FR2480604A1 - Fractions nouvelles extraites de bacteries aerobies, douees de proprietes antitumorales, antibacteriennes et inductrices d'interferon et leur procede de preparation - Google Patents
Fractions nouvelles extraites de bacteries aerobies, douees de proprietes antitumorales, antibacteriennes et inductrices d'interferon et leur procede de preparation Download PDFInfo
- Publication number
- FR2480604A1 FR2480604A1 FR8008976A FR8008976A FR2480604A1 FR 2480604 A1 FR2480604 A1 FR 2480604A1 FR 8008976 A FR8008976 A FR 8008976A FR 8008976 A FR8008976 A FR 8008976A FR 2480604 A1 FR2480604 A1 FR 2480604A1
- Authority
- FR
- France
- Prior art keywords
- sep
- fraction
- interferon
- adjuvant
- corynebacterium
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 title claims abstract description 30
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 title claims abstract description 27
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 title claims abstract description 22
- 229960001438 immunostimulant agent Drugs 0.000 title claims abstract description 10
- 239000003022 immunostimulating agent Substances 0.000 title claims abstract description 10
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 title claims description 41
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 title claims description 41
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 title claims description 41
- 241000186216 Corynebacterium Species 0.000 title claims description 25
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 title claims description 23
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 title claims description 7
- 239000003814 drug Substances 0.000 title description 2
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims abstract description 15
- 241001148470 aerobic bacillus Species 0.000 claims abstract description 14
- 230000015961 delipidation Effects 0.000 claims abstract description 9
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 15
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 8
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 7
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 6
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 4
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 claims description 3
- 239000003599 detergent Substances 0.000 claims description 3
- 238000000227 grinding Methods 0.000 claims description 3
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 claims description 3
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 3
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 claims 3
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 claims 3
- 239000000470 constituent Substances 0.000 claims 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 abstract description 5
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 28
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 22
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 14
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 13
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 13
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 13
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 12
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 11
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 10
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 9
- 239000002799 interferon inducing agent Substances 0.000 description 9
- 239000000047 product Substances 0.000 description 7
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 6
- 244000052616 bacterial pathogen Species 0.000 description 5
- 238000011161 development Methods 0.000 description 5
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 5
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 5
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 5
- 241001464975 Cutibacterium granulosum Species 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 4
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 4
- 208000012322 Raynaud phenomenon Diseases 0.000 description 3
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 3
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 3
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 3
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 3
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 3
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 3
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 2
- 241000588832 Bordetella pertussis Species 0.000 description 2
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 2
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 2
- 241000600169 Maro Species 0.000 description 2
- 229910002651 NO3 Inorganic materials 0.000 description 2
- NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N Nitrate Chemical compound [O-][N+]([O-])=O NHNBFGGVMKEFGY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000711975 Vesicular stomatitis virus Species 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 2
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 2
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 2
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 229920006008 lipopolysaccharide Polymers 0.000 description 2
