RS67728B1 - Analozi hormona štitne žlezde - Google Patents

Description

[0001] Opis

[0003] POZADINA

[0005] Hormoni štitne žlezde su ključni za normalan rast i razvoj i za održavanje metaboličke homeostaze (Paul M. Yen, Physiological reviews, Vol. 81(3): pp. 1097-1126 (2001)). Nivoi tiroidnih hormona u cirkulaciji su strogo regulisani mehanizmima povratne sprege u osi hipotalamus/hipofiza/štitna žlezda (HPT). Disfunkcija štitne žlezde koja dovodi do hipotireoze ili hipertireoze jasno pokazuje da tiroidni hormoni imaju dubok uticaj na srčanu funkciju, telesnu težinu, metabolizam, brzinu metabolizma, telesnu temperaturu, holesterol, kosti, mišiće i ponašanje.

[0007] Biološka aktivnost hormona štitne žlezde je posredovana receptorima hormona štitne žlezde (TRs ili THRs) (M. A. Lazar, Endocrine Reviews, Vol. 14: pp. 348-399 (1993)). TRs pripadaju superfamiliji poznatoj kao nuklearni receptori. TR formiraju heterodimere sa retinoidnim receptorom koji deluju kao transkripcioni faktori inducibilni ligandom. TR imaju domen za vezivanje liganda, domen za vezivanje DNK i amino terminalni domen, i regulišu ekspresiju gena kroz interakcije sa elementima odgovora DNK i sa različitim nuklearnim koaktivatorima i korepresorima. Receptori tiroidnih hormona su izvedeni iz dva odvojena gena, α i β. Ovi različiti genski proizvodi proizvode višestruke oblike svojih odgovarajućih receptora kroz diferencijalnu obradu RNK. Glavne izoforme tiroidnih receptora su α1, α2, β1 i β2. Receptori tiroidnih hormona α1, β1 i β2 vezuju tiroidne hormone. Pokazano je da se podtipovi receptora tiroidnih hormona mogu razlikovati u svom doprinosu određenim biološkim odgovorima. Nedavne studije sugerišu da TRβ1 igra važnu ulogu u regulaciji TRH (hormon koji oslobađa tireotropin) i u regulaciji delovanja tiroidnih hormona u jetri. TRβ2 igra važnu ulogu u regulaciji TSH (hormon koji stimuliše štitnu žlezdu) (Abel i dr., J. Klin. Invest., Vol 104: str.291-300 (1999)). TRβ1 igra važnu ulogu u regulaciji srčane frekvencije (B. Gloss et. al. Endocrinology, Vol.142: pp.544-550 (2001); C. Johansson et. al., Am. J. Physiol., Vol.275: pp. R640-R646 (1998)).

[0009] [0003] Uloženi su napori da se sintetišu analozi tiroidnih hormona koji pokazuju povećanu selektivnost beta receptora tiroidnih hormona i/ili selektivno dejstvo na tkiva. Takvi mimetici tiroidnih hormona mogu dovesti do poželjnog smanjenja telesne težine, lipida, holesterola i lipoproteina, sa smanjenim uticajem na kardiovaskularnu funkciju ili normalnu funkciju ose hipotalamus/hipofiza/tiroidna žlezda (videti, npr., Joharapurkar et al., J. Med. Chem., 2012, 55 (12), pp 5649-5675). Razvoj analoga tiroidnih hormona koji izbegavaju neželjene efekte hipertireoze i hipotireoze, a istovremeno održavaju korisne efekte tiroidnih hormona, otvorio bi nove puteve lečenja za pacijente sa metaboličkim bolestima kao što su gojaznost, hiperlipidemija, hiperholesterolemija, dijabetes i drugi poremećaji i bolesti kao što su steatoza jetre i NASH, ateroskleroza, kardiovaskularne bolesti, hipotireodizam, rak štitne žlezde, bolesti štitne žlezde, rezistencija na tiroidne hormone i srodni poremećaji i bolesti.

[0011] WO 2007/009913 opisuje derivate piridazinona kao agoniste receptora tiroidnih hormona. WO 2009/037172 opisuje prolekove analoga tiroidnih hormona.

[0013] KRATAK OPIS PRONALASKA

[0015] U prvom aspektu, pronalazak obezbeđuje 2-(3,5-dihloro-4-((5-izopropil-6-okso-1,6-dihidropiridazin-3-il)oksi)fenil)-3,5-diokso-2,3,4,5-tetrahidro-1,2,4-triazin-6-karbonitril

[0017]

[0019] za upotrebu kao lek, gde se Jedinjenje A administrira/daje u efikasnoj količini do 100 mg dnevno.

[0021] U jednom izvođenju prvog aspekta pronalaska, Jedinjenje A je za upotrebu u metodu lečenja ili sprečavanja bolesti masne jetre kod subjekta koji obuhvata administraciju/primenu Jedinjenja A subjektu u efikasnoj količini do 100 mg dnevno.

[0023] U jednom izvođenju prvog aspekta pronalaska, Jedinjenje A je za upotrebu u metodu lečenja bolesti masne jetre kod subjekta koji obuhvata primenu Jedinjenja A subjektu u efikasnoj količini do 100 mg dnevno.

[0025] U jednom izvođenju prvog aspekta pronalaska, bolest masne jetre je nealkoholni steatohepatitis.

[0027] U jednom izvođenju prvog aspekta pronalaska, Jedinjenje A se administrira subjektu u količini od oko 100 mg dnevno.

[0029] U jednom izvođenju prvog aspekta pronalaska, Jedinjenje A se administrira oralno.

[0030] U jednom izvođenju prvog aspekta pronalaska, Jedinjenje A se administrira odrasloj osobi.

[0032] U jednom izvođenju prvog aspekta pronalaska, Jedinjenje A se administrira oralno u tableti.

[0034] U jednom izvođenju prvog aspekta pronalaska, Jedinjenje A se administrira dnevno kao jedna doza.

[0036] U drugom aspektu, pronalazak obezbešuje farmaceutsku kompoziciju koja sadrži 2-(3,5-dihloro-4-((5-izopropil-6-okso-1,6-dihidropiridazin-3-il)oksi)fenil)-3,5-diokso-2,3,4,5-tetrahidro-1,2,4-triazin-6-karbonitril („Jedinjenje A“) i najmanje jedan farmaceutski prihvatljiv ekscipijens ili nosač, za upotrebu kao lek, pri čemu Jedinjenje A je administrirano u efikasnoj količini do 100 mg dnevno.

[0038] U jednom izvođenju drugog aspekta pronalaska, farmaceutsk kompozicija je namenjena za upotrebu u metodu lečenja ili sprečavanja masne bolesti jetre kod subjekta, pri čemu se Jedinjenje A administrira subjektu u efikasnoj količini do 100 mg dnevno.

[0040] U jednom izvođenju drugog aspekta pronalaska, farmaceutsk kompozicija je namenjena za upotrebu u metodu lečenja bolesti masne jetre kod subjekta, pri čemu se Jedinjenje A administrira subjektu u efikasnoj količini do 100 mg dnevno.

[0042] U jednom izvođenju drugog aspekta pronalaska, bolest masne jetre je nealkoholni steatohepatitis.

[0044] U jednom izvođenju drugog aspekta pronalaska, Jedinjenje A se administrira subjektu u količini od oko 100 mg dnevno.

[0046] U jednom izvođenju drugog aspekta pronalaska, farmaceutsk kompozicija je administrirana oralno.

[0048] U jednom izvođenju drugog aspekta pronalaska, farmaceutsk kompozicija je administrirana odrasloj osobi.

[0050] U jednom izvođenju drugog aspekta pronalaska, farmaceutsk kompozicija je tableta i/ili se farmaceutsk kompozicija administrira dnevno kao jedna doza.

[0052] U jednom izvođenju prvog i/ili drugog aspekta pronalaska, Jedinjenje A je farmaceutski prihvatljiva so Jedinjenja A.

[0053] Ovo otkriće takođe opisuje postupak sinteze, koji se može koristiti za pripremu 6-(4-amino-2,6-dihlorofenoksi)-4-izopropilpiridazin-3(2H)-ona („Int. 7“), jedinjenja koje je korisno kao intermedijer za dobijanje piridazinonskih jedinjenja kao analoga tiroidnih hormona, kao što sledi:

[0055] (a) reakcija R<1>MgX ili R<1>Li sa jedinjenjem Formule (I):

[0057]

[0059] pri čemu se dobija jedinjenje Formule (II):

[0061]

[0063] u kojem R<1>je izopropil ili izopropenil, X je halo i R<2>je H ili zaštitna grupa za amin; i

[0064] (b) konverzija jedinjenja Formule (II) u jedinjenje Formula (III):

[0066]

[0068] u prisustvu baze kada R<1>je izopropenil ili u prisustvu oksidujućeg agensa kada R<1>je izopropil.

[0070] U koraku (a), rastvarač može biti aprotični organski rastvarač, kao što su THF, dietil etar, toluen ili dioksan, temperatura reakcije može biti 0-60 °C, 20-50 °C, 30-45 °C ili 35-45 °C, vreme reakcije može biti od 10 minuta do 10 sati, 1-8 sati ili 3-5 sati, a količina Grignard -ovog reagensa (R<1>MgX) može da bude 3-10 ekvivalenata ili 3-6 ekvivalenata jedinjenja Formule (I).

[0072] U koraku (b), baza se koristi za izomerizaciju jedinjenja Formule (II). Može biti organska baza ili neorganska baza. Primeri baza uključuju, ali nisu ograničeni na, trietilamin, piridin, KOH, NaOH i karbonate. Izomerizacija se takođe može postići pod drugim uslovima, npr. tretmanom kiselinom ili zagrevanjem u aprotičnom rastvaraču.

[0074] Takođe, u koraku (b), oksidaciono sredstvo nije posebno ograničeno. Na primer, može da se koristi brom u acetatnoj kiselini ili propionskoj kiselini.

[0076] [0027] Primeri zaštitnih grupa za amin uključuju, ali nisu ograničeni na, supstituisani alkil, acil (npr. benzoil ili acetil) i silil. Zaštitne grupe za hidroksi i amin su razmatrane u in T. W. Greene and P. G. M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 2d. Ed., John Wiley and Sons (1991).

[0078] U jednom izvođenju, korak (a) se izvodi reakicijom m R<1>MgX sa jedinjenjem Formule (I), u kojem R<1>je izopropenil, a X je Br. Rastvarač koji se koristi u ovoj reakciji može biti THF sa odnosom zapremine i težine THF prema jedinjenju Formule (I) u rasponu između 7 i 30 (ili između 7 i 15). Ovaj korak se može izvesti u prisustvu Luisove kiseline (npr. litijum halida).

[0080] U jednom izvođenju, korak (a) se izvodi reakcijom R<1>MgX sa jedinjenjem Formule (I), u kojem R<1>je izopropil, a X je Cl. Rastvarač koji se koristi u ovoj reakciji može biti THF sa odnosom zapremine i težine THF prema jedinjenju Formule (I) u rasponu između 7 i 30 (ili između 7 i 15). Ovaj korak se može izvesti u prisustvu Luisove kiseline (npr. litijum halida).

[0082] U jednom izvođenju, u koraku (b) baza je hidroksid metala (npr. kalijum hidroksid).

[0084] U jednom ivzođenju, u koraku (b) oksidaciono sredstvo je brom, a korak (b) se izvodi u prisustvu kiseline.

[0086] U jednom izvođenju, u Formuli (I) i Formuli (II) R<2>grupa je acetil ili benzoil. U narednom izvođenju, R<2>je benzoil.

[0088] U jednom izvođenju, postupak dalje obuhvata obezbeđivanje jedinjenja Formule (I) kontaktiranjem 3,6-dihloropiridazina sa 2,6-dihlor-4-aminofenolom da bi se formirao 3,5-dihlor-4-((6-hlorpiridazin-3-il)oksi)anilina, hidrolizom 3,5-dihlor-4-((6-hlorpiridazin-3-il)oksi)anilina i zaštitom amino grupe 3,5-dihlor-4-((6-hlorpiridazin-3-il)oksi)anilina pre ili posle hidrolize da bi se formiralo jedinjenje Formule (I). reakcija 3,6-dihloropiridazina sa 2,6-dihlor-4-aminofenolom se vrši u polarnom aprotičnom rastvaraču (npr. dimetilacetamid (DMAC)) u prisustvu baze (npr. Cs<2>CO<3>) na temperaturi reakcije između 60 i 120 °C (npr. oko 65 °C). Dalje, može biti uključen korak prečišćavanja. To jest, pre koraka (a), jedinjenje Formule (I) se prečišćava u kiselom rastvoru na temperaturi između 80 i 100 °C.

[0090] U jednom izvođenju, postupak dalje obuhvata korak (c), kada je prisutan, uklanjanje zaštitne grupe za amin za R<2>grupu jedinjenja Formule (III) da bi se formirao 6-(4-amino-2,6-dihlorfenoksi)-4-izopropilpiridazin-3(2H)-on.

[0092] [0035] U jednom izvođenju, jedinjenje, npr., Int. 7, odijen ovde opisanom metodom, ima čistoću veću od 85%, npr. veću od 86%, veću od 90%, veću od 92,5%, veću od 95%, veću od 96%, veću od 97%, veću od 97,5%, veću od 98%, veću od 98,5%, veću od 99%, veću od 99,2%, veću od 99,5% ili veću od 99,8%.

[0094] U jednom izvođenju, jedinjenje, tj. 6-(4-amino-2,6-dihlorofenoksi)-4-izopropilpiridazin-3(2H)-on, dobijen ovde opisanim postupkom, ima manje od 1,5% 6-(4-amino-2,6-dihlorofenoksi)-5-izopropilpiridazin-3(2H)-ona, npr. manje od 1,0% 6-(4-amino-2,6-dihlorofenoksi)-5-izopropilpiridazin-3(2H)-ona, ili manje od 0,5% 6-(4-amino-2,6-dihlorofenoksi)-5-izopropilpiridazin-3(2H)-ona.

[0096] U drugom izvođenju, jedinjenje dobijeno prethodno opisanim postupkom ne sadrži 6-(4-amino-2,6-dihlorofenoksi)-5-izopropilpiridazin-3(2H)-on.

[0098] Ovde opisan postupak sinteze može dalje da obuhvati sledeći korak za sintezu jedinjenja piridazinona kao analoga tiroidnih hormona i njihovih prolekova:

[0100] (d) konverziju 6-(4-amino-2,6-dihlorofenoksi)-4-izopropilpiridazin-3(2H)-ona u jedinjenje formule (IV):

[0102]

[0104] gde

[0106] R<3>je H ili CH<2>R<a>, pri čemu R<a>je hidroksil, O-vezana amino kiselina, -OP(O)(OH)<2>ili -OC(O)-R<b>, R<b>je niži alkil, alkoksi, alkina kiselina, cicloalkil, aril, heteroaril, ili -(CH<2>)<n>-heteroaril i n je 0 ili 1;

[0108] R<4>je H, i R<5>je CH<2>COOH, C(O)CO<2>H, ili njhov estar ili amid, ili R<4>i R<5>tajedno čine - N=C(R<c>)-C(O)-NH-C(O)-; gde R<c>je H ili cijano.

[0110] U jednom izvođenju, jedinjenje Formule (IV) je 2-(3,5-dihloro-4-((5-izopropil-6-okso-1,6-dihidropiridazin-3-il)oksi)fenil)-3,5-diokso-2,3,4,5-tetrahidro-1,2,4-triazin-6-karbonitril („Jedinjenje A“) i gore navedeni korak se izvodi reakcijom 6-(4-amino-2,6-dihlorofenoksi)-4-izopropilpiridazin-3(2H)-ona sa etil (2-cijanoacetil)karbamatom i nitritom metala, nakon čega sledi tretman sa kalijum acetatom u DMAC.

[0111] U jednom izvođenju, postupak dalje obuhvata formiranje morfnog oblika 2-(3,5-dihloro-4-((5-izopropil-6-okso-1,6-dihidropiridazin-3-il)oksi)fenil)-3,5-diokso-2,3,4,5-tetrahidro-1,2,4-triazin-6-karbonitrila („Jedinjenje A“) (Oblik I) koji je okarakterisan rendgenskim difraktogramom praha koji uključuje pikove na oko 10,5, 18,7, 22,9, 23,6 i 24,7 stepeni 2θ.

[0113] U jednom izvođenju, jedinjenje Formule (IV) je Formule (V)

[0115]

[0117] gde R<3>je CH<2>R<a>, i korak (d) izveden reakcijom 6-(4-amino-2,6-dihlorofenoksi)-4-izopropilpiridazin-3(2H)-ona sa etil (2-cijanoacetil)karbamatom i zatim tretmanom sa kalijum acetatom u DMAC pri čemu se dobija 2-(3,5-dihloro-4-((5-izopropil-6-okso-1,6-dihidropiridazin-3-il)oksi)fenil)-3,5-diokso-2,3,4,5-tetrahidro-1,2,4-triazin-6-karbonitril ("Jedinjenje A") i koverzija Jedinjenje A u jedinjenje Formule (V) na odgovarajući način, npr., prema jednoj od tehnika opisanim u U.S. Patentu 8,076,334.

[0119] U jednom izvođenju, jedinjenje Formule (IV), npr. 2-(3,5-dihloro-4-((5-izopropil-6-okso-1,6-dihidropiridazin-3-il)oksi)fenil)-3,5-diokso-2,3,4,5-tetrahidro-1,2,4-triazin-6-karbonitril („Jedinjenje A“), dobijen ovde opisanim postupkom, ima čistoću veću od 85%, npr. veću od 86%, veću od 90%, veću od 92,5%, veću od 95%, veću od 96%, veću od 97%, veću od 97,5%, veću od 98%, veću od 98,5%, veću od 99%, veću od 99,2%, veću od 99,5% ili veću od 99,8%. Na primer, sadržaj nečistoća (tj. bilo koje komponente kompozicije koja je proizvedena ovde opisanim postupkom, osim jedinjenja Formule (IV), kao što su sporedni proizvodi, početni materijal, ostaci rastvarača, teški metali itd.) je manji od 15%, manje od 14%, manje od 10%, manje od 8%, manje od 5%, manje od 4%, manje od 3%, manje od 2%, manje od 1,5%, manje od 1%, manje od 0,8%, manje od 0,5% ili manje od 0,2%.

[0121] [0043] U jednom izvođenju, jedinjenje Formule (IV) dobijeno ovde opisanim postupkom je Jedinjenje A u Obliku I, i ima čistoću veću od 85%, npr. veću od 86%, veću od 90%, veću od 92,5%, veću od 95%, veću od 96%, veću od 97%, veću od 97,5%, veću od 98%, veću od 98,5%, veću od 99%, veću od 99,2%, veću od 99,5% ili veću od 99,8%. Na primer, sadržaj nečistoća (tj. bilo koje komponente kompozicije proizvedene ovde opisanim postupkom, osim Jedinjenja A, kao što su sporedni proizvodi, početni materijal, ostaci rastvarača, teški metali itd.) je manji od 15%, manje od 14%, manje od 10%, manje od 8%, manje od 5%, manje od 4%, manje od 3%, manje od 2%, manje od 1,5%, manje od 1%, manje od 0,8%, manje od 0,5% ili manje od 0,2%.

[0123] U jednom izvođenju, jedinjenje Formule (IV) dobijeno ovde opisanim postupkom je Jedinjenje A u Obliku I, a Oblik I ima čistoću veću od 85%, npr. veću od 86%, veću od 90%, veću od 92,5%, veću od 95%, veću od 96%, veću od 97%, veću od 97,5%, veću od 98%, veću od 98,5%, veću od 99%, veću od 99,2%, veću od 99,5% ili veću od 99,8%. Na primer, sadržaj nečistoća (tj. bilo koje komponente kompozicije proizvedene postupkom opisanim ovde, osim Oblika I, kao što su drugi morfni oblici Jedinjenja A, sporedni proizvodi, početni materijal, ostaci rastvarača, teški metali itd.) je manji od 15%, manje od 14%, manje od 10%, manje od 8%, manje od 5%, manje od 4%, manje od 3%, manje od 2%, manje od 1,5%, manje od 1%, manje od 0,8%, manje od 0,5% ili manje od 0,2%.

[0125] U jednom izvođenju, kompozicija koja sadrži jedinjenje Formule (IV), kao što je Jedinjenje A, dobijena ovde opisanim metodom, ima manje od 1,5% (npr., manje od 1,0%, npr., manje od 0,5%) odgovarajućeg regioizomera β -izopropilidazin-3(2H)-ona (npr., 2-(3,5-dihloro-4-((4-izopropil-6-okso-1,6-dihidropiridazin-3-il)oksi)fenil)-3,5-diokso-2,3,4,5-tetrahidro-1,2,4-triazin-6-karbonitril, β-izopropilpiridazin-3(2H)-on regioizomera Jedinjenja A).

