ES3053874T3

ES3053874T3 - Biopharmaceutical compositions

Info

Publication number: ES3053874T3
Application number: ES22152628T
Authority: ES
Inventors: Myrna Monck; Narendra Bam; Jennifer Dally; Michelle Spatara
Original assignee: GlaxoSmithKline Intellectual Property No 2 Ltd
Current assignee: GlaxoSmithKline Intellectual Property No 2 Ltd
Priority date: 2015-08-24
Filing date: 2016-08-22
Publication date: 2026-01-27
Anticipated expiration: 2036-08-22
Also published as: EA037487B1; TW201722473A; US20240294630A1; US10870695B2; JP2022023049A; CN116474091A; US20180251539A1; US12187790B2; EP4056590A1; CA2996088A1; JP2024123040A; US20220380452A1; MX2024001617A; KR20250086801A; CN116327921A; IL257539A; US11286298B2; US20200199219A1; KR20240099511A; US11459384B2

Abstract

La presente divulgación se refiere a composiciones para tratar enfermedades mediadas por interleucina 5 (IL-5) y métodos relacionados. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

[0001] DESCRIPCIÓN

[0002] Composiciones biofarmacéuticas

[0003] Campo de la divulgación

[0004] La presente divulgación se refiere a composiciones para tratar enfermedades mediadas por interleucina 5 (IL-5), y a métodos relacionados.

[0005] Antecedentes de la divulgación

[0006] IL-5 desempeña una función en varias enfermedades diferentes tales como asma, asma eosinofílica intensa, asma intensa, asma eosinofílica no controlada, asma eosinofílica, asma sub-eosinofílica, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, granulomatosis eosinofílica con poliangitis, síndrome hipereosinofílico, poliposis nasal, penfigoide ampolloso y esofagitis eosinofílica. Estas enfermedades graves afectan a cientos de millones de personas en todo el mundo. Mepolizumab es un anticuerpo monoclonal que se une a IL-5 soluble y bloquea la unión de la IL-5 soluble a su receptor. La estructura de IL-5 es indicativa de una proteína secretada y no hay evidencias de ninguna forma unida a membrana de IL-5 en ningún tipo celular. Por tanto, las funciones efectoras de Fc no forman parte del mecanismo de acción de mepolizumab. Basándose en el mecanismo de acción y las propiedades farmacocinéticas de mepolizumab, hay dos dominios funcionales implicados en la actividad biológica de este anticuerpo monoclonal. Se trata de a) unión a IL-5 en región determinante de la complementariedad (CDR) que proporciona el mecanismo de acción; y b) unión a receptor de Fc neonatal (FcRn) en la región de Fc, que determina la semivida. Mediante extensos estudios de caracterización realizados a lo largo de todo el desarrollo del producto, se ha determinado que la desamidación, oxidación y agregación son atributos de calidad críticos de mepolizumab. De manera importante, se ha encontrado que deben mantenerse niveles específicos de estas variantes para garantizar una función biológica apropiada.

[0007] Mukherjeeet al., 2014, titulado “Anti-IL5 therapy for asthma and beyond”, es un artículo de revisión que menciona que se sometió mepolizumab a prueba en ensayos clínicos para el tratamiento de varias enfermedades, incluyendo el asma. El documento WO2009/068649 da a conocer las secuencias de cadena ligera y pesada de mepolizumab. Por tanto, existe una necesidad de composiciones adecuadas para conservar la función biológica de mepolizumab y para tratar una enfermedad mediada por IL-5. Tales composiciones y métodos relacionados se proporcionan por la presente divulgación.

[0008] Sumario de la divulgación

[0009] La presente invención se refiere a una composición que comprende

[0010] a) un anticuerpo anti-IL-5 que comprende una secuencia de cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 1 y una secuencia de cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 2;

[0011] b) el 35 % o menos de una variante de anticuerpo que tiene un residuo de aminoácido de cadena pesada desamidado en la asparagina 386 y el 25 % o menos de una variante de anticuerpo que tiene un residuo de aminoácido de cadena ligera desamidado en la asparagina 31; y

[0012] c) el 3 % o menos de una variante de anticuerpo que tiene un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en el triptófano 52, el 50 % o menos de una variante de anticuerpo que tiene un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 64, el 50 % o menos de una variante de anticuerpo que tiene un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 254, el 50 % o menos de una variante de anticuerpo que tiene un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 360, y el 50 % o menos de una variante de anticuerpo que tiene un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 430;

[0013] en la que la cantidad de variante de anticuerpo desamidada y/o la cantidad de variante de anticuerpo oxidada se determina mediante cromatografía de líquidos-espectrometría de masas/espectrometría de masas (CL-EM/EM) de mapeo peptídico; y en la que la composición comprende además una formulación líquida acuosa a pH 6,3 que contiene heptahidrato de fosfato de sodio dibásico 15,5 mM, monohidrato de ácido cítrico 4,5 mM, el 12 % en peso de sacarosa con respecto a volumen, el 0,02 % en peso de polisorbato 80 con respecto a volumen y EDTA 0,05 mM.

[0014] La presente invención también se refiere a una composición farmacéutica que comprende la composición y un portador farmacéuticamente aceptable.

[0015] La presente invención también se refiere a la composición para su uso en terapia.

[0016] La presente invención también se refiere a la composición para su uso en el tratamiento de asma, asma eosinofílica intensa, asma intensa, asma eosinofílica no controlada, asma eosinofílica, asma sub-eosinofílica, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, granulomatosis eosinofílica con poliangitis, síndrome hipereosinofílico, poliposis nasal, penfigoide ampolloso o esofagitis eosinofílica.

[0018] Un aspecto de la divulgación es una composición que comprende un anticuerpo que tiene una secuencia de aminoácidos de cadena pesada tal como se muestra en SEQ ID NO: 1 y una secuencia de aminoácidos de cadena ligera tal como se muestra en SEQ ID NO: 2, o una variante de anticuerpo que tiene una secuencia de aminoácidos de cadena pesada idéntica en al menos el 90 % a la secuencia de aminoácidos de cadena pesada y/o una secuencia de aminoácidos de cadena ligera idéntica en al menos el 90 % a la secuencia de aminoácidos de cadena ligera, en la que la composición comprende: ≤80 % de variantes de anticuerpo ácidas.

[0020] Otro aspecto de la divulgación es una composición que comprende un anticuerpo que tiene una secuencia de aminoácidos de cadena pesada tal como se muestra en SEQ ID NO: 1 y una secuencia de aminoácidos de cadena ligera tal como se muestra en SEQ ID NO: 2, o una variante de anticuerpo que tiene una secuencia de aminoácidos de cadena pesada idéntica en al menos el 90 % a la secuencia de aminoácidos de cadena pesada y/o una secuencia de aminoácidos de cadena ligera idéntica en al menos el 90 % a la secuencia de aminoácidos de cadena ligera, en la que la composición comprende: ≤80 % de variantes de anticuerpo ácidas y ≤20 % de variantes de anticuerpo agregadas.

[0022] Otro aspecto de la divulgación es una composición que comprende un anticuerpo que tiene una secuencia de aminoácidos de cadena pesada tal como se muestra en SEQ ID NO: 1 y una secuencia de aminoácidos de cadena ligera tal como se muestra en SEQ ID NO: 2, o una variante de anticuerpo que tiene una secuencia de aminoácidos de cadena pesada idéntica en al menos el 90 % a la secuencia de aminoácidos de cadena pesada y/o una secuencia de aminoácidos de cadena ligera idéntica en al menos el 90 % a la secuencia de aminoácidos de cadena ligera, en la que la composición comprende: ≤25 % de variante de anticuerpo desamidada en N31 de la secuencia de aminoácidos de cadena ligera; y ≤20 % de variantes de anticuerpo agregadas.

[0024] Otro aspecto de la divulgación es una composición que comprende un anticuerpo que tiene una secuencia de aminoácidos de cadena pesada tal como se muestra en SEQ ID NO: 1 y una secuencia de aminoácidos de cadena ligera tal como se muestra en SEQ ID NO: 2, o una variante de anticuerpo que tiene una secuencia de aminoácidos de cadena pesada idéntica en al menos el 90 % a la secuencia de aminoácidos de cadena pesada y/o una secuencia de aminoácidos de cadena ligera idéntica en al menos el 90 % a la secuencia de aminoácidos de cadena ligera, en la que la composición comprende: ≤25 % de variantes de anticuerpo desamidadas en N31 de la secuencia de aminoácidos de cadena ligera; ≤55 % de variantes de anticuerpo oxidadas en M64 de la secuencia de aminoácidos de cadena pesada; ≤3 % de variante oxidada en W52 de la secuencia de aminoácidos de cadena pesada; y ≤20 % de variantes de anticuerpo agregadas.

[0026] Otro aspecto de la divulgación es una composición que comprende un anticuerpo que tiene una secuencia de aminoácidos de cadena pesada tal como se muestra en SEQ ID NO: 1 y una secuencia de aminoácidos de cadena ligera tal como se muestra en SEQ ID NO: 2, o una variante de anticuerpo que tiene una secuencia de aminoácidos de cadena pesada idéntica en al menos el 90 % a la secuencia de aminoácidos de cadena pesada y/o una secuencia de aminoácidos de cadena ligera idéntica en al menos el 90 % a la secuencia de aminoácidos de cadena ligera, en la que la composición comprende: ≤25 % de variantes de anticuerpo desamidadas en N31 de la secuencia de aminoácidos de cadena ligera; ≤35 % de variantes de anticuerpo desamidadas en N386 de la secuencia de aminoácidos de cadena pesada; y ≤20 % de variantes de anticuerpo agregadas.

[0028] Otro aspecto de la divulgación es una composición que comprende un anticuerpo que tiene una secuencia de aminoácidos de cadena pesada tal como se muestra en SEQ ID NO: 1 y una secuencia de aminoácidos de cadena ligera tal como se muestra en SEQ ID NO: 2, o una variante de anticuerpo que tiene una secuencia de aminoácidos de cadena pesada idéntica en al menos el 90 % a la secuencia de aminoácidos de cadena pesada y/o una secuencia de aminoácidos de cadena ligera idéntica en al menos el 90 % a la secuencia de aminoácidos de cadena ligera, en la que la composición comprende: ≤25 % de variantes de anticuerpo desamidadas en N31 de la secuencia de aminoácidos de cadena ligera; ≤35 % de variantes de anticuerpo desamidadas en N386 de la secuencia de aminoácidos de cadena pesada; ≤55 % de variantes de anticuerpo oxidadas en M64 de la secuencia de aminoácidos de cadena pesada, M254 de la secuencia de aminoácidos de cadena pesada, M430 de la secuencia de aminoácidos de cadena pesada; ≤3 % de variantes de anticuerpo oxidadas en W52 de la secuencia de aminoácidos de cadena pesada; y ≤20 % de variantes de anticuerpo agregadas.

[0030] Otro aspecto de la divulgación es una composición que comprende una preparación purificada de un anticuerpo monoclonal y un agente tamponante, en la que la composición está a un pH de desde 6,8 hasta 7,2, en la que el agente tamponante es histidina, fosfato, ácido cítrico, citrato o una sal de los mismos, en la que la preparación purificada comprende las isoformas representadas por el pico 65, el pico 78, el pico 88, el pico 92, el pico principal y el pico 112 mostrados en la figura 1, en la que el anticuerpo comprende una secuencia de aminoácidos de cadena pesada que tiene al menos el 90 % de identidad con respecto a la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1 y una secuencia de aminoácidos de cadena ligera que tiene al menos el 90 % de identidad con respecto a la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2, y en la que el anticuerpo se produce por una célula de ovario de hámster chino.

[0031] Otro aspecto de la divulgación es una composición que comprende una preparación purificada de un anticuerpo monoclonal y un agente tamponante, en la que la composición está a un pH de desde 6,8 hasta 7,2, en la que el agente tamponante es fosfato o una sal del mismo, en la que la preparación purificada comprende las isoformas representadas por el pico 65, el pico 78, el pico 88, el pico 92, el pico principal y el pico 112 mostrados en la figura 1, en la que el anticuerpo comprende una secuencia de aminoácidos de cadena pesada que tiene al menos el 90 % de identidad con respecto a la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1 y una secuencia de aminoácidos de cadena ligera que tiene al menos el 90 % de identidad con respecto a la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2, y en la que el anticuerpo se produce por una célula de ovario de hámster chino.

[0033] Otro aspecto de la divulgación es una composición que comprende a) un anticuerpo anti-IL-5 que comprende una secuencia de cadena pesada que tiene al menos el 90 % de identidad con respecto a la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 1 y una secuencia de cadena ligera que tiene al menos el 90 % de identidad con respecto a la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 2; y b) una forma principal del anticuerpo que comprende más del, o igual al, 50 % de la proteína en la composición tal como se mide usando isoelectroenfoque capilar de la composición.

[0035] Otro aspecto de la divulgación es una composición que comprende a) un anticuerpo anti-IL-5 que comprende una secuencia de cadena pesada que tiene al menos el 90 % de identidad con respecto a la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 1 y una secuencia de cadena ligera que tiene al menos el 90 % de identidad con respecto a la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 2; b) una forma principal del anticuerpo que comprende más del, o igual al, 50 % de la proteína en la composición tal como se mide usando isoelectroenfoque capilar de la composición; y c) formas ácidas del anticuerpo que comprenden de aproximadamente el 20 % a aproximadamente el 45 % de la proteína en la composición tal como se mide usando isoelectroenfoque capilar de la composición.

[0037] Otro aspecto de la divulgación es una composición que comprende a) un anticuerpo anti-IL-5 que comprende una secuencia de cadena pesada que tiene al menos el 90 % de identidad con respecto a la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 1 y una secuencia de cadena ligera que tiene al menos el 90 % de identidad con respecto a la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 2; b) una forma principal del anticuerpo que comprende más del, o igual al, 50 % de la proteína en la composición tal como se mide usando isoelectroenfoque capilar de la composición; y c) una forma básica del anticuerpo que comprende de aproximadamente el 1 % a aproximadamente el 15 % de la proteína en la composición tal como se mide usando isoelectroenfoque capilar de la composición.

[0038] Otro aspecto de la divulgación es una composición que comprende a) un anticuerpo anti-IL-5 que comprende una secuencia de cadena pesada que tiene al menos el 90 % de identidad con respecto a la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 1 y una secuencia de cadena ligera que tiene al menos el 90 % de identidad con respecto a la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 2; b) una forma principal del anticuerpo que comprende más del, o igual al, 50 % de la proteína en la composición tal como se mide usando isoelectroenfoque capilar de la composición; c) formas ácidas del anticuerpo que comprenden de aproximadamente el 20 % a aproximadamente el 45 % de la proteína en la composición tal como se mide usando isoelectroenfoque capilar de la composición; y d) una forma básica del anticuerpo que comprende de aproximadamente el 1 % a aproximadamente el 15 % de la proteína en la composición tal como se mide usando isoelectroenfoque capilar de la composición.

[0040] Otro aspecto de la divulgación es una composición que comprende a) un anticuerpo anti-IL-5 que comprende una secuencia de cadena pesada que tiene al menos el 90 % de identidad con respecto a la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 1 y una secuencia de cadena ligera que tiene al menos el 90 % de identidad con respecto a la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 2; y b) formas desamidadas del anticuerpo que comprenden al menos uno seleccionado del grupo que consiste en un residuo de aminoácido de cadena pesada desamidado en la asparagina 299, un residuo de aminoácido de cadena pesada desamidado en la asparagina 317, un residuo de aminoácido de cadena pesada desamidado en la asparagina 386 y un residuo de aminoácido de cadena ligera desamidado en la asparagina 31.

[0042] Otro aspecto de la divulgación es una composición que comprende a) un anticuerpo anti-IL-5 que comprende una secuencia de cadena pesada que tiene al menos el 90 % de identidad con respecto a la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 1 y una secuencia de cadena ligera que tiene al menos el 90 % de identidad con respecto a la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 2; y b) formas oxidadas del anticuerpo que comprenden al menos uno seleccionado del grupo que consiste en un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en el triptófano 52, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 64, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 82, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 85, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la cisteína 222, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 254, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 360, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 430, un residuo de aminoácido de cadena ligera oxidado en la metionina 4 y residuo de aminoácido de cadena ligera oxidado en la cisteína 220.

[0043] Otro aspecto de la divulgación es una composición que comprende a) un anticuerpo anti-IL-5 que comprende una secuencia de cadena pesada que tiene al menos el 90 % de identidad con respecto a la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 1 y una secuencia de cadena ligera que tiene al menos el 90 % de identidad con respecto a la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 2; b) formas desamidadas del anticuerpo que comprenden al menos uno seleccionado del grupo que consiste en un residuo de aminoácido de cadena pesada desamidado en la asparagina 299, un residuo de aminoácido de cadena pesada desamidado en la asparagina 317, un residuo de aminoácido de cadena pesada desamidado en la asparagina 386 y un residuo de aminoácido de cadena ligera desamidado en la asparagina 31; y c) formas oxidadas del anticuerpo que comprenden al menos uno seleccionado del grupo que consiste en un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en el triptófano 52, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 64, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 82, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 85, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la cisteína 222, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 254, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 360, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 430, un residuo de aminoácido de cadena ligera oxidado en la metionina 4 y residuo de aminoácido de cadena ligera oxidado en la cisteína 220.

[0044] Otro aspecto de la divulgación es una composición que comprende a) un anticuerpo anti-IL-5 que comprende una región variable de cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos de CDRH1 mostrada en SEQ ID NO: 5, la secuencia de aminoácidos de CDRH2 mostrada en SEQ ID NO: 6, y la secuencia de aminoácidos de CDRH3 mostrada en SEQ ID NO: 7; y una región variable de cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos de CDRL1 mostrada en SEQ ID NO: 8, la secuencia de aminoácidos de CDRL2 mostrada en SEQ ID NO: 9, y la secuencia de aminoácidos de CDRL3 mostrada en SEQ ID NO: 10; y b) formas desamidadas del anticuerpo que comprenden un residuo de aminoácido de cadena ligera desamidado en la asparagina 31.

[0045] Otro aspecto de la divulgación es una composición que comprende a) un anticuerpo anti-IL-5 que comprende una región variable de cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos de CDRH1 mostrada en SEQ ID NO: 5, la secuencia de aminoácidos de CDRH2 mostrada en SEQ ID NO: 6, y la secuencia de aminoácidos de CDRH3 mostrada en SEQ ID NO: 7; y una región variable de cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos de CDRL1 mostrada en SEQ ID NO: 8, la secuencia de aminoácidos de CDRL2 mostrada en SEQ ID NO: 9, y la secuencia de aminoácidos de CDRL3 mostrada en SEQ ID NO: 10; y b) formas oxidadas del anticuerpo que comprenden un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 64.

[0046] Otro aspecto de la divulgación es una composición que comprende a) un anticuerpo anti-IL-5 que comprende una región variable de cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos de CDRH1 mostrada en SEQ ID NO: 5, la secuencia de aminoácidos de CDRH2 mostrada en SEQ ID NO: 6, y la secuencia de aminoácidos de CDRH3 mostrada en SEQ ID NO: 7; y una región variable de cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos de CDRL1 mostrada en SEQ ID NO: 8, la secuencia de aminoácidos de CDRL2 mostrada en SEQ ID NO: 9, y la secuencia de aminoácidos de CDRL3 mostrada en SEQ ID NO: 10; y b) formas oxidadas del anticuerpo que comprenden un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 64; y c) formas desamidadas del anticuerpo que comprenden un residuo de aminoácido de cadena ligera desamidado en la asparagina 31.

[0047] Otro aspecto de la divulgación es una composición que comprende a) un anticuerpo anti-IL-5 que comprende una secuencia de región variable de cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 3 y una secuencia de región variable de cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 4; y b) formas desamidadas del anticuerpo que comprenden un residuo de aminoácido de cadena ligera desamidado en la asparagina 31.

[0048] Otro aspecto de la divulgación es una composición que comprende a) un anticuerpo anti-IL-5 que comprende una secuencia de región variable de cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 3 y una secuencia de región variable de cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 4; y b) formas oxidadas del anticuerpo que comprenden al menos uno seleccionado del grupo que consiste en un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en el triptófano 52, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 64, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 82, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 85 y un residuo de aminoácido de cadena ligera oxidado en la metionina 4.

[0049] Otro aspecto de la divulgación es una composición que comprende a) un anticuerpo anti-IL-5 que comprende una secuencia de región variable de cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 3 y una secuencia de región variable de cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 4; b) formas desamidadas del anticuerpo que comprenden un residuo de aminoácido de cadena ligera desamidado en la asparagina 31; y c) formas oxidadas del anticuerpo que comprenden al menos uno seleccionado del grupo que consiste en un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en el triptófano 52, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 64, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 82, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 85 y un residuo de aminoácido de cadena ligera oxidado en la metionina 4.

[0051] Otro aspecto de la divulgación es una composición que comprende una población de anticuerpos anti-IL-5 que tienen a) una forma modificada de la secuencia de aminoácidos de cadena pesada de anticuerpo mostrada en SEQ ID NO: 1 que comprende al menos una modificación de residuo de aminoácido seleccionada del grupo que consiste en un residuo de piroglutamato amino-terminal en el residuo de aminoácido 1, un residuo de aminoácido de glicina carboxiloterminal en el residuo de aminoácido 448, un residuo de asparagina desamidada en la posición 299, un residuo de asparagina desamidada en la posición 317, un residuo de asparagina desamidada en la posición 386, un residuo de triptófano oxidado en la posición 52, un residuo de metionina oxidada en la posición 64, un residuo de metionina oxidada en la posición 82, un residuo de metionina oxidada en la posición 85, una cisteína oxidada en la posición 222, una metionina oxidada en la posición 254, una metionina oxidada en la posición 360 y un residuo de metionina oxidada en la posición 430; y b) una forma modificada de la secuencia de aminoácidos de cadena ligera de anticuerpo mostrada en SEQ ID NO: 2 que comprende al menos una modificación de residuo de aminoácido seleccionada del grupo que consiste en un residuo de asparagina desamidada en el residuo de aminoácido 31, un residuo de metionina oxidada en la posición 4 y una cisteína oxidada en la posición 220.

[0053] Otro aspecto de la divulgación es una composición que comprende una población de anticuerpos anti-IL-5 que tienen a) una forma modificada de la secuencia de aminoácidos de cadena pesada de anticuerpo mostrada en SEQ ID NO: 1 que comprende al menos una modificación de residuo de aminoácido seleccionada del grupo que consiste en un residuo de asparagina desamidada en la posición 299, un residuo de asparagina desamidada en la posición 317, un residuo de asparagina desamidada en la posición 386, un residuo de triptófano oxidado en la posición 52, un residuo de metionina oxidada en la posición 64, un residuo de metionina oxidada en la posición 82, un residuo de metionina oxidada en la posición 85, una cisteína oxidada en la posición 222, una metionina oxidada en la posición 254, una metionina oxidada en la posición 360, y un residuo de metionina oxidada en la posición 430; y b) una forma modificada de la secuencia de aminoácidos de cadena ligera de anticuerpo mostrada en SEQ ID NO: 2 que comprende al menos una modificación de residuo de aminoácido seleccionada del grupo que consiste en un residuo de asparagina desamidada en el residuo de aminoácido 31, un residuo de metionina oxidada en la posición 4 y una cisteína oxidada en la posición 220.

[0055] Otro aspecto de la divulgación es una composición que comprende una población de anticuerpos anti-IL-5 que tienen a) una forma modificada de la secuencia de aminoácidos de cadena pesada de anticuerpo mostrada en SEQ ID NO: 1 que comprende al menos una modificación de residuo de aminoácido seleccionada del grupo que consiste en un residuo de asparagina desamidada en la posición 299, un residuo de asparagina desamidada en la posición 317 y un residuo de asparagina desamidada en la posición 386; y b) una forma modificada de la secuencia de aminoácidos de cadena ligera de anticuerpo mostrada en SEQ ID NO: 2 que comprende un residuo de asparagina desamidada en el residuo de aminoácido 31.

[0057] Otro aspecto de la divulgación es una composición que comprende una población de anticuerpos anti-IL-5 que tienen a) una forma modificada de la secuencia de aminoácidos de cadena pesada de anticuerpo mostrada en SEQ ID NO: 1 que comprende al menos una modificación de residuo de aminoácido seleccionada del grupo que consiste en un residuo de triptófano oxidado en la posición 52, un residuo de metionina oxidada en la posición 64, un residuo de metionina oxidada en la posición 82, un residuo de metionina oxidada en la posición 85, una cisteína oxidada en la posición 222, una metionina oxidada en la posición 254, una metionina oxidada en la posición 360, y un residuo de metionina oxidada en la posición 430; y b) una forma modificada de la secuencia de aminoácidos de cadena ligera de anticuerpo mostrada en SEQ ID NO: 2 que comprende al menos uno seleccionado del grupo que consiste en un residuo de metionina oxidada en la posición 4 y una cisteína oxidada en la posición 220.

[0059] Otro aspecto de la divulgación es una composición que comprende a) un anticuerpo anti-IL-5 que comprende una secuencia de cadena pesada que tiene al menos el 90 % de identidad con respecto a la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 1 y una secuencia de cadena ligera que tiene al menos el 90 % de identidad con respecto a la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 2; y b) una forma principal del anticuerpo que comprende más del, o igual al, 20 % de la proteína en la composición tal como se mide usando isoelectroenfoque capilar de la composición.

[0061] Otro aspecto de la divulgación es una composición que comprende a) un anticuerpo anti-IL-5 que comprende una secuencia de cadena pesada que tiene al menos el 90 % de identidad con respecto a la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 1 y una secuencia de cadena ligera que tiene al menos el 90 % de identidad con respecto a la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 2; b) una forma principal del anticuerpo que comprende más del, o igual al, 20 % de la proteína en la composición tal como se mide usando isoelectroenfoque capilar de la composición; y c) formas ácidas del anticuerpo que comprenden hasta aproximadamente el 80 % de la proteína en la composición tal como se mide usando isoelectroenfoque capilar de la composición.

[0062] Breve descripción de los dibujos

[0063] Figura 1. Electroferograma de isoelectroenfoque capilar (cIEF) representativo de una composición de patrón de referencia (RS) que comprende mepolizumab.

[0064] Figura 2. Electroferogramas de cIEF representativos de una composición de patrón de referencia que comprende mepolizumab (control) y diferentes lotes de las composiciones que comprenden mepolizumab sometidas a tres días de degradación forzada a pH 9,0.

[0065] Figura 3. Cromatograma de cromatografía de exclusión molecular (SEC) de vista completa representativo de una composición de RS que comprende mepolizumab.

[0066] Figura 4. Cromatograma de SEC de vista expandida representativo de una composición de RS que comprende mepolizumab.

[0067] Figura 5. Cromatograma de SEC-dispersión de la luz de múltiples ángulos (MALS) representativo de una composición de RS que comprende mepolizumab.

[0068] Figura 6. Cromatograma de SEC-MALS representativo de un lote de la composición que comprende mepolizumab. Figura 7. Cromatogramas de SEC representativos de una composición de RS que comprende mepolizumab y para diferentes lotes de composición sometida a condiciones extremas a pH 3,5 que comprende mepolizumab en el día 7.

[0069] Descripción detallada de la divulgación

[0070] La presente divulgación proporciona composiciones para tratar enfermedades mediadas por interleucina 5 (IL-5), y objeto relacionado.

[0071] El término “asma” tal como se usa en el presente documento significa una enfermedad inflamatoria de las vías respiratorias caracterizada por obstrucción reversible del flujo de aire y broncoespasmos. Los síntomas comunes incluyen respiración sibilante, tos, opresión en el tórax y dificultad para respirar.

[0072] En los métodos de la divulgación, “asma” puede ser “asma eosinofílica intensa”. Los sujetos con asma eosinofílica intensa pueden tener asma y eosinófilos en sangre a más de o igual a 300 eosinófilos por µl de sangre en los últimos 12 meses. Los sujetos con asma eosinofílica intensa pueden cumplir uno o más de los criterios descritos en la tabla 1.

[0073] Tabla 1

[0076]

[0077]

[0080] De manera importante, los sujetos con asma eosinofílica intensa según estos criterios pueden tener menos de 150 eosinófilos por µl de sangre al inicio del tratamiento. Mepolizumab es un anticuerpo monoclonal que comprende la secuencia de aminoácidos de cadena pesada mostrada en SEQ ID NO: 1 y la secuencia de aminoácidos de cadena ligera mostrada en SEQ ID NO: 2. Mepolizumab, y proteínas de unión a antígeno, en particular moléculas de anticuerpo, que comprenden las CDR de cadena pesada y las CDR de cadena ligera de mepolizumab, puede usarse para tratar asma eosinofílica intensa según los métodos de la divulgación. Por ejemplo, mepolizumab, o proteínas de unión a antígeno relacionadas, puede estar indicado para tratamiento de mantenimiento suplementario de asma eosinofílica intensa, tal como se identifica mediante eosinófilos en sangre a más de o igual a 300 células/µl en los últimos 12 meses y/o eosinófilos en sangre a más de o igual a 150 células/µl al inicio del tratamiento y/o eosinófilos en sangre a menos de 150 células/µl al inicio del tratamiento, en pacientes. Alternativamente, mepolizumab, o proteínas de unión a antígeno relacionadas, puede estar indicado para tratamiento de mantenimiento suplementario de asma eosinofílica intensa, tal como se identifica mediante eosinófilos en sangre a más de o igual a 300 células/µl en los últimos 12 meses y/o eosinófilos en sangre a más de o igual a 150 células/µl al inicio del tratamiento, en pacientes. Mepolizumab, o proteínas de unión a antígeno relacionadas, puede estar indicado para tratamiento de mantenimiento suplementario de asma eosinofílica intensa, tal como se identifica mediante eosinófilos en sangre a más de o igual a 300 células/µl en los últimos 12 meses y/o eosinófilos en sangre a menos de 150 células/µl al inicio del tratamiento, en pacientes. Tales pacientes pueden tener 12 años de edad y mayores. El tratamiento con mepolizumab puede reducir las exacerbaciones de asma en pacientes (por ejemplo, pacientes con una historia de exacerbación). Los métodos de la divulgación pueden usarse cuando está indicado el tratamiento con mepolizumab (es decir, tal tratamiento con mepolizumab puede combinarse con los métodos de la divulgación). El tratamiento con mepolizumab puede:

[0082] a) producir una reducción de la frecuencia de exacerbaciones. En comparación con placebo, el tratamiento con mepolizumab, tal como 100 mg por sujeto administrados por vía subcutánea o 75 mg por sujeto administrados por vía intravenosa, pueden reducir la tasa de 1) exacerbaciones clínicamente significativas, 2) exacerbaciones que requieren hospitalización o visitas a ED, y 3) exacerbaciones que requieren hospitalización. Este beneficio puede conducir posiblemente a reducciones de la morbididad y acontecimientos mortales debidos a asma;

[0084] b) producir una reducción de la dosis de OCS diaria: el tratamiento con mepolizumab, tal como 100 mg por sujeto administrados por vía subcutánea o 75 mg por sujeto administrados por vía intravenosa, puede permitir a los sujetos reducir su dosis diaria de corticosteroide concomitante sin experimentar pérdida de control del asma. Los sujetos tratados con mepolizumab pueden lograr una mediana del porcentaje de reducción del 50 % desde el nivel inicial en la dosis de corticosteroide oral (OCS) diario frente al 0 % para los tratados con placebo. Además, el 54 % de los sujetos tratados con mepolizumab pueden lograr una reducción de la dosis de OCS hasta 5,0 mg en comparación con el 32 % de los sujetos tratados con placebo (p=0,025);

[0086] c) producir una mejora en la función pulmonar: pueden demostrarse cambios clínicamente relevantes en FEV<1>antes y después de broncodilatador con el tratamiento con mepolizumab, tal como 100 mg por sujeto administrados por vía subcutánea o 75 mg por sujeto administrados por vía intravenosa, en comparación con placebo. Cualquier mejora en la función pulmonar tiene importancia clínica particular en esta población de sujetos dado que la mayoría reciben terapia máxima contra el asma incluyendo ICCS a dosis alta (corticosteroides inhalados) y/u OCS más una medicación preventiva;

[0088] d) producir una mejora en el control del asma: pueden observarse mejoras estadísticamente significativas y clínicamente relevantes en ACQ-5 con mepolizumab, tal como 100 mg por sujeto administrados por vía subcutánea o 75 mg por sujeto administrados por vía intravenosa, en comparación con placebo, indicando que los sujetos pueden lograr control del asma con la adición de mepolizumab a su tratamiento para el asma existente;

[0089] e) producir una mejora en la calidad de vida: pueden demostrarse cambios estadísticamente significativos y clínicamente relevantes en las puntuaciones de SGRQ con mepolizumab, tal como 100 mg por sujeto administrados por vía subcutánea o 75 mg por sujeto administrados por vía intravenosa, en comparación con placebo. Los sujetos pueden experimentar una mejora notable en los síntomas del asma y la capacidad para realizar actividades diarias; f) producir una persistencia de la eficacia y del efecto farmacodinámico: A lo largo de un periodo de duraciones de tratamiento de 32 y/o 52 semanas, puede observarse una reducción sostenida en las exacerbaciones del asma y los eosinófilos en sangre, y mejoras en la función pulmonar, control del asma y calidad de vida sin desarrollo de tolerancia; y

[0090] g) producir una reducción de los eosinófilos en sangre. El tratamiento con composiciones que comprenden mepolizumab, tal como 100 mg de mepolizumab por sujeto administrados por vía subcutánea o 75 mg por sujeto administrados por vía intravenosa, puede dar como resultado una rápida reducción de eosinófilos en sangre (aproximadamente el 80 % en la primera evaluación en la semana 4 tras el tratamiento inicial; por ejemplo, desde 250-290 células/µl hasta 40-60 células/µl, etc.).

