ES3055127T3 - Use of parasites and extracellular vesicles obtained from parasites in cancer treatment - Google Patents

Abstract

La presente invención se refiere al uso de parásitos y vesículas extracelulares obtenidas de parásitos para el tratamiento del cáncer. La invención tiene como objetivo el uso de parásitos y vesículas extracelulares obtenidas de parásitos en el tratamiento del cáncer, y la carga de principio activo en exosomas aprovechando la capacidad de carga farmacológica de estos. De esta manera, se transporta el fármaco específico directamente a las células cancerosas diana sin causar efectos secundarios en las células sanas, mejorando así la biodisponibilidad del fármaco y logrando el efecto deseado en la región diana específica del tumor. Dentro del alcance de la invención, se utiliza particularmente el parásito Leishmania infantum como fuente de vesículas extracelulares. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

[0001] DESCRIPCIÓN

[0002] Uso de parásitos y vesículas extracelulares obtenidas de parásitos en el tratamiento del cáncer

[0003] Campo de la invención

[0004] La presente invención se refiere al uso de parásitos y vesículas extracelulares obtenidas de parásitos con fines de tratamiento contra el cáncer.

[0005] Antecedentes de la invención

[0006] El cáncer es una de las enfermedades más peligrosas y comunes de la actualidad. Se estima que en 2012 se produjeron 14,1 millones de nuevos casos de cáncer en el mundo[1].Aunque se han probado muchos agentes químicos y biológicos diferentes en el tratamiento del cáncer, los procedimientos de tratamiento desarrollados son insuficientes debido a su baja eficacia y altos efectos secundarios. Por ejemplo, la quimioterapia es el procedimiento de tratamiento más usado en muchos tipos de cáncer, tal como el cáncer de mama, pero provoca daños graves en muchos tejidos sanos del cuerpo, tal como la médula ósea, el cabello y el sistema digestivo[2].La insuficiencia de los procedimientos de tratamiento ha obligado a los científicos a probar nuevos procedimientos en el campo del cáncer. Entre estos ensayos, los exosomas prometen resultados eficaces.

[0007] El término "enfermedades neoplásicas" usado en el alcance de la presente solicitud se refiere a tumores malignos o una afección fisiológica caracterizada por un crecimiento celular incontrolado, tal como cáncer. En este contexto, los términos "enfermedad neoplásica" y "cáncer" pueden usarse indistintamente. Los ejemplos de cáncer incluyen, pero no se limitan a, carcinoma, linfoma, sarcoma de blastoma y leucemia.

[0008] •El carcinoma, como se usa en esta invención, se refiere a un tipo de cáncer que consiste en células epiteliales.

[0009] •El linfoma, como se usa en esta invención, describe un tipo de cáncer que se desarrolla a partir de linfocitos.

[0010] •El blastoma, como se usa en esta invención, describe un tipo de cáncer que se desarrolla a partir de células precursoras, también conocidas como células blásticas.

[0011] •El sarcoma, como se usa en esta invención, describe el tipo de cáncer que surge a partir de células transformadas de origen mesenquimal.

[0012] •La leucemia, como se usa en esta invención, describe el tipo de cáncer que comienza en la médula ósea y da como resultado un alto número de glóbulos blancos anormales.

[0013] Los ejemplos más específicos de tipos de cáncer incluyen cáncer de mama, cáncer de próstata, cáncer colorrectal, cáncer de piel, cáncer de pulmón microcítico, cáncer de pulmón no microcítico, mesotelioma, cáncer gastrointestinal, cáncer de páncreas, glioblastoma, cáncer de vulva, cáncer de cuello uterino, carcinoma de endometrio, cáncer de ovario, cáncer de hígado, hepatoma, cáncer de vejiga, cáncer de riñón, carcinoma de glándulas salivales, cáncer de tiroides y diversos cánceres de cabeza y cuello.

[0014] Las operaciones quirúrgicas y/o la quimioterapia se usan con frecuencia para tratar el cáncer. Si bien la operación quirúrgica produce un resultado completo y eficaz en algunos casos; normalmente, se administra un fármaco quimioterapéutico después de la operación contra la posibilidad de presencia de células cancerosas que sobrevivirán y desencadenarán la formación de cáncer a largo plazo. En su mayoría, la quimioterapia provoca varios efectos secundarios al dañar las células sanas y las células cancerosas. Las células con altas tasas de proliferación en el cuerpo son las más afectadas por la quimioterapia, que son las células ciliadas, las células sanguíneas producidas en la médula ósea y las células del sistema digestivo.

[0015] Los efectos secundarios observados con frecuencia después de la quimioterapia son los siguientes:

[0016] •Fatiga:

Aunque es provocada principalmente por la anemia resultante del hecho de que las células sanguíneas están afectadas, la causa también puede ser psicológica.

[0017] •Náuseas y vómitos:

Si bien puede deberse a la sensibilidad a los fármacos, también puede tener causas psicológicas.

[0018] •Pérdida de cabello:

La pérdida de cabello, que se ve particularmente afectada por la quimioterapia debido a su rápido crecimiento, es una de las razones más significativas por las que los pacientes se deprimen.

[0019] •Disminución de los valores sanguíneos:

La médula ósea que se ve afectada por la quimioterapia da lugar a una disminución significativa de las células sanguíneas. Dado que no se puede suministrar una cantidad suficiente de oxígeno a los tejidos como resultado de esta disminución, se pueden observar muchos efectos adversos, tal como el debilitamiento del sistema inmunitario y la dificultad en la coagulación de la sangre.

[0020] •Llagas en la boca:

Los fármacos de quimioterapia a veces pueden provocar llagas inflamatorias en la boca. Durante el tratamiento, los pacientes deben evitar las bebidas extremadamente calientes o frías y prestar la máxima atención a su higiene bucal.

[0021] •Diarrea o estreñimiento:

La diarrea o el estreñimiento se pueden observar como resultado de la respuesta de las células del sistema digestivo contra diferentes agentes quimioterapéuticos. Esta situación, cuyos efectos pueden reducirse en su mayoría mediante dieta, puede en algunos casos dar lugar a diarrea grave que requiere ingesta de líquidos por vía intravenosa.

[0022] •Cambios en la piel y las uñas:

Los fármacos quimioterapéuticos tienen efectos secundarios tal como oscurecimiento del color de la piel, descamación de la piel, enrojecimiento o piel seca. También se puede observar una fácil rotura de las uñas u oscurecimiento de su color. Se debe prestar especial atención a la descamación de la piel, ya que provocará heridas abiertas en pacientes inmunocomprometidos.

[0023] •Problemas para dormir:

Aunque normalmente se produce por razones psicológicas, la incapacidad del cuerpo para descansar, particularmente durante el proceso de tratamiento de quimioterapia, reduce el efecto de la quimioterapia y altera aún más la salud mental del paciente.

[0024] Con el fin de aumentar el éxito del tratamiento, el requisito de usar quimioterapia en combinación con procedimientos quirúrgicos y de otro tipo y la abundancia e imprevisibilidad de sus efectos secundarios que varían de un paciente a otro han llevado a los científicos a buscar nuevos procedimientos de tratamiento.

