ES3055824T3 - Plasminogen replacement therapy for plasminogen-deficiency - Google Patents

Abstract

Los objetos de la invención son un método de suplementación de plasminógeno en un sujeto con deficiencia de plasminógeno y un método para el tratamiento de la deficiencia de plasminógeno en un sujeto con deficiencia de plasminógeno. Estos métodos comprenden la administración al sujeto con deficiencia de plasminógeno de una dosis de plasminógeno, y más particularmente de Glu-plasminógeno, para aumentar el nivel de actividad del plasminógeno en al menos aproximadamente un 1 %, y más particularmente en al menos aproximadamente un 10 %, de la actividad normal del plasminógeno, y para mantener dicho nivel aumentado de actividad del plasminógeno durante un período de suplementación o un período de tratamiento. El sujeto con deficiencia de plasminógeno de la presente invención puede padecer deficiencia de plasminógeno de tipo I, tipo II o una deficiencia adquirida. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

[0001] DESCRIPCIÓN

[0002] Terapia de suplementación con plasminógeno para la deficiencia de plasminógeno

[0003] Campo de la invención

[0004] La presente invención se relaciona con el campo de la medicina. Aspectos particulares de la invención se refieren a métodos y usos para suministrar plasminógeno a un sujeto con deficiencia de plasminógeno.

[0005] Antecedentes de la invención

[0006] El plasminógeno (Pg) es una proteína de origen natural sintetizada por el hígado y que circula en la sangre. Una vez activado, el plasminógeno se convierte en plasmina, un componente enzimático del sistema fibrinolítico y la principal enzima implicada en la lisis de los coágulos y la eliminación de la fibrina extravasada.

[0007] Mecanismo de acción del plasminógeno humano: fisiológicamente, el plasminógeno está involucrado tanto en la fibrinólisis intravascular como extravascular (Castillino and Ploplis, 2005). En el plasma humano existen dos glicoformas principales de plasminógeno: el plasminógeno tipo 1, que contiene dos grupos de glicosilación (N-unido a N289 y O-unido a T346), y el plasminógeno tipo 2, que contiene solo un azúcar O-unido (O-unido a T346). El plasminógeno tipo 2 se recluta preferentemente en la superficie celular, mientras que el plasminógeno tipo 1 se recluta más fácilmente en los coágulos sanguíneos.

[0008] El plasminógeno se activa a plasmina por la escisión del enlace peptídico Arg561-Val562 por el activador del plasminógeno tipo tejido (tPA) o el activador del plasminógeno tipo uroquinasa. Esta escisión da como resultado una cadena pesada α que consiste en cinco kringles con sitios de unión a lisina y una cadena ligera β con la tríada catalítica His603, Asp646, y Ser741. La plasmina activa participa en la lisis de los coágulos de fibrina en el torrente sanguíneo. Se ha demostrado que, al unirse a un coágulo de fibrina, el plasminógeno nativo con un ácido glutámico N-terminal (Glu-plasminógeno) se escinde fácilmente y se convierte en un plasminógeno modificado (83 kDa) con una lisina N-terminal (Lys-plasminógeno) (como se muestra en la Figura 1). Este Lysplasminógeno es un sustrato superior para la activación por tPA (Fredenburg and Nesheim, 1992). Schott, D. et al. ("Therapy with a Purified Plasminogen Concentrate in an Infant with Ligneous Conjunctivitis and Homozygous Plasminogen Deficiency", 1998, N Engl J Med 339:1679-1686) divulga una terapia a corto plazo de un paciente con conjuntivitis leñosa debido a la deficiencia de plasminógeno tipo I utilizando una dosis alta de LYS-plasminógeno.

[0009] Necesidad en el campo: todavía existe la necesidad de nuevas estrategias para tratar la deficiencia de plasminógeno. La suplementación con plasminógeno no es invasiva, y lamentablemente, no existe ninguna terapia de suplementación con plasminógeno que se ofrezca a estos sujetos con deficiencia de plasminógeno. Por lo tanto, es necesario proporcionar terapia de suplementación con plasminógeno.

[0010] Las características adicionales de la divulgación se harán evidentes a partir de una revisión de la discusión, las figuras y la descripción del ejemplo en este documento.

[0011] Breve compendio de la invención

[0012] La invención es tal como se define en las reivindicaciones, y cualquier otro aspecto, configuraciones, o realizaciones que se exponga en el presente documento que no entren dentro del alcance de las reivindicaciones son solo para fines informativos. Además, cualquier referencia en la descripción a métodos de tratamiento se refiere a los compuestos, las composiciones farmacéuticas, y los medicamentos de la presente invención para su uso en un método de tratamiento del cuerpo humano (o animal) mediante terapia (o para diagnóstico).

[0013] El alcance de la invención reivindicada se define en las reivindicaciones independientes. Las modalidades preferidas se establecen en las reivindicaciones secundarias.

[0014] En consecuencia, en un aspecto de la invención, se proporciona Glu-plasminógeno para su uso en un método de tratamiento de la deficiencia de plasminógeno tipo I en un sujeto, en donde el Glu-plasminógeno se administrará por vía intravenosa según los siguientes regímenes:

[0015] (i) diariamente en una dosis efectiva de al menos 0,5 mg/kg de masa del sujeto con deficiencia de plasminógeno; (ii) cada dos días en una dosis efectiva de al menos 1,5 mg/kg de masa del sujeto con deficiencia de plasminógeno;

[0016] (iii) dos veces a la semana en una dosis efectiva de al menos 6 mg/kg de masa del sujeto con deficiencia de plasminógeno; o

[0017] (iv) semanalmente en una dosis efectiva de al menos 45 mg/kg de masa del sujeto con deficiencia de plasminógeno.

[0018] En términos más genéricos, aunque en parte fuera del alcance de las reivindicaciones, la presente divulgación se refiere a un método de suplementación de plasminógeno en un sujeto con deficiencia de plasminógeno, el uso de plasminógeno para la suplementación de plasminógeno, el plasminógeno para su uso en una suplementación de plasminógeno en un sujeto con deficiencia de plasminógeno, un método para aumentar el nivel de la actividad plasmática de plasminógeno de un sujeto con deficiencia de plasminógeno, y el uso de plasminógeno para la preparación de un medicamento para aumentar el nivel de la actividad de plasminógeno de un sujeto.

[0019] Breve descripción de las figuras

[0020] La figura 1 muestra un esquema de la cadena de aminoácidos del Glu-plasminógeno, su sitio de conversión en Lys-plasminógeno, sus cadenas A y B, y sus estructuras Kringle.

[0021] La figura 2 muestra una fotografía de un paciente de 4 años que padece conjuntivitis leñosa en ambos ojos (Schuster and Seregard, 2003).

[0022] La figura 3 muestra una fotografía de una hiperplasia gingival generalizada con agrandamiento nodular cubierto por pseudomembranas amarillentas (Silva, 2006).

[0023] La figura 4 es un gráfico que muestra la terminología utilizada en este documento para describir las fases de una administración repetida típica y el 'aumento de la actividad de plasminógeno'.

[0024] La figura 5 es una gráfica que muestra el perfil farmacocinético (PK) de la actividad plasmática de plasminógeno en cinco sujetos con deficiencia de plasminógeno que recibieron una única dosis de 2 mg/kg de Gluplasminógeno, el valor medio de los mismos y un PK previsto establecido a partir de una ecuación determinada por la aplicación Phoenix<®>WinNonlin basada en dicho valor medio.

[0025] La figura 6 es un gráfico que muestra el PK previsto (determinado por dicha ecuación) para una dosis única de 2 mg/kg, 6 mg/kg y 12 mg/kg.

[0026] La figura 7A muestra una fotografía del párpado derecho del sujeto 2 en el día 0 (antes de la infusión) en el estudio descrito en el ejemplo 2. La figura 7B muestra una fotografía del párpado derecho del sujeto 2 en el día 1 en el estudio descrito en el ejemplo 2.

[0027] La figura 7C es un gráfico que muestra la actividad de plasminógeno ajustada a la línea basal del sujeto 2 a los 5-15 minutos, 1 hora, 6 horas, 24 horas y 48 horas después del final de la infusión de una dosis única de 2 mg/kg.

[0028] La figura 8A es un gráfico que muestra el perfil farmacocinético previsto de la actividad plasmática de plasminógeno (por encima de la línea basal) para una administración diaria de 2 mg/kg de Glu-plasminógeno en un sujeto con deficiencia de plasminógeno.

[0029] La figura 8B es un gráfico que muestra el perfil farmacocinético previsto de la actividad plasmática de plasminógeno (por encima de la línea basal) para una administración diaria de 0,5 mg/kg de Glu-plasminógeno en un sujeto con deficiencia de plasminógeno.

[0030] La figura 9A es un gráfico que muestra el perfil farmacocinético previsto de la actividad plasmática de plasminógeno (por encima de la línea basal) para una administración cada dos días de 2 mg/kg de Gluplasminógeno en un sujeto con deficiencia de plasminógeno.

[0031] La figura 9B es un gráfico que muestra el perfil farmacocinético previsto de la actividad plasmática de plasminógeno (por encima de la línea basal) para una administración cada dos días de 1,5 mg/kg de Gluplasminógeno en un sujeto con deficiencia de plasminógeno.

[0032] La figura 10A es un gráfico que muestra el perfil farmacocinético previsto de la actividad plasmática de plasminógeno (por encima de la línea basal) para una administración dos veces a la semana de 2 mg/kg de Glu-plasminógeno en un sujeto con deficiencia de plasminógeno.

[0033] La figura 10B es un gráfico que muestra el perfil farmacocinético previsto de la actividad plasmática de plasminógeno (por encima de la línea basal) para una administración dos veces a la semana de 6 mg/kg de Glu-plasminógeno en un sujeto con deficiencia de plasminógeno.

[0034] La figura 10C es un gráfico que muestra el perfil farmacocinético previsto de la actividad plasmática de plasminógeno (por encima de la línea basal) para una administración dos veces a la semana de 12 mg/kg de Glu-plasminógeno en un sujeto con deficiencia de plasminógeno.

[0035] La figura 11A es un gráfico que muestra el perfil farmacocinético previsto de la actividad plasmática de plasminógeno (por encima de la línea basal) para una administración semanal de 12 mg/kg de Gluplasminógeno en un sujeto con deficiencia de plasminógeno.

[0036] La figura 11B es un gráfico que muestra el perfil farmacocinético previsto de la actividad plasmática de plasminógeno (por encima de la línea basal) para una administración semanal de 45 mg/kg de Gluplasminógeno en un sujeto con deficiencia de plasminógeno.

[0037] La figura 12 es una radiografía de tórax que muestra atelectasia total del pulmón izquierdo debido a obstrucción de las vías respiratorias en el sujeto descrito en el Ejemplo 4 antes de la suplementación con Glu-plasminógeno. Las figuras 13A y 13B muestran fotografías de broncoscopia de la tráquea del sujeto descrito en el ejemplo 4 que muestran secreciones viscosas (A) y lesiones obstructivas en la tráquea (B), respectivamente.

[0038] La figura 14 muestra la actividad de plasminógeno y el momento de las dosis de plasminógeno durante las primeras 144 horas de la suplementación con Glu-plasminógeno en el sujeto del ejemplo 4.

[0039] La figura 15 muestra el nivel de D-dímeros y la actividad de plasminógeno durante las primeras 144 horas de la suplementación con plasminógeno en el sujeto del ejemplo 4.

[0040] La figura 16 es una gráfica que muestra el perfil farmacocinético (PK) de la actividad de plasminógeno plasmática en siete sujetos con deficiencia de plasminógeno que recibieron una única dosis de 6 mg/kg de Gluplasminógeno, los valores promedio de estos y la curva para dichos valores promedio.

[0041] Las figuras 17 a 23 son gráficas que muestran la actividad de plasminógeno a través de niveles mínimos (actividad plasmática de plasminógeno detectada antes de una dosis de Glu-plasminógeno) medida durante un período de 12 semanas de suplementación con Glu-plasminógeno que consiste en dosis repetidas de 6 mg/kg proporcionadas por vía intravenosa cada 2 días (qod) o cada 3 días (q3d). Los niveles mínimos de los sujetos 01-001, 01-002, 01-006, 01-007, 01-008, 01-009 y 01-010 se muestran en las gráficas de las figuras 17, 18, 19, 20, 21, 22 y 23, respectivamente. La línea basal el 10 % se ilustra con fines de referencia.

