ES3058564T3 - Fxr (nr1h4) modulating compounds - Google Patents

Abstract

La presente divulgación se refiere en general a compuestos que se unen al FXR y actúan como agonistas del mismo. Además, se refiere al uso de dichos compuestos para la preparación de un medicamento para el tratamiento de enfermedades y/o afecciones mediante la unión de dichos compuestos a dicho receptor nuclear, así como a un proceso para la síntesis de dichos compuestos. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

[0001] DESCRIPCIÓN

[0002] Compuestos moduladores de FXR (NR1H4)

[0003] REFERENCIA CRUZADA A APLICACIONES RELACIONADAS

[0004] La presente solicitud de patente reivindica el beneficio de la prioridad de la Solicitud de Patente Provisional de EE. UU. N.º 62/792,714, depositada el 15 de enero de 2019, titulada "FXR (NR1H4) MODULATING COMPOUNDS".

[0005] LISTADO DE SECUENCIAS

[0006] El listado de secuencias asociado a esta solicitud se proporciona en formato de texto en lugar de una copia en papel. El nombre del archivo de texto que contiene el Listado de Secuencias es "1274_SequenceListing". El archivo de texto creado el 17 de diciembre de 2018 es de aproximadamente 1 kilobyte y se presentó electrónicamente a través de EFS-Web.

[0007] CAMPO

[0008] La presente divulgación se refiere a composiciones farmacéuticas que comprenden compuestos que se unen al Receptor Famesoide X (FXR) y actúan como agonistas o moduladores del mismo, y específicamente a composiciones farmacéuticas que comprenden de 7 mg a 350 mg de un compuesto que tiene la siguiente Fórmula (I):

[0011]

[0013] o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su administración como dosis diaria total para un humano adulto de 70 kg. La divulgación se refiere además a las composiciones farmacéuticas para su uso en el tratamiento y/o profilaxis de enfermedades y/o afecciones.

[0014] FONDO

[0015] El Receptor X Famesoide (FXR), también denominado a menudo NR1H4 (subfamilia 1 de receptores nucleares, grupo H, miembro 4) cuando se refiere al receptor humano, es un receptor hormonal nuclear. El FXR se ha asociado a múltiples funciones biológicas. El FXR se expresa principalmente en el hígado y en todo el tracto gastrointestinal, pero también se encuentra en el riñón, las glándulas suprarrenales y el ovario. El FXR está asociado al control de la expresión génica intracelular y puede estar implicado en la señalización paracrina y endocrina. En el intestino y el hígado, el FXR actúa como regulador de la homeostasis de los ácidos biliares y la lipogénesis hepática. El FXR también se ha asociado a las células de Kupffer y a las células endoteliales sinusoidales del hígado, donde se cree que tiene funciones relacionadas con la inflamación, la fibrosis y la hipertensión portal.

[0016] Se conocen varios agonistas de FXR y se están investigando en relación con varias afecciones fisiológicas, incluidas las enfermedades hepáticas. Los agonistas del FXR pueden tener efectos beneficiosos en la esteatosis, la inflamación lobular, el abombamiento hepatocelular y la fibrosis.

[0017] El agonismo de FXR puede producir diferentes efectos en diferentes regiones del cuerpo. En el intestino delgado distal y sistémicamente en órganos como el hígado, la activación del FXR provoca directamente la expresión y secreción de la hormona FGF19. El FGF19 modula la síntesis de ácidos biliares, lo que puede ser beneficioso, por ejemplo, en enfermedades hepáticas. Los agonistas del FXR también se han asociado a efectos perjudiciales, como el prurito. Tales efectos perjudiciales, y el grado en que se experimentan, podrían depender del lugar de agonismo del FXR. Por ejemplo, se ha sugerido que la pruritis está asociada al agonismo no intestinal de los FXR.

[0018] [0007]El documento US 2018/280394 A1 divulga un método de prevención y/o tratamiento de enfermedades hepáticas que comprende administrar un inhibidor específico de la acetil CoA carboxilasa (ACC) en combinación con un agonista específico de FXR a un paciente que lo necesita. El documento WO 2018/089212 A1 divulga un método de prevención y/o tratamiento de enfermedades hepáticas que comprende administrar un inhibidor específico de la quinasa reguladora de señales de apoptosis 1 (ASK 1) en combinación con un agonista específico de FXR a un paciente que lo necesite. El documento EP 3257847 A1 se refiere a un grupo de compuestos que actúan como agonistas de FXR. El documento WO 2018/075650 A1 divulga un método para tratar un trastorno hepático o un trastorno lipídico con un agonista β específico del receptor de la hormona tiroidea (THR).

[0019] Sigue existiendo la necesidad de agonistas de FXR con la potencia, selectividad y efectos perjudiciales reducidos deseables.

[0020] RESUMEN

[0021] La presente divulgación proporciona una composición farmacéutica que comprende de 7 mg a 350 mg de un compuesto de Fórmula (I):

[0024]

[0026] o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo para su administración como dosis diaria total para un humano adulto de 70 kg.

[0027] En una realización, la composición farmacéutica comprende además un portador farmacéuticamente aceptable.

[0028] También se proporciona la composición farmacéutica anterior para su uso en combinación con un inhibidor de la Quinasa Reguladora de la Señal de Apoptosis 1 (ASK1) para tratar y/o prevenir una enfermedad hepática.

[0029] También se proporciona la composición farmacéutica anterior para su uso en combinación con un inhibidor de la Acetil CoA Carboxilasa (ACC) para tratar y/o prevenir una enfermedad hepática.

[0030] También se proporciona la composición farmacéutica anterior para su uso en combinación con un agonista β del Receptor de la Hormona Tiroidea (THR) para tratar y/o prevenir una enfermedad hepática.

[0031] DESCRIPCIÓN DE LAS FIGURAS

[0032]

[0033] La FIG.1 representa un gráfico de la concentración plasmática de FGF19 a lo largo del tiempo en mono cynomolgus tras la administración con el compuesto del Ejemplo 1.

[0034] La FIG.2 representa un gráfico de la concentración plasmática de FGF19 a lo largo del tiempo en el mono cynomolgus tras la administración con el compuesto del Ejemplo Comparativo 1.

[0035] La FIG.3 representa un gráfico de la concentración plasmática de FGF19 a lo largo del tiempo en mono cynomolgus tras la administración con el compuesto del Ejemplo Comparativo 2.

[0036] La FIG.4 es un difractograma de rayos X en polvo de la Forma I de mesilato de Fórmula (I).

[0037] La FIG.5 es una curva DSC de la Forma I de mesilato de Fórmula (I).

[0038] La FIG.6 es una curva TGA de la Forma I de mesilato de Fórmula (I).

[0039] DESCRIPCIÓN DETALLADA

[0040] La presente divulgación se refiere a composiciones farmacéuticas relacionadas con agonistas de FXR y las composiciones farmacéuticas para su uso en combinación con un inhibidor de ASK 1, un inhibidor de ACC o un agonista de THR β para tratar y/o prevenir enfermedades hepáticas.

[0041] [0016]Los agonistas de FXR se expresan en el hígado y en todo el tracto gastrointestinal, donde su acción o inacción puede desempeñar un papel en una o más enfermedades del hígado, como NASH, PSC y/o fibrosis hepática. Sin embargo, también se han identificado agonistas de FXR en otras regiones del cuerpo, en cuyo caso su función puede variar. El FGF19 es el principal gen diana del FXR en las células epiteliales del íleon. La activación fisiológica del FXR ileal por los ácidos biliares provoca la secreción de FGF19. En el hígado, el agonismo del FXR y la señalización del FGF19 tienen funciones superpuestas y distintas. Por ejemplo, ambas vías suprimen la síntesis de ácidos biliares. El agonismo del FXR en los hepatocitos regula indirectamente a la baja muchas de las mismas enzimas que reduce el FGF19.

[0042] Los agonistas de FXR pueden ser útiles en el tratamiento y la prevención de diversas afecciones, incluida la enfermedad hepática. Las enfermedades hepáticas pueden incluir daños agudos o crónicos en el hígado, por ejemplo, por infección, lesión, acumulación anormal de sustancias normales en la sangre u otras causas. Aunque se conocen muchos agonistas de FXR y análogos relacionados, estos agonistas de FXR pueden presentar inconvenientes como una eficacia deficiente, problemas de metabolismo y/o acontecimientos adversos.

[0043] En el presente documento se describen agonistas de FXR y composiciones relacionadas. Los agonistas de FXR aquí divulgados pueden, sorprendentemente, mantener un buen efecto terapéutico a la vez que minimizan los efectos adversos y los problemas de metabolismo.

[0044] En algunas realizaciones, los agonistas de FXR aquí descritos pueden tener una potencia celular deseable. Por ejemplo, en algunas realizaciones, una alta potencia celular podría proporcionar un mayor agonismo de FXR con dosis más bajas del fármaco administrado en relación con compuestos que tienen una potencia celular más baja.

[0045] En algunas realizaciones, la presente divulgación proporciona agonistas FXR que pueden demostrar altos niveles de agonismo FXR en el tracto gastrointestinal con agonismo FXR sistémico reducido. Los agonistas de FXR descritos en el presente documento pueden provocar un aumento de la secreción de FGF 19 con la administración oral, mientras que el aumento de FGF 19 con la administración intravenosa es mínimo. Un menor agonismo sistémico del FXR puede ser ventajoso, por ejemplo al reducir y/o limitar la posibilidad de ciertas reacciones adversas, como el prurito, o al reducir los riesgos de posibles interacciones farmacológicas con fármacos sistémicos.

[0046] En algunas realizaciones, los agonistas de FXR aquí descritos tienen una buena selectividad de diana. Por ejemplo, los agonistas de FXR descritos en el presente documento agonizan FXR y no alteran significativamente la actividad de TGR5 y/u otros receptores hormonales nucleares relacionados con FXR. En algunas realizaciones, los agonistas de FXR descritos en el presente documento agonizan preferentemente el FXR intestinal sobre el FXR hepático.

[0047] Ventajosamente, los agonistas de FXR dosificados por vía oral aquí divulgados pueden producir aumentos dependientes de la dosis en los niveles plasmáticos de FGF19 y disminuciones en los niveles séricos de C4, lo que indica una síntesis reducida de ácidos biliares.

[0048] Definiciones y Parámetros Generales

[0049] Tal como se utilizan en la presente especificación, los siguientes términos y frases tienen generalmente el significado que se indica a continuación, excepto en la medida en que el contexto en el que se utilizan indique lo contrario.

[0050] La referencia a "aproximadamente" un valor o parámetro incluye (y describe) realizaciones dirigidas a ese valor o parámetroper se. En ciertas realizaciones, el término "aproximadamente" incluye la cantidad indicada ± 10%. En otras realizaciones, el término "aproximadamente" incluye la cantidad indicada ± 5%. En algunas otras realizaciones, el término "aproximadamente" incluye la cantidad indicada ± 1%. Además, el término "aproximadamente X" incluye la descripción de "X". Asimismo, las formas singulares "un" y "el" incluyen referencias plurales a menos que el contexto dicte claramente lo contrario.

[0051] Las divulgaciones descritas de forma ilustrativa en el presente documento pueden practicarse adecuadamente en ausencia de cualquier elemento o elementos, limitación o limitaciones, no divulgados específicamente en el presente documento. Así, por ejemplo, los términos "que comprenda", "que incluya", "que contenga", etc. deben interpretarse de forma amplia y sin limitaciones. Además, los términos y expresiones empleados aquí se han utilizado como términos de descripción y no de limitación, y no hay intención en el uso de tales términos y expresiones de excluir cualquier equivalente de las características mostradas y descritas o partes de las mismas, pero se reconoce que varias modificaciones son posibles dentro del alcance de la divulgación reivindicada.

[0052] En el hígado humano, las UDP-glucuronosiltransferasas actúan sobre ciertos compuestos que tienen grupos amino, carbamilo, tio (sulfhidrilo) o hidroxilo para conjugar el difosfato de uridina-α-D-ácido glucurónico a través de enlaces glucosídicos, o para esterificar compuestos con grupos carboxi o hidroxilo en el proceso del metabolismo de fase II. Los compuestos de la presente divulgación pueden glucuronidarse, es decir, conjugarse con ácido glucurónico, para formar glucurónidos, en particular (β-D)glucurónidos.

[0053] Un paso en la formación de la bilis es la conjugación de los ácidos biliares individuales con un aminoácido, particularmente glicina o taurina. Los compuestos de la presente divulgación pueden conjugarse con glicina o taurina en una posición sustituible.

[0054] Los compuestos de la presente divulgación pueden estar en forma de una sal farmacéuticamente aceptable. El término "sales farmacéuticamente aceptables" se refiere a sales preparadas a partir de bases o ácidos no tóxicos farmacéuticamente aceptables, incluyendo bases o ácidos inorgánicos y bases o ácidos orgánicos. Los compuestos de la presente divulgación pueden estar en forma de una sal farmacéuticamente aceptable. El término "sales farmacéuticamente aceptables" se refiere a sales preparadas a partir de bases o ácidos no tóxicos farmacéuticamente aceptables, incluyendo bases o ácidos inorgánicos y bases o ácidos orgánicos. En caso de que los compuestos de la presente divulgación contengan uno o más grupos ácidos o básicos, la divulgación también comprende sus correspondientes sales farmacéutica o toxicológicamente aceptables, en particular sus sales farmacéuticamente utilizables. Así, los compuestos de la presente divulgación que contienen grupos ácidos pueden estar presentes en estos grupos y pueden utilizarse según la divulgación, por ejemplo, como sales de metales alcalinos, sales de metales alcalinotérreos o sales de amonio. Ejemplos más precisos de tales sales incluyen sales de sodio, sales de potasio, sales de calcio, sales de magnesio o sales con amoníaco o aminas orgánicas como, por ejemplo, etilamina, etanolamina, trietanolamina, aminoácidos u otras bases conocidas por los expertos en la materia. Los compuestos de la presente divulgación que contienen uno o más grupos básicos, es decir, grupos que pueden protonarse, pueden estar presentes y pueden utilizarse según la divulgación en forma de sus sales de adición con ácidos inorgánicos u orgánicos. Ejemplos de ácidos adecuados incluyen cloruro de hidrógeno, bromuro de hidrógeno, ácido fosfórico, ácido sulfúrico, ácido nítrico, ácido metanosulfónico, ácido p-toluenosulfónico, ácidos naftalendisulfónicos, ácido oxálico, ácido acético, ácido tartárico, ácido láctico, ácido salicílico, ácido benzoico, ácido fórmico, ácido propiónico, ácido piválico, ácido dietilacético, ácido malónico, ácido succínico, ácido pimélico, ácido fumárico, ácido maleico, ácido málico, ácido sulfamínico, ácido fenilpropiónico, ácido glucónico, ácido ascórbico, ácido isonicotínico, ácido cítrico, ácido adípico y otros ácidos conocidos por los expertos en la materia.

[0056] Si los compuestos de la presente divulgación contienen simultáneamente grupos ácidos y básicos en la molécula, la divulgación también incluye, además de las formas de sal mencionadas, sales internas o betaínas (zwitteriones). Las sales respectivas pueden obtenerse por métodos habituales conocidos por el experto en la materia como, por ejemplo, poniéndolas en contacto con un ácido o una base orgánicos o inorgánicos en un disolvente o dispersante, o por intercambio aniónico o catiónico con otras sales.

[0058] En algunas realizaciones, una sal farmacéuticamente aceptable de un compuesto de Fórmula (I) incluye un zwitterion. Por ejemplo, un compuesto de Fórmula (I) puede formar un zwitterión como sigue:

[0060]

[0063] La presente divulgación también incluye todas las sales de los compuestos de la presente divulgación que, debido a su baja compatibilidad fisiológica, no son directamente adecuadas para su uso en productos farmacéuticos, pero que pueden utilizarse, por ejemplo, como intermedios para reacciones químicas o para la preparación de sales farmacéuticamente aceptables. Los ácidos y las bases útiles para reaccionar con un compuesto subyacente y formar sales farmacéuticamente aceptables (sales de adición de ácido o de adición de base, respectivamente) son conocidos por los expertos en la materia. Del mismo modo, los métodos de preparación de sales farmacéuticamente aceptables a partir de un compuesto subyacente (previa divulgación) son conocidos por un experto en la materia y se divulgan, por ejemplo, en Berge, et al. Journal of Pharmaceutical Science, enero de 1977, vol.66, nº 1, y otras fuentes.

[0065] Además, los compuestos aquí divulgados pueden estar sujetos a tautomerismo. Cuando puede producirse tautomería, p. ej., tautomería ceto-enol, de los compuestos, las formas individuales, como p. ej., la forma ceto y la forma enol, están cada una dentro del alcance de la divulgación, así como sus mezclas en cualquier proporción. Lo mismo se aplica a los estereoisómeros, como p. ej., enantiómeros, isómeros cis/trans, diastereómeros, conformadores y similares.

[0067] El término "grupo protector" se refiere a una fracción de un compuesto que enmascara o altera las propiedades de un grupo funcional o las propiedades del compuesto en su conjunto. Los grupos protectores químicos y las estrategias de protección/desprotección son bien conocidos en la técnica.Véase,p. ej., Protective Groups in Organic Chemistry, Theodora W. Greene, John Wiley & Sons, Inc., Nueva York, 1991. Los grupos protectores se utilizan a menudo para enmascarar la reactividad de ciertos grupos funcionales, para ayudar en la eficiencia de las reacciones químicas deseadas, p. ej., haciendo y rompiendo enlaces químicos de una manera ordenada y planificada. El término "desprotección" se refiere a la eliminación del grupo protector.