[0025] Nauts y col. (1953) demostraron que los microorganismos pueden inducir una respuesta antitumoral. Trabajaron en la idea de que organismos no patógenos, atenuados o modificados genéticamente, podrían usarse como agentes antitumorales[3].Descubrieron que losToxoplasma gondiiyAcanthamoeba castellaniipresentaban actividad antitumoral. A la luz de estos desarrollos, ha surgido un nuevo campo de tratamiento en oncología con los microorganismos, y se han llevado a cabo estudios de investigación y desarrollo bajo el nombre de "bioterapia", que se usó por primera vez en 1931.

[0026] Baird y col. (2013) usaron el parásitoToxoplasma gondiiatenuado en el tratamiento del melanoma murino B16F10 y demostraron que se producía una fuerte respuesta antitumoral inducida por células T CD8 en ratones que recibieronToxoplasma gondii[9]

.

[0027] Bose y col. (2016) han concluido en su estudio que elLeishmania donovaniatenuado por calor induce la apoptosis de las células de cáncer de hígado HepG2 a través de la vía mitocondrial dependiente de p53 mediada por especies reactivas al oxígeno (Reactive Oxygen Species, ROS)[10].

[0028] Yang y col. (2017) sometieron a ensayo exosomas aislados de ratones infectados con Plasmodium en el modelo de cáncer de pulmón de Lewis y observaron que inhibe la angiogénesis tumoral[11].

[0029] Debido a su empleabilidad en el direccionamiento al llevar el contenido de carga específico de la célula de la que se obtienen, los exosomas se han vuelto prominentes en los estudios iniciados con el fin de mejorar los procedimientos de tratamiento actuales y reducir los efectos secundarios.

[0030] Las vesículas extracelulares son pequeños sacos que participan en el transporte intercelular de sustancias y están separados por, por lo menos, una bicapa lipídica del fluido citoplasmático. Los exosomas, que son una de las vesículas extracelulares, son vesículas que se liberan en muchos organismos tales como eucariotas superiores y plantas, y que contienen membranas de bicapa lipídica de diferentes tamaños. La importancia de estas vesículas radica en la capacidad de transferir información a las otras células con el fin de influir en la función celular. La transferencia de señales a través de los exosomas se lleva a cabo mediante biomoléculas en muchas categorías diferentes que consisten en proteínas, lípidos, ácidos nucleicos y azúcares[12].Puesto que transportan las proteínas de superficie de la célula a partir de la cual se producen, los exosomas se dirigen al tipo de célula en la que se administran en sistemasin vivo. Estas propiedades hacen que el exosoma sea adecuado para transportar ácidos nucleicos para fármacos, sustancias bioactivas y terapia génica. Otro aspecto distintivo de los exosomas es que son específicos de la célula en la que se producen las señales y cargas que transportan y de las condiciones fisiológicas actuales de la célula. Los exosomas de diferentes organismos, los exosomas de diferentes tipos de células del mismo organismo y los exosomas de la misma célula en diferentes condiciones muestran diferentes propiedades.

[0031] Cada célula produce exosomas para sus propios fines. Se ha descubierto que las células cancerosas, con los exosomas que producen, crean un entorno favorable para sí mismas en el cuerpo[13],escapan del sistema inmunitario[14, 15]y hacen uso de los exosomas para la metástasis[16].Los exosomas de células madre[17]y especialmente los exosomas de células dendríticas que son células del sistema inmunitario[18, 19]tienen muchas actividades en la respuesta del cuerpo al cáncer. Otra fuente de exosomas que producen resultados satisfactorios son las plantas. Los exosomas obtenidos del limón se han usado satisfactoriamente en el modelo de leucemia mieloide crónica con fines de tratamiento[20].

[0032] Todas las células eucariotas producen sus propios exosomas, incluidos los parásitos eucariotas. La leishmaniosis es un nombre común dado a un grupo de enfermedades transmitidas por vectores que se transmiten a los humanos por la picadura de moscas de la arena hembras infectadas con parásitosprotozoarios de Leishmania. Según la Organización Mundial de la Salud, la leishmaniosis se observa ampliamente en más de 60 países de todo el mundo, especialmente en los países del sur de Europa, Oriente Medio y el norte de África, incluida Turquía y la geografía circundante.

[0033] El documento de patente europea núm. EP1687025, una solicitud conocida en la técnica, describe una composición de vacuna comprendiendo interleucina-18 y un adyuvante de saponina. Se determinó que la terapia de combinación descrita dentro del alcance de dicha invención era útil en el tratamiento o la profilaxis de enfermedades infecciosas, cánceres, enfermedades autoinmunes y afecciones relacionadas.

[0034] El documento de patente núm. WO2013089738A1 es una solicitud de patente relacionada con la expresión génica diana usando exosomas y proteínas de fusión Nef. El documento proporciona nuevos procedimientos para la producción y administración de proteínas recombinantes que se pueden usar con fines terapéuticos y de diagnóstico a través de exosomas. Los exosomas son pequeñas vesículas que transportan proteínas y ácidos ribonucleicos, facilitando la comunicación intercelular. El documento también describe cómo los péptidos derivados de la proteína Nef del VIH-1 pueden unirse a otras proteínas y transportarse a las células diana a través de exosomas. El documento tiene como objetivo aplicar este mecanismo en áreas tal como el tratamiento del cáncer, las terapias inmunitarias y las vacunas. Además, se pueden usar exosomas para administrar proteínas, ARNip y otros agentes inmunitarios a dianas celulares específicas.

[0035] El documento de patente china núm. CN102988417, una solicitud conocida en la técnica, describe el uso de agentes biológicos de parásitos helmínticos para prevenir y controlar enfermedades. Estas preparaciones de parásitos afectan una función reguladora de las células T. Una enfermedad se trata alterando una actividad reguladora de las células T a través de la administración de una preparación parasitaria. Los ejemplos de las enfermedades tratadas por este procedimiento se muestran como cánceres asociados a Th1 o Th2.

[0036] Resumen de la invención

[0037] El objetivo de la presente invención es el uso de vesículas extracelulares obtenidas a partir de parásitos deLeishmania infantumen el tratamiento del cáncer. Los exosomas de parásitos inducen directamente la respuesta en las células cancerosas sin provocar efectos secundarios en las células sanas. Además, las sustancias activas se pueden cargar en los exosomas mediante el uso de la capacidad de carga de fármaco de los exosomas y, por lo tanto, al llevar el fármaco específico a la célula diana y mejorando de este modo la biodisponibilidad del fármaco, se logra el efecto deseado en la región diana específica del tumor. Dentro del alcance de la invención, particularmente el parásitoLeishmania infantumse usa como fuente de vesículas extracelulares (exosomas). La invención se define en las reivindicaciones.

[0038] Descripción detallada de la invención

[0039] El "Uso de parásitos y vesículas extracelulares obtenidas de parásitos en el tratamiento del cáncer" desarrollado para cumplir con los objetivos de la presente invención se ilustra en las figuras adjuntas, en las que:

[0040] La Figura 1.es una representación gráfica del efecto apoptótico de la incubación de parásitos deLeishmania infantumjunto con las células U87 en dos dosis diferentes en las células.