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 2
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 2
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 229920002477 rna polymer Polymers 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 2
- 230000005748 tumor development Effects 0.000 description 2
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O Ammonium Chemical compound [NH4+] QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-O 0.000 description 1
- 241000304886 Bacilli Species 0.000 description 1
- 108010023063 Bacto-peptone Proteins 0.000 description 1
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M Bromide Chemical compound [Br-] CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102000016938 Catalase Human genes 0.000 description 1
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 1
- 206010010741 Conjunctivitis Diseases 0.000 description 1
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 1
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 108010033040 Histones Proteins 0.000 description 1
- 241000218195 Lauraceae Species 0.000 description 1
- 235000017858 Laurus nobilis Nutrition 0.000 description 1
- 241000186779 Listeria monocytogenes Species 0.000 description 1
- 206010027458 Metastases to lung Diseases 0.000 description 1
- 102000016943 Muramidase Human genes 0.000 description 1
- 108010014251 Muramidase Proteins 0.000 description 1
- 241000204031 Mycoplasma Species 0.000 description 1
- 108010062010 N-Acetylmuramoyl-L-alanine Amidase Proteins 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- 108010039918 Polylysine Proteins 0.000 description 1
- 206010036790 Productive cough Diseases 0.000 description 1
- 241000606701 Rickettsia Species 0.000 description 1
- PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L Sodium Sulfate Chemical class [Na+].[Na+].[O-]S([O-])(=O)=O PMZURENOXWZQFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000005212 Terminalia tomentosa Nutrition 0.000 description 1
- 108010046334 Urease Proteins 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 244000309464 bull Species 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 1
- 125000002091 cationic group Chemical group 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 229940108605 cyclophosphamide injection Drugs 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 230000000994 depressogenic effect Effects 0.000 description 1
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 230000037149 energy metabolism Effects 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 1
- 229960002737 fructose Drugs 0.000 description 1
- 230000003861 general physiology Effects 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 210000000548 hind-foot Anatomy 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 229940090044 injection Drugs 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 1
- 231100000053 low toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 239000004325 lysozyme Substances 0.000 description 1
- 229960000274 lysozyme Drugs 0.000 description 1
- 235000010335 lysozyme Nutrition 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003458 metachromatic effect Effects 0.000 description 1
- CEQFOVLGLXCDCX-WUKNDPDISA-N methyl red Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1\N=N\C1=CC=CC=C1C(O)=O CEQFOVLGLXCDCX-WUKNDPDISA-N 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 239000003226 mitogen Substances 0.000 description 1
- 231100000957 no side effect Toxicity 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 239000013618 particulate matter Substances 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 229920000867 polyelectrolyte Polymers 0.000 description 1
- 229920000656 polylysine Polymers 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920002714 polyornithine Polymers 0.000 description 1
- 108010055896 polyornithine Proteins 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 230000000392 somatic effect Effects 0.000 description 1
- 210000003802 sputum Anatomy 0.000 description 1
- 208000024794 sputum Diseases 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 229920001059 synthetic polymer Polymers 0.000 description 1
- 210000001550 testis Anatomy 0.000 description 1
- MPMFCABZENCRHV-UHFFFAOYSA-N tilorone Chemical compound C1=C(OCCN(CC)CC)C=C2C(=O)C3=CC(OCCN(CC)CC)=CC=C3C2=C1 MPMFCABZENCRHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003104 tissue culture media Substances 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/39—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the immunostimulating additives, e.g. chemical adjuvants
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
- A61K35/74—Bacteria
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
- A61K2039/55588—Adjuvants of undefined constitution
- A61K2039/55594—Adjuvants of undefined constitution from bacteria
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
LA PRESENTE INVENTION EST RELATIVE A DES NOUVELLES FRACTIONS EXTRAITES DE BACTERIES AEROBIES. CES FRACTIONS OBTENUES A PARTIR D'UNE SOUCHE DE BACTERIES AEROBIES SOUMISES A UN TRAITEMENT DE DELIPIDATION SONT DOUEES DE PROPRIETES ADJUVANTES, IMMUNOSTIMULANTES ET ANTIBACTERIENNES. APPLICATION AUX TRAITEMENTS ANTITUMORAUX.
Description
