ES3059814T3

ES3059814T3 - Safe and effective method of treating psoriasis with anti-il23 specific antibody

Info

Publication number: ES3059814T3
Application number: ES17857471T
Authority: ES
Inventors: Bruce Randazzo; Yasmine Wasfi
Original assignee: Janssen Biotech Inc
Current assignee: Janssen Biotech Inc
Priority date: 2016-09-30
Filing date: 2017-09-29
Publication date: 2026-03-23
Anticipated expiration: 2037-09-29
Also published as: AU2017336799A1; EP3519049B1; SI3519049T1; US20180094052A1; KR20240046648A; HRP20260008T1; PT3519049T; KR20190059305A; WO2018064436A1; AU2017336799B2; US20200385454A1; AU2023254982A1; US20240360212A1; IL316408A; PL3519049T3; JP2022071020A; JP2020500152A; FI3519049T3; LT3519049T; MD3519049T2

Abstract

Método para tratar la psoriasis en pacientes mediante la administración de un anticuerpo específico contra la IL-23, por ejemplo, guselkumab, en una cantidad segura y eficaz, logrando que el paciente alcance una puntuación PASI90, PASI100 o IGA 0 o 1, medida a las 16, 24, 32, 40 y 48 semanas después del tratamiento inicial. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

[0001] DESCRIPCIÓN

[0003] Método seguro y eficaz para tratar la psoriasis con un anticuerpo específico anti-IL23

[0005] Campo de la invención

[0007] La presente invención se refiere a métodos para tratar la psoriasis con un anticuerpo que se une a la proteína IL-23 humana. En particular, se refiere a un método para administrar el anticuerpo específico anti-IL-23 guselkumab y a composiciones farmacéuticas específicas de guselkumab, que es seguro y eficaz para los pacientes que padecen psoriasis.

[0009] Antecedentes de la invención

[0011] La interleucina (IL)-12 es una citocina heterodimérica secretada que comprende 2 subunidades proteicas glicosiladas unidas por disulfuro, designadas p35 y p40 por sus pesos moleculares aproximados. La IL-12 es producida principalmente por células presentadoras de antígenos e impulsa la inmunidad mediada por células al unirse a un complejo receptor de dos cadenas que se expresa en la superficie de las células T o las células destructoras naturales (NK, por sus siglas en inglés). La cadena beta-1 del receptor de la IL-12 (IL-12Rβ1) se une a la subunidad p40 de la IL-12, proporcionando la interacción primaria entre la IL-12 y su receptor. Sin embargo, es la ligación de la IL-12p35 de la segunda cadena de receptor, la IL-12Rβ2, la que confiere la señalización intracelular (p. ej., la fosforilación de STAT4) y la activación de la célula portadora del receptor (Presky y col., 1996). Se cree que la señalización de la IL-12 concurrente con la presentación del antígeno invoca la diferenciación de las células T hacia el fenotipo T helper 1 (Th1), caracterizado por la producción de interferón gamma (IFNy) (Trinchieri, 2003). Se cree que las células Th1 promueven la inmunidad contra algunos patógenos intracelulares, generan isotipos de anticuerpos que fijan el complemento y contribuyen a la inmunovigilancia tumoral. Por lo tanto, se cree que la IL-12 es un componente importante de los mecanismos inmunitarios de defensa del huésped.

[0013] Se descubrió que la subunidad proteica p40 de la IL-12 también puede asociarse con una subunidad proteica separada, designada p19, para formar una nueva citocina, la IL-23 (Oppman y col., 2000). La IL-23 también envía señales a través de un complejo receptor de dos cadenas. Dado que la subunidad p40 se comparte entre la IL-12 y la IL-23, se sigue que la cadena IL-12Rβ1 también se comparte entre la IL-12 y la IL-23. Sin embargo, es la ligación de la IL-23p19 del segundo componente del complejo de receptor de la IL-23, la IL-23R, la que confiere la señalización intracelular específica de la IL-23 (p. ej., la fosforilación de STAT3) y la posterior producción de la IL-17 por parte de las células T (Parham y col., 2002; Aggarwal y col. 2003). Estudios recientes han demostrado que las funciones biológicas de la IL-23 son distintas de las de la IL-12, a pesar de la similitud estructural entre las dos citocinas (Langrish y col., 2005).

[0015] La regulación anormal de las poblaciones de células IL-12 y Th1 se ha asociado con muchas enfermedades mediada por el sistema inmunitarios, ya que la neutralización de la IL-12 mediante anticuerpos es eficaz en el tratamiento de modelos animales de psoriasis, esclerosis múltiple (EM), artritis reumatoide, enfermedad inflamatoria intestinal, diabetes mellitus insulinodependiente (tipo 1), y uveítis (Leonard y col., 1995; Hong col., 1999; Malfait col., 1998; Davidson col., 1998). Sin embargo, dado que estos estudios se dirigieron a la subunidad p40 compartida, tanto la IL-12 como la IL-23 se neutralizaronin vivo.Por lo tanto, no estaba claro si la IL-12 o la IL-23 mediaban la enfermedad, o si era necesario inhibir ambas citocinas para lograr la supresión de la enfermedad. Estudios recientes han confirmado a través de ratones deficientes de IL-23p19 o la neutralización con anticuerpo específico de la IL-23, que la inhibición de la IL-23 puede proporcionar un beneficio equivalente al de las estrategias anti-IL-12p40 (Cua y col., 2003, Murphy y col., 2003, Benson y col., 2004). Por lo tanto, cada vez hay más pruebas del papel específico de la IL-23 en la enfermedad mediada por el sistema inmunitario. La neutralización de la IL-23 sin la inhibición de las vías de la IL-12 podría, a continuación, proporcionar una terapia eficaz para la enfermedad mediada por el sistema inmunitario con un impacto limitado en el importante mecanismo inmunitario de defensa del huésped. Esto representaría una mejora significativa con respecto a las opciones terapéuticas actuales.

[0017] La psoriasis es un trastorno cutáneo crónico mediado por el sistema inmunitario común con comorbilidades significativas, tal como la artritis psoriásica (PsA), la depresión, las enfermedades cardiovasculares, la hipertensión, la obesidad, la diabetes, el síndrome metabólico y la enfermedad de Crohn. La psoriasis en placas es la forma más común de la enfermedad y se manifiesta en lesiones eritematosas bien delimitadas cubiertas con escamas plateadas blancas. Las placas son pruriginosas, dolorosas, frecuentemente desfigurantes e incapacitantes, y una proporción significativa de los pacientes con psoriasis tiene placas en las manos/uñas, la cara, los pies y los genitales. Como tal, la psoriasis impacta negativamente la calidad de vida relacionada con la salud (HRQoL, por sus siglas en inglés) en una medida significativa, incluyendo la imposición de cargas físicas y psicosociales que se extienden más allá de los síntomas dermatológicos físicos e interfieren con las actividades diarias. Por ejemplo, la psoriasis impacta negativamente a las relaciones familiares, conyugales, sociales y laborales, y se asocia con una mayor incidencia de depresión y un aumento de las tendencias suicidas.

[0018] La caracterización histológica de las lesiones de psoriasis revela un engrosamiento de la epidermis que resulta de la proliferación y diferenciación aberrantes de queratinocitos, así como la infiltración dérmica y la colocalización de linfocitos T CD3+ y células dendríticas. Si bien la etiología de la psoriasis no está bien definida, los análisis de genes y proteínas han demostrado que la IL-12, la IL-23 y sus moléculas corriente abajo se sobreexpresan en las lesiones psoriásicas, y algunas pueden correlacionarse con la gravedad de la enfermedad de la psoriasis. Algunas terapias utilizadas en el tratamiento de la psoriasis modulan los niveles de IL-12 e IL-23, lo que se especula que contribuye a su eficacia. Las células Th1 y Th17 pueden producir citocinas efectoras que inducen la producción de vasodilatadores, quimioatrayentes y la expresión de moléculas de adhesión en las células endoteliales que, a su vez, promueven el reclutamiento de monocitos y neutrófilos, la infiltración de células T, la neovascularización, y la activación e hiperplasia de queratinocitos. Los queratinocitos activados pueden producir factores quimioatrayentes que promueven el tráfico de neutrófilos, monocitos, células T y células dendríticas, estableciendo así un ciclo de inflamación e hiperproliferación de queratinocitos.

[0019] La elucidación de la patogénesis de la psoriasis ha dado lugar a tratamientos biológicos eficaces que se dirigen al factor de necrosis tumoral alfa (TNF-α), tanto a la interleucina (IL)-12 como a la IL-23 y, más recientemente, a la IL-17 así como a la IL-23 sola (incluyendo los ensayos clínicos de fase 1 y 2 que utilizan guselkumab). El guselkumab (también conocido como CNTO 1959) es un anticuerpo monoclonal lambda IgG1 totalmente humano que se une a la subunidad p19 de la IL-23 e inhibe la señalización intracelular y corriente abajo de la IL-23, requerida para la diferenciación terminal de las células T helper (Th) 17.

[0020] Sofen y col., J. Allergy Clin. Immunol 33:4 (2014) informa que el guselkumab demuestra una respuesta clínica y molecular en pacientes con psoriasis de moderada a grave. Gordon y col., NEJM 373:2 (2015) describe un ensayo de fase 2 de guselkumab versus adalimumab para la psoriasis en placas. Takahashi y col., Int. J. Dermatol., 54(10):1194-1198 (2015) compara la eficacia del ustekinumab entre los casos de psoriasis japoneses no tratados previamente con fármacos anti-TNFα anti-TNFα y casos resistentes a los fármacos anti-TNFα. Foulkes y col., Clin. Exp. Dermatol.

[0021] 36(6):585-589 (2011) presenta un análisis de las guías y revisiones sistemáticas sobre la psoriasis publicadas en 2009-2010.

[0022] Resumen de la invención

[0023] La invención proporciona un anticuerpo IL-23 para utilizarse en un método para tratar la psoriasis en un paciente que es no respondedor a un inhibidor del TNF, que comprende administrar el anticuerpo al paciente en una cantidad segura y eficaz, en donde el anticuerpo es guselkumab y el inhibidor del TNF es adalimumab.

[0024] Cualquier referencia en la descripción a métodos de tratamiento se refiere a los compuestos, composiciones farmacéuticas y medicamentos de la presente invención para utilizarse en un método para el tratamiento del cuerpo humano (o animal) mediante terapia (o para diagnóstico).

[0025] En una realización, el anticuerpo específico anti-IL-23 se administra en una dosis inicial, una dosis 4 semanas después de eso, y con un intervalo de dosificación de una vez cada 8 semanas después de eso, p. ej., una dosis a las 0, 4, 8, 16, 24, 32, 40 y 48 semanas. En otro aspecto, la composición utilizada en el método de la invención comprende una composición farmacéutica que comprende: un anticuerpo específico anti-IL-23 en una cantidad de aproximadamente 1,0 µg/ml a aproximadamente 1000 mg/ml, específicamente a 50 mg o 100 mg. En una realización preferida, el anticuerpo específico anti-IL-23 es el guselkumab a 100 mg/ml; 7,9 % (p/v) de sacarosa, 4,0 mM de histidina, 6,9 mM de monoclorhidrato de L-histidina monohidratado; 0,053 % (p/v) de polisorbato 80 de la composición farmacéutica; en donde el diluyente es agua en estado estándar.

[0026] En una realización, el paciente con psoriasis alcanzó los criterios de valoración para lograr una puntuación de IGA de enfermedad aclarada o mínima (IGA 0/1) y una mejora del 90 % en la respuesta PASI (PASI 90) o una mejora del 100 % en la respuesta PASI (PASI 100) en la semana 16.

[0027] Descripción detallada de las realizaciones preferidas

[0028] Como se utiliza en la presente memoria, el método de tratamiento de la psoriasis comprende administrar anticuerpos humanos específicos anti-IL-23 aislados, recombinantes y/o sintéticos, y composiciones, métodos y dispositivos diagnósticos y terapéuticos.

[0029] Como se utiliza en la presente memoria, un “anticuerpo específico anti-IL-23”, “anticuerpo anti-IL-23”, “parte de anticuerpo” o “fragmento de anticuerpo” y/o “variante de anticuerpo” y similares incluyen cualquier molécula que contenga proteínas o péptidos, que comprenda al menos una parte de una molécula de inmunoglobulina, tal como, pero sin limitarse a, al menos una región determinante de complementariedad (CDR, por sus siglas en inglés) de una cadena pesada o ligera o una parte de unión al ligando de la misma, una región variable de cadena pesada o ligera, una región constante de cadena pesada o cadena ligera, una región de marco, o cualquier parte de la misma, o al menos una parte de un receptor de IL-23 o proteína de unión, que puede incorporarse en un anticuerpo. Tal anticuerpo opcionalmente afecta además un ligando específico, tal como, pero sin limitarse a, donde tal anticuerpo modula, disminuye, aumenta, antagoniza, agoniza, mitiga, alivia, bloquea, inhibe, anula y/o interfiere con al menos una actividad o unión de la IL-23, o con la actividad o unión del receptor de la IL-23,in vitro, insitu y/o in vivo. Como ejemplo no limitativo, un anticuerpo anti-IL-23 adecuado, la parte o variante especificada puede unirse al menos a una molécula de IL-23, o partes, variantes o dominios especificados de la misma. Un anticuerpo anti-IL-23 adecuado, la parte o variante especificada también pueden afectar opcionalmente al menos a una de la actividad o la función de la IL-23, tales como, pero sin limitarse a, la síntesis de ARN, ADN o proteínas, la liberación de la IL-23, la señalización del receptor de la IL-23, la escisión de la IL-23 en la membrana, la actividad de la IL-23, la producción y/o síntesis de la IL-23.

[0031] El término “anticuerpo” pretende abarcar además anticuerpos, fragmentos de digestión, partes y variantes especificadas de los mismos, incluyendo los miméticos de anticuerpos o comprendiendo partes de anticuerpos que imitan la estructura y/o función de un anticuerpo o fragmento o parte especificados del mismo, incluyendo los anticuerpos monocatenarios y fragmentos del mismo. Los fragmentos funcionales incluyen fragmentos de unión al antígeno que se unen a una IL-23 de un mamífero. Por ejemplo, fragmentos de anticuerpos capaces de unirse a la IL-23 o partes de la misma, incluyendo, aunque no de forma limitativa, Fab (p. ej., mediante digestión con papaína), Fab' (p. ej., mediante digestión con pepsina y reducción parcial) y F(ab')<2>(p. ej., mediante digestión con pepsina), facb (p. ej., mediante digestión con plasmina), pFc' (p. ej., mediante digestión con pepsina o plasmina), Fd (p. ej., mediante digestión con pepsina, reducción parcial y reagregación), Fv o scFv (p. ej., mediante técnicas de biología molecular), están abarcados por el término (véase, p. ej., Colligan, Immunology, supra).

[0033] Tales fragmentos pueden producirse mediante escisión enzimática, técnicas sintéticas o recombinantes, como se conoce en la técnica y/o como se describe en la presente memoria. Los anticuerpos también pueden producirse en una variedad de formas truncadas utilizando genes de anticuerpos en los que se han introducido uno o más codones de parada corriente arriba del sitio de parada natural. Por ejemplo, un gen combinado que codifica una parte de cadena pesada F(ab')<2>puede diseñarse para incluir secuencias de ADN que codifican el dominio C<H>1 y/o la región bisagra de la cadena pesada. Las diversas partes de los anticuerpos pueden unirse químicamente mediante técnicas convencionales, o pueden prepararse como una proteína contigua utilizando técnicas de ingeniería genética.

[0035] Como se utiliza en la presente memoria, el término “anticuerpo humano” se refiere a un anticuerpo en el que sustancialmente cada parte de la proteína (p. ej., CDR, marco, dominios C<L>, C<H>(p. ej., C<H>1, C<H>2, C<H>3), bisagra, (V<L>, V<H>)) es sustancialmente no inmunogénico en los seres humanos, con solo cambios o variaciones de secuencia menores. Un “anticuerpo humano” también puede ser un anticuerpo que se deriva de o coincide estrechamente con las secuencias de inmunoglobulina de la línea germinal humana. Los anticuerpos humanos pueden incluir residuos de aminoácidos no codificados por secuencias de inmunoglobulina de la línea germinal (p. ej., mutaciones introducidas por mutagénesis aleatoria o específica de sitio in vitro o por mutación somática in vivo). Frecuentemente, esto significa que el anticuerpo humano es sustancialmente no inmunogénico en los seres humanos. Los anticuerpos humanos se han clasificado en grupos en función de sus similitudes en las secuencias de aminoácidos. En consecuencia, utilizando una búsqueda de similitud de secuencias, puede elegirse un anticuerpo con una secuencia lineal similar como plantilla para crear un anticuerpo humano. Similarmente, los anticuerpos designados primates (mono, babuino, chimpancé, etc.), roedores (ratón, rata, conejo, cobaya, hámster y similares) y otros mamíferos designan anticuerpos específicos de tales especies, subgéneros, géneros, subfamilias y familias. Además, los anticuerpos quiméricos pueden incluir cualquier combinación de los anteriores. Tales cambios o variaciones retienen o reducen opcional y preferiblemente la inmunogenicidad en humanos u otras especies en relación con los anticuerpos no modificados. Por lo tanto, un anticuerpo humano es distinto de un anticuerpo quimérico o humanizado.

[0037] Se señala que un anticuerpo humano puede ser producido por un animal no humano o una célula procariota o eucariota que es capaz de expresar genes de inmunoglobulina humana funcionalmente reordenados (p. ej., cadena pesada y/o cadena ligera). Además, cuando un anticuerpo humano es un anticuerpo monocatenario, puede comprender un péptido enlazador que no se encuentra en los anticuerpos humanos nativos. Por ejemplo, un Fv puede comprender un péptido enlazador, tal como de dos a aproximadamente ocho residuos de glicina u otros aminoácidos, que conecta la región variable de la cadena pesada y la región variable de la cadena ligera. Se considera que tales péptidos enlazadores son de origen humano.

[0039] También pueden utilizarse anticuerpos biespecíficos, heteroespecíficos, heteroconjugados o similares que sean anticuerpos monoclonales, preferiblemente humanos o humanizados, que tengan especificidades de unión para al menos dos antígenos diferentes. En el presente caso, una de las especificidades de unión es para al menos una proteína IL-23, la otra es para cualquier otro antígeno. Los métodos para fabricar anticuerpos biespecíficos son conocidos en la técnica. Tradicionalmente, la producción recombinante de anticuerpos biespecíficos se basa en la coexpresión de dos pares de cadena pesada-cadena ligera de inmunoglobulina, donde las dos cadenas pesadas tienen diferentes especificidades (Milstein y Cuello, Nature 305:537 (1983)). Debido a la variedad aleatoria de cadenas pesadas y ligeras de inmunoglobulinas, estos hibridomas (cuadromas) producen una mezcla potencial de 10 moléculas de anticuerpos diferentes, de las cuales solo una tiene la estructura biespecífica correcta. La purificación de la molécula correcta, que usualmente se realiza mediante pasos de cromatografía de afinidad, es bastante engorrosa y los rendimientos del producto son bajos. Se describen procedimientos similares, p. ej., en la patente WO 93/08829, las patentes US-6210668, US-6193967, US-6132992, US-6106833, US-6060285, US-6037453, US-6010902, US-5989530, US-5959084, US-5959083, US-5932448, US-5833985, US-5821333, US-5807706, US-5643759, US5601819, US-5582996, US-5496549, US-4676980, WO 91/00360, WO 92/00373, EP 03089, Traunecker y col., EMBO J.10:3655 (1991), Suresh y col., Methods in Enzymology 121:210 (1986).

[0040] Los anticuerpos específicos anti-IL-23 (también denominados anticuerpos específicos de la IL-23) (o anticuerpos para la IL-23) útiles en los métodos y composiciones de la presente invención pueden caracterizarse opcionalmente por una unión de alta afinidad a la IL-23 y, opcional y preferiblemente, por tener una baja toxicidad. En particular, un anticuerpo de la invención, donde los componentes individuales, tales como la región variable, la región constante y el marco, individual y/o colectivamente, opcional y preferiblemente poseen baja inmunogenicidad, es útil en la presente invención. Los anticuerpos que pueden utilizarse en la invención se caracterizan opcionalmente por su capacidad para tratar a pacientes durante períodos prolongados con un alivio medible de los síntomas y una toxicidad baja y/o aceptable. La inmunogenicidad baja o aceptable y/o la alta afinidad, así como otras propiedades adecuadas, pueden contribuir a los resultados terapéuticos logrados. La “baja inmunogenicidad” se define en la presente memoria como el aumento significativo de respuestas HAHA, HACA o HAMA en menos de aproximadamente el 75 %, o preferiblemente menos de aproximadamente el 50 % de los pacientes tratados y/o el aumento de títulos bajos en el paciente tratado (menos de aproximadamente 300, preferiblemente menos de aproximadamente 100, medido con un inmunoensayo enzimático de doble antígeno) (Elliott y col., Lancet 344:1125-1127 (1994)). La “baja inmunogenicidad” también puede definirse como la incidencia de niveles ajustables de anticuerpos para el anticuerpo anti-IL-23 en pacientes tratados con el anticuerpo anti-IL-23, que se produce en menos del 25 % de los pacientes tratados, preferiblemente, en menos del 10 % de los pacientes tratados con la dosis recomendada para el curso de terapia recomendado durante el período de tratamiento.

[0041] Utilidad

[0042] Los ácidos nucleicos aislados descritos en la presente memoria pueden utilizarse para producir al menos un anticuerpo anti-IL-23 o variante especificada del mismo, que puede utilizarse para medir o hacer efectos en una célula, tejido, órgano o animal (incluyendo mamíferos y seres humanos), para diagnosticar, monitorizar, modular, tratar, aliviar, ayudar a prevenir la incidencia de, o reducir los síntomas de la psoriasis.

[0043] Tal método puede comprender la administración de una cantidad eficaz de una composición o una composición farmacéutica que comprende al menos un anticuerpo anti-IL-23 a una célula, tejido, órgano, animal o paciente que necesita tal modulación, tratamiento, alivio, prevención, o reducción de los síntomas, efectos o mecanismos. La cantidad eficaz puede comprender una cantidad de aproximadamente 0,001 a 500 mg/kg por administración única (p. ej., bolo), múltiple o continua, o para lograr una concentración sérica de 0,01-5000 µg/ml por administración única, múltiple o continua, o cualquier intervalo o valor eficaz en el mismo, como se realiza y determina utilizando métodos conocidos, como se describe en la presente memoria o se conoce en las técnicas relevantes

[0044] Citas

[0045] Ausubel, y col., ed., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, Inc., NY, NY (1987-2001); Sambrook, y col., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2.ª edición, Cold Spring Harbor, NY (1989); Harlow and Lane, antibodies, a Laboratory Manual, Cold Spring Harbor, NY (1989); Colligan, y col., eds., Current Protocols in Immunology, John Wiley & Sons, Inc., NY (1994-2001); Colligan y col., Current Protocols in Protein Science, John Wiley & Sons, NY, NY, (1997-2001).

[0046] Anticuerpos de la presente invención: producción y generación

[0047] Un anticuerpo anti-IL-23 puede producirse opcionalmente mediante una línea celular, una línea celular mixta, una célula inmortalizada o una población clonal de células inmortalizadas, como es bien conocido en la técnica. Véase, p. ej., Ausubel, y col., ed., Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, Inc., NY, NY (1987-2001); Sambrook, y col., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2.ª edición, Cold Spring Harbor, NY (1989); Harlow and Lane, antibodies, a Laboratory Manual, Cold Spring Harbor, NY (1989); Colligan, y col., eds., Current Protocols in Immunology, John Wiley & Sons, Inc., NY (1994-2001); Colligan y col., Current Protocols in Protein Science, John Wiley & Sons, NY, NY, (1997-2001).

[0048] Un anticuerpo anti-IL-23 preferido es el guselkumab (también denominado CNTO1959) que tiene la secuencia de aminoácidos de región variable de cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 106 y la secuencia de aminoácidos de región variable de cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 116 y que tiene las secuencias de aminoácidos de CDR de cadena pesada de la Id. de sec. n.º: 5, la Id. de sec. n.º: 20, y la Id. de sec. n.º: 44; y las secuencias de aminoácidos de CDR de cadena ligera de la Id. de sec. n.º: 50, la Id. de sec. n.º: 56 y la Id. de sec. n.º: 73. Otros anticuerpos anti-IL-23 tienen secuencias enumeradas en la presente memoria y se describen en la patente US-7.935.344).

[0049] Los anticuerpos humanos que son específicos para las proteínas IL-23 humanas o fragmentos de las mismas pueden generarse contra un antígeno inmunogénico apropiado, tal como una proteína IL-23 aislada y/o una parte de la misma (incluyendo moléculas sintéticas, tales como péptidos sintéticos). Otros anticuerpos de mamíferos específicos o generales pueden generarse de forma similar. La preparación de antígenos inmunogénicos y la producción de anticuerpos monoclonales puede realizarse utilizando cualquier técnica adecuada.

[0050] En un enfoque, un hibridoma se produce mediante la fusión de una línea celular inmortal adecuada (p. ej., una línea celular de mieloma, tal como, pero sin limitarse a, Sp2/0, Sp2/0-AG14, NSO, NS1, NS2, AE-1, L.5, L243, P3X63Ag8.653, Sp2 SA3, Sp2 MAI, Sp2 SS1, Sp2 SA5, U937, MLA 144, ACT IV, MOLT4, DA-1, JURKAT, WEHI, K-562, COS, RAJI, NIH 3T3, HL-60, MLA 144, NAMALWA, NEURO 2A, o similares, o heteromielomas, productos de fusión de los mismos, o cualquier célula o célula de fusión derivada de los mismos, o cualquier otra línea celular adecuada conocida en la técnica) (véase, p. ej., www.atcc.org, www.lifetech.com., y similares), con células productoras de anticuerpos, tales como, pero sin limitarse a, células aisladas o clonadas de bazo, sangre periférica, linfa, amígdala u otras células inmunitarias o que contienen células B, o cualquiera de otras células que expresan secuencias de marco o CDR, constantes o variables de cadena pesada o ligera, o ya sea como ácido nucleico endógeno o heterólogo, como ADN recombinante o endógeno, viral, bacteriano, de alga, procariota, anfibio, insecto, reptil, pez, mamífero, roedor, equino, ovino, cabra, oveja, primate, eucariota, genómico, ADNc, ADNr, ADN o ARN mitocondrial, ADN o ARN de cloroplasto, ARNnh, ARNm, ARNt, monocatenarios, bicatenarios o triples, hibridados, y similares o cualquier combinación de los mismos. Véase, p. ej., Ausubel, supra, y Colligan, Immunology, supra, capítulo 2.

