ES3058227T3 - Prevention of infection by highly pathogenic viruses using topical application of povidone-iodine on mucous membranes - Google Patents

Abstract

Esta invención está dirigida a métodos para la prevención de infecciones por virus altamente patógenos (HP) mediante la aplicación a las membranas mucosas nasales de una preparación tópica que comprende el agente antimicrobiano de amplio espectro povidona yodada (PVP-I). Dichos virus incluyen los coronavirus SARS y MERS, como el SARS-CoV-2 (que causa la COVID-19), Filoviridae como el virus del Ébola (EBOV), el virus de Marburgo (MARV), el virus de Sudán (SUDV), el virus del bosque Tai (TAFV) y el virus Bundibugyo (BDBV), virus de la influenza pandémica como H5N1, H5N9, H7N3, H7N7, H9N2 y H1N1, y Arenaviridae que causan la fiebre de Lassa, Junin y Machupo, Bunyaviridae que causan la fiebre hemorrágica de Crimea-Congo, la fiebre del Valle del Rift, las fiebres hemorrágicas de Hantaan y Flaviviridae que causan la fiebre amarilla, el dengue, la fiebre hemorrágica de Omsk y la enfermedad del bosque de Kyasanur. La presente invención se refiere además a un método para disminuir infecciones secundarias de una infección viral primaria HP, causada por bacterias u hongos tales como Mycoplasma pneumoniae, S. aureus, K. pneumoniae, S. pneumoniae, M. catarrhalis, P. aeruginosa, S. pyogenes o Streptococcus agalactiae. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

[0001] DESCRIPCIÓN

[0002] Prevención de la infección por virus altamente patógenos usando la aplicación tópica de povidona-yodo sobre membranas mucosas

[0003] Campo de la invención

[0004] Esta invención está dirigida a una preparación farmacéutica que comprende povidona-yodo (PVP-I) para su uso en un método para reducir el título viral de SARS-CoV-2 en un sujeto humano infectado con SARS-CoV-2.

[0005] Antecedentes de la invención

[0006] Las enfermedades causadas por virus altamente patógenos, generalmente zoonóticos, presentan una preocupación creciente para las autoridades sanitarias. Los ejemplos recientes destacados son los brotes de enfermedades provocadas por los coronavirus SARS y MERS (SARS-CoV, MERS-CoV), el virus de la gripe aviar (AIV), el virus del Ébola (EBOV) y el virus responsable de la COVID19 (SARS-CoV-2). Con el aumento de la globalización, se ha amplificado la amenaza de enfermedades causadas por dichos virus altamente patógenos. En algunos casos, existe la preocupación añadida de que los virus podrían usarse para el bioterrorismo.

[0007] Para los fines de esta invención, se usará el término virus altamente patógenos o virus HP, donde el término incluye todos los virus donde hay un acceso limitado a tratamiento o vacunas efectivas, porque actualmente no hay tratamiento o vacunas efectivas o donde existen, pero el despliegue de tales intervenciones está comprometido o contraindicado (por ejemplo, el uso de tratamientos que pueden ser inadecuados para pacientes con otras morbilidades concomitantes o puede haber retrasos en el despliegue de vacunas) y donde los virus son capaces de causar enfermedades graves, incluyendo enfermedad fatal, en los seres humanos si no se tratan y/o un impacto social significativo, incluyendo el potencial para usarse como armas de bioterrorismo.

[0008] A modo de ejemplo específico, los virus HP incluirán los siguientes: Filoviridae capaz de causar fiebre hemorrágica viral mortal (VHF) en seres humanos, en particular EBOV, virus de Marburg (MARV), virus de Sudán (SUDV), virus del bosque de Tai (TAFV) y virus de Bundibugyo (BDBV); coronavirus capaces de causar enfermedades graves o fatales en los seres humanos, en particular MERS-CoV, SARS-CoV y SARS-CoV-2; y virus de la gripe aviar (AIV) y otras cepas emergentes de la gripe con potencial pandémico. Se entenderá que, en el futuro, se pueden identificar otros virus emergentes con un impacto y preocupación potenciales similares, ya sea como resultado de un cambio marcado en el potencial de transmisión de un virus conocido o la aparición de una nueva especie o cepa.

[0009] Aparte del hecho de que todos estos virus son capaces de causar una enfermedad grave y fatal en los seres humanos y que todavía puede no existir un tratamiento o vacuna efectiva, o estar contraindicado y/o difícil de desplegar rápidamente, el otro aspecto en común importante es que todos son zoonóticos, es decir, transmitidos originalmente desde animales a seres humanos. A modo de ejemplo, la fuente animal para el AIV son las aves, y para el EBOV se cree que son los murciélagos de la fruta.

[0010] Otra característica común es que tienen tasas de mortalidad relativamente altas en los seres humanos y en muchos casos son fácilmente transmisibles, a menudo por vía respiratoria. Típicamente, estos virus se categorizarán como grupos de riesgo de nivel 3 o 4 y en muchos casos se definirán como agentes de selección biológica por las autoridades reguladoras tales como en los EE. UU. En algunos casos, tales como virus de la gripe emergentes novedosos y SARS-CoV-2, tienen el potencial de convertirse en pandémicos, causando un impacto social significativo, un gran número de muertes y grandes desafíos para los trabajadores sanitarios de primera línea que están en riesgo de contraer el virus. Una preocupación adicional es que algunos de los virus responsables de estas enfermedades pueden tener la capacidad de ser desarrollados como armas de bioterrorismo.

[0011] JP 2004 352642 describe un profiláctico que comprende povidona yodada como ingrediente activo para prevenir una enfermedad infecciosa con un coronavirus.

[0012] KR 20170033925 describe una composición de pulverización antiviral y antibacteriana preparada mezclando un ingrediente principal con el contenido del 1-10 % de una solución de povidona-yodo y un aditivo con el contenido del 1-3 % de hidrocortisona, y mezclando y diluyendo 30-150 partes en peso de la mezcla hasta las 100 partes en peso del ingrediente principal, y 100-100.000 partes en peso de agua purificada hasta 100 partes en peso de la mezcla.

[0013] Ébola

[0014] Los virus del ébola presentan una preocupación particular. Causan una VHF que se conoce como enfermedad del virus del Ébola (EVD) o simplemente Ébola, que en 2014 mató más de 9.000 personas en África Occidental y provocó una preocupación global. Para los fines de esta invención, se considerará que el término "virus del Ébola" incluye los cinco virus de filovirus capaces de causar VHF humano, concretamente EBOV, MARV, SUDV, TAFV y BDBV.

[0015] Se cree que los murciélagos de la fruta son el reservorio natural del EBOV y el contacto con las heces de murciélagos u otros fluidos corporales puede ser responsable de la infección inicial de los seres humanos, después de lo cual puede ocurrir la transmisión humano a humano. Como se ha indicado por Osterholm et al ("Transmission of Ebola Viruses: What We Know and What We Do Not Know." mBio, 6,2 (2015): 1-9) la transmisión de EBOV humano a humano se produce principalmente a través del contacto directo con sangre o fluidos corporales de una persona infectada que está mostrando signos de infección o por contacto con objetos recientemente contaminados por una persona infectada enferma activamente.

[0016] Bosio et al ("Ebola and Marburg Viruses Replicate in Monocyte-Derived Dendritic Cells without Inducing the Production of Cytokines and Full Maturation". The Journal of Infectious Diseases 2003; 188:1630-8) informaron que la profunda virulencia de EBOV y MARV se debe a su capacidad para infectar y replicarse en células dendríticas y monocitos que no son detectados hasta que el número de virus está más allá de la capacidad de la respuesta inmunitaria del huésped para contener la infección. Las células inmunitarias infectadas propagan entonces la infección a través del cuerpo.

[0017] Mohomadzadeh et al (“How Ebola and Marburg viruses battle the immune system”. Nature Reviews Immunology 7, (2007): 556-567) también reportaron que la infección productiva, es decir, la infección que da como resultado que se produzca más progenie viral, se produce principalmente en las células dendríticas, monocitos y macrófagos.

[0018] Osterholm et al (2015) plantearon la hipótesis de que los virus del Ébola tienen el potencial de ser patógenos respiratorios con propagación respiratoria primaria por aerosolización de micronúcleos de gotitas después de la tos y vómitos por los pacientes con Ébola. El EBOV se ha encontrado en el exterior de máscaras faciales llevadas por trabajadores sanitarios que cuidan de víctimas de la enfermedad y se ha establecido que el virus puede infectar ciertas células del tracto respiratorio.

[0019] Prescott et al. (“Postmortem Stability of Ebola Virus”. Emerging Infectious Diseases, Vol. 21, No. 5, mayo de 2015: 856-859) reportaron que, basándose en modelos animales, el virus se puede aislar de los cadáveres durante al menos siete días después de la muerte, encontrándose grandes números de virus en la cavidad nasal y oral.

[0020] Osterholm et al (2015) también reportaron que la dosis infecciosa para los virus del Ébola en los seres humanos parece ser extremadamente baja, siendo diez o menos partículas virales suficientes para la infección poniendo a los trabajadores sanitarios en riesgo a pesar de los procedimientos de prevención de barrera.