La présente invention est relative à des fractions nouvelles ,extraites de bactéries aérobies, douées de propriétés antitumorales; antibacteriennes et inductrices d'interféron et à leur procédé de préparation.
Des travaux de recherches ont mis en évidence le pouvoir immunostimulant et antitumoral des corps microbiens tués de certaines espèces de Corynebacterium anaérobies /cf.
notamment A.R. PREVOT, B.N. HALPERN, F. BIOZZI, C. STIFFEL,
D. MOUTON, J.C. MORARD, Y. BOUTHILLIER, C. DECREUSEFOND,
C.R. Acad. Sci. (PARIS), 1963, 257 (Série D), 137. Des travaux ont ensuite été consacrés à l'isolement de fractions actives à partir de germes entiers Lcf. notamment M. RAYNAUD,
B. KOUZNETZOVA, B. BIZZINI et J.C. CHERMANN : "Etude de l'ef- fet immunostimulant de diverses espèces de Corynebacteries anaérobies et de leurs fractions" Ann. Inst. PASTEUR, 1972, 122, 695-700 ; A,R. PREVOT, M. RAYNAUD, B. BIZZINI, j.C. CHERMANN, B. KOUZNETZOVA et F. SINOUSSI : "Activité réticulostimulante des parois de Corynebacteries anaérobies "C.R. Acad. Sci.PARIS, t. 274 (10 Avril 1972)?; "B.KOUZNETZOVA et B. BIZZINI, J.C. CHERMANN, F. DEGRAND, A. PREVOT et
M. RAYNAUD :"Recent results in cancer research"l974, 47, 275-293 (Immunostimulating activity of whole cells, cell-walls and fractions of anaerobie corynebacteria)". D. MIGLIORE-SAMOUR et P. JOLLES ZFebs Letters 25 n 2 (1972) 301/ ont décrit l'isolement à partir de Corynebacteries anaérobies, d'une fraction hydrosoluble ayant conservé le pouvoir adjuvant des bactéries entières. Puis P. LALLOUETTE, B. BIZZINI et
M.RAYNAUD lN.G.M. 25/1975) 137, en appliquant le procédé de MIGLIORE-SAMOUR et JOLLES au fractionnement de Corynebacterium granulosum, ont trouvé que l'activité adjuvante et immunostimulante est associée non pas à la fraction hydrosoluble S70, mais à la fraction particulaire P40. La fraction P40 isolée à partir de C. granulosum a été caractérisée sur le plan chimique et biologique par B. BIZZINI, B. MARO et
J. LALLOUETTE, tdans Médecine et maladies infectieuses 78, n 9, tome VIII, pages 408-414 (isolement et caractérisation d'une fraction dite fraction P 40 à partir de Corynebacterium granulosum) ]. Ils ont mis en évidence l'activité curative particulièrement intéressante de la fraction P40 sur la tumeur
P815 chez la souris. D'autre part, P. LALLOUETTE, B. MARO,
A. SCHWARTZ, B.BIZZINI (cf, C.R. Acad. Sci. (PARIS), 1976), ont montré que la fraction P40 est capable de restaurer et même d'augmenter la capacité immunogénique de formation d'anticorps anti-globules rouges de mouton chez des souris déprimées par l'injection de cyclophosphamide,
Il existe par ailleurs, un-certain nombre de travaux concernant l'obtention d'inducteurs d'interférons, et notamment le Brevet français MAES 2 092 875 relatif à des complexes inducteurs de la formation d'interféron et à leur procédé de préparation.Ces complexes sont obtenus en faisant réagir un acide nucléique mono-, bi- ou tricaténaire avec un dialcoylaminoalcoyldextrane suivant un rapport pondéral alcoylaminoalcoyldextrane/acide nucléique inférieur à 1/1 ou avec un polymère synthétique d'acides aminés tels que la polylysine ou la polyornithine ou bien avec des protéines naturelles basiques telles que l'histone ou le lysozyme, ou bien encore avec un polyélectrolyte cationique synthétique tel que le bromure d'hexadiméthrine. Le Brevet français nO 2 130 533 au nom de
The Kitasato Institute décrit également un inducteur d'inter féron faiblement toxique et dépourvu d'effets secondaires, obtenu à partir du surnageant d'un milieu de culture liquide d'un organisme de phase III, de phase II ou de phase I de
Bordetella pertussîs, ou à partir d'une fraction obtenue par désintégration du protoplasme d'un organisme de phase III, de phase II ou de phase I de Bordetella pertussis et séparation ultérieure de l'endotoxine lipopolysaccharidique et de l'antigène O- des composants somatiques des bactéries. Ce Brevet fait en outre état de publications antérieures zJulius S.
D. MOUTON, J.C. MORARD, Y. BOUTHILLIER, C. DECREUSEFOND,
C.R. Acad. Sci. (PARIS), 1963, 257 (Série D), 137. Des travaux ont ensuite été consacrés à l'isolement de fractions actives à partir de germes entiers Lcf. notamment M. RAYNAUD,
B. KOUZNETZOVA, B. BIZZINI et J.C. CHERMANN : "Etude de l'ef- fet immunostimulant de diverses espèces de Corynebacteries anaérobies et de leurs fractions" Ann. Inst. PASTEUR, 1972, 122, 695-700 ; A,R. PREVOT, M. RAYNAUD, B. BIZZINI, j.C. CHERMANN, B. KOUZNETZOVA et F. SINOUSSI : "Activité réticulostimulante des parois de Corynebacteries anaérobies "C.R. Acad. Sci.PARIS, t. 274 (10 Avril 1972)?; "B.KOUZNETZOVA et B. BIZZINI, J.C. CHERMANN, F. DEGRAND, A. PREVOT et
M. RAYNAUD :"Recent results in cancer research"l974, 47, 275-293 (Immunostimulating activity of whole cells, cell-walls and fractions of anaerobie corynebacteria)". D. MIGLIORE-SAMOUR et P. JOLLES ZFebs Letters 25 n 2 (1972) 301/ ont décrit l'isolement à partir de Corynebacteries anaérobies, d'une fraction hydrosoluble ayant conservé le pouvoir adjuvant des bactéries entières. Puis P. LALLOUETTE, B. BIZZINI et