[0052] Las células productoras de anticuerpos también pueden obtenerse de la sangre periférica o, preferiblemente, del bazo o los ganglios linfáticos, de seres humanos u otros animales adecuados que se hayan inmunizado con el antígeno de interés. También puede utilizarse cualquier otra célula huésped adecuada para expresar un ácido nucleico heterólogo o endógeno que codifica un anticuerpo de la presente invención. Las células fusionadas (hibridomas) o las células recombinantes pueden aislarse utilizando condiciones de cultivo selectivas u otros métodos conocidos adecuados, y clonarse limitando la dilución o la clasificación celular, u otros métodos conocidos. Las células que producen anticuerpos con la especificidad deseada pueden seleccionarse mediante un ensayo adecuado (p. ej., ELISA).

[0053] Pueden utilizarse otros métodos adecuados para producir o aislar anticuerpos con la especificidad requerida, incluyendo, aunque no de forma limitativa, métodos que seleccionan anticuerpos recombinantes de una biblioteca de péptidos o proteínas (p. ej., pero sin limitarse a, una biblioteca de presentación de bacteriófagos, ribosomas, oligonucleótidos, ARN, ADNc o similares; p. ej., como está disponible en Cambridge antibody Technologies, Cambridgeshire, Reino Unido; MorphoSys, Martinsreid/Planegg, Alemania; Biovation, Aberdeen, Escocia, Reino Unido; BioInvent, Lund, Suecia; Dyax Corp., Enzon, Affymax/Biosite; Xoma, Berkeley, CA; Ixsys. Véase, p. ej., las patentes EP 368.684, WO92/001047; WO93/006213; WO93/011236; WO92/020791; WO93/019172; US-5.962.255; WO95/001438; WO95/015388; WO98/001757;

[0054] (CAT/MRC); WO90/14443; WO90/14424; WO90/14430; WO94/018219; WO92/18619; WO96/07754;

[0055] (Scripps); WO96/13583, WO97/08320 (MorphoSys); WO95/16027 (BioInvent); WO88/06630; WO90/3809 (Dyax); US-4.704.692 (Enzon); WO91/017271 (Affymax); WO89/06283; EP 371 998; EP 550 400; (Xoma); EP 229 046; WO92/006204 (Ixsys); o péptidos o proteínas generados estocásticamente: US-5723323, US-5763192, US-5814476, US-5817483, US-5824514, US-5976862, WO 86/05803, EP 590 689 (Ixsys, predecesora de Applied Molecular Evolution [AME])) o que se basan en la inmunización de animales transgénicos (p. ej., ratones SCID, Nguyen y col., Microbiol. Immunol. 41:901-907 (1997); Sandhu y col., Crit. Rev. Biotechnol. 16:95-118 (1996); Eren y col., Immunol.93:154-161 (1998)) que son capaces de producir un repertorio de anticuerpos humanos, como se conoce en la técnica y/o como se describe en la presente memoria. Tales técnicas incluyen, aunque no de forma limitativa, la presentación de ribosomas (Hanes y col., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 94:4937-4942 (mayo de 1997); Hanes y col., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 95:14130-14135 (noviembre de 1998)); tecnologías de producción de anticuerpos unicelulares (p. ej., el método de anticuerpos de linfocitos seleccionados [“SLAM”, por sus siglas en inglés] (patente US-5.627.052, Wen y col., J. Immunol.17:887-892 (1987); Babcook y col., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93:7843-7848 (1996)); microgota de gel y citometría de flujo y (Powell y col., Biotechnol. 8:333-337 (1990); One Cell Systems, Cambridge, Massachusetts; Gray y col., J. Imm. Meth. 182:155-163 (1995); Kenny y col., Bio/Technol. 13:787-790 (1995)); selección de células B (Steenbakkers y col., Molec. Biol. Reports 19:125-134 (1994); Jonak y col., Progress Biotech, Vol. 5, In Vitro Immunization in Hybridoma Technology, Borrebaeck, ed., Elsevier Science Publishers B.V., Ámsterdam, Países Bajos (1988)).

[0057] También pueden utilizarse métodos para diseñar por ingeniería o humanizar anticuerpos no humanos o humanos y son muy conocidos en la técnica. Generalmente, un anticuerpo humanizado o diseñado por ingeniería tiene uno o más residuos de aminoácidos de una fuente que no es humana, p. ej., pero sin limitarse a, ratón, rata, conejo, primate no humano u otro mamífero. Estos residuos de aminoácidos no humanos se reemplazan por residuos frecuentemente denominados residuos de “importación”, que de forma típica se toman de una variable, constante u otro dominio de “importación” de una secuencia humana conocida.

[0059] Se describen secuencias de Ig humanas conocidas, p. ej., www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi; www.ncbi.nih.gov/igblast; www.atcc.org/phage/hdb.html; www.mrc-cpe.cam.ac.uk/ALIGNMENTS.php; www.kabatdatabase.com/top.html; ftp.ncbi.nih.gov/repository/kabat; www.sciquest.com; www.abcam.com; www.antibodyresource.com/onlinecomp.html; www.public.iastate.edu/~pedro/research_tools.html; www.whfreeman.com/immunology/CH05/kuby05.htm; www.hhmi.org/grants/lectures/1996/vlab; www.path.cam.ac.uk/~mrc7/mikeimages.html; mcb.harvard.edu/BioLinks/Immunology.html; www.immunologylink.com; pathbox.wustl.edu/-hcenter/index.html; www.appliedbiosystems.com; www.nal.usda.gov/awic/pubs/antibody; www.m.ehime-u.ac.jp/~yasuhito/Elisa.html; www.biodesign.com; www.cancerresearchuk.org; www.biotech.ufl.edu; www.isac-net.org; baserv.uci.kun.nl/~jraats/links1.html; www.recab.uni-hd.de/immuno.bme.nwu.edu; www.mrc-cpe.cam.ac.uk; www.ibt.unam.mx/vir/V_mice.html; http://www.bioinf.org.uk/abs; antibody.bath.ac.uk; www.unizh.ch; www.cryst.bbk.ac.uk/~ubcg07s; www.nimr.mrc.ac.uk/CC/ccaewg/ccaewg.html; www.path.cam.ac.uk/~mrc7/humanisation/TAHHP.html; www.ibt.unam.mx/vir/structure/stat_aim.html; www.biosci.missouri.edu/smithgp/index.html; www.jerini.de; Kabat y col., Sequences of Proteins of Immunological Interest, U.S. Dept. Health (1983).

[0061] Tales secuencias importadas pueden utilizarse para reducir la inmunogenicidad o reducir, potenciar o modificar la unión, afinidad, velocidad de asociación, velocidad de disociación, avidez, especificidad, semivida, o cualquier otra característica adecuada, como se conoce en la técnica. En general, los residuos de CDR están directa y más sustancialmente implicados en la influencia de la unión al antígeno. En consecuencia, parte o la totalidad de las secuencias de CDR humanas o no humanas se mantienen, mientras que las secuencias no humanas de las regiones variables y constantes pueden reemplazarse con aminoácidos humanos u otros aminoácidos.

[0063] Los anticuerpos también pueden ser opcionalmente anticuerpos humanizados o humanos diseñados con retención de alta afinidad por el antígeno y otras propiedades biológicas favorables. Para lograr este objetivo, los anticuerpos humanizados (o humanos) pueden prepararse opcionalmente mediante un proceso de análisis de las secuencias parentales y diversos productos humanizados conceptuales utilizando modelos tridimensionales de las secuencias parentales y humanizadas. Los modelos tridimensionales de inmunoglobulina están comúnmente disponibles y son familiares para los expertos en la técnica. Hay programas informáticos disponibles que ilustran y muestran las probables estructuras conformacionales tridimensionales de secuencias de inmunoglobulina candidatas seleccionadas. La inspección de estas visualizaciones permite el análisis del papel probable de los residuos en el funcionamiento de la secuencia de inmunoglobulina candidata, es decir, el análisis de los residuos que influyen en la capacidad de la inmunoglobulina candidata para unirse a su antígeno. De esta forma, los residuos de marco (FR, por sus siglas en inglés) pueden seleccionarse y combinarse a partir de las secuencias de consenso e importación de modo que se logra la característica deseada del anticuerpo, tal como una mayor afinidad por el antígeno o antígenos diana.

[0065] Además, el anticuerpo específico para la IL-23 humana puede comprender un marco de cadena ligera de la línea germinal humana. La secuencia de la línea germinal de cadena ligera puede seleccionarse de las secuencias VK humanas, incluyendo, aunque no de forma limitativa, A1, A10, A11, A14, A17, A18, A19, A2, A20, A23, A26, A27, A3, A30, A5, A7, B2, B3, L1, L10, L11, L12, L14, L15, L16, L18, L19, L2, L20, L22, L23, L24, L25, L4/18a, L5, L6, L8, L9, O1, O11, O12, O14, O18, O2, O4, y O8. A veces, este marco de la línea germinal humana de cadena ligera se selecciona de V1-11, V1-13, V1-16, V1-17, V1-18, V1-19, V1-2, V1-20, V1-22, V1-3, V1-4, V1-5, V1-7, V1-9, V2-1, V2-11, V2-13, V2-14, V2-15, V2-17, V2-19, V2-6, V2-7, V2-8, V3-2, V3-3, V3-4, V4-1, V4-2, V4-3, V4-4, V4-6, V5-1, V5-2, V5-4, y V5-6.

[0067] En otros casos, el anticuerpo específico para la IL-23 humana puede comprender un marco de cadena pesada de la línea germinal humana. A veces, este marco de la línea germinal humana de cadena pesada se selecciona de VH1-18, VH1-2, VH1-24, VH1-3, VH1-45, VH1-46, VH1-58, VH1-69, VH1-8, VH2-26, VH2-5, VH2-70, VH3-11, VH3-13, VH3-15, VH3-16, VH3-20, VH3-21, VH3-23, VH3-30, VH3-33, VH3-35, VH3-38, VH3-43, VH3-48, VH3-49, VH3-53, VH3-64, VH3-66, VH3-7, VH3-72, VH3-73, VH3-74, VH3-9, VH4-28, VH4-31, VH4-34, VH4-39, VH4-4, VH4-59, VH4-61, VH5-51, VH6-1, y VH7-81.

[0069] En realizaciones particulares, la región variable de cadena ligera y/o la región variable de cadena pesada comprenden una región de marco o al menos una parte de una región de marco (p. ej., que contiene 2 o 3 subregiones, tales como FR2 y FR3). En ciertas realizaciones, al menos FRL1, FRL2, FRL3, o FRL4 es completamente humano. En otras realizaciones, al menos FRH1, FRH2, FRH3, o FRH4 es completamente humano. En algunas realizaciones, al menos FRL1, FRL2, FRL3, o FRL4 es una secuencia de línea germinal (p. ej., línea germinal humana) o comprende secuencias de consenso humanas para el marco particular (fácilmente disponibles en las fuentes de secuencias de Ig humanas conocidas descritas anteriormente). En otras realizaciones, al menos FRH1, FRH2, FRH3, o FRH4 es una secuencia de línea germinal (p. ej., línea germinal humana) o comprende secuencias de consenso humanas para el marco particular. En realizaciones preferidas, la región marco es una región marco completamente humana.

[0071] La humanización o ingeniería de anticuerpos puede realizarse utilizando cualquier método conocido, tal como, pero sin limitarse a, los descritos en Winter (Jones y col., Nature 321:522 (1986); Riechmann y col., Nature 332:323 (1988); Verhoeyen y col., Science 239:1534 (1988)), Sims y col., J. Immunol.151: 2296 (1993); Chothia y Lesk, J. Mol. Biol.196:901 (1987), Carter y col., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.89:4285 (1992); Presta y col., J. Immunol.151:2623 (1993), patentes: US-5723323, US-5976862, US-5824514, US-5817483, US-5814476, US-5763192, US-5723323, US-5.766886, US-5714352, US-6204023, US-6180370, US-5693762, US-5530101, US-5585089, US-5225539; US-4816567, WO99/006834, WO97/020032, WO92/011272, WO92/003461, WO94/018219, WO90/005144, WO92/001047, WO93/006213, WO90/14443, WO90/14424, WO90/14430, EP 229246.

[0073] A veces, un anticuerpo descrito comprende una región Fc alterada (p. ej., mutada). Por ejemplo, a veces la región Fc se ha alterado para reducir o mejorar las funciones efectoras del anticuerpo. A veces, la región Fc es un isotipo seleccionado de IgM, IgA, IgG, IgE u otro isotipo. Alternativa o adicionalmente, puede ser útil combinar modificaciones de aminoácidos con una o más modificaciones de aminoácidos adicionales que alteran la unión a C1q y/o la función de citotoxicidad dependiente del complemento de la región Fc de una molécula de unión a IL-23. El polipéptido de partida de particular interés puede ser uno que se une a C1q y muestra citotoxicidad dependiente del complemento (CDC, por sus siglas en inglés). Los polipéptidos con actividad de unión a C1q preexistente, que opcionalmente tienen además la capacidad de mediar la CDC, pueden modificarse de tal modo que se potencia una o ambas de estas actividades. Las modificaciones de aminoácidos que alteran el C1q y/o modifican su función de citotoxicidad dependiente del complemento se describen, por ejemplo, en la patente WO0042072.

[0074] Como se ha descrito anteriormente, puede diseñarse una región Fc de un anticuerpo específico para la IL-23 humana con una función efectora alterada, p. ej., modificando la unión a C1q y/o la unión a FcyR y cambiando de este modo la actividad de citotoxicidad dependiente del complemento (CDC) y/o la actividad de citotoxicidad mediada por células dependiente de anticuerpos (ADCC, por sus siglas en inglés). Las “funciones efectoras” son responsables de activar o disminuir una actividad biológica (p. ej., en un sujeto). Los ejemplos de funciones efectoras incluyen, aunque no de forma limitativa: unión de C1q; CDC; unión al receptor Fc; ADCC; fagocitosis; regulación negativa de los receptores de la superficie celular (p. ej., el receptor de células B; BCR), etc. Tales funciones efectoras pueden requerir que la región Fc se combine con un dominio de unión (p. ej., un dominio variable de anticuerpo) y pueden evaluarse utilizando diversos ensayos (p. ej., ensayos de unión a Fc, ensayos de ADCC, ensayos de CDC, etc.).

[0075] Por ejemplo, puede generarse una región Fc variante del anticuerpo para la IL-23 (o anti-IL-23) humana con una mejor unión a C1q y una mejor unión a FcyRIII (p. ej., tanto con una mejor actividad de ADCC como con una mejor actividad de CDC). Alternativamente, si se desea reducir o eliminar la función efectora, puede diseñarse por ingeniería una región Fc variante con actividad de CDC reducida y/o actividad de ADCC reducida. A veces, solo puede aumentarse una de estas actividades y, opcionalmente, también puede reducirse la otra actividad (p. ej., para generar una variante de la región Fc con una mejor actividad de ADCC, pero una actividad de CDC reducida y viceversa).

[0076] Las mutaciones Fc también pueden introducirse en ingeniería para alterar su interacción con el receptor Fc neonatal (FcRn) y mejorar sus propiedades farmacocinéticas. Se ha descrito una colección de variantes de Fc humanas con una mejor unión al FcRn (Shields y col., (2001). El mapeo de alta resolución del sitio de unión en la IgG1 humana para FcyRI, FcyRII, FcγRIII, y FcRn y el diseño de variantes de IgG1 con una mejor unión al FcyR, J. Biol. Chem.276:6591-6604).

[0077] Otro tipo de sustitución de aminoácidos sirve para alterar el patrón de glicosilación de la región Fc del anticuerpo específico para la IL-23 humana. La glicosilación de una región Fc está típicamente unida a N o unida a O. Unida a N se refiere a la unión del resto de carbohidrato a la cadena lateral de un residuo de asparagina. La glicosilación unida a O se refiere a la unión de uno de los azúcares N-aceilgalactosamina, galactosa o xilosa a un hidroxiaminoácido, más comúnmente serina o treonina, aunque también pueden utilizarse 5-hidroxiprolina o 5-hidroxilisina. Las secuencias de reconocimiento para la unión enzimática del resto de carbohidrato a las secuencias peptídicas de la cadena lateral de la asparagina son asparagina-X-serina y asparagina-X-treonina, donde X es cualquier aminoácido excepto la prolina. Por lo tanto, la presencia de cualquiera de estas secuencias peptídicas en un polipéptido crea un sitio de glicosilación potencial.

[0078] El patrón de glucosilación puede alterarse, por ejemplo, eliminando uno o más sitios de glicosilación que se encuentran en el polipéptido, y/o añadiendo uno o más sitios de glicosilación que no están presentes en el polipéptido. La adición de sitios de glicosilación a la región Fc de un anticuerpo específico para la IL-23 humana se logra convenientemente alterando la secuencia de aminoácidos de tal modo que contiene una o más de las secuencias de tripéptidos descritas anteriormente (para los sitios de glicosilación unidos a N). Una variante de glicosilación ejemplar tiene una sustitución de aminoácidos del residuo Asn 297 de la cadena pesada. La alteración también puede realizarse mediante la adición de, o la sustitución por, uno o más residuos de serina o treonina a la secuencia del polipéptido original (para sitios de glicosilación unidos a O). Adicionalmente, un cambio de Asn 297 a Ala puede eliminar uno de los sitios de glicosilación. En ciertas realizaciones, el anticuerpo específico para la IL-23 humana de la presente invención se expresa en células que expresan la beta (1,4)-N-acetilglucosaminiltransferasa III (GnT III), de tal modo que la GnT III añade GlcNAc al anticuerpo para la IL-23 humana. Los métodos para producir anticuerpos de tal forma se proporcionan en las patentes WO/9954342, WO/03011878, la publicación de patente 20030003097A1, y Umana y col., Nature Biotechnology, 17:176-180, febrero de 1999.

[0079] El anticuerpo anti-IL-23 también puede generarse opcionalmente mediante la inmunización de un animal transgénico (p. ej., ratón, rata, hámster, primate no humano y similares) capaz de producir un repertorio de anticuerpos humanos, como se describe en la presente memoria y/o como se conoce en la técnica. Las células que producen un anticuerpo anti-IL-23 humano pueden aislarse de tales animales e inmortalizarse utilizando métodos adecuados, tales como los métodos descritos en la presente memoria.

[0080] Los ratones transgénicos que pueden producir un repertorio de anticuerpos humanos que se unen a antígenos humanos pueden producirse mediante métodos conocidos (p. ej., pero sin limitarse a, las patentes US- 5.770.428, US-5.569.825, US-5.545.806, US-5.625.126, US-5.625.825, US-5.633.425, US-5.661.016 y US-5.789.650 otorgadas a Lonberg y col.; Jakobovits y col. WO 98/50433, Jakobovits y col. WO 98/24893, Lonberg y col. WO 98/24884, Lonberg y col. WO 97/13852, Lonberg y col. WO 94/25585, Kucherlapate y col. WO 96/34096, Kucherlapate y col. EP 0463 151 B1, Kucherlapate y col. EP 0710 719 A1, Surani y col. US - 5.545.807, Bruggemann y col. WO 90/04036, Bruggemann y col. EP 0438 474 B1, Lonberg y col. EP 0814 259 A2, Lonberg y col. GB 2 272 440 A, Lonberg y col. Nature 368:856-859 (1994), Taylor y col., Int. Inmunol. 6(4)579-591 (1994), Green et al, Nature Genetics 7:13-21 (1994), Mendez y col., Nature Genetics 15:146-156 (1997), Taylor y col., Nucleic Acids Research 20(23):6287-6295 (1992), Tuaillon y col., Proc Natl Acad Sci USA 90(8)3720-3724 (1993), Lonberg y col., Int Rev Immunol 13(1):65-93 (1995) y Fishwald y col., Nat Biotechnol 14(7):845-851 (1996)). En general, estos ratones comprenden al menos un transgén que comprende ADN de al menos un locus de inmunoglobulina humana que está reorganizado funcionalmente o que puede sufrir un reordenamiento funcional. Los loci de inmunoglobulina endógenos en tales ratones pueden alterarse o eliminarse para eliminar la capacidad del animal de producir anticuerpos codificados por genes endógenos.

[0082] El cribado de anticuerpos para la unión específica a proteínas o fragmentos similares puede lograrse convenientemente utilizando bibliotecas de presentación de péptidos. Este método implica el cribado de grandes colecciones de péptidos para miembros individuales que tienen la función o estructura deseada. El cribado de anticuerpos de bibliotecas de presentación de péptidos es bien conocido en la técnica. Las secuencias peptídicas mostradas pueden tener una longitud de 3 a 5000 o más aminoácidos, con frecuencia de 5-100 aminoácidos de longitud y, a menudo, de aproximadamente 8 -25 aminoácidos. Además de los métodos de síntesis química directa para generar bibliotecas de péptidos, se han descrito varios métodos de ADN recombinante. Un tipo implica la presentación de una secuencia peptídica en la superficie de un bacteriófago o célula. Cada bacteriófago o célula contiene la secuencia de nucleótidos que codifica la secuencia peptídica particular mostrada. Tales métodos se describen en las publicaciones de patente PCT n.° 91/17271, 91/18980, 91/19818, y 93/08278.

[0084] Otros sistemas para generar bibliotecas de péptidos tienen aspectos tanto de la síntesis química in vitro como de los métodos recombinantes. Véase las publicaciones de patente PCT n.° 92/05258, 92/14843 y 96/19256. Véase también las patentes US-5.658.754; y US-5.643.768. Las bibliotecas de presentación de péptidos, el vector y los kits de cribado están disponibles comercialmente en proveedores tales como Invitrogen (Carlsbad, California) y Cambridge antibody Technologies (Cambridgeshire, Reino Unido). Véase, p. ej., las patentes US-4704692, US-4939666, US-4946778, US-5260203, US-5455030, US-5518889, US-5534621, US-5656730, US-5763733, US-5767260, US-5856456, concedidas a Enzon; US-5223409, US-5403484, US-5571698, US-5837500, concedidas a Dyax, US-5427908, US-5580717, concedidas a Affymax; 5885793, asignada a Cambridge Antibody Technologies; US-5750373, concedida a Genentech, US-5618920, US-5595898, US-5576195, US-5698435, US-5693493, US-5698417, concedidas a Xoma, Colligan, supra; Ausubel,supra;o Sambrook,supra.

[0086] Los anticuerpos utilizados en el método de la presente invención también pueden prepararse utilizando al menos un anticuerpo anti-IL23 que codifica un ácido nucleico para proporcionar animales o mamíferos transgénicos, tales como cabras, vacas, caballos, ovejas, conejos y similares, que producen tales anticuerpos en su leche. Tales animales pueden proporcionarse utilizando métodos conocidos. Véase, p. ej., pero sin limitarse a, las patentes US-5.827.690; US-5.849.992; US-4.873.316; US-5.849.992; US-5.994.616; US-5.565.362; US-5.304.489, y similares.

[0087] Los anticuerpos utilizados en el método de la presente invención pueden prepararse adicionalmente utilizando al menos un anticuerpo anti-IL23 que codifica un ácido nucleico para proporcionar plantas transgénicas y células vegetales cultivadas (p. ej., pero sin limitarse a, tabaco y maíz) que producen tales anticuerpos, partes o variantes especificados en las partes de la planta o en las células cultivadas a partir de las mismas. Como ejemplo no limitativo, las hojas de tabaco transgénico que expresan proteínas recombinantes se han utilizado con éxito para proporcionar grandes cantidades de proteínas recombinantes, p. ej., utilizando un promotor inducible. Véase, p. ej., Cramer y col., Curr. Top. Microbol. Immunol.240:95-118 (1999) y las referencias citadas en la misma. Además, el maíz transgénico se ha utilizado para expresar proteínas de mamíferos a niveles de producción comercial, con actividades biológicas equivalentes a las producidas en otros sistemas recombinantes o purificadas a partir de fuentes naturales. Véase, p. ej., Hood y col., Adv. Exp. Med. Biol. 464:127-147 (1999) y las referencias citadas allí. También se han producido anticuerpos en grandes cantidades a partir de semillas de plantas transgénicas, incluyendo fragmentos de anticuerpos, como los anticuerpos monocatenarios (scFv), incluyendo semillas de tabaco y tubérculos de patata. Véase, p. ej., Conrad y col., Plant Mol. Biol. 38:101-109 (1998) y las referencias citadas allí. Por lo tanto, los anticuerpos de la presente invención también pueden producirse utilizando plantas transgénicas, según los métodos conocidos. Véase también, p. ej., Fischer y col., Biotechnol. Appl. Bioquímica. 30:99-108 (oct., 1999), Ma y col., Trends Biotechnol.

[0088] 13:522-7 (1995); Ma y col., Plant Physiol.109:341-6 (1995); Whitelam y col., Biochem. Soc. Trans.22:940-944 (1994); y las referencias citadas en las mismas.

[0090] Los anticuerpos pueden unirse a la IL-23 humana con una amplia gama de afinidades (K<D>). En una realización preferida, un mAb humano puede unirse opcionalmente a la IL-23 humana con alta afinidad. Por ejemplo, un mAb humano puede unirse a la IL-23 humana con un K<D>igual o inferior a aproximadamente 10<-7>M, tal como, pero sin limitarse a, 0,1-9,9 (o cualquier intervalo o valor en el mismo) X 10<-7>, 10<-8>, 10<-9>, 10<-10>, 10<-11>, 10<-12>, 10<-13>o cualquier intervalo o valor en el mismo.