[0091] En los métodos de la divulgación, “asma” puede ser “asma intensa”. Los sujetos con asma intensa cumplen la definición de asma intensa descrita en las directrices de la Sociedad Respiratoria Europea/Sociedad Torácica Estadounidense (ERS/ATS) para asma intensa. Por tanto, el asma intensa es asma que requiere tratamiento con medicamentos sugeridos en las directrices para asma en las etapas 4-5 de la Iniciativa Global para el Asma (GINA) (corticosteroides inhalados [ICS] a dosis alta más agonista beta-2 [LABA] de acción prolongada o modificador de leucotrieno/teofilina) durante el año anterior, o corticosteroides sistémicos (CS) durante >=50 % del año anterior para mantener el control del asma del sujeto. El tratamiento con composiciones que comprenden mepolizumab puede usarse para tratar asma intensa según los métodos de la divulgación.

[0092] En los métodos de la divulgación, “asma” puede ser “asma eosinofílica no controlada”. Los sujetos con asma eosinofílica no controlada cumplen los criterios descritos en la tabla 2.

[0093] Tabla 2.

[0096]

[0098] El tratamiento con composiciones que comprenden mepolizumab puede usarse para tratar asma eosinofílica no controlada según los métodos de la divulgación.

[0099] En los métodos de la divulgación, “asma” puede ser “asma eosinofílica”. Los sujetos con asma eosinofílica no controlada cumplen los criterios descritos en la tabla 3.

[0100] Tabla 3.

[0103]

[0105] En los métodos de la divulgación, “asma” puede ser “asma sub-eosinofílica”. Los sujetos con asma eosinofílica no controlada cumplen los criterios descritos en la tabla 4.

[0106] Tabla 4

[0109]

[0112] El tratamiento con composiciones que comprenden mepolizumab puede usarse para tratar asma sub-eosinofílica y también puede usarse para tratar asma sub-eosinofílica según los métodos de la divulgación.

[0114] El término “penfigoide ampolloso” (BP) tal como se usa en el presente documento significa una enfermedad cutánea autoinmunitaria aguda o crónica, que implica la formación de ampollas, conocidas de manera más apropiada como bullas, en el espacio entre las capas de la piel de la epidermis y la dermis. BP es la enfermedad cutánea ampollosa autoinmunitaria más común. Afecta de manera característica a las personas ancianas (>70 años) con una incidencia anual de 5 a 35 por millón. La incidencia de BP está aumentando drásticamente con un promedio del 17 % al año. BP empieza con frecuencia con lesiones cutáneas extremadamente pruríticas que se asemejan a eccema o urticaria antes de que surjan vesículas y ampollas. En el 10-30 % de los pacientes, BP también afecta a la mucosa oral. La intensidad de la enfermedad puede determinarse por medio de la puntuación de intensidad de trastornos de la piel ampollosos autoinmunitarios (ABSIS) que evalúa la zona afectada así como la actividad de la enfermedad. La enfermedad se debe a una respuesta autoinmunitaria frente a componentes estructurales de complejos de adhesión a la unión que conduce al daño de la unión dérmica-epidérmica con formación de ampollas subepidérmicas. Específicamente, se han identificado respuestas de células B y T autorreactivas frente a los antígenos hemidesmosómicos BP180 y BP230. Los niveles en suero de autoanticuerpos frente a BP180 reflejan la intensidad y actividad de la enfermedad. Las células T son células CD4+ de memoria que producen citocinas tanto Th1 como Th2, principalmente IL-4, IL-5 e IL-13. IL-5 así como eotaxina se encuentran de manera abundante en líquidos de blísteres. De hecho, la producción de IL-5 está asociada con eosinofilia en sangre e infiltración de eosinófilos significativa en la piel de pacientes con BP. Se piensa que los eosinófilos participan de manera crítica en la formación de ampollas mediante relajación de proteínas de gránulos tóxicos (ESP, MBP) y enzimas proteolíticas.

[0116] El término “esofagitis eosinofílica” (EoE) tal como se usa en el presente documento significa un estado inflamatorio alérgico del esófago que implica eosinófilos. Los síntomas son dificultad para tragar, impactación alimentaria y ardor de estómago. La EoE está caracterizada por un infiltrado denso con glóbulos blancos de tipo eosinófilos en el revestimiento epitelial del esófago. Se cree que EoE es una reacción alérgica frente a alimentos ingeridos, basándose en la importante función que desempeñan los eosinófilos en reacciones alérgicas. Puede usarse el panel de diagnóstico de EoE para diagnosticar EoE. También puede diagnosticarse EoE si el reflujo gastroesofágico no responde a un ensayo de 6 semanas de inhibidores de la bomba de protones (PPI) a dosis alta dos veces al día o si un estudio del pH ambulatorio negativo descartó la enfermedad por reflujo gastroesofágico (GERD). Desde el punto de vista endoscópico, pueden observarse rugosidades, surcos o anillos en la pared esofágica. Algunas veces, pueden producirse múltiples anillos en el esófago, conduciendo al término “esófago corrugado” o “esófago felino” debido a la similitud de los anillos con el esófago de los gatos. La presencia de exudados blancos en el esófago también sugiere el diagnóstico. En una biopsia tomada en el momento de la endoscopia, normalmente pueden verse numerosos eosinófilos en el epitelio superficial. Se requiere un mínimo de 15 eosinófilos por campo de alta potencia para realizar un diagnóstico. La inflamación eosinofílica no está limitada únicamente al esófago, y se extiende a través de todo el tracto gastrointestinal. También pueden estar presentes eosinófilos profundamente desgranulados, al igual que microabscesos y una expansión de la capa basal. Desde el punto de vista radiológico, se ha usado el término “esófago en anillos” para el aspecto de esofagitis eosinofílica en estudios de tránsito baritado para contrastar con el aspecto de pliegues transversales transitorios algunas veces observados con el reflujo esofágico (denominado “esófago felino”).

[0117] El tratamiento con composiciones que comprenden mepolizumab puede usarse para tratar EPOC según los métodos de la divulgación.

[0119] Los sujetos con “enfermedad pulmonar obstructiva crónica” (EPOC) pueden cumplir uno o más de los siguientes criterios: a) un diagnóstico de EPOC anterior: sujetos con una historia clínicamente documentada de EPOC durante al menos 1 año según la definición de la Sociedad Torácica Estadounidense/Sociedad Respiratoria Europea; b) intensidad de EPOC: los sujetos pueden presentar lo siguiente: una razón de volumen espiratorio forzado en un segundo/capacidad vital forzada (FEV<1>/FVC) medida antes y después de salbutamol de <0,70 para confirmar un diagnóstico de EPOC; un FEV<1>medido tras salbutamol >20 por ciento y <=80 por ciento de valores normal predichos calculados usando ecuaciones de referencia de la Encuesta Nacional de Examen de Salud y Nutrición (NHANES) III; c) una historia de exacerbaciones: una historia bien documentada (tal como verificación de registros médicos) en los 12 meses de: al menos dos exacerbaciones de EPOC moderadas. Moderado se define como el uso de corticosteroides sistémicos (i.m., intravenosos, u orales) y/o tratamiento con antibióticos, o al menos una exacerbación de EPOC intensa. Intensa se define como que requiere hospitalización. Nota: al menos una exacerbación debe haberse producido mientras el sujeto estaba tomando corticosteroide inhalado (ICS) más agonista beta-2 de acción prolongada (LABA) más antagonista muscarínico de acción prolongada (LAMA). Nota: el uso previo de antibióticos por sí solo no cualifica como exacerbación moderada a menos que el uso fuera específicamente para el tratamiento del empeoramiento de síntomas de EPOC; y d) terapia para EPOC concomitante: una necesidad bien documentada de terapia previa de referencia (SoC) optimizada que incluye ICS más 2 medicamentos para EPOC adicionales (es decir, terapia triple) durante los 12 meses anteriores y cumple los siguientes criterios: inmediatamente antes de la visita al proveedor de atención sanitaria, un mínimo de 3 meses de uso de un corticosteroide inhalado (a una dosis >=500 microgramos (mcg)/día de dosis de propionato de fluticasona equivalente más); o LABA y LAMA.

[0120] El tratamiento con composiciones que comprenden mepolizumab puede usarse para tratar EPOC según los métodos de la divulgación.

[0121] El término “granulomatosis eosinofílica con poliangitis” (EGPA) tal como se usa en el presente documento significa un estado autoinmunitario que provoca inflamación de vesículas de sangre de tamaño pequeño y mediano (vasculitis) en personas con una historia de hipersensibilidad alérgica de las vías respiratorias (atopia). EGPA también puede denominarse síndrome de Churg-Strauss (CSS) o granulomatosis alérgica. EGPA se manifiesta habitualmente en tres estadios. El estadio temprano (prodrómico) está marcado por inflamación de las vías respiratorias; casi todos los pacientes experimentan asma y/o rinitis alérgica. El segundo estadio está caracterizado por números anómalamente altos de eosinófilos (hipereosinofilia), lo cual provoca daño tisular, lo más habitualmente en los pulmones y el tracto digestivo. El tercer estadio consiste en vasculitis, que puede conducir con el tiempo a muerte celular y puede ser potencialmente mortal.

[0122] Los sujetos con EGPA pueden cumplir uno o más de los siguientes criterios: a) asma; b) niveles de eosinófilos en sangre de más del 10 % de una fórmula leucocitaria; c) presencia de mononeuropatía o polineuropatía; d) infiltrados pulmonares no fijados; e) presencia de anomalías del seno paranasal; y e) evidencia histológica de eosinófilos extravasculares. Con fines de clasificación, se dirá que un paciente tiene EGPA si al menos cuatro de los seis criterios anteriores son positivos.

[0123] El tratamiento con composiciones que comprenden mepolizumab puede usarse para tratar EGPA según los métodos de la divulgación. Las composiciones de la divulgación pueden administrarse a un paciente con EGPA en una cantidad de 300 mg una vez cada 4 semanas.

[0124] El término “síndrome hipereosinofílico” (HES) tal como se usa en el presente documento significa una enfermedad caracterizada por un recuento de eosinófilos elevado de manera persistente (≥ 1500 eosinófilos/mm<3>) en la sangre durante al menos seis meses sin ninguna causa reconocible, con afectación del corazón, del sistema nervioso o de la médula ósea.

[0125] Los sujetos con síndrome hipereosinofílico pueden cumplir uno o más de los siguientes criterios: a) una historia documentada de síndrome hipereosinofílico; b) un recuento de eosinófilos en sangre de más de 1500 células durante 6 meses; c) signos y síntomas de afectación de aparatos y sistemas; y d) sin evidencias de causas parasíticas, alérgicas u otras de eosinofilia tras una evaluación exhaustiva.

[0126] El tratamiento con composiciones que comprenden mepolizumab puede usarse para tratar síndrome hipereosinofílico según los métodos de la divulgación. Las composiciones de la divulgación pueden administrarse a un paciente con síndrome hipereosinofílico en una cantidad de 300 mg una vez cada 4 semanas.

[0127] El término “poliposis nasal” tal como se usa en el presente documento significa una enfermedad caracterizada por la presencia de pólipos en la cavidad nasal. Tales pólipos pueden estar en la parte superior de la cavidad nasal y/o pueden originarse desde el interior del complejo osteomeatal.

[0128] Los sujetos con poliposis nasal pueden cumplir uno o más de los siguientes criterios: a) una historia documentada de poliposis nasal; o b) pólipos nasales evidentes en la exploración (por ejemplo, exploración endoscópica).

[0129] El tratamiento con composiciones que comprenden mepolizumab puede usarse para tratar poliposis nasal según los métodos de la divulgación. Las composiciones de la divulgación pueden administrarse a un paciente con poliposis nasal en una cantidad de 750 mg una vez cada 4 semanas.

[0130] El término “anticuerpo” tal como se usa en el presente documento se refiere a moléculas con un dominio de tipo inmunoglobulina (por ejemplo, IgG, IgM, IgA, IgD o IgE) e incluye moléculas monoclonales, recombinantes, policlonales, monoclonales, recombinantes, policlonales, quiméricas, humanas y humanizadas de este tipo. Los anticuerpos monoclonales pueden producirse por un clon celular eucariota que expresa un anticuerpo. Los anticuerpos monoclonales también pueden producirse por una línea celular eucariota que puede expresar de manera recombinante la cadena pesada y la cadena ligera del anticuerpo gracias a tener secuencias de ácido nucleico que codifican para las mismas introducidas en la célula. Se conocen bien métodos para producir anticuerpos a partir de diferentes líneas celulares eucariotas tales como células de ovario de hámster chino, hibridomas o células de anticuerpos inmortalizadas derivadas de un animal (por ejemplo, ser humano).

[0131] El anticuerpo puede derivarse de rata, ratón, primate (por ejemplo, macaco cangrejero, cercopitécido o mono antropoide), ser humano u otras fuentes tales como ácidos nucleicos generados usando técnicas de biología molecular que codifican para una molécula de anticuerpo.

[0132] El anticuerpo puede comprender una región constante, que puede ser de cualquier isotipo o subclase. La región constante puede ser del isotipo de IgG, por ejemplo, IgG<1>, IgG<2>, IgG<3>, IgG<4>o variantes de las mismas. La región constante de proteína de unión a antígeno puede ser IgG<1>.

[0133] La proteína de unión a antígeno puede comprender una o más modificaciones seleccionadas de un dominio constante mutado de tal manera que el anticuerpo tiene potenciación de funciones de efector/ADCC y/o activación del complemento.

[0134] Un anticuerpo puede ser capaz de unirse a un antígeno diana. Los ejemplos de tales antígenos diana incluyen IL-5 humana que comprende la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 11.

[0135] Mepolizumab, que comprende la secuencia de aminoácidos de cadena pesada mostrada en SEQ ID NO: 1 y la secuencia de aminoácidos de cadena ligera mostrada en SEQ ID NO: 2, es un ejemplo de un anticuerpo. Mepolizumab se une a IL-5 humana y antagoniza su actividad.

[0136] Mepolizumab es un anticuerpo monoclonal humanizado recombinante (IgG<1>, Kappa). Mepolizumab tiene dos cadenas ligeras y dos pesadas.

[0137] La cadena pesada de mepolizumab está codificada por la secuencia de ácido nucleico mostrada en SEQ ID NO: 13. La cadena pesada de mepolizumab contiene 449 aminoácidos con una masa molecular estimada de aproximadamente 49 kDa. La secuencia de aminoácidos de cadena pesada madura predicha para mepolizumab es:

[0140]

[0142] En la secuencia de aminoácidos de cadena pesada anterior, los entramados y las CDR de cadena pesada según la definición de Kabat se identifican como entramado 1 subrayado con línea ondulada, CDR1 subrayada con línea continua, entramado 2 subrayado con línea ondulada, CDR2 subrayada con línea continua, entramado 3 subrayado con línea ondulada, CDR3 subrayada con línea continua y entramado 4 con línea ondulada en orden desde la porción amino-proximal hasta la porción carboxilo-terminal de la secuencia presentada. En la secuencia de aminoácidos de cadena pesada anterior, un asterisco a la derecha de un carácter para un código de aminoácido de una única letra indica que el residuo de aminoácido a la izquierda puede ser un sitio de N-glicosilación.

[0143] La cadena ligera de mepolizumab está codificada por la secuencia de ácido nucleico mostrada en SEQ ID NO: 14. La cadena ligera de mepolizumab contiene 220 residuos de aminoácido con una masa molecular estimada de aproximadamente 24 kDa. La secuencia de aminoácidos de cadena ligera madura es:

[0144]

[0147] En la secuencia de aminoácidos de cadena ligera anterior, los entramados y las CDR de cadena ligera según la definición de Kabat se identifican como entramado 1 subrayado con línea ondulada, CDR1 subrayada con línea continua, entramado 2 subrayado con línea ondulada, CDR2 subrayada con línea continua, entramado 3 subrayado con línea ondulada, CDR3 subrayada con línea continua y entramado 4 con línea ondulada en orden desde la porción amino-proximal hasta la porción carboxilo-terminal de la secuencia presentada.

[0149] Las cadenas pesada y ligera de mepolizumab están unidas de manera covalente mediante un único enlace disulfuro y las cadenas pesadas están unidas entre sí mediante dos enlaces disulfuro dando como resultado una molécula de IgG típica. Ambas cadenas pesadas pueden estar glicosiladas en la asparagina 299 con oligosacáridos biantenarios complejos. La masa molecular de polipéptido predicha es de aproximadamente 146 kDa y la masa molecular de hidrato de carbono predicha es de aproximadamente 3 kDa, dando una masa molecular estimada total de 149,2 kDa para mepolizumab. Mepolizumab tal como se codifica tiene 1338 residuos de aminoácido (220 residuos de aminoácido por cada cadena ligera, 449 residuos de aminoácido por cada cadena pesada). El pI principal de mepolizumab es de aproximadamente 8,7 - 9,1. La constante de disociación en equilibrio (K<D>) para la interacción molecular de mepolizumab e IL-5 humana tal como se mide usando ensayos convencionales de resonancia de plasmón superficial es de menos de 2,29x10<-11>M.

[0151] Mepolizumab puede proporcionarse como un polvo liofilizado que contiene el anticuerpo y excipientes que pueden reconstituirse con un portador farmacéuticamente aceptable (por ejemplo, agua estéril). Entonces puede administrarse esta composición farmacéutica reconstituida o bien por vía subcutánea o bien por vía intravenosa (por ejemplo, con dilución adicional). También puede proporcionarse mepolizumab como formulación líquida que contiene el anticuerpo, excipientes y un portador farmacéuticamente aceptable. Entonces puede administrarse esta composición farmacéutica líquida o bien por vía subcutánea o bien por vía intravenosa (por ejemplo, con dilución adicional).

[0153] El término “variante de anticuerpo” tal como se usa en el presente documento significa un anticuerpo que difiere de un anticuerpo original debido a al menos una modificación de aminoácido (por ejemplo, por tener una cadena lateral de aminoácido diferente), modificación postraduccional u otra modificación en al menos una cadena pesada, cadena ligera, o combinaciones de las mismas que da como resultado un cambio estructural (por ejemplo, cadena lateral de aminoácido diferente, modificación postraduccional diferente u otra modificación) con respecto al anticuerpo original. Mepolizumab es un ejemplo de un anticuerpo original de este tipo. Los cambios estructurales pueden determinarse directamente mediante una variedad de métodos bien conocidos en la técnica tales como CL-EM, secuenciación directa o indirectamente mediante métodos tales como isoelectroenfoque y similares. Tales métodos los conocen bien los expertos habituales en la técnica.

[0155] El término “IL-5” tal como se usa en el presente documento significa IL-5 humana que comprende la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 11.

[0157] El término “se une específicamente”, tal como se usa en el presente documento con respecto proteínas de unión a antígeno, significa que la proteína de unión a antígeno se une a un antígeno diana así como a un dominio diferenciado, o secuencia de aminoácidos diferenciada, dentro de un antígeno diana sin unión o con unión insignificante a otras proteínas (por ejemplo, no relacionadas). Sin embargo, este término no excluye el hecho de que las proteínas de unión a antígeno también puedan presentar reacción cruzada con moléculas estrechamente relacionadas (por ejemplo, aquellas con un alto grado de identidad de secuencia o de otros géneros o especies). Las proteínas de unión a antígeno descritas en el presente documento pueden unirse a IL-5 humana o al receptor de IL-5 humana con una afinidad al menos 2, 5, 10, 50, 100 o 1000 veces mayor que con la que se unen a moléculas estrechamente relacionadas.

[0159] La afinidad de unión (K<D>) de la interacción proteína de unión a antígeno-antígeno diana puede ser de 1 mM o menos, 100 nM o menos, 10 nM o menos, 2 nM o menos o 1 nM o menos. Alternativamente, la K<D>puede ser de entre 5 y 10 nM; o entre 1 y 2 nM. La K<D>puede ser de entre 1 pM y 500 pM; o entre 500 pM y 1 nM. La afinidad de unión de la proteína de unión a antígeno se determina mediante la constante de asociación (Ka) y la constante de disociación (Kd) (KD = Kd/Ka). La afinidad de unión puede medirse mediante BIACORE<™>, por ejemplo, mediante captura del anticuerpo de prueba sobre una superficie de sensor recubierta con proteína A y haciendo fluir antígeno diana sobre esta superficie. Alternativamente, la afinidad de unión puede medirse mediante FORTEBIO, por ejemplo, con el receptor de anticuerpo de prueba capturado sobre una aguja recubierta con proteína A y haciendo fluir antígeno diana sobre esta superficie.

[0161] La K<d>puede ser de 1x10<-3>Ms<-1>o menos, 1x10<-4>Ms<-1>o menos, o 1x10<-5>Ms<-1>o menos. La K<d>puede ser de entre 1x10-<5>Ms<-1>y 1x10<-4>Ms<-1>; o entre 1x10<-4>Ms<-1>y 1x10<-3>Ms<-1>. Una K<d>lenta puede dar como resultado una disociación lenta del complejo de proteína de unión a antígeno-antígeno diana y una neutralización mejorada del antígeno diana. El término “actividad de unión a antígeno específica” tal como se usa en el presente documento significa actividad de unión a antígeno tal como se mide mediante resonancia de plasmón superficial (SPR). La actividad de unión específica a IL-5 puede determinarse mediante SPR usando un instrumento BIACORE<™>, por ejemplo realizada en el modo de unión. Se trata de la actividad de unión dividida entre el contenido de proteína total (por ejemplo, mepolizumab) en una muestra.

[0162] El término “actividad de unión a FcRn” tal como se usa en el presente documento significa actividad de unión a receptor de Fc neonatal (FcRn) tal como se mide mediante resonancia de plasmón superficial (SPR). La unión a FcRn puede determinarse usando un instrumento BIACORE<™>. Se trata de la actividad de unión al receptor FcRn, dividida entre la concentración de proteína total de la muestra.

[0163] El método de SPR para determinar la unión a FcRn y la unión a antígeno específica usa un patrón de referencia de mepolizumab. El patrón de referencia de mepolizumab puede usarse en ensayos para obtener datos de idoneidad del sistema y de comparabilidad de muestras, para garantizar que los métodos están funcionando de manera apropiada. El patrón de referencia puede permitir el establecimiento de una curva de calibración y se interpolan concentraciones de las muestras a partir de la curva.

[0164] Por ejemplo, el patrón de referencia es una composición que comprende SEQ ID NO: 1 y SEQ ID NO: 2. En otra realización, el patrón de referencia es una composición que comprende SEQ ID NO: 1 y SEQ ID NO: 2, y el 98 % o más de variante con lisina C-terminal delecionada de HC, y el 95 % o más de variante con piroglutamato N-terminal de HC. En una realización adicional, el patrón de referencia es una composición que comprende SEQ ID NO: 1 y SEQ ID NO: 2, y el 98 % o más de variante con lisina C-terminal delecionada de HC, el 95 % o más de variante con piroglutamato N-terminal de HC, y el 6 % o menos de variante desamidada. En otra realización, el patrón de referencia es una composición que comprende SEQ ID NO: 1 y SEQ ID NO: 2, y el 98 % o más de variante con lisina C-terminal delecionada de HC, el 95 % o más de variante con piroglutamato N-terminal de HC, el 6 % o menos de variante desamidada, el 4 % o menos de variante con metionina o cisteína oxidada, y el 0,1 % de variante con triptófano oxidado. En una realización adicional, el patrón de referencia es una composición que comprende SEQ ID NO: 1 y SEQ ID NO: 2, y el 98 % o más de variante con lisina C-terminal delecionada de HC, el 95 % o más de variante con piroglutamato N-terminal de HC, el 6 % o menos de variante desamidada, el 4 % o menos de variante con metionina o cisteína oxidada, el 0,1 % o menos de variante con triptófano oxidado, y el 0,4 % o menos de variante agregada. En otra realización, el patrón de referencia es una composición que comprende las isoformas representadas por el pico 65, el pico 78, el pico 88, el pico 92, el pico principal y el pico 112 mostrados en la figura 1. En una realización el patrón de referencia es una composición que comprende SEQ ID NO: 1 y SEQ ID NO: 2, aproximadamente el 62,9 % de pico principal, aproximadamente el 35,9 % de pico ácido, aproximadamente el 1,2 % de pico básico, aproximadamente el 99,6 % de monómero, aproximadamente el 0,4 % de agregado, aproximadamente el 0 % de fragmento, aproximadamente el 0,8 % de N317 desamidada de HC, aproximadamente el 5,5 % de N386 desamidada de HC, aproximadamente el 5,2 % de N31 desamidada de HC, aproximadamente el 0,2 % de N299 desamidada de HC, aproximadamente el 0,9 % de M64 oxidada de HC, aproximadamente el 3,5 % de M254 oxidada de HC, aproximadamente el 0,5 % de M360 oxidada de HC, aproximadamente el 0,5 % de M430 oxidada de HC, aproximadamente el 0,3 % de M82 y M85 oxidadas de HC, aproximadamente el 0,2 % de M4 oxidada de CL, aproximadamente el 0,0 % de C220 oxidada de CL, aproximadamente el 0,1 % de W52 oxidado de HC, el 98 % o más de variante con lisina C-terminal delecionada de HC, y el 95 % o más de variante con piroglutamato N-terminal de HC. En una realización la composición tiene una actividad de unión a IL-5 específica de ≥0,70; y una actividad de unión a FcRn ≥ 70 %. Por ejemplo, la unión a antígeno específica está en el intervalo de desde 0,70 hasta 1,30; y/o la unión a FcRn está en el intervalo de desde el 70 % hasta el 130 %, en comparación con el patrón de referencia que se establece como una actividad de unión a IL-5 específica de 1,0, y el 100 % actividad de unión a FcRn.

[0165] La razón de DE<50>de neutralización de IL-5 es la DE<50>de un patrón de anticuerpo de referencia (por ejemplo, un patrón de anticuerpo de mepolizumab que comprende las secuencias de aminoácidos de SEQ ID NO: 1 y SEQ ID NO: 2) dividida entre la DE<50>de una muestra de anticuerpo (por ejemplo, una muestra de variante de mepolizumab o una muestra de un lote fabricado de composición que comprende un anticuerpo de mepolizumab que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1 y SEQ ID NO: 2).

[0166] Por “aislado”, quiere decirse que la molécula, tal como una proteína de unión a antígeno o ácido nucleico, se retira del entorno en el que puede encontrarse en la naturaleza. Por ejemplo, la molécula puede separarse mediante purificación de sustancias con las que existe normalmente en la naturaleza. Por ejemplo, la masa de la molécula en una muestra puede ser el 95 % de la masa total.

[0167] Los términos “V<H>” y “V<L>” se usan en el presente documento para hacer referencia a la región variable de cadena pesada y la región variable de cadena ligera respectivamente de una proteína de unión a antígeno.

[0168] Las “CDR” se definen como las secuencias de aminoácidos de región determinante de la complementariedad de una proteína de unión a antígeno. Son las regiones hipervariables de cadenas pesada y ligera de inmunoglobulinas. Hay tres CDR de cadena pesada y tres de cadena ligera (o regiones CDR) en la porción variable de una inmunoglobulina. Por tanto, las “CDR” tal como se usan en el presente documento se refieren a las tres CDR de cadena pesada, las tres CDR de cadena ligera, todas las CDR de cadena pesada y ligera, o al menos una CDR y en las que la al menos una CDR es CDRH3. Las regiones de entramado siguen a cada una de estas regiones CDR. Las regiones de entramado 1, entramado 2 y entramado 3 de región variable de cadena pesada y región variable de cadena ligera aceptables se reconocen fácilmente por los expertos habituales en la técnica. Las regiones constantes de cadena pesada aceptables (incluyendo regiones bisagra) y las regiones constantes de cadena ligera también se reconocen fácilmente por los expertos habituales en la técnica. Los isotipos de anticuerpo aceptables se reconocen fácilmente de manera similar por los expertos habituales en la técnica.

[0170] A lo largo de esta memoria descriptiva, los residuos de aminoácido en secuencias de dominio variable y secuencias de anticuerpo de longitud completa se numeran según el convenio de numeración de Kabat. De manera similar, los términos “CDR”, “CDRL1”, “CDRL2”, “CDRL3”, “CDRH1”, “CDRH2”, “CDRH3” usados en la memoria descriptiva siguen el convenio de numeración de Kabat.

[0172] Resultará evidente para los expertos en la técnica que hay convenios de numeración alternativos para residuos de aminoácido en secuencias de domino variable y secuencias de anticuerpo de longitud completa. También hay convenios de numeración alternativos para secuencias de CDR, por ejemplo los expuestos según el convenio de numeración de Chothia. La estructura y el plegamiento de proteína del anticuerpo pueden significar que se considere que otros residuos forman parte de la secuencia de CDR y el experto entenderá que esto es así.

[0174] Otros convenios de numeración para secuencias de CDR disponibles para el experto incluyen los métodos de “AbM” (University of Bath) y “contacto” (University College London). La región de solapamiento mínima usando al menos dos de los métodos de Kabat, Chothia, AbM y contacto puede determinarse para proporcionar la “unidad de unión mínima”. La unidad de unión mínima puede ser una sub-porción de una CDR.

[0176] La tabla 5 a continuación representa una definición usando cada convenio de numeración para cada CDR o unidad de unión. En la tabla 5 se usa el esquema de numeración de Kabat para numerar la secuencia de aminoácidos de dominio variable. Debe observarse que algunas de las definiciones de CDR pueden variar dependiendo de la publicación individual usada.

[0178] Tabla 5

[0181]

[0184] La “identidad en porcentaje” entre una secuencia de ácido nucleico de consulta y una secuencia de ácido nucleico objeto es el valor de “identidades”, expresado como porcentaje, que se calcula mediante el algoritmo BLASTN cuando una secuencia de ácido nucleico objeto tiene una cobertura de consulta del 100 % con una secuencia de ácido nucleico de consulta tras realizar una alineación de BLASTN por parejas. Tales alineaciones de BLASTN por parejas entre una secuencia de ácido nucleico de consulta y una secuencia de ácido nucleico objeto se realizan usando ajustes por defecto del algoritmo BLASTN disponible en el sitio web del National Center for Biotechnology Institute con el filtro para regiones de baja complejidad desactivado. De manera importante, una secuencia de consulta puede describirse por una secuencia de ácido nucleico identificada en una o más reivindicaciones en el presente documento.

[0186] Las secuencias de ácido nucleico que pueden ser útiles, y se incluyen, en las composiciones y los métodos relacionados de la divulgación pueden tener entre aproximadamente el 85 % y aproximadamente el 100 %, de aproximadamente el 90 % a aproximadamente el 100 %, de aproximadamente el 95 % a aproximadamente el 100 %, aproximadamente el 91 %, aproximadamente el 92 %, aproximadamente el 93 %, aproximadamente el 94 %, aproximadamente el 95 %, aproximadamente el 96 %, aproximadamente el 97 %, aproximadamente el 98 %, aproximadamente el 99 % y aproximadamente el 100 % de identidad con respecto a las secuencias de ácido nucleico identificadas en la divulgación (por ejemplo, ácidos nucleicos que codifican para una cadena pesada de anticuerpo o cadena ligera de anticuerpo). En la divulgación, la identidad en porcentaje entre las secuencias de ácido nucleico descritas puede incluir cualquier subintervalo diferenciado de los intervalos de identidad en porcentaje mencionados anteriormente (por ejemplo, cualquier intervalo de valores de número entero dentro de un intervalo particular o valores secundarios diferenciados dentro de un intervalo particular).

[0187] La “identidad en porcentaje” entre una secuencia de aminoácidos de consulta y una secuencia de aminoácidos objeto es el valor de “identidades”, expresado como porcentaje, que se calcula mediante el algoritmo BLASTP cuando una secuencia de aminoácidos objeto tiene una cobertura de consulta del 100 % con una secuencia de aminoácidos de consulta tras realizar una alineación de BLASTP por parejas. Tales alineaciones de BLASTP por parejas entre una secuencia de aminoácidos de consulta y una secuencia de aminoácidos objeto se realizan usando los ajustes por defecto del algoritmo BLASTP disponible en el sitio web del National Center for Biotechnology Institute con el filtro para regiones de baja complejidad desactivado. De manera importante, una secuencia de consulta puede describirse mediante una secuencia de aminoácidos identificada en una o más reivindicaciones en el presente documento. Las secuencias de aminoácidos que pueden ser útiles, y se incluyen, en composiciones y métodos relacionados de la divulgación pueden tener entre aproximadamente el 85 % y aproximadamente el 100 %, de aproximadamente el 90 % a aproximadamente el 100 %, de aproximadamente el 95 % a aproximadamente el 100 %, aproximadamente el 91 %, aproximadamente el 92 %, aproximadamente el 93 %, aproximadamente el 94 %, aproximadamente el 95 %, aproximadamente el 96 %, aproximadamente el 97 %, aproximadamente el 98 %, aproximadamente el 99 % y aproximadamente el 100 % de identidad con respecto a las secuencias de aminoácidos identificadas en la divulgación (por ejemplo, con respecto a una cadena pesada de anticuerpo o cadena ligera de anticuerpo). En la divulgación, la identidad en porcentaje entre las secuencias de aminoácidos descritas puede incluir cualquier subintervalo diferenciado de los intervalos de identidad en porcentaje mencionados anteriormente (por ejemplo, cualquier intervalo de valores de número entero dentro de un intervalo particular o valores secundarios dentro de un intervalo particular). Los términos “péptido”, “polipéptido”, “proteína” y “cadena peptídica” se refieren, cada uno, a una molécula que comprende dos o más residuos de aminoácido. Un péptido puede ser monomérico o polimérico.