M.RAYNAUD lN.G.M. 25/1975) 137, en appliquant le procédé de MIGLIORE-SAMOUR et JOLLES au fractionnement de Corynebacterium granulosum, ont trouvé que l'activité adjuvante et immunostimulante est associée non pas à la fraction hydrosoluble S70, mais à la fraction particulaire P40. La fraction P40 isolée à partir de C. granulosum a été caractérisée sur le plan chimique et biologique par B. BIZZINI, B. MARO et
J. LALLOUETTE, tdans Médecine et maladies infectieuses 78, n 9, tome VIII, pages 408-414 (isolement et caractérisation d'une fraction dite fraction P 40 à partir de Corynebacterium granulosum) ]. Ils ont mis en évidence l'activité curative particulièrement intéressante de la fraction P40 sur la tumeur
P815 chez la souris. D'autre part, P. LALLOUETTE, B. MARO,
A. SCHWARTZ, B.BIZZINI (cf, C.R. Acad. Sci. (PARIS), 1976), ont montré que la fraction P40 est capable de restaurer et même d'augmenter la capacité immunogénique de formation d'anticorps anti-globules rouges de mouton chez des souris déprimées par l'injection de cyclophosphamide,
Il existe par ailleurs, un-certain nombre de travaux concernant l'obtention d'inducteurs d'interférons, et notamment le Brevet français MAES 2 092 875 relatif à des complexes inducteurs de la formation d'interféron et à leur procédé de préparation.Ces complexes sont obtenus en faisant réagir un acide nucléique mono-, bi- ou tricaténaire avec un dialcoylaminoalcoyldextrane suivant un rapport pondéral alcoylaminoalcoyldextrane/acide nucléique inférieur à 1/1 ou avec un polymère synthétique d'acides aminés tels que la polylysine ou la polyornithine ou bien avec des protéines naturelles basiques telles que l'histone ou le lysozyme, ou bien encore avec un polyélectrolyte cationique synthétique tel que le bromure d'hexadiméthrine. Le Brevet français nO 2 130 533 au nom de
The Kitasato Institute décrit également un inducteur d'inter féron faiblement toxique et dépourvu d'effets secondaires, obtenu à partir du surnageant d'un milieu de culture liquide d'un organisme de phase III, de phase II ou de phase I de
Bordetella pertussîs, ou à partir d'une fraction obtenue par désintégration du protoplasme d'un organisme de phase III, de phase II ou de phase I de Bordetella pertussis et séparation ultérieure de l'endotoxine lipopolysaccharidique et de l'antigène O- des composants somatiques des bactéries. Ce Brevet fait en outre état de publications antérieures zJulius S.
YOUNGER, Journal General Physiology, 56 (1), Part 2, pages 25-40 (1970) et J. VILCEK, Virology Monograph, Vol. 6, Interferon, Editions SPRINGER, 1969, p. 21-22/ qui décrivent des inducteurs d'interférons pour la prévention des maladies infectieuses virales, tels que divers virus, des bactéries (en particulier des bactéries Gram négatives), les endotoxines lipopolysaccharidiques de ces bactéries, des produits métaboliques de moisissures, des polysaccharides et acides ribonucléiques en double-hélice, tous considérés comme toxiques et induisant des effets secondaires indésirables.Le Brevet américain
UPJOHN 4 007 086 décrit, pour sa part, un procédé de production d'interféron in vitro qui consiste à soumettre des cellules humaines ou animales productrices d'interféron à un rayonnement ultra-violet de 50 ergs/mm à 2 500 ergs/mm, avant, en même temps ou après l'addition à ces cellules d'un
inducteur d'interféron non viral. L'inducteur d'interféron mis en oeuvre selon ce Brevet peut être une endotoxine, une bactérie, un agent de conjonctivite trachomateuse, un mycoplasme, un protozoaire, un rickettsia, un polymère synthétique, un mitogène, un polysaccharide, un antibiotique, un inducteur d'interféron de bas poids moléculaire tel que le chlorhydrate de tilorone, les acides nucléiques naturels et synthétiques et notamment les acides ribonucléiques mono- ou di- caténaires et leurs complexes avec des polysaccharides et d'autres substances.
UPJOHN 4 007 086 décrit, pour sa part, un procédé de production d'interféron in vitro qui consiste à soumettre des cellules humaines ou animales productrices d'interféron à un rayonnement ultra-violet de 50 ergs/mm à 2 500 ergs/mm, avant, en même temps ou après l'addition à ces cellules d'un
inducteur d'interféron non viral. L'inducteur d'interféron mis en oeuvre selon ce Brevet peut être une endotoxine, une bactérie, un agent de conjonctivite trachomateuse, un mycoplasme, un protozoaire, un rickettsia, un polymère synthétique, un mitogène, un polysaccharide, un antibiotique, un inducteur d'interféron de bas poids moléculaire tel que le chlorhydrate de tilorone, les acides nucléiques naturels et synthétiques et notamment les acides ribonucléiques mono- ou di- caténaires et leurs complexes avec des polysaccharides et d'autres substances.
La possibilité de disposer d'un inducteur d'inter féron non toxique et dépourvu d'effets secondaires est d'autant plus importante qu'il ne se produit d'interféron qu'en présence d'inducteurs d'interféron. Or, l'interféron, qui est une protéine qui apparait dans le sang ou les organes des animaux ou dans les milieux de cultures de tissus lorsque ceuxci sont soumis à l'action d'un inducteur d'interféron, empêche ou atténue les maladies virales.
La présente invention a pour but de pourvoir à un nouvel agent présentant à.la fois, des propriétés adjuvantes, des propriétés immunostimulantes, des propriétés antibactérien- nes, et des propriétés d'induction d'interféron.