[0092] La afinidad o avidez de un anticuerpo por un antígeno puede determinarse experimentalmente utilizando cualquier método adecuado. (Véase, por ejemplo, Berzofsky, y col., “Antibody-Antigen Interactions”, en Fundamental Immunology, Paul, W. E., Ed., Raven Press: Nueva York, NY (1984); Kuby, Janis Immunology, W. H. Freeman and Company: Nueva York, NY (1992); y los métodos descritos en la presente memoria). La afinidad medida de una interacción anticuerpo-antígeno particular puede variar si se mide en diferentes condiciones (p. ej., concentración de sal, pH). Por lo tanto, las mediciones de afinidad y otros parámetros de unión al antígeno (p. ej., K<D>, K<a>, K<d>) se realizan preferiblemente con soluciones estandarizadas de anticuerpo y antígeno, y un tampón estandarizado, tal como el tampón descrito en la presente memoria.

[0093] Moléculas de ácido nucleico

[0094] Utilizando la información proporcionada en la presente memoria, por ejemplo, las secuencias de nucleótidos que codifican al menos el 70-100 % de los aminoácidos contiguos de al menos una de las regiones de CDR o variables de cadena ligera o pesada descritas en la presente memoria, entre otras secuencias descritas en la presente memoria, fragmentos, variantes o secuencias de consenso especificados de las mismas, o un vector depositado que comprende al menos una de estas secuencias, puede obtenerse una molécula de ácido nucleico de la presente descripción que codifica al menos un anticuerpo anti-IL-23 utilizando métodos descritos en la presente memoria o conocidos en la técnica.

[0095] Las moléculas de ácido nucleico pueden estar en forma de ARN, tal como ARNm, ARNnh, ARNt o cualquier otra forma, o en forma de ADN, incluyendo, aunque de forma no limitativa, el ADNc y el ADN genómico obtenidos mediante clonación o producidos sintéticamente, o cualquier combinación de los mismos. El ADN puede ser triple, bicatenario o monocatenario, o cualquier combinación de los mismos. Cualquier parte de al menos una cadena del ADN o ARN puede ser la cadena codificante, también conocida como cadena sentido, o puede ser la cadena no codificante, también denominada cadena antisentido.

[0096] Las moléculas de ácido nucleico aisladas utilizadas en el método de la presente descripción pueden incluir moléculas de ácido nucleico que comprenden un marco de lectura abierto (ORF, por sus siglas en inglés), opcionalmente, con uno o más intrones, p. ej., pero sin limitarse a, al menos una parte especificada de al menos una CDR, tal como CDR1, CDR2 y/o CDR3 de al menos una cadena pesada o cadena ligera; moléculas de ácido nucleico que comprenden la secuencia codificante para un anticuerpo anti-IL-23 o una región variable; y moléculas de ácido nucleico que comprenden una secuencia de nucleótidos sustancialmente diferente de las descritas anteriormente pero que, debido a la degeneración del código genético, todavía codifican al menos un anticuerpo anti-IL-23 como se describe en la presente memoria y/o como se conoce en la técnica. Por supuesto, el código genético es bien conocido en la técnica. Por lo tanto, sería rutinario para un experto en la técnica generar tales variantes de ácido nucleico degeneradas que codifiquen los anticuerpos anti-IL-23 específicos utilizados en el método de la presente invención. Véase, p. ej., Ausubel y col.,supra. Los ejemplos no limitantes de moléculas de ácido nucleico aisladas incluyen ácidos nucleicos que codifican HC CDR1, HC CDR2, HC CDR3, LC CDR1, LC CDR2 y LC CDR3, respectivamente.

[0097] Como se indica en la presente memoria, las moléculas de ácido nucleico que comprenden un ácido nucleico que codifica un anticuerpo anti-IL-23 pueden incluir, aunque no de forma limitativa, las que codifican la secuencia de aminoácidos de un fragmento de anticuerpo, por sí mismas; la secuencia codificante para todo el anticuerpo o una parte del mismo; la secuencia codificante para un anticuerpo, fragmento o parte, así como secuencias adicionales, tales como la secuencia codificante de al menos un líder de señal o péptido de fusión, con o sin las secuencias codificantes adicionales mencionadas anteriormente, tales como al menos un intrón, junto con secuencias no codificantes adicionales, que incluyen, aunque no de forma limitativa, secuencias 5' y 3' no codificantes, tales como las secuencias transcritas y no traducidas que desempeñan un papel en la transcripción, el procesamiento del ARNm, incluyendo señales de empalme y poliadenilación (por ejemplo, unión al ribosoma y estabilidad de ARNm); una secuencia codificante adicional que codifica aminoácidos adicionales, tales como los que proporcionan funcionalidades adicionales. Por lo tanto, la secuencia que codifica un anticuerpo puede fusionarse con una secuencia marcadora, tal como una secuencia que codifica un péptido que facilita la purificación del anticuerpo fusionado que comprende un fragmento o parte de anticuerpo.

[0098] Polinucleótidos que se hibridan selectivamente con un polinucleótido como se describe en la presente memoria El método de la presente descripción utiliza ácidos nucleicos aislados que se hibridan en condiciones de hibridación selectiva con un polinucleótido descrito en la presente memoria. Por lo tanto, estos polinucleótidos pueden utilizarse para aislar, detectar y/o cuantificar los ácidos nucleicos que comprenden tales polinucleótidos. Por ejemplo, los polinucleótidos pueden utilizarse para identificar, aislar o amplificar clones de longitud parcial o completa en una biblioteca depositada. A veces, los polinucleótidos son secuencias genómicas o de ADNc aisladas, o de otro modo complementarias a, un ADNc de una biblioteca de ácidos nucleicos de humanos o mamíferos.

[0099] Preferiblemente, la biblioteca de ADNc comprende al menos un 80 % de secuencias de longitud completa, preferiblemente, al menos un 85 % o un 90 % de secuencias de longitud completa y, más preferiblemente, al menos un 95 % de secuencias de longitud completa. Las bibliotecas de ADNc pueden normalizarse para aumentar la representación de secuencias raras. Las condiciones de hibridación de rigurosidad baja o moderada se emplean de forma típica, pero no exclusivamente, con secuencias que tienen una identidad de secuencia reducida con respecto a las secuencias complementarias. Pueden emplearse opcionalmente condiciones de rigurosidad moderada y alta para secuencias de mayor identidad. Las condiciones de baja rigurosidad permiten la hibridación selectiva de secuencias que tienen aproximadamente un 70 % de identidad de secuencia y pueden emplearse para identificar secuencias ortólogas o parálogas.

[0100] Opcionalmente, los polinucleótidos codificarán al menos una parte de un anticuerpo. Los polinucleótidos abarcan secuencias de ácidos nucleicos que pueden emplearse para la hibridación selectiva con un polinucleótido que codifica un anticuerpo de la presente invención. Véase, p. ej., Ausubel, supra; Colligan, supra.

[0101] Construcción de ácidos nucleicos

[0102] Los ácidos nucleicos aislados pueden prepararse utilizando (a) métodos recombinantes, (b) técnicas sintéticas, (c) técnicas de purificación y/o (d) combinaciones de los mismos, como es bien conocido en la técnica.

[0103] Los ácidos nucleicos pueden comprender convenientemente secuencias además de un polinucleótido de la presente descripción. Por ejemplo, un sitio de clonación múltiple que comprende uno o más sitios de restricción de endonucleasas puede insertarse en el ácido nucleico para ayudar en el aislamiento del polinucleótido. Además, las secuencias traducibles pueden insertarse para ayudar en el aislamiento del polinucleótido traducido de la presente descripción. Por ejemplo, una secuencia marcadora de hexahistidina proporciona un medio conveniente para purificar las proteínas de la presente descripción. El ácido nucleico de la presente descripción, excluyendo la secuencia codificante, es opcionalmente un vector, adaptador o enlazador para la clonación y/o expresión de un polinucleótido de la presente divulgación.

[0104] Pueden añadirse secuencias adicionales a tales secuencias de clonación y/o expresión para optimizar su función en la clonación y/o expresión, para ayudar al aislamiento del polinucleótido o para mejorar la introducción del polinucleótido en una célula. La utilización de vectores de clonación, vectores de expresión, adaptadores y conectores es bien conocido en la técnica. (Véase, p. ej., Ausubel,supra;o Sambrook,supra)

[0105] Métodos recombinantes para construir ácidos nucleicos

[0106] Las composiciones de ácidos nucleicos aisladas, tales como ARN, ADNc, ADN genómico o cualquier combinación de los mismos, pueden obtenerse a partir de fuentes biológicas utilizando cualquier número de metodologías de clonación conocidas por los expertos en la técnica. A veces, las sondas de oligonucleótidos que se hibridan selectivamente, en condiciones rigurosas, con los polinucleótidos de la presente descripción se utilizan para identificar la secuencia deseada en una biblioteca de ADNc o ADN genómico. El aislamiento del ARN y la construcción de bibliotecas genómicas y de ADNc son bien conocidos por los expertos en la técnica. (Véase, p. ej., Ausubel,supra;o Sambrook,supra)

[0107] Métodos de cribado y aislamiento de ácidos nucleicos

[0108] Una biblioteca de ADNc o genómica puede cribarse utilizando una sonda basada en la secuencia de un polinucleótido utilizado en el método de la presente descripción, tal como los descritos en la presente memoria. Las sondas pueden utilizarse para hibridar con secuencias de ADN genómico o ADNc para aislar genes homólogos en organismos iguales o diferentes. Los expertos en la técnica apreciarán que pueden emplearse diversos grados de rigurosidad de hibridación en el ensayo; y tanto la hibridación como el medio de lavado pueden ser rigurosos. A medida que las condiciones para la hibridación se vuelven más rigurosas, debe haber un mayor grado de complementariedad entre la sonda y la diana para que se produzca la formación de dúplex. El grado de rigurosidad puede controlarse mediante uno o más factores como la temperatura, la fuerza iónica, el pH y la presencia de un disolvente parcialmente desnaturalizante, tal como la formamida. Por ejemplo, la rigurosidad de la hibridación se varía convenientemente cambiando la polaridad de la solución del reactivo a través de, por ejemplo, la manipulación de la concentración de formamida dentro del intervalo del 0 % al 50 %. El grado de complementariedad (identidad de secuencia) requerido para la unión detectable variará según la rigurosidad del medio de hibridación y/o medio de lavado. El grado de complementariedad será óptimamente del 100 %, o del 70-100 %, o de cualquier intervalo o valor del mismo. Sin embargo, debe entenderse que las variaciones de secuencia menores en las sondas y los cebadores pueden compensarse reduciendo la rigurosidad del medio de hibridación y/o lavado.

[0109] Los métodos de amplificación de ARN o ADN son muy conocidos en la técnica y pueden utilizarse según la presente descripción sin experimentación indebida, basándose en la enseñanza y la guía presentadas en la presente memoria. Los métodos conocidos de amplificación de ADN o ARN incluyen, aunque no de forma limitativa, la reacción en cadena de la polimerasa (PCR, por sus siglas en inglés) y los procesos de amplificación relacionados (véanse, p. ej., las patentes US-4.683.195, US-4.683.202, US-4.800.159, US-4.965.188, de Mullis, y col.; US-4.795.699 y US-4.921.794 de Tabor y col.; US-5.142.033 de Innis; US-5.122.464 de Wilson, y col.; US-5.091.310 de Innis; US-5.066.584 de Gyllensten, y col.; US-4.889.818 de Gelfand, y col.; US-4.994.370 de Silver, y col.; US-4.766.067 a Biswas; US-4.656.134 de Ringold) y la amplificación mediada por ARN que utiliza ARN antisentido a la secuencia diana como molde para la síntesis de ADN bicatenario (patente US-5.130.238 de Malek, y col., con el nombre comercial NASBA). (Véase, p. ej., Ausubel,supra;o Sambrook,supra).

[0110] Por ejemplo, la tecnología de reacción en cadena de la polimerasa (PCR) puede utilizarse para amplificar las secuencias de polinucleótidos utilizadas en el método de la presente descripción y los genes relacionados directamente a partir de bibliotecas de ADN genómico o ADNc. La PCR y otros métodos de amplificación in vitro también pueden ser útiles, por ejemplo, para clonar secuencias de ácido nucleico que codifican las proteínas que deben expresarse, para fabricar ácidos nucleicos para utilizarlos como sondas para detectar la presencia del ARNm deseado en muestras, para la secuenciación de ácidos nucleicos o para otros fines. Los ejemplos de técnicas suficientes para dirigir a los expertos a través de métodos de amplificación in vitro se encuentran en Berger, supra, Sambrook, supra, y Ausubel, supra, así como en Mullis, y col., patente US-4.683.202 (1987); e Innis, y col., PCR Protocols A Guide to Methods and Applications, eds., Academic Press Inc., San Diego, CA (1990). Los kits disponibles en el mercado para la amplificación por PCR genómica son conocidos en la técnica. Véase, p. ej., el kit de PCR genómica Advantage-GC (Clontech). Adicionalmente, p. ej., la proteína 32 del gen T4 (Boehringer Mannheim) puede utilizarse para mejorar el rendimiento de los productos de PCR largos.

[0111] Métodos sintéticos para construir ácidos nucleicos

[0112] Los ácidos nucleicos aislados utilizados en el método de la presente descripción también pueden prepararse mediante síntesis química directa mediante métodos conocidos (véase, p. ej., Ausubel, y col., supra). La síntesis química generalmente produce un oligonucleótido monocatenario, que puede convertirse en ADN bicatenario mediante hibridación con una secuencia complementaria, o mediante polimerización con una ADN polimerasa utilizando la cadena monocatenaria como molde. Un experto en la técnica reconocerá que, si bien la síntesis química del ADN puede limitarse a secuencias de aproximadamente 100 o más bases, pueden obtenerse secuencias más largas mediante la ligación de secuencias más cortas.

[0113] Casetes de expresión recombinante

[0114] La presente descripción utiliza casetes de expresión recombinantes que comprenden un ácido nucleico. Una secuencia de ácido nucleico, por ejemplo, un ADNc o una secuencia genómica que codifica un anticuerpo utilizado en el método de la presente descripción, puede utilizarse para construir un casete de expresión recombinante que puede introducirse en al menos una célula huésped deseada. De forma típica, un casete de expresión recombinante comprenderá un polinucleótido unido operativamente a secuencias reguladoras de iniciación de la transcripción que dirigirán la transcripción del polinucleótido en la célula huésped deseada. Pueden emplearse promotores tanto heterólogos como no heterólogos (es decir, endógenos) para dirigir la expresión de los ácidos nucleicos.

[0115] A veces, los ácidos nucleicos aislados que sirven como promotores, potenciadores u otros elementos pueden introducirse en la posición apropiada (corriente arriba, corriente abajo o en el intrón) de una forma no heteróloga de un polinucleótido de la presente descripción para regular hacia arriba o hacia abajo la expresión de un polinucleótido. Por ejemplo, los promotores endógenos pueden alterarsein vivooin vitromediante mutación, deleción y/o sustitución. Vectores y células huésped

[0116] La presente descripción también se refiere a vectores que incluyen moléculas de ácido nucleico aisladas, células huésped que se modifican genéticamente con los vectores recombinantes y la producción de al menos un anticuerpo anti-IL-23 mediante técnicas recombinantes, como se conoce bien en la técnica. Véase, p. ej., Sambrook, col., supra; Ausubel y col., supra.

[0117] Los polinucleótidos pueden unirse opcionalmente a un vector que contiene un marcador seleccionable para la propagación en un huésped. En general, un vector plasmídico se introduce en un precipitado, tal como un precipitado de fosfato de calcio, o en un complejo con un lípido cargado. Si el vector es un virus, puede envasarse in vitro utilizando una línea celular de envasado apropiada y, a continuación, transducirse en células huésped.

[0118] El inserto de ADN debe estar enlazado operativamente a un promotor apropiado. Las construcciones de expresión contendrán además sitios para el inicio y la terminación de la transcripción y, en la región transcrita, un sitio de unión al ribosoma para la traducción. La parte codificante de las transcripciones maduras expresadas por las construcciones incluirá preferiblemente un codón de inicio de la traducción al principio y un codón de terminación (p. ej., UAA, UGA o UAG) colocado apropiadamente al final del ARNm que debe traducirse, prefiriéndose UAA y UAG para la expresión en células de mamíferos o eucariotas.

[0119] Los vectores de expresión incluirán preferiblemente, pero opcionalmente, al menos un marcador seleccionable. Tales marcadores incluyen, p. ej., aunque no de forma limitativa, metotrexato (MTX, por sus siglas en inglés), resistencia a la dihidrofolato reductasa (DHFR, por sus siglas en inglés, las patentes US-4.399.216; US-4.634.665; US-4.656.134; US-4.956.288; US-5.149.636; US-5.179.017, ampicilina, neomicina (G418), ácido micofenólico, o glutamina sintetasa (GS, las patentes US-5.122.464; US-5.770.359; US-5.827.739) para el cultivo de células eucariotas, y genes de resistencia a la tetraciclina o la ampicilina para el cultivo enE. coliy otras bacterias o procariotas. Los medios y condiciones de cultivo apropiados para las células huésped descritas anteriormente son conocidos en la técnica. Los vectores adecuados serán fácilmente evidentes para el experto en la técnica. La introducción de un constructo vectorial en una célula huésped puede efectuarse mediante transfección con fosfato de calcio, transfección mediada por DEAE-dextrano, transfección mediada por lípidos catiónicos, electroporación, transducción, infección u otros métodos conocidos. Tales métodos se describen en la técnica, tal como Sambrook, supra, capítulos 1-4 y 16-18; Ausubel, supra, capítulos 1, 9, 13, 15, 16.

[0120] Al menos un anticuerpo descrito en la presente memoria puede expresarse en una forma modificada, tal como una proteína de fusión, y puede incluir no solo señales de secreción, sino también regiones funcionales heterólogas adicionales. Por ejemplo, puede añadirse una región de aminoácidos adicionales, particularmente aminoácidos cargados, al N terminal de un anticuerpo para mejorar la estabilidad y la persistencia en la célula huésped, durante la purificación o durante la manipulación y el almacenamiento posteriores. También pueden añadirse restos peptídicos a un anticuerpo descrito en la presente memoria para facilitar la purificación. Tales regiones pueden eliminarse antes de la preparación final de un anticuerpo o al menos un fragmento del mismo. Tales métodos se describen en muchos manuales de laboratorio estándar, tales como Sambrook, supra, capítulos 17.29-17.42 y 18.1-18.74; Ausubel, supra, capítulos 16, 17 y 18.

[0121] Los expertos en la técnica conocen los numerosos sistemas de expresión disponibles para la expresión de un ácido nucleico que codifica una proteína utilizada en el método de la presente invención. Alternativamente, los ácidos nucleicos pueden expresarse en una célula huésped activándose (mediante manipulación) en una célula huésped que contiene ADN endógeno que codifica un anticuerpo. Tales métodos son muy conocidos en la técnica, p. ej., como se describe en las patentes US-5.580.734, US-5.641.670, US-5.733.746 y US-5.733.761.

[0122] Las células de mamíferos ilustran los cultivos celulares útiles para la producción de los anticuerpos, partes o variantes especificadas de los mismos. Los sistemas de células de mamíferos frecuentemente estarán en forma de monocapas de células, aunque también pueden utilizarse suspensiones o biorreactores de células de mamíferos. Se ha desarrollado en la técnica un número de líneas celulares huésped adecuadas, capaces de expresar proteínas glicosiladas intactas, e incluyen las líneas celulares COS-1 (p. ej., ATCC CRL 1650), COS-7 (p. ej., ATCC CRL-1651), HEK293, BHK21 (p. ej., ATCC CRL-10), CHO (p. ej., ATCC CRL 1610) y BSC-1 (p. ej., ATCC CRL-26). líneas, células Cos-7, células CHO, células hep G2, P3X63Ag8.653, SP2/0-Ag14, células 293, células HeLa y similares, que están fácilmente disponibles en, p. ej., American Type Culture Collection, Manassas, Va (www.atcc.org). Las células huésped preferidas incluyen células de origen linfoide, tales como células de mieloma y linfoma. Las células huésped particularmente preferidas son las células P3X63Ag8.653 (número de acceso ATCC CRL-1580) y células SP2/0-Ag14 (número de acceso ATCC CRL-1851). En una realización particularmente preferida, la célula recombinante es una célula P3X63Ab8.653 o una célula SP2/0-Ag14.

[0123] Los vectores de expresión para estas células pueden incluir una o más de las siguientes secuencias de control de la expresión, tales como, pero sin limitarse a, un origen de replicación; un promotor (p. ej., promotores del SV40 tardíos o tempranos, el promotor del CMV [las patentes US-5.168.062; US-5.385.839], un promotor HSV tk, un promotor pgk (fosfoglicerato quinasa), un promotor EF-1 alfa (patente US- 5.266.491), al menos un promotor de inmunoglobulina humana; un potenciador y/o sitios de información de procesamiento, tales como sitios de unión a ribosomas, sitios de empalme de ARN, sitios de poliadenilación (p. ej., un sitio de adición de poli A de T Ag grande de SV40) y secuencias de terminación de la transcripción. Véase, p. ej., Ausubel y col., supra; Sambrook y col., supra. Se conocen y/o están disponibles otras células útiles para la producción de ácidos nucleicos o proteínas de la presente invención, por ejemplo, en el Catálogo de líneas celulares e hibridomas de la American Type Culture Collection (www.atcc.org) u otras fuentes conocidas o comerciales.

[0124] De forma típica, cuando se emplean células huéspedes eucariotas, se incorporan secuencias de terminación de la poliadenilación o la transcripción en el vector. Un ejemplo de una secuencia de terminación es la secuencia de poliadenilación del gen de la hormona del crecimiento bovina. También pueden incluirse secuencias para un empalme preciso de la transcripción. Un ejemplo de una secuencia de empalme es el intrón VP1 del SV40 (Sprague, y col., J. Virol.45:773-781 (1983)). Adicionalmente, las secuencias génicas para controlar la replicación en la célula huésped pueden incorporarse al vector, como se conoce en la técnica.

[0125] Purificación de un anticuerpo

[0126] Un anticuerpo anti-IL-23 puede recuperarse y purificarse a partir de cultivos celulares recombinantes mediante métodos muy conocidos, incluyendo, aunque no de forma limitativa, la purificación con proteína A, la precipitación con sulfato de amonio o etanol, la extracción con ácido, la cromatografía de intercambio aniónico o catiónico, la cromatografía de fosfocelulosa, la cromatografía de interacción hidrófoba, la cromatografía de afinidad, la cromatografía de hidroxilapatita y la cromatografía de lectina. También puede emplearse cromatografía líquida de alta resolución (“HPLC”, por sus siglas en inglés) para la purificación. Véase, p. ej., Colligan, Current Protocols in Immunology o Current Protocols in Protein Science, John Wiley & Sons, NY, NY, (1997-2001), p. ej., capítulos 1, 4, 6, 8, 9, 10.

[0127] Los anticuerpos utilizados en el método de la presente invención incluyen productos purificados de forma natural, productos de procedimientos químicos sintéticos y productos producidos mediante técnicas recombinantes a partir de un huésped eucariota, que incluyen, por ejemplo, células de levadura, plantas superiores, insectos y mamíferos. Dependiendo del huésped empleado en un procedimiento de producción recombinante, el anticuerpo puede estar glicosilado o puede estar no glicosilado, prefiriéndose el glicosilado. Tales métodos se describen en muchos manuales de laboratorio estándar, tales como Sambrook, supra, secciones 17.37-17.42; Ausubel, supra, capítulos 10, 12, 13, 16, 18 y 20, Colligan, Protein Science, supra, capítulos 12-14.

[0129] Anticuerpos anti-IL-23.

[0131] Un anticuerpo anti-IL-23 según la presente descripción incluye cualquier molécula que contenga proteínas o péptidos que comprende al menos una parte de una molécula de inmunoglobulina, tal como, pero sin limitarse a, al menos una parte de unión al ligando (LBP, por sus siglas en inglés), tal como, pero sin limitarse a, una región determinante de complementariedad (CDR) de una cadena pesada o ligera o una parte de unión al ligando de la misma, una región variable de cadena pesada o cadena ligera, una región de marco (p. ej., FR1, FR2, FR3, FR4 o un fragmento de la misma, que además comprende opcionalmente al menos una sustitución, inserción o deleción), una región constante de cadena pesada o cadena ligera (p. ej., comprendiendo al menos un C<H>1, bisagra 1, bisagra 2, bisagra 3, bisagra 4, C<H>2, o C<H>3 o un fragmento de la misma, comprendiendo además, opcionalmente, al menos una sustitución, inserción o deleción), o cualquier parte de la misma, que puede incorporarse en un anticuerpo. Un anticuerpo puede incluir o derivar de cualquier mamífero, tal como, pero sin limitarse a, un ser humano, un ratón, un conejo, una rata, un roedor, un primate o cualquier combinación de los mismos, y similares.