[0021] Debido a estos factores, y otros factores, tales como las condiciones ambientales y el entrenamiento, los procedimientos de protección de barrera estándar, tales como la higiene de las manos y el equipo de protección personal (PPE) tal como guantes, máscaras, protección ocular y máscaras protectoras, pueden no ser suficientes para prevenir la infección de los trabajadores sanitarios por el Ébola. Esto se pone de manifiesto por la revisión de la Organización Mundial de la Salud de las infecciones de trabajadores sanitarios durante la epidemia de Ébola de 2013-16 y la publicación del borrador del artículo "Preferred Product Characteristics for Personal Protective Equipment for the Healthcare Worker on the Frontline Responding to Ebola Virus and Haemorrhagic Fever Outbreaks in Tropical Climate (WHO 7 de septiembre de 2017). Mientras tanto, aquellos expuestos sin PPE, tales como los miembros de la familia, tienen un alto riesgo de infección. Por lo tanto, existe la necesidad de proteger mejor a los trabajadores sanitarios y a los civiles que podrían estar expuestos al virus del Ébola, cuando se exponen a personas infectadas y sus fluidos corporales.

[0022] Gripe pandémica

[0023] Al igual que el ébola, la gripe pandémica es una enfermedad potencialmente fatal que continúa causando preocupación global. Está causada por la introducción de un virus de la gripe con alto potencial patógeno en una población humana sin tratamiento previo que no tiene inmunidad preexistente y a menudo cuyo huésped natural es un animal, por ejemplo, aves en el caso del virus de la gripe aviar (AIV) y cerdos en el caso de la gripe porcina, o un virus recombinante que contiene genes derivados de virus humanos junto con genes no encontrados previamente en aislados humanos. Una de las cepas más altamente patógenas de AIV hasta la fecha se denomina H5N1 y se ha extendido a lo largo de Asia desde 2003. Otras cepas conocidas y potencialmente altamente patógenas son H5N9, H7N3, H7N7, H7N9 y H9N2. El virus de la "gripe porcina" pandémico de 2009 más reciente (generalmente se cree que es una redistribución de los virus de la gripe aviar, porcina y humana) se denomina H1N1, específicamente (H1N1)pdm09 y se notifica que se ha asociado con 151.700-575.400 muertes en todo el mundo en el primer año de la pandemia. Se cree generalmente que la mayoría de las infecciones humanas iniciales de AIV son el resultado de la manipulación de aves infectadas muertas o del contacto directo con fluidos infectados. Sin embargo, una vez infectada una persona, el riesgo de transmisión humano a humano presenta una preocupación notable posiblemente por analogía con otros virus de la gripe humana a través de la aerosolización del virus durante la tos y el estornudo y la posterior inhalación por otros. La transmisión de humano a humano también puede producirse mediante el contacto de las membranas mucosas (por ejemplo, de los ojos o las fosas nasales) con fluidos corporales y tocando objetos contaminados con el virus.

[0024] Los brotes de AIV y otros virus de la gripe emergentes se gestionan mediante prácticas tales como la eliminación de los animales infectados, el aislamiento de las personas infectadas, el cribado en aeropuertos de personas con síntomas de gripe, el uso de mascarillas faciales por civiles que perciben que podrían estar en riesgo, y la adherencia a procedimientos estrictos de protección de barrera y control de infecciones por trabajadores sanitarios, incluyendo higiene de manos y equipos de protección personal (PPE) tales como batas, guantes, protección ocular y máscaras protectoras.

[0025] Los agentes antivirales existentes tales como zanamivir y oseltamivir han presentado una eficacia limitada en el tratamiento de infecciones por AIV, porque en el momento en que el paciente lo presenta generalmente es demasiado tarde en la infección. Además, el virus ha demostrado la capacidad de mutar y, por lo tanto, evitar dichos fármacos, particularmente oseltamivir, en algunos casos. También se están realizando esfuerzos para desarrollar vacunas, pero hasta la fecha no se ha puesto a disposición ninguna vacuna efectiva para todas las cepas pandémicas y, a pesar de muchos intentos, no se ha desarrollado ninguna vacuna universal.

[0026] Dadas estas consideraciones y el hecho de que el virus se extienda a través de la transmisión por el aire, existe la preocupación grave de que el AIV y los virus de la gripe relacionados puedan usarse como un arma de bioterrorismo.

[0027] Existe la necesidad de proteger mejor a los trabajadores sanitarios y civiles que podrían estar expuestos a virus de la gripe emergentes de alta patogenicidad, ya sea cuando se manipulan animales infectados o cuando se exponen a personas infectadas.

[0028] SARS y MERS

[0029] Al igual que el AIV, el síndrome respiratorio agudo grave o el SARS es una enfermedad potencialmente mortal causada principalmente por la transmisión por el aire de un virus y la infección primaria del tracto respiratorio. El SRAS está causado por un coronavirus, llamado coronavirus asociado al SRAS o SRAS-CoV. Los coronavirus son una familia de virus de ARN monocatenario con envuelta que se dividen en cuatro géneros principales. La secuencia genómica del SARS-CoV-2 es similar en un 82 % al coronavirus del síndrome respiratorio agudo grave (SARS-CoV), y ambos pertenecen al género β de la familia del coronavirus. Se sabe que los coronavirus humanos tales como SARS-CoV y el coronavirus del síndrome respiratorio del Oriente Medio (MERS-CoV), causan síntomas respiratorios y entéricos. El SARS se informó por primera vez en Asia en febrero de 2003. La enfermedad se extendió a más de dos docenas de países antes de que se contuviera el brote global de 2003. Durante 2003, un total de 8.098 personas en todo el mundo estaban infectadas con SARS y 774 murieron. A finales de 2019 el mundo fue testigo de la aparición del nuevo coronavirus (SAR-CoV-2) que provocó un nuevo síndrome respiratorio agudo denominado COVID-19 y que se designó más tarde como una pandemia global.

[0030] Los síntomas tempranos incluyen fiebre alta, dolor de cabeza, malestar y dolores corporales. Algunos también tienen síntomas respiratorios leves o diarrea. Después de 2 a 7 días, los pacientes con SRAS pueden desarrollar una tos seca. Muchos pacientes desarrollan neumonía, que es la principal causa de mortalidad. El SARS-CoV se transmite por gotitas respiratorias producidas cuando una persona infectada tose o estornuda, con las gotitas infectadas depositadas en las membranas mucosas de la boca, nariz u ojos de personas que están cerca. El virus también puede propagarse cuando una persona toca una superficie u objeto contaminado con gotitas infecciosas y luego toca su boca, nariz u ojos.

[0031] El MERS también es una enfermedad respiratoria grave y a menudo mortal en seres humanos causada por un nuevo coronavirus, denominado MERS-CoV. El MERS se encontró por primera vez en la Península Arábiga y se creyó que se originaba en camellos. Entre septiembre de 2012 y el 5 de junio de 2015, había 1.279 casos humanos de MERS notificados y 495 muertes, o una tasa de mortalidad del 38,7 %. La enfermedad se informó por primera vez en Arabia Saudí, pero más recientemente se encontró en Corea y más de otros 20 países. Se cree que el MERS-CoV, al igual que otros coronavirus, se propaga desde las secreciones respiratorias de una persona infectada, tal como a través de la tos. Los síntomas tempranos pueden incluir fiebre, escalofríos, tos, falta de aliento, dolores corporales, dolor de garganta, cefalea, diarrea, náuseas y/o vómitos y nariz con moqueo. Sin embargo, se ha informado de un amplio espectro clínico de infección por MERS-CoV, que va desde una infección asintomática hasta una enfermedad respiratoria superior aguda, y neumonitis rápidamente progresiva, insuficiencia respiratoria, choque séptico e insuficiencia multiorgánica que da como resultado la muerte.

[0032] Los que tienen un riesgo primario de infección incluyen trabajadores sanitarios de primera línea y las familias de los infectados. Los que tienen un riesgo secundario incluyen la tripulación de vuelos de aerolíneas, unidades de Servicio Médico de Emergencia (EMS) en aeropuertos, personal de aduanas e inmigración y viajeros internacionales. Para los trabajadores sanitarios, la protección recomendada incluye higiene de manos, guantes, batas, protección ocular y máscaras protectoras.

[0033] Tanto para el SARS como para el MERS, la protección recomendada para trabajadores sanitarios de primera línea incluye higiene de manos y equipos de protección personal (PPE) tales como batas, guantes, protección ocular y máscaras protectoras. Sin embargo, tales protecciones pueden no ser completamente efectivas y pueden no estar disponibles para todos los trabajadores sanitarios y otros que puedan estar expuestos. Protección frente a virus altamente patógenos (HP)

[0034] La piel epidérmica no deteriorada proporciona una barrera efectiva frente a la invasión de microbios en el cuerpo humano, incluyendo la invasión por virus HP. Sin embargo, las membranas mucosas, tales como en los ojos, las fosas nasales, la cavidad oral y los pulmones son más permisivas y, por lo tanto, proporcionan una superficie más receptiva para la entrada microbiana y la infección sistémica. Los conductos nasales también proporcionan un mecanismo de atrapamiento efectivo para evitar que las partículas y los aerosoles, incluyendo microbios, se transporten adicionalmente a lo largo de las vías respiratorias a los bronquiolos y pulmones. Este mecanismo de filtración da como resultado de manera argumentada a la acumulación de virus y bacterias en las fosas nasales donde son capaces de proliferar, lo que requiere que el cuerpo monte una defensa inmunitaria para contrarrestar la carga viral creciente. La carga viral creciente dentro de las fosas nasales aumenta el riesgo de que el virus encuentre su camino hacia los pulmones, tal como en MERS y SARS, o que se propague sistémicamente a través del cuerpo.