[0042] La figura 24 muestra la escala para la evaluación de la mejora global.

[0043] La figura 25 muestra la escala para la evaluación de la calidad de vida.

[0044] Descripción detallada de la divulgación

[0045] La invención es tal como se define en las reivindicaciones y cualquier otro aspecto, configuraciones o realizaciones que se establecen en el presente documento que no entren dentro del alcance de las reivindicaciones son solo para fines informativos. Además, cualquier referencia en la descripción a métodos de tratamiento se refiere a los compuestos, las composiciones farmacéuticas, y los medicamentos de la presente invención para su uso en un método de tratamiento del cuerpo humano (o animal) mediante terapia (o para diagnóstico).

[0046] En términos genéricos, la presente divulgación se refiere a una 'suplementación con plasminógeno', que también puede designarse como una 'terapia de suplementación con plasminógeno' o una 'terapia con plasminógeno' o un 'tratamiento de la deficiencia de plasminógeno'. Existen muchas condiciones relacionadas con la deficiencia de plasminógeno; la invención se refiere a la deficiencia congénita de plasminógeno tipo I. En su tema general, la presente divulgación se refiere a un método para i) suplementar plasminógeno a un sujeto con deficiencia de plasminógeno o ii) proporcionar a dicho sujeto plasminógeno, en donde el sujeto con deficiencia de plasminógeno tiene una actividad plasmática reducida de plasminógeno en relación con una actividad plasmática normal de plasminógeno. El método puede comprender además un paso de determinación de la actividad plasmática de plasminógeno del sujeto antes de la administración del plasminógeno.

[0047] En este contexto, el sujeto que necesita la presente divulgación es un 'sujeto con deficiencia de plasminógeno'. Un 'sujeto con deficiencia de plasminógeno' se define como un sujeto que tiene una actividad plasmática de plasminógeno inferior al nivel de la actividad plasmática de plasminógeno en un sujeto normal no deficiente en plasminógeno (denominado 'actividad normal de plasminógeno'). Debido a que existe variabilidad en la actividad de plasminógeno de un sujeto normal, es preferiblemente calcular la actividad normal de plasminógeno en un conjunto de plasma recogido de sujetos normales o sanos no deficientes en plasminógeno. Preferiblemente, dicho conjunto de plasma se recoge a partir de una cantidad suficientemente grande de sujetos para así normalizar la variación encontrada en los individuos. Preferiblemente, dicho conjunto de plasma se recoge a partir de al menos 240 sujetos normales no deficientes en plasminógeno, por ejemplo 120 hombres adultos sanos y 120 mujeres adultas sanas que abarcan edades comprendidas entre los 20 y los 80 años. Por ejemplo, la actividad normal de plasminógeno puede corresponder a la actividad media o promedio determinada del plasminógeno en una población de sujetos sanos (es decir, no deficientes en plasminógeno). En la técnica se conocen varios métodos para medir la actividad de plasminógeno. Por ejemplo, la actividad de plasminógeno se determina comúnmente mediante ensayos cromogénicos o fluorogénicos. El conjunto de sujetos para la determinación de la actividad normal de plasminógeno, así como el método para medir la actividad de plasminógeno que se utilizan preferiblemente según la presente divulgación se describen en Criterios para la medición específica del plasminógeno (enzimático; procedimiento) en plasma humano, Electronic Journal Of The International Federation Of Clinical Chemistry And Laboratory Medicine, Vol. 12, No. 3, 2000: www.ifcc.org/ifccfiles/docs/plasminogen.pd.

[0049] Existen diversos tipos de sujetos con deficiencia de plasminógenos, que incluyen, sin limitación, una persona que padece de i) deficiencia aguda de plasminógeno tal como un recién nacido o bebes prematuros, ii) pacientes con deficiencia crónica de plasminógeno tales como aquellas causadas por una mutación, iii) síndrome de dificultad respiratoria neonatal aguda (NRDS/HMD), iv) síndrome de dificultad respiratoria en adultos aguda (ARDS), v) coagulación intravascular diseminada (DIC), y vi) conjuntivitis leñosa. Aunque la invención se refiere al tratamiento de la deficiencia de plasminógeno tipo I (una condición congénita), la presente divulgación también proporciona, fuera del objeto de las reivindicaciones, el tratamiento de otras formas de deficiencia de plasminógeno.

[0051] Según un aspecto de la invención, el sujeto es humano. En algunas realizaciones de la invención, el sujeto es un adulto o un niño.

[0053] El término 'actividad reducida del plasminógeno' designa la actividad de plasminógeno medida en un sujeto con deficiencia de plasminógeno. El término 'actividad de plasminógeno reducida' también se refiere al nivel de la actividad de plasminógeno de un sujeto con deficiencia de plasminógeno antes de la administración de plasminógeno según la presente divulgación. Dentro del ámbito de las reivindicaciones, en el caso donde un sujeto tenga deficiencia de plasminógeno tipo I, su cantidad de plasminógeno plasmático es inferior al nivel encontrado en una población sana y la actividad de plasminógeno resultante es inferior a dicha actividad normal de plasminógeno. Fuera del ámbito de las reivindicaciones, en el caso donde un sujeto tiene deficiencia de plasminógeno tipo II, su cantidad de plasminógeno plasmático puede o no puede ser menor que el nivel encontrado en una población saludable; sin embargo, su plasminógeno está mutado de tal manera que la actividad de plasminógeno resultante es inferior a dicha actividad normal de plasminógeno. Fuera del ámbito de las reivindicaciones, en el caso donde un sujeto tiene diabetes mellitus controlada de forma insuficiente o descontrolada, su cantidad de plasminógeno plasmático puede o no puede ser menor que el nivel encontrado en una población saludable; sin embargo, su plasminógeno es glicosilado de tal manera que la actividad de plasminógeno resultante es inferior a dicha actividad normal de plasminógeno. Por lo tanto, en todos estos casos, los niveles de actividad de plasminógeno de estos sujetos son inferiores a dicha actividad normal de plasminógeno. La actividad reducida del plasminógeno puede ser del 70 % o menos de la actividad normal de plasminógeno, del 60 % o menos de la actividad normal de plasminógeno, del 50 % o menos de la actividad normal de plasminógeno, del 40 % o menos de la actividad normal de plasminógeno, del 35 % o menos de la actividad normal de plasminógeno, o del 30 % o menos de la actividad normal de plasminógeno.

[0055] En términos generales una dosis eficaz de plasminógeno debería aumentar el nivel de la actividad de plasminógeno del sujeto en al menos aproximadamente un 10 % de la actividad normal de plasminógeno. Idealmente, el nivel de la actividad de plasminógeno del sujeto debería aumentar en al menos aproximadamente un 10 % del nivel de la actividad normal de plasminógeno y mantener dicho aumento del nivel de la actividad de plasminógeno sobre un periodo de suplementación.

[0057] A modo de ilustración, la actividad normal de plasminógeno se establece en un 100 %. Por lo tanto, un aumento de al menos aproximadamente el 10 % de la actividad normal de plasminógeno (100 %) representa al menos aproximadamente el 10 %. Por ejemplo, en el caso de que se determine una actividad reducida de plasminógeno del 40 %, entonces el aumento de la actividad de plasminógeno después de la administración de plasminógeno es de al menos aproximadamente el 50 %. Fuera del ámbito de las reivindicaciones, la actividad reducida de plasminógeno aumenta al menos aproximadamente un 10 %, aproximadamente un 15 %, aproximadamente un 20 %, aproximadamente un 25 %, aproximadamente un 30 %, aproximadamente un 35 %, aproximadamente un 40 %, aproximadamente un 45 %, o aproximadamente un 50 % de la actividad normal de plasminógeno.

[0059] Donde el nivel de la actividad de plasminógeno se incrementa hasta un nivel deseado y se mantiene en dicho nivel deseado durante un período de suplementación, la dosis de plasminógeno puede administrarse en dosis múltiples para así acumular una concentración plasmática hasta el nivel deseado y mantenerla. Para cada dosis administrada, hay un pico de nivel plasmático máximo seguido de una disminución. Entre dos dosis administradas, hay un nivel plasmático mínimo que se denomina mínimo (ver figura 4). Por lo tanto, el pico corresponde a la actividad máxima después de la administración de una dosis; y el mínimo corresponde a la actividad más baja alcanzada entre la administración de dos dosis (ver figura 4). Inicialmente, al administrar las dosis repetidas, el plasminógeno se acumulará en el plasma a un cierto ritmo que depende de su vida media intrínseca en el sujeto, la cantidad de plasminógeno administrada y la frecuencia de su administración. El nivel plasmático de la actividad de plasminógeno aumentará durante un período llamado el 'período de acumulación'(ver figura 4), que generalmente dura hasta 3 a 5 veces la vida media de un compuesto en el plasma de un sujeto. Después de este período de acumulación, la eliminación de plasminógeno y la entrada de plasminógeno llegan a un equilibrio y el nivel plasmático de la actividad de plasminógeno deja de aumentar y alcanza una meseta, que se denomina el 'estado estacionario' (ver figura 4). Durante el estado estacionario, el nivel mínimo permanece estable en un nivel determinado. Este es el nivel mínimo en estado estacionario que corresponde al 'aumento del nivel de la actividad de plasminógeno del sujeto'. Los picos de la actividad de plasminógeno en estado estacionario pueden ser superiores al nivel de la actividad de plasminógeno aumentado, y los mínimos de la actividad de plasminógeno en estado estacionario definen dicho nivel de la actividad de plasminógeno aumentado. Debe entenderse que en cualquier momento durante el estado estacionario, la actividad de plasminógeno (picos y mínimos) es al menos aproximadamente el 10 % de la actividad normal de plasminógeno.

[0061] En términos generales, es conveniente que el nivel máximo de la actividad de plasminógeno durante el estado estacionario no sea superior a aproximadamente 8 veces la actividad normal de plasminógeno (aproximadamente el 800 %). Aunque no todos los regímenes listados en las reivindicaciones pueden dar como resultado esto, también puede ser conveniente que el nivel máximo no sea superior a aproximadamente 5 veces la actividad normal de plasminógeno (aproximadamente el 500 %), aproximadamente 3 veces la actividad normal de plasminógeno (aproximadamente el 300 %), aproximadamente 2,5 veces la actividad normal de plasminógeno (aproximadamente el 250 %), aproximadamente 2 veces la actividad normal de plasminógeno (aproximadamente el 200 %), aproximadamente 1,75 veces la actividad normal de plasminógeno (aproximadamente el 175 %), aproximadamente 1,5 veces la actividad normal de plasminógeno (aproximadamente el 150 %), aproximadamente 1,25 veces la actividad normal de plasminógeno (aproximadamente el 125 %), o aproximadamente 1 vez la actividad normal de plasminógeno (aproximadamente el 100 %). Por ejemplo, el nivel de la actividad de plasminógeno del sujeto aumenta en no más de aproximadamente el 200 % de la actividad normal de plasminógeno, en no más de aproximadamente el 150 % de la actividad normal de plasminógeno, o en no más de aproximadamente el 100 % de la actividad normal de plasminógeno. En este caso, cuando el nivel de la actividad de plasminógeno aumenta en no más de aproximadamente un cierto valor, se pretende que el nivel máximo de la actividad de plasminógeno no sea mayor que un cierto valor. En otras palabras, es conveniente que el nivel mínimo sea mayor que un valor mínimo y que el nivel máximo sea menor que un valor máximo, en donde dicho valor mínimo es preferiblemente igual al nivel basal del sujeto 10 % del nivel normal; y el valor máximo no sea mayor del 800 % del nivel normal, y (aunque fuera del ámbito de las presentes reivindicaciones) incluso del 500 %, 300 %, 250 %, 200 %, 175 %, 150 %, 125 % o 100 % del nivel normal.