[0068] Un "grupo saliente" incluye un fragmento molecular que puede partir con un par de electrones de un enlace covalente al átomo de carbono reaccionante durante una reacción química.

[0070] Se apreciará por el experto que cuando las listas de sustituyentes alternativos incluyen miembros que, debido a sus requisitos de valencia u otras razones, no pueden utilizarse para sustituir a un grupo particular, la lista está destinada a ser leída con el conocimiento del experto para incluir sólo aquellos miembros de la lista que son adecuados para sustituir al grupo particular.

[0072] Además, los compuestos de la presente divulgación pueden estar presentes en forma de solvatos, como los que incluyen como solvato agua, o solvatos farmacéuticamente aceptables, como alcoholes, en particular etanol. Un "solvato" se forma por la interacción de un disolvente y un compuesto.

[0074] En ciertas realizaciones, se proporcionan isómeros ópticos, racematos u otras mezclas de los mismos de los compuestos aquí descritos o una sal farmacéuticamente aceptable o una mezcla de los mismos. Si se desea, los isómeros pueden separarse por métodos bien conocidos en la técnica, p. ej., mediante cromatografía líquida. En esas situaciones, el enantiómero o diastereómero único, es decir, la forma ópticamente activa, puede obtenerse por síntesis asimétrica o por resolución. La resolución puede llevarse a cabo, por ejemplo, mediante métodos convencionales como la cristalización en presencia de un agente de resolución, o la cromatografía, utilizando, por ejemplo, una columna quiral de cromatografía líquida de alta presión (HPLC).

[0076] Un "estereoisómero" se refiere a un compuesto formado por los mismos átomos unidos por los mismos enlaces pero con estructuras tridimensionales diferentes, que no son intercambiables. La presente divulgación contempla varios estereoisómeros y mezclas de los mismos e incluye "enantiómeros", que se refiere a dos estereoisómeros cuyas moléculas son imágenes especulares no superponibles entre sí. Los "diastereómeros" son estereoisómeros que tienen al menos dos átomos asimétricos, pero que no son imágenes especulares entre sí.

[0078] Los compuestos aquí divulgados y sus sales farmacéuticamente aceptables pueden, en algunas realizaciones, incluir un centro asimétrico y por lo tanto pueden dar lugar a enantiómeros, diastereómeros y otras formas estereoisoméricas que pueden definirse, en términos de estereoquímica absoluta, como (R)- o (S)- o, como (D)- o (L)-para aminoácidos. Algunas realizaciones incluyen todos los isómeros posibles, así como sus formas racémicas y ópticamente puras. Los isómeros ópticamente activos (+) y (-), (R)- y (S)-, o (D)- y (L)- pueden prepararse utilizando sintrones quirales o reactivos quirales, o resolverse mediante técnicas convencionales, por ejemplo, cromatografía y cristalización fraccionada. Las técnicas convencionales para la preparación/aislamiento de enantiómeros individuales incluyen la síntesis quiral a partir de un precursor ópticamente puro adecuado o la resolución del racemato (o el racemato de una sal o derivado) utilizando, por ejemplo, cromatografía líquida de alta presión (HPLC) quiral. Cuando los compuestos aquí descritos contienen dobles enlaces olefínicos u otros centros de asimetría geométrica, y a menos que se especifique lo contrario, se pretende que los compuestos incluyan isómeros geométricos tantoEcomoZ.

[0080] Las composiciones proporcionadas en el presente documento que incluyen un compuesto descrito en el presente documento o sales farmacéuticamente aceptables, un isómero o una mezcla de los mismos pueden incluir mezclas racémicas, o mezclas que contienen un exceso enantiomérico de un enantiómero o diastereómeros simples o mezclas diastereoméricas. Todas las formas isoméricas de estos compuestos se incluyen expresamente en el presente documento como si todas y cada una de las formas isoméricas se enumeraran específica e individualmente.

[0082] Cualquier fórmula o estructura que se indique en el presente documento, también pretende representar formas no etiquetadas, así como formas isotópicamente etiquetadas de los compuestos. Los compuestos isotópicamente marcados tienen estructuras representadas por las fórmulas dadas en este documento, excepto que uno o más átomos se sustituyen por un átomo que tiene una masa atómica seleccionada o un número másico. Ejemplos de isótopos que pueden incorporarse a los compuestos de la divulgación incluyen isótopos de hidrógeno, carbono, nitrógeno, oxígeno, fósforo, flúor y cloro, tales como, pero no limitados a<2>H (deuterio, D),<3>H (tritio),<11>C,<13>C,<14>C,<15>N,<18>F,<31>P,<32>P,<35>S,<36>Cl, y<125>I. Diversos compuestos marcados isotópicamente de la presente divulgación, por ejemplo aquellos a los que se incorporan isótopos radiactivos como<3>H,<13>C, y<14>C. Dichos compuestos marcados isotópicamente pueden ser útiles en estudios metabólicos, estudios cinéticos de reacción, técnicas de detección o formación de imágenes, como la tomografía por emisión de positrones (PET) o la tomografía computarizada por emisión monofotónica (SPECT), incluidos los ensayos de distribución tisular de fármacos o sustratos, o en el tratamiento radiactivo de pacientes. Los compuestos isotópicamente marcados de la presente divulgación pueden prepararse generalmente llevando a cabo los procedimientos divulgados en los esquemas o en los ejemplos y preparaciones descritos a continuación, sustituyendo un reactivo isotópicamente marcado fácilmente disponible por un reactivo no isotópicamente marcado.

[0084] La divulgación también incluye "análogos deuterados" de los compuestos aquí divulgados, en los que de 1 a n hidrógenos unidos a un átomo de carbono se sustituyen por deuterio, siendo n el número de hidrógenos en la molécula. Dichos compuestos pueden presentar una mayor resistencia al metabolismo y, por tanto, ser útiles para aumentar la semivida de cualquier compuesto de Fórmula (I) cuando se administra a un mamífero, p. ej., un ser humano. Véase, por ejemplo, Foster, "Deuterium Isotope Effects in Studies of Drug Metabolism", Trends Pharmacol. Sci.5(12):524-527 (1984). Dichos compuestos se sintetizan mediante métodos bien conocidos en la técnica, por ejemplo, empleando materiales de partida en los que uno o más hidrógenos han sido reemplazados por deuterio.

[0085] Los compuestos terapéuticos de la divulgación marcados con deuterio o sustituidos pueden tener propiedades DMPK (metabolismo de fármacos y farmacocinética) beneficiosas, relacionadas con la distribución, el metabolismo y la excreción (ADME). La sustitución por isótopos más pesados, como el deuterio, puede ofrecer ciertas ventajas terapéuticas derivadas de una mayor estabilidad metabólica, por ejemplo, una mayor semividain vivo, menores necesidades de administración y/o una mejora del índice terapéutico. Un compuesto marcado con<18>F puede ser útil para estudios PET o SPECT.

[0086] La concentración de dicho isótopo más pesado, específicamente el deuterio, puede definirse por un factor de enriquecimiento isotópico. En los compuestos de esta divulgación, cualquier átomo no designado específicamente como un isótopo particular se entiende que representa cualquier isótopo estable de ese átomo. A menos que se indique lo contrario, cuando una posición se designa específicamente como "H" o "hidrógeno", se entiende que la posición tiene hidrógeno en su composición isotópica de abundancia natural. En consecuencia, en los compuestos de esta divulgación cualquier átomo específicamente designado como deuterio (D) se entiende que representa al deuterio.

[0087] Además, la presente divulgación proporciona composiciones farmacéuticas que comprenden un compuesto de la presente divulgación, o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo como ingrediente activo junto con un portador farmacéuticamente aceptable.

[0088] Por "composición farmacéutica" se entiende uno o más principios activos y uno o más principios inertes que constituyen el soporte, así como cualquier producto que resulte, directa o indirectamente, de la combinación, complejación o agregación de dos o más de los principios, o de la disociación de uno o más de los principios, o de otros tipos de reacciones o interacciones de uno o más de los principios. En consecuencia, las composiciones farmacéuticas de la presente divulgación pueden abarcar cualquier composición hecha mezclando al menos un compuesto de la presente divulgación y un portador farmacéuticamente aceptable.

[0089] Como se usa aquí, "portador farmacéuticamente aceptable" incluye excipientes o agentes tales como disolventes, diluyentes, medios de dispersión, recubrimientos, agentes antibacterianos y antifúngicos, agentes isotónicos y retardadores de la absorción y similares que no son deletéreos para el compuesto divulgado o el uso del mismo. El uso de tales portadores y agentes para preparar composiciones de sustancias farmacéuticamente activas es bien conocido en la técnica (véase, p. ej.,Remington's Pharmaceutical Sciences, Mace Publishing Co., Philadelphia, PA 17th Ed. (1985); y Modern Pharmaceutics, Marcel Dekker, Inc.3ª Ed. (G.S. Banker & C.T. Rhodes, Eds.)).

[0090] Los términos "cantidad terapéuticamente eficaz" y "cantidad eficaz" se usan de manera intercambiable y se refieren a una cantidad de un compuesto que es suficiente para efectuar el tratamiento como se define a continuación, cuando se administra a un paciente (p. ej., un humano) que necesita dicho tratamiento en una o más dosis. La cantidad terapéuticamente eficaz variará en función del paciente, la enfermedad tratada, el peso y/o la edad del paciente, la gravedad de la enfermedad o la forma de administración, según determine un prescriptor o cuidador cualificado.

[0091] El término "tratamiento" o "tratar" significa administrar un compuesto o sal farmacéuticamente aceptable de fórmula (I) con el fin de: (i) retrasar la aparición de una enfermedad, es decir, hacer que los síntomas clínicos de la enfermedad no se desarrollen o retrasar el desarrollo de la misma; (ii) inhibir la enfermedad, es decir, detener el desarrollo de los síntomas clínicos; y/o (iii) aliviar la enfermedad, es decir, causar la regresión de los síntomas clínicos o la gravedad de la misma.

[0092] Lista de abreviaturas y Acrónimos

[0094]

[0095] (continuación)

[0096]

[0097] (continuación)

[0098]

[0099] (continuación)

[0101]

[0103] Tal como se utiliza en el presente documento, un "agonista de FXR" se refiere a cualquier agente capaz de unirse y activar el Receptor X Famesoide (FXR), que puede denominarse receptor de ácidos biliares (BAR) o receptor NR1H4 (receptor nuclear subfamilia 1, grupo H, miembro 4). Los agonistas del FXR pueden actuar como agonistas o agonistas parciales del FXR. El agente puede ser un compuesto químico o una molécula biológica (p. ej., una proteína o un anticuerpo). La actividad de un agonista de FXR puede medirse por varios métodos diferentes, p. ej., en un ensayo in vitro utilizando el ensayo libre de células de transferencia de energía por resonancia de fluorescencia (FRET) como se describe en Pellicciari, et al. Journal of Medicinal Chemistry, 2002 vol.15, N.º 45:3569-72.

[0104] Tal como se menciona en el presente documento, un "inhibidor de ASK1" puede ser cualquier agente capaz de inactivar una proteína quinasa reguladora de la señal de apoptosis 1 (ASK1). El agente puede ser un compuesto químico o una molécula biológica (p. ej., una proteína o un anticuerpo). La actividad de la proteína ASK1 puede medirse por varios métodos diferentes. Por ejemplo, la actividad de una proteína ASK1 puede determinarse basándose en la capacidad de la proteína ASK1 para fosforilar una proteína sustrato. Se conocen métodos para identificar un inhibidor de ASK1 (véase, p. ej.,U.S. documento de EE. UU. 2007/0276050; y documento de EE. UU. 2011/0009410). Las proteínas sustrato de ASK1 ejemplares incluyen MAPKK3, MAPKK4, MAPKK6, MAPKK7, o fragmentos de las mismas. La actividad de la proteína ASK1 también puede medirse por el nivel de fosforilación de la proteína ASK1, por ejemplo, el nivel de fosforilación de un residuo de treonina en la proteína ASK1 correspondiente a la treonina 838 (T838) de una proteína ASK1 humana de longitud completa o a la treonina 845 (T845) de una proteína ASK1 de ratón de longitud completa. Por ejemplo, cuando la proteína ASK1 comprende una secuencia de proteína ASK1 humana de longitud completa, un inhibidor de ASK1 puede atenuar la fosforilación de T838 en la secuencia de proteína ASK1 humana de longitud completa. Se puede utilizar un anticuerpo específico contra ASK1 T838 humano o ASK1 T845 de ratón para detectar el nivel de fosfoforilación.

[0105] Como se usa aquí, un "inhibidor de ACC" se refiere a cualquier agente que es capaz de unirse e inhibir la Acetil-CoA carboxilasa (ACC). Los inhibidores de la ACC pueden actuar como inhibidores o inhibidores parciales de la ACC. El agente puede ser un compuesto químico o una molécula biológica (p. ej., una proteína o un anticuerpo). La actividad de un inhibidor de ACC puede medirse por métodos conocidos en la técnica, como los descritos y citados en la Patente de EE. UU. N.º 8.969.557, y/o en Publicación de Solicitud de Patente de EE. UU. N.º 20160108061.

[0106] Tal como se utiliza en el presente documento, un "agonista β del receptor de la hormona tiroidea" o un "agonista β del THR" se refiere a cualquier agente capaz de unirse y activar el receptor beta de la hormona tiroidea, que puede denominarse receptor NR1A2 (receptor nuclear de la subfamilia 1, grupo A, miembro 2). Los agonistas de la THR β pueden actuar como agonistas o agonistas parciales de la THR β. El agente puede ser un compuesto químico o una molécula biológica (p. ej., una proteína o un anticuerpo). La actividad de un agonista THR β puede medirse por métodos conocidos.

[0107] Compuestos

[0108] Se proporciona aquí una composición farmacéutica que comprende de 7 mg a 350 mg de un compuesto que tiene la siguiente Fórmula (I):

[0109]

[0111] o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su administración como dosis diaria total para un humano adulto de 70 kg.

[0112] En algunas realizaciones, la sal farmacéuticamente aceptable es una sal de mesilato. Por ejemplo, se proporciona un compuesto de la siguiente fórmula:

[0115]

[0118] Forma Sólidas

[0119] En algunas realizaciones, la composición farmacéutica comprende una forma sólida de un compuesto de Fórmula (I) o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo. Las formas sólidas, como las cristalinas, pueden proporcionar la ventaja de la biodisponibilidad y la estabilidad que podrían ser adecuadas para su uso como ingrediente activo en una composición farmacéutica.

[0120] Las variaciones en la estructura cristalina de una sustancia farmacéutica o ingrediente activo pueden afectar a la velocidad de disolución (que puede afectar a la biodisponibilidad, etc.), la fabricabilidad (p. ej., la facilidad de manipulación, la capacidad de preparar de forma coherente dosis de potencia conocida) y la estabilidad (p. ej., la estabilidad térmica, la vida útil, etc.) de un producto farmacéutico o ingrediente activo. Tales variaciones pueden afectar a la preparación o formulación de composiciones farmacéuticas en diferentes formas de administración o administración, como soluciones o formas sólidas de administración oral, incluidos comprimidos y cápsulas. En comparación con otras formas, como las formas no cristalinas o amorfas, las formas cristalinas pueden proporcionar la higroscopicidad deseada o adecuada, los controles del tamaño de las partículas, la velocidad de disolución, la solubilidad, la pureza, la estabilidad física y química, la fabricabilidad, el rendimiento y/o el control del proceso.

[0121] En algunas realizaciones, se proporciona una forma sólida estable de un compuesto de Fórmula (I). Por ejemplo, una sal de mesilato de Fórmula (I) puede producirse como una forma cristalina estable que no se convierte a otras formas polimórficas y/o que se forma como la misma forma polimórfica bajo una variedad de condiciones de fabricación.

[0122] Así, las formas cristalinas del compuesto de Fórmula (I) pueden proporcionar ventajas tales como mejorar: el proceso de fabricación del compuesto, la estabilidad o almacenabilidad de una forma farmacéutica del compuesto, la estabilidad o almacenabilidad de una sustancia farmacéutica del compuesto y/o la biodisponibilidad y/o estabilidad del compuesto como agente activo.

[0123] En algunas realizaciones, la forma sólida es la Forma I de mesilato de Fórmula (I).

[0124] La Forma I de mesilato de Fórmula (I) puede caracterizarse por un difractograma de polvo de rayos X en el que la forma sólida presenta un patrón de difracción de rayos X en polvo (XRPD) sustancialmente como se muestra en la FIG.

[0125] 4. La Forma I de mesilato de Fórmula (I) puede presentar un termograma de calorimetría diferencial de barrido (DSC) sustancialmente como se muestra en la FIG. 5. La Forma I de mesilato de Fórmula (I) puede exhibir un termograma de análisis termogravimétrico (TGA) sustancialmente como se muestra en la FIG.6.

[0126] En algunas realizaciones de la Forma I de mesilato de Fórmula (I), se aplican al menos una, al menos dos o todas las siguientes (a)-(c): (a) Forma I de mesilato de Fórmula (I) tiene un patrón XRPD sustancialmente como se muestra en la FIG. 4; (b) la Forma I de mesilato de Fórmula (I) tiene un termograma DSC sustancialmente como se muestra en la FIG.5; (c) la Forma I de mesilato de Fórmula (I) tiene un termograma TGA sustancialmente como se muestra en la FIG.

[0127] 6.