[0127] U jednom izvođenju, kompozicija koja sadrži jedinjenje formule (IV), kao što je Jedinjenje A, dobijena ovde opisanim postupkom ne sadrži odgovarajući β-izopropilpiridazin-3(2H)-on regioizomer (npr. 2-(3,5-dihloro-4-((4-izopropil-6-okso-1,6-dihidropiridazin-3-il)oksi)fenil)-3,5-diokso-2,3,4,5-tetrahidro-1,2,4-triazin-6-karbonitril, β-izopropilpiridazin-3(2H)-on regioizomer Jedinjenja A).

[0129] U jednom izvođenju, kompozicija koji sadrži jedinjenje Formule (IV), kao što je Jedinjenje A, dobijeno ovde opisanim postupkom, ima manje od 1,5% (npr. manje od 0,1%) teških metala, npr. srebra.

[0131] U jednom izvođenju, kompozicija koja sadrži jedinjenje Formule (IV), kao što je Jedinjenje A, dobijeno ovde opisanim postupkom, ne sadrži teške metale, npr. srebro, zlato ili platinu.

[0132] Sintetičke metode opisane ovde uključuju prednosti u poređenju sa prethodnim metodama, kao što su one objavljene u U.S. Patentu 7,452,882. Na primer, ukupni prinos 2-(3,5-dihloro-4-((5-izopropil-6-okso-1,6-dihidropiridazin-3-il)oksi)fenil)-3,5-diokso-2,3,4,5-tetrahidro-1,2,4-triazin-6-karbonitrila („Jedinjenje A“) je znatno povećan (npr. > 40% naspram ~9% kada se priprema prema metodi objavljenoj u aU.S. Patentu 7,452,882).

[0134] Takođe, regioselektivnost sinteze je daleko superiornija. Dalje, nove metode nude lakšu obradu, npr. lakše filtracije. Konačno, u metodama opisanim ovde za Jedinjenje A nisu korišćeni teški metali. Poređenja radi, srebro je korišćeno na način opisan u U.S. Patentu 7,452,882, što je zahtevalo tretman sanacije smolom.

[0136] Ovde je takođe opisana kompozicija koja sadrži više od 85% jedinjenja Formule (IV), manje od 1,5% odgovarajućeg β -izopropilpiridazin-3(2H)-on regioizomera (tj.

[0138]

ima manje od 1,5% teških metala.

[0140] U jednom izvođenju, jedinjenje Formule (IV), npr., Jedinjenje A, ima čistoću veću od 85%, npr., veću od 86%, veću od 90%, veću od 92,5%, veću od 95%, veću od 96%, veću od 97%, veću od 97,5%, veću od 98%, veću od 98,5%, veću od 99%, veću od 99,2%, veću od 99,5% ili veću od 99,8%. Na primer, sadržaj nečistoća (tj. bilo koje komponente kompozicije koja sadrži jedinjenje Formule (IV), osim jedinjenja Formule (IV), kao što su sporedni proizvodi, početni materijal, ostaci rastvarača, teški metali itd.) je manji od 15%, manje od 14%, manje od 10%, manje od 8%, manje od 5%, manje od 4%, manje od 3%, manje od 2%, manje od 1,5%, manje od 1%, manje od 0,8%, manje od 0,5% ili manje od 0,2%. U jednom izvođenju, jedinjenje Formule (IV) je Jedinjenje A u Obliku I, i ima čistoću veću od 85%, npr., veću od 86%, veću od 90%, veću od 92,5%, veću od 95%, veću od 96%, veću od 97%, veću od 97,5%, veću od 98%, veću od 98,5%, veću od 99%, veću od 99,2%, veću od 99,5% ili veću od 99,8%. Na primer, sadržaj nečistoća (tj. bilo koje komponente sastava koji sadrži Jedinjenje A, osim Jedinjenja A, kao što su sporedni proizvodi, početni materijal, ostaci rastvarača, teški metali itd.) je manji od 15%, manje od 14%, manje od 10%, manje od 8%, manje od 5%, manje od 4%, manje od 3%, manje od 2%, manje od 1,5%, manje od 1%, manje od 0,8%, manje od 0,5% ili manje od 0,2%.

[0143] 1

[0144] U jednom izvođenju, jedinjenje Formule (IV) je Jedinjenje A u Obliku I, a Oblik I ima čistoću veću od 85%, npr., veću od 86%, veću od 90%, veću od 92,5%, veću od 95%, veću od 96%, veću od 97%, veću od 97,5%, veću od 98%, veću od 98,5%, veću od 99%, veću od 99,2%, veću od 99,5% ili veću od 99,8%. Na primer, sadržaj nečistoća (tj. bilo koje komponente kompozicije koja sadrži Oblik I, osim Oblika I, kao što su drugi morfni oblici Jedinjenja A, sporedni sproizvodi, početni materijal, ostaci rastvarača, teški metali itd.) je manji od 15%, manji od 14%, manji od 10%, manji od 8%, manje od 5%, manji od 4%, manji od 3%, manji od 2%, manji od 1,5%, manji od 1%, manji od 0,8%, manji od 0,5% ili manji od 0,2%.

[0146] U jednom izvođenju, jedinjenje formule (IV), kao što je Jedinjenje A, ima manje od 1,5% (npr., manje od 1,0%, npr., manje od 0,5%) odgovarajućeg β -izopropilpiridazin-3(2H)-ona regioizomera (npr., 2-(3,5-dihloro-4-((4-izopropil-6-okso-1,6-dihidropiridazin-3-il)oksi)fenil)-3,5-diokso-2,3,4,5-tetrahidro-1,2,4-triazin-6-karbonitril, β-izopropilpiridazin-3(2H)-on regioizomer Jedinjenja A).

[0148] U jednom izvođenju, jedinjenje formule (IV), kao što je Jedinjenje A, ne sadrži odgovarajući β -izopropilpiridazin-3(2H)-on regioizomer (npr., 2-(3,5-dihloro-4-((4-izopropil-6-okso-1,6-dihidropiridazin-3-il)oksi)fenil)-3,5-diokso-2,3,4,5-tetrahidro-1,2,4-triazin-6-karbonitril, β-izopropilpiridazin-3(2H)-on regioizomer Jedinjenja A).

[0150] U jednom izvođenju, jedinjenje Formule (IV), kao što je Jedinjenje A, ima manje od 1,5% (npr., manje od 1,0%, npr., manje od 0,5%) teških metala, npr., srebra, zlata ili platine.

[0152] U jednom izvođenju, jedinjenje Formule (IV), kao što je Jedinjenje A, dobijeno ovde opisanim postupkom, ne sadrži teške metale, npr., srebro.

[0154] Jedinjenje A može biti morfni oblik (Oblik I) koji karakteriše rendgenski difrakcijski dijagram praha („XRPD“) koji uključuje pikove na oko 10,5, 18,7, 22,9, 23,6 i 24,7 stepeni 2θ.

[0156] U jednom izvođenju, Oblik I karakteriše rendgenski difraktogram praha koji dodatno uključuje pikove na oko 8,2, 11,2, 15,7, 16,4, 17,7, 30,0 i 32,2 stepena 2θ.

[0158] U jednom izvođenju, Oblik I karakteriše rendgenski difraktogram praha koji uključuje pikove na oko 8,2, 10,5, 18,7, 22,9, 23,6 i 24,7 stepeni 2θ.

[0160] U jednom izvođenju, Oblik I karakteriše rendgenski difraktogram praha koji uključuje pikove na oko 8,2, 10,5, 11,2, 15,7, 16,4, 17,7, 18,7, 22,9, 23,6 i 24,7 stepeni 2θ.

[0161] U jednom izvođenju, Oblik I karakteriše rendgenski difraktogram praha koji uključuje pikove na oko 8,2, 10,5, 11,2, 15,7, 16,4, 17,7, 18,7, 22,9, 23,6, 24,7, 30,0 i 32,2 stepeni 2θ.

[0163] U drugom izvođenju, Oblik I karakteriše rendgenski difraktogram praha koji je suštinski sličan onom prikazanom na slici.1.

[0165] U drugom aspektu, ovo otkriće opisuje postupak dobijanja Oblika I. Postupak obuhvata mešanje uzorka koji sadrži Jedinjenje A (npr., bilo sirovi ili prečišćeni preparat Jedinjenja A) sa organskim rastvaračem, kao što je alkohol (npr., etanol), keton (npr., metil izobutil keton, tj. MIBK), ili vodeni rastvor koji sadrži alkohol ili keton. Na primer, rezultujuća smeša (npr., suspenzija ili emulzija) koja sadrži početno Jedinjenje A i rastvarač se zagreva na prvu temperaturu, a zatim hladi na drugu temperaturu koja je niža od prve temperature. Poželjno je da organski rastvarač bude etanol. Početno Jedinjenje A koje prelazi u konverziju oblika može biti solvat, kao što je hidrat (npr., monohidrat ili dihidrat), ili solvat organskog rastvarača (na primer, dimetil acetamid, etanol ili MIBK). Alternativno, početno Jedinjenje A može biti desolvatisan/ansolvat (npr., anhidrid).

[0167] U jednom izvođenju, postupak se izvodi zagrevanjem Jedinjenja A sa organskim rastvaračem na povišenu temperaturu (npr., oko 60-110 °C ili oko 80 °C) da bi se formirala emzulzija ili suspenzija, nakon čega sledi hlađenje (npr., na temperaturu oko 0-60 °C, oko 40-60 °C, oko 45-55 °C ili na oko sobnoj temperaturi) da bi se dobio Oblik I Jedinjenja A. Na primer, organski rastvarač je etanol, a kaša koja sadrži Jedinjenje A može se ohladiti na temperaturu veću od oko 40 °C da bi se dobio Oblik I. Na primer, organski rastvarač je MIBK, a emulzija koja sadrži Jedinjenje A može se ohladiti na sobnu temperaturu da bi se dobio Oblik I.

[0169] U drugom izvođenju, etanolna suspenzija Jedinjenja A se zagreva na povišenu temperaturu (npr. oko 80 °C), a zatim hladi na temperaturu ne nižu od oko 40 °C (npr. oko 45-55 °C), profiltrira (npr. oko 45-55 °C), ispira zagrejanim (npr.45-55 °C) etanolom i suši na npr.

[0170] 45-55 °C da bi se dobio Oblik I Jedinjenja A koji je u suštini ne sadrži solvat Jedinjenja A, kao što je solvat etanola. Na primer, Oblik I Jedinjenja A, kako je pripremljen, ima sadržaj solvata etanol < 5% (npr. < 2%, < 1%, < 0,5% ili < 0,1%).

[0172] U jednom izvođenju, postupak dalje obuhvata, nakon hlađenja smeše i filtraciju smeše. Korak filtracije može se izvesti na temperaturi između oko 0 °C i oko 60 °C (npr., oko 40-60 °C, oko 45-55 °C ili na približno sobnoj temperaturi) da bi se dobio filter kolač.

[0173] U jednom izvođenju, postupak dalje obuhvata, nakon filtracije smeše, ispiranje filter kolača. Korak ispiranja može se izvesti na temperaturi između oko 0 °C i oko 60 °C (npr., oko 40-60 °C, oko 45-55 °C ili na oko sobnoj temperaturi) organskim rastvaračem (npr., alkoholom kao što je etanol) da bi se dobio ispran filter kolač.

[0175] U jednom izvođenju, postupak dalje obuhvata, nakon ispiranja filter kolača, sušenje ispranog filter kolača. Korak sušenja može se izvesti na temperaturi između oko 0 °C i oko 60 °C (npr., oko 40-60 °C, oko 45-55 °C ili na oko sobnoj temperaturi) da bi se dobio Oblik I Jedinjenja A.

[0177] U jednom izvođenju, Oblik I ima čistoću veću od 91%, npr., veću od 92,5%, veću od 95%, veću od 96%, veću od 97% ili veću od 97,5%.

[0179] U jednom izvođenju, Oblik I ima čistoću veću od 98%, npr., veću od 98,5%, veću od 99%, veću od 99,2%, veću od 99,5% ili veću od 99,8%.

[0181] U drugom aspektu, otkriće obezbeđuje jedinjenja kao što su:

[0183]

[0186] i njegova so, npr., korisna u sintezi 6-(4-amino-2,6-dihlorofenoksi)-4-izopropilpiridazin-3(2H)-ona („int. 7“).

[0189] 1

[0190] Ovaj opis takođe obezbeđuje metod za lečenje rezistencije na tireoidni hormon (RTH) kod subjekta kome je to potrebno. Metod obuhvata administraciju/davanje subjektu koji ima najmanje jednu TRβ mutaciju terapeutski efikasne količine jedinjenja Formule (IV):

[0192]

[0195] gde

[0197] R<3>je H ili CH<2>R<a>, u kome R<a>je hidroksil, O-vezana amino kliselina, -OP(O)(OH)<2>ili

[0198] -OC(O)-R<b>, R<b>je niži alkil, alkoksi, alkil kiselina, cikloalkil, aril, heteroaril, ili

[0199] -(CH<2>)<n>-heteroaril i n je 0 ili 1;

[0201] R<4>je H, i R<5>je CH<2>COOH, C(O)CO<2>H, ili njihove estar ili amid, ili R<4>i R<5>zajedno cu -N=C(R<c>)-C(O)-NH-C(O)-; u kome R<c>je H ili cijano.

[0203] Rezistencija na tireoidni hormon (RTH) je sindrom koji karakteriše varijabilna hiposenzitivnost tkiva na tireoidni hormon i prvenstveno je uzrokovan autozomno dominantnim mutacijama THRβ. Videti Shi et al., Biochemistry 2005, 44, 4612-4626.

[0205] U jednom izvođenju, jedinjenje koje se koristi u gore navedenom postupku je 2-(3,5-dihloro-4-((5-izopropil-6-okso-1,6-dihidropiridazin-3-il)oksi)fenil)-3,5-diokso-2,3,4,5-tetrahidro-1,2,4-triazin-6-karbonitril ("Jedinjenje A"), npr., Jedinjenje A u Obliku I.

[0207] U jednom izvođenju, subjekt koji se leči gore navedenim postupkom je gojazan, ima hiperlipidemiju, hiperholesterolemiju, dijabetes, nealkoholni steatohepatitis, masnu jetru, bolest kostiju, promenu osovine štitne žlezde, aterosklerozu, kardiovaskularni poremećaj, tahikardiju, hiperkinetičko ponašanje, hipotireoidizam, gušavost, poremećaj pažnje sa hiperaktivnošću, teškoće u učenju, mentalnu retardaciju, gubitak sluha, odloženu koštanu starost, neurološku ili psihijatrijsku bolest ili rak štitne žlezde.

[0209] [0077] U jednom izvođenju, mutacija THRβ je izabrana iz grupe koja se sastoji od supstitucije treonina (T) za ostatak alanina (A) divljeg tipa na poziciji aminokiseline 234 SEQ ID NO: 1 (A234T); supstitucije glutamina (Q) za ostatak arginina (R) divljeg tipa na poziciji aminokiseline 243 SEQ ID NO: 1 (R243Q); supstitucije histidina (H) za ostatak arginina (R) divljeg tipa na poziciji aminokiseline 316 SEQ ID NO: 1 (R316H); i supstitucije treonina (T) za ostatak alanina (A) divljeg tipa na poziciji aminokiseline 317 SEQ ID NO: 1 (A317T). U drugom izvđenju, jedinjenje koje se koristi u metodi obnavlja aktivnost mutantnog THRβ.

[0211] U jednom izvođenju, čistoća jedinjenja Formule (IV), kao što je Jedinjenje A, dobija se ponovnim suspendovanjem sirovog jedinjenja iz odgovarajućeg rastvarača opisanog ovde. U drugom izvođenju, jedinjenje nije solvat (npr. hidrat).

[0213] U jednom izvođenju, jedinjenje Formule (IV), npr. Jedinjenje A, ima čistoću veću od 85%, npr. veću od 86%, veću od 90%, veću od 92,5%, veću od 95%, veću od 96%, veću od 97%, veću od 97,5%, veću od 98%, veću od 98,5%, veću od 99%, veću od 99,2%, veću od 99,5% ili veću od 99,8%.

[0215] U jednom izvođenju, jedinjenje Formule (IV) je Jedinjenje A u Obliku I, i ima čistoću veću od 85%, npr., veću od 86%, veću od 90%, veću od 92,5%, veću od 95%, veću od 96%, veću od 97%, veću od 97,5%, veću od 98%, veću od 98,5%, veću od 99%, veću od 99,2%, veću od 99,5% ili veću od 99,8%.

[0217] U jednom izvođenju, jedinjenje Formule (IV) je Jedinjenje A u Obliku I, a Oblik I ima čistoću veću od 85%, npr., veću od 86%, veću od 90%, veću od 92,5%, veću od 95%, veću od 96%, veću od 97%, veću od 97,5%, veću od 98%, veću od 98,5%, veću od 99%, veću od 99,2%, veću od 99,5% ili veću od 99,8%.

[0219] U jednom izvođenju, jedinjenje formule (IV), kao što je Jedinjenje A, ima manje od 1,5% (npr., manje od 1,0%, npr., manje od 0,5%) odgovarajućeg β -izopropilpiridazin-3(2H)-on regioizomera (npr., 2-(3,5-dihloro-4-((4-izopropil-6-okso-1,6-dihidropiridazin-3-il)oksi)fenil)-3,5-diokso-2,3,4,5-tetrahidro-1,2,4-triazin-6-karbonitril, β-izopropilpiridazin-3(2H)-on regioizomer Jedinjenja A).

[0221] U jednom izvođenju, jedinjenje formule (IV), kao što je Jedinjenje A, ne sadrži odgovarajući β -izopropilpiridazin-3(2H)-on regioizomer (npr., 2-(3,5-dihloro-4-((4-izopropil-6-okso-1,6-dihidropiridazin-3-il)oksi)fenil)-3,5-diokso-2,3,4,5-tetrahidro-1,2,4-triazin-6-karbonitril, β-izopropilpiridazin-3(2H)-on regioizomer JedinjenjaA).

[0223] U jednom izvođenju, jedinjenje Formule (IV), kao što je Jedinjenje A, ima manje od 1,5% (npr., manje od 1,0%, npr., manje od 0,5%) teških metala, npr., srebra, zlata ili platine.

[0225] U jednom izvođenju, subjekt je sisar. U drugom izvođenju, subjekt je čovek.

[0228] 1

[0229] Otkriće dalje obezbeđuje metod za određivanje odgovora subjekta na jedinjenje Formule (IV) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, pri čemu metod obuhvata:

[0231] (a) obezbeđivanje uzorka od subjekta; i

[0233] (b) detekciju mutacije u receptoru tiroidnog hormona („TR“), gde prisustvo mutacije ukazuje da subjekt reaguje na jedinjenja ili njihovu farmaceutski prihvatljivu so.

[0235] U jednom izvođenju, jedinjenje Formule (IV) je 22-(3,5-dihloro-4-((5-izopropil-6-okso-1,6-dihidropiridazin-3-il)oksi)fenil)-3,5-diokso-2,3,4,5-tetrahidro-1,2,4-triazin-6-karbonitril ("Jedinjenje A").

[0237] U jednom izvođenju, TR je TRβ.

[0239] U jednom izvođenju, subjekt lečen Jedinjenjem A je gojazan, ima hiperlipidemiju, hiperholesterolemiju, dijabetes, nealkoholni steatohepatitis, masnu jetru, bolest kostiju, promenu osovine štitne žlezde, aterosklerozu, kardiovaskularni poremećaj, tahikardiju, hiperkinetičko ponašanje, hipotireoidizam, gušavost, poremećaj pažnje sa hiperaktivnošću, teškoće u učenju, mentalnu retardaciju, gubitak sluha, odloženu koštanu starost, neurološku ili psihijatrijsku bolest ili rak štitne žlezde.

[0241] U jednom izvođenju, metod za određivanje odgovora/reakcije na jedinjenje Formule (IV) može se koristiti zajedno sa metodom za lečenje rezistencije na hormone štitne žlezde. To jest, pre tretmana, subjekt se testira da bi se utvrdila reakcija na jedinjenje.

[0243] Druge karakteristike i prednosti ovog pronalaska su očigledne iz detaljnog opisa, primera i zahteva.