[0063] Según la invención, el sujeto con deficiencia de plasminógeno padece una deficiencia de plasminógeno tipo I. Las deficiencias de plasminógeno tipo I y II se denominan deficiencias congénitas de plasminógeno.

[0065] Hay dos tipos de deficiencia congénita de plasminógeno: la deficiencia de plasminógeno tipo I y deficiencia de plasminógeno tipo II. La hipoplasminogenemia, también conocida como deficiencia de plasminógeno tipo I, es un trastorno autosómico recesivo raro caracterizado por niveles disminuidos tanto de plasminógeno inmunorreactivo como funcional y que conduce a manifestaciones clínicas graves principalmente debido a la formación de depósitos fibrosos en las membranas mucosas de todo el cuerpo (Schott D. et al., 1998 Therapy with a Purified Plasminogen Concentrate in an Infant with Ligneous Conjunctivitis and Homozygous Plasminogen Deficiency. New Engl. J. Med. (339):1679). En la deficiencia de plasminógeno tipo II, o displasminogenemia, que está fuera del ámbito de las reivindicaciones, los niveles del antígeno del plasminógeno son normales o ligeramente reducidos, pero la actividad funcional específica del plasminógeno está marcadamente reducida.

[0067] La condición más común y bien definida asociada con la hipoplasminogenemia es la conjuntivitis leñosa, que se caracteriza por crecimientos gruesos y leñosos (ligneos) en la conjuntiva del ojo. La figura 2 muestra una fotografía de un paciente de 4 años que padece conjuntivitis leñosa en ambos ojos (Schuster V. and Seregard S.2003 Ligneous conjunctivitis. Surv. Ophthalmol.48(4), pp.369-388).

[0069] Sin tratamiento, la conjuntivitis leñosa puede provocar ceguera. La mayoría de los casos afectados de conjuntivitis leñosa son lactantes y niños con deficiencia de plasminógeno, con la edad media de la primera manifestación clínica de aproximadamente 10 meses (Schuster V. et al. 2007 Plasminogen deficiency. J. Thromb. Haemost. 5(12), pp. 2315-2322; Bateman J.B. et al. 1986 Ligneous conjunctivitis: an autosomal recessive disorder. J Pediatr Ophthalmol Strabismus. 23(3), pp. 137-140). Se cree que la conjuntivitis leñosa es desencadenada por una infección local o intervenciones quirúrgicas en el ojo (Schuster V. and Seregard S.

[0070] 2003 Ligneous conjunctivitis. Surv. Ophthalmol.48(4), pp.369-388).

[0071] Además de la conjuntivitis leñosa, la hipoplasminogenemia es una enfermedad multisistémica que también puede afectar los oídos, los senos paranasales, el árbol traqueobronquial, el tracto genitourinario, y las encías. La figura 3 muestra una fotografía de una hiperplasia gingival generalizada con agrandamiento nodular cubierto por pseudomembranas amarillentas (Silva G.B. et al. Clinical manifestations due to severe plasminogen deficiency: a case report. 2006 J. Dent. Child (Chic). 73(3), pp. 179-82). Las lesiones traqueobronquiales con secreciones hiperviscosas pueden resultar en insuficiencia respiratoria. Además, se ha informado de hidrocefalia en aproximadamente el 10 % de los niños con deficiencia grave de plasminógeno, aparentemente relacionada con la deposición de fibrina en el sistema ventricular cerebral. El tratamiento de la hidrocefalia puede requerir la implantación de una derivación, lo que puede complicarse por oclusiones repetidas debido a la falta de la lisis normal del coágulo y provocar la muerte. También se ha informado de la cicatrización de heridas cutáneas gravemente deficiente asociada a la deficiencia de plasminógeno. Aunque se informa con menos frecuencia, también se ha informado de la afectación del tracto gastrointestinal, del sistema renal y de una malformación del vermis cerebeloso conocida como malformación de Dandy-Walker (Schott D. et al., 1998 Therapy with a Purified Plasminogen Concentrate in an Infant with Ligneous Conjunctivitis and Homozygous Plasminogen Deficiency. New Engl. J. Med. (339):1679). El pronóstico de la hipoplasminogenemia varía según la extensión, longitud, y el sitio de las lesiones y puede resultar en retraso del crecimiento mental, pérdida de la función de los órganos, y en ocasiones, la muerte (Mingers A.M. et al. Homozygous type I plasminogen deficiency.1997 Semin. Thromb. Hemost.23(3), pp.259-269; Schuster V. et al. Plasminogen deficiency.2007 J. Thromb. Haemost. 5(12), pp. 2315-2322; Mehta R. and Shapiro A.D. Plasminogen deficiency. 2008 Haemophilia.14(6), pp.1261-1268).

[0073] Base genética de la hipoplasminogenemia o displasminogenemia: el diagnóstico de hipoplasminogenemia grave se basa en el reconocimiento de las manifestaciones clínicas y los resultados de las pruebas de laboratorio de la actividad de plasminógeno y los niveles de antígeno. El diagnóstico puede confirmarse por el análisis del gen del plasminógeno.

[0075] El gen del plasminógeno abarca aproximadamente 52,5 kilobases (kb) de ADN y está compuesto por 19 exones separados por 18 intrones. El ADNc del plasminógeno de 2,7 kb codifica una proteína compuesta por 791 aminoácidos. Dos exones codifican los cinco dominios kringle del plasminógeno. Las mutaciones en el gen del plasminógeno pueden provocar la deficiencia de plasminógeno tipo I (hipoplasminogenemia), donde se reducen el antígeno y la actividad de plasminógeno circulante, o la deficiencia de plasminógeno tipo II (displasminogenemia), donde se reduce la actividad de plasminógeno circulante, pero el nivel del antígeno del plasminógeno es normal.

[0077] La manifestación clínica más común de la deficiencia de plasminógeno tipo I es la conjuntivitis leñosa. Mingers, 1997 fue el primero en demostrar niveles gravemente reducidos de antígeno de plasminógeno y de la actividad de plasminógeno en tres niñas no relacionadas con la conjuntivitis leñosa. Schuster V. et al. (2007) identificaron una mutación puntual homocigótica de Gly a Ala en el exón 7, posición 780 en una mujer joven con conjuntivitis leñosa. Esta mutación conduce a un intercambio de Arg216 por His. Los padres del paciente y una hermana eran todos heterocigotos para esta mutación y no presentaban signos de manifestaciones clínicas. Una segunda niña con conjuntivitis leñosa tenía una mutación puntual homocigótica Gly a Ala en el exón 15, posición 1924, que dio lugar a un codón de terminación (Trp59 a Stop). Una vez más, los padres del paciente no presentaban síntomas y eran heterocigotos para esta mutación. El padre de este segundo paciente también tenía una mutación en su segundo alelo en el mismo codón para producir un Trp597 a Cys (heterocigosidad compuesta).

[0079] Estos estudios fueron la primera evidencia de que la conjuntivitis leñosa puede ser causada por mutaciones en el gen del plasminógeno. Otras mutaciones que se han identificado en pacientes con conjuntivitis leñosa con deficiencia de plasminógeno tipo I incluyen: exón 11, posición 1511 (Gly a Thr) en tres pacientes, que conduce a una mutación de terminación (Glu460 a Stop); heterocigotos compuestos, Lys19 a Glu/Arg513 a His, Lys19 a Glu/Arg216 a His y Lys19 a Glu/Leu128 a Pro; y deleción de una mutación del sitio de empalme de Lys en el intrón Q en dos pacientes adicionales. Schuster et al. (2007) encontraron una mutación puntual heterocigota Ala a Gly, que conduce a un intercambio de Lys19 a Glu en dos pacientes y la misma mutación homocigota en otros dos pacientes.

[0081] En un estudio de 50 pacientes con deficiencia de plasminógeno de 44 familias, 40 (80 %) tenían conjuntivitis leñosa, 17 (34 %) tenían gingivitis leñosa y 7 pacientes tenían ambas (Tefs K. et al. Molecular and clinical spectrum of type I plasminogen deficiency: A series of 50 patients.2006 Blood.108(9), pp.3021-3026.). En 15 pacientes (30 %), la enfermedad afectó al tracto respiratorio superior e inferior (oídos, senos paranasales, laringe, bronquios y pulmones) y en 4 (8 %) pacientes la enfermedad afectó al tracto genital femenino. El defecto más común del gen del plasminógeno en estos 50 pacientes fue la mutación Lys19 a Glu (17 pacientes [34 %]) y el nivel de la actividad basal del plasminógeno en estos pacientes varía del 27 % al 35 % del nivel de la actividad normal de plasminógeno. En pacientes con otras mutaciones, tales como la mutación R216H, el nivel de la actividad de plasminógeno disminuye al 2 % del nivel de la actividad normal de plasminógeno. El nivel de la actividad resultante de plasminógeno es específico para la mutación.

[0082] Deficiencia adquirida de plasminógeno: la disminución de los niveles de plasminógeno no relacionada con factores genéticos, denominada deficiencia adquirida de plasminógeno, que queda fuera del ámbito de las reivindicaciones, se ha observado en varias condiciones, entre las que se incluyen, entre otras, la coagulación intravascular diseminada (DIC), la sepsis, la leucemia, la enfermedad de la membrana hialina, la enfermedad hepática, la fiebre hemorrágica argentina, el hipertiroidismo, la terapia post L-asparaginasa, la terapia trombolítica y la cirugía. La disminución en plasminógeno en algunas de estas condiciones puede ser una señal de pronóstico negativa. Existen varios mecanismos que pueden provocar una deficiencia de plasminógeno adquirida. El aumento en el consumo de plasminógeno así como también la síntesis deprimida de plasminógeno pueden ser la razón de la deficiencia observada en varias enfermedades hepáticas graves. Una liberación excesiva de activadores de plasminógenos naturales inducida por un estímulo masivo (amplio daño de tejido, estrés, shock, determinados fármacos, etc.) podría conducir, posiblemente, a un nivel de plasminógeno disminuido. Por ejemplo, se cree que la degradación de plasminógeno en un plasminógeno molecular bajo mediante la elastasa de leucocitos es la razón de la reducción en un plasminógeno funcional observado en sujetos sépticos y con fiebre hemorrágica argentina.

[0083] Fuera del ámbito de las reivindicaciones, existen diversas enfermedades o condiciones que representan una deficiencia de plasminógeno adquirida, tal como:

[0084] a) Enfermedad de Kawasaki

[0085] b) Neonatos/Niños (evento trombolítico)

[0086] c) Quemaduras y quemaduras graves

[0087] d) Osificación heterotópica (miositis osificante)

[0088] e) Enfermedad de la membrana hialina en neonatos/síndrome de enfermedad respiratoria neonatal (NRDS) f) Coagulación intravascular diseminada (DIC)

[0089] g) Sepsis

[0090] h) Terapia trombolítica en adultos

[0091] i) Ictus

[0092] j) Daño pulmonar agudo (ALI)/Síndrome de enfermedad respiratoria (aguda) en adultos (ARDS) k) Diabetes (Tipo: 1, 1,5, 2 y 3)

[0093] I) Enfermedad hepática (insuficiencia hepática fulminante/hepática)

[0094] m) Síndrome de Budd-Chiari

[0095] n) Anemia hemolítica microangiopática (MAHA)

[0096] o) Síndrome urémico hemolítico atípico

[0097] Enfermedad de Kawasaki: la enfermedad de Kawasaki es una enfermedad en la que los vasos sanguíneos a lo largo del cuerpo se inflaman. Los síntomas más comunes incluyen una fiebre que dura más de cinco días y no se controla a través de medicación común, ganglios linfáticos grandes en el cuello, un sarpullido en el área genital y ojos, labios, palmas o plantas de los pies enrojecidos. En algunos niños, pueden formarse aneurismas en la arteria coronaria en el corazón. Si las arterias coronarias se ven implicadas, puede ser necesario un tratamiento continuo o cirugía. Sin tratamiento, los problemas de arteria coronaria ocurren en hasta el 25 % y aproximadamente el 1 % fallece. Las complicaciones cardíacas son el aspecto más importante de la enfermedad de Kawasaki. Es la principal causa de enfermedad cardíaca adquirida en la niñez en Estados Unidos y Japón. El fallecimiento puede ocurrir debido a un infarto en el miocardio secundario a la formación de un coágulo de sangre (trombosis) en un aneurisma en la arteria coronaria o a la ruptura de un aneurisma en una arteria coronaria grande. La terapia trombolítica mediante el uso del activador de tipo tisular (t-PA/u-PA) se utiliza típicamente en eventos trombolíticos. El activador de plasminógeno exige un plasminógeno como sustrato para producir plasmina que luego iniciará el proceso fibrinolítico en los coágulos de sangre que causan trombosis. Se informó que los pacientes con enfermedad de Kawasaki tienen niveles de actividad de plasminógeno de solamente el 50 %, por lo que se limita el beneficio terapéutico del tratamiento de la enfermedad de Kawasaki (Saji B.T. et al., Kawasaki Disease: Current Understanding of the Mechanism and Evidence-Based Treatment. 2017 Ed. Springer ISBN 978-4-431-56039-5). Por lo tanto, los pacientes con Kawasaki podrían beneficiarse con la terapia de suplementación con plasminógeno para asegurar la resolución rápida al evento trombolítico que supone una amenaza para la vida/extremidad, aunque esto queda fuera del objeto de las reivindicaciones.