[0188] Se reconoce en la técnica que ciertas sustituciones de aminoácidos se considera que son “conservativas”. Los aminoácidos se dividen en grupos basándose en propiedades de cadena lateral comunes y las sustituciones dentro de grupos que conservan la totalidad o sustancialmente la totalidad de la afinidad de unión de la proteína de unión a antígeno se consideran sustituciones conservativas. Véase la tabla 6. Las proteínas de unión a antígeno dadas a conocer en el presente documento pueden comprender tales sustituciones de aminoácidos “conservativas”.

[0189] Tabla 6

[0192]

[0194] El término “composición farmacéutica” tal como se usa en el presente documento significa una composición adecuada para su administración a un paciente.

[0195] Las composiciones farmacéuticas descritas en el presente documento pueden comprender preparaciones purificadas de un anticuerpo tal como se describe en el presente documento.

[0196] Por ejemplo, la preparación farmacéutica puede comprender una preparación purificada de un anticuerpo tal como se describe en el presente documento en combinación con un portador farmacéuticamente aceptable.

[0197] Normalmente, tales composiciones farmacéuticas comprenden un portador farmacéuticamente aceptable tal como se conoce y al que se recurre en la práctica farmacéutica aceptable. Los ejemplos de tales portadores incluyen portadores esterilizados, tales como solución salina, disolución de Ringer, o disolución de dextrosa, opcionalmente tamponados con tampones adecuados a un pH dentro de un intervalo de 5 a 8.

[0198] Las composiciones farmacéuticas pueden administrarse mediante inyección o infusión (por ejemplo, intravenosa, intraperitoneal, intradérmica, subcutánea, intramuscular o intraportal). Tales composiciones están de manera adecuada libres de material particulado visible. Las composiciones farmacéuticas pueden comprender entre 1 mg y 10 g de proteína de unión a antígeno, por ejemplo, entre 5 mg y 1 g de proteína de unión a antígeno. Alternativamente, la composición puede comprender entre 5 mg y 500 mg de proteína de unión a antígeno, por ejemplo, entre 5 mg y 50 mg.

[0199] Los expertos en la técnica conocen bien métodos para la preparación de tales composiciones farmacéuticas. Las composiciones farmacéuticas pueden comprender entre 1 mg y 10 g de proteína de unión a antígeno en forma de dosificación unitaria, opcionalmente junto con instrucciones de uso. Las composiciones farmacéuticas pueden liofilizarse (secarse por congelación) para su reconstitución antes de la administración según métodos bien conocidos o evidentes para los expertos en la técnica. Cuando los anticuerpos tienen un isotipo IgG<1>, puede añadirse un quelante de cobre, tal como citrato (por ejemplo, citrato de sodio) o EDTA o histidina, a la composición farmacéutica para reducir el grado de degradación mediada por cobre de anticuerpos de este isotipo. Las composiciones farmacéuticas también pueden comprender un solublizante, tal como arginina, un tensioactivo/agente anti-agregación tal como polisorbato 80, y un gas inerte tal como nitrógeno para sustituir al oxígeno del espacio de cabeza del vial.

[0201] El término “cantidad terapéuticamente eficaz” tal como se usa en el presente documento significa una cantidad de un agente (tal como un anticuerpo o una composición farmacéutica), que proporciona un beneficio terapéutico en el tratamiento o control de uno o más síntomas de un estado que va a tratarse (tal como asma, asma eosinofílica intensa, asma eosinofílica no controlada, asma eosinofílica, asma sub-eosinofílica, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, granulomatosis eosinofílica con poliangitis (EGPA), síndrome hipereosinofílico y poliposis nasal). Los ejemplos de tal tratamiento o control de uno o más síntomas de asma, incluyendo asma eosinofílica intensa, asma eosinofílica no controlada, asma eosinofílica o asma sub-eosinofílica, incluyen 1) una reducción de la frecuencia de exacerbaciones de asma; 2) una reducción del tiempo hasta la primera exacerbación clínicamente significativa que requiere corticosteroides orales o sistémicos, hospitalización, y/o visitas al servicio de urgencias (ED); 3) una reducción de la frecuencia de exacerbaciones que requieren hospitalización (incluyendo intubación e ingreso en una unidad de cuidados intensivos) o visitas al ED; 4) una reducción del tiempo hasta la primera exacerbación que requiere hospitalización o visita al ED; 5) un cambio desde el nivel inicial en el FEV<1>clínico antes de broncodilatador; 6) un cambio desde el nivel inicial en el FEV<1>clínico tras el broncodilatador; 7) un cambio desde el nivel inicial en una puntuación de cuestionario de control del asma (ACQ); 8) función pulmonar mejorada tal como se evalúa mediante espirometría (por ejemplo, capacidad vital (VC), capacidad vital forzada (FVC), volumen espiratorio forzado (FEV) a intervalos cronometrados de 0,5, 1,0 (FEV<1>), 2,0 y 3,0 segundos, capacidad pulmonar total de flujo espiratorio forzado del 25-75 % (FEF 25-75) y ventilación voluntaria máxima (MVV), volumen tidal, volumen residual, volumen de reserva espiratorio, volumen de reserva inspiratorio, capacidad inspiratoria, capacidad inspiratoria vital, capacidad vital, capacidad residual funcional, volumen residual expresado como porcentaje de la capacidad pulmonar total, volumen de gas alveolar, volumen real del pulmón incluyendo el volumen de las vías respiratorias de conducción, capacidad vital forzada, etc.); y 9) una reducción de las exacerbaciones de asma que requieren esteroides para su control (tales como esteroides orales o prednisona de tipo esteroides, prednisolona, etc., administrados mediante cualquier vía). Tal reducción de las exacerbaciones de asma que requieren esteroides para su control puede ser una reducción de aproximadamente el 50 % de las exacerbaciones que requieren esteroides (por ejemplo, esteroides orales).

[0203] Las cantidades terapéuticamente eficaces y pautas de tratamiento se determinan generalmente de manera empírica y pueden depender de factores tales como la edad, peso y estado de salud del paciente y la enfermedad o trastorno que va a tratarse. Tales factores están dentro del alcance del médico encargado.

[0205] La dosificación de proteína de unión a antígeno administrada a un sujeto es generalmente de entre 1 µg/kg y 150 mg/kg, entre 0,1 mg/kg y 100 mg/kg, entre 0,5 mg/kg y 50 mg/kg, entre 1 y 25 mg/kg, entre aproximadamente 0,3 mg/kg y aproximadamente 3 mg/kg o entre 1 y 10 mg/kg del peso corporal del sujeto. Por ejemplo, la dosis puede ser de 10 mg/kg, 30 mg/kg o 60 mg/kg. La dosis también puede ser de desde 10 mg/kg hasta 110 mg/mg, de 15 mg/kg a 25 mg/kg o de 15 mg/kg a 100 mg/kg. La proteína de unión a antígeno puede administrarse, por ejemplo, por vía parenteral, por vía subcutánea, por vía intravenosa o por vía intramuscular. También pueden administrarse dosis basándose en cada sujeto, tal como de aproximadamente 20 mg por sujeto a aproximadamente 750 mg por sujeto, de aproximadamente 75 mg por sujeto a aproximadamente 750 mg por sujeto, de aproximadamente 20 mg por sujeto a aproximadamente 200 mg por sujeto. La dosis puede ser cualquier subintervalo diferenciado con estos intervalos de dosificación. Por ejemplo, la dosis (tal como una dosis de mepolizumab o una composición farmacéutica que comprende mepolizumab) también puede administrarse por vía subcutánea basándose en cada sujeto, tal como aproximadamente 100 mg por sujeto (por ejemplo, una vez cada cuatro semanas), o 300 mg por sujeto (u otras dosis administradas pueden ser por vía subcutánea siempre que se logre una biodisponibilidad aproximadamente igual, o comparable, a la administración intravenosa, por ejemplo, tres dosis de 100 mg por sujeto para lograr una dosis total administrada por vía subcutánea de 300 mg por sujeto).

[0207] Los intervalos proporcionados en el presente documento, de cualquier tipo, incluyen todos los valores dentro de un intervalo particular descrito y valores alrededor de un punto final para un intervalo particular.

[0209] Si se desea, la dosis diaria eficaz de una composición terapéutica puede administrarse como dos, tres, cuatro, cinco, seis o más dosis administradas por separado a intervalos apropiados a lo largo de todo el día, opcionalmente, en formas de dosificación unitarias.

[0211] La administración de una dosis puede ser mediante infusión continua lenta a lo largo de un periodo de desde 2 hasta 24 horas, tal como de desde 2 hasta 12 horas, o desde 2 hasta 6 horas. Una administración de este tipo puede dar como resultado efectos secundarios reducidos.

[0213] La administración de una dosis puede repetirse una o más veces según sea necesario, por ejemplo, tres veces al día, una vez cada día, una vez cada 2 días, una vez por semana, una vez cada 14 días, una vez al mes, una vez cada 3 meses, una vez cada 4 meses, una vez cada 6 meses o una vez cada 12 meses. Las proteínas de unión a antígeno pueden administrarse mediante terapia de mantenimiento, por ejemplo una vez por semana durante un periodo de 6 meses o más. Las proteínas de unión a antígeno pueden administrarse mediante terapia intermitente, por ejemplo, durante un periodo de 3 a 6 meses y después sin dosis durante de 3 a 6 meses, seguido por administración de proteínas de unión a antígeno de nuevo durante de 3 a 6 meses, y así sucesivamente, en un ciclo.

[0214] Por ejemplo, la dosis puede administrarse por vía subcutánea, una vez cada 14 o 28 días, en forma de múltiples dosis en cada día de administración. En una realización, la dosificación de la composición es de 100 mg una vez cada 4 semanas (28 días).

[0215] La proteína de unión a antígeno puede administrarse al sujeto de tal manera que se dirige la terapia a un sitio particular. La proteína de unión a antígeno en los métodos de la divulgación puede usarse en combinación con uno o más de otros agentes terapéuticamente activos, tales como anticuerpos o inhibidores de molécula pequeña.

[0216] Mediante el término “tratar” y variaciones gramaticales del mismo tal como se usa en el presente documento, se hace referencia a terapia terapéutica. Haciendo referencia a un estado particular, tratar significa: (1) mejorar el estado o una o más de las manifestaciones biológicas del estado, (2) interferir con a) uno o más puntos en la cascada biológica que conduce al, o es responsable del, estado o b) una o más de las manifestaciones biológicas del estado, (3) aliviar uno o más de los síntomas, efectos o efectos secundarios asociados con el estado o el tratamiento del mismo, (4) ralentizar la progresión del estado o una o más de las manifestaciones biológicas del estado o (5) prevenir la aparición de una o más de las manifestaciones biológicas del estado. De este modo también se contempla la terapia profiláctica. El experto en la técnica apreciará que “prevención” no es un término absoluto. En medicina, se entiende que “prevención” se refiere a la administración profiláctica de un fármaco para reducir sustancialmente la probabilidad o intensidad de un estado o manifestación biológica del mismo, o retardar la aparición de tal estado o manifestación biológica del mismo.

[0217] Los términos “individuo”, “sujeto” y “paciente” se usan en el presente documento de manera intercambiable. El sujeto es normalmente un ser humano. El sujeto también puede ser un mamífero, tal como un ratón, rata o primate (por ejemplo, un tití o mono). El sujeto puede ser un animal no humano. Las proteínas de unión a antígeno, composiciones y métodos de la divulgación también tienen uso veterinario. El sujeto que va a tratarse puede ser un animal de granja, por ejemplo, una vaca o toro, oveja, cerdo, buey, cabra o caballo, o puede ser un animal doméstico tal como un perro o gato. El animal puede tener cualquier edad, o ser un animal adulto maduro.

[0218] El tratamiento puede ser terapéutico, profiláctico o preventivo. El sujeto será uno que lo necesita. Aquellos que necesitan tratamiento pueden incluir individuos que ya padecen una enfermedad médica particular, además de aquellos que pueden desarrollar la enfermedad en el futuro.

[0219] Por tanto, los métodos, proteínas de unión a antígeno y composiciones de la divulgación descritos en el presente documento pueden usarse para tratamiento profiláctico o tratamiento preventivo si se especifica. En ese caso, los métodos, proteínas de unión a antígeno y composiciones de la divulgación pueden usarse para prevenir o retardar la aparición de uno o más aspectos o síntomas de una enfermedad. El sujeto puede ser asintomático. El sujeto puede tener una predisposición genética a la enfermedad. Una cantidad profilácticamente eficaz de la proteína de unión a antígeno se administra a un individuo de este tipo. Una cantidad profilácticamente eficaz es una cantidad que previene o retarda la aparición de uno o más aspectos o síntomas de una enfermedad descrita en el presente documento. No se necesita que los métodos, proteínas de unión a antígeno y composiciones de la divulgación produzcan una cura completa, o erradiquen todos los síntomas o manifestaciones de la enfermedad, para constituir un tratamiento terapéutico viable. Tal como se reconoce en la técnica, los fármacos empleados como agentes terapéuticos en métodos de tratamiento pueden reducir la intensidad de un estado patológico dado, pero no es necesario que eliminen todas las manifestaciones de la enfermedad para considerarse agentes terapéuticos útiles. De manera similar, no es necesario que un tratamiento administrado de manera profiláctica sea completamente eficaz en prevenir la aparición de una enfermedad con el fin de constituir un agente profiláctico viable. Es suficiente simplemente con reducir el impacto de una enfermedad (por ejemplo, reduciendo el número o la intensidad de sus síntomas, o aumentando la eficacia de otro tratamiento, o produciendo otro efecto beneficioso) o reducir la probabilidad de que se produzca la enfermedad (por ejemplo, retardando la aparición de la enfermedad) o empeore en un sujeto.

[0220] Un aspecto de la divulgación es una composición que comprende un anticuerpo que tiene una secuencia de aminoácidos de cadena pesada tal como se muestra en SEQ ID NO: 1 y una secuencia de aminoácidos de cadena ligera tal como se muestra en SEQ ID NO: 2, o una variante de anticuerpo que tiene una secuencia de aminoácidos de cadena pesada idéntica en al menos el 90 % a la secuencia de aminoácidos de cadena pesada y/o una secuencia de aminoácidos de cadena ligera idéntica en al menos el 90 % a la secuencia de aminoácidos de cadena ligera, en la que la composición comprende: ≤80 % de variantes de anticuerpo ácidas.

[0221] En una realización la composición tiene: a) ≥0,70 de unión a antígeno específica de IL-5; y/o b) ≥70 % de unión a FcRn. La unión a antígeno específica de IL-5, tal como unión a IL-5 humana que comprende la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 11, puede medirse usando ensayos convencionales, tales como resonancia de plasmón superficial (por ejemplo, BIACORE<™>), que se conocen bien en la técnica. La unión a FcRn puede medirse de manera similar usando ensayos convencionales, tales como resonancia de plasmón superficial (por ejemplo, BIACORE<™>), que se conocen bien en la técnica.

[0222] En otra realización a) la unión a antígeno específica está en el intervalo de desde 0,70 a 1,30; y/o b) la unión a FcRn está en el intervalo de desde el 70 % hasta el 130 %. En algunas realizaciones la unión a antígeno específica puede estar en el intervalo de aproximadamente 0,9 a 1,1, de 0,75 a aproximadamente 1, de aproximadamente 0,7 a aproximadamente 0,8, aproximadamente 0,7, de aproximadamente 0,91 a aproximadamente 0,95, de aproximadamente 0,994 a aproximadamente 0,997 o de aproximadamente 0,7 a aproximadamente 0,9. En algunas realizaciones, la unión a FcRn está en el intervalo de desde aproximadamente el 70 % hasta aproximadamente el 100 %, de aproximadamente el 100 % a aproximadamente el 130 %, aproximadamente el 70 %, aproximadamente el 80 %, aproximadamente el 90 %, aproximadamente el 100 %, aproximadamente el 110 %, aproximadamente el 120 %, de aproximadamente el 80 % a aproximadamente el 90 %, de aproximadamente el 80 % a aproximadamente el 100 %, de aproximadamente el 100 % a aproximadamente el 110 %, de aproximadamente el 110 % a aproximadamente el 120 %, de aproximadamente el 120 % a aproximadamente el 130 %, de aproximadamente el 80 % a aproximadamente el 120 % y de aproximadamente el 90 % a aproximadamente el 110 %.

[0223] En una realización, la composición comprende: ≤80 % de variantes de anticuerpo ácidas. Por ejemplo, la composición puede comprender ≤75 %, ≤70 %, ≤65 %, ≤60 %, ≤55 %, ≤50 %, o ≤45 % de variantes de anticuerpo ácidas.

[0224] En otra realización, la composición comprende: ≤35 % de variantes de anticuerpo desamidadas.

[0225] En otra realización, la composición comprende: ≤25 % de variantes de anticuerpo desamidadas en N31 de la secuencia de aminoácidos de cadena ligera. Por ejemplo, la composición puede comprender ≤22,5 %, ≤20 %, ≤17,5 %, ≤15 %, ≤12,5, ≤10 %, o ≤7,5 % de variantes de anticuerpo desamidadas en N31 de la secuencia de aminoácidos de cadena ligera.

[0226] En otra realización, la composición comprende: ≤35 % de variantes de anticuerpo desamidadas en N386 de la secuencia de aminoácidos de cadena pesada. Por ejemplo, la composición puede comprender ≤32,5 %, ≤30 %, ≤25,5 %, o ≤20 %, ≤17,5 %, ≤15 %, ≤12,5 %, ≤10 %, o ≤7,5 % de variantes de anticuerpo desamidadas en N386 de la secuencia de aminoácidos de cadena pesada.

[0227] En otra realización, la composición comprende: ≤55 % de variantes de anticuerpo oxidadas.

[0228] En otra realización, la composición comprende: ≤55 % de variante de anticuerpo oxidada en uno cualquiera o una combinación de: a) M64 de la secuencia de aminoácidos de cadena pesada; b) M254 de la secuencia de aminoácidos de cadena pesada; y/o c) M430 de la secuencia de aminoácidos de cadena pesada. Por ejemplo, la composición puede comprender ≤50 %, ≤45 %, ≤40 %, ≤35 %, ≤30 %, o ≤25 %, ≤20 %, ≤15 %, ≤10 %, o ≤5 % de variantes de anticuerpo oxidadas en M64, M254, y/o M430 de la secuencia de aminoácidos de cadena pesada.

[0229] En otra realización, la composición comprende: ≤3 % de variantes de anticuerpo oxidadas en W52 de la secuencia de aminoácidos de cadena pesada. Por ejemplo, la composición puede comprender ≤2,5 %, ≤2 %, <1,5 %, ≤1 %, ≤0,5 %, ≤0,4 %, ≤0,3 %, ≤0,25 %, ≤0,2 %, ≤0,15 %, o ≤0,1 % de variantes de anticuerpo oxidadas en W52 de la secuencia de aminoácidos de cadena pesada.

[0230] En otra realización, una cantidad de variante de anticuerpo desamidada y/o una cantidad de variante oxidada, se determina mediante CL-EM/EM de mapeo peptídico.

[0231] En otra realización, la composición comprende: ≤20 % de variantes de anticuerpo agregadas. Por ejemplo, la composición puede comprender ≤17,5 %, ≤15 %, ≤12,5, ≤10 %, ≤7,5 %, ≤5 %, o ≤4 %, de variante agregada. Las composiciones pueden comprender menos del, o igual al, 3 %, 2 %, 1 % o 0,5 % de anticuerpo agregado. La composición puede comprender más del, o igual al, 98 % de anticuerpo monomérico.

[0232] En otra realización, la variante de anticuerpo agregada comprende un dímero. Un anticuerpo agregado de este tipo puede comprender dos moléculas de anticuerpo (por ejemplo, dos moléculas de anticuerpo IgG1).

[0233] En otra realización, la cantidad de variante de anticuerpo agregada se determina mediante cromatografía de exclusión molecular (SEC). En la técnica se conocen bien métodos para realizar cromatografía de exclusión molecular y medir el tamaño de moléculas de proteína.

[0234] En otra realización, la composición comprende: ≥50 % de variantes de anticuerpo con lisina K449 C-terminal delecionada en la secuencia de aminoácidos de cadena pesada. Por ejemplo, la composición puede comprender ≥60 %, ≥70 %, ≥75, ≥80 %, ≥85 %, ≥90 %, o ≥95 % de variantes de anticuerpo con lisina K449 C-terminal delecionada en la secuencia de aminoácidos de cadena pesada.

[0236] En otra realización, la composición comprende: ≥50 % de variantes de anticuerpo con piroglutamato N-terminal en la secuencia de aminoácidos de cadena pesada. Por ejemplo, la composición puede comprender ≥60 %, ≥70 %, ≥75, ≥80 %, ≥85 %, ≥90 %, o ≥95 % de variantes de anticuerpo con piroglutamato N-terminal en la secuencia de aminoácidos de cadena pesada.

[0238] En otra realización, la composición comprende proteína de célula huésped (HCP). La HCP derivarse de células CHO. La HCP es una impureza relacionada con el procedimiento en contraposición a sustancias relacionadas con producto de mepolizumab (es decir, mepolizumab más variantes de mepolizumab). Los límites aceptables convencionales en la industria para HCP pueden ser de hasta 100 ppm (igual a 100 ng/mg). El contenido en HCP en una composición descrita en el presente documento puede ser ≤ 50 ng/mg, ≤ 40 ng/mg, ≤ 30 ng/mg o ≤ 20 ng/mg. Por ejemplo, el contenido en HCP de la composición puede ser ≤ 10 ng/mg. En una realización particular, el contenido en HCP de la composición puede ser ≤ 5 ng/mg o ≤ 2 ng/mg.

[0240] Otro aspecto de la divulgación es una composición que comprende un anticuerpo que tiene una secuencia de aminoácidos de cadena pesada tal como se muestra en SEQ ID NO: 1 y una secuencia de aminoácidos de cadena ligera tal como se muestra en SEQ ID NO: 2, o una variante de anticuerpo que tiene una secuencia de aminoácidos de cadena pesada idéntica en al menos el 90 % a la secuencia de aminoácidos de cadena pesada y/o una secuencia de aminoácidos de cadena ligera idéntica en al menos el 90 % a la secuencia de aminoácidos de cadena ligera, en la que la composición comprende: ≤80 % de variantes de anticuerpo ácidas y ≤20 % de variantes de anticuerpo agregadas.

[0242] Otro aspecto de la divulgación es una composición que comprende un anticuerpo que tiene una secuencia de aminoácidos de cadena pesada tal como se muestra en SEQ ID NO: 1 y una secuencia de aminoácidos de cadena ligera tal como se muestra en SEQ ID NO: 2, o una variante de anticuerpo que tiene una secuencia de aminoácidos de cadena pesada idéntica en al menos el 90 % a la secuencia de aminoácidos de cadena pesada y/o una secuencia de aminoácidos de cadena ligera idéntica en al menos el 90 % a la secuencia de aminoácidos de cadena ligera, en la que la composición comprende: ≤25 % de variantes de anticuerpo desamidadas en N31 de la secuencia de aminoácidos de cadena ligera; y ≤20 % de variantes de anticuerpo agregadas.

[0244] Otro aspecto de la divulgación es una composición que comprende un anticuerpo que tiene una secuencia de aminoácidos de cadena pesada tal como se muestra en SEQ ID NO: 1 y una secuencia de aminoácidos de cadena ligera tal como se muestra en SEQ ID NO: 2, o una variante de anticuerpo que tiene una secuencia de aminoácidos de cadena pesada idéntica en al menos el 90 % a la secuencia de aminoácidos de cadena pesada y/o una secuencia de aminoácidos de cadena ligera idéntica en al menos el 90 % a la secuencia de aminoácidos de cadena ligera, en la que la composición comprende: ≤25 % de variantes de anticuerpo desamidadas en N31 de la secuencia de aminoácidos de cadena ligera; ≤55 % de variantes de anticuerpo oxidadas en M64 de la secuencia de aminoácidos de cadena pesada; ≤3 % de variantes oxidadas en W52 de la secuencia de aminoácidos de cadena pesada; y ≤20 % de variantes de anticuerpo agregadas.

[0246] Otro aspecto de la divulgación es una composición que comprende un anticuerpo que tiene una secuencia de aminoácidos de cadena pesada tal como se muestra en SEQ ID NO: 1 y una secuencia de aminoácidos de cadena ligera tal como se muestra en SEQ ID NO: 2, o una variante de anticuerpo que tiene una secuencia de aminoácidos de cadena pesada idéntica en al menos el 90 % a la secuencia de aminoácidos de cadena pesada y/o una secuencia de aminoácidos de cadena ligera idéntica en al menos el 90 % a la secuencia de aminoácidos de cadena ligera, en la que la composición comprende: ≤25 % de variantes de anticuerpo desamidadas en N31 de la secuencia de aminoácidos de cadena ligera; ≤35 % de variantes de anticuerpo desamidadas en N386 de la secuencia de aminoácidos de cadena pesada; y ≤20 % de variantes de anticuerpo agregadas.

[0248] Otro aspecto de la divulgación es una composición que comprende un anticuerpo que tiene una secuencia de aminoácidos de cadena pesada tal como se muestra en SEQ ID NO: 1 y una secuencia de aminoácidos de cadena ligera tal como se muestra en SEQ ID NO: 2, o una variante de anticuerpo que tiene una secuencia de aminoácidos de cadena pesada idéntica en al menos el 90 % a la secuencia de aminoácidos de cadena pesada y/o una secuencia de aminoácidos de cadena ligera idéntica en al menos el 90 % a la secuencia de aminoácidos de cadena ligera, en la que la composición comprende: ≤25 % de variantes de anticuerpo desamidadas en N31 de la secuencia de aminoácidos de cadena ligera; ≤35 % de variantes de anticuerpo desamidadas en N386 de la secuencia de aminoácidos de cadena pesada; ≤55 % de variantes de anticuerpo oxidadas en M64 de la secuencia de aminoácidos de cadena pesada, M254 de la secuencia de aminoácidos de cadena pesada, M430 de la secuencia de aminoácidos de cadena pesada; ≤3 % de variantes de anticuerpo oxidadas en W52 de la secuencia de aminoácidos de cadena pesada; y ≤20 % de variantes de anticuerpo agregadas.

[0249] Las composiciones de la divulgación pueden comprender además un agente tamponante seleccionado del grupo que consiste en heptahidrato de fosfato de sodio dibásico, fosfato, ácido cítrico, citrato, fosfato de sodio, fosfato de potasio, citrato de sodio e histidina, que proporciona un pH de entre 6,8 y 7,2 o un pH de desde pH 6,2 hasta pH 6,6, prefiriéndose un valor de pH de 6,3. El tampón en las composiciones de la divulgación puede estar presente en el intervalo de desde aproximadamente 10-30 mM, aproximadamente 10-20 mM, aproximadamente 20 mM o aproximadamente 15,5 mM. Por ejemplo, el tampón en las composiciones de la divulgación está presente como heptahidrato de fosfato de sodio dibásico a aproximadamente 20 mM o aproximadamente 15,5 mM.

[0250] Las composiciones de la divulgación pueden comprender agentes tamponantes de heptahidrato de fosfato de sodio dibásico y ácido cítrico que proporcionan un pH de desde 6,2 hasta 6,6 inclusive, prefiriéndose un valor de pH de 6,3. El agente tamponante de heptahidrato de fosfato de sodio dibásico puede estar presente en el intervalo de desde aproximadamente 15-16,4 mM y el agente tamponante de ácido cítrico puede estar presente en el intervalo de desde aproximadamente 3,8-4,9 mM. Por ejemplo, las composiciones de la divulgación pueden comprender heptahidrato de fosfato de sodio dibásico a aproximadamente 15,5 mM y monohidrato de ácido cítrico a aproximadamente 4,5 mM. Las composiciones de la divulgación pueden comprender además un azúcar. Las composiciones de la divulgación pueden comprender además sacarosa. La sacarosa puede estar presente en las composiciones de la divulgación en el intervalo de desde aproximadamente el 5-20 %; aproximadamente el 10-15 %, aproximadamente el 11-13 % o a aproximadamente el 12 % en peso con respecto a volumen.

[0251] Las composiciones de la divulgación pueden comprender además polisorbato 80. El polisorbato 80 puede estar presente en el intervalo de desde aproximadamente el 0,01-0,1 % en peso con respecto a volumen. Por ejemplo, el polisorbato 80 puede estar presente en las composiciones de la divulgación a aproximadamente el 0,02 % en peso con respecto a volumen, o a aproximadamente el 0,05 % en peso con respecto a volumen.

[0252] Las composiciones de la divulgación pueden comprender además EDTA. EDTA puede estar presente en el intervalo de desde aproximadamente 0,01-0,1 mM. Por ejemplo, EDTA puede estar presente a aproximadamente 0,05 mM. En una realización, las composiciones de la divulgación comprenden además heptahidrato de fosfato de sodio dibásico 20 mM, el 12 % en peso de sacarosa con respecto a volumen y el 0,05 % en peso de polisorbato 80 con respecto a volumen.

[0253] En otra realización, las composiciones de la divulgación comprenden además fosfato de sodio dibásico 15,5 mM, monohidrato de ácido cítrico 3,9 mM, el 12 % en peso de sacarosa con respecto a volumen, el 0,02 % en peso de polisorbato 80 con respecto a volumen y EDTA 0,05 mM.

[0254] Las composiciones de la divulgación pueden comprender una formulación líquida acuosa a pH 6,2 que contiene heptahidrato de fosfato de sodio dibásico 16,1 mM, monohidrato de ácido cítrico 3,9 mM, el 12 % en peso de sacarosa con respecto a volumen, el 0,02 % en peso de polisorbato 80 con respecto a volumen y EDTA 0,05 mM.

[0255] Las composiciones de la divulgación pueden comprender una formulación líquida acuosa a pH 6,2 que contiene heptahidrato de fosfato de sodio dibásico 15,2 mM, monohidrato de ácido cítrico 4,8 mM, el 12 % en peso de sacarosa con respecto a volumen, el 0,02 % en peso de polisorbato 80 con respecto a volumen y EDTA 0,05 mM.

[0256] Las composiciones de la divulgación pueden comprender una formulación líquida acuosa a pH 6,4 que contiene heptahidrato de fosfato de sodio dibásico 15,8 mM, monohidrato de ácido cítrico 4,2 mM, el 12 % en peso de sacarosa con respecto a volumen, el 0,02 % en peso de polisorbato 80 con respecto a volumen y EDTA 0,05 mM.

[0257] Las composiciones de la divulgación pueden comprender una formulación líquida acuosa a pH 6,6 que contiene heptahidrato de fosfato de sodio dibásico 16,3 mM, monohidrato de ácido cítrico 3,7 mM, el 12 % en peso de sacarosa con respecto a volumen, el 0,02 % en peso de polisorbato 80 con respecto a volumen y EDTA 0,05 mM.

[0258] Las composiciones de la divulgación pueden comprender una formulación líquida acuosa a pH 6,3 que contiene heptahidrato de fosfato de sodio dibásico 15,5 mM, monohidrato de ácido cítrico 4,5 mM, el 12 % en peso de sacarosa con respecto a volumen, el 0,02 % en peso de polisorbato 80 con respecto a volumen y EDTA 0,05 mM. De manera importante, la etapa de intercambio de ultrafiltración y filtración tangencial del ejemplo 1 a continuación puede ajustarse para producir las composiciones de la divulgación, tales como una composición de la divulgación que comprende heptahidrato de fosfato de sodio dibásico 15,5 mM, monohidrato de ácido cítrico 4,5 mM, sacarosa al 12 % en peso con respecto al volumen, polisorbato 80 al 0,02 % en peso con respecto al volumen, EDTA 0,05 mM a un pH de 6,3, u otras formulaciones líquidas de este tipo.

[0259] Otro aspecto de la divulgación es una composición que comprende una preparación purificada de un anticuerpo monoclonal y un agente tamponante, en la que la composición está a un pH de desde 6,8 hasta 7,2, en la que el agente tamponante es histidina, fosfato, ácido cítrico, citrato o una sal de los mismos, en la que la preparación purificada comprende las isoformas representadas por el pico 65, el pico 78, el pico 88, el pico 92, el pico principal y el pico 112 mostrados en la figura 1, en la que el anticuerpo comprende una secuencia de aminoácidos de cadena pesada que tiene al menos el 90 % de identidad con respecto a la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1 y una secuencia de aminoácidos de cadena ligera que tiene al menos el 90 % de identidad con respecto a la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2, y en la que el anticuerpo se produce por una célula de ovario de hámster chino. En la composición, la cadena pesada puede comprender una secuencia de aminoácidos que tiene al menos el 95 %, el 96 %, 96,88 %, el 97 %, el 98 % o el 99 % de identidad con respecto a la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1. En la composición, la cadena ligera puede comprender una secuencia de aminoácidos que tiene al menos el 98 %, 98,63 o el 99 % de identidad con respecto a la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2.

[0260] En una realización, el agente tamponante es al menos uno seleccionado del grupo que consiste en heptahidrato de fosfato de sodio dibásico, fosfato, ácido cítrico y citrato.