[0245] Kratak opis slika

[0247]

[0249] Slika 1 je rendgenski difraktogram praha (XRPD) Oblika I 2-(3,5-dihloro-4-((5-izopropil-6-okso-1,6-dihidropiridazin-3-il)oksi)fenil)-3,5-diokso-2,3,4,5-tetrahidro-1,2,4-triazin-6-karbonitrila ("Jedinjenje A").

[0251] Slika 2 je dijagram diferencijalne skenirajuće kalorimetrije (DSC) Oblika I Jedinjenja A.

[0252] Slike 3A i 3B su slike MakPajmolovog/ MacPymol modeliranja koje prikazuju T3 i Jedinjenje A u THRβ, respektivno.

[0255] 1

[0256] Slika 4 je slika MakPajmolovog/ MacPymol modeliranja koja prikazuje superponirane T3 i Jedinjenje A u THRβ.

[0258] Slika 5A je slika dobijena MakPajmolim/ MacPymol modeliranjem koja prikazuje polarne interakcije između T3 i THRβ divljeg tipa, gde T3 veoma specifično interaguje sa Arg320.

[0259] Slika 5B je slika dobijena MakPajmolim/ MacPymol modeliranjem koja prikazuje polarne interakcije između Jedinjenja A i divljeg tipa THRβ, gde Jedinjenje A interaguje sa Arg320 i Arg316.

[0261] Slika 6 je slika dobijena MakPajmolim/ MacPymol modeliranjem koja pokazuje da mutacije dovode do mnogih promena u polarnom regionu domena vezivanja liganda („LBD“).

[0263] Slika 7A je slika dobijena MakPajmolim/ MacPymol modeliranjem koja prikazuje interakcije između T3 i THRβ mutanata: Ala234Thr, Arg243Gln, Arg316His, Ala317Thr.

[0265] Slika 7B je slika dobijena MacPymol /MakPajmolim modeliranjem koja prikazuje interakcije između Jedinjenja A i THRβ mutanata: Ala234Thr, Arg243Gln, Arg316His, Ala317Thr; što ukazuje da, u poređenju sa T3, negativno naelektrisani heterocikl u Jedinjenju A bolje prilagođava mutacije.

[0267] Slike 8A i 8B su slike dobijene MacPymol/ MakPajmolovim modeliranjem T3 i Jedinjenja A u mutantu Arg316His, respektivno. Interakcija T3-Arg320 je verovatno slabija zbog rotacije Arg320 dalje od liganda u mutantu, dok Jedinjenje A održava povoljnu interakciju sa Arg320 i dobro je pozicionirana za CN grupu da formira pi-katjonsku interakciju sa mutiranim His316.

[0268] Slike 9A i 9B su slike dobijene MacPymol /MakPajmolovim modeliranjem Jedinjenja A u WT THRβ i Arg316His mutantu, respektivno.

[0270] DETALJAN OPIS PRONALASKA

[0272] Kako se koristi u specifikaciji i priloženim zahtevima, oblici jednine u engleskom tekstu „a“, „an“ i „the“ uključuje i množinu, osim ako kontekst jasno ne nalaže drugačije. Tako, na primer, referenca na „reaktant“ uključuje ne samo jedan reaktant već i kombinaciju ili smešu dva ili više različitih reaktanata, referenca na „supstituent“ uključuje jedan supstituent kao i dva ili više supstituenata i slično.

[0274] Kako se ovde koriste, izrazi „na primer“, „na primer“, „kao što je“ ili „uključujući“ imaju za cilj da uvedu primere koji dalje razjašnjavaju opštiji predmet pronalaska. Ovi primeri su dati samo kao pomoć za razumevanje otkrića i nisu namenjeni da budu ograničavajući na

[0277] 1

[0278] bilo koji način. Dalje, kako se ovde koriste, izrazi „može“, „opciono“, „ po izboru“ ili „može opciono/po izboru“ znače da se naknadno opisana okolnost može, ali i ne mora dogoditi, tako da opis uključuje slučajeve gde se okolnost dešava i slučajeve gde se ne dešava. Na primer, izraz „opciono/po izboru prisutan“ znači da objekat može, ali i ne mora biti prisutan, i stoga opis uključuje slučajeve u kojima je objekat prisutan i slučajeve u kojima element nije prisutan.

[0280] Prilikom opisivanja i traženja zaštite obuhvaćenog predmetnim pronalaskom, koristiće se sledeća terminologija u skladu sa definicijama navedenim u nastavku.

[0282] Kako se ovde koristi, skraćenica „TR“ ili „THR“ odnosi se na receptor tiroidnih hormona. TR nukleinske kiseline i polipeptidi iz različitih vrsta (npr. čoveka, pacova, živine, itd.) su prethodno opisani. Videti, npr., R. L. Wagner et al. (2001), Molecular Endocrinology 15(3): 398-410; J. Sap et al. (1986), Nature 324:635-640; C. Weinberger et al. (1986), Nature 324:641-646; and C.C.Tompson et al. (1986), Science 237:1610-1614. Obezbeđena je aminokiselinska sekvenca TRβ čoveka, npr., Genbank Accession No. P108282.

[0284] Aminokiselinska sekvenca domena za vezivanje liganda (ostaci 203-461) TRβ (SEQ

[0287]

[0290] Ostaci na položajima 234, 243, 316 i 317 TRβ čoveka su podvučeni u SEQ ID NO: 1. Deo nukleotidne sekvence TRβ čoveka koji kodira gore navedenu aminokiselinsku sekvencu je SEQ ID NO: 2. Obezbešena je nukleotidna sekvenca ljudskog TRβ, npr., Genbank Accession No. NM_0004614.

[0293] 1

[0294]

[0297] Kako se ovde koristi, fraza „ima formulu“ ili „ima strukturu“ nije namenjena da bude ograničavajuća i koristi se na isti način kao što se uobičajeno koristi termin „sadrži/obuhvata“. Termin „nezavisno odabran iz“ se ovde koristi da označi da navedeni elementi, npr., R grupe ili slično, mogu biti identični ili različiti.

[0299] Termin „alkil“, kako se ovde koristi, odnosi se na razgranatu ili nerazgranatu zasićenu ugljovodoničnu grupu koja obično, mada ne nužno, sadrži 1 do oko 24 atoma ugljenika, kao što su metil, etil, n-propil, izopropil, n-butil, izobutil, t-butil, oktil, decil i slično, kao i cikloalkil grupe kao što su ciklopentil, cikloheksil i slično. Generalno, mada ne nužno, alkil grupe ovde mogu da sadrže 1 do oko 18 atoma ugljenika, a takve grupe mogu sadržati 1 do oko 12 atoma ugljenika. Termin „niži alkil“ označava alkil grupu od 1 do 6 atoma ugljenika, na primer, 1, 2, 3, 4, 5 ili 6 atoma ugljenika. „Supstituisani alkil“ se odnosi na alkil supstituisan jednom ili više grupa supstituenata, a termini „alkil koji sadrži heteroatom“ i „heteroalkil“ se odnose na alkil supstituent u kome je najmanje jedan atom ugljenika zamenjen heteroatomom, kao što je detaljnije opisano u nastavku.

[0301] Termin „alkenil“, kako se ovde koristi, odnosi se na linearnu, razgranatu ili cikličnu ugljovodoničnu grupu od 2 do oko 24 atoma ugljenika koja sadrži najmanje jednu dvostruku vezu, kao što su etenil, n-propenil, izopropenil, n-butenil, izobutenil, oktenil, decenil, tetradecenil, heksadecenil, ejkozenil, tetrakozenil i slično. Generalno, iako ponovo ne nužno, alkenil grupe ovde mogu sadržati 2 do oko 18 atoma ugljenika, i na primer mogu sadržati 2 do 12 atoma ugljenika. Termin „niži alkenil“ označava alkenil grupu od 2 do 6 atoma ugljenika. Termin „supstituisani alkenil“ odnosi se na alkenil supstituisan sa jednom ili više grupa

[0304] 1

[0305] supstituenata, a termini „alkenil koji sadrži heteroatom“ i „heteroalkenil“ odnose se na alkenil u kome je najmanje jedan atom ugljenika zamenjen heteroatomom, npr., N, P, O ili S.

[0307] Termin „alkinil“, kako se ovde koristi, odnosi se na linearnu ili razgranatu ugljovodoničnu grupu od 2 do 24 atoma ugljenika koja sadrži najmanje jednu trostruku vezu, kao što su etinil, n-propinil i slično. Generalno, iako ponovo ne nužno, alkinil grupe ovde mogu sadržati 2 do oko 18 atoma ugljenika, a takve grupe mogu dalje sadržati 2 do 12 atoma ugljenika. Termin „niži alkinil“ odnosi se na alkinil grupu od 2 do 6 atoma ugljenika. Termin „supstituisani alkinil“ odnosi se na alkinil supstituisan jednom ili više grupa supstituenata, a termini „alkinil koji sadrži heteroatom“ i „heteroalkinil“ odnose se na alkinil u kome je najmanje jedan atom ugljenika zamenjen heteroatomom.

[0309] Termin „alkoksi“, kako se ovde koristi, odnosi se na alkil grupu vezanu preko jedne, terminalne etarske veze; to jest, „alkoksi“ grupa može biti predstavljena kao -O-alkil gde je alkil kao što je gore definisano. Grupa „niži alkoksi“ označava alkoksi grupu koja sadrži 1 do 6 atoma ugljenika i uključuje, na primer, metoksi, etoksi, n-propoksi, izopropoksi, t-butiloksi itd. Supstituenti identifikovani kao „ C<1>-C<6>alkoksi“ ili „niži alkoksi“ ovde mogu, na primer, sadržati 1 do 3 atoma ugljenika, a kao dalji primer, takvi supstituenti mogu sadržati 1 ili 2 atoma ugljenika (tj. metoksi i etoksi).

[0311] Termin „alkilna kiselina“ odnosi se na kiseli supstituent koji se nalazi na alkil grupi, kao što je CH<2>)<o>COOH, gde je o ceo broj između 1 i 6. Alkil grupa može biti linearna ili razgranata.

[0313] Termin „aril“, kako se ovde koristi, i osim ako nije drugačije naznačeno, odnosi se na aromatični supstituent koji generalno, iako ne nužno, sadrži 5 do 30 atoma ugljenika i sadrži jedan aromatični prsten ili više aromatičnih prstenova koji su spojeni zajedno, direktno povezani ili indirektno povezani (tako da su različiti aromatični prstenovi vezani za zajedničku grupu kao što je metilen ili etilen deo). Aril grupe mogu, na primer, da sadrže 5 do 20 atoma ugljenika, a kao dalji primer, aril grupe mogu sadržati 5 do 12 atoma ugljenika. Na primer, aril grupe mogu da sadrže jedan aromatični prsten ili dva spojena ili povezana aromatična prstena, npr., fenil, naftil, bifenil, difeniletar, difenilamin, benzofenon i slično. „Supstituisani aril“ se odnosi na arilni deo supstituisan jednom ili više supstituentskih grupa, a termini „aril koji sadrži heteroatom“ i „heteroaril“ se odnose na arilni supstituent, u kome je najmanje jedan atom ugljenika zamenjen heteroatomom, kao što će biti detaljnije opisano u nastavku. Ako nije

[0316] 2

[0317] drugačije naznačeno, termin „aril“ uključuje prstenove koji su nesupstituisani, supstituisani i/ili imaju aromatične supstituente koji sadrže heteroatom.

[0319] Termin „aralkil“ se odnosi na alkil grupu sa aril supstituentom, a termin „alkaril“ se odnosi na aril grupu sa alkil supstituentom, gde su „alkil“ i „aril“ kao što je gore definisano. Generalno, aralkil i alkaril grupe ovde sadrže 6 do 30 atoma ugljenika. Aralkil i alkaril grupe mogu, na primer, da sadrže 6 do 20 atoma ugljenika, a kao dalji primer, takve grupe mogu da sadrže 6 do 12 atoma ugljenika.

[0321] Termin „amino“ se ovde koristi da bi se odnosio na grupu - NZ<1>Z<2>gde Z<1>i Z<2>su vodonik ili supstituenti koji nisu dovodnik, pri čemu supstituenti koji nisu vodonik uključuju, na primer, alkil, aril, alkenil, aralkil i njihove supstituisane i/ili varijante koje sadrže heteroatome.

[0323] Termini „halo“ i „halogen“ se koriste u konvencionalnom smislu da bi se odnosili na hloro, bromo, fluoro ili jodo supstituent.

[0325] Termin „koji sadrži heteroatom“ kao u „alkil grupa koja sadrži heteroatom“ (takođe se naziva „heteroalkil“ grupa) ili „aril grupa koja sadrži heteroatom“ (takođe se naziva „heteroaril“ grupa) odnosi se na molekul, vezu ili supstituent u kome je jedan ili više atoma ugljenika zamenjeno atomom koji nije ugljenik, npr., azot, kiseonik, sumpor, fosfor ili silicijum, tipično azot, kiseonik ili sumpor. Slično tome, termin „heteroalkil“ se odnosi na alkilni supstituent koji sadrži heteroatom, termin „heterocikl“ ili „heterociklični“ se odnosi na ciklični deo koji sadrži heteroatom, termini „heteroaril“ i „heteroaromatični“ se respektivno odnose na „aril“ i „aromatične“ supstituente koji sadrže heteroatome i slično. Primeri heteroalkilnih grupa uključuju alkoksiaril, alkilsulfanil-supstituisani alkil, N-alkilovani amino alkil i slično. Primeri heteroarilnih supstituenata uključuju pirolil, pirolidinil, piridinil, hinolinil, indolil, furil, pirimidinil, imidazolil, 1,2,4-triazolil, tetrazolil, itd., a primeri alicikličnih grupa koje sadrže heteroatome su pirolidino, morfolino, piperazino, piperidino, tetrahidrofuranil itd.

[0327] [0109] „Hidrokarbil“ se odnosi na jednovalentne hidrokarbil radikale koji sadrže od 1 do oko 30 atoma ugljenika, uključujući od 1 do oko 24 atoma ugljenika, dalje uključujući od 1 do oko 18 atoma ugljenika, i dalje uključujući oko 1 do 12 atoma ugljenika, uključujući linearne, razgranate, ciklične, zasićene i nezasićene vrste, kao što su alkil grupe, alkenil grupe, aril grupe i slično. „Supstituisani hidrokarbil“ se odnosi na hidrokarbil supstituisan jednom ili više supstituentskih grupa, a termin „hidrokarbil koji sadrži heteroatom“ se odnosi na hidrokarbil u kome je najmanje jedan atom ugljenika zamenjen heteroatomom.

[0329] Termin „O-vezana aminokiselina“ označava bilo koju aminokiselinu, prirodnu ili sintetičku, povezanu sa molekulom preko kiseonika karboksilne grupe aminokiseline, poželjno preko karboksilne grupe karboksilnog terminusa aminokiseline.

[0331] [0111] Kako se ovde koristi, termin „zaštitna grupa“ znači da je određeni funkcionalni deo, npr., O, S ili N, privremeno blokiran tako da se reakcija može selektivno izvršiti na drugom reaktivnom mestu u multifunkcionalnom jedinjenju. U poželjnim izvođenjima, zaštitna grupa reaguje selektivno u dobrom prinosu dajući zaštićeni supstrat koji je stabilan na projektovane reakcije; zaštitna grupa mora biti selektivno uklonjena u dobrom prinosu lako dostupnim, poželjno netoksičnim reagensima koji ne napadaju druge funkcionalne grupe; zaštitna grupa formira lako odvojivi derivat (poželjnije bez stvaranja novih stereogenih centara); i zaštitna grupa ima minimalnu dodatnu funkcionalnost da bi se izbegla dalja mesta reakcije. Kao što je ovde detaljno opisano, mogu se koristiti kiseonik, sumpor, azot i zaštitne grupe za ugljenik. Na primer, u određenim otelotvorenjima, mogu se koristiti određeni primeri zaštitnih grupa kiseonika. Ove zaštitne grupe za heksagen uključuju, ali nisu ograničene na, metil etre, supstituisane metil etre (npr., MOM (metoksimetil etar), MTM (metil tiometil etar), BOM (benziloksimetil etar) i PMBM (p-metoksibenziloksimetil etar)), supstituisane etil etre, supstituisane benzil etre, silil etre (npr., TMS (trimetil silil etar), TES (trietil sililetar), TIPS (triizopropilsilil etar), TBDMS (t-butildimetil silil etar), tribenzil silil etar i TBDPS (tbutildifenil silil etar), estre (npr., format, acetat, benzoat (Bz), trifluoroacetat i dihloroacetat), karbonate, ciklične acetale i ketale. U određenim drugim primerima realizacije, koriste se azotne zaštitne grupe. Zaštitne grupe za azot, kao i metode zaštite i uklanjanja zaštite (deprotekcije) su poznate u struci. Zaštitne grupe za azot uključuju, ali nisu ograničene na, karbamate (uključujući metil, etil i supstituisane etil karbamate (npr. Troc), amide, ciklične derivate imida, N-alkil i N-aril amine, derivate imina i derivate enamina. U još nekim realizacijama, mogu se koristiti određeni primeri zaštitnih grupa za sumpor. Zaštitne grupe za sumpor uključuju, ali nisu ograničene na one zaštitne grupe za kiseonika koje su prethodno opisane, kao i alifatičnu karboksilnu kiselinu (npr. akrilnu kiselinu), maleimid, vinil sulfonil i opciono supstituisanu maleinsku kiselinu. Određeni drugi primeri zaštitnih grupa su detaljno opisani ovde, međutim, biće jasno da ovaj pronalazak nije namenjen da bude ograničen na ove zaštitne grupe; nego, razne dodatne ekvivalentne zaštitne grupe mogu se lako identifikovati korišćenjem gore navedenih kriterijuma i koristiti u ovom pronalasku. Pored toga, razne zaštitne grupe su opisane u "Protective Groups in Organic Synthesis" Third Ed. Greene, T.W. and Wuts, P.G., Eds., John Wiley & Sons, New York: 1999

[0333] Pod „supstituisan“, kao u „supstituisani hidrokarbil“, „supstituisani alkil“, „supstituisani aril“ i slično, kako je navedeno u nekim od gore navedenih definicija, podrazumeva se da je u hidrokarbilu, alkilu, arilu ili drugom ostatku, najmanje jedan atom vodonika vezan za atom ugljenika (ili drugi) zamenjen je jednim ili više supstituenata koji nisu vodonik. Primeri takvih supstituenata uključuju, bez ograničenja, funkcionalne grupe i hidrokarbil grupe C<1>-C<24>alkil (uključujući C<1>-C<18>alkil, uključujući dalje C<1>-C<12>alkil, i uključujući i C<1>-C<6>alkil), C<2>-C<24>alkenil (uključujući C<2>-C<18>alkenil, uključujući dalje C<2>-C<12>alkenil, i uključujući i C<2>-C<6>alkenil), C<2>-C<24>alkinil (uključujući C<2>-C<18>alkinil, further uključujući C<2>-C<12>alkinil i further uključujući C<2>-C<6>alkinil), C<5>-C<30>aril (uključujući C<5>-C<20>aril, i dalje uključujući C<5>-C<12>aril), i C<6>-C<30>aralkil (uključujući C<6>-C<20>aralkil, i dalje uključujući C<6>-C<12>aralkil).