Comme on l'a montré plus haut, le pouvoir adjuvant et immunostimulant des Corynébactéries anaérobies est amplement démontré. Par contre, les essais effectués sur les Corynebacteries aérobies connues ont montré que ces dernières sont dépourvues de propriétés adjuvantes et immunostimulantes
(Comptes-rendus de l'Académie des Sciences Paris 1964, tome
258, p. 4619-4621).
(Comptes-rendus de l'Académie des Sciences Paris 1964, tome
258, p. 4619-4621).
Les Inventeurs ont isolé des crachats d'un malade
atteint d'un cancer généralisé avec des métastases pulmonaires
et mésentériques étendues, un nouveau Corynebacterium aérobie,
en culture pure d'emblée.
atteint d'un cancer généralisé avec des métastases pulmonaires
et mésentériques étendues, un nouveau Corynebacterium aérobie,
en culture pure d'emblée.
La culture de ce Corybbacteriun aérobie a été effectuée suivant les techniques usuelles, soit en flacon de verre de 5 litres de capacité, soit en fermenteur agité de 50 litres de capacité, soit encore sur milieu solide.
La bactérie a été cultivée sur différents milieux: bouillon ordinaire, gélose ordinaire, bouillon ordinaire enrichi de Bactopeptone et d'extrait de levure.
Les caractéristiques de la bactérie isolée sont celles du genre Corynebacterium aérobie, à savoir
Morphologie : bacilles grêles en forme de bâtonnets, rares
formes en massues orientées en V, ou en amas,
ou en peigne. Gram +, présentant des corpus
cules métachromatiques.
Morphologie : bacilles grêles en forme de bâtonnets, rares
formes en massues orientées en V, ou en amas,
ou en peigne. Gram +, présentant des corpus
cules métachromatiques.
Culture
a) Sur bouillon ordinaire, trouble, puis dépôt et
formation d'un voile en surface après quelques jours
b) Sur gélose ordinaire : colonies opaques appa
raissant en 24 heures, s'élargissant au-delà
en prenant une teinte jaunatre.
a) Sur bouillon ordinaire, trouble, puis dépôt et
formation d'un voile en surface après quelques jours
b) Sur gélose ordinaire : colonies opaques appa
raissant en 24 heures, s'élargissant au-delà
en prenant une teinte jaunatre.
Métabolisme énergétique
Nitrate + (NO3 - NO2+1)
Uréase +
Catalase +
Rouge de méthyle +
Caractères biochimiques
Dextrine : 1,2 - 3
Glucose +
Lévulose +
Ce germe, qui n'a pu être identifié avec aucune espèce connue, a été désigné sous le nom de Corynebacteriun catarrhalis par les Inventeurs et a fait l'objet d'un dépôt dans la Collection Nationale de Cultures de Microorganismes tenue par 1'INSTITUT PASTEUR, en date du 21 Février 1980, sous le numéro I-116,
La présente invention a pour objet des fractions adjuvantes, immunostimulantes et douées d'activité antibactérienne, obtenues à partir de souches de bactéries aérobies soumises à un traitement de délipidation.
Nitrate + (NO3 - NO2+1)
Uréase +
Catalase +
Rouge de méthyle +
Caractères biochimiques
Dextrine : 1,2 - 3
Glucose +
Lévulose +
Ce germe, qui n'a pu être identifié avec aucune espèce connue, a été désigné sous le nom de Corynebacteriun catarrhalis par les Inventeurs et a fait l'objet d'un dépôt dans la Collection Nationale de Cultures de Microorganismes tenue par 1'INSTITUT PASTEUR, en date du 21 Février 1980, sous le numéro I-116,
La présente invention a pour objet des fractions adjuvantes, immunostimulantes et douées d'activité antibactérienne, obtenues à partir de souches de bactéries aérobies soumises à un traitement de délipidation.
L'invention a également pour objet des fractions adjuvantes, immunostimulantes, antibactériennes et/ou inductrices d'interféron dépourvues de toxicité, obtenues à partir de souches de bactéries aérobies soumises à un traitement de délipidation suivi d'une extraction douce des cellules délipidées, par broyage et homogénéisation en milieu aqueux, en présence ou non d'un détergent non-ionique.
Egalement conformément à l'invention, lesdites fractions adjuvantes, immunostimulantes et douées d'activité antibactérienne sont constituées par des cellules entières de bactéries aérobies délipidées.
Conformément à l'invention, lesdites fractions douées de propriétés adjuvantes, immunostimulantes, antibactériennes et inductrices d'interféron sont constituées par une fraction particulaire insoluble extraite de cellules bactériennes entières de bactéries aérobies délipidées.