[0128] En algunas realizaciones, la Forma I de mesilato de Fórmula (I) tiene al menos una, al menos dos o al menos tres de las siguientes propiedades:

[0129] a) un patrón XRPD sustancialmente como se muestra en la FIG.4

[0130] b) un termograma DSC sustancialmente como se muestra en la FIG.5

[0131] c) un termograma TGA sustancialmente como se muestra en la FIG.6.

[0132] En algunas realizaciones, la Forma I de mesilato de Fórmula (I) tiene un patrón XRPD que muestra al menos dos, al menos tres, al menos cuatro, al menos cinco, al menos seis, al menos siete, al menos ocho, o al menos nueve de las reflexiones de grado 2θ con la mayor intensidad como el patrón XRPD sustancialmente como se muestra en la FIG.4.

[0133] En ciertas realizaciones, la Forma I de mesilato de Fórmula (I) tiene un patrón XRPD que comprende reflexiones de grado 2θ (± 0,2 grados 2θ) a 9,6, 19,3 y 22,6 grados. En algunas realizaciones, la Forma I de mesilato de Fórmula (I) tiene un patrón XRPD que comprende reflexiones de grado 2θ (± 0,2 grados 2θ) a 9,6, 19,3 y 22,6 grados y una, dos o tres de las reflexiones de grado 2θ (± 0,2 grados 2θ) a 3,2, 6,4 y 12,8 grados. En algunas realizaciones, la Forma I de mesilato de Fórmula (I) tiene un patrón XRPD que comprende reflexiones de grado 2θ (± 0,2 grados 2θ) a 9,6, 19,3 y 22,6 grados y una, dos o tres de las reflexiones de grado 2θ (± 0,2 grados 2θ) a 22,1, 25,8 y 29,1 grados. En algunas realizaciones, la Forma I de mesilato de Fórmula (I) tiene un patrón XRPD que comprende reflexiones de grado 2θ (± 0,2 grados 2θ) a 9,6, 19,3, 22,6, 3,2, 6,4, 12,8, 22,1, 25,8 y 29,1 grados.

[0134] En algunas realizaciones, la Forma I de mesilato de Fórmula (I) tiene un termograma de calorimetría diferencial de barrido que comprende un pico endotérmico con inicio a aproximadamente 221 °C.

[0135] Composiciones Farmacéuticas y Modos de Administración

[0136] Además, la presente divulgación proporciona composiciones farmacéuticas que comprenden al menos un compuesto de la presente divulgación, o una sal o solvato farmacéuticamente aceptable del mismo como ingrediente activo junto con un portador farmacéuticamente aceptable.

[0137] La composición farmacéutica de la presente divulgación puede comprender adicionalmente uno o más compuestos como ingredientes activos, como otros moduladores de receptores nucleares.

[0138] Las composiciones son adecuadas para administración oral, rectal, tópica, parenteral (incluyendo subcutánea, intramuscular e intravenosa), ocular (oftálmica), pulmonar (inhalación nasal o bucal) o nasal, aunque la vía más adecuada en cada caso dependerá de la naturaleza y gravedad de las afecciones tratadas y de la naturaleza del principio activo. Pueden presentarse convenientemente en forma de administración unitaria y prepararse por cualquiera de los métodos bien conocidos en el arte de la farmacia.

[0139] En el uso práctico, los compuestos de la presente divulgación pueden combinarse como el ingrediente activo en una mezcla íntima con un portador farmacéutico de acuerdo con las técnicas convencionales de composición farmacéutica. El portador puede adoptar una amplia variedad de formas dependiendo de la forma de preparación deseada para la administración, p. ej., oral o parenteral (incluida la intravenosa). En la preparación de las composiciones para administración oral, puede emplearse cualquiera de los medios farmacéuticos habituales, como, por ejemplo, agua, glicoles, aceites, alcoholes, agentes aromatizantes, conservantes, colorantes y similares en el caso de preparaciones orales líquidas, como, por ejemplo, suspensiones, elixires y soluciones; o portadores como almidones, azúcares, celulosa microcristalina, diluyentes, agentes granulantes, lubricantes, aglutinantes, agentes desintegrantes y similares en el caso de preparados orales sólidos como, por ejemplo, polvos, cápsulas duras y blandas y comprimidos, prefiriéndose los preparados orales sólidos a los líquidos.

[0140] [0071]Debido a su facilidad de administración, los comprimidos y las cápsulas representan la forma unitaria de administración oral más ventajosa en cuyo caso se emplean portadores farmacéuticos sólidos. Si se desea, los comprimidos pueden recubrirse mediante técnicas acuosas o no acuosas estándar. Dichas composiciones y preparados deben contener al menos un 0,1 por ciento de compuesto activo. El porcentaje de compuesto activo en estas composiciones puede, por supuesto, ser variado y puede ser convenientemente entre aproximadamente 2 por ciento a aproximadamente 60 por ciento del peso de la unidad. La cantidad de compuesto activo en tales composiciones terapéuticamente útiles es tal que se obtendrá una dosis eficaz. Los compuestos activos también pueden administrarse por vía intranasal como, por ejemplo, gotas líquidas o aerosoles.

[0141] Los comprimidos, píldoras, cápsulas y similares también pueden contener un aglutinante como goma tragacanto, acacia, almidón de maíz o gelatina; excipientes como fosfato dicálcico; un agente desintegrador como almidón de maíz, almidón de patata, ácido algínico; un lubricante como estearato de magnesio; y un agente edulcorante como sacarosa, lactosa o sacarina. Cuando una forma de unidad de administración es una cápsula, puede contener, además de los materiales del tipo anterior, un portador líquido como un aceite graso.

[0142] Otros materiales diversos pueden estar presentes como recubrimientos o para modificar la forma física de la unidad de administración. Por ejemplo, las pastillas pueden estar recubiertas de goma laca, azúcar o ambos. Un jarabe o elixir puede contener, además del principio activo, sacarosa como agente edulcorante, metil y propilparabenos como conservantes, un colorante y un aromatizante como el sabor a cereza o naranja.

[0143] En algunas realizaciones, los compuestos de la presente divulgación también pueden utilizarse como sales con varias contracciones para producir una formulación disponible por vía oral.

[0144] Los compuestos de la presente divulgación también pueden administrarse por vía parenteral. Las soluciones o suspensiones de estos compuestos activos pueden prepararse en agua convenientemente mezclada con un tensioactivo como la hidroxipropilcelulosa. Las dispersiones también pueden prepararse en glicerol, polietilenglicoles líquidos y mezclas de los mismos en aceites. En condiciones normales de almacenamiento y uso, estos preparados contienen un conservante para evitar la proliferación de microorganismos.

[0145] Las formas farmacéuticas adecuadas para uso inyectable incluyen soluciones o dispersiones acuosas estériles y polvos estériles para la preparación extemporánea de soluciones o dispersiones inyectables estériles. En todos los casos, la forma debe ser estéril y fluida hasta el punto de que se pueda jeringar fácilmente. Debe ser estable en las condiciones de fabricación y almacenamiento y conservarse contra la acción contaminante de microorganismos, como bacterias y hongos. El portador puede ser un disolvente o medio de dispersión que contenga, p. ej., agua, etanol, poliol (por ejemplo, glicerol, propilenglicol y polietilenglicol líquido), mezclas adecuadas de los mismos y aceites vegetales.

[0146] Puede emplearse cualquier vía de administración adecuada para proporcionar a un mamífero, especialmente a un ser humano, una dosis eficaz de un compuesto de la presente divulgación. Por ejemplo, pueden emplearse por vía oral, rectal, tópica, parenteral, ocular, pulmonar, nasal y similares. Las formas de administración incluyen comprimidos, troqueles, dispersiones, suspensiones, soluciones, cápsulas, cremas, pomadas, aerosoles y similares. En algunas realizaciones, los compuestos de la presente divulgación se administran por vía oral.

[0147] Kits

[0148] También se proporcionan kits que incluyen un compuesto de la divulgación, o una sal farmacéuticamente aceptable, tautómero, estereoisómero, mezcla de estereoisómeros o análogo deuterado del mismo, y un envase adecuado. En una realización, el kit incluye además instrucciones de uso. En un aspecto, un kit incluye un compuesto de la divulgación, o una sal farmacéuticamente aceptable, tautómero, estereoisómero, mezcla de estereoisómeros o análogo deuterado del mismo, y una etiqueta y/o instrucciones para el uso de los compuestos en el tratamiento de las indicaciones, incluidas las enfermedades o afecciones, descritas en el presente documento.

[0149] También se proporcionan aquí artículos de fabricación que incluyen un compuesto descrito aquí o una sal farmacéuticamente aceptable, tautómero, estereoisómero, mezcla de estereoisómeros o análogo deuterado del mismo en un envase adecuado. El envase puede ser un vial, un frasco, una ampolla, una jeringa precargada y una bolsa intravenosa.

[0150] Tratamientos y Usos

[0151] "Tratamiento" o "tratar" es un enfoque para obtener resultados beneficiosos o deseados, incluidos los resultados clínicos. Los resultados clínicos beneficiosos o deseados pueden incluir uno o más de los siguientes: a) inhibición de la enfermedad o afección (p. ej., disminución de uno o más síntomas resultantes de la enfermedad o afección, y/o disminución de la extensión de la enfermedad o afección); b) ralentización o detención del desarrollo de uno o más síntomas clínicos asociados con la enfermedad o afección (p. ej., estabilizar la enfermedad o afección, prevenir o retrasar el empeoramiento o la progresión de la enfermedad o afección, y/o prevenir o retrasar la propagación (p. ej., metástasis) de la enfermedad o afección); y/o c) aliviar la enfermedad, es decir, provocar la regresión de los síntomas clínicos (p. ej., mejorar el estado de la enfermedad, proporcionar la remisión parcial o total de la enfermedad o afección, potenciar el efecto de otro medicamento, retrasar la progresión de la enfermedad, aumentar la calidad de vida y/o prolongar la supervivencia).

[0152] [0081]Por "prevención" o "prevenir" se entiende cualquier tratamiento de una enfermedad o afección que haga que no se desarrollen los síntomas clínicos de la enfermedad o afección. En algunas realizaciones, los compuestos pueden administrarse a un sujeto (un ser humano) que esté en riesgo o tenga antecedentes familiares de la enfermedad o afección.

[0154] El término "cantidad terapéuticamente eficaz" o "cantidad eficaz" de un compuesto descrito en el presente documento o una sal, tautómero, estereoisómero, mezcla de estereoisómeros o análogo deuterado farmacéuticamente aceptable del mismo significa una cantidad suficiente para efectuar el tratamiento cuando se administra a un sujeto, para proporcionar un beneficio terapéutico como la mejora de los síntomas o la ralentización de la progresión de la enfermedad. Por ejemplo, una cantidad terapéuticamente eficaz puede ser una cantidad suficiente para disminuir un síntoma de una enfermedad o afección que responda al agonismo del FXR. La cantidad terapéuticamente eficaz puede variar en función del sujeto y de la enfermedad o afección que se trate, del peso y la edad del sujeto, de la gravedad de la enfermedad o afección y de la forma de administración, que puede determinar fácilmente un experto en la técnica.

[0156] La divulgación se refiere además a las composiciones de los compuestos aquí divulgados para su uso en el tratamiento y/o profilaxis de enfermedades y/o afecciones a través de la unión de dicho receptor nuclear por dichos compuestos.

[0158] En algunas realizaciones, la presente divulgación se refiere a las composiciones de compuestos según la Fórmula (I) para su uso en la profilaxis y/o tratamiento de afecciones colestásicas intrahepáticas crónicas o algunas formas de afecciones colestásicas extrahepáticas, de fibrosis hepática, de afecciones colestásicas intrahepáticas agudas, de trastornos inflamatorios obstructivos o crónicos que surgen de una composición biliar inadecuada, de afecciones gastrointestinales con una absorción reducida de grasas alimentarias y vitaminas dietéticas liposolubles, de enfermedades inflamatorias intestinales, de trastornos de lípidos y lipoproteínas, de diabetes de tipo II y complicaciones clínicas de diabetes de tipo I y II, de afecciones y enfermedades que resultan de la degeneración grasa y fibrótica crónica de órganos debido a la acumulación forzada de lípidos y, específicamente, de triglicéridos y la subsiguiente activación de vías profibróticas, de la obesidad y el síndrome metabólico (condiciones combinadas de dislipidemia, diabetes e índice de masa corporal anormalmente elevado), del infarto agudo de miocardio, del ictus agudo, de la trombosis que se produce como punto final de la aterosclerosis obstructiva crónica, de las infecciones persistentes por bacterias intracelulares o protozoos parásitos, de los trastornos hiperproliferativos no malignos, de los trastornos hiperproliferativos malignos, del adenocarcinoma de colon y el carcinoma hepatocelular en particular, de la esteatosis hepática y los síndromes asociados, de la insuficiencia hepática o el mal funcionamiento del hígado como resultado de enfermedades hepáticas crónicas o de la resección quirúrgica del hígado, de la infección por Hepatitis B, de la infección por Hepatitis C y/o de los efectos colestásicos y fibróticos que se asocian con la cirrosis inducida por el alcohol o con formas de hepatitis de transmisión vírica.

[0160] Los medicamentos a los que se hace referencia en el presente documento pueden prepararse mediante procesos convencionales, incluida la combinación de un compuesto según la presente divulgación y un portador farmacéuticamente aceptable.

[0162] El FXR puede modular tanto la producción sintética de ácidos biliares en el hígado como su reciclaje en el intestino (mediante la regulación de las proteínas de unión a ácidos biliares). El FXR puede estar implicado en la regulación de muchos procesos fisiológicos diversos que son relevantes en la etiología y para el tratamiento de enfermedades tan diversas como los cálculos biliares de colesterol, trastornos metabólicos como la Diabetes Tipo II, dislipidemias u obesidad, enfermedades inflamatorias crónicas como las Enfermedades Inflamatorias Intestinales, o formas intrahepáticas crónicas de colestasis.

[0164] El FXR regula un complejo patrón de genes de respuesta en el hígado y en el tracto gastrointestinal. Los productos génicos influyen en diversos procesos fisiológicos. Por ejemplo, FXR reprime la inducción de Cyp7A1 a través de la regulación al alza del ARNm que codifica SHP, otro receptor nuclear que es represor dominante sobre LRH-1. Dado que el FXR se une a los ácidos biliares primarios, los productos finales de esta vía, esto puede considerarse un ejemplo de inhibición por retroalimentación a nivel de expresión génica.

[0166] Los ligandos FXR inducen el flujo biliar y cambian la composición de los ácidos biliares hacia una composición más hidrofílica. Con el desarrollo del primer ligando sintético de FXR GW4064 como compuesto herramienta y del ligando semisintético artificial de ácido biliar 6-alfa-etil-CDCA, se pudieron analizar los efectos de la superestimulación de FXR por agonistas potentes. Se demostró que ambos ligandos inducen el flujo biliar en animales con conductos biliares ligados. Por otra parte, además de los efectos coleréticos, también pudieron demostrarse efectos hepatoprotectores. Estos efectos hepatoprotectores incluían efectos antifibróticos resultantes de la represión de los inhibidores tisulares de las metaloproteinasas de matriz TIMP-1 y 2, la inducción de la metaloproteinasa de matriz resolutora de depósitos de colágeno 2 en las células estrelladas hepáticas, y la consiguiente reducción del ARNm del colágeno alfa y del factor de crecimiento transformante beta (TGF-beta), ambos factores profibróticos.

[0168] [0089]Además, se demostró actividad anticolestásica en modelos animales ligados a conductos biliares, así como en modelos animales de colestasis inducida por estrógenos. Los estudios genéticos demuestran que en las formas hereditarias de colestasis (Colestasis Intrahepática Familiar Progresiva = PFIC, Tipos I - IV) se reduce la localización nuclear del propio FXR como consecuencia de una mutación en el gen FIC1 (en la PFIC Tipo I, también llamada Enfermedad de Byler) (F. Chen et al., Gastroenterology 2004, 126, 756; L. Alvarez et al., Hum. Mol. Genet. 2004, 13, 2451) o se reducen los niveles del gen diana del FXR que codifica la bomba de exportación de fosfolípidos MDR-3 (en la PFIC de tipo III). Cada vez hay más pruebas de que los compuestos de unión a FXR pueden resultar de gran utilidad clínica en el régimen terapéutico de afecciones colestásicas crónicas como la Cirrosis Biliar Primaria (PBC) o la Colangitis Esclerosante Primaria (PSC).

[0169] Los agonistas de FXR pueden ser útiles para prevenir la formación de cálculos biliares de colesterol o para prevenir la reformación de cálculos biliares después de la extirpación quirúrgica o la litotricia por ondas de choque. Por ejemplo, utilizando el compuesto sintético herramienta FXR GW4064 se pudo demostrar que la activación de FXR conduce a una mejora del Índice de Saturación de Colesterol (CSI) y directamente a una abolición de la formación de cálculos biliares en ratones C57L susceptibles a cálculos biliares, mientras que el tratamiento farmacológico en ratonesknockoutFXR no muestra ningún efecto sobre la formación de cálculos biliares. Así, en una realización de la divulgación, las composiciones farmacéuticas que comprenden el compuesto según la Fórmula (I) es para su uso en la profilaxis y / o tratamiento de trastornos inflamatorios obstructivos o crónicos que surgen de la composición biliar inadecuada, tales como colelitiasis también conocida como cálculos biliares de colesterol.