[0041] La Figura 2.es una vista de la fotografía de microscopio óptico que muestra la infección por parásitos después de 8 horas después de la incubación de las células U87 en un medio de cultivo con los parásitos.

[0042] La Figura 3.es una representación gráfica del efecto de los exosomas obtenidos a partir de los parásitos deLeishmania infantumsobre la viabilidad celular de las células U87 administradas durante 24, 48 y 72 horas en 8 dosis diferentes.

[0043] La Figura 4.es una representación gráfica del efecto de los exosomas obtenidos a partir de los parásitos deLeishmania infantumsobre la viabilidad celular de las células A172 administradas durante 24, 48 y 72 horas en 8 dosis diferentes.

[0044] La Figura 5.es una representación gráfica del efecto de los exosomas obtenidos a partir de los parásitos deLeishmania infantumsobre la viabilidad celular de las células SHSY5Y administradas durante 24, 48 y 72 horas en 8 dosis diferentes.

[0045] La Figura 6.es una representación gráfica del efecto de los exosomas obtenidos a partir de los parásitos deLeishmania infantumsobre la viabilidad celular de las células SH4 administradas durante 24, 48 y 72 horas en 8 dosis diferentes.

[0046] La Figura 7.es una representación gráfica del efecto de los exosomas obtenidos a partir de los parásitos deLeishmania infantumsobre la viabilidad celular de las células 22RV administradas durante 24, 48 y 72 horas en 8 dosis diferentes.

[0047] La Figura 8.es una representación gráfica del efecto de los exosomas obtenidos a partir de los parásitos deLeishmania infantumsobre la viabilidad celular de las células HDF administradas durante 24, 48 y 72 horas en 8 dosis diferentes.

[0048] La Figura 9.es una representación gráfica del efecto de los exosomas obtenidos a partir de los parásitos deLeishmania infantumsobre la viabilidad celular de las células HaCaT administradas durante 24, 48 y 72 horas en 8 dosis diferentes.

[0049] La Figura 10.es una representación gráfica del efecto de los exosomas obtenidos a partir de los parásitos deLeishmania infantumsobre la viabilidad celular de las células de astrocitos administradas durante 24, 48 y 72 horas en 8 dosis diferentes.

[0050] La Figura 11.es una representación gráfica del efecto de los exosomas obtenidos a partir de los parásitos deLeishmania infantumsobre la expresión génica Bax en las células de neuroblastoma SHSY5Y administradas durante 48 horas en una sola dosis.

[0051] La Figura 12.es una representación gráfica del efecto de los exosomas obtenidos a partir de los parásitos deLeishmania infantumsobre la expresión génica Bcl-2 en las células de neuroblastoma SHSY5Y administradas durante 48 horas en una sola dosis.

[0052] La Figura 13.es una representación gráfica del efecto de los exosomas obtenidos a partir de los parásitosLeishmania infantumsobre la expresión génica de la caspasa-3 en las células de neuroblastoma SHSY5Y administrados durante 48 horas en una sola dosis.

[0053] La Figura 14.es una representación gráfica del efecto de los exosomas obtenidos a partir de los parásitos deLeishmania infantumsobre la expresión génica p53 en las células de neuroblastoma SHSY5Y administradas durante 48 horas en una sola dosis.

[0054] La Figura 15.es una representación gráfica del efecto de los exosomas obtenidos a partir de los parásitos deLeishmania infantumsobre la expresión génica p21 en las células de neuroblastoma SHSY5Y administradas durante 3 horas en una sola dosis.

[0055] La Figura 16.es una representación gráfica del efecto de los exosomas obtenidos a partir de los parásitos deLeishmania infantumsobre la expresión génica p21 en las células de astrocitos administradas durante 3 horas en una sola dosis.

[0056] La Figura 17.es una representación gráfica del efecto de los exosomas obtenidos a partir de los parásitos deLeishmania infantumsobre la expresión génica p53 en las células de neuroblastoma SHSY5Y administradas durante 3 horas en una sola dosis.

[0057] La Figura 18.es una representación gráfica del efecto de los exosomas obtenidos a partir de los parásitos deLeishmania infantumsobre la expresión génica p53 en las células de astrocitos administradas durante 3 horas en una sola dosis.

[0058] La Figura 19.es una representación gráfica del efecto de los exosomas obtenidos a partir de los parásitos deLeishmania infantumsobre la expresión génica de la caspasa-3 en las células de neuroblastoma SHSY5Y administrados durante 3 horas en una sola dosis.

[0059] La Figura 20.es una representación gráfica del efecto de los exosomas obtenidos a partir de los parásitos deLeishmania infantumsobre la expresión génica de la caspasa-3 en las células de astrocitos administrados durante 3 horas en una sola dosis.

[0060] La presente invención se refiere al uso de vesículas extracelulares obtenidas a partir de parásitos deLeishmania infantumen el tratamiento de enfermedades neoplásicas. El término "enfermedades neoplásicas" se refiere a tumores malignos o una afección fisiológica caracterizada por un crecimiento celular incontrolado y apunta al cáncer. Dentro del alcance de la invención, los términos "enfermedad neoplásica" y "cáncer" pueden usarse indistintamente. La enfermedad neoplásica puede ser por lo menos un tipo de cáncer seleccionado del grupo que incluye cáncer de mama, cáncer de próstata, cáncer colorrectal, cáncer de piel, cáncer de pulmón microcítico, cáncer de pulmón no microcítico, mesotelioma, cáncer gastrointestinal, cáncer de páncreas, sarcoma, blastoma, linfoma, glioblastoma, neuroblastoma, cáncer de vulva, cáncer de cuello uterino, carcinoma de endometrio, cáncer de ovario, cáncer de hígado, hepatoma, leucemia, cáncer de vejiga, cáncer de riñón, carcinoma de glándulas salivales, cáncer de tiroides, cánceres de cabeza y cuello. Dentro del alcance de la invención, el tratamiento del cáncer se lleva a cabo en forma de destrucción de células cancerosas U87 y células cancerosas A172 que son líneas celulares de glioblastoma, células cancerosas SHSY-5Y que son líneas celulares de neuroblastoma, células cancerosas SH4 que son líneas celulares de melanoma y células cancerosas 22RV que son líneas celulares de próstata.

[0061] La invención aborda el uso de vesículas extracelulares obtenidas de los parásitos deLeishmania infantumen el tratamiento del cáncer, ya que destruyen de forma selectiva las células cancerosas. Al desarrollar la invención, se ha observado que las vesículas extracelulares obtenidas de los parásitos deLeishmania infantumson altamente fatales para el cáncer, pero prácticamente no tienen efectos secundarios sobre las células sanas.

[0063] Dentro del alcance de la invención, será posible cargar sustancias activas en los exosomas mediante el uso de la capacidad de carga de fármaco de los exosomas y transportar el fármaco específico de la célula diana y, por lo tanto, mejorar la biodisponibilidad del fármaco y lograr el efecto deseado en la región diana.

