ES3069936T3 - Detergent composition comprising amylase and protease variants - Google Patents

Detergent composition comprising amylase and protease variants

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ES3069936T3
ES3069936T3 ES20210201T ES20210201T ES3069936T3 ES 3069936 T3 ES3069936 T3 ES 3069936T3 ES 20210201 T ES20210201 T ES 20210201T ES 20210201 T ES20210201 T ES 20210201T ES 3069936 T3 ES3069936 T3 ES 3069936T3
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protease
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Carsten Andersen
Yanfei Wang
Wenwen Tao
Bitten Plesner
Elena Pont
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Novozymes AS
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Abstract

La presente invención se refiere a composiciones detergentes que comprenden variantes de proteasas y alfa-amilasas o variantes de las mismas. Asimismo, la presente invención se refiere a métodos para el uso de dichas composiciones detergentes. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

[0001] DESCRIPCIÓN
[0002] Composición detergente que comprende variantes de amilasa y proteasa
[0003] REFERENCIA A UN LISTADO DE SECUENCIAS
[0004] Esta solicitud comprende un listado de secuencias en forma legible por ordenador.
[0005] ANTECEDENTES DE LA INVENCIÓN
[0006] Campo de la invención
[0007] La presente invención se refiere a composiciones novedosas que comprenden variantes de amilasa y una proteasa o variantes de proteasa, en donde las respectivas variantes presentan modificaciones con relación a la amilasa parental y la proteasa parental, respectivamente, en una o más propiedades, incluyendo: rendimiento de lavado, estabilidad del detergente y/o estabilidad en almacenamiento. Las composiciones de la invención son adecuadas, por ejemplo, como composiciones de limpieza o detergentes, tales como composiciones detergentes para el lavado de ropa y composiciones para el lavado de la vajilla, incluyendo composiciones para el lavado automático de la vajilla y para el lavado manual de la vajilla.
[0008] Descripción de la técnica relacionada
[0009] Dentro de la industria de los detergentes, durante muchas décadas se han usado enzimas como parte de las formulaciones de lavado. Las alfa-amilasas son, desde una perspectiva comercial, unas de las enzimas más relevantes en tales formulaciones, pero a menudo también se usan otras enzimas, incluyendo proteasa, lipasas, amilasas adicionales, celulasas, hemicelulasas o mezclas de enzimas. Para mejorar el coste y/o el rendimiento de las enzimas, existe una búsqueda continua de enzimas con propiedades alteradas, tales como una actividad aumentada a bajas temperaturas, una estabilidad aumentada, por ejemplo, en presencia de quelantes, una actividad específica aumentada a un pH dado, una dependencia alterada de Ca<2+>, una estabilidad aumentada en presencia de otros ingredientes detergentes (por ejemplo, blanqueador, tensioactivos, etc.), etc. Por ejemplo, las alfa-amilasas han sido normalmente alfa-amilasas deBacillus licheniformis, también conocidas como Termamyl. También pueden usarse otras alfa-amilasas.
[0010] Las proteasas, que a menudo se usan en detergentes, son de la familia de las subtilasas. Esta familia ha sido previamente agrupada adicionalmente en 6 diferentes subgrupos por Siezen RJ y Leunissen JAM, 1997, Protein Science, 6, 501-523. Uno de estos subgrupos es la familia Subtilisina, que incluye subtilasas tales como BPN’ y subtilisina 309 (SAVINASE<®>, Novozymes A/S), subtilisina Carlsberg (ALCALASE<®>, Novozymes A/S). Otra proteasa, TY145, que también es una subtilasa deBacillus sp. TY145, NCIMB 40339, se describió por primera vez en el documento WO 92/17577 (Novozymes A/S) y en la posterior solicitud WO2004/067737 (Novozymes A/S) que da a conocer la estructura tridimensional y el uso de la ingeniería de proteínas para alterar la funcionalidad de una subtilasa TY-145.
[0011] Se han descrito composiciones detergentes, pero existe una necesidad continua de composiciones detergentes mejoradas en donde las enzimas conserven la actividad y estabilidad dentro de las composiciones detergentes en presencia del componente detergente, tal como el sistema de blanqueo o quelantes. El documento WO 2014/106593 da a conocer composiciones detergentes que comprenden una alfa-amilasa y una proteasa.
[0012] Por tanto, es un objetivo de la presente invención proporcionar tales composiciones detergentes.
[0013] SUMARIO DE LA INVENCIÓN
[0014] La presente invención se refiere a una composición detergente, que comprende (i) al menos una variante de alfaamilasa que comprende una modificación en la posición 116 y una o más posiciones correspondientes a las posiciones 476, 167, 1, 54, 56, 72, 109, 113, 134, 140, 159, 169, 172, 173, 174, 181, 182, 183, 184, 189, 194, 195, 206, 255, 260, 262, 265, 284, 289, 304, 305, 347, 391, 395, 439, 469, 444, 473 o 477 de SEQ ID NO: 1, en donde dicha variante de alfa-amilasa tiene una identidad de secuencia de al menos el 75%, pero menos del 100% con SEQ ID NO: 1 y en donde dicha variante de alfa-amilasa tiene actividad de alfa-amilasa; y (ii) al menos una proteasa que tiene actividad de proteasa, en donde dicha proteasa tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, tal como al menos el 75%, tal como al menos el 80%, tal como al menos el 85%, tal como al menos el 90%, tal como al menos el 95%, tal como al menos el 98%, tal como al menos el 99%, tal como el 100%, con la secuencia de SEQ ID NO: 3.
[0015] La presente invención también se refiere también al uso de la composición detergente según una cualquiera de las realizaciones descritas en el presente documento en lavado de ropa, lavado manual de vajillas o lavado automático de vajillas.
[0016] La presente invención se refiere también a un método de lavar ropa, que comprende lavar un tejido con una composición detergente según una cualquiera de las realizaciones descritas en el presente documento, preferiblemente a una temperatura de 40ºC o menos, o más preferiblemente a una temperatura de 30ºC o menos, o incluso más preferiblemente a una temperatura de 20ºC o menos.
[0017] La presente invención se refiere también a un método de lavar vajilla en una máquina lavavajillas automática usando una composición detergente según una cualquiera de las realizaciones descritas en el presente documento, que comprende las etapas de añadir dicha composición detergente a un compartimento para la composición detergente en dicha máquina lavavajillas automática, y liberar dicha composición detergente durante un ciclo de lavado principal.
[0018] Síntesis del listado de secuencias
[0019] SEQ ID NO: 1 es la secuencia de aminoácidos de una alfa-amilasa (AAI10)
[0020] SEQ ID NO: 2 es la secuencia de aminoácidos de una proteasa (TY145)
[0021] SEQ ID NO: 3 es la secuencia de aminoácidos de una proteasa (Savinase<®>)
[0022] SEQ ID NO: 4 es la secuencia de aminoácidos de una lipasa (TLL)
[0023] SEQ ID NO: 5 es la secuencia de aminoácidos de una alfa-amilasa (AA560)
[0024] SEQ ID NO: 6 es la secuencia de aminoácidos de una alfa-amilasa (SP722)
[0025] SEQ ID NO: 7 es la secuencia de aminoácidos de una alfa-amilasa (TS23)
[0026] SEQ ID NO: 8 es la secuencia de aminoácidos de una alfa-amilasa (Cytophaga sp)
[0027] SEQ ID NO: 9 es la secuencia de aminoácidos de una alfa-amilasa (SP707)
[0028] SEQ ID NO: 10 es la secuencia de aminoácidos de una alfa-amilasa de fusión (LASB0000)
[0029] SEQ ID NO: 11 es la secuencia de aminoácidos de una alfa-amilasa (SP.7-7)
[0030] SEQ ID NO: 12 es la secuencia de aminoácidos de una alfa-amilasa (Termamyl)
[0031] SEQ ID NO: 13 es la secuencia de aminoácidos de una alfa-amilasa de fusión
[0032] SEQ ID NO: 14 es la secuencia de aminoácidos de una alfa-amilasa de fusión (LABM)
[0033] SEQ ID NO: 15 es la secuencia de aminoácidos de una alfa-amilasa (KSM-AP1378)
[0034] SEQ ID NO: 16 es la secuencia de aminoácidos de una alfa-amilasa (KSM-K36/-K38)
[0035] SEQ ID NO: 17 es la secuencia de aminoácidos de una alfa-amilasa (BSG)
[0036] SEQ ID NO: 18 es la secuencia de aminoácidos de una alfa-amilasa (BAN)
[0037] SEQ ID NO: 19 es la secuencia de aminoácidos de una proteasa (Neutrase)
[0038] SEQ ID NO: 20 es la secuencia de aminoácidos de una proteasa (metaloproteasa)
[0039] SEQ ID NO: 21 es la secuencia de aminoácidos de una variante de proteasa (proteasa 2)
[0040] SEQ ID NO: 22 es la secuencia de aminoácidos de una variante de proteasa (proteasa 3)
[0041] SEQ ID NO: 23 es la secuencia de aminoácidos de una proteasa (BPN’)
[0042] Definiciones
[0043] A continuación en el presente documento, la terminología “realización” se refiere a la divulgación y solo forma parte de la invención si cae dentro del alcance de las reivindicaciones. El término “propiedad mejorada”, cuando se refiere a una variante de alfa-amilasa en el presente documento, se refiere a una característica asociada con una variante de alfa-amilasa que está mejorada en comparación con la alfa-amilasa parental, por ejemplo, una alfaamilasa parental que tiene la secuencia de SEQ ID NO: 1, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 o 18, o en comparación con una alfa-amilasa que tiene la secuencia de aminoácidos idéntica de dicha variante, pero que no tiene la alteración en una o más de dichas posiciones especificadas. Tales propiedades mejoradas incluyen, pero no se limitan a, rendimiento de lavado, actividad de alfa-amilasa, perfil de actividad térmica, termoestabilidad, perfil de actividad del pH, estabilidad al pH, especificidad por el sustrato, propiedades de superficie mejoradas, especificidad por el producto, estabilidad aumentada, estabilidad mejorada bajo condiciones de almacenamiento y estabilidad química.
[0045] El término “actividad de alfa-amilasa mejorada” se define en el presente documento como una actividad de alfaamilasa alterada (tal como se ha definido anteriormente), por ejemplo, mediante una conversión aumentada de polisacáridos de una variante de alfa-amilasa que presenta una alteración de la actividad con relación a (o en comparación con) la actividad de la alfa-amilasa parental, o en comparación con una alfa-amilasa con SEQ ID NO: 1, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 o 18, o con relación a una alfa-amilasa que tiene la secuencia de aminoácidos idéntica de dicha variante de alfa-amilasa, pero que no tiene las alteraciones en una o más de dichas posiciones especificadas.
[0047] El término “propiedad mejorada”, cuando se refiere a una variante de proteasa en el presente documento, significa una característica asociada con una variante que está mejorada en comparación con la parental o en comparación con una proteasa con SEQ ID NO: 2, 3, 19, 20 o 23, o en comparación con una proteasa que tiene la secuencia de aminoácidos idéntica de dicha variante, pero que no tiene las alteraciones en una o más de dichas posiciones especificadas. Tales propiedades mejoradas incluyen, pero no se limitan a, rendimiento de lavado, actividad de proteasa, perfil de actividad térmica, termoestabilidad, perfil de actividad del pH, estabilidad al pH, especificidad por el sustrato/cofactor, propiedades de superficie mejoradas, especificidad por el producto, estabilidad aumentada, estabilidad mejorada bajo condiciones de almacenamiento y estabilidad química.
[0049] El término “actividad de proteasa mejorada” se define en el presente documento como una actividad de proteasa alterada (tal como se ha definido anteriormente), por ejemplo, mediante una conversión aumentada de proteínas de una variante de proteasa que presenta una alteración de la actividad con relación a (o en comparación con) la actividad de la proteasa parental, o en comparación con una proteasa con SEQ ID NO: 2, 3, 19, 20 o 23, o con relación a una proteasa que tiene la secuencia de aminoácidos idéntica de dicha variante de proteasa, pero que no tiene las alteraciones en una o más de dichas posiciones especificadas.
[0051] El término “estabilidad” incluye estabilidad en almacenamiento y estabilidad durante el uso, por ejemplo, durante un proceso de lavado, y refleja la estabilidad de la variante de proteasa según la invención como una función del tiempo, por ejemplo, cuánta actividad se conserva cuando la variante de proteasa se mantiene en disolución, en particular en una disolución detergente. La estabilidad se ve influida por muchos factores, por ejemplo, pH, temperatura, composición detergente, por ejemplo, cantidad de adyuvante, tensioactivos, etc.
[0053] El término “estabilidad mejorada” o “estabilidad aumentada” se define en el presente documento como una variante que es o bien una variante de proteasa, una variante de lipasa o bien una variante de alfa-amilasa que presenta una estabilidad aumentada en disoluciones, con relación a la estabilidad de la proteasa parental, lipasa parental o alfa-amilasa parental, respectivamente, con relación a una proteasa, lipasa o una alfa-amilasa que tiene la secuencia de aminoácidos idéntica de dicha variante, pero que no tiene las alteraciones en una o más de dichas posiciones especificadas o con relación a SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 o 23, dependiendo de qué polipéptido parental se haya derivado la variante. Los términos “estabilidad mejorada” y “estabilidad aumentada” incluyen “estabilidad química mejorada”, “estabilidad del detergente” o “estabilidad del detergente mejorada”. La estabilidad enzimática puede medirse tal como se describe en los ejemplos.
[0055] El término “estabilidad química mejorada” se define en el presente documento como una enzima variante que presenta conservación de la actividad enzimática después de un periodo de incubación en presencia de un producto químico o de productos químicos, que se produce o producen de manera natural o sintéticos, que reduce la actividad enzimática de la enzima parental. Una estabilidad química mejorada también puede dar como resultado variantes que son más capaces de catalizar una reacción en presencia de tales productos químicos. En un aspecto particular de la invención, la estabilidad química mejorada es una estabilidad mejorada en un detergente, en particular en un detergente líquido. El término “estabilidad del detergente” o “estabilidad del detergente mejorada” es, en particular, una estabilidad mejorada de la actividad enzimática cuando una variante de la enzima se mezcla en una formulación de detergente líquido, especialmente en una formulación de detergente líquido según la tabla 1 y entonces se almacena a temperaturas entre 15 y 50ºC, por ejemplo 20ºC, 30ºC o 40ºC durante al menos una semana.
[0057] El término “actividad térmica mejorada” significa una variante que presenta un perfil de actividad dependiente de la temperatura alterado a una temperatura específica con relación al perfil de actividad dependiente de la temperatura de la parental o con relación a un polipéptido de SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 o 23. El valor de actividad térmica proporciona una medida de la eficiencia de la variante a la hora de potenciar la catálisis de una reacción de hidrólisis a lo largo de un intervalo de temperaturas.
[0058] El término “rendimiento de lavado mejorado” se define en el presente documento como una variante que presenta un rendimiento de lavado mejorado con relación al rendimiento de lavado de la enzima parental, con relación a un polipéptido de SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 o 23, o en relación con una enzima que tiene la secuencia de aminoácidos idéntica de dicha variante, pero que no tiene las alteraciones en una o más de dichas posiciones especificadas, por ejemplo, mediante la eliminación aumentada de las manchas. El término “rendimiento de lavado” incluye el rendimiento de lavado en el lavado de ropa, pero también, por ejemplo, en el lavado de la vajilla. El rendimiento de lavado puede cuantificarse tal como se describe bajo la definición de “rendimiento de lavado” en el presente documento.
[0059] El término “tejido” o “prenda”, tal como se usa en el presente documento, se refiere a cualquier material textil. Por tanto, se pretende que el término abarque prendas, así como tejidos, hilos, fibras, materiales no tejidos, materiales naturales, materiales sintéticos y cualquier otro material textil.
[0060] El término “textil”, tal como se usa en el presente documento, se refiere a telas tejidas, así como a fibras cortadas y filamentos adecuados para la conversión en o el uso como hilos, telas tejidas, tricotadas y no tejidas. El término abarca hilos hechos a partir de fibras naturales, así como sintéticas (por ejemplo, manufacturadas). El término “materiales textiles” es un término general para fibras, productos intermedios de hilos, hilo, tejidos y productos hechos de tejidos (por ejemplo, prendas y otros artículos).
[0061] El término “composiciones detergentes no de tejidos” incluye composiciones detergentes de superficies no textiles, incluyendo, pero sin limitarse a, composiciones para la limpieza de superficies duras, tales como composiciones detergentes para lavavajillas, composiciones detergentes orales, composiciones detergentes dentífricas y composiciones para la limpieza personal.
[0062] El término “cantidad efectiva de enzima” se refiere a la cantidad de enzima necesaria para lograr la actividad enzimática requerida en la aplicación específica, por ejemplo, en una composición detergente definida. Tales cantidades efectivas se determinan fácilmente por un experto ordinario en la técnica y se basan en muchos factores, tales como la enzima particular usada, la aplicación de limpieza, la composición específica de la composición detergente y si se requiere una composición líquida o seca (por ejemplo, granular, pastilla), y similares. El término “cantidad efectiva” de una variante se refiere a la cantidad de variante descrita antes en el presente documento que alcanza un nivel deseado de actividad enzimática, por ejemplo, en una composición detergente definida. En una realización, la cantidad efectiva de una variante de proteasa es la misma cantidad efectiva de una alfa-amilasa, tal como una variante de alfa-amilasa. En otra realización, la cantidad efectiva de una variante de proteasa es diferente a la cantidad efectiva de una alfa-amilasa, tal como una variante de alfa-amilasa, por ejemplo, la cantidad efectiva de una variante de proteasa puede ser más o puede ser menos que la cantidad efectiva de una alfa-amilasa, tal como una variante de alfa-amilasa.
[0063] El término “dureza del agua” o “grado de dureza” o “dH” o “ºdH”, tal como se utiliza en el presente documento, se refiere a grados de dureza alemanes. Un grado se define como 10 miligramos de óxido de calcio por litro de agua. El término “condiciones relevantes de lavado” se usa en el presente documento para indicar las condiciones, en particular la temperatura del lavado, el tiempo, la mecánica del lavado, la concentración de detergente, el tipo de detergente y la dureza del agua, usados realmente a nivel doméstico en un segmento del mercado de detergentes. El término “materiales auxiliares” significa cualquier material líquido, sólido o gaseoso seleccionado para el tipo particular de composición detergente deseada y la forma del producto (por ejemplo, líquido, gránulo, polvo, pastilla, pasta, spray, comprimido, gel o composición de espuma), materiales que son también preferiblemente compatibles con las enzimas usadas en la composición. En algunas realizaciones, las composiciones granulares están en forma “compacta”, mientras que en otras realizaciones, las composiciones líquidas están en forma “concentrada”. El término “enzima para eliminar manchas”, tal como se usa en el presente documento, describe una enzima que ayuda a la eliminación de una mancha o suciedad de un tejido o una superficie dura. Las enzimas para eliminar manchas actúan sobre sustratos específicos, por ejemplo, una proteasa sobre una proteína, una amilasa sobre el almidón, una lipasa y una cutinasa sobre lípidos (grasas y aceites), una pectinasa sobre la pectina y las hemicelulasas sobre la hemicelulosa. A menudo las manchas son depósitos de mezclas complejas de diferentes componentes lo que o bien da como resultado un cambio de coloración local del material en sí mismo o bien deja una superficie pegajosa sobre el objeto que puede atraer suciedad disuelta en el licor de lavado, dando así como resultado un cambio de coloración del área manchada. Cuando una enzima actúa sobre su sustrato específico presente en una mancha, la enzima degrada o degrada parcialmente su sustrato y de este modo ayuda a la eliminación de componentes de la mancha y suciedad asociados con el sustrato durante el proceso de lavado. Por ejemplo, cuando una proteasa actúa sobre una mancha de hierba, degrada los componentes proteicos en la hierba y permite que se libere el color verde/pardo durante el lavado.
[0064] El término “cantidad reducida” significa en este contexto que la cantidad del componente es menor que la cantidad que se usaría en un proceso de referencia, por lo demás bajo las mismas condiciones. En una realización preferida, la cantidad se reduce, por ejemplo, al menos un 5%, tal como al menos un 10%, al menos un 15%, al menos un 20% o de otro modo tal como se describe en el presente documento.
[0066] El término sistema de “concentración de detergente baja” incluye detergentes en los que menos de aproximadamente 800 ppm de componentes detergentes están presentes en el agua de lavado. Los detergentes asiáticos, por ejemplo, japoneses, se consideran normalmente sistemas de concentración de detergente baja.
[0067] El término sistema de “concentración de detergente media” incluye detergentes en los que entre aproximadamente 800 ppm y aproximadamente 2000 ppm de componentes detergentes están presentes en el agua de lavado. Los detergentes norteamericanos se consideran generalmente sistemas de concentración de detergente media.
[0068] El término sistema de “concentración de detergente elevada” incluye detergentes en los que más de aproximadamente 2000 ppm de componentes detergentes están presentes en el agua de lavado. Los detergentes europeos se consideran generalmente sistemas de concentración de detergente elevada.
[0070] Convenciones para la designación de variantes
[0072] Los polipéptidos dados a conocer en SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 o 23 pueden usarse para determinar el residuo aminoácido correspondiente en otro polipéptido. La secuencia de aminoácidos de otro polipéptido se alinea con el polipéptido dado a conocer en SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 o 23, dependiendo de si es una alfa-amilasa, una proteasa o una lipasa, y en base al alineamiento, el número de posición del aminoácido correspondiente a cualquier residuo aminoácido en el polipéptido dado a conocer en SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 o 23 se determina usando el algoritmo de Needleman-Wunsch (Needleman y Wunsch, 1970, J. Mol. Biol. 48: 443-453) tal como se implementa en el programa Needle del paquete EMBOSS (EMBOSS: The European Molecular Biology Open Software Suite, Riceet al., 2000, Trends Genet. 16: 276-277), preferiblemente la versión 5.0.0 o versiones posteriores. Los parámetros usados son penalización por apertura de hueco de 10, penalización por extensión de hueco de 0,5, y la matriz de sustitución EBLOSUM62 (versión EMBOSS de BLOSUM62).
[0074] La identificación del residuo aminoácido correspondiente en otra enzima puede determinarse mediante un alineamiento de múltiples secuencias de polipéptidos usando varios programas informáticos que incluyen, pero no se limitan a, MUSCLE (comparación de múltiples secuencias mediante expectativa log.; versión 3.5 o versiones posteriores; Edgar, 2004, Nucleic Acids Research 32: 1792-1797), MAFFT (versión 6.857 o versiones posteriores; Katoh y Kuma, 2002, Nucleic Acids Research 30: 3059-3066; Katoh et al., 2005, Nucleic Acids Research 33: 511-518; Katoh y Toh, 2007, Bioinformatics 23: 372-374; Katoh et al., 2009, Methods in Molecular Biology 537:_39-64; Katoh y Toh, 2010, Bioinformatics 26:_1899-1900) y EMBOSS EMMA empleando ClustalW (1.83 o posterior; Thompsonet al., 1994, Nucleic Acids Research 22: 4673-4680), usando sus respectivos parámetros por defecto.
[0075] Cuando la otra enzima ha divergido respecto al polipéptido de SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 o 23, de modo que la comparación tradicional basada en la secuencia falla a la hora de detectar su relación (Lindahl y Elofsson, 2000, J. Mol. Biol. 295: 613-615) pueden usarse otros algoritmos de comparación de las secuencias por pares. Puede obtenerse una mayor sensibilidad en la búsqueda basada en secuencias usando programas de búsqueda que utilizan representaciones probabilísticas de familias de polipéptidos (perfiles) para realizar búsquedas en bases de datos. Por ejemplo, el programa PSI-BLAST genera perfiles a través de un proceso de búsqueda en bases de datos iterativo y es capaz de detectar homólogos remotos (Atschulet al., 1997, Nucleic Acids Res. 25: 3389-3402). Puede obtenerse una sensibilidad incluso mayor si la familia o superfamilia para el polipéptido tiene uno o más representantes en las bases de datos de estructuras proteicas. Programas tales como GenTHREADER (Jones, 1999, J. Mol. Biol. 287: 797-815; McGuffin y Jones, 2003, Bioinformatics 19: 874-881) utilizan información de una variedad de fuentes (PSI-BLAST, predicción de estructura secundaria, perfiles de alineamiento estructurales y potenciales de solvatación) como entrada para una red neural que predice el plegamiento estructural para una secuencia de consulta. De manera similar, el método de Goughet al., 2000, J. Mol. Biol. 313: 903-919 puede usarse para alinear una secuencia de estructura desconocida con los modelos de superfamilias presentes en la base de datos SCOP. A su vez, estos alineamientos pueden usarse para generar modelos de homología para el polipéptido y tales modelos pueden evaluarse para determinar su precisión usando una variedad de herramientas desarrolladas para ese fin.
[0077] Para proteínas de estructura conocida, se dispone de varias herramientas y recursos para recuperar y generar alineamientos estructurales. Por ejemplo, las superfamilias SCOP de proteínas se han alineado estructuralmente, y esos alineamientos son accesibles y pueden descargarse. Dos o más estructuras proteicas pueden alinearse usando una variedad de algoritmos tales como la matriz de alineamiento de distancias (Holm y Sander, 1998, Proteins 33: 88-96) o la extensión combinatoria (Shindyalov y Bourne, 1998, Protein Engineering 11: 739-747), y puede utilizarse adicionalmente la implementación de estos algoritmos para consultar bases de datos de estructuras con una estructura de interés con el fin de descubrir posibles homólogos estructurales (por ejemplo, Holm y Park, 2000, Bioinformatics 16: 566-567).
[0078] Está dentro del conocimiento del experto en la técnica determinar qué herramienta de alineamiento usar cuando tengan que identificarse posiciones de aminoácidos correspondientes. Por tanto, se contempla que cualquier herramienta de alineamiento disponible que el experto en la técnica encuentre adecuada pueda usarse en el contexto de la presente invención.
[0079] A la hora de describir las variantes enzimáticas descritas en el presente documento, la nomenclatura descrita más adelante se adapta para la facilidad de referencia. Se emplean las abreviaturas de aminoácidos de una letra o de tres letras aceptadas por la IUPAC. Las posiciones de los aminoácidos se indican con H1, G109, etc.
[0080] Variantes descritas en el presente documento comprenden una o más modificaciones en comparación con el polipéptido parental. Por consiguiente, las variantes pueden comprender modificaciones conservativas, en particular, tales modificaciones conservativas pueden ser sustituciones conservativas. Ejemplos de sustituciones conservativas son dentro de los grupos de aminoácidos básicos (arginina, lisina e histidina), aminoácidos ácidos (ácido glutámico y ácido aspártico), aminoácidos polares (glutamina y asparagina), aminoácidos hidrófobos (leucina, isoleucina y valina), aminoácidos aromáticos (fenilalanina, triptófano y tirosina) y aminoácidos pequeños (glicina, alanina, serina, treonina y metionina). Las sustituciones de aminoácidos que no alteran generalmente la actividad específica se conocen en la técnica y se describen, por ejemplo, por H. Neurath y R.L. Hill, 1979, En, The Proteins, Academic Press, Nueva York. Sustituciones comunes son Ala/Ser, Val/Ile, Asp/Glu, Asn/Gln, Thr/Ser, Ala/Gly, Ala/Thr, Ser/Asn, Ala/Val, Ser/Gly, Tyr/Phe, Ala/Pro, Lys/Arg, Asp/Asn, Glu/Gln, Leu/Ile, Leu/Val, Ala/Glu y Asp/Gly.
[0081] Alternativamente, los cambios de los aminoácidos son de tal naturaleza que las propiedades fisicoquímicas de los polipéptidos están alteradas. Por ejemplo, los cambios de los aminoácidos pueden mejorar la estabilidad térmica del polipéptido, alterar la especificidad por el sustrato, cambiar el pH óptimo y similares.
[0082] Sustituciones: Para la sustitución de un aminoácido, se usa la siguiente nomenclatura: aminoácido original, posición, aminoácido sustituido. Por consiguiente, la sustitución de glicina en la posición G109 con alanina se designa como “Gly109Ala” o “G109A”. Mutaciones múltiples están separadas por símbolos de adición (“+”) o por comas (“,”), por ejemplo, “Gly109Ala Leu173Pro” o “G109A,L173P”, que representan sustituciones en las posiciones 109 y 173 de glicina (G) con alanina (A) y leucina (L) con prolina (P), respectivamente. Si más de un aminoácido puede estar sustituido en una posición dada, éstos se enumeran o dividen por una barra oblicua tal como /. Por tanto, si tanto Ala como Pro según la invención pueden estar sustituidos en lugar del aminoácido que ocupa la posición 109, esto se indica como X109A/P, en donde X en el presente ejemplo indica que diferentes enzimas pueden ser parentales, por ejemplo, tal como una alfa-amilasa con SEQ ID NO: 1 o una alfa-amilasa que tiene una identidad de al menos el 75% con la misma. Por tanto, en algunos casos, las variantes se representan como 109A/P o X109A/P, indicando que los aminoácidos a sustituir varían dependiendo de la enzima parental. Deleciones: Para la deleción de un aminoácido, se usa la siguiente nomenclatura: aminoácido original, posición, *. Por consiguiente, la deleción de arginina en la posición 181 se designa como “Arg181*” o “R181*”. Deleciones múltiples están separadas por símbolos de adición (“+”) o por comas (“,”), por ejemplo, “Arg181* Gly182*” o “R181*+G182*” o “R181*, G182*”.
[0083] Inserciones: La inserción de un residuo aminoácido adicional tal como, por ejemplo, una lisina después de G#<1>puede indicarse mediante: Gly#<1>GlyLys o G#<1>GK. Alternativamente, la inserción de un residuo aminoácido adicional tal como lisina después de G109 puede indicarse mediante: *109aL. Cuando se inserta más de un residuo aminoácido tal como, por ejemplo, una Lys y Ala después de 109, esto puede indicarse como: Gly109GlyLysAla o G109GKA. En tales casos, el/los residuo(s) aminoácido(s) insertado(s) también pueden numerarse mediante la adición de letras en minúscula al número de la posición del residuo aminoácido anterior al/a los residuo(s) aminoácido(s) insertado(s), en este ejemplo: *109aK *109bA.
[0084] Colectivamente, las sustituciones, deleciones e inserciones pueden denominarse en el presente documento “modificaciones”. Por tanto, ha de entenderse que cualquier variante descrita en el presente documento comprende modificaciones tales como sustituciones, deleciones y/o inserciones, a menos que se indique de otro modo por el contexto.
[0085] Modificaciones múltiples: Las variantes que comprenden modificaciones múltiples están separadas por símbolos de adición (“+”), barras oblicuas (“/”) o por comas (“,”), por ejemplo, “Gly109Pro+Lys391Ala” o “G109P, K391A” representando una sustitución de glicina en la posición 109 y de lisina en la posición 391 con prolina y alanina, respectivamente, tal como se ha descrito anteriormente.
[0086] Diferentes modificaciones: Cuando puedan introducirse diferentes modificaciones en una posición, las diferentes modificaciones están separadas por una división (“/”) o por una coma (“,”), por ejemplo, “Gly109Pro,Lys” o “G109P,K” representa una sustitución de glicina en la posición 109 con prolina o lisina. Por tanto, “Gly109Pro,Lys Lys391Ala” designa las siguientes variantes: “Gly109Pro+Lys391Ala”, “Gly109Lys+Lys391Ala” o “G109P,K K391A”.
[0087] El experto en la técnica conocerá que el aminoácido original en cualquier posición puede variar de una alfa-amilasa parental a otra cuando se alinea. Por consiguiente, ha de entenderse que el experto en la técnica será capaz de alinear cualquier secuencia de alfa-amilasa con la secuencia de numeración, es decir, SEQ ID NO: 1, de la presente invención. Sin embargo, sin limitar la presente invención, los aminoácidos originales se designan con una “X” que cubriría todos los polipéptidos parentales. Ha de entenderse, por tanto, que “X” se lista como un prefijo para una posición de aminoácido en la presente invención. No ha de entenderse de modo limitativo alguno.
[0088] DESCRIPCIÓN DETALLADA DE LA INVENCIÓN
[0089] En un aspecto, la presente invención se refiere a una composición detergente que comprende
[0090] (i) al menos una variante de alfa-amilasa que comprende una modificación en la posición 116 y una o más posiciones correspondientes a las posiciones 476, 167, 1, 54, 56, 72, 109, 113, 134, 140, 159, 169, 172, 173,
[0091] 174, 181, 182, 183, 184, 189, 194, 195, 206, 255, 260, 262, 265, 284, 289, 304, 305, 347, 391, 395, 439, 469,
[0092] 444, 473 o 477 de SEQ ID NO: 1, en donde dicha variante de alfa-amilasa tiene una identidad de secuencia de al menos el 75%, pero menos del 100% con SEQ ID NO: 1, y en donde dicha variante de alfa-amilasa tiene actividad de alfa-amilasa; y (ii) al menos una proteasa que tiene actividad de proteasa, en donde dicha proteasa tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, tal como al menos el 75%, tal como al menos el 80%, tal como al menos el 85%, tal como al menos el 90%, tal como al menos el 95%, tal como al menos el 98%, tal como al menos el 99%, tal como el 100%, con la secuencia de SEQ ID NO: 3.
[0093] Se han generado las variantes de alfa-amilasa de la composición detergente de la presente invención que comprenden una o más sustituciones en las posiciones definidas usando SEQ ID NO: 1 para la numeración y se sometieron a prueba en cuanto a la estabilidad y el rendimiento en un detergente modelo tal como se describe en “Materiales y métodos” y los inventores demostraron que una o más sustituciones de uno o más aminoácidos en una posición correspondiente a las posiciones 476, 167, 1, 54, 56, 72, 109, 113, 116, 134, 140, 159, 169, 172, 173, 174, 181, 182, 183, 184, 189, 194, 195, 206, 255, 260, 262, 265, 284, 289, 304, 305, 347, 391, 395, 439, 469, 444, 473 y 477 en el polipéptido de SEQ ID NO: 1 o 14 mejoraban la estabilidad y/o el rendimiento del detergente en comparación con una alfa-amilasa que tiene una secuencia de aminoácidos de, por ejemplo, SEQ ID NO: 1 y 14, pero que no tiene una sustitución en una o más de dichas posiciones especificadas o en comparación con una alfa-amilasa con SEQ ID NO: 1. Como puede verse a partir de los ejemplos, la combinación de una variante de alfa-amilasa y una variante de proteasa tiene un efecto sinérgico sobre la eliminación de manchas, es decir, un rendimiento mejorado. En uno de los ejemplos descritos en el presente documento, se muestra también que la combinación de una variante de alfa-amilasa y una variante de proteasa tiene al menos la misma estabilidad que las variantes sometidas a prueba solas.