[0170] Los agonistas de FXR pueden ser útiles para proteger el intestino de la transformación neoplásica y del desarrollo de pólipos y su transición a adenocarcinoma en el intestino. La ausencia de FXR conduce a un elevado incremento en la formación de Cacrcinoma Hepatocelular (HCC), la forma más prominente de cáncer de hígado. Mientras que un FXR funcional previene la formación de adenocarcinoma de colon y carcinoma hepatocelular, la activación del FXR induce la regeneración del hígado tras una hepatectomía.

[0171] Los efectos combinados hepatoprotectores, antineoplásicos y regenerativos hepáticos asociados con la activación de FXR pueden explotarse terapéuticamente para el uso de agonistas de FXR en el tratamiento de enfermedades hepáticas graves. En una realización, las composiciones farmacéuticas que comprenden los compuestos se utilizan en el tratamiento de enfermedades hepáticas como el HCC, la estimulación del recrecimiento del hígado y la mejora de los efectos secundarios asociados a la resección hepática mayor, la cirrosis hepática independientemente de la etiología y la prevención o el tratamiento de la isquemia hepática en el curso de un trasplante de hígado o de una cirugía hepática mayor.

[0172] Además, el FXR puede ser un regulador clave de los triglicéridos séricos. La activación del FXR mediante agonistas sintéticos puede conducir a una reducción significativa de los triglicéridos séricos, principalmente en forma de reducción de VLDL, pero también a una reducción del colesterol sérico total. La reducción de los triglicéridos séricos no es un efecto aislado. El tratamiento de ratones db/db u ob/ob con el agonista sintético del FXR GW4064 produjo una reducción marcada y combinada de los triglicéridos séricos, el colesterol total, los ácidos grasos libres y los cuerpos cetónicos como el 3-OH butirato. Por otra parte, la activación del FXR interactúa con la vía de señalización intracelular de la insulina en los hepatocitos, lo que provoca una reducción de la producción de glucosa a partir de la gluconeogénesis hepática y un aumento concomitante del glucógeno hepático. La sensibilidad a la insulina y la tolerancia a la glucosa se vieron afectadas positivamente por el tratamiento con FXR. También se ha observado recientemente un efecto de reducción del peso corporal en ratones sobrealimentados con una dieta rica en lípidos. Este efecto de pérdida de peso podría deberse a la inducción por el FXR del FGF-19, un factor de crecimiento de fibroblastos que se sabe que conduce a la pérdida de peso y al fenotipo atlético. Se ha demostrado el efecto del agonista FXR en la reducción del peso corporal.

[0173] En consecuencia, los agonistas de FXR pueden explotarse de diferentes maneras terapéuticas: Los compuestos de unión a FXR se consideran buenos candidatos para el tratamiento de la diabetes de tipo II por sus efectos de sensibilización a la insulina, glucogénicos y de reducción de lípidos.

[0174] En una realización, las composiciones farmacéuticas que comprenden los compuestos se utilizan en la profilaxis y/o el tratamiento de la diabetes de tipo II, que puede superarse mediante la regulación ascendente mediada por FXR de la sensibilidad sistémica a la insulina y la señalización intracelular de insulina en el hígado, el aumento de la captación y metabolización periférica de glucosa, el aumento del almacenamiento de glucógeno en el hígado, la disminución de la salida de glucosa al suero a partir de la gluconeogénesis hepática.

[0175] En otra realización, dichas composiciones farmacéuticas se utilizan en la profilaxis y/o el tratamiento de enfermedades intrahepáticas crónicas, como la PBC, PSC, la colestasis familiar progresiva (PFIC), la cirrosis inducida por el alcohol y la colestasis asociada, y algunas formas de enfermedades colestásicas extrahepáticas, o la fibrosis hepática.

[0176] La divulgación también se refiere a una composición farmacéutica que comprende el compuesto para su uso en la profilaxis y/o el tratamiento de afecciones gastrointestinales con una absorción reducida de grasa dietética y vitaminas dietéticas liposolubles que puede superarse mediante el aumento de los niveles intestinales de ácidos biliares y fosfolípidos.

[0177] [0098]En otra realización, dicha composición farmacéutica se usa para prevenir y/o tratar una enfermedad seleccionada del grupo que consiste en trastornos de lípidos y lipoproteínas como hipercolesterolemia, hipertrigliceridemia y aterosclerosis como afección clínicamente manifiesta que puede mejorarse por el efecto beneficioso de FXR en la reducción del colesterol plasmático total, la reducción de los triglicéridos séricos, el aumento de la conversión del colesterol hepático en ácidos biliares y el aumento de la eliminación y conversión metabólica de VLDL y otras lipoproteínas en el hígado.

[0178] En otra realización, dicha composición farmacéutica se utilizan en la profilaxis y/o tratamiento de enfermedades en las que los efectos combinados hipolipemiantes, anticolestáticos y antifibróticos de los medicamentos dirigidos a FXR pueden aprovecharse para el tratamiento de la esteatosis hepática y síndromes asociados como la esteatohepatitis no alcohólica (NASH), o para el tratamiento de los efectos colestáticos y fibróticos asociados con la cirrosis inducida por el alcohol, o con formas de hepatitis de transmisión viral.

[0179] Junto con los efectos hipolipidémicos se demostró que la pérdida de FXR funcional conduce a un aumento de la aterosclerosis en ratonesknockoutApoE. En consecuencia, los agonistas del FXR pueden tener utilidad clínica como fármacos antiateroscleróticos y cardioprotectores. La regulación a la baja de la endotelina-1 en las células musculares lisas vasculares también puede contribuir a estos efectos terapéuticos beneficiosos.

[0180] La divulgación también se refiere a una composición farmacéutica que comprende el compuesto para su uso en el tratamiento preventivo y postraumático de un trastorno cardiovascular, como el infarto agudo de miocardio, el accidente cerebrovascular agudo o la trombosis que se producen como punto final de la aterosclerosis obstructiva crónica.

[0181] Además de controlar la formación de pólipos intestinales y colónicos, el FXR parece expresarse en el tejido y las líneas celulares del cáncer de mama, pero no en el tejido mamario sano, y parece interactuar con el Receptor de Estrógeno en las células de cáncer de mama ER positivas. Así pues, el FXR puede ser una diana potencial para el tratamiento de enfermedades proliferativas, especialmente las formas de cáncer metastásico que expresan una forma de FXR sensible a pequeñas moléculas.

[0182] En otra realización, dichas composiciones farmacéuticas son para uso en la profilaxis y/o tratamiento de trastornos hiperproliferativos malignos tales como diferentes formas de cáncer, específicamente ciertas formas de cáncer de mama, hígado o colon donde la interferencia con un ligando FXR tendrá un impacto beneficioso.

[0183] FXR puede estar implicado en el control de la defensa antibacteriana en el intestino. Los agonistas del FXR pueden tener un impacto beneficioso en la terapia de las Enfermedades Inflamatorias Intestinales (IBD). Por ejemplo, en las formas de IBD en las que está afectada la parte superior (ileal) del intestino (p. ej., la enfermedad de Crohn ileal) los agonistas del FXR podrían tener efectos beneficiosos a través del control del crecimiento bacteriano mediado por el FXR. En la IBD, la desensibilización de la respuesta inmunitaria adaptativa está de algún modo alterada en el sistema inmunitario intestinal. El sobrecrecimiento bacteriano podría ser el desencadenante de una respuesta inflamatoria crónica. Por lo tanto, la amortiguación del crecimiento bacteriano mediante mecanismos basados en FXR podría ser un mecanismo clave para prevenir los episodios inflamatorios agudos.

[0184] Así pues, la divulgación también se refiere a una composición farmacéutica que comprende el compuesto para su uso en la prevención y/o el tratamiento de una enfermedad relacionada con una Enfermedad Inflamatoria Intestinal, como la enfermedad de Crohn o la Colitis ulcerosa. Se cree que la restauración de la función de barrera intestinal mediada por FXR y la reducción de la carga bacteriana no comensal ayudan a reducir la exposición de antígenos bacterianos al sistema inmunitario intestinal y, por tanto, pueden reducir las respuestas inflamatorias.

[0185] La divulgación se refiere además a una composición farmacéutica para su uso en la profilaxis y/o tratamiento de la obesidad y trastornos asociados como el síndrome metabólico (condiciones combinadas de dislipidemias, diabetes e índice de masa corporal anormalmente alto) que puede superarse mediante la disminución mediada por FXR de los triglicéridos séricos, la glucosa en sangre y el aumento de la sensibilidad a la insulina y la pérdida de peso mediada por FXR.

[0186] En otra realización, las composiciones farmacéuticas de la presente divulgación son útiles para prevenir y/o tratar complicaciones clínicas de la Diabetes Tipo I y Tipo II. Ejemplos de estas complicaciones son la nefropatía diabética, la retinopatía diabética, las neuropatías diabéticas o la Enfermedad Oclusiva Arterial Periférica (PAOD). La presente divulgación también abarca otras complicaciones clínicas de la diabetes.

[0187] Además, las afecciones y enfermedades que resultan de la degeneración grasa y fibrótica crónica de órganos debido a la acumulación forzada de lípidos y específicamente de triglicéridos y la activación subsiguiente de vías profibróticas también pueden prevenirse y/o tratarse administrando los compuestos o la composición farmacéutica de la presente divulgación. Tales afecciones y enfermedades abarcan NASH y los estados colestásicos crónicos en el hígado, la glomeruloesclerosis y la nefropatía diabética en el riñón, la degeneración de la mácula y la retinopatía diabética en el ojo y las enfermedades neurodegenerativas, como la enfermedad de Alzheimer en el cerebro o las neuropatías diabéticas en el sistema nervioso periférico.

[0188] En otra realización, las composiciones farmacéuticas de la presente divulgación son útiles para prevenir y/o tratar la fibrosis hepática congénita.

[0189] Administración

[0190] La dosis efectiva del ingrediente activo empleado puede variar dependiendo del compuesto particular empleado, el modo de administración, la condición a tratar y la severidad de la condición a tratar. Una persona experta en la materia puede determinar fácilmente dicha administración.

[0191] Cuando se tratan o previenen afecciones mediadas por FXR para las que están indicados los compuestos de la presente divulgación, los compuestos de la presente divulgación se administran como dosis única diaria o en dosis divididas de dos a seis veces al día, o en forma de liberación sostenida. En el caso de un ser humano adulto de 70 kg, la dosis diaria total será generalmente de aproximadamente 7 miligramos a aproximadamente 350 miligramos. La pauta posológica puede ajustarse para proporcionar la respuesta terapéutica óptima. En algunas realizaciones, la dosis diaria total es de unos 50 miligramos a unos 300 miligramos, o de unos 50 miligramos a unos 200 miligramos.

[0192] Las composiciones de los compuestos de la presente solicitud pueden administrarse una, dos, tres o cuatro veces al día, utilizando cualquier modo adecuado descrito anteriormente. Además, la administración o el tratamiento con los compuestos puede continuarse durante un número de días; por ejemplo, comúnmente el tratamiento continuaría durante al menos 7 días, 14 días o 28 días, para un ciclo de tratamiento. Los ciclos de tratamiento son bien conocidos en la quimioterapia contra el cáncer, y con frecuencia se alternan con periodos de descanso de entre 1 y 28 días, comúnmente de entre 7 y 14 días. Los ciclos de tratamiento, en otras realizaciones, también pueden ser continuos.

[0193] Combinaciones

[0194] En algunas realizaciones, una composición del compuesto aquí divulgado es para administración en combinación con uno o más agentes terapéuticos adicionales para tratar o prevenir una enfermedad o condición aquí divulgada. En algunas realizaciones, uno o más agentes terapéuticos adicionales son un inhibidor ACE, un inhibidor de la acetil CoA carboxilasa, un agonista del receptor A3 de la adenosina, un agonista del receptor de la adiponectina, un inhibidor de la proteína quinasa AKT, una proteína quinasa activada por AMP (AMPK), un agonista del receptor de la amilina, un antagonista del receptor AT-1 de la angiotensina II, inhibidores de la autotaxina, un lípido bioactivo, un agonista de la calcitonina, Inhibidor de la caspasa, estimulador de la caspasa 3, inhibidor de la catepsina, inhibidor de la caveolina 1, antagonista de la quimiocina CCR2, antagonista de la quimiocina CCR3, antagonista de la quimiocina CCR5, estimulador del canal de cloruro, inhibidor de la CNR1, inhibidor de la ciclina D1, inhibidor del citocromo P4507A1, inhibidor de la DGAT1/2, inhibidor de la dipeptidil peptidasa IV, modulador de la endosialina, inhibidor del ligando de la eotaxina, Modulador de proteínas de la matriz extracelular, Agonista del receptor X famesoide, Inhibidores de la sintasa de ácidos grasos, Agonista del receptor FGF1, Ligandos del factor de crecimiento de fibroblastos (FGF-15, FGF-19, FGF-21), Inhibidor de la galectina 3, Agonista del receptor de glucagón, Agonista del péptido 1 similar al glucagón, Agonista del receptor 1 de ácidos biliares acoplado a proteína G, Modulador de Hedgehog (Hh), Inhibidor de la proteasa NS3 del virus de la hepatitis C, modulador del factor nuclear 4 alfa de los hepatocitos (HNF4A), modulador del factor de crecimiento de los hepatocitos, inhibidor de la HMG CoA reductasa, agonista de la IL-10, antagonista de la IL-17, inhibidor del cotransportador ileal sódico de ácidos biliares, sensibilizador a la insulina, modulador de la integrina, inhibidor de la quinasa 4 asociada al receptor de la intereucina 1 (IRAK4), inhibidor de la tirosina quinasa Jak2, inhibidores de la cetohexoquinasa, estimulador de la Klotho beta, inhibidor de la 5-lipoxigenasa, inhibidor de la lipoproteína lipasa, receptor del hígado X, estimulador del gen LPL, antagonista del receptor del lisofosfatidato-1, inhibidor del homólogo 2 de la lisil oxidasa, inhibidor de las metaloproteinasas de la matriz (MMP), inhibidor de la proteína quinasa MEKK-5, inhibidor de la amina oxidasa de cobre de membrana (VAP-1), inhibidor de la metionina aminopeptidasa-2, modulador de la proteína 2 de unión a metil CpG, Inhibidor del microARN-21 (miR-21), Desacoplador mitocondrial, Estimulador de la proteína básica de la mielina, Inhibidor de la proteína 3 de dominio NACHT LRR PYD (NLRP3), Estimulador de la sirtuina deacetilasa dependiente de NAD, Inhibidor de la NADPH oxidasa (NOX), Agonista del receptor 1 del ácido nicotínico, Estimulador del purinoceptor P2Y13, Inhibidor de la PDE 3, Inhibidor de la PDE 4, Inhibidor de la PDE 5, Modulador del receptor beta del PDGF, Inhibidor de la fosfolipasa C, agonista de PPAR alfa, agonista de PPAR delta, agonista de PPAR gamma, modulador de PPAR gamma, antagonista del receptor 2 activado por proteasa, modulador de la proteína quinasa, inhibidor de la proteína quinasa asociada a Rho, inhibidor del transportador sódico de glucosa 2, inhibidor del factor de transcripción SREBP, inhibidor de STAT-1, inhibidor de la estearoil CoA desaturasa 1, estimulador del supresor de la señalización de citoquinas 1, estimulador del supresor de la señalización de citoquinas-3, factor de crecimiento transformante β (TGF-β), quinasa 1 activada por el factor de crecimiento transformante β (TAK1), agonista beta del receptor de la hormona tiroidea, antagonista del TLR-4, inhibidor de la transglutaminasa, modulador del receptor de la tirosina quinasa, modulador del GPCR, modulador del receptor de la hormona nuclear, moduladores del WNT o modulador de YAP/TAZ.

