ES3053122T3 - Thyroid hormone analogs - Google Patents

Abstract

La presente divulgación describe métodos de síntesis de compuestos de piridazinona como análogos de la hormona tiroidea y sus profármacos. Los métodos preferidos, según la divulgación, permiten la preparación a gran escala de compuestos de piridazinona de alta pureza. En algunas realizaciones, los métodos preferidos, según la divulgación, también permiten la preparación de compuestos de piridazinona con un rendimiento superior al de los métodos utilizados previamente para la preparación de dichos compuestos. También se describen formas mórficas de un compuesto de piridazinona. Además, se describe un método para tratar la resistencia a la hormona tiroidea en un sujeto con al menos una mutación TRP. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

[0001] DESCRIPCIÓN

[0002] Análogos de la hormona tiroidea

[0003] FONDO

[0004] Las hormonas tiroideas son fundamentales para el crecimiento y el desarrollo normales y para mantener la homeostasis metabólica (Paul M. Yen, Physiological reviews, Vol.81(3): pp.1097-1126 (2001)). Los niveles circulantes de hormonas tiroideas están estrechamente regulados por mecanismos de retroalimentación en el eje hipotálamo/hipófisis/tiroides (HPT). La disfunción tiroidea que conduce al hipotiroidismo o al hipertiroidismo demuestra claramente que las hormonas tiroideas ejercen profundos efectos sobre la función cardiaca, el peso corporal, el metabolismo, la tasa metabólica, la temperatura corporal, el colesterol, los huesos, los músculos y el comportamiento.

[0005] La actividad biológica de las hormonas tiroideas está mediada por los receptores de hormonas tiroideas (TR o THR) (M. A. Lazar, Endocrine Reviews, Vol.14: pp.348-399 (1993)). Los TR pertenecen a la superfamilia conocida como receptores nucleares. Los TR forman heterodímeros con el receptor retinoide que actúan como factores de transcripción inducibles por ligando. Los TR tienen un dominio de unión al ligando, un dominio de unión al ADN y un dominio aminoterminal, y regulan la expresión génica mediante interacciones con elementos de respuesta del ADN y con diversos coactivadores y correpresores nucleares. Los receptores de la hormona tiroidea derivan de dos genes distintos, α y β. Estos distintos productos génicos producen múltiples formas de sus respectivos receptores mediante un procesamiento diferencial del ARN. Las principales isoformas del receptor tiroideo son α1, α2, β1 y β2. Los receptores de la hormona tiroidea α1, β1 y β2 se unen a la hormona tiroidea. Se ha demostrado que los subtipos de receptores de la hormona tiroidea pueden diferir en su contribución a determinadas respuestas biológicas. Estudios recientes sugieren que TRβ1 desempeña un papel importante en la regulación de la TRH (hormona liberadora de tirotropina) y en la regulación de las acciones de la hormona tiroidea en el hígado. TRβ2 desempeña un papel importante en la regulación de la TSH (hormona estimulante del tiroides) (Abel et. al., J. Clin. Invest., Vol 104: pp.291-300 (1999)). TRβ1 desempeña un papel importante en la regulación de la frecuencia cardiaca (B. Gloss et. al. Endocrinology, Vol.142: pp.544-550 (2001); C. Johansson et. al., Am. J. Physiol., Vol.275: pp. R640-R646 (1998)).

[0006] Se han realizado esfuerzos para sintetizar análogos de la hormona tiroidea que presenten una mayor selectividad del receptor beta de la hormona tiroidea y/o una acción selectiva tisular. Tales miméticos de la hormona tiroidea pueden producir reducciones deseables del peso corporal, los lípidos, el colesterol y las lipoproteínas, con un impacto reducido sobre la función cardiovascular o la función normal del eje hipotálamo/hipófisis/tiroides (véase, por ejemplo, Joharapurkar et al., J. Med. Chem., 2012, 55 (12), pp 5649-5675). El desarrollo de análogos de la hormona tiroidea que eviten los efectos indeseables del hipertiroidismo y el hipotiroidismo manteniendo los efectos beneficiosos de las hormonas tiroideas abriría nuevas vías de tratamiento para los pacientes con enfermedades metabólicas como la obesidad, la hiperlipidemia, la hipercolesterolemia, la diabetes y otros trastornos y enfermedades como la esteatosis hepática y la NASH, la aterosclerosis, las enfermedades cardiovasculares, el hipotiroidismo, el cáncer de tiroides, las enfermedades tiroideas, la resistencia a la hormona tiroidea y los trastornos y enfermedades relacionados.

[0007] El documento WO 2007/009913 describe derivados de piridazinona como agonistas del receptor de la hormona tiroidea. El documento WO 2009/037172 describe profármacos de análogos de la hormona tiroidea.

[0008] RESUMEN DE LA DIVULGACIÓN

[0009] En un primer aspecto, la invención proporciona 2-(3,5-dicloro-4-((5-isopropil-6-oxo-1,6-dihidropiridazin-3-il)oxi)fenil)-3,5-dioxo-2,3,4,5-tetrahidro-1,2,4-triazina-6-carbonitrilo("Compuesto A"):

[0012]

[0014] para su uso como medicamento, en el que elCompuesto Ase administra en una cantidad eficaz de hasta 100 mg al día.

[0015] En una realización del primer aspecto de la invención, elCompuesto Aes para uso en un método de tratamiento o prevención de una enfermedad de hígado graso en un sujeto que comprende la administración delCompuestoA al sujeto en una cantidad eficaz de hasta 100 mg por día.

[0016] [0007]En una realización del primer aspecto de la invención, elCompuesto Aes para uso en un método de tratamiento de una enfermedad de hígado graso en un sujeto que comprende la administración delCompuestoA al sujeto en una cantidad eficaz de hasta 100 mg por día.

[0017] En una realización del primer aspecto de la invención, la enfermedad del hígado graso es la esteatohepatitis no alcohólica.

[0018] En una realización del primer aspecto de la invención, elCompuesto Ase administra al sujeto en una cantidad de aproximadamente 100 mg por día.

[0019] En una realización del primer aspecto de la invención, elCompuesto Ase administra por vía oral.

[0020] En una realización del primer aspecto de la invención, elCompuesto Ase administra a un humano adulto.

[0021] En una realización del primer aspecto de la invención, elCompuesto Ase administra por vía oral en un comprimido.

[0022] En una realización del primer aspecto de la invención, elCompuesto Ase administra diariamente como dosis única.

[0023] En un segundo aspecto, la invención proporciona una composición farmacéutica que comprende 2-(3,5-dicloro-4-((5-isopropil-6-oxo-1,6-dihidropiridazin-3-il)oxi)fenil)-3,5-dioxo-2,3,4,5-tetrahidro-1,2,4-triazina-6-carbonitrilo("Compuesto A")y al menos un excipiente o soporte farmacéuticamente aceptable, para su uso como medicamento, en el que elCompuesto Ase administra en una cantidad eficaz de hasta 100 mg al día.

[0024] En una realización del segundo aspecto de la invención, la composición farmacéutica es para uso en un método de tratamiento o prevención de una enfermedad de hígado graso en un sujeto, en el que elCompuesto Ase administra al sujeto en una cantidad eficaz de hasta 100 mg por día.

[0025] En una realización del segundo aspecto de la invención, la composición farmacéutica es para uso en un método de tratamiento de una enfermedad de hígado graso en un sujeto, en el que elCompuesto Ase administra al sujeto en una cantidad eficaz de hasta 100 mg por día.

[0026] En una realización del segundo aspecto de la invención, la enfermedad del hígado graso es la esteatohepatitis no alcohólica.

[0027] En una realización del segundo aspecto de la invención, elCompuesto Ase administra al sujeto en una cantidad de aproximadamente 100 mg por día.

[0028] En una realización del segundo aspecto de la invención, la composición farmacéutica se administra por vía oral.

[0029] En una realización del segundo aspecto de la invención, la composición farmacéutica se administra a un ser humano adulto.

[0030] En una realización del segundo aspecto de la invención, la composición farmacéutica es un comprimido, y/o la composición farmacéutica se administra diariamente como dosis única.

[0031] En una realización del primer y/o segundo aspecto de la invención, elCompuesto Aes una sal farmacéuticamente aceptable delCompuesto A.

[0032] La presente divulgación también describe un proceso sintético que puede utilizarse para preparar 6-(4-amino-2,6-diclorofenoxi)-4-isopropilpiridazin-3(2H)-ona("Int.7"),un compuesto que es útil como intermedio para hacer compuestos de piridazinona como análogos de la hormona tiroidea, como sigue:

[0033] (a) poner en contacto R<1>MgX o R<1>Li con un compuesto de Fórmula (I):

[0036]

[0039] para formar un compuesto de Fórmula (II):

[0040]

[0042] en el que R<1>es isopropilo o isopropenilo, X es halo y R<2>es H o un grupo protector de amina; y (b) convertir el compuesto de Fórmula (II) en un compuesto de Fórmula (III):

[0045]

[0047] en presencia de una base cuando R<1>es isopropenilo o en presencia de un agente oxidante cuando R<1>es isopropilo.

[0048] En la etapa (a), el disolvente puede ser un disolvente orgánico aprótico, tal como THF, éter dietílico, tolueno o dioxano, la temperatura de reacción puede ser de 0-60 °C, 20-50 °C, 30-45 °C o 35-45 °C, el tiempo de reacción puede ser de 10 min a 10 horas, 1-8 horas o 3-5 horas, y la cantidad del reactivo de Grignard (R<1>MgX) puede ser de 3-10 equivalentes o 3-6 equivalentes del compuesto de Fórmula (I).

[0049] En la etapa (b), la base se utiliza para isomerizar el compuesto de Fórmula (II). Puede ser una base orgánica o inorgánica. Ejemplos de bases incluyen, pero no se limitan a, trietilamina, piridina, KOH, NaOH y carbonatos. La isomerización también puede lograrse en otras condiciones, por ejemplo, tratamiento con un ácido o calentamiento en un disolvente aprótico.

[0050] Además, en la etapa (b), el agente oxidante no está particularmente limitado. Por ejemplo, se puede utilizar bromo en ácido acético o ácido propriónico.

[0051] Ejemplos de grupos protectores de amina incluyen, pero no se limitan a, alquilo sustituido, acilo (p. ej., benzoilo o acetilo) y sililo. Los grupos protectores hidroxi y amina se han tratado en T. W. Greene y P. G. M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 2d. Ed., John Wiley and Sons (1991).

[0052] En una realización, la etapa (a) se realiza poniendo en contacto R<1>MgX con el compuesto de Fórmula (I), en el que R<1>es isopropenilo y X es Br. El disolvente utilizado en esta reacción puede ser THF con una relación volumen/peso de THF respecto al compuesto de Fórmula (I) comprendida entre 7 y 30 (o entre 7 y 15). Esta etapa puede realizarse en presencia de un ácido de Lewis (p. ej., un haluro de litio).

[0053] En una realización, la etapa (a) se realiza poniendo en contacto R<1>MgX con el compuesto de Fórmula (I), en el que R<1>es isopropilo y X es Cl. El disolvente utilizado en esta reacción puede ser THF con una relación volumen/peso de THF respecto al compuesto de Fórmula (I) comprendida entre 7 y 30 (o entre 7 y 15). Esta etapa puede realizarse en presencia de un ácido de Lewis (p. ej., un haluro de litio).

[0054] En una realización, la base en la etapa (b) es un hidróxido metálico (p. ej., hidróxido de potasio).

[0055] En una realización, el agente oxidante en la etapa (b) es bromo y la etapa (b) se realiza en presencia de un ácido.

[0056] En una realización, el grupo R<2>en Fórmula (I) y Fórmula (II) es acetilo o benzoilo. En otra realización, R<2>es benzoilo.

[0057] En una realización, el proceso comprende además proporcionar el compuesto de Fórmula (I) poniendo en contacto 3,6-dicloropiridazina con 2,6-dicloro-4-aminofenol para formar 3,5-dicloro-4-((6-cloropiridazin-3-il)oxi)anilina, hidrolizar 3,5-dicloro-4-((6-cloropiridazin-3-il)oxi)anilina y proteger el grupo amina de 3,5-dicloro-4-((6-cloropiridazin-3-il)oxi)anilina antes o después de la hidrólisis para formar el compuesto de Fórmula (I). La puesta en contacto de la 3,6-dicloropiridazina con el 2,6-dicloro-4-aminofenol se realiza en un disolvente aprótico polar (p. ej., dimetilacetamida (DMAC)) en presencia de una base (p. ej., Cs<2>CO<3>) a una temperatura de reacción comprendida entre 60 y 120 °C (p. ej., aproximadamente 65 °C). Además, puede incluirse una etapa de purificación. Es decir, antes de la etapa (a), el compuesto de Fórmula (I) se purifica en una solución ácida a una temperatura comprendida entre 80 y 100 °C.

[0058] En una realización, el proceso comprende además la etapa (c) cuando está presente, eliminando el grupo protector de amina R<2>del compuesto de Fórmula (III) para formar 6-(4-amino-2,6-diclorofenoxi)-4-isopropilpiridazin-3(2H)-ona.

[0059] En una realización, el compuesto, por ejemplo,Int.7,fabricado por el método descrito en el presente documento tiene una pureza superior al 85%, por ejemplo, superior al 86%, superior al 90%, superior al 92,5%, superior al 95%, superior al 96%, superior al 97%, superior al 97,5%, superior al 98%, superior al 98,5%, superior al 99%, superior al 99,2%, superior al 99,5% o superior al 99,8%.

[0060] En una realización, el compuesto, es decir, 6-(4-amino-2,6-diclorofenoxi)-4-isopropilpiridazin-3(2H)-ona, hecho por el método descrito en el presente documento tiene menos del 1,5% de 6-(4-amino-2,6-diclorofenoxi)-5-isopropilpiridazin-3(2H)-ona, por ejemplo, menos del 1,0% de 6-(4-amino-2,6-diclorofenoxi)-5-isopropilpiridazin-3(2H)-ona, o menos del 0,5% de 6-(4-amino-2,6-diclorofenoxi)-5-isopropilpiridazin-3(2H)-ona.

[0061] En otra realización, el compuesto hecho por el proceso descrito anteriormente está libre de 6-(4-amino-2,6-diclorofenoxi)-5-isopropilpiridazin-3(2H)-ona.

[0062] El proceso sintético aquí descrito puede comprender además la siguiente etapa para sintetizar compuestos de piridazinona como análogos de la hormona tiroidea y sus profármacos:

[0063] (d) conversión de 6-(4-amino-2,6-diclorofenoxi)-4-isopropilpiridazin-3(2H)-ona en el compuesto de Fórmula (IV):

[0066]

[0069] Donde

[0070] R<3>es H o CH<2>R<a>, en el que R<a>es hidroxilo, aminoácido ligado a -OP(O)(OH)<2>o -OC(O)-R<b>, siendo R<b>alquilo inferior, alcoxi, alquilo ácido, cicloalquilo, arilo, heteroarilo o -(CH<2>)<n>-heteroarilo y n 0 o 1;

[0071] R<4>es H, y R<5>es CH<2>COOH, C(O)CO<2>H, o un éster o amida de los mismos, o R<4>y R<5>juntos son -N=C(R<c>)-C(O)-NH-C(O)-; en el que R<c>es H o ciano.

[0072] En una realización, el compuesto de Fórmula (IV) es 2-(3,5-dicloro-4-((5-isopropil-6-oxo-1,6-dihidropiridazin-3-il)oxi)fenil)-3,5-dioxo-2,3,4,5-tetrahidro-1,2,4-triazina-6-carbonitrilo("Compuesto A")y la etapa anterior se realiza poniendo en contacto 6-(4-amino-2,6-diclorofenoxi)-4-isopropilpiridazin-3(2H)-ona con (2-cianoacetil)carbamato de etilo y un nitrito metálico, seguido de tratamiento con acetato de potasio en DMAC.

[0073] En una realización, el proceso comprende además la formación de una forma mórfica de 2-(3,5-dicloro-4-((5-isopropil-6-oxo-1,6-dihidropiridazin-3-il)oxi)fenil)-3,5-dioxo-2,3,4,5-tetrahidro-1,2,4-triazina-6-carbonitrilo("Compuesto A")(Forma I) caracterizada por un patrón de difracción de polvo de rayos X que incluye picos a aproximadamente 10..5, 18,7, 22,9, 23,6 y 24,7 grados 2θ.

[0074] En una realización, el compuesto de Fórmula (IV) es de Fórmula (V)

[0077]

[0078] en la que R<3>es CH<2>R<a>, y la etapa (d) se realiza poniendo en contacto 6-(4-amino-2,6-diclorofenoxi)-4-isopropilpiridazin-3(2H)-ona con (2-cianoacetil)carbamato de etilo seguido de tratamiento con acetato de potasio en DMAC para formar 2-(3-,5-dicloro-4-((5-isopropil-6-oxo-1,6-dihidropiridazin-3-il)oxi)fenil)-3,5-dioxo-2,3,4,5-tetrahidro-1,2,4-triazina-6-carbonitrilo("Compuesto A")y conversión del Compuesto A en el compuesto de Fórmula (V) de una manera adecuada, p. ej., utilizando una de las técnicas descritas en la Patente de EEUU.8.076.334.

[0079] En una realización, el compuesto de Fórmula (IV), por ejemplo, 2-(3,5-dicloro-4-((5-isopropil-6-oxo-1,6-dihidropiridazin-3-il)oxi)fenil)-3,5-dioxo-2,3,4,5-tetrahidro-1,2,4-triazina-6-carbonitrilo("Compuesto A"),hecho por el método aquí descrito tiene una pureza superior al 85%, p. ej., superior al 86%, superior al 90%, superior al 92,5%, superior al 95%, superior al 96%, superior al 97%, superior al 97,5%, superior al 98%, superior al 98,5%, superior al 99%, superior al 99,2%, superior al 99,5%, o superior al 99,8%. Por ejemplo, el contenido de impurezas (es decir, cualquier componente de la composición producida por el método aquí descrito, distinto del compuesto de Fórmula (IV), como subproductos, material de partida, residuos de disolventes, metales pesados, etc.) es inferior al 15%, inferior al 14%, inferior al 10%, inferior al 8%, inferior al 5%, inferior al 4%, inferior al 3%, inferior al 2%, inferior al 1,5%, inferior al 1%, inferior al 0,8%, inferior al 0,5% o inferior al 0,2%.

[0080] En una realización, el compuesto de Fórmula (IV) hecho por el método descrito en el presente documento es elCompuesto Aen Forma I, y tiene una pureza superior al 85%, por ejemplo, superior al 86%, superior al 90%, superior al 92,5%, superior al 95%, superior al 96%, superior al 97%, superior al 97,5%, superior al 98%, superior al 98,5%, superior al 99%, superior al 99,2%, superior al 99,5%, o superior al 99,8%. Por ejemplo, el contenido de impurezas (es decir, cualquier componente de la composición producida por el método aquí descrito, distinto del Compuesto A, como subproductos, material de partida, residuos de disolventes, metales pesados, etc.) es inferior al 15%, inferior al 14%, inferior al 10%, inferior al 8%, inferior al 5%, inferior al 4%, inferior al 3%, inferior al 2%, inferior al 1,5%, inferior al 1%, inferior al 0,8%, inferior al 0,5% o inferior al 0,2%.