[0335] Pod „funkcionalnom grupom“, kako je navedeno u nekim od gore navedenih definicija, podrazumeva se grupa koja nije vodonika, a koja sadrži jednu ili više neugljovodoničnih funkcionalnosti. Primeri funkcionalnih grupa uključuju, bez ograničenja: halo, hidroksil, sulfhidril, C<1>-C<24>alkoksi, C<2>-C<24>alkeniloksi, C<2>-C<24>alkiniloksi, C<5>-C<20>ariloksi, acil (uključujući C<2>-C<24>alkilkarbonil (-CO-alkil) i C<6>-C<20>arilkarbonil (-CO-aril)), aciloksi (-O-acil), C<2>-C<24>alkoksikarbonil (-(CO)-O-alkil), C<6>-C<20>ariloksikarbonil (-(CO)-O-aril), halokarbonil (-CO)-X pri čemu X je halo), C<2>-C<24>alkilkarbonato (-O-(CO)-O-alkil), C<6>-C<20>arilkarbonato (-O-(CO)-O-aril), karboksii (-COOH), karboksiilato (-COO<->), karbamoil (-(CO)-NH<2>), mono-supstituisan C<1>-C<24>alkilkarbamoil (-(CO)-NH(C<1>-C<24>alkil)), disupstituisan alkilkarbamoil (-(CO)-N(C<1>-C<24>alkil)<2>), mono-supstituisan arilkarbamoil (-(CO)-NH-aril), tiokarbamoil (-(CS)-NH<2>), karbamido (-NH-(CO)-NH<2>), cijano (-C≡N), isocijano (-N<+>≡C-), cijanato (-O-C≡N), izocijanato (-O-N<+>≡C-), izotiocijanato (-S-C≡N), azido (-N=N<+>=N-), formil (-(CO)-H), tioformil (-(CS)-H), amino (-NH<2>), mono- i di-(C<1>-C<24>alkil)-supstituisan amino, mono- i di-(C<5>-C<20>aril)-supstituisan amino, C<2>-C<24>alkilamido (-NH-(CO)-alkil), C<5>-C<20>arilamido (-NH-(CO)-aril), imino (-CR=NH gde R = hidrogen, C<1>-C<24>alkil, C<5>-C<20>aril, C<6>-C<20>alkaril, C<6>-C<20>aralkil, etc.), alkilimino (-CR=N(alkil), gde R = hidrogen, alkil, aril, alkaril, etc.), arilimino (-CR=N(aril), gde R = hidrogen, alkil, aril, alkaril, etc.), nitro (-NO<2>), nitrozo (-NO), sulfo (-SO<2>-OH), sulfonato (-SO<2>-O-), C<1>-C<24>alkilsulfanil (-S-alkil; also termed "alkiltio"), arilsulfanil (-S-aril; also termed "ariltio"), C<1>-C<24>alkilsulfinil (-(SO)-alkil), C<5>-C<20>arilsulfinil (-(SO)-aril), C<1>-C<24>alkilsulfonil (-SO<2>-alkil), C<5>-C<20>arilsulfonil (-SO<2>-aril), fosfono (-P(O)(OH)<2>), fosfonato (-P(O)(O-)<2>), fosfinato (-P(O)(O-)), fosfo (-PO<2>), i fosfino (-

[0338] 2

[0339] PH<2>), mono- i di-(C<1>-C<24>alkil)-supstituisan fosfino, mono- i di-(C<5>-C<20>aril)-supstituisan fosfino; i hidrokarbill ostatala C<1>-C<24>alkil (uključujući C<1>-C<18>alkil, further uključujući C<1>-C<12>alkil, i dalje uključujući C<1>-C<6>alkil), C<2>-C<24>alkenil (uključujući C<2>-C<18>alkenil, further uključujući C<2>-C<12>alkenil, i dalje uključujući C<2>-C<6>alkenil), C<2>-C<24>alkinil (uključujući C<2>-C<18>alkinil, further uključujući C<2>-C<12>alkinil, i daljeuključujući C<2>-C<6>alkinil), C<5>-C<30>aril (uključujući C<5>-C<20>aril i further uključujući C<5>-C<12>aril), i C<6>-C<30>aralkil (uključujući C<6>-C<20>aralkil, i dalje dodatno uključujući C<6>-C<12>aralkil) Pored toga, gore pomenute funkcionalne grupe mogu, ako određena grupa dozvoljava, biti dalje supstituisane sa jednom ili više dodatnih funkcionalnih grupa ili sa jednom ili više hidrokarbilnih jedinica kao što su one posebno nabrojane gore. Analogno, gore pomenute hidrokarbil jedinice mogu biti dalje supstituisane sa jednom ili više funkcionalnih grupa ili dodatnih hidrokarbil jedinica kao što su one posebno naznačen.

[0341] Termin „teleskopiranje procesa“ odnosi se na sažimanje višestepenog procesa na manji broj koraka ili jediničnih operacija. Jedinična operacija uključuje transformacije, ali takođe obuhvata korake rukovanja i izolacije. Centrifugiranje, filtracija, destilacija, dekantacija, taloženje/kristalizacija i pakovanje su primeri jediničnih operacija. Postoji veliki broj primera teleskopiranja i drugih poboljšanja procesa u literaturi (videti, npr., J. Org. Chem., 2007, 72, 9757-9760).

[0343] Treba razumeti da se neke od gore pomenutih definicija mogu preklapati, tako da neki hemijski delovi mogu potpadati pod više od jedne definicije.

[0345] Kada se termin „supstituisan“ pojavi pre liste mogućih supstituišućih grupa, namera je da se taj termin primenjuje na svakog člana te grupe. Na primer, fraza „supstituisan alkil i aril“ treba da se tumači kao „supstituisan alkil i supstituisan aril“.

[0347] Ovaj pronalazak obezbeđuje postupke sinteze jedinjenja, npr., koje je korisno kao međuproizvod za sintezu piridazinonskih jedinjenja kao analoga tiroidnih hormona. Jedinjenja piridazinona kao analozi tiroidnih hormona, kao i njihovi prolekovi, otkriveni su u npr., američkim patentima 7,452,882, 7,807,674 i 8,076,334.

[0349] Konkretno, pronalazak opisuje postupak za proizvodnju 66-(4-amino-2,6-dihlorofenoksi)-4-izopropilpiridazin-3(2H)-ona ("Int. 7") ili njegove soli, pri čemu postupak obuhvata:

[0351] (a) reakciju R<1>MgX ili R<1>Li sa jedinjenjem Formule (I):

[0352]

[0354] pri čemu se dobija jedinjenje Formule (II):

[0356]

[0358] u kojem R<1>je izopropil ili izopropenil, X je halo i R<2>je H ili zaštitna grupa za amin; i

[0359] (b) konverziju jedinjenja Formule (II) u jedinjenje Formule (III):

[0361]

[0363] u prisustvu baze kada R<1>je izopropenil ili u prisustvu oksidujućeg agensa kada R<1>je izopropil.

[0365] Ovo otkriće takođe opisuje metod za sintezu piridazinonskih jedinjenja kao analoga tiroidnih hormona, kao i njihovih prolekova. Takva jedinjenja uključuju ona objavljena U.S. patentima 7,452,882, 7,807,674 i 8,076,334. Konkretno, otkriće opisuje metod za dobijanje jedinjenja Formule (IV) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli:

[0367]

[0369] gde

[0371] R<3>je H ili CH<2>R<a>, u kojem R<a>je hidroksil, O-vezana amino kiselina, -OP(O)(OH)<2>ili

[0372] -OC(O)-R<b>, R<b>je niži alkil, alkoksi, alkil acid, cikloalkil, aril, heteroaril, ili

[0373] -(CH<2>)<n>-heteroaril i n je 0 ili 1;

[0375] R<4>je H, i R<5>je CH<2>COOH, C(O)CO<2>H, ili njegov estar ili amid, ili R<4>i R<5>zajedno čine -N=C(R<c>)-

[0376] C(O)-NH-C(O)-; gde R<c>je H ili cijano. Metod obuhvata:

[0379] 2

[0380] (a) reakciju R<1>MgX ili R<1>Li sa jedinjenje Formule (I):

[0382]

[0384] pri čemu se dobija jedinjenje Formule (II):

[0386]

[0388] u kojem R<1>je izopropil ili izopropenil, X je halo i R<2>je H ili zaštitna grupa za amin; i

[0389] (b) konverziju jedinjenja Formule (II) u jedinjenje Formule (III):

[0391]

[0393] u prisustvu baze kada R<1>je izopropenil ili u prisustvu broma i kiseline kada R<1>je izopropil,

[0395] (c) kada je prisutna, uklanjanje zaštitne grupe za amin R<2>za jedinjenje Formule (III) kako bi se dobio 6-(4-amino-2,6-dihlorofenoksi)-4-izopropilpiridazin-3(2H)-on; i, po izboru

[0397] (d) konverziju 6-(4-amino-2,6-dihlorofenoksi)-4-izopropilpiridazin-3(2H)-ona u jedinjenje Formule (IV) pod odgovarajućim uslovima.

[0399] Ovo otkriće takođe pruža detaljne metode za sintezu različitih otkrivenih jedinjenja prema sledećim šemama i kao što je prikazano u primerima.

[0401] U tekstu opisa, gde su kompozicije opisane kao da imaju, uključujući, ili sadrže specifične komponente, podrazumeva se da se kompozicije takođe u suštini sastoje od, ili sastoje od, navedenih komponenti. Slično, gde su metode ili procesi opisane kao da imaju, uključujući, ili sadrže specifične korake procesa, procesi se takođe u suštini sastoje od, ili sastoje od, navedenih koraka obrade. Dalje, treba razumeti da je redosled koraka ili redosled izvođenja određenih radnji nebitan sve dok metode ili procesi ostaju operativni. Štaviše, dva ili više koraka ili radnji mogu se sprovoditi istovremeno.

[0403] Ovde opisani procesi sinteze mogu da dopuste širok spektar funkcionalnih grupa, tako da se mogu koristiti različiti supstituisani početni materijali. Procesi generalno obezbeđuju

[0406] 2

[0407] željeni konačni rezultat pri kraju celokupnog procesa, iako u određenim slučajevima može biti poželjno dalje pretvoriti jedinjenje u njegovu farmaceutski prihvatljivu so, estar ili prolek.

[0409] U nekim realizacijama, 6-(4-amino-2,6-dihlorofenoksi)-4-izopropilpiridazin-3(2H)-on ("Int. 7") se priprema prema šemi 1 ili 2 datoj u daljem tekstu.

[0411] Šema 1: Sinteza 6-(4-amino-2,6-dihlorofenoksi)-4-izopropilpiridazin-3(2H)-ona (Int.

[0412] 7) sa izopropil Grignard -ovim reagensom (iPrMgX).

[0414] Šema 1

[0416]

[0419] Šema 2: Sinteza 6-(4-amino-2,6-dihlorofenoksi)-4-izopropilpiridazin-3(2II)-ona (int.7) sa izopropenil Grignard-ovim reagensom

[0422] 2

[0423]

[0426] Faza 1: Sinteza 3,5-dihloro-4-((6-hloropiridazin-3-il)oksi)anilina (Jedinjenje 2) i N-(3,5-dihloro-4-((6-okso-1,6-dihidropiridazin-3-il)oksi)fenil)benzamida ili N-(3,5-dihloro-4-((6-okso-1,6-dihidropiridazin-3-il)oksi)fenil)acetamida (Jedinjenje 4)

[0428] Jedinjenje 2 se dobija dovođenjem u kontakt 3,6-dihloropiridazina sa 2,6-dihloro-4-aminofenolom u prisustvu male količine pogodne baze kao što je karbonat metala (npr. cezijum ili kalijum karbonat) ili rastvor alkoksida metala (npr., kalijum t-butoksid) u odgovarajućem organskom oksidu (npr. DMSO ili DMAC) (npr. odgovarajućoj temperaturi reakcije (npr., 60 do 120 °C) do završetka reakcije, tipično oko 3 do 30 sati, na primer oko 3 do 15 sati.

[0430] Jedinjenje 4 se priprema zaštitom 2 odgovarajućim reagensom za zaštitu amina (kao što je anhidrid benzoeve kiseline ili benzoil hlorid), nakon čega sledi tretman zaštićenog intermedijera natrijum acetatom u prisustvu odgovarajućeg organskog rastvarača (kao što je acetatna/sirćetna kiselina) na odgovarajućoj temperaturi reakcije (npr., 100 do 120 °C) do završetka reakcije, tipično oko 2 do 20 sati, na primer oko 5 do 15 sati. Sirovi proizvod se prečišćava odgovarajućim rastvaračem (npr., smešom vode i acetatne kiseline) na odgovarajućoj temperaturi (npr., 88-100 °C). Jedinjenje 4 sa zaštićenim acetatom može se pripremiti podvrgavanjem Jedinjenja 2 uslovima hidrolize.

[0432] Faza 2: Sinteza N-(3,5-dihloro-4-((5-izopropil-6-okso-1,6-dihidropiridazin-3-il)oksi)fenil)benzamida ili N-(3,5-dihloro-4-((5-izopropil-6-okso-1,6-dihidropiridazin-3-

[0435] 2

[0436] il)oksi)fenil)acetamida (Jedinjenje 6) i 6-(4-amino-2,6-dihlorofenoksi)-4-izopropilpiridazin-3(2H)-ona (Int. 7)

[0438] Jedinjenje 6 se priprema reakcijom Jedinjenja 4 sa izopropil Grignard -ovim rastvorom u odgovarajućem organskom rastvaraču (kao što je tetrahidrofuran ili dioksan), nakon čega sledi korak oksidacije. Korak oksidacije može se izvesti u prisustvu oksidacionog reagensa kao što je brom u odgovarajućem organskom rastvaraču kao što je sirćetna kiselina na odgovarajućoj temperaturi reakcije (npr., 60 do 90 °C) do završetka reakcije, tipično oko 2 do 10 sati, na primer oko 2 do 5 sati.

[0440] Treba razumeti da je potrebna reakcija uklanjanja zaštite da bi se završila transformacija iz Jedinjenja 6 u Int.7. Konkretno, N-zaštitna grupa (tj. acetil ili benzoil) mora biti uklonjena da bi se dobila slobodna amino grupa prisutna u Int. 7. Dakle, u jednom izvođenju, Int. 7 se dobija uklanjanjem zaštite sa Jedinjenja 6 (gde je R<2>Bz) pomoću baze kao što je hidroksid metala (npr., KOH ili NaOH) ili karbonat metala (npr., natrijum karbonat). U drugom izvođenju, Int. 7 se dobija uklanjanjem zaštite sa Jedinjenja 6 (gde R<2>je Ac) kiselinom kao što je trifluoracetatna kiselina.

[0442] Alternativno, Jedinjenje 7 se priprema kontaktiranjem Jedinjenja 4 sa izopropenil Grignard -ovim rastvorom u odgovarajućem organskom rastvaraču (kao što je tetrahidrofuran ili 2-metil THF), nakon čega sledi izomerizacija (npr., od 5A do 6) i uklanjanje zaštite uz tretman bazom kao što je hidroksid metala (npr., KOH). Korak izomerizacije/deprotekcije se izvodi na odgovarajućoj reakcionoj temperaturi (npr., 60 do 90 °C) do završetka reakcije, obično oko 10 do 60 sati, na primer oko 16 sati na 90 °C.

[0444] Grignard -ova reakcija može se izvesti u prisustvu Luisove kiseline kao što je LiCl ili LiBr na odgovarajućoj temperaturi reakcije (npr., sobna temperatura do 40 °C) do završetka reakcije, tipično oko 2 do 10 sati, na primer oko 2 do 5 sati.

[0446] U nekim izvođenjima, sinteza jedinjenja 5 ili 5A rezultira poboljšanim prinosom Int.7 u odnosu na druge metode poznate u struci. Na primer, sinteza 5 ili 5A rezultira prinosom većim od 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85% ili većim od 90%.

[0448] U nekim izvođenjima, Grignard -ova reakcija poboljšava regioselektivnost, što rezultira značajno manjim β -izopropil regioizomerom Jedinjenja 6, tj.

[0451] 2

[0452]

[0455] a time i čistiji Int. 7.

[0457] U jednom izvođenju, konverzija iz 6-(4-amino-2,6-dihlorofenoksi)-4-izopropilpiridazin-3(2H)-ona ("Int. 7") u Jedinjenje A se izvodi prema Šemi 3 datoj ispod

[0459]

[0462] Faza 3: Sinteza 6-(4-amino-2,6-dihlorfenoksi)-4-izopropilpiridazin-3(2H)-ona (Int. 8)

[0464] Int. 8 je pripremljen reakcijom 6-(4-amino-2,6-dihlorfenoksi)-4-izopropilpiridazin-3(2H)-ona i etil (2-cijanoacetil)karbamata i nitritom metala kao što je natrijum nitrit u prisustvu kiseline (kao što je HCl) u odgovarajućem rastvaraču (npr. smeši acetatne kiseline i vode) na odgovarajućoj temperaturi reakcije (npr. ispod 10 °C) dok se reakcija ne završi.

[0466] Faza 4: Sinteza 2-(3,5-dihloro-4-((5-izopropil-6-okso-1,6-dihidropiridazin-3-il)oksi)fenil)-3,5-diokso-2,3,4,5-tetrahidro-1,2,4-triazin-6-karbonitrila (Jedinjenje A)

[0468] Jedinjenje A je dobijeno reakcijom Int. 8 i baze kao što je natrijum acetat ili kalijum acetat u odgovarajućem rastvaraču (npr., DMAC) na odgovarajućoj reakcionoj temperaturi (npr., na oko 120 °C) dok se reakcija ne završi.

[0470] [0136] U nekim realizacijama, konverzija 6-(4-amino-2,6-dihlorofenoksi)-4-izopropilpiridazin-3(2H)-ona ("Int. 7") u jedinjenje Formule (IV) koje nije MGL-3916 (kao što su njegovi prolekovi) izvedena je pod uslovima opisanim u, npr., U.S. patentima 7,452,882, 7,807,674, i 8,076,334. Metode sinteze koje su ovde opisane rezultiraju superiornom regioselektivnošću, sa Grignard -ovom instalacijom izopropenil ili izopropil grupe u odnosu na formiranje biaril etara u sintetičkom putu prethodno objavljenom u, npr., U.S. patentu 7,452,882, koji je dao lošu regioselektivnost. Dalje, teleskopskom sintezom formiranja biaril etara za zaštitu benzamida, ovde opisane metode izbegavaju izolovanje proizvoda biaril etara, što je bilo gotovo praktično nemoguće zbog vremena filtracije dužeg od 1 nedelje po seriji prilikom sinteze ovog proizvoda u kilogramskim količinama.

[0472] Predmetni pronalazak obezbeđuje Jedinjenje A i farmaceutske kompozicije koje sadrže Jedinjenje A i najmanje jedan farmaceutski prihvatljiv ekscipijent ili nosač, za upotrebu kao lek, pri čemu se Jedinjenje A primenjuje u efikasnoj količini do 100 mg dnevno. U jednom izvođenju, Jedinjenje A ili farmaceutska kompozicija je namenjena za lečenje ili prevenciju gojaznosti, hiperlipidemije, hiperholesterolemije, dijabetesa, nealkoholnog steatohepatitisa, masne jetre, bolesti kostiju, promene osovine štitne žlezde, ateroskleroze, kardiovaskularnog poremećaja, tahikardije, hiperkinetičkog ponašanja, hipotireoze, gušavosti, poremećaja pažnje sa hiperaktivnošću, teškoća u učenju, mentalne retardacije, gubitka sluha, odloženog starenja kostiju, neuroloških ili psihijatrijskih bolesti ili raka štitne žlezde.

[0474] Treba razumeti da su ovde opisani metodi pogodni za pripremu željenih jedinjenja i u velikim i u malim razmerama. U preferiranim ostvarenjima ovde opisanih metoda, analozi tiroidnih hormona mogu se pripremiti u velikim razmerama, na primer u industrijskoj proizvodnji, pre nego u eksperimentalnoj/laboratorijskoj razmeri. Na primer, proces šaržnog tipa prema metodama ovog otkrića omogućava pripremu serija od najmanje 1 g, ili najmanje 5 g, ili najmanje 10 g, ili najmanje 100 g, ili najmanje 1 kg, ili najmanje 100 kg analoga tiroidnih hormona. Štaviše, metodi omogućavaju pripremu analoga tiroidnih hormona čistoće od najmanje 98%, ili najmanje 98,5% mereno HPLC-om.

[0476] Farmaceutske kompozicije

[0478] Predmetni pronalazak se takođe odnosi na farmaceutske kompozicije koje sadrže Jedinjenje A u kombinaciji sa najmanje jednim farmaceutski prihvatljivim ekscipijentom ili nosačem, za upotrebu kao lek.

[0480] „Farmaceutska kompozicija“ je formulacija koja sadrži Jedinjenje A u obliku pogodnom za administraciju/primenu subjektu. U jednom izvođenju, farmaceutska kompozicija je u rasutom stanju ili u obliku jedinične doze. Oblik jedinične doze je bilo koji od različitih oblika, uključujući, na primer, kapsulu, intravensku kesu, tabletu, jednu pumpu na aerosolnom inhalatoru ili bočicu. Količina aktivnog sastojka (npr. formulacije otkrivenog jedinjenja ili njegove soli, hidrata, solvata ili izomera) u jediničnoj dozi kompozicije je efikasna

[0483] 1

[0484] količina i varira u zavisnosti od određenog tretmana. Stručnjak u ovoj oblasti će razumeti da je ponekad potrebno praviti rutinske varijacije doze u zavisnosti od starosti i stanja pacijenta. Doza će takođe zavisiti od načina administracije/primene. Razmatraju se različiti putevi primene, uključujući oralni, plućni, rektalni, parenteralni, transdermalni, subkutani, intravenski, intramuskularni, intraperitonealni, inhalacioni, bukalni, sublingvalni, intrapleuralni, intratekalni, intranazalni i slično. Dozni oblici za lokalnu ili transdermalnu primenu Jedinjenja A uključuju praškove, sprejeve, masti, paste, kreme, losione, gelove, rastvore, flastere i inhalante. U jednom izvođenju, Jedinjenje A se meša pod sterilnim uslovima sa farmaceutski prihvatljivim nosačem i sa svim potrebnim konzervansima, puferima ili propelentima.