[0035] Sumario de la invención

[0036] La invención se define por las reivindicaciones.

[0037] La presente invención implica una preparación farmacéutica que comprende povidona-yodo (PVP-I) a una concentración mayor del 0,10 % p/v y menor de aproximadamente el 1,25 % p/v para su uso en un método para reducir el título viral de SARS-CoV-2 en un sujeto humano infectado con SARS-CoV-2, en donde la preparación se aplica en las fosas nasales del sujeto humano y la aplicación provoca la reducción del título viral del SARS-CoV-2 en el ser humano.

[0038] Las aplicaciones se producen a una frecuencia de entre 1 y 12 veces al día comenzando después o alrededor del momento de la exposición al SARS-CoV-2 y/o después durante un número de días, preferiblemente 21 días. Por consiguiente, la presente invención proporciona una preparación farmacéutica que comprende povidonayodo (PVP-I) a una concentración entre el 0,10 % p/v y el 1,25 % p/v para su uso en un método para reducir el título viral de SARS-CoV-2 en un sujeto humano infectado con SARS-CoV-2, en donde la preparación se aplica en las fosas nasales del sujeto humano entre 1 y 12 veces al día comenzando después o alrededor del momento de la exposición a SARS-CoV-2 y/o después durante hasta preferiblemente 21 días, en donde la aplicación provoca la reducción del título viral de SARS-CoV-2 en el ser humano.

[0039] Es evidente a partir de las Figuras y parte experimental contenidas en la presente memoria que la replicación de SARS-CoV-2 se eliminó eficazmente en las muestras expuestas a PVP-I, como se evidencia por la falta de detección de ARN específico del virus en muestras cultivadas en células Vero en comparación con muestras de control no tratadas. Estos datos corresponden a una reducción de SARS-CoV-2 viable competente para la replicación >99,97 % en comparación con los valores de control. Notablemente, y sorprendentemente, el ARN asociado al virus en las muestras de inóculo no se redujo mediante el tratamiento con PVP-I. Estos datos ponen de manifiesto que a) la PVP-I no interfería con el método de ensayo de RT-PCR y por tanto los datos de detección de ARN son válidos; b) es esencial que se utilice un método que implique el cultivo del virus, tal como se describe en el presente ejemplo, para detectar el efecto de la PVP-I sobre la viabilidad del virus. En ausencia de una etapa de cultivo para establecer la competencia de la replicación viral, el efecto de PVP-I puede haber sido ocultado.

[0040] En la presente memoria, se enseña que la aplicación puede ocurrir con una frecuencia de entre 1 y 12 veces al día comenzando después o alrededor del momento de exposición al virus y/o después durante hasta 21 días (o durante el período de sospecha de presencia del virus, si los síntomas persistieran y/o hubiera cualquier otra preocupación, por ejemplo, una prueba de diagnóstico positivo, de que el virus todavía puede estar presente en el sujeto).

[0041] Breve descripción de las figuras

[0042] Figura 1: Detección de ARN de SARS-CoV-2 en sobrenadantes de placas de 96 pocillos mediante RT-PCR TaqMan en tiempo real tras la exposición a soluciones de ensayo. Se expuso SARS-CoV-2 a la o las soluciones de ensayo indicadas durante 1 minuto antes de la dilución en serie (1:3) y la incubación en células Vero durante 48 h. Valores expresados como valor de umbral de ciclo medio (Ct) SEM (n = 3) frente a factor de dilución (incrementos de 1:3) (A) Titulación del inóculo en el punto de tiempo cero (0 h) usada para determinar los valores de Ct iniciales de las muestras tratadas. (B) Los sobrenadantes del cultivo se recogieron 48 h después de la inoculación en células Vero.

[0043] Figura 2: Detección de ARN de SARS-CoV-2 en sobrenadantes de placas de 96 pocillos mediante RT-PCR TaqMan en tiempo real tras la exposición a soluciones de ensayo. Se expuso SARS-CoV-2 a la o las soluciones de ensayo indicadas durante 1 minuto antes de la dilución en serie (1:3) y la incubación en células Vero durante 96 h. Valores expresados como valor de umbral de ciclo medio (Ct) SEM (n = 3) frente a factor de dilución (incrementos de 1:3) (A) Titulación del inóculo en el punto de tiempo cero (0 h) usada para determinar los valores de Ct de la línea basal de las muestras tratadas. (B) Los sobrenadantes del cultivo se recogieron 96 h después de la inoculación en células Vero.

[0044] Descripción detallada de la invención

[0045] La invención se define por las reivindicaciones.

[0046] Hasta la fecha, la PVP-I nunca se ha propuesto como un preventivo para infecciones causadas por virus HP mediante la aplicación en las fosas nasales. Su uso como antiséptico tópico en las manos y la piel para prevenir la infección por virus, incluyendo los virus HP, es conocido y se aplica ampliamente como parte de regímenes de barrera para prevenir el acceso del virus al interior del cuerpo humano.

[0047] La solicitud de patente australiana 2014206143 de Molloy y Goodall, divulga que la aplicación de PVP-I en las fosas nasales se puede usar para tratar y prevenir infecciones causadas por virus del resfriado común, pero no se sugiere que una aplicación similar en las fosas nasales pueda prevenir la infección y/o la eliminación por/de los virus HP o enfermedades asociadas con infecciones secundarias, ni es obvio porque SARS, MERS y AIV, por ejemplo, se consideran infecciones del tracto respiratorio inferior (LRI) con una presentación clínica y patología muy diferente a una infección limitada al tracto respiratorio superior (URI) tal como el resfriado común. Además, se considera que el Ébola es una consecuencia de una infección sistémica.

[0048] La presente divulgación describe que la aplicación de PVP-I en las fosas nasales tiene utilidad en la reducción del riesgo de infección y transmisión de infección, la prevención de enfermedad, así como la disminución del riesgo de infecciones secundarias causadas por y asociadas con virus HP tales como los virus del Ébola, tales como EBOV, coronavirus patógenos, tales como SARS-CoV y MERS-CoV, y virus de la gripe pandémicos, tales como AIV, y otros virus HP emergentes. La invención reivindicada se refiere a SARS-CoV-2.

[0049] EBOV

[0050] Se describe, pero no se reivindica, una composición farmacéutica para su uso en el tratamiento o la prevención del EBOV. En el caso del EBOV y otros filovirus, si la exposición se produce por contacto directo con fluidos corporales infectados o a través de virus transportados por el aire, en algún punto el virus necesita acceder al cuerpo humano interno para iniciar y propagar la infección. Un portal probable para tal acceso son las membranas mucosas de la cara, el tracto respiratorio y en particular las fosas nasales.

[0051] Como es el caso con el resfriado común, los ojos pueden ser un portal, como podría ocurrir cuando alguien frota sus ojos con los dedos contaminados con virus. Sin embargo, debido a la fisiología del cuerpo humano, es más probable que cualquier virus que entre a través de los ojos encuentre su camino hacia las fosas nasales y se replique allí como parte del proceso de establecimiento de una infección productiva.

[0052] La cavidad oral podría ser también un portal útil para el virus, pero la secreción constante de saliva y los mecanismos excretores tales como la deglución podrían argumentarse contra esto como un punto de acceso importante para el virus. Por el contrario, las fosas nasales representan un área altamente receptiva para una infección y en ausencia de una infección por resfriado u otra infección nasal, las secreciones son limitadas y como se enseña por la solicitud de patente australiana 2014206143 de Molloy et al, a la que se ha hecho referencia anteriormente en la presente memoria, la eliminación mucociliar normal tarda aproximadamente 15 minutos. Las fosas nasales ofrecen otra ventaja importante para los filovirus tales como el EBOV, ya que las fosas nasales contienen monocitos que actúan como células centinela para la infección, también como se enseña en la patente australiana 2014206143 de Molloy et al, a la que se ha hecho referencia anteriormente en la presente memoria. Se sabe que tales células inmunitarias se infectan por EBOV y actúan como un 'caballo de Troya” para la infección por EBOV que se propaga a órganos por todo el cuerpo. Estas células inmunitarias no se encuentran comúnmente en la cavidad oral.

[0053] Además, la presencia de EBOV o ARN de EBOV en las fosas nasales provocaría que los monocitos liberaran citoquinas, atrayendo de este modo a los neutrófilos a las fosas nasales, que también serían susceptibles a la infección por el EBOV y, de hecho, en lugar de luchar contra la infección, que es su papel normal, se postula que su infección aceleraría y propagaría la infección junto con los monocitos infectados.

[0055] Por lo tanto, la presente divulgación describe que, a través de la combinación inesperada de estos factores, las fosas nasales ofrecen sorprendentemente un portal único atractivo para una entrada inicial de EBOV en el huésped humano como preludio de la replicación sistémica y la enfermedad. Sin embargo, es este punto de entrada el que también hace que el EBOV sea especialmente susceptible al ataque y destrucción por PVP-I mediante la aplicación en las fosas nasales.