[0081] En una realización, el compuesto de Fórmula (IV) hecho por el método aquí descrito es elCompuesto Aen Forma I, y la Forma I tiene una pureza de más del 85%, por ejemplo, más del 86%, más del 90%, más del 92,5%, más del 95%, más del 96%, más del 97%, más del 97,5%, más del 98%, más del 98,5%, más del 99%, más del 99,2%, más del 99,5%, o más del 99,8%. Por ejemplo, el contenido de impurezas (es decir, cualquier componente de la composición producida por el método aquí descrito, distinto de la Forma I, como otras formas mórficas del Compuesto A, subproductos, material de partida, residuos de disolventes, metales pesados, etc.) es inferior al 15%, inferior al 14%, inferior al 10%, inferior al 8%, inferior al 5%, inferior al 4%, inferior al 3%, inferior al 2%, inferior al 1,5%, inferior al 1%, inferior al 0,8%, inferior al 0,5%, o inferior al 0,2%.

[0082] En una realización, la composición que comprende un compuesto de Fórmula (IV), tal como elCompuesto A,hecho por el método aquí descrito, tiene menos del 1,5% (p. ej., menos del 1,0%, por ejemplo, menos del 0,5%) del correspondiente regioisómero de β-isopropilpiridazin-3(2H)-ona (p. ej., 2-(3,5-dicloro-4-((4-isopropil-6-oxo-1,6-dihidropiridazin-3-il)oxi)fenil)-3,5-dioxo-2,3,4,5-tetrahidro-1,2,4-triazina-6-carbonitrilo, el regioisómero de βisopropilpiridazin-3(2H)-ona delcompuesto A).

[0083] En una realización, la composición que comprende un compuesto de Fórmula (IV), tal como elCompuesto A,hecho por el método aquí descrito está libre del correspondiente regioisómero de β-isopropilpiridazin-3(2H)-ona (p. ej., 2-(3,5-dicloro-4-((4-isopropil-6-oxo-1,6-dihidropiridazin-3-il)oxi)fenil)-3,5-dioxo-2,3,4,5-tetrahidro-1,2,4-triazina-6-carbonitrilo, el regioisómero de β-isopropilpiridazin-3(2H)-ona delCompuesto A).

[0084] En una realización, la composición que comprende un compuesto de Fórmula (IV), tal como elCompuesto A,hecho por el método aquí descrito tiene menos de 1,5% (p. ej., menos de 0,1%) de metal pesado, por ejemplo, plata.

[0085] En una realización, la composición que comprende un compuesto de Fórmula (IV), tal como elCompuesto A,hecha por el método aquí descrito está libre de metales pesados, por ejemplo, plata, oro o platino.

[0086] Los métodos sintéticos descritos en el presente documento incluyen ventajas en comparación con los métodos anteriores, como los divulgados en la Patente de EEUU.7.452.882. Por ejemplo, el rendimiento global del 2-(3,5-dicloro-4-((5-isopropil-6-oxo-1,6-dihidropiridazin-3-il)oxi)fenil)-3,5-dioxo-2,3,4,5-tetrahidro-1,2,4-triazina-6-carbonitrilo("Compuesto A")es mucho mayor (p. ej., > 40% frente a ~9% cuando se hace según el método divulgado en la Patente de EEUU.7.452.882.

[0087] Además, la regioselectividad de la síntesis es muy superior. Además, los nuevos métodos ofrecen un procesamiento más sencillo, por ejemplo, filtraciones más fáciles. Por último, no se utilizan metales pesados en los métodos aquí descritos para elCompuesto A.En comparación, la plata se utilizó en la ruta descrita en la Patente 7.452.882, que requería un tratamiento de remediación con una resina.

[0088] También se describe en el presente documento una composición que comprende más del 85% de un compuesto de Fórmula (IV), menos del 1,5% del correspondiente regioisómero de β-isopropilpiridazin-3(2H)-ona (es decir,

[0089]

[0092] ), y/o tiene menos del 1,5% de metales pesados.

[0093] En una realización, el compuesto de Fórmula (IV), por ejemplo, elCompuesto A,tiene una pureza superior al 85%, por ejemplo, superior al 86%, superior al 90%, superior al 92,5%, superior al 95%, superior al 96%, superior al 97%, superior al 97,5%, superior al 98%, superior al 98,5%, superior al 99%, superior al 99,2%, superior al 99,5%, o superior al 99,8%. Por ejemplo, el contenido de impurezas (es decir, cualquier componente de una composición que comprenda el compuesto de Fórmula (IV), distinto del compuesto de Fórmula (IV), como subproductos, material de partida, residuos de disolventes, metales pesados, etc.) es inferior al 15%, inferior al 14%, inferior al 10%, inferior al 8%, inferior al 5%, inferior al 4%, inferior al 3%, inferior al 2%, inferior al 1,5%, inferior al 1%, inferior al 0,8%, inferior al 0,5%, o inferior al 0,2%. En una realización, el compuesto de Fórmula (IV) es elCompuesto Ade la Forma I, y tiene una pureza superior al 85%, por ejemplo, superior al 86%, superior al 90%, superior al 92,5%, superior al 95%, superior al 96%, superior al 97%, superior al 97,5%, superior al 98%, superior al 98,5%, superior al 99%, superior al 99,2%, superior al 99,5%, o superior al 99,8%. Por ejemplo, el contenido de impurezas (es decir, cualquier componente de una composición que comprende elCompuesto A,distinto delCompuesto A,como subproductos, material de partida, residuos de disolventes, metales pesados, etc.) es inferior al 15%, inferior al 14%, inferior al 10%, inferior al 8%, inferior al 5%, inferior al 4%, inferior al 3%, inferior al 2%, inferior al 1,5%, inferior al 1%, inferior al 0,8%, inferior al 0,5%, o inferior al 0,2%.

[0094] En una realización, el compuesto de Fórmula (IV) es elCompuesto Aen Forma I, y la Forma I tiene una pureza superior al 85%, por ejemplo, superior al 86%, superior al 90%, superior al 92,5%, superior al 95%, superior al 96%, superior al 97%, superior al 97,5%, superior al 98%, superior al 98,5%, superior al 99%, superior al 99,2%, superior al 99,5%, o superior al 99,8%. Por ejemplo, el contenido de impurezas (es decir, cualquier componente de una composición que comprenda la Forma I, distinto de la Forma I, como otras formas mórficas del Compuesto A, subproductos, material de partida, residuos de disolventes, metales pesados, etc.) es inferior al 15%, inferior al 14%, inferior al 10%, inferior al 8%, inferior al 5%, inferior al 4%, inferior al 3%, inferior al 2%, inferior al 1,5%, inferior al 1%, inferior al 0,8%, inferior al 0,5%, o inferior al 0,2%.

[0095] En una realización, el compuesto de Fórmula (IV), tal como elCompuesto A,tiene menos del 1,5% (p. ej., menos del 1,0%, por ejemplo, menos del 0,5%) del correspondiente regioisómero de β-isopropilpiridazin-3(2H)-ona (p. ej., 2-(3,5-dicloro-4-((4-isopropil-6-oxo-1,6-dihidropiridazin-3-il)oxi)fenil)-3,5-dioxo-2,3,4,5-tetrahidro-1,2,4-triazina-6-carbonitrilo, el regioisómero de β-isopropilpiridazin-3(2H)-ona delCompuesto A).

[0096] En una realización, el compuesto de Fórmula (IV), tal como elCompuesto A,está libre del correspondiente regioisómero de β-isopropilpiridazin-3(2H)-ona (p. ej., 2-(3,5-dicloro-4-((4-isopropil-6-oxo-1,6-dihidropiridazin-3-il)oxi)fenil)-3,5-dioxo-2,3,4,5-tetrahidro-1,2,4-triazina-6-carbonitrilo, el regioisómero de β-isopropilpiridazin-3(2H)-ona delCompuesto A).

[0097] En una realización, el compuesto de Fórmula (IV), tal como elCompuesto A,tiene menos del 1,5% (p. ej., menos del 1,0%, por ejemplo, menos del 0,5%) de metal pesado, por ejemplo, plata, oro o platino.

[0098] En una realización, el compuesto de Fórmula (IV), tal como elCompuesto A,hecho por el método aquí descrito está libre de metal pesado, por ejemplo, plata.

[0099] ElCompuesto Apuede ser una forma mórfica (Forma I) caracterizada por un patrón de difracción de polvo de rayos X ("XRPD") que incluye picos a aproximadamente 10,5, 18,7, 22,9, 23,6 y 24,7 grados 2θ.

[0100] En una realización, la Forma I se caracteriza por un patrón de difracción de polvo de rayos X que incluye además picos a aproximadamente 8,2, 11,2, 15,716,4, 17,7, 30,0 y 32,2 grados 2θ.

[0101] En una realización, la Forma I se caracteriza por un patrón de difracción de polvo de rayos X que incluye picos a aproximadamente 8,2, 10,5, 18,7, 22,9, 23,6 y 24,7 grados 2θ.

[0102] En una realización, la Forma I se caracteriza por un patrón de difracción de polvo de rayos X que incluye picos a aproximadamente 8,2, 10,5, 11,2, 15,716,4, 17,7, 18,7, 22,9, 23,6 y 24,7 grados 2θ.

[0103] En una realización, la Forma I se caracteriza por un patrón de difracción de polvo de rayos X que incluye picos a aproximadamente 8,2, 10,5, 11,2, 15,716,4, 17,7, 18,7, 22,9, 23,6, 24,7, 30,0 y 32,2 grados 2θ.

[0104] En otra incrustación, la Forma I se caracteriza por un patrón de difracción de polvo de rayos X sustancialmente similar al expuesto en la FIG.1.

[0105] En otro aspecto, la presente divulgación describe un proceso de preparación de la Forma I. El proceso comprende mezclar una muestra que contiene el Compuesto A (p. ej., una preparación bruta o purificada del Compuesto A) con un disolvente orgánico, tal como alcohol (p. ej., etanol), cetona (p. ej., metil-isobutil-cetona, es decir, MIBK), o una solución acuosa que incluye alcohol o cetona. Por ejemplo, la mezcla resultante (p. ej., una lechada o suspensión) que contiene el Compuesto A de inicio y el disolvente se calienta a una primera temperatura y, a continuación, se enfría a una segunda temperatura inferior a la primera. Preferiblemente, el disolvente orgánico es etanol. El Compuesto A de partida que entra en la conversión de forma puede ser un solvato, como un hidrato (p. ej., un monohidrato o un dihidrato), o un solvato de un disolvente orgánico (por ejemplo dimetil acetamida, etanol o MIBK). Alternativamente, el Compuesto A de partida puede ser un ansolvato (p. ej., un anhidrato).

[0106] En una realización, el proceso se lleva a cabo calentando el Compuesto A con el disolvente orgánico a una temperatura elevada (p. ej., aproximadamente 60-110 °C o aproximadamente 80 °C) para formar una lechada o suspensión, seguida de enfriamiento (p. ej., a una temperatura aproximadamente 0-60 °C, aproximadamente 40-60 °C, aproximadamente 45-55 °C, o aproximadamente a temperatura ambiente) para obtener la Forma I del Compuesto A. Por ejemplo, el disolvente orgánico es etanol y la suspensión que contiene el Compuesto A puede enfriarse a una temperatura superior a aproximadamente 40 °C para obtener la Forma I. Por ejemplo, el disolvente orgánico es MIBK, y la suspensión que contiene el Compuesto A puede enfriarse a temperatura ambiente para obtener la Forma I.

[0107] En otra realización, una suspensión de etanol del Compuesto A se calienta a una temperatura elevada (p. ej., aproximadamente 80 °C) y luego se enfría a una temperatura no inferior a aproximadamente 40 °C (p. ej., aproximadamente 45-55 °C), se filtra (p. ej., aproximadamente 45-55 °C), se lava con etanol calentado (p. ej., 45-55 °C) y se seca a, por ejemplo, 45-55 °C para obtener la Forma I del Compuesto A que está sustancialmente libre de cualquier solvato del Compuesto A, como el solvato de etanol. Por ejemplo, la Forma I del Compuesto A tal como se ha preparado tiene un contenido de solvato de etanol < 5% (p. ej., < 2%, < 1%, < 0,5%, o < 0,1%).

[0108] En una realización, el proceso comprende además, después de enfriar la mezcla, filtrar la mezcla. La etapa de filtración puede realizarse a una temperatura comprendida entre 0 °C y aprox.

[0109] 60 °C (p. ej., aproximadamente 40-60 °C, aproximadamente 45-55 °C, o aproximadamente a temperatura ambiente) para obtener una torta de filtración.

[0110] En una realización, el proceso comprende además, después de filtrar la mezcla, enjuagar la torta de filtración. La etapa de aclarado puede realizarse a una temperatura comprendida entre 0 °C aproximadamente y 60 °C (p. ej., aproximadamente 40-60 °C, aproximadamente 45-55 °C, o aproximadamente a temperatura ambiente) con un disolvente orgánico (p. ej.,un alcohol como el etanol) para obtener una torta de filtración enjuagada.

[0111] En una realización, el proceso comprende además, después de enjuagar la torta de filtración, secar la torta de filtración enjuagada. La etapa de secado puede realizarse a una temperatura comprendida entre aproximadamente 0 °C y aproximadamente 60 °C (p. ej., aproximadamente 40-60 °C, aproximadamente 45-55 °C, o aproximadamente a temperatura ambiente) para obtener la Forma I del Compuesto A.

[0112] En una realización, la Forma I tiene una pureza superior al 91%, por ejemplo, superior al 92,5%, superior al 95%, superior al 96%, superior al 97% o superior al 97,5%.

[0113] En una realización, la Forma I tiene una pureza superior al 98%, por ejemplo, superior al 98,5%, superior al 99%, superior al 99,2%, superior al 99,5% o superior al 99,8%.

[0114] En otro aspecto, la divulgación proporciona compuestos tales como

[0117]

[0118]

[0120] y una sal del mismo, por ejemplo, útil para sintetizar 6-(4-amino-2,6-diclorofenoxi)-4-isopropilpiridazin-3(2H)-ona ("Int.7").

[0121] La divulgación también proporciona un método para tratar una resistencia a la hormona tiroidea (RTH) en un sujeto que la necesita. El método comprende administrar a un sujeto que tiene al menos una mutación TRβ una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de Fórmula (IV):

[0124]

[0127] donde

[0128] R<3>es H o CH<2>R<a>, en el que R<a>es hidroxilo, aminoácido ligado a O, -OP(O)(OH)<2>o

[0129] -OC(O)-R<b>, siendo R<b>alquilo inferior, alcoxi, alquilo ácido, cicloalquilo, arilo, heteroarilo, o -(CH<2>)<n>-heteroarilo y siendo n 0 ó 1;

[0130] R<4>es H, y R<5>es CH<2>COOH, C(O)CO<2>H, o un éster o amida de los mismos, o R<4>y R<5>juntos son -N=C(R<c>)-C(O)-NH-C(O)-; en el que R<c>es H o ciano.

[0131] La resistencia a la hormona tiroidea (RTH) es un síndrome caracterizado por una hiposensibilidad tisular variable a la hormona tiroidea y está causado principalmente por mutaciones autosómicas dominantes enTHRβ. Véase Shi et al., Biochemistry 2005, 44, 4612-4626.

[0132] En una realización, el compuesto utilizado en el método anterior es 2-(3,5-dicloro-4-((5-isopropil-6-oxo-1,6-dihidropiridazin-3-il)oxi)fenil)-3,5-dioxo-2,3,4,5-tetrahidro-1,2,4-triazina-6-carbonitrilo("Compuesto A"),p. ej., elCompuesto Aen la Forma I.

[0133] En una realización, el sujeto a tratar por el método anterior tiene obesidad, hiperlipidemia, hipercolesterolemia, diabetes, esteatohepatitis no alcohólica, hígado graso, enfermedad ósea, alteración del eje tiroideo, aterosclerosis, un trastorno cardiovascular, taquicardia, comportamiento hipercinético, hipotiroidismo, bocio, trastorno por déficit de atención con hiperactividad, problemas de aprendizaje, retraso mental, pérdida de audición, retraso de la edad ósea, enfermedad neurológica o psiquiátrica o cáncer de tiroides.

[0134] En una realización, la mutación THRβ se selecciona del grupo que consiste en una sustitución de treonina (T) por el residuo de tipo salvaje alanina (A) en la posición de aminoácido 234 de SEQ ID N.º: 1 (A234T); una sustitución de glutamina (Q) por el residuo de tipo salvaje arginina (R) en la posición de aminoácido 243 de SEQ ID N.º: 1 (R243Q); una sustitución de histidina (H) por el residuo de tipo salvaje arginina (R) en la posición de aminoácido 316 de SEQ ID N.º: 1 (R316H); y una sustitución de treonina (T) por el residuo de tipo silvestre alanina (A) en la posición de aminoácido 317 de SEQ ID N.º: 1 (A317T). En otra realización, el compuesto utilizado en el método restaura la actividad de THRβ mutante.

[0135] En una realización, la pureza del compuesto de Fórmula (IV), tal como elCompuesto A,se obtiene a partir de la redisolución de un compuesto bruto de un disolvente adecuado descrito en el presente documento. En otra realización, el compuesto no es un solvato (p. ej., un hidrato).

[0136] En una realización, el compuesto de Fórmula (IV), por ejemplo, elCompuesto A,tiene una pureza superior al 85%, por ejemplo, superior al 86%, superior al 90%, superior al 92,5%, superior al 95%, superior al 96%, superior al 97%, superior al 97,5%, superior al 98%, superior al 98,5%, superior al 99%, superior al 99,2%, superior al 99,5%, o superior al 99,8%.

[0137] En una realización, el compuesto de Fórmula (IV) es elCompuesto Aen la Forma I, y tiene una pureza superior al 85%, por ejemplo, superior al 86%, superior al 90%, superior al 92,5%, superior al 95%, superior al 96%, superior al 97%, superior al 97,5%, superior al 98%, superior al 98,5%, superior al 99%, superior al 99,2%, superior al 99,5%, o superior al 99,8%.

[0138] En una realización, el compuesto de Fórmula (IV) es elCompuesto Aen Forma I, y la Forma I tiene una pureza superior al 85%, por ejemplo, superior al 86%, superior al 90%, superior al 92,5%, superior al 95%, superior al 96%, superior al 97%, superior al 97,5%, superior al 98%, superior al 98,5%, superior al 99%, superior al 99,2%, superior al 99,5%, o superior al 99,8%.

[0139] En una realización, el compuesto de Fórmula (IV), tal como elCompuesto A,tiene menos del 1,5% (p. ej., menos del 1,0%, por ejemplo, menos del 0,5%) del correspondiente regioisómero de β-isopropilpiridazin-3(2H)-ona (p. ej., 2-(3,5-dicloro-4-((4-isopropil-6-oxo-1,6-dihidropiridazin-3-il)oxi)fenil)-3,5-dioxo-2,3,4,5-tetrahidro-1,2,4-triazina-6-carbonitrilo, el regioisómero de β-isopropilpiridazin-3(2H)-ona delCompuesto A).