[0133] Los anticuerpos aislados utilizados en el método de la presente descripción comprenden las secuencias de aminoácidos de anticuerpos descritas en la presente memoria codificadas por cualquier polinucleótido adecuado, o cualquier anticuerpo aislado o preparado. Preferiblemente, el anticuerpo humano o el fragmento de unión al antígeno se une a la IL-23 humana y, por lo tanto, neutraliza parcial o sustancialmente al menos una actividad biológica de la proteína. Un anticuerpo, o una parte o variante especificada del mismo, que neutraliza parcial o preferiblemente de forma sustancial al menos una actividad biológica de al menos una proteína o fragmento de la IL-23, puede unirse a la proteína o fragmento y, de este modo, inhibir las actividades mediadas por la unión de la IL-23 al receptor de IL-23 o a través de otros mecanismos dependientes o mediados por la IL-23. Como se utiliza en la presente memoria, el término “anticuerpo neutralizante” se refiere a un anticuerpo que puede inhibir una actividad dependiente de IL-23 en aproximadamente un 20-120 %, preferiblemente en al menos aproximadamente un 10, 20, 30, 40, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100 % o más, dependiendo del ensayo. La capacidad de un anticuerpo anti-IL-23 para inhibir una actividad dependiente de IL-23 se evalúa preferiblemente mediante al menos un ensayo de proteína o receptor de IL-23 adecuado, como se describe en la presente memoria y/o como se conoce en la técnica. Un anticuerpo humano puede ser de cualquier clase (IgG, IgA, IgM, IgE, IgD, etc.) o isotipo y puede comprender una cadena ligera kappa o lambda. A veces, el anticuerpo humano comprende una cadena pesada de IgG o un fragmento definido, por ejemplo, al menos uno de los isotipos, IgG1, IgG2, IgG3 o IgG4 (p. ej., γ1, y2, y3, y4). Los anticuerpos de este tipo pueden prepararse empleando un ratón transgénico u otro mamífero no humano transgénico que comprende al menos un transgén de cadena ligera humana (p. ej., IgG, IgA e IgM), como se describe en la presente memoria y/o como se conoce en la técnica. En una realización, el anticuerpo humano anti-IL-23 comprende una cadena pesada de IgG1.

[0135] Un anticuerpo se une al menos a un epítopo específico de al menos una proteína, subunidad, fragmento, parte o cualquier combinación de la IL-23. El al menos un epítopo puede comprender al menos una región de unión al anticuerpo que comprende al menos una parte de la proteína, cuyo epítopo está compuesto preferiblemente de al menos una parte extracelular, soluble, hidrofilílica, externa o citoplasmática de la proteína.

[0137] En general, el anticuerpo humano o fragmento de unión al antígeno comprenderá una región de unión al antígeno que comprende al menos una región determinante de la complementariedad humana (CDR1, CDR2 y CDR3) o variante de al menos una región variable de la cadena pesada y al menos una región determinante de la complementariedad humana (CDR1, CDR2 y CDR3) o variante de al menos una región variable de la cadena ligera. Las secuencias de CDR pueden derivarse de secuencias de la línea germinal humana o coincidir estrechamente con las secuencias de la línea germinal. Por ejemplo, pueden utilizarse las CDR de una biblioteca sintética derivada de las CDR no humanas originales. Estas CDR pueden formarse mediante la incorporación de sustituciones conservadoras de la secuencia no humana original. A veces, el anticuerpo o la parte o variante de unión al antígeno puede tener una región de unión al antígeno que comprende al menos una parte de al menos una CDR de cadena ligera (es decir, CDR1, CDR2 y/o CDR3) que tiene la secuencia de aminoácidos de las CDR 1, 2 y/o 3 correspondientes.

[0139] Tales anticuerpos pueden prepararse uniendo químicamente las diversas partes (p. ej., CDR, marco) del anticuerpo utilizando técnicas convencionales, preparando y expresando una (es decir, una o más) molécula de ácido nucleico que codifica el anticuerpo utilizando técnicas convencionales de tecnología de ADN recombinante o utilizando cualquier otro método adecuado.

[0141] El anticuerpo específico contra la IL-23 puede comprender al menos una de las regiones variables de cadena pesada o ligera que tiene una secuencia de aminoácidos definida. Por ejemplo, a veces el anticuerpo anti-IL-23 comprende al menos una de al menos una región variable de cadena pesada, que tiene opcionalmente la secuencia de aminoácidos de la Id. de sec. n.º: 106 y/o al menos una región variable de cadena ligera, que tiene opcionalmente la secuencia de aminoácidos de la Id. de sec. n.º: 116. Los anticuerpos que se unen a la IL-23 humana y que comprenden una región variable de cadena pesada o ligera definida pueden prepararse utilizando métodos adecuados, tales como la presentación en fagos (Katsube, Y., y col., Int J Mol. Med, 1(5):863-868 (1998)) o métodos que emplean animales transgénicos, como se conoce en la técnica y/o como se describe en la presente memoria. Por ejemplo, un ratón transgénico, que comprende un transgén de cadena pesada de inmunoglobulina humana funcionalmente reordenado y un transgén que comprende el ADN de un locus de cadena ligera de inmunoglobulina humana que puede someterse a un reordenamiento funcional, puede inmunizarse con IL-23 humana o un fragmento del mismo para provocar la producción de anticuerpos. Si se desea, pueden aislarse las células productoras de anticuerpos y pueden prepararse hibridomas u otras células productoras de anticuerpos inmortalizadas, como se describe en la presente memoria y/o como se conoce en la técnica. Alternativamente, el anticuerpo, la parte especificada o la variante pueden expresarse utilizando el ácido nucleico codificante o una parte del mismo en una célula huésped adecuada.

[0143] También se describen en la presente memoria anticuerpos, fragmentos de unión al antígeno, cadenas de inmunoglobulina y CDR que comprenden aminoácidos en una secuencia que es sustancialmente la misma que la secuencia de aminoácidos descrita en la presente memoria. Preferiblemente, tales anticuerpos o fragmentos de unión al antígeno y los anticuerpos que comprenden tales cadenas o CDR pueden unirse a la IL-23 humana con alta afinidad (p. ej., K<D>inferior o igual a aproximadamente 10<-9>M). Las secuencias de aminoácidos que son sustancialmente las mismas que las secuencias descritas en la presente memoria incluyen secuencias que comprenden sustituciones de aminoácidos conservadoras, así como deleciones y/o inserciones de aminoácidos. Una sustitución conservadora de aminoácidos se refiere a la sustitución de un primer aminoácido por un segundo aminoácido que tiene propiedades químicas y/o físicas (p. ej., carga, estructura, polaridad, hidrofobicidad/hidrofilicidad) que son similares a las del primer aminoácido. Las sustituciones conservadoras incluyen, sin limitación, la sustitución de un aminoácido por otro dentro de los siguientes grupos: lisina (K), arginina (R) e histidina (H); aspartato (D) y glutamato (E); asparagina (N), glutamina (Q), serina (S), treonina (T), tirosina (Y), K, R, H, D y E; alanina (A), valina (V), leucina (L), isoleucina (I), prolina (P), fenilalanina (F), triptófano (W), metionina (M), cisteína (C) y glicina (G); F, W e Y; C, S y T.

[0145] Códigos de aminoácidos

[0147] Los aminoácidos que forman los anticuerpos anti-IL-23 a menudo se abrevian. Las designaciones de los aminoácidos pueden indicarse designando el aminoácido por su código de una única letra, su código de tres letras, nombre o el (los) codón(es) de tres nucleótidos, como se entiende bien en la técnica (véase Alberts, B., y col., Molecular Biology of The Cell, tercera edición, Garland Publishing, Inc., Nueva York, 1994):

[0149]

[0150]

[0152] Un anticuerpo anti-IL-23 descrito en la presente memoria puede incluir una o más sustituciones, deleciones o adiciones de aminoácidos, ya sea por mutaciones naturales o por manipulación humana, como se especifica en la presente memoria.

[0153] El número de sustituciones de aminoácidos que haría un experto en la técnica depende de muchos factores, incluidos los descritos anteriormente. En términos generales, el número de sustituciones, inserciones o deleciones de aminoácidos para cualquier anticuerpo anti-IL-23, fragmento o variante dado no será mayor que 40, 30, 20, 19, 18, 17, 16, 15, 14, 13, 12, 11, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4, 3, 2, 1, tal como 1-30 o cualquier intervalo o valor en el mismo, como se especifica en la presente memoria.

[0154] Los aminoácidos en un anticuerpo específico anti-IL-23 que son esenciales para la función pueden identificarse mediante métodos conocidos en la técnica, tales como la mutagénesis dirigida al sitio o la mutagénesis de exploración de alanina (p. ej., Ausubel, supra, capítulos 8 y 15; Cunningham y Wells, Science 244:1081-1085 (1989)). Este último procedimiento introduce mutaciones únicas de alanina en cada residuo de la molécula. A continuación, se prueba la actividad biológica de las moléculas mutantes resultantes, tal como, pero sin limitarse a, al menos una actividad neutralizante de la IL-23. Los sitios que son críticos para la unión de anticuerpos también pueden identificarse mediante análisis estructurales, tal como la cristalización, la resonancia magnética nuclear o el etiquetado por fotoafinidad (Smith, y col., J. Mol. Biol.224:899-904 (1992) y de Vos, y col., Science 255:306-312 (1992)).

[0155] Los anticuerpos anti-IL-23 pueden incluir, aunque no de forma limitativa, al menos una parte, secuencia o combinación seleccionada de 5 y todos los aminoácidos contiguos de al menos una de las Id. de sec. n.º: 5, 20, 44, 50, 56 y 73. Los anticuerpos IL-23 o las partes o variantes especificadas pueden incluir, aunque no de forma limitativa, al menos una parte, secuencia o combinación seleccionada de al menos 3-5 aminoácidos contiguos de las Id. de sec. n.º anteriores; 5-17 aminoácidos contiguos de las Id. de sec. n.º anteriores, 5-10 aminoácidos contiguos de las Id. de sec. n.º anteriores, 5-11 aminoácidos contiguos de las Id. de sec. n.º anteriores, 5-7 aminoácidos contiguos de las Id. de sec. n.º anteriores; 5-9 aminoácidos contiguos de las Id. de sec. n.º anteriores.

[0156] Un anticuerpo anti-IL-23 puede comprender además, opcionalmente, un polipéptido de al menos uno del 70-100 % de 5, 17, 10, 11, 7, 9, 119 o 108 aminoácidos contiguos de las Id. de sec. n.º anteriores. A veces, la secuencia de aminoácidos de una cadena de inmunoglobulina, o parte de la misma (p. ej., región variable, CDR) tiene aproximadamente una identidad del 70-100 % (p. ej., 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100 o cualquier intervalo o valor en el mismo) con respecto a la secuencia de aminoácidos de la cadena correspondiente de al menos una de las Id. de sec. n.º anteriores. Por ejemplo, la secuencia de aminoácidos de una región variable de cadena ligera puede compararse con la secuencia de las Id. de sec. n.º anteriores, o la secuencia de aminoácidos de una CDR3 de cadena pesada puede compararse con las Id. de sec. n.º anteriores. Preferiblemente, la identidad de aminoácidos del 70-100 % (es decir, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100 o cualquier intervalo o valor en el mismo) se determina utilizando un algoritmo informático adecuado, como se conoce en la técnica.

[0157] La “identidad”, como se conoce en la técnica, es una relación entre dos o más secuencias de polipéptidos o dos o más secuencias de polinucleótidos, según se determina mediante la comparación de las secuencias. En la técnica, “identidad” también significa el grado de relación de secuencia entre las secuencias de polipéptidos o polinucleótidos, según se determina mediante la coincidencia entre las cadenas de tales secuencias. La “identidad” y la “similitud” pueden calcularse fácilmente mediante métodos conocidos, incluyendo, aunque no de forma limitativa, los descritos en Computational Molecular Biology, Lesk, A. M., ed., Oxford University Press, Nueva York, 1988; Biocomputing:Informatics and Genome Projects, Smith, D. W., ed., Academic Press, Nueva York, 1993; Análisis computarizado de datos de secuencia, parte I, Griffin, A. M., y Griffin, H. G., eds., Humana Press, Nueva Jersey, 1994; Sequence Analysis in Molecular Biology, von Heinje, G., Academic Press, 1987; y Sequence Analysis Primer, Gribskov, M. and Devereux, J., eds., M Stockton Press, Nueva York, 1991; y Carillo, H., y Lipman, D., Siam J. Applied Math., 48:1073 (1988). Además, los valores del porcentaje de identidad pueden obtenerse a partir de las alineaciones de secuencias de aminoácidos y nucleótidos generadas utilizando la configuración predeterminada para el componente AlignX de Vector NTI Suite 8.0 (Informax, Frederick, MD).

[0158] Los métodos preferidos para determinar la identidad se diseñan para dar la mayor coincidencia entre las secuencias probadas. Los métodos para determinar la identidad y la similitud están codificados en programas informáticos disponibles al público. Los métodos de programas informáticos preferidos para determinar la identidad y similitud entre dos secuencias incluyen, aunque no de forma limitativa, el paquete de programas GCG (Devereux, J., y col., Nucleic Acids Research 12(1): 387 (1984)), BLASTP, BLASTN, y FASTA (Atschul, S. F. y col., J. Molec. Biol. 215:403-410 (1990)). El programa BLAST X está disponible públicamente en NCBI y otras fuentes (BLAST Manual, Altschul, S., y col., NCBINLM NIH Bethesda, Md.20894: Altschul, S., y col., J. Mol. Biol.215:403-410 (1990). El conocido algoritmo de Smith Waterman también puede utilizarse para determinar la identidad.

[0159] Los parámetros preferidos para la comparación de secuencias de polipéptidos incluyen los siguientes: (1) Algorithm: Needleman y Wunsch, J. Mol Biol. 48:443-453 (1970) Comparison matrix: BLOSSUM62 de Hentikoff y Hentikoff, Proc. Natl. Acad. Sci, USA.89:10915-10919 (1992)

[0160] Penalización por espacio: 12

[0161] Penalización por longitud de espacio: 4

[0162] Un programa útil con estos parámetros está disponible públicamente como el programa “gap” de Genetics Computer Group, Madison, Wisconsin. Los parámetros mencionados anteriormente son los parámetros predeterminados para las comparaciones de secuencias peptídicas (junto con ninguna penalización por espacios de extremo).

[0163] Los parámetros preferidos para la comparación de polinucleótidos incluyen los siguientes:

[0164] (1) Algorithm: Needleman y Wunsch, J. Mol Biol.48:443-453 (1970)

[0165] Matriz de comparación: coincidencias=+10, discordancia=0

[0166] Penalización por espacio: 50

[0167] Penalización por longitud de espacio: 3

[0168] Disponible como: El programa “gap” de Genetics Computer Group, Madison, Wisconsin. Estos son los parámetros predeterminados para las comparaciones de secuencias de ácidos nucleicos.

[0169] A modo de ejemplo, una secuencia de polinucleótidos puede ser idéntica a otra secuencia, es decir, idéntica al 100 %, o puede incluir hasta un cierto número entero de alteraciones de nucleótidos en comparación con la secuencia de referencia. Tales alteraciones se seleccionan del grupo que consiste en al menos una deleción, sustitución, incluyendo la transición y la transversión, o inserción de nucleótidos, y en donde las alteraciones pueden producirse en las posiciones terminales 5' o 3' de la secuencia de nucleótidos de referencia o en cualquier lugar entre esas posiciones terminales, intercaladas ya sea individualmente entre los nucleótidos en la secuencia de referencia o en uno o más grupos contiguos dentro de la secuencia de referencia. El número de alteraciones de nucleótidos se determina multiplicando el número total de nucleótidos de la secuencia por el porcentaje numérico del porcentaje de identidad respectivo (dividido por 100) y restando ese producto del número total de nucleótidos de la secuencia, o: n.sub.n.ltorsim.x.sub.n -(x.sub.n.y),

[0170] en donde n.sub.n es el número de alteraciones de nucleótidos, x.sub.n es el número total de nucleótidos en la secuencia, e y es, por ejemplo, 0,70 para el 70 %, 0,80 para el 80 %, 0,85 para el 85 %, 0,90 para el 90 %, 0,95 para el 95 %, etc., y en donde cualquier producto no entero de x.sub.n e y se redondea hacia abajo al número entero más cercano antes de restarlo de x.sub.n.

[0171] Las alteraciones de una secuencia de polinucleótidos que codifica las Id. de sec. n.º anteriores pueden crear mutaciones sin sentido, de sentido erróneo o de marco de lectura en esta secuencia codificante y, de este modo, alterar el polipéptido codificado por el polinucleótido después de tales alteraciones. Similarmente, una secuencia de polipéptidos puede ser idéntica a la secuencia de referencia de las Id. de sec. n.º anteriores, es decir, ser 100 % idéntica, o puede incluir hasta un cierto número entero de alteraciones de aminoácidos en comparación con la secuencia de referencia, de tal modo que el porcentaje de identidad es inferior al 100 %. Tales alteraciones se seleccionan del grupo que consiste en al menos una deleción, sustitución, incluyendo sustituciones conservadoras y no conservadoras, o inserción de aminoácidos, y en donde las alteraciones pueden producirse en las posiciones amino o carboxi terminales de la secuencia de polipéptidos de referencia o en cualquier lugar entre esas posiciones terminales, intercaladas ya sea individualmente entre los aminoácidos en la secuencia de referencia o en uno o más grupos contiguos dentro de la secuencia de referencia. El número de alteraciones de aminoácidos para un % de identidad dado se determina multiplicando el número total de aminoácidos en las Id. de sec. n.º anteriores por el porcentaje numérico del porcentaje de identidad respectivo (dividido por 100) y, a continuación, restando ese producto del número total de aminoácidos en las Id. de sec. n.º anteriores, o:

[0172] n.sub.a.ltorsim.x.sub.a - (x.sub.a.y),

[0173] en donde n.sub.a es el número de alteraciones de aminoácidos, x.sub.a es el número total de aminoácidos en las Id. de sec. n.º anteriores, e y es, por ejemplo, 0,70 para el 70 %, 0,80 para el 80 %, 0,85 para el 85 %, etc., y en donde cualquier producto no entero de x.sub.a e y se redondea hacia abajo al número entero más cercano antes de restarlo de x.sub.a.

[0174] Las secuencias de regiones variables de cadena pesada y cadena ligera ilustrativas y partes de las mismas se proporcionan en las Id. de sec. n.º anteriores. Los anticuerpos descritos en la presente memoria, o variantes especificadas de los mismos, pueden comprender cualquier número de residuos de aminoácidos contiguos de un anticuerpo descrito en la presente memoria, en donde ese número se selecciona del grupo de números enteros que consiste en del 10 -100 % del número de residuos contiguos en un anticuerpo anti-IL-23. Opcionalmente, esta subsecuencia de aminoácidos contiguos tiene al menos aproximadamente 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, 200, 210, 220, 230, 240, 250 o más aminoácidos de longitud, o cualquier intervalo o valor en los mismos. Además, el número de tales subsecuencias puede ser cualquier número entero seleccionado del grupo que consiste de 1 a 20, tal como al menos 2, 3, 4 o 5.

[0176] Como apreciarán los expertos, los anticuerpos biológicamente activos tienen una actividad específica de al menos el 20 %, el 30 %, o el 40 % y, preferiblemente, al menos el 50 %, el 60 %, o el 70 % y, con la máxima preferencia, al menos el 80 %, el 90 %, o el 95 %-100 % o más (incluyendo, sin limitación, hasta 10 veces la actividad específica) de la del anticuerpo nativo (no sintético), endógeno o relacionado y conocido. Los expertos en la técnica conocen bien los métodos para ensayar y cuantificar las medidas de la actividad enzimática y la especificidad del sustrato.

[0178] También se describen en la presente memoria anticuerpos humanos y fragmentos de unión al antígeno, como se describe en la presente memoria, que se modifican mediante la unión covalente de un resto orgánico. Tal modificación puede producir un anticuerpo o un fragmento de unión al antígeno con mejores propiedades farmacocinéticas (p. ej., aumento de la vida media séricain vivo). El resto orgánico puede ser un grupo polimérico hidrófilo lineal o ramificado, un grupo de ácido graso o un grupo de éster de ácido graso. A veces, el grupo polimérico hidrófilo puede tener un peso molecular de aproximadamente 800 a aproximadamente 120.000 dáltones y puede ser un polialcanoglicol (p. ej., polietilenglicol [PEG], polipropilenglicol [PPG]), polímero de carbohidratos, polímero de aminoácidos o polivinilpirrolidona, y el grupo de ácido graso o éster de ácido graso puede comprender de aproximadamente ocho a aproximadamente cuarenta átomos de carbono.

[0180] Los anticuerpos modificados y los fragmentos de unión al antígeno pueden comprender uno o más restos orgánicos que están unidos covalentemente, directa o indirectamente, al anticuerpo. Cada resto orgánico que está unido a un anticuerpo o fragmento de unión al antígeno descrito en la presente memoria puede ser, de forma independiente, un grupo polimérico hidrófilo, un grupo de ácido graso o un grupo de éster de ácido graso. Como se utiliza en la presente memoria, el término “ácido graso” abarca ácidos monocarboxílicos y ácidos dicarboxílicos. Un “grupo polimérico hidrófilo”, como se utiliza el término en la presente memoria, se refiere a un polímero orgánico que es más soluble en agua que en octano. Por ejemplo, la polilisina es más soluble en agua que en octano. Por lo tanto, se describe un anticuerpo modificado mediante la unión covalente de la polilisina. Los polímeros hidrófilos adecuados para modificar anticuerpos pueden ser lineales o ramificados e incluyen, por ejemplo, polialcanoglicoles (p. ej., PEG, monometoxipolietilenglicol [mPEG], PPG y similares), carbohidratos (p. ej., dextrano, celulosa, oligosacáridos, polisacáridos y similares), polímeros de aminoácidos hidrófilos (p. ej., polilisina, poliarginina, poliaspartato y similares), polímeros de aminoácidos hidrófilos (p. ej., polilisina, poliarginina, poliaspartato y similares), óxidos de polialcano (p. ej., óxido de polietileno, óxido de polipropileno y similares) y polivinilpirrolidona. Preferiblemente, el polímero hidrófilo que modifica un anticuerpo descrito en la presente memoria tiene un peso molecular de aproximadamente 800 a aproximadamente 150.000 dáltones como entidad molecular separada. Por ejemplo, pueden utilizarse PEG<5000>y PEG<20,000,>en donde el subíndice es el peso molecular promedio del polímero en dáltones. El grupo polimérico hidrófilo puede sustituirse con uno a aproximadamente seis grupos de alquilo, ácido graso o éster de ácido graso. Los polímeros hidrófilos que se sustituyen con un grupo de ácido graso o éster de ácido graso pueden prepararse empleando métodos adecuados. Por ejemplo, un polímero que comprende un grupo amina puede acoplarse a un carboxilato del ácido graso o éster de ácido graso, y un carboxilato activado (p. ej., activado con N, N-carbonildiimidazol) en un ácido graso o éster de ácido graso puede acoplarse a un grupo hidroxilo en un polímero.

[0182] Los ácidos grasos y los ésteres de ácidos grasos adecuados para modificar los anticuerpos pueden estar saturados o pueden contener una o más unidades de insaturación. Los ácidos grasos que son adecuados para modificar anticuerpos incluyen, por ejemplo, n-dodecanoato (C<12>, laurato), n-tetradecanoato (C<14>, miristato), n-octadecanoato (C<18>, estearato), n-eicosanoato (C<20>, araquidato), n-docosanoato (C<22>, behenato), n-triacontanoato (C<30>), ntetracontanoato (C<40>),cis-Δ9-octadecanoato (C<18>, oleato), todocis-Δ5,8,11,14-eicosatetraenoato (C<20>, araquidonato), ácido octanodioico, ácido tetradecanodioico, ácido octadecanodioico, ácido docosanodioico, y similares. Los ésteres de ácidos grasos adecuados incluyen monoésteres de ácidos dicarboxílicos que comprenden un grupo alquilo inferior lineal o ramificado. El grupo alquilo inferior puede comprender de uno a aproximadamente doce, preferiblemente, de uno a aproximadamente seis, átomos de carbono.

[0184] Los anticuerpos humanos modificados y los fragmentos de unión al antígeno pueden prepararse utilizando métodos adecuados, tales como mediante reacción con uno o más agentes modificadores. Un “agente modificador”, como se utiliza el término en la presente memoria, se refiere a un grupo orgánico adecuado (p. ej., un polímero hidrófilo, un ácido graso, un éster de ácido graso) que comprende un grupo activador. Un “grupo activador” es un resto químico o grupo funcional que puede, en condiciones apropiadas, reaccionar con un segundo grupo químico, formando de este modo un enlace covalente entre el agente modificador y el segundo grupo químico. Por ejemplo, los grupos activadores reactivos con aminas incluyen grupos electrófilos, tales como tosilato, mesilato, halo (cloro, bromo, fluoro, yodo), ésteres de N-hidroxisuccinimidilo (NHS), y similares. Los grupos activadores que pueden reaccionar con tioles incluyen, por ejemplo, maleimida, yodoacetilo, acrilolilo, disulfuros de piridilo, tiol del ácido 5-tiol-2-nitrobenzoico (TNB-tiol), y similares. Un grupo funcional aldehído puede acoplarse a moléculas que contienen amina o hidrazida, y un grupo azida puede reaccionar con un grupo fosforoso trivalente para formar enlaces fosforamidato o fosforimida. En la técnica se conocen métodos adecuados para introducir grupos activadores en las moléculas (véase, por ejemplo, Hermanson, G. T., Bioconjugate Techniques, Academic Press: San Diego, CA (1996)). Un grupo activador puede unirse directamente al grupo orgánico (p. ej., polímero hidrófilo, ácido graso, éster de ácido graso), o a través de un resto enlazador, por ejemplo, un grupo C<1>-C<12>divalente en donde uno o más átomos de carbono pueden reemplazarse por un heteroátomo, tal como oxígeno, nitrógeno o azufre. Los restos enlazadores adecuados incluyen, por ejemplo, tetraetilenglicol, -(CH<2>)<3>-, -NH-(CH<2>)<6>-NH-, -(CH<2>)<2>-NH- y -CH<2>-O-CH<2>-CH<2>-O-CH<2>-CH<2>-O-CH-NH-. Los agentes modificadores que comprenden un resto enlazador pueden producirse, p. ej., haciendo reaccionar una mono-Bocalquildiamina (p. ej., mono-Boc-etilendiamina, mono-Boc-diaminohexano) con un ácido graso en presencia de 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil) carbodiimida (EDC) para formar un enlace amida entre la amina libre y el carboxilato del ácido graso. El grupo protector Boc puede eliminarse del producto mediante tratamiento con ácido trifluoroacético (TFA, por sus siglas en inglés) para exponer una amina primaria que puede acoplarse a otro carboxilato, como se describe, o puede hacerse reaccionar con anhídrido maleico y el producto resultante se cicla para producir un derivado maleimido activado del ácido graso. (Véase, por ejemplo, Thompson, y col., WO 92/16221)

[0186] Los anticuerpos modificados pueden producirse haciendo reaccionar un anticuerpo humano o un fragmento de unión al antígeno con un agente modificador. Por ejemplo, los restos orgánicos pueden unirse al anticuerpo de una manera no específica del sitio empleando un agente modificador reactivo con aminas, por ejemplo, un éster de NHS de PEG. Los anticuerpos humanos modificados o los fragmentos de unión al antígeno también pueden prepararse reduciendo los enlaces disulfuro (p. ej., los enlaces disulfuro intracatenarios) de un anticuerpo o fragmento de unión al antígeno. El anticuerpo reducido o el fragmento de unión al antígeno pueden hacerse reaccionar a continuación con un agente modificador reactivo con tiol para producir el anticuerpo modificado. Los anticuerpos humanos modificados y los fragmentos de unión al antígeno que comprenden un resto orgánico que está unido a sitios específicos de un anticuerpo pueden prepararse utilizando métodos adecuados, tal como la proteólisis inversa (Fisch y col., Bioconjugate Chem., 3:147-153 (1992); Werlen y col., Bioconjugate Chem., 5:411-417 (1994); Kumaran y col., Protein Sci.