[0057] Se sabe que la PVP-I destruye rápidamente el EBOV y probablemente todos los demás filovirus a bajas concentraciones de PVP-I. Además, como se enseña en la patente australiana 2014206143 de Molloy et al, a la que se ha hecho referencia anteriormente en la presente memoria, se sabe que la PVP-I es tóxica para las células inmunitarias tales como monocitos a bajas concentraciones de PVP-I. Este conocimiento combinado con la divulgación anterior del mecanismo de entrada e infección por EBOV ha llevado a los presentes inventores a un nuevo descubrimiento y es que la aplicación intranasal repetida de PVP-I según el método inventivo no solo eliminaría cualquier EBOV presente en las fosas nasales antes de que pueda iniciarse una infección sino que destruiría cualquier monocito o neutrófilo infectado y eliminaría los monocitos o neutrófilos no infectados presentes de modo que no pudieran infectarse posteriormente por EBOV. En esencia, la aplicación de PVP-I en las fosas nasales, transformaría las fosas nasales desde un portal conveniente de acceso para el EBOV a una barrera secundaria de protección contra la infección por EBOV, reduciendo en gran medida el riesgo general de infección por EBOV.

[0059] La patente australiana 2014206143 de Molloy et al, a la que se ha hecho referencia anteriormente en la presente memoria, enseña que, para su uso en las fosas nasales, una concentración adecuada de PVP-I está entre el 0,10 % p/v y el 2,5 % p/v, representando el valor inferior el nivel por debajo del cual hay poca o ninguna capacidad antimicrobiana efectiva y representando el valor superior el nivel por encima del cual se sabe que la PVP-I causa ciliotoxicidad en la nariz. Para su uso en el tratamiento del resfriado común, la patente enseña contra el uso de preparaciones liposomales de PVP-I, como se define en la patente, debido a su rendimiento más lento y actividad antiviral reducida frente a la inactivación de mucina, aclaramiento secretor y un virus más resiliente, rinovirus humano. Sin embargo, en el caso de los virus del Ébola, que son virus con envoltura y mucho más sensibles a la PVP-I, y con la ausencia de rinorrea presente en los resfriados, estos factores son menos aplicables. De hecho, la liberación más lenta y el tiempo de residencia más largo asociados con las formulaciones de PVP-I liposomales, u otras formas de liberación lenta/tiempo de residencia más largo, por ejemplo, geles, pueden ser una ventaja para aplicaciones preventivas tales como infección por EBOV. Por lo tanto, la presente invención no excluye formulaciones liposomales de PVP-I.

[0061] En cuanto a la frecuencia y el esquema de tiempo de la aplicación, esto dependerá de las circunstancias de la exposición al EBOV o virus similares. En el caso de trabajadores sanitarios que están usando PPE y técnicas de barrera asociadas mientras están expuestos a individuos infectados, no es práctico aplicar una preparación en la nariz mientras el PPE está en su sitio y hacerlo puede aumentar la exposición a los virus. La primera oportunidad para aplicar una preparación intranasal de PVP-I podría ser antes o mientras se aplica PPE (es decir, como parte de un régimen de "ponerse" el PPE) o podría ser en el momento de retirar el PPE después de completar las actividades de trabajo, donde el propósito de la aplicación de PVP-I intranasal es eliminar cualquier virus que podría haber evitado de alguna manera el PPE y otras barreras, por ejemplo, debido a la falla de una máscara facial o porque el trabajador toca inadvertidamente el exterior de una mascarilla facial o bata durante la retirada y posteriormente toca su nariz u ojos permitiendo que el virus encuentre potencialmente su camino a las fosas nasales. En esas circunstancias, el trabajador debe usar el producto inmediatamente después de retirar el PPE según las prácticas de trabajo seguras recomendadas y después a una frecuencia de hasta 12 veces al día durante el período equivalente al período de incubación para el virus, que en el caso del EBOV es de hasta 21 días después de la exposición más reciente al virus.

[0063] En el caso de personas que no tienen PPE y que pueden estar expuestas al virus, tales como miembros de la familia, la preparación intranasal de PVP-I necesitaría usarse continuamente durante el periodo de exposición a una frecuencia de hasta 12 veces al día y después de la exposición a una frecuencia similar durante el periodo equivalente al periodo de incubación para el virus, que en el caso de EBOV es de hasta 21 días después de la exposición más reciente al virus.

[0065] En todos los casos, el volumen de la preparación intranasal de PVP-I debe ser suficiente para alcanzar todas las partes de las fosas nasales, que en el caso de una preparación intranasal líquida de PVP-I como se enseña en este la patente australiana 2014206143 de Molloy et al, a la que se ha hecho referencia anteriormente en la presente memoria, puede representar un volumen de hasta 1 ml aplicado a cada orificio nasal de la persona expuesta.

[0067] La preparación intranasal de PVP-I puede estar en forma de una solución, gotas, pulverización, gel, crema, aerosol o inhalante.

[0068] AIV

[0069] Se describe, pero no se reivindica, una composición farmacéutica para su uso en el tratamiento o prevención de AIV. En el caso de AIV y como se divulga por Shinya et al ("Influenza virus receptors in the human airway". Nature, 440: 435-6) H5N1 sólo se replica productivamente en las células del tracto respiratorio inferior, no en las fosas nasales. Por lo tanto, la aplicación de PVP-I en las fosas nasales, no sería considerada por un experto en la técnica como un medio productivo para tratar o prevenir la infección por AIV.

[0070] Sin embargo, los presentes inventores han descubierto que, cuando se produce la transmisión humanohumano, normalmente se produciría como resultado del estornudo o tos de una persona infectada, con el virus transportado por gotitas. Tales gotitas son lo suficientemente grandes como para depositarse en las fosas nasales y aunque el virus puede no replicarse en las células nasales, se espera que las fosas nasales actúen como un punto de estadificación inicial importante para establecer la infección y/o antes de la entrada adicional al tracto respiratorio inferior. Por ejemplo, el virus podría ser transportado por aclaramiento mucociliar a la garganta desde donde puede migrar fácilmente a los bronquios.

[0071] Además, en el caso de la transmisión animal-humano de AIV, como podría ocurrir con personas que atienden, manipulan o están expuestas de otro modo a animales, especialmente aves de corral, infectados con AIV, el virus sería transportado sobre polvo y otras partículas y también muy probablemente encontraría su camino a las fosas nasales y se alojaría allí antes de la migración adicional a los pulmones.

[0072] En la transmisión animal-humano o humano-humano, el virus también podría ser llevado en las manos y la persona puede autoinocularse tocando sus ojos o nariz con dedos contaminados. De nuevo, las fosas nasales podrían ser importantes en el transporte del virus finalmente a los pulmones.

[0073] Por lo tanto, la presente invención divulga por primera vez que, si una persona está expuesta a animales o seres humanos infectados, la aplicación de PVP-I en las fosas nasales, proporciona un importante efecto protector contra la infección y/o replicación/eliminación de virus inmediatamente después de la infección. Se sabe que la PVP-I destruye rápidamente H5N1 y todos los demás virus de la gripe, pandémicos o de otro modo, a bajas concentraciones de PVP-I. Este conocimiento combinado con la divulgación anterior del mecanismo de entrada e infección por AIV ha llevado a los presentes inventores a un nuevo descubrimiento y es que, la aplicación intranasal repetida de PVP-I según el método inventivo eliminaría cualquier AIV presente en las fosas nasales antes de que el virus pueda migrar al tracto respiratorio inferior y establecer una infección productiva. En esencia, la aplicación nasal de PVP-I transformaría las fosas nasales desde un portal conveniente de acceso para AIV a una barrera secundaria de protección frente a la infección por AIV, reduciendo en gran medida el riesgo global de infección por AIV.

[0074] Por las razones ya discutidas, una concentración adecuada de PVP-I está entre el 0,10 % p/v y el 1,25 % p/v, tal como aproximadamente el 0,15 %, 0,2 %, 0,25 %, 0,3 %, 0,35 %, 0,4 %, 0,45 %, 0,5 %, 0,55 %, 0,6 %, 0,65 %, 0,7 %, 0,75 %, 0,8 %, 0,85 %, 0,9 %, 0,95 %, 1 %, 1,05 %, 1,1 %, 1,15 %, o aproximadamente el 1,2 %, o cualquier intervalo dentro de tales concentraciones.

[0075] En cuanto a la frecuencia y el esquema de tiempo de aplicación, se aplican consideraciones similares a las ya discutidas para el EBOV. En el caso de animales o trabajadores sanitarios que están usando PPE y técnicas de barrera asociadas mientras están expuestos a animales o personas infectados con AIV, el trabajador debe usar el producto antes o mientras aplica PPE o inmediatamente después de retirar el PPE y después a una frecuencia de hasta 12 veces al día durante el periodo equivalente al periodo de incubación para el virus, que en el caso de AIV puede ser de hasta 17 días.

[0076] En el caso de personas que no tienen PPE y que pueden estar expuestas a virus, tales como miembros de la familia, la preparación intranasal de PVP-I necesitaría usarse continuamente durante el periodo de exposición a una frecuencia de hasta 12 veces al día y después de la exposición a una frecuencia similar durante el periodo equivalente al periodo de incubación para el virus, que en el caso de AIV es de hasta 17 días después de la exposición más reciente al virus.

[0077] En todos los casos, el volumen de la preparación intranasal de PVP-I debe ser suficiente para alcanzar todas las partes de las fosas nasales, que en el caso de una preparación intranasal líquida de PVP-I puede representar un volumen de hasta 1 ml aplicado a cada orificio nasal de la persona expuesta.