[0140] En una realización, el compuesto de Fórmula (IV), tal como elCompuesto A,está libre del correspondiente regioisómero de β-isopropilpiridazin-3(2H)-ona (p. ej., 2-(3,5-dicloro-4-((4-isopropil-6-oxo-1,6-dihidropiridazin-3-il)oxi)fenil)-3,5-dioxo-2,3,4,5-tetrahidro-1,2,4-triazina-6-carbonitrilo, el regioisómero de β-isopropilpiridazin-3(2H)-ona delCompuesto A).

[0141] En una realización, el compuesto de Fórmula (IV), tal como elCompuesto A,tiene menos del 1,5% (p. ej., menos del 1,0%, por ejemplo, menos del 0,5%) de metal pesado, por ejemplo, plata, oro o platino.

[0142] En una realización, el sujeto es un mamífero. En otra realización, el sujeto es un ser humano.

[0143] La divulgación proporciona además un método para determinar una capacidad de respuesta de un sujeto al compuesto de Fórmula (IV) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, comprendiendo el método:

[0144] (a) proporcionar una muestra del sujeto; y

[0145] (b) detectar una mutación en un receptor de hormona tiroidea ("TR"), donde la presencia de la mutación indica que el sujeto responde a los compuestos o a una sal farmacéuticamente aceptable de los mismos.

[0146] En una realización, el compuesto de Fórmula (IV) es 2-(3,5-dicloro-4-((5-isopropil-6-oxo-1,6-dihidropiridazin-3-il)oxi)fenil)-3,5-dioxo-2,3,4,5-tetrahidro-1,2,4-triazina-6-carbonitrilo("Compuesto A").

[0147] En una realización, el TR es TRβ.

[0148] En una realización, el sujeto tratado con elCompuesto Apadece obesidad, hiperlipidemia, hipercolesterolemia, diabetes, esteatohepatitis no alcohólica, hígado graso, enfermedad ósea, alteración del eje tiroideo, aterosclerosis, un trastorno cardiovascular, taquicardia, comportamiento hipercinético, hipotiroidismo, bocio, trastorno por déficit de atención con hiperactividad, problemas de aprendizaje, retraso mental, pérdida de audición, retraso de la edad ósea, enfermedad neurológica o psiquiátrica o cáncer de tiroides.

[0149] En una realización, un método para determinar una capacidad de respuesta al compuesto de Fórmula (IV) puede utilizarse junto con el método para tratar una resistencia a la hormona tiroidea. Es decir, antes del tratamiento, se examina a un sujeto para determinar la capacidad de respuesta al compuesto.

[0150] Otras características y ventajas de la presente invención se desprenden de la descripción detallada, los ejemplos y las reivindicaciones.

[0151] Breve Descripción de los Dibujos

[0152]

[0153] La Figura 1 es un difractograma de rayos X en polvo (DRX) de la Forma I de 2-(3,5-dicloro-4-((5-isopropil-6-oxo-1,6-dihidropiridazin-3-il)oxi)fenil)-3,5-dioxo-2,3,4,5-tetrahidro-1,2,4-triazina-6-carbonitrilo("Compuesto A").

[0154] La Figura 2 es un diagrama de calorimetría diferencial de barrido (DSC) de la Forma I delCompuesto A.

[0155] Las Figuras 3A y 3B son imágenes de modelado MacPymol para mostrar T3 y elCompuesto Aen THRβ, respectivamente.

[0156] La Figura 4 es una imagen de modelado MacPymol para mostrar la superposición de T3 y elCompuesto Aen THRβ.

[0157] La Figura 5A es una imagen de modelado MacPymol para mostrar las interacciones polares entre T3 y THRβ de tipo salvaje, donde T3 interactúa con Arg320 muy específicamente.

[0158] La Figura 5B es una imagen de modelado MacPymol para mostrar las interacciones polares entre elCompuesto Ay el THRβ de tipo salvaje, donde elCompuesto Ainteractúa con Arg320 y Arg316. La Figura 6 es una imagen de modelado MacPymol para mostrar que las mutaciones conducen a muchos cambios en la región polar del dominio de unión al ligando ("LBD").

[0159] La Figura 7A es una imagen de modelado MacPymol para mostrar las interacciones entre T3 y mutantes THRβ: Ala234Thr, Arg243Gln, Arg316His, Ala317Thr.

[0160] La Figura 7B es una imagen de modelado MacPymol para mostrar las interacciones entre elCompuesto Ay los mutantes THRβ: Ala234Thr, Arg243Gln, Arg316His, Ala317Thr; lo que indica que, en comparación con el T3, el heterociclo cargado negativamente delCompuesto Ase adapta mejor a las mutaciones.

[0161] Las Figuras 8A y 8B son imágenes de modelado MacPymol de T3 y elCompuesto Aen el mutante Arg316His, respectivamente. La interacción T3-Arg320 es probablemente más débil debido a la rotación de Arg320 lejos del ligando en el mutante, mientras que elCompuesto Amantiene una interacción favorable con Arg320 y está bien posicionado para que el grupo CN forme una interacción pi-catión con el His316 mutado.

[0162] Las Figuras 9A y 9B son imágenes de modelado MacPymol delCompuesto Aen el THRβ WT y el mutante Arg316His, respectivamente.

[0163] DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN

[0164] Tal como se utilizan en esta especificación y en las reivindicaciones anexas, las formas singulares "un/una" incluyen referencias plurales a menos que el contexto dicte claramente lo contrario. Así, por ejemplo, la referencia a "un reactivo" incluye no sólo un único reactivo, sino también una combinación o mezcla de dos o más reactivos diferentes, la referencia a "un sustituyente" incluye un único sustituyente, así como dos o más sustituyentes, y similares.

[0165] Tal como se utilizan en el presente documento, las frases "por ejemplo", "por ejemplo", "tal como" o "incluyendo" tienen por objeto introducir ejemplos que aclaran aún más la materia más general. Estos ejemplos se proporcionan únicamente como ayuda para la comprensión de la divulgación y no pretenden ser limitativos en modo alguno. Además, tal y como se utilizan en el presente documento, los términos "puede", "opcional", "opcionalmente" o "puede opcionalmente" significan que la circunstancia descrita posteriormente puede darse o no, de modo que la descripción incluye casos en los que la circunstancia se da y casos en los que no. Por ejemplo, la frase "opcionalmente presente" significa que un objeto puede o no estar presente y, por lo tanto, la descripción incluye casos en los que el objeto está presente y casos en los que el objeto no está presente.

[0166] Al describir y reivindicar la presente invención, se utilizará la siguiente terminología de acuerdo con las definiciones que figuran a continuación.

[0167] Como se usa aquí, la abreviatura "TR" o "THR" se refiere al receptor de la hormona tiroidea. Anteriormente se han descrito ácidos nucleicos y polipéptidos TR de diversas especies (p. ej., humanos, ratas, pollos, etc.).Véase, p. ej.,R. L. Wagner et al. (2001), Molecular Endocrinology 15(3): 398-410; J. Sap et al. (1986), Nature 324:635-640; C. Weinberger et al. (1986), Nature 324:641-646; and C.C.Tompson et al. (1986), Science 237:1610-1614. La secuencia de aminoácidos de TRβ humana se proporciona,p. ej.,mediante el número de acceso P108282 del Genbank.

[0170]

[0172] Los residuos en las posiciones 234, 243, 316 y 317 de TRβ humana están subrayados en SEQ ID N.º: 1. La parte de la secuencia de nucleótidos TRβ humana que codifica la secuencia de aminoácidos anterior es SEQ ID N.º: 2. La secuencia de nucleótidos de TRβ humana se proporciona,p. ej.,mediante el número de acceso del Genbank NM_0004614.

[0173]

[0175] Tal y como se utiliza en el presente documento, la frase "que tiene la fórmula" o "que tiene la estructura" no pretende ser limitativa y se utiliza del mismo modo que el término "que comprende". El término "seleccionado independientemente de" se utiliza aquí para indicar que los elementos citados,p. ej.,grupos R o similares, pueden ser idénticos o diferentes.

[0176] El término "alquilo", tal como se utiliza aquí, se refiere a un grupo hidrocarburo saturado ramificado o no ramificado que contiene típicamente, aunque no necesariamente, de 1 a aproximadamente 24 átomos de carbono, como metilo, etilo,n-propilo, isopropilo,n-butilo, isobutilo,t-butilo, octilo, decilo y similares, así como grupos cicloalquilo como ciclopentilo, ciclohexilo y similares. Generalmente, aunque no necesariamente, los grupos alquilo aquí presentes pueden contener de 1 a aproximadamente 18 átomos de carbono, y tales grupos pueden contener de 1 a aproximadamente 12 átomos de carbono. El término "alquilo inferior" se refiere a un grupo alquilo de 1 a 6 átomos de carbono, por ejemplo, 1, 2, 3, 4, 5 o 6 átomos de carbono. "Alquilo sustituido" se refiere al alquilo sustituido con uno o más grupos sustituyentes, y los términos "alquilo que contiene heteroátomo" y "heteroalquilo" se refieren a un sustituyente alquilo en el que al menos un átomo de carbono se sustituye por un heteroátomo, como se describe con más detalle infra.

[0177] El término "alquenilo", tal como se utiliza aquí, se refiere a un grupo hidrocarburo lineal, ramificado o cíclico de 2 a aproximadamente 24 átomos de carbono que contiene al menos un doble enlace, como etenilo, n-propenilo, isopropenilo, n-butenilo, isobutenilo, octenilo, decenilo, tetradecenilo, hexadecenilo, eicosenilo, tetracosenilo y similares. Generalmente, aunque no necesariamente, los grupos alquenilo pueden contener de 2 a 18 átomos de carbono y, por ejemplo, de 2 a 12 átomos de carbono. El término "alquenilo inferior" se refiere a un grupo alquenilo de 2 a 6 átomos de carbono. El término "alquenilo sustituido" se refiere al alquenilo sustituido con uno o más grupos sustituyentes, y los términos "alquenilo que contiene heteroátomos" y "heteroalquenilo" se refieren al alquenilo en el que al menos un átomo de carbono se sustituye por un heteroátomo, p. ej., N, P, O o S.

[0178] El término "alquinilo", tal como se utiliza en el presente documento, se refiere a un grupo hidrocarbonado lineal o ramificado de 2 a 24 átomos de carbono que contiene al menos un triple enlace, como el etileno, el n-propinilo y similares. Generalmente, aunque no necesariamente, los grupos alquilo pueden contener de 2 a 18 átomos de carbono, y tales grupos pueden contener además de 2 a 12 átomos de carbono. El término "alquinilo inferior" se refiere a un grupo alquinilo de 2 a 6 átomos de carbono. El término "alquinilo sustituido" se refiere al alquinilo sustituido con uno o más grupos sustituyentes, y los términos "alquinilo que contiene heteroátomo" y "heteroalquinilo" se refieren al alquinilo en el que al menos un átomo de carbono se sustituye por un heteroátomo.

[0179] El término "alcoxi", tal como se utiliza en el presente documento, se refiere a un grupo alquilo unido a través de un enlace éter único y terminal; es decir, un grupo "alcoxi" puede representarse como -O-alquilo, donde alquilo es como se ha definido anteriormente. Un grupo "alcoxi inferior" es un grupo alcoxi que contiene de 1 a 6 átomos de carbono e incluye, por ejemplo, metoxi, etoxi, n-propoxi, isopropoxi, t-butiloxi, etc. Los sustituyentes identificados como "<C1-C6>alcoxi" o "alcoxi inferior" en el presente documento pueden, por ejemplo, contener de 1 a 3 átomos de carbono, y como ejemplo adicional, dichos sustituyentes pueden contener 1 o 2 átomos de carbono (es decir, metoxi y etoxi).

[0180] El término "ácido alquilo" se refiere a un sustituyente ácido que se encuentra en un grupo alquilo, como -(CH<2>)<o>COOH, en el que o es un número entero entre 1 y 6. El grupo alquilo puede ser lineal o ramificado.

[0181] [0104]El término "arilo", tal como se utiliza en el presente documento, y a menos que se especifique lo contrario, se refiere a un sustituyente aromático que generalmente, aunque no necesariamente, contiene de 5 a 30 átomos de carbono y contiene un anillo aromático único o múltiples anillos aromáticos que están fusionados, directa o indirectamente unidos (de tal manera que los diferentes anillos aromáticos están unidos a un grupo común tal como una fracción de metileno o etileno). Los grupos arilo pueden, por ejemplo, contener de 5 a 20 átomos de carbono, y como ejemplo adicional, los grupos arilo pueden contener de 5 a 12 átomos de carbono. Por ejemplo, los grupos arilo pueden contener un anillo aromático o dos anillos aromáticos fusionados o enlazados,p. ej.,fenilo, naftilo, bifenilo, difeniléter, difenilamina, benzofenona y similares. "Arilo sustituido" se refiere a una fracción de arilo sustituida con uno o más grupos sustituyentes, y los términos "arilo que contiene heteroátomos" y "heteroarilo" se refieren a un sustituyente arilo en el que al menos un átomo de carbono se sustituye por un heteroátomo, como se describirá con más detalle infra. Si no se indica lo contrario, el término "arilo" incluye anillos no sustituidos, sustituidos y/o con sustituyentes aromáticos que contienen heteroátomos.

[0182] El término "aralquilo" se refiere a un grupo alquilo con un sustituyente arilo, y el término "alcarilo" se refiere a un grupo arilo con un sustituyente alquilo, donde "alquilo" y "arilo" son como se han definido anteriormente. En general, los grupos aralquilo y alcarilo contienen de 6 a 30 átomos de carbono. Los grupos aralquilo y alcarilo pueden, por ejemplo, contener de 6 a 20 átomos de carbono, y como ejemplo adicional, dichos grupos pueden contener de 6 a 12 átomos de carbono.

[0183] El término "amino" se utiliza aquí para referirse al grupo -NZ<1>Z<2>en el que Z<1>y Z<2>son sustituyentes hidrógeno o no hidrógeno, con sustituyentes no hidrógeno que incluyen, por ejemplo, alquilo, arilo, alquenilo, aralquilo y variantes sustituidas y/o que contienen heteroátomo de los mismos.

[0184] Los términos "halo" y "halógeno" se utilizan en el sentido convencional para referirse a un sustituyente cloro, bromo, fluoro o yodo.

[0185] El término "que contiene heteroátomos" como en un "grupo alquilo que contiene heteroátomos" (también denominado grupo "heteroalquilo") o un "grupo arilo que contiene heteroátomos" (también denominado grupo "heteroarilo") se refiere a una molécula, enlace o sustituyente en el que uno o más átomos de carbono se sustituyen por un átomo distinto del carbono,p. ej., nitrógeno, oxígeno, azufre, fósforo o silicio, normalmente nitrógeno, oxígeno o azufre. Del mismo modo, el término "heteroalquilo" se refiere a un sustituyente alquilo que contiene heteroátomos, el término "heterociclo" o "heterocíclico" se refiere a una fracción cíclica que contiene heteroátomos, los términos "heteroarilo" y "heteroaromático" se refieren respectivamente a los sustituyentes "arilo" y "aromático" que contienen heteroátomos, y similares. Los ejemplos de grupos heteroalquilo incluyen alcoxiarilo, alquilo sustituido por alquilsulfanilo, aminoalquilo N-alquilado y similares. Ejemplos de sustituyentes heteroarilo son pirrolilo, pirrolidinilo, piridinilo, quinolinilo, indolilo, furilo, pirimidinilo, imidazolilo, 1,2,4-triazolilo, tetrazolilo, etc., y ejemplos de grupos alicíclicos que contienen heteroátomos son pirrolidino, morfolino, piperazino, piperidino, tetrahidrofuranoilo, etc.

[0186] "Hidrocarbilo" se refiere a radicales hidrocarbilo univalentes que contienen de 1 a aproximadamente 30 átomos de carbono, incluyendo de 1 a aproximadamente 24 átomos de carbono, incluyendo además de 1 a aproximadamente 18 átomos de carbono, e incluyendo además de aproximadamente 1 a 12 átomos de carbono, incluyendo especies lineales, ramificadas, cíclicas, saturadas e insaturadas, tales como grupos alquilo, grupos alquenilo, grupos arilo, y similares. "Hidrocarbilo sustituido" se refiere al hidrocarbilo sustituido con uno o más grupos sustituyentes, y el término "hidrocarbilo que contiene heteroátomo" se refiere al hidrocarbilo en el que al menos un átomo de carbono se sustituye por un heteroátomo.

[0187] El término "aminoácido O-ligado" significa cualquier aminoácido, natural o sintético, ligado a una molécula a través de un oxígeno de un grupo carboxilo del aminoácido, preferentemente a través del grupo carboxilo del extremo carboxi del aminoácido.