Selon un mode de réalisation avantageux de l'invention, lesdites fractions sont douées de propriétés adjuvantes, immunostimulantes et antibactériennes, et sont constituées par des cellules entières délipidées d'une souche de
Corynebactérium aérobie nouvellement isolée, dénommée
Corynebacterium catarrhalis, déposée auprès de la Collection
Nationale de Cultures de Microorganismes tenue par 1'INSTITUT PASTEUR, en date du 21 Février 1980, sous le numéro I-116.
Corynebactérium aérobie nouvellement isolée, dénommée
Corynebacterium catarrhalis, déposée auprès de la Collection
Nationale de Cultures de Microorganismes tenue par 1'INSTITUT PASTEUR, en date du 21 Février 1980, sous le numéro I-116.
Selon encore une autre disposition avantageuse de ce mode de réalisation, lesdites fractions sont douées de propriétés adjuvantes, immunostimulantes, antibactériennes et inductrices d'interféron, et sot constituées par une fraction particulaire insoluble extraite de cellules bactériennes entières, délipidées, de Corynebacterium catarrhalis.
Selon encore une autre disposition avantageuse de ce mode de réalisation, lesdites fractions sont douées de propriétés inductrices d'interféron et sont constituées par une fraction hydrosoluble extraite de cellules entières, délipidées, de Corynebacterium catarrhalis.
La présente invention a également pour objet un procédé d'obtention de fractions adjuvantes, immunostimulantes et douées d'activité antibactérienne , d 'obtention de fractions adjuvantes, iuuuno- stimulantes , antibactériennes et inductrices d'interféron et d'obtention de fractions inductrices d'interféron.Ce procédé est essentiellement caractérisé en ce que l'on soumet des cellules entières de bactéries aéro bies,notamment de Corynebacterium aérobies,et plus particulièrement de
Corynebacterium catarrhalis,à un traitement de délipidation,par exemple en mettant en oeuvre la méthode de délipidation décrite par A. AEBI et
Alia l, Soc. Chtn, Biol. 35, 661 (1953)7,1equel traitement est éventuellement suivi d'un traitement d'extraction douce appliquée aux cellules délipidées, tel que celui décrit dans le Brevet ANVAR n 74 15570 du 6 Mai 1974 par P. JOLLES et D. MISLIORErS2DER, qui permet de recueillir une fraction particulaire insoluble et une fraction particulaire soluble.
Corynebacterium catarrhalis,à un traitement de délipidation,par exemple en mettant en oeuvre la méthode de délipidation décrite par A. AEBI et
Alia l, Soc. Chtn, Biol. 35, 661 (1953)7,1equel traitement est éventuellement suivi d'un traitement d'extraction douce appliquée aux cellules délipidées, tel que celui décrit dans le Brevet ANVAR n 74 15570 du 6 Mai 1974 par P. JOLLES et D. MISLIORErS2DER, qui permet de recueillir une fraction particulaire insoluble et une fraction particulaire soluble.
Outre les dispositions qui précèdent, l'invention comprend encore d'autres dispositions, qui-ressortiront de la description qui va suivre.
La présente invention vise plus particulièrement les fractions douées de propriétés adjuvantes, immunostimulantes, antibactériennes, et inductrices d'interféron conformes aux dispositions qui précèdent, ainsi que leurs procédés d'obtention, et les compostions pharmaceutiques les contenant, lesquelles sont avantageusement constituées par une fraction particulaire insoluble extraite de cellules bactériennes, délipidées, de Corynebacterium catarrhalis associée à un véhicule d'administration approprié usuel, ainsi qu'éventuellement à un autre constituant actif, tel qu'un vaccin.
L'invention sera mieux comprise à l'aide du complément de description qui va suivre, qui se réfère d'une part à un exemple de préparation de fractions actives conformes à l'invention, et d'autre part à des compte-rendus d'expérimentations pharmacologiques destinées à démontrer le pouvoir adjuvant, immunostimulant et antihactérien et l'activité inductrice d'interféron des fractions actives conformes à l'invention
I1 doit être bien entendu, toutefois, que ces exemple et compte-rendus d'expérimentations sont donnés uniquement à titre d'illustration de l'objet de l'invention, dont ils ne constituent en aucune manière une limitation.
I1 doit être bien entendu, toutefois, que ces exemple et compte-rendus d'expérimentations sont donnés uniquement à titre d'illustration de l'objet de l'invention, dont ils ne constituent en aucune manière une limitation.
Exemple de preparati-on de fractions actives conformes à l'invention
A. Des cellules d'une culture d'un Corynebacterium aérobie dé
nommé Corynebacterium catarrhalis, déposé dans la Collec
tion Nationale de Cultures de Microorganismes tenue par
1'INSTITUT PASTEUR,en date du 21 Février 1980 sous le
numéro I-116, sont soumises à un processus de délipidation
conformément à la méthode décrite par A. AEBI et Coll.,
Bull. Soc. Chim. Biol. 35, 661 (1953).