[0078] La preparación intranasal de PVP-I puede estar en forma de una solución, gotas, pulverización, gel, crema, aerosol o inhalante.

[0079] Coronavirus HP (por ejemplo, SARS y MERS)

[0080] Se describe, pero no se reivindica, una composición farmacéutica para su uso en el tratamiento o prevención de MERS. El MERS-CoV causa una LRI, que puede dar como resultado neumonía grave con insuficiencia respiratoria aguda e insuficiencia multiorgánica que conduce a una alta tasa de mortalidad. Como AIV, la transmisión es probablemente a través de gotitas transportadas por el aire o contacto directo o indirecto con el virus.

[0081] Adney et al ("Replication and Shedding of MERS-CoV in Upper Respiratory Tract of Inoculated Dromedary Camels". Emerging Infectious Diseases, 20, 12 (2014): 1999-2005) mostraron que MERS-CoV se replicaba activamente en el tracto respiratorio superior de camellos.

[0082] Memish et al. (“Middle East respiratory syndrome coronavirus infections in health care workers” N Engl J Med 369 (2013): 884-886) reportaron que los portadores asintomáticos de MERS CoV a menudo tenían síntomas de URI leves, lo que sugiere que el virus podría infectar las fosas nasales de los seres humanos, pero en un estudio posterior Memish et al ("Prevalence of MERS-CoV Nasal Carriage and Compliance With the Saudi Health Recommendations Among Pilgrims Attending the 2013 Hajj." JID 210 (2014): 1067-1072) no encontraron evidencias de transporte nasal de MERS-CoV, al menos en sujetos asintomáticos.

[0083] Por estas razones y el hecho de que el SARS y el MERS se consideran infecciones del tracto respiratorio inferior, la aplicación de PVP-I en las fosas nasales no sería considerada por un experto en la técnica como un medio productivo para tratar o prevenir infecciones por SARS o MERS.

[0084] Sin embargo, cuando se produce la transmisión humano-humano, normalmente se produciría como resultado del estornudo o tos de una persona infectada, con el virus transportado por gotitas. Tales gotitas son lo suficientemente grandes como para depositarse en las fosas nasales y aunque el virus puede no replicarse en las células nasales, las fosas nasales pueden actuar como un punto de estadificación inicial importante para la entrada adicional en el tracto respiratorio inferior. Por ejemplo, el virus podría ser transportado por aclaramiento mucociliar a la garganta desde donde puede migrar fácilmente a los bronquios.

[0085] Además, en el caso de la transmisión animal-humano de SARS o MERS, como podría ocurrir con personas que atienden, manejan o están expuestas de otro modo a animales infectados, el virus sería transportado sobre polvo y otras partículas y probablemente también encontraría su camino a las fosas nasales y se alojaría allí antes de la migración adicional a los pulmones.

[0086] En la transmisión animal-humano o humano-humano, el virus también podría ser llevado en las manos y la persona puede autoinocularse tocando sus ojos o nariz con dedos contaminados. De nuevo, las fosas nasales podrían ser importantes en el transporte del virus finalmente a los pulmones. Además, Sungnak y colaboradores han informado recientemente de evidencias de que las células de las fosas nasales pueden ser particularmente susceptibles a la infección y han postulado un papel potencial en la infección viral inicial, la propagación y la eliminación de SARS-CoV-2 (Sungnak et al., 2020. Nature Comms. 26: 681-687. “SARS-CoV-2 entry factors are highly expressed in nasal epithelial cells together with innate immune genes”).

[0087] Por lo tanto, la presente invención divulga por primera vez que, si una persona está expuesta a animales o seres humanos infectados, la aplicación de PVP-I en las fosas nasales puede proporcionar un efecto protector importante contra la entrada al tracto respiratorio inferior y la infección productiva. Esto sería especialmente importante para los trabajadores sanitarios y otras personas susceptibles que podrían estar expuestas a individuos infectados que han probado ser positivos, por ejemplo, para SARS-CoV-2, muestran los síntomas de la enfermedad COVID-19, o para personas que están ensayando individuos para determinar si son positivos para el virus.

[0088] Los ejemplos proporcionados en la presente memoria muestran que la PVP-I inactiva también el SARS-CoV-2 (Figuras 1 y 2).

[0089] Este conocimiento combinado con la divulgación anterior del mecanismo de entrada e infección por coronavirus SARS o MERS ha llevado a los presentes inventores a un nuevo descubrimiento y es que, la aplicación intranasal repetida de PVP-I según el método inventivo eliminaría cualquier SARS-CoV o MERS-CoV presente en las fosas nasales antes de que el virus pueda migrar al tracto respiratorio inferior y establecer una infección productiva. Esto incluiría "suprimir" la infección viral en un individuo infectado, por ejemplo, con SAR-CoV-2 u otros virus, con el fin de reducir el riesgo de transmisión.

[0090] El concepto de “suprimir” la infección viral indica cualquier aspecto de la infección viral, tal como replicación viral, transcurso de tiempo de la infección, cantidad (título) de virus, lesiones y/o uno o más síntomas que se restringen, inhiben o reducen (en términos de gravedad y/o duración) en un individuo o población de individuos tratados con una composición de PVP-I según la invención en comparación con un aspecto de infección viral en un individuo o población de individuos no tratados según la invención. La reducción en el título viral incluye, pero no se limita a, la eliminación del virus de un sitio o individuo infectado. La infección viral puede evaluarse por cualquier medio conocido en la técnica, incluyendo, pero no limitado a, medición de partículas virales, ácido nucleico viral o antígenos virales, detección de síntomas y detección y/o medición de anticuerpos antivirus. Los anticuerpos antivirus se usan ampliamente para detectar y monitorizar la infección viral y, en general, están disponibles comercialmente. Además, la infección viral puede evaluarse por otros medios conocidos en la técnica incluyendo, pero no limitados a, PCR, hibridación in situ con sondas específicas de virus, ensayos de TCID<50>, ensayos de centros infecciosos, ensayos en placa, etc.

[0092] Por razones ya discutidas, una concentración adecuada de PVP-I está entre el 0,10 % p/v y el 1,25 % p/v, tal como aproximadamente el 0,15 %, 0,2 %, 0,25 %, 0,3 %, 0,35 %, 0,4 %, 0,45 %, 0,5 %, 0,55 %, 0,6 %, 0,65 %, 0,7 %, 0,75 %, 0,8 %, 0,85 %, 0,9 %, 0,95 %, 1 %, 1,05 %, 1,1 %, 1,15 %, o aproximadamente el 1,2 %, o cualquier intervalo dentro de tales concentraciones.

[0094] En cuanto a la frecuencia y esquema de tiempo de aplicación, se aplican consideraciones similares a las ya discutidas para EBOV y AIV. En el caso de animales o trabajadores sanitarios que están usando PPE y técnicas de barrera asociadas mientras están expuestos a animales o personas infectados con AIV, el trabajador debe usar el producto antes de o al mismo tiempo que se aplica el PPE, o inmediatamente después de retirar el PPE y después de eso a una frecuencia de hasta 12 veces al día durante el periodo equivalente al periodo de incubación para el virus, que en el caso del SARS es de hasta 10 días y para MERS es de hasta 14 días.

[0095] En el caso de personas que no tienen PPE y que pueden estar expuestas a virus, tales como miembros de la familia, la preparación intranasal de PVP-I necesitaría usarse continuamente durante el periodo de exposición a una frecuencia de hasta 12 veces al día y después de la exposición a una frecuencia similar durante el periodo equivalente al periodo de incubación para el virus, o hasta 10 días para SARS y 14 días para MERS después de la exposición más reciente al virus.

[0097] En todos los casos, el volumen de la preparación intranasal de PVP-I debe ser suficiente para alcanzar todas las partes de las fosas nasales, que en el caso de una preparación intranasal líquida de PVP-I puede representar un volumen de hasta 1 ml aplicado a cada orificio nasal de la persona expuesta.

[0099] La preparación intranasal de PVP-I puede estar en forma de una solución, gotas, pulverización, gel, crema, aerosol o inhalante.

[0101] En relación con los virus HP analizados anteriormente en ciertas realizaciones, la aplicación nasal proporciona una reducción logarítmica clínicamente significativa de al menos varias unidades logarítmicas (por ejemplo, 2-4 unidades logarítmicas) en aproximadamente 5-20 minutos que persiste durante aproximadamente 8 horas después de ser expuestas a dicho virus después de una aplicación en la fosa nasal. En una realización, la composición proporciona una reducción logarítmica clínicamente significativa de al menos varias unidades logarítmicas (por ejemplo, 2-4 unidades logarítmicas) en aproximadamente 5-20 minutos que persiste durante aproximadamente 6 horas después de ser expuestas a dicho virus después de una aplicación en la fosa nasal. En una realización, la composición proporciona una reducción logarítmica clínicamente significativa de al menos varias unidades logarítmicas (por ejemplo, 2-4 unidades logarítmicas) en aproximadamente 5-20 minutos que persiste durante aproximadamente 4 horas después de ser expuestas a dicho virus después de una aplicación en la fosa nasal. En otra realización, la composición proporciona una reducción logarítmica clínicamente significativa de al menos varias unidades logarítmicas (por ejemplo, 2-4 unidades logarítmicas) en aproximadamente 5-20 minutos que persiste durante 2 horas después de ser expuestas a dicho virus después de una aplicación en la fosa nasal. En otra realización, la composición proporciona una reducción logarítmica clínicamente significativa de al menos varias unidades logarítmicas (por ejemplo, 2-4 unidades logarítmicas) en aproximadamente 5-20 minutos que persiste durante 1 hora después de ser expuestas a dicho virus después de una aplicación en el conducto nasal.