[0099] Neonatos/Niños (evento trombolítico): los neonatos, los lactantes y en ocasiones los niños tienen del 40-50 % de la actividad de plasminógeno en comparación con los adultos. Este nivel de plasminógeno bajo relentiza la generación de plasmina y reduce el efecto trombolítico de esteptoquinasa exógena/endógena, uroquinasa (u-PA) y activadores del plasminógeno tisulares (t-PA) cuando ocurre un evento trombolítico. Los eventos trombolíticos venosos (VTE) en neonatos/lactantes/niños y, ocalsionalmente, adolescentes pueden beneficiarse de la terapia de suplementación con plasminógen, aunque esto queda fuera del objeto de las reivindicaciones. Además, el Colegio Estadounidense de Médicos del Tórax recomienda: "Sugerimos que, si se requiere la trombólisis, se utilice el activador tisular del plasminógeno (tPA) en lugar de otros agentes líticos (Grado 2C), y sugerimos la administración de plasminógeno (plasma fresco congelado) antes de comenzar la terapia (Grado 2C)" (Monagle P. et al. Antithrombotic Therapy and Prevention of Thrombosis, 9th ED: ACCP Guidelines Chest 2012; 141(2) (Suppl):e737S-e801S).

[0101] Quemaduras y quemaduras graves y osificación heterotópica (miositis osificante): la osificación heterotópica (OH) es la presencia de hueso en tejido blando donde normalmente no existe hueso. La forma adquirida de OH se observa, más frecuentemente, con cualquier quemadura o quemadura grave, trauma músculoesqueletal, daño de la médula espinal o daño en el sistema nervioso central. Por ejemplo, los pacientes que hayan sufrido recientemente una artroplastia de cadera total o tengan paraplejia luego de daño en la médula espinal se encuentran en riesgo de OH.

[0103] El término osificación heterotópica (OH) describe la formación del hueso en un lugar anatómico anómalo, usualmente en tejido blando. La OH se puede clasificar en los siguientes 3 tipos: Miositis osificante progresiva (fibrodisplasia osificante progresiva). Este trastorno se encuentra entre las condiciones genéticas raras, con una incidencia de 1 caso por cada 2 millones de personas. La transmisión es dominante autosómico con una expresión variable. La condición se caracteriza por (a) inflamación recurrente y dolorosa de los tejidos blandos que conduce a la OH y (b) malformación congénita del dedo gordo del pie. Miositis osificante traumática. En esta condición, se desarrolla un área dolorosa en el músculo o tejido blando despúes de un único golpe en el área, un desgarro muscular, o la repetición de un trauma menor. Osificación heterotópica neurogénica. Esta condición es en la que se piensa cuando se utiliza la frase genérica de osificación heterotópica. Recientemente, durante estudios sobre fracturas se descubrió el papel esencial del plasminógeno en la prevención de la OH en los que se determinó que el plasminógeno es esencial para la curación de las fracturas. Umbral necesario de la actividad de la plasmina para prevenir la OH: a partir de estos estudios hemos determinado que un nivel circulante de plasminógeno >60 % es esencial para prevenir la formación de la OH después de una lesión del músculo esquelético.

[0105] Los pacientes con quemaduras que afectan >30 % de la superficie corporal experimentan una disminución del 50 % en los niveles de plasminógeno y un aumento en la incidencia de la formación de OH (Mignemi N et al. Plasminogen is Essential to Prevent Heterotypic Ossification Following Traumatic Muscle Injury. 2016 The FASEB Journal, 30(1) Supplement 83.3). Claramente, los pacientes con OH y particularmente los pacientes con quemaduras podrían beneficiarse de la terapia de suplementación con plasminógeno para evitar la formación de OH, aunque esto queda fuera del ámbito de las reivindicaciones.

[0107] Enfermedad de la membrana hialina en neonatos/Síndrome de enfermedad respiratoria neonatal (NRDS): la enfermedad de la membrana hialina (HMD), un término más antiguo y el sinónimo de síndrome de dificultad respiratoria infantil (IRDS) o Sindrome de dificultad respiratoria neonatal (NRDS), se refiere a la apariencia microscópica de membranas uniformes, homogéneas, y esoinofílicas que cubren los bronquiolos terminales y ductos alveolares de los neonatos. Las membranas hialinas se componen de células alveolares necróticas, transudado de plasma, células escamosas aspiradas y una cantidad importante de fibrina. Las células polimorfonucleares pueden infiltrar las membranas si una infección complica el NRDS. Aunque las membranas hialinas pueden encontrarse de forma tan precoz como a las 3-4 horas después del nacimiento en neonatos que luego fallecen por NRDS, usualmente se establecen satisfactoriamente a las 12-24 horas. Las membranas hialinas normalmente se organizan y se separan de la pared alveolar o bronquial subyacente a las 36-48 horas si la tensión alta de oxígeno y la presión del respirador artificial no son necesarias, y, en última instancia, se eliminan por los macrófagos alveolares, de lo contrario esta condición puede conducir la muerte del neonato.

[0108] En una examinación al microscopio, las vías respiratorias pequeñas que contienen las membranas hialinas se encuentran rodeadas por los acinos colapsados de los pulmones con deficiencia de surfactante. Por lo tanto, el RDS de los neonatos es una enfermedad pulmonar aguda que normalmente afecta a lactantes prematuros y que es causada por, principalmente, cantidades inadecuadas de surfactante. Una disminución de surfactante tiene como resultado una tensión de superficie insuficiente en el alvéolo durante la exhalación, lo que conduce a atelectasis, disminución en el intercambio gaseoso, hipoxia grave y acidosis.

[0110] El defecto básico que causa RDS en bebés pretérmino es la inmadurez de los pulmones, particularmente de los neumocitos tipo II. Desde el punto de vista cualitativo y cuantitativo, el surfactante fetal es menos eficaz que el surfactante adulto en la disminución de la tensión de superficie alveolar y en mantener abierto los alvéolos. Dado que los pulmones no se encuentran recubiertos adecuadamente con surfactante, se produce la fuga de plasma dentro de los espacios alveolares, con la creación posterior de capas de fibrina y células necróticas ("membranas hialinas") a través de la superficie de los ductos alveolares y bronquiolos respiratorios. El depósito de membranas hialinas a su vez impide adicionalmente el pasaje del oxígeno de los espacios alveolares a través de la superficie respiratoria en la vascularización pulmonar.

[0112] Se ha informado de que los neonatos a término tienen una actividad de plasminógeno de aproximadamente el 40 % o de la normal (adultos) y que los neonatos prematuros con un peso inferior a 2000 g tienen una actividad de plasminógeno de solo el 20 % en comparación con el mismo control. Por lo tanto, los neonatos prétermino y a término tienen niveles naturalmente bajos de plasminógeno, pero cuando se combina este hecho con la fisiopatología clínica del NRDS donde ocurre el depósito intenso de fibrina en los alvéolos conduce a la conclusión inmediata de que estos pacientes podrían beneficiare de la terapia de suplementación con plasminógeno, aunque esto queda fuera del ámbito de las reivindicaciones.

[0114] Coagulación intravascular diseminada (DIC): la coagulación intravascular diseminada (DIC) es un síndrome clinicopatológico en el que ocurre la coagulación intravascular generalizada como resultado de una exposición o producción de procoagulantes equilibrados de forma insuficiente mediante los mecanismos anticoagulantes naturales y fibrinólisis endógena. La perturbación del endotelio en la microcirculación junto con las células inflamatorias estimuladas y la liberación de mediadores inflamatorios juegan un papel importante en este mecanismo. La DIC puede causar isquemia de tejidos a partir de microtrombos oclusivos y sangrado a partir del consumo de plaquetas y factores de coagulación y, en algunos casos, una respuesta fibrinolítica excesiva.

[0115] Hay dos fenotipos de coagulación intravascular diseminada (DIC). Aunque la activación de la vía dependiente del factor tisular como la etapa inicial de la cascada de coagulación y la presente de sistemas de anticoagulación insuficientes son iguales, la DIC puede subdividirse en fenotipos fibrinolíticos (hemorrágicos) y antifibrinolítics (trombóticos). En la DIC con el fenotipo fibrinolítico, la DIC y el sistema de fibrinógenolisis o fibrinólisis pueden coexistir.

[0117] Los tratamientos de la DIC con el fenotipo fibrinolítico implican la reparación quirúrgica del traumatismo, mejora del shock, y la sustitución rápida y suficiente del concentrado de plaquetas, plasma congelado fresco, y factores de coagulación disminuidos. Se conoce que el nivel de la actividad de plaminógeno en plasma disminuye tanto como el 70 % (30 % de la actividad residual de lo normal) en la coagulación intravascular diseminada (Rutherford E.J. et al. Hematologic principles in surgery. In: Townsend C.M. et al., editors. Sabiston Textbook of Surgery 17th Ed. Philadelphia: Elsevier Saunders; 2004. pp.113-136; Lackner H. and Javid J.P.

[0119] Sepsis: la sepsis se define como la disfunción orgánica que potencialmente mortal causada por una respuesta desregulada del hospedador a una infección. Esta definición enfatiza la prioridad de la respuesta del hospedador no homoestática a la infección, la fatalidad potencial que es considerablemente mayor en una infección directa y la necesidad de reconocimiento urgente. Por lo tanto, la sepsis es una complicación potencialmente riesgosa para la vida de una infección y ocurre cuando los químicos liberados en el torrente sanguíneo para luchar contra la infección desencadenan respuestas inflamatorias en el cuerpo. Esta inflamación puede desencadenar una cascada de cambios que pueden dañar múltiples sistemas de órganos, lo que hace que fallen. La sepsis se define como grave cuando estos descubrimientos ocurren con relación a señales de disfunciones orgánicas, tales como hipoxemia, oliguria, acidosis láctica, enzimas hepáticas elevadas, y función cerebral alterada. Casi la totalidad de las víctimas de sepsis necesitan tratamiento en una unidad de cuidados intensivos durante varios días o semanas. Si la sepsis progresa a shock séptico, la presión arterial baja drásticamente, lo que puede provocar la muerte (Mervyn S. et al. The Third International Consensus Definitions for Sepsis and Septic Shock (Sepsis-3). 2016 JAMA, 315(8), pp. 801-810). El choque séptico y hemorrágico tienen un riesgo de mortalidad alto. La falla de microcirculación secundaria a las alteraciones de hemostasia y fibrinólisis juegan un papel importante en la patogénesis del choque. En ciertos casos, el plasminógeno fue significativamente menor en los fallecidos en el día 1 y el complejo plamsina-antiplasmina significativamente superior en el día 4 en comparación con los supervivientes. Se observó que el aumento consecutivo de plasminógeno durante el día 4 y el 7 fue significativamente más potente en los supervivientes. La fibrinólisis, medida por su mayor capacidad y capacidad de respuesta, es claramente predictiva y desempeña un papel significativo en la supervivencia, posiblemente debido a su función de eliminación en la microcirculación (Helling et al. Clinical Hemorheology and Microcirculation, 2010, 45(2-4), pp.295-300; Seitz R. et al. Reduced fibrinolytic capacity and its restoration by plasminogen substitution in acute renal failure. 1989 Int. J. Tissue React.11(1), pp.39-46). Por lo tanto, en la sepsis, el nivel de la actividad de plasminógeno se ve gravemente disminuida y los pacientes podrían beneficiarse de la terapia de suplementación con plasminógeno para aumentar su resultado clínico, aunque esto queda fuera del ámbito de las reivindicaciones.