[0486] Kako se ovde koristi, izraz „farmaceutski prihvatljiv“ odnosi se na ona jedinjenja, materijale, kompozicije, nosače i/ili dozne oblike koji su, u okviru zdrave medicinske procene, pogodni za upotrebu u kontaktu sa tkivima ljudi i životinja bez prekomerne toksičnosti, iritacije, alergijske reakcije ili drugih problema ili komplikacija, srazmerno razumnom odnosu koristi i rizika.

[0488] „Farmaceutski prihvatljiv ekscipijent ili nosač“ označava ekscipijent ili nosač koji je koristan u pripremi farmaceutskog sastava koji je generalno bezbedan, netoksičan i ni biološki ni na drugi način nepoželjan, i uključuje ekscipijent koji je prihvatljiv za veterinarsku upotrebu, kao i za humanu farmaceutsku upotrebu. „Farmaceutski prihvatljiv ekscipijent“, kako se koristi u specifikaciji i zahtevima, uključuje i jedan i više takvih ekscipijenata.

[0490] Farmaceutski sastav pronalaska je formulisan tako da bude kompatibilan sa predviđenim načinom primene. Primeri načina primene uključuju parenteralnu, npr., intravenoznu, intradermalnu, subkutanu, oralnu (npr., inhalacijom), transdermalnu (topikalnu) i transmukoznu administraciju/primenu. Rastvori ili suspenzije koji se koriste za parenteralnu, intradermalnu ili subkutanu primenu mogu da sadrže sledeće komponente: sterilni razblaživač kao što je voda za injekcije, fiziološki rastvor, fiksna ulja, polietilen glikoli, glicerin, propilen glikol ili drugi sintetički rastvarači; antibakterijska sredstva kao što su benzil alkohol ili metil parabeni; antioksidante kao što su askorbinska kiselina ili natrijum bisulfit; agense za heliranje kao što je etil enediamintetraacetatna kiselina; puferi kao što su acetati, citrati ili fosfati i sredstva za podešavanje toničnosti kao što je natrijum hlorid ili dekstroza. Vrednost pH se može podesiti pomoću kiselina ili baza, kao što je hlorovodonična kiselina ili natrijum hidroksid.

[0493] 2

[0494] Parenteralni preparat može biti upakovan u ampule, špriceve za jednokratnu upotrebu ili bočice za višestruke doze napravljene od stakla ili plastike.

[0496] Termin „terapeutski efikasna količina“, kako se ovde koristi, odnosi se na količinu farmaceutskog sredstva za lečenje, ublažavanje ili sprečavanje identifikovane bolesti ili stanja, ili za pokazivanje detektabilnog terapeutskog ili inhibitornog efekta. Efekat se može detektovati bilo kojom metodom ispitivanja poznatom u struci. Precizna efikasna količina za subjekta zavisiće od telesne težine, veličine i zdravstvenog stanja subjekta; prirode i obima stanja; i terapeutske ili kombinacije terapijskih sredstava odabranih za administraciju/primenu. Terapeutski efikasne količine za datu situaciju mogu se odrediti rutinskim eksperimentisanjem koje je u okviru veštine i procene kliničara. U poželjnom aspektu, bolest ili stanje koje se leči je metabolički poremećaj.

[0498] [0145] Jedinjenje A se administrira subjektu u efikasnoj količini do 100 mg dnevno. Jedinjenje A ili njegova farmaceutski prihvatljiva so može se administrirati bilo kojom od uobičajenih i prihvatljivih metoda poznatih u struci, pojedinačno ili u kombinaciji, uključujući oralno (npr. bukalna duplja), sublingvalno, parenteralno (npr. intramuskularno, intravenozno ili subkutano), rektalno (npr. supozitorijama ili ispiranjima), transdermalno (npr. elektroporacijom kroz kožu) ili inhalacijom (npr. aerosolom), i u obliku čvrstih, tečnih ili gasovitih doza, uključujući tablete i suspenzije. Administracija/primena se može sprovesti u obliku pojedinačne jedinične doze sa kontinuiranom terapijom ili u terapiji pojedinačnom dozom ad libitum. Terapeutska kompozicija takođe može da bude u obliku uljane emulzije ili disperzije u kombinaciji sa lipofilnom soli kao što je pamoinska kiselina, ili u obliku biorazgradive kompozicije sa produženim oslobađanjem za subkutanu ili intramuskularnu primenu. Korisni farmaceutski nosači za pripremu ovih kompozicija mogu biti čvrste materije, tečnosti ili gasovi; dakle, kompozicije mogu biti u obliku tableta, pilula, kapsula, supozitorija, prahova, enterički obloženih ili drugih zaštićenih formulacija (npr. vezivanje na jonoizmenjivačke smole ili pakovanje u lipidno-proteinske vezikule), formulacija sa produženim oslobađanjem, rastvora, suspenzija, eliksira, aerosola i slično. Nosač može biti izabran iz različitih ulja, uključujući ona iz nafte, životinjskog, biljnog ili sintetičkog porekla, npr. ulje od kikirikija, sojino ulje, mineralno ulje, susamovo ulje i slično. Voda, fiziološki rastvor, vodeni rastvor dekstroze i glikoli su poželjni tečni nosači, posebno (kada su izotonični sa krvlju) za injekcione rastvore. Na primer, formulacije za intravenoznu primenu sadrže sterilne vodene rastvore aktivnog sastojka (sastojaka) koji se pripremaju rastvaranjem čvrstog aktivnog sastojka (sastojaka) u vodi da bi se dobio vodeni rastvor i sterilizovanjem rastvora. Pogodni farmaceutski ekscipijenti uključuju skrob, celulozu, talk, glukozu, laktozu, želatin, slad, pirinač, brašno, kredu, silicijum dioksid, magnezijum stearat, natrijum stearat, glicerol monostearat, natrijum hlorid, sušeno obrano mleko, glicerol, propilen glikol, vodu, etanol i slično. Kompozicije mogu biti podvrgnute konvencionalnim farmaceutskim aditivima kao što su konzervansi, stabilizatori, kvasci ili emulgatori, soli za podešavanje osmotskog pritiska, puferi i slično. Pogodni farmaceutski nosači i njihova formulacija opisani su u in Remington's Pharmaceutical Sciences by E. W. Martin. Takve kompozicije će, u svakom slučaju, sadržati efikasnu količinu aktivnog jedinjenja zajedno sa odgovarajućim nosačem kako bi se pripremio odgovarajući dozni oblik za pravilnu administraciju primaocu.

[0500] Farmaceutski preparati takođe mogu sadržati konzervanse, solubilizujuće agente, stabilizatore, okvašivače, emulgatore, zaslađivače, boje, aromatizujuće agente, soli za promenu osmotskog pritiska, pufere, agense za oblagannje ili antioksidanse. Takođe mogu da sadrže i druge terapeutski vredne supstance, uključujući dodatne aktivne sastojke osim onih Formule I.

[0502] Jedinjenje A ovog pronalaska je namenjeno za upotrebu kao lek. Jedinjenje A ovog pronalaska može se koristiti u lečenju rezistencije na tiroidni hormon (RTH) kod subjekta koji ima najmanje jednu TRβ mutaciju. Subjekt može imati bolest, kao što su gojaznost, hiperlipidemija, hiperholesterolemija, dijabetes, nealkoholni steatohepatitis, masna jetra, bolest kostiju, promena osovine štitne žlezde, ateroskleroza, kardiovaskularni poremećaj, tahikardija, hiperkinetičko ponašanje, hipotireoza, gušavost, poremećaj pažnje sa hiperaktivnošću, teškoće u učenju, mentalna retardacija, gubitak sluha, odloženo starenje kostiju, neurološka ili psihijatrijska bolest ili rak štitne žlezde.

[0504] Terapeutski efikasna količina ili doza Jedinjenja A prema ovom pronalasku može varirati u širokim granicama i može se odrediti na način poznat u struci. Na primer, lek se može dozirati prema telesnoj težini. Takva doza će biti prilagođena individualnim zahtevima u svakom pojedinačnom slučaju, uključujući specifično jedinjenje (jedinjenja) koje se administrira, način administracije/primene, stanje koje se leči, kao i pacijenta koji se leči. U drugom izvođenju, lek se može administrirati u fiksnim dozama, npr., dozama koje se ne prilagođavaju telesnoj težini. Poželjna doza može biti od oko 20 mg do oko 100 mg dnevno. Dnevna doza se može administrirati kao jedna doza ili u podeljenim dozama, ili za parenteralnu primenu može se davati kao kontinuirana infuzija.

[0506] Efikasna količina farmaceutskog sredstva je ona koja pruža objektivno identifikovano poboljšanje koje je primetio lekar ili drugi kvalifikovani posmatrač. Kako se ovde koristi,

[0509] 4

[0510] termin „doziranje na efikasan način“ odnosi se na količinu aktivnog jedinjenja za proizvodnju željenog biološkog efekta u subjektu ili ćeliji.

[0512] Farmaceutske kompozicije mogu da budu upakovane u kontejner, pakovanje ili dozator zajedno sa uputstvima za administraciju/primenu.

[0514] Jedinjenje A je sposobno za dalje formiranje soli. Svi ovi oblici su takođe razmatrani u okviru pronalaska čija se zaštita traži.

[0516] Kako se ovde koristi, „farmaceutski prihvatljive soli“ odnose se na derivate Jedinjenja A gde je Jedinjenje A modifikovano dobijanjem njegovih kiselih ili baznih soli. Primeri farmaceutski prihvatljivih soli uključuju, ali nisu ograničeni na, mineralne ili organske kiselinske soli baznih ostataka kao što su amini, alkalne ili organske soli kiselih ostataka kao što su karboksilinske kiseline i slično. Farmaceutski prihvatljive soli uključuju konvencionalne netoksične soli ili kvaternarne amonijumove soli formirane, na primer, od netoksičnih neorganskih ili organskih kiselina. Na primer, takve konvencionalne netoksične soli uključuju, ali nisu ograničene na, one izvedene iz neorganskih i organskih kiselina odabranih iz grupe koju čine 2-acetoksibenzoeva, 2-hidroksietan sulfonsla, acetatna, askorbinska, benzen sulfonska, benzoeva, bikarbonska, ugljena, limunska, etilen diamin tetra sirćetna kiselina, etan disulfonska, 1,2-etan sulfonska, fumarna, glukoheptonska, glukonska, glutaminska, gliklona, glikolarsanilinska, heksilrezorcilna, bromovodonična kiselina, hlorovodonična, jodovodonična, hidroksimaleinska, hidroksinaftoinska, izetionska, mlečna, laktobionska, lauril sulfonska, maleinska, jabučna, bademova, metan sulfonska, 2-naftalensulfonska, azotna, oksalna, pamoinska, pantotenska, fenilsirćetna, fosforna, poligalakturonska, propionska, saliciklična, stearinska, subsirćetna, sukcinska, sulfaminska, sulfanilna, sumporna, taninska, vinska, toluen sulfonska kiseline, i oubičajene aminokiseline, npr., glicina, alanina, fenilalanina, arginina, itd.

[0518] [0153] Drugi primeri farmaceutski prihvatljivih soli uključuju heksanska kiselina, ciklopentan propionska kiselina, piruvisnka kiselina, malonska kiselina, 3-(4-hidroksibenzoil)benzoeva kiselina, cinnaminska kiselina, 4-hlorbenzensulfonska kiselina, 2-naftalensulfonska kiselina, 4-toluensulfonska kiselina, kamforsulfonska kiselina, 4-metil biciklo-[2.2.2]-okt-2-en-1-karboksilna kiselina, 3-fenilpropionska kiselina, trimetil acetatna kiselina, terc butilacetanta kiselina, mukoniska kiselina, i slično. Predmetni pronalazak takođe obuhvata soli koje nastaju kada se kiseli proton prisutan u Jedinjenju A zameni metalnim jonom, npr. jonom alkalnog metala, jonom zemnoalkalnog metala ili jonom aluminijuma; ili koordinira sa organskom bazom kao što je etanolamin, dietanolamin, trietanolamin, trometamin, N-metil glukamin, dietil amin, dietil aminoetanol, etil endiamin, imidazol, lizin, arginin, morfolin, 2-hidroksietil morfolin, dibenziletil endiamin, trimetil amin, piperidin, pirolidin, benzilamin, tetrametil amonijum hidroksid i slično.

[0520] Treba razumeti da sve reference na farmaceutski prihvatljive soli uključuju adicione oblike rastvarača (solvate) ili kristalne oblike (polimorfe) kao što je ovde definisano, iste soli.

[0522] Jedinjenja ovog pronalaska mogu se takođe pripremiti kao estri, na primer, farmaceutski prihvatljivi estri. Na primer, karboksikiselinski funkcionalna grupa u jedinjenju može se pretvoriti u odgovarajući estar, npr. metil, etil ili drugi estar. Takođe, alkoholna grupa u jedinjenju može se pretvoriti u odgovarajući estar, npr., acetat, propionat ili drugi estar.

[0524] Jedinjenje A se takođe može pripremiti kao prolek, na primer, farmaceutski prihvatljiv prolek. Termini „pro-lek“ i „prolek“ se ovde koriste naizmenično i odnose se na bilo koje jedinjenje koje oslobađa aktivni matični lek in vivo. Pošto je poznato da prolekovi poboljšavaju brojne poželjne osobine farmaceutskih proizvoda (npr., rastvorljivost, biodostupnost, proizvodnju itd.), jedinjenja ovog pronalaska mogu se isporučiti u obliku proleka. „Prolekovi“ treba da uključuju bilo koje kovalentno vezane nosače koji oslobađaju aktivni matični lek in vivo kada se takav prolek primeni na subjekta. Prolekovi se pripremaju modifikovanjem funkcionalnih grupa prisutnih u jedinjenju na takav način da se modifikacije otcepljuju, bilo rutinskom manipulacijom ili in vivo, u matično jedinjenje. Prolekovi uključuju jedinjenja u kojima je hidroksi, amino, sulfhidril, karboksi ili karbonil grupa vezana za bilo koju grupu koja se može otcepiti in vivo da bi se formirala slobodna hidroksi, slobodna amino, slobodna sulfhidrilna, slobodna karboksi ili slobodna karbonil grupa, tim redom.

[0526] Primeri prolekova uključuju, ali nisu ograničeni na, estre (npr. acetat, dialkilaminoacetat, format, fosfat, sulfat i benzoat derivate) i karbamate (npr. N,N-dimetil aminokarbonil) hidroksi funkcionalnih grupa, estre (npr. etil estri, morfolinoetanol estri) karboksi funkcionalnih grupa, N-acil derivate (npr. N-acetil), N-Manihove baze, Šifove baze i enaminone amino funkcionalnih grupa, oksime, acetale, ketale i enol estre ketonskih i aldehidnih funkcionalnih grupa u jedinjenjima pronalaska i slično. Videti Bundegaard, H., Design of Prodrugs, p1-92, Elesevier, New York-Oxford (1985).

[0528] Jedinjenje A, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so prema pronalasku, primenjuju se oralno, nazalno, transdermalno, plućno, inhalaciono, bukalno, sublingvalno, intraperitonealno, potkožno, intramuskularno, intravenozno, rektalno, intrapleuralno, intratekalno i parenteralno.

[0529] U jednom izvođenju, Jedinjenje A se administrira/primenjuje oralno. Stručnjak u ovoj oblasti će prepoznati prednosti određenih načina administracija/primene.

[0531] Režim doziranja koji koristi jedinjenja se bira u skladu sa različitim faktorima, uključujući vrstu, vrstu, starost, težinu, pol i medicinsko stanje pacijenta; težinu stanja koje se leči; način primene; bubrežnu i hepatičnu funkciju pacijenta; i određeno jedinjenje ili njegova so koja se koristi. Prosečni stručnjak u ovoj bolesti, lekar ili veterinar može lako da odredi i propiše efikasnu količinu leka potrebnu za prevenciju, suzbijanje ili zaustavljanje napredovanja stanja.

[0533] Tehnike za formulaciju i primenu otkrivenih jedinjenja mogu se naći u Remington: the Science and Practice of Pharmacy, 19th edition, Mack Publishing Co., Easton, PA (1995). U jednom izvođenju, ovde opisana jedinjenja, i njihove farmaceutski prihvatljive soli, koriste se u farmaceutskim preparatima u kombinaciji sa farmaceutski prihvatljivim nosačem ili razblaživačem. Pogodni farmaceutski prihvatljivi nosači uključuju inertne čvrste punioce ili razblaživače i sterilne vodene ili organske rastvore. Jedinjenja će biti prisutna u takvim farmaceutskim kompozicijama u količinama dovoljnim da obezbede željenu količinu doze u opsegu opisanom ovde.

[0535] U jednom izvođenju, pronalazak predstavlja Jedinjenje A za upotrebu u metodu za lečenje ili ublažavanje simptoma rezistencije na tiroidne hormone kod subjekta davanjem subjektu koji eksprimuje mutantni TRβ koji sadrži mutaciju u domenu za vezivanje liganda Jedinjenje A, npr., Oblik I istog, u efikasnoj količini do 100 mg dnevno.

[0537] Otkriće takođe obezbeđuje metod određivanja odgovora subjekta koji ima rezistenciju na tiroidne hormone (RTH) na ovde opisano jedinjenje Formule (IV) obezbeđivanjem uzorka od subjekta; i detekcijom najmanje jedne TRβ mutacije (npr., genske mutacije ili mutacije u domenu za vezivanje liganda TRβ polipeptida, npr., polipeptida kako je definisano u SEQ ID NO: 1); i prisustvo navedene mutacije ukazuje da subjekt reaguje na jedinjenje Formule (IV), kao što je Jedinjenje A, npr., njegov Oblik I. Metod može dalje da uključi lečenje subjekta koji ima mutaciju primenom terapeutski efikasne količine jedinjenja Formule (IV), kao što je Jedinjenje A, npr., njegov Oblik I.

[0539] [0163] U jednom izvođenju, subjekt koji pokazuje ili će pokazati odgovor na jedinjenje Formule (IV) kao što je Jedinjenje A ima gojaznost, hiperlipidemiju, hiperholesterolemiju, dijabetes, nealkoholni steatohepatitis, masnu jetru, bolest kostiju, promenu osovine štitne žlezde, aterosklerozu, kardiovaskularni poremećaj, tahikardiju, hiperkinetičko ponašanje, hipotireoidizam, gušavost, poremećaj pažnje sa hiperaktivnošću, teškoće u učenju, mentalnu retardaciju, gubitak sluha, odloženo starenje kostiju, neurološku ili psihijatrijsku bolest ili rak štitne žlezde.

[0541] Dalje, otkriće takođe pruža metod koji uključuje određivanje prisustva mutacije gena TRβ u uzorku od subjekta; i izbor, na osnovu prisustva mutacije gena TRβ, terapije koja uključuje primenu terapeutski efikasne količine jedinjenja Formule (IV), kao što je Jedinjenje A, npr., njegov Oblik I.

[0543] Ovaj opis takođe pruža metod koji uključuje amplifikaciju nukleinske kiseline u uzorku od subjekta sa prajmerom koji je komplementaran mutantnoj sekvenci TRβ nukleinske kiseline koja sadrži mutaciju gena TRβ u sekvenci nukleinske kiseline kako je definisano u SEQ ID NO: 2; određivanje prisustva amplificirane nukleinske kiseline i izbor, na osnovu prisustva amplificirane nukleinske kiseline, terapije koja uključuje primenu terapeutski efikasne količine jedinjenja Formule (IV), ili lečenje subjekta administracijom/primenom terapeutski efikasne količine jedinjenja Formule (IV) na osnovu prisustva amplificirane nukleinske kiseline.

[0545] Mutantni TRβ opisan ovde je mutantni TRβ polipeptid ili sekvenca nukleinske kiseline koja kodira mutantni TRβ polipeptid.