[0103] En relación con los virus HP analizados anteriormente en ciertas realizaciones, la aplicación nasal proporciona una reducción logarítmica clínicamente significativa de al menos varias unidades logarítmicas (por ejemplo, 2-4 unidades logarítmicas) en aproximadamente 10 minutos que persiste durante aproximadamente 8 horas después de ser expuestas a dicho virus después de una aplicación en la fosa nasal. En una realización, la composición proporciona una reducción logarítmica clínicamente significativa de al menos varias unidades logarítmicas (por ejemplo, 2-4 unidades logarítmicas) en aproximadamente 10 minutos que persiste durante aproximadamente 6 horas después de ser expuestas a dicho virus después de una aplicación en la fosa nasal. En una realización, la composición proporciona una reducción logarítmica clínicamente significativa de al menos varias unidades logarítmicas (por ejemplo, 2-4 unidades logarítmicas) en aproximadamente 10 minutos que persiste durante aproximadamente 4 horas después de ser expuestas a dicho virus después de una aplicación en la fosa nasal. En otra realización, la composición proporciona una reducción logarítmica clínicamente significativa de al menos varias unidades logarítmicas (por ejemplo, 2-4 unidades logarítmicas) en aproximadamente 10 minutos que persiste durante 2 horas después de ser expuestas a dicho virus después de una aplicación en la fosa nasal. En otra realización, la composición proporciona una reducción logarítmica clínicamente significativa de al menos varias unidades logarítmicas (por ejemplo, 2-4 unidades logarítmicas) en aproximadamente 10 minutos que persiste durante 1 hora después de ser expuestas a dicho virus después de una aplicación en el conducto nasal.

[0104] Infecciones secundarias

[0105] Es bien conocido que las denominadas "infecciones secundarias" pueden ser una complicación común de una infección viral primaria, particularmente en el caso de una enfermedad viral respiratoria primaria. Estas infecciones secundarias son a menudo infecciones bacterianas. Las infecciones secundarias se producen durante o después de una infección por otro patógeno, comúnmente virus. Se cree que estas enfermedades secundarias se facilitan por varios factores, incluyendo la unión y colonización potenciadas mediadas por virus, la patogénesis potenciada mediada por virus y la inmunomodulación mediada por virus. Las infecciones secundarias son responsables de un aumento de la morbilidad y, en algunos casos, de la mortalidad y se ha mostrado que aumentan el impacto social e individual de los virus HP. Por ejemplo, durante la infección secundaria pandémica de gripe H1N1 de 2009 por una variedad de microorganismos que incluyenMycoplasma pneumoniae, S. aureus, K. pneumoniae, S. pneumoniae, M. catarrhalis, P. aeruginosa, S. pyogenes,yStreptococcus agalactiaese mostró que estaba presente en aproximadamente un tercio a la mitad de todas las fatalidades (Morris et al., Front. Microbiol. 2017; 8: 1041 "Secondary Bacterial Infections Associated with Influenza Pandemics” y referencias en el mismo). De manera similar, se han notificado comúnmente infecciones secundarias después de la autopsia de la enfermedad COVID-19 mortal, existen preocupaciones de que éstas pueden contribuir a la mortalidad y morbilidad asociadas con la pandemia reciente (Cox et al., Lancet, Microbe 2020; 1: E11. “Co-infections: potentially lethal and unexplored in COVID-19", y referencias en el mismo). Estas infecciones secundarias presentan un desafío diagnóstico complejo ya que pueden comprender una variedad de especies y pueden resultar difíciles de resolver a partir de microorganismos que colonizan al paciente de forma benigna o en algunos casos los organismos previamente benignos pueden convertirse en patógenos después de la infección primaria. Se ha descrito que la PVP-I tiene un amplio espectro de actividad antimicrobiana e inactiva rápidamente una amplia gama de microorganismos, incluyendo cepas resistentes a antibióticos (Kanagalingam, et al., Int J Clin Practice.201569; 11: 1247-1256, "Practical use of povidone-iodine antiseptic in the maintenance of oral health and in the prevention and treatment of common oropharyngeal infections" y referencias en el mismo). El uso de PVP-I se ha propuesto como un "desinfectante" universal para los fines de mantener, por ejemplo, la salud oral asociada con infecciones microbianas. Es importante destacar que, debido a su modo de acción y actividad de amplio espectro, no se espera que se requiera el conocimiento de la identidad o susceptibilidad antibiótica del microorganismo responsable de la infección secundaria ni que la falta de este conocimiento limite la utilidad de la PVP-I.

[0106] Las infecciones secundarias, a menudo asociadas con bacterias y hongos, son una causa conocida de morbilidad y mortalidad graves en enfermedades virales, particularmente virus respiratorios. También se cree que las infecciones secundarias han desempeñado un papel en las pandemias recientes causadas por virus HP. A menudo, son difíciles de diagnosticar y, por ejemplo, en el caso de organismos resistentes a antibióticos, pueden presentar desafíos de tratamiento. Se cree que la infección primaria por virus predispone a un paciente a enfermedades secundarias, por ejemplo, promoviendo la colonización, la inmunomodulación y otros factores tales como facilitar una virulencia aumentada. Las enfermedades tales como neumonía bacteriana causada por infecciones secundarias son el resultado de infección bacteriana del tracto respiratorio inferior.

[0107] Por estas razones, la aplicación de PVP-I en las fosas nasales, no sería considerada por un experto en la técnica como un medio productivo para tratar o prevenir infecciones secundarias.

[0108] Por lo tanto, la presente invención divulga por primera vez que, si una persona está expuesta a una infección con un virus HP, la aplicación de PVP-I en las fosas nasales, puede proporcionar un importante efecto protector contra infecciones secundarias y las enfermedades asociadas con infecciones secundarias. Esto sería especialmente importante para trabajadores sanitarios y otras personas susceptibles que pueden presentar un mayor riesgo.

[0109] Se sabe que la PVP-I tiene un efecto antimicrobiano de amplio espectro (2006), (previamente referenciado en la presente memoria), y no se ve afectada por la resistencia a antibióticos. En algunos casos, los organismos implicados en enfermedades secundarias pueden colonizar las fosas nasales de una manera benigna antes de la infección primaria.

[0110] Este conocimiento combinado con la divulgación anterior del mecanismo de entrada e infección por virus HP ha llevado a los presentes inventores a describir esto es que la aplicación intranasal repetida de PVP-I según el método inventivo eliminaría microorganismos presentes en las fosas nasales, evitando de este modo la promoción de la colonización y enfermedad exacerbada, y limitando su propagación antes de que puedan migrar al tracto respiratorio inferior (o a cualquier otro lugar) y establecer una infección secundaria productiva. Por razones ya discutidas, una concentración adecuada de PVP-I está entre el 0,10 % p/v y el 1,25 % p/v, tal como aproximadamente el 0,15 %, 0,2 %, 0,25 %, 0,3 %, 0,35 %, 0,4 %, 0,45 %, 0,5 %, 0,55 %, 0,6 %, 0,65 %, 0,7 %, 0,75 %, 0,8 %, 0,85 %, 0,9 %, 0,95 %, 1 %, 1,05 %, 1,1 %, 1,15 %, o aproximadamente el 1,2 %, o cualquier intervalo dentro de tales concentraciones.

[0111] En cuanto a la frecuencia y el esquema de tiempo de aplicación, se aplican consideraciones similares a las ya analizadas para la infección primaria con virus HP. En el caso de animales o trabajadores sanitarios que están usando PPE y técnicas de barrera asociadas mientras están expuestos a animales o personas infectados con virus HP, el trabajador debe usar el producto antes de o al mismo tiempo que se aplica el PPE, o inmediatamente después de retirar el PPE y después de eso a una frecuencia de hasta 12 veces al día durante el periodo equivalente al periodo de incubación para el virus.

[0112] En el caso de personas que no tienen PPE y que pueden estar expuestas a virus, tales como miembros de la familia, la preparación intranasal de PVP-I necesitaría usarse continuamente durante el periodo de exposición a una frecuencia de hasta 12 veces al día y después de la exposición a una frecuencia similar durante el periodo equivalente al periodo de incubación para el virus.

[0113] En todos los casos, el volumen de la preparación intranasal de PVP-I debe ser suficiente para alcanzar todas las partes de las fosas nasales, que, en el caso de una preparación intranasal líquida de PVP-I, puede representar un volumen de hasta 1 ml aplicado en cada orificio nasal de la persona expuesta.

[0114] Se pretende que las preparaciones se apliquen a "temperatura ambiente" que se refiere a la temperatura en el entorno en donde se lleva a cabo el método de la presente invención. Típicamente, la temperatura ambiente será de aproximadamente 10 °C a aproximadamente 30 °C. De manera importante, el término "temperatura ambiente" significa que ni la formulación ni las fosas nasales del sujeto a tratar se exponen a calentamiento externo al llevar a cabo el método de la presente invención.