[0195] Ejemplos no limitantes de uno o más agentes terapéuticos adicionales incluyen:

[0196] Inhibidores ACE, como el enalapril;

[0197] Inhibidores de la acetil CoA carboxilasa (ACC), como DRM-01, gemcabene, PF-05175157 y QLT-091382;

[0198] Agonistas de los receptores de adenosina, como CF-102, CF-101, CF-502 y CGS21680;

[0199] Agonistas del receptor de adiponectina, como ADP-355;

[0200] Agonistas de los receptores de amilina/calcitonina, como KBP-042;

[0201] Estimuladores de la proteína quinasa activada por AMP, como el O-304;

[0202] Antagonistas de los receptores AT-1 de la angiotensina II, como el irbesartán;

[0203] Inhibidores de la autotaxina, como PAT-505, PAT-048, GLPG-1690, X-165, PF-8380 y AM-063;

[0204] Lípidos bioactivos, como el DS-102;

[0205] Inhibidores del receptor cannabinoide tipo 1 (CNR1), como namacizumab y GWP-42004;

[0206] Inhibidores de la caspasa, como el emricasán;

[0207] Inhibidores de la catepsina B, como el VBY-376;

[0208] Inhibidores de la catepsina pan, como el VBY-825;

[0209] Antagonistas de las quimiocinas CCR2/CCR5, como el cenicriviroc;

[0210] Antagonistas de la quimiocina CCR2, como el propagermanio;

[0211] Antagonistas de la quimiocina CCR3, como el bertilimumab;

[0212] Estimuladores de los canales de cloruro, como la cobiprostona;

[0213] Inhibidores de la diglicérido aciltransferasa 2 (DGAT2), como IONIS-DGAT2Rx;

[0214] Inhibidores de la dipeptidil peptidasa IV, como la linagliptina;

[0215] Inhibidores del ligando de la eotaxina, como el bertilimumab;

[0216] Moduladores de proteínas de la matriz extracelular, como CNX-024;

[0217] Inhibidores de la sintasa de ácidos grasos, como el TVB-2640;

[0218] Factor de crecimiento de fibroblastos 19 (rhFGF19)/inhibidores del citocromo P450 (CYP)7A1, como el NGM-282; Ligando del factor de crecimiento de fibroblastos 21 (FGF-21), como BMS-986171, BMS-986036;

[0219] Agonistas del factor de crecimiento de fibroblastos 21 (FGF-21)/péptido similar al glucagón 1 (GLP-1), como el YH-25723;

[0220] Inhibidores de la galectina-3, como GR-MD-02;

[0221] Agonistas del péptido 1 similar al glucagón (GLP1R), como AC-3174, liraglutida, semaglutida;

[0222] Agonistas del receptor 1 de ácidos biliares acoplado a proteína G (TGR5), como RDX-009, INT-777;

[0223] Inhibidores de la proteína de choque térmico 47 (HSP47), como el ND-L02-s0201;

[0224] Inhibidores de la HMG CoA reductasa, como atorvastatina, fluvastatina, pitavastatina, pravastatina, rosuvastatina y simvastatina;

[0225] Agonistas de la IL-10, como la peg-ilodecakina;

[0226] Inhibidores ileales del cotransportador sódico de ácidos biliares, como A-4250, etanolato potásico hidratado de volixibat (SHP-262) y GSK2330672;

[0227] Sensibilizadores a la insulina, como KBP-042, MSDC-0602K, Px-102, RG-125 (AZD4076) y VVP-100X;

[0228] Inhibidores de la cetohexoquinasa, como PF-06835919;

[0229] Agonista beta Klotho (KLB)-FGF1c, como el NGM-313;

[0230] Inhibidores de la 5-lipoxigenasa, como tipelukast (MN-001);

[0231] Inhibidores de la lipoproteína lipasa, como el CAT-2003;

[0232] Estimuladores del gen LPL, como el alipogene tiparvovec;

[0233] Moduladores del receptor X hepático (LXR), como PX-L603, PX-L493, BMS-852927, T-0901317, GW-3965 y SR-9238; Antagonistas del receptor de lisofosfatidato-1, como BMT-053011, UD-009, AR-479, ITMN-10534, BMS-986020 y KI-16198;

[0234] Inhibidores de la lisil oxidasa homóloga 2, como el simtuzumab;

[0235] Inhibidores de la amina oxidasa sensible a la semicarbazida/proteína de adhesión vascular-1 (SSAO/VAP-1), como el PXS-4728A;

[0236] Inhibidores de la metionina aminopeptidasa-2, como el ZGN-839;

[0237] Moduladores de la proteína 2 de unión a metil CpG, como la mercaptamina;

[0238] Desacopladores mitocondriales, como el 2,4-dinitrofenol;

[0239] Estimuladores de la proteína básica de la mielina, como la olesoxima;

[0240] Inhibidores de la NADPH oxidasa 1/4, como el GKT-831;

[0241] Agonistas del receptor 1 del ácido nicotínico, como el ARI-3037MO;

[0242] Nitazoxinida;

[0243] Inhibidores de la proteína 3 de dominio NACHT LRR PYD (NLRP3), como KDDF-201406-03, y NBC-6;

[0244] Moduladores de receptores nucleares, como DUR-928;

[0245] Estimuladores de purinoceptores P2Y13, como CER-209;

[0246] Inhibidores de la PDE 3/4, como el tipelukast (MN-001);

[0247] Inhibidores de la PDE 5, como el sildenafilo;

[0248] Moduladores del receptor beta del PDGF, como BOT-191, BOT-509;

[0249] Agonistas PPAR, como elafibranor (GFT-505), MBX-8025, pioglitazona deuterada enantiómero R, pioglitazona, DRX-065, saroglitazar e IVA-337;

[0250] Antagonistas del receptor-2 activado por proteasa, como el PZ-235;

[0251] Moduladores de la proteína quinasa, como CNX-014;

[0252] Inhibidores de la proteína quinasa asociada a Rho (ROCK), como el KD-025;

[0253] Inhibidores del transportador sódico de glucosa-2 (SGLT2), como ipragliflozina, etabonato de remogliflozina, ertugliflozina, dapagliflozina y sotagliflozina;

[0254] Inhibidores del factor de transcripción SREBP, como CAT-2003 y MDV-4463;

[0255] Inhibidores de la estearoil CoA desaturasa-1, como el aramchol;

[0256] Agonistas beta del receptor de la hormona tiroidea (THR), como MGL-3196, MGL-3745, VK-2809;

[0257] Antagonistas de TLR-4, como JKB-121;

[0258] Moduladores de los receptores tirosina quinasa, como CNX-025;

[0259] Moduladores GPCR, como CNX-023; y

[0260] Moduladores de los receptores de hormonas nucleares, como el Px-102.

[0261] En ciertas realizaciones específicas, el uno o más agentes terapéuticos adicionales se seleccionan entre A-4250, AC-3174, ácido acetilsalicílico, AK-20, AKN-083, alipogene tiparvovec, aramchol, ARI-3037MO, ASP-8232, atorvastatina, bertilimumab, betaína anhidra, BAR-704, BI-1467335, BMS-986036, BMS-986171, BMT-053011, BOT-191, BTT-1023, BWD-100, BWL-200, CAT-2003, cenicriviroc, CER-209, CF-102, CGS21680, CNX-014, CNX-023, CNX-024, CNX-025, cobiprostona, colesevelam, dapagliflozina, 16-dehidro-pregnenolona, pioglitazona deuterada enantiómero R, 2,4-dinitrofenol, DRX-065, DS-102, DUR-928, EDP-305, elafibranor (GFT-505), emricasan, enalapril, EP-024297, ertugliflozina, evogliptina, EYP-001, F-351, fexaramina, GKT-831, GNF-5120, GR-MD-02, hidroclorotiazida, éster etílico de icosapent, IMM-124-E, INT-767, IONIS-DGAT2Rx, INV-33, ipragliflozina, Irbesarta, propagermanio, IVA-337, JKB-121, KB-GE-001, KBP-042, KD-025, M790, M780, M450, metformina, sildenafilo, LC-280126, linagliptina, liraglutida, LJN-452, LMB-763, MBX-8025, MDV-4463, mercaptamina, MET-409, MGL-3196, MGL-3745, MSDC-0602K, namacizumab, NC-101, ND-L02-s0201, NFX-21, NGM-282, NGM-313, NGM-386, NGM-395, NTX-023-1, ácido norursodesoxicólico, O-304, ácido obeticólico, 25HC3S, olesoxime, PAT-505, PAT-048, peg-ilodecakin, pioglitazona, pirfenidona, PRI-724, PX20606, Px-102, PX-L603, PX-L493, PXS-4728A, PZ-235, RDX-009, RDX-023, etabonato de remogliflozina, tricaprilina reutilizada, RG-125 (AZD4076), saroglitazar, semaglutida, simtuzumab, SIPI-7623, solitromicina, sotagliflozina, estatinas (atorvastatina, fluvastatina, pitavastatina, pravastatina, rosuvastatina, simvastatina), TCM-606F, TERN-101, TEV-45478, tipelukast (MN-001), TLY-012, tropifexor, TRX-318, TVB-2640, UD-009, ácido ursodesoxicólico, VBY-376, VBY-825, VK-2809, vismodegib, volixibat etanolato potásico hidrato (SHP-626), VVP-100X, WAV-301, WNT-974 y ZGN-839.

[0262] En algunas realizaciones, las composiciones incluyen una cantidad terapéuticamente eficaz de un inhibidor de la quinasa reguladora de la señal de apoptosis 1 (ASK1) y una cantidad terapéuticamente eficaz de un agonista del Receptor X Famesoide (FXR), en el que el agonista del FXR es un compuesto de fórmula (I):

[0265]

[0268] o una sal farmacéuticamente aceptable, un estereoisómero, una mezcla de estereoisómeros o un tautómero del mismo.

[0269] En ciertas realizaciones de las composiciones farmacéuticas aquí divulgadas, el inhibidor de ASK1 es un compuesto de Fórmula (II):

[0272]

[0274] o una sal farmacéuticamente aceptable, un estereoisómero, una mezcla de estereoisómeros o un tautómero del mismo.

[0275] Los inhibidores de ASK1, como el compuesto de Fórmula (II), pueden sintetizarse y caracterizarse utilizando métodos conocidos por los expertos en la materia, como los descritos en documento de EE.UU. 2007/0276050; documento de EE.UU.2011/0009410; y documento de EE.UU.2013/0197037.

[0276] En algunas realizaciones, las composiciones incluyen una cantidad terapéuticamente eficaz de un inhibidor de la Acetil CoA Carboxilasa (ACC) y una cantidad terapéuticamente eficaz de un agonista del Receptor X Famesoide (FXR), en el que el agonista del FXR es un compuesto de Fórmula (I):

[0277]

[0280] o una sal farmacéuticamente aceptable, un estereoisómero, una mezcla de estereoisómeros o un tautómero del mismo.

[0281] En ciertas realizaciones de las composiciones farmacéuticas aquí divulgadas, el inhibidor de ACC es un compuesto de Fórmula (III):

[0284]

[0286] o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo.

[0287] Los inhibidores de ACC, como el compuesto de Fórmula (III), pueden sintetizarse y caracterizarse utilizando métodos conocidos por los expertos en la materia, como los descritos en la Publicación de Solicitud Internacional PCT Nº WO 2013/071169.

[0288] En algunas realizaciones, las composiciones incluyen una cantidad terapéuticamente eficaz de un agonista β del Receptor de Hormona Tiroidea (THR) en combinación con una cantidad terapéuticamente eficaz de un agonista del Receptor X Famesoide (FXR), donde el agonista FXR es un compuesto de Fórmula (I):

[0291]

[0293] o una sal farmacéuticamente aceptable, un estereoisómero, una mezcla de estereoisómeros o un tautómero del mismo.

[0294] En ciertas realizaciones de las composiciones farmacéuticas aquí divulgadas, el agonista THR β es un compuesto de Fórmula (IV):

[0295]

[0297] o una sal farmacéuticamente aceptable, un estereoisómero, una mezcla de estereoisómeros o un tautómero del mismo.

[0298] Los agonistas β de THR, tales como el compuesto de Fórmula (IV), pueden sintetizarse y caracterizarse utilizando métodos conocidos por los expertos en la materia.

[0299] EJEMPLOS

[0300] Los siguientes ejemplos se incluyen para demostrar realizaciones específicas de la divulgación. Los expertos en la técnica apreciarán que las técnicas descritas en los ejemplos que siguen representan técnicas que funcionan bien en la práctica de la divulgación y, por lo tanto, puede considerarse que constituyen modos específicos para su práctica. Sin embargo, a la luz de la presente divulgación, los expertos en la materia deberían entender que estos ejemplos son ilustrativos y no exhaustivos.

[0301] Los compuestos aquí divulgados pueden prepararse de acuerdo con los procedimientos de los siguientes Esquemas y Ejemplos, utilizando materiales apropiados y se ejemplifican además con los siguientes ejemplos específicos. Además, utilizando los procedimientos descritos en el presente documento, en conjunción con las habilidades ordinarias en el arte, compuestos adicionales de la presente divulgación reivindicada en el presente documento se pueden preparar fácilmente. Los ejemplos ilustran además detalles para la preparación de los compuestos de la presente divulgación. Los expertos en la materia comprenderán fácilmente que para preparar estos compuestos pueden utilizarse variaciones conocidas de las condiciones y procesos de los siguientes procedimientos de preparación. Para sintetizar compuestos que son realizaciones descritas en la presente divulgación, la inspección de la estructura del compuesto a sintetizar proporcionará la identidad de cada grupo sustituyente. En algunos casos, la identidad del producto final puede hacer aparente la identidad de los materiales de partida necesarios mediante un proceso de inspección, dados los ejemplos aquí expuestos. Los compuestos pueden aislarse en forma de sus sales farmacéuticamente aceptables, como las descritas anteriormente. Los compuestos aquí descritos suelen ser estables y aislables a temperatura y presión ambiente.

[0302] A continuación se muestra una ilustración de la preparación de los compuestos aquí divulgados. A menos que se indique lo contrario, las variables tienen el mismo significado descrito anteriormente. Los ejemplos que se presentan a continuación pretenden ilustrar determinadas realizaciones de la divulgación. Los materiales de partida adecuados, los componentes básicos y los reactivos empleados en la síntesis descrita a continuación están disponibles comercialmente en Sigma-Aldrich o Acros Organics, por ejemplo, o pueden prepararse rutinariamente mediante procedimientos descritos en la bibliografía, por ejemplo en "March's Advanced Organic Chemistry: Reactions, Mechanisms, and Structure", 5ª edición; John Wiley & Sons o T. Eicher, S. Hauptmann "The Chemistry of Heterocycles; Structures, Reactions, Synthesis and Application", 2ª edición, Wiley-VCH 2003; Fieser et al. "Fiesers' Reagents for organic Synthesis" John Wiley & Sons 2000.

[0303] Métodos

[0304] Difracción de rayos X en polvo (XRPD)

[0305] Los patrones XRPD se recogieron en un difractómetro PANanalytical XPERT-PRO en condiciones ambientales bajo los siguientes ajustes experimentales: 45 KV, 40 mA, Kα1=1,5406 Å, intervalo de exploración de 2 a 40 °2θ, tamaño de paso 0,0084 o 0,0167 °2θ, tiempo de medición: 5 min.

[0306] Calorimetría diferencial de barrido (DSC)

[0307] [0129]Los termogramas DSC se recogieron en un sistema TA Instruments Q2000 equipado con un muestreador automático de 50 posiciones. La calibración para la energía y la temperatura se realizó utilizando indio certificado. Típicamente 1 - 5 mg de cada muestra, en un recipiente de aluminio con agujeros de alfiler, se calentó a 10 °C/min de aproximadamente 25 °C a aproximadamente 300 °C. Se mantuvo una purga de nitrógeno seco a 50 ml/min sobre la muestra durante toda la medición. El inicio de la endoterma de fusión se registró como punto de fusión.

[0308] Análisis Termogravimétrico (TGA)

[0309] Los termogramas TGA se recogieron en un sistema TA Instruments Q5000, equipado con un muestreador automático de 25 posiciones. Se cargaron aproximadamente 1 - 5 mg de cada muestra en un recipiente de aluminio previamente tarado y se calentaron a 10 °C/min desde aproximadamente 25 °C hasta aproximadamente 350 °C. Se mantuvo una purga de nitrógeno a 25 ml/min sobre la muestra durante toda la medición.

[0310] Esquema Sintético General

[0311] Los compuestos de Fórmula (Ia) en los que Y es N pueden sintetizarse de acuerdo con los siguientes esquemas sintéticos generales.

[0314]

[0317] [0132]En los esquemas sintéticos generales anteriores, A es piridileno o fenileno, cada uno de los cuales está opcionalmente sustituido con uno o dos grupos seleccionados independientemente entre halógeno, alcoxi C<1-4>, halo-alcoxi C<1-4>, alquilo C<1-4>, y halo-alquilo C<1-4>; Q es fenileno o piridileno, cada uno de los cuales está opcionalmente sustituido con uno o dos sustituyentes seleccionados independientemente entre halógeno, metilo, alcoxi C<1-4>, halo-alcoxi C<1-4>, -CH<2>F, -CHF<2>, y -CF<3>; X es un grupo saliente, Y es un grupo como un halógeno que puede utilizarse para la formación de una especie organometálica como un reactivo de Grignard, Z es isoxazol sustituido con R<1>o pirazol sustituido con alquilo C<1-4>o cicloalquilo C<3-6>, R<2>y R<3>se seleccionan independientemente entre hidrógeno, halógeno, metoxi, -CF<3>, - CHF<2>, -CH<2>F, -OCH<2>F, -OCHF<2>, -OCF<3>y metilo; R<4>es -CO<2>R<5>o -C(O)NR<5>R<6>; R<5>es hidrógeno, alquilo C<1-6>o halo-alquilo C<1-6>; y R<6>es hidrógeno o alquilo C<1-6>, en el que dicho alquilo C<1-6>está opcionalmente sustituido con 1 a 6 sustituyentes seleccionados independientemente entre halógeno, -SO<3>H, y -CO<2>H. PG es un grupo protector, y las variables restantes son las que se indican en el presente documento. Un compuesto de Fórmula (C) puede prepararse haciendo reaccionar un compuesto de Fórmula (A) con un compuesto de Fórmula (B) en presencia de una base. Un compuesto de Fórmula (D) se forma a partir de un compuesto de Fórmula (C) mediante la formación de una especie organometálica tal como un reactivo de Grignard seguido de condensación con una 3-cetoazetidina adecuadamente protegida. Un compuesto de Fórmula (E) se forma a partir de un compuesto de Fórmula (D) en condiciones de desprotección adecuadas. Un compuesto de Fórmula (E) puede combinarse con un compuesto de Fórmula (F) en presencia de una base para dar un compuesto de Fórmula (Ia).

[0318] Alternativamente, un compuesto de Fórmula (D) puede formarse haciendo reaccionar un compuesto de Fórmula (A) con un compuesto de Fórmula (G) en presencia de una base.

[0319] Los compuestos apropiados de estructura (A) y (B) pueden prepararse según los métodos descritos en los Ejemplos siguientes o por métodos conocidos en la técnica. Por ejemplo, X puede ser un halógeno (p. ej., fluoro, bromo, cloro y/o yodo) y PG puede ser un grupo protector terc-butilcarbonilo (BOC).