[0094] El término “composición detergente”, tal como se usa en el presente documento, se refiere a una composición adecuada para su uso como una composición detergente. Está dentro del conocimiento del experto en la técnica determinar cuándo puede considerarse a una composición como una composición detergente.
[0095] El término “alfa-amilasa” significa una alfa-amilasa que tiene actividad de alfa-amilasa, es decir, la actividad de alfa-1,4-glucan-4-glucanohidrolasas, E.C.3.2.1.1, que constituyen un grupo de enzimas que catalizan la hidrólisis de almidón y otros oligo- y polisacáridos 1,4-glucosídicos lineales y ramificados. Para los fines de las alfa-amilasas presentes en las composiciones detergentes de la presente invención, la actividad de alfa-amilasa puede determinarse tal como se describe en el ejemplo 1 más adelante. Las alfa-amilasas descritas en el presente documento tienen al menos el 20%, por ejemplo, al menos el 40%, al menos el 50%, al menos el 60%, al menos el 70%, al menos el 80%, al menos el 90%, al menos el 95% o al menos el 100% de la actividad de proteasa del polipéptido con SEQ ID NO: 1. Los términos “alfa-amilasa” y “amilasa” pueden usarse de manera intercambiable y tienen el mismo significado y propósito dentro del alcance de la presente invención.
[0096] El término “variante de alfa-amilasa”, tal como se usa en el presente documento, se refiere a una alfa-amilasa que tiene actividad de alfa-amilasa que comprende una alteración, es decir, una sustitución, inserción y/o deleción en una o más (por ejemplo, varias) posiciones en comparación con una “alfa-amilasa parental”. Una sustitución significa un reemplazo de un aminoácido que ocupa una posición por un aminoácido diferente; una deleción significa la eliminación de un aminoácido que ocupa una posición; y una inserción significa añadir aminoácidos, por ejemplo, de 1 a 10 aminoácidos, preferiblemente 1-3 aminoácidos adyacentes a un aminoácido que ocupa una posición. Las sustituciones de aminoácidos pueden intercambiar un aminoácido nativo por otro aminoácido que se produce de manera natural, o por un derivado de aminoácido que no se produce de manera natural. Las variantes de alfa-amilasa tienen al menos el 20%, por ejemplo, al menos el 40%, al menos el 50%, al menos el 60%, al menos el 70%, al menos el 80%, al menos el 90%, al menos el 95% o al menos el 100% de la actividad de alfaamilasa de la alfa-amilasa parental madura de la cual se han derivado.
[0097] El término “actividad de alfa-amilasa”, tal como se usa en el presente documento, se refiere a la actividad de alfa-1,4-glucan-4-glucanohidrolasas, E.C.3.2.1.1, que constituyen un grupo de enzimas que catalizan la hidrólisis de almidón y otros oligo- y polisacáridos 1,4-glucosídicos lineales y ramificados. Por tanto, el término “alfa-amilasa”, tal como se usa en el presente documento, se refiere a una enzima que tiene actividad de alfa-amilasa (clase de enzima; EC 3.2.1.1) que hidroliza los enlaces alfa de polisacáridos grandes unidos en alfa, tales como almidón y glucógeno, proporcionando glucosa y maltosa. Para los fines de la presente invención, la actividad de alfa-amilasa se determina según el procedimiento descrito en los ejemplos. En una realización, las variantes de la presente invención tienen al menos el 20%, por ejemplo, al menos el 40%, al menos el 50%, al menos el 60%, al menos el 70%, al menos el 80%, al menos el 90%, al menos el 95% o al menos el 100% de la actividad de alfa-amilasa del polipéptido de SEQ ID NOs: 1, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 o 18.
[0099] El término “proteasa” se define en el presente documento como una enzima que hidroliza enlaces peptídicos. Incluye cualquier enzima que pertenezca al grupo de enzimas EC 3.4 (incluyendo cada una de las trece subclases del mismo). El número EC se refiere a Enzyme Nomenclature 1992 de NC-IUBMB, Academic Press, San Diego, California, incluyendo los suplementos 1-5 publicados en Eur. J. Biochem.1994, 223, 1-5; Eur. J. Biochem.1995, 232, 1-6; Eur. J. Biochem.1996, 237, 1-5; Eur. J. Biochem.1997, 250, 1-6; y Eur. J. Biochem.1999, 264, 610-650; respectivamente. El término “subtilasas” se refiere a un subgrupo de serina-proteasa según Siezenet al., Protein Engng.4 (1991) 719-737 and Siezenet al. Protein Science 6 (1997) 501-523. Serina proteasas o serina peptidasas es un subgrupo de proteasas caracterizado por tener una serina en el sitio activo, que forma un aducto covalente con el sustrato. Además, las subtilasas (y las serina proteasas) se caracterizan por tener dos residuos aminoacídicos de sitio activo aparte de la serina, concretamente una histidina y un residuo ácido aspártico. Las subtilasas pueden dividirse en 6 subdivisiones, es decir, la familia Subtilisina, la familia Termitasa, la familia Proteinasa K, la familia Lantibiótico peptidasa, la familia Kexina y la familia Pirolisina. El término “actividad de proteasa” significa una actividad proteolítica (EC 3.4). Las proteasas de la invención son endopeptidasas (EC 3.4.21). Para los fines de la presente invención, la actividad de proteasa se determina según el procedimiento descrito en el ejemplo 1 más adelante. Las variantes de proteasas descritas en el presente documento tienen al menos el 20%, por ejemplo, al menos el 40%, al menos el 50%, al menos el 60%, al menos el 70%, al menos el 80%, al menos el 90%, al menos el 95% o al menos el 100% de la actividad de proteasa del polipéptido maduro con SEQ ID NO: 2, 3, 19, 20 o 23.
[0101] El término “actividad de proteasa”, tal como se usa en el presente documento, se refiere a la actividad de hidrólisis de enlaces peptídicos. Para los fines de la presente invención, la actividad de proteasa se determina según el procedimiento descrito en los ejemplos. En una realización, las variantes tienen al menos el 20%, por ejemplo, al menos el 40%, al menos el 50%, al menos el 60%, al menos el 70%, al menos el 80%, al menos el 90%, al menos el 95% o al menos el 100% de la actividad de alfa-amilasa del polipéptido de SEQ ID NOs: 2, 3, 19, 20 o 23.
[0102] El término “variante de proteasa”, tal como se usa en el presente documento, se refiere a una proteasa que tiene actividad de proteasa que comprende una alteración, es decir, una sustitución, inserción y/o deleción, preferiblemente una sustitución, en una o más (o una o varias) posiciones en comparación con su parental, que es una proteasa que tiene la secuencia de aminoácidos idéntica de dicha variante, pero que no tiene las alteraciones en una o más de dichas posiciones especificadas.
[0104] El término “variante” significa una variante que está modificada por la mano del hombre. En un aspecto, la variante presenta una pureza de al menos el 1%, por ejemplo, una pureza de al menos el 5%, una pureza de al menos el 10%, una pureza de al menos el 20%, una pureza de al menos el 40%, una pureza de al menos el 60%, una pureza de al menos el 80% y una pureza de al menos el 90%, tal como se determina mediante SDS-PAGE.
[0106] El término “modificación” se describe en otra parte en el presente documento. El término es una designación global de los términos “sustitución”, “inserción” y “deleción” tal como se describen en el presente documento.
[0108] El término “correspondiente a”, tal como se usa en el presente documento, se refiere a una forma de determinar el aminoácido específico de una secuencia, en donde se hace referencia a una secuencia de aminoácidos específica. Por ejemplo, para los fines de la presente invención, cuando se hace referencia a posiciones de aminoácidos específicas, el experto en la técnica será capaz de alinear otra secuencia de aminoácidos con dicha secuencia de aminoácidos a la que se hace referencia, con el fin de determinar qué aminoácido específico puede ser de interés en dicha otra secuencia de aminoácidos. El alineamiento de otra secuencia de aminoácidos con, por ejemplo, la secuencia expuesta en SEQ ID NO: 1, 3 o cualquier otra secuencia listada en el presente documento, se ha descrito en otra parte en el presente documento. Pueden usarse métodos de alineamiento alternativos y se conocen ampliamente por el experto en la técnica.
[0110] El término “identidad de secuencia”, tal como se usa en el presente documento, se refiere a la relación entre dos secuencias de aminoácidos o entre dos secuencias de nucleótidos y se describe mediante el parámetro “identidad de secuencia”. Para los fines de la presente invención, el grado de identidad de secuencia entre dos secuencias de aminoácidos se determina usando el algoritmo de Needleman-Wunsch (Needleman y Wunsch, 1970, J. Mol. Biol.48: 443-453) tal como se implementa en el programa Needle del paquete EMBOSS (EMBOSS: The European Molecular Biology Open Software Suite, Riceet al., 2000, Trends Genet.16: 276-277), preferiblemente la versión 3.0.0 o versiones posteriores. Los parámetros opcionales usados son una penalización por apertura de hueco de 10, una penalización por extensión de hueco de 0,5 y la matriz de sustitución EBLOSUM62 (versión EMBOSS de BLOSUM62). El resultado de Needle marcado como “identidad más larga” (obtenido utilizando la opción -no corto) se usa como el porcentaje de identidad y se calcula tal como sigue:
[0111] (Restos idénticos x 100)/(Longitud del alineamiento - Número total de huecos en el alineamiento)
[0112] Preferiblemente, la composición detergente según la presente invención constituye una composición que comprende al menos una variante de alfa-amilasa y al menos una variante de proteasa, que tienen una estabilidad y/o un rendimiento de lavado mejorados en comparación con la alfa-amilasa o la proteasa parentales, respectivamente.
[0114] Se da a conocer una composición detergente, en donde la al menos una alfa-amilasa comprende una o más modificaciones de aminoácidos en las posiciones correspondientes a las posiciones 476, 167, 1, 54, 56, 72, 109, 113, 116, 134, 140, 159, 169, 172, 173, 174, 181, 182, 183, 184, 189, 194, 195, 206, 255, 260, 262, 265, 284, 289, 304, 305, 347, 391, 395, 439, 469, 444, 473 o 477 de SEQ ID NO: 1, en donde la variante de alfa-amilasa tiene una identidad de secuencia de al menos el 75% con la alfa-amilasa parental de SEQ ID Nos: 1, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 o 18, por ejemplo, una identidad de secuencia de al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, pero menos del 100% con la alfa-amilasa parental de SEQ ID NOs: 1, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 o 18, y la al menos una variante de proteasa comprende una sustitución de uno o más aminoácidos en el bucle correspondiente a las posiciones 171, 173, 175, 179 o 180 de SEQ ID NO: 2, en donde la variante de proteasa tiene una identidad de secuencia de al menos el 75% con la proteasa parental de SEQ ID NO: 2, por ejemplo, una identidad de secuencia de al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, pero menos del 100% con la proteasa parental de SEQ ID NO: 2, o comprende una sustitución de uno o más aminoácidos en las posiciones correspondientes a 32, 33, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 58, 59,60, 61, 62, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 116, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 150, 152, 153, 154, 155, 156, 158, 159, 160, 161, 164, 169, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 197, 198, 203, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215 y 216 de SEQ ID NO: 3, en donde la variante de proteasa tiene una identidad de secuencia de al menos el 75% con la proteasa parental de SEQ ID NO: 3, por ejemplo, una identidad de secuencia de al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, pero menos del 100% con la proteasa parental de SEQ ID NO: 3, o comprende una sustitución en una o más posiciones correspondientes a las posiciones 9, 15, 27, 42, 52, 55, 56, 59, 60, 66, 74, 85, 97, 99, 101, 102, 104, 116, 118, 154, 156, 157, 158, 161, 164, 176, 179, 182, 185, 188, 198, 199, 200, 203, 206, 210, 211, 212, 216, 230, 232, 239, 242, 250, 253, 255, 256 o 269 de SEQ ID NO: 3, en donde la variante de proteasa tiene una identidad de secuencia de al menos el 60% con la proteasa parental de SEQ ID NO: 3, por ejemplo, una identidad de secuencia de al menos el 65%, al menos el 70%, al menos el 75%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, pero menos del 100% con la proteasa parental de SEQ ID NO: 3, en donde la numeración es según SEQ ID NO: 3, en donde dicha variante de proteasa tiene una identidad de secuencia de al menos el 60% con SEQ ID NO: 3, o comprende una sustitución en una o más posiciones correspondientes a las posiciones 32, 33, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 60, 61, 62, 63, 64, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 118, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 152, 154, 155, 156, 157, 158, 161, 162, 163, 167, 170, 175, 181, 187, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 203, 204, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 217, 218, 219, 220, 221 o 222 en comparación con la proteasa mostrada en SEQ ID NO: 23, en donde dicha variante de proteasa tiene una identidad de secuencia de al menos el 75% con SEQ ID NO:23, por ejemplo, una identidad de secuencia de al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, pero menos del 100% con la proteasa parental de SEQ ID NO: 23.
[0116] Ha de entenderse que en el contexto de la presente invención “una variante de alfa-amilasa” o “la variante de alfaamilasa” significa “al menos una variante de alfa-amilasa”, a menos que se contradiga por el contexto, por ejemplo, “la una variante de alfa-amilasa”. Por tanto, la composición detergente según la invención comprenderá en todas las realizaciones al menos una variante de alfa-amilasa. Lo mismo se aplica a la proteasa o la lipasa o a cualquier variante de las mismas. En una realización particular, la al menos una variante de alfa-amilasa comprende una modificación en dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete, ocho, nueve, diez, once, doce o trece posiciones correspondientes a las posiciones 1, 54, 56, 72, 109, 113, 116, 134, 140, 159, 167, 169, 172, 173, 174, 181, 182, 183, 184, 189, 194, 195, 206, 255, 260, 262, 265, 284, 289, 304, 305, 347, 391, 395, 439, 469, 444, 473, 476 o 477, en donde la numeración es según SEQ ID NO: 1.
[0117] En una realización, la al menos una variante de alfa-amilasa comprende una o más modificaciones seleccionadas del grupo que consiste en: X476R, X476Q, X476E, X476K, X167Y, X167H, X167F, X1*, X1A, X54S, X56T, X72R, X109A, X113Q, X116Q, X116H, X134E, X140Y, X140F, X140H, X159Y, X159F, X159H, X169E, X172K, X172G, X172N, X173P, X174*, X174S, X181*, X182*, X183*, X184*, X184T, X189Y, X189F, X189H, X189E, X189D, X189Q, X189N, X194D, X194N, X194S, X195F, X206L, X206F, X206Y, X255A, X260G, X260P, X260A, X260G, X260P, X260A, X265G, X284G, X284H, X289H, X304K, X304R, X304Q, X304E, X305K, X305R, X305Q, X305E, X347Y, X347F, X347H, X391A, X395P, X439N, X439Q, X439T, X444Q, X469T, X469N, X473R, X477K, X477R, X477Q y X477E, en donde las posiciones corresponden a las posiciones de SEQ ID NO: 1.
[0119] En una realización particular, la al menos una variante de alfa-amilasa comprende dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete, ocho, nueve, diez, once, doce o trece de las siguientes modificaciones X476R, X476Q, X476E, X476K, X167Y, X167H, X167F, X1*, X1A, X54S, X56T, X72R, X109A, X113Q, X116Q, X116H, X134E, X140Y, X140F, X140H, X159Y, X159F, X159H, X169E, X172K, X172G, X172N, X173P, X174*, X174S, X181*, X182*, X183*, X184*, X184T, X189Y, X189F, X189H, X189E, X189D, X189Q, X189N, X194D, X194N, X194S, X195F, X206L, X206F, X206Y, X255A, X260G, X260P, X260A, X260G, X260P, X260A, X265G, X284G, X284H, X289H, X304K, X304R, X304Q, X304E, X305K, X305R, X305Q, X305E, X347Y, X347F, X347H, X391A, X395P, X439N, X439Q, X439T, X444Q, X469T, X469N, X473R, X477K, X477R, X477Q o X477E, en donde la numeración es según SEQ ID NO: 1, y en donde la variante de alfa-amilasa es una variante de alfa-amilasa de una alfa-amilasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 1 y 14.
[0121] En una realización preferida, la al menos una variante de alfa-amilasa comprende una deleción y/o una sustitución en dos o más posiciones correspondientes a las posiciones 181, 182, 183 o 184 de SEQ ID NO: 1, en donde la variante de alfa-amilasa tiene una identidad de secuencia de al menos el 75% con SEQ ID NO: 1, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, al menos el 75%, al menos el 80%, al menos el 85%, al menos el 90%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98% o al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6%, pero menos del 100%.
[0123] Por tanto, en una realización, la al menos una variante de alfa-amilasa comprende una deleción en las posiciones correspondientes a 181+182; 181+183; 181+184; 182+183; 182+184; o 183+184 de SEQ ID NO:1.
[0125] En una realización particular, la al menos una variante de alfa-amilasa comprende una o más de las siguientes modificaciones: X476R, X476Q, X476E, X476K, X167Y, X167H, X167F, X1*, X1A, X54S, X56T, X72R, X109A, X113Q, X116Q, X116H, X134E, X140Y, X140F, X140H, X159Y, X159F, X159H, X169E, X172K, X172G, X172N, X173P, X174*, X174S, X181*, X182*, X183*, X184*, X184T, X189Y, X189F, X189H, X189E, X189D, X189Q, X189N, X194D, X194N, X194S, X195F, X206L, X206F, X206Y, X255A, X260G, X260P, X260A, X260G, X260P, X260A, X265G, X284G, X284H, X289H, X304K, X304R, X304Q, X304E, X305K, X305R, X305Q, X305E, X347Y, X347F, X347H, X391A, X395P, X439N, X439Q, X439T, X444Q, X469T, X469N, X473R, X477K, X477R, X477Q o X477E y una de las deleciones por pares de X181*+X182*; X181*+X183*; X181*+X184*; X182*+X183*; X182*+X184*; o X183*+X184*; en donde la numeración es según SEQ ID NO: 1, y en donde la variante de alfaamilasa es una variante de alfa-amilasa de una alfa-amilasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 1 o 14.
[0127] En una realización, la variante de alfa-amilasa en (i) se selecciona del grupo que consiste en:
[0129] H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+ G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K;
[0130] H1*+N54S+V56T+G109A+R116H+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K;
[0132] H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+F113Q+R116Q+W167F+Q172G+A174S5+G182*+D183*+G184T+N195F+
[0133] V206L+K391A+P473R+G476K;
[0135] H1*+N54S+V56T+G109A+F113Q+R116Q+Q172N+A1745+G182*+D183*+N195F+V206L+A265G+K391A+P
[0136] 473R+G476K;
[0138] H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+F113Q+W167F+Q172R+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G4
[0139] 76K;
[0140] H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+R116H+T134E+W167F+Q172G+L173V+A174S+G182*+D183*+N195F+V2
[0141] 06L+G255A+K391A+G476K;
[0143] H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+R116H+T134E+W167F+Q172G+L173V+A174S+G182*+D183*+N195F+V2
[0144] 06L+G255A+K391A+Q395P+T444Q+P473R+G476K;
[0145] H1*+N54S+V56T+G109A+T134E+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K;
[0146] H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+G255A+K391A+G476K; y H1*+N54S+V56T+G109A+W167F+Q172E+L173P+A174K+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K, en donde dicha variante de alfa-amilasa comparte una identidad de secuencia de al menos el 80%, tal como al menos el 85%, tal como al menos el 90%, tal como al menos el 93%, tal como al menos el 94%, tal como al menos el 95%, tal como al menos el 96%, tal como al menos el 97%, tal como al menos el 98%, pero menos del 100% con el polipéptido de SEQ ID NO: 1, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 o 18, preferiblemente SEQ ID NO: 1 o 14, y en donde dicha variante de alfa-amilasa tiene actividad de alfa-amilasa.
[0148] En una realización, la variante de alfa-amilasa en (i) es una variante de SEQ ID NO: 1 o SEQ ID NO: 14, que comprende las siguientes modificaciones:
[0150] H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+ G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K;
[0151] H1*+N54S+V56T+G109A+R116H+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K;
[0153] H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+F113Q+R116Q+W167F+Q172G+A174S+G182*+D183*+G184T+N195F+V
[0154] 206L+K391A+P473R+G476K;
[0156] H1*+N54S+V56T+G109A+F113Q+R116Q+Q172N+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+A265G+K391A+P
[0157] 473R+G476K;
[0159] H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+F113Q+W167F+Q172R+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G4
[0160] 76K;
[0162] H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+R116H+T134E+W167F+Q172G+L173V+A174S+G182*+D183*+N195F+V2
[0163] 06L+G255A+K391A+G476K;
[0165] H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+R116H+T134E+W167F+Q172G+L173V+A174S+G182*+D183*+N195F+V2
[0166] 06L+G255A+K391A+Q395P+T444Q+P473R+G476K;
[0167] H1*+N54S+V56T+G109A+T134E+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K;
[0168] H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+G255A+K391A+G476K; y H1*+N54S+V56T+G109A+W167F+Q172E+L173P+A174K+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K, en donde dicha variante de alfa-amilasa comparte una identidad de secuencia de al menos el 80%, tal como al menos el 85%, tal como al menos el 90%, tal como al menos el 93%, tal como al menos el 94%, tal como al menos el 95%, tal como al menos el 96%, tal como al menos el 97%, tal como al menos el 98%, pero menos del 100% con el polipéptido de SEQ ID NO: 1 o la SEQ ID NO: 14, y en donde dicha variante de alfa-amilasa tiene actividad de alfa-amilasa.
[0170] En una realización particular, la al menos una variante de alfa-amilasa comprende las modificaciones H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+G182*+D183*+N195F+V206L K391A+G476K, en donde la numeración es según SEQ ID NO: 1, la variante de alfa-amilasa es una variante de alfa-amilasa de una alfa-amilasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 1 y 14.
[0172] En una realización particular, la al menos una variante de alfa-amilasa comprende las modificaciones H1*+N54S+V56T+G109A+R116H+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A G476K, en donde la numeración es según SEQ ID NO: 1, la variante de alfa-amilasa es una variante de alfa-amilasa de una alfa-amilasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 1 y 14.
[0174] En una realización particular, la al menos una variante de alfa-amilasa comprende las modificaciones H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+F113Q+R116Q+W167F+Q172G+A174S+G182* D183*+G184T+N195F+V206L+K391A+P473R+G476K, en donde la numeración es según SEQ ID NO: 1, en donde la variante de alfa-amilasa es una variante de alfa-amilasa de una alfa-amilasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 1 y 14.
[0176] En una realización particular, la al menos una variante de alfa-amilasa comprende las modificaciones H1*+N54S+V56T+G109A+F113Q+R116Q+Q172N+A174S+G182*+D183*+N195F V206L+A265G+K391A+P473R+G476K, en donde la numeración es según SEQ ID NO: 1, la variante de alfaamilasa es una variante de alfa-amilasa de una alfa-amilasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 1 y 14.
[0178] En una realización particular, la al menos una variante de alfa-amilasa comprende las modificaciones H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+F113Q+W167F+Q172R+A174S+G182*+D183* N195F+V206L+K391A+G476K, en donde la numeración es según SEQ ID NO: 1, la variante de alfa-amilasa es una variante de alfa-amilasa de una alfa-amilasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 1 y 14.
[0180] En una realización particular, la al menos una variante de alfa-amilasa comprende las modificaciones H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+R116H+T134E+W167F+Q172G+L173V+A174S G182*+D183*+N195F+V206L+G255A+K391A+G476K, en donde la numeración es según SEQ ID NO: 1, la variante de alfa-amilasa es una variante de alfa-amilasa de una alfa-amilasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 1 y 14.
[0182] En una realización particular, la al menos una variante de alfa-amilasa comprende las modificaciones H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+R116H+T134E+W167F+Q172G+L173V+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L G255A+K391A+Q395P+T444Q+P473R+G476K, en donde la numeración es según SEQ ID NO: 1, la variante de alfa-amilasa es una variante de alfa-amilasa de una alfa-amilasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 1 y 14.
[0184] En una realización particular, la al menos una variante de alfa-amilasa comprende las modificaciones H1*+N54S+V56T+G109A+T134E+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A G476K, en donde la numeración es según SEQ ID NO: 1, la variante de alfa-amilasa es una variante de alfa-amilasa de una alfa-amilasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 1 y 14.
[0186] En una realización particular, la al menos una variante de alfa-amilasa comprende las modificaciones H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+G255A+ K391A+G476K, en donde la numeración es según SEQ ID NO: 1, la variante de alfa-amilasa es una variante de alfa-amilasa de una alfa-amilasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 1 y 14.
[0188] En una realización particular, la al menos una variante de alfa-amilasa comprende las modificaciones H1*+N54S+V56T+G109A+W167F+Q172E+L173P+A174K+G182*+D183*+N195F V206L+K391A+G476K, en donde la numeración es según SEQ ID NO: 1, la variante de alfa-amilasa es una variante de alfa-amilasa de una alfa-amilasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 1 y 14.
[0190] En una realización, la proteasa es la de (a) enumerada anteriormente. Por consiguiente, en una realización, la proteasa es una proteasa que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, tal como al menos el 75%, tal como al menos el 80%, tal como al menos el 85%, tal como al menos el 90%, tal como al menos el 95%, tal como al menos el 98%, tal como al menos el 99%, tal como el 100%, con las secuencias de SEQ ID NOs: 3, 4, 19, 20 o 23.
[0192] En una realización particular, la composición detergente comprende; al menos una variante de alfa-amilasa que comprende las siguientes modificaciones: H1*+N54S+V56T+G109A+ Q169E+Q172K+A174*+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K, en donde la numeración es según SEQ ID NO: 1, la variante de alfa-amilasa es una variante de alfa-amilasa de una alfa-amilasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 1 y 14; y al menos una proteasa que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 19.
[0194] En una realización particular, la composición detergente comprende: al menos una variante de alfa-amilasa que comprende las siguientes modificaciones: H1*+N54S+V56T+G109A+R116H A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K, en donde la numeración es según SEQ ID NO: 1, la variante de alfa-amilasa es una variante de alfa-amilasa de una alfa-amilasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 1 y 14; y al menos una proteasa que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 19.
[0195] En una realización particular, la composición detergente comprende; al menos una variante de alfa-amilasa que comprende las siguientes modificaciones: H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+F113Q R116Q+W167F+Q172G+A174S+G182*+D183*+G184T+N195F+V206L+K391A+P473R+G476K, en donde la numeración es según SEQ ID NO: 1, la variante de alfa-amilasa es una variante de alfa-amilasa de una alfa-amilasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 1 y 14; y al menos una proteasa que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 19.
[0197] En una realización particular, la composición detergente comprende; al menos una variante de alfa-amilasa que comprende las siguientes modificaciones: H1*+N54S+V56T+G109A+F113Q+R116Q Q172N+A 174S+G182*+D183*+N195F+V206L+A265G+K391A+P473R+G476K, en donde la numeración es según SEQ ID NO: 1, la variante de alfa-amilasa es una variante de alfa-amilasa de una alfa-amilasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 1 y 14; y al menos una proteasa que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 19.
[0199] En una realización particular, la composición detergente comprende; al menos una variante de alfa-amilasa que comprende las siguientes modificaciones: H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+F113Q W167F+Q172R+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K, en donde la numeración es según SEQ ID NO: 1, la variante de alfa-amilasa es una variante de alfa-amilasa de una alfa-amilasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 1 y 14; y al menos una proteasa que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 19.
[0201] En una realización particular, la composición detergente comprende; al menos una variante de alfa-amilasa que comprende las siguientes modificaciones: H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+R116H+T134E+W167F+Q172G+L173V+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L G255A+K391A+G476K, en donde la numeración es según SEQ ID NO: 1, en donde la variante de alfa-amilasa es una variante de alfa-amilasa de una alfa-amilasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 1 y 14; y al menos una proteasa que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 19.
[0203] En una realización particular, la composición detergente comprende; al menos una variante de alfa-amilasa que comprende las siguientes modificaciones: H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+R116H+T134E+W167F+Q172G+L173V+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L G255A+K391A+Q 395P+T444Q+P473R+G476K, en donde la numeración es según SEQ ID NO: 1, la variante de alfa-amilasa es una variante de alfa-amilasa de una alfa-amilasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6 o el 100% con SEQ ID NO: 1 y 14; y al menos una proteasa que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6 o el 100% con SEQ ID NO: 19.
[0205] En una realización particular, la composición detergente comprende; al menos una variante de alfa-amilasa que comprende las siguientes modificaciones: H1*+N54S+V56T+G109A+T134E A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K, en donde la numeración es según SEQ ID NO: 1, la variante de alfa-amilasa es una variante de alfa-amilasa de una alfa-amilasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6 o el 100% con SEQ ID NO: 1 y 14; y al menos una proteasa que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6 o el 100% con SEQ ID NO: 19.
[0207] En una realización particular, la composición detergente comprende; al menos una variante de alfa-amilasa que comprende las siguientes modificaciones: H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+A174S+ G182*+D183*+N195F+V206L+G255A+K391A+G476K, en donde la numeración es según SEQ ID NO: 1, la variante de alfa-amilasa es una variante de alfa-amilasa de una alfa-amilasa parental que tiene una identidad de secuencia al menos el 70%, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 1 y 14; y al menos una proteasa que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 19.
[0209] En una realización particular, la composición detergente comprende; al menos una variante de alfa-amilasa que comprende las siguientes modificaciones: H1*+N54S+V56T+G109A+W167F+Q172E+L173P+A174K+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K (numeración según SEQ ID NO: 1, en donde la variante de alfa-amilasa es una variante de alfa-amilasa de una alfa-amilasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6 o el 100% con SEQ ID NO: 1 y 14; y al menos una proteasa que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6 o el 100% con SEQ ID NO: 19.
[0211] En una realización particular, la composición detergente comprende; al menos una variante de alfa-amilasa que comprende las siguientes modificaciones: H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+ Q172K+A174*+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K, en donde la numeración es según SEQ ID NO: 1, la variante de alfa-amilasa es una variante de alfa-amilasa de una alfa-amilasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6 o el 100% con SEQ ID NO: 1 y 14; y al menos una proteasa que tiene al menos el 70%, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6 o el 100% con SEQ ID NO: 20.
[0213] En una realización particular, la composición detergente comprende: al menos una variante de alfa-amilasa que comprende las siguientes modificaciones: H1*+N54S+V56T+G109A+R116H+ A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K, en donde la numeración es según SEQ ID NO: 1, la variante de alfa-amilasa es una variante de alfa-amilasa de una alfa-amilasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 1 y 14; y al menos una proteasa que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 20.
[0215] En una realización particular, la composición detergente comprende; al menos una variante de alfa-amilasa que comprende las siguientes modificaciones: H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+F113Q+ R116Q+W167F+Q172G+A174S+G182*+D183*+G184T+N195F+V206L+K391A+P473R+G476K, en donde la numeración es según SEQ ID NO: 1, la variante de alfa-amilasa es una variante de alfa-amilasa de una alfa-amilasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 1 y 14; y al menos una proteasa que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 20.
[0217] En una realización particular, la composición detergente comprende; al menos una variante de alfa-amilasa que comprende las siguientes modificaciones: H1*+N54S+V56T+G109A+F113Q+R116Q+ Q172N+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+A265G+K391A+P473R+G476K, en donde la numeración es según SEQ ID NO: 1, la variante de alfa-amilasa es una variante de alfa-amilasa de una alfa-amilasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 1 y 14; y al menos una proteasa que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 20.
[0218] En una realización particular, la composición detergente comprende: al menos una variante de alfa-amilasa que comprende las siguientes modificaciones: H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+F113Q W167F+Q172R+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K, en donde la numeración es según SEQ ID NO: 1, la variante de alfa-amilasa es una variante de alfa-amilasa de una alfa-amilasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 1 y 14; y al menos una proteasa que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 20.
[0220] En una realización particular, las composiciones detergentes comprende: al menos una variante de alfa-amilasa que comprende las siguientes modificaciones: H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+ R116H+T134E+W167F+Q172G+L173V+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+G255A+K391A+G 476K, en donde la numeración es según SEQ ID NO: 1, la variante de alfa-amilasa es una variante de alfa-amilasa de una alfa-amilasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 1 y 14; y al menos una proteasa que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 20.
[0222] En una realización particular, la composición detergente comprende; al menos una variante de alfa-amilasa que comprende las siguientes modificaciones: H1*+N54S+V56T+K72R+G109A R116H+T134E+W167F+Q172G+L173V+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+G255A+K391A+ Q395P+T444Q+P473R+G476K, en donde la numeración es según SEQ ID NO: 1, la variante de alfa-amilasa es una variante de alfa-amilasa de una alfa-amilasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 1 y 14; y al menos una proteasa que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 20.
[0224] En una realización particular, la composición detergente comprende; al menos una variante de alfa-amilasa que comprende las siguientes modificaciones: H1*+N54S+V56T+G109A+T134E+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K, en donde la numeración es según SEQ ID NO: 1, la variante de alfa-amilasa es una variante de alfa-amilasa de una alfa-amilasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 1 y 14; y al menos una proteasa que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 20.
[0226] En una realización particular, la composición detergente comprende; al menos una variante de alfa-amilasa que comprende las siguientes modificaciones: H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+ A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+G255A+K391A+G476K, en donde la numeración es según SEQ ID NO: 1, la variante de alfa-amilasa es una variante de alfa-amilasa de una alfa-amilasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 1 y 14; y al menos una proteasa que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 20.
[0227] En una realización particular, la composición detergente comprende; al menos una variante de alfa-amilasa que comprende las siguientes modificaciones: H1*+N54S+V56T+G109A+W167F+Q172E+L173P+A174K+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K, en donde la numeración es según SEQ ID NO: 1, la variante de alfa-amilasa es una variante de alfa-amilasa de una alfa-amilasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 1 y 14; y al menos una proteasa que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 20.