[0187] 6(10):2233-2241 (1997); Itoh y col., Bioorg. Chem., 24(1): 59-68 (1996); Capellas y col., Biotechnol. Bioeng., 56(4):456-463 (1997)), y los métodos descritos en Hermanson, G. T., Bioconjugate Techniques, Academic Press: San Diego, CA (1996).

[0189] El método de la presente invención también utiliza una composición de anticuerpos anti-IL-23 que comprende guselkumab y al menos uno, al menos dos, al menos tres, al menos cuatro, al menos cinco, o más anticuerpos anti-IL-23 de los mismos, como se describe en la presente memoria y/o como se conoce en la técnica, que se proporcionan en una composición, mezcla o forma de origen no natural. Tales composiciones comprenden composiciones de origen no natural que comprenden guselkumab y al menos una variante, dominio, fragmento o variante especificada de longitud completa, con deleción en el extremo C y/o N, de la secuencia de aminoácidos del anticuerpo anti-IL-23 seleccionada del grupo que consiste en el 70-100 % de los aminoácidos contiguos de las Id. de sec. n.º anteriores, o fragmentos, dominios o variantes especificados de los mismos. Las composiciones de anticuerpos anti-IL-23 preferidas incluyen guselkumab y al menos un fragmento, dominio o variante de longitud completa como al menos una parte que contiene CDR o LBP de la secuencia de anticuerpo anti-IL-23 descrita en la presente memoria, por ejemplo, del 70-100 % de las Id. de sec. n.º anteriores, o fragmentos, dominios o variantes especificados de las mismas. Las composiciones adicionales preferidas comprenden, por ejemplo, guselkumab y del 40-99 % de al menos una del 70-100 % de las Id. de sec. n.º anteriores, etc., o fragmentos, dominios o variantes especificados de las mismas. Tales porcentajes de composición son en peso, volumen, concentración, molaridad o molalida como soluciones, mezclas, suspensiones, emulsiones, partículas, polvo o coloides líquidos o secos, como se conoce en la técnica o como se describe en la presente memoria.

[0191] Composiciones de anticuerpos que comprenden ingredientes terapéuticamente activos adicionales

[0193] Las composiciones de anticuerpos utilizadas en el método de la invención pueden comprender además opcionalmente una cantidad eficaz de al menos un compuesto o proteína seleccionado de al menos uno de un fármaco antiinfeccioso, un fármaco del sistema cardiovascular (CV), un fármaco del sistema nervioso central (SNC), un fármaco para el sistema nervioso autónomo (SNA), un fármaco del tracto respiratorio, un fármaco del tracto gastrointestinal (GI), un fármaco hormonal, un fármaco para el equilibrio de líquidos o electrolitos, un fármaco hematológico, un antineoplásico, un fármaco inmunomodulador, un fármaco oftálmico, ótico o nasal, un fármaco tópico, un fármaco nutricional o similares. Tales fármacos son muy conocidos en la técnica, incluyendo las formulaciones, las indicaciones, la dosificación y la administración para cada uno de los que se presentan en la presente memoria (véase, p. ej., Nursing 2001 Handbook of Drugs, 21.ª edición, Springhouse Corp., Springhouse, PA, 2001; Health Professional's Drug Guide 2001, ed., Shannon, Wilson, Stang, Prentice-Hall, Inc., Upper Saddle River, NJ; Pharmcotherapy Handbook, Wells y col., ed., Appleton & Lange, Stamford, CT).

[0195] A modo de ejemplo de los fármacos que pueden combinarse con los anticuerpos para el método de la presente invención, el fármaco antiinfeccioso puede ser al menos uno seleccionado de amebicidas o al menos un antiprotozoario, antihelmíntico, antifúngico, antipalúdico, antituberculoso o al menos un antileprótico, aminoglucósidos, penicilinas, cefalosporinas, tetraciclinas, sulfonamidas, fluoroquinolonas, antivirales, antiinfecciosos macrólidos y antiinfecciosos diversos. El fármaco hormonal puede ser al menos uno seleccionado de corticosteroides, andrógenos o al menos un esteroide anabólico, estrógeno o al menos una progestina, gonadotropina, fármaco antidiabético o al menos un glucagón, hormona tiroidea, antagonista de la hormona tiroidea, hormona hipofisaria y fármaco de tipo paratiroideo. La al menos una cefalosporina puede ser al menos una seleccionada de cefaclor, cefadroxilo, cefazolina sódica, cefdinir, clorhidrato de cefepima, cefixima, cefmetazol sódico, cefonicida sódico, cefoperazona sódica, cefotaxima sódica, cefotetán disódico, cefoxitina sódica, cefpodoxima proxetilo, cefprozilo, ceftazidima, ceftibuteno, ceftizoxima sódica, ceftriaxona sódica, cefuroxima axetilo, cefuroxima sódica, clorhidrato de cefalexina, monohidrato de cefalexina, cefradina, y loracarbef.

[0197] El al menos un coricoesteroide puede ser al menos uno seleccionado de betametasona, acetato de betametasona o fosfato sódico de betametasona, fosfato sódico de betametasona, acetato de cortisona, dexametasona, acetato de dexametasona, fosfato sódico de dexametasona, acetato de fludrocortisona, hidrocortisona, acetato de hidrocortisona, cipionato de hidrocortisona, fosfato sódico de hidrocortisona, succinato sódico de hidrocortisona, metilprednisolona, acetato de metilprednisolona, succinato sódico de metilprednisolona, prednisolona, acetato de prednisolona, fosfato sódico de prednisolona, tebutato de prednisolona, prednisona, triamcinolona, acetónido de triamcinolona, y diacetato de triamcinolona. El al menos un andrógeno o esteroide anabólico puede ser al menos uno seleccionado de danazol, fluoximesterona, metiltestosterona, decanoato de nandrolona, fenpropionato de nandrolona, testosterona, cipionato de testosterona, enantato de testosterona, propionato de testosterona, y sistema transdérmico de testosterona.

[0198] El al menos un inmunosupresor puede ser al menos uno seleccionado de azatioprina, basiliximab, ciclosporina, daclizumab, inmunoglobulina linfocitaria, muromonab-CD3, micofenolato mofetilo, clorhidrato de micofenolato mofetilo, sirolimus y tacrolimus.

[0200] El al menos un antiinfeccioso local puede ser al menos uno seleccionado de aciclovir, anfotericina B, crema de ácido azelaico, bacitracina, nitrato de butoconazol, fosfato de clindamicina, clotrimazol, nitrato de econazol, eritromicina, sulfato de gentamicina, ketoconazol, acetato de mafenida, metronidazol (tópico), nitrato de miconazol, mupiromicina cina, clorhidrato de naftifina, sulfato de neomicina, nitrofurazona, nistatina, sulfadiazina de plata, clorhidrato de terbinafina, terconazol, clorhidrato de tetraciclina, tioconazol, y tolnaftato. El al menos un escabicida o pediculicida puede ser al menos uno seleccionado de crotamitón, lindano, permetrina, y piretrinas. El al menos un corticosteroide tópico puede ser al menos uno seleccionado de dipropionato de betametasona, valerato de betametasona, propionato de clobetasol, desonida, desoximetasona, dexametasona, fosfato sódico de dexametasona, diacetato de diflorasona, acetonida de fluocinolona, fluocinonida, flurandrenolida, propionato de fluticasona, halcionida, hidrocortisona, acetato de hidrocortisona, butirato de hidrocortisona, valerato de hidrocortisona, furoato de mometasona, y acetonida de triamcinolona. (Véase, p. ej., las páginas 1098-1136 de Nursing 2001 Drug Handbook).

[0202] Las composiciones de anticuerpos anti-IL-23 pueden comprender además al menos una de cualquier cantidad adecuada y eficaz de una composición o composición farmacéutica que comprende al menos un anticuerpo anti-IL-23 puesto en contacto o administrado a una célula, tejido, órgano, animal o paciente que necesita tal modulación, tratamiento o terapia, comprendiendo opcionalmente además al menos uno seleccionado de al menos un antagonista del TNF (p. ej., pero sin limitarse a, un antagonista químico o proteico del TNF, un anticuerpo o fragmento monoclonal o policlonal del TNF, un receptor soluble del TNF (p. ej., p55, p70 o p85) o fragmento, polipéptidos de fusión de los mismos, o un antagonista del TNF de molécula pequeña, p. ej., la proteína de unión al TNF I o II (TBP-1 o TBP-II), nerelimonmab, infliximab, eternacept, CDP-571, CDP-870, afelimomab, lenercept y similares), un antirreumático (p. ej., metotrexato, auranofina, aurotioglucosa, azatioprina, etanercept, tiomalato de oro y sodio, sulfato de hidroxicloroquina, leflunomida, sulfasalazina), una inmunización, una inmunoglobulina, un inmunosupresor (p. ej., basiliximab, ciclosporina, daclizumab), una citocina o un antagonista de citocinas. Los ejemplos no limitativos de tales citocinas incluyen, aunque no de forma limitativa, cualquiera de las IL-1 a IL-23 y col. (p. ej., IL-1, IL-2, etc.). Las dosificaciones adecuadas son muy conocidas en la técnica. Véase, p. ej., Wells y col., eds., Pharmacotherapy Handbook, 2.ª edición, Appleton and Lange, Stamford, CT (2000); PDR Pharmacopoeia, Tarascon Pocket Pharmacopoeia 2000, Deluxe Edition, Tarascon Publishing, Loma Linda, CA (2000).

[0204] Los compuestos, composiciones o combinaciones de anticuerpos anti-IL-23 utilizados en el método de la presente invención pueden comprender además al menos uno de cualquier auxiliar adecuado, tal como, pero sin limitarse a, diluyente, aglutinante, estabilizador, tampones, sales, disolventes lipófilos, conservantes, adyuvantes o similares. Se prefieren los auxiliares farmacéuticamente aceptables. Los ejemplos no limitativos y los métodos para preparar tales soluciones estériles son muy conocidos en la técnica, tales como, aunque de forma limitativa, Gennaro, Ed., Remington's Pharmaceutical Sciences, 18.ª edición, Mack Publishing Co. (Easton, PA) 1990. Los portadores farmacéuticamente aceptables pueden seleccionarse de forma rutinaria para que sean adecuados para el modo de administración, la solubilidad y/o la estabilidad del anticuerpo anti-IL-23, fragmento o composición variante, como se conoce bien en la técnica o como se describe en la presente memoria.

[0206] Los excipientes y aditivos farmacéuticos útiles en la presente composición incluyen, aunque no de forma limitativa, proteínas, péptidos, aminoácidos, lípidos y carbohidratos (p. ej., azúcares), incluyendo monosacáridos, di-, tri-, tetray oligosacáridos; azúcares derivatizados, tales como alditoles, ácidos aldónicos, azúcares esterificados y similares; y polisacáridos o polímeros de azúcar), que pueden estar presentes individualmente o en combinación, comprendiendo solos o en combinación del 1-99,99 % en peso o volumen. Los excipientes proteicos ilustrativos incluyen albúmina sérica, tal como albúmina sérica humana (HSA, por sus siglas en inglés), albúmina humana recombinante (rHa), gelatina, caseína, y similares. Los componentes de aminoácidos/anticuerpos representativos, que también pueden funcionar en una capacidad tamponadora, incluyen alanina, glicina, arginina, betaína, histidina, ácido glutámico, ácido aspártico, cisteína, lisina, leucina, isoleucina, valina, metionina, fenilalanina, aspartamo, y similares. Un aminoácido preferido es la glicina.

[0208] Los excipientes de carbohidratos adecuados para utilizarse en la invención incluyen, por ejemplo, monosacáridos, tales como fructosa, maltosa, galactosa, glucosa, D-manosa, sorbosa y similares; disacáridos, tales como lactosa, sacarosa, trehalosa, celobiosa y similares; polisacáridos, tales como rafinosa, melezitosa, maltodextrinas, dextranos, almidones y similares; y alditoles, tales como manitol, xilitol, maltitol, lactitol, xilitol sorbitol (glucitol), mioinositol y similares. Los excipientes de carbohidratos preferidos para utilizarse en la presente invención son manitol, trehalosa y rafinosa.

[0210] Las composiciones de anticuerpos anti-IL-23 también pueden incluir un tampón o un agente de ajuste del pH; de forma típica, el tampón es una sal preparada a partir de un ácido o base orgánicos. Los tampones representativos incluyen sales de ácidos orgánicos, tales como sales de ácido cítrico, ácido ascórbico, ácido glucónico, ácido carbónico, ácido tartárico, ácido succínico, ácido acético o ácido ftálico; Tris, clorhidrato de trometamina, o tampones de fosfato. Los tampones preferidos para utilizarse en las presentes composiciones son las sales de ácidos orgánicos, tales como el citrato.

[0212] Adicionalmente, las composiciones de anticuerpos anti-IL-23 pueden incluir excipientes/aditivos poliméricos, tales como polivinilpirrolidonas, ficolls (un azúcar polimérico), dextratos (p. ej., ciclodextrinas, tales como la 2-hidroxipropilβ-ciclodextrina), polietilenglicoles, agentes aromatizantes, agentes antimicrobianos, edulcorantes, antioxidantes, agentes antiestáticos, surfactantes (p. ej., polisorbatos, tales como “TWEEN 20” y “TWEEN 80”), lípidos (p. ej., fosfolípidos, ácidos grasos), esteroides (p. ej., colesterol), y agentes quelantes (p. ej., EDTA).

[0214] Estos y otros excipientes y/o aditivos farmacéuticos conocidos adecuados para utilizarse en las composiciones de anticuerpos anti-IL-23, partes o variantes según la invención son conocidos en la técnica, p. ej., como se enumeran en “Remington: The Science & Practice of Pharmacy”, 19.ª ed., Williams & Williams, (1995), y en “Physician's Desk Reference”, 52.ª ed., Medical Economics, Montvale, NJ (1998). Los materiales de portadores o excipientes preferidos son carbohidratos (p. ej., sacáridos y alditoles) y tampones (p. ej., citrato) o agentes poliméricos. Una molécula portadora ilustrativa es el mucopolisacárido, el ácido hialurónico, que puede ser útil para el suministro intraarticular.

[0215] Formulaciones

[0217] Como se ha señalado anteriormente, la invención proporciona formulaciones estables, que comprenden preferiblemente un tampón de fosfato con solución salina o una sal elegida, así como soluciones y formulaciones conservadas que contienen un conservante, así como formulaciones conservadas de utilización múltiple adecuadas para utilizarse de forma farmacéutica o veterinaria, que comprenden al menos un anticuerpo anti-IL-23 en una formulación farmacéuticamente aceptable. Las formulaciones conservadas contienen al menos un conservante conocido u opcionalmente seleccionado del grupo que consiste en al menos un fenol, m-cresol, p-cresol, o-cresol, clorocresol, alcohol bencílico, nitrito fenilmercúrico, fenoxietanol, formaldehído, clorobutanol, cloruro de magnesio (p. ej., hexahidrato), alquilparabeno (metilo, etilo, propilo, butilo y similares), cloruro de benzalconio, cloruro de bencetonio, dehidroacetato de sodio y timerosal, o mezclas de los mismos en un diluyente acuoso. Cualquier concentración o mezcla adecuada puede utilizarse como se conoce en la técnica, tal como el 0,001-5 %, o cualquier intervalo o valor en el mismo, tal como, pero sin limitarse a, 0,001, 0,003, 0,005, 0,009, 0,01, 0,02, 0,03, 0,05, 0,09, 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1,0, 1,1, 1,2, 1,3, 1,4, 1,5, 1,6, 1,7, 1,8, 1,9, 2,0, 2,1, 2,2, 2,3, 2,4, 2,5, 2,6, 2,7, 2,8, 2,9, 3,0, 3,1, 3,2, 3,3, 3,4, 3,5, 3,6, 3,7, 3,8, 3,9, 4,0, 4,3, 4,5, 4,6, 4,7, 4,8, 4,9, o cualquier intervalo o valor en el mismo. Los ejemplos no limitativos incluyen, sin conservantes, 0,1-2 % de m-cresol (p. ej., 0,2, 0,3.0,4, 0,5, 0,9, 1,0 %), 0,1-3 % de alcohol bencílico (p. ej., 0,5, 0,9, 1,1, 1,5, 1,9, 2,0, 2,5 %), 0,001-0,5 % de timerosal (p. ej., 0,005, 0,01), 0,001-2,0 % de fenol (p. ej., 0,05, 0,25, 0,28, 0,5, 0,9, 1,0 %), 0,0005-1,0 % de alquilparabenos (p. ej., 0,00075, 0,0009, 0,001, 0,002, 0,005, 0,0075, 0,009, 0,01, 0,02, 0,05, 0,075, 0,09, 0,1, 0,2, 0,3, 0,5, 0,75, 0,9, 1,0 %), y similares.

[0218] Como se ha señalado anteriormente, el método de la invención utiliza un artículo de fabricación, que comprende material de envasado y al menos un vial que comprende una solución de al menos un anticuerpo específico anti-IL-23 con los tampones y/o conservantes prescritos, opcionalmente en un diluyente acuoso, en donde dicho material de envasado comprende una etiqueta que indica que tal solución puede mantenerse durante un período de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 9, 12, 18, 20, 24, 30, 36, 40, 48, 54, 60, 66, 72 horas o más. La invención utiliza además un artículo de fabricación, que comprende material de envasado, un primer vial que comprende un anticuerpo específico anti-IL-23 liofilizado, y un segundo vial que comprende un diluyente acuoso de tampón o conservante prescrito, en donde dicho material de envasado comprende una etiqueta que indica al paciente que reconstituya el anticuerpo específico anti-IL-23 en el diluyente acuoso para formar una solución que puede mantenerse durante un período de veinticuatro horas o más.

[0219] El anticuerpo específico anti-IL-23 utilizado según la presente invención puede producirse por medios recombinantes, incluyendo a partir de células de mamíferos o preparaciones transgénicas, o puede purificarse a partir de otras fuentes biológicas, como se describe en la presente memoria o como se conoce en la técnica.

[0220] El intervalo del anticuerpo específico anti-IL-23 incluye cantidades que, al reconstituirse, si están en un sistema húmedo/seco, producen concentraciones de aproximadamente 1,0 µg/ml a aproximadamente 1000 mg/ml, aunque las concentraciones más bajas y más altas son operativas y dependen del vehículo de suministro previsto, p. ej., las formulaciones en solución diferirán de los métodos con parches transdérmicos, pulmonares, transmucosos, osmóticos o de microbombas.

[0221] Preferiblemente, el diluyente acuoso comprende además opcionalmente un conservante farmacéuticamente aceptable. Los conservantes preferidos incluyen los seleccionados del grupo que consiste en fenol, m-cresol, p-cresol, o-cresol, clorocresol, alcohol bencílico, alquilparabeno (metilo, etilo, propilo, butilo y similares), cloruro de benzalconio, cloruro de bencetonio, deshidroacetato de sodio y timerosal, o mezclas de los mismos. La concentración de conservante utilizada en la formulación es una concentración suficiente para producir un efecto antimicrobiano. Tales concentraciones dependen del conservante seleccionado y son fácilmente determinadas por el experto en la técnica. Otros excipientes, p. ej., agentes de isotonicidad, tampones, antioxidantes, y potenciadores de conservantes, pueden añadirse opcional y preferiblemente al diluyente. Un agente de isotonicidad, tal como la glicerina, se utiliza comúnmente a concentraciones conocidas. Preferiblemente, se añade un tampón fisiológicamente tolerado para proporcionar un mejor control del pH. Las formulaciones pueden cubrir un amplio intervalo de pH, tal como de aproximadamente pH 4 a aproximadamente pH 10, e intervalos preferidos de aproximadamente pH 5 a aproximadamente pH 9, y un intervalo con la máxima preferencia de aproximadamente 6,0 a aproximadamente 8,0. Preferiblemente, las formulaciones de la presente invención tienen un pH entre aproximadamente 6,8 y aproximadamente 7,8. Los tampones preferidos incluyen tampones de fosfato, con la máxima preferencia, fosfato de sodio, particularmente, solución salina tamponada con fosfato (PBS, por sus siglas en inglés).

[0222] Otros aditivos, tales como solubilizantes farmacéuticamente aceptables como Tween 20 (monolaurato de polioxietileno (20) sorbitán), Tween 40 (monopalmitato de polioxietileno (20) sorbitán), Tween 80 (monooleato de sorbitán polioxietileno (20)), Pluronic F68 (copolímeros en bloque de polioxietileno y polioxipropileno) y PEG (polietilenglicol) o surfactantes no iónicos, tales como polisorbato 20 u 80 o poloxámero 184 o 188, polioles Pluronic<®>, otros copolímeros en bloque y quelantes, tales como EDTA y EGTA, pueden añadirse opcionalmente a las formulaciones o composiciones para reducir la agregación. Estos aditivos son particularmente útiles si se utiliza una bomba o un recipiente de plástico para administrar la formulación. La presencia de un surfactante farmacéuticamente aceptable mitiga la propensión de la proteína a agregarse.

[0223] Las formulaciones pueden prepararse mediante un proceso que comprende mezclar al menos un anticuerpo específico anti-IL-23 y un conservante seleccionado del grupo que consiste en fenol, m-cresol, p-cresol, o-cresol, clorocresol, alcohol bencílico, alquilparabeno (metilo, etilo, propilo, butilo y similares), cloruro de benzalconio, cloruro de bencetonio, dehidroacetato de sodio y timerosal, o mezclas de los mismos, en un diluyente acuoso. La mezcla del al menos un anticuerpo específico anti-IL-23 y el conservante en un diluyente acuoso se lleva a cabo utilizando procedimientos de disolución y mezcla convencionales. Para preparar una formulación adecuada, por ejemplo, se combina una cantidad medida de al menos un anticuerpo específico anti-IL-23 en solución tamponada con el conservante deseado en una solución tamponada en cantidades suficientes para proporcionar la proteína y el conservante en las concentraciones deseadas. Un experto en la técnica reconocería variaciones de este proceso. Por ejemplo, el orden en que se añaden los componentes, si se utilizan aditivos adicionales, la temperatura y el pH a los que se prepara la formulación son factores que pueden optimizarse para la concentración y los medios de administración utilizados.

[0224] Las formulaciones pueden proporcionarse a los pacientes como soluciones claras o como viales dobles que comprenden un vial de anticuerpo específico anti-IL-23 liofilizado que se reconstituye con un segundo vial que contiene agua, un conservante y/o excipientes, preferiblemente, un tampón de fosfato y/o solución salina y una sal elegida, en un diluyente acuoso. Tanto un vial de solución única como un vial doble que requiere reconstitución puede reutilizarse múltiples veces y puede ser suficiente para un único o múltiples ciclos de tratamiento del paciente y, por lo tanto, puede proporcionar un régimen de tratamiento más conveniente que el disponible actualmente.

[0225] Los presentes artículos de fabricación son útiles para la administración durante un período que varía de inmediato a veinticuatro horas o más. Por consiguiente, los artículos de fabricación actualmente reivindicados ofrecen ventajas significativas para el paciente. Las formulaciones de la invención pueden almacenarse opcionalmente de forma segura a temperaturas de aproximadamente 2 °C a aproximadamente 40 °C y retener la actividad biológica de la proteína durante períodos de tiempo prolongados, lo que permite indicar en la etiqueta del envase que la solución puede mantenerse y/o utilizarse durante un período de 6, 12, 18, 24, 36, 48, 72 o 96 horas o más. Si se utiliza un diluyente conservado, tal etiqueta puede incluir la utilización hasta de 1-12 meses, medio año, año y medio y/o dos años. Las soluciones de anticuerpos específicos anti-IL-23 pueden prepararse mediante un proceso que comprende mezclar al menos un anticuerpo en un diluyente acuoso. La mezcla se lleva a cabo utilizando procedimientos convencionales de disolución y mezcla. Para preparar un diluyente adecuado, por ejemplo, se combina una cantidad medida de al menos un anticuerpo en agua o tampón en cantidades suficientes para proporcionar la proteína y, opcionalmente, un conservante o tampón en las concentraciones deseadas. Un experto en la técnica reconocería variaciones de este proceso. Por ejemplo, el orden en que se añaden los componentes, si se utilizan aditivos adicionales, la temperatura y el pH a los que se prepara la formulación son factores que pueden optimizarse para la concentración y los medios de administración utilizados.

[0227] Los productos reivindicados pueden proporcionarse a los pacientes como soluciones claras o como viales dobles que comprenden un vial de al menos un anticuerpo específico anti-IL-23 liofilizado que se reconstituye con un segundo vial que contiene el diluyente acuoso. Tanto un vial de solución única como un vial doble que requiere reconstitución puede reutilizarse múltiples veces y puede ser suficiente para un único o múltiples ciclos de tratamiento del paciente y, por lo tanto, proporciona un régimen de tratamiento más conveniente que el disponible actualmente.