[0320] Ejemplo 1: Preparación de la Fórmula (I)

[0321] Paso 1: Preparación de 2,6-dicloro-4-fluorobenzaldehído oxima

[0322]

[0325]

[0327] Una suspensión de 2,6-dicloro-4-fluorobenzaldehído (20 g, 100 mmol), hidrocloruro de hidroxilamina (14 g, 210 mmol) y carbonato sódico (27 g, 260 mmol) en etanol/agua (5:1, 170 ml) se sonicó durante aproximadamente 10 minutos y luego se dejó agitar toda la noche a temperatura ambiente.

[0328] La mezcla se diluyó con agua y acetato de etilo. La fase acuosa se extrajo dos veces con acetato de etilo. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con solución acuosa saturada de cloruro sódico, se secaron sobre sulfato de magnesio anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida para obtener el intermedio deseado. LCMS-ESI<+>(m/z):

[0329] [M+H]<+>calc. para C<7>H<5>Cl<2>FNO: 207,97, encontrada: 207,99.

[0330] Paso 2: Preparación de 2,6-dicloro-4-fluoro-N-hidroxibenzimidoilcloruro

[0331]

[0334]

[0336] Una solución de 2,6-dicloro-4-fluorobenzaldehído oxima (21 g, 99 mmol) enN,N-dimetilformamida(200 ml) se trató con una única porción deN-clorosuccinimida (1,5 g, 11 mmol). Se burbujeó en la mezcla vapor de cloruro de hidrógeno (aproximadamente 40 ml, tomado del espacio libre de la botella de ácido clorhídrico concentrado). Tras la adición de otra porción deN-clorosuccinimida (1,5 g, 90 mmol), se introdujeron dos volúmenes más de cloruro de hidrógeno gaseoso (40 ml × 2). Se añadió másN-clorosuccinimida (12 g, 11 mmol) en pequeñas porciones. Al observar una exoterma a 25 °C, la mezcla se enfrió en un baño de agua a temperatura ambiente. Se dejó que la temperatura descendiera hasta aproximadamente 23 °C y se añadió el resto de laN-clorosuccinimida por partes. Al final de la adición, el análisis LC/MS reveló la persistencia del material de partida oxima, por lo que se añadió una porción final deN-clorosuccinimida (1,2 g, 9,0 mmol). La mezcla se dejó agitar durante toda la noche a temperatura ambiente y se llevó sin trabajo hasta el siguiente paso sintético. LCMS-ESI<+>(m

/z):[M+H]<+>calc. para C<7>H<4>Cl<3>FNO: 241,93, encontrada: 242.20.

[0337] Paso 3: Preparación de 5-ciclopropil-3-(2,6-dicloro-4-fluorofenil)isoxazol-4 carboxilato de etilo

[0338]

[0341]

[0343] Una solución de ciclopropil-3-oxopropanoato de etilo (19 g, 120 mmol) en 2-metiltetrahidrofurano a temperatura ambiente se trató mediante jeringa con trietilamina (55 ml, 400 mmol). Tras 30 minutos de agitación, se añadió gota a gota mediante jeringa la mezcla de reacción que contenía cloruro de 2,6-dicloro-4-fluoro-N-hidroxibenzimidoilo (24 g, 99 mmol). Al final de la adición, la mezcla se calentó a aproximadamente 60 °C durante toda la noche. La mezcla de reacción se concentró a presión reducida. El residuo se diluyó con solución de ácido clorhídrico al 10% y acetato de etilo. La fase acuosa se extrajo tres veces con acetato de etilo. Los extractos orgánicos combinados se lavaron una vez con solución acuosa saturada de cloruro sódico, se secaron sobre sulfato de magnesio anhidro y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía flash (gel de sílice) para obtener el intermedio deseado. LCMS-ESI<+>(m/z):

[0344] [M+H]<+>calc. para C<15>H<13>Cl<2>FNO<3>: 344,02, encontrada: 344,03

[0345] Paso 4: Preparación de (5-ciclopropil-3-(2,6-dicloro-4-fluorofenil)isoxazol-4-il)metanol

[0346]

[0349]

[0351] Se tomó una solución de 5-ciclopropil-3-(2,6-dicloro-4-fluorofenil)isoxazol-4-carboxilato de etilo (15 g, 44 mmol) en 2-metiltetrahidrofurano (220 ml) y se enfrió con agitación magnética en un baño de hielo húmedo/acetona de -12 a -10 °C aproximadamente. Se añadió gota a gota una solución de hidruro de litio y aluminio (2,0 M en tetrahidrofurano, 53 mmol). Tras 30 minutos de agitación en el baño, la mezcla, enfriada en un baño de agua helada, se extinguió sucesivamente con agua (2,0 ml, gota a gota con mucho cuidado), solución acuosa de hidróxido sódico al 15% (2,0 ml) y agua (6,0 ml). La suspensión se dejó agitar a temperatura ambiente durante 15 minutos antes de añadir sulfato de magnesio anhidro, a lo que siguió otra hora de agitación. La suspensión se filtró; la torta del filtro se lavó con acetato de etilo y el filtrado se concentró hasta sequedad a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía flash (gel de sílice) para obtener el intermedio deseado. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>calc. para C<13>H<11>Cl<2>FNO<2>302.01; encontrada: 302.51.

[0352] Paso 5: Preparación de 4-(clorometil)-5-ciclopropil-3-(2,6-dicloro-4-fluorofenil)isoxazol

[0353]

[0356]

[0359] [0145]Se añadió cloruro de tionilo (6,6 ml, 90 mmol) a una mezcla de (5-ciclopropil-3-(2,6-dicloro-4-fluorofenil)isoxazol-4-il)metanol (9,1 g, 30 mmol) en diclorometano (150 ml) a temperatura ambiente. A continuación, la mezcla se calentó a aproximadamente 45 °C durante 45 minutos. La mezcla se concentró a presión reducida. El residuo se recogió en éter dietílico y se reconcentró. Esto se repitió dos veces más para proporcionar el intermedio deseado, que se llevó adelante sin purificación adicional. LCMS-ESI<+>(m

/z):[M+H]<+>calc. para C<13>H<10>Cl<3>FNO: 319,97, encontrada: 320,50

[0360] Paso 6: Preparación de 4-((4-bromo-3-clorofenoxi)metil)-5-ciclopropil-3-(2,6-dicloro-4-fluorofenil)isoxazol [0146]

[0363]

[0365] Se trató una solución de 4-(clorometil)-5-ciclopropil-3-(2,6-dicloro-4-fluorofenil)isoxazol crudo (4,2 g, 13 mmol) enN,N-dimetilformamida (50 ml) con 4-bromo-3-clorofenol (2,7 g, 13 mmol), yoduro sódico (3,3 g, 22 mmol) y carbonato potásico anhidro (3,6 g, 26 mmol). La mezcla se calentó a aproximadamente 60 °C durante 25 minutos. La mezcla se filtró y el filtrado se concentró a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía flash (gel de sílice) para obtener el intermedio deseado. LCMS-ESI<+>(m

/z):[M+H]<+>calc. para C<19>H<13>BrCl<3>FNO<2>: 489,91, encontrada: 490.10.

[0366] Paso 7: Preparación de 3-(2-cloro-4-((5-ciclopropil-3-(2,6-dicloro-4-fluorofenil)isoxazol-4-il)metoxi)fenil)-3-hidroxiazatidina-1-carboxilato de terc-butilo

[0367]

[0370]

[0373] Bajo una atmósfera de argón, se trató una solución de 4-((4-bromo-3-clorofenoxi)metil)-5-ciclopropil-3-(2,6-dicloro-4-fluorofenil)isoxazol (5,1 g, 10 mmol) en tetrahidrofurano (27 ml) con una solución de cloruro de isopropilmagnesio/cloruro de litio (1,3 M, 12 ml, 15 mmol) mediante jeringa. La mezcla resultante se agitó durante una hora antes de introducir un volumen adicional de solución de cloruro de isopropilmagnesio/cloruro de litio (1,3 M, 4,0 ml, 5,2 mmol). Tras 45 minutos de agitación, se añadió otra porción de solución de cloruro de isopropilmagnesio/cloruro de litio (1,3 M, 1,0 ml, 1,3 mmol). Tras una hora de agitación, se añadió 3-oxoazetidina-1-carboxilato de terc-butilo (3,8 g, 22 mmol) en una sola porción a la mezcla de Grignard, que se estaba enfriando en un baño de hielo húmedo/acetona. Tras 30 minutos de agitación, se añadió una porción adicional de 3-oxoazetidina-1-carboxilato de terc-butilo (0,80 g, 4,7 mmol). La mezcla se extinguió con solución acuosa de ácido cítrico al 10% (50 ml). La fase acuosa se extrajo tres veces con acetato de etilo. Los orgánicos combinados se lavaron una vez cada uno con agua y solución acuosa saturada de cloruro sódico, se secaron sobre sulfato de magnesio anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía flash (gel de sílice) para obtener el intermedio deseado. LCMS-ESI<+>(m

/z):[M+H]<+>calc. para C<27>H<27>Cl<3>FN<2>O<5>: 584,86, encontrada: 483,19

[0374] Paso 8: Preparación de la sal de tosilato de 3-(2-cloro-4-((5-ciclopropil-3-(2,6-dicloro-4-fluorofenil)isoxazol-4-il)metoxi)fenil)azetidin-3-ol

[0375]

[0376]

[0378] Se añadió ácidop-toluenosulfónicomonohidratado (3,5 g, 18 mmol) a una mezcla de 3-(2-cloro-4-((5-ciclopropil-3-(2,6-dicloro-4-fluorofenil)isoxazol-4-il)metoxi)fenil)-3-hidroxiazetidina-1-carboxilato deterc-butilo (5,3 g, 9,1 mmol) e isopropanol (21 ml). La mezcla se calentó durante toda la noche a aproximadamente 50 °C y posteriormente se enfrió en un baño de hielo húmedo/acetona con agitación magnética. La suspensión resultante se calentó casi hasta la homogeneidad a aproximadamente 50 °C. Una vez enfriada la mezcla, se añadió hexano y la suspensión resultante se sometió a sonicación y se calentó a aproximadamente 50 °C. El sólido se recogió mediante filtración por succión, se lavó con hexano y se secó en un horno de vacío a aproximadamente 75 °C para proporcionar la sal de tosilato del intermedio deseado. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>calc. para C<22>H<19>Cl<3>FN<2>O<3>: 483,04, encontrada: 483,19

[0379] Paso 9: Preparación de 6-(3-(2-cloro-4-((5-ciclopropil-3-(2,6-dicloro-4-fluorofenil)isoxazol-4-il)metoxi)fenil)-3-hidroxiazetidin-1-il)nicotinato de metilo

[0380]

[0383]

[0385] Una mezcla de 3-(2-cloro-4-((5-ciclopropil-3-(2,6-dicloro-4-fluorofenil)isoxazol-4-il)metoxi)fenil)azetidin-3-ol tosilato (0,47 g, 0.71 mmol), 6-cloronicotinato de metilo (0,15 g, 0,90 mmol), y carbonato potásico (0,49 g, 3,6 mmol) enN,N-dimetilformamida (4 ml) se calentó durante la noche a 80 °C. La reacción se repartió entre acetato de etilo y agua. La fase acuosa se extrajo tres veces con acetato de etilo. Los extractos combinados se lavaron sucesivamente con agua y solución acuosa saturada de cloruro sódico, se secaron sobre sulfato de magnesio anhidro, se filtraron y se concentraron a presión reducida. El residuo se purificó mediante cromatografía flash (gel de sílice) para obtener el intermedio deseado. LCMS-ESI<+>(m

/z):[M+H]<+>calc. para C<29>H<24>Cl<3>FN<5>O<5>: 618,07, encontrada: 618,41

[0386] Paso 10: Preparación del ácido 6-(3-(2-cloro-4-((5-ciclopropil-3-(2,6-dicloro-4-fluorofenil)isoxazol-4-il)metoxi)fenil)-3-hidroxiazetidin-1-il)nicotínico

[0387]

[0390]

[0392] [0155]Una mezcla de 6-(3-(2-cloro-4-((5-ciclopropil-3-(2,6-dicloro-4-fluorofenil)isoxazol-4-il)metoxi)fenil)-3-hidroxiazetidin-1-il)isonicotinato de metilo (0.32 g, 0,51 mmol) e hidróxido de litio monohidratado (43 mg, 1,0 mmol) en tetrahidrofurano/agua (1:1, 10 ml) se agitó a temperatura ambiente durante una noche.

[0393] La mezcla se concentró a presión reducida para eliminar la mayor parte de los volátiles. La mezcla acuosa resultante se diluyó de nuevo con agua y se trató con ácido acético seguido de una solución acuosa de ácido clorhídrico al 10%. El precipitado resultante se recogió mediante filtración por succión, se lavó con agua y se secó en una estufa de vacío a aproximadamente 50 °C para obtener el material deseado como ácido libre. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>calc. para C<28>H<22>Cl<3>FN<3>O<5>: 604,05, encontrada: 604.41.

[0394] Paso 11: Preparación del ácido 6-(3-(2-cloro-4-((5-ciclopropil-3-(2,6-dicloro-4-fluorofenil)isoxazol-4-il)metoxi)fenil)-3-hidroxiazetidin-1-il)nicotínico, sal tris

[0395]

[0398]

[0401] El ácido 6-(3-(2-cloro-4-((5-ciclopropil-3-(2,6-dicloro-4-fluorofenil)isoxazol-4-il)metoxi)fenil)-3-hidroxiazetidin-1-il)nicotínico (0,29 g, 0.48 mmol) se tomó como una suspensión en MeOH/agua (95:5, 2 mL), se trató con trometamina (58 mg, 0,48 mmol), se calentó a 55 °C y se concentró para proporcionar el ácido deseado como la sal de trometamina.<1>H NMR (400 MHz, Metanol-d4

) δ 8.65 (dd, J = 2.2, 0.8 Hz, 1H), 8.05 (dd, J = 8.7, 2.2 Hz, 1H), 7.38 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 7.35 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 6.87 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 6.78 (dd, J = 8.6, 2.6 Hz, 1H), 6.42 (dd, J = 8.8, 0.8 Hz, 1H), 4.92 (s, 2H), 4.57 (dd, J = 9.3, 1.1 Hz, 2H), 4.29 (dd, J = 9.2, 1.1 Hz, 2H), 3.63 (s, 7H), 2.32 (tt, J = 8.0, 5.5 Hz, 1H), 1.25 - 1.11 (m, 4H).

[0402] Ejemplo 2: Síntesis del Ejemplo Comparativo 1

[0403] Ácido 6-(3-(2-cloro-4-((5-ciclopropil-3-(2,6-dicloro-4-fluorofenil)isoxazol-4-il)metoxi)fenil)-3-hidroxiazetidin-1-il)-5-fluoronicotínico

[0404]

[0407]

[0410] Síntesis del intermedio A:

[0411] A una solución de (4-bromo-3-clorofenoxi)(terc-butil)dimetilsilano (60 g, 187 mmol) en THF (500 ml) se añadió gota a gota n-BuLi (2,5 M, 75 ml) a aproximadamente -78 °C bajo N<2>. La reacción se agitó a aproximadamente -78 °C durante 1 hora. A continuación, se añadió gota a gota una solución de 3-oxoazetidina-1-carboxilato de terc-butilo (27 g, 155 mmol) en THF (500 ml) a la mezcla a -78 °C. A continuación, la reacción se agitó a aproximadamente 20 °C durante 3 horas. La mezcla de reacción se vertió en H<2>O (1 l) y se extrajo con EtOAc (2 l) tres veces. Las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua (1 l), se secaron sobre Na<2>SO<4>, se filtraron y se concentraron al vacío. El producto bruto se purificó por cromatografía en gel de sílice eluyendo con 10: 1 éter de petróleo:EtOAc para dar 3-(4-((tercbutildimetilsilil)oxi)-2-clorofenil)azetidin-3-ol (Intermedio A).

[0412] Paso 1: 3-(2-cloro-4-hidroxifenil)-3-hidroxiazetidina-1-carboxilato de terc-butilo

[0413] A una solución de 3-(4-((terc-butildimetilsilil)oxi)-2-clorofenil)-3-hidroxiazetidina-1-carboxilato deterc-butilo (Intermedio A,1,27 g, 3,07 mmol) en THF (50,0 ml) a aproximadamente -10 °C se añadió gota a gota TBAF 1M en THF (3,68 ml, 3,68 mmol). La reacción se agitó durante 2 horas y se concentró para obtener 3-(2-cloro-4-hidroxifenil)-3-hidroxiazetidina-1-carboxilatode terc-butilo, que se utilizó sin purificación adicional.

[0414] Paso 2: 4-(clorometil)-5-ciclopropil-3-(2,6-dicloro-4-fluorofenil)isoxazol

[0415] Se enfrió a aproximadamente 0 °C una solución de (5-ciclopropil-3-(2,6-dicloro-4-fluorofenil)isoxazol-4-il)metanol (45 mg, 2,80 mmol) en DCM (28,0 ml). Se añadió cloruro de tionilo (1,02 ml, 14,0 mmol) y la solución se calentó a aproximadamente 45 °C durante 1 hora. La reacción se concentró hasta sequedad y se utilizó sin purificar en el siguiente paso.