[0229] En una realización particular, la composición detergente comprende; al menos una variante de alfa-amilasa que comprende las siguientes modificaciones: H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K, en donde la numeración es según SEQ ID NO: 1, la variante de alfa-amilasa es una variante de alfa-amilasa de una alfa-amilasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6 o el 100% con SEQ ID NO: 1 y 14; y al menos una proteasa que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6 o el 100% con SEQ ID NO: 23.
[0231] En una realización particular, la composición detergente comprende: al menos una variante de alfa-amilasa que comprende las siguientes modificaciones: H1*+N54S+V56T+G109A+R116H+ A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K, en donde la numeración es según SEQ ID NO: 1, la variante de alfa-amilasa es una variante de alfa-amilasa de una alfa-amilasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6 o el 100% con SEQ ID NO: 1 y 14; y al menos una proteasa que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6 o el 100% con SEQ ID NO: 23.
[0233] En una realización particular, la composición detergente comprende; al menos una variante de alfa-amilasa que comprende las siguientes modificaciones: H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+F113Q+ R116Q+W167F+Q172G+A174S+G182*+D183*+G184T+N195F+V206L+K391A+P473R+G476K, en donde la numeración es según SEQ ID NO: 1, la variante de alfa-amilasa es una variante de alfa-amilasa de una alfa-amilasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 1 y 14; y al menos una proteasa que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 23.
[0235] En una realización particular, la composición detergente comprende; al menos una variante de alfa-amilasa que comprende las siguientes modificaciones: H1*+N54S+V56T+G109A+F113Q+R116Q+ Q172N+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+A265G+K391A+P473R+G476K, en donde la numeración es según SEQ ID NO: 1, la variante de alfa-amilasa es una variante de alfa-amilasa de una alfa-amilasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 1 y 14; y al menos una proteasa que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 23.
[0236] En una realización particular, la composición detergente comprende; al menos una variante de alfa-amilasa que comprende las siguientes modificaciones: H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+F113Q+W167F+Q172R+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476 K, en donde la numeración es según SEQ ID NO: 1, la variante de alfa-amilasa es una variante de alfa-amilasa de una alfa-amilasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 1 y 14; y al menos una proteasa que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 23.
[0238] En una realización particular, las composiciones detergentes comprende; al menos una variante de alfa-amilasa que comprende las siguientes modificaciones: H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+R116H+T134E+W167F+Q172G+L173V+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L G255A+K391A+G 476K, en donde la numeración es según SEQ ID NO: 1, la variante de alfa-amilasa es una variante de alfa-amilasa de una alfa-amilasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 1 y 14; y al menos una proteasa que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 23.
[0240] En una realización particular, la composición detergente comprende; al menos una variante de alfa-amilasa que comprende las siguientes modificaciones: H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+R116H+T134E+W167F+Q172G+L173V+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L G255A+K391A+ Q395P+T444Q+P473R+G476K, en donde la numeración es según SEQ ID NO: 1, la variante de alfa-amilasa es una variante de alfa-amilasa de una alfa-amilasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 1 y 14; y al menos una proteasa que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 23.
[0242] En una realización particular, la composición detergente comprende; al menos una variante de alfa-amilasa que comprende las siguientes modificaciones: H1*+N54S+V56T+G109A+T134E+ A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K, en donde la numeración es según SEQ ID NO: 1, la variante de alfa-amilasa es una variante de alfa-amilasa de una alfa-amilasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6 o el 100% con SEQ ID NO: 1 y 14; y al menos una proteasa que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6 o el 100% con SEQ ID NO: 23.
[0244] En una realización particular, la composición detergente comprende; al menos una variante de alfa-amilasa que comprende las siguientes modificaciones: H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+G255A+K391A+G476K, en donde la numeración es según SEQ ID NO: 1, la variante de alfa-amilasa es una variante de alfa-amilasa de una alfa-amilasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6 o el 100% con SEQ ID NO: 1 y 14; y al menos una proteasa que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6 o el 100% con SEQ ID NO: 23.
[0245] En una realización particular, la composición detergente comprende; al menos una variante de alfa-amilasa que comprende las siguientes modificaciones: H1*+N54S+V56T+G109A+W167F+ Q172E+L173P+A174K+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K, en donde la numeración es según SEQ ID NO: 1, la variante de alfa-amilasa es una variante de alfa-amilasa de una alfa-amilasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 1 y 14; y al menos una proteasa que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 23.
[0246] En una realización particular, la composición detergente comprende al menos una variante de proteasa que es una variante TY-145 (SEQ ID NO: 2) que comprende una sustitución de uno o más aminoácidos en el bucle correspondiente a las posiciones 171, 173, 175, 179 o 180 de SEQ ID NO: 2. En otra realización, la al menos una variante de proteasa de la composición detergente según la invención comprende una sustitución en dos, tres, cuatro o cinco posiciones correspondientes a las posiciones 171, 173, 175, 179 o 180 de SEQ ID NO: 2. Una realización concierne a una composición detergente, en donde la al menos una variante de proteasa comprende una sustitución de uno o más aminoácidos en el bucle correspondiente a las posiciones 171, 173, 175, 179 o 180 de SEQ ID NO: 1, en donde la variante tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, al menos el 75%, al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6%, pero menos del 100% con SEQ ID NO: 2.
[0247] En una realización particular, la proteasa es una variante en (b) comprende una sustitución en al menos una posición correspondiente a las posiciones 171, 173, 175, 179 o 180, y en donde el aminoácido en la posición correspondiente a la posición 171 de SEQ ID NO: 2 se selecciona del grupo que consiste en W, K, E, D y N, es decir, X171W, X171K, X171E, X171D y X171N; y/o el aminoácido en la posición correspondiente a la posición 173 de SEQ ID NO: 2 es P; y/o el aminoácido en la posición correspondiente a la posición 175 de SEQ ID NO: 2 se selecciona del grupo que consiste en A, V y P, es decir, X175A, X175V y X175P; y/o el aminoácido en la posición correspondiente a la posición 179 de SEQ ID NO: 2 se selecciona del grupo que consiste en C, V, Q, S, T, E, H, K, M, N, Y y A, es decir, X179C, X179V, X179Q, X179S, X179T, X179E, X179H, X179K, X179M, X179N, X179Y y X179A; y/o el aminoácido en la posición correspondiente a la posición 180 de SEQ ID NO: 2 es Y.
[0249] En una realización particular, la variante de proteasa en (b) comprende una sustitución seleccionada de S173P, S175P o F180Y, en donde las posiciones corresponden a las posiciones de SEQ ID NO: 2.
[0251] En una realización particular, la composición detergente comprende; al menos una variante de alfa-amilasa que comprende las siguientes modificaciones: H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K, en donde la numeración es según SEQ ID NO: 1, la variante de alfa-amilasa es una variante de alfa-amilasa de una alfa-amilasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 1 y 14; y al menos una variante de proteasa que comprende una o más de las siguientes sustituciones: S173P, S175P o F180Y (numeración según SEQ ID NO: 2, en donde la variante de proteasa es una variante de proteasa de una proteasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 2.
[0252] En una realización particular, la composición detergente comprende: al menos una variante de alfa-amilasa que comprende las siguientes modificaciones: H1*+N54S+V56T+G109A+R116H+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K, en donde la numeración es según SEQ ID NO: 1, la variante de alfa-amilasa es una variante de alfa-amilasa de una alfa-amilasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 1 y 14; y al menos una variante de proteasa que comprende una o más de las siguientes sustituciones: S173P, S175P o F180Y (numeración según SEQ ID NO: 2, en donde la variante de proteasa es una variante de proteasa de una proteasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 2.
[0253] En una realización particular, la composición detergente comprende; al menos una variante de alfa-amilasa que comprende las siguientes modificaciones: H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+F113Q+R116Q+W167F+Q172G+A174S+G182*+D183*+G184T+N195F+V206 L+K391A+P473R+G476K, en donde la numeración es según SEQ ID NO: 1, la variante de alfa-amilasa es una variante de alfa-amilasa de una alfa-amilasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 1 y 14; y al menos una variante de proteasa que comprende una o más de las siguientes sustituciones: S173P, S175P o F180Y (numeración según SEQ ID NO: 2), en donde la variante de proteasa es una variante de proteasa de una proteasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 2.
[0255] En una realización particular, la composición detergente comprende; al menos una variante de alfa-amilasa que comprende las siguientes modificaciones: H1*+N54S+V56T+G109A+F113Q+R116Q+Q172N+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+A265G+K391A+P473 R+G476K, en donde la numeración es según SEQ ID NO: 1, en donde la variante de alfa-amilasa es una variante de alfa-amilasa de una alfa-amilasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 1 y 14; y al menos una variante de proteasa que comprende una o más de las siguientes sustituciones: S173P, S175P o F180Y (numeración según SEQ ID NO: 2), en donde la variante de proteasa es una variante de proteasa de una proteasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 2.
[0257] En una realización particular, la composición detergente comprende; al menos una variante de alfa-amilasa que comprende las siguientes modificaciones: H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+F113Q+W167F+Q172R+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476 K, en donde la numeración es según SEQ ID NO: 1, la variante de alfa-amilasa es una variante de alfa-amilasa de una alfa-amilasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 1 y 14; y al menos una variante de proteasa que comprende una o más de las siguientes sustituciones: S173P, S175P o F180Y (numeración según SEQ ID NO: 2), en donde la variante de proteasa es una variante de proteasa de una proteasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 2.
[0259] En una realización particular, la composición detergente comprende; al menos una variante de alfa-amilasa que comprende las siguientes modificaciones: H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+R116H+T134E+W167F+Q172G+L173V+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L G255A+K391A+G476K, en donde la numeración es según SEQ ID NO: 1, la variante de alfa-amilasa es una variante de alfa-amilasa de una alfa-amilasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 1 y 14; y al menos una variante de proteasa que comprende una o más de las siguientes sustituciones: S173P, S175P o F180Y (numeración según SEQ ID NO: 2), en donde la variante de proteasa es una variante de proteasa de una proteasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 2.
[0261] En una realización particular, la composición detergente comprende; al menos una variante de alfa-amilasa que comprende las siguientes modificaciones: H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+R116H+T134E+W167F+Q172G+L173V+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L G255A+K391A+Q395P+T444Q+P473R+G476K, en donde la numeración es según SEQ ID NO: 1, la variante de alfa-amilasa es una variante de alfa-amilasa de una alfa-amilasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 1 y 14; y al menos una variante de proteasa que comprende una o más de las siguientes sustituciones: S173P, S175P o F180Y (numeración según SEQ ID NO: 2), en donde la variante de proteasa es una variante de proteasa de una proteasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 2.
[0263] En una realización particular, la composición detergente comprende; al menos una variante de alfa-amilasa que comprende las siguientes modificaciones: H1*+N54S+V56T+G109A+T134E+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K, en donde la numeración es según SEQ ID NO: 1, la variante de alfa-amilasa es una variante de alfa-amilasa de una alfa-amilasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 1 y 14; y al menos una variante de proteasa que comprende una o más de las siguientes sustituciones: S173P, S175P o F180Y (numeración según SEQ ID NO: 2), en donde la variante de proteasa es una variante de proteasa de una proteasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 2.
[0264] En una realización particular, la composición detergente comprende; al menos una variante de alfa-amilasa que comprende las siguientes modificaciones: H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+G255A+K391A+G476K, en donde la numeración es según SEQ ID NO: 1, la variante de alfa-amilasa es una variante de alfa-amilasa de una alfa-amilasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 1 y 14; y al menos una variante de proteasa que comprende una o más de las siguientes sustituciones: S173P, S175P o F180Y (numeración según SEQ ID NO: 2), en donde la variante de proteasa es una variante de proteasa de una proteasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 2.
[0265] En una realización particular, la composición detergente comprende; al menos una variante de alfa-amilasa que comprende las siguientes modificaciones: H1*+N54S+V56T+G109A+W167F+Q172E+L173P+A174K+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K, en donde la numeración es según SEQ ID NO: 1, la variante de alfa-amilasa es una variante de alfa-amilasa de una alfa-amilasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 1 y 14; y al menos una variante de proteasa que comprende una o más de las siguientes sustituciones: S173P, S175P o F180Y (numeración según SEQ ID NO: 2), en donde la variante de proteasa es una variante de proteasa de una proteasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 2.
[0266] En una realización, la composición detergente comprende al menos una de proteasa que es una proteasa Savinase (SEQ ID NO: 3).
[0268] En una realización particular, la composición detergente comprende; al menos una variante de alfa-amilasa que comprende las siguientes modificaciones: H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K, en donde la numeración es según SEQ ID NO: 1, la variante de alfa-amilasa es una variante de alfa-amilasa de una alfa-amilasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 1 y 14; y al menos una proteasa de SEQ ID NO: 3.
[0270] En una realización particular, la composición detergente comprende: al menos una variante de alfa-amilasa que comprende las siguientes modificaciones: H1*+N54S+V56T+G109A+R116H+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K, en donde la numeración es según SEQ ID NO: 1, la variante de alfa-amilasa es una variante de alfa-amilasa de una alfa-amilasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 1 y 14; y al menos una proteasa de SEQ ID NO: 3.
[0272] En una realización particular, la composición detergente comprende; al menos una variante de alfa-amilasa que comprende las siguientes modificaciones: H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+F113Q+R116Q+W167F+Q172G+A174S+G182*+D183*+G184T+N195F+V206 L+K391A+P473R+G476K, en donde la numeración es según SEQ ID NO: 1, la variante de alfa-amilasa es una variante de alfa-amilasa de una alfa-amilasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 1 y 14; y al menos una proteasa de SEQ ID NO: 3.
[0274] En una realización particular, la composición detergente comprende; al menos una variante de alfa-amilasa que comprende las siguientes modificaciones: H1*+N54S+V56T+G109A+F113Q+R116Q+Q172N+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+A265G+K391A+P473 R+G476K, en donde la numeración es según SEQ ID NO: 1, la variante de alfa-amilasa es una variante de alfaamilasa de una alfa-amilasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 1 y 14; y al menos una proteasa de SEQ ID NO: 3.
[0276] En una realización particular, la composición detergente comprende; al menos una variante de alfa-amilasa que comprende las siguientes modificaciones: H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+F113Q+W167F+Q172R+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476 K, en donde la numeración es según SEQ ID NO: 1, la variante de alfa-amilasa es una variante de alfa-amilasa de una alfa-amilasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 1 y 14; y al menos una proteasa de SEQ ID NO: 3.
[0278] En una realización particular, la composición detergente comprende; al menos una variante de alfa-amilasa que comprende las siguientes modificaciones: H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+R116H+T134E+W167F+Q172G+L173V+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L G255A+K391A+G 476K, en donde la numeración es según SEQ ID NO: 1, la variante de alfa-amilasa es una variante de alfa-amilasa de una alfa-amilasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 1 y 14; y al menos una proteasa de SEQ ID NO: 3.
[0280] En una realización particular, la composición detergente comprende; al menos una variante de alfa-amilasa que comprende las siguientes modificaciones: H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+R116H+T134E+W167F+Q172G+L173V+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L G255A+K391A+Q395P+T 444Q+P473R+G476K, en donde la numeración es según SEQ ID NO: 1, la variante de alfa-amilasa es una variante de alfa-amilasa de una alfa-amilasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 1 y 14; y al menos una proteasa de SEQ ID NO: 3.
[0282] En una realización particular, la composición detergente comprende; al menos una variante de alfa-amilasa que comprende las siguientes modificaciones: H1*+N54S+V56T+G109A+T134E+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K, en donde la numeración es según SEQ ID NO: 1, la variante de alfa-amilasa es una variante de alfa-amilasa de una alfa-amilasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 1 y 14; y al menos una proteasa de SEQ ID NO: 3.
[0284] En una realización particular, la composición detergente comprende; al menos una variante de alfa-amilasa que comprende las siguientes modificaciones: H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+G255A+K391A+G476K, en donde la numeración es según SEQ ID NO: 1, la variante de alfa-amilasa es una variante de alfa-amilasa de una alfa-amilasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 1 y 14; y al menos una proteasa de SEQ ID NO: 3.
[0286] En una realización particular, la composición detergente comprende; al menos una variante de alfa-amilasa que comprende las siguientes modificaciones: H1*+N54S+V56T+G109A+W167F+Q172E+L173P+A174K+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K, en donde la numeración es según SEQ ID NO: 1, la variante de alfa-amilasa es una variante de alfa-amilasa de una alfa-amilasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 1 y 14; y al menos una proteasa de SEQ ID NO: 3.
[0288] En una realización, la composición detergente comprende al menos una variante de proteasa que es una variante Savinase (SEQ ID NO: 3). La variante Savinase es una variante de una proteasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, al menos el 75%, al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6%, pero menos del 100% con SEQ ID NO: 3.
[0290] Por tanto, en una realización, la proteasa es una variante de proteasa que comprende una modificación en una o más posiciones correspondientes a las posiciones 32, 33, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 58, 59,60, 61, 62, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 116, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 150, 152, 153, 154, 155, 156, 158, 159, 160, 161, 164, 169, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 197, 198, 203, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215 y 216 en comparación con la proteasa en SEQ ID NO:3, en donde dicha variante de proteasa tiene una identidad de secuencia de al menos el 75% con SEQ ID NO: 3.
[0292] En una realización particular, la modificación en al menos una posición en dicha variante de proteasa en (c) se selecciona del grupo que consiste en: 9, 15, 27, 42, 52, 55, 56, 59, 60, 66, 74, 85, 97, 99, 101, 102, 104, 116, 118, 154, 156, 157, 158, 161, 164, 176, 179, 182, 185, 188, 198, 199, 200, 203, 206, 210, 211, 212, 216, 230, 232, 239, 242, 250, 253, 255, 256 y 269, en donde la numeración es según SEQ ID NO: 3.
[0294] En una realización preferida, la variante de proteasa comprende una o más de las siguientes sustituciones X9E, X9R, X15T, X27R, X42R, X52S, X55P, X56P, X59D, X59E, X60D, X60E, X66A, X74D, X85N, X85R, X97A, X97E, X97D, X99E, X99D, X99G, X99N, X99H, X99M, X101A, X102I, X102N, X104A, X116V, X116R, X154D, X156E, X157S, X157D, X157P, X158E, X161A, X164S, X176E, X179E, X182E, X185N, X188P, X198D, X199I, X200L, X203W, X206G, X210V, X211D, X211Q, X211E, X212D, X212E, X212S, X216S, X216A, X230H, X239R, X242D, X250D, X253D, X255W, X255D, X255E, X256E, X256D y X269H, en donde la numeración es según SEQ ID NO: 3.
[0296] En una realización preferida adicional, la variante de proteasa tiene actividad de proteasa y comprende una o más de las siguientes sustituciones: S9R, A15T, V68A, N218D o Q245R (numeración según SEQ ID NO: 3), en donde la variante de proteasa es una variante de proteasa de una proteasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 3.
[0298] En una realización particular, la composición detergente comprende; al menos una variante de alfa-amilasa que comprende las siguientes modificaciones: H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K, en donde la numeración es según SEQ ID NO: 1, la variante de alfa-amilasa es una variante de alfa-amilasa de una alfa-amilasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 1 y 14; y al menos una variante de proteasa que comprende una o más de las siguientes sustituciones: S9R, A15T, V68A, N218D o Q245R (numeración según SEQ ID NO: 3), en donde la variante de proteasa es una variante de proteasa de una proteasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 3.
[0299] En una realización particular, la composición detergente comprende: al menos una variante de alfa-amilasa que comprende las siguientes modificaciones: H1*+N54S+V56T+G109A+R116H+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K, en donde la numeración es según SEQ ID NO: 1, la variante de alfa-amilasa es una variante de alfa-amilasa de una alfa-amilasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 1 y 14; y al menos una variante de proteasa que comprende una o más de las siguientes sustituciones: S9R, A15T, V68A, N218D o Q245R (numeración según SEQ ID NO: 3), en donde la variante de proteasa es una variante de proteasa de una proteasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 3.
[0301] En una realización particular, la composición detergente comprende; al menos una variante de alfa-amilasa que comprende las siguientes modificaciones: H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+F113Q+R116Q+W167F+Q172G+A174S+G182*+D183*+G184T+N195F+V206 L+K391A+P473R+G476K, en donde la numeración es según SEQ ID NO: 1, la variante de alfa-amilasa es una variante de alfa-amilasa de una alfa-amilasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 1 y 14; y al menos una variante de proteasa que comprende una o más de las siguientes sustituciones: S9R, A15T, V68A, N218D o Q245R (numeración según SEQ ID NO: 3), en donde la variante de proteasa es una variante de proteasa de una proteasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 3.
[0303] En una realización particular, la composición detergente comprende; al menos una variante de alfa-amilasa que comprende las siguientes modificaciones: H1*+N54S+V56T+G109A+F113Q+R116Q+Q172N+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+A265G+K391A+P473 R+G476K, en donde la numeración es según SEQ ID NO: 1, la variante de alfa-amilasa es una variante de alfaamilasa de una alfa-amilasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 1 y 14; y al menos una variante de proteasa que comprende una o más de las siguientes sustituciones: S9R, A15T, V68A, N218D o Q245R (numeración según SEQ ID NO: 3), en donde la variante de proteasa es una variante de proteasa de una proteasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 3.
[0304] En una realización particular, la composición detergente comprende; al menos una variante de alfa-amilasa que comprende las siguientes modificaciones: H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+F113Q+W167F+Q172R+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476 K, en donde la numeración es según SEQ ID NO: 1, la variante de alfa-amilasa es una variante de alfa-amilasa de una alfa-amilasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 1 y 14; y al menos una variante de proteasa que comprende una o más de las siguientes sustituciones: S9R, A15T, V68A, N218D o Q245R (numeración según SEQ ID NO: 3), en donde la variante de proteasa es una variante de proteasa de una proteasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 3.
[0306] En una realización particular, la composición detergente comprende; al menos una variante de alfa-amilasa que comprende las siguientes modificaciones: H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+R116H+T134E+W167F+Q172G+L173V+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L G255A+K391A+G476K, en donde la numeración es según SEQ ID NO: 1, la variante de alfa-amilasa es una variante de alfa-amilasa de una alfa-amilasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 1 y 14; y al menos una variante de proteasa que comprende una o más de las siguientes sustituciones: S9R, A15T, V68A, N218D o Q245R (numeración según SEQ ID NO: 3), en donde la variante de proteasa es una variante de proteasa de una proteasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 3.
[0308] En una realización particular, la composición detergente comprende; al menos una variante de alfa-amilasa que comprende las siguientes modificaciones: H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+R116H+T134E+W167F+Q172G+L173V+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L G255A+K391A+Q395P+T444Q+P473R+G476K, en donde la numeración es según SEQ ID NO: 1, la variante de alfa-amilasa es una variante de alfa-amilasa de una alfa-amilasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 1 y 14; y al menos una variante de proteasa que comprende una o más de las siguientes sustituciones: S9R, A15T, V68A, N218D o Q245R (numeración según SEQ ID NO: 3), en donde la variante de proteasa es una variante de proteasa de una proteasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 3.
[0309] En una realización particular, la composición detergente comprende; al menos una variante de alfa-amilasa que comprende las siguientes modificaciones: H1*+N54S+V56T+G109A+T134E+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K, en donde la numeración es según SEQ ID NO: 1, la variante de alfa-amilasa es una variante de alfa-amilasa de una alfa-amilasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 1 y 14; y al menos una variante de proteasa que comprende una o más de las siguientes sustituciones: S9R, A15T, V68A, N218D o Q245R (numeración según SEQ ID NO: 3), en donde la variante de proteasa es una variante de proteasa de una proteasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 3.
[0311] En una realización particular, la composición detergente comprende; al menos una variante de alfa-amilasa que comprende las siguientes modificaciones: H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+G255A+K391A+G476K, en donde la numeración es según SEQ ID NO: 1, la variante de alfa-amilasa es una variante de alfa-amilasa de una alfa-amilasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 1 y 14; y al menos una variante de proteasa que comprende una o más de las siguientes sustituciones: S9R, A15T, V68A, N218D o Q245R (numeración según SEQ ID NO: 3), en donde la variante de proteasa es una variante de proteasa de una proteasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 3.
[0313] En una realización particular, la composición detergente comprende; al menos una variante de alfa-amilasa que comprende las siguientes modificaciones: H1*+N54S+V56T+G109A+W167F+Q172E+L173P+A174K+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K, en donde la numeración es según SEQ ID NO: 1, la variante de alfa-amilasa es una variante de alfa-amilasa de una alfa-amilasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 1 y 14; y al menos una variante de proteasa que comprende una o más de las siguientes sustituciones: S9R, A15T, V68A, N218D o Q245R (numeración según SEQ ID NO: 3), en donde la variante de proteasa es una variante de proteasa de una proteasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 3.
[0314] En una realización preferida adicional, la variante de proteasa tiene una actividad de proteasa y se selecciona del grupo que consiste en: (a) X9R X15T X68A X218D X245R; (b) X9R X15T X68A X245R; (c) X61E X194P X205I X261D; (d) X61D X205I X245R; (e) X61E X194P X205I X261D; (f) X87N X118V X128L X129Q X130A; (g) X87N X101M X118V X128L X129Q X130A; (h) X76D X87R X118R X128L+ X129Q X130A; (i) X22A+ X62D X101G X188D X232V X245R; (j) X103A X104I, (k) X22R X101G X232V X245R; (l) X103A X104I X156D; (m) X103A X104I X261E; (n) X62D X245R; (o) X101N X128A X217Q; (p) X101E X217Q; (q) X101E X217D; (r) X9E X43R X262E; (s) X76D X43R X209W; (t) X205I X206L X209W; (u) X185E X188E X205I; (v) X256D X261W X262E; (w) X191N X209W; (x) X261E X262E; (y) X261E X262D; y (z) X167A X170S X194P, en donde las posiciones corresponden a las posiciones de SEQ ID NO: 23, y la proteasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 23.
[0316] En una realización particular, la composición detergente comprende; al menos una variante de alfa-amilasa que comprende las siguientes modificaciones: H1*+N54S+V56T+G109A+Q169E+Q172K+A174*+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K, en donde la numeración es según SEQ ID NO: 1, la variante de alfa-amilasa es una variante de alfa-amilasa de una alfa-amilasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 1 y 14; y al menos una variante de proteasa tiene una actividad de proteasa y se selecciona del grupo que consiste en: (a) X9R X15T X68A X218D X245R; (b) X9R X15T X68A X245R; (c) X61E X194P X205I X261D; (d) X61D X205I X245R; (e) X61E X194P X205I X261D; (f) X87N X118V X128L X129Q X130A; (g) X87N X101M X118V X128L X129Q X130A; (h) X76D X87R X118R X128L+ X129Q X130A; (i) X22A+ X62D X101G X188D X232V X245R; (j) X103A X104I, (k) X22R X101G X232V X245R; (l) X103A X104I X156D; (m) X103A X104I X261E; (n) X62D X245R; (o) X101N X128A X217Q; (p) X101E X217Q; (q) X101E X217D; (r) X9E X43R X262E; (s) X76D X43R X209W; (t) X205I X206L X209W; (u) X185E X188E X205I; (v) X256D X261W X262E; (w) X191N X209W; (x) X261E X262E; (y) X261E X262D; y (z) X167A X170S X194P, en donde las posiciones corresponden a las posiciones de SEQ ID NO: 23, y la proteasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 23.
[0318] En una realización particular, la composición detergente comprende: al menos una variante de alfa-amilasa que comprende las siguientes modificaciones: H1*+N54S+V56T+G109A+R116H+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K, en donde la numeración es según SEQ ID NO: 1, la variante de alfa-amilasa es una variante de alfa-amilasa de una alfa-amilasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 1 y 14; y al menos una variante de proteasa que comprende una o más de las siguientes sustituciones: S9R, A15T, V68A, N218D o Q245R (numeración según SEQ ID NO: 3), en donde la variante de proteasa tiene una actividad de proteasa y se selecciona del grupo que consiste en: (a) X9R X15T X68A X218D X245R; (b) X9R X15T X68A X245R; (c) X61E X194P X205I X261D; (d) X61D X205I X245R; (e) X61E X194P X205I X261D; (f) X87N X118V X128L X129Q X130A; (g) X87N X101M X118V X128L X129Q X130A; (h) X76D X87R X118R X128L+ X129Q X130A; (i) X22A+ X62D X101G X188D X232V X245R; (j) X103A X104I, (k) X22R X101G X232V X245R; (l) X103A X104I X156D; (m) X103A X104I X261E; (n) X62D X245R; (o) X101N X128A X217Q; (p) X101E X217Q; (q) X101E X217D; (r) X9E X43R X262E; (s) X76D X43R X209W; (t) X205I X206L X209W; (u) X185E X188E X205I; (v) X256D X261W X262E; (w) X191N X209W; (x) X261E X262E; (y) X261E X262D; y (z) X167A X170S X194P, en donde las posiciones corresponden a las posiciones de SEQ ID NO: 23, y la proteasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 23.
[0320] En una realización particular, la composición detergente comprende; al menos una variante de alfa-amilasa que comprende las siguientes modificaciones: H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+F113Q+R116Q+W167F+Q172G+A 174S+G182*+D183*+G184T+N195F+V206L+K391A+P473R+G476K, en donde la numeración es según SEQ ID NO: 1, la variante de alfa-amilasa es una variante de alfa-amilasa de una alfa-amilasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 1 y 14; y al menos una variante de proteasa tiene una actividad de proteasa y se selecciona del grupo que consiste en: (a) X9R X15T X68A X218D X245R; (b) X9R X15T X68A X245R; (c) X61E X194P X205I X261D; (d) X61D X205I X245R; (e) X61E X194P X205I X261D; (f) X87N X118V X128L X129Q X130A; (g) X87N X101M X118V X128L X129Q X130A; (h) X76D X87R X118R X128L+ X129Q X130A; (i) X22A+ X62D X101G X188D X232V X245R; (j) X103A X104I, (k) X22R X101G X232V X245R; (l) X103A X104I X156D; (m) X103A X104I X261E; (n) X62D X245R; (o) X101N X128A X217Q; (p) X101E X217Q; (q) X101E X217D; (r) X9E X43R X262E; (s) X76D X43R X209W; (t) X205I X206L X209W; (u) X185E X188E X205I; (v) X256D X261W X262E; (w) X191N X209W; (x) X261E X262E; (y) X261E X262D; y (z) X167A X170S X194P, en donde las posiciones corresponden a las posiciones de SEQ ID NO: 23, y la proteasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 23.
[0322] En una realización particular, la composición detergente comprende; al menos una variante de alfa-amilasa que comprende las siguientes modificaciones: H1*+N54S+V56T+G109A+F113Q+R116Q+Q172N+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+A265G+K391A+P473 R+G476K, en donde la numeración es según SEQ ID NO: 1, la variante de alfa-amilasa es una variante de alfaamilasa de una alfa-amilasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 1 y 14; y al menos una variante de proteasa tiene una actividad de proteasa y se selecciona del grupo que consiste en: (a) X9R X15T X68A X218D X245R; (b) X9R X15T X68A X245R; (c) X61E X194P X205I X261D; (d) X61D X205I X245R; (e) X61E X194P X205I X261D; (f) X87N X118V X128L X129Q X130A; (g) X87N X101M X118V X128L X129Q X130A; (h) X76D X87R X118R X128L+ X129Q X130A; (i) X22A+ X62D X101G X188D X232V X245R; (j) X103A X104I, (k) X22R X101G X232V X245R; (l) X103A X104I X156D; (m) X103A X104I X261E; (n) X62D X245R; (o) X101N X128A X217Q; (p) X101E X217Q; (q) X101E X217D; (r) X9E X43R X262E; (s) X76D X43R X209W; (t) X205I X206L X209W; (u) X185E X188E X205I; (v) X256D X261W X262E; (w) X191N X209W; (x) X261E X262E; (y) X261E X262D; y (z) X167A X170S X194P, en donde las posiciones corresponden a las posiciones de SEQ ID NO: 23, y la proteasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 23.
[0324] En una realización particular, la composición detergente comprende; al menos una variante de alfa-amilasa que comprende las siguientes modificaciones: H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+F113Q+W167F+Q172R+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476 K, en donde la numeración es según SEQ ID NO: 1, la variante de alfa-amilasa es una variante de alfa-amilasa de una alfa-amilasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 1 y 14; y al menos una variante de proteasa tiene una actividad de proteasa y se selecciona del grupo que consiste en: (a) X9R X15T X68A X218D X245R; (b) X9R X15T X68A X245R; (c) X61E X194P X205I X261D; (d) X61D X205I X245R; (e) X61E X194P X205I X261D; (f) X87N X118V X128L X129Q X130A; (g) X87N X101M X118V X128L X129Q X130A; (h) X76D X87R X118R X128L+ X129Q X130A; (i) X22A+ X62D X101G X188D X232V X245R; (j) X103A X104I, (k) X22R X101G X232V X245R; (l) X103A X104I X156D; (m) X103A X104I X261E; (n) X62D X245R; (o) X101N X128A X217Q; (p) X101E X217Q; (q) X101E X217D; (r) X9E X43R X262E; (s) X76D X43R X209W; (t) X205I X206L X209W; (u) X185E X188E X205I; (v) X256D X261W X262E; (w) X191N X209W; (x) X261E X262E; (y) X261E X262D; y (z) X167A X170S X194P, en donde las posiciones corresponden a las posiciones de SEQ ID NO: 23, y la proteasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 23.