[0188] Tal como se utiliza en el presente documento, el término "grupo protector" significa que una fracción funcional particular,p. ej.,O, S o N, se bloquea temporalmente para que una reacción pueda llevarse a cabo selectivamente en otro sitio reactivo en un compuesto multifuncional. En realizaciones preferidas, un grupo protector reacciona selectivamente en buen rendimiento para dar un sustrato protegido que es estable a las reacciones proyectadas; el grupo protector debe ser eliminado selectivamente en buen rendimiento por reactivos fácilmente disponibles, preferiblemente no tóxicos que no atacan a los otros grupos funcionales; el grupo protector forma un derivado fácilmente separable (más preferiblemente sin la generación de nuevos centros estereogénicos); y el grupo protector tiene un mínimo de funcionalidad adicional para evitar más sitios de reacción. Como se detalla en el presente documento, pueden utilizarse grupos protectores de oxígeno, azufre, nitrógeno y carbono. Por ejemplo, en ciertas realizaciones, pueden utilizarse ciertos grupos protectores de oxígeno ejemplares. Estos grupos protectores de oxígeno incluyen, entre otros, éteres metílicos, éteres metílicos sustituidos (p. ej.,MOM (éter metoximetil), MTM (éter metiltiometil), BOM (éter benzoiloximetil) y PMBM (éter p-metoxibenciloximetil)), éteres etílicos sustituidos, éteres bencílicos sustituidos, éteres silílicos (p. ej.,TMS (trimetilsilil éter), TES (trietilsililéter), TIPS (triisopropilsil éter), TBDMS (t-butildimetilsilil éter), tribencil silil éter y TBDPS (tbutildifenil silil éter), ésteres (p. ej.,formiato, acetato, benzoato (Bz), trifluoroacetato y dicloroacetato), carbonatos, acetales cíclicos y cetales. En algunas otras realizaciones ejemplares, se utilizan grupos protectores de nitrógeno. Los grupos protectores de nitrógeno, así como los métodos de protección y desprotección son conocidos en la técnica. Los grupos protectores de nitrógeno incluyen, pero no se limitan a, carbamatos (incluyendo metil, etil y carbamatos de etilo sustituidos (p. ej.,Troc), amidas, derivados cíclicos de imida, N-alquil y N-aril aminas, derivados de imina y derivados de enamina. En otras realizaciones, pueden utilizarse ciertos grupos protectores de azufre ejemplares. Los grupos protectores de azufre incluyen, pero no se limitan a aquellos grupos protectores de oxígeno descritos anteriormente, así como ácido carboxílico alifático (p. ej., ácido acrílico), maleimida, vinil sulfonilo y ácido maleico opcionalmente sustituido. Ciertos otros grupos protectores ejemplares se detallan aquí, sin embargo, se apreciará que la presente invención no pretende limitarse a estos grupos protectores; más bien, una variedad de grupos protectores equivalentes adicionales pueden ser fácilmente identificados utilizando los criterios anteriores y utilizados en la presente invención. Además, en "Protective Groups in Organic Synthesis" Third Ed. Greene, T.W. y Wuts, P.G., Eds., John Wiley & Sons, Nueva York: 1999

[0189] [0112]Por "sustituido", como en "hidrocarbilo sustituido", "alquilo sustituido", "arilo sustituido" y similares, como se menciona en algunas de las definiciones anteriores, se entiende que en el hidrocarbilo, alquilo, arilo u otra fracción, al menos un átomo de hidrógeno unido a un átomo de carbono (u otro) se sustituye por uno o más sustituyentes no hidrógeno. Ejemplos de tales sustituyentes incluyen, sin limitación, grupos funcionales y las fracciones de hidrocarbilo alquilo C<1>-C<24>(incluyendo alquilo C<1>-C<18>, incluyendo además alquilo C<1>-C<12>, y incluyendo además alquilo C<1>-C<6>), alquenilo C<2>-C<24>(incluyendo alquenilo C<2>-C<18>, incluyendo además alquenilo C<2>-C<12>, y incluyendo además alquenilo C<2>-C<6>), alquinilo C<2>-C<24>(incluyendo alquinilo C<2>-C<18>, incluyendo además alquinilo C<2>-C<12>, y incluyendo además alquinilo C<2>-C<6>), arilo C<5>-C<30>(incluyendo arilo C<5>-C<20>, y incluyendo además arilo C<5>-C<12>), y aralquilo C<6>-C<30>(incluyendo aralquilo C<6>-C<20>, y incluyendo además aralquilo C<6>-C<12>).

[0190] Por "grupo funcional", como se alude en algunas de las definiciones antes mencionadas, se entiende un grupo no hidrógeno que comprende una o más funcionalidades no hidrocarbonadas. Ejemplos de grupos funcionales incluyen, sin limitación halo, hidroxilo, sulfhidrilo, alcoxi C<1>-C<24>, alquinoxi C<2>-C<24>, alquinoxi C<2>-C<24>, ariloxi C<5>-C<20>, acilo [incluyendo alquilcarbonilo C<2>-C<24>(-CO-alquilo) y arilcarbonilo C<6>-C<20>(-CO-arilo)], aciloxi (-O-acil), alcoxicarbonilo C<2>-C<24>(-(CO)-O-alquilo), ariloxicarbonilo C<6>-C<20>(-(CO)-O-arilo), halocarbonilo (-CO)-X donde X es halo), alquilcarbonato C<2>-C<24>(-O-(CO)-O-alquilo), arilcarbonato C<6>-C<20>(-O-(CO)-O-arilo), carboxi (-COOH), carboxilato (-COO-), carbamoilo (-(CO)-NH<2>), alquilcarbamoilo C<1>-C<24>monosustituido (-(CO)-NH(alquilo C<1>-C<24>)), alquilcarbamoilo di-sustituido (-(CO)-N(alquilo C<1>-C<24>)<2>), arilcarbamoil monosustituido (-(CO)-NH-arilo), tiocarbamoil (-(CS)-NH<2>), carbamido (-NH-(CO)-NH<2>), ciano (-C≡N), isociano (-N<+>≡C-), cianato (-O-C≡N), isocianato (-O-N<+>≡C-), isotiocianato (-S-C≡N), azido (-N=N<+>=N-), formilo (-(CO)-H), tioformilo (-(CS)-H), amino (-NH<2>), mono- y di-(alquilo C<1>-C<24>)-amino sustituido, mono- y di-(arilo C<5>-C<20>)-amino sustituido, alquilamido C<2>-C<24>(-NH-(CO)-alquilo), arilamido C<5>-C<20>(-NH-(CO)-arilo), imino (-CR=NH donde R = hidrógeno, alquilo C<1>-C<24>, arilo C<5>-C<20>, alcarilo C<6>-C<20>, aralquilo C<6>-C<20>, etc.), alquilimino (-CR=N(alquilo), donde R = hidrógeno, alquilo, arilo, alquilarilo, etc.), arilimino (-CR=N(arilo), donde R = hidrógeno, alquilo, arilo, alquilarilo, etc.), nitro (-NO<2>), nitroso (-NO), sulfo (-SO<2>-OH), sulfonato (-SO<2>-O-), alquilsulfanilo C<1>-C<24>(-S-alquilo; también denominado "alquiltio"), arilsulfanilo (-S-arilo; también denominado "ariltio"), alquilsulfinilo C<1>-C<24>(-(SO)-alquilo), arilsulfinilo C<5>-C<20>(-(SO)-arilo), alquilsulfonilo C<1>-C<24>(-SO<2>-alquilo), arilsulfonilo C<5>-C<20>(-SO<2>-arilo), fosfono (-P(O)(OH)<2>), fosfonato (-P(O)(O-)<2>), fosfinato (-P(O)(O-)), fosfo (-PO<2>) y fosfino (-PH<2>), fosfino mono- y di-(alquilo C<1>-C<24>)-sustituido, fosfino mono- y di-(arilo C<5>-C<20>)-sustituido; y las fracciones hidrocarbonadas alquilo C<1>-C<24>(incluyendo alquilo C<1>-C<18>, incluyendo además alquilo C<1>-C<12>, y incluyendo además alquilo C<1>-C<6>), alquenilo C<2>-C<24>(incluyendo alquenilo C<2>-C<18>, incluyendo además alquenilo C<2>-C<12>, y incluyendo además alquenilo C<2>-C<6>), alquinilo C<2>-C<24>(incluyendo alquinilo C<2>-C<18>, incluyendo además alquinilo C<2>-C<12>, y incluyendo además alquinilo C<2>-C<6>), arilo C<5>-C<30>(incluyendo arilo C<5>-C<20>, y incluyendo además arilo C<5>-C<12>), y aralquilo C<6>-C<30>(incluyendo aralquilo C<6>-C<20>, y incluyendo además aralquilo C<6>-C<12>). Además, los grupos funcionales antes mencionados pueden, si un grupo particular lo permite, ser sustituidos adicionalmente con uno o más grupos funcionales adicionales o con una o más moléculas de hidrocarbilo como las específicamente enumeradas anteriormente. De forma análoga, las moléculas de hidrocarbilo mencionadas pueden sustituirse además con uno o más grupos funcionales o moléculas de hidrocarbilo adicionales, como las enumeradas específicamente.

[0191] El término "telescópico de un proceso" se refiere al colapso de un proceso de múltiples etapas en un número menor de etapas u operaciones unitarias. Una operación unitaria incluye transformaciones, pero también abarca etapas de manipulación y aislamiento. La centrifugación, la filtración, la destilación, la decantación, la precipitación/cristalización y el envasado son ejemplos de operaciones unitarias. Existen numerosos ejemplos de telescopado y otras mejoras del proceso en la bibliografía (véase, p. ej., J. Org. Chem., 2007, 72, 9757-9760).

[0192] Se apreciará que algunas de las definiciones mencionadas pueden solaparse, de modo que algunas moléculas químicas pueden corresponder a más de una definición.

[0193] Cuando el término "sustituido" aparece antes de una lista de posibles grupos sustituidos, se pretende que el término se aplique a cada miembro de ese grupo. Por ejemplo, la frase "alquilo sustituido y arilo" debe interpretarse como "alquilo sustituido y arilo sustituido".

[0194] La divulgación proporciona métodos para sintetizar un compuesto, p. ej., uno que sea útil como intermedio para sintetizar los compuestos de piridazinona como análogos de la hormona tiroidea. Los compuestos de piridazinona como análogos de la hormona tiroidea, así como sus profármacos, se han divulgado, p. ej., en la Patentes de EE.UU.7.452.882, 7.807.674, 8.076.334 y 5.019.369.

[0195] En particular, la divulgación describe un método de fabricación de 6-(4-amino-2,6-diclorofenoxi)-4-isopropilpiridazin-3(2H)-ona("Int.7")o una sal del mismo, comprendiendo el método:

[0196] (a) poner en contacto R<1>MgX o R<1>Li con un compuesto de Fórmula (I):

[0199]

[0200] para formar un compuesto de Fórmula (II):

[0203]

[0206] en el que R<1>es isopropilo o isopropenilo, X es halo y R<2>es H o un grupo protector de amina; y (b) convertir el compuesto de Fórmula (II) en un compuesto de Fórmula (III):

[0209]

[0212] en presencia de una base cuando R<1>es isopropenilo o en presencia de un agente oxidante cuando R<1>es isopropilo.

[0213] La presente divulgación también describe un método para sintetizar los compuestos de piridazinona como análogos de la hormona tiroidea, así como sus profármacos. Tales compuestos incluyen los divulgados en las Patentes de EE.UU.

[0214] 7.452.882, 7.807.674, 8.076.334 y 5.019.369. En particular, la divulgación describe un método para hacer un compuesto de Fórmula (IV) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo:

[0217]

[0220] donde

[0221] R<3>es H o CH<2>R<a>, en el que R<a>es hidroxilo, aminoácido ligado a O, -OP(O)(OH)<2>o

[0222] -OC(O)-R<b>, siendo R<b>alquilo inferior, alcoxi, alquilo ácido, cicloalquilo, arilo, heteroarilo, o -(CH<2>)<n>-heteroarilo y siendo n 0 ó 1;

[0223] R<4>es H, y R<5>es CH<2>COOH, C(O)CO<2>H, o un éster o amida de los mismos, o R<4>y R<5>juntos son -N=C(R<c>)-C(O)-NH-C(O)-; en el que R<c>es H o ciano. El método comprende: (a) poner en contacto R<1>MgX o R<1>Li con un compuesto de Fórmula (I):

[0226]

[0228] para formar un compuesto de Fórmula (II):

[0229]

[0232] en el que R<1>es isopropilo o isopropenilo, X es halo y R<2>es H o un grupo protector de amina; y (b) convertir el compuesto de Fórmula (II) en un compuesto de Fórmula (III):

[0235]

[0238] en presencia de una base cuando R<1>es isopropenilo o en presencia de bromo y un ácido cuando R<1>es isopropilo,

[0239] (c) cuando esté presente, eliminar el R<2>grupo protector de amina del compuesto de Fórmula (III) para formar 6-(4-amino-2,6-diclorofenoxi)-4-isopropilpiridazin-3(2H)-ona; y, opcionalmente (d) convertir 6-(4-amino-2,6-diclorofenoxi)-4-isopropilpiridazin-3(2H)-ona en el compuesto de Fórmula (IV) en condiciones adecuadas.

[0240] La presente divulgación también proporciona métodos detallados para la síntesis de varios compuestos divulgados de acuerdo con los siguientes esquemas y como se muestra en los Ejemplos.

[0241] A lo largo de la descripción, donde las composiciones se describen como teniendo, incluyendo, o comprendiendo componentes específicos, se contempla que las composiciones también consisten esencialmente en, o consisten en, los componentes recitados. Del mismo modo, cuando los métodos o procesos se describen como que tienen, incluyen o comprenden etapas de proceso específicas, los procesos también consisten esencialmente en, o consisten en, las etapas de procesamiento mencionadas. Además, debe entenderse que el orden de las etapas o el orden para realizar ciertas acciones es irrelevante mientras los métodos o procesos sigan siendo operables. Además, se pueden realizar dos o más etapas o acciones simultáneamente.

[0242] Los procesos sintéticos aquí descritos pueden tolerar una amplia variedad de grupos funcionales, por lo que pueden utilizarse diversos materiales de partida sustituidos. Los procesos generalmente proporcionan el compuesto final deseado al final o cerca del final del proceso global, aunque puede ser deseable en ciertos casos convertir aún más el compuesto en una sal farmacéuticamente aceptable, éster o profármaco del mismo.

[0243] En algunas realizaciones, 6-(4-amino-2,6-diclorofenoxi)-4-isopropilpiridazin-3(2H)-ona("Int.7")se prepara según los esquemas 1 ó 2 que figuran a continuación.

[0244] Esquema 1: Síntesis de 6-(4-amino-2,6-diclorofenoxi)-4-isopropilpiridazin-3(2H)-ona(Int. 7)con reactivo isopropílico de Grignard (iPrMgX).

[0245]

[0246]

[0249] Etapa 1:Síntesis de 3,5-dicloro-4-((6-cloropiridazin-3-il)oxi)anilina (Compuesto2)y N-(3,5-dicloro-4-((6-oxo-1,6-dihidropiridazin-3-il)oxi)fenil)benzamida o N-(3,5-dicloro-4-((6-oxo-1,6-dihidropiridazin-3-il)oxi)fenil)acetamida (Compuesto4)

[0250] El Compuesto2se prepara poniendo en contacto 3,6-dicloropiridazina con 2,6-dicloro-4-aminofenol en presencia de una pequeña cantidad de una base adecuada tal como un carbonato metálico (p. ej.,carbonato de cesio o potasio) o un alcóxido metálico (p. ej., t-butóxido de potasio) en un disolvente orgánico adecuado (p. ej.,DMSO o DMAC) a una temperatura de reacción adecuada (p. ej.,de 60 a 120 °C) hasta la finalización de la reacción, normalmente de 3 a 30 horas, por ejemplo de 3 a 15 horas.

[0251] El Compuesto4se prepara protegiendo2con un reactivo protector de amina adecuado (tal como anhídrido benzoico o cloruro benzoico) seguido de tratamiento del intermedio protegido con acetato de sodio en presencia de un disolvente orgánico adecuado (tal como ácido acético) a una temperatura de reacción adecuada(porejemplo, 100 a 120 °C) hasta la finalización de la reacción, típicamente de unas 2 a 20 horas, por ejemplo de unas 5 a 15 horas. El producto bruto se purifica con un disolvente adecuado (p. ej., una mezcla de agua y ácido acético) a una temperatura adecuada (p. ej., 88-100 °C). El Compuesto 4 protegido con acetato puede prepararse sometiendo el Compuesto 2 a las condiciones de hidrólisis.

[0252] Etapa 2:Síntesis de N-(3,5-dicloro-4-((5-isopropil-6-oxo-1,6-dihidropiridazin-3-il)oxi)fenil)benzamida o N-(3,5-dicloro-4-((5-isopropil-6-oxo-1,6-dihidropiridazin-3-il)oxi)fenil)acetamida (Compuesto6)y 6-(4-amino-2,6-diclorofenoxi)-4-isopropilpiridazin-3(2H)-ona(Int.7)

[0253] El Compuesto6se prepara poniendo en contacto el Compuesto4con un Grignard isopropílico en un disolvente orgánico adecuado (como tetrahidrofurano o dioxano) seguido de una etapa de oxidación. La etapa de oxidación puede realizarse en presencia de un reactivo oxidante, como el bromo, en un disolvente orgánico adecuado, como el ácido acético, a una temperatura de reacción adecuada (p. ej.,de 60 a 90 °C) hasta la finalización de la reacción, normalmente entre 2 y 10 horas, por ejemplo, entre 2 y 5 horas.

[0254] Se apreciará que se requiere una reacción de desprotección para completar la transformación del Compuesto6enInt. 7.En particular, el grupo N-protector (es decir, acetilo o benzoilo) debe eliminarse para obtener el amino libre presente enInt.7.Así, en una realización,Int.7se obtiene desprotegiendo el Compuesto6(donde R<2>es Bz) con una base como hidróxido metálico (p. ej., KOH o NaOH) o carbonato metálico (p. ej., carbonato sódico). En otra realización,Int.7se obtiene desprotegiendo el Compuesto6(donde R<2>es Ac) con un ácido como el trifluoroacético.

[0255] Alternativamente, el Compuesto7se prepara poniendo en contacto el Compuesto4con un isopropenil Grignard en un disolvente orgánico adecuado (tal como tetrahidrofurano o 2-metil THF) seguido de isomerización (p. ej., de5Aa6) y desprotección bajo el tratamiento de una base tal como hidróxido metálico (p. ej., KOH). La etapa de isomerización/desprotección se realiza a una temperatura de reacción adecuada (p. ej.,de 60 a 90 °C) hasta la finalización de la reacción, normalmente entre 10 y 60 horas, por ejemplo unas 16 horas a 90 °C.

[0256] La reacción de Grignard puede realizarse en presencia de un ácido de Lewis como LiCl o LiBr a una temperatura de reacción adecuada (p. ej.,temperatura ambiente a 40 °C) hasta la finalización de la reacción, típicamente de 2 a 10 horas, por ejemplo de 2 a 5 horas.

[0257] En algunas realizaciones, la síntesis del compuesto5o5Amejora el rendimiento deInt.7en relación con otros métodos conocidos en la técnica. Por ejemplo, la síntesis de5o5Ada lugar a un rendimiento superior al 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85% o superior al 90%.

[0258] En realizaciones, la reacción de Grignard mejora la regioselectividad, dando como resultado significativamente menos regioisómero β-isopropílico del Compuesto6, es decir,

[0261]

[0263] y, por tanto,Int.7más puro.

[0264] En una realización, la conversión de 6-(4-amino-2,6-diclorofenoxi)-4-isopropilpiridazin-3(2H)-ona("Int. 7") alCompuestoA se realiza según el Esquema 3 siguiente.

[0267]

[0269] Etapa 3:Síntesis de 6-(4-amino-2,6-diclorofenoxi)-4-isopropilpiridazin-3(2H)-ona(Int.8)

[0270] Int. 8se prepara poniendo en contacto 6-(4-amino-2,6-diclorofenoxi)-4-isopropilpiridazin-3(2H)-ona con (2-cianoacetil)carbamato de etilo y un nitrito metálico, como el nitrito de sodio, en presencia de un ácido (como HCl) en un disolvente adecuado (p. ej.,una mezcla de ácido acético y agua) a una temperatura de reacción adecuada (p. ej.,inferior a 10 °C) hasta que se complete la reacción.

[0271] Etapa 4:Síntesis de 2-(3,5-dicloro-4-((5-isopropil-6-oxo-1,6-dihidropiridazin-3-il)oxi)fenil)-3,5-dioxo-2,3,4,5-tetrahidro-1,2,4-triazina-6-carbonitrilo(CompuestoA)

[0272] ElCompuesto Ase prepara poniendo en contactoInt.8y una base tal como acetato de sodio o acetato de potasio en un disolvente adecuado (p. ej.,DMAC) a una temperatura de reacción adecuada (p. ej.,a aproximadamente 120 °C) hasta que se complete la reacción.