[0065] La característica distintiva de la invención es el uso de exosomas aislados del parásitoLeishmaniainfantum en el tratamiento del cáncer. En los estudios mencionados bajo el título de antecedentes de la invención, el uso directo de parásitos es un grave obstáculo para el uso de los parásitos en el tratamiento porque provocan enfermedades. En cuanto a la presente invención, mediante el uso de exosomas aislados de los parásitos, se evita el posible riesgo de enfermedades en el uso directo de parásitos.

[0067] Dentro del alcance de la invención, se seleccionaLeishmania infantumcomo el parásito para caracterizar las vesículas extracelulares obtenidas de los parásitos. Su uso en el tratamiento del cáncer puede ser el medio de cultivo de parásitos.

[0069] Dentro del alcance de la presente invención, el aislamiento de parásitos y vesículas extracelulares obtenidas de parásitos se lleva a cabo mediante el uso de por lo menos uno de los siguientes procedimientos de aislamiento: aislamiento con sistemas acuosos en dos fases (Aqueous Two-Phase Systems, ATPS), centrífuga graduada, ultracentrífuga, ultracentrífuga de gradiente de sacarosa, precipitación polimérica, ultrafiltración, aislamiento con procedimientos cromatográficos (cromatografía de afinidad (afinidad de anticuerpos y péptidos), cromatografía de separación por tamaño (cromatografía de exclusión por tamaño)), aislamiento con microperlas y precipitación según la carga iónica (precipitación basada en la carga eléctrica) y la salazón. El procedimiento de aislamiento de líquidos en dos fases preferido dentro del alcance de la invención comprende las etapas de

[0071] - recoger medios de cultivo del parásito en los cuales se aislarán las vesículas extracelulares,

[0072] - centrifugar a una tasa de 2.000 g a 10.000 g durante 5-20 minutos para la eliminación de las sustancias indeseables tales como residuos celulares y parásitos del medio de cultivo,

[0073] - eliminar las partículas de tamaño 220 nm y superior por filtración después de la centrifugación,

[0074] - transferir la mezcla de vesícula-proteína obtenida por centrifugación a un sistema líquido en dos fases que contiene una fase de PEG y una fase de DEX para su separación,

[0075] - eliminar las proteínas no vesiculares, la grasa celular y otras impurezas de las vesículas usando la tendencia química de la fase de PEG con las proteínas y la fase de DEX con las membranas estructuradas en fosfolípidos,

[0076] - obtener las vesículas aisladas.

[0078] Una formulación desarrollada dentro del alcance de la presente invención y que contiene vesículas extracelulares obtenidas a partir de parásitos deLeishmania infantumcomprende por lo menos un compuesto activo seleccionado de un grupo comprendiendo compuestos activos que muestran actividad antiparasitaria, antibacteriana, antiviral, antineoplásica y/o citotóxica y/o antimetastásica, y combinaciones binarias y ternarias de los mismos como una sustancia activa adicional. Esta formulación comprende por lo menos un agente seleccionado de un grupo comprendiendo amikacina, gentamicina, kanamicina, neomicina, netilmicina, tobramicina, paromomicina, estreptomicina, espectinomicina, geldanamicina, herbimicina, rifaximina, loracarbef, ertapenem, doripenem, imipenem, meropenem, cefároxilo, cefazolina, cefalotina, cefalexina, cefaclor, cefamandol, cefoxitina, cefprozilo, cefuroxima, cefixima, cefdinir, cefditoren, cefoperazona, cefotaxima, cefpodoxima, ceftazidima, ceftibuteno, ceftizoxima, cefepima, ceftarolina fosamilo, ceftobiprol, teicoplanina, vancomicina, televancina, dalbavancina, oritavancina, clindamicina, lincomicina, daptomicina, azitromicina, claritromicina, diritromicina, eritromicina, roxitromicina, troleandomicina, telitromicina, espiramicina, aztreonam, furazolidona, nitrofurantoína, linezolid, posizolid, radezolid, torezolid, amoxicilina, ampicilina, azlocilina, carbenicilina, cloxacilina, dicloxacilina, flucloxacilina, mezlocilina, meticilina, nafcilina, oxacilina, penicilina G, penicilina V, piperacilina, temocillina, ticarcilina, clavulanato, sulbactam, tazobactam, bacitracina, colistina, polimixina B, ciprofloxacina, enoxacina, gatifloxacina, gemifloxacina, levofloxacina, lomefloxacina, moxifloxacina, ácido nalidínico, norfloxacina, ofloxacina, trovafloxacina, grepafloxacina, esparfloxacina, temafloxacina, mafenida, sulfacetamida, sulfadiazina, sulfadimetoxina, sulfametizol, sulfametoxazol, sulfanilamida, sulfasalazina, sulfisoxazol, trimetoprim, demeclociclina, doxiciclina, minociclina, oxitetraciclina, tetraciclina, clofazimina, dapsona, capreomicina, cicloserina, etambutol, isoniazida, pirazinamida, rifampicina, rifabutina, rifapentina, estreptomicina, arsfenamina, cloranfenicol, fosfomicina, ácido fusídico, metronidazol, mupirocina, platensimicina, quinupristina, dalfopristina, tianfenicol, tigeciclina, tinidazol, trimetoprim, y combinaciones binarias o ternarias y/o encapsulaciones de los mismos como un compuesto activo que muestra actividad antibacteriana. Esta formulación comprende por lo menos un agente seleccionado del grupo comprendiendo abacavir, aciclovir, adefovir, amantadina, amprenavir, ampligen, arbidol, atazanavir, atripla, balavir, sidofovir, kombivir, dolutegravir, darunavir, delavirdina, didanosina, docosanol, eduksudina, efavirenz, emtricitabina, enfuvirtida, entecavir, ecoliver, famciclovir, fomivirsen, fosamprenavir, foscarnet, fosfonet, ganciclovir, ibasitabina, imunovir, idoxuridina, imiquimod, indinavir, inosina, interferón tipo I, interferón tipo II, interferón tipo III, interferón, lamivudina, lopinavir, lovirid, maravirok, moroxidina, metisazona, nelfinavir, nevirapina, nexavir, nitazoxanida, novir, oseltamivir, peginterferón alfa-2a, pensiclovir, peramivir, plekonarilo, podofilotoxina, inhibidor de la proteasa, análogos de nucleósidos, ralgetavir, ribavirina, rimantadina, ritonavir, piramidina, saquinavir, sofosbuvir, estavudina, telaprevir, tenofovir, tipranavir, trifluridina, trisivir, tromantadina, trovada, valaciclovir, valganciclovir, vidarabina, viramidina, zalcitabina, zanamivir, zidovudina, y combinaciones binarias o ternarias y/o encapsulaciones de los mismos como un compuesto activo que muestra actividad antiviral. Esta formulación comprende por lo menos un agente seleccionado de un grupo comprendiendo nitazoxanida, melarsoprol, eflornitina, metronidazol, tinidazol, miltefosina, mebendazol, pamoato de pirantel, tiabendazol, dietilcarbamazina, ivermectina, niclosamida, prazicuantel, albendazol, rifampicina, anfotericina B, fumagilina, furazolidona, nifursemizona, nitazoxanida, ornidazol, sulfato de paromomicina, pentamidina, pirimetamina, tinidazol, albendazol, mebendazol, tiabendazol, fenbendazol, triclabendazol, flubendazol, abamectina, dietilcarbamazina, ivermectina, suramina, pamoato de pirantel, levamisol, niclosamida, nitazoxanida, oxiclozanida, monepantel, derquantel, anfotericina B, urea estibamina, estibogluconato de sodio, antimoniato de meglumina, paromomicina, miltefosina, fluconazol, pentamidina, y combinaciones binarias o ternarias y/o encapsulaciones de los mismos como un compuesto activo que muestra actividad antiparasitaria. Esta formulación comprende por lo menos un agente seleccionado de un grupo comprendiendo ciclofosfamida, ifosfamida, temozolomida, capecitabina, 5-fluorouracilo, metotrexato, gemcitabina, pemetrexed, mitomicina, bleomicina, epirubicina, doxorrubicina, etopósido, paclitaxel, irinotecán, docetaxel, vincristina, carboplatino, cisplatino, oxaliplatino, bevacizumab, cetuximab, gefitinib, imatinib, trastuzumab, denosumab, rituximab, sunitinib, zoledronato, abiraterona, anastrozol, bicalutamida, exemestano, goserelina, medroxiprogesterona, octreotida, tamoxifeno, bendamustina, carmustina, clorambucilo, lomustina, melfalán, procarbazina, estreptozocina, fludarabina, raltitrexed, actinomicina D, dactinomicina, doxorrubicina, mitoxantrona, eribulina, topotecán, vinblastina, vinorelbina, afatinib, aflibercept, crizotinib, dabrafenib, interferón, ipilimumab, lapatinib, nivolumab, panitumumab, pembrolizumab, pertuzumab, sorafenib, trastuzumab emtansina, temsorilimus, vemurafenib, ácido ibandrónico, pamidronato, bexaroteno, buserelina, ciproterona, degarelix, ácido folínico, fulvestrant, lanreotida, lenalidomida, letrozol, leuprorelina, megestrol, mesna, talidomida, vincristina, y combinaciones binarias o ternarias y/o encapsulaciones de los mismos como un compuesto activo que muestra actividad antineoplásica en combinación con vesículas extracelulares. Además, esta formulación comprende por lo menos una sustancia activa. La sustancia activa comprende las sustancias definidas y enumeradas anteriormente. El procedimiento de administración de esta composición farmacéutica descrita anteriormente para el tratamiento comprende por lo menos un procedimiento de administración seleccionado de un grupo comprendiendo parenteral, intravenoso, intradérmico, subcutáneo, intraperitoneal, tópico, intratecal, intranasal, intracerebroventricular, ocular, vaginal, uretral, transdérmico, sublingual, subaracnoideo, rectal, periodontal, perineural, peridural, periarticular, oral, intratimpánico, intratumoral, intrapulmonar, intrasinovial, intramuscular, intraovárico, intraminéreo, intracorporal cavernoso, intracoronario, intracerebral, epidural, cutáneo, bucal, dental.