[0416] Paso 3: 3-(2-cloro-4-((5-ciclopropil-3-(2,6-dicloro-4-fluorofenil)isoxazol-4-il)metoxi)fenil)-3-hidroxiazatidina-1-carboxilato de terc-butilo

[0417] Se añadió una solución de 3-(2-cloro-4-hidroxifenil)-3-hidroxiazetidina-1-carboxilatode terc-butilo (922 mg, 3,07 mmol) en DMF (28,0 ml) a 4-(clorometil)-5-ciclopropil-3-(2,6-dicloro-4-fluorofenil)isoxazol crudo, seguido de la adición de carbonato potásico (773 mg, 5,60 mmol). La mezcla se calentó a aproximadamente 60 °C durante 8 horas. La reacción se concentró, se diluyó con agua y se extrajo con EtOAc (3x). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con agua, salmuera, se secaron sobre MgSO<4>, se filtraron y se concentraron. El producto bruto se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (DCM/Et<2>O/MeOH) para obtener 3-(2-cloro-4-((5-ciclopropil-3-(2,6-dicloro-4-fluorofenil)isoxazol-4-il)metoxi)fenil)-3-hidroxiazatidina-1-carboxilatode terc-butilo. LCMS-ESI<+>(m/z): [(M+H)-BOC]<+>calc. 483.04; encontrada 483.04.

[0418] Paso 4: 3-(2-cloro-4-((5-ciclopropil-3-(2,6-dicloro-4-fluorofenil)isoxazol-4-il)metoxi)fenil)azetidin-3-ol

[0419] A una solución de 3-(2-cloro-4-((5-ciclopropil-3-(2,6-dicloro-4-fluorofenil)isoxazol-4-il)metoxi)fenil)-3-hidroxiazatidina-1-carboxilato deterc-butilo (1,52 g, 2,60 mmol) en DCM (130 ml) se añadió HCl 4 N en 1,4-dioxano (26,0 ml, 104 mmol). La solución se agitó a temperatura ambiente durante 2,5 horas y se concentró hasta sequedad para obtener 3-(2-cloro-4-((5-ciclopropil-3-(2,6-dicloro-4-fluorofenil)isoxazol-4-il)metoxi)fenil)azetidin-3-ol como sal clorhidrato, que se utilizó sin purificación adicional. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>calc.483.04; encontrada 483.03.

[0420] Paso 5: 6-(3-(2-cloro-4-((5-ciclopropil-3-(2,6-dicloro-4-fluorofenil)isoxazol-4-il)metoxi)fenil)-3-hidroxiazetidin-1-il)-5-fluoronicotinato de metilo

[0421] Se calentó una mezcla de 6-cloro-5-fluoropiridina de metilo (235 mg, 1,24 mmol), 3-(2-cloro-4-((5-ciclopropil-3-(2,6-dicloro-4-fluorofenil)isoxazol-4-il)metoxi)fenil)azetidin-3-ol como sal de clorhidrato (495 mg, 0,952 mmol) y carbonato potásico (1,05 g, 7,61 mmol) en DMF (30,0 ml) durante 1 hora.952 mmol) y carbonato potásico (1,05 g, 7,61 mmol) en DMF (30,0 ml) se calentó a aproximadamente 60 °C durante 1 hora. La reacción se concentró, se diluyó con agua y se extrajo con EtOAc (3x). Las capas orgánicas combinadas se lavaron con salmuera, se secaron sobre MgSO<4>, se filtraron y se concentraron. La mezcla cruda se purificó mediante cromatografía en gel de sílice (DCM / Et<2>O / MeOH) para obtener 6-(3-(2-cloro-4-((5-ciclopropil-3-(2,6-dicloro-4-fluorofenil)isoxazol-4-il)metoxi)fenil)-3-hidroxiazetidin-1-il)-5-fluoronicotinato de metilo. LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>calc.636.07; encontrada 635.96.

[0422] Paso 6: Ácido 6-(3-(2-cloro-4-((5-ciclopropil-3-(2,6-dicloro-4-fluorofenil)isoxazol-4-il)metoxi)fenil)-3-hidroxiazetidin-1-il)-5-fluoronicotínico (Ejemplo Comparativo 1)

[0423] A una solución de 6-(3-(2-cloro-4-((5-ciclopropil-3-(2,6-dicloro-4-fluorofenil)isoxazol-4-il)metoxi)fenil)-3-hidroxiazetidin-1-il)-5-fluoronicotinato de metilo (364 mg, 0,571 mmol) en THF/agua (1:1:20,0 ml) se añadió hidróxido de litio monohidratado (41,3 mg, 0,984 mmol).571 mmol) en THF / agua (1:1, 20,0 ml) se añadió hidróxido de litio monohidratado (41,3 mg, 0,984 mmol). La solución se agitó durante 18 horas, se concentró para eliminar el THF y se diluyó con agua (10,0 ml). El pH se ajustó a 3 con HCl 1N. Los sólidos se filtraron, se lavaron con agua, se disolvieron en ACN/agua y se liofilizaron para obtener ácido 6-(3-(2-cloro-4-((5-ciclopropil-3-(2,6-dicloro-4-fluorofenil)isoxazol-4-il)metoxi)fenil)-3-hidroxiazetidin-1-il)-5-fluoronicotínico (Ejemplo Comparativo 1). LCMS-ESI<+>(m/z): [M+H]<+>calc.622.05; encontrada 622.12.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d<6>) δ 12.84 (bs, 1H), 8.44 (t, J = 1.7 Hz, 1H), 7.79 - 7.63 (m, 3H), 7.39 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 6.95 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 6.77 (dd, J = 8.6, 2.6 Hz, 1H), 6.28 (s, 1H), 4.93 (s, 2H), 4.70 (d, J = 9.8 Hz, 2H), 4.34 (d, J = 9.5 Hz, 2H), 2.50-2.43 (m, 1H), 1.22 - 1.08 (m, 4H).

[0424] Ejemplo 3: Ensayo de actividad FRET

[0425] La determinación de una interacción péptido cofactor mediada por ligando para cuantificar la unión de ligando al receptor nuclear FXR se realizó como sigue.

[0426] [0168]Preparación del dominio de unión a ligando (LBD) del FXR alfa humano: El LBD del FXRalfa humano se expresó en la cepa BL21(DE3) deE. colicomo una proteína de fusión marcada N-terminalmente con GST. El ADN que codifica el dominio de unión al ligando FXR se clonó en el vector pDEST15 (Invitrogen). La expresión estaba bajo el control de un promotor T7 inducible por IPTG. Los límites aminoacídicos del dominio de unión al ligando fueron los aminoácidos 187-472 de la entrada de la base de datos NM_005123 (RefSeq). Expresión y purificación del FXR-LBD: Un precultivo de una noche de una cepa deE. colitransformada se diluyó 1:20 en medio LB-Ampicilina y se cultivó a 30 °C hasta una densidad óptica de OD<600>=0,4-0,6. A continuación, se indujo la expresión génica mediante la adición de 0,5 mM de IPTG. Las células se incubaron otras 6 h a 30 °C, 180 rpm. Las células se recogieron por centrifugación (7000 x g, 7 minutos, temperatura ambiente). Por litro de cultivo celular original, las células se resuspendieron en 10 ml de tampón de lisis (50 mM de glucosa, 50 mM de Tris pH 7,9, 1 mM de EDTA y 4 mg/ml de lisozima) y se dejaron en hielo durante 30 min. A continuación, las células se sometieron a sonicación y los restos celulares se eliminaron mediante centrifugación (22000 × g, 30 min, 4 °C). Se añadieron 0,5 ml de suspensión de sefarosa Glutatión 4B prelavada (Qiagen) por cada 10 ml de sobrenadante y la suspensión se mantuvo en rotación lenta durante 1 hora a 4 °C. Las perlas de sefarosa de glutatión 4B se separaron por centrifugación (2000 x g, 15 segundos, 4 °C) y se lavaron dos veces en tampón de lavado (25 mM Tris, 50 mM KCl, 4 mM MgCl<2>y 1M NaCl). El precipitado se resuspendió en 3 ml de tampón de elución por litro de cultivo original (tampón de elución: 20 mM Tris, 60 mM KCl, 5 mM MgCl<2>y 80 mM glutatión añadidos inmediatamente antes de su uso como polvo). La suspensión se dejó en rotación durante 15 minutos a 4 °C, las microesferas se precipitaron y se eluyeron de nuevo con la mitad de volumen de tampón de elución que la primera vez. Los eluidos se agruparon y dializaron durante la noche en tampón Hepes 20 mM (pH 7,5) que contenía 60 mM KCl, 5 mM MgCl<2>así como 1 mM de ditiotreitol y 10% (v/v) de glicerol. La proteína se analizó mediante SDS-Page.

[0428] El método mide la capacidad de los ligandos putativos para modular la interacción entre el dominio de unión a ligando (LBD) de FXR purificado expresado bacterialmente y un péptido sintético biotinilado basado en los residuos 676-700 de SRC-1 (LCD2, 676-700). La secuencia del péptido utilizado fue B-CPSSHSSLTERHKILHRLLQEGSPS-COOH (SEQ ID NO: 1) donde el N-terminal fue biotinilado (B). El dominio de unión al ligando (LBD) del FXR se expresó como proteína de fusión con GST en células BL-21 utilizando el vector pDEST15. Las células se lisaron por sonicación y las proteínas de fusión se purificaron sobre glutatión sefarosa (Pharmacia) siguiendo las instrucciones del fabricante. Para el cribado de compuestos en busca de su influencia en la interacción FXR-péptido, se aplicó la tecnología LANCE de Perkin Elmer. Este método se basa en la transferencia de energía dependiente de la unión de un fluoróforo donante a un aceptor unido a la pareja de unión de interés. Para facilitar la manipulación y reducir el fondo de fluorescencia de los compuestos, la tecnología LANCE utiliza etiquetas fluoróforas genéricas y detección resuelta en el tiempo Los ensayos se realizaron en un volumen final de 25 µl en una placa de 384 pocillos, en un tampón basado en Tris (20 mM Tris-HCl pH 7.5; 60 mM KCl, 5 mM MgCl<2>; 35 ng/µl BSA), con 20-60 ng/pocillo de FXR-LBD expresado recombinantemente y fusionado a GST, 200-600 nM de péptido N-terminal biotinilado, que representa los aminoácidos 676-700 de SRC1, 200 ng/pocillo de conjugado de estreptavidina-xlAPC (Prozyme) y 6-10 ng/pocillo de Eu W1024 - antiGST (Perkin Elmer). El contenido de DMSO de las muestras se mantuvo en el 1%. Tras generar la mezcla del ensayo y diluir los ligandos potencialmente moduladores del FXR, el ensayo se equilibró durante 1 hora en la oscuridad a temperatura ambiente en placas FIA negras de 384 pocillos (Greiner). La señal LANCE se detectó con un contador multilabel VICTOR2VTM de Perkin Elmer. Los resultados se visualizaron trazando la relación entre la luz emitida a 665 y 615 nm. Se observa un nivel basal de formación de péptidos FXR en ausencia de ligando añadido. Los ligandos que promueven la formación del complejo inducen un aumento dependiente de la concentración de la señal fluorescente resuelta en el tiempo. Se espera que los compuestos que se unen por igual al FXR monomérico y al complejo FXR-péptido no produzcan ningún cambio en la señal, mientras que se espera que los ligandos que se unen preferentemente al receptor monomérico induzcan una disminución dependiente de la concentración en la señal observada.

[0430] Para evaluar el potencial agonístico de los compuestos, se determinaron los valores EC<50>para los compuestos de ejemplo y se enumeran a continuación en la Tabla 1 (EC<50>de FRET). Como se indica en la Tabla 1, el compuesto del Ejemplo 1 se evaluó junto con el Ejemplo Comparativo 1, y el Ejemplo Comparativo 2 (Ejemplo 3 de la Publicación de Solicitud de Patente de EE. UU. N.º 2017/0355685), cuyas estructuras químicas se representan en la tabla siguiente.

[0431] Ejemplo 4: Ensayo del híbrido mamífero uno (M1H)

[0433] La determinación de una transactivación impulsada por el promotor Gal4 mediada por ligando para cuantificar la activación de FXR mediada por unión a ligando se realizó como sigue.

[0435] La parte de ADNc que codifica el dominio de unión al ligando FXR se clonó en el vector pCMV-BD (Stratagene) como una fusión con el dominio de unión al ADN GAL4 de levadura bajo el control del promotor CMV. Los límites aminoacídicos del dominio de unión al ligando fueron los aminoácidos 187-472 de la entrada de la base de datos NM_005123 (RefSeq). Como plásmido indicador se utilizó el plásmido pFR-Luc (Stratagene), que contiene un promotor sintético con cinco repeticiones en tándem de los sitios de unión a GAL4 de la levadura, que impulsa la expresión del gen de la luciferasa de Photinus pyralis (luciérnaga americana) como gen indicador. Para mejorar la precisión experimental se cotransfectó el plásmido pRL-CMV (Promega). pRL-CMV contiene el promotor constitutivo CMV, que controla la expresión de la luciferasa Renilla reniformis. Todos los ensayos del gen indicador Gal4 se realizaron en células HEK293 (obtenidas de DSMZ, Braunschweig, Alemania) cultivadas en MEM con L-Glutamina y BSS de Earle suplementado con 10% de suero bovino fetal, 0,1 mM de aminoácidos no esenciales, 1 mM de piruvato sódico y 100 unidades de Penicilina/Estreptavidina por ml a aproximadamente 37 °C en 5% de CO<2>. El medio y los suplementos se obtuvieron de Invitrogen. Para el ensayo, se sembraron 5 x 10<5>células por pocillo en placas de 96 pocillos en 100 µl por pocillo de MEM sin rojo de fenol ni L-glutamina y con BSS de Earle suplementado con un 10% de FBS tratado con carbón/dextrano (HyClone, South Logan, Utah), 0,1 mM de aminoácidos no esenciales, 2 mM de glutamina, 1 mM de piruvato sódico y 100 unidades de penicilina/estreptavidina por ml, incubadas a aproximadamente 37 °C en un 5% de CO<2>. Al día siguiente, las células tenían una confluencia superior al 90%. Se eliminó el medio y las células se transfectaron transitoriamente utilizando 20 µl por pocillo de un reactivo de transfección basado en OptiMEM - polietilenimina (OptiMEM, Invitrogen; polietilenimina, Aldrich Cat No.40,827-7) que incluía los tres plásmidos descritos anteriormente. Se añadió MEM con la misma composición que la utilizada para el cultivo de células 2-4 horas después de añadir la mezcla de transfección. A continuación, se añadieron stocks de compuestos, prediluidos en MEM (concentración final del vehículo no superior al 0,1%). Las células se incubaron durante 16 horas más antes de medir secuencialmente las actividades de luciferasa de luciérnaga y renilla en el mismo extracto celular utilizando un sistema de ensayo de luciferasa de doble luz (Dyer et al., Anal. Biochem.2000, 282, 158-161). Todos los experimentos se realizaron por triplicado.

[0437] [0173]Para evaluar la potencia agonística FXR de los compuestos de ejemplo, la potencia se determinó en el ensayo M1H y se enumera a continuación en la Tabla 1 (EC<50>de M1H).

[0438] Tabla 1

[0441]

[0443] Ejemplo 5: Evaluación de la Farmacodinámica in vivo en Mono Cynomolgus

[0444] La farmacodinámicain vivode la Fórmula (I) del Ejemplo 1, del Ejemplo Comparativo 1 y del Ejemplo Comparativo 2 se determinó como sigue.

[0445] ARTÍCULO DE ENSAYO Y FORMULACIÓN

[0446] Dosis de Suspensión Oral

[0447] Se formularon dosis de solución oral de Fórmula (I) (Ejemplo 1)a concentraciones de 1 mg/ml en suspensiones acuosas de 1% de lauril sulfato de sodio (SLS), 1% de etanol y 98% de agua a pH 2. Las dosis de suspensión oral delEjemplo Comparativo 1y delEjemplo Comparativo 2se formularon a concentraciones de 2,5 mg/ml en 1% de hidroxipropilmetilcelulosa (HPMC), 0,5% de Tween 80 y 98,5% de agua.

[0448] Dosis Intravenosas

[0449] Se formularon dosis intravenosas de compuestos de Fórmula (I)(Ejemplo 1), Ejemplo Comparativo 1yEjemplo Comparativo 2a concentraciones de 0,5 mg/ml en un vehículo que incluía 5% DMSO, 15% NMP, 60% PEG 300 y agua con 1,1 equivalentes de NaOH.

[0450] Animales

[0451] Cada grupo de administración constaba de tres a seis monos macho Cynomolgus. En el momento de la administración, los animales pesaban entre 2,4 y 4,4 kg.

[0452] Administración

[0453] Los artículos de prueba orales se administraron a los monos mediante sonda oral a 2 ml/kg o por sonda nasogástrica a 5 ml/kg para una dosis de 5 mg/kg. Los artículos de prueba intravenosos se administraron en infusión durante aproximadamente 30 minutos a través de un catéter permanente en una vena safena o cefálica a aproximadamente 2 ml/kg para una dosis de 1 mg/kg.

[0454] Recogida de Muestras

[0455] Se tomaron muestras de sangre venosa de cada animal en momentos específicos después de la administración. Se recogieron las muestras de sangre y se transfirieron a tubos que contenían anticoagulante de potasio (K<2>) EDTA. Determinación de las Concentraciones de FGF19 en Plasma

[0456] Se utilizó el kit de ensayo ELISA FGF19 de BioVendor (número de producto RD191107200R) para determinar las concentraciones de FGF19 en las muestras de sangre recogidas.