[0273] [0136]En algunas realizaciones, la conversión de 6-(4-amino-2,6-diclorofenoxi)-4-isopropilpiridazin-3(2H)-ona("Int.7")a un compuesto de Fórmula (IV) distinto de MGL-3916 (como los profármacos del mismo) se realiza en las condiciones descritas en, p. ej., Patentes de EE.UU. 7.452.882, 7.807.674, 8.076.334 y 5.019.369. Los métodos sintéticos aquí descritos dan como resultado una regioselectividad superior, con la instalación de Grignard del grupo isopropenilo o isopropilo frente a la formación de éter de biarilo en la ruta sintética previamente divulgada en, p. ej., la Patente 7.452.882, que daba una regioselectividad pobre. Además, telescópicamente la formación de éter de biarilo en la protección de benzamida, los métodos divulgados aquí evitan el aislamiento del producto de éter de biarilo, que era casi prácticamente imposible debido a los tiempos de filtración de más de 1 semana por lote al sintetizar este producto en cantidades de kilogramo.

[0274] La presente invención proporcionael Compuesto Ay composiciones farmacéuticas que comprendenel Compuesto Ay al menos un excipiente o portador farmacéuticamente aceptable, para su uso como medicamento, en las que elCompuesto Ase administra en una cantidad eficaz de hasta 100 mg al día. En una realización, elCompuesto Ao la composición farmacéutica es para el tratamiento o prevención de la obesidad, hiperlipidemia, hipercolesterolemia, diabetes, esteatohepatitis no alcohólica, hígado graso, enfermedad ósea, alteración del eje tiroideo, aterosclerosis, un trastorno cardiovascular, taquicardia, comportamiento hipercinético, hipotiroidismo, bocio, trastorno por déficit de atención con hiperactividad, problemas de aprendizaje, retraso mental, pérdida de audición, retraso de la edad ósea, enfermedad neurológica o psiquiátrica o cáncer de tiroides.

[0275] Se apreciará que los métodos aquí divulgados son adecuados tanto para preparaciones a gran escala como a pequeña escala de los compuestos deseados. En realizaciones preferidas de los métodos aquí descritos, los análogos de la hormona tiroidea pueden prepararse a gran escala, por ejemplo a escala de producción industrial en lugar de a escala experimental/laboratorio. Por ejemplo, un proceso de tipo discontinuo según los métodos de la divulgación permite la preparación de lotes de al menos 1 g, o al menos 5 g, o al menos 10 g, o al menos 100 g, o al menos 1 kg, o al menos 100 kg de análogos de hormona tiroidea. Además, los métodos permiten la preparación de un análogo de la hormona tiroidea con una pureza de al menos el 98%, o al menos el 98,5% medida por HPLC.

[0276] Composiciones Farmacéuticas

[0277] La presente invención también se refiere a composiciones farmacéuticas que comprenden elCompuesto Aen combinación con al menos un excipiente o portador farmacéuticamente aceptable, para su uso como medicamento.

[0278] Una "composición farmacéutica" es una formulación que contiene elCompuesto Aen una forma adecuada para su administración a un sujeto. En una realización, la composición farmacéutica se presenta a granel o en forma de dosificación unitaria. La forma de dosificación unitaria es cualquiera de una variedad de formas, incluyendo, por ejemplo, una cápsula, una bolsa intravenosa, un comprimido, una bomba única en un inhalador de aerosol o un vial. La cantidad de ingrediente activo(porejemplo, una formulación del compuesto divulgado o sal, hidrato, solvato o isómero del mismo) en una dosis unitaria de composición es una cantidad eficaz y varía según el tratamiento particular de que se trate. Un experto en la materia apreciará que a veces es necesario realizar variaciones rutinarias de la dosis en función de la edad y el estado del paciente. La dosis también dependerá de la vía de administración. Se contemplan diversas vías, como la oral, pulmonar, rectal, parenteral, transdérmica, subcutánea, intravenosa, intramuscular, intraperitoneal, inhalatoria, bucal, sublingual, intrapleural, intratecal, intranasal y similares. Las formas de dosificación para la administración tópica o transdérmica delCompuesto Aincluyen polvos, aerosoles, pomadas, pastas, cremas, lociones, geles, soluciones, parches e inhalantes. En una realización, elCompuesto Ase mezcla en condiciones estériles con un portador farmacéuticamente aceptable, y con los conservantes, tampones o propelentes que sean necesarios.

[0279] Tal como se utiliza en el presente documento, la frase "farmacéuticamente aceptable" se refiere a aquellos compuestos, materiales, composiciones, portadores y/o formas de dosificación que son, dentro del ámbito del buen juicio médico, adecuados para su uso en contacto con los tejidos de seres humanos y animales sin excesiva toxicidad, irritación, respuesta alérgica u otro problema o complicación, proporcional a una relación beneficio/riesgo razonable.

[0280] "Excipiente o portador farmacéuticamente aceptable" significa un excipiente o portador que es útil en la preparación de una composición farmacéutica que es generalmente segura, no tóxica y ni biológicamente ni de otra manera indeseable, e incluye excipiente que es aceptable para uso veterinario así como para uso farmacéutico humano. Un "excipiente farmacéuticamente aceptable", tal como se utiliza en la especificación y en las reivindicaciones, incluye tanto uno como más de un excipiente de este tipo.

[0281] Una composición farmacéutica de la invención se formula para que sea compatible con su vía de administración prevista. Ejemplos de vías de administración incluyen la parenteral,porejemplo, intravenosa, intradérmica, subcutánea, oral (p. ej.,inhalación), transdérmica (tópica) y transmucosa. Las soluciones o suspensiones utilizadas para aplicación parenteral, intradérmica o subcutánea pueden incluir los siguientes componentes: un diluyente estéril como agua para inyección, solución salina, aceites fijos, polietilenglicoles, glicerina, propilenglicol u otros disolventes sintéticos; agentes antibacterianos como alcohol bencílico o metilparabenos; antioxidantes como ácido ascórbico o bisulfito sódico; agentes quelantes como ácido etilendiaminotetraacético; tampones como acetatos, citratos o fosfatos, y agentes para el ajuste de la tonicidad como cloruro sódico o dextrosa. El pH puede ajustarse con ácidos o bases, como el ácido clorhídrico o el hidróxido de sodio. El preparado parenteral puede presentarse en ampollas, jeringas desechables o viales de dosis múltiples de vidrio o plástico.

[0282] El término "cantidad terapéuticamente eficaz", tal como se utiliza aquí, se refiere a una cantidad de un agente farmacéutico para tratar, mejorar o prevenir una enfermedad o afección identificada, o para exhibir un efecto terapéutico o inhibitorio detectable. El efecto puede detectarse mediante cualquier método de ensayo conocido en la técnica. La cantidad eficaz precisa para un sujeto dependerá de su peso corporal, tamaño y estado de salud; de la naturaleza y el alcance de la afección; y de la terapéutica o combinación de terapéuticas seleccionadas para su administración. Las cantidades terapéuticamente eficaces para una situación dada pueden determinarse mediante la experimentación rutinaria que está dentro de la habilidad y el juicio del clínico. En un aspecto preferido, la enfermedad o afección a tratar es un trastorno metabólico.

[0284] El Compuesto A se administra al sujeto en una cantidad eficaz de hasta 100 mg al día. El Compuesto A o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo puede administrarse mediante cualquiera de los métodos habituales y aceptables conocidos en la técnica, ya sea por separado o en combinación, incluyendo por vía oral (p. ej., cavidad bucal), sublingual, parenteral (p. ej., intramuscular, intravenosa o subcutánea), rectal (p. ej., por supositorios o lavados), transdérmica (p. ej., electroporación cutánea) o por inhalación (p. ej., por aerosol), y en forma de dosis sólidas, líquidas o gaseosas, incluidos comprimidos y suspensiones. La administración puede realizarse en una forma de dosificación unitaria con terapia continua o en una terapia de dosis única ad libitum. La composición terapéutica también puede presentarse en forma de emulsión o dispersión oleosa junto con una sal lipofílica como el ácido pamoico, o en forma de composición biodegradable de liberación sostenida para administración subcutánea o intramuscular. Los portadores farmacéuticos útiles para la preparación de las composiciones pueden ser sólidos, líquidos o gaseosos; por lo tanto, las composiciones pueden adoptar la forma de comprimidos, píldoras, cápsulas, supositorios, polvos, formulaciones con recubrimiento entérico u otras formulaciones protegidas (p. ej., unión a resinas de intercambio iónico o envasado en vesículas lipídico-proteicas), formulaciones de liberación sostenida, soluciones, suspensiones, elixires, aerosoles y similares. El portador puede seleccionarse entre diversos aceites, incluidos los de origen petrolífero, animal, vegetal o sintético, p. ej., aceite de cacahuete, aceite de soja, aceite mineral, aceite de sésamo y similares. El agua, la solución salina, la dextrosa acuosa y los glicoles son los portadores líquidos preferidos, en particular (cuando son isotónicos con la sangre) para soluciones inyectables. Por ejemplo, las formulaciones para administración intravenosa comprenden soluciones acuosas estériles del ingrediente o ingredientes activos que se preparan disolviendo el ingrediente o ingredientes activos sólidos en agua para producir una solución acuosa, y esterilizando la solución. Los excipientes farmacéuticos adecuados incluyen almidón, celulosa, talco, glucosa, lactosa, talco, gelatina, malta, arroz, harina, tiza, sílice, estearato de magnesio, estearato de sodio, monoestearato de glicerol, cloruro de sodio, leche desnatada en polvo, glicerol, propilenglicol, agua, etanol y similares. Las composiciones pueden someterse a aditivos farmacéuticos convencionales como conservantes, agentes estabilizantes, agentes humectantes o emulsionantes, sales para ajustar la presión osmótica, tampones y similares. Los soportes farmacéuticos adecuados y su formulación se describen en Remington's Pharmaceutical Sciences de E. W. Martin. Dichas composiciones contendrán, en cualquier caso, una cantidad eficaz del compuesto activo junto con un portador adecuado para preparar la forma de dosificación apropiada para su correcta administración al receptor.

[0286] Los preparados farmacéuticos también pueden contener agentes conservantes, agentes solubilizantes, agentes estabilizantes, agentes humectantes, agentes emulsionantes, agentes edulcorantes, agentes colorantes, agentes aromatizantes, sales para variar la presión osmótica, tampones, agentes de recubrimiento o antioxidantes. También pueden contener otras sustancias con valor terapéutico, incluidos principios activos adicionales distintos de los de la fórmula I.

[0288] ElCompuesto Ade la presente invención es para uso como medicamento. ElCompuesto Ade la presente invención puede utilizarse en el tratamiento de una resistencia a la hormona tiroidea (RTH) en un sujeto que tiene al menos una mutación TRβ. El sujeto puede padecer una enfermedad, como obesidad, hiperlipidemia, hipercolesterolemia, diabetes, esteatohepatitis no alcohólica, hígado graso, enfermedad ósea, alteración del eje tiroideo, aterosclerosis, un trastorno cardiovascular, taquicardia, comportamiento hipercinético, hipotiroidismo, bocio, trastorno por déficit de atención con hiperactividad, problemas de aprendizaje, retraso mental, pérdida de audición, retraso de la edad ósea, enfermedad neurológica o psiquiátrica o cáncer de tiroides.

[0290] La cantidad o dosificación terapéuticamente eficaz del Compuesto A según esta invención puede variar dentro de amplios límites y puede determinarse de una manera conocida en la técnica. Por ejemplo, el fármaco puede dosificarse en función del peso corporal. Dicha dosificación se ajustará a los requisitos individuales en cada caso concreto, incluyendo el compuesto o compuestos específicos que se administren, la vía de administración, la afección que se trate, así como el paciente tratado. En otra realización, el fármaco puede administrarse mediante dosis fijas, p. ej., dosis no ajustadas en función del peso corporal. Una dosis preferida puede ser de unos 20 mg a aproximadamente 100 mg al día. La dosis diaria puede administrarse como dosis única o en dosis divididas, o para administración parenteral puede administrarse como infusión continua.

[0292] Una cantidad eficaz de un agente farmacéutico es aquella que proporciona una mejoría objetivamente identificable según lo observado por el clínico u otro observador cualificado. Tal como se utiliza en el presente documento, el término "dosis eficaz" se refiere a la cantidad de un compuesto activo para producir el efecto biológico deseado en un sujeto o célula.

[0294] [0150]Las composiciones farmacéuticas pueden incluirse en un recipiente, envase o dispensador junto con las instrucciones de administración.

[0295] ElCompuesto Aes capaz de formar más sales. Todas estas formas también se contemplan dentro del ámbito de la invención reivindicada.

[0296] Como se usa aquí, "sales farmacéuticamente aceptables" se refiere a derivados delCompuestoA en los que elCompuestoA se modifica haciendo sales ácidas o básicas del mismo. Ejemplos de sales farmacéuticamente aceptables incluyen, pero no se limitan a, sales minerales o de ácidos orgánicos de residuos básicos como aminas, sales alcalinas u orgánicas de residuos ácidos como ácidos carboxílicos, y similares. Las sales farmacéuticamente aceptables incluyen las sales no tóxicas convencionales o las sales de amonio cuaternario formadas, por ejemplo, a partir de ácidos inorgánicos u orgánicos no tóxicos. Por ejemplo, tales sales convencionales no tóxicas incluyen, pero no se limitan a, las derivadas de ácidos inorgánicos y orgánicos seleccionados de 2-acetoxibenzoico, 2-hidroxietano sulfónico, acético, ascórbico, benceno sulfónico, benzoico, bicarbónico, carbónico, cítrico, edético, etano disulfónico, 1,2-etano sulfónico, fumárico, glucoheptónico, glucónico, glutámico, glicólico, glicolilarsanílico, hexilresorcínico, hidrábámico, bromhídrico, clorhídrico, yodhídrico, hidroximaleico, hidroxinaftoico, isetiónico, láctico, lactobiónico, lauril sulfónico, maleico, málico, mandélico, metano sulfónico, napsílico, nítrico, oxálico, pamoico, pantoténico, fenilacético, fosfórico, poligalacturónico, propiónico, salicíclico, esteárico, subacético, succínico, sulfámico, sulfanílico, sulfúrico, tánico, tartárico, tolueno sulfónico, y los ácidos amínicos más comunes, p. ej., glicina, alanina, fenilalanina, arginina, etc.

[0297] Otros ejemplos de sales farmacéuticamente aceptables incluyen el ácido hexanoico, el ácido ciclopentano propiónico, el ácido pirúvico, el ácido malónico, el ácido 3-(4-hidroxibenzoil)benzoico, el ácido cinámico, el ácido 4-clorobencenosulfónico, el ácido 2-naftalenosulfónico, el ácido 4-toluenosulfónico, el ácido canfor sulfónico, el ácido 4-metilbiciclo-[2. 2.2]-oct-2-eno-1-carboxílico y similares.2.2]-oct-2-eno-1-carboxílico, ácido 3-fenilpropiónico, ácido trimetilacético, ácido butilacético terciario, ácido mucónico y similares. La presente invención también abarca sales formadas cuando un protón ácido presente en elCompuesto Ase sustituye por un ion metálico,p. ej.,un ion de metal alcalino, un ion alcalinotérreo o un ion de aluminio; o se coordina con una base orgánica como etanolamina, dietanolamina, trietanolamina, trometamina, N-metilglucamina, dietilamina, dietilaminoetanol, etilendiamina, imidazol, lisina, arginina, morfolina, 2-hidroxietilmorfolina, dibenciltilendiamina, trimetilamina, piperidina, pirrolidina, bencilamina, hidróxido de tetrametilamonio y similares.

[0298] Debe entenderse que todas las referencias a sales farmacéuticamente aceptables incluyen formas de adición de disolventes (solvatos) o formas cristalinas (polimorfos), tal como se definen en el presente documento, de la misma sal.

[0299] Los compuestos de la presente invención también pueden prepararse como ésteres, por ejemplo, ésteres farmacéuticamente aceptables. Por ejemplo, un grupo de función ácido carboxílico en un compuesto puede convertirse en su éster correspondiente,p. ej.,un éster metílico, etílico o de otro tipo. Asimismo, un grupo alcohol de un compuesto puede convertirse en su éster correspondiente,p. ej.,un acetato, un propionato u otro éster.

[0300] ElCompuesto Atambién puede prepararse como profármaco, por ejemplo, un profármaco farmacéuticamente aceptable. Los términos "profármaco" y "profármaco" se utilizan indistintamente en el presente documento y se refieren a cualquier compuesto que libere un fármaco activoin vivo.Dado que se sabe que los profármacos mejoran numerosas cualidades deseables de los productos farmacéuticos (p. ej., solubilidad, biodisponibilidad, fabricación, etc.), los compuestos de la presente invención pueden administrarse en forma de profármaco. Por "profármacos" se entiende cualquier portador unido covalentemente que libera un fármaco activoin vivocuando se administra dicho profármaco a un sujeto. Los profármacos se preparan modificando los grupos funcionales presentes en el compuesto de tal manera que las modificaciones se escinden, ya sea en la manipulación rutinaria oin vivo,al compuesto original. Los profármacos incluyen compuestos en los que un grupo hidroxi, amino, sulfhidrilo, carboxi o carbonilo está unido a cualquier grupo que pueda escindirsein vivopara formar un grupo hidroxilo libre, amino libre, sulfhidrilo libre, carboxi libre o carbonilo libre, respectivamente.

[0301] Los ejemplos de profármacos incluyen, entre otros, ésteres (p. ej.,acetato, dialquilaminoacetatos, formiatos, fosfatos, sulfatos y derivados de benzoato) y carbamatos (p. ej.,N,N-dimetilaminocarbonilo) de grupos funcionales hidroxi, ésteres (p. ej.,ésteres etílicos, ésteres de morfolinoetanol) de grupos funcionales carboxilo, derivados N-acílicos (p. ej.,N-acetilo), bases de N-Mannich, bases de Schiff y enaminonas de grupos funcionales amino, oximas, acetales y ésteres enólicos de cetonas y aldehídos, oximas, acetales y ésteres enólicos de cetonas y aldehídos, N-acetilo) bases N-Mannich, bases Schiff y enaminonas de grupos funcionales amino, oximas, acetales, cetales y ésteres de enol de grupos funcionales cetona y aldehído en compuestos de la invención, y similares, Véase Bundegaard, H., Design of Prodrugs, p1-92, Elesevier, Nueva York-Oxford (1985).

[0302] ElCompuesto A,o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo según la invención, se administran por vía oral, nasal, transdérmica, pulmonar, inhalatoria, bucal, sublingual, intraperintoneal, subcutánea, intramuscular, intravenosa, rectal, intrapleural, intratecal y parenteral. En una realización, elCompuesto Ase administra por vía oral. Un experto en la materia reconocerá las ventajas de determinadas vías de administración.

[0303] [0159]El régimen de dosificación que utiliza los compuestos se selecciona de acuerdo con una variedad de factores que incluyen el tipo, la especie, la edad, el peso, el sexo y la condición médica del paciente; la gravedad de la condición a tratar; la vía de administración; la función renal y hepática del paciente; y el compuesto particular o sal del mismo empleado. Un médico o veterinario normalmente experto puede determinar y recetar fácilmente la cantidad eficaz del medicamento necesaria para prevenir, contrarrestar o detener el progreso de la enfermedad.