[0229] Los productos reivindicados pueden proporcionarse indirectamente a los pacientes proporcionando a farmacias, clínicas u otras instituciones e instalaciones como tales, soluciones claras o viales dobles que comprenden un vial de al menos un anticuerpo específico anti-IL-23 liofilizado que se reconstituye con un segundo vial que contiene el diluyente acuoso. La solución clara en este caso puede tener un tamaño de hasta un litro o incluso mayor, proporcionando un depósito grande del que pueden recuperarse partes más pequeñas de la al menos una solución de anticuerpos una o múltiples veces para transferirse en viales más pequeños y ser proporcionadas por la farmacia o la clínica a sus clientes y/o pacientes.

[0231] Los dispositivos reconocidos que comprenden sistemas de vial único incluyen dispositivos de inyector tipo pluma para el suministro de una solución, tales como BD Pens, BD Autojector<®>, Humaject<®,>NovoPen<®>, B-D<®>Pen, AutoPen<®>, y OptiPen<®>, GenotropinPen<®>, Genotronorm Pen<®>, Humatro Pen<®>, Reco-Pen<®>, Roferon Pen<®>, Biojector<®>, Iject<®>, J-tip Needle-Free Injector<®>, Intraject<®>, Medi-Ject<®>, Smartject<®>, p. ej., fabricados o desarrollados por Becton Dickensen (Franklin Lakes, NJ, www.bectondickenson.com), Disetronic (Burgdorf, Suiza, www.disetronic.com; Bioject, Portland, Oregón (www.bioject.com); National Medical Products, Weston Medical (Peterborough, Reino Unido, www.westonmedical.com), Medi-Ject Corp (Minneapolis, MN, www.mediject.com) y dispositivos similares adecuados. Los dispositivos reconocidos que comprenden un sistema de vial doble incluyen los sistemas de inyector tipo pluma para reconstituir un fármaco liofilizado en un cartucho para el suministro de la solución reconstituida, tal como el HumatroPen<®>. Los ejemplos de otros dispositivos adecuados incluyen jeringas precargadas, autoinyectores, inyectores sin aguja, y equipos de infusión IV sin aguja.

[0233] Los productos pueden incluir material de embalaje. El material de embalaje proporciona, además de la información requerida por las agencias reguladoras, las condiciones en las que puede utilizarse el producto. El material de envasado proporciona instrucciones al paciente, según corresponda, para reconstituir el al menos un anticuerpo anti-IL-23 en el diluyente acuoso para formar una solución y para utilizar la solución durante un período de 2 a 24 horas o más para el producto de dos viales, húmedo/seco. Para el vial único, el producto en solución, la jeringa precargada o el autoinyector, la etiqueta indica que tal solución puede utilizarse durante un período de 2-24 horas o más. Los productos son útiles para la utilización de productos farmacéuticos en humanos.

[0235] Las formulaciones utilizadas en el método de la presente invención pueden prepararse mediante un proceso que comprende mezclar un anticuerpo anti-IL-23 y un tampón seleccionado, preferiblemente, un tampón de fosfato que contiene solución salina o una sal elegida. La mezcla del anticuerpo anti-IL-23 y el tampón en un diluyente acuoso se realiza utilizando procedimientos convencionales de disolución y mezcla. Para preparar una formulación adecuada, por ejemplo, se combina una cantidad medida de al menos un anticuerpo en agua o tampón con el agente tamponador deseado en agua en cantidades suficientes para proporcionar la proteína y el tampón en las concentraciones deseadas. Un experto en la técnica reconocería variaciones de este proceso. Por ejemplo, el orden en que se añaden los componentes, si se utilizan aditivos adicionales, la temperatura y el pH a los que se prepara la formulación son factores que pueden optimizarse para la concentración y los medios de administración utilizados.

[0237] El método de la invención proporciona composiciones farmacéuticas que comprenden diversas formulaciones útiles y aceptables para la administración a un paciente humano o animal. Tales composiciones farmacéuticas se preparan utilizando agua en “estado estándar” como diluyente y métodos rutinarios muy conocidos por los expertos en la técnica. Por ejemplo, pueden proporcionarse primero componentes tamponadores, tales como la histidina y el monoclorhidrato de histidina hidratado, seguidos de la adición de un volumen apropiado, no final, de diluyente de agua, sacarosa y polisorbato 80 en “estado estándar”. A continuación, puede añadirse el anticuerpo aislado. Por último, el volumen de la composición farmacéutica se ajusta al volumen final deseado en condiciones de “estado estándar” utilizando agua como diluyente. Los expertos en la técnica reconocerán una serie de otros métodos adecuados para la preparación de las composiciones farmacéuticas.

[0239] Las composiciones farmacéuticas pueden ser soluciones o suspensiones acuosas que comprenden la masa indicada de cada constituyente por unidad de volumen de agua o que tienen un pH indicado en “estado estándar”. Como se utiliza en la presente memoria, el término “estado estándar” significa una temperatura de 25 °C /- 2 °C y una presión de 1 atmósfera. El término “estado estándar” no se utiliza en la técnica para referirse a un único conjunto de temperaturas o presiones reconocido en la técnica, sino que es un estado de referencia que especifica las temperaturas y la presión que se deben utilizar para describir una solución o suspensión con una composición particular en las condiciones de “estado estándar” de referencia. Esto se debe a que el volumen de una solución es, en parte, una función de la temperatura y la presión. Los expertos en la técnica reconocerán que las composiciones farmacéuticas equivalentes a las descritas en la presente memoria pueden producirse a otras temperaturas y presiones. Si tales composiciones farmacéuticas son equivalentes a las descritas en la presente memoria debe determinarse en las condiciones de “estado estándar” definidas anteriormente (p. ej., 25 °C /- 2 °C y una presión de 1 atmósfera).

[0241] Es importante destacar que tales composiciones farmacéuticas pueden contener masas de componentes de “aproximadamente” un cierto valor (p. ej.“aproximadamente 0,53 mg de L-histidina”) por unidad de volumen de la composición farmacéutica o tener valores de pH de aproximadamente un cierto valor. Una masa de componente presente en una composición farmacéutica o el valor de pH es “aproximadamente” un valor numérico dado si el anticuerpo aislado presente en la composición farmacéutica es capaz de unirse a una cadena peptídica mientras el anticuerpo aislado está presente en la composición farmacéutica o después de que el anticuerpo aislado se ha eliminado de la composición farmacéutica (p. ej., mediante dilución). Dicho de una forma diferente, un valor, tal como el valor de masa de componente o el valor de pH, es “aproximadamente” un valor numérico dado cuando la actividad de unión del anticuerpo aislado se mantiene y es detectable después de colocar el anticuerpo aislado en la composición farmacéutica.

[0243] El análisis de unión competitiva se realiza para determinar si los mAb específicos de IL-23 se unen a epítopos similares o diferentes y/o compiten entre sí. Los Abs se recubren individualmente en placas ELISA. Se añaden los mAb competidores, seguido de la adición de hrIL-23 biotinilado. Para el control positivo, puede utilizarse el mismo mAb para el recubrimiento que el mAb competidor (“autocompetencia”). La unión a la IL-23 se detecta utilizando estreptavidina. Estos resultados demuestran si los mAb reconocen epítopos similares o parcialmente superpuestos en la IL-23.

[0244] En una realización de las composiciones farmacéuticas, la concentración de anticuerpos aislados es de aproximadamente 77 a aproximadamente 104 mg por ml de la composición farmacéutica. En otra realización de las composiciones farmacéuticas, el pH es de aproximadamente 5,5 a aproximadamente 6,5.

[0246] Las formulaciones estables o conservadas pueden proporcionarse a los pacientes como soluciones claras o como viales dobles que comprenden un vial de al menos un anticuerpo anti-IL-23 liofilizado que se reconstituye con un segundo vial que contiene un conservante o tampón y excipientes en un diluyente acuoso. Tanto un vial de solución única como un vial doble que requiere reconstitución puede reutilizarse múltiples veces y puede ser suficiente para un único o múltiples ciclos de tratamiento del paciente y, por lo tanto, proporciona un régimen de tratamiento más conveniente que el disponible actualmente.

[0248] Otras formulaciones o métodos para estabilizar el anticuerpo anti-IL-23 pueden resultar en una solución distinta a una solución clara de polvo liofilizado que comprende el anticuerpo. Entre las soluciones no claras están las formulaciones que comprenden suspensiones en forma de partículas, siendo dichas partículas una composición que contiene el anticuerpo anti-IL-23 en una estructura de dimensión variable y conocida de diversas formas como microesfera, micropartícula, nanopartícula, nanoesfera o liposoma. Tales formulaciones en forma de partículas relativamente homogéneas, esencialmente esféricas, que contienen un agente activo pueden formarse poniendo en contacto una fase acuosa que contiene el agente activo y un polímero y una fase no acuosa seguida de la evaporación de la fase no acuosa para provocar la coalescencia de partículas de la fase acuosa, como se enseña en la patente US-4.589.330. Las micropartículas porosas pueden prepararse utilizando una primera fase que contiene el agente activo y un polímero dispersos en un disolvente continuo y eliminando dicho disolvente de la suspensión mediante liofilización o dilución-extracción-precipitación, como se enseña en la patente US-4.818.542. Los polímeros preferidos para tales preparaciones son polímeros o copolímeros naturales o sintéticos seleccionados del grupo que consiste en agar gelatina, almidón, arabinogalactano, albúmina, colágeno, ácido poliglicólico, ácido poliláctico, glicólido-L(-) láctido poli(épsilon-caprolactona, ácido poli(épsilon-caprolactona-CO-láctico), ácido poli(épsilon-caprolactona-CO-glicólico), poli(ácido β-hidroxibutírico), poli(óxido de etileno), polietileno, poli(alquil-2-cianoacrilato), poli(metacrilato de hidroxietilo), poliamidas, poli(aminoácidos), poli(2-hidroxietil DL-aspartamida), poli(éster urea), poli(L-fenilalanina/etilenglicol/1,6-diisocianatohexano) y poli(metacrilato de metilo). Los polímeros particularmente preferidos son los poliésteres, tales como el ácido poliglicólico, el ácido poliláctico, el glicólido-L(-) láctido, la poli(épsiloncaprolactona), el ácido poli (épsilon-caprolactona-CO-láctico), y el ácido poli(épsilon-caprolactona-CO-glicólico. Los disolventes útiles para disolver el polímero y/o el activo incluyen: agua, hexafluoroisopropanol, cloruro de metileno, tetrahidrofurano, hexano, benceno o sesquihidrato de hexafluoroacetona. El proceso de dispersión de la fase que contiene el activo con una segunda fase puede incluir aplicar presión para forzar dicha primera fase a través de un orificio en una boquilla para afectar la formación de gotas.

[0250] Las formulaciones de polvo seco pueden resultar de procesos distintos de la liofilización, tales como el secado por pulverización o la extracción con disolvente mediante evaporación o mediante precipitación de una composición cristalina seguida de uno o más pasos para eliminar el disolvente acuoso o no acuoso. La preparación de un preparado de anticuerpos secado por pulverización se enseña en la patente US-6.019.968. Las composiciones de polvo seco basadas en anticuerpos pueden producirse mediante el secando por pulverización de soluciones o suspensiones del anticuerpo y, opcionalmente, excipientes, en un disolvente en condiciones que proporcionen un polvo seco respirable.

[0251] Los disolventes pueden incluir compuestos polares, tales como agua y etanol, que pueden secarse fácilmente. La estabilidad de los anticuerpos puede mejorarse realizando los procedimientos de secado por pulverización en ausencia de oxígeno, tal como bajo una capa de nitrógeno o mediante la utilización de nitrógeno como gas de secado. Otra formulación relativamente seca es una dispersión de una pluralidad de microestructuras perforadas dispersas en un medio de suspensión que de forma típica comprende un propelente de hidrofluoroalcano, como se enseña en la patente WO 9916419. Las dispersiones estabilizadas pueden administrarse al pulmón de un paciente utilizando un inhalador de dosis medida. Los equipos útiles en la fabricación comercial de medicamentos secados por pulverización son fabricados por Buchi Ltd. o Niro Corp.

[0253] Un anticuerpo anti-IL-23, ya sea en las formulaciones o soluciones estables o conservadas descritas en la presente memoria, puede administrarse a un paciente según la presente invención a través de una variedad de métodos de suministro, incluyendo la inyección SC o IM; transdérmica, pulmonar, transmucosa, implante, bomba osmótica, cartucho, microbomba, u otros medios apreciados por los expertos en la técnica, como se conoce muy bien en la técnica.

[0255] Aplicaciones terapéuticas

[0257] Cualquier método descrito en la presente memoria puede comprender la administración de una cantidad eficaz de una composición o composición farmacéutica que comprende un anticuerpo anti-IL-23 a una célula, tejido, órgano, animal o paciente que necesita tal modulación, tratamiento o terapia. Tal método puede comprender además opcionalmente la coadministración o terapia combinada para tratar tales enfermedades o trastornos, en donde la administración de dicho al menos un anticuerpo anti-IL-23, parte o variante especificada del mismo, comprende además administrar, antes, simultáneamente y/o después, al menos uno seleccionado de al menos un antagonista del TNF (p. ej., pero sin limitarse a, un antagonista químico o proteico del TNF, un anticuerpo o fragmento monoclonal o policlonal del TNF, un receptor soluble del TNF (p. ej., p55, p70 o p85) o un fragmento, polipéptidos de fusión de los mismos, o un antagonista del TNF de molécula pequeña, p. ej., la proteína de unión al TNF I o II TNF (TBP-1 o TBP-II), nerelimonmab, infliximab, eternacept (Enbrel<™>), adalimulab (Humira<™>), CDP-571, CDP-870, afelimomab, lenercept y similares), un antirreumático (p. ej., metotrexato, auranofina, aurotioglucosa, azatioprina, tiomalato de oro y sodio, sulfato de hidroxicloroquina, leflunomida, sulfasalzina), un relajante muscular, un narcótico, un fármaco antiinflamatorio no esteroideo (AINE), un analgésico, un anestésico, un sedante, un anestésico local, un bloqueador neuromuscular, un antimicrobiano (p. ej., aminoglucósido, un antifúngico, un antiparasitario, un antiviral, un carbapenem, cefalosporina, una flurorquinolona, un macrólido, una penicilina, una sulfonamida, una tetraciclina, otro antimicrobiano), un antipsoriásico, un corticosteroide, un esteroide anabólico, un agente relacionado con la diabetes, un mineral, un nutriente, un agente tiroideo, una vitamina, una hormona relacionada con el calcio, un antidiarreico, un antitusivo, un antiemético, un antiulceroso, un laxante, un anticoagulante, una eritropoyetina (p. ej., epoetina alfa), un filgrastim (p. ej., G-CSF, Neupogen), un sargramostim (GM- LCR, Leukine), una inmunización, una inmunoglobulina, un inmunosupresor (p. ej., basiliximab, ciclosporina, daclizumab), una hormona del crecimiento, un fármaco de reemplazo hormonal, un modulador del receptor de estrógenos, un midriático, un ciclopléjico, un agente alquilante, un antimetabolito, un inhibidor mitótico, un radiofármaco, un antidepresivo, agente antimaníaco, un antipsicótico, un ansiolítico, un hipnótico, un simpaticomimético, un estimulante, donepezilo, tacrina, un medicamento para el asma, un agonista beta, un esteroide inhalado, un inhibidor de leucotrienos, una metilxantina, una cromolina, una epinefrina o análogo, dornasa alfa (Pulmozyme), una citocina o un antagonista de las citocinas. Las dosificaciones adecuadas son muy conocidas en la técnica. Véase, p. ej., Wells y col., eds., Pharmacotherapy Handbook, 2.ª edición, Appleton and Lange, Stamford, CT (2000); PDR Pharmacopoeia, Tarascon Pocket Pharmacopoeia 2000, Deluxe Edition, Tarascon Publishing, Loma Linda, CA (2000); Nursing 2001 Handbook of Drugs, 21.ª edición, Springhouse Corp., Springhouse, PA, 2001; Health Professional's Drug Guide 2001, ed., Shannon, Wilson, Stang, Prentice-Hall, Inc., Upper Saddle River, NJ.

[0259] Tratamientos terapéuticos

[0261] De forma típica, el tratamiento de la psoriasis es afectado por la administración de una cantidad o dosificación eficaz de una composición de anticuerpos anti-IL-23 que totaliza, en promedio, un intervalo de al menos aproximadamente 0,01 a 500 miligramos de un anticuerpo anti-IL-23 por kilogramo de paciente por dosis y, preferiblemente, de al menos aproximadamente 0,1 a 100 miligramos de anticuerpo/kilogramo de paciente por administración única o múltiple, dependiendo de la actividad específica del agente activo contenido en la composición. Alternativamente, la concentración sérica eficaz puede comprender una concentración sérica de 0,1-5000 µg/ml por administración única o múltiple. Las dosificaciones adecuadas son conocidas por los médicos y, por supuesto, dependerán del estado particular de la enfermedad, la actividad específica de la composición que se administra y el paciente particular que se somete a tratamiento. En algunos casos, para lograr la cantidad terapéutica deseada, puede ser necesario proporcionar una administración repetida,es decir,administraciones individuales repetidas de una dosis particular monitorizada o medida, donde las administraciones individuales se repiten hasta lograr la dosis o el efecto diario deseado.

[0263] Las dosis preferidas pueden incluir opcionalmente 0,1, 0,2, 0,3, 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 59, 60, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 y/o 100-500 mg/kg/administración, o cualquier intervalo, valor o fracción de los mismos, o para lograr una concentración sérica de 0,1, 0,5, 0,9, 1,0, 1,1, 1,2, 1,5, 1,9, 2,0, 2,5, 2,9, 3,0, 3,5, 3,9, 4,0, 4,5, 4,9, 5,0, 5,5, 5,9, 6,0, 6,5, 6,9, 7,0, 7,5, 7,9, 8,0, 8,5, 8,9, 9,0, 9,5, 9,9, 10, 10,5, 10,9, 11, 11,5, 11,9, 20, 12,5, 12,9, 13,0, 13,5, 13,9, 14,0, 14,5, 4,9, 5,0, 5,5., 5,9, 6,0, 6,5, 6,9, 7,0, 7,5, 7,9, 8,0, 8,5, 8,9, 9,0, 9,5, 9,9, 10, 10,5, 10,9, 11, 11,5, 11,9, 12, 12,5, 12,9, 13,0, 13,5, 13,9, 14, 14,5, 15, 15,5, 15,9, 16, 16,5, 16,9, 17, 17,5, 17,9, 18, 18,5, 18,9, 19, 19,5, 19,9, 20, 20,5, 20,9, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 96, 100, 200, 300, 400, 500, 600, 700, 800, 900, 1000, 1500, 2000, 2500, 3000, 3500, 4000, 4500, y/o 5000 µg/ml de concentración sérica por administración única o múltiple, o cualquier intervalo, valor o fracción de los mismos.

[0264] Alternativamente, la dosificación administrada puede variar dependiendo de factores conocidos, tales como las características farmacodinámicas del agente particular y su modo y vía de administración; la edad, salud y peso del destinatario; la naturaleza y extensión de los síntomas, el tipo de tratamiento simultáneo, la frecuencia del tratamiento y el efecto deseado. Usualmente, una dosificación de ingrediente activo puede ser de aproximadamente 0,1 a 100 miligramos por kilogramo de peso corporal. Normalmente, de 0,1 a 50 y, preferiblemente, de 0,1 a 10 miligramos, por kilogramo por administración o en forma de liberación sostenida son eficaces para obtener los resultados deseados. Como ejemplo no limitativo, el tratamiento de seres humanos o animales puede proporcionarse como una dosificación de una vez o periódica de al menos un anticuerpo de la presente invención de 0,1 a 100 mg/kg, tal como 0,5, 0,9, 1,0, 1,1, 1,5, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 40, 45, 50, 60, 70, 80, 90 o 100 mg/kg, por día, en al menos uno del día 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, o 40, o, alternativa o adicionalmente, al menos una de la semana 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, o 52, o, alternativa o adicionalmente, al menos uno de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, o 20 años, o cualquier combinación de los mismos, utilizando dosis únicas, en infusión o repetidas.

[0265] Las formas de dosificación (composición) adecuadas para la administración interna contienen generalmente de aproximadamente 0,001 miligramos a aproximadamente 500 miligramos de ingrediente activo por unidad o recipiente. En estas composiciones farmacéuticas, el ingrediente activo normalmente estará presente en una cantidad de aproximadamente el 0,5-99,999 % en peso con respecto al peso total de la composición.

[0266] Para la administración parenteral, el anticuerpo puede formularse como una solución, suspensión, emulsión, partícula, polvo o polvo liofilizado en asociación, o proporcionarse por separado, con un vehículo parenteral farmacéuticamente aceptable. Los ejemplos de tales vehículos son agua, solución salina, solución de Ringer, solución de dextrosa y albúmina sérica humana al 1-10 %. También pueden utilizarse liposomas y vehículos no acuosos, tales como aceites fijos. El vehículo o el polvo liofilizado pueden contener aditivos que mantienen la isotonicidad (p. ej., cloruro de sodio, manitol) y la estabilidad química (p. ej., tampones y conservantes). La formulación se esteriliza mediante técnicas conocidas o adecuadas.

[0267] Los portadores farmacéuticos adecuados se describen en la edición más reciente de Remington's Pharmaceutical Sciences, A. Osol, un texto de referencia estándar en este campo.

[0268] Administración alternativa

[0269] Pueden utilizarse muchos modos conocidos y desarrollados según la presente invención para administrar cantidades farmacéuticamente eficaces de un anticuerpo anti-IL-23. Si bien la administración pulmonar se utiliza en la siguiente descripción, pueden utilizar otros modos de administración según la presente invención con resultados adecuados. Los anticuerpos específicos de la IL-23 de la presente invención pueden administrarse en un portador, como una solución, emulsión, coloide o suspensión, o como un polvo seco, utilizando cualquiera de una variedad de dispositivos y métodos adecuados para la administración por inhalación u otros modos descritos en la presente memoria o conocidos en la técnica.

[0270] Formulaciones y administración parenterales

[0271] Las formulaciones para la administración parenteral pueden contener como excipientes comunes agua estéril o solución salina, polialquilenglicoles, tales como polietilenglicol, aceites de origen vegetal, naftalenos hidrogenados y similares. Las suspensiones acuosas u oleosas para inyección pueden prepararse utilizando un emulsionante o humidificador apropiado y un agente de suspensión, según métodos conocidos. Los agentes para inyección pueden ser un agente diluyente no tóxico, no administrable por vía oral, tal como una solución acuosa, una solución inyectable estéril o una suspensión en un disolvente. Como vehículo o disolvente utilizable, se permiten el agua, la solución de Ringer, la solución salina isotónica, etc.; como disolvente ordinario o disolvente de suspensión, puede utilizarse aceite estéril no volátil. Para estos fines, puede utilizarse cualquier tipo de aceite y ácido graso no volátiles, incluyendo aceites grasos o ácidos grasos naturales o sintéticos o semisintéticos; monoglicéridos o diglicéridos o triglicéridos naturales o sintéticos o semisintéticos. La administración parental es conocida en la técnica e incluye, aunque no de forma limitativa, los medios de inyección convencionales, un dispositivo de inyección sin aguja a presión con gas, como se describe en la patente US-5.851.198, y un dispositivo perforador láser, como se describe en la patente US-5.839.446.

[0272] Suministro alternativo

[0274] La invención se refiere además a la administración de un anticuerpo anti-IL-23 mediante medios parenterales, subcutáneos, intramusculares, intravenosos, intrarticulares, intrabrónquicos, intraabdominales, intracapsulares, intracartilaginosos, intracavitarios, intracelulares, intracerebelosos, intracerebroventriculares, intracólicos, intracervicales, intragástricos, intrahepáticos, intramiocárdicos, intraóseos, intrapélvicos, intrapericárdicos, intraperitoneales, intrapleurales, intraprostáticos, intrapulmonares, intrarrectales, intrarrenales, intrarretinales, intraespinales, intrasinoviales, intratorácicos, intrauterinos, intravesicales, intralesionales, en bolo, vaginales, rectales, bucales, sublinguales, intranasales o transdérmicos. Puede prepararse una composición de anticuerpos anti-IL-23 para utilizarse en la administración parenteral (subcutánea, intramuscular o intravenosa) o cualquier otra administración, particularmente en forma de soluciones o suspensiones líquidas; para utilizarse en la administración vaginal o rectal, particularmente en formas semisólidas, tales como, pero sin limitarse a, cremas y supositorios; para administración bucal o sublingual, tales como, pero sin limitarse a, en forma de comprimidos o cápsulas; o por vía intranasal, tales como, pero sin limitarse a, la forma de polvos, gotas nasales o aerosoles o ciertos agentes; o por vía transdérmica, tales como, pero sin limitarse a, un sistema de suministro de gel, ungüento, loción, suspensión o parche con potenciadores químicos tal como el sulfóxido de dimetilo ya sea para modificar la estructura de la piel o aumentar la concentración del fármaco en el parche transdérmico (Junginger, y col. En “Drug Permeation Enhancement”;Hsieh, D. S., Eds., págs.59-90 (Marcel Dekker, Inc. Nueva York 1994), o con agentes oxidantes que permiten la aplicación de formulaciones que contienen proteínas y péptidos sobre la piel (WO 98/53847), o aplicaciones de campos eléctricos para crear vías de transporte transitorias, como la electroporación, o para aumentar la movilidad de fármacos cargados a través de la piel, tal como la iontoforesis, o la aplicación de ultrasonidos, tal como la sonoforesis (patentes US-4.309.989 y US-4.767.402).

[0276] Una vez descrita en general la invención, la misma se entenderá más fácilmente haciendo referencia a los siguientes ejemplos, que se proporcionan a modo de ilustración y no pretenden ser limitativos. Los detalles adicionales de la invención se ilustran mediante los siguientes ejemplos no limitantes.

[0278] Ejemplo 1: La comparación de la eficacia y seguridad del guselkumab (GUS) con el anticuerpo anti-TNFα adalimumab (ADA) y el placebo (PBO) en pacientes tratados durante un año.