A. Des cellules d'une culture d'un Corynebacterium aérobie dé
nommé Corynebacterium catarrhalis, déposé dans la Collec
tion Nationale de Cultures de Microorganismes tenue par
1'INSTITUT PASTEUR,en date du 21 Février 1980 sous le
numéro I-116, sont soumises à un processus de délipidation
conformément à la méthode décrite par A. AEBI et Coll.,
Bull. Soc. Chim. Biol. 35, 661 (1953).
B. 50 g des cellules délipidées obtenues en A ci-dessus sont
broyés et homogénéisés dans 250 cm3 d'eau contenant un dé
tergent non-ionique du type du "NP-40", dans unbroyeur de
type "OMNI MIXER FORVALL".
broyés et homogénéisés dans 250 cm3 d'eau contenant un dé
tergent non-ionique du type du "NP-40", dans unbroyeur de
type "OMNI MIXER FORVALL".
Après agitation pendant 5 heures à la température du laboratoire, suivie d'une centrifugation pendant 15 minu- tes à 40C (2 000 g), on chauffe la couche surnageante à 800C, puis l'on ajoute de la solution saturée de sulfate d'ammonium de façon à obtenir une solution à 40 % de saturation.
On maintient pendant 12 heures à 40C, puis on centrifuge pendant 15 minutes à 40C (à 4 000 g), et on recueille un précipité constitué par la fraction CBAp40.
La fraction hydrosoluble présente dans le surnageant de précipitation de la fraction CBAp40 est désignée sous le nom de fraction LS.
Le précipité contenant la fraction CBAp40, ainsi que le surnageant de centrifugation, sont dialysés pour éliminer toute trace de sulfate d'ammonium. Les produits sont finalement lyophilisés.
Compte-rendus d'expérimentations pharmacologiques 1. Le pouvoir adjuvant et immunostimulant des fractions cellu
laires délipidées et des fractions CBAp40 a été démontré
en procédant comme suit
Animaux : pour cette étude, on a utilisé des souris B6 D2
F1, mâles, de 18-20 g, provenant de chez IFFA-CREDO.
laires délipidées et des fractions CBAp40 a été démontré
en procédant comme suit
Animaux : pour cette étude, on a utilisé des souris B6 D2
F1, mâles, de 18-20 g, provenant de chez IFFA-CREDO.
Tumeur : une tumeur de Lewis (3LL) a été greffée par in
jection intramusculaire de 105 ou 106 cellules viables,
suivant les expériences, sous un volume de 0,2 ml dans la
patte postérieure droite. L'évolution de la tumeur et la mortalité ont été suivies quotidiennement.
jection intramusculaire de 105 ou 106 cellules viables,
suivant les expériences, sous un volume de 0,2 ml dans la
patte postérieure droite. L'évolution de la tumeur et la mortalité ont été suivies quotidiennement.
Traitement : il a été effectué par injection intraveineuse unique de 250 g de la fraction CBAp40, sous un volume de 0,5 ml, soit 2, 3 ou 4 jours avant, soit le même jour, soit 3, 6, 9 ou 10 jours après la greffe tumorale. A titre de comparaison, des lots de souris ont reçu 250 g ou 500 g de cellules entières délipidées ou de fraction LS, suivant les mêmes modalités.
Analyse statistique des résultats : les résultats ont été analysés soit par le test de Student lorsque la mortalité était de 100 % des.animaux à la fin de l'expérience 2 (Tableau 1), sqit par le test du x2, , lorsqu'un certain pourcentage d'animaux ont survécu à la fin de l'expérience (Tableaux 2, 3 et 4 ? .
RESULTATS
Les résultats des expériences sont rapportés dans les Tableaux 1, 2, 3 et 4. En plus, dans le Tableau 1 figurent également le pourcentage d'augmentation de l'intervalle de vie des animaux (ILS%), et le temps moyen de survie (MST).
Les résultats des expériences sont rapportés dans les Tableaux 1, 2, 3 et 4. En plus, dans le Tableau 1 figurent également le pourcentage d'augmentation de l'intervalle de vie des animaux (ILS%), et le temps moyen de survie (MST).
I1 faut distinguer deux types d'expériences : celles résumées dans les Tableaux 1 et 4 dans lesquelles on observe 100 % de mortalité chez les animaux témoins, et celles résumées dans les Tableaux 2 et 3 dans lesquelles un certain pourcentage d'animaux témoins ont survécu. Dans ce dernier cas, il est justifié de supposer que l'on se trouve dans la situation de maladie résiduelle.