[0304] Las técnicas para la formulación y administración de los compuestos divulgados pueden encontrarse en Remington: the Science and Practice of Pharmacy, 19ª edición, Mack Publishing Co., Easton, PA (1995). En una realización, los compuestos descritos en el presente documento, y las sales farmacéuticamente aceptables de los mismos, se utilizan en preparaciones farmacéuticas en combinación con un portador o diluyente farmacéuticamente aceptable. Los portadores farmacéuticamente aceptables adecuados incluyen rellenos sólidos inertes o diluyentes y soluciones acuosas u orgánicas estériles. Los compuestos estarán presentes en dichas composiciones farmacéuticas en cantidades suficientes para proporcionar la cantidad de dosificación deseada en el rango aquí descrito.

[0305] En una realización, la invención presenta elCompuesto Apara su uso en un método para tratar o aliviar un síntoma de resistencia a la hormona tiroidea en un sujeto administrando a un sujeto que expresa un TRβ mutante que comprende una mutación en el dominio de unión a ligando elCompuesto A,por ejemplo, la Forma I del mismo, en una cantidad eficaz de hasta 100 mg al día.

[0306] La divulgación también proporciona un método para determinar una capacidad de respuesta de un sujeto que tiene resistencia a la hormona tiroidea (RTH) a un compuesto de Fórmula (IV) divulgado en el presente documento proporcionando una muestra del sujeto; y detectando al menos una mutación TRβ (p. ej., una mutación genética o una mutación en el dominio de unión a ligando del polipéptido TRβ, por ejemplo, un polipéptido como se define en SEQ ID N.º: 1); y la presencia de dicha mutación indica que el sujeto responde a un compuesto de Fórmula (IV), como elCompuesto A, por ejemplo, la Forma I del mismo. El método puede incluir además tratar al sujeto que tiene la mutación administrando con una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de Fórmula (IV), tal como elCompuesto A,por ejemplo, la Forma I del mismo.

[0307] En una realización, el sujeto que muestra o mostrará capacidad de respuesta a un compuesto de Fórmula (IV) tal como elCompuesto Atiene obesidad, hiperlipidemia, hipercolesterolemia, diabetes, esteatohepatitis no alcohólica, hígado graso, enfermedad ósea, alteración del eje tiroideo, aterosclerosis, un trastorno cardiovascular, taquicardia, comportamiento hipercinético, hipotiroidismo, bocio, trastorno por déficit de atención con hiperactividad, problemas de aprendizaje, retraso mental, pérdida de audición, retraso de la edad ósea, enfermedad neurológica o psiquiátrica o cáncer de tiroides.

[0308] Además, la divulgación también proporciona un método que incluye determinar la presencia de una mutación del gen TRβ en una muestra de un sujeto; y seleccionar, basándose en la presencia de una mutación del gen TRβ, una terapia que incluye la administración de una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de Fórmula (IV), tal como elCompuesto A,por ejemplo, la Forma I del mismo.

[0309] La divulgación también proporciona un método que incluye amplificar un ácido nucleico en una muestra de un sujeto con un cebador que es complementario a una secuencia de ácido nucleico TRβ mutante que comprende una mutación del gen TRβ en una secuencia de ácido nucleico como se define en SEQ ID N.º: 2; determinar la presencia del ácido nucleico amplificado, y seleccionar, basándose en la presencia del ácido nucleico amplificado, una terapia que incluya la administración de una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de Fórmula (IV), o tratar al sujeto administrándole una cantidad terapéuticamente eficaz de un compuesto de Fórmula (IV) basándose en la presencia del ácido nucleico amplificado.

[0310] El TRβ mutante descrito en el presente documento es un polipéptido TRβ mutante o una secuencia de ácido nucleico que codifica un polipéptido TRβ mutante.

[0311] En una realización, el TRβ mutante comprende una o más mutaciones en las posiciones de aminoácidos 234, 243, 316 y 317 de SEQ ID N.º: 1. Más preferiblemente, la mutación se selecciona del grupo que consiste en una sustitución de treonina (T) por el residuo de tipo salvaje alanina (A) en la posición de aminoácido 234 de SEQ ID N.º: 1 (A234T); una sustitución de glutamina (Q) por el residuo de tipo salvaje arginina (R) en la posición de aminoácido 243 de SEQ ID N.º: 1 (R243Q); una sustitución de histidina (H) por el residuo de tipo salvaje arginina (R) en la posición de aminoácido 316 de SEQ ID N.º: 1 (R316H); y una sustitución de treonina (T) por el residuo de tipo silvestre alanina (A) en la posición de aminoácido 317 de SEQ ID N.º: 1 (A317T).

[0312] [0168]En una realización, el TRβ mutante comprende una secuencia de ácido nucleico que codifica un polipéptido TRβ mutante que tiene una o más mutaciones en las posiciones de aminoácidos 234, 243, 316 y 317 de SEQ ID N.º: 1. Una secuencia de ácido nucleico que codifica un polipéptido TRβ mutante o un fragmento peptídico característico del polipéptido TRβ mutante puede detectarse utilizando cualquier método adecuado. Por ejemplo, una secuencia de ácido nucleico que codifica un polipéptido TRβ mutante puede detectarse utilizando la resecuenciación del genoma completo o la resecuenciación de la región diana (esta última también conocida como resecuenciación dirigida) utilizando fuentes de ADN adecuadamente seleccionadas y cebadores de reacción en cadena de la polimerasa (PCR) de acuerdo con métodos bien conocidos en la técnica.Véase, por ejemplo,Bentley (2006) Curr Opin Genet Dev. 16:545-52, y Li et al. (2009) Genome Res 19:1124-32. El método suele y generalmente conlleva las etapas de purificación del ADN genómico, amplificación por PCR para amplificar la región de interés, secuenciación cíclica, limpieza de la reacción de secuenciación, electroforesis capilar y análisis de datos. Se diseñan cebadores PCR de alta calidad para cubrir la región de interés utilizando herramientas de diseño de cebadoresin silico. La secuenciación cíclica es un método sencillo en el que rondas sucesivas de desnaturalización, recocido y extensión en un termociclador dan lugar a una amplificación lineal de los productos de extensión. Los productos suelen terminarse con una etiqueta fluorescente que identifica la base nucleotídica terminal como G, A, T o C. Los colorantes terminadores no incorporados y las sales que pueden competir por la inyección eletroforética capilar se eliminan mediante lavado. Durante la electroforesis capilar, los productos de la reacción de secuenciación cíclica migran a través de capilares llenos de polímero. Los fragmentos de ADN cargados negativamente se separan por tamaño a medida que avanzan por los capilares hacia el electrodo positivo. Tras la electroforesis, el software de recogida de datos crea un archivo de muestra con los datos sin procesar. Mediante aplicaciones de software posteriores, se realiza un análisis adicional de los datos para traducir las imágenes de datos en color recogidas en las bases de nucleótidos correspondientes. Alternativa o adicionalmente, el método puede incluir el uso de captura y/o secuenciación de ADN genómico de región diana basada en microarrays. Los kits, reactivos y métodos para seleccionar los cebadores de PCR adecuados y realizar la resecuenciación están disponibles comercialmente, por ejemplo, en Applied Biosystems, Agilent y NimbleGen (Roche Diagnostics GmbH). Para su uso en la presente divulgación, los cebadores de PCR pueden seleccionarse para amplificar, por ejemplo, al menos una porción relevante de una secuencia de ácido nucleico que codifica un polipéptido TRβ mutante que tiene una o más mutaciones en las posiciones de aminoácidos 234, 243, 316 y 317 de SEQ ID N.º: 1.

[0313] Alternativamente o además, una secuencia de ácido nucleico que codifica un polipéptido TRβ mutante puede detectarse usando un Southern blot de acuerdo con métodos bien conocidos en la técnica.

[0314] En ciertas realizaciones, los métodos de la divulgación comprenden la etapa de realizar un ensayo para detectar un mutante de TRβ en una muestra de un sujeto. Tal como se utiliza aquí, una "muestra de un sujeto" se refiere a cualquier muestra adecuada que contenga células o componentes de células obtenidas o derivadas de un sujeto. En una realización, la muestra es una muestra de sangre. En una realización, la muestra es una muestra de biopsia obtenida, por ejemplo, de la glándula tiroides.

[0315] La divulgación también proporciona un complejo ligando-TRβ mutante que comprende: un polipéptido TRβ mutante y un compuesto de Fórmula (IV). Por ejemplo, el polipéptido TRβ mutante que forma el complejo comprende una o más mutaciones en las posiciones de aminoácidos 234, 243, 316 y 317 de SEQ ID N.º: 1. Por ejemplo, el compuesto que forma el complejo es elCompuesto A.

[0316] Además, la divulgación proporciona un complejo cebador-ácido nucleico que comprende: una secuencia de ácido nucleico TRβ mutante, y un cebador de PCR que es complementario a la secuencia de ácido nucleico TRβ mutante, en el que la secuencia de ácido nucleico mutante comprende una mutación del gen EZH2 en una secuencia de ácido nucleico como se define en SEQ ID N.º: 2.

[0317] Debe entenderse que, si bien la invención se ha descrito junto con las realizaciones específicas preferidas de la misma, la descripción anterior, así como los ejemplos que siguen, pretenden ilustrar y no limitar el alcance de la invención. Se entenderá por los expertos en la materia que se pueden hacer varios cambios y se pueden sustituir equivalentes sin apartarse del alcance de la invención, y además que otros aspectos, ventajas y modificaciones serán evidentes para los expertos en la materia a la que pertenece la invención.

[0318] Todos los porcentajes y proporciones aquí utilizados, a menos que se indique lo contrario, se expresan en peso. Otras características y ventajas de la presente invención se desprenden de los diferentes ejemplos. Los ejemplos proporcionados ilustran diferentes componentes y metodología útiles en la práctica de la presente invención. Los ejemplos no limitan la invención reivindicada. Basándose en la presente divulgación, el artesano experto puede identificar y emplear otros componentes y metodología útiles para practicar la presente invención.

[0319] Ejemplos

[0320] A menos que se especifique lo contrario, los instrumentos y parámetros analíticos utilizados para los compuestos descritos en los Ejemplos son los siguientes:

[0321] Los datos XRPD se recogieron en un difractómetro de polvo de rayos X (CubiX-Pro XRD) con radiación Cu Kα (45 kV, 40 mA) de 3 a 45 grados 2-theta (2θ) a una velocidad de barrido de 0,12 grados/min y un intervalo de paso de 0,020 grados.

[0322] La muestra se colocó en portamuestras ultramicro de Si sin retorno. El análisis se realizó utilizando una anchura irradiada de 10 mm y se establecieron los siguientes parámetros en el hardware/software:

[0323] Tubo de rayos X: Cu KV, 45 kV, 40 mA

[0324] Detector: X'Celerator

[0325] Ranura primaria ASS: Fijo 1°

[0326] Ranura de divergencia (Prog): Automático - 5 mm de longitud irradiada

[0327] Ranuras de Soller: 0,02 radianes

[0328] Ranura de dispersión (PASS): Automático - 5 mm de longitud observada

[0329] Rango de Exploración: 3.0-45.0°

[0330] Modo de exploración: Continuo

[0331] Intervalo de Paso: 0,02°

[0332] Tiempo por Paso:S

[0333] Longitud activa: 2.54°

[0334] Tras el análisis, los datos se convirtieron de rendijas ajustables a fijas utilizando el software X'Pert HighScore Plus con los siguientes parámetros:

[0335] Tamaño de Ranura Divergencia Fija: 1,00°, 1,59 mm

[0336] Punto de Intersección: 44,3 °Omega

[0337] En los Ejemplos descritos a continuación, a menos que se especifique lo contrario, el Compuesto 4 es el compuesto protegido con benzoilo.

[0338] Ejemplo 1:Preparación de N-(3,5-dicloro-4-((6-oxo-1,6-dihidropiridazin-3-il)oxi)fenil)benzamida (Compuesto 4donde R<2>es benzoilo)

[0339] Se cargó un matraz de tres bocas y fondo redondo de 1 L equipado con agitación por encima, un termopar, condensador de reflujo y entrada/salida de N<2>con 3,6-dicloropiridazina (100 g, 0,672 mol, 1 peso), 4-amino-2,6-diclorofenol (122 g, 0,686 mol, 1,02 equiv) y DMAC (500 mL, 5 vol). La solución resultante se cargó con carbonato de cesio (251 g, 0,771 mol, 1,15 equiv) y la suspensión se calentó a 110 °C. Tras 3 h a esa temperatura, se bajó la temperatura del lote a 70 °C y se agitó a esa temperatura durante 16 h. El análisis por<1>H NMR (DMSO) mostró que se había consumido casi toda la dicloropiridazina y la reacción se consideró completa. El lote se enfrió a temperatura ambiente y se transfirió a un matraz de fondo redondo de 3 L con ayuda de EtOAc (2 L, 20 vol). Se añadió gel de sílice (100 g, 1 peso) y la suspensión se agitó durante 30 min y se filtró. El reactor y la torta se lavaron con EtOAc (500 mL, 5 vol) hasta que el filtrado eluyó incoloro. El filtrado resultante se trató con NaCl acuoso al 10% (2 L, 20 vol), se agitó la mezcla bifásica durante 30 min y se desechó la capa acuosa inferior. La capa orgánica superior se concentró hasta sequedad a presión reducida. Se añadió EtOAc (100 mL, 1 vol) al residuo y se concentró hasta sequedad a presión reducida para proporcionar el Compuesto2bruto (251 g, 128% de rendimiento) como un aceite. El análisis por HPLC mostró una pureza del 93,4%. El análisis por<1>H NMR (DMSO) fue coherente con la estructura asignada y mostró la presencia de ≈25% de DMAC y 2% de EtOAc.

[0340] Otras condiciones para sintetizar el Compuesto2se describen en las Tablas 1-3 a continuación.

[0341] Tabla 1. Resumen de los parámetros de reacción para elCompuesto 2

[0342]

[0343] Tabla 2. Resumen de los parámetros de reacción para elCompuesto 2.

[0344]

[0346] Tabla 3. Resumen de los parámetros de reacción para elCompuesto 2(todas las reacciones son en DMAC)

[0347]

[0348] El2bruto anterior se tomó en ácido acético (1,48 L, 7,5 vol) y se añadió anhídrido benzoico (168 g, 0,741 mol, 1,1 equiv). La mezcla resultante se calentó a 100 °C y, tras 35 min a esa temperatura, la cantidad de2era del 0,8%. Se añadió acetato sódico (110 g, 2 equiv) y se aumentó la temperatura a 110 °C. Tras 14,5 h a esa temperatura, el análisis por HPLC de la mezcla de reacción no mostró restos intermedios, y la reacción se consideró completa. El lote se enfrió a 75 °C y se añadió agua (1,5 L, 7,7 vol) durante 1 hora, manteniendo la temperatura del lote entre 72-75 °C. El lote se enfrió a 21 °C y se filtró con papel de filtro Sharkskin. El reactor y la torta se lavaron secuencialmente con agua (1 L, 5 vol). Tras secar el sólido recogido en una estufa de vacío a 50 °C durante 16 h, el rendimiento del4bruto fue de 195 g (77%). El análisis por HPLC (método B, 220 nm) mostró una pureza del 91,6%.

[0350] Método B de HPLC:

[0351] Columna: Waters Sunfire C18, 3,5 µM, 4,6 × 150 mm

[0352] Caudal: 1,0 mL/min.

[0353] Fase móvil A: 0,05% TFA en agua

[0354] Fase móvil B: 0,05% TFA en H<2>O

[0355] Diluyente: 50:50 MeCN/H<2>O

[0358]

[0361] El análisis por<1>H NMR (DMSO) fue coherente con la estructura asignada e indicó un contenido de ácido acético del 1%. También se utilizó cloruro de benzoilo para la protección en lugar de anhídrido benzoico. Cuando se utilizaba cloruro de benzoilo, se empleaban bases como el carbonato de cesio o el carbonato de potasio y la reacción se llevaba a cabo a temperatura ambiente.

[0363] Otras condiciones para sintetizar el Compuesto4se describen en las Tablas 4 y 5 a continuación.

[0364] Tabla 4. Protección/hidrólisis del Compuesto2(rendimientos comunicados por Int.1) (grupo protector benzoilo)

[0367]

[0370] Tabla 5. Resumen de los parámetros de reacción para elCompuesto 4(grupo protector acetato)

[0373]

[0376] Purificación del Compuesto4:Se cargó un matraz de tres bocas y fondo redondo de 5 L, equipado con agitación por encima, termopar, refrigerante de reflujo y entrada/salida de N<2>, con4bruto (100 g, 1 peso) y ácido acético (2 L, 20 vol). La suspensión se agitó y se calentó a 95 °C, y se produjo la disolución. Se añadió agua (2 L, 20 vol) durante un período de 2,75 h mientras se mantenía una temperatura por lotes de ≈95 °C, y se produjo la precipitación. La suspensión resultante se calentó a 95 °C durante otros 30 min antes de retirar la calefacción. Una vez que el lote alcanzó la temperatura ambiente, se agitó a esa temperatura durante toda la noche por conveniencia y se filtró con papel de filtro Sharkskin. El reactor y la torta se enjuagaron secuencialmente con agua (1 L, 10 vol). El sólido blanco recogido se secó en estufa de vacío a 40 °C hasta un peso constante de 91 g (91%). El análisis por HPLC del sólido seco mostró una pureza del 98,0%. El análisis por<1>H NMR (DMSO) fue coherente con la estructura asignada y mostró un contenido de ácido acético del 0,3%. La Tabla 6 enumera otras condiciones para purificar el Compuesto4.

[0377] Tabla 6 Purificación del Compuesto4(R<2>=Bz)

[0380]

[0383] Ejemplo 2:Preparación de 6-(4-amino-2,6-diclorofenoxi)-4-isopropilpiridazin-3(2H)-ona(Int.7)

[0385] Un matraz de 4 L, cuatro bocas y fondo redondo equipado con agitación por encima, un termopar, entrada/salida de N<2>y un refrigerante de reflujo se cargó con4(95 g, 0,253 mol, 1 peso), THF (665 mL, 7 vol) y LiCl (32,3 g, 0,759 mol, 3 equiv). La suspensión resultante se calentó a 35 °C, y se añadió una solución de bromuro de isopropenilmagnesio (0,5 M en THF, 1,72 L, 0,859 mol, 3,4 equiv) durante un periodo de 80 min mientras se mantenía una temperatura por lotes entre 35-45 °C. Tras calentar la suspensión resultante a 40 °C durante 3 h, el análisis por HPLC mostró una conversión del 87%). Se añadió solución adicional de bromuro de isopropenilmagnesio (0,5 M en THF, 51 mL, 0,026 mol, 0,1 equiv) y la mezcla se agitó a 40-43 °C durante otros 90 min. El análisis por HPLC mostró una conversión del 92,9% y la reacción se consideró completa. Se retiró la calefacción, se enfrió la mezcla de reacción a 14 °C y se añadió lentamente HCl acuoso 3 N (380 mL, 4 vol) durante 15 min mientras se mantenía la temperatura del lote por debajo de 26 °C, tiempo tras el cual se habían disuelto todos los sólidos. La capa acuosa inferior se eliminó y se extrajo con THF (350 mL, 3,7 vol). Tras eliminar la capa acuosa inferior, las capas orgánicas combinadas se concentraron a presión reducida hasta aproximadamente 5 vol con respecto a4.La solución resultante se cargó con KOH acuoso al 10% (p/p) (532 mL, 5,6 vol), y la mezcla se calentó a 85 °C mientras se destilaba el THF utilizando un aparato de destilación de trayecto corto. El lote se mantuvo a 85 °C durante 11 h y se retiró el calentamiento. El lote se enfrió a temperatura ambiente durante la noche para mayor comodidad. El análisis por HPLC (método A a continuación) de la suspensión resultante mostró una conversión del 99% aInt.7y la reacción se consideró completa.