[0326] En una realización particular, las composiciones detergentes comprende; al menos una variante de alfa-amilasa que comprende las siguientes modificaciones: H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+R116H+T134E+W167F+Q172G+L173V+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L G255A+K391A+G476K, en donde la numeración es según SEQ ID NO: 1, la variante de alfa-amilasa es una variante de alfa-amilasa de una alfa-amilasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 1 y 14; y al menos una variante de proteasa tiene una actividad de proteasa y se selecciona del grupo que consiste en: (a) X9R X15T X68A X218D X245R; (b) X9R X15T X68A X245R; (c) X61E X194P X205I X261D; (d) X61D X205I X245R; (e) X61E X194P X205I X261D; (f) X87N X118V X128L X129Q X130A; (g) X87N X101M X118V X128L X129Q X130A; (h) X76D X87R X118R X128L+ X129Q X130A; (i) X22A+ X62D X101G X188D X232V X245R; (j) X103A X104I, (k) X22R X101G X232V X245R; (l) X103A X104I X156D; (m) X103A X104I X261E; (n) X62D X245R; (o) X101N X128A X217Q; (p) X101E X217Q; (q) X101E X217D; (r) X9E X43R X262E; (s) X76D X43R X209W; (t) X205I X206L X209W; (u) X185E X188E X205I; (v) X256D X261W X262E; (w) X191N X209W; (x) X261E X262E; (y) X261E X262D; y (z) X167A X170S X194P, en donde las posiciones corresponden a las posiciones de SEQ ID NO: 23, y la proteasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 23.
[0328] En una realización particular, la composición detergente comprende; al menos una variante de alfa-amilasa que comprende las siguientes modificaciones: H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+R116H+T134E+W167F+Q172G+L173V+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L G255A+K391A+Q395P+T444Q+P473R+G476K, en donde la numeración es según SEQ ID NO: 1, la variante de alfa-amilasa es una variante de alfa-amilasa de una alfa-amilasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 1 y 14; y al menos una variante de proteasa tiene una actividad de proteasa y se selecciona del grupo que consiste en: (a) X9R X15T X68A X218D X245R; (b) X9R X15T X68A X245R; (c) X61E X194P X205I X261D; (d) X61D X205I X245R; (e) X61E X194P X205I X261D; (f) X87N X118V X128L X129Q X130A; (g) X87N X101M X118V X128L X129Q X130A; (h) X76D X87R X118R X128L+ X129Q X130A; (i) X22A+ X62D X101G X188D X232V X245R; (j) X103A X104I, (k) X22R X101G X232V X245R; (l) X103A X104I X156D; (m) X103A X104I X261E; (n) X62D X245R; (o) X101N X128A X217Q; (p) X101E X217Q; (q) X101E X217D; (r) X9E X43R X262E; (s) X76D X43R X209W; (t) X205I X206L X209W; (u) X185E X188E X205I; (v) X256D X261W X262E; (w) X191N X209W; (x) X261E X262E; (y) X261E X262D; y (z) X167A X170S X194P, en donde las posiciones corresponden a las posiciones de SEQ ID NO: 23, y la proteasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 23.
[0330] En una realización particular, la composición detergente comprende; al menos una variante de alfa-amilasa que comprende las siguientes modificaciones: H1*+N54S+V56T+G109A+T134E+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K, en donde la numeración es según SEQ ID NO: 1, la variante de alfa-amilasa es una variante de alfa-amilasa de una alfa-amilasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 1 y 14; y al menos una variante de proteasa tiene una actividad de proteasa y se selecciona del grupo que consiste en: (a) X9R X15T X68A X218D X245R; (b) X9R X15T X68A X245R; (c) X61E X194P X205I X261D; (d) X61D X205I X245R; (e) X61E X194P X205I X261D; (f) X87N X118V X128L X129Q X130A; (g) X87N X101M X118V X128L X129Q X130A; (h) X76D X87R X118R X128L+ X129Q X130A; (i) X22A+ X62D X101G X188D X232V X245R; (j) X103A X104I, (k) X22R X101G X232V X245R; (l) X103A X104I X156D; (m) X103A X104I X261E; (n) X62D X245R; (o) X101N X128A X217Q; (p) X101E X217Q; (q) X101E X217D; (r) X9E X43R X262E; (s) X76D X43R X209W; (t) X205I X206L X209W; (u) X185E X188E X205I; (v) X256D X261W X262E; (w) X191 N X209W; (x) X261E X262E; (y) X261E X262D; y (z) X167A X170S X194P, en donde las posiciones corresponden a las posiciones de SEQ ID NO: 23, y la proteasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 23.
[0332] En una realización particular, la composición detergente comprende; al menos una variante de alfa-amilasa que comprende las siguientes modificaciones: H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+G255A+K391A+G476K, en donde la numeración es según SEQ ID NO: 1, la variante de alfa-amilasa es una variante de alfa-amilasa de una alfa-amilasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 1 y 14; y al menos una variante de proteasa tiene una actividad de proteasa y se selecciona del grupo que consiste en: (a) X9R X15T X68A X218D X245R; (b) X9R X15T X68A X245R; (c) X61E X194P X205I X261D; (d) X61D X205I X245R; (e) X61E X194P X205I X261D; (f) X87N X118V X128L X129Q X130A; (g) X87N X101M X118V X128L X129Q X130A; (h) X76D X87R X118R X128L+ X129Q X130A; (i) X22A+ X62D X101G X188D X232V X245R; (j) X103A X104I, (k) X22R X101G X232V X245R; (l) X103A X104I X156D; (m) X103A X104I X261E; (n) X62D X245R; (o) X101N X128A X217Q; (p) X101E X217Q; (q) X101E X217D; (r) X9E X43R X262E; (s) X76D X43R X209W; (t) X205I X206L X209W; (u) X185E X188E X205I; (v) X256D X261W X262E; (w) X191N X209W; (x) X261E X262E; (y) X261E X262D; y (z) X167A X170S X194P, en donde las posiciones corresponden a las posiciones de SEQ ID NO: 23, y la proteasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 23.
[0334] En una realización particular, la composición detergente comprende; al menos una variante de alfa-amilasa que comprende las siguientes modificaciones: H1*+N54S+V56T+G109A+W167F+Q172E+L173P+A174K+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K, en donde la numeración es según SEQ ID NO: 1, la variante de alfa-amilasa es una variante de alfa-amilasa de una alfa-amilasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 1 y 14; y al menos una variante de proteasa tiene una actividad de proteasa y se selecciona del grupo que consiste en: (a) X9R X15T X68A X218D X245R; (b) X9R X15T X68A X245R; (c) X61E X194P X205I X261D; (d) X61D X205I X245R; (e) X61E X194P X205I X261D; (f) X87N X118V X128L X129Q X130A; (g) X87N X101M X118V X128L X129Q X130A; (h) X76D X87R X118R X128L+ X129Q X130A; (i) X22A+ X62D X101G X188D X232V X245R; (j) X103A X104I, (k) X22R X101G X232V X245R; (l) X103A X104I X156D; (m) X103A X104I X261E; (n) X62D X245R; (o) X101N X128A X217Q; (p) X101E X217Q; (q) X101E X217D; (r) X9E X43R X262E; (s) X76D X43R X209W; (t) X205I X206L X209W; (u) X185E X188E X205I; (v) X256D X261W X262E; (w) X191N X209W; (x) X261E X262E; (y) X261E X262D; y (z) X167A X170S X194P, en donde las posiciones corresponden a las posiciones de SEQ ID NO: 23, y la proteasa parental que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, tal como al menos el 75%, por ejemplo, tal como al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98%, al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% con SEQ ID NO: 23. La composición detergente puede comprender, además, enzimas adicionales. Tales enzimas adicionales pueden ser alfa-amilasa, proteasa, lipasa, celulasa, beta-glucanasa o cualquier otra enzima. En particular, la composición detergente comprende además una o más enzimas adicionales seleccionadas del grupo de:
[0336] (A) una alfa-amilasa que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 5, o una variante de la misma que tiene una identidad de secuencia de al menos el 75%, pero menos del 100% con SEQ ID NO: 5, y en donde dicha variante de alfa-amilasa tiene actividad de alfa-amilasa;
[0338] (B) una alfa-amilasa que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 6, o una variante de la misma que tiene una identidad de secuencia de al menos el 75%, pero menos del 100% con SEQ ID NO: 6, y en donde dicha variante de alfa-amilasa tiene actividad de alfa-amilasa;
[0340] (C) una alfa-amilasa que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 7, o una variante de la misma que tiene una identidad de secuencia de al menos el 75%, pero menos del 100% con SEQ ID NO: 7, y en donde dicha variante de alfa-amilasa tiene actividad de alfa-amilasa;
[0342] (D) una alfa-amilasa que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 8, o una variante de la misma que tiene una identidad de secuencia de al menos el 75%, pero menos del 100% con SEQ ID NO: 8, y en donde dicha variante de alfa-amilasa tiene actividad de alfa-amilasa;
[0343] (E) una alfa-amilasa que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 9, o una variante de la misma que tiene una identidad de secuencia de al menos el 75%, pero menos del 100% con SEQ ID NO: 9, y en donde dicha variante de alfa-amilasa tiene actividad de alfa-amilasa;
[0344] (F) una alfa-amilasa que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 10, o una variante de la misma que tiene una identidad de secuencia de al menos el 75%, pero menos del 100% con SEQ ID NO: 10, y en donde dicha variante de alfa-amilasa tiene actividad de alfa-amilasa;
[0345] (G) una alfa-amilasa que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 13, o una variante de la misma que tiene una identidad de secuencia de al menos el 75%, pero menos del 100% con SEQ ID NO: 13, y en donde dicha variante de alfa-amilasa tiene actividad de alfa-amilasa;
[0346] (H) una alfa-amilasa que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 14, o una variante de la misma que tiene una identidad de secuencia de al menos el 75%, pero menos del 100% con SEQ ID NO: 14, y en donde dicha variante de alfa-amilasa tiene actividad de alfa-amilasa;
[0347] (I) una alfa-amilasa que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 11, o una variante de la misma que tiene una identidad de secuencia de al menos el 75%, pero menos del 100% con SEQ ID NO: 11, y en donde dicha variante de alfa-amilasa tiene actividad de alfa-amilasa;
[0348] (J) una alfa-amilasa que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 12, o una variante de la misma que tiene una identidad de secuencia de al menos el 75%, pero menos del 100% con SEQ ID NO: 12, y en donde dicha variante de alfa-amilasa tiene actividad de alfa-amilasa;
[0349] (K) una alfa-amilasa que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 15, o una variante de la misma que tiene una identidad de secuencia de al menos el 75%, pero menos del 100% con SEQ ID NO: 15, y en donde dicha variante de alfa-amilasa tiene actividad de alfa-amilasa;
[0350] (L) una alfa-amilasa que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 16, o una variante de la misma que tiene una identidad de secuencia de al menos el 75%, pero menos del 100% con SEQ ID NO: 16, y en donde dicha variante de alfa-amilasa tiene actividad de alfa-amilasa;
[0351] (M) una alfa-amilasa que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 17, o una variante de la misma que tiene una identidad de secuencia de al menos el 75%, pero menos del 100% con SEQ ID NO: 17, y en donde dicha variante de alfa-amilasa tiene actividad de alfa-amilasa;
[0352] (N) una alfa-amilasa que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 18, o una variante de la misma que tiene una identidad de secuencia de al menos el 75%, pero menos del 100% con SEQ ID NO: 18, y en donde dicha variante de alfa-amilasa tiene actividad de alfa-amilasa;
[0353] (O) una lipasa que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 4, o una variante de la misma que tiene una identidad de secuencia de al menos el 75%, pero menos del 100% con SEQ ID NO: 4, y en donde dicha variante de lipasa tiene actividad de lipasa, y
[0354] (P) una proteasa que tiene la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 2, 3, 19, 20 o 23, o una variante de la misma que tiene una identidad de secuencia de al menos el 75%, pero menos del 100% con SEQ ID NO: 2, 3, 19, 20 o 23, y en donde la variante de proteasa tiene actividad de proteasa.
[0355] El término “enzimas adicionales”, tal como se usa en el presente documento, se refiere a un conjunto de enzimas que pueden incluirse adicionalmente en la composición detergente. Tales enzimas pueden ser cualquier enzima que se piense que es útil en la composición detergente. Por tanto, el conjunto de enzimas no se limita a enzimas que son diferentes de la al menos una variante de alfa-amilasa que comprende una modificación en una o más posiciones correspondientes a las posiciones 1, 54, 56, 72, 109, 113, 116, 134, 140, 159, 167, 169, 172, 173, 174, 181, 182, 183, 184, 189, 194, 195, 206, 255, 260, 262, 265, 284, 289, 304, 305, 347, 391, 395, 439, 469, 444, 473, 476 o 477 de SEQ ID NO: 1, en donde dicha variante de alfa-amilasa tiene una identidad de secuencia de al menos el 75%, pero menos del 100% con SEQ ID NO: 1, y en donde dicha variante de alfa-amilasa tiene actividad de alfaamilasa; y en donde la al menos una proteasa se selecciona del grupo de: (a) una proteasa que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, tal como al menos el 75%, tal como al menos el 80%, tal como al menos el 85%, tal como al menos el 90%, tal como al menos el 95%, tal como al menos el 98%, tal como al menos el 99%, tal como el 100%, con las secuencias de SEQ ID NOs: 3, 4, 19, 20 o 23; (b) una variante de proteasa que comprende una sustitución en una o más posiciones correspondientes a las posiciones 171, 173, 175, 179 o 180 de SEQ ID NO: 2, en donde dicha variante de proteasa tiene una identidad de secuencia de al menos el 75%, pero menos del 100% con SEQ ID NO: 2; y (c) una variante de proteasa que comprende una modificación en una o más posiciones correspondientes a las posiciones 32, 33, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 58, 59,60, 61, 62, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 116, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 150, 152, 153, 154, 155, 156, 158, 159, 160, 161, 164, 169, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 197, 198, 203, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215 y 216 en comparación con la proteasa en SEQ ID NO:3, en donde dicha variante de proteasa tiene una identidad de secuencia de al menos el 75% con SEQ ID NO: 3, una variante de proteasa que comprende una sustitución en una o más posiciones correspondientes a las posiciones 9, 15, 27, 42, 52, 55, 56, 59, 60, 66, 74, 85, 97, 99, 101, 102, 104, 116, 118, 154, 156, 157, 158, 161, 164, 176, 179, 182, 185, 188, 198, 199, 200, 203, 206, 210, 211, 212, 216, 230, 232, 239, 242, 250, 253, 255, 256 o 269, en donde la numeración es según SEQ ID NO: 3, en donde dicha variante de proteasa tiene una identidad de secuencia de al menos el 60% con SEQ ID NO: 3, o una variante de proteasa que comprende una sustitución en una o más posiciones correspondientes a las posiciones 32, 33, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 60, 61, 62, 63, 64, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 118, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 152, 154, 155, 156, 157, 158, 161, 162, 163, 167, 170, 175, 181, 187, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 203, 204, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 217, 218, 219, 220, 221 o 222 en comparación con la proteasa mostrada en SEQ ID NO: 23, en donde dicha variante de proteasa tiene una identidad de secuencia de al menos el 75% con SEQ ID NO: 23, pero puede ser adición de la otra enzima variante que cae dentro de la definición mencionada anteriormente. Sin embargo, el conjunto de enzimas (o denominado “las enzimas adicionales”) pueden ser variantes diferentes de proteasas, amilasas o cualquier otra clase de enzimas.
[0357] El término “lipasa” tal como se usa en el presente documento, se refiere a una lipasa que tiene actividad de lipasa. La lipasa definida en el presente documento puede ser una éster carboxílico hidrolasa EC 3.1.1,-, que incluye actividades tales como EC 3.1.1.3 triacilglicerol lipasa, EC 3.1.1.4 fosfolipasa A2, EC 3.1.1.5 lisofosfolipasa, EC 3.1.1.26 galactolipasa, EC 3.1.1.32 fosfolipasa A1, EC 3.1.1.73 feruloil esterasa.
[0359] En una realización, la enzima adicional es una variante de alfa-amilasa de una alfa-amilasa parental de SEQ ID NO: 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 o 18, y en donde la variante de alfa-amilasa tiene actividad de alfaamilasa. Por tanto, en una realización, la alfa-amilasa adicional es una variante de una alfa-amilasa parental de SEQ ID NO: 5. En una realización, la variante de alfa-amilasa adicional comprende una identidad de secuencia de al menos el 75% con SEQ ID NO: 5, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, al menos el 75%, al menos el 80%, al menos el 85%, al menos el 90%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98% o al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6%, pero menos del 100%.
[0361] En una realización, la alfa-amilasa adicional es una variante de una alfa-amilasa parental de SEQ ID NO: 6. En una realización, la variante de alfa-amilasa adicional comprende una identidad de secuencia de al menos el 75% con SEQ ID NO: 6, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, al menos el 75%, al menos el 80%, al menos el 85%, al menos el 90%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98% o al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6%, pero menos del 100%.
[0363] En una realización, la alfa-amilasa adicional es una variante de una alfa-amilasa parental de SEQ ID NO: 7. En una realización, la variante de alfa-amilasa adicional comprende una identidad de secuencia de al menos el 75% con SEQ ID NO: 7, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, al menos el 75%, al menos el 80%, al menos el 85%, al menos el 90%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98% o al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6%, pero menos del 100%.
[0365] En una realización, la alfa-amilasa adicional es una variante de una alfa-amilasa parental de SEQ ID NO: 8. En una realización, la variante de alfa-amilasa adicional comprende una identidad de secuencia de al menos el 75% con SEQ ID NO: 8, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, al menos el 75%, al menos el 80%, al menos el 85%, al menos el 90%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98% o al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6%, pero menos del 100%.
[0367] En una realización, la alfa-amilasa adicional es una variante de una alfa-amilasa parental de SEQ ID NO: 9. En una realización, la variante de alfa-amilasa adicional comprende una identidad de secuencia de al menos el 75% con SEQ ID NO: 9, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, al menos el 75%, al menos el 80%, al menos el 85%, al menos el 90%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98% o al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6%, pero menos del 100%.
[0369] En una realización, la alfa-amilasa adicional es una variante de una alfa-amilasa parental de SEQ ID NO: 10. En una realización, la variante de alfa-amilasa adicional comprende una identidad de secuencia de al menos el 75% con SEQ ID NO: 10, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, al menos el 75%, al menos el 80%, al menos el 85%, al menos el 90%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98% o al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6%, pero menos del 100%.
[0370] En una realización, la alfa-amilasa adicional es una variante de una alfa-amilasa parental de SEQ ID NO: 11. En una realización, la variante de alfa-amilasa adicional comprende una identidad de secuencia de al menos el 75% con SEQ ID NO: 12, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, al menos el 75%, al menos el 80%, al menos el 85%, al menos el 90%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98% o al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6%, pero menos del 100%.
[0371] En una realización, la alfa-amilasa adicional es una variante de una alfa-amilasa parental de SEQ ID NO: 12. En una realización, la variante de alfa-amilasa adicional comprende una identidad de secuencia de al menos el 75% con SEQ ID NO: 12, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, al menos el 75%, al menos el 80%, al menos el 85%, al menos el 90%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98% o al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6%, pero menos del 100%.
[0372] En una realización, la alfa-amilasa adicional es una variante de una alfa-amilasa parental de SEQ ID NO: 13. En una realización, la variante de alfa-amilasa adicional comprende una identidad de secuencia de al menos el 75% con SEQ ID NO: 13, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, al menos el 75%, al menos el 80%, al menos el 85%, al menos el 90%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98% o al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6%, pero menos del 100%.
[0373] En una realización, la alfa-amilasa adicional es una variante de una alfa-amilasa parental de SEQ ID NO: 14. En una realización, la variante de alfa-amilasa adicional comprende una identidad de secuencia de al menos el 75% con SEQ ID NO: 14, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, al menos el 75%, al menos el 80%, al menos el 85%, al menos el 90%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98% o al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6%, pero menos del 100%.
[0374] En una realización, la alfa-amilasa adicional es una variante de una alfa-amilasa parental de SEQ ID NO: 15. En una realización, la variante de alfa-amilasa adicional comprende una identidad de secuencia de al menos el 75% con SEQ ID NO: 15, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, al menos el 75%, al menos el 80%, al menos el 85%, al menos el 90%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98% o al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6%, pero menos del 100%.
[0375] En una realización, la alfa-amilasa adicional es una variante de una alfa-amilasa parental de SEQ ID NO: 16. En una realización, la variante de alfa-amilasa adicional comprende una identidad de secuencia de al menos el 75% con SEQ ID NO: 16, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, al menos el 75%, al menos el 80%, al menos el 85%, al menos el 90%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98% o al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6%, pero menos del 100%.
[0376] En una realización, la alfa-amilasa adicional es una variante de una alfa-amilasa parental de SEQ ID NO: 17. En una realización, la variante de alfa-amilasa adicional comprende una identidad de secuencia de al menos el 75% con SEQ ID NO: 17, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, al menos el 75%, al menos el 80%, al menos el 85%, al menos el 90%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98% o al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6%, pero menos del 100%.
[0377] En una realización, la alfa-amilasa adicional es una variante de una alfa-amilasa parental de SEQ ID NO: 18. En una realización, la variante de alfa-amilasa adicional comprende una identidad de secuencia de al menos el 75% con SEQ ID NO: 18, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, al menos el 75%, al menos el 80%, al menos el 85%, al menos el 90%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98% o al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6%, pero menos del 100%.
[0378] En una realización, la enzima adicional es una lipasa que tiene la secuencia de SEQ ID NO: 4. En otra realización, la enzima adicional es una variante de lipasa de una lipasa parental que tiene la secuencia de SEQ ID NO:4 o que tiene una identidad de secuencia de al menos el 75% con SEQ ID NO: 4, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, al menos el 75%, al menos el 80%, al menos el 85%, al menos el 90%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98% o al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6%, pero menos del 100%.
[0379] En una realización, la enzima adicional de:
[0380] (A) es una variante de alfa-amilasa que comprende una o más modificaciones en las siguientes posiciones: 9, 118, 149, 182, 186, 195, 202, 257, 295, 299, 320, 323, 339, 345 y 458, en donde las posiciones corresponden a las posiciones en SEQ ID NO:5;
[0381] (B) es una variante de alfa-amilasa que comprende una o más modificaciones en las siguientes posiciones: 140, 195, 183, 184 y 206, en donde las posiciones corresponden a las posiciones en SEQ ID NO: 6;
[0382] (C) es una variante de alfa-amilasa que comprende una o más modificaciones en las siguientes posiciones: 180, 181, 243 y 475, en donde las posiciones corresponden a las posiciones en SEQ ID NO: 7;
[0383] (D) es una variante de alfa-amilasa que comprende una o más modificaciones en las siguientes posiciones: 178, 179, 187, 203, 458, 459, 460 y 476, en donde las posiciones corresponden a las posiciones en SEQ ID NO: 8;
[0384] (E) es una variante de alfa-amilasa que comprende una modificación en la siguiente posición 202, en donde la posición corresponde a la posición en SEQ ID NO:9;
[0385] (F) es una variante de alfa-amilasa que comprende una o más modificaciones en las siguientes posiciones: 405, 421, 422 y 428, en donde las posiciones corresponden a las posiciones en SEQ ID NO: 10;
[0386] (G) es una variante de alfa-amilasa que comprende una o más modificaciones en las siguientes posiciones: 48, 49, 107, 156, 181, 190, 209 y 264 de SEQ ID NO: 13; y
[0387] (O) es una variante de lipasa que comprende una o más modificaciones en las siguientes posiciones: 4, 27, 33,
[0388] 38, 57, 58, 60, 83, 86, 91, 94, 96, 97, 99, 111, 150, 163, 210, 216, 225, 227, 231, 233, 249, 254, 255, 256, 263,
[0389] 264, 265, 266, 267 y 269 de SEQ ID NO: 4.
[0390] En una realización preferida, la enzima adicional es una variante de una alfa-amilasa parental de SEQ ID NO: 5. En una realización preferida, la enzima adicional es una variante que comprende una o más modificaciones en las siguientes posiciones: 9, 118, 149, 182, 186, 195, 202, 257, 295, 299, 320, 323, 339, 345 y 458 de SEQ ID NO: 5, en donde la variante de alfa-amilasa adicional tiene una identidad de secuencia de al menos el 75% con SEQ ID NO: 5, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, al menos el 75%, al menos el 80%, al menos el 85%, al menos el 90%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98% o al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6%, pero menos del 100%. En una realización particular, la alfa-amilasa adicional comprende las siguientes modificaciones: R118K+D183*+G184*+N195F+R320K+R458K, en donde la numeración es según SEQ ID NO: 5. En otra realización particular, la enzima adicional comprende las siguientes modificaciones: M9L+R118K+G149A+G182T+G186A D183*+G184*+N195F+M202L+T257I+Y295F+N299Y+R320K+M323T+A339S+E345R+R458K, en donde la numeración es según SEQ ID NO: 5.
[0391] En una realización preferida, la enzima adicional es una variante de una alfa-amilasa parental de SEQ ID NO: 6. En una realización preferida, la enzima adicional es una variante que comprende una o más modificaciones en las siguientes posiciones: 140, 195, 183, 184 y 206 de SEQ ID NO: 6, en donde la variante de alfa-amilasa adicional tiene una identidad de secuencia de al menos el 75% con SEQ ID NO: 6, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, al menos el 75%, al menos el 80%, al menos el 85%, al menos el 90%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98% o al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6%, pero menos del 100%. En una realización particular, la alfa-amilasa adicional comprende las siguientes modificaciones: W140Y+D183*+G184*+N195F+I206Y, en donde la numeración es según SEQ ID NO: 6.
[0392] En una realización preferida, la enzima adicional es una variante de una alfa-amilasa parental de SEQ ID NO: 7. En una realización preferida, la enzima adicional es una variante que comprende una o más modificaciones en las siguientes posiciones: 180, 181, 243 y 475 de SEQ ID NO: 7, en donde la variante de alfa-amilasa adicional tiene una identidad de secuencia de al menos el 75% con SEQ ID NO: 7, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, al menos el 75%, al menos el 80%, al menos el 85%, al menos el 90%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98% o al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6%, pero menos del 100%. En una realización particular, la alfa-amilasa adicional comprende las siguientes modificaciones: R180*+S181*+S243Q+G475K, en donde la numeración es según SEQ ID NO: 7.
[0393] En una realización preferida, la enzima adicional es una variante de una alfa-amilasa parental de SEQ ID NO: 8. En una realización preferida, la enzima adicional es una variante que comprende una o más modificaciones en las siguientes posiciones: 178, 179, 187, 203, 458, 459, 460 y 476 de SEQ ID NO: 8, en donde la variante de alfaamilasa adicional tiene una identidad de secuencia de al menos el 75% con SEQ ID NO: 8, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, al menos el 75%, al menos el 80%, al menos el 85%, al menos el 90%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98% o al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6%, pero menos del 100%. En una realización particular, la alfa-amilasa adicional comprende las siguientes modificaciones: R178*+G179*+E187P+I203Y+R458N+T459S+D460T+G476K, en donde la numeración es según SEQ ID NO: 8.
[0394] En una realización preferida, la enzima adicional es una variante de una alfa-amilasa parental de SEQ ID NO: 9. En una realización preferida, la enzima adicional es una variante que comprende una modificación en la siguiente posición: 202 de SEQ ID NO: 9, en donde la variante de alfa-amilasa adicional tiene una identidad de secuencia de al menos el 75% con SEQ ID NO: 9, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, al menos el 75%, al menos el 80%, al menos el 85%, al menos el 90%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98% o al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6%, pero menos del 100%. En una realización particular, la alfa-amilasa adicional comprende la siguiente modificación: M202L, en donde la numeración es según SEQ ID NO: 9.
[0395] En una realización preferida, la enzima adicional es una variante de una alfa-amilasa parental de SEQ ID NO: 10. En una realización preferida, la enzima adicional es una variante que comprende una o más modificaciones en las siguientes posiciones: 405, 421, 422 y 428 de SEQ ID NO: 10, en donde la variante de alfa-amilasa adicional tiene una identidad de secuencia de al menos el 75% con SEQ ID NO: 10, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, al menos el 75%, al menos el 80%, al menos el 85%, al menos el 90%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98% o al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6%, pero menos del 100%. En una realización particular, la alfa-amilasa adicional comprende las siguientes modificaciones: I405L+A421H+A422P+A428T, en donde la numeración es según SEQ ID NO: 10.
[0396] En una realización preferida, la enzima adicional es una variante de una alfa-amilasa parental de SEQ ID NO: 13. En una realización preferida, la enzima adicional es una variante que comprende una o más modificaciones en las siguientes posiciones: 48, 49, 107, 156, 181, 190, 209 y 264 de SEQ ID NO: 13, en donde la variante de alfaamilasa adicional tiene una identidad de secuencia de al menos el 75% con SEQ ID NO: 13, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, al menos el 75%, al menos el 80%, al menos el 85%, al menos el 90%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98% o al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6%, pero menos del 100%. En una realización particular, la alfa-amilasa adicional comprende las siguientes modificaciones: G48A+T49I+G107A+H156Y+A181T+N190F+L201F+A209V+Q264S, en donde la numeración es según SEQ ID NO: 10.
[0397] En una realización preferida, la enzima adicional es una variante de lipasa de una lipasa parental de SEQ ID NO: 4. En una realización preferida, la enzima adicional es una variante que comprende una o más modificaciones en las siguientes posiciones: 4, 27, 33, 38, 57, 58, 60, 83, 86, 91, 94, 96, 97, 99, 111, 150, 163, 210, 216, 225, 227, 231, 233, 249, 254, 255, 256, 263, 264, 265, 266, 267 y 269 de SEQ ID NO: 4, en donde la variante de lipasa tiene una identidad de secuencia de al menos el 75% con SEQ ID NO: 4, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, al menos el 75%, al menos el 80%, al menos el 85%, al menos el 90%, al menos el 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98% o al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6%, pero menos del 100%.
[0398] En una realización preferida adicional, la enzima adicional es una variante de lipasa de una lipasa parental de SEQ ID NO: 4, en donde la variante de lipasa comprende una o más modificaciones seleccionadas del grupo que consiste en: X1C, X2K, X2Y, X4V, X27R, X33K, X33Q, X38A, X54T, X56K, X57G, X58A, X60S, X69R, X83T, X86V, X91A, X91N, X91Q, X91T, X94K, X91R, X96E, X91G, X91L, X91W, X97M, X98E, X98I, X99K, X101D, X111A, X163K, X176L, X210K, X210Q, X210R, X216P, X220F, X225R, X227G, X231R, X233C, X233R, X249R, X254S, X256V, X263Q, X264A, X265T, X266D, X267A y X269N de SEQ ID NO: 4.
[0399] En otra realización, la composición detergente comprende más de una enzima adicional, tal como dos, tres, cuatro, cinco, seis, siete, ocho, nueve o diez enzimas adicionales.
[0400] En una realización, la composición detergente comprende dos o más enzimas, tal como al menos tres enzimas, de manera más preferida al menos cuatro o cinco enzimas. Preferiblemente, las enzimas tienen diferente especificidad por el sustrato, por ejemplo, actividad proteolítica, actividad amilolítica, actividad lipolítica, actividad hemicelulítica o actividad pectolítica.
[0401] La composición detergente puede comprender una o más enzimas adicionales tales como enzimas activas en carbohidratos tales como carbohidrasa, pectinasa, mananasa, amilasa, celulasa, arabinasa, galactanasa, xilanasa o proteasa, lipasa, una cutinasa, oxidasa, por ejemplo, una lacasa y/o peroxidasa.
[0402] En general, las propiedades de la(s) enzima(s) seleccionada(s) deberían ser compatibles con el detergente seleccionado, (es decir, óptimo de pH, compatibilidad con otros ingredientes enzimáticos y no enzimáticos, etc.) y la(s) enzima(s) debería(n) estar presente(s) en cantidades efectivas.
[0403] Las celulasas adecuadas incluyen aquellas de origen bacteriano o fúngico. Se incluyen mutantes modificados químicamente o modificados mediante ingeniería de proteína. Las celulasas adecuadas incluyen celulasas de los génerosBacillus,Pseudomonas,Humicola,Fusarium,Thielavia,Acremonium, por ejemplo, las celulasas fúngicas producidas porHumicola insolens,Myceliophthora thermophilayFusarium oxisporumdadas a conocer en los documentos US 4.435.307, US 5.648.263, US 5.691.178, US 5.776.757 y WO 89/09259.
[0404] Celulasas especialmente adecuadas son las celulasas alcalinas o neutras que tienen beneficios en cuanto al cuidado del color. Ejemplos de tales celulasas son las celulasas descritas en los documentos EP 0495257, EP 0 531372, WO 96/11262, WO 96/29397, WO 98/08940. Otros ejemplos son variantes de celulasas tales como las descritas en los documentos WO 94/07998, EP 0 531 315, US 5.457.046, US 5.686.593, US 5.763.254, WO 95/24471, WO 98/12307 y WO 99/001544.
[0405] Otras celulasas son la enzima endo-beta-1,4-glucanasa que tiene una secuencia de al menos el 97% de identidad con la secuencia de aminoácidos de la posición 1 a la posición 773 de SEQ ID NO: 2 del documento WO 2002/099091 o una familia de 44 xiloglucanasas, cuya enzima xiloglucanasa tiene una secuencia de al menos el 60% de identidad con las posiciones 40-559 de SEQ ID NO: 2 del documento WO 2001/062903.
[0406] Las celulasas comercialmente disponibles incluyen Celluzyme ™ y Carezyme ™ (Novozymes A/S) Carezyme Premium ™ (Novozymes A/S), Celluclean ™ (Novozymes A/S), Celluclean Classic ™ (Novozymes A/S), Cellusoft ™ (Novozymes A/S), Whitezyme ™ (Novozymes A/S), Clazinase ™, y Puradax HA ™ (Genencor International Inc.) y KAC-500(B) ™ (Kao Corporation).
[0407] Las manasas adecuadas incluyen aquellas de origen bacteriano o fúngico. Se incluyen mutantes modificados química o genéticamente. La mananasa puede ser una mananasa alcalina de la familia 5 o 26. Puede ser un tipo silvestre deBacillusoHumicola, particularmenteB. agaradhaerens,B. licheniformis,B. halodurans,B. clausiioH. insolens. Mananasas adecuadas se describen en el documento WO 1999/064619. Una mananasa disponible comercialmente es Mannaway (Novozymes A/S).