[0115] Preparaciones intranasales:

[0116] Como se divulga en la presente memoria, las preparaciones intranasales de PVP-I pueden estar en forma de una solución, gotas, pulverización, gel, crema, aerosol o inhalante.

[0117] La concentración adecuada de PVP-I está entre el 0,10 % p/v y el 1,25 % p/v, tal como aproximadamente el 0,15 %, 0,2 %, 0,25 %, 0,3 %, 0,35 %, 0,4 %, 0,45 %, 0,5 %, 0,55 %, 0,6 %, 0,65 %, 0,7 %, 0,75 %, 0,8 %, 0,85 %, 0,9 %, 0,95 %, 1 %, 1,05 %, 1,1 %, 1,15 % o aproximadamente el 1,2 % o cualquier intervalo dentro de tales concentraciones.

[0118] En ciertas realizaciones, las preparaciones intranasales de PVP-I son preparaciones intranasales de base acuosa en donde el agua constituye de aproximadamente el 80 % p/v a aproximadamente el 96 % p/v de la preparación total.

[0119] En ciertas realizaciones, las preparaciones de PVP-I divulgadas en la presente memoria incluyen adicionalmente una cantidad de sales yoduro y/o yodato de aproximadamente el 0,003 a aproximadamente el 0,05 % p/v de la preparación total.

[0120] En ciertas realizaciones, las preparaciones de PVP-I divulgadas en la presente memoria también pueden incluir uno o más de los siguientes: agentes solubilizantes, disolventes polares, acidulante seco, secuestrantes, agentes alcalinos, agentes contrairritantes, anestésicos locales y conservantes.

[0121] En ciertas realizaciones, las preparaciones intranasales de PVP-I son preparaciones intranasales de base acuosa en donde el agua constituye de aproximadamente el 80 % p/v a aproximadamente el 96 % p/v de la preparación total y tiene un pH de aproximadamente 2-7, tal como un intervalo de pH de aproximadamente 3-6.

[0122] En ciertas realizaciones, las preparaciones de PVP-I divulgadas en la presente memoria incluyen adicionalmente una cantidad de humectante tal como ácido hialurónico, polietilenglicol o glicerol (glicerina) de aproximadamente el 1 a aproximadamente el 10 % p/v de la preparación total.

[0123] En ciertas realizaciones, las preparaciones de PVP-I divulgadas en la presente memoria incluyen adicionalmente una cantidad de un disolvente polar, tal como etanol, de aproximadamente el 0,2 a aproximadamente el 2 % p/v de la preparación total.

[0124] En ciertas realizaciones, las preparaciones de PVP-I divulgadas en la presente memoria incluyen adicionalmente una cantidad de un contrairritante o anestésico local, tal como mentol, de aproximadamente el 0,001 a aproximadamente el 1 % p/v de la preparación total.

[0125] En ciertas realizaciones, las preparaciones de PVP-I divulgadas en la presente memoria incluyen adicionalmente una cantidad de un conservante, tal como un conservante de sal de amonio cuaternario, de aproximadamente el 0,01 a aproximadamente el 0,5 % p/v de la preparación total.

[0126] En ciertas realizaciones, las preparaciones de PVP-I divulgadas en la presente memoria incluyen adicionalmente una cantidad de tampón tal como fosfato, citrato o acetato de sodio de aproximadamente el 0,05 a aproximadamente el 0,5 % p/v de la preparación total.

[0127] La preparación farmacéutica puede comprender además al menos un diluyente, excipiente o vehículo farmacéuticamente aceptable.

[0128] El diluyente, excipiente o vehículo puede ser un agente de sabor, edulcorante, agente colorante, disolvente, tampón, alcohol, polímero, tensioactivo u otro diluyente, excipiente o vehículo diseñado para optimizar la administración nasal, distribución intranasal, estabilidad, eficacia, aceptabilidad, tolerabilidad de la preparación.

[0129] Ejemplos

[0130] Ejemplos de preparación intranasal acuosa:

[0131] Ejemplo 1

[0133]

[0135] Ejemplo 2

[0137]

[0139] Ejemplo 3

[0141]

[0142]

[0144] Ejemplo 4

[0146]

[0148] Ejemplo 5

[0150]

[0152] Ejemplo 6

[0154]

[0156] Ejemplo 7

[0158]

[0159]

[0161] Ejemplo 8

[0163]

[0165] Ejemplo 9

[0167]

[0169] Ejemplo 10

[0171]

[0172] Ejemplo 11

[0174]

[0176] Ejemplo 12

[0178]

[0180] Ejemplo 13

[0182]

[0184] Ejemplo 14

[0186]

[0187]

[0189] Ejemplo 15

[0191]

[0193] Ejemplo 16

[0195]

[0197] Ejemplo 17

[0199]

[0201] Ejemplo 18

[0203]

[0204]

[0206] Ejemplo 19

[0208]

[0210] Ejemplo 20

[0212]

[0214] Ejemplo 21

[0216]

[0217] Ejemplo 22

[0219]

[0221] Ejemplo 23

[0223]

[0225] Ejemplo 24

[0227]

[0229] Ejemplo 25

[0231]

[0232] Datos biológicos:

[0233] a) SARS-CoV-2

[0234] La preparación intranasal nasal de PVP-I de los ejemplos inactiva SARS-CoV-2 en un sistema de cultivo celular Introducción:

[0235] Este estudio evaluó la capacidad de PVP-I para inactivar SARS-CoV-2, que se mostró que se replicaba eficazmente dentro del tracto respiratorio superior. Se evaluó la PVP-I frente a controles solo con solución salina y medios en paralelo para evaluar la presencia/ausencia de actividad viricida.

[0236] Objetivo del estudio:

[0237] El objetivo de este estudio es comparar y evaluar la actividad viricida de PVP-I contra la cepa SARS-CoV-2 (BetaCoV/Australia/VIC01/2020) en la línea celular humana de riñón de mono verde africano (Vero).

[0238] El impacto sobre la replicación del virus se evaluará cualitativamente para el ARN de SARS-CoV-2 usando un ensayo de PCR en tiempo real TaqMan específico de SARS que se dirige al gen E.

[0239] Materiales:

[0240] Virus

[0241] Se aisló SARS-CoV-2 (BetaCoV/Australia/VIC01/2020) y se cultivó por el Laboratorio de Referencia de Enfermedades Infecciosas de Victoria a partir de una muestra de paciente positivo en enero de 2020. La secuenciación del genoma completo confirmó la presencia de SARS-CoV-2 (ID de GenBank: MT007544). Soluciones de placebo y povidona yodada

[0242] Los ejemplos de PVP-I según la descripción se prepararon a una concentración de PVP-I entre el 0,1 % p/v y el 1,25 % p/v (designado como "PVP-I", esta sección de ejemplos)

[0243] Células

[0244] Se cultivaron células Vero en medio esencial mínimo de Eagle (Sigma-Aldrich, North Ryde, Australia) número de catálogo (M2279), suplementado con 1x aminoácidos no esenciales (NEAA) (Gibco, Mount Wanderley, Australia; número de catálogo 11140050) y suero bovino fetal inactivado por calor al 10 % (FBS: Bovogen, Melbourne, Australia; número de catálogo SFBS, lote# 1502B).

[0245] Métodos:

[0246] Siembra en placas de 96 pocillos

[0247] Las células Vero se tripsinizaron, se contaron y se sembraron en placas de 96 pocillos a una densidad celular de 1x104 células/pocillo en 200 ul de medio y se incubaron a 37 °C, CO<2>al 5 %. No se usaron los pocillos perimetrales externos de la placa, para minimizar los efectos de borde potenciales.

[0248] Incubación del virus con soluciones de tratamiento

[0249] Se incubaron 95 ul de cada solución de ensayo (solución salina o PVP-I) con 5 ul de cada virus a 37 °C durante 1 minuto. Al final de la incubación, la mezcla de solución de ensayo/virus se diluyó 1:10 con medio EMEM FBS al 2 % enfriado con hielo. Inmediatamente después de añadir medio enfriado con hielo, se añadieron 100 ul de la mezcla de ensayo para las muestras a las placas por triplicado (columna 2 a continuación). Nota: Se ensayó PVP-I por duplicado (PVP-I #1, PVP-I #2). Las muestras se mezclaron a fondo y se transfirieron 100 ul a la columna 3 con puntas de pipeta nuevas. Se transfirieron 100 ul de la columna 3 a la columna 4 y así sucesivamente hasta la columna 10. Se desecharon 100 ul de la columna 10, dejando un volumen final de 200 ul en los pocillos. La columna 11 contenía células solas con EMEM reciente al 2 % que sirvió como control sin virus. Las placas se incubaron a 37 °C, atmósfera de CO2 al 5 % durante 48 horas antes de la recogida.

[0250]

[0252] Purificación de ARN de SARS-CoV.

[0253] El ARN de SARS-CoV-2 se purificó a partir de 200 ul de sobrenadante/medio de cada pocillo de las placas de 96 pocillos usando el kit QIAamp 96 virus QIAcube HT y se procesó en la plataforma de extracción robótica QIAcube (QIAgen, Hilden, Alemania) para confirmar la presencia/ausencia de virus replicante.

[0254] RT-PCR Taqman de ARN de SARS-CoV.