[0386] Método A de HPLC

[0387] Columna: Waters Sunfire C18, 3,5 µM, 4,6 × 150 mm

[0388] Caudal: 1,0 mL/min.

[0389] Fase móvil A: 0,05% TFA en agua

[0390] Fase móvil B: 0,05% TFA en H<2>O

[0391] Diluyente: 50:50 MeCN/H<2>O

[0392]

[0395] La temperatura del lote se ajustó a 48 °C y se añadió HCl acuoso 3 N (152 mL, 1,6 vol) durante 35 min para ajustar el pH a 7,5-8,0 mientras se mantenía una temperatura del lote de 46-48 °C. Se retiró el calor y la suspensión se enfrió a 30 °C. El análisis por<1>H NMR (DMSO) mostró unInt.7/THFde 1,0:0,22 (Anexo 14). El lote se filtró a 30 °C a través de papel de filtro Sharkskin y el reactor y la torta se lavaron con agua (475 mL, 5 vol) secuencialmente. ElInt. 7de color beige sólido se secó en estufa de vacío a 40 °C hasta un peso constante de 81,6 g (rendimiento del 102%). El análisis de Karl Fischer indicó un contenido de agua del 0,8%. La<1>H NMR (DMSO) fue coherente con la estructura asignada e indicó un contenido de THF del 0,4%. El análisis por HPLC mostró una pureza del 92,6%. En las tablas 7-10 se resumen los parámetros de reacción para la producción deInt.7.

[0397] Tabla 7 Resumen de los Ensayos de Isopropenilación de Grignard

[0400]

[0401] (continuación)

[0402]

[0403] Tabla 8 Resumen de los Ensayos de Isopropilación de Grignard

[0404]

[0405] (continuación)

[0406]

[0407] (continuación)

[0409]

[0411] Tabla 9 Resumen de la Oxidación con Bromo de la Piridazinona Compuesto 5

[0412]

[0413] (continuación)

[0414]

[0416] Tabla 10 Resumen de la desprotección del Compuesto6para obtenerInt.7

[0417] Ejemplo 3:Preparación de (Z)-(2-ciano-2-(2-(3,5-dicloro-4-((5-isopropil-6-oxo-1,6-dihidropiridazin-3-il)oxi)fenil)hidrazono)acetil)carbamato de etilo (Int.8)

[0418] Un matraz de tres bocas y fondo redondo de 2 L equipado con agitación por encima, un termopar y una entrada/salida de N<2>se cargó conInt.7(75,0 g, 0,239 mol, 1 peso), ácido acético (600 mL, 8 vol), agua (150 mL, 2 vol) y HCl concentrado (71,3 mL, 0,95 vol). La suspensión fina resultante se enfrió a 6 °C y se añadió una solución de NaNO<2>(16,8 g, 0,243 mol, 1,02 equiv) en agua (37,5 mL, 0,5 vol) durante un periodo de 10 min mientras se mantenía una temperatura del lote inferior a 10 °C. Tras 10 min adicionales de agitación entre 5-10 °C, el análisis por HPLC mostró la conversión completa delInt.7al intermedio diazonio. Se añadió una disolución de NaOAc (54,5 g, 0,664 mol, 2,78 equiv) en agua (225 mL, 3 vol) durante un periodo de 6 min mientras se mantenía una temperatura del lote por debajo de 10 °C. Inmediatamente se añadió N-cianoacetiluretano (37,9 g, 0,243 mol, 1,02 equiv), se retiró la refrigeración y el lote se calentó naturalmente a 8 °C durante 35 min. El análisis por HPLC mostró el consumo completo del intermedio de diazonio y la reacción se consideró completa. El lote se calentó de forma natural hasta 21 °C y se filtró con papel de filtro Sharkskin. El reactor y la torta se lavaron secuencialmente con agua (375 mL, 5 vol) dos veces. El sólido anaranjado recogido se secó en estufa de vacío a 35 °C durante 64 h para obtenerInt.8bruto (104,8 g, 91%).

[0419] Un matraz de tres bocas y fondo redondo de 1 L equipado con agitación por encima, un termopar y una entrada/salida de N<2>se cargó conInt.8bruto (104,4 g, 1 peso) y ácido acético (522 mL, 5 vol). La suspensión resultante se calentó a 50 °C y se mantuvo a esa temperatura durante 1,5 h. El lote se enfrió de forma natural a 25 °C durante 2 h y se filtró con papel de filtro Sharkskin. El reactor y la torta se lavaron secuencialmente con agua (522 mL, 5 vol) y la torta se acondicionó al vacío durante 1,75 h. El sólido de color naranja claro se secó hasta peso constante en una estufa de vacío a 40 °C para obtener 89,9 g (78% deInt. 7) del producto deseado. La<1>H NMR (DMSO) fue coherente con la estructura asignada.

[0420] Ejemplo 4:Preparación de 2-(3,5-dicloro-4-((5-isopropil-6-oxo-1,6-dihidropiridazin-3-il)oxi)fenil)-3,5-dioxo-2,3,4,5-tetrahidro-1,2,4-triazina-6-carbonitrilo(Compuesto A)

[0421] Un matraz de tres bocas y fondo redondo de 2 L equipado con agitación por encima, un termopar, entrada/salida de N<2>y condensador de reflujo se cargó conInt.8(89,3 g, 0,185 mol, 1 peso), DMAC (446 mL, 5 vol) y KOAc (20,0 g, 0,204 mol, 1,1 equiv). La mezcla se calentó a 120 °C y se mantuvo a esa temperatura durante 2 h. El análisis por HPLC mostró una conversión completa alCompuesto A.La temperatura del lote se ajustó a 18 °C durante 1 h y se añadió ácido acético (22,3 mL, 0,25 vol). La temperatura del lote se ajustó a 8 °C, y se añadió agua (714 mL, 8 vol) a lo largo de 1 h; se formó una pasta naranja. El lote se filtró a través de papel de filtro Sharkskin y la torta se dejó acondicionar durante la noche bajo N<2>sin vacío por conveniencia. Se cargó en el matraz una solución premezclada de acetona/agua 1:1 (445 mL, 5 vol) y se añadió a la torta como enjuague aplicando vacío. Tras 2 h de acondicionamiento de la torta al vacío, se transfirió a un matraz limpio de 1 L, tres bocas y fondo redondo, equipado con agitación superior, un termopar y entrada/salida de N<2>. Se cargaron etanol (357 mL, 4 vol) y acetona (357 mL, 4 vol) y la suspensión resultante se calentó a 60 °C; se produjo la disolución. Se añadió agua (890 mL, 10 vol) durante un periodo de 90 min mientras se mantenía una temperatura de lote entre 55-60 °C. La suspensión resultante se dejó enfriar a 25 °C y se filtró con papel de filtro Sharkskin. El reactor y la torta se lavaron secuencialmente con una solución de 1:1 EtOH/agua (446 mL, 5 vol). La torta se acondicionó durante la noche bajo N<2>sin vacío para mayor comodidad. Se alisaron las grietas de la tarta y se aplicó vacío. La torta se lavó con agua (179 mL, 2 vol) y se secó en estufa de vacío a 45 °C hasta un peso constante de 70,5 g (87%,Compuesto Abruto). El análisis por HPLC mostró una pureza del 94,8%.

[0422] Se cargó un matraz de 500 mL, de tres bocas y fondo redondo, equipado con agitación por encima, un termopar, entrada/salida de N<2>y condensador de reflujo, con el Compuesto A bruto (70,0 g) y MIBK (350 mL, 5 vol). La suspensión naranja se calentó a 50 °C y se mantuvo a esa temperatura durante 2 h. El lote se enfrió naturalmente a 23 °C y se filtró con papel de filtro Sharkskin. El reactor y la torta se lavaron secuencialmente con MIBK (35 mL, 0,5 vol) dos veces. Los sólidos recogidos se secaron en estufa de vacío a 45 °C hasta un peso constante de 58,5 g (84%). Este sólido se cargó en un matraz de fondo redondo de tres bocas de 500 mL equipado con agitación por encima, termopar, entrada/salida de N<2>y refrigerante de reflujo. Se añadió etanol (290 mL, 5 vol) y la mezcla se calentó a reflujo. Tras 3,5 h a reflujo, XRPD mostró que el sólido era consistente con la Forma I, y se retiró el calentamiento. Una vez alcanzados los 25 °C, el lote se filtró con papel de filtro y el reactor y la torta se lavaron secuencialmente con EtOH (174 mL, 3 vol). El sólido bronceadoCompuesto Ase secó en estufa de vacío a 40 °C hasta un peso constante de 50,4 g (87%, 64% deInt.8). El análisis por HPLC mostró una pureza del 99,1%. La<1>H NMR (DMSO) fue coherente con la estructura asignada.

[0423] Ejemplo 5:Preparación a escala de 2-(3,5-dicloro-4-((5-isopropil-6-oxo-1,6-dihidropiridazin-3-il)oxi)fenil)-3,5-dioxo-2,3,4,5-tetrahidro-1,2,4-triazina-6-carbonitrilo(Compuesto A)

[0424] Se sintetizó un lote a mayor escala del Compuesto A según el esquema siguiente. Las condiciones del esquema siguiente son similares a las descritas en los Ejemplos 1-4 anteriores.

[0425]

[0428] [0193] Síntesis de 4:Se cargó un recipiente de vidrio encamisado de 50 L (purgado con N<2>) con 3,6-dicloropiridazina (2,00 kg), 4-amino-2,6-diclorofenol (2,44 kg) yN,N-dimetilacetamida(10,0 L). El lote se purgó 3 veces con vacío (26 inHg) / nitrógeno (1 PSIG). Se añadió carbonato de cesio (5,03 kg) y la temperatura del lote se ajustó de 22,3 °C a 65,0 °C a lo largo de 3,5 horas. El lote se mantuvo a 65,0 °C durante 20 horas. En este punto, el análisis por<1>H NMR indicó un 3,34% de 3,6-dicloropiridazina en relación con2.La temperatura del lote se ajustó a 21,5 °C y se añadió acetato de etilo (4,00 L) al lote. El lote se agitó durante 10 minutos y luego se filtró a través de un filtro Nutsche de 18" equipado con tela filtrante de polipropileno. La filtración duró 15 minutos. Se cargó acetato de etilo (5,34 L) en el recipiente y se transfirió al filtro como enjuague. A continuación, el lote se volvió a suspender manualmente en el filtro antes de volver a aplicar el vacío. Este proceso se repitió 2 veces más y la torta de filtración se acondicionó durante 10 minutos. El filtrado se cargó en un recipiente de 100 L que contenía (16,0 L) de un cloruro sódico al 15% en H<2>O previamente preparado. El lote se agitó durante 5 minutos y luego se dejó separar durante 35 minutos. La interfase no era visible, por lo que se eliminaron los 23 L calculados de la fase acuosa inferior. Se añadieron al lote 16,0 L de cloruro sódico al 15% en H<2>O. El lote se agitó durante 6 minutos y luego se dejó separar durante 7 minutos. La interfase era visible a ~19 L y se eliminó la fase acuosa inferior. Se añadieron al lote 17,0 L de cloruro sódico al 15% en H<2>O. El lote se agitó durante 7 minutos y luego se dejó separar durante 11 minutos. Se eliminó la fase acuosa inferior. El recipiente se preparó para la destilación al vacío y el lote se concentró de 17,0 L a 8,0 L a lo largo de 2 horas y 20 minutos, manteniendo la temperatura del lote en torno a los 21 °C. Se cargaron en el recipiente anhídrido benzoico (3,19 kg) y ácido acético (18,0 L). El recipiente se preparó para la destilación al vacío y el lote se concentró de 28,0 L a 12,0 L a lo largo de 2 días (retención nocturna a 20 °C) con la temperatura del lote mantenida entre 20 y 55 °C. En este punto, el análisis de<1>H NMR indicó una relación mol de ácido acético a acetato de etilo de 1,0:0,015. Se cargó ácido acético (4,0 L) al lote y éste se destiló hasta 12 L. El análisis de<1>H NMR indicó una relación mol de ácido acético a acetato de etilo de 1,0:0,0036. Se cargó ácido acético (20,0 L) en el lote y se ajustó la temperatura del lote a 70,0 °C. Se tomaron muestras del lote para el análisis por HPLC y2fue de 0,16%. Se añadió acetato sódico (2,20 kg) al lote y se ajustó la temperatura del lote de 72,4 °C a 110,0 °C. Tras 18,5 horas, el análisis por HPLC indicó que no había Int. B detectado. La temperatura del lote se ajustó de 111,3 a 74,7 °C y se añadió agua desionizada (30,0 L) al lote a lo largo de 2 horas. La temperatura del lote se ajustó a 20,5 °C y, a continuación, se filtró utilizando un filtro Haselloy Nutsche de 24" equipado con tela filtrante de polipropileno. Se cargó en el recipiente una solución previamente preparada de ácido acético 1:1 en DI H<2>O (10,0 L) y se agitó durante 5 minutos. El lavado se transfirió al filtro y el lote se volvió a suspender manualmente en el filtro antes de volver a aplicar el vacío. Se cargó DI H<2>O (10,0 L) en el recipiente y luego se transfirió al filtro. El lote se volvió a suspender manualmente en el filtro antes de volver a aplicar el vacío. Se cargó DI H<2>O (10,0 L) directamente en el filtro y, a continuación, se resuspendió manualmente el lote en el filtro antes de volver a aplicar el vacío. La torta de filtración se dejó acondicionar durante 18 horas para dar 14,4 kg de4.El análisis por HPLC indicó una pureza del 93,7%. Esta torta húmeda pasó a la depuración. Se cargó un recipiente de vidrio encamisado de 100 L (purgado con N<2>) con4bruto (torta húmeda de 14,42 kg), ácido acético (48,8 L) y se puso en marcha el agitador. Se cargó DI H<2>O (1,74 L). La temperatura del lote (una lechada) se ajustó de 18,1 a 100,1 °C a lo largo de 4,25 horas. El lote se mantuvo entre 100,1 y 106,1 °C durante 1 hora y después se ajustó a 73,1 °C. Se añadió DI H<2>O (28,0 L) al lote a lo largo de 1 hora manteniendo la temperatura del lote entre 73,1 y 70,3 °C. La temperatura del lote se ajustó de nuevo de 70,3 °C a 25,0 °C durante la noche. El lote se filtró utilizando un filtro Hastelloy Nutsche de 24" equipado con tela filtrante de polipropileno. La filtración duró 13 minutos. Se preparó una solución de DI H<2>O (9,00 L) y ácido acético (11,0 L) y se añadió al recipiente de 100 L. La mezcla se agitó durante 5 minutos y luego se transfirió a la torta de filtración. Se cargó DI H<2>O (20,0 L) en el recipiente, se agitó durante 6 minutos y, a continuación, se transfirió a la torta de filtración. Se cargó DI H<2>O (20,0 L) en el recipiente, se agitó durante 9 minutos y, a continuación, se transfirió a la torta de filtración. El lote se dejó acondicionar durante 3 días y luego se transfirió a bandejas de secado para su secado en estufa de vacío. Tras 3 días a 50 °C y 28"/Hg, el lote dio un rendimiento del 74% (3,7 kg) de4 como sólido blanquecino. El espectro<1>H NMR fue consistente con la estructura asignada, el análisis HPLC indicó una pureza del 98,87% y el análisis KF indicó 0,14% H<2>O.

[0430] Síntesis de Int.7:Se cargó un recipiente de vidrio encamisado de 100 L (purgado con N<2>) con tetrahidrofurano (44,4 L). Se puso en marcha el agitador (125 RPM) y se cargó4(3,67 kg) seguido de cloruro de litio (1,26 kg). La temperatura del lote se observó a 26,7 ° C y era una solución de color ámbar. Se añadió una solución 1,64 molar de bromuro de isopropenilmagnesio en 2-metil THF (21,29 kg) a lo largo de 2 ½ horas manteniendo el lote entre 24,3 y 33,6 °C. El lote se agitó a 24,5 °C durante 17 horas, momento en el que el análisis por HPLC indicó un 9%4.Un segundo recipiente de vidrio encamisado de 100 L (purgado con N<2>) se cargó con cloruro de hidrógeno 3N (18,3 L). El lote se transfirió al recipiente que contenía el HCl 3N durante 25 minutos manteniendo la temperatura del lote entre 20 y 46 °C. Se observó una solución bifásica. El lote enfriado se transfirió de nuevo al primer recipiente de 100 litros para enfriar la pequeña cantidad de residuo que quedaba. Como aclarado se utilizó THF (2,00 L). Se observó que la temperatura del lote era de 40,9 ° C y se agitó a 318 RPM durante 45 minutos. La temperatura del lote se ajustó a 21,8 ° C y se dejó que las capas se separaran. La separación duró 10 minutos. Se eliminó la fase acuosa inferior (~26,0 L). Se preparó una solución de cloruro sódico (1,56 kg) en agua desionizada (14,0 L) y se añadió al lote. Se agitó a 318 RPM durante 10 minutos y se paró el agitador. La separación duró 3 minutos. Se eliminó la fase acuosa inferior (~16,0 L). El lote se destiló al vacío de 58,0 L a 18,4 L utilizando ~24"/Hg y una temperatura de camisa de 50 a 55 °C. Se preparó una solución de hidróxido de potasio (2,30 kg) en agua desionizada (20,7 L) en un matraz de fondo redondo de 72 L. El recipiente fue preparado para la destilación atmosférica utilizando 2 cabezales de destilación y el lote fue transferido al recipiente de 72 L. Como aclarado se utilizó THF (0,75 L). El volumen del lote fue de ~41,0 L, la temperatura se ajustó a 64,1 °C y se inició la destilación con ayuda de un barrido de N<2>. Se continuó calentando para llevar la temperatura del lote a 85,4 °C mientras se destilaba, momento en el que el recipiente de 72 L se preparó para reflujo (el volumen del lote era de unos 28,0 L al final de la destilación). El lote se mantuvo a 85 °C durante 13 horas, momento en el que el análisis por HPLC indicó un 0,3% de compuesto6A.Se detuvo el calentamiento y el lote se transfirió a un recipiente de vidrio encamisado de 100 L. Se observaron sólidos. La temperatura del lote se ajustó de 70,6 °C a 56,7 °C. Se añadió una solución previamente preparada de hidrogenocarbonato sódico (2,82 kg) en agua desionizada (35,0 L) a lo largo de 80 minutos, manteniendo la temperatura del lote entre 56,7 y 46,7 °C. El pH del lote al final de la adición era de 9,8. El lote se mantuvo entre 46,7 y 49,0 °C durante 40 minutos y después se enfrió a 25,0 °C. El lote se filtró con un filtro Nutsche de acero inoxidable de 18". Se cargó agua desionizada (18,4 L) en el recipiente y se transfirió al filtro. La torta de filtración se volvió a suspender manualmente en el filtro y, a continuación, se extrajeron los licores. Este proceso se repitió una vez más y la torta de filtración tenía un grosor de 3". La torta de filtración se acondicionó en el filtro durante 3 días, se transfirió a bandejas de secado y se secó en estufa de vacío a 45 °C para obtener 2,93 kgde Int.7(rendimiento del 95%) con una pureza por HPLC del 87,6%.