[0261] En otra realización, el agente tamponante es fosfato de sodio, fosfato de potasio o citrato de sodio.

[0262] En otra realización, la composición comprende además un azúcar, un hidrato de carbono y/o una sal.

[0263] En otra realización, la composición comprende sacarosa.

[0264] Otro aspecto de la divulgación es una composición que comprende una preparación purificada de un anticuerpo monoclonal y un agente tamponante, en la que la composición está a un pH de desde 6,8 hasta 7,2, en la que el agente tamponante es fosfato o una sal del mismo, en la que la preparación purificada comprende las isoformas representadas por el pico 65, el pico 78, el pico 88, el pico 92, el pico principal y el pico 112 mostrados en la figura 1, en la que el anticuerpo comprende una secuencia de aminoácidos de cadena pesada que tiene al menos el 90 % de identidad con respecto a la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1 y una secuencia de aminoácidos de cadena ligera que tiene al menos el 90 % de identidad con respecto a la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2, y en la que el anticuerpo se produce por una célula de ovario de hámster chino.

[0265] En otra realización, el agente tamponante es al menos uno seleccionado del grupo que consiste en heptahidrato de fosfato de sodio dibásico, fosfato, ácido cítrico y citrato.

[0266] En otra realización, la composición comprende además un azúcar.

[0267] En otra realización, el azúcar es sacarosa.

[0268] En otra realización, la composición comprende polisorbato 80.

[0269] En otra realización, la composición comprende una seleccionada de una primera formulación de heptahidrato de fosfato de sodio dibásico 20 mM, el 12 % en peso de sacarosa con respecto a volumen y el 0,05 % en peso de polisorbato 80 con respecto a volumen; y una segunda formulación de heptahidrato de fosfato de sodio dibásico 15,5 mM, monohidrato de ácido cítrico 3,9 mM, el 12 % en peso de sacarosa con respecto a volumen, el 0,02 % en peso de polisorbato 80 con respecto a volumen y EDTA 0,05 mM; y una tercera formulación de heptahidrato de fosfato de sodio dibásico 26 mM, el 15 % en peso de sacarosa con respecto a volumen y el 0,065 % en peso de polisorbato 80 con respecto a volumen. La composición puede estar a un pH de entre aproximadamente 6,8 y aproximadamente 7,2, de aproximadamente 6,1 a aproximadamente 6,5 o de aproximadamente 6 a aproximadamente 6,6.

[0270] En otra realización, el anticuerpo tiene una constante de disociación igual a, o de menos de, aproximadamente 3,5x10<-11>M para interleucina 5 humana que comprende la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 11.

[0271] Otro aspecto de la divulgación es una composición que comprende a) un anticuerpo anti-IL-5 que comprende una secuencia de cadena pesada que tiene al menos el 90 % de identidad con respecto a la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 1 y una secuencia de cadena ligera que tiene al menos el 90 % de identidad con respecto a la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 2; y b) una forma principal del anticuerpo que comprende más del, o igual al, 50 % de la proteína en la composición tal como se mide usando isoelectroenfoque capilar de la composición. La forma principal del anticuerpo también puede comprender más del, o igual al, 57,9 %, 59,4 % y 60 % de la proteína en la composición tal como se mide usando isoelectroenfoque capilar de la composición.

[0272] En otra realización, la forma principal del anticuerpo comprende al menos un residuo de aminoácido oxidado seleccionado del grupo que consiste en un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en el triptófano 52, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 64, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 82, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 85, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la cisteína 222, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 254, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 360, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 430, un residuo de aminoácido de cadena ligera oxidado en la metionina 4 y un residuo de aminoácido de cadena ligera oxidado en la cisteína 220.

[0274] Otro aspecto de la divulgación es una composición que comprende a) un anticuerpo anti-IL-5 que comprende una secuencia de cadena pesada que tiene al menos el 90 % de identidad con respecto a la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 1 y una secuencia de cadena ligera que tiene al menos el 90 % de identidad con respecto a la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 2; b) una forma principal del anticuerpo que comprende más del, o igual al, 50 % de la proteína en la composición tal como se mide usando isoelectroenfoque capilar de la composición; y c) formas ácidas del anticuerpo que comprenden de aproximadamente el 20 % a aproximadamente el 45 % de la proteína en la composición tal como se mide usando isoelectroenfoque capilar de la composición. Las formas ácidas del anticuerpo también pueden comprender más del, o igual al, 37,6 %, 37,8 %, 38,4 % y 39,8 % de la proteína en la composición tal como se mide usando isoelectroenfoque capilar de la composición. El área de pico ácido total determinada mediante cIEF puede ser de hasta el 72 % y todavía conservar 0,74 de unión específica a IL-5 y el 80 % de unión a FcRn.

[0276] En otra realización, las formas ácidas del anticuerpo comprenden al menos uno seleccionado del grupo que consiste en una forma ácida de pico 65, una forma ácida de pico 78, una forma ácida de pico 88 y una forma ácida de pico 92.

[0277] En otra realización, las formas ácidas del anticuerpo comprenden al menos un residuo de aminoácido desamidado seleccionado del grupo que consiste en un residuo de aminoácido de cadena pesada desamidado en la asparagina 299, un residuo de aminoácido de cadena pesada desamidado en la asparagina 317, un residuo de aminoácido de cadena pesada desamidado en la asparagina 386 y un residuo de aminoácido de cadena ligera desamidado en la asparagina 31. Un nivel aceptable de desamidación en N31 de CL es de más del, o igual al, 17 %, o más del, o igual al, 17,4 % tal como se mide mediante CL-EM/EM de mapeo peptídico. Un nivel aceptable de desamidación en 386 de HC es de más del, o igual al, 30 % tal como se mide mediante CL-EM/EM de mapeo peptídico. El nivel superior aceptable puede ser el nivel de una variante particular que permite que las moléculas de anticuerpo en la composición conserven actividad de unión a antígeno de aproximadamente 0,70 a aproximadamente 1,30 tal como se mide mediante SPR y actividad de unión a FcRn de aproximadamente el 70 % a aproximadamente el 130 % tal como se mide mediante SPR u otros valores, o intervalos, de actividad de unión a antígeno o actividad de unión a FcRn dados a conocer en el presente documento.

[0279] En otra realización, las formas ácidas del anticuerpo comprenden al menos un residuo de aminoácido oxidado seleccionado del grupo que consiste en un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en el triptófano 52, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 64, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 82, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 85, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la cisteína 222, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 254,a residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 360, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 430, un residuo de aminoácido de cadena ligera oxidado en la metionina 4 y un residuo de aminoácido de cadena ligera oxidado en la cisteína 220. Los niveles aceptables de oxidación en los residuos de cadena pesada del anticuerpo tal como se mide mediante CL-EM/EM de mapeo peptídico pueden ser de aproximadamente el 50 % para M64, M254, y M430 de HC, y de aproximadamente el 3 % para W52 de HC. El nivel superior aceptable puede ser el nivel de una variante particular que permite que las moléculas de anticuerpo en la composición conserven actividad de unión a antígeno de aproximadamente 0,70 a aproximadamente 1,30 tal como se mide mediante SPR y actividad de unión a FcRn de aproximadamente el 70 % a aproximadamente el 130 % tal como se mide mediante SPR u otros valores, o intervalos, de actividad de unión a antígeno o actividad de unión a FcRn dados a conocer en el presente documento.

[0281] En otra realización, la forma principal del anticuerpo comprende al menos un residuo de aminoácido oxidado seleccionado del grupo que consiste en un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en el triptófano 52, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 64, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 82, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 85, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la cisteína 222, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 254, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 360, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 430, un residuo de aminoácido de cadena ligera oxidado en la metionina 4 y un residuo de aminoácido de cadena ligera oxidado en la cisteína 220; y las formas ácidas del anticuerpo comprenden al menos un residuo de aminoácido oxidado seleccionado del grupo que consiste en un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en el triptófano 52, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 64, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 82, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 85, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la cisteína 222, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 254, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 360, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 430, un residuo de aminoácido de cadena ligera oxidado en la metionina 4 y un residuo de aminoácido de cadena ligera oxidado en la cisteína 220.

[0283] Otro aspecto de la divulgación es una composición que comprende a) un anticuerpo anti-IL-5 que comprende una secuencia de cadena pesada que tiene al menos el 90 % de identidad con respecto a la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 1 y una secuencia de cadena ligera que tiene al menos el 90 % de identidad con respecto a la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 2; b) una forma principal del anticuerpo que comprende más del, o igual al, 50 % de la proteína en la composición tal como se mide usando isoelectroenfoque capilar de la composición; y c) una forma básica del anticuerpo que comprende de aproximadamente el 1 % a aproximadamente el 15 % de la proteína en la composición tal como se mide usando isoelectroenfoque capilar de la composición. La forma básica del anticuerpo también puede comprender más del, o igual al, 2,2 % y el 2,3 % de la proteína en la composición tal como se mide usando isoelectroenfoque capilar de la composición.

[0285] En otra realización, la forma básica del anticuerpo comprende una forma básica de pico 112.

[0287] En otra realización, la forma básica del anticuerpo comprende una cadena pesada que tiene un residuo carboxiloterminal que es glicina 448.

[0289] En otra realización, las formas básicas del anticuerpo comprenden al menos un residuo de aminoácido oxidado seleccionado del grupo que consiste en un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en el triptófano 52, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 64, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 82, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 85, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la cisteína 222, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 254, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 360, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 430, un residuo de aminoácido de cadena ligera oxidado en la metionina 4 y un residuo de aminoácido de cadena ligera oxidado en la cisteína 220.

[0291] En otra realización, la forma principal del anticuerpo comprende al menos un residuo de aminoácido oxidado seleccionado del grupo que consiste en un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en el triptófano 52, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 64, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 82, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 85, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la cisteína 222, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 254, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 360, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 430, un residuo de aminoácido de cadena ligera oxidado en la metionina 4 y un residuo de aminoácido de cadena ligera oxidado en la cisteína 220; y las formas básicas del anticuerpo comprenden al menos un residuo de aminoácido oxidado seleccionado del grupo que consiste en un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en el triptófano 52, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 64, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 82, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 85, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la cisteína 222, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 254, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 360, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 430, un residuo de aminoácido de cadena ligera oxidado en la metionina 4 y un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la cisteína 222.

[0293] Otro aspecto de la divulgación es una composición que comprende a) un anticuerpo anti-IL-5 que comprende una secuencia de cadena pesada que tiene al menos el 90 % de identidad con respecto a la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 1 y una secuencia de cadena ligera que tiene al menos el 90 % de identidad con respecto a la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 2; b) una forma principal del anticuerpo que comprende más del, o igual al, 50 % de la proteína en la composición tal como se mide usando isoelectroenfoque capilar de la composición; c) formas ácidas del anticuerpo que comprenden de aproximadamente el 20 % a aproximadamente el 45 % de la proteína en la composición tal como se mide usando isoelectroenfoque capilar de la composición; y d) una forma básica del anticuerpo que comprende de aproximadamente el 1 % a aproximadamente el 15 % de la proteína en la composición tal como se mide usando isoelectroenfoque capilar de la composición.

[0295] En otra realización, las formas ácidas del anticuerpo comprenden al menos un residuo de aminoácido oxidado seleccionado del grupo que consiste en un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en el triptófano 52, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 64, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 82, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 85, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la cisteína 222, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 254, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 360, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 430, un residuo de aminoácido de cadena ligera oxidado en la metionina 4 y un residuo de aminoácido de cadena ligera oxidado en la cisteína 220; y las formas básicas del anticuerpo comprenden al menos un residuo de aminoácido oxidado seleccionado del grupo que consiste en un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en el triptófano 52, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 64, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 82, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 85, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la cisteína 222, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 254, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 360, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 430, un residuo de aminoácido de cadena ligera oxidado en la metionina 4 y un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la cisteína 222.

[0297] En otra realización, la forma principal del anticuerpo comprende al menos un residuo de aminoácido oxidado seleccionado del grupo que consiste en un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en el triptófano 52, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 64, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 82, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 85, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la cisteína 222, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 254, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 360, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 430, un residuo de aminoácido de cadena ligera oxidado en la metionina 4 y un residuo de aminoácido de cadena ligera oxidado en la cisteína 220; las formas ácidas del anticuerpo comprenden al menos un residuo de aminoácido oxidado seleccionado del grupo que consiste en un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en el triptófano 52, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 64, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 82, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 85, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la cisteína 222, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 254, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 360, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 430, un residuo de aminoácido de cadena ligera oxidado en la metionina 4 y un residuo de aminoácido de cadena ligera oxidado en la cisteína 220; y en la que las formas básicas del anticuerpo comprenden al menos un residuo de aminoácido oxidado seleccionado del grupo que consiste en un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en el triptófano 52, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 64, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 82, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 85, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la cisteína 222, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 254, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 360, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 430, un residuo de aminoácido de cadena ligera oxidado en la metionina 4 y un residuo de aminoácido de cadena ligera oxidado en la cisteína 220.

[0299] Otro aspecto de la divulgación es una composición que comprende a) un anticuerpo anti-IL-5 que comprende una secuencia de cadena pesada que tiene al menos el 90 % de identidad con respecto a la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 1 y una secuencia de cadena ligera que tiene al menos el 90 % de identidad con respecto a la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 2; y b) formas desamidadas del anticuerpo que comprenden al menos uno seleccionado del grupo que consiste en un residuo de aminoácido de cadena pesada desamidado en la asparagina 299, un residuo de aminoácido de cadena pesada desamidado en la asparagina 317, un residuo de aminoácido de cadena pesada desamidado en la asparagina 386 y un residuo de aminoácido de cadena ligera desamidado en la asparagina 31.

[0301] Otro aspecto de la divulgación es una composición que comprende a) un anticuerpo anti-IL-5 que comprende una secuencia de cadena pesada que tiene al menos el 90 % de identidad con respecto a la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 1 y una secuencia de cadena ligera que tiene al menos el 90 % de identidad con respecto a la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 2; y b) formas oxidadas del anticuerpo que comprenden al menos uno seleccionado del grupo que consiste en un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en el triptófano 52, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 64, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 82, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 85, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la cisteína 222, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 254, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 360, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 430, un residuo de aminoácido de cadena ligera oxidado en la metionina 4 y un residuo de aminoácido de cadena ligera oxidado en la cisteína 220.

[0303] Otro aspecto de la divulgación es una composición que comprende a) un anticuerpo anti-IL-5 que comprende una secuencia de cadena pesada que tiene al menos el 90 % de identidad con respecto a la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 1 y una secuencia de cadena ligera que tiene al menos el 90 % de identidad con respecto a la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 2; b) formas desamidadas del anticuerpo que comprenden al menos uno seleccionado del grupo que consiste en un residuo de aminoácido de cadena pesada desamidado en la asparagina 299, un residuo de aminoácido de cadena pesada desamidado en la asparagina 317, un residuo de aminoácido de cadena pesada desamidado en la asparagina 386 y un residuo de aminoácido de cadena ligera desamidado en la asparagina 31; y c) formas oxidadas del anticuerpo que comprenden al menos uno seleccionado del grupo que consiste en un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en el triptófano 52, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 64, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 82, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 85, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la cisteína 222, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 254, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 360, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 430, un residuo de aminoácido de cadena ligera oxidado en la metionina 4 y un residuo de aminoácido de cadena ligera oxidado en la cisteína 220.

[0304] Otro aspecto de la divulgación es una composición que comprende a) un anticuerpo anti-IL-5 que comprende una región variable de cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos de CDRH1 mostrada en SEQ ID NO: 5, la secuencia de aminoácidos de CDRH2 mostrada en SEQ ID NO: 6, y la secuencia de aminoácidos de CDRH3 mostrada en SEQ ID NO: 7; y una región variable de cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos de CDRL1 mostrada en SEQ ID NO: 8, la secuencia de aminoácidos de CDRL2 mostrada en SEQ ID NO: 9, y la secuencia de aminoácidos de CDRL3 mostrada en SEQ ID NO: 10; y b) formas desamidadas del anticuerpo que comprenden un residuo de aminoácido de cadena ligera desamidado en la asparagina 31. En la composición, CDRH2 puede comprender una secuencia de aminoácidos que tiene al menos el 85 % o el 87,5 % de identidad con respecto a la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 6. En la composición, CDRL1 puede comprender una secuencia de aminoácidos que tiene el 93 %, el 94 % o el 94,11 % de identidad con respecto a la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 8. Otro aspecto de la divulgación es una composición que comprende a) un anticuerpo anti-IL-5 que comprende una región variable de cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos de CDRH1 mostrada en SEQ ID NO: 5, la secuencia de aminoácidos de CDRH2 mostrada en SEQ ID NO: 6, y la secuencia de aminoácidos de CDRH3 mostrada en SEQ ID NO: 7; y una región variable de cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos de CDRL1 mostrada en SEQ ID NO: 8, la secuencia de aminoácidos de CDRL2 mostrada en SEQ ID NO: 9, y la secuencia de aminoácidos de CDRL3 mostrada en SEQ ID NO: 10; y b) formas oxidadas del anticuerpo que comprenden un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 64.

[0305] Otro aspecto de la divulgación es una composición que comprende a) un anticuerpo anti-IL-5 que comprende una región variable de cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos de CDRH1 mostrada en SEQ ID NO: 5, la secuencia de aminoácidos de CDRH2 mostrada en SEQ ID NO: 6, y la secuencia de aminoácidos de CDRH3 mostrada en SEQ ID NO: 7; y una región variable de cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos de CDRL1 mostrada en SEQ ID NO: 8, la secuencia de aminoácidos de CDRL2 mostrada en SEQ ID NO: 9, y la secuencia de aminoácidos de CDRL3 mostrada en SEQ ID NO: 10; y b) formas oxidadas del anticuerpo que comprenden un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 64; y c) formas desamidadas del anticuerpo que comprenden un residuo de aminoácido de cadena ligera desamidado en la asparagina 31.

[0306] Otro aspecto de la divulgación es una composición que comprende a) un anticuerpo anti-IL-5 que comprende una secuencia de región variable de cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 3 y una secuencia de región variable de cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 4; y b) formas desamidadas del anticuerpo que comprenden un residuo de aminoácido de cadena ligera desamidado en la asparagina 31. En la composición, la región variable de cadena pesada puede comprender una secuencia de aminoácidos que tiene al menos el 90 %, el 95 % o el 95,57 % de identidad con respecto a la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 3. En la composición, la región variable de cadena ligera puede comprender una secuencia de aminoácidos que tiene al menos el 90 %, el 98 % o el 98,31 % de identidad con respecto a la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 3.

[0307] Otro aspecto de la divulgación es una composición que comprende a) un anticuerpo anti-IL-5 que comprende una secuencia de región variable de cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 3 y una secuencia de región variable de cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 4; y b) formas oxidadas del anticuerpo que comprenden al menos uno seleccionado del grupo que consiste en un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en el triptófano 52, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 64, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 82, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 85 y un residuo de aminoácido de cadena ligera oxidado en la metionina 4.

[0308] Otro aspecto de la divulgación es una composición que comprende a) un anticuerpo anti-IL-5 que comprende una secuencia de región variable de cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 3 y una secuencia de región variable de cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 4; b) formas desamidadas del anticuerpo que comprenden un residuo de aminoácido de cadena ligera desamidado en la asparagina 31; y c) formas oxidadas del anticuerpo que comprenden al menos uno seleccionado del grupo que consiste en un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en el triptófano 52, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 64, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 82, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 85 y un residuo de aminoácido de cadena ligera oxidado en la metionina 4.

[0309] En otra realización, la concentración de proteína total es de aproximadamente 75 mg/ml. La concentración de proteína total también puede ser de aproximadamente cualquier par de valores, o valor individual en el intervalo de aproximadamente 75 mg/ml a aproximadamente 150 mg/ml tal como de aproximadamente 75 mg/ml a aproximadamente 100 mg/ml, de aproximadamente 67,3 a aproximadamente 87,5 mg/ml, de aproximadamente 76 g de proteína/l a aproximadamente 82 g de proteína/l, de aproximadamente 46 g de proteína/l a aproximadamente 66 g de proteína/l o de aproximadamente 100 mg/ml. En las composiciones, la pureza de los anticuerpos anti-IL-5 humana en la muestra es de más del, o igual al, 97,0 %, 96 %, 95 %, o 80 %, 85 %.

[0310] En otra realización, la composición comprende además a) una forma principal del anticuerpo que comprende más del, o igual al, 50 % de la proteína en la composición tal como se mide usando isoelectroenfoque capilar de la composición.

[0311] En otra realización, la composición comprende además a) una forma principal del anticuerpo que comprende más del, o igual al, 50 % de la proteína en la composición tal como se mide usando isoelectroenfoque capilar de la composición; y b) formas ácidas del anticuerpo que comprenden de aproximadamente el 20 % a aproximadamente el 45 % de la proteína en la composición tal como se mide usando isoelectroenfoque capilar de la composición.

[0313] En otra realización, la composición comprende además a) una forma principal del anticuerpo que comprende más del, o igual al, 50 % de la proteína en la composición tal como se mide usando isoelectroenfoque capilar de la composición; y b) una forma básica del anticuerpo que comprende de aproximadamente el 1 % a aproximadamente el 15 % de la proteína en la composición tal como se mide usando isoelectroenfoque capilar de la composición.

[0315] En otra realización, la composición de comprende además a) una forma principal del anticuerpo que comprende más del, o igual al, 50 % de la proteína en la composición tal como se mide usando isoelectroenfoque capilar de la composición; b) formas ácidas del anticuerpo que comprenden de aproximadamente el 20 % a aproximadamente el 45 % de la proteína en la composición tal como se mide usando isoelectroenfoque capilar de la composición; y c) una forma básica del anticuerpo que comprende de aproximadamente el 1 % a aproximadamente el 15 % de la proteína en la composición tal como se mide usando isoelectroenfoque capilar de la composición.

[0317] Otro aspecto de la divulgación es una composición que comprende una población de anticuerpos anti-IL-5 que tienen a) una forma modificada de la secuencia de aminoácidos de cadena pesada de anticuerpo mostrada en SEQ ID NO: 1 que comprende al menos una modificación de residuo de aminoácido seleccionada del grupo que consiste en un residuo de piroglutamato amino-terminal en el residuo de aminoácido 1, un residuo de aminoácido de glicina carboxiloterminal en el residuo de aminoácido 448, un residuo de asparagina desamidada en la posición 299, un residuo de asparagina desamidada en la posición 317, un residuo de asparagina desamidada en la posición 386, un residuo de triptófano oxidado en la posición 52, un residuo de metionina oxidada en la posición 64, un residuo de metionina oxidada en la posición 82, un residuo de metionina oxidada en la posición 85, un residuo de cisteína oxidada en la posición 222, una metionina oxidada en la posición 254, una metionina oxidada en la posición 360 y un residuo de metionina oxidada en la posición 430; y b) una forma modificada de la secuencia de aminoácidos de cadena ligera de anticuerpo mostrada en SEQ ID NO: 2 que comprende al menos una modificación de residuo de aminoácido seleccionada del grupo que consiste en un residuo de asparagina desamidada en el residuo de aminoácido 31, un residuo de metionina oxidada en la posición 4 y un residuo de cisteína oxidada en la posición 220.

[0319] En otra realización, la composición comprende a) aproximadamente más del, o igual al, 92 % de la población comprende un residuo de piroglutamato amino-terminal en el residuo de aminoácido 1 de la cadena pesada de anticuerpo, b) aproximadamente más del, o igual al, 90 % de la población comprende un residuo de aminoácido de glicina carboxilo-terminal en el residuo de aminoácido 448 de la cadena pesada de anticuerpo, c) menos del, o igual al, 6,0 % de la población comprende un residuo de asparagina desamidada en la posición 386 de la cadena pesada de anticuerpo; d) aproximadamente menos del, o igual al, 1,5 % de la población comprende un residuo de metionina oxidada en la posición 64 de la cadena pesada de anticuerpo, e) aproximadamente menos del, o igual al, 4,5 % de la población comprende una metionina oxidada en la posición 254 de la cadena pesada de anticuerpo, f) aproximadamente menos del, o igual al, 0,8 % de la población comprende un residuo de metionina oxidada en la posición 430 de la cadena pesada de anticuerpo, y g) aproximadamente menos del, o igual al, 6,6 % de la población comprende un residuo de asparagina desamidada en el residuo de aminoácido 31 de la cadena ligera de anticuerpo.

[0320] En otra realización, la composición comprende a) de aproximadamente el 92 % a aproximadamente el 99 % de la población comprende un residuo de piroglutamato amino-terminal en el residuo de aminoácido 1 de la cadena pesada de anticuerpo, b) de aproximadamente el 95 % a aproximadamente el 99,5 % de la población comprende un residuo de aminoácido de glicina carboxilo-terminal en el residuo de aminoácido 448 de la cadena pesada de anticuerpo, c) de aproximadamente el 0,3 % a aproximadamente el 1,5 % de la población comprende un residuo de asparagina desamidada en la posición 317 de la cadena pesada de anticuerpo, d) de aproximadamente el 1,5 % a aproximadamente el 4,5 % de la población comprende un residuo de asparagina desamidada en la posición 386 de la cadena pesada de anticuerpo; e) de aproximadamente el 0,5 % a aproximadamente el 1,5 % de la población comprende un residuo de metionina oxidada en la posición 64 de la cadena pesada de anticuerpo, f) de aproximadamente el 0,2 % a aproximadamente el 1,5 % de la población comprende un residuo de metionina oxidada en la posición 82 de la cadena pesada de anticuerpo o un residuo de metionina oxidada en la posición 85 de la cadena pesada de anticuerpo, g) de aproximadamente el 2,5 % a aproximadamente el 3,5 % de la población comprende una metionina oxidada en la posición 254 de la cadena pesada de anticuerpo, h) de aproximadamente el 0,4 % a aproximadamente el 0,8 % de la población comprende un residuo de metionina oxidada en la posición 430 de la cadena pesada de anticuerpo, i) de aproximadamente el 3,3 % a aproximadamente el 6,6 % de la población comprende un residuo de asparagina desamidada en el residuo de aminoácido 31 de la cadena ligera de anticuerpo, y j) de aproximadamente el 0,1 % a aproximadamente el 1 % de la población comprende un residuo de metionina oxidada en la posición 4 de la cadena ligera de anticuerpo.

[0322] En otra realización, la composición comprende: a) de aproximadamente el 93,7 % a aproximadamente el 98,6 % de la población comprende un residuo de piroglutamato amino-terminal en el residuo de aminoácido 1 de la cadena pesada de anticuerpo, b) de aproximadamente el 97,6 % a aproximadamente el 99,2 % de la población comprende un residuo de aminoácido de glicina carboxilo-terminal en el residuo de aminoácido 448 de la cadena pesada de anticuerpo, c) de aproximadamente el 0,4 % a aproximadamente el 1,2 % de la población comprende un residuo de asparagina desamidada en la posición 317 de la cadena pesada de anticuerpo, d) de aproximadamente el 1,6 % a aproximadamente el 4,2 % de la población comprende un residuo de asparagina desamidada en la posición 386 de la cadena pesada de anticuerpo; e) de aproximadamente el 0,7 % a aproximadamente el 0,9 % de la población comprende un residuo de metionina oxidada en la posición 64 de la cadena pesada de anticuerpo, f) de aproximadamente el 0,3 % a aproximadamente el 1,1 % de la población comprende un residuo de metionina oxidada en la posición 82 de la cadena pesada de anticuerpo o un residuo de metionina oxidada en la posición 85 de la cadena pesada de anticuerpo, g) de aproximadamente el 2,6 % a aproximadamente el 3,3 % de la población comprende una metionina oxidada en la posición 254 de la cadena pesada de anticuerpo, h) de aproximadamente el 0,5 % a aproximadamente el 0,7 % de la población comprende un residuo de metionina oxidada en la posición 430 de la cadena pesada de anticuerpo, i) de aproximadamente el 3,4 % a aproximadamente el 6,5 % de la población comprende un residuo de asparagina desamidada en el residuo de aminoácido 31 de la cadena ligera de anticuerpo, y j) de aproximadamente el 0,2 % a aproximadamente el 0,8 % de la población comprende un residuo de metionina oxidada en la posición 4 de la cadena ligera de anticuerpo.

[0324] Otro aspecto de la divulgación es una composición que comprende una población de anticuerpos anti-IL-5 que tienen a) una forma modificada de la secuencia de aminoácidos de cadena pesada de anticuerpo mostrada en SEQ ID NO: 1 que comprende al menos una modificación de residuo de aminoácido seleccionada del grupo que consiste en un residuo de asparagina desamidada en la posición 299, un residuo de asparagina desamidada en la posición 317, un residuo de asparagina desamidada en la posición 386, un residuo de triptófano oxidado en la posición 52, un residuo de metionina oxidada en la posición 64, un residuo de metionina oxidada en la posición 82, un residuo de metionina oxidada en la posición 85, un residuo de cisteína oxidada en la posición 222, una metionina oxidada en la posición 254, una metionina oxidada en la posición 360 y un residuo de metionina oxidada en la posición 430; y b) una forma modificada de la secuencia de aminoácidos de cadena ligera de anticuerpo mostrada en SEQ ID NO: 2 que comprende al menos una modificación de residuo de aminoácido seleccionada del grupo que consiste en un residuo de asparagina desamidada en el residuo de aminoácido 31, un residuo de metionina oxidada en la posición 4 y un residuo de cisteína oxidada en la posición 222.

[0326] En otra realización, la composición comprende: a) de aproximadamente el 0,3 % a aproximadamente el 1,5 % de la población comprende un residuo de asparagina desamidada en la posición 317 de la cadena pesada de anticuerpo, b) de aproximadamente el 1,5 % a aproximadamente el 4,5 % de la población comprende un residuo de asparagina desamidada en la posición 386 de la cadena pesada de anticuerpo; c) de aproximadamente el 0,5 % a aproximadamente el 1,5 % de la población comprende un residuo de metionina oxidada en la posición 64 de la cadena pesada de anticuerpo, d) de aproximadamente el 0,2 % a aproximadamente el 1,5 % de la población comprende un residuo de metionina oxidada en la posición 82 de la cadena pesada de anticuerpo o un residuo de metionina oxidada en la posición 85 de la cadena pesada de anticuerpo, e) de aproximadamente el 2,5 % a aproximadamente el 3,5 % de la población comprende una metionina oxidada en la posición 254 de la cadena pesada de anticuerpo, f) de aproximadamente el 0,4 % a aproximadamente el 0,8 % de la población comprende un residuo de metionina oxidada en la posición 430 de la cadena pesada de anticuerpo, g) de aproximadamente el 3,3 % a aproximadamente el 6,6 % de la población comprende un residuo de asparagina desamidada en el residuo de aminoácido 31 de la cadena ligera de anticuerpo, y h) de aproximadamente el 0,1 % a aproximadamente el 1 % de la población comprende un residuo de metionina oxidada en la posición 4 de la cadena ligera de anticuerpo.

[0328] En otra realización, la composición comprende: a) de aproximadamente el 0,4 % a aproximadamente el 1,2 % de la población comprende un residuo de asparagina desamidada en la posición 317 de la cadena pesada de anticuerpo, b) de aproximadamente el 1,6 % a aproximadamente el 4,2 % de la población comprende un residuo de asparagina desamidada en la posición 386 de la cadena pesada de anticuerpo; c) de aproximadamente el 0,7 % a aproximadamente el 0,9 % de la población comprende un residuo de metionina oxidada en la posición 64 de la cadena pesada de anticuerpo, d) de aproximadamente el 0,3 % a aproximadamente el 1,1 % de la población comprende un residuo de metionina oxidada en la posición 82 de la cadena pesada de anticuerpo o un residuo de metionina oxidada en la posición 85 de la cadena pesada de anticuerpo, e) de aproximadamente el 2,6 % a aproximadamente el 3,3 % de la población comprende una metionina oxidada en la posición 254 de la cadena pesada de anticuerpo, f) de aproximadamente el 0,5 % a aproximadamente el 0,7 % de la población comprende un residuo de metionina oxidada en la posición 430 de la cadena pesada de anticuerpo, g) de aproximadamente el 3,4 % a aproximadamente el 6,5 % de la población comprende un residuo de asparagina desamidada en el residuo de aminoácido 31 de la cadena ligera de anticuerpo, y h) de aproximadamente el 0,2 % a aproximadamente el 0,8 % de la población comprende un residuo de metionina oxidada en la posición 4 de la cadena ligera de anticuerpo.

[0329] Otro aspecto de la divulgación es una composición que comprende una población de anticuerpos anti-IL-5 que tienen a) una forma modificada de la secuencia de aminoácidos de cadena pesada de anticuerpo mostrada en SEQ ID NO: 1 que comprende al menos una modificación de residuo de aminoácido seleccionada del grupo que consiste en un residuo de asparagina desamidada en la posición 299, un residuo de asparagina desamidada en la posición 317 y un residuo de asparagina desamidada en la posición 386; y b) una forma modificada de la secuencia de aminoácidos de cadena ligera de anticuerpo mostrada en SEQ ID NO: 2 que comprende un residuo de asparagina desamidada en el residuo de aminoácido 31.