[0408] Las proteasas adicionales adecuadas incluyen las de origen bacteriano, fúngico, vegetal, viral o animal, por ejemplo, de origen vegetal o microbiano. Se prefiere el origen microbiano. Se incluyen los mutantes modificados químicamente o modificados mediante ingeniería de proteína. Puede ser una proteasa alcalina, tal como una serina proteasa o una metaloproteasa. Una serina proteasa puede ser, por ejemplo, de la familia S1, tal como la tripsina, o de la familia S8 tal como la subtilisina. Una proteasa metaloproteasa puede ser, por ejemplo, una termolisina de, por ejemplo, la familia M4 u otra metaloproteasa tal como las de las familias M5, M7 o M8.
[0409] El término “subtilasas” se refiere a un subgrupo de serina proteasa según Siezenet al., Protein Engng. 4 (1991) 719-737 y Siezenet al. Protein Science 6 (1997) 501-523. Las serina proteasas son un subgrupo de proteasas caracterizadas por tener una serina en el sitio activo, que forma un aducto covalente con el sustrato. Las subtilasas pueden dividirse en 6 subdivisiones, es decir, la familia Subtilisina, la familia Termitasa, la familia Proteinasa K, la familia Lantibiótico peptidasa, la familia Kexina y la familia Pirolisina.
[0410] Ejemplos de subtilasas son aquellas derivadas a partir deBacillustales comoBacillus lentus,B. alkalophilus,B. subtilis,B. amyloliquefaciens,Bacillus pumilusyBacillus gibsoniidescritas en los documentos US7262042 y WO09/021867, ysubtilisin lentus,subtilisin Novo,subtilisin Carlsberg,Bacillus licheniformis,subtilisin BPN’,subtilisin 309,subtilisin 147ysubtilisin 168descritas en el documento WO89/06279 y proteasa PD138 descrita en el documento WO93/18140. Otras proteasas útiles pueden ser aquellas descritas en los documentos WO92/175177, WO01/016285, WO02/026024 y WO02/016547. Ejemplos de proteasas similares a la tripsina son la tripsina (por ejemplo, de origen porcino o bovino) y la proteasa deFusariumdescrita en los documentos WO89/06270, WO94/25583 y WO05/040372, y las proteasas de tipo quimotripsina derivadas deCellulomonasdescritas en los documentos WO05/052161 y WO05/052146.
[0411] Otra proteasa preferida es la proteasa alcalina deBacillus lentusDSM 5483, tal como se describe, por ejemplo, en el documento WO 95/23221, y variantes de la misma que se describen en los documentos WO 92/21760, WO 95/23221, EP 1921147 y EP 1921148.
[0412] Ejemplos de metaloproteasas son las metaloproteasas neutras tal como se describen en el documento WO07/044993 (Genencor Int.) tales como las derivadas deBacillus amiloliquefaciens.
[0413] Ejemplos de proteasas útiles son las variantes descritas en: los documentos WO92/19729, WO96/034946, WO98/20115, WO98/20116, WO99/011768, WO01/44452, WO03/006602, WO04/03186, WO04/041979, WO07/006305, WO11/036263, WO11/036264, especialmente las variantes con sustituciones en una o más de las siguientes posiciones: 3, 4, 9, 15, 27, 36, 57, 68, 76, 87, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 106, 118, 120, 123, 128, 129, 130, 160, 167, 170, 194, 195, 199, 205, 206, 217, 218, 222, 224, 232, 235, 236, 245, 248, 252 y 274 usando la numeración de BPN’. De manera más preferida, las variantes de proteasa pueden comprender las siguientes mutaciones: X3T, X4I, X9R, X15T, X27R, *36D, X68A, X76D, X87S, X87R, *97E, X98S, X99G, X99D, X99A, X99AD, X101G, X101M, X101R, X103A, X104I, X104Y, X104N, X106A, X118V, X118R, X120D, X120N, X123S, X128L, X129Q, X130A, X160D, X167A, X170S, X194P, X195E, X199M, X205I, X217D, X218D, X222S, X232V, X235L, X236H, X245R, X252K o X274A (usando la numeración de BPN’).
[0414] Enzimas proteasa adecuadas disponibles comercialmente incluyen las vendidas bajo los nombres comerciales Alcalase<®>, Duralase ™, Durazym ™, Relase<®>, Relase<®>Ultra, Savinase<®>, Savinase<®>Ultra, Primase<®>, Polarzyme<®>, Kannase<®>, Liquanase<®>, Liquanase<®>Ultra, Ovozyme<®>, Coronase<®>, Coronase<®>Ultra, Neutrase<®>, Everlase<®>y Esperase<®>(Novozymes A/S), las vendidas bajo el nombre comercial Maxatase<®>, Maxacal<®>, Maxapem<®>, Purafect<®>, Purafect Prime<®>, Preferenz ™, Purafect MA<®>, Purafect Ox<®>, Purafect OxP<®>, Puramax<®>, Properase<®>, Effectenz ™, FN2<®>, FN3<®>, FN4<®>, Excellase<®>, Eraser<®>, Opticlean<®>y Optimase<®>(Danisco/DuPont), Axapem ™ (Gist-Brocases N.V.), BLAP (secuencia mostrada en la Figura 29 del documento US5352604) y variantes de las mismas (Henkel AG) y KAP (subtilisina deBacillus alkalophilus) de Kao.
[0415] Las lipasas y cutinasas adecuadas incluyen las de origen bacteriano o fúngico. Se incluyen enzimas mutantes modificadas químicamente o modificadas mediante ingeniería de proteína. Los ejemplos incluyen lipasa deThermomyces, por ejemplo deT. lanuginosus(previamente denominadaHumicola lanuginosa) tal como se describe en los documentos EP258068 y EP305216, cutinasa deHumicola, por ejemploH. insolens(documento WO96/13580), lipasa de cepas dePseudomonas(algunas de ellas han pasado ahora a denominarseBurkholderia), por ejemplo,P. alcaligenesoP. pseudoalcaligenes(documento EP218272),P. cepacia(documento EP331376),P. sp. cepa SD705 (documentos WO95/06720 y WO96/27002),P. wisconsinensis(documento WO96/12012), lipasas deStreptomycestipo GDSL (documento WO10/065455), cutinasa deMagnaporthe grisea(documento WO10/107560), cutinasa dePseudomonas mendocina(documento US5.389.536), lipasa deThermobifida fusca(documento WO11/084412), lipasa deGeobacillus stearothermophilus(documento WO11/084417), lipasa deBacillus subtilis(documento WO11/084599) y lipasa deStreptomyces griseus(documento WO11/150157) yS. pristinaespiralis(documento WO12/137147).
[0416] Otros ejemplos son variantes de lipasa tales como aquellas descritas en los documentos EP407225, WO92/05249, WO94/01541, WO94/25578, WO95/14783, WO95/30744, WO95/35381, WO95/22615, WO96/00292, WO97/04079, WO97/07202, WO00/34450, WO00/60063, WO01/92502, WO07/87508 y WO09/109500.
[0417] Los productos de lipasas comerciales preferidos incluyen Lipolase ™, Lipex™, Lipolex ™ y Lipoclean ™ (Novozymes A/S), Lumafast (originalmente de Genencor) y Lipomax (originalmente de Gist-Brocades).
[0418] Todavía otros ejemplos son lipasas, a veces denominadas aciltransferasas o perhidrolasas, por ejemplo, aciltransferasas con homología a lipasa A deCandida antarctica(documento WO10/111143), aciltransferasa deMycobacterium smegmatis(documento WO05/56782), perhidrolasas de la familia CE 7 (documento WO09/67279) y variantes de la perhidrolasa deM. smegmatis, en particular la variante S54V usada en el producto comercial Gentle Power Bleach de Huntsman Textile Effects Pte Ltd (documento WO10/100028).
[0419] Amilasas adecuadas adicionales que pueden usarse junto con las variantes pueden ser una alfa-amilasa o una glucoamilasa y pueden ser de origen bacteriano o fúngico. Se incluyen mutantes modificados químicamente o modificados mediante ingeniería de proteína. Las amilasas incluyen, por ejemplo, alfa-amilasas obtenidas deBacillus, por ejemplo, una cepa especial deBacillus licheniformis, descrita con más detalle en el documento GB 1.296.839.
[0420] Las amilasas adecuadas diferentes incluyen las amilasas que tienen la SEQ ID NO: 6 en el documento WO 02/010355 o variantes de las mismas que tienen una identidad de secuencia del 90% con respecto a SEQ ID NO: 6. Variantes preferidas de SEQ ID NO: 6 son aquellas que tienen una deleción en las posiciones 181 y 182 y una sustitución en la posición 193.
[0421] Otras amilasas que son adecuadas son una alfa-amilasa híbrida que comprende los residuos 1-33 de la alfaamilasa derivada deB. amiloliquefaciensmostrada en SEQ ID NO: 6 del documento WO 2006/066594 y los residuos 36-483 de la alfa-amilasa deB. licheniformismostrada en SEQ ID NO: 4 del documento WO 2006/066594 o variantes que tienen una identidad de secuencia del 90% con la misma. Variantes preferidas de esta alfa-amilasa híbrida son aquellas que tienen una sustitución, una deleción o una inserción en una o más de las siguientes posiciones: G48, T49, G107, H156, A181, N190, M197, I201, A209 y Q264. Las variantes más preferidas de la alfa-amilasa híbrida que comprende los residuos 1-33 de la alfa-amilasa derivada deB. amyloliquefaciensmostrada en SEQ ID NO: 6 del documento WO 2006/066594 y los residuos 36-483 de SEQ ID NO: 4 son aquellas que tienen las sustituciones:
[0422] M197T;
[0423] H156Y+A181T+N190F+A209V+Q264S; o
[0424] G48A+T49I+G107A+H156Y+A181T+N190F+I201F+A209V+Q264S.
[0425] Otras amilasas que pueden usarse son las amilasas que tienen SEQ ID NO: 2 del documento WO 08/153815, SEQ ID NO: 10 del documento WO 01/66712 o variantes de las mismas que tienen una identidad de secuencia del 90% con respecto a SEQ ID NO: 2 del documento WO 08/153815 o una identidad de secuencia del 90% con respecto a SEQ ID NO: 10 en el documento WO 01/66712. Las variantes preferidas de la SEQ ID NO: 10 en el documento WO 01/66712 son aquellas que tienen una sustitución, una deleción o una inserción en una o más de las siguientes posiciones: 176, 177, 178, 179, 190, 201, 207, 211 y 264.
[0426] Amilasas adecuadas adicionales son las amilasas que tienen SEQ ID NO: 2 del documento WO 09/061380 o variantes que tienen una identidad de secuencia del 90% con respecto a SEQ ID NO: 2 con las mismas. Las variantes preferidas de SEQ ID NO: 2 son aquellas que tienen un truncamiento del extremo C-terminal y/o una sustitución, una deleción o una inserción en una o más de las siguientes posiciones: Q87, Q98, S125, N128, T131, T165, K178, R180, S181, T182, G183, M201, F202, N225, S243, N272, N282, Y305, R309, D319, Q320, Q359, K444 y G475. Las variantes más preferidas de SEQ ID NO: 2 son aquellas que tienen la sustitución en una o más de las siguientes posiciones: Q87E,R, Q98R, S125A, N128C, T131I, T165I, K178L, T182G, M201L, F202Y, N225E, N225R, N272E, N272R, S243Q, S243A, S243E, S243D, Y305R, R309A, Q320R, Q359E, K444E y G475K y/o deleción en la posición R180 y/o S181 o de T182 y/o G183. Las variantes de amilasa más preferidas de SEQ ID NO: 2 son aquellas que tienen las siguientes sustituciones:
[0427] N128C+K178L+T182G+Y305R+G475K;
[0428] N128C+K178L+T182G+F202Y+Y305R+D319T+G475K;
[0429] S125A+N128C+K178L+T182G+Y305R+G475K; o S125A+N128C+T131I+T165I+K178L+T182G+Y305R+G475K, en donde las variantes están truncadas en el extremo C-terminal y opcionalmente comprenden además una sustitución en la posición 243 y/o una deleción en la posición 180 y/o la posición 181.
[0430] Amilasas adecuadas adicionales son las amilasas que tienen SEQ ID NO: 1 del documento WO13184577 o variantes que tienen una identidad de secuencia de al menos el 90% con SEQ ID NO: 1 con las mismas. Las variantes preferidas de SEQ ID NO: 1 son aquellas que tienen una sustitución, una deleción o una inserción en una o más de las siguientes posiciones: K176, R178, G179, T180, G181, E187, N192, M199, I203, S241, R458, T459, D460, G476 y G477. Las variantes más preferidas de SEQ ID NO: 1 son aquellas que tienen la sustitución en una o más de las siguientes posiciones: K176L, E187P, N192FYH, M199L, I203YF, S241QADN, R458N, T459S, D460T, G476K y G477K y/o una deleción en la posición R178 y/o S179 o de T180 y/o G181. Las variantes de amilasa más preferidas de SEQ ID NO: 1 son aquellas que tienen las siguientes sustituciones:
[0431] E187P+I203Y+G476K
[0432] E187P+I203Y+R458N+T459S+D460T+G476K
[0433] en donde las variantes comprenden opcionalmente, además, una sustitución en la posición 241 y/o una deleción en la posición 178 y/o la posición 179.
[0434] Amilasas adecuadas adicionales son las amilasas que tienen SEQ ID NO: 1 del documento WO10104675 o variantes que tienen una identidad de secuencia de al menos el 90% con SEQ ID NO: 1 con las mismas. Las variantes preferidas de SEQ ID NO: 1 son aquellas que tienen una sustitución, una deleción o una inserción en una o más de las siguientes posiciones: N21, D97, V128 K177, R179, S180, I181, G182, M200, L204, E242, G477 y G478. Las variantes más preferidas de la SEQ ID NO: 1 son aquellas que tienen la sustitución en una o más de las siguientes posiciones: N21D, D97N, V128I, K177L, M200L, L204YF, E242QA, G477K y G478K y/o una deleción en la posición R179 y/o S180 o de I181 y/o G182. Las variantes de amilasa más preferidas de SEQ ID NO: 1 son aquellas que tienen las siguientes sustituciones: N21D+D97N+V128I, en donde las variantes comprenden opcionalmente, además, una sustitución en la posición 200 y/o una deleción en la posición 180 y/o la posición 181. Otras amilasas adecuadas son la alfa-amilasa que tiene SEQ ID NO: 12 en el documento WO01/66712 o una variante que tiene una identidad de secuencia de al menos el 90% con respecto a SEQ ID NO: 12. Las variantes de amilasa preferidas son aquellas que tienen una sustitución, una deleción o una inserción en una o más de las siguientes posiciones de la SEQ ID NO: 12 del documento WO01/66712: R28, R118, N174; R181, G182, D183, G184, G186, W189, N195, M202, Y298, N299, K302, S303, N306, R310, N314; R320, H324, E345, Y396, R400, W439, R444, N445, K446, Q449, R458, N471, N484. Las amilasas preferidas particulares incluyen variantes que tienen una deleción de D183 y G184 y que tienen las sustituciones R118K, N195F, R320K y R458K, y una variante que tiene adicionalmente sustituciones en una o más posiciones seleccionadas del grupo: M9, G149, G182, G186, M202, T257, Y295, N299, M323, E345 y A339, lo más preferida una variante que tiene adicionalmente sustituciones en todas estas posiciones.
[0435] Otros ejemplos son variantes de amilasa tales como aquellas descritas en los documentos WO2011/098531, WO2013/001078 y WO2013/001087.
[0436] Amilasas disponibles comercialmente son Duramyl ™, Termamyl ™, Fungamyl ™, Stainzyme ™, Stainzyme Plus ™, Natalase ™, Liquozyme X y BAN ™ (de Novozymes A/S), y Rapidase ™, Purastar ™/Effectenz ™, Powerase, Preferenz S1000, Preferenz S2000, Preferenz S100 y Preferenz S110 (de Genencor International Inc./DuPont). Las peroxidasas/oxidasas adecuadas incluyen las de origen vegetal, bacteriano o fúngico. Se incluyen mutantes modificados químicamente o modificados mediante ingeniería de proteína. Los ejemplos de peroxidasas útiles incluyen peroxidasas deCoprinus, por ejemplo, deC. cinereus, y variantes de las mismas tales como aquellas descritas en los documentos WO 93/24618, WO 95/10602 y WO 98/15257.
[0437] Las peroxidasas disponibles comercialmente incluyen Guardzyme ™ (Novozymes A/S).
[0438] Una composición detergente puede comprender también enzimas adicionales tales como pectato liasas, por ejemplo, Pectawash ™, clorofilasas, etc.
[0439] La(s) enzima(s) detergente(s) pueden incluirse en la composición detergente añadiendo aditivos separados que contienen una o más enzimas, o añadiendo un aditivo combinado que comprende todas estas enzimas. Un aditivo detergente, es decir, un aditivo separado o un aditivo combinado, puede formularse, por ejemplo, como granulado, líquido, suspensión, etc. Formulaciones de aditivo detergente preferidas son granulados, en particular granulados que no forman polvo, líquidos, en particular líquidos estabilizados, o suspensiones.
[0440] Los granulados que no forman polvo pueden producirse, por ejemplo, tal como se da a conocer en los documentos US 4.106.991 y 4.661.452 y pueden recubrirse opcionalmente mediante métodos conocidos en la técnica. Ejemplos de materiales de recubrimiento céreos son los productos de poli(óxido de etileno) (polietilenglicol, PEG) con pesos molares medios de 1000 a 20000; nonilfenoles etoxilados que tienen de 16 a 50 unidades de óxido de etileno; alcoholes grasos etoxilados en los que el alcohol contiene de 12 a 20 átomos de carbono y en los que hay de 15 a 80 unidades de óxido de etileno; alcoholes grasos; ácidos grasos; y mono-, di- y triglicéridos de ácidos grasos. En el documento GB 1483591 se proporcionan ejemplos de materiales de recubrimiento formadores de película adecuados para su aplicación mediante técnicas de lecho fluido. Las preparaciones enzimáticas líquidas pueden estabilizarse, por ejemplo, añadiendo un poliol tal como propilenglicol, un azúcar o alcohol de azúcar, ácido láctico o ácido bórico según métodos establecidos. Pueden prepararse enzimas protegidas según el método dado a conocer en el documento EP 238.216.
[0441] En una realización, el número de modificaciones en las variantes de proteasa, alfa-amilasa y/o lipasa individualmente es 1 a 30, por ejemplo, 1 a 20, 1 a 10 y 1 a 5, tal como 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29 o 30 modificaciones.
[0442] En una realización, el número de modificaciones en las variantes de proteasa, alfa-amilasa y/o lipasa individualmente es 1 a 20, por ejemplo, 1 a 10 y 1 a 5, tal como 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10 modificaciones. En una realización, las variantes de alfa-amilasa comprenden modificaciones adicionales. Por consiguiente, se contempla que cada variante de alfa-amilasa descrita en el presente documento pueda tener además un rendimiento mejorado y/o una estabilidad mejorada, tal como rendimiento de lavado mejorado en el lavado de ropa o en el lavado de vajillas automatizado, y/o una estabilidad en almacenamiento mejorada, en comparación con cualquiera de las alfa-amilasas parentales enumeradas como SEQ ID NO: 1, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 y 18. Por tanto, las variantes de alfa-amilasa pueden comprender además una o más sustituciones adicionales en una o más (por ejemplo, varias) otras posiciones. Por consiguiente, en una realización, la variante de alfa-amilasa de la composición detergente comprende además una modificación en las posiciones correspondientes a las posiciones;
[0445]
[0446]
[0449] en donde la numeración es según SEQ ID NO: 5.
[0451] Los aminoácidos esenciales en un polipéptido pueden identificarse según procedimientos conocidos en la técnica, tales como la mutagénesis dirigida o la mutagénesis de barrido de alanina (Cunningham y Wells, 1989, Science 244: 1081-1085). En esta última técnica, se introducen mutaciones de una única alanina en cada residuo en la molécula y las moléculas mutantes resultantes se someten a prueba en cuanto a la actividad de proteasa para identificar los residuos de aminoácido que son críticos para la actividad de la molécula. Véase también, Hiltonet al., 1996, J. Biol. Chem. 271: 4699-4708. El sitio activo de la enzima u otra interacción biológica también puede determinarse mediante el análisis físico de la estructura, tal como se determina mediante técnicas tales como la resonancia magnética nuclear, cristalografía, difracción de electrones o marcaje por fotoafinidad, junto con la mutación de posibles aminoácidos del sitio de contacto. Véase, por ejemplo, de Voset al., 1992, Science 255: 306-312; Smithet al., 1992, J. Mol. Biol. 224: 899-904; Wlodaveret al., 1992, FEBS Lett. 309: 59-64. La identidad de los aminoácidos esenciales también puede deducirse a partir de un alineamiento con un polipéptido relacionado.
[0452] En una realización, la composición detergente comprende una variante de alfa-amilasa tal como se describe en el presente documento y una variante de proteasa tal como se describe en el presente documento, que tiene una estabilidad mejorada en comparación con una composición detergente que comprende una alfa-amilasa parental y una proteasa parental que tiene la secuencia de aminoácidos idéntica de las variantes, respectivamente, pero que no tiene una sustitución en una o más de dichas modificaciones especificadas. La estabilidad puede medirse mediante un método que comprende las etapas de almacenar la variante en una composición detergente durante, por ejemplo, 4 semanas a 30ºC, 37ºC o temperatura ambiente, tal como 25ºC, seguido de determinar la actividad específica de las variantes. Está dentro del conocimiento del experto en la técnica cómo puede medirse la actividad específica.
[0453] Cualquier variante, es decir, una variante de alfa-amilasa, una variante de proteasa y una variante de lipasa, se ha preparado a partir de una enzima parental. Una enzima parental de este tipo se define como un polipéptido que comprende o consiste en las secuencias de aminoácidos enumeradas como SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 o 20. Por tanto, las variantes se han preparado a partir de una enzima parental. Una enzima parental puede identificarse mediante homología de secuencia. La homología entre dos secuencias de aminoácidos se describe en este contexto mediante el parámetro “identidad” para los fines de la presente invención, el grado de identidad entre dos secuencias de aminoácidos se determina utilizando el algoritmo de Needleman-Wunsch tal como se ha descrito anteriormente. El resultado de la rutina es además del alineamiento de aminoácidos el cálculo de la “identidad porcentual” entre las dos secuencias.
[0454] En base a esta descripción, es una rutina para un experto en la técnica identificar alfa-amilasas, proteasas y lipasas homólogas adecuadas, que puedan ser modificadas tal como se describe en el presente documento.
[0455] Variantes parentales sustancialmente homólogas pueden tener una o más sustituciones, deleciones y/o inserciones de (varios) aminoácidos, en el presente contexto la expresión “una o más” se usa de manera intercambiable con el término “varios”. Estos cambios son preferiblemente de naturaleza menor, es decir, sustituciones de aminoácidos conservativas tal como se describió anteriormente y otras sustituciones que no afectan significativamente al plegamiento tridimensional o la actividad de la proteína o polipéptido; pequeñas deleciones, normalmente de uno a aproximadamente 30 aminoácidos; y pequeñas extensiones de extremo aminoo carboxilo-terminal, tal como un residuo de metionina de extremo amino-terminal, un pequeño péptido enlazante de hasta aproximadamente 20-25 residuos, o una pequeña extensión que facilita la purificación (una etiqueta de afinidad), tal como una región de polihistidina, o proteína A (Nilssonet al., 1985, EMBO J.4: 1075; Nilssonet al., 1991, Methods Enzymol.198: 3. Véase también, en general, Fordet al., 1991, Protein Expression and Purification 2: 95-107.
[0456] A pesar de que los cambios descritos anteriormente son preferiblemente de naturaleza menor, tales cambios también pueden ser de naturaleza sustancial, tal como una fusión de polipéptidos más grandes de hasta 300 aminoácidos o más como extensiones de extremo amino- o carboxilo-terminal.
[0457] La enzima parental puede ser (a) un polipéptido que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70% con el polipéptido maduro de SEQ ID NO: 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 o 20.
[0458] Por consiguiente, la alfa-amilasa parental tiene una identidad de secuencia con el polipéptido con SEQ ID NO: 1, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 o 18 de al menos el 70%, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, al menos el 75%, al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos una identidad del 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98% o al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% que tiene actividad de alfa-amilasa. Por consiguiente, la proteasa parental tiene una identidad de secuencia con el polipéptido con SEQ ID NO: 2, 3, 19 o 20 de al menos el 70%, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, al menos el 75%, al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos una identidad del 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98% o al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% que tiene actividad de proteasa.
[0459] Por consiguiente, la lipasa parental tiene una identidad de secuencia con el polipéptido con SEQ ID NO: 4 de al menos el 70%, tal como al menos el 71%, al menos el 72%, al menos el 73%, al menos el 74%, al menos el 75%, al menos el 76%, al menos el 77%, al menos el 78%, al menos el 79%, al menos el 80%, al menos el 81%, al menos el 82%, al menos el 83%, al menos el 84%, al menos el 85%, al menos el 86%, al menos el 87%, al menos el 88%, al menos el 89%, al menos el 90%, al menos el 91%, al menos el 92%, al menos el 93%, al menos el 94%, al menos una identidad del 95%, al menos el 96%, al menos el 97%, al menos el 98% o al menos el 99%, por ejemplo, al menos el 99,1%, al menos el 99,2%, al menos el 99,3%, al menos el 99,4%, al menos el 99,5%, al menos el 99,6% o el 100% que tiene actividad de lipasa.
[0460] Las enzimas parentales pueden ser un polipéptido híbrido, en el que una región de un polipéptido está condensada en el extremo N-terminal o el extremo C-terminal de una región de otro polipéptido y proporcionando de ese modo la enzima parental de fusión. Los términos “fusión” e “híbrido” pueden usarse de manera intercambiable en el presente documento, pero constituyen el mismo significado y fin, y no deberían entenderse de manera limitativa. Un polipéptido de fusión se produce condensando un polinucleótido que codifica otro polipéptido con un polinucleótido. Las técnicas para producir polipéptidos de fusión se conocen en la técnica e incluyen ligar las secuencias codificantes que codifican los polipéptidos de modo que estén en marco y que la expresión del polipéptido de fusión esté bajo el control del/de los mismo(s) promotor(es) y el mismo terminador. Los polipéptidos de fusión también pueden construirse usando la tecnología de inteínas en la que los polipéptidos de fusión se crean después de la traducción (Cooperet al., 1993, EMBO J. 12: 2575-2583; Dawsonet al., 1994, Science 266: 776-779).
[0461] Un polipéptido de fusión puede comprender además un sitio de escisión entre los dos polipéptidos. Al secretar la proteína de fusión, el sitio se escinde liberando los dos polipéptidos. Los ejemplos de sitios de escisión incluyen, pero no se limitan a, los sitios dados a conocer en Martinet al., 2003, J. Ind. Microbiol. Biotechnol. 3: 568-576; Svetinaet al., 2000, J. Biotechnol.76: 245-251; Rasmussen-Wilsonet al., 1997, Appl. Environ. Microbiol.63: 3488-3493; Wardet al., 1995, Biotechnology 13: 498-503; y Contreraset al., 1991, Biotechnology 9: 378-381; Eatonet al., 1986, Biochemistry 25: 505-512; Collins-Racieet al., 1995, Biotechnology 13: 982-987; Carteret al., 1989, Proteins: Structure, Function, and Genetics 6: 240-248; y Stevens, 2003, Drug Discovery World 4: 35-48.
[0462] La enzima parental puede obtenerse de organismos de cualquier género. Para los fines de la presente invención, la expresión “obtenido de”, tal como se usa en el presente documento en relación con una fuente dada, significará que la parental codificada por un polinucleótido se produce por la fuente o por una cepa en la que se ha insertado el polinucleótido de la fuente. En un aspecto, la parental se secreta de manera extracelular.
[0463] Las variantes presentes en la composición detergente pueden prepararse mediante un método para obtener una variante que tiene la actividad enzimática específica, en donde el método comprende las etapas de: (a) introducir en una enzima parental una modificación en una o más (por ejemplo, varias) posiciones tal como se especifica en el presente documento; y (b) recuperar la variante.
[0464] El experto en la técnica conocerá cómo preparar una variante. Sin embargo, pueden prepararse variantes usando cualquier procedimiento de mutagénesis conocido en la técnica, tal como mutagénesis dirigida al sitio, construcción de genes sintéticos, construcción de genes semisintéticos, mutagénesis aleatoria, reordenamiento, etc.
[0465] La mutagénesis dirigida al sitio es una técnica en la que se introducen una o más (por ejemplo, varias) mutaciones en uno o más sitios definidos de un polinucleótido que codifica la parental.
[0466] La mutagénesis dirigida al sitio puede llevarse a caboin vitromediante PCR que implica el uso de cebadores oligonucleotídicos que contienen la mutación deseada. La mutagénesis dirigida al sitio también puede realizarsein vitromediante mutagénesis en casete, que implica la escisión mediante una enzima de restricción en un sitio en el plásmido que comprende un polinucleótido que codifica la parental y el ligamiento posterior de un oligonucleótido que contiene la mutación en el polinucleótido. Usualmente, la enzima de restricción que digiere el plásmido y el oligonucleótido es la misma, lo que permite que los extremos adhesivos del plásmido y el inserto se liguen entre sí. Véanse, por ejemplo, Scherer y Davis, 1979, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 76: 4949-4955; y Bartonet al., 1990, Nucleic Acids Res.18: 7349-4966.
[0467] La mutagénesis dirigida al sitio también puede llevarse a caboin vivomediante métodos conocidos en la técnica. Véanse, por ejemplo, la publicación de solicitud de patente de los Estados Unidos n.º 2004/0171154; Storiciet al., 2001, Nature Biotechnol.19: 773-776; Krenet al., 1998, Nat. Med.4: 285-290; y Calissano y Macino, 1996, Fungal Genet. Newslett.43: 15-16.
[0468] Puede usarse cualquier procedimiento de mutagénesis de sitio dirigido. Hay disponibles muchos kits comerciales que pueden usarse para preparar variantes.
[0469] La construcción de genes sintéticos implica la síntesisin vitrode una molécula polinucleotídica diseñada para que codifique un polipéptido de interés. La síntesis de genes puede realizarse utilizando un número de técnicas, tales como la tecnología basada en microchips multiplex descrita por Tianet al. (2004, Nature 432: 1050-1054) y tecnologías similares en las que se sintetizan oligonucleótidos y se ensamblan sobre chips microfluídicos fotoprogramables.
[0470] Las sustituciones, deleciones y/o inserciones de un único o múltiples aminoácidos pueden hacerse y someterse a prueba usando métodos conocidos de mutagénesis, recombinación y/o reordenamiento, seguidos de un procedimiento de examen relevante, tales como los dados a conocer por Reidhaar-Olson y Sauer, 1988, Science 241: 53-57; Bowie y Sauer, 1989, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86: 2152-2156; el documento WO 95/17413 o el documento WO 95/22625. Otros métodos que pueden usarse incluyen PCR propensa a errores, presentación en fagos (por ejemplo, Lowmanet al., 1991, Biochemistry 30: 10832-10837; documentos US5.223.409; WO 92/06204) y mutagénesis dirigida a la región (Derbyshireet al., 1986, Gene 46: 145; Neret al., 1988, DNA 7: 127).
[0471] Los métodos de mutagénesis/reordenamiento pueden combinarse con métodos de examen automatizados, de alto rendimiento, para detectar la actividad de polipéptidos mutagenizados, clonados, expresados por células huésped (Nesset al., 1999, Nature Biotechnology 17: 893-896). Las moléculas de ADN mutagenizadas que codifican polipéptidos activos pueden recuperarse a partir de las células huésped y secuenciarse rápidamente usando métodos estándar en la técnica. Estos métodos permiten determinar rápidamente la importancia de residuos aminoácido individuales en un polipéptido.
[0472] La construcción de genes semisintéticos se consigue combinando aspectos de la construcción de genes sintéticos, y/o mutagénesis dirigida al sitio, y/o mutagénesis aleatoria y/o reordenamiento. La construcción semisintética está tipificada por un proceso que utiliza fragmentos de polinucleótidos que se sintetizan en combinación con técnicas de PCR. De este modo, las regiones definidas de los genes pueden sintetizarsede novo, mientras que otras regiones pueden amplificarse usando cebadores mutagénicos específicos de sitio, mientras que aún otras regiones pueden someterse a amplificación por PCR propensa a errores o por PCR no propensa a errores. Entonces pueden reordenarse las subsecuencias de polinucleótidos.
[0473] Además de enzimas, la composición detergente puede comprender componentes adicionales. Por consiguiente, en una realización, la composición detergente comprende además al menos un agente quelante; al menos un tensioactivo; al menos un polímero sulfonado; al menos un hidrótropo; al menos un adyuvante y/o un coadyuvante; al menos un perfume; y/o al menos un tipo de sistema de blanqueo.
[0474] La elección de los componentes adicionales se encuentra dentro de la habilidad del experto e incluye ingredientes convencionales, incluyendo los componentes no limitativos ilustrativos que se exponen más adelante. La elección de los componentes puede incluir, para el cuidado de tejidos, la consideración del tipo de tejido que debe limpiarse, el tipo y/o grado de suciedad, la temperatura a la que va a tener lugar la limpieza y la formulación del producto detergente. Aunque los componentes que se mencionan más adelante están categorizados por un título general según una funcionalidad particular, esto no debe interpretarse como una limitación, ya que un componente puede comprender funcionalidades adicionales tal como podrá apreciar el experto en la técnica.
[0475] Las variantes de alfa-amilasa y proteasa pueden añadirse a una composición detergente en una cantidad que corresponde a 0,001-100 mg de proteína, tal como 0,01-100 mg de proteína, preferiblemente 0,005-50 mg de proteína, más preferiblemente 0,01-25 mg de proteína, incluso más preferiblemente 0,05-10 mg de proteína, lo más preferiblemente 0,05-5 mg de proteína e incluso lo más preferiblemente 0,01-1 mg de proteína por litro de líquido de lavado.
[0476] Las variantes de alfa-amilasa y proteasa pueden añadirse a una composición detergente en una cantidad que corresponde a 0,001-100 mg de proteína, tal como 0,01-100 mg de proteína, preferiblemente 0,005-50 mg de proteína, más preferiblemente 0,01-25 mg de proteína, incluso más preferiblemente 0,05-10 mg de proteína, lo más preferiblemente 0,05-5 mg de proteína e incluso lo más preferiblemente 0,01-1 mg de proteína por gramo de composición detergente.