[0432] [0195] Síntesis de Int.8:Se cargó un recipiente de vidrio encamisado de 100 L (purgado con N<2>y conectado a un lavador cáustico) con ácido (13,0 L).Int. 7(2,85 kg) y se puso en marcha el agitador. Se cargaron en el recipiente N-cianoacetiluretano (1,56 kg) y agua desionizada (5,70 L). La temperatura del lote se ajustó de 17,0 °C a 5,5 °C y se observó una lechada fina. En este punto, se añadió cloruro de hidrógeno al 37% (2,70 L) durante 10 minutos, manteniendo la temperatura del lote entre 4,8 °C y 8,8 °C. Se añadió una solución previamente preparada de nitrito sódico (638 g) en agua desionizada (1,42 L) durante 26 minutos, manteniendo la temperatura del lote entre 5,8 °C y 8,7 °C. Durante la adición se observó un gas marrón en el espacio de cabeza del recipiente. Los análisis por HPLC indicaron la ausencia deInt. 7detectados. En este punto, se añadió una solución previamente preparada de acetato sódico (2,07 kg) en agua desionizada (8,50 L) durante 47 minutos, manteniendo la temperatura del lote entre 5,5 °C y 9,5 °C. Tras la adición, se observó una fina capa de residuo naranja en la pared del recipiente justo por encima del nivel del lote. La temperatura del lote se ajustó de 9,4 °C a 24,5 °C y se mantuvo a 25 °C (± 5 °C) durante 12 horas. El lote se filtró utilizando un filtro Hastelloy Nutsche de 24" equipado con tela filtrante de polipropileno de tejido apretado. La filtración duró 30 minutos. El recipiente se enjuagó con 14,3 L de ácido 1:1 / agua desionizada. El residuo anaranjado del reactor desapareció con el enjuague. El enjuague se transfirió al filtro, donde el lote se volvió a suspender manualmente. Se volvió a aplicar vacío para eliminar el lavado. Se realizó un segundo lavado 1:1 ácido / agua desionizada como se ha indicado anteriormente y el lote se acondicionó en el filtro durante 26 horas. El análisis por HPLC de la torta de filtración húmeda indicó una pureza del 90,4%. El lote se secó hasta un peso constante de 3,97 kg (91% de rendimiento) en una estufa de vacío a 45 °C y 28"/Hg.

[0433] Preparación del Solvato DMAC del Compuesto A

[0434] Un recipiente de vidrio de 100 L, enchaquetado y purgado con N<2>se cargó conInt.8(3,90 kg) y acetato de potasio (875 g). Se cargó el recipiente con N,N-dimetilacetamida (DMAC, 18,3 L) y se puso en marcha el agitador. La temperatura del lote se ajustó a 115 °C durante 2 h. Tras 2 h a 115 °C, se tomaron muestras del lote y el análisis por HPLC indicó un 0,27% deInt.8permaneció. La temperatura del lote se ajustó a 25,0 °C durante la noche. Se añadió ácido acético (975 mL) al lote y se agitó más durante 3 h. El lote se transfirió a una cuba y el recipiente se enjuagó con 800 mL de DMAC. El lote se transfirió de nuevo al recipiente de 100 L utilizando vacío a través de un filtro en línea de 10 µm y se utilizó un enjuague de DMAC (1,15 L). La filtración fue rápida al principio pero lenta al final, taponando el filtro. La temperatura del lote se ajustó a 11,1 °C y se añadió agua desionizada (35,1 L) a lo largo de 2 h 20 min, manteniendo la temperatura del lote entre 5-15 °C. El lote se mantuvo durante 1 h y se filtró, utilizando un filtro Nutsche de 18" equipado con tela de polipropileno de tejido apretado. La filtración duró 15 h. Se cargó en el recipiente un lavado 1:1 de etanol/agua DI (19,5 L), se enfrió a 10 °C y se transfirió a la torta de filtración. La torta se dejó acondicionar bajo N<2>y vacío durante 8 h y se transfirió a bandejas de secado. El lote se secó en un horno de vacío a 45 °C y 28"/Hg para dar un rendimiento del 89% (3,77 kg) de solvato de DMAC delCompuesto Acomo un sólido naranja/canela. El espectro de<1>H NMR fue coherente con la estructura asignada y el análisis de Karl Fischer indicó un 0,49% de H<2>O. La DRXP indicó la forma esperada, es decir, el solvato DMAC delCompuesto A. El análisis termogravimétrico (TGA) indicó una pérdida de peso del 16%. El análisis por HPLC indicó una pureza del 93,67%.

[0435] Preparación del Compuesto A Bruto

[0436] Un recipiente de vidrio de 100 L, enchaquetado y purgado con N<2>se cargó con disolvente DMAC delCompuesto A(3,75 kg) y etanol (15,0 L). Se puso en marcha el agitador y se añadió acetona (15,0 L). La temperatura del lote se ajustó de 10,6 °C a 60,0 °C a lo largo de 1 h. En ese momento, el lote estaba disuelto. Se añadió agua desionizada al lote a lo largo de 1,5 h, manteniendo la temperatura del lote a 60 ± 5 °C. El lote se mantuvo a 60 ± 5 °C durante 1 h y se enfrió a 23,5 °C. Se preparó un filtro Nutsche de 18" equipado con tela de polipropileno de tejido apretado (0,67 CFM) y se filtró el lote. La filtración duró 15 h. Se cargó en el recipiente un lavado 1:1 de etanol/agua DI (19,5 L) y se transfirió a la torta de filtración. La torta se dejó acondicionar bajo N<2>y vacío durante 8 h y se transfirió a bandejas de secado. El lote se secó en un horno de vacío a 45 °C y 28"/Hg durante cinco días para obtener un rendimiento del 94% (2,90 kg) del Compuesto A como sólido de color canela pulverulento. El espectro de<1>H NMR es coherente con la estructura asignada y el análisis de Karl Fischer indicó un 6,6% de H<2>O. La DRXP indicó la forma esperada de dihidrato. El TGA indicó una pérdida de peso del 6,7%. El análisis por HPLC indicó una pureza del 96,4% (AUC).

[0437] Purificación del Compuesto A Bruto

[0438] Un recipiente de vidrio de 50 L, enchaquetado y purgado con N<2>se cargó con Compuesto A bruto (2,90 kg) y metil isobutil cetona (14,5 L). Se puso en marcha el agitador y se ajustó la temperatura del lote de 20,2 °C a 50,4 °C a lo largo de 1,5 h. El lote se mantuvo a 50 °C (± 5 °C) durante 1 h y se enfrió a 20-25 °C. El lote se mantuvo a 20-25 °C durante 2,5 h. Se preparó un filtro Nutsche de 18" equipado con tela de polipropileno de tejido apretado (0,67 CFM) y se filtró el lote. La filtración duró 20 min. Se cargó metil isobutil cetona (MIBK, 1,45 L) en el recipiente y se transfirió a la torta de filtración. La torta se resuspendió manualmente y los licores se extrajeron con vacío. Se cargó metil isobutil cetona (2,90 L) en la torta de filtración y se resuspendió manualmente la torta. Los licores se arrastraron con vacío y la torta se acondicionó con vacío y nitrógeno durante 15 h. La torta de filtración se secó y se convirtió en un disco bronceado y duro de 18" × 1 ½". Se rompió manualmente y se pasó por un molinillo de café para obtener un 76% de rendimiento (2,72 kg) de solvato de MGL-3196 MIBK como sólido pulverulento de color canela. No fue necesario secar al horno. El espectro de<1>H NMR fue coherente con la estructura asignada y el análisis de Karl Fischer indicó <0,1% de H<2>O. XRPD indicó la forma esperada MIBK solvato. El TGA indicó una pérdida de peso del 17,3%. El análisis por HPLC indicó una pureza del 98,5%.

[0439] Ejemplo 6:Conversión del Compuesto A en la Forma I

[0440] [0199] Compuesto Apurificado (4802 g) como solvato de MIBK 1:1 que se obtuvo deInt. 8como se describe en el Ejemplo 5 anterior se añadió a un reactor encamisado de 100 L junto con 24 litros de etanol. La suspensión resultante se calentó a 80 ± 5 °C (reflujo) durante 1 h y 25 min; la mezcla se agitó a esa temperatura durante 4 h y 25 min. El análisis de los sólidos filtrados a las 2 h 55 min indicó que se había completado la conversión de la forma, con los espectros XRPD conformes a la Forma I. La mezcla se enfrió a 20 ± 5 °C durante 45 min y se agitó a esa temperatura durante 15 min. La suspensión se filtró y la torta de filtración se lavó dos veces con etanol prefiltrado (2 × 4,8 L). La torta húmeda (4,28 kg) se secó al vacío a 40 ± 5 °C durante 118 h para obtener 3390 g de la forma I del Compuesto A.

[0441] El estudio de Difracción de Polvos de Rayos X fue realizado en diferentes lotes de la Forma mórfica I del Compuesto A generada por el proceso descrito anteriormente. La DRX tras la micronización confirma la Forma 1.

[0442] Los datos para la Forma I se proporcionan en la Tabla 11 a continuación y los difractogramas de la Forma I se proporcionan como Fig.1.

[0443] Tabla 11

[0446]

[0447] (continuación)

[0448]

[0449] (continuación)

[0452]

[0454] Se encontró que la Forma I tenía un inicio de fusión alrededor de 321 °C, seguido de descomposición al fundirse por DSC (Figura 2).

[0455] Ejemplo 7:Preparación de la Forma I del Compuesto A: conversión del solvato del Compuesto A en la Forma I[0203]Un recipiente de vidrio de 50 L, enchaquetado y purgado con N<2>se cargó con disolvente de MIBK del Compuesto A (2,72 kg) del Ejemplo 5 anterior y etanol (13,6 L). Se puso en marcha el agitador y la temperatura del lote se ajustó de 16,8 °C a 79,4 °C a lo largo de 1,3 h. El lote se mantuvo a 79,5 °C durante 2 h y se tomaron muestras para el análisis XRPD. XRPD indicó Forma I, y el lote se enfrió a 24,9 °C durante 1 h y 10 min. Se preparó un filtro Nutsche de 18" equipado con tela de polipropileno de tejido apretado (0,67 CFM) y se filtró el lote. La filtración duró 4 min. Se cargó etanol (2,8 L) en el recipiente y se transfirió a la torta de filtración. La torta se resuspendió manualmente y los licores se extrajeron con vacío. Se cargó etanol (2,80 L) en la torta de filtración y se resuspendió manualmente la torta. Los licores se arrastraron con vacío y la torta se acondicionó con vacío y nitrógeno durante 1 h. La torta filtrada se transfirió a bandejas de secado y se secó a 45 °C y 28"/Hg durante un día para obtener un rendimiento del 89% (1,96 kg) del Compuesto A como sólido amarillo claro. El análisis por HPLC indicó una pureza del 99,6%. El análisis XRPD es consistente con la Forma I. La micronización de 300 g de este material en un molino de chorro de 2" dio 284 g (95% de rendimiento) de Compuesto A micronizado. El análisis XRPD confirmó que el Compuesto A micronizado seguía siendo la Forma I.

[0456] [0204]El solvato DMAC del Compuesto A puede convertirse, a través del dihidrato y el solvato MIBK, en la Forma I como se describe en el Ejemplo 7. Alternativamente, el solvato de DMAC se convirtió directamente en la Forma I en un rendimiento del 75% (rendimiento calculado a partir del Intermedio 8) calentándolo con 8 volúmenes de etanol a 80°C durante 2 horas, seguido de enfriamiento a temperatura ambiente y filtrado. En otra reacción, una muestra del Compuesto A que era una mezcla del solvato de DMAC y el dihidrato se convirtió en la Forma I en un 69% de rendimiento calentándolo con 8 volúmenes de MIBK hasta 80°C seguido de enfriamiento hasta temperatura ambiente.

[0457] Modelización de la interacción entre el Compuesto A y el receptor de la hormona tiroidea

[0458] Las estructuras cristalinas se obtuvieron del banco de datos de proteínas RCSB (números ID: 1N46, 1NQ0, 1NQ1, 1NQ2 y 1NUO). Las estructuras de los co-cristales de proteínas se alinearon utilizando MacPymol para Mac OS X (Copyright 2006 DeLano Scientific LLC.; ahora un producto de Schrodinger Inc.) También se utilizó MacPymol para todos los análisis de las interacciones ligando-proteína y para representar las figuras 3-9. Estas cifras indican que, en general, el Compuesto A es más capaz de adaptarse a las variaciones estructurales de los mutantes THRβ. Por ejemplo, en el mutante Arg316His, Arg316 está mutado a His y Arg320 está ligeramente desplazado del ligando. Como resultado, la interacción específica entre Arg320 y T3 es menos óptima en el mutante Arg316His. En comparación, el gran heterociclo polarizable negativo del Compuesto A forma interacciones favorables que no se ven alteradas por la mutación Arg316His. En otras palabras, el Compuesto A, al tener un heterociclo más grande y polarizable, mantiene interacciones favorables con Arg320 y His316 mutado. Véanse, p. ej., las Figuras 8 y 9. Los resultados son similares para otras mutaciones. La siguiente tabla enumera las propiedades bioquímicas de ciertos mutantes TRβ. Pueden encontrarse otros mutantes y sus propiedades en, p. ej., M. Adams et al., J Clin Invest. 1994; 94(2): 506-515, B. R. Huber et al., Mol Endocrinol, 2003, 17(4):643-652; and B. R. Huber et al., Mol Endocrinol, 2003, 17(1):107-116.

[0461]

[0464] EQUIVALENTES

[0465] La invención puede materializarse en otras formas específicas sin apartarse de las características esenciales de la misma. Por lo tanto, las realizaciones anteriores deben considerarse ilustrativas en todos sus aspectos y no limitativas de la invención aquí descrita. El alcance de la invención está indicado por las reivindicaciones adjuntas más que por la descripción anterior, y todos los cambios que entran dentro del significado y el rango de equivalencia de las reivindicaciones están destinados a ser incluidos en las mismas.

Claims (19)

1. REIVINDICACIONES

1. 2-(3,5-dicloro-4-((5-isopropil-6-oxo-1,6-dihidropiridazin-3-il)oxi)fenil)-3,5-dioxo-2,3,4,5-tetrahidro-1,2,4-triazina-6-carbonitrilo ("Compuesto A") para su uso como medicamento, en el que el Compuesto A se administra en una cantidad eficaz de hasta 100 mg al día.

2. El Compuesto A para uso según la reivindicación 1, en el que el Compuesto A es para uso en un método de tratamiento o prevención de una enfermedad de hígado graso en un sujeto que comprende administrar el Compuesto A al sujeto en una cantidad eficaz de hasta 100 mg al día.

3. El Compuesto A para uso según la reivindicación 2, en el que el Compuesto A es para uso en un método de tratamiento de una enfermedad de hígado graso en un sujeto que comprende administrar el Compuesto A al sujeto en una cantidad eficaz de hasta 100 mg al día.

4. El Compuesto A para uso según la reivindicación 2 o 3, en el que la enfermedad del hígado graso es esteatohepatitis no alcohólica.

5. El Compuesto A para uso según cualquiera de las reivindicaciones 1-4, en el que la dosis es de aproximadamente 100 mg al día.

6. El Compuesto A para uso según cualquiera de las reivindicaciones 1-5, en el que el Compuesto A se administra por vía oral.

7. El Compuesto A para uso según la reivindicación 6, en el que el Compuesto A se administra a un humano adulto.

8. El Compuesto A para uso según cualquiera de las reivindicaciones 1-7, en el que el Compuesto A se administra por vía oral en un comprimido.

9. El Compuesto A para uso según cualquiera de las reivindicaciones 1-8, en el que el Compuesto A se administra diariamente como dosis única.

10. Una composición farmacéutica que comprende 2-(3,5-dicloro-4-((5-isopropil-6-oxo-1,6-dihidropiridazin-3-il)oxi)fenil)-3,5-dioxo-2,3,4,5-tetrahidro-1,2,4-triazina-6-carbonitrilo ("Compuesto A") y al menos un excipiente o soporte farmacéuticamente aceptable, para su uso como medicamento, en el que el Compuesto A se administra en una cantidad eficaz de hasta 100 mg al día.

11. La composición farmacéutica para uso según la reivindicación 10, en la que la composición farmacéutica es para uso en un método de tratamiento o prevención de una enfermedad de hígado graso en un sujeto, en la que el Compuesto A se administra al sujeto en una cantidad eficaz de hasta 100 mg al día.

12. La composición farmacéutica para uso según la reivindicación 11, en la que la composición farmacéutica es para uso en un método de tratamiento de una enfermedad de hígado graso en un sujeto, en el que el Compuesto A se administra al sujeto en una cantidad eficaz de hasta 100 mg al día.

13. La composición farmacéutica para uso según la reivindicación 11 o 12, en la que la enfermedad del hígado graso es esteatohepatitis no alcohólica.

14. La composición farmacéutica para uso según cualquiera de las reivindicaciones 10-13, en la que la dosis es de aproximadamente 100 mg al día.

15. La composición farmacéutica para uso según cualquiera de las reivindicaciones 10-14, en la que la composición farmacéutica se administra por vía oral.

16. La composición farmacéutica para uso según la reivindicación 15, en la que la composición farmacéutica se administra a un humano adulto.

17. La composición farmacéutica para uso según cualquiera de las reivindicaciones 10-16, en la que la composición farmacéutica es un comprimido, y/o en la que la composición farmacéutica se administra diariamente como dosis única.

18. El Compuesto A para uso según cualquiera de las reivindicaciones 1-9, en el que el Compuesto A para uso es una sal farmacéuticamente aceptable del Compuesto A para uso.

19. La composición farmacéutica para uso según cualquiera de las reivindicaciones 10-17, en la que el Compuesto A de la composición farmacéutica es una sal farmacéuticamente aceptable del Compuesto A.