[0331] En otra realización, la composición comprende: a) de aproximadamente el 0,3 % a aproximadamente el 1,5 % de la población comprende un residuo de asparagina desamidada en la posición 317 de la cadena pesada de anticuerpo, b) de aproximadamente el 1,5 % a aproximadamente el 4,5 % de la población comprende un residuo de asparagina desamidada en la posición 386 de la cadena pesada de anticuerpo; y c) de aproximadamente el 3,3 % a aproximadamente el 6,6 % de la población comprende un residuo de asparagina desamidada en el residuo de aminoácido 31 de la cadena ligera de anticuerpo.

[0333] En otra realización, la composición comprende: a) de aproximadamente el 0,4 % a aproximadamente el 1,2 % de la población comprende un residuo de asparagina desamidada en la posición 317 de la cadena pesada de anticuerpo, b) de aproximadamente el 1,6 % a aproximadamente el 4,2 % de la población comprende un residuo de asparagina desamidada en la posición 386 de la cadena pesada de anticuerpo; y c) de aproximadamente el 3,4 % a aproximadamente el 6,5 % de la población comprende un residuo de asparagina desamidada en el residuo de aminoácido 31 de la cadena ligera de anticuerpo.

[0335] Otro aspecto de la divulgación es una composición que comprende una población de anticuerpos anti-IL-5 que tienen a) una forma modificada de la secuencia de aminoácidos de cadena pesada de anticuerpo mostrada en SEQ ID NO: 1 que comprende al menos una modificación de residuo de aminoácido seleccionada del grupo que consiste en un residuo de triptófano oxidado en la posición 52, un residuo de metionina oxidada en la posición 64, un residuo de metionina oxidada en la posición 82, un residuo de metionina oxidada en la posición 85, un residuo de cisteína oxidada en la posición 222, una metionina oxidada en la posición 254, una metionina oxidada en la posición 360 y un residuo de metionina oxidada en la posición 430; y b) una forma modificada de la secuencia de aminoácidos de cadena ligera de anticuerpo mostrada en SEQ ID NO: 2 que comprende al menos una modificación de residuo de aminoácido seleccionada del grupo que consiste en un residuo de metionina oxidada en la posición 4 y un residuo de cisteína oxidada en la posición 220.

[0337] En otra realización, la composición comprende: a) de aproximadamente el 0,5 % a aproximadamente el 1,5 % de la población comprende un residuo de metionina oxidada en la posición 64 de la cadena pesada de anticuerpo, b) de aproximadamente el 0,2 % a aproximadamente el 1,5 % de la población comprende un residuo de metionina oxidada en la posición 82 de la cadena pesada de anticuerpo o un residuo de metionina oxidada en la posición 85 de la cadena pesada de anticuerpo, c) de aproximadamente el 2,5 % a aproximadamente el 3,5 % de la población comprende una metionina oxidada en la posición 254 de la cadena pesada de anticuerpo, d) de aproximadamente el 0,4 % a aproximadamente el 0,8 % de la población comprende un residuo de metionina oxidada en la posición 430 de la cadena pesada de anticuerpo, y e) de aproximadamente el 0,1 % a aproximadamente el 1 % de la población comprende un residuo de metionina oxidada en la posición 4 de la cadena ligera de anticuerpo.

[0339] En otra realización, la composición comprende: a) de aproximadamente el 0,7 % a aproximadamente el 0,9 % de la población comprende un residuo de metionina oxidada en la posición 64 de la cadena pesada de anticuerpo, b) de aproximadamente el 0,3 % a aproximadamente el 1,1 % de la población comprende un residuo de metionina oxidada en la posición 82 de la cadena pesada de anticuerpo o un residuo de metionina oxidada en la posición 85 de la cadena pesada de anticuerpo, c) de aproximadamente el 2,6 % a aproximadamente el 3,3 % de la población comprende una metionina oxidada en la posición 254 de la cadena pesada de anticuerpo, d) de aproximadamente el 0,5 % a aproximadamente el 0,7 % de la población comprende un residuo de metionina oxidada en la posición 430 de la cadena pesada de anticuerpo, y e) de aproximadamente el 0,2 % a aproximadamente el 0,8 % de la población comprende un residuo de metionina oxidada en la posición 4 de la cadena ligera de anticuerpo.

[0341] Otro aspecto de la divulgación es una composición que comprende a) un anticuerpo anti-IL-5 que comprende una secuencia de cadena pesada que tiene al menos el 90 % de identidad con respecto a la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 1 y una secuencia de cadena ligera que tiene al menos el 90 % de identidad con respecto a la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 2; y b) una forma principal del anticuerpo que comprende más del, o igual al, 20 % de la proteína en la composición tal como se mide usando isoelectroenfoque capilar de la composición.

[0343] Otro aspecto de la divulgación es una composición que comprende a) un anticuerpo anti-IL-5 que comprende una secuencia de cadena pesada que tiene al menos el 90 % de identidad con respecto a la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 1 y una secuencia de cadena ligera que tiene al menos el 90 % de identidad con respecto a la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 2; b) una forma principal del anticuerpo que comprende más del, o igual al, 20 % de la proteína en la composición tal como se mide usando isoelectroenfoque capilar de la composición; y c) formas ácidas del anticuerpo que comprenden hasta aproximadamente el 80 % de la proteína en la composición tal como se mide usando isoelectroenfoque capilar de la composición.

[0345] Las referencias a métodos de tratamiento en los siguientes párrafos de esta descripción deben interpretarse como referencias a los compuestos, las composiciones farmacéuticas o los medicamentos de la presente invención para su uso en un método de tratamiento del cuerpo humano (o animal) mediante terapia (o para diagnóstico). En otra realización, la composición es para el tratamiento de una enfermedad seleccionada del grupo que consiste en asma, asma eosinofílica intensa, asma intensa, asma eosinofílica no controlada, asma eosinofílica, asma sub-eosinofílica, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, granulomatosis eosinofílica con poliangitis, síndrome hipereosinofílico, poliposis nasal, penfigoide ampolloso y esofagitis eosinofílica.

[0347] Otra realización es un método de tratamiento de una enfermedad en un sujeto que comprende las etapas de a) identificar a un sujeto con una enfermedad seleccionada del grupo que consiste en asma, asma eosinofílica intensa, asma intensa, asma eosinofílica no controlada, asma eosinofílica, asma sub-eosinofílica, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, granulomatosis eosinofílica con poliangitis, síndrome hipereosinofílico, poliposis nasal, penfigoide ampolloso y esofagitis eosinofílica; y b) administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de una composición según la divulgación al sujeto; mediante lo cual se trata la enfermedad en el sujeto.

[0349] Otra realización es un método de producción de una composición de la divulgación, que comprende las etapas de: a) expresar en una célula huésped un anticuerpo que tiene una secuencia de aminoácidos de cadena pesada tal como se muestra en SEQ ID NO: 1 y una secuencia de aminoácidos de cadena ligera tal como se muestra en SEQ ID NO: 2, o una variante de anticuerpo que tiene una secuencia de aminoácidos de cadena pesada idéntica en al menos el 90 % a la secuencia de aminoácidos de cadena pesada y/o una secuencia de aminoácidos de cadena ligera idéntica en al menos el 90 % a la secuencia de aminoácidos de cadena ligera; b) hacer crecer las células a un pH de aproximadamente 6,75 a aproximadamente 7,00; c) recoger un sobrenadante de cultivo celular; d) colocar el sobrenadante de cultivo celular en contacto con una resina de proteína A o resina de proteína G para unirse a moléculas de anticuerpo; e) eluir las moléculas de anticuerpo a partir de la resina para producir un primer eluato; f) tratar el primer eluato a un pH de aproximadamente 3,3 a aproximadamente 3,7 durante de aproximadamente 15 a aproximadamente 240 minutos para producir un primer eluato tratado; g) colocar el primer eluato tratado en contacto con una resina de intercambio aniónico a un pH de carga de aproximadamente 8,3 a aproximadamente 8,7; h) recoger un segundo eluato (un eluato de flujo a través) a partir de la resina de intercambio aniónico y conservar esto durante aproximadamente 96 horas o menos; i) tratar el segundo eluato con guanidina y sulfato de amonio para producir una disolución; j) colocar la disolución en contacto con un lecho de resina de cromatografía de interacción hidrófoba a una razón de carga de aproximadamente 12 g de proteína/l de resina a aproximadamente 27 g de proteína/l de resina load ratio; k) eluir un tercer eluato que comprende las moléculas de anticuerpo a partir de la resina de cromatografía de interacción hidrófoba con un volumen de gradiente de elución de aproximadamente 9 volúmenes de lecho de resina a aproximadamente 11 volúmenes de lecho de resina y un tope de corte de pico de elución de aproximadamente el 17 % de la altura de pico máxima a aproximadamente el 23 % de la altura de pico máxima; y l) formular el tercer eluato; mediante lo cual se produce una composición de la divulgación. En los métodos de la divulgación, cualquier secuencia de ácido nucleico adecuada para la expresión de un anticuerpo que tiene una secuencia de aminoácidos de cadena pesada tal como se muestra en SEQ ID NO: 1 y una secuencia de aminoácidos de cadena ligera tal como se muestra en SEQ ID NO: 2, o una variante de anticuerpo que tiene una secuencia de aminoácidos de cadena pesada idéntica en al menos el 90 % a la secuencia de aminoácidos de cadena pesada y/o una secuencia de aminoácidos de cadena ligera idéntica en al menos el 90 % a la secuencia de aminoácidos de cadena ligera. Por ejemplo, puede usarse la secuencia de ácido nucleico de SEQ ID NO: 13 o SEQ ID NO: 14 para expresar un anticuerpo en una célula eucariota. Alternativamente, pueden usarse otras secuencias de ácido nucleico con diferentes secuencias que codifican (por ejemplo, debido al uso de codones alternativos) para la secuencia de aminoácidos de cadena pesada de anticuerpo tal como se muestra en SEQ ID NO: 1 o la secuencia de aminoácidos de cadena ligera de anticuerpo tal como se muestra en SEQ ID NO: 2. En los métodos de la divulgación, la desamidación puede controlarse haciendo crecer células a un pH de aproximadamente 6,75 a aproximadamente 7,00. En los métodos de la divulgación, la desamidación puede controlarse haciendo crecer células durante de aproximadamente 12 a aproximadamente 18 días para una edad de célulasin vitrode menos de, o igual a, 166 días. En los métodos de la divulgación, la desamidación puede controlarse colocando el primer eluato tratado en contacto con una resina de intercambio aniónico a un pH de carga de aproximadamente 8,3 a aproximadamente 8,7 y recogiendo el segundo eluato a partir de la resina de intercambio aniónico y conservando esto durante aproximadamente 96 horas o menos. En los métodos de la divulgación, la agregación puede controlarse durante cromatografía con fenil-SEPHAROSE<™>Fast Flow colocando la disolución en contacto con el lecho de resina de cromatografía de interacción hidrófoba a una razón de carga de aproximadamente 12 g de proteína/l de resina a aproximadamente 27 g de proteína/l de resina; eluyendo un tercer eluato que comprende las moléculas de anticuerpo a partir de la resina de cromatografía de interacción hidrófoba con un volumen de gradiente de elución de aproximadamente 9 volúmenes de lecho de resina a aproximadamente 11 volúmenes de lecho de resina y un tope de corte de pico de elución de aproximadamente el 17 % de la altura de pico máxima a aproximadamente el 23 % de la altura de pico máxima. La agregación también puede limitarse tras la filtración final, llenando y congelando de las composiciones farmacéuticas de la divulgación hasta menos de, o igual a, aproximadamente 6 horas. De manera importante, cualquiera de las etapas de los métodos dados a conocer puede omitirse o combinarse para producir las composiciones de la divulgación.

[0350] Tras la producción del anticuerpo, pueden producirse modificaciones postraduccionales. Esto puede incluir la escisión de ciertas secuencias líder, la adición de diversos restos de azúcar en diversos patrones de glicosilación, desamidación (por ejemplo, en un residuo de asparagina o glutamina), oxidación (por ejemplo, en un residuo de metionina, triptófano o cisteína libre), reorganización al azar de enlaces disulfuro, isomerización (por ejemplo, en un residuo de ácido aspártico), corte de lisina C-terminal (por ejemplo, a partir de una o ambas cadenas pesadas), y ciclización de glutamina N-terminal (por ejemplo, en la cadena pesada y/o ligera).

[0351] La composición de anticuerpo puede comprender (i) el anticuerpo (es decir, un anticuerpo que tiene una secuencia de aminoácidos de cadena pesada tal como se muestra en SEQ ID NO: 1 y una secuencia de aminoácidos de cadena ligera tal como se muestra en SEQ ID NO: 2); y (ii) variantes de anticuerpo que incluyen una o más o una combinación de: variantes de carga (por ejemplo, variantes ácidas y básicas), variantes de secuencia de aminoácidos, y variantes estructurales de anticuerpo (por ejemplo, variantes agregadas y fragmentadas).

[0352] Las variantes de anticuerpo ácidas o básicas pueden caracterizarse y distinguirse del anticuerpo basándose en su carga ácida o básica global. Por ejemplo, la distribución de carga de la composición de anticuerpo puede detectarse usando isoelectroenfoque capilar (cIEF) o cromatografía de intercambio iónico. Las variantes ácidas pueden comprender variantes de anticuerpo desamidadas, variantes de anticuerpo glicadas, variantes de anticuerpo sialiladas, y variantes de anticuerpo oxidadas. La oxidación de cisteína y triptófano en la variante de anticuerpo da como resultado un desplazamiento del pI (es decir, una diferencia de carga) y se detectan con otras variantes de anticuerpo ácidas. La oxidación de metionina en la variante de anticuerpo puede monitorizarse mediante un cambio en la unión a antígeno, o mediante mapeo peptídico, por ejemplo mediante CL-EM/EM.

[0353] La desamidación es una reacción enzimática que convierte principalmente asparagina (N) en ácido iso-aspártico (isoaspartato) (iso-D) y ácido aspártico (aspartato) (D) a una razón de aproximadamente 3:1. Por tanto, esta reacción de desamidación está relacionada con la isomerización de aspartato (D) para dar iso-aspartato. Tanto la desamidación de asparagina como la isomerización de aspartato implican el producto intermedio succinimida. En mucho menor grado, puede producirse desamidación con residuos de glutamina de una manera similar. La desamidación puede producirse en una CDR, en una Fab (región distinta de CDR) o en la región de Fc.

[0354] La desamidación provoca un cambio de la carga del anticuerpo, de tal manera que las variantes de anticuerpo desamidadas son ácidas en comparación con el anticuerpo. La composición de anticuerpo puede comprender ≤35 % de variante de anticuerpo desamidada. Por ejemplo, N31 de la cadena ligera puede desamidarse para dar iso-D, D o succinimida. La composición de anticuerpo puede comprender ≤25 % de variante de anticuerpo desamidada en la posición 31 de la cadena ligera. Esto puede dar como resultado un cambio de aminoácido en la secuencia de la cadena ligera del anticuerpo, por ejemplo en ≤25 % de la composición de anticuerpo.

[0355] Por ejemplo, N386 de la cadena pesada puede desamidarse para dar Iso-D, D o succinimida. La composición de anticuerpo puede comprender ≤35 % de variante de anticuerpo desamidada en la posición 386 de la cadena pesada. Esto puede dar como resultado un cambio de aminoácido en la secuencia de la cadena pesada del anticuerpo, por ejemplo en ≤35 % de la composición de anticuerpo. La composición puede comprender una mezcla de variantes de anticuerpo. Los acontecimientos de desamidación pueden ser acumulativos, de modo que se desamidan dos o más residuos de asparagina. Por tanto, la composición de anticuerpo puede comprender al menos un cambio de aminoácido en la secuencia de la cadena pesada del anticuerpo y/o al menos un cambio de aminoácido en la secuencia de la cadena pesada del anticuerpo. Por ejemplo, la composición de anticuerpo puede comprender variante de anticuerpo desamidada en la posición 31 de la cadena ligera y variante de anticuerpo desamidada en la posición 386 de la cadena pesada.

[0356] Puede producirse oxidación durante la producción y el almacenamiento (es decir, en presencia de condiciones oxidantes) y da como resultado una modificación covalente de una proteína, inducida o bien directamente mediante especies reactivas de oxígeno o bien indirectamente mediante reacción con subproductos secundarios de estrés oxidativo. La oxidación se produce principalmente con residuos de metionina, peor puede producirse en residuos de triptófano y de cisteína libre. La oxidación puede producirse en una CDR, en una región de Fab (distinta de CDR) o en la región de Fc.

[0357] La oxidación puede provocar un cambio en la carga del anticuerpo, de tal manera que variantes de anticuerpo oxidadas son ácidas en comparación con el anticuerpo. Algunas variantes de anticuerpo oxidadas tienen la misma carga que el anticuerpo. La composición de anticuerpo puede comprender ≤55 % de variante de anticuerpo oxidada. Por ejemplo, uno cualquiera o una combinación de M64, M254 y/o M430 de la cadena pesada pueden estar oxidadas. La composición de anticuerpo puede comprender ≤55 % de variante de anticuerpo oxidada en uno cualquiera o una combinación de M64, M254, y/o M430 de la cadena pesada. Por ejemplo, W52 de la cadena pesada puede estar oxidada. La composición de anticuerpo puede comprender ≤3 % de variante de anticuerpo oxidada en W52 de la cadena pesada.

[0358] La composición puede comprender una mezcla de variantes de anticuerpo. Por tanto, la composición de anticuerpo puede comprender al menos un cambio de aminoácido en la secuencia de la cadena pesada del anticuerpo y/o al menos un cambio de aminoácido en la secuencia de la cadena pesada del anticuerpo. Por ejemplo, la composición de anticuerpo puede comprender variante de anticuerpo desamidada en la posición 31 de la cadena ligera; y/o variante de anticuerpo desamidada en la posición 386 de la cadena pesada; y/u oxidación en uno cualquiera o una combinación de M64, M254 y/o M430 y/o W52 de la cadena pesada.

[0359] La reorganización al azar de enlaces disulfuro puede producirse durante la producción y condiciones de almacenamiento básicas. En determinadas circunstancias, los enlaces disulfuro pueden romperse o formarse de manera incorrecta, dando como resultado residuos de cisteína (-SH) no emparejados. Estos sulfhidrilos (-SH) libres (no emparejados) pueden fomentar el intercambio.

[0360] Es probable que la glutamina (Q) y el glutamato (ácido glutámico) (E) N-terminales en la cadena pesada y/o cadena ligera formen piroglutamato (pGlu) mediante ciclización. Se piensa que la mayor parte de la formación de pGlu se produce en el biorreactor de producción, pero también puede formarse de manera no enzimática, dependiendo del pH y la temperatura del procesamiento y las condiciones de almacenamiento. La ciclización de Q o E N-terminal se observa habitualmente en anticuerpos humanos naturales. La composición de anticuerpo descrita en el presente documento puede comprender ≥50 % de pGlu en el extremo N-terminal del anticuerpo. pGlu puede estar presente en la cadena pesada. Esto puede dar como resultado un cambio de aminoácido en la secuencia de la cadena pesada o ligera del anticuerpo, por ejemplo en ≥50 % de la composición de anticuerpo.

[0361] La composición puede comprender una mezcla de variantes de anticuerpo. Los cambios de secuencia pueden ser acumulativos, de modo que la composición comprende dos o más cambios de secuencia en la cadena pesada y/o ligera. Por tanto, la composición de anticuerpo puede comprender al menos un cambio de aminoácido en la secuencia de la cadena pesada del anticuerpo y/o al menos un cambio de aminoácido en la secuencia de la cadena pesada del anticuerpo. Por ejemplo, la composición de anticuerpo puede comprender variante de anticuerpo desamidada en la posición 31 de la cadena ligera; y/o variante de anticuerpo desamidada en la posición 386 de la cadena pesada; y/u oxidación en uno cualquiera o una combinación de M64, M254, y/o M430 y/o W52 de la cadena pesada; y/o pGlu en el extremo N-terminal de la cadena pesada y/o ligera.

[0362] El corte de lisina C-terminal es una reacción enzimática catalizada por carboxipeptidasas, y se observa habitualmente en anticuerpos recombinantes y humanos naturales. Las variantes de este proceso incluyen eliminación de lisina a partir de una o ambas cadenas pesadas debido a enzimas celulares a partir de la célula huésped recombinante. Tras la administración al sujeto/paciente humano, es probable que dé como resultado la eliminación de cualquier lisina C-terminal restante. La composición de anticuerpo descrita en el presente documento puede comprender ≥50 % de lisina C-terminal delecionada en el extremo C-terminal del anticuerpo. K449 puede delecionarse en una o ambas de las cadenas pesadas del anticuerpo. Por tanto, hay dos variantes de anticuerpo: deleción individual de lisina en la cadena pesada, y deleción doble de lisina en la cadena pesada. El anticuerpo (es decir, un anticuerpo que tiene una secuencia de aminoácidos de cadena pesada tal como se muestra en SEQ ID NO: 1 y una secuencia de aminoácidos de cadena ligera tal como se muestra en SEQ ID NO: 2) tiene ambas lisinas intactas/presentes. Esto puede dar como resultado un cambio de aminoácido en la secuencia de la cadena pesada del anticuerpo, por ejemplo en ≥50 % de la composición de anticuerpo.

[0363] La composición puede comprender una mezcla de variantes de anticuerpo. Por ejemplo, la composición de anticuerpo puede comprender variante de anticuerpo desamidada en la posición 31 de la cadena ligera; y/o variante de anticuerpo desamidada en la posición 386 de la cadena pesada; y/u oxidación en uno cualquiera o una combinación de M64, M254, y/o M430 y/o W52 de la cadena pesada; y/o pGlu en el extremo N-terminal de la cadena pesada y/o ligera; y/o lisina C-terminal delecionada en el extremo C-terminal.

[0364] Las variantes de anticuerpo agregadas o fragmentadas pueden caracterizarse y distinguirse del anticuerpo basándose en su tamaño. Por ejemplo, la distribución de tamaño de la composición de anticuerpo puede detectarse usando cromatografía de exclusión molecular (SEC).

[0365] La composición de anticuerpo puede comprender ≤20 % de variante de anticuerpo agregada. La variante de anticuerpo agregada puede comprender dímero. La composición puede comprender una mezcla de variantes de anticuerpo. Por ejemplo, la composición de anticuerpo puede comprender variante de anticuerpo desamidada en la posición 31 de la cadena ligera; y/o variante de anticuerpo desamidada en la posición 386 de la cadena pesada; y/u oxidación en uno cualquiera o una combinación de M64, M254, y/o M430 y/o W52 de la cadena pesada; y/o pGlu en el extremo N-terminal de la cadena pesada y/o ligera; y/o lisina C-terminal delecionada en el extremo C-terminal; y/o variante de anticuerpo agregada.

[0366] Las composiciones descritas pueden haberse sometido a, o haber experimentado, una o más modificaciones postraduccionales. La modificación puede producirse en una CDR, la región de entramado variable, o la región constante. La modificación puede dar como resultado un cambio en la carga de la molécula. Las modificaciones postraduccionales y cambios en la secuencia de aminoácidos primaria descritas anteriormente no dan como resultado cambios significativos en la afinidad de unión a antígeno, actividad biológica, PK/PD, agregación, inmunogenicidad o unión al receptor de Fc de las composiciones. Las composiciones están sustancialmente libres de materiales contaminantes.

[0367] La composición de anticuerpo que comprende el anticuerpo y variantes de anticuerpo descrita anteriormente conserva unión a antígeno específica y/o unión a FcRn. Por ejemplo, la composición de anticuerpo que comprende el anticuerpo y variantes de anticuerpo descrita anteriormente tiene ≥0,70 de unión a antígeno específica de IL-5; y/o ≥ 70 % de unión a FcRn. Por tanto, estos niveles ( %) de variantes pueden tolerarse en la composición de anticuerpo sin tener un impacto sobre la función.

[0368] Las composiciones descritas en el presente documento pueden producirse mediante cualquiera de varias técnicas convencionales. Por ejemplo, las composiciones pueden expresarse en, y purificarse a partir de, sistemas de expresión recombinantes. En una realización, la composición se produce mediante un método de cultivar una célula huésped en condiciones adecuadas para la expresión de un polipéptido que comprende SEQ ID NO: 1 y SEQ ID NO: 2, en el que la composición se expresa, y opcionalmente se purifica, y opcionalmente se formula, dentro de una composición farmacéutica.

[0369] Pueden usarse varios sistemas de expresión y regímenes de purificación diferentes para producir las composiciones. Generalmente, las células huésped se transforman con un vector de expresión recombinante que codifica para el anticuerpo. Puede emplearse una amplia gama de células huésped, incluyendo líneas celulares eucariotas de origen de mamífero (por ejemplo, CHO, Perc6, HEK293, HeLa, NS0). Las células huésped adecuadas incluyen células de mamífero tales como CHO (por ejemplo, CHOK1 y CHO-DG44).

[0370] La célula huésped puede ser una célula huésped aislada. Habitualmente la célula huésped no forma parte de un organismo multicelular (por ejemplo, planta o animal). La célula huésped puede ser una célula huésped no humana. En la técnica se conocen vectores de clonación y expresión apropiados para su uso con huéspedes celulares eucariotas o de mamífero y métodos de clonación.

[0371] Las células pueden cultivarse en condiciones que fomentan la expresión del anticuerpo. Por ejemplo, se usa un biorreactor de producción para cultivar las células. El volumen de biorreactor de producción puede ser de: (i) aproximadamente 20.000 litros, aproximadamente 10.000 litros; aproximadamente 5.000 litros; aproximadamente 2.000 litros; aproximadamente 1.000 litros; o aproximadamente 500 litros; o (ii) entre 500 y 20.000 litros; entre 500 y 10.000 litros; entre 500 y 5.000 litros; entre 1.000 y 10.000 litros, o entre 2.000 y 10.000 litros. Por ejemplo, las células pueden cultivarse en un biorreactor de producción a un pH de aproximadamente 6,75 a pH 7,00. Alternativamente, las células pueden cultivarse en un biorreactor de producción durante de aproximadamente 12 a aproximadamente 18 días. Alternativamente, las células pueden cultivarse en un biorreactor de producción a un pH de aproximadamente 6,75 a pH 7,00, durante de aproximadamente 12 a aproximadamente 18 días. Esta etapa de cultivo puede ayudar a controlar el nivel de variantes de anticuerpo desamidadas, por ejemplo, para reducir el nivel de variantes de anticuerpo desamidadas.

[0372] La composición puede recuperarse y purificarse mediante procedimientos de purificación de proteínas convencionales. Por ejemplo, la composición puede recogerse directamente a partir del medio de cultivo. La recogida del medio de cultivo celular puede realizarse mediante aclaración, por ejemplo mediante centrifugación y/o filtración profunda. La recuperación de la composición va seguida por purificación para garantizar una pureza adecuada.

[0373] Pueden usarse una o más etapas de cromatografía en la purificación, por ejemplo una o más resinas de cromatografía; y/o una o más etapas de filtración. Por ejemplo, puede usarse cromatografía de afinidad usando resinas, tales como proteína A, G o L, para purificar la composición. Alternativa o adicionalmente, puede usarse una resina de intercambio iónico tal como una de intercambio catiónico para purificar la composición. Alternativa o adicionalmente, puede usarse una resina de cromatografía de interacción hidrófoba para purificar la composición. Alternativamente, las etapas de purificación comprenden: una etapa de resina de cromatografía de afinidad, seguida por una etapa de resina de intercambio catiónico, seguida por una etapa de resina de cromatografía de interacción hidrófoba.

[0374] Por ejemplo, se pone el producto recogido en contacto con una resina de proteína A. La disolución que comprende la composición puede eluirse a partir de la resina de proteína A y tratarse a pH de 3,3 a 3,7 durante de 15 a 240 minutos. Esta etapa de resina de proteína A puede ayudar a controlar el nivel de variantes de anticuerpo agregadas, por ejemplo, para reducir el nivel de variantes de anticuerpo agregadas.

[0375] Entonces puede aclararse adicionalmente la disolución que comprende la composición mediante filtración profunda y/o filtración de capa doble.

[0376] Alternativa o adicionalmente, puede usarse una resina de intercambio aniónico. La disolución que comprende la composición puede colocarse en contacto con una resina de intercambio aniónico (por ejemplo, cromatografía de intercambio aniónico Q-SEPHAROSE<™>Fast Flow) a un pH de carga de 8,3 a 8,7. La disolución que comprende la composición puede eluirse a partir de la resina de intercambio aniónico y conservarse durante 96 horas o menos. Esta etapa de resina de intercambio aniónico puede ayudar a controlar el nivel de variantes de anticuerpo desamidadas, por ejemplo, para reducir el nivel de variantes de anticuerpo desamidadas.

[0377] Opcionalmente, pueden añadirse guanidina y/o sulfato de amonio a la disolución que comprende la composición, y conservarse durante de 15 a 240 minutos.

[0378] Alternativa o adicionalmente, puede usarse una resina de cromatografía de interacción hidrófoba. La disolución que comprende la composición puede colocarse placed en contacto con una resina de cromatografía de interacción hidrófoba (por ejemplo, cromatografía con fenil-SEPHAROSE<™>Fast Flow) a una razón de carga de 12 a 27 g de proteína/l de resina. Por ejemplo, la disolución que comprende la composición puede eluirse usando un volumen de gradiente de elución (volúmenes de lecho; BV) de aproximadamente 9 a aproximadamente 11. Puede usarse un tope de corte de pico de elución ( % de la altura de pico máxima) de aproximadamente el 17 a aproximadamente el 23 durante la elución a partir de la resina de cromatografía de interacción hidrófoba. Esta etapa de resina de cromatografía de interacción hidrófoba puede ayudar a controlar el nivel de variantes de anticuerpo agregadas, por ejemplo, para reducir el nivel de variantes de anticuerpo agregadas.

[0379] Entonces puede filtrarse la disolución que comprende la composición para eliminar virus. Entonces puede formularse la disolución que comprende la composición a una concentración de anticuerpo de aproximadamente 76 g de proteína/l a aproximadamente 82 g de proteína/l, o a aproximadamente 100 g de proteína/l. La disolución que comprende la composición puede llenarse en recipientes y congelarse. Pueden liofilizarse alícuotas de la disolución que comprende la composición. El liofilizado puede reconstituirse mediante la adición de agua para producir una composición que comprende 75 mg/l de proteína, el anticuerpo monoclonal anti-IL-5 mepolizumab y heptahidrato de fosfato de sodio dibásico 20 mM, el 12 % en peso de sacarosa con respecto a volumen y el 0,05 % en peso de polisorbato 80 con respecto a volumen a un pH de desde aproximadamente 6,8 hasta aproximadamente 7,2.

[0380] En otra realización, la composición de la divulgación se produce usando este método de producción de una composición de la divulgación.

[0381] Otro aspecto de la divulgación es una composición que comprende una preparación purificada de un anticuerpo monoclonal y un agente tamponante, en la que la composición está a un pH de desde 6,2 hasta 6,6, en la que el agente tamponante es histidina, fosfato, ácido cítrico, monohidrato de ácido cítrico, citrato o una sal de los mismos, en la que la preparación purificada comprende las isoformas representadas por el pico 65, el pico 78, el pico 88, el pico 92, el pico principal y el pico 112 mostrados en la figura 1, en la que el anticuerpo comprende una secuencia de aminoácidos de cadena pesada que tiene al menos el 90 % de identidad con respecto a la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1 y una secuencia de aminoácidos de cadena ligera que tiene al menos el 90 % de identidad con respecto a la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2, y en la que el anticuerpo se produce por una célula de ovario de hámster chino.

[0382] Otro aspecto de la divulgación es una composición que comprende una preparación purificada de un anticuerpo monoclonal y un agente tamponante, en la que la composición está a un pH de desde 6,2 hasta 6,6, en la que el agente tamponante es fosfato o una sal del mismo, en la que la preparación purificada comprende las isoformas representadas por el pico 65, el pico 78, el pico 88, el pico 92, el pico principal y el pico 112 mostrados en la figura 1, en la que el anticuerpo comprende una secuencia de aminoácidos de cadena pesada que tiene al menos el 90 % de identidad con respecto a la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1 y una secuencia de aminoácidos de cadena ligera que tiene al menos el 90 % de identidad con respecto a la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2, y en la que el anticuerpo se produce por una célula de ovario de hámster chino.

[0383] En otra realización de las composiciones de la divulgación el agente tamponante es al menos uno seleccionado del grupo que consiste en heptahidrato de fosfato de sodio dibásico, fosfato y ácido cítrico.

[0384] En otra realización, las composiciones de la divulgación comprenden una seleccionada de una primera formulación de heptahidrato de fosfato de sodio dibásico 16,1 mM, ácido cítrico 3,9 mM, el 12 % en peso de sacarosa con respecto a volumen, el 0,02 % en peso de polisorbato 80 con respecto a volumen y EDTA 0,05 mM; una segunda formulación de heptahidrato de fosfato de sodio dibásico 15,2 mM, ácido cítrico 4,8 mM, el 12 % en peso de sacarosa con respecto a volumen, el 0,02 % en peso de polisorbato 80 con respecto a volumen y EDTA 0,05 mM; una tercera formulación de heptahidrato de fosfato de sodio dibásico 15,8 mM, ácido cítrico 4,2 mM, el 12 % en peso de sacarosa con respecto a volumen, el 0,02 % en peso de polisorbato 80 con respecto a volumen y EDTA 0,05 mM; una cuarta formulación de heptahidrato de fosfato de sodio dibásico 16,3 mM, ácido cítrico 3,7 mM, el 12 % en peso de sacarosa con respecto a volumen, el 0,02 % en peso de polisorbato 80 con respecto a volumen y EDTA 0,05 mM; y una quinta formulación de heptahidrato de fosfato de sodio dibásico 15,5 mM, ácido cítrico 4,5 mM, el 12 % en peso de sacarosa con respecto a volumen, el 0,02 % en peso de polisorbato 80 con respecto a volumen y EDTA 0,05 mM.