[0477] Las variantes de alfa-amilasa y proteasa pueden estabilizarse usando agentes estabilizantes, que pueden seleccionarse del grupo que contiene propilenglicol, glicerol, un azúcar, un alcohol de azúcar, ácido láctico, ácido bórico, borato y derivados de ácido fenilborónico, tales como aquellos en los que el residuo R en el derivado de ácido fenilborónico es un grupo alquilo C1-C6, y entre éstos, más preferiblemente CH<3>, CH<3>CH<2>o CH<3>CH<2>CH<2>. El residuo R en el derivado del ácido fenilborónico también puede ser hidrógeno. Un ejemplo de un derivado de ácido fenilborónico es ácido 4-formilfenilborónico (4-FPBA) con la siguiente fórmula:
[0480]
[0482] Los derivados de ácido fenilborónico pueden tener, además, otras modificaciones químicas en el anillo de fenilo y, en particular, pueden contener uno o más residuos o grupos metilo, amino, nitro, cloro, fluoro, bromo, hidroxilo, formilo, etilo, acetilo, t-butilo, anisilo, bencilo, trifluoroacetilo, N-hidroxisuccinimida, t-butiloxicarbonilo, benzoílo, 4-metilbencilo, tioanizilo, tiocresilo, benciloximetilo, 4-nitrofenilo, benciloxicarbonilo, 2-nitrobenzoílo, 2-nitrofenilsulfenilo, 4-toluensulfonilo, pentafluorofenilo, difenilmetilo, 2-clorobenciloxicarbonilo, 2,4,5-triclorofenilo, 2-bromobenciloxicarbonilo, 9-fluorenilmetiloxicarbonilo, trifenilmetilo, 2,2,5,7,8-pentametilcroman-6-sulfonilo, o combinaciones de los mismos. Todos los agentes estabilizantes pueden estar presentes en la composición detergente en todas las formas protonadas o desprotonadas. Además, todos estos compuestos, en particular sus formas protonadas, pueden asociarse con cationes. Cationes preferidos a este respecto son cationes monovalentes o polivalentes, en particular divalentes, en particular iones Na (Na<+>), iones K (K<+>), iones Li (Li<+>), iones Ca (Ca<2+>), iones Mg (Mg<2+>), iones Mn (Mn<2+>) e iones Zn (Zn<2+>). Las composiciones detergentes de la presente invención pueden comprender dos o más agentes estabilizantes, por ejemplo, tales como los seleccionados del grupo que consiste en propilenglicol, glicerol, ácido 4-formilfenilborónico y borato. Un ejemplo es una composición detergente que comprende ácido 4-formilfenilborónico y/o borato. El derivado de ácido fenilborónico puede estar contenido en la composición detergente en una cantidad de desde el 0,00001 hasta el 5,0% en peso, preferiblemente desde el 0,0001 hasta el 3,0% en peso, desde el 0,001 hasta el 2,0% en peso, desde el 0,005 hasta el 1,0% en peso, desde el 0,01 hasta el 0,5% en peso, desde el 0,02 hasta el 0,3% en peso. Preferiblemente, el ácido borónico/borato está contenido en una cantidad de desde el 0,001 hasta el 5,5% en peso y preferiblemente de manera creciente de desde el 0,01 hasta el 4,5% en peso, desde el 0,05 hasta el 3,5 y desde el 0,1 hasta el 3, del 0,4 al 2,49, del 0,5 al 1,5% en peso en la composición detergente. Se ha encontrado que la adición de una combinación de borato y ácido 4-formilfenilborónico es particularmente efectiva, conduciendo a un elevado aumento en la estabilidad enzimática en composiciones detergentes. Preferiblemente, el ácido bórico/borato está contenido en una cantidad de desde el 0,001 hasta el 5,5% en peso y preferiblemente de manera creciente desde el 0,075 hasta el 4,5% en peso, desde el 0,09 hasta el 3,5 y desde el 0,1 hasta el 2,49% en peso, y el derivado de ácido fenilborónico está contenido en una cantidad de desde el 0,001 hasta el 0,08% en peso y preferiblemente de manera creciente desde el 0,003 hasta el 0,06% en peso, desde el 0,005 hasta el 0,05% en peso, desde el 0,007 hasta el 0,03% en peso y desde el 0,009 hasta el 0,01% en peso en una composición detergente. Particularmente preferida es la adición de ácido 4-formilfenilborónico en una cantidad del 1,0 al 2,0% en peso en combinación con el 1,0% en peso de borato.
[0484] La composición detergente puede comprender variantes de alfa-amilasa y proteasa que pueden estabilizarse también usando aldehídos peptídicos o cetonas, tal como se describe en los documentos WO 2005/105826 y WO 2009/118375. Otro ejemplo de composiciones detergentes se refiere a una composición detergente que comprende alfa-amilasa y una variante de proteasa tal como se describe en el presente documento, en donde la formulación detergente es tal como se da a conocer en el documento WO 97/07202.
[0486] Otros componentes de la composición detergente pueden ser tensioactivos. Por tanto, la composición detergente puede comprender uno o más tensioactivos, que pueden ser aniónicos y/o catiónicos y/o no iónicos y/o semipolares y/o zwitteriónicos, o una mezcla de los mismos. En una realización particular, la composición detergente incluye una mezcla de uno o más tensioactivos no iónicos y uno o más tensioactivos aniónicos. El/Los tensioactivo(s) está(n) presente(s) normalmente en un nivel de desde aproximadamente el 0,1% al 60% en peso, tal de aproximadamente el 1% a aproximadamente el 40%, o de aproximadamente el 3% a aproximadamente el 20%, o de aproximadamente el 3% a aproximadamente el 10%. El/Los tensioactivo(s) se elige(n) en función de la aplicación de limpieza deseada e incluye(n) cualquier tensioactivo convencional conocido en la técnica. Puede utilizarse cualquier tensioactivo conocido en la técnica por su uso en detergentes.
[0488] Cuando se incluya en el mismo, el detergente contendrá usualmente desde aproximadamente el 1% hasta aproximadamente el 40% en peso, tal como desde aproximadamente el 5% hasta aproximadamente el 30%, incluyendo desde aproximadamente el 5% hasta aproximadamente el 15%, o desde aproximadamente el 20% hasta aproximadamente el 25% de un tensioactivo aniónico. Los ejemplos no limitativos de tensioactivos aniónicos incluyen sulfatos y sulfonatos, en particular, alquilbencenosulfonatos lineales (LAS), isómeros de LAS, alquilbencenosulfonatos ramificados (BABS), fenilalcanosulfonatos, alfa-olefinsulfonatos (AOS), olefinsulfonatos, alquenosulfonatos, alcano-2,3-diilbis(sulfatos), hidroxialcanosulfonatos y disulfonatos, alquilsulfatos (AS) tales como dodecilsulfato sódico (SDS), sulfatos de alcoholes grasos (FAS), sulfatos de alcoholes primarios (PAS), etersulfatos de alcoholes (AES o AEOS o FES, también conocidos como etoxisulfatos de alcoholes o etersulfatos de alcoholes grasos), alcanosulfonatos secundarios (SAS), sulfonatos de parafina (PS), estersulfonatos, ésteres de glicerol y ácidos grasos sulfonados, ésteres metílicos de ácidos grasos alfa-sulfonados (alfa-SFMe o SES) incluyendo sulfonato de éster metílico (MES), ácido alquil- o alquenilsuccínico, ácido dodecenil/tetradecenilsuccínico (DTSA), derivados de ácido graso de aminoácidos, diésteres y monoésteres del ácido sulfosuccínico o jabón y combinaciones de los mismos.
[0490] Cuando se incluya en la misma, la composición detergente contendrá usualmente desde aproximadamente el 1% hasta aproximadamente el 40% en peso de un tensioactivo catiónico. Los ejemplos no limitativos de tensioactivos catiónicos incluyen alquildimetiletanolamina cuaternaria (ADMEAQ), bromuro de cetiltrimetilamonio (CTAB), cloruro de dimetildiestearilamonio (DSDMAC) y alquilbencildimetilamonio, y combinaciones de los mismos, compuestos de alquilamonio cuaternario y amonio cuaternario alcoxilado (AQA).
[0492] Cuando se incluya en el mismo, el detergente contendrá usualmente desde aproximadamente el 0,2% hasta aproximadamente el 40% en peso de un tensioactivo no iónico, por ejemplo, desde aproximadamente el 0,5% hasta aproximadamente el 30%, en particular desde aproximadamente el 1% hasta aproximadamente el 20%, desde aproximadamente el 3% hasta aproximadamente el 10%, tal como desde aproximadamente el 3% hasta aproximadamente el 5%, o desde aproximadamente el 8% hasta aproximadamente el 12%. Los ejemplos no limitativos de tensioactivos no iónicos incluyen etoxilatos de alcoholes (AE o AEO), propoxilatos de alcoholes, alcoholes grasos propoxilados (PFA), ésteres alquílicos de ácidos grasos alcoxilados, tales como ésteres alquílicos de ácidos grasos propoxilados y/o etoxilados, etoxilatos de alquilfenol (APE), etoxilatos de nonilfenol (NPE), alquilpoliglucósidos (APG), aminas alcoxiladas, monoetanolamidas de ácidos grasos (FAM), dietanolamidas de ácidos grasos (FADA), monoetanolamidas de ácidos grasos etoxilados (EFAM), monoetanolamida de ácidos grasos propoxilados (PFAM), amidas de ácidos grasos polihidroxialquílicos o derivados de N-acilo o N-alquilo de glucosamina (glucamidas, GA, o glucamida de ácidos grasos, FAGA), así como productos disponibles bajo los nombres comerciales SPAN y TWEEN, y combinaciones de los mismos.
[0494] Cuando se incluya en la misma, la composición detergente contendrá usualmente desde aproximadamente el 1% hasta aproximadamente el 40% en peso de un tensioactivo semipolar. Los ejemplos no limitativos de tensioactivos semipolares incluyen óxidos de amina (AO) tales como óxido de alquildimetilamina, óxido de N-(alquilo de coco)-N,N-dimetilamina y óxido de N-(alquilo de sebo)-N,N-bis(2-hidroxietil)amina, alcanolamidas de ácidos grasos y alcanolamidas de ácidos grasos etoxilados, y combinaciones de los mismos.
[0495] Cuando se incluya en la misma, la composición detergente contendrá usualmente desde aproximadamente el 1% hasta aproximadamente el 40% en peso de un tensioactivo zwitteriónico. Los ejemplos no limitativos de tensioactivos zwitteriónicos incluyen betaína, alquildimetilbetaína y sulfobetaína, y combinaciones de las mismas. El término “polímero sulfonado”, tal como se usa en el presente documento, se refiere a polímeros que contienen grupos funcionales ácido sulfónico o sulfonato.
[0496] Si se usa, el polímero se usa en cualquier cantidad adecuada de desde aproximadamente el 0,1% hasta aproximadamente el 20%, preferiblemente desde aproximadamente el 1% hasta aproximadamente el 15%, más preferiblemente desde el 2% hasta el 10% en peso de la composición. Los polímeros sulfonados/carboxilados son particularmente adecuados para las composiciones contenidas en el alcance de la invención.
[0497] Los polímeros sulfonados/carboxilados adecuados descritos en el presente documento pueden tener un peso molecular promedio en peso de menos de o igual a aproximadamente 100.000 Da, o menos de o igual a aproximadamente 75.000 Da, o menos de o igual a aproximadamente 50.000 Da, o desde aproximadamente 3.000 Da hasta aproximadamente 50.000, preferiblemente desde aproximadamente 5.000 Da hasta aproximadamente 45.000 Da.
[0498] Tal como se señala en el presente documento, los polímeros sulfonados/carboxilados pueden comprender (a) al menos una unidad estructural derivada de al menos un monómero de ácido carboxílico que tiene la fórmula general (I):
[0501]
[0503] en donde R<1>a R<4>son independientemente hidrógeno, metilo, grupo ácido carboxílico o CH<2>COOH, y en donde los grupos ácido carboxílico pueden estar neutralizados; (b) opcionalmente, una o más unidades estructurales derivadas de al menos un monómero no iónico que tiene la fórmula general (II):
[0506]
[0508] en donde R<5>es hidrógeno, alquilo C<1>a C<6>o hidroxialquilo C<1>a C<6>, y X es o bien aromático (siendo R<5>hidrógeno o metilo cuando X es aromático) o bien X es de fórmula general (III):
[0511]
[0513] en donde R<6>es (independientemente de R<5>) hidrógeno, alquilo C<1>a C<6>o hidroxialquilo C<1>a C<6>, e Y es O o N; y al menos una unidad estructural derivada de al menos un monómero de ácido sulfónico que tiene la fórmula general (IV):
[0514]
[0516] en donde R<7>es un grupo que comprende al menos un enlace sp<2>, A es O, N, P, S o una unión amido o éster, B es un grupo aromático mono- o policíclico o un grupo alifático, cada t es independientemente 0 o 1 y M<+>es un catión. En un aspecto, R<7>es un alqueno C<2>a C<6>. En otro aspecto, R<7>es eteno, buteno o propeno.
[0517] Los monómeros de ácido carboxílico preferidos incluyen uno o más de los siguientes: ácido acrílico, ácido maleico, ácido itacónico, ácido metacrílico o ésteres de etoxilato de ácidos acrílico, siendo los ácidos acrílicos y metacrílicos más preferidos. Monómeros sulfonados preferidos incluyen uno o más de los siguientes: (met)alil-sulfonato de sodio, sulfonato de vinilo, fenil(met)alil-éter-sulfonato de sodio o ácido 2-acrilamido-metilpropanosulfónico. Los monómeros no iónicos preferidos incluyen uno o más de los siguientes: (met)acrilato de metilo, (met)acrilato de etilo, (met)acrilato de t-butilo, metil-(met)acrilamida, etil-(met)acrilamida, t-butil-(met)acrilamida, estireno o [alfa]-metil-estireno.
[0518] Preferiblemente, el polímero comprende los siguientes niveles de monómeros: desde aproximadamente el 40 hasta aproximadamente el 90%, preferiblemente desde aproximadamente el 60 hasta aproximadamente el 90% en peso del polímero de uno o más monómeros de ácido carboxílico; desde aproximadamente el 5 hasta aproximadamente el 50%, preferiblemente desde aproximadamente el 10 hasta aproximadamente el 40% en peso del polímero de uno o más monómeros de ácido sulfónico; y opcionalmente desde aproximadamente el 1% hasta aproximadamente el 30%, preferiblemente desde aproximadamente el 2 hasta aproximadamente el 20% en peso del polímero de uno o más monómeros no iónicos. Un polímero especialmente preferido comprende de aproximadamente el 70% a aproximadamente el 80% en peso del polímero de al menos un monómero de ácido carboxílico y desde aproximadamente el 20% hasta aproximadamente el 30% en peso del polímero de al menos un monómero de ácido sulfónico.
[0519] El ácido carboxílico es preferiblemente ácido (met)acrílico. El monómero de ácido sulfónico es preferiblemente uno de los siguientes: ácido 2-acrilamido-metil-1-propanosulfónico, ácido 2-metacrilamido-2-metil-1-propanosulfónico, ácido 3-metacrilamido-2-hidroxipropanosulfónico, ácido alilsulfónico, ácido metalilsulfónico, ácido aliloxibencenosulfónico, ácido metaliloxibencenosulfónico, ácido 2-hidroxi-3-(2-propeniloxi)propanosulfónico, ácido 2-metil-2-propeno-l-sulfónico, ácido estirenosulfónico, ácido vinilsulfónico, acrilato de 3-sulfopropilo, metacrilato de 3-sulfopropilo, sulfometilacrilamida, sulfometilmetacrilamida y sales solubles en agua de los mismos. El monómero de ácido sulfónico insaturado es lo más preferiblemente ácido 2-acrilamido-2-propanosulfónico (AMPS).
[0520] Los polímeros disponibles comercialmente preferidos incluyen: Alcosperse 240, Aquatreat AR 540 y Aquatreat MPS suministrados por Alco Chemical; Acumer 3100, Acumer 2000, Acusol 587G y Acusol 588G suministrados por Rohm & Haas; Goodrich K-798, K-775 y K-797 suministrados por BF Goodrich; y ACP 1042 suministrado por ISP technologies Inc. Polímeros particularmente preferidos son Acusol 587G y Acusol 588G suministrados por Rohm & Haas.
[0521] En los polímeros, todos o algunos de los grupos ácido carboxílico o sulfónico pueden estar presentes en forma neutralizada, es decir, el átomo de hidrógeno de carácter ácido del grupo ácido carboxílico y/o sulfónico en algunos o en todos los grupos ácido puede estar reemplazado por iones de metales, preferiblemente iones de metales alcalinos y en particular iones sodio.
[0522] Aún otro componente de la composición detergente son hidrótropos.
[0523] Un hidrótropo es un compuesto que solubiliza compuestos hidrófobos en disoluciones acuosas (o, al contrario, sustancias polares en un entorno no polar). Normalmente, los hidrótropos tienen carácter hidrófilo e hidrófobo (las denominadas propiedades anfífilas tal como se conocen de los tensioactivos); sin embargo, la estructura molecular de los hidrótropos generalmente no favorece la autoagregación espontánea, véase por ejemplo, el artículo de revisión de Hodgdon y Kaler (2007), Current Opinion in Colloid & Interface Science 12: 121-128. Los hidrótropos no presentan ninguna concentración crítica por encima de la que tenga lugar la autoagregación, tal como se observa para los tensioactivos y lípidos que forman fases micelares, lamelares u otras mesofases bien definidas. En su lugar, muchos hidrótropos muestran un proceso de agregación de tipo continuo, en el que los tamaños de los agregados crecen a medida que aumenta la concentración. Sin embargo, muchos hidrótropos alteran el comportamiento fásico, la estabilidad y las propiedades coloidales de los sistemas que contienen sustancias de carácter polar y no polar, incluyendo las mezclas de agua, aceite, tensioactivos y polímeros. Los hidrótropos se han usado tradicionalmente en diferentes industrias, desde la farmacéutica, de cuidado personal y alimentaria hasta las aplicaciones técnicas. El uso de hidrótropos en composiciones detergentes permite obtener, por ejemplo, formulaciones más concentradas de tensioactivos (como en el proceso de compactación de detergentes líquidos eliminando el agua) sin inducir fenómenos no deseados tales como la separación de fases o una viscosidad elevada.
[0525] Por tanto, la composición detergente puede comprender el 0-5% en peso, tal como de aproximadamente el 0,5 a aproximadamente el 5% o de aproximadamente el 3% a aproximadamente el 5% de un hidrótropo. Puede utilizarse cualquier hidrótropo conocido en la técnica para su uso en detergentes. Los ejemplos no limitativos de hidrótropos incluyen el bencenosulfonato sódico, p-toluenosulfonatos sódicos (STS), xilenosulfonatos sódicos (SXS), cumenosulfonatos sódicos (SCS), cimenosulfonato sódico, óxidos de amina, alcoholes y éteres poliglicólicos, hidroxinaftoato sódico, hidroxinaftalenosulfonato sódico, etilhexilsulfato sódico y combinaciones de los mismos.
[0526] Otro componente de una composición detergente pueden ser adyuvantes y/o coadyuvantes. El término “adyuvante” puede clasificarse mediante la prueba descrita por M.K. Nagarajaet al., JAOCS, vol. 61, n.º 9 (septiembre de 1984), págs.1475-1478 para determinar el nivel mínimo de adyuvante requerido para disminuir la dureza del agua a pH 8 desde 2,0 mM (como CaCO<3>) hasta 0,10 mM en una disolución. El adyuvante puede ser particularmente un agente quelante que forma complejos solubles en agua con, por ejemplo, iones calcio y magnesio. El término “agentes quelantes” o “quelantes”, tal como se usa en el presente documento, se refiere a productos químicos que forman moléculas con ciertos iones de metales, inactivando los iones de modo que no puedan reaccionar con otros elementos, por tanto un agente de unión que suprime la actividad química formando quelatos. La quelación es la formación o presencia de dos o más uniones separadas entre un ligando y un solo átomo central. El ligando puede ser cualquier compuesto orgánico, un silicato o un fosfato. Por tanto, en una realización, la composición detergente puede comprender aproximadamente el 0-65% en peso, tal como de aproximadamente el 5% a aproximadamente el 50% de un adyuvante o coadyuvante de detergente, o una mezcla de los mismos. En un detergente para lavar la vajilla, el nivel de adyuvante es normalmente del 40-65%, particularmente del 50-65%. Particularmente, el adyuvante y/o coadyuvante puede ser un agente quelante que forme complejos solubles en agua con Ca y Mg. Puede utilizarse cualquier adyuvante o coadyuvante conocido en la técnica para su uso en detergentes para lavar ropa, ADW y de limpieza de superficies duras. Los ejemplos no limitativos de adyuvantes incluyen zeolitas, difosfatos (pirofosfatos), trifosfatos como trifosfato de sodio (STP o STPP), carbonatos tales como carbonato de sodio, silicatos solubles tal como metasilicato de sodio, silicatos estratificados (por ejemplo, SKS-6 de Hoechst), etanolaminas tales como 2-aminoetan-1-ol (MEA), iminodietanol (DEA) y 2,2’,2’’-nitrilotrietanol (TEA) y carboximetilinulina (CMI), y combinaciones de las mismas.
[0528] La composición detergente puede comprender también el 0-65% en peso, tal como de aproximadamente el 5% a aproximadamente el 40% de un adyuvante o coadyuvante, o una mezcla de los mismos. La composición detergente puede incluir un coadyuvante solo o en combinación con un adyuvante, por ejemplo, un adyuvante de zeolita. Los ejemplos no limitantes de coadyuvantes incluyen homopolímeros de poliacrilatos o copolímeros de los mismos, tales como poli(ácido acrílico) (PAA) o copoli(ácido acrílico/ácido maleico) (PAA/PMA). Otros ejemplos no limitantes incluyen citrato, quelantes tales como aminocarboxilatos, aminopolicarboxilatos y fosfonatos, y ácido alquil- o alquenilsuccínico. Los ejemplos específicos adicionales incluyen ácido 2,2’,2”-nitrilotriacético (NTA), ácido etilendiaminotetracético (EDTA), ácido dietilentriaminopentaacético (DTPA), ácido iminodisuccínico (IDS), ácido etilendiamina-N,N’-disuccícino (EDDS), ácido metilglicinodiacético (MGDA), ácido glutámico-ácido N,N-diacético (GLDA), ácido 1-hidroxietano-1,1-diilbis(fosfónico) (HEDP), ácido etilendiaminotetrakis(metilen)tetrakis(fosfónico) (EDTMPA), ácido dietilentriaminopentakis(metilen)pentakis(fosfónico) (DTPMPA), ácido N-(2-hidroxietil)iminodiacético (EDG), ácido aspártico-N-monoacético (ASMA), ácido aspártico-ácido N,N-diacético (ASDA), ácido aspártico-ácido N-monopropiónico (ASMP), ácido iminodisuccínico (IDA), ácido N-(2-sulfometil)aspártico (SMAS), ácido N-(2-sulfoetil)aspártico (SEAS), ácido N-(2-sulfometil)glutámico (SMGL), ácido N-(2-sulfoetil)glutámico (SEGL), ácido N-metiliminodiacético (MIDA), ácido α-alanina-N,N-diacético (α-ALDA), ácido serin-N,N-diacético (SEDA), ácido isoserina-N,N-diacético (ISDA), ácido fenilalanina-N,N-diacético (PHDA), ácido antranílico-ácido N,N-diacético (ANDA), ácido sulfanílico-ácido N,N-diacético (SLDA), ácido taurina-N,N-diacético (TUDA) y ácido sulfometil-N,N-diacético (SMDA), N-(hidroxietil)-etilidendiaminotriacetato (HEDTA), dietanolglicina (DEG), ácido dietilentriaminopenta(metilenfosfónico) (DTPMP), ácido aminotris(metilenfosfónico) (ATMP), y combinaciones y sales de los mismos. Se describen adyuvantes o coadyuvantes a modo de ejemplo adicionales en, por ejemplo, los documentos WO 09/102854 y US 5977053.
[0530] Aún otro componente de la composición detergente pueden ser sistemas de blanqueo. Por tanto, en una realización, la composición detergente puede comprender el 0-10% en peso, tal como de aproximadamente el 1% a aproximadamente el 5% de un sistema de blanqueo. Puede utilizarse cualquier sistema de blanqueo conocido en la técnica para su uso en detergentes para lavar ropa, ADW y de limpieza de superficies duras. Los componentes de sistemas de blanqueo adecuados incluyen catalizadores de blanqueo, fotoblanqueadores, activadores del blanqueo, fuentes de peróxido de hidrógeno tales como percarbonato sódico y perboratos sódicos, perácidos preformados y mezclas de los mismos. Los perácidos preformados adecuados incluyen, pero no se limitan a, ácidos y sales peroxicarboxílicos, ácidos y sales percarbónicos, ácidos y sales perimídicos, ácidos y sales peroximonosulfúricos, por ejemplo, Oxone (R) y mezclas de estos. Los ejemplos no limitativos de sistemas de blanqueamiento incluyen sistemas de blanqueamiento a base de peróxidos, que pueden comprender, por ejemplo, una sal inorgánica, incluyendo sales de metales alcalinos tales como sales sódicas de perborato (usualmente mono- o tetrahidrato), sales de percarbonatos, persulfatos, perfosfatos, persilicatos, en combinación con un activador de blanqueo que forma perácidos. Con activador de blanqueo quiere decirse en el presente documento un compuesto que reacciona con un blanqueante de peroxígeno como el peróxido de hidrógeno para formar un perácido. El perácido así formado constituye el blanqueante activado. Los activadores de blanqueo adecuados que deben usarse en el presente documento incluyen aquellos que pertenecen a la clase de anhídridos, imidas o amidas de ésteres. Ejemplos adecuados son tetracetiletilendiamina (TAED), 3,5,5-trimetilhexanoiloxibencenosulfonato sódico, ácido diperoxidodecanoico, 4-(dodecanoiloxi)bencenosulfonato (LOBS), 4-(decanoiloxi)bencenosulfonato, 4-(decanoiloxi)benzoato (DOBS), 4-(3,5,5-trimetilhexanoiloxi)bencenosulfonato (ISO-NOBS), tetraacetiletilendiamina (TAED) y 4-(nonanoiloxi)bencenosulfonato (NOBS) y/o aquellos dados a conocer en el documento WO98/17767. En el documento EP624154 se ha dado a conocer una familia particular de activadores de blanqueamiento de interés y en esa familia se prefiere particularmente el acetilcitrato de trietilo (ACT). El ACT o un triglicérido de cadena corta como la triacina tiene la ventaja de que es respetuoso con el medio ambiente, ya que en última instancia se degrada en ácido cítrico y alcohol. Además, el acetilcitrato de trietilo y la triacetina tienen una buena estabilidad hidrolítica en el producto cuando se almacenan y son unos activadores de blanqueo eficientes. Finalmente, el ATC proporciona una buena capacidad de adyuvancia al aditivo para lavar la ropa. Alternativamente, el sistema de blanqueamiento puede comprender peroxiácidos, por ejemplo, de tipo amida, imida o sulfona. El sistema de blanqueo también puede comprender perácidos tales como ácido 6-(ftaloilamino)percaproico (PAP). El sistema de blanqueamiento también puede incluir un catalizador de blanqueamiento. En algunas realizaciones, el componente de blanqueo puede ser un catalizador orgánico seleccionado del grupo que consiste en catalizadores orgánicos que tienen las siguientes fórmulas:
[0533]
[0536] (iii) y mezclas de los mismos; en donde cada R<1>es independientemente un grupo alquilo ramificado que contiene desde 9 hasta 24 carbonos o un grupo alquilo lineal que contiene desde 11 hasta 24 carbonos, preferentemente cada R<1>es independientemente un grupo alquilo ramificado que contiene desde 9 hasta 18 carbonos o un grupo alquilo lineal que contiene desde 11 hasta 18 carbonos, más preferentemente cada R<1>se selecciona independientemente del grupo que consiste en 2-propilheptilo, 2-butiloctilo, 2-pentilnonilo, 2-hexildecilo, n-dodecilo, n-tetradecilo, n-hexadecilo, n-octadecilo, iso-nonilo, iso-decilo, iso-tridecilo e iso-pentadecilo. Otros sistemas de blanqueo a modo de ejemplo se describen, por ejemplo, en los documentos WO2007/087258, WO2007/087244, WO2007/087259, WO2007/087242. Sistemas fotoblanqueadores adecuados pueden ser, por ejemplo, ftalocianina de cinc sulfonada.
[0538] Otro componente de una composición detergente son polímeros. Por tanto, en una realización, la composición detergente comprende un polímero.
[0540] Por consiguiente, la composición detergente puede comprender el 0-10% en peso, tal como el 0,5-5%, el 2-5%, el 0,5-2% o el 0,2-1% de un polímero. Puede utilizarse cualquier polímero conocido en la técnica por su uso en detergentes. El polímero puede actuar como coadyuvante tal como se ha mencionado anteriormente o puede proporcionar un propiedades contra la redeposición, de protección de las fibras, de desprendimiento de la suciedad, de inhibición de la transferencia de tinte, de limpieza de la grasa y/o antiespumantes. Algunos polímeros pueden tener más de una de las propiedades mencionadas anteriormente y/o más de uno de los motivos que se mencionan más adelante. Los polímeros a modo de ejemplo incluyen (carboximetil)celulosa (CMC), poli(alcohol vinílico) (PVA), poli(vinilpirrolidona) (PVP), poli(etilenglicol) o poli(óxido de etileno) (PEG), poli(etilenimina) etoxilada, carboximetilinulina (CMI), y policarboxilatos tales como PAA, PAA/PMA, ácido poliaspártico y copolímeros de metacritalo laurílico/ácido acrílico, CMC modificado hidrófobamente (HM-CMC) y siliconas, copolímeros de ácido tereftálico y glicoles oligoméricos, copolímeros de tereftalato de polietileno y tereftalato de polioxieteno (PET-POET), PVP, poli(vinilimidazol) (PVI), poli(N-óxido de vinilpiridina) (PVPO o PVPNO) y polivinilpirrolidonavinilimidazol (PVPVI). Los polímeros a modo de ejemplo adicionales incluyen policarboxilatos sulfonados, óxido de polietileno y óxido de polipropileno (PEO-PPO) y etoxisulfato de dicuaternio. Otros polímeros a modo de ejemplo se dan a conocer, por ejemplo, en el documento WO 2006/130575. También se contemplan las sales de los polímeros mencionados anteriormente.
[0541] Aún otro componente de las composiciones detergentes pueden ser agentes que modifican la tonalidad de los tejidos. Por tanto, en una realización, la composición detergente comprende un agente que modifica la tonalidad de los tejidos.
[0543] La composición detergente puede comprender también agentes que modifican la tonalidad de los tejidos, tales como colorantes o pigmentos que, cuando se formulan en composiciones detergentes, pueden depositarse sobre un tejido cuando dicho tejido se pone en contacto con un licor de lavado que comprende dichas composiciones detergentes, alterando así el tono de dicho tejido a través de la absorción/reflexión de luz visible. Los agentes blanqueadores fluorescentes emiten al menos algo de luz visible. Por el contrario, los agentes que modifican la tonalidad de los tejidos alteran el tono de una superficie, ya que absorben al menos una porción del espectro de la luz visible. Los agentes que modifican la tonalidad de los tejidos adecuados incluyen colorantes y conjugados de colorante-arcilla, y también pueden incluir pigmentos. Los colorantes adecuados incluyen colorantes de moléculas pequeñas y colorantes poliméricos. Los colorantes de moléculas pequeñas adecuados incluyen colorantes de moléculas pequeñas seleccionados del grupo que consiste en colorantes incluidos en las clasificaciones del Índice de Color (C.I.) de Azul directo, Rojo directo, Violeta directo, Azul ácido, Rojo ácido, Violeta ácido, Azul básico, Violeta básico y Rojo básico, o mezclas de los mismos, por ejemplo, tal como se describe en los documentos WO2005/03274, WO2005/03275, WO2005/03276 y EP1876226. Una composición detergente comprende preferiblemente desde aproximadamente el 0,00003% en peso hasta aproximadamente el 0,2% en peso, desde aproximadamente el 0,00008% en peso hasta aproximadamente el 0,05% en peso, o incluso desde aproximadamente el 0,0001% en peso hasta aproximadamente el 0,04% en peso de un agente que modifica la tonalidad de los tejidos. La composición puede comprender desde el 0,0001% en peso hasta el 0,2% en peso de un agente que modifica la tonalidad de los tejidos, esto puede preferirse especialmente cuando la composición esté en forma de una bolsita de dosis unitaria. También se dan a conocer agentes que modifican la tonalidad de los tejidos adecuados, por ejemplo, en WO 2007/087257 y WO2007/087243.
[0545] También pueden utilizarse cualquier componente detergente conocidos en la técnica por su uso en detergentes para lavar la ropa. Otros componentes de detergente opcionales incluyen agentes anticorrosivos, agentes antiencogimiento, agentes contra la redeposición de la suciedad, agentes antiarrugas, bactericidas, aglutinantes, inhibidores de la corrosión, agentes disgregantes/de disgregación, tintes, estabilizantes enzimáticos (incluyendo ácido bórico, boratos, CMC y/o polioles tal como propilenglicol), acondicionadores de tejidos incluyendo arcillas, cargas/sustancias auxiliares de procesamiento, agentes de blanqueo fluorescentes/abrillantadores ópticos, potenciadores de la espuma, reguladores de la espuma (espuma de jabones), perfumes, agentes de suspensión de la suciedad, suavizantes, supresores de la espuma de jabones, inhibidores del deslustrado y agentes de capilaridad, ya sean solos o en combinación. Puede utilizarse cualquier ingrediente conocido en la técnica por su uso en detergentes para lavar la ropa. La elección de tales ingredientes se encuentra dentro de la habilidad del experto.