[0280] Para confirmar los hallazgos de estudios anteriores, se realizaron dos ensayos fundamentales de fase III: VOYAGE 1 y VOYAGE 2. Se informan los hallazgos de eficacia, seguridad y resultados informados por los pacientes (PRO, por sus siglas en inglés) de VOYAGE 1, en el que se comparó el guselkumab con el adalimumab, un inhibidor del TNF-α ampliamente utilizado, y con placebo en pacientes con psoriasis tratados de forma continua durante un año. Además, un ensayo adicional, conocido como VOYAGE 2 (descrito en el ejemplo 2), incluyó un período de retirada aleatorizado.

[0282] Resumen de materiales/métodos de VOYAGE 1:VOYAGE 1 es un ensayo de fase 3, aleatorizado, doble ciego, controlado con placebo y comparador activo. Los pacientes elegibles (edad ≥ 18 años) han tenido psoriasis en placas durante ≥ 6 meses, una puntuación de evaluación global del investigador [IGA, por sus siglas en inglés] ≥ 3, una puntuación del índice de área y gravedad de la psoriasis [PASI, por sus siglas en inglés] ≥ 12, y una afectación de la superficie corporal ≥ 10 %, y fueron candidatos para la terapia sistémica o fototerapia. Al inicio del estudio, 837 pacientes fueron aleatorizados a PBO en las semanas 0/4/12, a continuación, a 100 mg de GUS en las semanas 16/20, y cada 8 semanas hasta la semana 44 (n = 174); 100 mg de GUS en las semanas 0/4/12, y cada 8 semanas hasta la semana 44 (n = 329); o ADA 80 mg en la semana 0, 40 mg en la semana 1 y 40 mg cada 2 semanas hasta la semana 47 (n = 334). Los criterios de valoración coprimarios fueron las proporciones de pacientes tratados con GUS vs. PBO que lograron una enfermedad aclarada o mínima (IGA 0/1) y una mejora del 90 % en la puntuación de PASI (PASI 90) en la semana 16. Otros criterios de valoración incluyeron las proporciones de pacientes tratados con GUS vs. ADA que alcanzaron IGA 0/1, IGA 0, PASI 90 y PASI 100 en las semanas 16/24/48, y una puntuación del índice de calidad de vida en dermatología de 0/1 (DLQI 0/1), lo que indica que la psoriasis no tiene ningún impacto en la calidad de vida relacionada con la salud, en las semanas 24/48. La seguridad se controló durante la semana 48.

[0284] Resumen de resultados de VOYAGE 1:Las proporciones significativamente mayores (p < 0,001) de pacientes en el grupo de GUS vs. PBO alcanzaron IGA 0/1 (85,1 % vs.6,9 %) y PASI 90 (73,3 % vs.2,9 %) en la semana 16. El GUS también fue superior al ADA basándose en las proporciones de pacientes que alcanzaron IGA 0/1 (85,1 % vs.65,9 %) y PASI 90 (el 73,3 % vs. al 49,7 %) en la semana 16 (p < 0,001). Del mismo modo, las proporciones significativamente mayores (p < 0,001) de pacientes lograron respuestas al GUS vs. ADA, respectivamente, en la semana 24: IGA 0 (52,6 % vs.29,3 %), IGA 0/1 (84,2 % vs.61,7 %), PASI 100 (44,4 % vs.24,9 %) y PASI 90 (80,2 % vs.53,0 %). Las tasas de respuesta correspondientes en la semana 48 fueron: IGA 0 (50,5 % vs.25,7 %), IGA 0/1 (80,5 % vs.55,4 %), PASI 100 (47,4 % vs.23,4 %) y PASI 90 (76,3 % vs.47,9 %), todos con p < 0,001. La proporción de pacientes con una puntuación DLQI de 0/1 entre los pacientes tratados con GUS vs. ADA fue del 60,9 % vs.39,5 % en la semana 24 y del 62,5 % vs.38,9 % en la semana 48 (ambos p < 0,001). Durante la semana 48, se produjeron efectos adversos en el 73,9 % y el 74,5 % de los pacientes con GUS y ADA, respectivamente; las tasas de efectos adversos graves también fueron similares para los grupos de GUS y ADA (4,9 % vs.4,5 %). Se produjeron infecciones graves en dos pacientes con GUS y tres pacientes con ADA. Se presentaron dos neoplasias malignas (próstata y mama) en el grupo con GUS. Se produjo un infarto de miocardio en cada grupo de tratamiento activo.

[0285] Resumen de conclusiones de VOYAGE 1:El GUS fue superior al ADA en el tratamiento de la psoriasis de moderada a grave y se toleró bien durante un año de tratamiento.

[0286] Antecedentes:El guselkumab, un bloqueador de la interleucina-23 (IL-23), fue superior al adalimumab en el tratamiento de la psoriasis de moderada a grave en un ensayo de fase II.

[0287] Objetivos:Comparar la eficacia y la seguridad del guselkumab con el adalimumab y el placebo en pacientes con psoriasis tratados durante un año.

[0288] Métodos:Los pacientes fueron aleatorizados a guselkumab 100 mg en la semana 0/4/12 y, a continuación, cada 8 semanas (n = 329); placebo en la semana 0/4/16, seguido de 100 mg de guselkumab en las semanas 16/20 y, a continuación, cada 8 semanas (n = 174); o adalimumab 80 mg en la semana 0, 40 mg en la semana 1, 40 mg cada 2 semanas (n = 334). Los resultados informados por los médicos (evaluación global del investigador [IGA], el índice de área y gravedad de la psoriasis [PASI]), los resultados informados por los pacientes (PRO; el índice de calidad de vida en dermatología [DLQI, por sus siglas en inglés], el diario de signos y síntomas de la psoriasis [PSSD, por sus siglas en inglés], y la seguridad se evaluaron hasta la semana 48.

[0289] Resultados:El guselkumab fue superior (p < 0,001) al placebo en la semana 16 (85,1 % vs.6,9 % [IGA0/1] y 73,3 % vs.2,9 % [PASI90]). El guselkumab también fue superior (p < 0,001) vs. adalimumab para la IGA0/1 y el PASI90 en la semana 16 (85,1 % vs.65,9 %, 73,3 % vs.49,7 %); la semana 24 (84,2 % vs.61,7 %, 80,2 % vs.53,0 %); y la semana 48 (80,5 % vs. 55,4 %, 76,3 % vs. 47,9 %). Además, el guselkumab mejoró significativamente los PRO hasta la semana 48. Las tasas de eventos adversos fueron comparables entre los tratamientos hasta la semana 48.

[0290] Limitaciones:Los análisis se limitaron a 48 semanas.

[0291] Conclusiones:El guselkumab demostró una eficacia superior en comparación con el adalimumab y se tolera bien en pacientes con psoriasis durante un año.

[0292] Materiales y métodos

[0293] Pacientes

[0294] El ensayo incluyó pacientes ≥ 18 años con psoriasis en placas de moderada a grave (es decir, evaluación global del investigador [IGA] ≥ 3, índice de área y gravedad de la psoriasis [PASI] ≥ 12, y afectación de la superficie corporal [BSA, por sus siglas en inglés] ≥ 10 %) durante al menos 6 meses que fueron candidatos para la terapia sistémica o fototerapia. Los pacientes no eran elegibles si tenían antecedentes o signos actuales de afecciones médicas graves, progresivas o no controladas, o si tenían antecedentes o diagnóstico actual de neoplasia maligna en 5 años, excepto el cáncer de piel no melanoma (NMSC, por sus siglas en inglés). Se excluyó a los pacientes con antecedentes o síntomas de tuberculosis (TB) activa. Los pacientes no podían participar si habían recibido previamente guselkumab o adalimumab; otra terapia anti-TNF-α en 3 meses; otro tratamiento dirigido a la IL-12/23, la IL-17 o la IL-23 en 6 meses; o cualquier inmunosupresor sistémico (p. ej., metotrexato) o fototerapia en 4 semanas.

[0295] Diseño del estudio

[0296] VOYAGE 1 fue un ensayo de fase III, aleatorizado, doble ciego, controlado con placebo y comparador activo, realizado en 104 sitios de todo el mundo (diciembre de 2014 - abril de 2016). El estudio comprendió un período de comparador activo cuando se comparó el guselkumab con el adalimumab (semana 0-48) y un período controlado con placebo (semana 0-16), después del cual los pacientes tratados con placebo realizaron un cruzamiento para recibir guselkumab hasta la semana 48. Los pacientes fueron aleatorizados al inicio del estudio en una relación de 2:1:2 a guselkumab 100 mg en las semanas 0, 4 y 12 y, a partir de eso, cada 8 semanas hasta la semana 44; placebo en las semanas 0, 4 y 12, seguido de guselkumab 100 mg en las semanas 16 y 20 y, a partir de eso, cada 8 semanas hasta la semana 44; o adalimumab 80 mg en la semana 0, 40 mg en la semana 1 y, a partir de eso, 40 mg cada 2 semanas hasta la semana 47. Para mantener el ciego se utilizaron placebos coincidentes. Una junta de revisión institucional o un comité de ética aprobó el protocolo del estudio en los centros participantes; los pacientes proporcionaron su consentimiento informado por escrito antes del inicio del estudio.

[0297] Evaluaciones

[0298] La eficacia se evaluó utilizando la IGA, el PASI, la IGA específica del cuero cabelludo (ss-IGA), la evaluación global de las uñas de las manos por parte del médico (f-PGA), el índice de área y gravedad de la psoriasis ungueal (NAPSI, por sus siglas en inglés) y la PGA de manos/pies (hf-PGA). Los resultados informados por los pacientes se evaluaron utilizando el índice de calidad de vida en dermatología (DLQI) y el diario de signos y síntomas de la psoriasis (PSSD). La monitorización de la seguridad incluyó la recopilación de eventos adversos (EA) y las pruebas de laboratorio.

[0299] Los anticuerpos contra el guselkumab se detectaron utilizando un inmunoensayo de electroquimioluminiscencia altamente sensible y tolerante a los fármacos; la sensibilidad fue de 3,1 ng/ml en suero sin guselkumab y de 15 ng/ml con concentraciones séricas de guselkumab de hasta 3,125 µg/ml, lo que supera los niveles séricos mínimos medios de guselkumab.

[0300] Análisis estadísticos

[0301] Los criterios de valoración coprimarios fueron la proporción de pacientes que lograron una puntuación de IGA de enfermedad aclarada o mínima (IGA 0/1) y una mejora del 90 % en la respuesta PASI (PASI 90) en la semana 16 en el grupo de guselkumab en comparación con el placebo. También se midieron los principales criterios de valoración secundarios. Todos los pacientes aleatorizados se incluyeron en los análisis de eficacia primarios y secundarios seleccionados; los datos se analizaron por grupo de tratamiento aleatorizado. Los análisis primarios y secundarios principales se probaron en una secuencia fija para controlar la multiplicidad.

[0302] Los criterios de valoración coprimarios y los criterios de valoración secundarios binarios principales se analizaron utilizando una prueba estadística de chi-cuadrado de Cochran-Mantel-Haenszel (CMH) estratificada por sitio del investigador agrupado. Con un tamaño de muestra de aproximadamente 750 pacientes, la capacidad para detectar una diferencia significativa fue > 99 % para ambos criterios de valoración coprimarios. Los parámetros de respuesta continua se compararon utilizando un modelo de análisis de varianza con el sitio del investigador agrupado como covariable. Todas las pruebas estadísticas se realizaron de dos lados (α=0,05).

[0303] Los pacientes que interrumpieron el agente del estudio debido a la falta de eficacia o a un AE de empeoramiento de la psoriasisoque iniciaron un tratamiento para la psoriasis prohibido por el protocolo se consideraron no respondedores para los criterios de valoración binarios, y se les transfirieron los valores iniciales para los criterios de valoración continuos. Otros pacientes a los que les faltaban datos se consideraron no respondedores para los criterios de valoración binarios (imputación de no respondedores) y se les transfirió la última observación para los criterios de valoración continuos (y todos los criterios de valoración de PSSD).

[0304] Los análisis de seguridad incluyeron a todos los pacientes que recibieron al menos una administración del agente del estudio y se resumieron según el tratamiento real. Se resumió la proporción de pacientes con anticuerpos contra el guselkumab para los que recibieron al menos una dosis del medicamento biológico.

[0305] Resultados

[0306] Al inicio del estudio, 837 pacientes fueron aleatorizados a placebo (n = 174), guselkumab (n = 329), o adalimumab (n = 334). En general, el 6,9 %, el 8,5 % y el 15,6 % de los pacientes interrumpieron el tratamiento en los grupos de placebo, guselkumab y adalimumab, respectivamente, hasta la semana 48. Las características demográficas y de la enfermedad fueron comparables entre los grupos de tratamiento al inicio del estudio).

[0307] Respuestas clínicas

[0308] El guselkumab fue superior tanto al placebo como al adalimumab con respecto a los criterios de valoración coprimarios y a todos los criterios de valoración secundarios principales (todos p < 0,001). En comparación con el placebo, las proporciones significativamente mayores de pacientes en el grupo de guselkumab lograron IGA 0/1 (6,9 % vs.85,1 %) y PASI 90 (2,9 % vs.73,3 %) en la semana 16. Adicionalmente, las proporciones que lograron una mejora de al menos un 75 % en PASI (PASI 75), así como en IGA 0 y PASI 100, fueron significativamente mayores para el guselkumab vs. el placebo en la semana 16. El guselkumab fue superior al adalimumab según lo medido por la proporción de pacientes que lograron IGA 0/1 (85,1 % vs.65,9 %), PASI 90 (73,3 % vs.49,7 %), y PASI 75 (91,2 % vs.73,1 %) en la semana 16. Se mantuvieron respuestas significativamente mejores al guselkumab en comparación con el adalimumab en la semana 24 (IGA 0 [52,6 % vs.29,3 %], IGA 0/1 [84,2 % vs.61,7 %], y PASI 90 [80,2 % vs.53,0 %]) y la semana 48 (50,5 % vs. 25,7 %, 80,5 % vs. 55,4 %, y 76,3 % vs. 47,9 %, respectivamente). Adicionalmente, mayores proporciones de pacientes que recibieron el guselkumab obtuvieron respuestas en categorías PASI más altas en comparación con el adalimumab en la semana 48. Después de iniciar el tratamiento con guselkumab en la semana 16, los pacientes en el grupo de cruzamiento con placebo lograron respuestas similares a las observadas en el grupo de guselkumab.

[0309] Medidas para la psoriasis regional

[0310] La psoriasis regional se evaluó basándose en las evaluaciones de ss-IGA, f-PGA, NAPSI y hf-PGA. La proporción de pacientes que lograron ss-IGA 0/1 (psoriasis del cuero cabelludo ausente/muy leve) en el grupo tratado con guselkumab fue significativamente mayor en comparación con el placebo (83,4 % vs.14,5 %, p <0,001) en la semana 16; se observaron respuestas significativamente mejores al guselkumab vs. el adalimumab en la semana 24 (p < 0,001) y en la semana 48 (p = 0,045). La proporción de pacientes que lograron f-PGA 0/1 (clara/mínima) y el porcentaje de mejora en NAPSI fueron significativamente mayores para el guselkumab vs. el placebo en la semana 16 (p < 0,001). Las respuestas de f-PGA fueron comparables en la semana 24, aunque el guselkumab fue superior al adalimumab en la semana 48 (p = 0,038). El porcentaje medio de mejora en NAPSI con guselkumab fue significativamente mayor que el del placebo en la semana 16 (p < 0,001) y comparable entre el guselkumab y el adalimumab en las semanas 24 y 48. Finalmente, la proporción de pacientes que lograron hf-PGA 0/1 (clara/casi clara) fue significativamente mayor para el guselkumab vs. el placebo en la semana 16, y las respuestas al guselkumab fueron superiores a las del adalimumab en las semanas 24 y 48 (p < 0,001).

[0311] Medidas de calidad de vida relacionadas con la salud

[0312] En la semana 16, la mejora con respecto al valor inicial en DLQI fue significativamente mayor en el grupo de guselkumab en comparación con el placebo (cambio medio, -0,6 vs. -11,2), al igual que la proporción de pacientes que lograron DLQI 0/1 (sin impacto de la psoriasis en la HRQoL) (ambos p < 0,001). En las semanas 24 y 48, tanto las mejoras con respecto al valor inicial en DLQI como las proporciones de pacientes que lograron DLQI 0/1 fueron significativamente mayores para el guselkumab vs. el adalimumab (p < 0,001).

[0313] En la semana 16, la mejora con respecto al valor inicial en la puntuación de síntomas de PSSD fue significativamente mayor para el guselkumab vs. el placebo (cambio medio, -3,0 vs. -41,9); los cambios medios en la puntuación del signo de PSSD fueron igualmente favorables para el guselkumab (ambos p < 0,001). Del mismo modo, en las semanas 24 y 48, los cambios medios en las puntuaciones de signos y síntomas de PSSD en el grupo de guselkumab fueron significativamente mayores que en los del grupo de adalimumab (p < 0,001). Las proporciones de pacientes que lograron una puntuación de síntomas de PSSD = 0 con guselkumab y adalimumab, respectivamente, fueron del 36,3 % y del 21,6 % en la semana 24, y la respuesta significativamente mejor al guselkumab se mantuvo en la semana 48 (p < 0,001). Se observaron resultados similares en las proporciones de pacientes que lograron una puntuación del signo de PSSD = 0 en las semanas 24 y 48 (p < 0,001).

[0314] Resultados de seguridad

[0315] Durante el período controlado con placebo (semanas 0-16), la proporción de pacientes con al menos un AE fue comparable en todos los grupos de tratamiento, y los eventos informados más comúnmente fueron nasofaringitis e infección del tracto respiratorio superior en la totalidad de los tres grupos. Los AE graves (SAE) y los AE que provocaron la interrupción del agente de estudio se produjeron con poca frecuencia y en proporciones similares de pacientes para cada tratamiento. Las tasas de infecciones generales y de infecciones que requirieron tratamiento con antibióticos fueron comparables entre los grupos de tratamiento. Dos pacientes del grupo de adalimumab experimentaron infecciones graves (ambas celulitis). Se notificó un NMSC (es decir, un carcinoma de células basales [BCC, por sus siglas en inglés]) en el grupo de guselkumab y no se produjo ninguna otra neoplasia maligna en ningún grupo. Se produjo un infarto de miocardio (es decir, un evento cardiovascular adverso mayor [MACE, por sus siglas en inglés]) en cada grupo de tratamiento activo hasta la semana 16.

[0316] Los tipos y patrones de los AE notificados hasta la semana 48 fueron similares a los notificados durante el período controlado con placebo. Las proporciones de pacientes con al menos un AE, un AE que provocó la interrupción del tratamiento o un SAE fueron similares en los grupos de guselkumab y adalimumab. Entre las semanas 16-48, se informaron infecciones graves en dos pacientes en el grupo de guselkumab (es decir, celulitis en uno y absceso en el muslo con infección posoperatoria de la herida en otro) y dos en el grupo de adalimumab (es decir, un absceso abdominal y una neumonía estafilocócica con un desenlace mortal en el paciente con celulitis de la pared abdominal informado anteriormente). Las infecciones generales y las infecciones que requirieron tratamiento con antibióticos se produjeron a tasas comparables en todos los grupos de tratamiento. Durante el estudio no se informaron AE de tuberculosis activa o infección oportunista. Se notificaron dos NMSC adicionales (es decir, un BCC en cada uno de los grupos de guselkumab y adalimumab) y dos neoplasias malignas (es decir, de próstata y mama en el grupo de guselkumab) hasta la semana 48. No se produjo ningún MACE adicional después de la semana 16. Se notificó un único intento de suicidio en un paciente con adalimumab. Las tasas de incidencia de candidiasis y neutropenia fueron bajas y comparables entre los grupos de guselkumab y placebo (datos no mostrados), y no se notificaron casos de enfermedad de Crohn hasta la semana 48.

[0317] Hasta la semana 48, la proporción de pacientes con una ISR (2,2 % vs. 9,0 %) y la proporción de inyecciones asociadas con las ISR (0,5 % vs.1,2 %) fueron inferiores para el guselkumab en comparación con el adalimumab; la mayoría de las ISR se consideraron leves. Las tasas de anormalidades de laboratorio fueron bajas y no se observaron diferencias entre los grupos (datos no mostrados). Se detectaron anticuerpos contra el guselkumab en 26/492 pacientes (5,3 %) hasta la semana 44; los títulos fueron generalmente bajos (81 % ≤ 1:320). No se observó una asociación aparente entre el desarrollo de anticuerpos y la reducción de la eficacia o la aparición de ISR (datos no mostrados).

[0318] Descripción

[0319] Los hallazgos del estudio VOYAGE 1, junto con los resultados del VOYAGE 2 descritos en el ejemplo 2 a continuación, confirman que dos inyecciones de 100 mg de guselkumab (semanas 0 y 4) y la terapia de mantenimiento cada 8 semanas tratan eficazmente la psoriasis de moderada a grave. El guselkumab fue superior al placebo por márgenes sustanciales en la semana 16 utilizando dos criterios de valoración rigurosos (IGA 0/1 y PASI 90). El inicio de la acción del guselkumab fue rápido, con una respuesta significativa evidente ya en la semana 2 en comparación con el placebo. El guselkumab también fue superior al adalimumab, que es un inhibidor del TNF-α subcutáneo, muy utilizado y muy eficaz, en los criterios de valoración de la semana 16 con IGA 0/1, PASI 90 y PASI 75. Las tasas de respuesta continuaron mejorando con guselkumab más allá de la semana 16. En las semanas 24 y 48, aproximadamente la mitad de todos los pacientes del grupo de guselkumab lograron el aclaramiento completo (IGA 0), lo que se asocia con una HRQoL óptima para los pacientes con psoriasis. Los criterios de valoración de los resultados informados por los pacientes (PSSD y DLQI), basados en el cambio total, o que indicaban un impacto mínimo o nulo en la HRQoL o la ausencia de síntomas o signos de psoriasis, demostraron que las respuestas al guselkumab eran superiores a las del placebo en la semana 16 y a las del adalimumab en las semanas 24 y 48.

[0320] Este estudio evaluó múltiples áreas del cuerpo donde la psoriasis es difícil de tratar, y el guselkumab fue muy eficaz en todas las regiones basándose en criterios de valoración rigurosos. El guselkumab fue superior al placebo en la semana 16 y al adalimumab en las semanas 24/48, lo que indica una aclaramiento completo o casi completo de la psoriasis del cuero cabelludo y de las manos/pies en al menos el 75 % de los pacientes tratados con guselkumab. Basándose tanto en la proporción de pacientes con psoriasis en las uñas de las manos clara/mínima (f-PGA 0/1) como en el porcentaje medio de mejora en NAPSI, el guselkumab fue superior al placebo en la semana 16. Las respuestas en las uñas fueron comparables entre los tratamientos activos en las semanas 24 y 48, y el guselkumab fue superior al adalimumab (75 % vs.62 %) para f-PGA 0/1 en la semana 48.

[0321] Las tasas y los tipos de AE, SAE, y anomalías de laboratorio fueron generalmente comparables entre los grupos de guselkumab y placebo hasta la semana 16, y entre los grupos de guselkumab y adalimumab hasta la semana 48. Las tasas de infecciones graves, neoplasias malignas y MACE fueron bajas en todos los grupos de tratamiento. No se observaron diferencias notables en la incidencia de neutropenia o candidiasis entre el grupo de guselkumab y el grupo de control. No se produjeron efectos adversos de la enfermedad de Crohn en ningún grupo de tratamiento y se notificó un intento de suicidio en el grupo de adalimumab. El número de inyecciones y la proporciones de pacientes con ISR fueron mayores para el adalimumab en comparación con el guselkumab. Es posible que el tamaño y la duración de este estudio no permitan evaluar los eventos poco frecuentes o aquellos con una latencia prolongada; sin embargo, el tratamiento a largo plazo se evaluará en las extensiones del estudio en curso.

[0322] VOYAGE 1 confirma el papel de la IL-23 en la patogénesis de la psoriasis. Los inhibidores del TNF-α son eficaces en muchas enfermedades, y el TNF-α está implicado en los procesos inflamatorios e inmunológicos sistémicos normales. La dirección selectiva de la vía de la IL-23 proporciona una mayor inhibición de las citocinas específicas de la psoriasis con un mayor grado de eficacia, mientras se mantiene un perfil de seguridad favorable, en comparación con el bloqueo del TNF-α. La IL-23 es un impulsor clave de la diferenciación y supervivencia de las células Th17 y un regulador corriente arriba de la IL-17A, una citocina efectora proinflamatoria central implicada en la patogénesis de la psoriasis. Además, la IL-23 estimula la producción de otras citocinas Th17 (p. ej., la IL-22) por parte de otros tipos de células, incluyendo las células linfoides innatas de tipo 3 (ILC3) y las células T γδ. Por lo tanto, la inhibición de la IL-23 bloquea la producción corriente abajo de IL-17A, IL-22 y otros tipos de células. Dado que muchas células productoras de IL-17A dependen de la IL-23 para sobrevivir, la inhibición de la IL-23 puede reducir el número de estas células patógenas. Esto puede explicar la larga duración del efecto y permitir un intervalo de dosificación conveniente del guselkumab en comparación con ambos agentes anti-TNF-α y anti-IL-17.

[0323] Los hallazgos, junto con los de VOYAGE 2, demuestran la eficacia superior del guselkumab en comparación con el adalimumab en la psoriasis, la eficacia en la enfermedad regional del cuero cabelludo, las uñas, y las manos/pies, y un perfil de seguridad positivo. El perfil de seguridad favorable durante un año no es inesperado, considerando los tranquilizadores hallazgos de seguridad a largo plazo informados para un tratamiento relacionado, ustekinumab, que bloquea tanto la IL-12 como la IL-23. Las extensiones del estudio continuarán examinando la eficacia y la seguridad del guselkumab, y contribuirán a la comprensión del bloqueo de la IL-23 a largo plazo basándose en los estudios de ustekinumab.