[0079] Las vesículas extracelulares se usan como adyuvantes para el tratamiento del cáncer dentro del alcance de la invención. La composición farmacéutica descrita dentro del alcance de la invención puede formarse incorporando vesículas extracelulares obtenidas de parásitos en por lo menos uno de hidróxido de aluminio, fosfato de aluminio, tocoferol, sistemas de emulsión que contienen 3D-MPL, colesterol, oligonucleótido de CG; o combinaciones de dos o más de los mismos.

[0080] La producción de parásitos y vesículas extracelulares de parásitos que se pueden usar en el tratamiento del cáncer para el propósito de la invención incluye las etapas siguientes.

[0081] 1. Cultivo de los parásitos

[0082] Los promastigotes deLeishmania infantum(MHOM/MA/67/ITMA-P263) se incuban a 27 °C en un medio de RPMI (con suero bovino fetal al 10 % inactivado por calor, 2 mM de L-glutamina, 20 mM de HEPES, 100 U/ml de penicilina, 100 µg/ml de estreptomicina). Los parásitos que alcanzan la fase logarítmica (10<6>/ml) se vuelven infecciosos.

[0083] 2. Tratamiento de parásitos cultivados con cáncer de glioblastoma y medición de la cantidad de apoptosis mediante el ensayo de anexinaV

[0084] Los parásitos preparados se añaden a células de glioblastoma U87 en un medio de cultivo. Los parásitos aplicados en 2 dosis diferentes (células U87 de 50 y 100 veces) se incuban durante 8 horas y posteriormente se eliminan los parásitos en las células U87. Al día siguiente, al añadir la solución de anexina V, se mide la tasa de mortalidad mediante un dispositivo de citometría de flujo.

[0085] 3. Recogida de medios del parásito

[0086] Dentro del alcance de la invención, las vesículas extracelulares de parásitos se aíslan mediante un procedimiento de aislamiento seleccionado del grupo que consiste en aislamiento mediante un sistema líquido en dos fases, centrífuga graduada, ultrafiltración, procedimientos cromatográficos, aislamiento basado en polímeros y aislamiento mediante microperlas. Entre ellos, el aislamiento extracelular de vesículas más puro se logra mediante el aislamiento con un sistema líquido en dos fases y, por lo tanto, este procedimiento de aislamiento se prefiere dentro del alcance de la presente solicitud.

[0087] El procedimiento de aislamiento a través del sistema líquido bifásico usado para el aislamiento de las vesículas extracelulares del parásito usadas dentro del alcance de la presente invención comprende las etapas siguientes:

[0089] •recoger medios de cultivo del parásito en los cuales se aislarán las vesículas extracelulares,

[0090] •centrifugar a una tasa de 2.000 g a 10.000 g durante 5-20 minutos para la eliminación de la sustancia indeseable tal como residuos celulares y parásitos del medio de cultivo,

[0091] •eliminar las partículas de tamaño 220 nm y superior por filtración después de la centrifugación,

[0092] •transferir la mezcla de vesícula-proteína obtenida por centrifugación a un sistema líquido en dos fases que contiene una fase de PEG y una fase de DEX para su separación,

[0093] •eliminar las proteínas no vesiculares, la grasa celular y otras impurezas de las vesículas usando la tendencia química de la fase de PEG con las proteínas y la fase de DEX con las membranas estructuradas de fosfolípidos,

[0094] •obtener las vesículas aisladas.

[0096] 4. MTS

[0098] Después de que las células se sembraron en placas de cultivo de 96 pocillos (Corning Glasswork, Corning, NY) a 5000 células/pocillo en un medio de Eagle modificado por Dulbecco (Dulbecco’s Modified Eagle’s Médium, DMEM) que contenía el 10 % de suero bovino fetal (Invitrogen) y el 1 % de PSA (Biological Industries, Beit Haemek, Israel) en el medio de cultivo, se midieron los niveles de viabilidad de las células en los días 1, 2 y 3. La viabilidad celular se midió usando el procedimiento de 3-(4,5-di-metiltiazol-2-il)-5-(3-carboxi-metoxi-fenil)-2-(4-sulfo-fenil)-2H-tetrazolio (MTS) (CellTiter96 Aqueous One Solution; Promega, Southampton, RU). Se añadieron 10 µl de solución de MTS a las células dentro de un medio de crecimiento de 100 µl y se incubaron en la oscuridad durante 2 horas. Después del proceso de incubación, se observó la viabilidad celular realizando una medición de absorbancia a través del dispositivo lector de placas ELISA (Biotek, Winooski, VT) a una longitud de onda de 490 nm.