[0547] La composición detergente puede comprender también dispersantes. En particular, los detergentes en polvo pueden comprender dispersantes. Los materiales orgánicos solubles en agua adecuados incluyen los ácidos homo- o copoliméricos o sus sales, en los que el ácido policarboxílico comprende al menos dos radicales carboxilo separados entre sí por no más de dos átomos de carbono. Dispersantes adecuados se describen, por ejemplo, en Powdered Detergents, Surfactant science series volumen 71, Marcel Dekker, Inc. La composición detergente puede comprender también uno o más agentes inhibidores de la transferencia de colorantes. Los agentes inhibidores de la transferencia de colorantes poliméricos adecuados incluyen, pero no se limitan a, polímeros de polivinilpirrolidona, polímeros de N-óxido de poliamina, copolímeros de N-vinilpirrolidona y N-vinilimidazol, poliviniloxazolidonas y polivinilimidazoles o mezclas de los mismos. Cuando están presentes en una composición en cuestión, los agentes inhibidores de la transferencia de colorantes pueden estar presentes en niveles de desde aproximadamente el 0,0001% hasta aproximadamente el 10%, desde aproximadamente el 0,01% hasta aproximadamente el 5% o incluso desde aproximadamente el 0,1% hasta aproximadamente el 3% en peso de la composición. Una composición detergente puede comprender también preferiblemente componentes adicionales que puedan tintar artículos que se estén limpiando, tal como un agente blanqueador fluorescente o abrillantadores ópticos. Cuando el abrillantador está presente, está preferiblemente a un nivel de aproximadamente el 0,01% a aproximadamente el 0,5%. En la composición puede usarse cualquier agente blanqueador fluorescente adecuado para uso en una composición detergente para lavar ropa. Los agentes blanqueadores fluorescentes usados más comúnmente son los que pertenecen a las clases de derivados de ácido diaminoestilbenosulfónico, derivados de diarilpirazolina y derivados de bisfenildiestirilo. Los ejemplos de agentes blanqueadores fluorescentes de tipo derivados de ácido diaminoestilbenosulfónico incluyen las sales sódicas de: 4,4’-bis(2-dietanolamino-4-anilino-striazin-6-ilamino)estilbeno-2,2’-disulfonato; 4,4’-bis(2,4-dianilino-s-triazin-6-ilamino)estilbeno-2,2’-disulfonato; 4,4’-bis(2-anilino-4-(N-metil-N-2-hidroxietilamino)-s-triazin-6-ilamino)estilbeno-2,2’-disulfonato, 4,4’-bis(4-fenil-2,1,3-triazol-2-il)estilbeno-2,2’-disulfonato; 4,4’-bis(2-anilino-4-(1-metil-2-hidroxietilamino)-s-triazin-6-ilamino)estilbeno-2,2’-disulfonato y 2-(estilbil-4’’-nafto-1.,2’’:4,5)-1,2,3-triazol-2’’-sulfonato. Los agentes blanqueadores fluorescentes preferidos son Tinopal DMS y Tinopal CBS disponibles de Ciba-Geigy AG, Basilea, Suiza. Tinopal DMS es la sal disódica de 4,4’-bis(2-morfolino-4-anilino-s-triazin-6-ilamino)estilbenodisulfonato. Tinopal CBS es la sal disódica de 2,2’-bis(fenilestiril)disulfonato. También es un agente blanqueador fluorescente preferido el producto disponible comercialmente Parawhite KX, suministrado por Paramount Minerals and Chemicals, Mumbai, India. Otros fluorescentes adecuados para su uso incluyen las 1-3-diarilpirazolinas y las 7-alquilaminocumarinas.
[0548] Los niveles de abrillantador fluorescente adecuados incluyen niveles inferiores de desde aproximadamente el 0,01, desde el 0,05, desde aproximadamente el 0,1 o incluso desde aproximadamente el 0,2% en peso hasta niveles superiores del 0,5 o incluso el 0,75% en peso. La composición detergente según la invención puede comprender también uno o más polímeros liberadores de la suciedad que ayudan a la eliminación de las manchas de tejidos tales como tejidos basados en algodón y poliéster, en particular la eliminación de las manchas hidrófobas de tejidos basados en poliéster Los polímeros que liberan la suciedad pueden ser, por ejemplo, polímeros basados en tereftalato aniónicos o no iónicos, polivinilcaprolactama y copolímeros relacionados, copolímeros vinílicos de injerto, poliéster poliamidas, véase, por ejemplo, el capítulo 7 en Powdered Detergents, Surfactant science series volumen 71, Marcel Dekker, Inc. Otro tipo de polímeros para liberar la suciedad son los polímeros que limpian la grasa alcoxilados anfifílicos que comprenden una estructura de núcleo y una pluralidad de grupos alcoxilato unidos a esa estructura de núcleo. La estructura de núcleo puede comprender una estructura de polialquilenimina o una estructura de polialcanolamina, tal como se describe detalladamente en el documento WO 2009/087523. Además, los copolímeros de injerto aleatorios son polímeros que liberan la suciedad adecuados. En los documentos WO 2007/138054, WO 2006/108856 y WO 2006/113314 se describen más detalladamente copolímeros de injerto adecuados. Otros polímeros para liberar la suciedad son estructuras de polisacáridos sustituidos, especialmente estructuras celulósicas sustituidas tales como derivados de celulosa modificados tales como los descritos en los documentos EP 1867808 o WO 2003/040279. Los polímeros celulósicos adecuados incluyen celulosa, éteres de celulosa, ésteres de celulosa, amidas de celulosa y mezclas de los mismos. Los polímeros celulósicos adecuados incluyen celulosa modificada aniónicamente, celulosa modificada no iónicamente, celulosa modificada catiónicamente, celulosa modificada zwitteriónicamente y mezclas de las mismas. Los polímeros celulósicos adecuados incluyen metilcelulosa, carboximetilcelulosa, etilcelulosa, hidroxiletilcelulosa, hidroxilpropilmetilcelulosa, éster de carboximetilcelulosa y mezclas de las mismas. El detergente puede comprender también uno o más agentes contra la redeposición tales como carboximetilcelulosa (CMC), poli(alcohol vinílico)(PVA), polivinilpirrolidona (PVP), polioxietileno y/o polietilenglicol (PEG), homopolímeros de ácido acrílico, copolímeros de ácido acrílico y ácido maleico y polietileniminas etoxiladas. Los polímeros a base de celulosa descritos en los polímeros para liberar la suciedad anteriores también pueden actuar como agentes contra la redeposición.
[0549] Otros materiales auxiliares adecuados incluyen, pero no se limitan a, agentes antiencogimiento, agentes antiarrugas, bactericidas, aglutinantes, portadores, tintes, estabilizantes enzimáticos, suavizantes para telas, cargas, reguladores de la espuma, hidrótropos, perfumes, pigmentos, supresores de la espuma de jabones, disolventes, estructurantes para detergentes líquidos y/o agentes que confieren elasticidad a la estructura.
[0550] Por tanto, en una realización particular, la composición detergente comprende además al menos un agente quelante; al menos un tensioactivo; al menos un polímero sulfonado; al menos un hidrótropo; al menos un adyuvante y/o coadyuvante; al menos un perfume; y/o al menos un tipo de sistema de blanqueo.
[0551] Formulación de productos detergentes
[0552] La composición detergente puede estar en cualquier forma conveniente, por ejemplo, una pastilla, un comprimido homogéneo, un comprimido que tiene dos o más capas, un polvo regular o compacto, un gránulo, una pasta, un gel o un líquido regular, compacto o concentrado.
[0553] Por tanto, en una realización, la composición detergente es una composición detergente líquida para lavar ropa, una composición detergente en polvo para lavar ropa, una composición detergente líquida para lavar vajillas o una composición detergente en polvo para lavar vajillas.
[0554] El término “composición detergente líquida para lavar ropa”, tal como se usa en el presente documento, se refiere a una composición detergente que está en una forma líquida estabilizada y se utiliza en un método para lavar un tejido. Por tanto, la composición detergente ha sido formulada para estar en forma fluida.
[0555] El término “composición detergente líquida para lavar ropa”, tal como se usa en el presente documento, se refiere a una composición detergente que está en una forma sólida, tal como un granulado, un granulado que no forma polvo o polvo, que se usa en un método para lavar un tejido.
[0556] El término “composición detergente líquida para el lavado de la vajilla”, tal como se usa en el presente documento, se refiere a una composición detergente que está en una forma líquida estabilizada y se usa en el lavado de la vajilla. El lavado de la vajilla puede ser cualquier tipo de lavado de la vajilla, tal como lavado manual de la vajilla y tal como lavado automatizado de la vajilla (ADW).
[0557] El término “composición detergente en polvo para el lavado de la vajilla”, tal como se usa en el presente documento, se refiere a una composición detergente que está en una forma sólida, tal como un granulado, polvo o unidad compacta, y se usa en el lavado de la vajilla. Una composición detergente en polvo para el lavado de la vajilla se utiliza normalmente en un lavado automatizado de la vajilla, pero el uso no se limita a un ADW de este tipo, y también puede estar prevista en cualquier otro tipo de lavado de la vajilla, tal como el lavado manual de la vajilla.
[0558] Formas de formulaciones detergentes: en capas (fases iguales o diferentes), bolsitas, frente a formas para una unidad de dosificación para máquinas.
[0559] Las bolsitas pueden configurarse como de un solo o de múltiples compartimentos. Puede ser de cualquier forma, configuración y material que sea adecuado para contener la composición, por ejemplo, sin permitir la liberación de la composición la liberación de la composición de la bolsita antes del contacto con el agua. La bolsita está hecha de una película soluble en agua que encierra un volumen interno. Dicho volumen interno puede dividirse en compartimentos de la bolsita. Las películas preferidas son materiales poliméricos, preferiblemente polímeros que se forman en una hoja o película. Los polímeros, copolímeros o derivados de los mismos preferidos se seleccionan de poliacrilatos, y copolímeros de acrilato solubles en agua, metilcelulosa, carboximetilcelulosa, dextrina sódica, etilcelulosa, hidroxietilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, maltodextrina, polimetacrilatos, lo más preferiblemente copolímeros de poli(alcohol vinílico), e hidroxipropilmetilcelulosa (HPMC). Preferiblemente, el nivel de polímero en la película, por ejemplo, PVA es de al menos aproximadamente el 60%. El peso molecular promedio preferido normalmente será de aproximadamente 20.000 a aproximadamente 150.000. Las películas también pueden ser de composiciones mezcladas que comprenden mezclas de polímeros solubles en agua y degradables hidrolíticamente tales como polilactida y poli(alcohol vinílico) (conocidos con la referencia comercial M8630 tal como se comercializan por Chris Craft In. Prod. Of Gary, Ind., EE. UU.), además de plastificantes tales como glicerol, etilenglicerol, propilenglicol, sorbitol y mezclas de los mismos. Las bolsitas pueden comprender una composición o componentes parciales de limpieza para la ropa sólidos y/o una composición o componentes parciales de limpieza líquidos separados por la película soluble en agua. El compartimento para los componentes líquidos puede tener una composición diferente a la de los compartimentos que contienen los sólidos. Ref: (US2009/0011970 A1).
[0560] Los ingredientes del detergente pueden separarse físicamente unos de otros mediante compartimentos en bolsitas que se disuelven en agua o en diferentes capas de comprimidos. De este modo, pueden evitarse interacciones negativas entre los componentes durante el almacenamiento. Los diferentes perfiles de disolución de cada uno de los compartimentos también pueden dar lugar a una disolución retardada de los componentes seleccionados en la disolución de lavado.
[0561] Un detergente líquido o en gel, que no se dosifica de manera unitaria, puede ser acuoso, conteniendo normalmente al menos el 20% en peso y hasta el 95% de agua, tal como hasta aproximadamente el 70% de agua, hasta aproximadamente el 65% de agua, hasta aproximadamente el 55% de agua, hasta aproximadamente el 45% de agua, hasta aproximadamente el 35% de agua. Pueden incluirse otros tipos de líquidos, incluyendo, sin limitación, alcanoles, aminas, dioles, éteres y polioles, en un líquido o gel acuoso. Un detergente en gel o líquido acuoso puede contener desde el 0-30% de un disolvente orgánico.
[0562] Un detergente en gel o líquido puede ser no acuoso.
[0563] Métodos y usos
[0564] En un aspecto, la invención se refiere al uso de la composición detergente tal como se describe en el presente documento en el lavado de ropa, el lavado manual de la vajilla o el lavado automático de la vajilla. Por consiguiente, la presente invención se refiere al uso de una composición detergente tal como se reivindica.
[0565] En una realización, el uso de la composición detergente tal como se describe en el presente documento es en el lavado de ropa.
[0566] En otra realización, el uso de la composición detergente tal como se describe en el presente documento es en el lavado automático de la vajilla.
[0567] Una composición detergente puede formularse, por ejemplo, como una composición detergente para el lavado a mano o a máquina de la ropa que incluye una composición de aditivo para el lavado de ropa adecuada para un pretratamiento de tejidos sucios y una composición de suavizante del tejido añadida al aclarado, o puede formularse como una composición detergente para uso en operaciones de limpieza de superficies duras en el hogar en general, o puede formularse para operaciones de lavado de la vajilla a mano o a máquina. Por tanto, en una realización, la composición detergente es una composición detergente líquida para lavar ropa, una composición detergente en polvo para lavar ropa, una composición detergente líquida para lavar vajillas; o una composición detergente en polvo para lavar vajillas.
[0568] Un proceso de limpieza o el proceso para el cuidado de un textil puede ser, por ejemplo, un proceso de lavado de ropa, un proceso de lavado de la vajilla o la limpieza de superficies duras tales como azulejos del baño, suelos, encimeras, desagües, fregaderos y lavabos. Los procesos para lavar la ropa pueden ser, por ejemplo, de lavado doméstico, pero pueden ser también de lavado industrial. Un proceso para lavar tejidos y/o prendas puede ser un proceso que comprende tratar los tejidos con una disolución de lavado que contiene una composición detergente y al menos una variante de proteasa. Un proceso de limpieza o un proceso para el cuidado de un textil puede llevarse a cabo, por ejemplo, en un proceso de lavado a máquina o en un proceso de lavado manual. La disolución de lavado puede ser, por ejemplo, una disolución de lavado acuosa que contiene una composición detergente. Los tejidos y/o prendas sometidas a un proceso de lavado, de limpieza o de cuidado de un textil pueden ser ropa lavable convencional, por ejemplo ropa del hogar. Preferentemente, la mayor parte de la ropa está constituida por prendas y tejidos, incluyendo artículos de punto, telas, vaqueros, no tejidos, fieltros, hilos y toallas. Los tejidos pueden ser de base celulósica tales como materiales celulósicos naturales, incluyendo materiales celulósicos de algodón, linaza, lino, yute, ramio, sisal o coco o hechos por el hombre (por ejemplo, los que proceden de pasta de madera) incluyendo viscosa/rayón, ramio, fibras de acetato de celulosa (tricell), lyocell o mezclas de los mismos. Los tejidos también pueden tener una base no celulósica tal como poliamidas naturales, incluyendo lana, camello, cachemir, angora, conejo y seda, o un polímero sintético tal como nailon, aramida, poliéster, acrílico, polipropileno y espandex/elastano o mezclas de los mismos, así como una mezcla de fibras de base celulósica y de base no celulósica. Ejemplos de mezclas son mezclas de algodón y/o rayón/viscosa con uno o más materiales acompañantes tales como lana, fibras sintéticas (por ejemplo, fibras de poliamida, fibras acrílicas, fibras de poliéster, fibras de poli(alcohol vinílico), fibras de poli(cloruro de vinilo), fibras de poliuretano, fibras de poliurea, fibras de aramida) y fibras que contienen celulosa (por ejemplo, rayón/viscosa, ramio, linaza, lino, yute, fibras de acetato de celulosa, lyocell).
[0569] En los últimos años se ha generado un interés cada vez mayor por reemplazar componentes en los detergentes, que se derivan de productos petroquímicos con componentes biológicos renovables tales como enzimas y polipéptidos, sin que se comprometa el rendimiento de lavado. Cuando los componentes de las composiciones detergentes cambian, se necesitan nuevas actividades enzimáticas o nuevas enzimas que tengan propiedades alternativas y/o mejoradas en comparación con las enzimas detergentes usadas comúnmente, tales como proteasas, lipasas y amilasas, para conseguir un rendimiento de lavado similar o mejorado en comparación con las composiciones detergentes tradicionales.
[0570] Las composiciones detergentes típicas incluyen diversos componentes además de las enzimas, estos componentes tienen diferentes efectos, algunos componentes como los tensioactivos disminuyen la tensión superficial en el detergente, lo que permite que la mancha que se está limpiando se separe y disperse y entonces se elimine, otros componentes como los sistemas de blanqueo eliminan el cambio del color a menudo mediante la oxidación y muchos blanqueadores también tienen fuertes propiedades bactericidas, y se usan para desinfectar y esterilizar. Aún otros componentes tal como un adyuvante y quelante suaviza, por ejemplo, el agua de lavado al retirar los iones de metales del líquido.
[0571] Las composiciones enzimáticas pueden comprender además al menos uno o más de los siguientes: un tensioactivo, un adyuvante, un quelante o agente quelante, un sistema de blanqueo o componente de blanqueo en el lavado de ropa o de la vajilla.
[0572] La cantidad de un tensioactivo, un adyuvante, un quelante o agente quelante, un sistema de blanqueo y/o componente de blanqueo puede reducirse en comparación con la cantidad de tensioactivo, adyuvante, quelante o agente quelante, sistema de blanqueo y/o componente de blanqueo usada sin la variante de proteasa de la invención añadida. Preferiblemente, el al menos un componente que es un tensioactivo, un adyuvante, un quelante o agente quelante, un sistema de blanqueo y/o un componente de blanqueo, está presente en una cantidad que es un 1% menos, tal como un 2% menos, tal como un 3% menos, tal como un 4% menos, tal como un 5% menos, tal como un 6% menos, tal como un 7% menos, tal como un 8% menos, tal como un 9% menos, tal como un 10% menos, tal como un 15% menos, tal como un 20% menos, tal como un 25% menos, tal como un 30% menos, tal como un 35% menos, tal como un 40% menos, tal como un 45% menos, tal como un 50% menos que la cantidad del componente en el sistema sin la adición de variantes de proteasa, tal como una cantidad convencional de tal componente. Las composiciones detergentes pueden ser también una composición que está libre de al menos un componente que es un tensioactivo, un adyuvante, un quelante o agente quelante, un sistema de blanqueo o componente de blanqueo y/o polímero.
[0573] En una realización, el uso es en el lavado de ropa o el lavado automático de la vajilla a baja temperatura, tal como menos de 60ºC, tal como menos de 55ºC, tal como menos de 50°, tal como menos de 45ºC, tal como menos de 40ºC, tal como menos de 35ºC, tal como menos de 30ºC, tal como menos de 25ºC, tal como menos de 20ºC, tal como menos de 15ºC.
[0574] El término “baja temperatura”, tal como se usa en el presente documento, se refiere a una temperatura de 5-60ºC, tal como 5-50ºC, preferiblemente 5-40ºC, más preferiblemente 5-30ºC, más preferiblemente 5-20ºC, lo más preferiblemente 5-15ºC y en particular 5-10ºC.
[0575] En una realización, el uso de la composición detergente es en el lavado de ropa a baja temperatura, tal como menos de 50ºC, tal como menos de 45ºC, tal como menos de 40ºC, tal como menos de 35ºC, tal como menos de 30ºC, tal como menos de 25ºC, tal como menos de 20ºC, tal como menos de 15ºC.
[0576] En otra realización, el uso de la composición detergente es en el lavado automático de la vajilla a baja temperatura, tal como menos de 60ºC, tal como menos de 55ºC, tal como menos de 50º, tal como menos de 45ºC, tal como menos de 40ºC, tal como menos de 35ºC, tal como menos de 30ºC.
[0578] Método de lavado
[0580] La composición detergente es adecuada de manera ideal para su uso en aplicaciones de lavado de ropa. Por tanto, en un aspecto, la presente divulgación se refiere a un método de lavar ropa, que comprende lavar una prenda con una composición detergente tal como se describe en el presente documento, preferiblemente a una temperatura de 40ºC o menos, o más preferiblemente a una temperatura de 30ºC o menos, o incluso más preferiblemente a una temperatura de 20ºC o menos. Por consiguiente, el método de lavar ropa comprende lavar un tejido con una composición detergente que comprende (i) al menos una variante de alfa-amilasa que comprende una modificación en una o más posiciones correspondientes a las posiciones 1, 54, 56, 72, 109, 113, 116, 134, 140, 159, 167, 169, 172, 173, 174, 181, 182, 183, 184, 189, 194, 195, 206, 255, 260, 262, 265, 284, 289, 304, 305, 347, 391, 395, 439, 469, 444, 473, 476 o 477 de SEQ ID NO: 1, en donde dicha variante de alfa-amilasa tiene una identidad de secuencia de al menos el 75%, pero menos del 100% con SEQ ID NO: 1, y en donde dicha variante de alfa-amilasa tiene actividad de alfa-amilasa; y (ii) al menos una proteasa que tiene actividad de proteasa, en donde dicha proteasa se selecciona del grupo de: (a) una proteasa que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, tal como al menos el 75%, tal como al menos el 80%, tal como al menos el 85%, tal como al menos el 90%, tal como al menos el 95%, tal como al menos el 98%, tal como al menos el 99%, tal como el 100%, con las secuencias de SEQ ID NOs: 2, 3, 19, 20 o 23; (b) una variante de proteasa que comprende una sustitución en una o más posiciones correspondientes a las posiciones 171, 173, 175, 179 o 180 de SEQ ID NO: 2, en donde dicha variante de proteasa tiene una identidad de secuencia de al menos el 75%, pero menos del 100% con SEQ ID NO: 2; (c) una variante de proteasa que comprende una modificación en una o más posiciones correspondientes a las posiciones 32, 33, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 58, 59,60, 61, 62, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 116, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 150, 152, 153, 154, 155, 156, 158, 159, 160, 161, 164, 169, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 197, 198, 203, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215 y 216 en comparación con la proteasa en SEQ ID NO:3, en donde dicha variante de proteasa tiene una identidad de secuencia de al menos el 75% con SEQ ID NO: 3, (d) una variante de proteasa que comprende una sustitución en una o más posiciones correspondientes a las posiciones 9, 15, 27, 42, 52, 55, 56, 59, 60, 66, 74, 85, 97, 99, 101, 102, 104, 116, 118, 154, 156, 157, 158, 161, 164, 176, 179, 182, 185, 188, 198, 199, 200, 203, 206, 210, 211, 212, 216, 230, 232, 239, 242, 250, 253, 255, 256 o 269, en donde la numeración es según SEQ ID NO: 3, en donde dicha variante de proteasa tiene una identidad de secuencia de al menos 60% con SEQ ID NO: 3, y (e) una variante de proteasa que comprende una sustitución en una o más posiciones correspondientes a las posiciones 32, 33, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 60, 61, 62, 63, 64, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 118, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 152, 154, 155, 156, 157, 158, 161, 162, 163, 167, 170, 175, 181, 187, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 203, 204, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 217, 218, 219, 220, 221 o 222 en comparación con la proteasa mostrada en SEQ ID NO: 23, en donde dicha variante de proteasa tiene una identidad de secuencia de al menos el 75% con SEQ ID NO: 23, preferiblemente a una temperatura de 40ºC o menor, o más preferiblemente a una temperatura de 30ºC o menor, o incluso más preferiblemente a una temperatura de 20ºC o menor.
[0582] Estos métodos incluyen un método para lavar un tejido. El método comprende las etapas de poner en contacto un tejido a lavar con una disolución para el lavado con limpieza que comprende una composición detergente. El tejido puede comprender cualquier tejido que pueda lavarse en condiciones de uso normales para el usuario. La disolución tiene preferiblemente un pH de desde aproximadamente 5,5 hasta aproximadamente 11,5. Pueden emplearse las composiciones a concentraciones de desde aproximadamente 100 ppm, preferentemente de 500 ppm a aproximadamente 15.000 ppm en disolución. Las temperaturas del agua oscilan normalmente entre aproximadamente 5ºC y aproximadamente 95ºC, incluyendo aproximadamente 10ºC, aproximadamente 15ºC, aproximadamente 20ºC, aproximadamente 25ºC, aproximadamente 30ºC, aproximadamente 35ºC, aproximadamente 40ºC, aproximadamente 45ºC, aproximadamente 50ºC, aproximadamente 55ºC, aproximadamente 60ºC, aproximadamente 65ºC, aproximadamente 70ºC, aproximadamente 75ºC, aproximadamente 80ºC, aproximadamente 85ºC y aproximadamente 90ºC. La relación de agua con respecto a tela es normalmente de desde aproximadamente 1:1 hasta aproximadamente 30:1.
[0584] En realizaciones particulares, el método de lavado se lleva a cabo a un pH de desde aproximadamente 5,0 hasta aproximadamente 11,5, o desde aproximadamente 6 hasta aproximadamente 10,5, de aproximadamente 5 a aproximadamente 11, de aproximadamente 5 a aproximadamente 10, de aproximadamente 5 a aproximadamente 9, de aproximadamente 5 a aproximadamente 8, de aproximadamente 5 a aproximadamente 7, de aproximadamente 5,5 a aproximadamente 11, de aproximadamente 5,5 a aproximadamente 10, de aproximadamente 5,5 a aproximadamente 9, de aproximadamente 5,5 a aproximadamente 8, de aproximadamente 5,5 a aproximadamente 7, de aproximadamente 6 a aproximadamente 11, de aproximadamente 6 a aproximadamente 10, de aproximadamente 6 a aproximadamente 9, de aproximadamente 6 a aproximadamente 8, de aproximadamente 6 a aproximadamente 7, de aproximadamente 6,5 a aproximadamente 11, de aproximadamente 6,5 a aproximadamente 10, de aproximadamente 6,5 a aproximadamente 9, de aproximadamente 6,5 a aproximadamente 8, de aproximadamente 6,5 a aproximadamente 7, de aproximadamente 7 a aproximadamente 11, de aproximadamente 7 a aproximadamente 10, de aproximadamente 7 a aproximadamente 9, o de aproximadamente 7 a aproximadamente 8, de aproximadamente 8 a aproximadamente 11, de aproximadamente 8 a aproximadamente 10, de aproximadamente 8 a aproximadamente 9, de aproximadamente 9 a aproximadamente 11, de aproximadamente 9 a aproximadamente 10, de aproximadamente 10 a aproximadamente 11, preferiblemente de aproximadamente 5,5 a aproximadamente 11,5.
[0586] En realizaciones particulares, el método de lavado se lleva a cabo a un grado de dureza de desde aproximadamente 0ºdH hasta aproximadamente 30ºdH, tal como aproximadamente 1ºdH, aproximadamente 2ºdH, aproximadamente 3ºdH, aproximadamente 4ºdH, aproximadamente 5ºdH, aproximadamente 6ºdH, aproximadamente 7ºdH, aproximadamente 8ºdH, aproximadamente 9ºdH, aproximadamente 10ºdH, aproximadamente 11ºdH, aproximadamente 12ºdH, aproximadamente 13ºdH, aproximadamente 14ºdH, aproximadamente 15ºdH, aproximadamente 16ºdH, aproximadamente 17ºdH, aproximadamente 18ºdH, aproximadamente 19ºdH, aproximadamente 20ºdH, aproximadamente 21ºdH, aproximadamente 22ºdH, aproximadamente 23ºdH, aproximadamente 24ºdH, aproximadamente 25ºdH, aproximadamente 26ºdH, aproximadamente 27ºdH, aproximadamente 28ºdH, aproximadamente 29ºdH y aproximadamente 30ºdH. En condiciones de lavado europeas típicas, el grado de dureza es de aproximadamente 16ºdH, en condiciones de lavado de EE. UU. típicas de aproximadamente 6ºdH y en condiciones de lavado asiáticas típicas de aproximadamente 3ºdH.
[0588] La composición detergente es adecuada de manera ideal además para su uso en aplicaciones de lavado de la vajilla, tal como el lavado automático de la vajilla. Por tanto, en un aspecto, la presente divulgación se refiere a un método de lavar vajilla en una máquina lavavajillas automática usando una composición detergente tal como se describe en el presente documento, que comprende las etapas de añadir dicha composición detergente a un compartimento para la composición detergente en dicha máquina lavavajillas automática, y liberar dicha composición detergente durante un ciclo de lavado principal. Por consiguiente, el método de lavar vajilla en una máquina lavavajillas automática usando una composición detergente que comprende (i) al menos una variante de alfa-amilasa que comprende una modificación en una o más posiciones correspondientes a las posiciones 1, 54, 56, 72, 109, 113, 116, 134, 140, 159, 167, 169, 172, 173, 174, 181, 182, 183, 184, 189, 194, 195, 206, 255, 260, 262, 265, 284, 289, 304, 305, 347, 391, 395, 439, 469, 444, 473, 476 o 477 de SEQ ID NO: 1, en donde dicha variante de alfa-amilasa tiene una identidad de secuencia de al menos un 75%, pero menos del 100% con SEQ ID NO: 1, y en donde dicha variante de alfa-amilasa tiene actividad de alfa-amilasa; y (ii) al menos una proteasa que tiene actividad de proteasa, en donde dicha proteasa se selecciona del grupo de: (a) una proteasa que tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, tal como al menos el 75%, tal como al menos el 80%, tal como al menos el 85%, tal como al menos el 90%, tal como al menos el 95%, tal como al menos el 98%, tal como al menos el 99%, tal como el 100%, con las secuencias de SEQ ID NOs: 2, 3, 19, 20 o 23; (b) una variante de proteasa que comprende una sustitución en una o más posiciones correspondientes a las posiciones 171, 173, 175, 179 o 180 de SEQ ID NO: 2, en donde dicha variante de proteasa tiene una identidad de secuencia de al menos el 75%, pero menos del 100% con SEQ ID NO: 2; (c) una variante de proteasa que comprende una modificación en una o más posiciones correspondientes a las posiciones 32, 33, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 58, 59,60, 61, 62, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 116, 123, 124, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 150, 152, 153, 154, 155, 156, 158, 159, 160, 161, 164, 169, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 183, 184, 185, 186, 197, 198, 203, 204, 205, 206, 207, 208, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215 y 216 en comparación con la proteasa en SEQ ID NO:3, en donde dicha variante de proteasa tiene una identidad de secuencia de al menos el 75% con SEQ ID NO: 3, (d) una variante de proteasa que comprende una sustitución en una o más posiciones correspondientes a las posiciones 9, 15, 27, 42, 52, 55, 56, 59, 60, 66, 74, 85, 97, 99, 101, 102, 104, 116, 118, 154, 156, 157, 158, 161, 164, 176, 179, 182, 185, 188, 198, 199, 200, 203, 206, 210, 211, 212, 216, 230, 232, 239, 242, 250, 253, 255, 256 o 269, en donde la numeración es según SEQ ID NO: 3, en donde dicha variante de proteasa tiene una identidad de secuencia de al menos 60% con SEQ ID NO: 3, y (e) una variante de proteasa que comprende una sustitución en una o más posiciones correspondientes a las posiciones 32, 33, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 60, 61, 62, 63, 64, 96, 97, 98, 99, 100, 101, 102, 103, 104, 105, 106, 107, 108, 109, 118, 125, 126, 127, 128, 129, 130, 131, 132, 133, 134, 135, 152, 154, 155, 156, 157, 158, 161, 162, 163, 167, 170, 175, 181, 187, 183, 184, 185, 186, 187, 188, 189, 190, 191, 192, 203, 204, 209, 210, 211, 212, 213, 214, 215, 216, 217, 218, 219, 220, 221 o 222 en comparación con la proteasa mostrada en SEQ ID NO: 23, en donde dicha variante de proteasa tiene una identidad de secuencia de al menos el 75% con SEQ ID NO: 23, que comprende las etapas de añadir dicha composición detergente a un compartimento de la composición detergente en dicha máquina lavavajillas automática y liberar dicha composición detergente durante un ciclo de lavado principal.
[0590] Las composiciones para su uso en los métodos descritos anteriormente pueden comprender además al menos una enzima adicional tal se expone en la sección anterior, tal como una enzima seleccionada del grupo de hidrolasas tales como proteasas, lipasas y cutinasas, carbohidrasas tales como amilasas, celulasas, hemicelulasas, xilanasas y pectinasa o una combinación de las mismas.
[0592] La presente invención se describe además mediante los siguientes ejemplos que no deben interpretarse como que limitan el alcance de la invención, que está definido mediante las reivindicaciones adjuntas.
[0593] EJEMPLOS
[0594] Materiales y métodos
[0595] Métodos de biología molecular generales:
[0596] A menos que se mencione lo contrario, las manipulaciones y transformaciones de ADN se realizaron usando métodos estándar de biología molecular (Sambrooket al. (1989); Ausubelet al. (1995); Harwood y Cutting (1990). Ensayo de estrés mecánico automático (AMSA) para lavar la ropa
[0597] Con el fin de evaluar el rendimiento de lavado en el lavado de la ropa, se llevaron a cabo experimentos usando el Ensayo de Estrés Mecánico Automático (AMSA, por sus siglas en inglés). Con el AMSA puede examinarse el rendimiento de lavado de una gran cantidad de disoluciones detergentes enzimáticas de volumen pequeño. La placa AMSA tiene varias ranuras para las disoluciones de prueba y una tapa que aprieta con firmeza la muestra de ropa, el textil que va a lavarse contra todas las aberturas de las ranuras. Durante el tiempo de lavado, la placa, las disoluciones de prueba, el textil y la tapa se agitan enérgicamente para que la disolución de prueba entre en contacto con el textil y para aplicar un estrés mecánico de manera regular, periódica y oscilante. Para una descripción adicional véase el documento WO02/42740, especialmente el párrafo “Special method embodiments” en las páginas 23-24.
[0598] El rendimiento de lavado se mide como el brillo del color del textil lavado. El brillo también puede expresarse como la intensidad de la luz reflejada por la muestra cuando se ilumina con luz blanca. Cuando la muestra está manchada, la intensidad de la luz reflejada es menor que la de la muestra limpia. Por tanto, la intensidad de la luz reflejada puede usarse para medir el rendimiento de lavado.