[0121] Terapia trombolítica en adultos: en adultos, antes de o durante la terapia trombolítica con dosis altas de estreptocinasa, uroquinasa o activador tisular de plasminógeno hay una disminución del plasminógeno que puede finalizar la eficacia de los fármacos trombolíticos, ya que el plasminógeno es el sustrato de esos activadores. Dichas condiciones incluyen, entre otras, el accidente cerebrovascular. Por lo tanto, el uso de agentes trombolíticos siempre debería implicar la estrecha monitorización de los componentes del sistema plasminógeno-plasmina, especialmente durante los tratamientos trombolíticos a largo plazo. En estos casos clínicos, los pacientes pueden beneficiarse de la terapia de suplementación con plasminógeno, donde puede conducir a una disminución en el tiempo de lisis del coágulo y en una disminución potencial de la cantidad de activador necesario del plasminógeno, aunque esto queda fuera del ámbito de las reivindicaciones.

[0123] Lesión pulmonar aguada (ALI)/Síndrome de dificultad respiratoria (aguda) en adultos (ARDS): la lesión pulmonar aguda (ALI) se define como una rnfermedad pulmonar aguda con filtraciones pulmonares bilaterales en una radiografía de tórax que consiste en la presencia de un edema y sin evidencia clínica de hipertensión atrial izquierda y una presión pulmonar enclavada de 2399,8 Pa (18 mmHg) o menos. Además, la relación de oxígeno arterial y la fracción de oxígeno inhalado (PaO2/FiO2) debe ser 39996,7 Pa (300 mmHg) o menos, sin importar el nivel de presión espiratoria positiva final (PEEP). El síndrome de dificultad respiratoria aguda (ARDS) en adultos, la forma más grave de ALI, y se define por una relación entre el oxígeno arterial y la fracción inspirada de oxígeno de 26664,5 Pa (200 mmHg) o menos. Aunque el término ARDS se utiliza frecuentemente de forma intercambiable con ALI, en criterios estrictos, el ARDS debe reservarse para la forma más grave de la enfermedad. Se observó que la patofisiología de NRDS y ARDS son diferentes pero la presencia de fibrina en los alvéolos es un descubrimiento histológico común, por lo tanto, el sistema fibrinolítico se ve afectado de alguna forma y, a diferencia del NRDS, la vía en el ARDS no se elucidó totalmente hasta la fecha.

[0125] El síndrome de dificultad respiratoria aguda (ARDS) tiene una mortalidad alta. A partir de un estudio llevado a cabo para investigar el proteoma del fluido del lavado bronquioalveolar (BALF, por sus siglas en inglés) e identificar las proteínas que diferencian supervivientes de no supervivientes de ARDS. En la etapa inicial del ARDS, las proteínas más abundantes en los supervivientes se mapearon en ontologías que indican una respuesta compensatoria coordinada al daño y el estrés. Estas incluyeron coagulación y fibrinólisis; activación del sistema inmunitario; y homeostasis de catión y hierro. Se determinó que las proteínas de fase temprana que diferencian a los supervivientes de los fallecidos son biomarcadores candidatos para predecir la supervivencia en el ARDS y se informó de la evaluación del plasminógeno (Bhargava M. and Becker T.L. Proteomic Profiles in Acute Respiratory Distress Síndrome Differentiates Survivors from Non-Survivors, PLoS ONE 9(10): e109713. http://dx.doi:10.1371/journal.pone.0109713). En este estudio, los pacientes supervivientes de ARDS tienen aproximadamente el doble en los niveles de plasminógeno que los fallecidos por ARDS. El sistema de homeostasis juega un papel importante en el ARDS, y la terapia de suplementación con plasminógeno podría ser beneficiosa para los pacientes con ARDS/ALI al aumentar su nivel de plasminógeno y aumentar su probabilidad de supervivencia, aunque esto queda fuera del ámbito de las reivindicaciones.

[0127] Diabetes (Tipo: 1, 1,5, 2 y 3): los pacientes con diabetes que tienen un riesgo mayor de sufrir eventos aterotrombóticos con prognosis de corto y largo plazo después del infarto de miocardio en comparación con la población no diabética. La formación de un coágulo de fibrina rico en placas obstructivo en una arteria coronaria representa la etapa final en el proceso aterotrombótico, lo que tiene como resultado el infarto del miocardio. La diabetes se asocia con un estado hipofibrinolítico, que representa un mecanismo de riesgo cardiovascular mayor en esta población. Se ven implicados una cantidad de factores en la lisis de coágulos de fibrina afectada en la diabetes, que incluye una estructura alterada de la red de fibrina, un aumento en la incorporación de proteínas antifibrinolíticas y la inhibición del proceso fibrinolítico. La diabetes también se asocia con la incorporación del inhibidor de plasminógeno y el complemento C3 dentro del coágulo, donde ambas proteínas muestran actividades antifibrinolíticas. Además, las concentraciones de plasma del inhibidor 1 del activador de plasminógeno son elevadas en diabetes y estados de resistencia a la insulina, lo que comprende el proceso fibrinolítico a través de la limitación de la generación de plasmina. Todos estos cambios promueven la inhibición de lisis de coágulos y contribuyen potencialmente al desarrollo y gravedad de la enfermedad cardiovascular isquémica en individuos con diabetes.

[0129] La enfermedad arterial periférica (PAD) es una condición caracterizada por la enfermedad aterosclerótica oclusiva de las extremidades inferiores. Mientras que el PAD es un factor de riesgo mayor para la amputación de las extremidades inferiores, también se ve acompañada por una alta posibilidad de enfermedad sintomática cardiovascular y cerebrovascular. Aunque se tienen conocimientos amplios sobre la PAD en la población general, la evaluación y gestión de la PAD en aquellas personas con diabetes es menos clara y supone algunos problemas especiales.

[0131] La enfermedad arterial periférica (PAD) es más común en pacientes con diabetes y aproximadamente la mitad de los pacientes con una úlcera diabética en el pie tienen PAD coexistente. La enfermedad aterosclerótica arterial oclusiva por debajo del nivel del ligamento inguinal da lugar a una reducción del flujo sanguíneo hacia la extremidad inferior. La enfermedad arterial periférica en la diabetes es una condición predominantemente de la vascularización infra-inguinal y es diferente de la de los pacientes sin diabetes en sus características, tratamiento y resultados. La identificación de PAD entre los pacientes con ulceración en el pie es importante porque su presencia se asocia con resultados peores, tales como curación más lenta (o inexistente) de las úlceras en el pie, amputaciones de extremidades inferiores, eventos cardiovasculares posteriores y mortalidad prematura. El diagnóstico de PAD es desafiante en pacientes con diabetes, ya que frecuentemente no presentan síntomas típicos, tal como la claudicación o dolor de descanso, incluso en presencia de grave pérdida de tejido. La calcificación arterial, infección del pie edema y neuropatía periférica, cada una de las cuales se encuentra frecuentemente con ulceración diabética del pie, y pueden afectar, de forma perjudicial, el rendimiento de evaluaciones de diagnóstico para PAD (http://www.iwgdf.org/files/2015/website_pad.pdf).

[0132] Se ha investigado la actividad de plasminógeno en pacientes diabéticos y se ha encontrado que la diabetes estaba asociada con una lisis de la red de fibrina plasmática deteriorada, que se ha normalizado parcialmente al mejorar la glucemia. Se concluyó que la glicación del plasminógeno en la diabetes afecta directamente a la fibrinólisis mediante la disminución de la generación de plasmina y la reducción de la actividad específica de la proteína(Ramzi A. and Gamlen T. Diabetes is associated with posttranslational modifications in plasminogen resulting in reduced plasmin generation and enzyme-specific activity.2013 Blood (122) pp.134-142). La terapia de suplementación con plasminógeno podría utilizarse para reabsorber el estado hipofibrinolítico de aquellos pacientes diabéticos y conducir a mejoras en sus pronósticos clínicos generales, aunque esto queda fuera del ámbito de las reivindicaciones.

[0134] Enfermedad hepática (insuficiencia hepática fulminante/hepática) y síndrome de Budd-Chiari: las anomalías de la coagulación sanguínea y la fibrinólisis son una parte importante de la insuficiencia hepática fulminante. En un estudio publicado, se determinó el sistema fibrinolítico en 42 pacientes con esta condición (Pernambuco J.R. et al. Activation of the fibrinolytic system in patients with fulminant liver failure.1993 Hepatology 18(6), pp.1350-1356). Los niveles de admisión de actividad de plasminógeno en plasma fueron bajos (9,1 % de normal). Se encontró que la actividad del activador de plasminógeno tisular estaba en niveles normales, mientras que el nivel de su inhibidor rápido, el inhibidor 1 del activador de plasminógeno, sufrió un amplio aumento en comparación con el de los controles, lo que indica un cambio hacia la inhibición de fibrinólisis en estos pacientes. Los niveles de plasma altos de D-dímeros, un fragmento de fibrina reticulado, también se encontraron en correlación con el nivel aumentado del complejo trombina-antitrombina. Se concluyó que hay anomalías importantes del sistema fibrinolítico en la insuficiencia hepática fulminante, pero dado que la actividad inhibitoria parece estar presente en cantidades adecuadas, esto limita la incidencia del sangrado debido a la fibrinólisis.

[0135] El síndrome de Budd-Chiari es una condición de enfermedad hepática causada por la oclusión de las venas hepáticas que drenan el hígado. Se presenta con la tríada clásica de dolor abdominal, ascitis y agrandamiento del hígado. La formación de un coágulo de sangre dentro de las ventas hepáticas puede conducir al síndrome de Budd-Chiari. El síndrome puede ser fulminante, agudo, crónico o asintomático.

[0137] La trombosis es el principal factor de riesgo de muerte en pacientes con hemoglobinuria paroxismal nocturna y casos anteriores indican que la trombosis venosa (por ejemplo: hígado) en pacientes con hemoglobinuria paroxismal nocturna es susceptible de trombólisis.

[0139] Se seleccionaron pacientes para el tratamiento del Síndrome de Budd-Chiari, se administró tPA como una infusión intravenosa y plasma congelado fresco (FFP) cuando un nivel bajo de plasminógeno limitaba la actividad fibrinolítica estimulada por el tPA (Araten D.J. et al. 2012 Thrombolytic therapy is effective in paroxysmal nocturnal hemoglobinuria. Haematologica 97(3), pp.344-352). Se recomienda monitorear de cerca el nivel de la actividad de plasminógeno. El FFP tiene ciertas limitaciones, una de las cuales es la cantidad limitada de plasminógeno/ml de FFP y la introducción de varias otras proteínas que pueden no ser necesarias e incluso perjudiciales para el tratamiento. Por lo tanto, los pacientes con Budd-Chiari y los pacientes con enfermedad hepática podrían beneficiarse de la terapia de suplementación con plasminógeno, aunque esto queda fuera del ámbito de las reivindicaciones.