[0547] U jednom izvođenju, mutant TRβ sadrži jednu ili više mutacija na aminokiselinskim pozicijama 234, 243, 316 i 317 SEQ ID NO: 1. Poželjnije je da je mutacija izabrana iz grupe koja se sastoji od supstitucije treonina (T) za ostatak alanins (A) divljeg tipa na aminokiselinskom položaju 234 SEQ ID NO: 1 (A234T); supstitucije glutamina (Q) za ostatak arginina (R) divljeg tipa na aminokiselinskom položaju 243 SEQ ID NO: 1 (R243Q); supstitucije histidina (H) za ostatak arginina (R) divljeg tipa na aminokiselinskom položaju 316 SEQ ID NO: 1 (R316H); i supstitucije treonina (T) za ostatak alanina (A) divljeg tipa na aminokiselinskom položaju 317 SEQ ID NO: 1 (A317T).

[0549] [0168] U jednom izvođenju, mutantni TRβ sadrži sekvencu nukleinske kiseline koja kodira mutantni TRβ polipeptid koji ima jednu ili više mutacija na aminokiselinskim pozicijama 234, 243, 316 i 317 SEQ ID NO: 1. Sekvenca nukleinske kiseline koja kodira mutantni TRβ polipeptid ili peptidni fragment koji je karakterističan za mutantni TRβ polipeptid može se detektovati korišćenjem bilo koje odgovarajuće metode. Na primer, sekvenca nukleinske kiseline koja kodira mutantni TRβ polipeptid može se detektovati korišćenjem resekvenciranja celog genoma ili resekvenciranja ciljnog regiona (ovo poslednje je takođe poznato kao ciljano resekvenciranje) korišćenjem odgovarajuće odabranih izvora DNK i prajmera za lančanu reakciju polimeraze (PCR) u skladu sa metodama dobro poznatim u struci. Videti, na primer, Bentley (2006) Curr Opin Genet Dev.16:545-52, i Li et al. (2009) Genome Res 19:1124-32. Metoda tipično i generalno podrazumeva korake prečišćavanja genomske DNK, PCR amplifikacije za amplifikaciju regiona od interesa, cikličnog sekvenciranja, prečišćavanja reakcije sekvenciranja, kapilarne elektroforeze i analize podataka. Visokokvalitetni PCR prajmeri za pokrivanje regiona od interesa dizajnirani su korišćenjem in silico alata za dizajn prajmera. Ciklično sekvenciranje je jednostavna metoda u kojoj uzastopni ciklusi denaturacije, žarenja i ekstenzije u termalnom cikličnom uređaju rezultiraju linearnom amplifikacijom proizvoda ekstenzije. Proizvodi se obično završavaju fluorescentnom oznakom koja identifikuje terminalna nukleotidna baza kao G,A,T ili C. Neinkorporisani terminatori boje i soli koji mogu da se takmiče za kapilarnu elektroforetsku injekciju uklanjaju se ispiranjem. Tokom kapilarne elektroforeze, proizvodi reakcije cikličnog sekvenciranja migriraju kroz kapilare ispunjene polimerom. Negativno naelektrisani fragmenti DNK se razdvajaju po veličini dok se kreću kroz kapilare prema pozitivnoj elektrodi. Nakon elektroforeze, softver za prikupljanje podataka kreira datoteku uzorka sirovih podataka. Koristeći nizvodne softverske aplikacije, vrši se dalja analiza podataka kako bi se prikupljene slike podataka u boji prevele u odgovarajuće nukleotidne baze. Alternativno, ili pored toga, metod može da uključuje upotrebu hvatanja i/ili sekvenciranja genomske DNK ciljanog regiona zasnovanog na mikročipovima. Kompleti, reagensi i metode za odabir odgovarajućih PCR prajmera i izvođenje ponovnog sekvenciranja su komercijalno dostupni, na primer, od Applied Biosystems, Agilent i NimbleGen (Roche Diagnostics GmbH). Za upotrebu u ovom otkriću, PCR prajmeri mogu biti odabrani tako da amplifikuju, na primer, barem relevantni deo sekvence nukleinske kiseline koja kodira mutantni TRβ polipeptid koji ima jednu ili više mutacija na aminokiselinskim pozicijama 234, 243, 316 i 317 SEQ ID NO: 1.

[0551] Alternativno ili dodatno, sekvenca nukleinske kiseline koja kodira mutantni TRβ polipeptid može se detektovati korišćenjem Southern blot-a u skladu sa metodama dobro poznatim u struci.

[0553] U određenim realizacijama, metodi otkrića obuhvataju korak izvođenja testa za detekciju mutanta TRβ u uzorku dobijenom od subjekta. Kako se ovde koristi, „uzorak dobijen od subjekta“ odnosi se na bilo koji pogodan uzorak koji sadrži ćelije ili komponente ćelija dobijenih ili izvedenih od subjekta. U jednom izvođenju uzorak je uzorak krvi. U jednom izvođenju uzorak je uzorak biopsije dobijen iz, na primer, štitne žlezde.

[0554] Pronalazak takođe obezbeđuje kompleks ligand-mutant TRβ koji sadrži: mutantni TRβ polipeptid i jedinjenje Formule (IV). Na primer, mutantni TRβ polipeptid koji formira kompleks sadrži jednu ili više mutacija na aminokiselinskim pozicijama 234, 243, 316 i 317 SEQ ID NO: 1. Na primer, jedinjenje koje formira kompleks je Jedinjenje A.

[0556] Pored toga, opis pruža kompleks prajmer-nukleinska kiselina koji sadrži: mutantni TRβ sekvencu nukleinske kiseline i PCR prajmer koji je komplementaran mutantnom TRβ sekvenci nukleinske kiseline, gde mutantni sekvenca nukleinske kiseline sadrži EZH2 gensku mutaciju u sekvenci nukleinske kiseline kao što je definisano u SEQ ID NO: 2.

[0558] Treba razumeti da, iako je pronalazak opisan u vezi sa njegovim preferiranim specifičnim ostvarenjima, da su prethodni opis, kao i primeri koji slede, namenjeni da ilustruju, a ne da ograničavaju obim pronalaska. Stručnjacima u ovoj oblasti biće jasno da se mogu napraviti različite izmene i da se ekvivalenti mogu zameniti bez odstupanja od obima pronalaska, a dalje će drugi aspekti, prednosti i modifikacije biti očigledni stručnjacima u oblasti na koju se pronalazak odnosi.

[0560] Svi procenti i odnosi koji se ovde koriste, osim ako nije drugačije naznačeno, su po težini. Ostale karakteristike i prednosti ovog pronalaska su očigledne iz različitih primera. Dati primeri ilustruju različite komponente i metodologiju korisnu u praktikovanju ovog pronalaska. Primeri ne ograničavaju zahtevani pronalazak. Na osnovu ovog otkrića, stručnjak u ovoj oblasti može identifikovati i koristiti druge komponente i metodologiju korisnu za praktikovanje ovog pronalaska.

[0562] Primeri

[0564] Osim ako nije drugačije naznačeno, analitički instrumenti i parametri koji se koriste za jedinjenja opisana u primerima su sledeći:

[0566] XRPD podaci su prikupljeni na rendgenskom difraktometru praha (CubiX-Pro XRD) sa Cu Kα zračenjem (45 kV, 40 mA) od 3 do 45 stepeni 2-teta (2 θ) pri brzini skeniranja od 0,12 stepeni/min i veličini koraka od 0,020 stepena.

[0568] Uzorak je postavljen na Si ultra-mikro držače za uzorke sa nultim povratom. Analiza je izvršena korišćenjem zračenja širine 10 mm i sledeći parametri su podešeni u okviru hardvera/softvera:

[0570] Rendgenska cev: Cu KV, 45 kV, 40 mA

[0573] 4

[0574] Detektor: X'Celerator

[0576] ASS Primari Slit: Fiksni 1°

[0578] Divergentni prorez (Prog): Automatski - zračenje dužine 5 mm

[0580] Solerovi prorezi: 0,02 radijana

[0582] Prorez za rasejavanje (PASS): Automatski - posmatrana dužina 5 mm

[0584] Opseg skeniranja: 3,0-45,0°

[0586] Režim skeniranja: Kontinuirani

[0588] Veličina koraka: 0,02°

[0590] Vreme po koraku: 10 s

[0592] Aktivna dužina: 2,54°

[0594] Nakon analize, podaci su konvertovani iz podesivih u fiksne proreze korišćenjem X'Pert HighScore Plus softvera sa sledećim parametrima:

[0596] Fiksna veličina divergentnog proreza: 1,00°, 1,59 mm

[0598] Tačka ukrštanja: 44,3 °Omega

[0600] U primerima opisanim u nastavku, osim ako nije drugačije naznačeno, Jedinjenje 4 je jedinjenje zaštićeno benzoilom.

[0602] Primer 1: Dobijanje N-(3,5-dihloro-4-((6-okso-1,6-dihidropiridazin-3-il)oksi)fenil)benzamida (Jedinjenje 4 gde R<2>je benzoil)

[0604] [0179] U trogrli balon od 1 litra sa okruglim dnom, opremljenim orbitalnom mešalicom, termoelementom, refluksnim kondenzatorom i ulazom/izlazom za N<2>, dodatisz 3,6-dihloropiridazin (100 g, 0,672 mol, 1 težina), 4-amino-2,6-dihlorfenol (122 g, 0,686 mol, 1,02 ekvivalenta) i DMAC (500 ml, 5 zapremina). Dobijenom rastvoru je dodat cezijum karbonat (251 g, 0,771 mol, 1,15 ekvivalenta) i suspenzija je zagrejana na 110 °C. Nakon 3 sata na toj temperaturi, temperatura smese je snižena na 70 °C i mešana na toj temperaturi 16 sati.<1>H NMR analiza (DMSO) je pokazala da je skoro sav dihloropiridazin potrošen i reakcija je smatrana završenom. Smesa je ohlađena na sobnu temperaturu i prebačena u balon sa okruglim dnom od 3 L pomoću EtOAc (2 L, 20 vol.). Dodat je silika gel (100 g, 1 tež.) i suspenzija je mešana 30 minuta i profiltrirana. Reaktor i kolač su isprani sa EtOAc (500 mL, 5 vol.) dok filtrat nije bezbojno eluiran. Dobijeni filtrat je tretiran sa 10% vodenim NaCl (2 L, 20 vol.), dvofazna smeša je mešana 30 minuta, a donji vodeni sloj je odbačen. Gornji organski sloj je koncentrovan do suva pod sniženim pritiskom. Ostatku je dodat EtOAc (100 mL, 1 vol) i koncentrovan do suva pod sniženim pritiskom da bi se dobilo sirovo Jedinjenje 2 (251 g, prinos 128%) kao ulje. HPLC analiza je pokazala čistoću od 93,4%.<1>H NMR analiza (DMSO) je bila u skladu sa dodeljenom strukturom i pokazala je prisustvo ≈25% DMAC i 2% EtOAc.

[0606] Ostali uslovi za sintezu Jedinjenja 2 su opisani u Tabelama 1-3 u daljem tekstu.

[0608] Tabela 1. Kratak prikaz reakcionih parametara za Jedinjenje 2

[0610]

[0611]

[0613] Tabela 2. Kratak prikaz reakcionih parametada za Jedinjenje 2

[0614]

[0617] 4

[0618]

[0621] Tabwla 3. Kratak opis reakcionih parametara ua Jedinjenje 2 (sve reakcije se odvijaju u DMAC)

[0622] Baz Vr Te HPLC IPC (220 nm) Cs<2>3 110 94.8%

[0624] 15 90 94.4%

[0625] Li<2>C 3 110 12.7%

[0626] K<2>C 3 110 91.6%

[0628] 15 90 91.4%

[0629] Na<2>3 110 84.5%

[0631] 15 90 84.9%

[0632] NaO 3 110 25.2%

[0633] KF 3 110 54.1%

[0635] DIP

3

110

22.8%

[0636]

[0639] Sirovi proizvod 2 iznad je rastvoren u sirćetnoj kiselini (1,48 L, 7,5 vol.) i dodat je anhidrid benzoeve kiseline (168 g, 0,741 mol, 1,1 ekvivalent). Dobijena smeša je zagrejana na 100 °C i nakon 35 minuta na toj temperaturi, količina 2 iznosila je 0,8%. Dodat je natrijum acetat (110 g, 2 ekvivalenta) i temperatura je porasla na 110 °C. Nakon 14,5 sati na toj temperaturi, HPLC analiza reakcione smeše nije pokazala da postoji intermedijer, a reakcija je smatrana završenom. Serija je ohlađena na 75 °C i voda (1,5 L, 7,7 vol.) je dodata tokom perioda od 1 sata, uz održavanje temperature serije između 72-75 °C. Serija je ohlađena na 21 °C i filtrirana kroz Sharkskin filter papir. Reaktor i kolač su sekvencijalno isprani vodom (1 L, 5 vol.). Nakon sušenja sakupljene čvrste supstance u vakuumskoj peći na 50 °C tokom 16 sati, prinos sirovog jedinjenja 4 iznosio je 195 g (77%). HPLC analiza (Metod B, 220 nm) pokazala je čistoću od 91,6%.

[0641] HPLC metod B:

[0643] Kolona: Waters Sunfire C18, 3,5 µM, 4,6 × 150 mm

[0645] Brzina protoka: 1,0 mL/min.

[0647] Mobilna faza A: 0,05% TFA u vodi

[0649] Mobilna faza B: 0,05% TFA u H<2>O

[0651] Razblaživač: 50:50 MeCN/H<2>O

[0654] 4

[0655]

[0658] Analiza<1>H NMR (DMSO) je bila u skladu sa dodeljenom strukturom i pokazala je sadržaj sirćetne kiseline od 1%. Benzoil hlorid je takođe korišćen za zaštitu umesto anhidrida benzoeve kiseline. Kada je korišćen benzoil hlorid, korišćene su baze kao što je cezijum karbonat ili kalijum karbonat, a reakcija je sprovedena na sobnoj temperaturi.

[0660] Ostali uslovi za sintezu Jedinjenja 4 su opisani u tabelama 4 i 5 datim u dlajem tekstu.

[0661] Tabela 4. Zaštita/hidroliza Jedinjenja 2 (prinosi saopšteni od Int.1) (zaštitna grupa za benzoil)

[0663]

[0667] 4

[0668]

[0671] Tabela 5. Kratak prikaz reakcionih parametara za jedinjenje 4 (zaštitna grupa za acetat)

[0674]

[0678]

[0681] Prečišćavanje jedinjenja 4: U trogrli balon sa od 5 litara okruglim dnom, opremljen orbitalnom mešalicom, termoelementom, refluksnim kondenzatorom i ulazom/izlazom za N<2>, dodat je sirovi proizvod 4 (100 g, 1 težinski) i sirćetna kiselina (2 l, 20 zapremina). Suspendovana smesa je mešana i zagrejana na 95 °C, pri čemu je došlo do rastvaranja. Voda (2 l, 20 zapremina) je dodata tokom perioda od 2,75 sati, uz održavanje temperature smese od ≈95 °C, pri čemu je došlo do taloženja. Dobijena suspenzija je zagrejana na 95 °C još 30 minuta pre nego što je zagrevanje prekinuto. Nakon što je smesa dostigla sobnu temperaturu, mešana je na toj temperaturi preko noći radi lakšeg snalaženja i filtrirana kroz Sharkskin filter papir. Reaktor i kolač su sekvencijalno isprani vodom (1 l, 10 zapremina). Sakupljena bela čvrsta

[0684] 4

[0685] supstanca je sušena u vakuumskoj peći na 40 °C do konstantne težine od 91 g (91%). HPLC analiza osušene čvrste supstance pokazala je čistoću od 98,0%.1H NMR analiza (DMSO) je bila u skladu sa dodeljenom strukturom i pokazala je sadržaj sirćetne kiseline od 0,3%. Tabela 6 ispod navodi druge uslove za prečišćavanje Jedinjenja 4.

[0687] Tabela 6 Prečišćavanje jedinjenja 4 (R<2>=Bz)

[0689]

[0692] Primer 2: Dobijanje6-(4-amino-2,6-dihlorofenoksi)-4-izopropilpiridazin-3(2H)-ona (Int.t 7)

[0695] 4

[0696] U balon sa četiri grla sa okruglim dnom od 4 litra, i opremljenom orbitalnom mešalicom, termoelementom, ulazom/izlazom za N<2>i refluksnim kondenzatorom, dodato je jedinjenje 4 (95 g, 0,253 mol, 1 tež.), THF (665 ml, 7 zaprem.) i LiCl (32,3 g, 0,759 mol, 3 ekvivalenta). Dobijena suspenzija je zagrejana na 35 °C, a rastvor izopropenilmagnezijum bromida (0,5 M u THF, 1,72 l, 0,859 mol, 3,4 ekvivalenta) je dodat tokom perioda od 80 minuta, uz održavanje temperature smeše između 35-45 °C. Nakon zagrevanja dobijene suspenzije na 40 °C tokom 3 sata, HPLC analiza je pokazala konverziju od 87%). Dodat je dodatni rastvor izopropenilmagnezijum bromida (0,5 M u THF-u, 51 mL, 0,026 mol, 0,1 ekviv) i suspenzija je mešana na 40-43 °C još 90 minuta. HPLC analiza je pokazala konverziju od 92,9% i reakcija je smatrana završenom. Zagrevanje je prekinuto, reakciona smeša je ohlađena na 14 °C, a 3 N vodeni rastvor HCl (380 mL, 4 vol.) je polako dodat tokom 15 minuta, održavajući temperaturu smese ispod 26 °C, nakon čega su se sve čvrste materije rastvorile. Donji vodeni sloj je uklonjen i ekstrahovan sa THF (350 mL, 3,7 vol.). Nakon uklanjanja donjeg vodenog sloja, kombinovani organski slojevi su koncentrovani pod smanjenim pritiskom na približno 5 zapreminskih jedinica u odnosu na jedinjenje 4. Dobijeni rastvor je dodat sa 10% (t/t) vodenim rastvorom KOH (532 mL, 5,6 zapreminskih jedinica), a smeša je zagrejana na 85 °C dok se THF destilirao pomoću aparata za kratkoputašku destilaciju. Smeša je održavana na 85 °C tokom 11 sati, a zatim je grejanje uprekinuto. Smeša je ohlađena na sobnu temperaturu preko noći radi lakšeg destilovanja. HPLC analiza (Metod A ispod) dobijene suspenzije pokazala je konverziju od 99% u Int. 7 i reakcija je smatrana završenom.

[0698] HPLC metod A

[0700] Kolona: Waters Sunfire C18, 3,5 µM, 4,6 × 150 mm

[0702] Brzina protoka: 1,0 mL/min.

[0704] Mobilna faza A: 0,05% TFA u vodi

[0706] Mobilna faza B: 0,05% TFA u H<2>O

[0708] Razblaživač: 50:50 MeCN/ H<2>O

[0711] 4

[0712]

[0715] Temperatura šarže je podešena na 48 °C i dodat je 3 N vodeni rastvor HCl (152 mL, 1,6 vol.) tokom 35 minuta da bi se pH podesio na 7,5-8,0, uz održavanje temperature šarže od 46-48 °C. Zagrevanje je uklonjeno i suspenzija je ohlađena na 30 °C. Analiza<1>H NMR (DMSO) je pokazala molski odnos Int. 7/THF od 1,0:0,22 (Prilog 14). Smeša je profiltrirana na 30 °C kroz Sharkskin filter papir, a reaktor i kolač su sekvencijalno isprani vodom (475 mL, 5 vol.). Bež čvrsta supstanca Int.7 je sušena u vakuumskoj peći na 40 °C do konstantne težine od 81,6 g (prinos 102%). Karl Fišerova analiza je pokazala sadržaj vode od 0,8%. 1H NMR (DMSO) je bio u skladu sa dodeljenom strukturom i pokazao je sadržaj THF od 0,4%. HPLC analiza je pokazala čistoću od 92,6%. Tabele 7-10 ispod daju kratak prikaz reakcionih parametara za proizvodnju Int. 7.