[0599] Las mediciones del color se realizan con un escáner de lecho plano profesional (Kodak iQsmart, Kodak, Midtager 29, DK-2605 Brøndby, Dinamarca), que se usa para capturar una imagen del textil lavado
[0600] Para extraer un valor para la intensidad de la luz a partir de las imágenes escaneadas, los valores en píxeles de 24 bits de la imagen se convierten en valores para rojo, verde y azul (RBG, por sus siglas en inglés). El valor de la intensidad (Int) se calcula sumando los valores RBG como vectores y tomando entonces la longitud del vector resultante:
[0602] Int=
[0603] Tabla 1a: Com osición de los deter entes modelo materiales de ensa o
[0605]
[0607] La dureza del agua se ajustó a 15ºdH mediante la adición de CaCl<2>, MgCl<2>y NaHCO<3>(Ca<2+>:Mg<2+>:HCO<3->= 4:1:7.5) al sistema de prueba. Tras el lavado, los textiles se enjuagaron con agua del grifo y se secaron.
[0608] Tabla 1b: Deter ente modelo X
[0611]
[0612]
[0614] La dureza del agua se ajustó a 12ºdH mediante la adición de CaCl<2>, MgCl<2>y NaHCO<3>(Ca<2+>:Mg<2+>:HCO<3->= 2:1:4.5) al sistema de prueba. Tras el lavado, los textiles se enjuagaron con agua del grifo y se secaron.
[0615] Tabla 1c: Deter ente modelo O
[0618]
[0620] La dureza del agua se ajustó a 12ºdH mediante la adición de CaCl<2>, MgCl<2>y NaHCO<3>(Ca<2+>:Mg<2+>:HCO<3->= 2:1:4.5) al sistema de prueba. Tras el lavado, los textiles se enjuagaron con agua del grifo y se secaron.
[0621] Tabla 1d: Deter ente modelo Z
[0624]
[0626] La dureza del agua se ajustó a 15ºdH mediante la adición de CaCl<2>, MgCl<2>y NaHCO<3>(Ca<2+>:Mg<2+>:HCO<3->= 4:1:7.5) al sistema de prueba. Después de lavar, los textiles se enjuagaron con agua del grifo y se secaron. El pH se ajustó con NaOH 4 M.
[0627] Tabla 1e: Deter ente modelo Z con blan ueo
[0630]
[0632] La dureza del agua se ajustó a 15ºdH mediante la adición de CaCl<2>, MgCl<2>y NaHCO<3>(Ca<2+>:Mg<2+>:HCO<3->= 4:1:7.5) al sistema de prueba. Después de lavar, los textiles se enjuagaron con agua del grifo y se secaron. El pH se ajustó con NaOH 4 M.
[0633] Tabla 1f: Formulación deter ente de base lí uida % / en la com osición total
[0635]
[0636]
[0639] Ensayo de estrés mecánico automático (AMSA) para el lavado automático de la vajilla
[0641] Se prepararon una disolución de prueba que comprende agua (21ºdH), 3,94 g/l de detergente modelo ADW con blanqueador o 3,45 g/l de detergente modelo ADW sin blanqueador, tal como se describe más adelante, y la composición detergente de la invención a concentraciones de 0,03, 0,06, 0,12 y 0,24 mg de proteína enzimática/l (40ºC) o 0,01, 0,03, 0,06 y 0,12 mg de proteína enzimática/l (50ºC). Tejidos manchados con manchas relevantes para las enzimas presentes en la composición detergente, tal como almidón (CS-28 de Center For Test materials BV, P.O. Box 120, 3133 KT, Vlaardingen, Países Bajos), se añaden y lavan durante 10 o 20 minutos a 40ºC y 50ºC, tal como se especifica más adelante. Después de un aclarado exhaustivo bajo un chorro de agua del grifo y secado en la oscuridad, se midieron los valores de intensidad lumínica de los tejidos manchados como una medida del rendimiento de lavado. Como blanco, se usó la prueba con 0 mg de proteína enzimática/l y correspondió a la contribución por parte del detergente. Preferiblemente, se aplica acción mecánica durante la etapa de lavado, por ejemplo, en forma de sacudida, rotación o agitación de la disolución de lavado con los tejidos y azulejos. Los experimentos del rendimiento del lavado AMSA se realizan bajo las condiciones experimentales especificadas a continuación:
[0643] Tabla 2: Condiciones ex erimentales
[0646]
[0647] Tabla 3: Detergente modelo ADW con blanqueador
[0650]
[0652] Tabla 4: Deter ente modelo ADW sin blan ueador
[0655]
[0657] La dureza del agua se ajusta a 21ºdH mediante la adición de CaCl<2>, MgCl<2>y NaHCO<3>(Ca<2+>:Mg<2+>:HCO<3->= 4:1:10) al sistema de prueba. Tras el lavado, los textiles se enjuagaron con agua del grifo y se secaron.
[0658] El rendimiento de lavado se midió como el brillo expresado como la intensidad de la luz reflejada por la muestra cuando se ilumina con luz blanca. Cuando la muestra estaba manchada, la intensidad de la luz reflejada fue menor que la de la muestra limpia. Por tanto, la intensidad de la luz reflejada puede usarse para medir el rendimiento de lavado.
[0659] Las mediciones del color se efectuaron con un escáner de lecho plano profesional (EPSON Expression 10000XL, EPSON) usado para capturar una imagen del textil lavado.
[0660] Para extraer un valor para la intensidad de la luz a partir de las imágenes escaneadas, valores en píxeles de color de 4824 bits de la imagen se convirtieron en valores para rojo, verde y azul (RGB). El valor de la intensidad (Int) se calcula sumando los valores RBG como vectores y tomando entonces la longitud del vector resultante:
[0663]
[0665] Lavado automático de la vajilla (ADW) a escala completa
[0666] Azulejos de melamina manchados, por ejemplo, con almidón (CS-28 de Center For Test materials BV, P.O. Box 120, 3133 KT, Vlaardingen, Países Bajos) se usaron como material de prueba y se lavaron a los programas establecidos a 40ºC y 50ºC usando agua con 21ºdH, tal como se especifica más adelante. Después de funcionar el programa de la máquina durante tres minutos, se añaden el detergente y la enzima a una concentración de 2,55 mg de enzima/lavado o 5,12 mg de enzima/lavado. Tras un aclarado a fondo bajo un chorro de agua del grifo y del secado en la oscuridad, se midieron posteriormente los valores de la intensidad de la luz de los azulejos manchados como una medida del rendimiento de lavado. Como blanco, se usa la prueba con 0 mg de proteína enzimática/l y correspondió a la contribución por parte del detergente. Los experimentos del rendimiento de lavado a escala completa se realizan bajo las condiciones experimentales especificadas a continuación:
[0667] Tabla 5: Condiciones ex erimentales
[0670]
[0672] Tabla 6: Deter ente modelo ADW con blan ueador
[0675]
[0677] Tabla 7: Deter ente modelo ADW sin blan ueador
[0680]
[0682] Después del lavado, los azulejos de melamina se enjuagan con agua del grifo y se secan.
[0683] El rendimiento de lavado se mide como diferencia en la remisión. Las mediciones de la remisión se hicieron con un Color-Eye 7000 (CE7000) usado para tomar espectros y efectuar cálculos de remisión y/o diferencia de color. La remisión se mide a 460 nm sin luz UV en el iluminante.
[0684] Ensayo de actividad de alfa-amilasa - ensayo pNP-G7
[0685] La actividad de alfa-amilasa puede determinarse mediante un método que emplea el sustrato G7-pNP. G7-pNP, que es una abreviatura para 4,6-etilideno(G<7>)-p-nitrofenil(G<1>)-α,D-maltoheptaósido, un oligosacárido bloqueado que puede escindirse mediante una endo-amilasa, tal como una alfa-amilasa. Tras la escisión, la alfa-glucosidasa incluida en el kit digiere adicionalmente el sustrato hidrolizado para liberar una molécula de PNP libre que tiene un color amarillo y que, por tanto, puede medirse por espectrofotometría visible a λ=405 nm (400-420 nm). Los kits que contienen el sustrato G7-pNP y la alfa-glucosidasa se fabrican por Roche/Hitachi (n.<o>de cat.11876473).Reactivos:
[0686] El sustrato G7-pNP de este kit contiene 4,6-etiliden-G7-pNP 22 mM y HEPES (ácido 2-[4-(2-hidroxietil)-1-piperazinil]etanosulfónico) 52,4 mM, pH 7,0).
[0687] El reactivo alfa-glucosidasa contiene HEPES 52,4 mM, NaCl 87 mM, MgCl<2>12,6 mM, CaCl<2>0,075 mM, ≥ 4 kU/l de alfa-glucosidasa).
[0688] La disolución de trabajo del sustrato se prepara mezclando 1 ml del reactivo alfa-Glucosidasa con 0,2 ml del sustrato G7-pNP. Esta disolución de trabajo del sustrato se elabora inmediatamente antes de usarla. Tampón de dilución: MOPS 50 mM, Triton X100 (polietilenglicol p-(1,1,3,3-tetrametilbutil)-fenil-éter (C<14>H<22>O(C<2>H<4>O)n (n = 9-10))) al 0,05% (p/v), CaCl<2>1 mM, pH 8,0.
[0689] Procedimiento:
[0690] La muestra de amilasa que debe analizarse se diluye en un tampón de dilución para asegurar que el pH en la muestra diluida sea 7. El ensayo se realiza transfiriendo 20 µl de muestras de enzima diluidas a una placa de microtitulación de 96 pocillos y añadiendo 80 µl de disolución de trabajo del sustrato. La disolución se mezcla y preincuba 1 minuto a temperatura ambiente y se mide la absorción cada 20 s durante 5 minutos a DO 405 nm. La pendiente (absorbancia por minuto) de la curva de absorción en función del tiempo es directamente proporcional a la actividad específica (actividad por mg de enzima) de la alfa-amilasa en cuestión en el conjunto dado de condiciones. La muestra de amilasa debe diluirse hasta un nivel en el que la pendiente esté por debajo de 0,4 unidades de absorbancia por minuto.
[0691] Ensayo de actividad de alfa-amilasa - ensayo de actividad Phadebas
[0692] La actividad de alfa-amilasa también puede determinarse mediante un método que usa el sustrato Phadebas (por ejemplo, de Magle Life Sciences, Lund, Suecia). Un comprimido de Phadebas incluye polímeros de almidón interligados que se están en forma de microesferas globulares que son insolubles en agua. Un tinte azul se une covalentemente a estas microesferas. Los polímeros de almidón interligados en la microesfera se degradan a una velocidad que es proporcional a la actividad de alfa-amilasa. Cuando la alfa-amilasa degrada los polímeros de almidón, el tinte azul liberado es soluble en agua y la concentración del tinte puede determinarse midiendo la absorbancia a 620 nm. La concentración de azul es proporcional a la actividad de alfa-amilasa en la muestra. La muestra de alfa-amilasa a analizar se diluye en tampón de actividad con el pH deseado. Se suspenden dos comprimidos de sustrato en 5 ml de tampón de actividad y se mezclan en un agitador magnético. Durante el mezclado del sustrato, se transfieren 150 µl a la placa de microtitulación (MTP) o PCR-MTP. Se añaden 30 µl de la muestra de amilasa diluida a 150 µl de sustrato y se mezcla. Se incuba durante 15 minutos a 37ºC. La reacción se detiene añadiendo 30 µl de NaOH 1 M y se mezcla. Se centrifuga la MTP durante 5 minutos a 4000xg. Se transfieren 100 µl a una MTP nueva y se mide la absorbancia a 620 nm.
[0693] La muestra de alfa-amilasa debe diluirse de tal forma que la absorbancia a 620 nm sea de entre 0 y 2,2, y está dentro del intervalo lineal del ensayo de actividad.
[0694] Ensayo de actividad de alfa-amilasa - ensayo de actividad Amylazyme
[0695] La actividad de alfa-amilasa también puede determinarse mediante un método que usa el sustrato Amylazyme (Megazyme® Amylazyme Test, suministrado por Megazyme para el ensayo de amilasas de cereales y bacterianas) que comprende AZCL-amilosa, que se ha mezclado con lactosa y estearato de magnesio y convertido en comprimidos. Un tinte azul se une covalentemente a estas microesferas. Los polímeros de amilosa interligados en la microesfera se degradan a una velocidad que es proporcional a la actividad de alfa-amilasa. Cuando la alfaamilasa degrada los polímeros de almidón, el colorante azul liberado es soluble en agua y la concentración del colorante puede determinarse midiendo la absorbancia a 590 nm. La concentración de azul es proporcional a la actividad de alfa-amilasa en la muestra.
[0696] La muestra de alfa-amilasa a analizar se diluye en tampón de actividad con el pH deseado. Se suspenden dos comprimidos de sustrato en 5 ml de tampón de actividad y se mezclan en un agitador magnético. Durante el mezclado del sustrato se transfieren 150 µl a una placa de microtitulación (MTP) o PCR-MTP. A continuación, se añaden 25 µl de muestra de amilasa diluida a 150 µl de sustrato y se mezcla. La mezcla se incuba durante 10 minutos a 37ºC. La reacción se detiene añadiendo 25 µl de NaOH 1 M y se mezcla. MTP se centrifuga durante 5 minutos a 4000xg, seguido de transferencia de 100 µl a una nueva MTP y se mide la absorbancia 590 nm. Ensayos de actividad de proteasa:
[0697] 1) Ensayo de actividad de Suc-AAPF-pNA:
[0698] La actividad proteolítica puede determinarse mediante un método que emplea el sustrato Suc-AAPF-PNA. Suc-AAPF-PNA es una abreviatura de N-Succinil-Alanina-Alanina-Prolina-Fenilalanina-p-Nitroanilida, y es un péptido bloqueado que puede escindirse mediante endo-proteasas. Tras la escisión se libera una molécula de PNA libre y tiene un color amarillo y, por tanto, puede medirse mediante espectrometría visible a una longitud de onda de 405 nm. El sustrato Suc-AAPF-PNA se fabrica por Bachem (n.º de cat. L1400, disuelto en DMSO).
[0699] La muestra de proteasa a analizar se diluyó en tampón de actividad residual (Tris 100 mM pH 8,6). El ensayo se realizó transfiriendo 60 µl de muestras de enzima diluidas a una placa de microtitulación de 96 pocillos y añadiendo 140 µl de disolución de trabajo del sustrato (0,72 mg/ml en Tris 100 mM pH 8,6). La disolución se mezcló a temperatura ambiente y la absorción se mide cada 20 s a lo largo de 5 minutos a una DO de 405 nm.
[0700] La pendiente (absorbancia por minuto) de la curva de absorción en función del tiempo es directamente proporcional a la actividad específica (actividad por mg de enzima) de la proteasa en cuestión bajo el conjunto dado de condiciones. La muestra de proteasa debería diluirse hasta un nivel en el que la pendiente sea lineal.
[0701] Ejemplo 1: Preparación y pruebas de variantes comprendidas en la composición detergente
[0702] Se construyeron variantes dirigidas al sitio de la alfa-amilasa parental (SEQ ID NOs: 1 y 14) y las proteasas parentales (SEQ ID NOs: 2 y 3) que comprenden modificaciones específicas en las regiones tal como se define en otra parte en el presente documento. Las variantes se elaboraron mediante clonación tradicional de fragmentos de ADN (Sambrooket al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2ª Ed., Cold Spring Harbor, 1989) usando PCR junto con oligonucleótidos mutagénicos diseñados adecuadamente que introducían las mutaciones deseadas en la secuencia resultante. Los oligos mutagénicos se sintetizaron de manera correspondiente a la secuencia de ADN que flanquea el/los sitio(s) de mutación deseado(s), separados por los pares de bases del ADN que definen las inserciones/deleciones/sustituciones. De esta manera se construyeron y produjeron las variantes enumeradas en la tabla 2a más adelante.
[0703] Fermentación de las variantes
[0704] La fermentación puede realizarse mediante métodos ampliamente conocidos en la técnica o tal como sigue. Una cepa deB. subtilisque alberga el plásmido de expresión relevante se rayó sobre una placa de agar LB con un antibiótico relevante (6 µg/ml de cloranfenicol) y se cultivó durante la noche a 37ºC.
[0705] Las colonias se transfirieron a 100 ml de medio PS-1 suplementado con el antibiótico relevante en un matraz de agitación de 500 ml que contenía un medio rico (por ejemplo, PS-1: 100 g/l de sacarosa (n.º de cat. de Danisco 109-0429), 40 g/l de corteza de soja (harina de soja), 10 g/l de Na<2>HPO<4>.12H<2>O (n.º de cat. de Merck 6579), 0,1 ml/l de Pluronic PE 6100 (BASF 102-3098)). El cultivo tarda normalmente 4 días a 30ºC agitando a 220 rpm. Se retiraron las células y otro material no disuelto del caldo de fermentación centrifugando a 4500 rpm durante 20-25 minutos. Posteriormente, el sobrenadante se filtró para obtener una disolución transparente.
[0706] Ejemplo 2: Combinación de alfa-amilasa y proteasa en el lavado manual de la vajilla (MDW)
[0707] Con el fin de demostrar el beneficio de una variante de alfa-amilasa en combinación con una variante de proteasa en el lavado manual de la vajilla se realizaron experimentos usando el método y las condiciones descritos a continuación.
[0708] Descripción general del método
[0709] Azulejos de melamina manchados se sumergieron en una disolución base de detergente Beromin (concentración de 0,5 g/l), que comprendía la cantidad especificada de enzimas y que tenía una temperatura de partida de 43ºC durante un periodo de tiempo dado - normalmente 0, 15 o 30 minutos.
[0710] Después de empaparlo, un azulejo dado se colocó en la máquina de fregado para el lavado manual de la vajilla (MDW) y se fregó durante número de veces dado - normalmente 12, 24 o 32 veces.
[0711] Después del fregado, el azulejo se enjuagó cuidadosamente bajo un chorro de agua del grifo durante 5 segundos y se secó dejándolo en reposo horizontalmente a temperatura ambiente durante al menos 2 h.
[0712] Después del secado, se midió el valor R460 en el centro del azulejo usando un aparato Color Eye estándar (Macbeth (EE.UU., Reino Unido, Alemania), proveedor: Largo, modelo: 370).
[0713] Azulejos sucios
[0714] Los azulejos sucios usados eran azulejos de melamina sucios estándar para someter a prueba el poder de limpieza de detergentes para el lavado de vajillas, comercializados bajo el nombre de CFT Dishwash Monitors. Los azulejos se producen por Center For Testmaterials BV (Vlaardingen, Países Bajos). Se usaron los siguientes azulejos manchados, identificados por el número de producto:
[0715] • DM-42 Tarta de Arándanos
[0716] • DM-03 Tarta de Shepherd
[0717] • DM-75 Pudin de chocolate
[0718] La máquina fregadora MDW
[0719] La máquina fregadora MDW usada era el aparato de prueba de abrasión y capacidad de lavado AB5000 (TQC Thermimport Quality Control, Capelle aan den IJssel, Países Bajos), que consiste en un dispositivo mecánico electrificado sobre el que se montó una esponja normal para el lavado de la vajilla de la cocina sobre un brazo de soporte. En funcionamiento, el brazo de soporte, y por tanto la esponja, se movió hacia atrás y hacia delante sobre un azulejo manchado de una manera uniforme reproducible durante un número de veces dado, que se estableció usando un contador incorporado en la máquina fregadora. La máquina comprende además una ranura en que puede montarse un azulejo sucio plano, intercambiable, (de aproximadamente 10 cm * 12 cm * 0,5 cm) de modo que pueda interaccionar con la esponja sobre el brazo de soporte. En una cierta posición en el ciclo de movimiento del brazo de soporte, la esponja entra en contacto con la superficie del azulejo manchado y se mueve a través del azulejo manchado de una manera reproducible. La esponja ejerce una presión constante sobre el azulejo manchado, asemejándose a una persona que limpiara la superficie de un elemento sucio dado de la batería de cocina durante un proceso manual para el lavado de vajillas. Durante el proceso de fregado hubo un flujo de disolución detergente con o sin composición de enzima sobre el azulejo manchado que estaba limpiándose. El caudal era de 3 ml/min y la dureza del agua era de 15ºdH (Ca<2+>:Mg<2+>:HCO<3->= 4:1:7.5).
[0720] Enzimas
[0721] La alfa-amilasa usada es una variante de alfa-amilasa de SEQ ID NO: 14 con las siguientes modificaciones; H1* N54S V56T K72R G109A F113Q R116Q W167F Q172G A174S G182* D183* G184T N195F V206L K391A P473R G476K y la proteasa usada era la proteasa de SEQ ID NO: 21 (proteasa 2) usada en las dosis indicadas en las tablas más adelante.
[0722] Resultados:
[0723] Los azulejos manchados usados eran DM-03 Tarta de Shepherd (tabla 8), DM-42 Yogur de arándanos (tabla 9), DM-75 Pudin de chocolate (tabla 10). Los niveles de enzimas se dosificaron encima del detergente y se basaron en la dosificación de detergente del 100%. El número de repeticiones para cada combinación de variables sometida a prueba era dos. La eliminación de la suciedad se evaluó midiendo los valores de remisión a 460 nm usando un aparato Color Eye estándar.
[0724] Tabla 8: Efecto de amilasa y proteasa sobre la eliminación de DM-03 Tarta de Shepherd. Un valor R460 de 4,95
[0725] /- 014 es e uivalente a “sin eliminación de suciedad”.
[0728]
[0730] Tabla 9: Efecto de amilasa y proteasa sobre la eliminación de DM-42 Yogur de arándanos. Un valor R460 de 495 /- 014 es e uivalente a “sin eliminación de suciedad”.
[0733]
[0734]
[0736] Tabla 10: Efecto de una alfa-amilasa y una variante de proteasa sobre la eliminación de DM-75 Pudin de chocolate. Un valor R460 de 495 /- 014 es e uivalente a “sin eliminación de suciedad”.
[0739]
[0741] Ejemplo 3: Combinación de alfa-amilasa y proteasa en el lavado manual de la vajilla (MDW)
[0742] Las enzimas usadas en el ejemplo 2 se sometieron a prueba en otra base de detergente y también en otros azulejos. Por consiguiente, el método realizado era idéntico al del ejemplo 2, con la excepción de que la base de detergente era W5 (un detergente para el lavado manual de vajillas comprado en Lidl, DK) en una dosificación de detergente del 100% de 0,6 g/l, el azulejo manchado sometido a prueba era solamente DM-42 Yogur de arándanos y el número de fregados aplicados era 12 y 24.
[0743] Resultados:
[0744] El azulejo manchado usado era DM-42 Yogur de arándanos (tabla 11). El detergente, la alfa-amilasa y la proteasa usados eran tal como se describe en el ejemplo 2. Los niveles de enzimas se dosificaron encima del detergente y se basaron en la dosificación de detergente del 100%. El número de repeticiones para cada combinación de variables sometida a prueba era dos. La eliminación de la suciedad se evaluó midiendo los valores de remisión a 460 nm usando un aparato Color Eye estándar.
[0745] Tabla 11: Efecto de una alfa-amilasa y una proteasa sobre la eliminación de DM-42 Yogur de arándanos. Un valor R460 de 495 /- 014 es e uivalente a “sin eliminación de suciedad”.
[0747]
[0748]
[0750] Ejemplo 4: Uso de amilasa y proteasa en MDW
[0751] El experimento se realizó tal como se describe en el ejemplo 2, con las siguientes especificaciones;
[0752] • Detergente: Base para lavado manual de vajillas W5 (obtenido de Lidl, Dinamarca)
[0753] • Dosificación de detergente del 100%: 5/l
[0754] • Azulejos manchados: DM-07 Pasta boloñesa, DM-54 Avena con chocolate y DM-06 Queso horneado • Número de fregados aplicados sobre la suciedad: 12 y 32
[0755] • Para DM-06 Queso horneado se colocó un peso de 75 g sobre la esponja en la máquina Resultados
[0756] Los resultados obtenidos del experimento se muestran en las tablas a continuación; la tabla 12 que muestra el efecto sobre DM-07 Pasta boloñesa, la tabla 13 que muestra el efecto sobre DM-54 Avena con chocolate y la tabla 14 que muestra el efecto sobre DM-06 Queso horneado.
[0757] Tabla 12: Efecto de amilasa roteasa sobre DM-07 Pasta boloñesa
[0760]
[0762] El efecto sinérgico de la combinación de amilasa y proteasa mostrado en la diferencia entre el “R460 ajustado” y el “R460 esperado”, que se calcula que es: (R460 ajustado) – (R460 esperado) = Sinergia => 56,65 – 45,16 = 11,49.
[0763] Tabla 13: Efecto de amilasa roteasa sobre DM-54 Avena con chocolate
[0766]
[0768] El efecto sinérgico de la combinación de amilasa y proteasa mostrado en la diferencia entre el “R460 ajustado” y el “R460 esperado”, que se calcula que es: (R460 ajustado) – (R460 esperado) = Sinergia => 26,53 – 8,49 = 18,04.
[0769] Tabla 14: Efecto de amilasa roteasa sobre DM-06 Queso horneado
[0772]
[0773]
[0775] El efecto sinérgico de la combinación de amilasa y proteasa mostrado en la diferencia entre el “R460 ajustado” y el “R460 esperado”, que se calcula que es: (R460 ajustado) – (R460 esperado) = Sinergia => 53,27 – 45,76 = 7,51.
[0776] Ejemplo 5: Alfa-amilasa y proteasa en ensayos de lavado de ropa con el tergotómetro (TOM)
[0777] El lavado con TOM es una prueba a pequeña escala que simula un lavado a máquina de ropa de “carga superior/tambor vertical”. El TOM se usa principalmente para la realización de pruebas para el lavado de ropa, bajo diferentes condiciones de lavado. Se sometieron a prueba las siguientes enzimas (y combinaciones de las mismas);
[0778] Tabla 15: Variantes de enzimas sometidas a ensa o
[0780]
[0782] Muestras de ensayo manchadas se lavaron en una disposición TOM con un detergente con o sin enzimas. Después del lavado, la eliminación de la suciedad de las muestras de ensayo se determinó midiendo la remisión de la luz usando un espectrofotómetro de remisión Color Eye 7000 de Macbeth.
[0783] Método
[0784] Las disoluciones de lavado se prepararon ajustando la dureza del agua a 14ºdH (CaCl<2>:MgCl<2>= 3:2) mediante la adición de CaCl<2>y MgCl<2>, añadiendo la cantidad deseada de detergente (modelo O en una concentración de 2 g/l) y ajustando la temperatura a 30ºC en los cubos. El detergente se disolvió durante la agitación magnética durante 15 min (la disolución de lavado se usó en el plazo de 30-60 min después de la preparación).
[0785] La temperatura y la rotación en el baño de agua en el TOM se ajustaron a 30ºC y 120 rpm, respectivamente. Cuando la temperatura se ajustó según la configuración, se añadieron 1000 ml de la disolución de lavado a los vasos de precipitados del TOM.
[0786] Muestras de ensayo (mancha de leche de cereales Yili (una mancha hecha en el hogar que consiste en arroz rojo, soja roja, cacahuete, leche) y una salsa parda 025KC (que puede obtenerse de Center For Testmaterials BV (Vlaardingen, Países Bajos)), enzima (0,188 mg EP/l de proteasa y 0,0104 mg EP/l o 0,0208 mg EP/l de Amilasa) lastre (hasta 30 g) se añadieron a los vasos de precipitados y se lavaron durante 20 min. Las muestras de ensayo se aclararon en agua fría del grifo en vasos de precipitados de 5 l durante 10 min (con el grifo abierto). Las muestras de ensayo se clasificaron, se extendieron sobre un papel de filtro, con la cara frontal hacia arriba y se dejaron secar durante la noche a temperatura ambiente.
[0787] Textil/muestras de ensayo
[0788] Se obtuvieron muestras de textil (también denominadas muestras de ensayo en el presente documento) 025KC (salsa parda) de Center for Testmaterials BV, P.O. Box 120, 3133 KT Vlaardingen, Países Bajos, y se prepararon muestras de ensayo de leche de cereales Yili tal como se expone en la tabla 16:
[0789] Tabla 16: Mancha de leche de cereales Yili
[0791]
[0792] La leche de cereales Yili y la disolución de negro de carbono se mezclaron y se agitaron durante 1 hora.600 ml de mezcla se cargaron en la muestra de ensayo CN42 y se dejaron secar durante la noche a temperatura ambiente. El rendimiento de lavado se midió como el brillo del color del textil lavado, expresado en valores de remisión (REM). Las mediciones de la remisión se hicieron usando un espectrofotómetro de remisión Color-Eye 7000 de Macbeth. Se midió cada una de las muestras de ensayo secadas. Debido al riesgo de interferencia con el fondo, las muestras de ensayo se colocaron encima de dos capas de tejido durante la medición de la remisión. La remisión se midió a 460 nm. No se incluyó el filtro de UV. Los resultados se muestran como Delta remisión en las tablas 17 y 18.
[0793] Tabla 17: Resultados de lavados de incrustaciones or TOM de manchas de leche de cereales Yili
[0795]
[0797] Tabla 18: Resultados de lavados de incrustaciones or TOM de manchas de salsa arda 025KC
[0799]
[0801] Las tablas 17 y 18 muestran la delta remisión medida para las enzimas individualmente, la delta remisión esperada y la delta remisión real. Como puede verse, el efecto sinérgico de las combinaciones de amilasa y proteasa mostrado es la diferencia entre la “Delta remisión real” y la “Delta remisión esperada”. Todas las observaciones sinérgicas son más altas en la delta remisión que las enzimas solas.

Claims (11)

1. REIVINDICACIONES
1.- Una composición detergente, que comprende:
(i) al menos una variante de alfa-amilasa que comprende una modificación en la posición 116 y una o más posiciones correspondientes a las posiciones 476, 167, 1, 54, 56, 72, 109, 113, 134, 140, 159, 169, 172, 173,
174, 181, 182, 183, 184, 189, 194, 195, 206, 255, 260, 262, 265, 284, 289, 304, 305, 347, 391, 395, 439, 469,
444, 473 o 477 de SEQ ID NO: 1, en donde dicha variante de alfa-amilasa tiene una identidad de secuencia de al menos el 75%, pero menos del 100% con SEQ ID NO: 1 y en donde dicha variante de alfa-amilasa tiene actividad de alfa-amilasa; y
(ii) al menos una proteasa que tiene actividad de proteasa, en donde dicha proteasa tiene una identidad de secuencia de al menos el 70%, tal como al menos el 75%, tal como al menos el 80%, tal como al menos el 85%, tal como al menos el 90%, tal como al menos el 95%, tal como al menos el 98%, tal como al menos el 99%, tal como el 100%, con la secuencia de SEQ ID NO: 3.
2.- La composición detergente según la reivindicación 1, en donde dicha alfa-amilasa comprende una modificación X116Q o X116H, correspondiendo la posición a la posición de SEQ ID NO: 1.
3.- La composición detergente según la reivindicación 1, en donde dicha al menos una variante de alfa-amilasa comprende una deleción en las posiciones correspondientes a 181+182; 181+183; 181+184; 182+183; 182+184; o 183+184 de SEQ ID NO:1.
4.- La composición detergente según cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde dicha variante de alfa-amilasa en (i) se selecciona del grupo que consiste en:
H1*+N54S+V56T+G109A+R116H+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+K391A+G476K;
H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+F113Q+R116Q+W167F+Q172G+A174S+G182*+D183*+G184T+N19
5F+V206L+K391A+P473R+G476K;
H1*+N54S+V56T+G109A+F113Q+R116Q+Q172N+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+A265G+K391A+P
473R+G476K;
H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+F113Q+W167F+Q172R+A174S+G182*+D183*+N195F+V206L+K39
1A+G476K;
H1*+N54S+V56T+K72R+G109A+A174S+G182*+D183*+N195 F+V206L+G255A+K391A+G476K; y
H1*+N54S+V56T+G109A+W167F+Q172E+L173P+A174K+G182*+D183*+N195 F+V206L+K391A+G476K,
en donde dicha variante de alfa-amilasa comparte una identidad de secuencia de al menos el 80%, tal como al menos el 85%, tal como al menos el 90%, tal como al menos el 93%, tal como al menos el 94%, tal como al menos el 95%, tal como al menos el 96%, tal como al menos el 97%, tal como al menos el 98%, pero menos del 100% con el polipéptido de SEQ ID NO: 1, y en donde dicha variante de alfa-amilasa tiene actividad de alfaamilasa (siendo * una deleción).
5.- La composición detergente según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, en donde el número de modificaciones en dichas variantes es de 1 a 20, por ejemplo, de 1 a 10 y de 1 a 5, tal como 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10 modificaciones.
6.- La composición detergente según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores, que comprende, además, al menos un agente quelante; al menos un tensioactivo; al menos un polímero sulfonado; al menos un hidrótropo; al menos un adyuvante y/o un coadyuvante; al menos un perfume; y/o al menos un tipo de sistema de blanqueo.
7.- La composición detergente según una cualquiera de las reivindicaciones precedentes, en donde dicha composición detergente es una composición detergente líquida para lavar ropa, una composición detergente en polvo para lavar ropa, una composición detergente líquida para lavar vajillas o una composición detergente en polvo para lavar vajillas.
8.- Uso de la composición detergente según una cualquiera de las reivindicaciones anteriores en el lavado de ropa, lavado manual de vajillas o lavado automático de vajillas.
9.- Uso según la reivindicación 8, en donde dicho uso es en el lavado de ropa o el lavado automático de la vajilla a baja temperatura, tal como menos de 60ºC, tal como menos de 55ºC, tal como menos de 50º, tal como menos de 45ºC, tal como menos de 40ºC, tal como menos de 35ºC, tal como menos de 30ºC, tal como menos de 25ºC, tal como menos de 20ºC, tal como menos de 15ºC.
10.- Un método de lavar ropa, que comprende lavar un tejido con una composición detergente según una cualquiera de las reivindicaciones 1-7, preferiblemente a una temperatura de 40ºC o menos, o más preferiblemente a una temperatura de 30ºC o menos, o incluso más preferiblemente a una temperatura de 20ºC o menos.
11.- Un método de lavar vajilla en una máquina lavavajillas automática usando una composición detergente según una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7, que comprende las etapas de añadir dicha composición detergente a un compartimento para la composición detergente en dicha máquina lavavajillas automática, y liberar dicha composición detergente durante un ciclo de lavado principal.
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