[0100] 5. Reacción en cadena de polimerasa en tiempo real cuantitativa (PCR-TR)

[0102] El día después de que las células se sembraron en placas de cultivo de 96 pocillos (Corning Glasswork, Corning, NY) a 150.000 células/pocillo en un medio de Eagle modificado por Dulbecco (Dulbecco’s Modified Eagle’s Médium, DMEM) que contenía 10 % de suero bovino fetal (Invitrogen) y 1 % de PSA (Biological Industries, Beit Haemek, Israel) en el medio de cultivo, las células se incubaron con diversas dosis (10-40 ug/ml) de exosoma de parásito, y 3 y 48 horas después de la incubación, se observaron las expresiones génicas de p21, p53, caspasa 3, Bcl-2 y Bax en las células. En resumen, el aislamiento de ARN se realizó en las células usando Trizol<®>, las concentraciones de ARN total se midieron mediante espectrofotometría NanoDrop y luego el análisis de ADNc se realizó usando el kit de ADNc (Roche). La PCR-TR se realizó a 95 °C durante 15 min, seguida de 39 ciclos a 95 °C durante 15 s, 58 °C durante 1 min y 72 °C durante 30 s usando el kit SYBR Green (Thermofisher Scientific). Se usó GAPDH como gen constitutivo.

[0103] Una de las diferencias de la presente invención con respecto al estado de la técnica es el uso de los parásitos y los exosomas aislados de los parásitos, y marca una diferencia significativa tanto en términos de las especies de las que está aislado como en el uso de los exosomas de los parásitos. Estos exosomas son solo una parte de los productos químicos que liberan las células fuera de la célula. Dentro del alcance de la invención, se muestran las actividades de los parásitos y sus exosomas en líneas celulares tanto cancerosas como sanas. Los parásitos se aplicaron sobre las células de glioblastoma U-87 tanto 50 veces como 100 veces y se evaluaron las tasas de apoptosis, es decir, las tasas de mortalidad, de las células cancerosas y al final de las 8 horas de incubación, se observó hasta un 30 % de muerte en ambas dosis (Figura 1). Al mismo tiempo, la infección de las células que sufren apoptosis, es decir, la muerte, con los parásitos deLeishmania infantumes de aproximadamente el 68 por ciento (Figura 2). Tras el examen de la viabilidad celular durante 3 días después de aplicar no solo los parásitos, sino también los exosomas que son secretados por estos parásitos y aislados del medio se aplican a ciertas concentraciones (0.78-50 µg/ml) en ciertas células cancerosas y sanas; se observó una disminución en la viabilidad celular y la apoptosis en células de glioblastoma U87 (40 % y superiores), células de neuroblastoma SHSY5Y (90 %) y superiores), células de glioblastoma A172 (45 % y superiores), células de melanoma SH4 (90 % y superiores), células de próstata 22RV (90 % y superiores), mientras que no se observó ningún efecto sobre la viabilidad en HaCaT, HDF y células de astrocitos que son las líneas celulares sanas (Figura 3-10).

[0105] Se aplicó una dosis de 10 µg/ml de exosomas en células de neuroblastoma SHSY-5Y y, después de la incubación durante 48 horas, se ensayaron las expresiones génicas de p53, caspasa 3, Bcl-2 y Bax mediante reacción en cadena de la polimerasa en tiempo real cuantitativa (PCR-TR); y como resultado, se observaron aumentos significativos en las expresiones génicas de p53, caspasa 3 y Bax y una disminución en la expresión génica de Bcl-2 en células de neuroblastomas SHSY-5Y (Figuras 11-14). Se aplicó una dosis de 40 µg/ml de exosomas en células de neuroblastomas y astrocitos (NHA) SHSY-5Y, y después de la incubación durante 3 horas, se evaluaron los cambios en las expresiones génicas de p21, p53 y caspasa 3; y se observaron aumentos significativos en las expresiones génicas de p21 y caspasa 3 en las células de neuroblastomas SHSY-5Y, al mismo tiempo que se concluyó que las expresiones génicas de p21, p53 y caspasa 3 disminuyeron en las células de astrocitos (NHA) (Figuras 15-20). Los resultados obtenidos a la luz de los experimentos muestran que la presente invención es adecuada para el desarrollo de una formulación que no tiene un efecto citotóxico sobre las células sanas mientras que provoca la muerte (apoptosis) en grandes cantidades de células cancerosas.

[0107] Las ventajas de la presente invención se pueden expresar de la siguiente manera:

[0109] •La presente invención presenta una actividad casi completa en 24 horas en diferentes tipos de cáncer y no tiene efectos secundarios en células sanas,

[0110] •Dado que los parásitos, especialmente las especies deLeishmania, están extremadamente abiertos a modificaciones genéticas, los parásitos y las vesículas extracelulares de los parásitos pueden modificarse mediante intervención genética según las necesidades, están abiertos a mejoras en sus actividades sobre el cáncer y el volumen de producción obtenido de los parásitos,

[0111] •Las sustancias activas se pueden cargar en los exosomas mediante el uso de la capacidad de carga de fármaco de los exosomas y, por lo tanto, al llevar el fármaco específico a la célula diana y mejorando de este modo la biodisponibilidad del fármaco, se logra el efecto deseado en la región diana específica del tumor.

[0112] •Las vesículas extracelulares usadas en la invención son productos que se pueden producir en grandes volúmenes a precios asequibles.

[0114] REFERENCIAS

[0116] [1].Ferlay, J., y col., Cancer incidence and mortality worldwide: sources, methods and major patterns en GLOBOCAN 2012. International journal of cancer, 2015.136(5): p. E359-E386.

[0117] [2].Tao, J.J., K. Visvanathan y A.C. Wolff, Long term side effects of adjuvant chemotherapy in patients with early breast cancer. The Breast, 2015.24: p. S149-S153.

[0118] [3].Nauts H.C., Fowler G.A. y Bogatko F.H.: A review of the influence of bacterial infection and of bacterial products (coley's toxins) on malignant tumors in man; a critical analysis of 30 inoperable cases treated by coley's mixed toxins, in which diagnosis was confirmed by microscopic examination selected for special study. Acta Med Sc and Suppl 1953; 276:1-103.

[0119] [4].Atayde V.D., Jasiulionis M.G., Cortez M., Yoshida N.: A recombinant protein based on trypanosoma cruzi surface molecule gp82 induces apoptotic cell death in melanoma cells. Melanoma Res 2008; 18:172-183.

[0120] [5].Kallinikova V.D., Matekin P.V., Ogloblina T.A., Leikina M.I., Kononenko A.F., Sokolova N.M., Pogodina L.S.:

[0121] [anticancer properties of flagellate protozoan trypanosoma cruzi chagas, 1909]. IzvAkad NaukSerBiol 2001:299-311.