[0255] El ARN purificado de SARS-CoV-2 se transcribió inversamente a ADNc usando el kit de ADNc Bioline Sensifast (número de catálogo CSA-01148; Londres, Reino Unido). Se realizaron ensayos en tiempo real usando el ensayo del gen E de SARS publicado [1] con cebadores y sondas (IDT, Singapur) y mezcla maestra de PCR universal rápida TaqMan ABI (2x) (número de catálogo 4352042; Thermofisher, Vilna, Lituania). Los ensayos se realizaron en una máquina de PCR en tiempo real rápida Thermofisher ABI 7500.

[0256] Resultados:

[0257] Evaluación por RT-PCR Taqman del ARN de SARS-CoV-2 en sobrenadantes de placas de 96 pocillos. Para confirmar la presencia o ausencia de SARS-CoV-2 replicante, se analizaron muestras de sobrenadante de 200 ul de todos los pocillos por triplicado para determinar la presencia de ARN de SARS-CoV-2 mediante RT-PCR Taqman.

[0258] Para establecer una línea base de valores de umbral de ciclo de RT-PCR (C<t>) para virus no replicantes, no viables, se titularon muestras de inóculo iniciales (0 h después de la infección) 1:3 (~0,5log10) a 1:19683 (4,3log10) y se sometieron a la RT-PCR Taqman específica del gen E. El SARS-CoV-2 solo, en presencia de solución salina, y Nasodina, muestra una relación lineal entre el valor de Ct y el factor de dilución (véanse las Figuras 1A, 2A). Se observaron valores solapantes para todas las condiciones, lo que indica que las soluciones de ensayo no tenían ningún efecto en la capacidad de nuestro ensayo para detectar ácido nucleico mediante RT-PCR en tiempo real.

[0259] Estudio de 48 h

[0260] Después de 48 h de incubación en células Vero, SARS-CoV-2 mostró una replicación robusta tanto con, como sin la presencia de solución salina (Figura 1B). Cuando se incubó en presencia de PVP-I, se observó una relación casi lineal entre los valores de Ct del ARN viral y el factor de dilución (donde los valores de Ct aumentan a medida que aumenta el factor de dilución), a niveles similares a los controles solo con inóculo, lo que indica la ausencia de cualquier crecimiento viral mensurable después del tratamiento con PVP-I y una reducción en lo detectable en al menos -2,4 Log10 en las muestras de PVP-I, lo que representa una reducción en las copias de ARN viral de más del 99 %.

[0261] Conclusión del estudio de 48 h:

[0262] El objetivo de este estudio fue comparar y evaluar la actividad viricida de la solución de PVP-I contra el SARS-CoV-2 recién surgido, el agente causante de la enfermedad de COVID-19.

[0263] Usando métodos de RT-PCR TaqMan en tiempo real se determinó que PVP-I posee una clara actividad viricida contra SARS-CoV-2 (reducción de -2,4 Log10, o >99 % de muerte) en comparación con solución salina sola. Estudio de 96 h

[0264] Después de 96 h de incubación en células Vero, SARS-CoV-2 en medio solo mostró una replicación robusta (Figura 2B), como se muestra por una disminución en el valor de Ct. Cuando se incubó en presencia de Nasodina, se observó una relación casi lineal entre los valores de Ct del ARN viral y el factor de dilución (donde los valores de Ct aumentan a medida que aumenta el factor de dilución), a niveles similares a los controles solo con inóculo, lo que indica la ausencia de cualquier crecimiento viral mensurable después del tratamiento con Nasodina y una reducción en el virus detectable en al menos -3,6 Log10 en las muestras de Nasodina, lo que representa una reducción en las copias de ARN viral de más del 99,97 %.

[0265] Conclusión:

[0266] El objetivo de este estudio fue comparar y evaluar la actividad viricida de la solución de PVP-I contra el SARS-CoV-2 recién surgido, el agente causante de la enfermedad de COVID-19.

[0267] Usando métodos de RT-PCR TaqMan en tiempo real se determinó que PVP-I posee una clara actividad viricida contra SARS-CoV-2 y basándose en los datos de RT-PCR obtenidos eliminó eficazmente el SARS-CoV-2 competente para la replicación presente en la muestra en comparación con medio solo tal como se evidencia por la falta de replicación viral en las diluciones cultivadas a partir de muestras tratadas con PVP-I en comparación con las muestras equivalentes no tratadas. Una comparación del número de copias de ARN viral asociado con cultivos derivados de la muestra de control no tratada menos diluida con la muestra de PVP-I equivalente indicó una reducción de -3,6 Log10 en las copias de ARN o una muerte mediada por PVP-I de >99,97 %. El grado de esta "muerte" cuantificable está limitado por el título de virus viables mensurables en la muestra de control.

Claims (15)

1. REIVINDICACIONES

1. Una preparación farmacéutica que comprende povidona-yodo (PVP-I) a una concentración mayor del 0,10 % p/v y menor de aproximadamente el 1,25 % p/v para su uso en un método para reducir el título viral de SARS-CoV-2 en un sujeto humano infectado con SARS-CoV-2, en donde la preparación se aplica en las fosas nasales del sujeto humano de 1 a 12 veces al día comenzando después o alrededor del tiempo de exposición al SARS-CoV-2 y/o después durante preferiblemente hasta 21 días, en donde la aplicación provoca la reducción del título viral del SARS-CoV-2 en el ser humano.

2. La preparación farmacéutica para su uso según se reivindica en la reivindicación 1, en donde el sujeto humano es un trabajador sanitario que está, o es probable que esté, expuesto al virus o pacientes infectados.

3. La preparación farmacéutica para su uso según se reivindica en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 2, en donde la concentración de PVP-I en la preparación farmacéutica aplicada en las fosas nasales, es de aproximadamente el 0,1 % a aproximadamente el 1,0 % p/v.

4. La preparación farmacéutica para su uso según se reivindica en una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 2, en donde la concentración de PVP-I en la preparación farmacéutica aplicada en las fosas nasales, es de aproximadamente el 0,2 % a aproximadamente el 0,5 % p/v.

5. La preparación farmacéutica para su uso según se reivindica en una de las reivindicaciones 1 a 2, en donde la concentración de PVP-I en la preparación farmacéutica aplicada en las fosas nasales, es de aproximadamente el 0,2 % a aproximadamente el 0,45 % p/v.

6. La preparación farmacéutica para su uso según se reivindica en cualquier reivindicación anterior, en donde la preparación farmacéutica está en una forma de dosificación seleccionada del grupo que consiste en soluciones intranasales, preparaciones liposomales, gotas, pulverizaciones, geles, aerosoles e inhaladores.

7. La preparación farmacéutica para su uso según se reivindica en una cualquiera de las reivindicaciones 4 a 6, en donde la preparación farmacéutica es una preparación intranasal de base acuosa en donde el agua constituye de aproximadamente el 80 % p/v a aproximadamente el 96 % p/v de la preparación total.

8. La preparación farmacéutica para su uso según se reivindica en una cualquiera de las reivindicaciones 4 a 7, en donde la preparación farmacéutica incluye adicionalmente una cantidad de yoduro de potasio de aproximadamente el 0,005 a aproximadamente el 0,05 % p/v de la preparación total.

9. La preparación farmacéutica para su uso según se reivindica en una cualquiera de las reivindicaciones 4 a 8, en donde la preparación farmacéutica incluye adicionalmente una cantidad de yodato de potasio de aproximadamente el 0,001 a aproximadamente el 0,03 % p/v de la preparación total.

10. La preparación farmacéutica para su uso según se reivindica en una cualquiera de las reivindicaciones 8 o 9, en donde la preparación farmacéutica es una preparación intranasal de base acuosa en donde el agua constituye de aproximadamente el 80 % p/v a aproximadamente el 96 % p/v de la preparación total y tiene un pH de aproximadamente 2-7, tal como un intervalo de pH de aproximadamente 3-6.

11. La preparación farmacéutica para su uso según se reivindica en una cualquiera de las reivindicaciones 4 a 10, en donde la preparación farmacéutica incluye adicionalmente una cantidad de humectante de aproximadamente el 1 a aproximadamente el 10 % p/v de la preparación total.

12. La preparación farmacéutica para su uso según se reivindica en una cualquiera de las reivindicaciones 4 a 11, en donde la preparación farmacéutica incluye adicionalmente una cantidad de un disolvente polar, tal como etanol, de aproximadamente el 0,2 a aproximadamente el 2 % p/v de la preparación total.

13. La preparación farmacéutica para su uso según se reivindica en una cualquiera de las reivindicaciones 4 a 12, en donde la preparación farmacéutica incluye adicionalmente una cantidad de un contrairritante o anestésico local, tal como mentol, de aproximadamente el 0,001 a aproximadamente el 1 % p/v de la preparación total.

14. La preparación farmacéutica para su uso según se reivindica en una cualquiera de las reivindicaciones 4 a 13, en donde la preparación farmacéutica incluye adicionalmente una cantidad de un conservante, tal como un conservante de sal de amonio cuaternario, de aproximadamente el 0,01 a aproximadamente el 0,5 % p/v de la preparación total.

15. La preparación farmacéutica para su uso según se reivindica en una cualquiera de las reivindicaciones 4 a 14, en donde la preparación farmacéutica incluye adicionalmente una cantidad de un tampón de aproximadamente el 0,05 a aproximadamente el 0,5 % p/v de la preparación total.