[0457] Determinación de la Concentración del Fármaco en Plasma

[0458] Para el análisis en un sistema API 5000 LC/MS/MS, una alícuota de 50 µL de cada muestra de plasma se trató con 200 µL de acetonitrilo (ACN) que contenía estándar interno. La solución anterior se centrifugó a 5000 RPM durante 10 minutos y se transfirieron 50 µl de sobrenadante a una placa de 96 pocillos limpia, seguida de la adición de 200 µl de agua. Se inyectó una alícuota de 10 µl en el sistema API 5000 LC/MS/MS.

[0459] Para el análisis en un sistema LC/MS/MS API 5500 de Applied Biosystems, se trató una alícuota de 20 µl de cada muestra de plasma con 120 µl de acetonitrilo (ACN) que contenía el patrón interno. Se centrifugó la solución anterior y se transfirieron 100 µl de sobrenadante a una placa de 96 pocillos limpia, tras lo cual se añadieron 100 µl de agua. Se inyectó una alícuota de 7-10 µl en el sistema LC/MS/MS API 5500.

[0460] Condiciones HPLC

[0461] Se utilizó una columna HPLC Zorbax Extend C18 (50 x 2,1 mm, 3,5 µm) de Agilent Technologies (N.º de referencia 735700-902) (Ejemplo comparativo 1 y Ejemplo comparativo 2) o una columna Waters BEH C18 (50 x 2,1 mm, 1,7 µm) (Ejemplo 1). Para la columna de HPLC Zorbax Extend C18, la fase móvil A contenía una solución acuosa de 1% de acetonitrilo en formiato de amonio 10 mM ajustado a pH 3,0 con ácido fórmico y la fase móvil B contenía y 10% de formiato de amonio 10 mM en acetonitrilo ajustado a pH 4,6 con ácido fórmico. Para la columna Waters BEH C18, la fase móvil A contenía 95% de agua, 5% de acetonitrilo y 0,1% de ácido fórmico, y la fase móvil B contenía 50% de metanol, 50% de acetonitrilo y 0,1% de ácido fórmico. Para la elución y separación se utilizó un multiplexor Thermo Aria con dos bombas binarias idénticas Agilent de la serie 1200 (P/N G1312A Bin Pump). Los programas de elución utilizados se exponen en la siguiente Tabla 2 para la HPLC Zorbax Extend C18 y en la Tabla 3 para la columna Waters BEH C18.

[0462] Tabla 2.

[0465]

[0468] Se utilizó un espectrómetro de masas de triple cuadrupolo API 5000 de AB Sciex, Foster City, CA, en modo de monitorización de reacción múltiple para cuantificar los compuestos. Los parámetros de espectrometría de masas utilizados se exponen en la siguiente Tabla 4.

[0469] Tabla 4.

[0472]

[0475] Administración oral frente a intravenosa en monos cynomolgus

[0476] La activación del Receptor X Famesoide en el intestino delgado distal, así como sistémicamente en órganos como el hígado, causa directamente la expresión y secreción de FGF19. Se evaluaron los niveles plasmáticos de FGF19 como marcador farmacodinámico de la activación de FXR en monos cynomolgus macho tras la aministración oral e intravenosa de dosis delEjemplo 1, Ejemplo Comparativo 1oEjemplo Comparativo 2.La diferencia entre los niveles de FGF19 tras la administración oral (PO) frente a la administración intravenosa (IV) se utilizó para comparar el grado de agonismo intestinal de FXR (mediante el análisis de los datos PO) y el agonismo sistémico de FXR (mediante el análisis de los datos IV) para cada compuesto administrado. Los niveles plasmáticos del fármaco y del FGF19 se midieron en varios momentos a lo largo de un periodo de 24 horas para generar curvas farmacocinéticas y farmacodinámicas.

[0477] La FIG.1 representa un gráfico de la concentración plasmática de FGF19 a lo largo del tiempo en mono cynomolgus tras la administración con el compuesto del Ejemplo 1.

[0478] La FIG. 2 representa un gráfico de la concentración plasmática de FGF19 a lo largo del tiempo en el mono cynomolgus tras la administración con el compuesto del Ejemplo Comparativo 1.

[0479] La FIG.3 representa un gráfico de la concentración plasmática de FGF19 a lo largo del tiempo en mono cynomolgus tras la administración con el compuesto del Ejemplo Comparativo 2.

[0480] Los datos faramacocinéticos se resumen en la Tabla 5 a continuación.

[0481] Tabla 5.

[0484]

[0486] [0190]Como se refleja en los resultados, la administración oral del Ejemplo 1, el Ejemplo Comparativo 1 y el Ejemplo Comparativo 2 causaron aumentos en el FGF19 plasmático durante el intervalo de administración en comparación con los niveles basales de FGF19 antes de la administración. Esto indica agonismo del receptor FXR intestinal. La administración IV del Ejemplo 1 no provocó un aumento del FGF19, lo que indica una falta de agonismo sistémico del FXR. Por el contrario, la administración IV de los Ejemplos comparativos 1 y 2 aumentó los niveles de FGF19 en comparación con los niveles basales de FGF19 antes de la administración, lo que indica que se produjo un agonismo sistémico de FXR.

[0487] Estos datos sugieren que las exposiciones ileales del Ejemplo 1 y del Ejemplo Comparativo 2 causan la activación de FXR en el epitelio intestinal. Los datos sugieren además que las exposiciones sistémicas del Ejemplo Comparativo 1 y del Ejemplo Comparativo 2, mediante administración IV, provocan una mayor activación sistémica, no intestinal, del FXR en relación con el Ejemplo 1.

[0488] Ejemplo 6: Inhibición de UGT1A1

[0489] Se probó el compuesto de Fórmula (I) (Ejemplo 1) para la inhibición de UGT1A1 y se comparó contra el Ejemplo Comparativo 1. Para realizar el ensayo, el compuesto de muestra se incubó con Supersomes<™>humanos de expresión UGT1A1 (0,25 mg/ml), alameticina (25 µg/mg) y UDPGA (5 mM) en presencia del sustrato de sonda estradiol (10 µM) durante 30 min a 37 °C. Un inhibidor selectivo de UGT1A1, el atazanavir, se analizó junto con los compuestos de ensayo como control positivo. Las reacciones se terminaron extinguiendo una alícuota en dos volúmenes de metanol. Las muestras se centrifugaron a 2500 rpm durante 30 minutos a 4 °C, y alícuotas del sobrenadante se diluyeron con ácido fórmico en agua desionizada (concentración final de ácido fórmico 0,1%) y patrón interno. Se utilizaron condiciones LC-MS/MS genéricas de Cyprotex para monitorizar la formación de 3-glucurónido de estradiol. Para calcular un valor IC<50>se utiliza una disminución en la formación del metabolito en comparación con el control del vehículo.

[0490] Los datos mostraron que el compuesto del Ejemplo 1 mostró la inhibición de UGT1A1 más potente de los compuestos comparados. El ejemplo 1 tuvo una IC<50>de 0,44 µM.

[0491] Ejemplo 7: Inhibición de CYP2C8, CYP3A4 y CYP2B6

[0492] Se evaluó el compuesto de Fórmula (I) (Ejemplo 1) para la inhibición de CYP2C8, CYP3A4 y CYP2B6 y se comparó con el Ejemplo Comparativo 1.

[0493] CYP2C8

[0494] Seis concentraciones de compuestos de muestra (0.1, 0.25, 1, 2.5, 10, 25 µM en DMSO; concentración final de DMSO 0.25%) se incubaron con microsomas de hígado humano (1 mg/mL) y NADPH (1 mM) en presencia del sustrato de sonda tolbutamida (120 µM) durante 60 minutos a 37 °C. El inhibidor selectivo del CYP2C9, el sulfafenazol, se analizó junto con los compuestos de ensayo como control positivo.

[0495] CYP3A4

[0496] Seis concentraciones de compuestos de muestra (0.1, 0.25, 1, 2.5, 10, 25 µM en DMSO; concentración final de DMSO 0.26%) se incubaron con microsomas de hígado humano (0.1 mg/ml) y NADPH (1 mM) en presencia del sustrato sonda midazolam (2.5 µM) durante 5 min a 37 °C. El inhibidor selectivo de CYP3A4, ketoconazol, se analizó junto con los compuestos de ensayo como control positivo. Alternativamente, se incubaron seis concentraciones de compuestos de muestra (0,1, 0,25, 1, 2,5, 10, 25 µM en DMSO; concentración final de DMSO 0,275%) con microsomas de hígado humano (0,5 mg/ml) y NADPH (1 mM) en presencia del sustrato sonda testosterona (50 µM) durante 5 min a 37 °C. El inhibidor selectivo de CYP3A4, ketoconazol, se analizó junto con los compuestos de ensayo como control positivo.

[0497] CYP2B6

[0498] Seis concentraciones de compuestos de prueba (0.1, 0.25, 1, 2.5, 10, 25 µM en DMSO; concentración final de DMSO 0.3%) se incuban con microsomas de hígado humano (0.1 mg/mL) y NADPH (1 mM) en presencia del sustrato sonda bupropion (110 µM) durante 5 min a 37 °C. El inhibidor selectivo de CYP2B6, la ticlopidina, se analiza junto con los compuestos de ensayo como control positivo.

[0499] Para cada una de las incubaciones de CYP2B6, CYP2C8, y CYP3A4, las reacciones fueron terminadas por adición de metanol. A continuación, las muestras se centrifugaron y se analizaron por LC-MS/MS. Antes del análisis, se añadió a la muestra final ácido fórmico en agua desionizada (concentración final 0,1%) con patrón interno. Para calcular la IC<50>se utilizó una disminución en la formación de los metabolitos en comparación con el control del vehículo.

[0500] Los datos mostraron que el compuesto del Ejemplo I no inhibió CYP2B6, mientras que el Ejemplo Comparativo 1 inhibió CYP2B6.

[0501] Ejemplo 8: Preparación de la Forma I de mesilato de Fórmula (I)

[0502] La Forma I de mesilato de Fórmula (I) se preparó combinando ácido 6-(3-(2-cloro-4-((5-ciclopropil-3-(2,6-dicloro4-fluorofenil)isoxazol-4-il)metoxi)fenil)-3-hidroxiazetidin-1-il)nicotínico (0.050 g, 0,0827 mmol) con ácido metanosulfónico (8 ul, 0,123 mmol) en un vial con alcohol isopropílico (1 ml) dando lugar a una suspensión. La suspensión se calentó a aproximadamente 50 °C durante aproximadamente 30 minutos, después se dejó enfriar lentamente a temperatura ambiente y la lechada durante unas 16 horas. A continuación, la suspensión se filtró y los sólidos aislados se caracterizaron por DRX presentados en la FIG. 4. A continuación, los sólidos se secaron en un horno de vacío a aproximadamente 50 °C y se caracterizaron por DRX, que dio como resultado el mismo patrón. Los picos XRPD de la Forma I de mesilato de Fórmula (I) incluyeron picos a: 3.2, 6.4, 9.6, 12.8, 19.3, 22.1, 22.6, 25.8, 29.1 °2θ. Los picos XRPD obtenidos se enumeran a continuación en la Tabla 1.

[0504] Tabla 1.

[0507]

[0510] Se realizaron análisis DSC y TGA. El termograma DSC de la Forma I de mesilato de Fórmula (I) mostró un evento endotérmico a aproximadamente 221 °C seguido de un evento exotérmico, como se ve en la FIG.5. El termograma TGA de la Forma I de mesilato de Fórmula (I) mostró una pérdida de peso de aproximadamente 0.6% al calentarse a aproximadamente 200 °C, como se observa en la FIG.6.

[0512] La Forma I de mesilato de Fórmula (I), también se formó tomando ácido 6-(3-(2-cloro-4-((5-ciclopropil-3-(2,6-dicloro-4-fluorofenil)isoxazol-4-il)metoxi)fenil)-3-hidroxiazetidin-1-il)nicotínico (3.00 g, 4,96 mmol) como suspensión en MeCN/agua (1,5:1 v/v, 15 ml) y tratándolo con una solución acuosa de hidróxido sódico (30 % en peso, 0,56 ml, 5,95 mmol). La solución resultante se cargó durante varias horas en un segundo recipiente que contenía una solución agitada de ácido metano sulfónico (1,0 ml, 15,9 mmol) en MeCN (15 ml) precalentado a aproximadamente 50 °C. La suspensión resultante se envejeció a aproximadamente 50 °C durante varias horas y luego se enfrió a aproximadamente 20 °C. La suspensión se filtra al vacío y los sólidos resultantes se secan al vacío a temperatura elevada hasta aproximadamente 60 °C para proporcionar la Forma I de mesilato de Fórmula (I).

[0514] [0203]La Forma I de mesilato de Fórmula (I) también se formó tomando ácido 6-(3-(2-cloro-4-((5-ciclopropil-3-(2,6-dicloro-4-fluorofenil)isoxazol-4-il)metoxi)fenil)-3-hidroxiazetidin-1-il)nicotínico (0,5 g, 0,83 mmol) como suspensión en acetona/agua (97:3 v/v, 10 ml) y calentando a aproximadamente 55 °C. Se cargó ácido metano sulfónico (60 µl, 0,91 mmol) a la suspensión y la mezcla se envejeció a aproximadamente 55 °C durante varias horas. La suspensión se enfrió a aproximadamente 20 °C y se filtró al vacío. Los sólidos resultantes se lavaron con acetona y se secaron al vacío a temperatura elevada hasta aproximadamente 60 °C para proporcionar la Forma I de mesilato de Fórmula (I).

[0515] A menos que se defina lo contrario, todos los términos técnicos y científicos utilizados en el presente documento tienen el mismo significado que comúnmente entiende una persona con conocimientos ordinarios en la técnica a la que pertenece esta divulgación.

[0516] Por lo tanto, debe entenderse que, aunque la presente divulgación ha sido específicamente divulgada por realizaciones preferidas y características opcionales, la modificación, mejora y variación de las divulgaciones aquí realizadas puede ser recurrida por aquellos expertos en la materia, y que tales modificaciones, mejoras y variaciones se consideran dentro del alcance de esta divulgación. Los materiales, métodos y ejemplos proporcionados aquí son representativos de las realizaciones preferidas, son ejemplares y no pretenden limitar el alcance de la divulgación.

[0517] La presente divulgación se ha descrito de forma amplia y genérica. También forman parte de la divulgación cada una de las especies y agrupaciones subgenéricas más restringidas incluidas en la divulgación genérica. Esto incluye la descripción genérica de la divulgación con una salvedad o limitación negativa que elimine cualquier materia del género, independientemente de si el material eliminado se menciona específicamente o no en el presente documento.

[0518] Además, cuando las características o aspectos de la divulgación se describen en términos de grupos de Markush, los expertos en la materia reconocerán que la divulgación también se describe en términos de cualquier miembro individual o subgrupo de miembros del grupo de Markush.

[0519] Debe entenderse que, si bien la divulgación se ha descrito en conjunción con las realizaciones anteriores, la descripción y los ejemplos precedentes pretenden ilustrar y no limitar el alcance de la divulgación. Otros aspectos, ventajas y modificaciones dentro del ámbito de la divulgación serán evidentes para los expertos en la materia a la que pertenece la divulgación.

Claims (14)

1. REIVINDICACIONES

1. Una composición farmacéutica que comprende de 7 mg a 350 mg de un compuesto que tiene la siguiente Fórmula (I):

o una sal farmacéuticamente aceptable del mismo, para su administración como dosis diaria total para un humano adulto de 70 kg.

2. La composición farmacéutica de la reivindicación 1, que comprende además un portador farmacéuticamente aceptable.

3. La composición farmacéutica de la reivindicación 1 o de la reivindicación 2 formulada para administración oral, rectal, tópica, parenteral, ocular, pulmonar o nasal.

4. La composición farmacéutica de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en la que la composición farmacéutica se formula como comprimido, trozo, dispersión, suspensión, solución, cápsula, crema, pomada o aerosol.

5. La composición farmacéutica de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 formulada para administración oral.

6. La composición farmacéutica según la reivindicación 5, en la que la composición farmacéutica se formula en forma de comprimido o cápsula.

7. La composición farmacéutica según la reivindicación 5 o la reivindicación 6, en la que la composición farmacéutica está formulada en forma de comprimido.

8. La composición farmacéutica según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 para su uso en combinación con un inhibidor de la quinasa reguladora de la señal de apoptosis 1 (ASK1) para tratar y/o prevenir una enfermedad hepática.

9. La composición farmacéutica para uso de la reivindicación 8, en la que el inhibidor de ASK1 es un compuesto de Fórmula (II):

o una sal farmacéuticamente aceptable, un estereoisómero, una mezcla de estereoisómeros o un tautómero del mismo.

10. La composición farmacéutica según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 para su uso en combinación con un inhibidor de la Acetil CoA Carboxilasa (ACC) para tratar y/o prevenir una enfermedad hepática.

11. La composición farmacéutica para uso de la reivindicación 10, en la que el inhibidor de ACC es un compuesto de Fórmula (III):

o una sal farmacéuticamente aceptable, un estereoisómero, una mezcla de estereoisómeros o un tautómero del mismo.

12. La composición farmacéutica según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 para su uso en combinación con un agonista β del Receptor de la Hormona Tiroidea (THR) para su uso en el tratamiento y/o prevención de una enfermedad hepática.

13. La composición farmacéutica para uso de la reivindicación 12, en la que el agonista THR β es un compuesto de Fórmula (IV):

o una sal farmacéuticamente aceptable, un estereoisómero, una mezcla de estereoisómeros o un tautómero del mismo.

14. La composición farmacéutica para uso de cualquiera de las reivindicaciones 8 a 13, en la que la composición farmacéutica de cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 y el inhibidor de ASK 1, el inhibidor de ACC o el agonista β de THR se administran por separado.