[0141] Anemia hemolítica microangiopática (MAHA): Síndrome hemolítico urémico atípico (aHUS): el síndrome hemolítico urémico atípico (aHUS) es una microangiopatía trombótica provocada por la activación descontrolada de la vía alternativa del complemento a nivel de la superficie celular que produce anemia hemolítica, trombocitopenia, e insuficiencia renal aguda. En aproximadamente la mitad de los pacientes afectados, se identificaron las variantes patogénicas de pérdida de función en los reguladores del complemento o variantes de ganancia de función en los efectores del complemento, lo que implica claramente el complemento en aHUS. Sin embargo, existen líneas fuertes de evidencia que respalda la presencia de contribuciones genéticas adicionales a esta enfermedad. Se está intentando identificar los genes nuevos asociados con aHUS, al completar un cribado eshaustivo de las vías del complemento y la coagulación en 36 pacientes con aHUS esporádico al utilizar el enriquecimiento genómico dirigido y secuenciamiento masivo en paralelo. Se identificaron también varios genes en la vía de coagulación como importantes en la patogénesis de aHUS. El plasminógeno en particular contuvo más variantes patogénicas que cualquier otro gen de coagulación, inclusive tres mutaciones de deficiencia de plasminógeno tipo 1 y una variante patogénica predicha. Bu F.et al.(Bu et al. Comprehensive genetic analysis of complement and coagulation genes in atypical hemolytic uremic syndrome.2014 J. Am. Soc. Nephrol.; 25(1), pp.55-64) postularon que, entre las posibilidades farmacológicas, la etapa 1 o el iniciador por desencadenamiento del inicio de aHUS puede estar en niveles bajos de plasminógeno debido a las diversas variantes identificadas en su estudio. Por lo tanto, la terapia de suplementación con plasminógeno podría ser beneficiosa en esta población de pacientes, aunque esto queda fuera del ámbito de las reivindicaciones.

[0142] Terapia de suplementación con plasminógeno: los sujetos que padecen deficiencia de plasminógeno tipo I pueden beneficiarse del régimen de suplementación de la presente divulgación. Según la invención donde el sujeto tiene deficiencia de plasminógeno tipo I, la actividad reducida del plasminógeno de un sujeto con deficiencia de plasminógeno puede ser del 70 % o menos, del 60 % o menos, del 50 % o menos, del 40 % o menos, del 35 % o menos, o del 30 % de la actividad normal de plasminógeno o menos. Algunos sujetos tienen un nivel muy bajo de la actividad plasmática de plasminógeno, que puede ser inferior al 5 % de la actividad normal de plasminógeno. En estos casos, la situación puede volverse potencialmente mortal y la necesidad de la suplementación con plasminógeno puede ser urgente. En estos casos, se puede tolerar un nivel alto de picos y/o se puede diseñar una suplementación con una alta frecuencia de administración para así acumular plasminógeno en el plasma hasta el nivel deseado lo más rápidamente posible, aunque esto queda fuera del ámbito de las reivindicaciones.

[0144] Según una realización de la invención, el sujeto con deficiencia de plasminógeno padece conjuntivitis leñosa. La conjuntivitis leñosa se caracteriza por una fibrinólisis extracelular marcadamente alterada que conduce a la formación de pseudomembranas leñosas (madrosas) en las superficies mucosas, incluyendo el ojo, la boca, los senos paranasales, la piel, el árbol traqueobronquial, el tracto gastrointestinal, el árbol broncopulmonar, y el tracto genitourinario. La deficiencia de plasminógeno también puede afectar a la orofaringe, los órganos respiratorios, los órganos genitourinarios, y la piel (milium coloide juvenil). Las pseudomembranas leñosas (madrosas) en las superficies mucosas también se denominan en este documento como una lesión o una 'lesión relacionada con la deficiencia de plasminógeno'. La deficiencia de plasminógeno también se asocia con la hidrocefalia obstructiva congénita.

[0146] Aunque en parte va más allá del alcance de las reivindicaciones, en términos más genéricos, según la presente divulgación cualquier condición definida por deficiencia de plasminógeno puede tratarse con suplementación con plasminógeno, lo que resulta en una mayor actividad de plasminógeno. La mayor actividad de plasminógeno se mantiene mediante la administración repetida de dosis efectivas de plasminógeno, y más en particular, de Glu-plasminógeno. Normalmente, el plasminógeno se administra por vía intravenosa. Las dosis repetidas pueden administrarse más de una vez al día, diariamente, cada dos días, cada tres días, dos veces a la semana, cada cuatro días, cada cinco días o semanalmente. Puede ser conveniente optar por una alta frecuencia de administración durante el período de acumulación para alcanzar rápidamente el nivel deseado y, a continuación, reducir la frecuencia de administración a la tasa deseada. La frecuencia de administración puede disminuirse después de un cierto período si se consiguen algunos beneficios clínicos.

[0148] La frecuencia de administración puede disminuirse después de un cierto período si no se consiguen algunos beneficios clínicos. La frecuencia de administración puede permanecer igual durante todo período de suplementación total, es decir, el período de acumulación y el estado estacionario.

[0150] Por ejemplo, el plasminógeno podría administrarse diariamente en una dosis de al menos 0,5 mg/kg, de al menos 1 mg/kg, de al menos 1,5 mg/kg, o de al menos 2 mg/kg de la masa del sujeto con deficiencia de plasminógeno. En una alternativa, el plasminógeno podría administrarse cada dos días en una dosis de al menos 1,5 mg/kg, de al menos 2 mg/kg, de al menos 2,5 mg/kg, de al menos 3 mg/kg, de al menos 4 mg/kg, de al menos 5 mg/kg o de al menos 6 mg/kg de la masa del sujeto con deficiencia de plasminógeno. En una alternativa adicional el plasminógeno se podría administrar dos veces a la semana en una dosis de al menos 6 mg/kg, 7 mg/kg, 8 mg/kg, 9 mg/kg, o 10 mg/kg de la masa del sujeto con deficiencia de plasminógeno. En otra alternativa adicional, el plasminógeno se podría administrar semanalmente en una dosis de al menos 45 mg/kg de la masa del sujeto con deficiencia de plasminógeno. Fuera del ámbito de las reivindicaciones, el plasminógeno se administra en una dosis de 1,5 mg/kg a 12 mg/kg y con una frecuencia desde una vez al día hasta una vez a la semana.

[0152] La presente invención se refiere al uso de Glu-plasminógeno humano, que se sabe que tiene una vida media de aproximadamente 2,2 días en sujetos normales sin deficiencia de plasminógeno. La composición de Gluplasminógeno comprende preferiblemente un Glu-plasminógeno altamente purificado que tiene una pureza superior a aproximadamente al 70 %, superior a aproximadamente al 80 %, superior a aproximadamente al 90 % o superior a aproximadamente al 95 %. El plasminógeno puede producirse de forma recombinante o prepararse mediante purificación a partir del plasma. El plasminógeno utilizado en los estudios descritos es este documento se preparó por el método descrito en la publicación PCT del documento WO 2006/120423.

[0154] En términos más genéricos, el plasminógeno que se utilizará para tratar las deficiencias de plasminógeno, como se indica en la presente divulgación, no está radiomarcado y se encuentra en una composición farmacéutica que está libre o sustancialmente libre de una proteína adicional, en particular libre, o sustancialmente libre de albúmina, aprotinina, un inhibidor de tripsina, un inhibidor de serina proteasa, o plasmina. El plasminógeno también debería estar incluido en una composición farmacéutica que esté libre o prácticamente libre de un surfactante, por ejemplo, una concentración de surfactante inferior a 0,01 mM.

[0156] Preferiblemente el plasminógeno debería estar comprendido en una composición farmacéutica que tenga una pureza del 70 % o más, del 80 % o más, del 85 % o más, del 90 % o más, del 95 % o más, y del 98 % o más. También debería estar incluido en una composición farmacéutica donde la cantidad total de proteína distinta del plasminógeno sea inferior al 30 %, inferior al 20 %, inferior al 15 %, inferior al 10 %, inferior al 5 %, o inferior al 2 %.

[0157] El 'período de suplementación' puede variar, y normalmente lo establece un profesional: podría ser de al menos 48, 72, 96, 120 o 144 horas, y puede detenerse cuando se obtienen los beneficios clínicos deseados. Se podrá iniciar otro período de suplementación cuando se necesiten mayores beneficios clínicos. En algunos casos, el período de suplementación puede durar toda la vida.

[0158] En la presente divulgación, la actividad de plasminógeno se informa como medida o de manera ajustada al valor basal. La actividad de plasminógeno ajustada al valor basal es el valor de la actividad de plasminógeno medida menos el valor de la actividad de plasminógeno antes de que haya comenzado la suplementación con plasminógeno. La actividad de plasminógeno antes de que comience la suplementación con plasminógeno puede designarse como la actividad basal del plasminógeno, la actividad de plasminógeno en el día 0, o antes de la administración de una primera dosis de plasminógeno. Por lo tanto, la actividad de plasminógeno ajustada al valor basal muestra solo el aumento de la actividad de plasminógeno resultante de la administración de Gluplasminógeno.

[0159] La cantidad de plasminógeno se puede calcular al medir el antígeno del plasminógeno mediante ELISA, nefelometría, o inmunodifusión radial.

[0160] La eficacia de la actividad de plasminógeno generada por la suplementación con plasminógeno de la presente divulgación puede demostrarse mediante observaciones clínicas, como se mencionó anteriormente, y también por el nivel de D-dímeros. Los D-dímeros son fragmentos de degradación de la fibrina resultantes de la actividad de plasminógeno que degrada la fibrina. Un nivel elevado de D-dímero es representativo de i) la presencia de lesiones y ii) la eficacia fibrinolítica del plasminógeno administrado.

[0161] La actividad de plasminógeno se puede medir en una muestra de un sujeto para determinar si dicho sujeto es deficiente en plasminógeno, y si el sujeto es deficiente en plasminógeno, realizar el método de suplementación con plasminógeno o tratar la deficiencia de plasminógeno descrita en este documento en dicho sujeto.

[0162] Ejemplos: Los siguientes ejemplos ilustran además la práctica de esta divulgación pero no pretenden limitar el alcance de las reivindicaciones.

[0163] Ejemplo 1: Formulación de Glu-Plasminógeno

[0164] El Glu-Plasminógeno es altamente purificado (>95 % de pureza) a partir de plasma humano combinado que proviene de centros de recogida de plasma de EE. UU. autorizados por la FDA/EMA. El monómero de plasminógeno está presente en una proporción superior al 95 %. El Glu-plasminógeno se preparó como se describió anteriormente en la publicación PCT del documento WO 2006/120423. El plasminógeno humano se comprende de aproximadamente 75 miligramos por vial de plasminógeno liofilizado. Antes de la infusión, el polvo liofilizado en un vial se reconstituye con 12,5 mL de agua para inyección intravenosa. La composición final contiene citrato de sodio, cloruro de sodio, glicina y sacarosa para proporcionar una estabilidad proteica, fuerza iónica y pH aceptables.

[0165] Ejemplo 2a: Dosis única (2 mg/kg) de Glu-plasminógeno en sujetos humanos con deficiencia de Pg y PK El estudio descrito en este documento es el primer estudio de Glu-plasminógeno humano en pacientes humanos deficientes en plasminógeno tipo I. El estudio es un estudio en fase 1, no aleatorizado, abierto, de dosis única en pacientes diagnosticados con hipoplasminogenemia. Tres adultos humanos y dos adolescentes han recibido una dosis única de 2 mg/kg de Glu-Plasminógeno por infusión intravenosa (IV). El tiempo de infusión fue de 10 minutos.

[0166] Se midieron la actividad de plasminógeno y los niveles de antígeno para así elaborar el perfil PK del plasminógeno. Estas muestras de sangre se analizaron en los siguientes momentos: Selección (visita 1, día -19); Valor basal inmediatamente antes de la dosificación (visita 2, día 0); a los 5-15 minutos, 1 hora, 6 horas (día 1), 24 horas (visita 3, día 2), 48 horas (visita 4, día 3), 72 horas (visita 5, día 4), 96 horas (visita 6, día 5), 120 horas (visita 7, día 6), 168 horas (visita 8, día 8), y 216 horas (visita 9, día 10) después de finalizar la infusión. Los sujetos regresaron 30 días después de la dosificación en la visita 11 (Día 31, visita de seguimiento de seguridad) para la recogida de eventos adversos, pruebas de inmunogenicidad, pruebas y procedimientos de seguridad de rutina, y pruebas finales de seguridad viral. No se ha informado de ningún evento adverso. Los niveles de antígeno del plasminógeno y los niveles de la actividad de plasminógeno para todos los sujetos, medidos en la selección (día -19) y antes de la infusión (día 0) y reportados en la Tabla 1. El nivel de la actividad de plasminógeno medido antes de la infusión se utiliza para determinar la valor basal del perfil farmacocinético.