[0385] En resumen, la divulgación incluye:

[0386] Una composición que comprende un anticuerpo que tiene una secuencia de aminoácidos de cadena pesada tal como se muestra en SEQ ID NO: 1 y una secuencia de aminoácidos de cadena ligera tal como se muestra en SEQ ID NO: 2, o una variante de anticuerpo que tiene una secuencia de aminoácidos de cadena pesada idéntica en al menos el 90 % a la secuencia de aminoácidos de cadena pesada y/o una secuencia de aminoácidos de cadena ligera idéntica en al menos el 90 % a la secuencia de aminoácidos de cadena ligera, en la que la composición comprende: ≤80 % de variantes de anticuerpo ácidas.

[0387] La composición puede tener:

[0388] a) ≥0,70 de unión a antígeno específica de IL-5; y/o

[0389] b) ≥ 70 % de unión a FcRn.

[0390] La unión a antígeno específica puede estar en el intervalo de desde 0,70 hasta 1,30; y/o b) la unión a FcRn está en el intervalo de desde el 70 % hasta el 130 %.

[0391] La composición puede comprender: ≤35 % de variantes de anticuerpo desamidadas.

[0392] La composición puede comprender: ≤25 % de variantes de anticuerpo desamidadas en N31 de la secuencia de aminoácidos de cadena ligera.

[0393] La composición puede comprender: ≤35 % de variantes de anticuerpo desamidadas en N386 de la secuencia de aminoácidos de cadena pesada.

[0394] La composición puede comprender: ≤55 % de variante de anticuerpo oxidada en uno cualquiera o una combinación de:

[0395] a) M64 de la secuencia de aminoácidos de cadena pesada;

[0396] b) M254 de la secuencia de aminoácidos de cadena pesada; y/o

[0397] c) M430 de la secuencia de aminoácidos de cadena pesada.

[0398] La composición puede comprender: ≤3 % de variantes de anticuerpo oxidadas en W52 de la secuencia de aminoácidos de cadena pesada.

[0399] La cantidad de variante de anticuerpo desamidada y/o una cantidad de variante oxidada, pueden determinarse mediante CL-EM/EM de mapeo peptídico.

[0400] La composición puede comprender: ≤20 % de variantes de anticuerpo agregadas.

[0401] La variante de anticuerpo agregada puede comprender un dímero.

[0402] La cantidad de variante de anticuerpo agregada puede determinarse mediante SEC.

[0403] La composición puede comprender: ≥50 % de variantes de anticuerpo con lisina K449 C-terminal delecionada en la secuencia de aminoácidos de cadena pesada.

[0404] La composición puede comprender: ≥50 % de variantes de anticuerpo con piroglutamato N-terminal en la secuencia de aminoácidos de cadena pesada.

[0405] Una composición que comprende un anticuerpo que tiene una secuencia de aminoácidos de cadena pesada tal como se muestra en SEQ ID NO: 1 y una secuencia de aminoácidos de cadena ligera tal como se muestra en SEQ ID NO: 2, o una variante de anticuerpo que tiene una secuencia de aminoácidos de cadena pesada idéntica en al menos el 90 % a la secuencia de aminoácidos de cadena pesada y/o una secuencia de aminoácidos de cadena ligera idéntica en al menos el 90 % a la secuencia de aminoácidos de cadena ligera, en la que la composición comprende: ≤80 % de variantes de anticuerpo ácidas y ≤20 % de variantes de anticuerpo agregadas.

[0406] Una composición que comprende un anticuerpo que tiene una secuencia de aminoácidos de cadena pesada tal como se muestra en SEQ ID NO: 1 y una secuencia de aminoácidos de cadena ligera tal como se muestra en SEQ ID NO: 2, o una variante de anticuerpo que tiene una secuencia de aminoácidos de cadena pesada idéntica en al menos el 90 % a la secuencia de aminoácidos de cadena pesada y/o una secuencia de aminoácidos de cadena ligera idéntica en al menos el 90 % a la secuencia de aminoácidos de cadena ligera, en la que la composición comprende: ≤25 % de variantes de anticuerpo desamidadas en N31 de la secuencia de aminoácidos de cadena ligera; y ≤20 % de variantes de anticuerpo agregadas.

[0407] Una composición que comprende un anticuerpo que tiene una secuencia de aminoácidos de cadena pesada tal como se muestra en SEQ ID NO: 1 y una secuencia de aminoácidos de cadena ligera tal como se muestra en SEQ ID NO: 2, o una variante de anticuerpo que tiene una secuencia de aminoácidos de cadena pesada idéntica en al menos el 90 % a la secuencia de aminoácidos de cadena pesada y/o una secuencia de aminoácidos de cadena ligera idéntica en al menos el 90 % a la secuencia de aminoácidos de cadena ligera, en la que la composición comprende: ≤25 % de variantes de anticuerpo desamidadas en N31 de la secuencia de aminoácidos de cadena ligera; ≤55 % de variantes de anticuerpo oxidadas en M64 de la secuencia de aminoácidos de cadena pesada; ≤3 % de variantes de anticuerpo oxidadas en W52 de la secuencia de aminoácidos de cadena pesada; y ≤20 % de variantes de anticuerpo agregadas. Una composición que comprende un anticuerpo que tiene una secuencia de aminoácidos de cadena pesada tal como se muestra en SEQ ID NO: 1 y una secuencia de aminoácidos de cadena ligera tal como se muestra en SEQ ID NO: 2, o una variante de anticuerpo que tiene una secuencia de aminoácidos de cadena pesada idéntica en al menos el 90 % a la secuencia de aminoácidos de cadena pesada y/o una secuencia de aminoácidos de cadena ligera idéntica en al menos el 90 % a la secuencia de aminoácidos de cadena ligera, en la que la composición comprende: ≤25 % de variantes de anticuerpo desamidadas en N31 de la secuencia de aminoácidos de cadena ligera; ≤35 % de variantes de anticuerpo desamidadas en N386 de la secuencia de aminoácidos de cadena pesada; y ≤20 % de variantes de anticuerpo agregadas.

[0408] Una composición que comprende un anticuerpo que tiene una secuencia de aminoácidos de cadena pesada tal como se muestra en SEQ ID NO: 1 y una secuencia de aminoácidos de cadena ligera tal como se muestra en SEQ ID NO: 2, o una variante de anticuerpo que tiene una secuencia de aminoácidos de cadena pesada idéntica en al menos el 90 % a la secuencia de aminoácidos de cadena pesada y/o una secuencia de aminoácidos de cadena ligera idéntica en al menos el 90 % a la secuencia de aminoácidos de cadena ligera, en la que la composición comprende: ≤25 % de variantes de anticuerpo desamidadas en N31 de la secuencia de aminoácidos de cadena ligera; ≤35 % de variantes de anticuerpo desamidadas en N386 de la secuencia de aminoácidos de cadena pesada; ≤55 % de variantes de anticuerpo oxidadas en M64 de la secuencia de aminoácidos de cadena pesada, M254 de la secuencia de aminoácidos de cadena pesada, M430 de la secuencia de aminoácidos de cadena pesada; ≤3 % de variantes de anticuerpo oxidadas en W52 de la secuencia de aminoácidos de cadena pesada; y ≤20 % de variantes de anticuerpo agregadas. Una composición que comprende una preparación purificada de un anticuerpo monoclonal y un agente tamponante, en la que la composición está a un pH de desde 6,8 hasta 7,2,

[0409] en la que el agente tamponante es histidina, fosfato, ácido cítrico, citrato o una sal de los mismos,

[0410] en la que la preparación purificada comprende las isoformas representadas por el pico 65, el pico 78, el pico 88, el pico 92, el pico principal y el pico 112 mostrados en la figura 1,

[0411] en la que el anticuerpo comprende una secuencia de aminoácidos de cadena pesada que tiene al menos el 90 % de identidad con respecto a la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1 y una secuencia de aminoácidos de cadena ligera que tiene al menos el 90 % de identidad con respecto a la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2, y en la que el anticuerpo se produce por una célula de ovario de hámster chino.

[0412] El agente tamponante puede ser al menos uno seleccionado del grupo que consiste en heptahidrato de fosfato de sodio dibásico, fosfato, ácido cítrico y citrato.

[0413] El agente tamponante puede ser fosfato de sodio, fosfato de potasio, o citrato de sodio.

[0414] La composición puede comprender además un azúcar, un hidrato de carbono y/o una sal.

[0415] La composición puede comprender sacarosa.

[0416] Una composición que comprende una preparación purificada de un anticuerpo monoclonal y un agente tamponante, en la que la composición está a un pH de desde 6,8 hasta 7,2,

[0417] en la que el agente tamponante es fosfato o una sal del mismo,

[0418] en la que la preparación purificada comprende las isoformas representadas por el pico 65, el pico 78, el pico 88, el pico 92, el pico principal y el pico 112 mostrados en la figura 1,

[0419] en la que el anticuerpo comprende una secuencia de aminoácidos de cadena pesada que tiene al menos el 90 % de identidad con respecto a la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1 y una secuencia de aminoácidos de cadena ligera que tiene al menos el 90 % de identidad con respecto a la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2, y en la que el anticuerpo se produce por una célula de ovario de hámster chino.

[0420] El agente tamponante puede ser al menos uno seleccionado del grupo que consiste en heptahidrato de fosfato de sodio dibásico, fosfato, ácido cítrico y citrato.

[0421] La composición puede comprender además un azúcar.

[0422] El azúcar puede ser sacarosa.

[0423] La composición puede comprender polisorbato 80.

[0424] La composición puede comprender una seleccionada de una primera formulación de heptahidrato de fosfato de sodio dibásico 20 mM, el 12 % en peso de sacarosa con respecto a volumen y el 0,05 % en peso de polisorbato 80 con respecto a volumen; una segunda formulación de heptahidrato de fosfato de sodio dibásico 15,5 mM, monohidrato de ácido cítrico 3,9 mM, el 12 % en peso de sacarosa con respecto a volumen, el 0,02 % en peso de polisorbato 80 con respecto a volumen y EDTA 0,05 mM; y una tercera formulación de heptahidrato de fosfato de sodio dibásico 26 mM, el 15 % en peso de sacarosa con respecto a volumen y 0,065 % en peso de polisorbato 80 con respecto a volumen. El anticuerpo puede tener una constante de disociación igual a, o de menos de, aproximadamente 3,5x10<-11>M para interleucina 5 humana que comprende la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 11.

[0425] La concentración de anticuerpo monoclonal puede ser de aproximadamente 75 mg/ml o aproximadamente 100 mg/ml. El anticuerpo puede tener una constante de disociación igual a, o de menos de, aproximadamente 3,5x10<-11>M para interleucina 5 humana que comprende la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 11.

[0426] La concentración de anticuerpo monoclonal puede ser de aproximadamente 75 mg/ml o aproximadamente 100 mg/ml. Una composición que comprende

[0427] a) un anticuerpo anti-IL-5 que comprende una secuencia de cadena pesada que tiene al menos el 90 % de identidad con respecto a la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 1 y una secuencia de cadena ligera que tiene al menos el 90 % de identidad con respecto a la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 2; y b) una forma principal del anticuerpo que comprende más del, o igual al, 50 % de la proteína en la composición tal como se mide usando isoelectroenfoque capilar de la composición.

[0428] La forma principal del anticuerpo puede comprender al menos un residuo de aminoácido oxidado seleccionado del grupo que consiste en un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en el triptófano 52, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 64, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 82, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 85, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la cisteína 222, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 254, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 360, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 430, un residuo de aminoácido de cadena ligera oxidado en la metionina 4 y un residuo de aminoácido de cadena ligera oxidado en la cisteína 220.

[0429] Una composición que comprende

[0430] a) un anticuerpo anti-IL-5 que comprende una secuencia de cadena pesada que tiene al menos el 90 % de identidad con respecto a la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 1 y una secuencia de cadena ligera que tiene al menos el 90 % de identidad con respecto a la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 2;

[0431] b) una forma principal del anticuerpo que comprende más del, o igual al, 50 % de la proteína en la composición tal como se mide usando isoelectroenfoque capilar de la composición; y

[0432] c) formas ácidas del anticuerpo que comprenden de aproximadamente el 20 % a aproximadamente el 45 % de la proteína en la composición tal como se mide usando isoelectroenfoque capilar de la composición.

[0433] Las formas ácidas del anticuerpo pueden comprender al menos una seleccionada del grupo que consiste en una forma ácida de pico 65, una forma ácida de pico 78, una forma ácida de pico 88 y una forma ácida de pico 92.

[0434] Las formas ácidas del anticuerpo pueden comprender al menos un residuo de aminoácido desamidado seleccionado del grupo que consiste en un residuo de aminoácido de cadena pesada desamidado en la asparagina 299, un residuo de aminoácido de cadena pesada desamidado en la asparagina 317, un residuo de aminoácido de cadena pesada desamidado en la asparagina 386 y un residuo de aminoácido de cadena ligera desamidado en la asparagina 31. La forma principal del anticuerpo puede comprender al menos un residuo de aminoácido oxidado seleccionado del grupo que consiste en un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en el triptófano 52, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 64, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 82, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 85, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la cisteína 222, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 254, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 360, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 430, un residuo de aminoácido de cadena ligera oxidado en la metionina 4 y un residuo de aminoácido de cadena ligera oxidado en la cisteína 220.

[0435] Las formas ácidas del anticuerpo pueden comprender al menos un residuo de aminoácido oxidado seleccionado del grupo que consiste en un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en el triptófano 52, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 64, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 82, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 85, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la cisteína 222, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 254, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 360, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 430, un residuo de aminoácido de cadena ligera oxidado en la metionina 4 y un residuo de aminoácido de cadena ligera oxidado en la cisteína 220.

[0436] La forma principal del anticuerpo puede comprender al menos un residuo de aminoácido oxidado seleccionado del grupo que consiste en un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en el triptófano 52, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 64, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 82, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 85, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la cisteína 222, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 254, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 360, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 430, un residuo de aminoácido de cadena ligera oxidado en la metionina 4 y un residuo de aminoácido de cadena ligera oxidado en la cisteína 220; y

[0437] las formas ácidas del anticuerpo pueden comprender al menos un residuo de aminoácido oxidado seleccionado del grupo que consiste en un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en el triptófano 52, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 64, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 82, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 85, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la cisteína 222, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 254, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 360, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 430, un residuo de aminoácido de cadena ligera oxidado en la metionina 4 y un residuo de aminoácido de cadena ligera oxidado en la cisteína 220.

[0438] Una composición que comprende

[0439] a) un anticuerpo anti-IL-5 que comprende una secuencia de cadena pesada que tiene al menos el 90 % de identidad con respecto a la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 1 y una secuencia de cadena ligera que tiene al menos el 90 % de identidad con respecto a la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 2;

[0440] b) una forma principal del anticuerpo que comprende más del, o igual al, 50 % de la proteína en la composición tal como se mide usando isoelectroenfoque capilar de la composición; y

[0441] c) una forma básica del anticuerpo que comprende de aproximadamente el 1 % a aproximadamente el 15 % de la proteína en la composición tal como se mide usando isoelectroenfoque capilar de la composición.

[0442] La forma básica del anticuerpo puede comprender una forma básica de pico 112.

[0443] La forma básica del anticuerpo puede comprender una cadena pesada que tiene un residuo carboxilo-terminal que es glicina 448.

[0444] La forma principal del anticuerpo puede comprender al menos un residuo de aminoácido oxidado seleccionado del grupo que consiste en un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en el triptófano 52, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 64, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 82, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 85, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la cisteína 222, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 254, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 360, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 430, un residuo de aminoácido de cadena ligera oxidado en la metionina 4 y un residuo de aminoácido de cadena ligera oxidado en la cisteína 220.

[0445] Las formas básicas del anticuerpo pueden comprender al menos un residuo de aminoácido oxidado seleccionado del grupo que consiste en un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en el triptófano 52, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 64, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 82, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 85, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la cisteína 222, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 254, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 360, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 430, un residuo de aminoácido de cadena ligera oxidado en la metionina 4 y un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la cisteína 220.

[0446] La forma principal del anticuerpo puede comprender al menos un residuo de aminoácido oxidado seleccionado del grupo que consiste en un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en el triptófano 52, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 64, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 82, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 85, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la cisteína 222, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 254, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 360, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 430, un residuo de aminoácido de cadena ligera oxidado en la metionina 4 y un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la cisteína 220; y

[0447] las formas básicas del anticuerpo pueden comprender al menos un residuo de aminoácido oxidado seleccionado del grupo que consiste en un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en el triptófano 52, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 64, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 82, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 85, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la cisteína 222, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 254, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 360, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 430, un residuo de aminoácido de cadena ligera oxidado en la metionina 4 y un residuo de aminoácido de cadena ligera oxidado en la cisteína 220.

[0448] Una composición que comprende

[0449] a) un anticuerpo anti-IL-5 que comprende una secuencia de cadena pesada que tiene al menos el 90 % de identidad con respecto a la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 1 y una secuencia de cadena ligera que tiene al menos el 90 % de identidad con respecto a la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 2;

[0450] b) una forma principal del anticuerpo que comprende más del, o igual al, 50 % de la proteína en la composición tal como se mide usando isoelectroenfoque capilar de la composición;

[0451] c) formas ácidas del anticuerpo que comprenden de aproximadamente el 20 % a aproximadamente el 45 % de la proteína en la composición tal como se mide usando isoelectroenfoque capilar de la composición; y

[0452] d) una forma básica del anticuerpo que comprende de aproximadamente el 1 % a aproximadamente el 15 % de la proteína en la composición tal como se mide usando isoelectroenfoque capilar de la composición.

[0453] Las formas ácidas del anticuerpo pueden comprender al menos una seleccionada del grupo que consiste en una forma ácida de pico 65, una forma ácida de pico 78, una forma ácida de pico 88 y una forma ácida de pico 92.

[0454] Las formas ácidas del anticuerpo pueden comprender al menos un residuo de aminoácido desamidado seleccionado del grupo que consiste en un residuo de aminoácido de cadena pesada desamidado en la asparagina 299, un residuo de aminoácido de cadena pesada desamidado en la asparagina 317, un residuo de aminoácido de cadena pesada desamidado en la asparagina 386 y un residuo de aminoácido de cadena ligera desamidado en la asparagina 31. La forma básica del anticuerpo puede comprender una forma básica de pico 112.

[0455] La forma básica del anticuerpo puede comprender una cadena pesada que tiene un residuo carboxilo-terminal que es glicina 448.

[0456] La forma principal del anticuerpo puede comprender al menos un residuo de aminoácido oxidado seleccionado del grupo que consiste en un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en el triptófano 52, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 64, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 82, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 85, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la cisteína 222, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 254, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 360, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 430, un residuo de aminoácido de cadena ligera oxidado en la metionina 4 y un residuo de aminoácido de cadena ligera oxidado en la cisteína 220.

[0458] Las formas ácidas del anticuerpo pueden comprender al menos un residuo de aminoácido oxidado seleccionado del grupo que consiste en un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en el triptófano 52, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 64, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 82, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 85, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la cisteína 222, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 254, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 360, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 430, un residuo de aminoácido de cadena ligera oxidado en la metionina 4 y un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la cisteína 220.

[0460] Las formas básicas del anticuerpo pueden comprender al menos un residuo de aminoácido oxidado seleccionado del grupo que consiste en un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en el triptófano 52, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 64, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 82, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 85, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la cisteína 222, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 254, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 360, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 430, un residuo de aminoácido de cadena ligera oxidado en la metionina 4 y un residuo de aminoácido de cadena ligera oxidado en la cisteína 220.

[0462] La forma principal del anticuerpo comprende al menos un residuo de aminoácido oxidado seleccionado del grupo que consiste en un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en el triptófano 52, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 64, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 82, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 85, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la cisteína 222, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 254, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 360, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 430, un residuo de aminoácido de cadena ligera oxidado en la metionina 4 y un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la cisteína 222; y las formas ácidas del anticuerpo pueden comprender al menos un residuo de aminoácido oxidado seleccionado del grupo que consiste en un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en el triptófano 52, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 64, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 82, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 85, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la cisteína 222, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 254, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 360, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 430, un residuo de aminoácido de cadena ligera oxidado en la metionina 4 y un residuo de aminoácido de cadena ligera oxidado en la cisteína 220.

[0464] Las formas ácidas del anticuerpo pueden comprender al menos un residuo de aminoácido oxidado seleccionado del grupo que consiste en un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en el triptófano 52, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 64, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 82, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 85, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la cisteína 222, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 254, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 360, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 430, un residuo de aminoácido de cadena ligera oxidado en la metionina 4 y un residuo de aminoácido de cadena ligera oxidado en la cisteína 220; y

[0466] las formas básicas del anticuerpo pueden comprender al menos un residuo de aminoácido oxidado seleccionado del grupo que consiste en un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en el triptófano 52, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 64, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 82, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 85, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la cisteína 222, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 254, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 360, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 430, un residuo de aminoácido de cadena ligera oxidado en la metionina 4 y un residuo de aminoácido de cadena ligera oxidado en la cisteína 220.

[0468] La forma principal del anticuerpo puede comprender al menos un residuo de aminoácido oxidado seleccionado del grupo que consiste en un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en el triptófano 52, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 64, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 82, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 85, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la cisteína 222, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 254, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 360, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 430, un residuo de aminoácido de cadena ligera oxidado en la metionina 4 y un residuo de aminoácido de cadena ligera oxidado en la cisteína 220; y

[0469] las formas básicas del anticuerpo pueden comprender al menos un residuo de aminoácido oxidado seleccionado del grupo que consiste en un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en el triptófano 52, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 64, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 82, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 85, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la cisteína 222, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 254, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 360, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 430, un residuo de aminoácido de cadena ligera oxidado en la metionina 4 y un residuo de aminoácido de cadena ligera oxidado en la cisteína 220.

[0470] La forma principal del anticuerpo puede comprender al menos un residuo de aminoácido oxidado seleccionado del grupo que consiste en un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en el triptófano 52, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 64, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 82, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 85, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la cisteína 222, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 254, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 360, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 430, un residuo de aminoácido de cadena ligera oxidado en la metionina 4 y un residuo de aminoácido de cadena ligera oxidado en la cisteína 220;

[0471] las formas ácidas del anticuerpo pueden comprender al menos un residuo de aminoácido oxidado seleccionado del grupo que consiste en un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en el triptófano 52, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 64, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 82, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 85, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la cisteína 220, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 254, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 360, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 430, un residuo de aminoácido de cadena ligera oxidado en la metionina 4 y un residuo de aminoácido de cadena ligera oxidado en la cisteína 220; y

[0472] las formas básicas del anticuerpo pueden comprender al menos un residuo de aminoácido oxidado seleccionado del grupo que consiste en un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en el triptófano 52, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 64, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 82, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 85, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la cisteína 222, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 254, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 360, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 430, un residuo de aminoácido de cadena ligera oxidado en la metionina 4 y un residuo de aminoácido de cadena ligera oxidado en la cisteína 220.

[0473] Una composición que comprende

[0474] a) un anticuerpo anti-IL-5 que comprende una secuencia de cadena pesada que tiene al menos el 90 % de identidad con respecto a la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 1 y una secuencia de cadena ligera que tiene al menos el 90 % de identidad con respecto a la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 2; y b) formas desamidadas del anticuerpo que comprenden al menos uno seleccionado del grupo que consiste en un residuo de aminoácido de cadena pesada desamidado en la asparagina 299, un residuo de aminoácido de cadena pesada desamidado en la asparagina 317, un residuo de aminoácido de cadena pesada desamidado en la asparagina 386 y un residuo de aminoácido de cadena ligera desamidado en la asparagina 31.

[0475] Una composición que comprende

[0476] a) un anticuerpo anti-IL-5 que comprende una secuencia de cadena pesada que tiene al menos el 90 % de identidad con respecto a la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 1 y una secuencia de cadena ligera que tiene al menos el 90 % de identidad con respecto a la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 2; y b) formas oxidadas del anticuerpo que comprenden al menos uno seleccionado del grupo que consiste en un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en el triptófano 52, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 64, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 82, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 85, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la cisteína 222, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 254, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 360, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 430, un residuo de aminoácido de cadena ligera oxidado en la metionina 4 y un residuo de aminoácido de cadena ligera oxidado en la cisteína 220.

[0477] Una composición que comprende

[0478] a) un anticuerpo anti-IL-5 que comprende una secuencia de cadena pesada que tiene al menos el 90 % de identidad con respecto a la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 1 y una secuencia de cadena ligera que tiene al menos el 90 % de identidad con respecto a la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 2;

[0479] b) formas desamidadas del anticuerpo que comprenden al menos uno seleccionado del grupo que consiste en un residuo de aminoácido de cadena pesada desamidado en la asparagina 299, un residuo de aminoácido de cadena pesada desamidado en la asparagina 317, un residuo de aminoácido de cadena pesada desamidado en la asparagina 386 y un residuo de aminoácido de cadena ligera desamidado en la asparagina 31; y

[0480] c) formas oxidadas del anticuerpo que comprenden al menos uno seleccionado del grupo que consiste en un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en el triptófano 52, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 64, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 82, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 85, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la cisteína 222, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 254, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 360, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 430, un residuo de aminoácido de cadena ligera oxidado en la metionina 4 y un residuo de aminoácido de cadena ligera oxidado en la cisteína 220.

[0481] Una composición que comprende

[0482] a) un anticuerpo anti-IL-5 que comprende una región variable de cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos de CDRH1 mostrada en SEQ ID NO: 5, la secuencia de aminoácidos de CDRH2 mostrada en SEQ ID NO: 6, y la secuencia de aminoácidos de CDRH3 mostrada en SEQ ID NO: 7; y una región variable de cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos de CDRL1 mostrada en SEQ ID NO: 8, la secuencia de aminoácidos de CDRL2 mostrada en SEQ ID NO: 9, y la secuencia de aminoácidos de CDRL3 mostrada en SEQ ID NO: 10; y

[0483] b) formas desamidadas del anticuerpo que comprenden un residuo de aminoácido de cadena ligera desamidado en la asparagina 31.

[0484] Una composición que comprende

[0485] a) un anticuerpo anti-IL-5 que comprende una región variable de cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos de CDRH1 mostrada en SEQ ID NO: 5, la secuencia de aminoácidos de CDRH2 mostrada en SEQ ID NO: 6, y la secuencia de aminoácidos de CDRH3 mostrada en SEQ ID NO: 7; y una región variable de cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos de CDRL1 mostrada en SEQ ID NO: 8, la secuencia de aminoácidos de CDRL2 mostrada en SEQ ID NO: 9, y la secuencia de aminoácidos de CDRL3 mostrada en SEQ ID NO: 10; y

[0486] b) formas oxidadas del anticuerpo que comprenden al menos uno seleccionado del grupo que consiste en un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en el triptófano 52 y un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 64.

[0487] Una composición que comprende

[0488] a) un anticuerpo anti-IL-5 que comprende una región variable de cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos de CDRH1 mostrada en SEQ ID NO: 5, la secuencia de aminoácidos de CDRH2 mostrada en SEQ ID NO: 6, y la secuencia de aminoácidos de CDRH3 mostrada en SEQ ID NO: 7; y una región variable de cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos de CDRL1 mostrada en SEQ ID NO: 8, la secuencia de aminoácidos de CDRL2 mostrada en SEQ ID NO: 9, y la secuencia de aminoácidos de CDRL3 mostrada en SEQ ID NO: 10;

[0489] b) formas oxidadas del anticuerpo que comprenden al menos uno seleccionado del grupo que consiste en un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en el triptófano 52 y un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 64; y

[0490] c) formas desamidadas del anticuerpo que comprenden un residuo de aminoácido de cadena ligera desamidado en la asparagina 31.

[0491] Una composición que comprende

[0492] a) un anticuerpo anti-IL-5 que comprende una secuencia de región variable de cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 3 y una secuencia de región variable de cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 4; y

[0493] b) formas desamidadas del anticuerpo que comprenden un residuo de aminoácido de cadena ligera desamidado en la asparagina 31.

[0494] Una composición que comprende

[0495] a) un anticuerpo anti-IL-5 que comprende una secuencia de región variable de cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 3 y una secuencia de región variable de cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 4; y

[0496] b) formas oxidadas del anticuerpo que comprenden al menos uno seleccionado del grupo que consiste en un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en el triptófano 52, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 64, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 82, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 85 y un residuo de aminoácido de cadena ligera oxidado en la metionina 4.

[0497] Una composición que comprende

[0498] a) un anticuerpo anti-IL-5 que comprende una secuencia de región variable de cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 3 y una secuencia de región variable de cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 4;

[0499] b) formas desamidadas del anticuerpo que comprenden un residuo de aminoácido de cadena ligera desamidado en la asparagina 31; y

[0500] c) formas oxidadas del anticuerpo que comprenden al menos uno seleccionado del grupo que consiste en un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en el triptófano 52, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 64, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 82, un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 85 y un residuo de aminoácido de cadena ligera oxidado en la metionina 4.

[0501] Una composición que comprende una población de anticuerpos anti-IL-5 que tienen

[0502] a) una forma modificada de la secuencia de aminoácidos de cadena pesada de anticuerpo mostrada en SEQ ID NO: 1 que comprende al menos una modificación de residuo de aminoácido seleccionada del grupo que consiste en un residuo de piroglutamato amino-terminal en el residuo de aminoácido 1, un residuo de aminoácido de glicina carboxiloterminal en el residuo de aminoácido 448, un residuo de asparagina desamidada en la posición 299, un residuo de asparagina desamidada en la posición 317, un residuo de asparagina desamidada en la posición 386, un residuo de triptófano oxidado en la posición 52, un residuo de metionina oxidada en la posición 64, un residuo de metionina oxidada en la posición 82, un residuo de metionina oxidada en la posición 85, una cisteína oxidada en la posición 222, una metionina oxidada en la posición 254, una metionina oxidada en la posición 360 y un residuo de metionina oxidada en la posición 430; y

[0503] b) una forma modificada de la secuencia de aminoácidos de cadena ligera de anticuerpo mostrada en SEQ ID NO: 2 que comprende al menos una modificación de residuo de aminoácido seleccionada del grupo que consiste en un residuo de asparagina desamidada en el residuo de aminoácido 31, un residuo de metionina oxidada en la posición 4 y una cisteína oxidada en la posición 220.

[0504] La composición puede tener:

[0505] a) aproximadamente más del, o igual al, 92 % de la población comprende un residuo de piroglutamato amino-terminal en el residuo de aminoácido 1 de la cadena pesada de anticuerpo,

[0506] b) aproximadamente más del, o igual al, 90 % de la población comprende un residuo de aminoácido de glicina carboxilo-terminal en el residuo de aminoácido 448 de la cadena pesada de anticuerpo,

[0507] c) menos del, o igual al, 6,0 % de la población comprende un residuo de asparagina desamidada en la posición 386 de la cadena pesada de anticuerpo;

[0508] d) aproximadamente menos del, o igual al, 1,5 % de la población comprende un residuo de metionina oxidada en la posición 64 de la cadena pesada de anticuerpo,

[0509] e) aproximadamente menos del, o igual al, 4,5 % de la población comprende una metionina oxidada en la posición 254 de la cadena pesada de anticuerpo,

[0510] f) aproximadamente menos del, o igual al, 0,8 % de la población comprende un residuo de metionina oxidada en la posición 430 de la cadena pesada de anticuerpo, y

[0511] g) aproximadamente menos del, o igual al, 6,6 % de la población comprende un residuo de asparagina desamidada en el residuo de aminoácido 31 de la cadena ligera de anticuerpo.

[0512] La composición puede tener:

[0513] a) de aproximadamente el 93,7 % a aproximadamente el 98,6 % de la población comprende un residuo de piroglutamato amino-terminal en el residuo de aminoácido 1 de la cadena pesada de anticuerpo,

[0514] b) de aproximadamente el 97,6 % a aproximadamente el 99,2 % de la población comprende un residuo de aminoácido de glicina carboxilo-terminal en el residuo de aminoácido 448 de la cadena pesada de anticuerpo,

[0515] c) de aproximadamente el 0,4 % a aproximadamente el 1,2 % de la población comprende un residuo de asparagina desamidada en la posición 317 de la cadena pesada de anticuerpo,

[0516] d) de aproximadamente el 1,6 % a aproximadamente el 4,2 % de la población comprende un residuo de asparagina desamidada en la posición 386 de la cadena pesada de anticuerpo;

[0517] e) de aproximadamente el 0,7 % a aproximadamente el 0,9 % de la población comprende un residuo de metionina oxidada en la posición 64 de la cadena pesada de anticuerpo,

[0518] f) de aproximadamente el 0,3 % a aproximadamente el 1,1 % de la población comprende un residuo de metionina oxidada en la posición 82 de la cadena pesada de anticuerpo o un residuo de metionina oxidada en la posición 85 de la cadena pesada de anticuerpo,

[0519] g) de aproximadamente el 2,6 % a aproximadamente el 3,3 % de la población comprende una metionina oxidada en la posición 254 de la cadena pesada de anticuerpo,

[0520] h) de aproximadamente el 0,5 % a aproximadamente el 0,7 % de la población comprende un residuo de metionina oxidada en la posición 430 de la cadena pesada de anticuerpo,

[0521] i) de aproximadamente el 3,4 % a aproximadamente el 6,5 % de la población comprende un residuo de asparagina desamidada en el residuo de aminoácido 31 de la cadena ligera de anticuerpo, y

[0522] j) de aproximadamente el 0,2 % a aproximadamente el 0,8 % de la población comprende un residuo de metionina oxidada en la posición 4 de la cadena ligera de anticuerpo.