[0122] [6].Kim J.O., Jung S.S., Kim S.Y., Kim T.Y., Shin D.W., Lee J.H., Lee Y.H.: Inhibition of lewis lung carcinoma growth by toxoplasma gondii through induction of th1 immune responses and inhibition of angiogenesis. J Korean Med Sci 2007; 22:S38-46.

[0123] [7].Lopez N.C., Valck C., Ramirez G., Rodriguez M., Ribeiro C., Orellana J., Maldonado I., Albini A., Anacona D., Lemus D., Aguilar L., Schwaeble W., Ferreira A.: Antiangiogenic and antitumor effects of trypanosoma cruzi calreticulin. PLoS Negl Trop Dis 2010;4:e730.

[0124] [8].Roskin Gr., Exempliarskaia E.: Protozoeninfektion und experimenteller Krebs. Z Krebsforsch 1931;34:628-645.

[0125] [9].Baird R. y col. Immune-mediated regression of established B16F10 melanoma by intratumoral injection of attenuated Toxoplasma gondii protects against rechallenge. J Immunol. 1 de enero de 2013; 190(1): 469-478. doi:10.4049/jimmunol.1201209.

[0126] [10].Bose D. y col., Heat Killed Attenuated Leishmania Induces Apoptosis of HepG2 Cells Through ROS Mediated p53 Dependent Mitochondrial Pathway. Cell Physiol Biochem 2016;38:1303-1318.

[0127] [11].Yang Y. y col., Exosomes from Plasmodium-infected hosts inhibittumorangiogenesis in a murine Lewis lung cancer model. Nature Oncogenesis (2017)6, e351; doi:10.1038/oncsis.2017.52.

[0128] [12].Théry, C., L. Zitvogel, y S. Amigorena, Exosomes: composition, biogenesis and function. Nature Reviews Immunology, 2002.2(8): p.569.

[0129] [13].Kahlert, C. y R. Kalluri, Exosomes in tumor microenvironment influence cancer progression and metastasis. Journal of molecular medicine, 2013.91(4): p.431-437.

[0130] [14].Clayton, A. y M.D. Mason, Exosomes in tumor immunity. Current oncology, 2009.16(3): p.46.

[0131] [15].Clayton, A., y col., Cancer exosomes express CD39 and CD73, which suppress T cells through adenosine production. The Journal of Immunology, 2011: p.1003884.

[0132] [16].Costa-Silva, B., y col., Pancreatic cancer exosomes initiate pre-metastatic niche formation in the liver. Nature cell biology, 2015.17(6): p.816.

[0133] [17].Lee, J.-K., y col., Exosomes derived from mesenchymal stem cells suppress angiogenesis by down-regulating VEGF expression in breast cancer cells. PloS one, 2013.8(12): p. e84256.

[0134] [18].Viaud, S., y col., Dendritic cell-derived exosomes for cancer immunotherapy: what's next? Cancer research, 2010: p.0008-5472. CAN-09-3276.

[0135] [19].Escudier, B., y col., Vaccination of metastatic melanoma patients with autologous dendritic cell (DC) derivedexosomes: results of the first phase I clinical trial. Journal of translational medicine, 2005.3(1): p.10.

[0136] [20].Raimondo, S., y col., Citrus limon-derived nanovesicles inhibit cancer cell proliferation and suppress CML xenograft growth by inducing TRAIL-mediated cell death. Oncotarget, 2015.6(23): p.19514.

Claims (12)

1. REIVINDICACIONES

1. Vesículas extracelulares obtenidas a partir de parásitos deLeishmania infantumpara su uso en el tratamiento del cáncer.

2. Vesículas extracelulares obtenidas a partir de parásitos deLeishmania infantumpara su uso según la reivindicación 1, en el que dicho cáncer se selecciona de un grupo que incluye cáncer de mama, cáncer de próstata, cáncer colorrectal, cáncer de piel, cáncer de pulmón microcítico, cáncer de pulmón no microcítico, mesotelioma, cáncer gastrointestinal, cáncer de páncreas, sarcoma, blastoma, linfoma, glioblastoma, neuroblastoma, cáncer de vulva, cáncer de cuello uterino, carcinoma de endometrio, cáncer de ovario, cáncer de hígado, hepatoma, leucemia, cáncer de vejiga, cáncer de riñón, carcinoma de glándulas salivales, cáncer de tiroides, cánceres de cabeza y cuello como una enfermedad neoplásica.

3. Vesículas extracelulares obtenidas a partir de parásitos deLeishmania infantumpara su uso según cualquiera de las reivindicaciones anteriores que se aíslan mediante el uso de por lo menos uno de los siguientes procedimientos de aislamiento: aislamiento con sistemas acuosos en dos fases, centrífuga graduada, ultracentrífuga, ultracentrífuga de gradiente de sacarosa, precipitación polimérica, ultrafiltración, aislamiento con procedimientos cromatográficos, aislamiento con microperlas y precipitación según la carga iónica y la salazón.

4. Vesículas extracelulares obtenidas a partir de parásitos deLeishmania infantumpara su uso según la reivindicación 3, que se aíslan mediante el procedimiento de aislamiento con un sistema líquido en dos fases comprendiendo las etapas de

- recoger medios de cultivo del parásito en los cuales se aislarán las vesículas extracelulares,

- centrifugar a una tasa de 2.000 g a 10.000 g durante 5-20 minutos para la eliminación de las sustancias indeseables tales como residuos celulares y parásitos del medio de cultivo,

- eliminar las partículas de tamaño 220 nm y superior por filtración después de la centrifugación,

- transferir la mezcla de vesícula-proteína obtenida por centrifugación a un sistema líquido en dos fases que contiene una fase de PEG y una fase de DEX para su separación,

- eliminar las proteínas no vesiculares, la grasa celular y otras impurezas de las vesículas usando la tendencia química de la fase de PEG con las proteínas y la fase de DEX con las membranas estructuradas en fosfolípidos, - obtener vesículas aisladas.

5. Una composición farmacéutica para su uso en el tratamiento del cáncer comprendiendo vesículas extracelulares obtenidas a partir de parásitos deLeishmania infantum, y por lo menos un compuesto activo seleccionado de un grupo comprendiendo compuestos activos que muestran actividad antiparasitaria, antibacteriana, antiviral, antineoplásica y/o citotóxica y/o antimetastásica, y combinaciones binarias y ternarias de los mismos como una sustancia activa adicional.