[0717] Tabela 7 Kratak prikaz Grignard-ovih ciklusa izopropenilacije

[0720]

[0721]

[0724] 1

[0725]

[0727] Tabela 8 Kratak prikaz Grignard-ovih ciklusa izopropilacije

[0728]

[0731] 2

[0732]

[0733]

[0736] 4

[0738] Tabela 9 kratak prikaz oksidacije broma piridazinona jedinjenja 5

[0739]

[0740]

[0741]

[0743] Tabela 10 Kratak prikaz uklanjanja zaštite sa Jedinjenja 6 za dobijanje Int. 7

[0744]

[0745] Zaštitna Uslovi Temp Vreme (h) Konverzija

[0747]

[0750] Primer 3: Dobijanje (Z)-etil (2-cijano-2-(2-(3,5-dihloro-4-((5-izopropil-6-okso-1,6-dihidropiridazin-3-il)oksi)fenil)hidrazono)acetil)karbamata (Int. 8)

[0752] U trogrli balon sa okruglim dnom od 2 l, opremljen orbitalnom mešalicom, termoelementom i ulazom/izlazom za N<2>, dodat je Int. 7 (75,0 g, 0,239 mol, 1 tež.), sirćetna kiselina (600 ml, 8 zapremina), voda (150 ml, 2 zapremine) i koncentrovanaHCl (71,3 ml, 0,95 zapremine). Dobijena tanka suspenzija je ohlađena na 6 °C i rastvor NaNO<2>(16,8 g, 0,243 mol, 1,02 ekvivalenta) u vodi (37,5 ml, 0,5 vol.) je dodat tokom perioda od 10 minuta, uz održavanje temperature šarže ispod 10 °C. Nakon dodatnih 10 minuta mešanja između 5-10 °C, HPLC analiza je pokazala potpunu konverziju Int. 7 u diazonijum intermedijer. Rastvor NaOAc (54,5 g, 0,664 mol, 2,78 ekvivalenta) u vodi (225 ml, 3 vol.) je dodat tokom perioda od 6 minuta, uz održavanje temperature šarže ispod 10 °C. Odmah je dodat N-cijanoacetiluretan (37,9 g, 0,243 mol, 1,02 ekvivalenta), hlađenje je uklonjeno, a smeša se prirodno zagrejala na 8 °C tokom 35 minuta. HPLC analiza je pokazala potpunu potrošnju diazonijum intermedijera i reakcija je smatrana završenom. Serija se prirodno zagrejala na 21 °C i profiltrirana je kroz Sharkskin filter papir. Reaktor i kolač su sekvencijalno isprani vodom (375 mL, 5 vol.) dva puta. Sakupljena narandžasta čvrsta supstanca je sušena u vakuumskoj peći na 35 °C tokom 64 sata da bi se dobio sirov Int. 8 (104,8 g, 91%).

[0754] [0189] U trogrli balon sa okruglim dnom od 1 L, opremljen orbitalnom mešalicom, termoelementom i ulazom/izlazom za N<2>, dodat je sirov Int. 8 (104,4 g, 1 težina) i sirćetna kiselina (522 mL, 5 vol.). Dobijena suspenzija je zagrejana na 50 °C i držana na toj temperaturi 1,5 sat. Serija se prirodno ohladila na 25 °C tokom 2 sata i filtrirala je kroz Sharkskin filter papir. Reaktor i kolač su sekvencijalno isprani vodom (522 mL, 5 vol) i kolač je kondicioniran pod vakuumom tokom 1,75 h. Svetlo narandžasta čvrsta supstanca je osušena do konstantne težine u vakuumskoj peći na 40 °C da bi se dobilo 89,9 g (78% od Int. 7) željenog proizvoda.

[0755] <1>H NMR (DMSO) je bio u skladu sa dodeljenom strukturom.

[0757] Primer 4: Dobijanje 2-(3,5-dihloro-4-((5-izopropil-6-okso-1,6-dihidropiridazin-3-il)oksi)fenil)-3,5-diokso-2,3,4,5-tetrahidro-1,2,4-triazin-6-karbonitrila (Jedinjenje A)

[0759] U trogrli balon sa okruglim dnom od 2 L, opremljen orbitalnom mešalicom, termoelementom, ulazom/izlazom za N<2>i refluksnim kondenzatorom u koji je dodat Int. 8 (89,3 g, 0,185 mol, 1 tež.), DMAC (446 ml, 5 zapremina) i KOAc (20,0 g, 0,204 mol, 1,1 ekvivalent). Smeša je zagrejana na 120 °C i držana na toj temperaturi 2 sata. HPLC analiza je pokazala potpunu konverziju u Jedinjenje A. Temperatura smese je podešena na 18 °C tokom 1 sata, i dodata je sirćetna kiselina (22,3 ml, 0,25 zapremina). Temperatura smese je podešena na 8 °C, i voda (714 ml, 8 zapremina) je dodata tokom 1 sata; formirana je narandžasta suspenzija. Smesa je filtrirana kroz filter papir boje ajkule, a kolač je ostavljen da se kondicionira preko noći pod N<2>bez vakuuma radi lakšeg snalaženja. Prethodno pomešani rastvor acetona/vode 1:1 (445 ml, 5 zapremina) je stavljen u bocu i dodat u kolač kao sredstvo za ispiranje uz primenjeni vakuum. Nakon 2 sata kondicioniranja kolača pod vakuumom, on je prebačen u čisti trogrli balon sa okruglim dnom od 1 litra, opremljen orbitalnom mešalicom, termoelementom i ulazom/izlazom za azot. Dodati su etanol (357 ml, 4 zapremine) i aceton (357 ml, 4 zapremine) i dobijena suspenzija je zagrejana na 60 °C; došlo je do rastvaranja. Voda (890 ml, 10 zapremina) je dodata tokom 90 minuta, uz održavanje temperature šarže između 55-60 °C. Dobijena suspenzija je ostavljena da se ohladi na 25 °C i filtrirana je kroz filter papir marke Sharkskin. Reaktor i kolač su sekvencijalno isprani rastvorom 1:1 EtOH/voda (446 ml, 5 zapremina). Kolač je kondicioniran preko noći pod N<2>bez vakuuma radi lakšeg snalaženja. Pukotine u kolaču su izglađene i primenjen je vakuum. Kolač je ispran vodom (179 ml, 2 vol.) i osušen u vakuumskoj peći na 45 °C do konstantne težine od 70,5 g (87%, sirovo Jedinjenje A). HPLC analiza je pokazala čistoću od 94,8%.

[0761] [0191] U trogrli balon sa okruglim dnom od 500 ml, opremljena orbitalnom mešalicom, termoelementom, ulazom/izlazom za N<2>i refluksnim kondenzatorom, napunjen sirovim Jedinjenjem A (70,0 g) i MIBK (350 ml, 5 zap.). Narandžasta suspenzija je zagrejana na 50 °C i držana na toj temperaturi 2 sata. Smeša se prirodno ohladila na 23 °C i filtrirana je kroz filter papir marke Sharkskin. Reaktor i kolač su sekvencijalno isprani sa MIBK (35 ml, 0,5 vol.) dva puta. Sakupljene čvrste materije su sušene u vakuumskoj peći na 45 °C do konstantne težine od 58,5 g (84%). Ova čvrsta materija je stavljena u trogrli sa okruglim dnom od 500 ml, opremljenu orbitalnom mešalicom, termoelementom, ulazom/izlazom za N<2>i refluksnim kondenzatorom. Dodat je etanol (290 ml, 5 vol.) i suspenzija je zagrejana do refluksa. Nakon 3,5 sata na refluksu, XRPD je pokazao da je čvrsta supstanca konzistentna sa Oblikom I, i zagrevanje je prekinuto. Kada je dostigla 25 °C, smesa je filtrirana kroz filter papir, a reaktor i kolač su sekvencijalno isprani sa EtOH (174 mL, 3 vol.). Smeđa čvrsta supstanca Jedinjenje A je sušena u vakuumskoj peći na 40 °C do konstantne težine od 50,4 g (87%, 64% od Int. 8). HPLC analiza je pokazala čistoću od 99,1%.<1>H NMR (DMSO) je bio u skladu sa dodeljenom strukturom.

[0763] Primer 5: Dobijanje 2-(3,5-dihloro-4-((5-izopropil-6-okso-1,6-dihidropiridazin-3-il)oksi)fenil)-3,5-diokso-2,3,4,5-tetrahidro-1,2,4-triazin-6-karbonitrila (Jedinjenje A) u većoj razmeri

[0765] Sintetisana je veća serija Jedinjenja A prema šemi ispod. Uslovi u šemi ispod su slični onima opisanim u prethodno datim primerima 1-4.

[0767]

[0768] Sinteza 4: Staklena posuda sa oblogom od 50 L (kroz koju je produvavan N<2>) napunjena je 3,6-dihloropiridazinom (2,00 kg), 2,6-dihloro-4-aminofenolom (2,44 kg) i N,N-dimetil acetamidom (10,0 L). Smeša je produvavana vakuumom (26 inHg) / azotom (1 PSIG) 3 puta. Dodat je cezijum karbonat (5,03 kg) i temperatura šarže je podešena sa 22,3 °C na 65,0 °C tokom 3,5 sata. Smeša je držana na 65,0 °C tokom 20 sati. U ovom trenutku, 1H NMR analiza je pokazala 3,34% 3,6-dihloropiridazina u odnosu na 2. Temperatura šarže je podešena na 21,5 °C i u smesu je dodat etil acetat (4,00 L). Smeša je mešana 10 minuta, a zatim filtrirana kroz Nutsche filter od 18" opremljen polipropilenskom filter tkaninom. Filtracija je trajala 15 minuta. Etil acetat (5,34 L) je stavljen u posudu i prebačen na filter kao tečnost za ispiranje. Smeša je zatim ručno resuspendovana u filteru pre ponovne primene vakuuma. Ovaj postupak je ponovljen još 2 puta, a filter kolač je kondicioniran 10 minuta. Filtrat je stavljen u posudu od 100 L koja je sadržala (16,0 L) prethodno pripremljenog 15% natrijum hlorida u H<2>O. Smeša je mešana 5 minuta, a zatim je ostavljena da se odvoji 35 minuta. Međufaza nije bila vidljiva, pa je izračunatih 23 L donje vodene faze uklonjeno. 16,0 L 15% natrijum hlorida u H2O je dodato u šaržu. Smeša je mešana 6 minuta, a zatim je ostavljena da se odvoji 7 minuta. Međufaza je bila vidljiva na ~19 L i donja vodena faza je uklonjena. U šaržu je dodato 17,0 L 15% natrijum hlorida u H<2>O. Smeša je mešana 7 minuta, a zatim je ostavljena da se odvoji 11 minuta. Donja vodena faza je uklonjena. Posuda je postavljena za vakuum destilaciju i smeša je koncentrovana sa 17,0 L na 8,0 L tokom 2 sata i 20 minuta, uz održavanje temperature šarže na oko 21 °C. U sud su dodati anhidrid benzoeve kiseline (3,19 kg) i sirćetna kiselina (18,0 L). Sud je postavljen za vakuumsku destilaciju i smeša je koncentrovana sa 28,0 L na 12,0 L tokom 2 dana (preko noći na 20 °C), uz održavanje temperature šarže između 20 i 55 °C. U ovom trenutku, analiza<1>H NMR je pokazala molski odnos sirćetne kiseline i etil acetata od 1,0:0,015. Sirćetna kiselina (4,0 L) je dodata u šaržu i smeša je destilovana do 12 L. Analiza<1>H NMR je pokazala molski odnos sirćetne kiseline i etil acetata od 1,0:0,0036. Sirćetna kiselina (20,0 L) je dodata u šaržu i temperatura šarže je podešena na 70,0 °C. Smeša je uzorkovana za HPLC analizu i sadržaj 2 je iznosio 0,16%. Natrijum acetat (2,20 kg) je dodat u šaržu i temperatura šarže je podešena sa 72,4 °C na 110,0 °C. Nakon 18,5 sati, HPLC analiza je pokazala da nije detektovan Int. B. Temperatura šarže je podešena sa 111,3 na 74,7 °C i deminezolovana voda (30,0 L) je dodata u šaržu tokom 2 sata. Temperatura šarže je podešena na 20,5 °C, a zatim je filtrirana pomoću Haselloy Nutsche filtera od 24" opremljenog polipropilenskom filterskom tkaninom. Prethodno pripremljen rastvor sirćetne kiseline 1:1 u DI H<2>O (10,0 L) je stavljen u posudu i mešan 5 minuta. Ispirajući rastvor je prebačen u filter, a zatim je serija ručno resuspendovana u filteru pre ponovnog primene vakuuma. DI H<2>O (10,0 L) je stavljena u

[0771] 1

[0772] posudu, a zatim prebačena u filter. Serija je ručno resuspendovana u filteru pre ponovnog primene vakuuma. DI H<2>O (10,0 L) je direktno stavljena u filter, a zatim je serija ručno resuspendovana u filteru pre ponovnog primene vakuuma. Filter kolač je ostavljen da se kondicionira 18 sati da bi se dobilo 14,4 kg jedinjenja 4. HPLC analiza je pokazala čistoću od 93,7%. Ovaj vlažni kolač je prebačen u postupak prečišćavanja. Staklena posuda sa oblogom od 100 litara (produvavana sa N<2>) je napunjena sirovim jedinjenjem 4 (vlažni kolač 14,42 kg), sirćetnom kiselinom (48,8 l) i mešalica je pokrenuta. Dodata je dejonizovana voda (1,74 l). Temperatura smese (suspenzije) je podešena od 18,1 do 100,1 °C tokom 4,25 sati. Smesa je držana na 100,1 do 106,1 °C tokom 1 sata, a zatim je podešena na 73,1 °C. Dejonizovana voda (28,0 l) je dodata u smesu tokom 1 sata, održavajući temperaturu smese između 73,1 i 70,3 °C. Temperatura smese je dodatno podešena od 70,3 °C do 25,0 °C preko noći. Smesa je filtrirana pomoću Hastelloy Nutsche filtera od 24" opremljenog polipropilenskom filter tkaninom. Filtracija je trajala 13 minuta. Rastvor DI H<2>O (9,00 L) i sirćetne kiseline (11,0 L) je pripremljen i dodat u posudu od 100 L. Smeša je mešana 5 minuta, a zatim preneta u filter kolač. DI H<2>O (20,0 L) je dodata u posudu, mešana 6 minuta, a zatim preneta u filter kolač. DI H<2>O (20,0 L) je dodata u posudu, mešana 9 minuta, a zatim preneta u filter kolač. Serija je ostavljena da se kondicionira 3 dana, a zatim preneta u posude za sušenje u vakuumskoj peći. Posle 3 dana na 50 °C i 28"/Hg, serija je dala prinos od 74% (3,7 kg) jedinjenja 4 kao prljavo bele čvrste supstance.<1>H NMR spektar je bio u skladu sa dodeljenom strukturom, HPLC analiza je pokazala čistoću od 98,87%, a KF analiza 0,14% H<2>O.

[0774] Sinteza Int. 7: Obložena staklena posuda od 100 L (produvavan sa N<2>) je napunjena tetrahidrofuranom (44,4 L). Mešalica je pokrenuta (125 RPM) i dodato je jedinjenje 4 (3,67 kg), a zatim litijum hlorid (1,26 kg). Temperatura serije je bila 26,7 °C i bila je ćilibarna. Dodavan je 1,64 molarni rastvor izopropenilmagnezijum bromida u 2-metil THF (21,29 kg) tokom 2 ½ sata, održavajući temperaturu serije između 24,3 i 33,6. °C. Smeša je mešana na 24,5 °C tokom 17 sati, kada je HPLC analiza pokazala 9% 4. Druga posuda sa oblogom od 100 litara (produvavan sa N<2>) je napunjena sa 3N hlorovodonikom (18,3 L). Smeša je prebačena u posudu koja sadrži 3N HCl tokom 25 minuta, održavajući temperaturu šarže između 20 i 46 °C. Primećen je dvofazni rastvor. Ugašena smeša je vraćena u prvu posudu od 100 litara da bi se ugasila mala količina ostatka. THF (2,00 L) je korišćen kao ispiranje. Temperatura šarže je bila 40,9 °C i mešana je na RPM 318 obrtaja u minuti tokom 45 minuta. Temperatura šarže je podešena na 21,8 °C i slojevi su ostavljeni da se razdvoje. Razdvajanje je trajalo 10 minuta. Donja vodena faza je uklonjena (~26,0 L). Pripremljen je rastvor natrijum hlorida (1,56 kg) u

[0777] 2

[0778] DI vodi (14,0 L) i dodata u smešu. Ova smeša je mešana je na RPM 318 obrtaja u minuti tokom 10 minuta, a zatim je mešalica zaustavljena. Razdvajanje je trajalo 3 minuta. Donja vodena faza je uklonjena (~16,0 L). Smeša je vakuumski destilovana sa 58,0 L na 18,4 L koristeći ~24"/Hg i temperaturu omotača od 50 do 55 °C. Rastvor kalijum hidroksida (2,30 kg) u deminezolovanoj vodi (20,7 L) je pripremljen u balonu sa okruglim dnom od 72 L. Sud je podešen za atmosfersku destilaciju korišćenjem 2 glave za destilaciju i smeša je prebačena u posudu od 72 L. THF (0,75 L) je korišćen za ispiranje. Zapremina šarže je bila ~41,0 L, temperatura je podešena na 64,1 °C i destilacija je započeta uz pomoć produvavanja azotom (N<2>). Zagrevanje je nastavljeno da bi se temperatura šarže podigla na 85,4 °C tokom destilacije, nakon čega je posuda od 72 litra podešena za refluks (zapremina šarže je bila oko 28,0 l na kraju destilacije). Smeša je držana na 85 °C tokom 13 sati, kada je HPLC analiza pokazala 0,3% jedinjenja 6A. Zagrevanje je prekinuto i smeša je prebačena u staklenu posudu sa oblogom od 100 litara. Primećene su čvrste materije. Temperatura šarže je podešena sa 70,6 °C na 56,7 °C. Prethodno pripremljen rastvor natrijum-hidrogenkarbonata (2,82 kg) u deminezolovanoj vodi (35,0 l) je dodat tokom 80 minuta, održavajući temperaturu šarže između 56,7 i 46,7 °C. pH vrednost šarže na kraju dodavanja bila je 9,8. Smeša je držana na 46,7 do 49,0 °C tokom 40 minuta, a zatim je ohlađena na 25,0 °C. Smeša je filtrirana korišćenjem Nutsche filtera od nerđajućeg čelika od 18". Dejonizovana voda (18,4 L) je dodata u sud i prebačena u filter. Filter kolač je ručno resuspendovan u filteru, a zatim su tečnosti uklonjene. Ovaj postupak je ponovljen još jednom i filter kolač je bio debljine 3". Filter kolač je kondicioniran na filteru 3 dana, prebačen je u posude za sušenje i osušen u vakuumskoj peći na 45 °C da bi se dobilo 2,93 kg Int.7 (prinos 95%) sa HPLC čistoćom od 87,6%.

[0780] [0195] Sinteza Int. 8: Stakleni sud sa oblogom od 100 L (produvavan sa N<2>i povezan sa kaustičnim čistačem) napunjen je kiselinom (13,0 L). Int.7 (2,85 kg) je dodat u sud i mešalica je pokrenuta. N-cijanoacetiluretan (1,56 kg) i deminezolovana voda (5,70 L) su dodati u posudu. Temperatura šarže je podešena sa 17,0 °C na 5,5 °C i primećena je tanka suspenzija. U ovom trenutku je dodato 37% hlorovodonik (2,70 L) tokom 10 minuta, održavajući temperaturu šarže između 4,8 °C i 8,8 °C. Prethodno pripremljen rastvor natrijum nitrita (638 g) u DI vodi (1,42 L) je dodat tokom 26 minuta, održavajući temperaturu šarže između 5,8 °C i 8,7 °C. Tokom dodavanja, u gornjem delu posude primećen je smeđi gas. HPLC analiza je pokazala da nije detektovan Int. 7. U ovom trenutku, prethodno pripremljen rastvor natrijum acetata (2,07 kg) u DI vodi (8,50 L) dodat je tokom 47 minuta, održavajući temperaturu smese između 5,5 °C i 9,5 °C. Nakon dodavanja, tanak sloj narandžastog ostatka primećen je na zidu suda, odmah iznad nivoa smese. Temperatura smese je podešena sa 9,4 °C na 24,5 °C i održavana na 25 °C (± 5 °C) tokom 12 sati. Smeša je filtrirana korišćenjem Hastelloy Nutsche filtera od 24" opremljenog gusto tkanom polipropilen filter tkaninom. Filtracija je trajala 30 minuta. Posuda je isprana sa 14,3 l rastvora kisele kiseline i deionizovane vode u odnosu 1:1. Narandžasti ostatak na reaktoru je ispran ispiranjem. Ispirajući rastvor je prebačen na filter gde je smeša ručno resuspendovana. Ponovo je primenjen vakuum da bi se uklonio isprani rastvor. Drugo ispiranje rastvorom kisele kiseline i deionizovane vode u odnosu 1:1 je izvršeno kao gore navedeno i smeša je kondicionirana na filteru 26 sati. HPLC analiza vlažnog filter kolača je pokazala da je čistoća 90,4%. Smeša je sušena do konstantne težine od 3,97 kg (prinos 91%) u vakuumskoj peći na 45 °C i 28"/Hg.