[0523] Una composición que comprende una población de anticuerpos anti-IL-5 que tienen

[0524] a) una forma modificada de la secuencia de aminoácidos de cadena pesada de anticuerpo mostrada en SEQ ID NO: 1 que comprende al menos una modificación de residuo de aminoácido seleccionada del grupo que consiste en un residuo de asparagina desamidada en la posición 299, un residuo de asparagina desamidada en la posición 317, un residuo de asparagina desamidada en la posición 386, un residuo de triptófano oxidado en la posición 52, un residuo de metionina oxidada en la posición 64, un residuo de metionina oxidada en la posición 82, un residuo de metionina oxidada en la posición 85, una cisteína oxidada en la posición 222, una metionina oxidada en la posición 254, una metionina oxidada en la posición 254, una metionina oxidada en la posición 360 y un residuo de metionina oxidada en la posición 430; y

[0525] b) una forma modificada de la secuencia de aminoácidos de cadena ligera de anticuerpo mostrada en SEQ ID NO: 2 que comprende al menos una modificación de residuo de aminoácido seleccionada del grupo que consiste en un residuo de asparagina desamidada en el residuo de aminoácido 31, un residuo de metionina oxidada en la posición 4 y una cisteína oxidada en la posición 220.

[0526] La composición puede tener:

[0527] a) de aproximadamente el 0,3 % a aproximadamente el 1,5 % de la población comprende un residuo de asparagina desamidada en la posición 317 de la cadena pesada de anticuerpo,

[0528] b) de aproximadamente el 1,5 % a aproximadamente el 4,5 % de la población comprende un residuo de asparagina desamidada en la posición 386 de la cadena pesada de anticuerpo;

[0529] c) de aproximadamente el 0,5 % a aproximadamente el 1,5 % de la población comprende un residuo de metionina oxidada en la posición 64 de la cadena pesada de anticuerpo,

[0530] d) de aproximadamente el 0,2 % a aproximadamente el 1,5 % de la población comprende un residuo de metionina oxidada en la posición 82 de la cadena pesada de anticuerpo o un residuo de metionina oxidada en la posición 85 de la cadena pesada de anticuerpo,

[0531] e) de aproximadamente el 2,5 % a aproximadamente el 3,5 % de la población comprende una metionina oxidada en la posición 254 de la cadena pesada de anticuerpo,

[0532] f) de aproximadamente el 0,4 % a aproximadamente el 0,8 % de la población comprende un residuo de metionina oxidada en la posición 430 de la cadena pesada de anticuerpo,

[0533] g) de aproximadamente el 3,3 % a aproximadamente el 6,6 % de la población comprende un residuo de asparagina desamidada en el residuo de aminoácido 31 de la cadena ligera de anticuerpo, y

[0534] h) de aproximadamente el 0,1 % a aproximadamente el 1 % de la población comprende un residuo de metionina oxidada en la posición 4 de la cadena ligera de anticuerpo.

[0535] La composición puede tener:

[0536] a) de aproximadamente el 0,4 % a aproximadamente el 1,2 % de la población comprende un residuo de asparagina desamidada en la posición 317 de la cadena pesada de anticuerpo,

[0537] b) de aproximadamente el 1,6 % a aproximadamente el 4,2 % de la población comprende un residuo de asparagina desamidada en la posición 386 de la cadena pesada de anticuerpo;

[0538] c) de aproximadamente el 0,7 % a aproximadamente el 0,9 % de la población comprende un residuo de metionina oxidada en la posición 64 de la cadena pesada de anticuerpo,

[0539] d) de aproximadamente el 0,3 % a aproximadamente el 1,1 % de la población comprende un residuo de metionina oxidada en la posición 82 de la cadena pesada de anticuerpo o un residuo de metionina oxidada en la posición 85 de la cadena pesada de anticuerpo,

[0540] e) de aproximadamente el 2,6 % a aproximadamente el 3,3 % de la población comprende una metionina oxidada en la posición 254 de la cadena pesada de anticuerpo,

[0541] f) de aproximadamente el 0,5 % a aproximadamente el 0,7 % de la población comprende un residuo de metionina oxidada en la posición 430 de la cadena pesada de anticuerpo,

[0542] g) de aproximadamente el 3,4 % a aproximadamente el 6,5 % de la población comprende un residuo de asparagina desamidada en el residuo de aminoácido 31 de la cadena ligera de anticuerpo, y

[0543] h) de aproximadamente el 0,2 % a aproximadamente el 0,8 % de la población comprende un residuo de metionina oxidada en la posición 4 de la cadena ligera de anticuerpo.

[0544] Una composición que comprende una población de anticuerpos anti-IL-5 que tienen

[0545] a) una forma modificada de la secuencia de aminoácidos de cadena pesada de anticuerpo mostrada en SEQ ID NO: 1 que comprende al menos una modificación de residuo de aminoácido seleccionada del grupo que consiste en un residuo de asparagina desamidada en la posición 299, un residuo de asparagina desamidada en la posición 317 y un residuo de asparagina desamidada en la posición 386; y

[0546] b) una forma modificada de la secuencia de aminoácidos de cadena ligera de anticuerpo mostrada en SEQ ID NO: 2 que comprende un residuo de asparagina desamidada en el residuo de aminoácido 31.

[0547] La composición puede tener:

[0548] a) de aproximadamente el 0,3 % a aproximadamente el 1,5 % de la población comprende un residuo de asparagina desamidada en la posición 317 de la cadena pesada de anticuerpo,

[0549] b) de aproximadamente el 1,5 % a aproximadamente el 4,5 % de la población comprende un residuo de asparagina desamidada en la posición 386 de la cadena pesada de anticuerpo; y

[0550] c) de aproximadamente el 3,3 % a aproximadamente el 6,6 % de la población comprende un residuo de asparagina desamidada en el residuo de aminoácido 31 de la cadena ligera de anticuerpo.

[0551] La composición puede tener:

[0552] a) de aproximadamente el 0,4 % a aproximadamente el 1,2 % de la población comprende un residuo de asparagina desamidada en la posición 317 de la cadena pesada de anticuerpo,

[0553] b) de aproximadamente el 1,6 % a aproximadamente el 4,2 % de la población comprende un residuo de asparagina desamidada en la posición 386 de la cadena pesada de anticuerpo; y

[0554] c) de aproximadamente el 3,4 % a aproximadamente el 6,5 % de la población comprende un residuo de asparagina desamidada en el residuo de aminoácido 31 de la cadena ligera de anticuerpo.

[0555] Una composición que comprende una población de anticuerpos anti-IL-5 que tienen

[0556] a) una forma modificada de la secuencia de aminoácidos de cadena pesada de anticuerpo mostrada en SEQ ID NO: 1 que comprende al menos una modificación de residuo de aminoácido seleccionada del grupo que consiste en un residuo de triptófano oxidado en la posición 52, un residuo de metionina oxidada en la posición 64, un residuo de metionina oxidada en la posición 82, un residuo de metionina oxidada en la posición 85, una cisteína oxidada en la posición 222, una metionina oxidada en la posición 254 , una metionina oxidada en la posición 360 y un residuo de metionina oxidada en la posición 430; y

[0557] b) una forma modificada de la secuencia de aminoácidos de cadena ligera de anticuerpo mostrada en SEQ ID NO: 2 que comprende al menos una modificación de residuo de aminoácido seleccionada del grupo que consiste en un residuo de metionina oxidada en la posición 4 y una cisteína oxidada en la posición 220.

[0558] La composición puede tener:

[0559] c) de aproximadamente el 0,5 % a aproximadamente el 1,5 % de la población comprende un residuo de metionina oxidada en la posición 64 de la cadena pesada de anticuerpo,

[0560] d) de aproximadamente el 0,2 % a aproximadamente el 1,5 % de la población comprende un residuo de metionina oxidada en la posición 82 de la cadena pesada de anticuerpo o un residuo de metionina oxidada en la posición 85 de la cadena pesada de anticuerpo,

[0561] e) de aproximadamente el 2,5 % a aproximadamente el 3,5 % de la población comprende una metionina oxidada en la posición 254 de la cadena pesada de anticuerpo,

[0562] f) de aproximadamente el 0,4 % a aproximadamente el 0,8 % de la población comprende un residuo de metionina oxidada en la posición 430 de la cadena pesada de anticuerpo, y

[0563] g) de aproximadamente el 0,1 % a aproximadamente el 1 % de la población comprende un residuo de metionina oxidada en la posición 4 de la cadena ligera de anticuerpo.

[0564] La composición puede tener:

[0565] a) de aproximadamente el 0,7 % a aproximadamente el 0,9 % de la población comprende un residuo de metionina oxidada en la posición 64 de la cadena pesada de anticuerpo,

[0566] b) de aproximadamente el 0,3 % a aproximadamente el 1,1 % de la población comprende un residuo de metionina oxidada en la posición 82 de la cadena pesada de anticuerpo o un residuo de metionina oxidada en la posición 85 de la cadena pesada de anticuerpo,

[0567] c) de aproximadamente el 2,6 % a aproximadamente el 3,3 % de la población comprende una metionina oxidada en la posición 254 de la cadena pesada de anticuerpo,

[0568] d) de aproximadamente el 0,5 % a aproximadamente el 0,7 % de la población comprende un residuo de metionina oxidada en la posición 430 de la cadena pesada de anticuerpo, y

[0569] e) de aproximadamente el 0,2 % a aproximadamente el 0,8 % de la población comprende un residuo de metionina oxidada en la posición 4 de la cadena ligera de anticuerpo.

[0570] Una composición que comprende

[0571] a) un anticuerpo anti-IL-5 que comprende una secuencia de cadena pesada que tiene al menos el 90 % de identidad con respecto a la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 1 y una secuencia de cadena ligera que tiene al menos el 90 % de identidad con respecto a la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 2; y b) una forma principal del anticuerpo que comprende más del, o igual al, 20 % de la proteína en la composición tal como se mide usando isoelectroenfoque capilar de la composición.

[0572] Una composición que comprende

[0573] a) un anticuerpo anti-IL-5 que comprende una secuencia de cadena pesada que tiene al menos el 90 % de identidad con respecto a la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 1 y una secuencia de cadena ligera que tiene al menos el 90 % de identidad con respecto a la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 2;

[0574] b) una forma principal del anticuerpo que comprende más del, o igual al, 20 % de la proteína en la composición tal como se mide usando isoelectroenfoque capilar de la composición; y

[0575] c) formas ácidas del anticuerpo que comprenden hasta aproximadamente el 80 % de la proteína en la composición tal como se mide usando isoelectroenfoque capilar de la composición.

[0576] La composición para el tratamiento de una enfermedad seleccionada del grupo que consiste en asma, asma eosinofílica intensa, asma intensa, asma eosinofílica no controlada, asma eosinofílica, asma sub-eosinofílica, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, granulomatosis eosinofílica con poliangitis, síndrome hipereosinofílico, poliposis nasal, penfigoide ampolloso y esofagitis eosinofílica.

[0577] Un método de tratamiento de una enfermedad en un sujeto que comprende las etapas de

[0578] a) identificar a un sujeto con una enfermedad seleccionada del grupo que consiste en asma, asma eosinofílica intensa, asma intensa, asma eosinofílica no controlada, asma eosinofílica, asma sub-eosinofílica, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, granulomatosis eosinofílica con poliangitis, síndrome hipereosinofílico, poliposis nasal, penfigoide ampolloso y esofagitis eosinofílica; y

[0579] b) administrar una cantidad terapéuticamente eficaz de la composición al sujeto;

[0580] mediante lo cual se trata la enfermedad en el sujeto.

[0581] La composición puede tener:

[0582] a) ≥0,70 de unión a antígeno específica de IL-5; y/o

[0583] b) ≥ 70 % de unión a FcRn.

[0584] La unión a antígeno específica puede estar en el intervalo de desde 0,70 hasta 1,30; y/o la unión a FcRn puede estar en el intervalo de desde el 70 % hasta el 130 %.

[0585] La composición puede comprender: ≤20 % de variantes de anticuerpo agregadas.

[0586] La variante de anticuerpo agregada puede comprender un dímero.

[0587] Un método de producción de la composición, que comprende las etapas de:

[0588] a) expresar en una célula huésped un anticuerpo que tiene una secuencia de aminoácidos de cadena pesada tal como se muestra en SEQ ID NO: 1 y una secuencia de aminoácidos de cadena ligera tal como se muestra en SEQ ID NO: 2, o una variante de anticuerpo que tiene una secuencia de aminoácidos de cadena pesada idéntica en al menos el 90 % a la secuencia de aminoácidos de cadena pesada y/o una secuencia de aminoácidos de cadena ligera idéntica en al menos el 90 % a la secuencia de aminoácidos de cadena ligera;

[0589] b) hacer crecer las células a un pH de aproximadamente 6,75 a aproximadamente 7,00 durante de aproximadamente 12 a aproximadamente 18 días para una edad de célulasin vitrocélula de menos de, o igual a, 166 días;

[0590] c) recoger un sobrenadante de cultivo celular;

[0591] d) colocar el sobrenadante de cultivo celular en contacto con una resina de proteína A o resina de proteína G para unirse a moléculas de anticuerpo;

[0592] e) eluir las moléculas de anticuerpo a partir de la resina para producir un primer eluato;

[0593] f) tratar el primer eluato a un pH de aproximadamente 3,3 a aproximadamente 3,7 durante de aproximadamente 15 a aproximadamente 240 minutos para producir un primer eluato tratado;

[0594] g) colocar el primer eluato tratado en contacto con una resina de intercambio aniónico a un pH de carga de aproximadamente 8,3 a aproximadamente 8,7;

[0595] h) recoger un segundo eluato a partir de la resina de intercambio aniónico y conservar esto durante aproximadamente 96 horas o menos;

[0596] i) tratar el segundo eluato con guanidina y sulfato de amonio para producir una disolución;

[0597] j) colocar la disolución en contacto con un lecho de resina de cromatografía de interacción hidrófoba a una razón de carga de aproximadamente 12 g de proteína/l de resina a aproximadamente 27 g de proteína/l de resina;

[0598] k) eluir un tercer eluato que comprende las moléculas de anticuerpo a partir de la resina de cromatografía de interacción hidrófoba con un volumen de gradiente de elución de aproximadamente 9 volúmenes de lecho de resina a aproximadamente 11 volúmenes de lecho de resina y un tope de corte de pico de elución de aproximadamente el 17 % de la altura de pico máxima a aproximadamente el 23 % de la altura de pico máxima; y

[0599] l) formular el tercer eluato;

[0600] mediante lo cual se produce la composición.

[0601] La composición puede producirse mediante el método.

[0602] Una composición que comprende una preparación purificada de un anticuerpo monoclonal y un agente tamponante, en la que la composición está a un pH de desde 6,2 hasta 6,6,

[0603] en la que el agente tamponante es histidina, fosfato, ácido cítrico, monohidrato de ácido cítrico, citrato o una sal de los mismos,

[0604] en la que la preparación purificada comprende las isoformas representadas por el pico 65, el pico 78, el pico 88, el pico 92, el pico principal y el pico 112 mostrados en la figura 1,

[0605] en la que el anticuerpo comprende una secuencia de aminoácidos de cadena pesada que tiene al menos el 90 % de identidad con respecto a la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1 y una secuencia de aminoácidos de cadena ligera que tiene al menos el 90 % de identidad con respecto a la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2, y en la que el anticuerpo se produce por una célula de ovario de hámster chino.

[0606] El agente tamponante puede ser al menos uno seleccionado del grupo que consiste en heptahidrato de fosfato de sodio dibásico, fosfato, ácido cítrico y monohidrato de ácido cítrico.

[0607] El agente tamponante puede ser fosfato de sodio, fosfato de potasio, ácido cítrico, monohidrato de ácido cítrico o citrato de sodio.

[0608] La composición puede comprender además un azúcar, un hidrato de carbono y/o una sal.

[0609] La composición puede comprender sacarosa.

[0610] Una composición que comprende una preparación purificada de un anticuerpo monoclonal y un agente tamponante, en la que la composición está a un pH de desde 6,2 hasta 6,6,

[0611] en la que el agente tamponante es fosfato o una sal del mismo,

[0612] en la que la preparación purificada comprende las isoformas representadas por el pico 65, el pico 78, el pico 88, el pico 92, el pico principal y el pico 112 mostrados en la figura 1,

[0613] en la que el anticuerpo comprende una secuencia de aminoácidos de cadena pesada que tiene al menos el 90 % de identidad con respecto a la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1 y una secuencia de aminoácidos de cadena ligera que tiene al menos el 90 % de identidad con respecto a la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2, y en la que el anticuerpo se produce por una célula de ovario de hámster chino.

[0614] El agente tamponante puede ser al menos uno seleccionado del grupo que consiste en heptahidrato de fosfato de sodio dibásico, fosfato, ácido cítrico, monohidrato de ácido cítrico y citrato.

[0615] La composición puede comprender además un azúcar.

[0616] El azúcar puede ser sacarosa.

[0617] La composición puede comprender polisorbato 80.

[0618] La composición puede comprender una seleccionada de una primera formulación de heptahidrato de fosfato de sodio dibásico 16,1 mM, monohidrato de ácido cítrico 3,9 mM, el 12 % en peso de sacarosa con respecto a volumen, el 0,02 % en peso de polisorbato 80 con respecto a volumen y EDTA 0,05 mM; una segunda formulación de heptahidrato de fosfato de sodio dibásico 15,2 mM, monohidrato de ácido cítrico 4,8 mM, el 12 % en peso de sacarosa con respecto a volumen, el 0,02 % en peso de polisorbato 80 con respecto a volumen y EDTA 0,05 mM; una tercera formulación de heptahidrato de fosfato de sodio dibásico 15,8 mM, monohidrato de ácido cítrico 4,2 mM, el 12 % en peso de sacarosa con respecto a volumen, el 0,02 % en peso de polisorbato 80 con respecto a volumen y EDTA 0,05 mM; una cuarta formulación de heptahidrato de fosfato de sodio dibásico 16,3 mM, monohidrato de ácido cítrico 3,7 mM, el 12 % en peso de sacarosa con respecto a volumen, el 0,02 % en peso de polisorbato 80 con respecto a volumen y EDTA 0,05 mM; y una quinta formulación de heptahidrato de fosfato de sodio dibásico 15,5 mM, monohidrato de ácido cítrico 4,5 mM, el 12 % en peso de sacarosa con respecto a volumen, el 0,02 % en peso de polisorbato 80 con respecto a volumen y EDTA 0,05 mM.

[0619] El anticuerpo puede tener una constante de disociación igual a, o de menos de, aproximadamente 3,5x10<-11>M para interleucina 5 humana que comprende la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 11.

[0620] La concentración de anticuerpo monoclonal puede ser de aproximadamente 75 mg/ml o aproximadamente 100 mg/ml. El anticuerpo puede tener una constante de disociación igual a, o de menos de, aproximadamente 3,5x10<-11>M para interleucina 5 humana que comprende la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 11.

[0621] El anticuerpo puede estar a una concentración de entre aproximadamente 75 mg/ml y aproximadamente 100 mg/ml. La composición puede comprender además uno o una combinación de:

[0622] a) un agente tamponante seleccionado del grupo que consiste en heptahidrato de fosfato de sodio dibásico, fosfato, citrato, fosfato de sodio, fosfato de potasio, citrato de sodio e histidina, proporcionando un pH de entre 6,8 y 7,2; y/o b) un azúcar; y/o

[0623] c) polisorbato 80; y/o d) EDTA.

[0624] La composición puede comprender además uno o una combinación de:

[0625] a) un agente tamponante seleccionado del grupo que consiste en heptahidrato de fosfato de sodio dibásico, fosfato, citrato, monohidrato de ácido cítrico, fosfato de sodio, fosfato de potasio, citrato de sodio e histidina, proporcionando un pH de entre 6,2 y 6,6; y/o

[0626] b) un azúcar; y/o

[0627] c) polisorbato 80; y/o d) EDTA.

[0628] La composición para su uso en terapia

[0629] La composición para su uso en el tratamiento de asma, asma eosinofílica intensa, asma intensa, asma eosinofílica no controlada, asma eosinofílica, asma sub-eosinofílica, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, granulomatosis eosinofílica con poliangitis, síndrome hipereosinofílico, poliposis nasal, penfigoide ampolloso y esofagitis eosinofílicaEjemplos

[0630] Ejemplo 1

[0631] Preparación de una composición

[0632] Se produjeron múltiples lotes de una composición que comprendía el anticuerpo monoclonal anti-IL-5 mepolizumab. Un inóculo de células de ovario de hámster chino transfectadas de manera estable con constructos de vector de expresión que comprendían las secuencias de ácido nucleico mostradas en SEQ ID NO: 13 y SEQ ID NO: 14 se cultivó en biorreactores de 5000 l que contenían un medio de cultivo celular líquido. El anticuerpo maduro codificado por estos ácidos nucleicos es mepolizumab y comprende la secuencia de aminoácidos de cadena pesada mostrada en SEQ ID NO: 1 y la secuencia de aminoácidos de cadena ligera mostrada en SEQ ID NO: 2.

[0633] Se hicieron funcionar los biorreactores a una temperatura de aproximadamente 34,5°C a aproximadamente 35,5°C. Se burbujearon aire y oxígeno en el medio de cultivo y se mantuvo un pH de aproximadamente 6,75 a 7,00. La duración de cultivo fue de aproximadamente 12 a 18 días. La edad de célulasin vitro(días de cultivo desde la descongelación inicial del banco de células maestro hasta la recogida) fue de 166 días o menos. Después de esto, se recogió un sobrenadante de cultivo celular aclarado mediante centrifugación y filtración profunda del medio de cultivo celular. Después se sometió este sobrenadante aclarado a cromatografía de proteína A y se dejaron fluir impurezas fuera de esta cromatografía columna. Después se eluyó proteína unida, incluyendo moléculas de anticuerpo, a partir de la columna de proteína A, se trató a un pH de aproximadamente 3,3 a 3,7 durante aproximadamente de 15 a 240 minutos. Después se ajustó esta preparación tratada a pH de aproximadamente 4,3 a 4,7 y se conservó durante aproximadamente de 20 a 1110 minutos. Después se aclaró esta preparación tratada a través del tren de filtración de un filtro profundo y un filtro de capa doble de 0,5/0,2 µm. Después se sometió la preparación filtrada a cromatografía de intercambio aniónico de Q-SEPHAROSE<™>Fast Flow a un pH de carga de aproximadamente 8,3 a 8,7 y se eluyó a partir de la columna de cromatografía. Después se conservó este eluato durante aproximadamente 96 horas o menos. Después se añadieron guanidina y sulfato de amonio. Se añadió guanidina a una concentración de aproximadamente 1,8 M a 2,2 M y se conservó durante aproximadamente de 15 a 240 minutos. Después se sometió esta disolución a cromatografía con fenil-SEPHAROSE<™>Fast Flow a una razón de carga de aproximadamente 12 g de proteína/l de resina a aproximadamente 27 g/L resina, un volumen de gradiente de elución (volúmenes de lecho; BV) de aproximadamente 9 a aproximadamente 11, y tope de corte de pico de elución ( % de la altura de pico máxima) de aproximadamente el 17 a aproximadamente el 23. Después se realizó filtración de virus usando un filtro de eliminación de virus Planova 20N. Después se ajustó este filtrado hasta una concentración objetivo de aproximadamente 46 g de proteína/l a aproximadamente 66 g de proteína/l y se formularon los principios activos a granel (BDS) mediante intercambio de ultrafiltración y filtración tangencial con una disolución que comprendía heptahidrato de fosfato de sodio dibásico a aproximadamente 20 mM y el 12 % en peso de sacarosa con respecto a volumen. Después se ajustó esta disolución hasta una concentración objetivo de 76 g de proteína/l a aproximadamente 82 g de proteína/l y se añadió aproximadamente el 0,05 % en peso de polisorbato 80 con respecto a volumen. Después se filtró esta disolución a través de filtros de PES de 0,5/0,2 µm y se llenaron y congelaron recipientes de la disolución. Se fabricó producto terminado usando un procedimiento de fabricación estéril que implicó descongelar y combinar recipientes a granel seguido por la filtración del producto a granel en viales, liofilización, taponado y engarzado mediante procedimientos de fabricación bien conocidos en la técnica. La presentación de producto terminado final es un producto terminado liofilizado en un vial de un solo uso.

[0634] Se reconstituyó producto liofilizado de cada lote producido mediante la adición de agua para producir una composición que comprendía 100 mg/ml de proteína, el anticuerpo monoclonal anti-IL-5 mepolizumab y heptahidrato de fosfato de sodio dibásico 26 mM, el 15 % en peso de sacarosa con respecto a volumen y el 0,065 % en peso de polisorbato 80 con respecto a volumen a un pH de desde aproximadamente 6,8 hasta aproximadamente 7,2.

[0635] Ejemplo 2

[0636] Caracterización de la composición

[0637] Se caracterizaron muestras de los lotes de composición que comprendía un anticuerpo monoclonal anti-IL-5 producidos tal como se describió anteriormente.

[0638] El isoelectroenfoque capilar (cIEF) mostró sistemáticamente la presencia de seis isoformas de anticuerpo en la composición (por ejemplo, composición de patrón de referencia (RS) 101245722). Véase la figura 1. Estas isoformas son las isoformas de pico 65, pico 78, pico 88, pico 92, pico principal y pico 112 mostradas en la figura 1. Se sometieron muestras de la composición a cIEF usando métodos convencionales. Se incluyeron patrones de pI 7,9 y pI 9,46 en muestras para analizarse mediante cIEF. El electroferograma de cIEF mostrado en la figura 1 es representativo de los de la composición de múltiples lotes.

[0639] El electroferograma muestra que la composición comprende una forma principal, formas ácidas y formas básicas del anticuerpo. La forma principal puede observarse en la figura 1 y también se identifica como pico 100 en algunos casos. Las formas ácidas del anticuerpo corresponden a las formas de pico 65, pico 78, pico 88 y pico 92 de la figura 1. Las formas básicas del anticuerpo corresponden a las formas de pico 112 de la figura 1.

[0640] La fórmula usada para la asignación de picos es la siguiente:

[0641] nombre de pico=int{(pIPico-8)/(pIPrincipal-8)*100} donde: int = número entero ypIPico =pI del pico que va a nombrarse. La tabla 7 muestra el convenio de nomenclatura de picos para electroferogramas de cIEF de la composición que comprende un anticuerpo monoclonal anti-IL-5. El nombre de los picos determinados tal como se describe aquí debe verificarse basándose en el patrón electroforético/cromatográfico observado. Los picos que no se encuentran dentro de los intervalos descritos aquí deben procesarse según la fórmula anterior.

[0642] Tabla 7. Identificación de picos de cIEF

[0645]

[0647] Se realizó un análisis integral de los picos de electroferograma. Véase la tabla 8.

[0648] Tabla 8. Área de picos totales en electroferogramas de cIEF seleccionados de diferentes lotes de composición.

[0651]

[0653] Esto mostró que la forma principal representaba más del, o igual al, 50,0 % del área de picos totales en las muestras (observándose también valores de entre aproximadamente el 58,1 % y el 62,3 %). Esto también mostró que las formas ácidas representaban menos del, o igual al, 45,0 % del área de picos totales en las muestras (observándose también valores de entre aproximadamente el 20 % y aproximadamente el 45 %, tal como el 32,2 % y el 40,7 %). Las formas básicas representaban desde aproximadamente el 1 % hasta aproximadamente el 15 % del área de picos totales en las muestras (observándose también valores de entre aproximadamente el 1,2 % y aproximadamente el 4,9 %). Después, la fracciones de picos de forma principal, formas ácidas y formas básicas producidas mediante cIEF se analizaron adicionalmente mediante análisis de intercambio catiónico débil (WCX), mapeo peptídico de tripsina y cromatografía de líquidos-espectrometría de masas/espectrometría de masas (CL-EM/EM). Se usaron métodos convencionales para estos análisis.

[0654] Estos resultados de WCX, mapeo peptídico de tripsina y CL-EM/EM mostraron que la fracción de pico de forma principal contenía dos modificaciones de AcM de IgG<1>. Por tanto, en la secuencia de aminoácidos de cadena pesada de anticuerpo de SEQ ID NO: el 99,6 % de la glutamina N-terminal (Gln, Q) estaba ciclizada para dar ácido piroglutámico (pGlu) y el 99,9 % de la lisina C-terminal de cadena pesada (HC) (Lys, K) 449 estaba escindida. Normalmente, los niveles de pGlu en los lotes sometidos a prueba eran >95,0 % y el nivel de HC sin C-terminal K449 era > 98,0 %.

[0655] Estos resultados de WCX, mapeo peptídico de tripsina y CL-EM/EM también mostraron para los picos de formas ácidas que se observaba un desplazamiento de masa de un Dalton característico de desamidación. La CL-EM/EM de mapeo peptídico demostró que los picos de formas ácidas contenían una mezcla de especies de anticuerpo desamidadas. La desamidación se observó de manera predominante en N386 de HC de la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 1 y en N31 de CL de la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 2. También se observaron niveles inferiores de desamidación en N317 de HC de la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 1.

[0656] En su totalidad, estos datos experimentales mostraron que los residuos de asparagina N317 de HC, N386 de HC, N299 de HC de la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 1 y N31 de CL de la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 2 eran propensos a la desamidación.

[0657] WCX, mapeo peptídico de tripsina y CL-EM/EM mostraron para los picos de formas básicas que las formas de anticuerpo en este pico tenían al menos un residuo de aminoácido de lisina carboxilo-terminal, de cadena pesada, intacto. Las especies de anticuerpo con lisinas intactas, con respecto a otras formas en las que están ausentes, migrarán en la región básica debido a cargas positivas adicionales a partir de estos residuos. Por tanto, las formas básicas, tales como el pico 112, corresponden a formas de anticuerpo en las que una, o ambas, secuencias de aminoácidos de cadena pesada tienen la secuencia de aminoácidos con lisina carboxilo-terminal mostrada en SEQ ID NO: 1 intacta.

[0658] También se realizó la secuenciación primaria de la composición que comprendía un anticuerpo monoclonal anti-IL-5 mediante técnicas de CL-EM/EM convencionales. Estos análisis examinaron la estructura primaria y secuencia de aminoácidos de las moléculas de anticuerpo en la composición. En particular, estos análisis mostraron qué residuos de aminoácido estaban desamidados, oxidados, ciclizados o ausentes en el anticuerpo anti-IL-5 y el porcentaje de los mismos en la población de anticuerpos anti-IL-5 (por ejemplo, expresado a partir de la secuencia de ácido nucleico de SEQ ID NO: 13 y la secuencia de ácido nucleico de SEQ ID NO: 14) presentes en la composición. Véase la tabla 9. Tabla 9. Secuencia primaria de anticuerpo mediante CL-EM/EM de mapeo peptídico.

[0661]

[0663] Variantes de anticuerpo

[0664] Mepolizumab se une a IL-5 soluble y bloquea la unión de la IL-5 soluble a su receptor. La estructura de IL-5 es indicativa de una proteína secretada y no hay ninguna evidencia de ninguna forma unida a membrana de IL-5 en ningún tipo de célula. Por tanto, las funciones efectoras de Fc no forman parte del mecanismo de acción (MOA) de mepolizumab. Basándose en el MOA y propiedades PK de mepolizumab, hay dos funciones implicadas en la actividad biológica de este anticuerpo: unión a IL-5 a través de las CDR, y unión al receptor FcRn a través de la región de Fc.

[0665] Mediante extensos estudios de caracterización realizados anteriormente y tal como se expone a continuación, se determinó que al menos la desamidación, oxidación y agregación pueden conducir a variantes de anticuerpo en la composición de mepolizumab, y que estas variantes pueden tener un impacto sobre la función de mepolizumab. Deben mantenerse niveles específicos de estas variantes para garantizar una función biológica apropiada. La función se describe en el presente documento dentro del intervalo aceptable de 0,70-1,30 de actividad de unión a antígeno específica (unión a IL5) y el 70 %-130 % de unión a FcRn. Por tanto, las etapas para identificar variantes de anticuerpo que tienen un impacto sobre la función incluyen: (i) se forma la variante de anticuerpo, (ii) tiene la variante un impacto sobre la función, y (iii) qué nivel de variante puede dar como resultado una composición funcional.

[0666] Función

[0667] Unión a IL-5: se realizó un análisis estadístico para calcular el intervalo de actividad funcional de unión a antígeno aceptable usando todos los datos de liberación y estabilidad de principio activo (DS) y producto terminado (DP) generados hasta la fecha. Se comparó el intervalo estadístico calculado con la experiencia clínica y se evaluó basándose en el impacto conocido de variantes relacionadas con producto sobre la potencia. Basándose en este análisis, el intervalo de actividad funcional de unión a antígeno aceptable en el momento de la liberación y al final de la vida de almacenamiento es unión a antígeno específica de 0,70 - 1,30.

[0668] La unión específica a IL-5 se determinó mediante resonancia de plasmón superficial (SPR) usando un instrumento BIACORE<™>, realizada en modo de unión. Este ensayo de SPR puede detectar reducciones de la unión a antígeno que resultan de cambios en mepolizumab y variantes de mepolizumab vinculadas a la potencia.