6. Una composición farmacéutica para su uso según la reivindicación 5, que comprende por lo menos un agente seleccionado de un grupo comprendiendo amikacina, gentamicina, kanamicina, neomicina, netilmicina, tobramicina, paromomicina, estreptomicina, espectinomicina, geldanamicina, herbimicina, rifaximina, loracarbef, ertapenem, doripenem, imipenem, meropenem, cefároxilo, cefazolina, cefalotina, cefalexina, cefaclor, cefamandol, cefoxitina, cefprozilo, cefuroxima, cefixima, cefdinir, cefditoren, cefoperazona, cefotaxima, cefpodoxima, ceftazidima, ceftibuteno, ceftizoxima, cefepima, ceftarolina fosamilo, ceftobiprol, teicoplanina, vancomicina, televancina, dalbavancina, oritavancina, clindamicina, lincomicina, daptomicina, azitromicina, claritromicina, diritromicina, eritromicina, roxitromicina, troleandomicina, telitromicina, espiramicina, aztreonam, furazolidona, nitrofurantoína, linezolid, posizolid, radezolid, torezolid, amoxicilina, ampicilina, azlocilina, carbenicilina, cloxacilina, dicloxacilina, flucloxacilina, mezlocilina, meticilina, nafcilina, oxacilina, penicilina G, penicilina V, piperacilina, temocillina, ticarcilina, clavulanato, sulbactam, tazobactam, bacitracina, colistina, polimixina B, ciprofloxacina, enoxacina, gatifloxacina, gemifloxacina, levofloxacina, lomefloxacina, moxifloxacina, ácido nalidínico, norfloxacina, ofloxacina, trovafloxacina, grepafloxacina, esparfloxacina, temafloxacina, mafenida, sulfacetamida, sulfadiazina, sulfadimetoxina, sulfametizol, sulfametoxazol, sulfanilamida, sulfasalazina, sulfisoxazol, trimetoprim, demeclociclina, doxiciclina, minociclina, oxitetraciclina, tetraciclina, clofazimina, dapsona, capreomicina, cicloserina, etambutol, isoniazida, pirazinamida, rifampicina, rifabutina, rifapentina, estreptomicina, arsfenamina, cloranfenicol, fosfomicina, ácido fusídico, metronidazol, mupirocina, platensimicina, quinupristina, dalfopristina, tianfenicol, tigeciclina, tinidazol, trimetoprim, y combinaciones binarias o ternarias y/o encapsulaciones de los mismos como un compuesto activo que muestra actividad antibacteriana.

7. Una composición farmacéutica para su uso según la reivindicación 5, que comprende por lo menos un agente seleccionado del grupo comprendiendo abacavir, aciclovir, adefovir, amantadina, amprenavir, ampligen, arbidol, atazanavir, atripla, balavir, sidofovir, kombivir, dolutegravir, darunavir, delavirdina, didanosina, docosanol, eduksudina, efavirenz, emtricitabina, enfuvirtida, entecavir, ecoliver, famciclovir, fomivirsen, fosamprenavir, foscarnet, fosfonet, ganciclovir, ibasitabina, imunovir, idoxuridina, imiquimod, indinavir, inosina, interferón tipo I, interferón tipo II, interferón tipo III, interferón, lamivudina, lopinavir, lovirid, maravirok, moroxidina, metisazona, nelfinavir, nevirapina, nexavir,

nitazoxanida, novir, oseltamivir, peginterferón alfa-2a, pensiclovir, peramivir, plekonaril, podofilotoxina, inhibidor de la proteasa, análogos de nucleósidos, ralgetavir, ribavirina, rimantadina, ritonavir, piramidina, saquinavir, sofosbuvir, estavudina, telaprevir, tenofovir, tipranavir, trifluridina, trisivir, tromantadina, trovada, valaciclovir, valganciclovir, vidarabina, viramidina, zalcitabina, zanamivir, zidovudina, y combinaciones binarias o ternarias y/o encapsulaciones de los mismos como un compuesto activo que muestra actividad antiviral.

8. Una composición farmacéutica para su uso según la reivindicación 5, que comprende por lo menos un agente seleccionado de un grupo comprendiendo nitazoxanida, melarsoprol, eflornitina, metronidazol, tinidazol, miltefosina, mebendazol, pamoato de pirantel, tiabendazol, dietilcarbamazina, ivermectina, niclosamida, prazicuantel, albendazol, rifampicina, anfotericina B, fumagilina, furazolidona, nifursemizona, nitazoxanida, ornidazol, sulfato de paromomicina, pentamidina, pirimetamina, tinidazol, albendazol, mebendazol, tiabendazol, fenbendazol, triclabendazol, flubendazol, abamectina, dietilcarbamazina, ivermectina, suramina, pamoato de pirantel, levamisol, niclosamida, nitazoxanida, oxiclozanida, monepantel, derquantel, anfotericina B, urea estibamina, estibogluconato de sodio, antimoniato de meglumina, paromomicina, miltefosina, fluconazol, pentamidina, y combinaciones binarias o ternarias y/o encapsulaciones de los mismos como un compuesto activo que muestra actividad antiparasitaria.

9. Una composición farmacéutica para su uso según la reivindicación 5, que comprende por lo menos un agente seleccionado de un grupo comprendiendo ciclofosfamida, ifosfamida, temozolomida, capecitabina, 5-fluorouracilo, metotrexato, gemcitabina, pemetrexed, mitomicina, bleomicina, epirubicina, doxorrubicina, etopósido, paclitaxel, irinotecán, docetaxel, vincristina, carboplatino, cisplatino, oxaliplatino, bevacizumab, cetuximab, gefitinib, imatinib, trastuzumab, denosumab, rituximab, sunitinib, zoledronato, abiraterona, anastrozol, bicalutamida, exemestano, goserelina, medroxiprogesterona, octreotida, tamoxifeno, bendamustina, carmustina, clorambucilo, lomustina, melfalán, procarbazina, estreptozocina, fludarabina, raltitrexed, actinomicina D, dactinomicina, doxorrubicina, mitoxantrona, eribulina, topotecán, vinblastina, vinorelbina, afatinib, aflibercept, crizotinib, dabrafenib, interferón, ipilimumab, lapatinib, nivolumab, panitumumab, pembrolizumab, pertuzumab, sorafenib, trastuzumab emtansina, temsorilimus, vemurafenib, ácido ibandrónico, pamidronato, bexaroteno, buserelina, ciproterona, degarelix, ácido folínico, fulvestrant, lanreotida, lenalidomida, letrozol, leuprorelina, megestrol, mesna, talidomida, vincristina, y combinaciones binarias o ternarias y/o encapsulaciones de los mismos como un compuesto activo que muestra actividad antineoplásica en combinación con vesículas extracelulares.

10. Una composición farmacéutica para su uso en el tratamiento del cáncer según cualquiera de las reivindicaciones 5-9, la composición se administra mediante por lo menos un procedimiento de administración seleccionado de un grupo comprendiendo parenteral, intravenoso, intradérmico, subcutáneo, intraperitoneal, tópico, intratecal, intranasal, intracerebroventricular, ocular, vaginal, uretral, transdérmico, sublingual, subaracnoideo, rectal, periodontal, perineural, peridural, periarticular, oral, intratimpánico, intratumoral, intrapulmonar, intrasinovial, intramuscular, intraovárico, intraminéreo, intracorporal cavernoso, intracoronario, intracerebral, epidural, cutáneo, bucal, dental.

11. Vesículas extracelulares obtenidas a partir de parásitos deLeishmania infantumpara su uso en el tratamiento del cáncer según las reivindicaciones 1-4, en el que las vesículas se usan como adyuvante.

12. Una composición farmacéutica para su uso según cualquiera de las reivindicaciones 5-10, en el que la composición se forma incorporando las vesículas extracelulares obtenidas a partir de parásitos deLeishmania infantumen por lo menos uno de hidróxido de aluminio, fosfato de aluminio, tocoferol, sistemas de emulsión que contienen 3D-MPL, colesterol, oligonucleótido de CG; o combinaciones de dos o más de los mismos.