[0782] Priprema solvata DMAC Jedinjenja A

[0784] Stakleni sud sa oblogom od 100 l, produvavan sa N<2>, napunjen je sa Int.8 (3,90 kg) i u posudu su dodati kalijum acetat (875 g). N,N-dimetil acetamid (DMAC, 18,3 l) i mešalica je pokrenuta. Temperatura šarže je podešena na 115 °C tokom 2 sata. Nakon 2 sata na 115 °C, smeša je uzorkovana i HPLC analiza je pokazala da je preostalo 0,27% Int. 8. Temperatura šarže je podešena na 25,0 °C preko noći. Sirćetna kiselina (975 ml) je dodata u šaržu i smeša je dalje mešana tokom 3 sata. Smeša je prebačena u demu, a posuda je isprana sa 800 ml DMAC-a. Smeša je vraćena u posudu od 100 l pomoću vakuuma kroz linijski filter od 10 µm i korišćeno je ispiranje DMAC-om (1,15 l). Filtracija je bila brza na početku, ali spora na kraju, začepljujući filter. Temperatura smese je podešena na 11,1 °C i dodata je deminezovana voda (35,1 L) tokom 2 sata i 20 minuta, održavajući temperaturu smese između 5-15 °C. Smesa je držana 1 sat i filtrirana korišćenjem Nutsche filtera od 18" opremljenog gusto tkanom polipropilen tkaninom. Filtracija je trajala 15 sati. Ispirajući rastvor etanola/deminezovane vode u odnosu 1:1 (19,5 L) je dodat u posudu, ohlađen na 10 °C i prebačen na filter kolač. Kolač je ostavljen da se kondicionira pod N<2>i vakuumom tokom 8 sati, a zatim prebačen u posude za sušenje. Smesa je sušena u vakuumskoj peći na 45 °C i 28"/Hg da bi se dobilo 89% prinosa (3,77 kg) Jedinjenje A DMAC solvata kao narandžasto-smeđe čvrste supstance. 1H NMR spektar je bio u skladu sa dodeljenom strukturom, a Karl Fischer analiza je pokazala 0,49% H<2>O. XRPD je pokazao očekivani oblik, tj. Jedinjenje A DMAC solvat. Termogravimetrijska analiza (TGA) je pokazala gubitak težine od 16%. HPLC analiza je pokazala čistoću od 93,67%.

[0787] 4

[0788] Dobijanje sirovog Jedinjenja A

[0790] U staklenu posudu od 100 litara sa oblogom, koja je produvavana sa N<2>, dodato je DMAC solvat Jedinjenja A (3,75 kg) i etanol (15,0 l). Mešalica je pokrenuta i dodat je aceton (15,0 l). Temperatura šarže je podešena sa 10,6 °C na 60,0 °C tokom 1 sata. U ovom trenutku, smeša je bila u rastvoru. DI voda je dodata u šaržu tokom 1,5 sata, održavajući temperaturu šarže na 60 ± 5 °C. Smeša je držana na 60 ± 5 °C tokom 1 sata i ohlađena na 23,5 °C. Postavljen je Nutsche filter od 18 inča opremljen gusto tkanom (0,67 CFM) polipropilen tkaninom i smeša je profiltrirana. Filtracija je trajala 15 sati. Rastvor etanola/DI vode u odnosu 1:1 (19,5 L) za ispiranje je dodat u posudu i prebačen na filter kolač. Kolač je ostavljen da se kondicionira pod N<2>i vakuumom tokom 8 sati, a zatim je prebačen u posude za sušenje. Serija je sušena u vakuumskoj peći na 45 °C i 28"/Hg tokom pet dana, dajući prinos od 94% (2,90 kg) Jedinjenja A kao praškastu, žućkastu čvrstu supstancu.<1>H NMR spektar je u skladu sa dodeljenom strukturom, a Karl Fischer analiza je pokazala 6,6% H<2>O. XRPD je pokazao očekivani oblik dihidrata. TGA je pokazala gubitak težine od 6,7%. HPLC analiza je pokazala čistoću od 96,4% (AUC).

[0792] Prečišćavanje sirovog Jedinjenja A

[0794] U staklenu posudu od 50 litara sa oblogom, koja je produvavana sa N<2>, dodato je sirovo Jedinjenje A (2,90 kg) i metil izobutil keton (14,5 l). Mešalica je pokrenuta i temperatura šarže je podešena sa 20,2 °C na 50,4 °C tokom 1,5 sata. Smeša je držana na 50 °C (± 5 °C) tokom 1 sata, a zatim ohlađena na 20-25 °C. Smeša je držana na 20-25 °C tokom 2,5 sata. Postavljen je Nutsche filter od 18" opremljen gusto tkanom (0,67 CFM) polipropilen tkaninom i serija je filtrirana. Filtracija je trajala 20 minuta. Metil izobutil keton (MIBK, 1,45 L) je stavljen u posudu i prebačen na filter kolač. Kolač je ručno resuspendovan, a tečnosti su provučene vakuumom. Metil izobutil keton (2,90 L) je dodat u filter kolač, a kolač je ručno resuspendovan. Tečnosti su provučene vakuumom, a kolač je kondicioniran vakuumom i azotom 15 sati. Filter kolač se osušio u žućkasti, tvrdi disk dimenzija 18" × 1 ½". Ovaj disk je ručno izlomljen i propušten kroz mlin za kafu da bi se dobio prinos od 76% (2,72 kg) MGL-3196 MIBK solvata kao žućkaste, praškaste čvrste supstance. Sušenje u peći nije bilo potrebno.

[0795] <1>H NMR spektar je bio u skladu sa dodeljenom strukturom, a Karl Fischer analiza je pokazala <0,1% H<2>O. XRPD je pokazao očekivani oblik MIBK solvata. TGA je pokazao gubitak težine od 17,3%. HPLC analiza je pokazala čistoću od 98,5%.

[0796] Primer 6: Konverzija Jedinjenja A u Oblik I

[0798] Prečišćeno Jedinjenje A (4802 g) kao 1:1 MIBK solvat, dobijen iz Int. 8 kao što je opisano u primeru 5 iznad, dodato je u obloženi reaktor od 100 litara zajedno sa 24 litra etanola. Dobijena suspenzija je zagrejana na 80 ± 5 °C (refluks) tokom 1 sata i 25 minuta; smeša je mešana na toj temperaturi 4 sata i 25 minuta. Analiza filtriranih čvrstih materija nakon 2 sata i 55 minuta pokazala je da je konverzija oblika završena, pri čemu XRPD spektri odgovaraju Obliku I. Smeša je ohlađena na 20 ± 5 °C tokom 45 minuta i mešana na toj temperaturi 15 minuta. Suspenzija je filtrirana, a filter kolač je dva puta ispran prethodno filtriranim etanolom (2 × 4,8 l). Vlažni kolač (4,28 kg) je sušen pod vakuumom na 40 ± 5 °C tokom 118 sati da bi se dobilo 3390 g oblika I Jedinjenja A.

[0800] Studija rendgenske difrakcije praha je sprovedena na različitim serijama Jedinjenja A morfnog oblika I generisanog gore opisanim postupkom. XRPD nakon mikronizacije potvrđuje Oblik 1.

[0802] Podaci za Oblik I su dati u Tabeli 11 ispod, a difraktogrami Oblika I su dati na Slici 1.

[0803] Tabela 11

[0804] 2θ (ug d vrednos Intenzit Intenzitet % (%)

[0805] 3.028 29.17117 1925.6 15.89

[0807] 3.459 25.5397 832.08 4.58

[0809] 3.670 24.07429 707.65 3.89

[0811] 4.002 22.07529 410.45 6.78

[0813] 4.446 19.87232 432.4 2.38

[0815] 4.579 19.29632 429.89 4.73

[0817] 5.253 16.82257 320.41 5.29

[0819] 5.856 15.09082 335.71 1.85

[0821] 6.05 14.60887 224.56 9.89

[0823] 6.806 12.98624 287.97 3.17

[0825] 7.215 12.25213 293.93 4.04

[0828] 7.642

11.56781

239.85

2.64

[0829] θ (uga d vredno Intenz Intenzitet % (%) .2256 10.7491 1637. 13.51

[0830] .8542 9.98745 309.9 3.41

[0831] .115 9.70221 244.6 2.02

[0832] .576 9.23622 255.4 2.11

[0833] 0.537 8.39569 9763. 100

[0834] 1.186 7.9096 2398. 24.56 3.081 6.76802 164.1 3.36

[0835] 3.901 6.37063 197.2 1.52

[0836] 4.302 6.19296 290.1 2.23

[0837] 4.728 6.01469 94.1 0.96

[0838] 5.739 5.63037 1305. 16.71 6.400 5.40513 804.2 10.3

[0839] 6.732 5.2987 173.2 2.22

[0840] 7.305 5.12435 145.1 2.97

[0841] 7.687 5.01461 1400. 17.93 8.339 4.83761 1233. 9.47

[0842] 8.698 4.7456 9825. 100

[0843] 8.959 4.6808 572.6 3.5

[0844] 9.301 4.59864 278.5 1.7

[0845] 9.664 4.51468 97.55 0.4

[0846] 0.093 4.41912 64.71 2.63

[0847] 1.060 4.21845 333.6 2.72

[0848] 2.209

4.00268

833.4

8.48

[0849] θ (ug d vredn Intenzit Intenzitet % (%) 2.61 3.9322 1304.9 10.62

[0850] 2.89 3.8841 3375.4 34.35

[0851] 3.06 3.856 976.63 5.96

[0852] 3.57 3.7740 3115.3 38.05

[0853] 3.86 3.7284 571.62 4.65

[0854] 4.1 3.6928 572.34 6.99

[0855] 4.52 3.6299 1097.2 6.7

[0856] 4.65 3.6116 1580.9 16.09

[0857] 5.49 3.4932 225.6 2.76

[0858] 6.49 3.3644 506.03 5.15

[0859] 6.75 3.3323 244.51 1.99

[0860] 7.12 3.2875 130.69 1.06

[0861] 7.43 3.251 546.35 4.45

[0862] 7.83 3.2048 213.44 2.17

[0863] 8.52 3.1297 158.82 1.29

[0864] 8.90 3.0888 436.59 2.67

[0865] 9.13 3.0650 710.53 5.79

[0866] 9.50 3.0272 416.16 4.24

[0867] 0.02 2.9760 1470.2 17.96

[0868] 0.36 2.9436 260.89 1.59

[0869] 0.63 2.9185 132.13 0.54

[0870] 1.31 2.8564 177.78 1.45

[0871] 1.60

2.8312

397.61

5.67

[0872] 2θ (ugao d vrednos Intenzit Intenzitet % (%) 31.9237 2.80343 514.26 4.19

[0873] 32.2125 2.77895 1293.0 18.4

[0874] 32.8721 2.72469 434.37 2.65

[0875] 33.3755 2.68474 295.36 2.4

[0876] 33.8232 2.65022 358.99 3.65

[0877] 34.8364 2.57542 140.57 1.72

[0878] 35.1838 2.55079 739.55 7.53

[0879] 35.7301 2.51303 98.13 1.2

[0880] 36.0084 2.49424 110.57 1.35

[0881] 36.4676 2.46389 316.07 2.57

[0882] 37.2747 2.41237 199.99 4.07

[0883] 38.3543 2.34691 34.08 0.42

[0884] 39.1941 2.29854 63.88 1.3

[0885] 39.9663 2.25589 211.73 1.29

[0886] 40.6489 2.21957 96.61 0.59

[0887] 41.194 2.19145 167.45 1.36

[0888] 42.0276 2.14989 47.01 0.57

[0889] 42.4477 2.12958 290.42 1.77

[0890] 42.8091 2.11244 200.71 1.63

[0892] 43.6289

2.07463

171.28

2.09

[0894] Utvrđeno je da Oblik I ima početak topljenja oko 321 °C, nakon čega sledi razlaganje nakon topljenja pomoću DSC (Slika 2).

[0895] Primer 7: Dobijanje Jedinjenje A Oblika I: konverzija Jedinjenje A solvata u Oblik I

[0896] U staklenu posudu od 50 litara sa oblogom, koja je produvavana sa N<2>, dodato je Jedinjenje A MIBK solvat (2,72 kg) iz Primera 5 iznad i etanolom (13,6 L). Mešalica je pokrenuta i temperatura šarže je podešena sa 16,8 °C na 79,4 °C tokom 1,3 h. Smeša je držana na 79,5 °C tokom 2 h i uzorkovana je za XRPD analizu. XRPD je pokazao Oblik I, a smeša je ohlađena na 24,9 °C tokom 1 h i 10 min. Postavljen je Nutsche filter od 18" opremljen gusto tkanom (0,67 CFM) polipropilen tkaninom i serija je filtrirana. Filtracija je trajala 4 minuta. Etanol (2,8 L) je dodat u posudu i prebačen na filter kolač. Kolač je ručno resuspendovan, a tečnosti su propuštene vakuumom. Etanol (2,80 L) je sipan u filter kolač, a kolač je ručno resuspendovan. Tečnosti su propuštene pomoću vakuuma, a kolač je kondicioniran vakuumom i azotom tokom 1 sata. Filter kolač je prebačen u posude za sušenje i sušen na 45 °C i 28"/Hg tokom jednog dana, dajući prinos od 89% (1,96 kg) Jedinjenja A kao svetlo žute čvrste supstance. HPLC analiza je pokazala čistoću od 99,6%. XRPD analiza je u skladu sa Oblikom I. Mikronizacija 300 g ovog materijala na mlaznom mlinu od 2 inča dala je 284 g (prinos od 95%) mikronizovanog Jedinjenja A. XRPD analiza je potvrdila da je mikronizovano Jedinjenje A zadržalo Oblik I.

[0898] DMAC solvat Jedinjenja A može se konvertovati, preko dihidrata i MIBK solvata, u Oblik I kao što je opisano u Primeru 7. Alternativno, DMAC solvat je direktno konvertovan u Oblik I u prinosu od 75% (prinos izračunat od int.8) zagrevanjem sa 8 zapremina etanola na 80°C tokom 2 sata, a zatim hlađenjem na sobnu temperaturu i filtriranjem. U drugoj reakciji, uzorak Jedinjenja A koji je bio smeša DMAC solvata i dihidrata konvertovan je u Oblik I u prinosu od 69% zagrevanjem sa 8 zapremina MIBK na 80°C, a zatim hlađenjem na sobnu temperaturu.

[0900] Modelovanje interakcije između Jedinjenja A i receptora tiroidnih hormona

[0902] [0205] Kristalne strukture su dobijene iz RCSB banke podataka o proteinima (ID brojevi: 1N46, 1NQ0, 1NQ1, 1NQ2 i 1NUO). Strukture proteinskih kokristala su poravnate pomoću MacPymol za Mac OS X (autorska prava 2006 DeLano Scientific LLC.; sada proizvod Schrodinger Inc.). MacPymol je takođe korišćen za sve analize interakcija ligand-protein i za prikazivanje slika 3-9. Ove slike ukazuju da je, generalno, Jedinjenje A bolje sposobno da prilagodi strukturne varijacije kod THRβ mutanata. Na primer, kod mutanta Arg316His, Arg316 je mutiran u His, a Arg320 je blago pomeren od liganda. Kao rezultat toga, specifična interakcija između Arg320 i T3 je manje optimalna kod mutanta Arg316His. U poređenju sa tim, veliki negativno polarizabilni heterocikl u Jedinjenju A formira povoljne interakcije koje nisu poremećene mutacijom Arg316His. Drugim rečima, Jedinjenje A, imajući veći, polarizabilniji heterocikl, održava povoljne interakcije sa Arg320 i mutiranim His316. Videti, npr., slike 8 i 9. Rezultati su slični za druge mutacije. Tabela ispod navodi biohemijska svojstva određenih TRβ mutanata. Ostali mutanti i njihova svojstva mogu se naći u npr M. Adams et al., J Clin Invest. 1994; 94(2): 506-515, B. R. Huber et al., Mol Endocrinol, 2003, 17(4):643-652; and B. R. Huber et al., Mol Endocrinol, 2003, 17(1):107-116.

[0904]

[0907] EKVIVALENTI

[0909] Pronalazak može da bude realizovan u drugim specifičnim oblicima bez odstupanja od njegovih bitnih karakteristika. Navedene realizacije stoga treba smatrati u svim aspektima ilustrativnim, a ne ograničavajućim za ovde opisani pronalazak. Obim pronalaska je stoga naznačen priloženim zahtevima, a ne prethodnim opisom, i sve promene koje spadaju u značenje i opseg ekvivalencije zahteva treba da budu obuhvaćene njima.

[0912] 1

Claims (19)

1. Patentni zahtevi

1. 2-(3,5-dihloro-4-((5-izopropil-6-okso-1,6-dihidropiridazin-3-il)oksi)fenil)-3,5-diokso-2,3,4,5-tetrahidro-1,2,4-triazin-6-karbonitril ("Jedinjenje A") za upotrebu kao lek, gde Jedinjenje A je administrirano u efikasnoj količini do 100 mg dnevno.

2. Jedinjenje A za upotrebu prema zahtevu 1, gde je Jedinjenje A za upotrebu u metodi lečenja ili prevenciji bolesti masne jetre kod subjekta koja obuhvata administraciju Jedinjenja A subjektu u efikasnoj količini do 100 mg dnevno.

3. Jedinjenje A za upotrebu prema zahtevu 2, gde je Jedinjenje A za upotrebu u metodi lečenja bolesti masne jetre kod subjekta koji obuhvata administraciju Jedinjenja A subjektu u efikasnoj količini do 100 mg dnevno.

4. Jedinjenje A za upotrebu prema zahtevu 2 ili 3, gde bolest masne jetre je nealkoholni steatohepatitis.

5. Jedinjenje A za upotrebu prema bilo kom od zahteva 1-4, pri čemu doza iznosi oko 100 mg dnevno.

6. Jedinjenje A za upotrebu prema bilo kom od zahteva 1-5, pri čemu Jedinjenje A se administrira oralno.

7. Jedinjenje A za upotrebu prema zahtevu 6, pri čemu Jedinjenje A se administrira odraslom čoveku.

8. Jedinjenje A za upotrebu prema bilo kom od zahteva 1-7, gde Jedinjenje A se administrira oralno u tableti.

9. Jedinjenje A za upotrebu prema bilo kom od zahteva 1-8, pri čemu Jedinjenje A se administrira dnevno kao jedna doza.

10. Farmaceutska kompozicija koja sadrži 2-(3,5-dihloro-4-((5-izopropil-6-okso-1,6-dihidropiridazin-3-il)oksi)fenil)-3,5-diokso-2,3,4,5-tetrahidro-1,2,4-triazin-6-karbonitril („Jedinjenje A“) i najmanje jedan farmaceutski prihvatljiv ekscipijens ili nosač, za upotrebu kao lek, pri čemu Jedinjenje A se administrira u efikasnoj količini do 100 mg dnevno.

2

11. Farmaceutska kompozicija za upotrebu prema zahtevu 10, gde farmaceutska kompozicija je sastav za upotrebu u metodi lečenja ili prevencije masne bolesti jetre kod subjekta, pri čemu Jedinjenje A se adminsitrira subjektu u efikasnoj količini do 100 mg dnevno.

12. Farmaceutska kompozicija za upotrebu prema zahtevu 11, pri čemu farmaceutska kompozicija je za upotrebu u metodi lečenja masne bolesti jetre kod subjekta, gde Jedinjenje A se administrira subjektu u efikasnoj količini do 100 mg dnevno.

13. Farmaceutska kompozicija za upotrebu prema zahtevu 11 ili 12, gde bolest masne jetre je nealkoholni steatohepatitis.

14. Farmaceutska kompozicija za upotrebu prema bilo kom od zahteva 10-13, gde doza iznosi oko 100 mg dnevno.

15. Farmaceutska kompozicija za upotrebu prema bilo kom od zahteva 10-14, pri čemu farmaceutska kompozicija se administrira oralno.

16. Farmaceutska kompozicija za upotrebu prema zahtevu 15, pri čemu farmaceutska kompozicija se administrira odraslom čoveku.

17. Farmaceutska kompozicija za upotrebu prema bilo kom od zahteva 10-16, pri čemu farmaceutska kompozicija je tableta i/ili gde se farmaceutska kompozicija administrira dnevno kao jedna doza.

18. Jedinjenje A za upotrebu prema bilo kom od zahteva 1-9, gde Jedinjenje A za upotrebu je farmaceutski prihvatljiva so Jedinjenja A za upotrebu.

19. Farmaceutska kompozicija za upotrebu prema bilo kom od zahteva 10-17, gde Jedinjenje A u farmaceutskoj kompoziciji je farmaceutski prihvatljiva so Jedinjenja A.