[0167] La actividad de plasminógeno se calculó como el porcentaje de la actividad en relación con el nivel de la actividad de plasminógeno del plasma combinado de sujetos sanos. El antígeno del plasminógeno se midió mediante un ensayo ELISA utilizando el kit ELISA de ensayo de antígeno total de plasminógeno humano de Cell Sciences<®>. Puede observarse que puede haber una variación del nivel de la actividad endógena de plasminógeno dentro de un sujeto donde algunos sujetos permanecen relativamente estables, como se evidenció mediante las variaciones de la actividad de plasminógeno observadas en el día -19 y el día 0 en el mismo sujeto (Tabla 1)

[0170]

[0172] Después de la infusión de plasminógeno, los niveles de la actividad de plasminógeno de cada sujeto se ajustaron con su propio valor basal (día 0) restando el valor basal para así obtener el nivel de la actividad de plasminógeno ajustado al valor basal. Dichos niveles de la actividad de plasminógeno ajustados al valor basal para cada sujeto (línea delgada) durante 48 horas se muestran en la Figura 5, junto con el valor medio (círculo abierto) para cada punto temporal y la curva farmacocinética prevista calculada con la aplicación Phoenix<®>WinNonlin (versión 6.4) de Pharsight Corporation. La aplicación Phoenix<®>WinNonlin utiliza los valores medios de los sujetos analizados y los parámetros del estudio y genera una o más ecuaciones y las curvas correspondientes para predecir la PK de un compuesto. Se seleccionó el modelo PK que corresponde perfectamente con los valores medios y se muestra en la Figura 5 (línea gruesa). Los valores medios observados confirman que la administración de 2 mg/kg de Glu-plasminógeno tuvieron como resultado un nivel medio de la actividad de plasminógeno que aumenta (con respecto al valor basal) en al menos el 10 % de la actividad normal de plasminógeno durante 48 horas.

[0173] Ejemplo 2b: Dosis única (2 mg/kg) de Glu-plasminógeno en sujetos humanos con deficiencia de Pg y eficacia Entre el estudio de fase 1 descrito en el Ejemplo 2a, el sujeto 2 tenía una conjuntivitis leñosa en el párpado del ojo derecho. Las fotografías de la lesión en el día 0 (antes de la infusión) y en el día 1 se muestran en las Figuras 7A y 7B, respectivamente. Se observó que la protuberancia provocada por la conjuntivitis leñosa fue reabsorbida 24 horas luego de la infusión de plasminógeno. Aunque un caso de regresión de la conjuntivitis leñosa no es estadísticamente significativo, esta observación es, no obstante, alentadora y proporciona evidencia del efecto clínico de la presente terapia de suplementación con Glu-plasminógeno.

[0174] El nivel de la actividad de plasminógeno ajustado al valor basal del sujeto 2 se muestra en la Figura 7C de 5-15 minutos posteriores a la dosis de plasminógeno hasta el día 2. Se puede observar que la dosis IV de 2 mg/kg consiguió aumentar la actividad de plasminógeno por encima de su nivel inicial durante al menos 2 días. Basándose en la Figura 5, puede concluirse que la administración de una dosis de aproximadamente 2 mg/kg de masa del sujeto con deficiencia de plasminógeno por día o cada dos días es suficiente para aumentar el nivel de la actividad de plasminógeno del sujeto en aproximadamente el 10 % de la actividad normal de plasminógeno, y, por lo tanto, también sería suficiente aumentarlo en un 5 % o un 1 % de la actividad normal de plasminógeno.

[0175] Ejemplo 3: Modelización de dosis repetidas basada en los resultados de dosis única del Ejemplo 2.

[0176] Basándose en la ecuación determinada con la aplicación Phoenix<®>WinNonlin (ver Ejemplo 2a), es posible predecir la curva de eliminación del Glu-plasminógeno (o el perfil PK) en un sujeto con deficiencia de plasminógeno a cualquier dosis. Las curvas previstas para la administración de una dosis única de 2, 6 y 12 mg/kg durante un período de 96 horas se muestran en la Figura 6.

[0177] Basándose en esta ecuación, se han realizado predicciones para dosis repetidas con diferentes frecuencias de administración: todos los días, cada dos días, dos veces a la semana y una vez a la semana. Se han evaluado diversas combinaciones de dosis y frecuencias utilizando esta ecuación. Las figuras 8A y 8B representan la actividad de plasminógeno ajustada al valor basal para una administración diaria de dosis de 2 mg/kg y 0,5 mg/kg, respectivamente. Las figuras 9A y 9B representan la actividad de plasminógeno ajustada al valor basal para una administración cada dos días de dosis de 2 mg/kg y 1,5 mg/kg, respectivamente. Las figuras 10A, 10B y 10C representan la actividad de plasminógeno ajustada al valor basal para una administración dos veces a la semana de dosis de 2 mg/kg, 6 mg/kg y 12 mg/kg. Las figuras 11A y 11B representan la actividad de plasminógeno ajustada al valor basal para una administración semanal de dosis de 12 mg/kg y 45 mg/kg, respectivamente. En la Tabla 2 se informa el nivel de la actividad de plasminógeno correspondiente al nivel de mínimos y picos durante el estado estacionario para cada una de estas frecuencias de administración y dosis. Tabla 2

[0179] 0

[0181] 1

[0184]

[0186] Con estas predicciones, ha sido posible determinar la dosis mínima necesaria para aumentar el nivel de la actividad de plasminógeno (nivel mínimo en estado estacionario) en al menos un 1 % o en al menos un 10 % de la actividad normal de plasminógeno por encima del valor basal. Los valores basales representan la actividad de plasminógeno del sujeto antes del tratamiento. La Tabla 2 es útil para determinar las combinaciones de dosis y frecuencia que dan como resultado un aumento de al menos el 1 % de la actividad normal de plasminógeno y un aumento de al menos el 10 % de la actividad normal de plasminógeno. Se descubrió que la dosis mínima necesaria para aumentar el nivel mínimo de la actividad de plasminógeno en un mínimo de al menos el 10 % de la actividad normal de plasminógeno es aproximadamente 0,5 mg/kg en una administración de diaria, aproximadamente 1,5 mg/kg en la administración cada dos días, aproximadamente 2,0 mg/kg en la administración cada dos días, aproximadamente 6 mg/kg en una administración dos veces a la semana, y aproximadamente 45 mg/kg en una administración semanal. Se descubrió que la dosis mínima necesaria para aumentar el nivel mínimo de la actividad de plasminógeno en un mínimo de al menos el 1 % de la actividad normal de plasminógeno es aproximadamente 2 mg/kg en una administración de dos veces a la semana y aproximadamente 12 mg/kg en una administración semanal. Obviamente, pueden evaluarse otras combinaciones de dosis y frecuencias en esta ecuación, pero las combinaciones mostradas en la Tabla 2 proporcionan un buen entendimiento del área de combinaciones que aumentan el nivel mínimo de la actividad de plasminógeno en un mínimo de al menos el 1 %, el 5 % o el 10 %.

[0187] La Tabla 2 también proporciona información sobre el nivel máximo de actividad de plasminógeno que se puede alcanzar en el plasma del sujeto (nivel máximo en estado estacionario) como resultado de cada combinación de dosis y frecuencia. El objetivo de la administración repetida es encontrar las mejores combinaciones de dosis y frecuencia que permiten mantener la actividad de plasminógeno sobre el nivel deseado (1 %, 5 % o 10 % sobre el nivel inicial), evitar alcanzar valores pico altos no deseados, y obtener una frecuencia de administración que sea conveniente para el cumplimiento del sujeto. En el presente caso, el nivel pico alto no deseado no se alcanzó todavía en estudios clínicos, ya que no se observaron efectos secundarios en la combinación de dosis y frecuencia evaluada.

[0188] Ejemplo 4: Dosis repetidas de Glu-plasminógeno en un bebé humano con deficiencia de Pg

[0189] Un varón de descendencia turca fue diagnosticado a las 4 semanas de edad con hipoplasminogenemia congénita después de presentar conjuntivitis leñosa típica. El nivel de la actividad de plasminógeno sérico fue inferior al 2 %, y el diagnóstico se confirmó mediante pruebas genéticas que mostraron una nueva mutación homocigótica en el sitio de empalme en PLG (1587+1 G>A).

[0190] A los 2 meses de edad, el sujeto sufrió una infección grave por el virus sincitial respiratorio (RSV) que requirió soporte ventilatorio durante 5 días y 1 mes de hospitalización. A partir de ese momento, el sujeto presentó problemas respiratorios recurrentes. A partir de los 4 meses de edad, el sujeto fue tratado con 20 mL/kg/semana de plasma fresco congelado (FFP). A los 18 meses de edad, se descubrió que el sujeto presentaba lesiones exofíticas dentro de ambos bronquios principales, derecho e izquierdo. El sujeto presentó un incidente de disnea aguda grave con cianosis que respondió a la insuflación de oxígeno no invasiva. Posteriormente, el sujeto fue sometido a broncoscopias repetidas con eliminación láser de las lesiones bronquiales con cobertura de FFP. A los 20 meses de edad, durante la preparación para la broncoscopia, el sujeto tuvo un episodio de cianosis aguda y paro cardíaco con asístole y fue reanimado después de 30 minutos. La radiografía de tórax mostró atelectasia del pulmón izquierdo y del lóbulo inferior derecho (ver la figura 12). El paciente ingresó en la UCI y requirió tanto soporte ventilatorio como circulatorio. La broncoscopia ha mostrado secreciones viscosas (ver la figura 13A) y lesiones obstructivas en la tráquea (ver la figura 13B). Se aspiraron abundantes secreciones pulmonares viscosas. Seis días después del evento de paro cardíaco, al sujeto se le administró una primera dosis de Glu-plasminógeno de 4 mg/kg, una segunda dosis de 6 mg/kg, y dosis subsiguientes de 6,5 mg/kg; cada dosis se administra cada 48 horas. Las mediciones de la actividad de plasminógeno, expresadas en %, durante las primeras 144 horas se muestran en la figura 14. Se puede observar que la actividad basal del plasminógeno del sujeto antes de la primera dosis de Glu-plasminógeno era del 21 %, lo que muy probablemente se deba a la terapia previa con FFP. Tras la suplementación con Glu-plasminógeno, se observó una disolución progresiva de las membranas y las lesiones exofíticas con algunas manchas de sangre, y se asoció con una disminución de las necesidades de oxígeno. También se observó mejoría en las lesiones oculares leñosas. Tras 4 días de tratamiento con Glu-plasminógeno, se extubó al sujeto, pero requirió reintubación 36 horas después debido al agotamiento. Una semana después de recibir la primera dosis de Gluplasminógeno, se extubó al sujeto de nuevo y, por lo tanto, el sujeto pudo respirar normalmente. El repuesto de plasminógeno ha continuado con un régimen de 6,5 mg/kg cada dos días. Se observó una disolución progresiva de las membranas con gran reducción de las lesiones después de 6 semanas de tratamiento con Glu-plasminógeno. la suplementación con Glu-plasminógeno en este paciente gravemente afectado fue muy eficaz. Todos los síntomas causados por su condición de deficiencia de plasminógeno fueron tanto disipados como reducidos significativamente. No se observaron efectos secundarios significativos. La eficacia de la suplementación con Glu-plasminógeno en el sujeto fue demostrada por los beneficios clínicos observados.

[0191] Para demostrar que el Glu-plasminógeno suplementado ha degradado eficazmente la fibrina, y por lo tanto, está tratando activamente las condiciones relacionadas con la deficiencia de plasminógeno, se ha medido el contenido de D-dímeros. La figura 15 superpone el perfil de D-dímeros y el perfil de la actividad de plasminógeno durante las primeras 144 horas de la suplementación con plasminógeno en dicho sujeto. La figura 15 muestra que los picos de D-dímeros se corroboran con los picos de la actividad de plasminógeno. Esto confirma que la suplementación con Glu-plasminógeno estaba activo en el sujeto.