[0669] Se usa SPR para determinar la actividad de unión a antígeno específica de mepolizumab. En primer lugar, se inyecta patrón de referencia de mepolizumab sobre la superficie de un chip de sensor CM5 que contiene proteína A inmovilizada y después se inyecta proteína de IL-5 diluida a una concentración fija, permitiendo que la IL-5 se una a la muestra de mepolizumab capturada. La concentración de mepolizumab unido a IL-5, notificada como unión funcional de mepolizumab a IL-5, se determina a partir de una curva de calibración de patrón de referencia de mepolizumab correspondiente. El resultado de SPR se notificó como concentración de unión funcional de mepolizumab a IL-5, dividida entre la concentración de proteína total.

[0670] Unión a FcRn: también se midió la actividad de unión a receptor de Fc neonatal (FcRn) de mepolizumab mediante resonancia de plasmón superficial (SPR) usando un instrumento BIACORE<™>. Se determinó que el intervalo de actividad funcional de unión a FcRn aceptable era del 70-130 %, basándose en resultados generados hasta la fecha durante el desarrollo de producto de mepolizumab, variables de ensayo conocidas, y resultados generados para productos de AcM similares.

[0671] La región de Fc de mepolizumab se une a FcRn, y esta interacción refleja la larga semivida en suero de mepolizumab (semivida terminal media = 20 días). En el ensayo de SPR, se usó un chip de sensor de ácido nitrilotriacético (NTA) que contenía receptores FcRn inmovilizados para capturar una concentración fija de mepolizumab. En primer lugar, se inyectó Ni<2+>a una concentración fija y se capturó sobre un chip de sensor de NTA mediante quelación de Ni<2+>a través de NTA. En segundo lugar, se inyectó receptor FcRn a una concentración fija y la etiqueta de 6x histidina en el extremo C-terminal de la cadena alfa del receptor FcRn se une al Ni<2+>que se había capturado previamente. Entonces se inyectó mepolizumab, que se había diluido dentro del intervalo de concentración de la curva patrón, sobre la superficie del chip de sensor de NTA que contenía receptor FcRn capturado. Se extrapoló la concentración de mepolizumab unido al receptor FcRn a partir de un partir de una curva de calibración de patrón de referencia de mepolizumab correspondiente. El resultado de SPR se notificó como la concentración de unión funcional de mepolizumab al receptor FcRn, dividida entre la concentración de proteína total.

[0672] El método de SPR para la unión a antígeno específica y la unión a FcRn usa un patrón de referencia de mepolizumab. El patrón de referencia de mepolizumab se usa simplemente en ensayos para obtener datos de idoneidad de sistema y de comparabilidad de muestras, para garantizar que los métodos están funcionando de manera apropiada. El patrón de referencia permite el establecimiento de una curva de calibración y se interpolan concentraciones de las muestras a partir de la curva.

[0673] Variantes ácidas

[0674] Después se realizaron estudios de degradación forzada para determinar el impacto de niveles aumentados de variantes ácidas, por ejemplo desamidación, sobre la función/eficacia de anticuerpo, es decir, actividades de unión a antígeno y de unión a FcRn.

[0675] En estudios de degradación forzada a pH 9,0, se ajustó la composición a pH 9,0 con hidróxido de sodio 6 N y se incubó durante 30 días a 40°C. Se recogieron muestras a 0, 3, 7, 14 y 30 días y se compararon con la composición no sometida a condiciones extremas, que se usó como control. Después se analizaron las muestras sometidas a condiciones extremas a pH 9,0 mediante cIEF. Los resultados se muestran en la tabla 10 y la figura 1 (día 0 y día 3). La composición sometida a condiciones extremas a pH 9,0 se degradó más allá de las capacidades del ensayo de cIEF en el día 14; por tanto, en la tabla 10 solo se muestran resultados hasta el punto de tiempo del día 7. A una condición extrema de pH 9,0 durante 3 días, se observó que la región ácida total era del 74,4 % y el 71,9 % para dos lotes diferentes de la composición.

[0676] Tabla 10. Resumen de datos de cIEF para estudios de degradación forzada a pH 9,0.

[0679]

[0681] Después se sometieron a prueba las muestras del estudio de degradación forzada a pH 9,0 de la composición de diferentes lotes para determinar la actividad de unión a antígeno específica (tabla 11) y actividad de unión a FcRn (tabla 12) usando métodos de resonancia de plasmón superficial (SPR) convencionales.

[0682] Tabla 11. Resumen de datos de actividad de unión a antígeno específica (por ejemplo, actividad de unión a IL-5 humana) medida mediante SPR en muestras de estudio de degradación forzada a pH 9,0 de la composición de diferentes lotes.

[0685]

[0687] Tabla 12. Unión a FcRn medida mediante SPR en muestras de estudio de degradación forzada a pH 9,0 de la composición de diferentes lotes.

[0690]

[0692] La actividad de unión específica a IL-5 en el día 3 (es decir, aproximadamente el 72-74 % de variante ácida) era de 0,74 para ambos lotes de la composición sometidos a degradación forzada a pH 9,0. Las actividades de unión a FcRn eran del 82 % y el 80 % respectivamente para ambos lotes de la composición sometidos a degradación forzada a pH 9,0. Estos valores estaban dentro de los criterios de aceptación para cada ensayo. El criterio de aceptación para la actividad de unión a antígeno específica es de 0,70-1,30 y el criterio de aceptación para la unión a FcRn es del 70 %-130 %. Por tanto, la variante ácida puede ser de hasta aproximadamente el 74 % para conservar la función de la composición de mepolizumab.

[0693] Desamidación

[0694] Los estudios de degradación forzada pueden determinar qué residuos que parecen ser propensos a la desamidación se desamidan realmente, y si la variante desamidada tiene un impacto sobre la función, y qué niveles de desamidación son aceptables dentro de una composición para conservar la función. Los residuos de asparagina que se determinó experimentalmente que eran propensos a la desamidación son N317 de HC, N386 de HC, HC N299 y N31 de CL. Se realizaron estudios de degradación forzada para determinar el impacto de niveles aumentados de desamidación de N31 de CL en la secuencia de aminoácidos de cadena ligera de anticuerpo mostrada en SEQ ID NO: 2 sobre la actividad de unión a antígeno. En estos estudios, se ajustó la composición de diferentes lotes a pH 9,0 con hidróxido de sodio 6 N y se incubó durante 30 días a 40°C. Se recogieron muestras a 0, 3, 7, 14 y 30 días y se compararon con composición no sometida a condiciones extremas (por ejemplo, patrón de referencia) que se usó como control. Se sometieron a prueba las muestras sometidas a condiciones extremas a pH 9,0 mediante CL-EM/EM de mapeo peptídico. Los resultados se muestran en la tabla 13. Cuando se conservó mepolizumab a pH 9,0 durante 3 días, el nivel de N31 de CL desamidada en la secuencia de aminoácidos de cadena ligera de anticuerpo mostrada en SEQ ID NO: 2 es del 17,4 % y el 16,8 % para diferentes lotes de la composición. Véase la tabla 13. Los datos de unión a antígeno y a FcRN para mepolizumab conservado a pH 9,0 durante 3 días se presentan en la tabla 11 y la tabla 12.

[0695] Tabla 13. Porcentaje de desamidación mediante CL-EM/EM de mapeo peptídico en muestras de estudio de degradación forzada a pH 9,0 de la composición de diferentes lotes en el día 3.

[0697]

[0700] Por tanto, en el día 3, la actividad de unión a antígeno específica de 0,74 (tabla 11), y la actividad de unión a FcRn del 84 % y el 82 % (tabla 12), muestran que la desamidación en N31 de hasta aproximadamente el 17 %, y la desamidación en N386 de hasta aproximadamente el 28 % (tabla 13), pueden conservar una composición funcional dentro del intervalo aceptable de 0,70-1,30 de actividad de unión a antígeno específica y el 70 %-130 % de unión a FcRn.

[0701] Oxidación

[0703] Se realizaron estudios de degradación forzada para examinar experimentalmente la propensión de metionina y otros residuos de aminoácido en las cadenas pesada y ligera de anticuerpo de la composición a la oxidación. Los estudios de degradación forzada pueden determinar qué residuos que parecen ser propensos a la oxidación se oxidan realmente, y si la variante oxidada tiene un impacto sobre la función, y qué niveles de oxidación son aceptables dentro de una composición para conservar la función/eficacia (unión a antígeno y/o unión a FcRn).

[0705] Se incubaron muestras de la composición con peróxido de hidrógeno (H<2>O<2>) al 0,1 % durante 48 horas a temperatura ambiente (TA) para inducir la oxidación. Se recogieron muestras a 0, 6, 12, 24 y 48 horas. Se compararon con composición no sometida a condiciones extremas (por ejemplo, patrón de referencia) que se usó como control. A partir de estos estudios se determinó que los residuos de metionina (M) más propensos a la oxidación incluyen M64 de HC, M82 de HC, M85 de HC, M254 de HC, M360 de HC, M430 de HC de la secuencia de aminoácidos de cadena pesada de anticuerpo mostrada en SEQ ID NO: 1 y M4 de CL de la secuencia de aminoácidos de cadena ligera de anticuerpo mostrada en SEQ ID NO: 2. Los residuos de metionina (M) más propensos a la oxidación incluyen M64, que está ubicado en la CDR2 de HC; M254 y M430, que están ubicados en la cavidad de unión a FcRn y a proteína A en la región de Fc; y M360 de la secuencia de aminoácidos de cadena pesada de anticuerpo mostrada en SEQ ID NO: 1. Los residuos de metionina propensos a la oxidación en menor grado incluyeron M4 de HC, M82 de HC y M85 de HC de la secuencia de aminoácidos de cadena pesada de anticuerpo mostrada en SEQ ID NO: 1. Además, se determinó que C220 de CL de la secuencia de aminoácidos de cadena ligera de anticuerpo mostrada en SEQ ID NO: 2 era propenso a la oxidación en condiciones químicamente inducidas. De manera importante, C220 de CL y C222 de HC forman el enlace disulfuro entre cadenas que une las cadenas pesada y ligera.

[0707] Los niveles de sulfóxido resultantes de la oxidación de metionina y de ácido sulfónico resultantes de la oxidación de cisteína se midieron usando CL-EM/EM de mapeo peptídico y se resumen en la tabla 14. M64, M254, M360 y M430 de HC se oxidaron a más del 70 % en 48 horas tras la incubación con peróxido de hidrógeno (H<2>O<2>) al 0,1 %.

[0709] Tabla 14. Porcentaje de oxidación determinado mediante CL-EM/EM de mapeo peptídico en muestras de estudio de la composición de diferentes lotes tras el tratamiento con H<2>O<2>durante 48 horas.

[0712]

[0715] Se midió la unión a antígeno específica mediante los anticuerpos en la composición mediante SPR. Esto demostró una mayor reducción de la actividad de unión a antígeno específica a las 48 horas en diferentes lotes sometidos a condiciones extremas con H<2>O<2>tal como se resume en la tabla 15. Esta reducción de la unión a antígeno se correlaciona con los niveles relativamente superiores de oxidación de M64 observados mediante CL-EM/EM de mapeo peptídico. Las actividades de unión a antígeno específica en las muestras sometidas a prueba de los diferentes lotes de la composición disminuyeron en aproximadamente el 15 % y el 32 %, respectivamente. Cuando mepolizumab estaba oxidado al 85,6 %, la actividad de unión a antígeno específica todavía se conservó a 0,57. Se usó la relación lineal entre los niveles acumulativos de oxidación en mepolizumab y la actividad de unión a antígeno específica y se determinó, en el peor caso, que M64 de HC podía oxidarse a aproximadamente el 50 % y los anticuerpos en la composición todavía conservarían la actividad de unión a antígeno en el intervalo de 0,70-1,30.

[0717] Tabla 15. Actividad de unión a antígeno específica medida mediante SPR en diferentes lotes de la composición tratados con H<2>O<2>durante 48 horas.

[0720]

[0723] Los perfiles de actividad de unión a FcRn de muestras sometidas a condiciones extremas con H<2>O<2>de diferentes lotes de la composición eran altamente similares con una reducción sustancial de la actividad de unión a FcRn a las 48 horas en comparación con los controles (patrón de referencia sin tratar) tal como se muestra en la tabla 16. M254 de HC y M430 de HC están ubicados en la región de Fc y, cuando se oxidan, se ha mostrado que dan como resultado una reducción de la unión a FcRn. Basándose en resultados de mapeo peptídico generados durante los estudios de degradación forzada, cuando la composición se oxida químicamente con H<2>O<2>durante 48 horas, los niveles de M254 de HC y M430 de HC oxidados observados en los diferentes lotes son ≥95 %. Los resultados de unión a FcRn mostraron una reducción de aproximadamente el 80 % en la unión a FcRn de antígeno en las muestras sometidas a condiciones extremas con H<2>O<2>de diferentes lotes de la composición. Cuando mepolizumab estaba oxidado a ≥90 %, la actividad de unión a FcRn todavía se conservó al 22 %. Se usó la relación lineal entre los niveles acumulativos de oxidación en mepolizumab y la actividad de unión a FcRn y se determinó, en el peor caso, que M254 de HC y M430 de HC podían oxidarse al 50 % y los anticuerpos en la composición todavía conservarían la actividad de unión a FcRn en el intervalo del 70 %-130 %.

[0725] Tabla 16. Actividad de unión a FcRn medida mediante SPR en diferentes lotes de la composición tratados con H<2>O<2>durante 48 horas.

[0728]

[0731] Se llevó a cabo un estudio de fotoestrés para determinar el impacto de la oxidación de triptófano inducida por la luz sobre la actividad de unión a antígeno de los anticuerpos en diferentes lotes de la composición. Esto mostró que el triptófano W52 en la cadena pesada de anticuerpo es propenso a la oxidación. Para estos estudios, se expuso la composición de diferentes lotes a 1,8 millones de lux-h de luz visible a lo largo de aproximadamente 60 horas a 25°C para inducir fotoestrés. Se compararon muestras recogidas a las 0, 3, 7, 14 y 30 horas con un patrón de referencia no sometido a condiciones extremas de la composición que se usó como control. Los niveles de di-oxidación/quinureninia resultantes de la oxidación de triptófano eran altamente similares en los diferentes lotes de composición sometida a condiciones extremas por exposición a luz tal como se resume en la tabla 17. Se detectaron aumentos de la oxidación de W52 de HC tras 60 horas de exposición a luz.

[0733] Tabla 17. Porcentaje de oxidación medido mediante CL-EM/EM de mapeo peptídico en diferentes lotes de la composición tras condiciones extremas por exposición a luz durante 60 horas.

[0734]

[0736] Los perfiles de actividad de unión a antígeno específica de los anticuerpos en los diferentes lotes de composición sometida a condiciones extremas por exposición a luz mostraron una reducción de la actividad de unión a antígeno específica a lo largo del tiempo. Esto se resume en la tabla 18. Cuando mepolizumab estaba oxidado a aproximadamente el 7 %, la actividad de unión a antígeno específica todavía se conservó a 0,53. Se usó la relación lineal entre los niveles acumulativos de oxidación de triptófano en mepolizumab y la actividad de unión a antígeno específica y se determinó, en el peor caso, que W52 podía oxidarse al 3 % y los anticuerpos en la composición todavía conservarían la actividad de unión a antígeno en el intervalo de 0,70-1,30.

[0737] Table18. Actividad de unión a antígeno específica medida mediante SPR en diferentes lotes de la composición tras condiciones extremas por exposición a luz durante 60 horas.

[0740]

[0742] Por tanto, para conservar la función (unión a IL-5 y/o unión a FcRn), M64 de HC podía oxidarse hasta el 50 %, M254 de HC y M430 de HC podían oxidarse hasta el 50 %, y W52 podía oxidarse hasta el 3 %.

[0743] Agregación

[0744] Se monitorizó la distribución de tamaño de los anticuerpos en la composición usando métodos de cromatografía de exclusión molecular (SEC) convencionales en condiciones no desnaturalizantes. Se detectaron tres picos en el perfil de SEC de la composición de RS tal como se muestra en la figura 3 y la figura 4. Se identificó un pico principal a 7,9 minutos con un área en porcentaje relativa del 99,4 % como monómero; se identificó un pico minoritario a aproximadamente 6,7 minutos con un área en porcentaje relativa del 0,5 % como agregado. En algunos lotes se ha observado un segundo pico minoritario, que eluye después del pico principal lo cual indica la presencia de fragmento. Normalmente, este pico está por debajo del QL del ensayo de SEC de 0,1.

[0745] El pico agregado se caracterizó adicionalmente usando SEC con detección por dispersión de la luz de múltiples ángulos (MALS) y ultracentrifugación analítica (AUC). Los resultados muestran que los perfiles de SEC-MALS contienen un pico que eluye más pronto (dímero) y un pico que eluye más tarde (monómero) tal como se muestra en la figura 5 para la composición de RS y la figura 6 para un lote diferente de la composición. La línea que interseca cada pico representa la masa molar de la especie detectada y la posición del pico de dímero, que no es fácilmente visible en los cromatogramas debido a la baja abundancia de dímero en las muestras.

[0746] Se usaron los datos de SEC-MALS para calcular la masa molar de los monómeros y dímeros de anticuerpo. La masa molar resultante de los monómeros en la composición de RS y para un lote diferente de la composición fue comparable a la masa teórica de monómero de mepolizumab de 148.760 kDa tal como se muestra en la tabla 19. Se detectó variabilidad en el peso molecular observado para el dímero debido al bajo nivel de esta especie presente en la muestra. Tabla 19. Análisis de SEC-MALS de los monómeros en la composición de RS y para un lote diferente de la composición.

[0749]

[0751] Se usó un análisis integral del área bajo la curva (AUC) de la velocidad de sedimentación como técnica complementaria a métodos basados en fracción incluyendo SEC para confirmar que no hay ninguna perturbación del equilibrio de auto asociación o exclusión de agregados de orden superior a partir de la separación cromatográfica. Los resultados del análisis de AUC demostraron que la distribución de c(s) contiene una especie dominante (pico principal), identificada como monómero, con un coeficiente de sedimentación tanto para el lote de RS de la composición como para otro lote de la composición de 2,81 S; y un pico agregado, identificado como dímero, con un coeficiente de sedimentación de 4,87 S para el lote de RS de la composición y de 5,10 S para otro lote de la composición tal como se muestra en la tabla 20. La diferencia en los valores de coeficiente de sedimentación entre PRS y BDS no se considera sustancial y se atribuye a la baja abundancia de dímero dentro de las muestras. La única especie de alto peso molecular detectada fue dímero, lo cual es compatible con los resultados de SEC-UV y SEC-MALS.

[0752] Tabla 20. Análisis de AUC de diferentes lotes de la composición

[0755]

[0757] Los coeficientes de sedimentación determinados para monómero y dímero fueron inferiores a los valores observados tradicionalmente para anticuerpos monoclonales de IgG<1>. La formulación de mepolizumab contiene el 12 % (p/v) de sacarosa, dando como resultado una muestra altamente viscosa lo cual provoca los coeficientes de sedimentación inferiores observados para estas moléculas de anticuerpo en la composición. Los resultados del análisis de SEC-UV, SEC-MALS y AUC muestran que la especie agregada en la composición es dímero de anticuerpo.

[0758] Para investigar el impacto del agregado sobre la actividad de unión a antígeno, se llevó a cabo un estudio a pH bajo con la composición de diferentes lotes. Se ajustaron muestras de composición de los diferentes lotes a pH 3,5 con ácido clorhídrico 5 N. Después se incubaron as muestras ajustadas a pH 3,5 durante 30 días a 40°C para inducir modificaciones químicas. Se compararon muestras recogidas a 0, 3, 7, 14 y 30 días con una muestra de RS no sometida a condiciones extremas de la composición, que se usó como control. Esto mostró que, cuando la composición se somete químicamente a condiciones extremas a pH bajo de 3,5, la agregación es una de las rutas de degradación primarias.

[0759] Los perfiles de degradación de SEC de muestras sometidas a condiciones extremas a pH 3,5 de la composición se muestran en la figura 7 y se resumen en la tabla 21. En las condiciones extremas a pH bajo de 3,5, se observaron diferentes tasas de agregación entre los diferentes lotes de composición. Sin embargo, en el día 30 ambos lotes de la composición alcanzaron el equilibrio y mostraron niveles similares de agregación. Esta diferencia en la tasa de agregación entre los diferentes lotes se atribuye al nivel superior de dímero covalente frene a dímero no covalente en los lotes. La tasa de agregación más lenta observada en el lote MDS1 de la composición se atribuye a la proporción superior de dímero no covalente con respecto a la del lote MDS2; el dímero no covalente se asocia y se disocia hasta que se alcanza el equilibrio, lo cual puede ralentizar la tasa global de formación de agregados.

[0760] Tabla 21. Resumen de datos de SEC para un lote de RS sin tratar de la composición y lotes sometidos a condiciones extremas de pH de la composición.

[0763]

[0765] Los perfiles de actividad de unión a antígeno específica de muestras de los lotes sometidos a condiciones extremas a pH 3,5 de la composición mostraron una reducción de la actividad de unión a antígeno específica a lo largo del tiempo tal como se resume en la tabla 22.

[0766] Tabla 22. Resumen de datos de actividad de unión a antígeno específica medida mediante SPR en muestras de lotes sometidos a condiciones extremas de pH de la composición.

[0767]

[0769] Los perfiles de actividad de unión a FcRn de muestras de los lotes sometidos a condiciones extremas a pH 3,5 de la composición mostraron una reducción de la actividad de unión a FcRn a lo largo del tiempo tal como se resume en la tabla 23.

[0770] Tabla 23. Resumen de datos de unión a FcRn medida mediante SPR en lotes sometidos a condiciones extremas de pH de la composición.

[0773]

[0775] En resumen, las tablas 21-23 muestran que hay una reducción de aproximadamente el 50 % de la unión a antígeno y la unión a FcRn cuando hay aproximadamente el 40 % de agregado presente en la muestra. Cuando mepolizumab estaba agregado a aproximadamente el 40 %, la actividad de unión a antígeno específica todavía se conservó a 0,57 y la actividad de unión a FcRn se conservó al 51 % (tabla 22, MDS2, día 3). Hubo un perfil de degradación ligeramente diferente para contenido de agregado entre MDS1 y MDS2 en el día 3 (tabla 21) debido a las diferentes razones de dímero covalente frente a no covalente.

[0776] Se usó la relación lineal entre la agregación en mepolizumab y las actividades de unión a antígeno y a FcRn específica a partir de MDS2 y se determinó, en el peor caso, que mepolizumab podía agregarse al 20 % y los anticuerpos en la composición todavía conservarían la actividad de unión a antígeno en el intervalo de 0,70-1,30 y la actividad de unión a FcRn del 70-130 %.

[0777] Por tanto, es posible que los anticuerpos en la composición que comprende mepolizumab estén agregados al 20 % y todavía conserven actividad de unión a IL-5 en el intervalo de 0,70-1,30 y actividad de unión a FcRn en el intervalo del 70 %-130 %.

[0778] HCP

[0779] Se miden niveles de proteína de célula huésped CHO residuales en la composición de mepolizumab usando un ensayo de inmunoabsorción ligado a enzimas (ELISA). Este método usa anticuerpos producidos contra antígenos nativos de la línea de células CHO que se hizo crecer en condiciones que imitan las condiciones de procedimiento de producción de mepolizumab.

[0780] Se determinó que, para la composición de mepolizumab, un intervalo aceptable para el contenido en HCP es ≤10 ng/mg. Este intervalo se deriva a partir de datos de liberación generados hasta la fecha y representa la verdadera variabilidad analítica y de procedimiento.37 lotes diferentes de principio activo tenían el siguiente contenido en HCP: 1,1 ng/mg (2 lotes), 1,0 ng/mg (5 lotes), 0,9 ng/mg (1 lote), 0,8 ng/mg (3 lotes), 0,7 ng/mg (1 lote), 0,6 (1 lote), 0,5 ng/mg (1 lote), <0,5 ng/mg (4 lotes), <1 ng/mg (19 lotes).

[0781] En resumen, hay dos funciones predominantes implicadas en la actividad biológica de mepolizumab: unión a IL-5 mediante las CDR, y unión a receptor FcRn mediante la región de Fc. Mediante los extensos estudios de caracterización realizados anteriormente, se determinó que variantes de anticuerpo desamidadas particulares, variantes de anticuerpo oxidadas particulares, y variantes de anticuerpo agregadas, pueden tener un impacto sobre la función de la composición de mepolizumab. Por tanto, deben mantenerse niveles específicos de estas variantes para garantizar una función/eficacia apropiada.

[0782] Ejemplo 3

[0783] Lista de secuencia de información

[0784] El subrayado a continuación identifica secuencias de CDR, según la definición de Kabat de las CDR, en las porciones de cadena pesada variable y ligera variable de los anticuerpos o las secuencias de ácido nucleico que codifican para estas secuencias de CDR. Por ejemplo, en SEQ ID NO: 1, los entramados y las CDR se presentan como entramado 1 en texto sin formato, CDR1 subrayada, entramado 2 en texto sin formato, CDR2 subrayada, entramado 3 en texto sin formato, CDR3 subrayada y entramado 4 en texto sin formato, en orden desde la porción amino-proximal hasta la porción carboxilo-terminal de las secuencias presentada. Los asteriscos a la derecha de un carácter para un código de aminoácido de una única letra indican que el residuo de aminoácido a la izquierda es un sitio de N-glicosilación. Este esquema se usa en las SEQ ID NO: 1-4, 11, 12 y 19-22, etc., por ejemplo. Los residuos de metionina aminoterminales mostrados en estas secuencias pueden escindirse. Por tanto, debe considerarse que las secuencias que muestran en este caso un residuo de metionina amino-terminal también dan a conocer las versiones escindidas de estas proteínas que carecen de tal residuo de metionina amino-terminal. Las secuencias de ácidos nucleicos se presentan como secuencias de ácido nucleico de ADN e incluyen residuos de ácido nucleico “t”, debe considerarse que también se da a conocer la secuencia de ARN correspondiente de tal manera que puede considerarse que los residuos de ácido nucleico “t” también dan a conocer un residuo de ácido nucleico “u”. Adicionalmente, el codón de iniciación “atg” 5’-proximal y los codones de terminación “taa”, “tag” y “tga” 3’-proximales se han omitido de las secuencias de ácido nucleico de ADNc a continuación. Este es el caso, por ejemplo, para las SEQ ID NO: 31-34, etc. CADENA PESADA DE LONGITUD COMPLETA DE MEPOLIZUMAB SEQ ID NO: 1

[0787]

[0789] CADENA LIGERA DE LONGITUD COMPLETA DE MEPOLIZUMAB SEQ ID NO: 2

[0792]

[0794] VH DE MEPOLIZUMAB SEQ ID NO: 3

[0797]

[0799] VL DE MEPOLIZUMAB SEQ ID NO: 4

[0802]

[0804] CDRH1 DE MEPOLIZUMAB

[0805] SEQ ID NO: 5

[0806] SYSVH

[0807] CDRH2 DE MEPOLIZUMAB

[0808] SEQ ID NO: 6

[0809] VIWASGGTDYNSALMS CDRH3 DE MEPOLIZUMAB

[0810] SEQ ID NO: 7

[0811] DPPSSLLRLDY CDRL1 DE MEPOLIZUMAB

[0812] SEQ ID NO: 8

[0813] KSSQSLLNSGNQKNYLA CDRL2 DE MEPOLIZUMAB

[0814] SEQ ID NO: 9

[0815] GASTRES CDRL3 DE MEPOLIZUMAB

[0816] SEQ ID NO: 10

[0817] QNVHSFPFT IL-5 HUMANA (PROTEÍNA MADURA)

[0818] SEQ ID NO: 11

[0821]

[0823] ISOFORMA ALFA 1 DE LA SUBUNIDAD DE RECEPTOR DE IL-5 HUMANA (PROTEÍNA MADURA) SEQ ID NO: 12

[0826]

[0828] ADN QUE CODIFICA PARA CADENA PESADA DE LONGITUD COMPLETA DE MEPOLIZUMAB SEQ ID NO: 13

[0829]

[0831] ADN QUE CODIFICA PARA CADENA LIGERA DE LONGITUD COMPLETA DE MEPOLIZUMAB SEQ ID NO: 14

[0833]

Claims

1. REIVINDICACIONES

1. Composición que comprende

a) un anticuerpo anti-IL-5 que comprende una secuencia de cadena pesada que tiene la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 1 y una secuencia de cadena ligera que tiene la secuencia de aminoácidos mostrada en SEQ ID NO: 2;

b) el 35 % o menos de una variante de anticuerpo que tiene un residuo de aminoácido de cadena pesada desamidado en la asparagina 386 y el 25 % o menos de una variante de anticuerpo que tiene un residuo de aminoácido de cadena ligera desamidado en la asparagina 31; y

c) el 3 % o menos de una variante de anticuerpo que tiene un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en el triptófano 52, el 50 % o menos de una variante de anticuerpo que tiene un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 64, el 50 % o menos de una variante de anticuerpo que tiene un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 254, el 50 % o menos de una variante de anticuerpo que tiene un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 360, y el 50 % o menos de una variante de anticuerpo que tiene un residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 430;

en la que la cantidad de variante de anticuerpo desamidada y/o la cantidad de variante de anticuerpo oxidada se determina mediante cromatografía de líquidos-espectrometría de masas/espectrometría de masas (CL-EM/EM) de mapeo peptídico; y en la que la composición comprende además una formulación líquida acuosa a pH 6,3 que contiene heptahidrato de fosfato de sodio dibásico 15,5 mM, monohidrato de ácido cítrico 4,5 mM, el 12 % en peso de sacarosa con respecto a volumen, el 0,02 % en peso de polisorbato 80 con respecto a volumen y EDTA 0,05 mM.

2. Composición según la reivindicación 1, en la que la composición comprende ≤22,5 %, ≤20 %, ≤17,5 %, ≤15 %, ≤12,5, ≤10 %, o ≤7,5 % de la variante de anticuerpo que tiene el residuo de aminoácido de cadena ligera desamidado en la asparagina 31.

3. Composición según la reivindicación 1, en la que la composición comprende ≤32,5 %, ≤30 %, ≤25,5 %, o ≤20 %, ≤17,5 %, ≤15 %, ≤12,5 %, ≤10 %, o ≤7,5 % de la variante de anticuerpo que tiene el residuo de aminoácido de cadena pesada desamidado en la asparagina 386.

4. Composición según la reivindicación 1, en la que la composición comprende ≤45 %, ≤40 %, ≤35 %, ≤30 %, o ≤25 %, ≤20 %, ≤15 %, ≤10 %, o ≤5 % de la variante de anticuerpo que tiene el residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 64, de la variante de anticuerpo que tiene el residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 254, y de la variante de anticuerpo que tiene el residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en la metionina 430.

5. Composición según la reivindicación 1, en la que la composición comprende ≤2,5 %, ≤2 %, ≤1,5 %, ≤1 %, ≤0,5 %, ≤0,4 %, ≤0,3 %, ≤0,25 %, ≤0,2 %, ≤0,15 %, o ≤0,1 % de la variante de anticuerpo que tiene el residuo de aminoácido de cadena pesada oxidado en el triptófano 52.

6. Composición según la reivindicación 1, en la que la composición comprende a) una forma principal del anticuerpo que comprende más del, o igual al, 20 % de la proteína en la composición tal como se mide usando isoelectroenfoque capilar de la composición; y b) formas ácidas del anticuerpo que comprenden hasta aproximadamente el 80 % de la proteína en la composición tal como se mide usando isoelectroenfoque capilar de la composición.

7. Composición según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que la composición comprende ≤20 % de variante de anticuerpo agregada, en la que la cantidad de variante de anticuerpo agregada se determina mediante cromatografía de exclusión molecular (SEC).

8. Composición según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que la composición comprende:

≥50 % de variantes de anticuerpo con lisina K449 C-terminal delecionada en la secuencia de aminoácidos de cadena pesada.

9. Composición según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que la composición comprende:

≥50 % de variantes de anticuerpo con piroglutamato N-terminal en la secuencia de aminoácidos de cadena pesada.

10. Composición según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que el anticuerpo está a una

concentración de entre 75 mg/ml y 100 mg/ml.

11. Composición según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en la que la composición tiene al menos 0,70 de actividad de unión a antígeno específica de IL-5; y/o al menos el 70 % de actividad de unión a FcRn, en comparación con una composición de patrón de referencia que comprende SEQ ID NO: 1 y SEQ ID NO: 2.

12. Composición farmacéutica que comprende una composición según una cualquiera de las reivindicaciones 1-11 y un portador farmacéuticamente aceptable.

13. Composición según una cualquiera de las reivindicaciones 1-11 para su uso en terapia.

14. Composición según una cualquiera de las reivindicaciones 1-11, para su uso en el tratamiento de asma, asma eosinofílica intensa, asma intensa, asma eosinofílica no controlada, asma eosinofílica, asma sub-eosinofílica, enfermedad pulmonar obstructiva crónica, granulomatosis eosinofílica con poliangitis, síndrome hipereosinofílico, poliposis nasal, penfigoide ampolloso o esofagitis eosinofílica.

15. Composición para su uso según la reivindicación 13 o 14, en la que la composición se administra a una dosis de 100 mg una vez cada 4 semanas o en la que la composición se administra por vía subcutánea a una dosis de 300 mg una vez cada 4 semanas.