[0324] Ejemplo 2: Resultados de VOYAGE 2

[0325] Para confirmar el potencial terapéutico de guselkumab, los estudios VOYAGE 1 y VOYAGE 2 de fase 3 evaluaron la eficacia y seguridad de guselkumab versus placebo y adalimumab. VOYAGE 1 evaluó el tratamiento continuo de 1 año, y VOYAGE 2 evaluó la eficacia y la seguridad de la interrupción del tratamiento, ya que los espacios de tratamiento se producen frecuentemente en la práctica clínica. Adicionalmente, VOYAGE 2 evaluó la transición de adalimumab a guselkumab, proporcionando información clínicamente relevante sobre los pacientes que cambian de medicamentos biológicos.

[0326] Materiales y métodos

[0327] Pacientes

[0328] Los adultos (edad ≥ 18 años) con psoriasis de tipo placa de moderada a grave eran elegibles. Los principales criterios de inclusión/exclusión se resumen en VOYAGE 1, más arriba. El protocolo del estudio fue aprobado por una junta de revisión de investigación en cada sitio, y todos los pacientes proporcionaron su consentimiento informado por escrito.

[0329] Diseño del estudio

[0330] VOYAGE 2 fue un estudio de fase 3, multicéntrico, aleatorizado, doble ciego, controlado con placebo y comparador de adalimumab (NCT02207244) realizado en 115 sitios de todo el mundo entre noviembre de 2014 y junio de 2016. El estudio consistió en un período controlado con placebo (semanas 0 a 16), un período controlado con comparador activo (semanas 0 a 28), y un período de retirada y retratamiento aleatorizado (semanas 28 a 72). Los resultados del estudio hasta la semana 48 se presentan aquí. Los pacientes fueron asignados al azar con una relación basal de 2:1:1 a 100 mg de guselkumab en las semanas 0, 4, 12 y 20; placebo en las semanas 0, 4 y 12, a continuación, guselkumab en las semanas 16 y 20; o adalimumab 80 mg en la semana 0, 40 mg en la semana 1 y, a partir de eso, cada dos semanas (cada 2 semanas) hasta la semana 23.

[0331] En la semana 28, los pacientes tratados con guselkumab lograron una mejora del 90 % con respecto al valor inicial en el índice de área y gravedad de la psoriasis (PASI 90; respondedores) fueron nuevamente aleatorizados en una relación de 1:1 a guselkumab o placebo. Después de perder ≥ 50 % de la respuesta PASI en la semana 28, los pacientes volvieron a tratarse con guselkumab, otra dosis 4 semanas después y, a continuación, cada 8 semanas a partir de eso. Los no respondedores al guselkumab continuaron el tratamiento con guselkumab. Los no respondedores al placebo→guselkumab en la semana 28 continuaron con el guselkumab cada 8 semanas, mientras que los respondedores recibieron el placebo cada 8 semanas a partir de la semana 28. Después de perder ≥ 50 % de la respuesta PASI en la semana 28, los pacientes volvieron a tratarse con guselkumab, seguido de otra dosis 4 semanas después y, a continuación, cada 8 semanas a partir de eso. Los no respondedores al adalimumab iniciaron el tratamiento con guselkumab en la semana 28, otra dosis 4 semanas después y, a continuación, cada 8 semanas a partir de eso. Los respondedores al adalimumab recibieron el placebo y, después de perder ≥ 50 % de la respuesta PASI en la semana 28, iniciaron el tratamiento con guselkumab, otra dosis 4 semanas después y, a continuación, cada 8 semanas a partir de eso. Para mantener el ciego, se administraron placebos de guselkumab y adalimumab según fue necesario.

[0332] Evaluaciones de eficacia y seguridad

[0333] La eficacia se evaluó durante la semana 24 y la seguridad hasta la semana 28. La eficacia clave, incluyendo la psoriasis general y regional, los resultados informados por los pacientes y las evaluaciones de seguridad se describen en detalle en el estudio VOYAGE 1. Además, en este estudio se evaluó el Medical Outcomes Study 36-Item Short Form (SF-36).

[0334] Criterios de valoración del estudio

[0335] Los criterios de valoración coprimarios fueron las proporciones de pacientes que lograron una puntuación de IGA aclarada (0) o mínima (1) en la semana 16 y la proporción de pacientes que lograron una respuesta PASI 90 en la semana 16, comparando los grupos de guselkumab y placebo. También se midieron los principales criterios de valoración secundarios. Los criterios de valoración de la psoriasis regional que evalúan el cuero cabelludo, las uñas de las manos y las manos/pies se describieron en detalle en otra parte.

[0336] Análisis estadístico

[0337] Todos los pacientes aleatorizados se incluyeron en el análisis primario y en algunos análisis de eficacia secundarios según el grupo de tratamiento asignado. Para evaluar la dosificación de mantenimiento versus la retirada del tratamiento para los principales criterios de valoración secundarios, se incluyeron en los análisis todos los pacientes que se sometieron a la segunda aleatorización y que tuvieron una evaluación de PASI después de la semana 28. Los criterios de valoración coprimarios y los criterios de valoración secundarios principales binarios se analizaron utilizando una prueba estadística de chi-cuadrado de Cochran-Mantel-Haenszel (CMH) de dos lados (α=0.05) estratificada por sitio del investigador. Los parámetros de respuesta continua se compararon utilizando un modelo de análisis de varianza con el sitio como covariable. Para determinar el tiempo hasta la pérdida de respuesta PASI 90, se utilizó la prueba de rango logarítmico estratificada por sitio.

[0338] Los pacientes que interrumpieron el tratamiento del estudio debido a la falta de eficacia o un AE de empeoramiento de la psoriasis, o que comenzaron un medicamento/terapia prohibido por el protocolo que podría mejorar la psoriasis, se consideraron fracasos del tratamiento. Los pacientes que cumplieron los criterios de fracaso del tratamiento antes de la semana 16 y los pacientes que no retornaron para la evaluación de la semana 16 se consideraron no respondedores para el criterio de valoración principal de la semana 16. Para los pacientes aleatorizados a placebo, solo los que realizaron un cruzamiento para recibir guselkumab en/después de la semana 16 se incluyeron en los análisis de eficacia después de la semana 16.

[0339] Para controlar la tasa general de error de tipo 1, el análisis primario y los análisis secundarios principales se probaron en una secuencia fija, siendo probado el primer criterio de valoración secundario principal solo si se cumplían los criterios de valoración coprimarios, y el (los) criterio(s) de valoración posterior(es) solo se probaron si se cumplía el criterio de valoración anterior en la secuencia.

[0340] Los análisis de seguridad incluyeron a todos los pacientes que recibieron al menos una administración del agente del estudio. Los eventos adversos y los eventos adversos graves (SAE) se agruparon según el tratamiento recibido. Se analizaron los anticuerpos contra el guselkumab.

[0341] Resultados

[0342] Disposición de los pacientes y características demográficas al inicio del estudio

[0343] Se examinó un total de 1279 pacientes y 992 fueron aleatorizados 2:1:1 para recibir guselkumab (n = 496), placebo (n = 248), o adalimumab (n = 248) (figura 2). En general, el 9,7 % (96/992) de los pacientes interrumpió el tratamiento con el agente del estudio hasta la semana 48 (guselkumab: 7,9 %; placebo: 11,7 %; adalimumab: 11,3 %). La demografía basal y las características de la enfermedad fueron, en general, comparables entre los grupos.

[0344] Eficacia

[0345] El guselkumab fue superior tanto al placebo como al adalimumab con respecto a los criterios de valoración coprimarios y a todos los criterios de valoración secundarios principales (todos p < 0,001).

[0346] Periodo controlado con placebo (semanas 0-16)

[0347] En la semana 16, las proporciones significativamente mayores de pacientes tratados con guselkumab lograron una IGA aclarada (0) o mínima (1) en comparación con los pacientes tratados con placebo (84,1 % vs.8,5 %; p < 0,001) y lograron una respuesta PASI 90 (70,0 % vs.2,4 %; p < 0,001) (criterios de valoración coprimarios). Se observó una mejora en el porcentaje de PASI significativamente mayor ya en la semana 2 en los pacientes tratados con guselkumab vs. placebo (p < 0,001). Adicionalmente, en la semana 16, una proporción significativamente mayor de pacientes tratados con guselkumab lograron respuestas PASI 75 y PASI 100 en comparación con los pacientes tratados con placebo. Los pacientes tratados con guselkumab lograron una mayor mejora en todas las evaluaciones de resultados de la psoriasis regional, en comparación con los tratados con placebo en la semana 16, incluyendo: ss-IGA, f-PGA, NAPSI y hf-PGA. De forma similar al VOYAGE 1, el guselkumab fue superior al placebo en la semana 16 en todos los resultados informados por los pacientes, incluyendo el índice de calidad de vida en dermatología (DLQI) y el diario de signos y síntomas de la psoriasis (PSSD) y, además, el SF-36.

[0348] Período de comparador activo (semanas 0-24)

[0349] Proporciones significativamente mayores de pacientes del grupo de guselkumab obtuvieron respuestas de IGA 0/1, PASI 90 y PASI 75 en la semana 16. En la semana 24, se mantuvieron tasas de respuesta significativamente mayores en los pacientes tratados con guselkumab vs. adalimumab con IGA 0 (51,5 % vs.31,5 %), IGA 0/1 (83,5 % vs.64,9 %), PASI 90 (75,2 % vs.54,8 %), y PASI 100 (44,2 % vs.26,6 %). En consonancia con VOYAGE 1, se observaron mayores mejoras en las puntuaciones de la enfermedad de psoriasis regional en la semana 24 en los pacientes tratados con guselkumab en comparación con los pacientes con adalimumab, con la excepción de la f-PGA 0/1 y el porcentaje de mejora en NAPSI, que fueron comparables. En la semana 24, las proporciones de pacientes que lograron DLQI 0/1, los cambios medios en las puntuaciones de signos y síntomas de PSSD, las proporciones de pacientes que lograron una puntuación de síntomas de PSSD de 0 y una puntuación de signos de 0 fueron significativamente mayores en el grupo de guselkumab que en el grupo de adalimumab (p <0,001)

[0350] Período de retirada y retratamiento aleatorizado (semanas 28-48)

[0351] Las respuestas PASI 90 se mantuvieron mejor en los respondedores de la semana 28 de guselkumab que continuaron con guselkumab (grupo de mantenimiento) versus los respondedores que se volvieron a aleatorizar a placebo (grupo de retirada). La mediana del tiempo hasta la pérdida de la respuesta PASI 90 fue de 15,2 semanas para los pacientes aleatorizados al grupo de retirada. Entre los pacientes retirados de guselkumab en la semana 28, las tasas de respuesta PASI 90 comenzaron a diferir de las del grupo de mantenimiento en la semana 32. Hasta la semana 48, el 88,6 % de los pacientes de mantenimiento mantuvieron una respuesta PASI 90 versus el 36,8 % de los pacientes en retirada. Además, en la semana 48, las respuestas clínicas (IGA, PASI) fueron significativamente mayores en el grupo de mantenimiento que en el grupo de retirada (p < 0,001). Las mejoras en las puntuaciones de los síntomas o signos del DLQI y el PSSD con respecto al valor inicial también fueron significativamente mayores en la semana 48 en los grupos de mantenimiento vs. de retirada (ambos p < 0,001). Durante la semana 48, un pequeño número de pacientes (n = 16) se retiraron del tratamiento con guselkumab.

[0352] Cambio de no respondedores al adalimumab a al guselkumab

[0353] En total, 112 no respondedores al adalimumab iniciaron el tratamiento con guselkumab en la semana 28 (5 semanas después de la última dosis de adalimumab). En estos pacientes, las tasas de respuesta PASI 90 (con respecto al valor inicial) y PASI 100 aumentaron después del cambio, y alcanzaron el 66,1 % y el 28,6 %, respectivamente, en la semana 48.

[0354] Seguridad

[0355] Periodo controlado con placebo (semanas 0-16)

[0356] Las proporciones de pacientes con al menos un AE, los AE que provocaron la interrupción del tratamiento y los SAE fueron comparables entre los grupos de guselkumab y placebo. Los eventos notificados con mayor frecuencia fueron nasofaringitis, cefalea e infección del tracto respiratorio superior. Las tasas de infecciones, infecciones que requieren tratamiento e infecciones graves fueron similares entre los grupos. No se notificaron neoplasias malignas ni cánceres de piel no melanoma (NMSC) hasta la semana 16. En el grupo de adalimumab se produjo un evento cardiovascular adverso mayor (MACE) (infarto de miocardio [MI, por sus siglas en inglés]). Una mayor proporción de pacientes tratados con adalimumab presentaron reacciones en el sitio de la inyección (ISR, por sus siglas en inglés) (6,9 % vs.

[0357] 2,6 %) y las inyecciones que resultaron en las ISR (1,5 % vs.0,9 %) en comparación con los pacientes tratados con guselkumab. Todas las reacciones en el lugar de la inyección fueron leves.

[0358] Período de comparador activo (semanas 0-28)

[0359] Los tipos de AE fueron similares a los informados en el período controlado con placebo. Las proporciones de pacientes con al menos un AE, los AE que provocaron la interrupción del tratamiento y los SAE fueron comparables entre los grupos de guselkumab y adalimumab. Las infecciones y las infecciones que requerían tratamiento también fueron comparables entre los grupos de guselkumab y adalimumab. Se informaron tres infecciones graves en cada uno de los grupos de guselkumab (bronquitis, erisipela, e infección de tejidos blandos) y adalimumab (dos casos de tuberculosis [uno diseminado] y un absceso en el sitio de la inyección). Se notificaron una neoplasia maligna (cáncer de próstata) y dos NMSC (un carcinoma de células escamosas [SCC, por sus siglas en inglés] en el grupo de guselkumab y un carcinoma de células basales [BCC, por sus siglas en inglés] en el grupo de placebo → guselkumab). Se informaron dos MACE (un infarto de miocardio en cada uno de los grupos de guselkumab y adalimumab).

[0360] Período de retirada y retratamiento aleatorizado (semanas 28-48)

[0361] Entre las semanas 28-48, ningún paciente interrumpió el tratamiento debido a los efectos adversos; se informó de una infección grave (apendicitis) en el grupo de mantenimiento. No se notificaron neoplasias malignas adicionales, NMSC o MACE. No se informó ningún AE entre las 16 patentes que volvieron a tratarse.

[0362] Seguridad adicional hasta la semana 48

[0363] Hasta la semana 48, se produjo un BCC adicional y un SCC adicional de la piel en el grupo de placebo → guselkumab (datos no mostrados). Entre las semanas 28 y 48, se informó de un MACE (MI) adicional en un paciente tratado con placebo → guselkumab. Ningún evento de infecciones graves, neoplasias malignas, o MACE se produjo en el grupo de adalimumab → guselkumab. No se produjeron muertes, infecciones oportunistas, hipersensibilidad ni reacciones anafilácticas durante la semana 48. Las tasas de resultados anormales en las pruebas de laboratorio fueron bajas y comparables entre los grupos de tratamiento hasta la semana 48. Se detectaron anticuerpos contra el guselkumab en 57/869 pacientes (6,6 %) hasta la semana 48; los títulos fueron generalmente bajos (88 % ≤ 1:160). No se observaron asociaciones aparentes entre el desarrollo de anticuerpos y la disminución de la eficacia o el desarrollo de ISR (datos no mostrados).

[0364] Descripción

[0365] VOYAGE 2 confirma los resultados de VOYAGE 1, que demuestran que el guselkumab es muy eficaz en el tratamiento de una amplia población con psoriasis de moderada a grave. El guselkumab fue superior al placebo en los criterios de valoración coprimarios de la semana 16 con IGA aclarada/mínima y respuesta PASI 90. El guselkumab también fue superior al adalimumab en los criterios de valoración de la semana 16 con IGA aclarada/mínima, PASI 75/90, y en la semana 24, IGA aclarada/mínima y PASI 90/100. El guselkumab también trató con éxito la psoriasis regional difícil, incluyendo el cuero cabelludo, las uñas y las manos/pies. Las mejoras evaluadas por los investigadores se reflejaron en las mejoras en los resultados informados por los pacientes evaluados en VOYAGE 1 (DLQI y PSSD, un instrumento recientemente validado que mide los signos y síntomas de la psoriasis). Además, en VOYAGE 2 se informó de mejoras significativas en la calidad de vida (QoL) (SF-36). Los sólidos y completos resultados combinados de VOYAGE 1 y VOYAGE 2 demostraron la superioridad frente al placebo y al adalimumab.

[0366] En consonancia con los hallazgos de otros productos biológicos para la psoriasis, VOYAGE 2 demostró que el mantenimiento es superior a la interrupción de la terapia y que el bloqueo de la IL-23 no revirtió el mecanismo subyacente de la psoriasis. A diferencia de VOYAGE 1, en el que los pacientes continuaron el tratamiento durante 48 semanas, en VOYAGE 2, los respondedores a PASI 90 fueron aleatorizados en la semana 28 para continuar con guselkumab o recibir el placebo. Los pacientes tratados con guselkumab mantuvieron la respuesta, incluyendo el PASI 90, el PASI 100 y la IGA aclarada, mientras que la psoriasis reapareció lentamente y la calidad de vida se redujo en los pacientes tratados con placebo. La mediana de tiempo hasta la pérdida de respuesta PASI 90 para los pacientes en retirada fue de 15,2 semanas, lo que es relevante porque las tasas de interrupción son significativas con la utilización de productos biológicos para la psoriasis hasta 1 año (frecuentemente > 50 %).

[0367] El guselkumab también fue eficaz en el tratamiento de los no respondedores al adalimumab (no alcanzaron PASI 90). Los pacientes se clasificaron como respondedores y no respondedores en la semana 28, 5 semanas después de la última inyección de adalimumab. Después de 20 semanas de tratamiento con guselkumab, 2/3 de los 112 no respondedores al adalimumab que cambiaron a guselkumab alcanzaron PASI 90 (en relación con el valor inicial). Determinar la tasa a la que los pacientes que han tenido respuestas por debajo de las óptimas alcanzan los objetivos de tratamiento podría tener un impacto significativo en las decisiones de tratamiento para los que buscan un mayor aclaramiento, ya que terapias contra la psoriasis más efectivas siguen entrando en el mercado. Si bien se desconoce el mecanismo de acción de la eficacia más amplia del guselkumab, en la psoriasis, el factor de necrosis tumoral-α (liberado de los macrófagos CD163+/CD CD11c+) y la IL-17A (liberada de los neutrófilos, mastocitos y células Th17) son citocinas efectoras que actúan principalmente sobre los queratinocitos. La IL-23 podría considerarse la citocina principal de la psoriasis porque impulsa la activación de las células T y los neutrófilos e induce la producción de IL-17. Además, la IL-23 induce a las células Th17 y a otras innatas a producir IL-22, otra citocina implicada en la patogénesis de la psoriasis. Por lo tanto, dirigirse a la vía de la IL-23 con un anticuerpo como el guselkumab puede proporcionar una mayor eficacia y respuestas duraderas.

[0368] El perfil de seguridad del guselkumab en este estudio fue consistente con el de VOYAGE 1. Las tasas y los tipos de AE, SAE, y anomalías de laboratorio fueron generalmente comparables al placebo hasta la semana 16 y al adalimumab hasta la semana 28. Hasta la semana 48, las tasas de infecciones graves, neoplasias malignas y MACE fueron bajas en todos los grupos de tratamiento. En general, hubo 2 casos de TB, ambos en pacientes con adalimumab. Se produjeron 5 neoplasias malignas en los pacientes tratados con guselkumab, 4 de las cuales fueron NMSC (2 BCC y 2 SCC). Las ISR se produjeron con mayor frecuencia en los pacientes tratados con adalimumab. Si bien el perfil de seguridad del guselkumab es favorable, el tamaño y la duración del estudio fueron inadecuados para detectar eventos raros.

[0369] Existen varias otras limitaciones de VOYAGE 2. Si bien la comparación de guselkumab con adalimumab en VOYAGE 2 se limitó a 24 semanas, VOYAGE 1 extendió la comparación con adalimumab durante 48 semanas. Más importante aún, en la semana 48, pocos pacientes de VOYAGE 2 retirados de la terapia activa habían perdido la respuesta adecuada para poder evaluar la eficacia y la seguridad del retratamiento. Sin embargo, estas cifras se aumentarán en un momento posterior.

[0370] En conclusión, VOYAGE 2 confirma los resultados de VOYAGE 1 que guselkumab demostró una eficacia superior a la de adalimumab y una seguridad comparable cuando se administra en un régimen de dosificación conveniente de una única inyección de 100 mg en las semanas 0, 4, y cada 8 semanas. Estos resultados sugieren que el guselkumab puede ser una adición importante a las alternativas de tratamiento de la psoriasis. Adicionalmente, VOYAGE 2 proporciona datos importantes sobre la necesidad de continuar la terapia con guselkumab para mantener el nivel más alto de respuesta, así como la transición exitosa del adalimumab al guselkumab.

[0371] Abreviaturas y acrónimos

[0372] AE evento adverso

[0373] BCC Carcinoma de células basales

[0374] BMI Índice de masa corporal

[0375] BSA Superficie corporal

[0376] DLQI Índice de calidad de vida en dermatología

[0377] f-PGA Evaluación global de las uñas de las manos por parte del médico

[0378] hf-pGA Evaluación global de manos y/o pies por parte de un médico

[0379] HRQoL Calidad de vida relacionada con la salud

[0380] IGA Evaluación global del investigador

[0381] IL Interleucina

[0382] NAPSI Índice de área y gravedad de la psoriasis ungueal

[0383] NMSC Cáncer de piel no melanoma

[0384] PASI Índice de área y gravedad de la psoriasis

[0385] PRO Resultado informado por los pacientes

[0386] PSSD Diario de signos y síntomas de la psoriasis

[0387] SAE Eventos adversos graves

[0388] ss-IGA Evaluación global del investigador específica del cuero cabelludo

[0389] Inhibidor del TNFα Inhibidor del factor de necrosis tumoral-α

[0390] Aprobación reglamentaria de los EE. UU.

[0391] La Administración de Alimentos y Medicamentos de los Estados Unidos ha aprobado la comercialización en los EE. UU. del anticuerpo específico anti-IL-23, guselkumab, para el tratamiento de pacientes adultos con psoriasis en placas de moderada a grave que son candidatos para la terapia sistémica o fototerapia mediante una solicitud de licencia de productos biológicos. La dosificación aprobada inicial es de 100 mg administrados por inyección subcutánea en la semana 0, la semana 4, y cada 8 semanas después de eso. El anticuerpo tiene una concentración de 100 mg/ml en una jeringa precargada de dosis única.

Claims

1. REIVINDICACIONES

1. Un anticuerpo IL-23 para utilizarse en un método para tratar la psoriasis en un paciente que es no respondedor a un inhibidor del TNF, que comprende administrar el anticuerpo al paciente en una cantidad segura y eficaz, en donde el anticuerpo es guselkumab y el inhibidor del TNF es adalimumab.

2. El anticuerpo para utilizarse de la reivindicación 1, en donde se determina que el paciente es un no respondedor al inhibidor del TNF mediante la medición de la puntuación de PASI y/o IGA.

3. El anticuerpo para utilizarse de la reivindicación 1 o la reivindicación 2, en donde el anticuerpo se administra en una dosis de entre 25 mg y 200 mg.

4. El anticuerpo para utilizarse de la reivindicación 3, en donde el anticuerpo se administra en una dosis de 50 mg o 100 mg.

5. El anticuerpo para utilizarse de una cualquiera de las reivindicaciones 1-4, en donde el anticuerpo se administra por vía subcutánea.

6. El anticuerpo para utilizarse de la reivindicación 5, en donde el anticuerpo anti-IL-23 es seguro y eficaz para tratar la psoriasis en un área de un paciente seleccionada del grupo que consiste en cuero cabelludo, uñas, manos y pies.

7. El anticuerpo para utilizarse de la reivindicación 6, en donde el anticuerpo está en una composición que comprende:

(a) 100 mg/ml de anticuerpo; 7,9 % (p/v) de sacarosa, 4,0 mM de histidina, 6,9 mM de monoclorhidrato de L-histidina monohidratado; 0,053 % (p/v) de polisorbato 80 de la composición farmacéutica; en donde el diluyente es agua en estado estándar, o

(b) 50 mg/ml de anticuerpo; 7,9 % (p/v) de sacarosa, 4,0 mM de histidina, 6,9 mM de monoclorhidrato de L-histidina monohidratado; 0,053 % (p/v) de polisorbato 80 de la composición farmacéutica; en donde el diluyente es agua en estado estándar.

8. El anticuerpo para utilizarse de una cualquiera de las reivindicaciones 1-7, en donde el anticuerpo se administra en una dosis inicial, 4 semanas después de la dosis inicial y cada 8 semanas después de la dosis a las 4 semanas.

9. El anticuerpo para utilizarse de una cualquiera de las reivindicaciones 1-8, en donde el paciente logra una puntuación de IGA de 0 o 1 y PASI90 o PASI100 en la semana 16.

10. El anticuerpo para utilizarse de la reivindicación 9, en donde la puntuación de PASI90, PASI100 o IGA de 0 o 1 se mide 16, 20 o 28 semanas después del tratamiento inicial.

11. El anticuerpo para utilizarse de una cualquiera de las reivindicaciones 1-10, que comprende además administrar al paciente uno o más fármacos adicionales utilizados para tratar la psoriasis, opcionalmente en donde el fármaco adicional se selecciona del grupo que consiste en: agentes inmunosupresores, fármacos antiinflamatorios no esteroideos (AINE), metotrexato (MTX), anticuerpos antimarcadores de superficie de células B, anticuerpos anti-CD20, rituximab, inhibidores del TNF, corticosteroides y modificadores coestimuladores.

12. El anticuerpo para utilizarse de una cualquiera de las reivindicaciones 1-11, en donde el anticuerpo es eficaz para reducir un síntoma de la psoriasis en el paciente, inducir una respuesta clínica, inducir o mantener la remisión clínica, inhibir la progresión de la enfermedad, o inhibir una complicación de la enfermedad en el paciente.