[0193] Ejemplo 5: Dosis única (6 mg/kg) de Glu-plasminógeno en sujetos humanos con deficiencia de Pg y PK

[0194] El estudio de fase I descrito en el Ejemplo 2a se llevó a cabo con la administración IV de una dosis única de 6 mg/kg de Glu-plasminógeno en el cohorte n.º 2 que contiene siete sujetos humanos, que varían de los 14 a los 38 años de edad. Sus puntos de referencia de la actividad de plasminógeno se muestran en la Tabla 3.

[0197]

[0200] Los niveles de la actividad de plasminógeno ajustados al valor basal a para cada sujeto (línea fina) durante 120 horas se muestran en la figura 16 junto con el valor promedio (círculo abierto) para cada punto temporal y la curva promedio resultante (línea gruesa). Los valores medios observados que la administración de 6 mg/kg de Glu-plasminógeno tuvieron como resultado en un nivel de la actividad de plasminógeno promedio que aumenta (con respecto a la referencia) en al menos el 10 % de la actividad normal de plasminógeno durante 96 horas. La curva resultante de los valores promedios sigue el patrón de la ecuación matemática establecida por la ecuación matemática determinada con la aplicación Phoenix<®>WinNonlin (Ejemplo 2a) y confirma que dicha ecuación representa adecuadamente el perfil de PK del Glu-plasminógeno en el ser humano con deficiencia de plasminógeno.

[0202] La vida media terminal individual se determinó y varía de 14,5 horas a 53,3 horas en el cohorte 1 (2 mg/kg) y de 17,2 horas a 50,0 horas en el cohorte 2 (6 mg/kg). Aunque se observó una gran variabilidad entre sujetos, no existió indicación de cinéticas no lineales. Los datos no mostrados para todos los sujetos. La ida media terminal promedio fue relativamente constante a partir de la dosis 2 mg/kg (35,6 ± 17,6 horas) hasta la dosis de 6 mg/kg (35,7 ± 12,3 horas).

[0204] Ejemplo 6: Dosis repetidas (6 mg/kg) de Glu-plasminógeno en sujetos humanos con deficiencia de Pg y PK

[0205] En un estudio esencial de fase 2/3, se administraron dosis repetidas de 6 mg/kg de Glu-plasminógeno en un cohorte de nueve sujetos humanos con deficiencia de plasminógeno en la frecuencia de i) cada dos días o cada dos día (qod), o ii) cada tres días (q3d). Los puntos de referencia de su actividad de plasminógeno se muestran en la Tabla 4.

[0206] Tabla 4

[0209]

[0211] Cada una semana o dos, se monitoreó la actividad de plasminógeno antes de la administración de la dosis posterior y dicha actividad de plasminógeno antes de la infusión de dosis representa el nivel mínimo del perfil de la actividad plasmática de plasminógeno en el sujeto. Los niveles mínimos de los sujetos 01-001, 01-002, 01-006, 01-007, 01-008, 01-009 y 01-010 se muestran en las gráficas individuales mostradas en las figuras 17, 18, 19, 20, 21, 22 y 23, respectivamente. La línea punteada representa el valor basal del sujeto respectivo más el 10 % de la actividad normal de plasminógeno. Esto se ilustra en cada gráfica con el fin de comparar fácilmente el aumento resultante con un aumento del 10 % de la actividad normal de plasminógeno.

[0212] En todos los sujetos, el nivel mínimo se aumentó al menos el 10 % de la actividad normal de plasminógeno después de la primera semana (identificado como la semana 2) de la suplementación con Glu-plasminógeno. El sujeto 01-001 comenzó a ser monitoreado en la semana 3, no en la semana 2.

[0213] En todos los sujetos (excepto por el sujeto 01-001), el nivel mínimo se mantuvo sobre el 10 % de la actividad normal de plasminógeno para la duración total de la suplementación con Glu-plasminógeno monitoreado. En el sujeto 01-001, el nivel mínimo disminuyó al 30 % en la semana 10, que representa el 1 % sobre su propio valor de referencia y aumentó nuevamente en la siguiente semana de monitoreo (semana 12). Hubo una interrupción en el tratamiento de ese sujeto entre la semana 8 y la semana 10, y esto es probablemente la razón de por qué el nivel de la actividad de plasminógeno disminuyó y aumentó de nuevo después de que la suplementación se retomó. Por lo tanto, la suplementación con Glu-plasminógeno de 6 mg/kg cada tres días (q3d) aumentó y mantuvo exitosamente la actividad de plasminógeno en al menos el 1 % de la actividad normal de plasminógeno durante el período de suplementación, y más concretamente, en al menos el 10 % de la actividad normal de plasminógeno durante el período de suplementación.

[0214] Además, la suplementación con Glu-plasminógeno de 6 mg/kg cada dos días (qod) también aumentó y mantuvo exitosamente la actividad de plasminógeno en al menos el 1 % de la actividad normal de plasminógeno durante el período de suplementación, y más concretament, en al menos el 10 % de la actividad normal de plasminógeno durante el período de suplementación.

[0215] Tal como se describe en este documento, el período de acumulación dura generalmente de 3 a 5 veces la vida media de un compuesto en el plasma de un sujeto. En los sujetos deficientes de plasminógeno del estudio de fase I, la semivida del Glu-plasminógeno se determinó en alrededor de 35,7 horas o 1,5 días (ver Ejemplo 5). Por lo tanto, en base a la semivida determinada, el período de acumulación tomaría de 107 horas (4,5 días) a 179 horas (7,4 días). Puede observarse en las figuras 17, 18, 19, 20, 21, 22 y 23 que el estado estacionario comienza después de aproximadamente una semana desde el comienzo del período de suplementación. Esto coincide con la semivida del Glu-plasminógeno en un sujeto deficiente de plasminógeno, que se determinó en la presente. De nuevo, hay una variabilidad del consumo del plasminógeno en un sujeto individual en ocasiones debido a muchos factores que tiene como resultado una curva de nivel mínimo observada que apenas difiere de la teoría descrita en la figura 4. El valor medio acerca la obervación a la teoría (no mostrada).

[0216] Ejemplo 7: Dosis repetidas (6 mg/kg) de Glu-plasminógeno en sujetos humanos con deficiencia de Pg y eficacia

[0217] Un objetivo de la suplementación con Glu-plasminógeno de la presente invención es proporcionar una suplementación con Glu-plasminógeno que sea eficaz en la reducción y/o tratamiento de al menos un síntoma relacionado con la deficiencia de plasminógeno. Los sujetos de la fase II fueron monitoreados para determinar sus lesiones visibles (Tabla 5), mejora global (Tabla 6) y calidad de vida (Tabla 6) en el día 0, semana 4, semana 8 y/o semana 12.

[0218] Tabla 5

[0220] Sujeto Visita Lesiones Número total Ubicación de las

[0221] visibles de lesiones lesiones MedibleDía 0 Sí 2 Ojo izquierdo 10 x 2 mm01-001Sí 2 Ojo derecho 10 x 2 mm Semana 4 --- ---01-002Día 0 Ojo izquierdo 15 x 5 mm

[0222]

Semana 4

---

---

[0223] Día 0 Sí 1 Encía superior No01-006Semana 4 No 0 --- ---Semana 8 No 0 --- ---01-007Día 0 --- --- ---

[0224]

Semana 4

---

---

---

[0225] Día 0 Sí 7 Ojo izquierdo No01-008Sí 7 Encía inferior No Sí 7 Ojo derecho No Sí 7 Encía superior No Semana 4 No 0 --- ---Semana 8 No 0 --- ---Semana 12 0 --- ---01-009Día -4 --- --- ---

[0226]

Semana 4

---

---

---

[0227] Día -4 Sí 2 Ojo derecho, párpado

[0228] inferior 10 x 5 mm Sí 2 Ojo derecho, párpado

[0229] 01-010superior 15 x 5 mm Semana 4 Sí 2 Ojo derecho, párpado

[0230] inferior 1 x 1 mm Sí 2 Ojo derecho, párpado

[0231] superior 5 x 2 mm

[0232] Se puede observar a partir de la monitorización de las lesiones visibles que algunas lesiones se redujeron tal como en el sujeto 01-010, o fueron completamente eliminadas en la semana 4 tal como en los sujetos 01-001, 01-002, 01-006 y 01-008, o no ocurrieron en los sujetos 01-009, que no tuvieron lesiones visibles en el Día 0. Por lo tanto, la suplementación con Glu-plasminógeno de la presente invención reduce la lesión, trata la lesión o previene la lesión en el sujeto con deficiencia de plasminógeno.

[0233]

[0236] La mejora total se evaluó mediante el uso de la pregunta y las respuestas detalladas en la figura 24.

[0238] En la Tabla 6, se puede observar que la mayoría de los sujetos experimentaron una gran mejoría de su impresión clínica global en la semana 4, que permaneció mejorado durante la duración total del período monitoreado. Más concretamente, la puntuación CGI fue 'ampliamente mejorado' o 'gran mejoría' excepto por el sujeto 01-007 que no tuvo cambios. Por lo tanto, la suplementación con plasminógeno es exitosa para mejorar una impresión clínica global deteriorada.

[0239] La calidad de vida se evaluó mediante el uso de la escala desarrollada por la Asociación Americana del Dolor Crónico, que se utiliza comúnmente para la evaluación de la calidad de vida en cualquier paciente. La escala de calidad de vida detallada en la figura 25.

[0241] En la Tabla 6, se puede observar que la calidad de vida para aquellos que ya no estaban yendo al trabajo cada día o tuvieron actividades diarias normales (puntuación de 10), mejoró en la semana 4 y para uno de ellos continuó mejorando a la semana 8. Para los sujetos que tienen una puntuación de 10 en el día 0, ellos mantuvieron su buena calidad de vida durante el periodo monitoreado. Por lo tanto, puede concluirse que la suplementación con Glu-plasminógeno mejora la calidad de vida para el sujeto que tiene una calidad de vida deteriorada o una puntuación de la calidad de vida menor a 10.

Claims (10)

1. REIVINDICACIONES

1. Glu-plasminógeno para su uso en un método de tratamiento de la deficiencia de plasminógeno tipo I en un sujeto, en donde el Glu-plasminógeno se administra por vía intravenosa según los siguientes regímenes: (i) diariamente en una dosis efectiva de al menos 0,5 mg/kg de masa del sujeto con deficiencia de plasminógeno; (ii) cada dos días en una dosis efectiva de al menos 1,5 mg/kg de masa del sujeto con deficiencia de plasminógeno;

(iii) dos veces a la semana en una dosis efectiva de al menos 6 mg/kg de masa del sujeto con deficiencia de plasminógeno; o

(iv) semanalmente en una dosis efectiva de al menos 45 mg/kg de masa del sujeto con deficiencia de plasminógeno.

2. El Glu-plasminógeno para su uso según la reivindicación 1, en donde el sujeto con deficiencia de plasminógeno padece conjuntivitis leñosa.

3. El Glu-plasminógeno pasa su uso según la reivindicación 1, en donde el régimen es cada dos días en una dosis de 1,5 mg/kg de masa del sujeto con deficiencia de plasminógeno.

4. El Glu-plasminógeno para su uso según la reivindicación 1, en donde el régimen es dos veces a la semana en una dosis de 6 mg/kg de masa del sujeto con deficiencia de plasminógeno.

5. El Glu-plasminógeno para uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4, en donde el Gluplasminógeno reduce, trata o previene una lesión relacionada con la deficiencia de plasminógeno.

6. El Glu-plasminógeno para uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en donde el sujeto es un adulto.

7. El Glu-plasminógeno para uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5, en donde el sujeto es un niño.

8. El Glu-plasminógeno para uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en donde la actividad de plasminógeno del sujeto es del 70 % o menos de la actividad normal de plasminógeno.

9. El Glu-plasminógeno para uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en donde la actividad de plasminógeno del sujeto es del 50 % o menos de la actividad normal de plasminógeno.

10. El Glu-plasminógeno para uso según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, en donde la actividad de plasminógeno del sujeto es del 30 % o menos de la actividad normal de plasminógeno.