TABLEAU 1
Effet sur le développement de la tumeur de Lewis chez la souris de la fraction CBAP40 injectée avant, en même temps ou après la greffe tumorale avec 106 cellules par la voie intramusculaire
Effet sur le développement de la tumeur de Lewis chez la souris de la fraction CBAP40 injectée avant, en même temps ou après la greffe tumorale avec 106 cellules par la voie intramusculaire
<SEP> Nombre <SEP> Mortali
Immuno- <SEP> voie <SEP> dose <SEP> Jour <SEP> nombre <SEP> aurvivants <SEP> té <SEP> sou- <SEP> Interval <SEP> IIS% <SEP> NST <SEP> Test
<tb> stimulat <SEP> d'inocu- <SEP> Eg <SEP> inocu- <SEP> d'eni- <SEP> au <SEP> 60ème <SEP> ris <SEP> le <SEP> de <SEP> t
<tb> <SEP> lation <SEP> lation <SEP> maux <SEP> jour <SEP> jour <SEP> mort
<tb> CABP40 <SEP> I.V. <SEP> 250 <SEP> -2 <SEP> 6 <SEP> 0 <SEP> 24,28,28 <SEP> 24 <SEP> - <SEP> 39 <SEP> 3,5 <SEP> 29,8 <SEP> 9,0 <SEP> > p <SEP> > 8,5
<tb> <SEP> 28,32,39
<tb> CABp40 <SEP> I.V.<SEP> 250 <SEP> 0 <SEP> 6 <SEP> 0 <SEP> 17,24,27, <SEP> 17 <SEP> - <SEP> 38 <SEP> - <SEP> 27,2 <SEP> 0,9 <SEP> > p <SEP> > <SEP> 0,5
<tb> <SEP> 27,30,38,
<tb> CABp40 <SEP> I.V. <SEP> 250 <SEP> 3 <SEP> 6 <SEP> 0 <SEP> 26,26,30 <SEP> 26 <SEP> - <SEP> 38 <SEP> 5.9 <SEP> 30,5 <SEP> 0,5 <SEP> > p <SEP> > <SEP> 0,3
<tb> <SEP> 31,32,38
<tb> CBAp40 <SEP> I.V. <SEP> 250 <SEP> 6 <SEP> 6 <SEP> 2 <SEP> 34,35,36 <SEP> 34 <SEP> - <SEP> 39 <SEP> 25 <SEP> 36 <SEP> 0,01 <SEP> > p <SEP> > 0,001
<tb> <SEP> 39
<tb> CBAp40 <SEP> I.V. <SEP> 250 <SEP> 10 <SEP> 6 <SEP> 0 <SEP> 28,28,30 <SEP> 28 <SEP> - <SEP> 39 <SEP> 12,8 <SEP> 23,5 <SEP> 0,05 <SEP> > p <SEP> > 0,02
<tb> <SEP> 34,36,39
<tb> PBS <SEP> I.V.<SEP> 0,5 <SEP> ml <SEP> 0 <SEP> 6 <SEP> 0 <SEP> 26,28,28 <SEP> 26 <SEP> - <SEP> 33 <SEP> - <SEP> 28,8 <SEP> TABLEAU 2
Effet sur le développement de la tumeur le Lewis chez la souris de la fraction CBAp40 injectée avant, en même temps ou après la greffe tumorale avec 105 ceilules par voie intramusculaire
Immuno- <SEP> voie <SEP> dose <SEP> Jour <SEP> nombre <SEP> aurvivants <SEP> té <SEP> sou- <SEP> Interval <SEP> IIS% <SEP> NST <SEP> Test
<tb> stimulat <SEP> d'inocu- <SEP> Eg <SEP> inocu- <SEP> d'eni- <SEP> au <SEP> 60ème <SEP> ris <SEP> le <SEP> de <SEP> t
<tb> <SEP> lation <SEP> lation <SEP> maux <SEP> jour <SEP> jour <SEP> mort
<tb> CABP40 <SEP> I.V. <SEP> 250 <SEP> -2 <SEP> 6 <SEP> 0 <SEP> 24,28,28 <SEP> 24 <SEP> - <SEP> 39 <SEP> 3,5 <SEP> 29,8 <SEP> 9,0 <SEP> > p <SEP> > 8,5
<tb> <SEP> 28,32,39
<tb> CABp40 <SEP> I.V.<SEP> 250 <SEP> 0 <SEP> 6 <SEP> 0 <SEP> 17,24,27, <SEP> 17 <SEP> - <SEP> 38 <SEP> - <SEP> 27,2 <SEP> 0,9 <SEP> > p <SEP> > <SEP> 0,5
<tb> <SEP> 27,30,38,
<tb> CABp40 <SEP> I.V. <SEP> 250 <SEP> 3 <SEP> 6 <SEP> 0 <SEP> 26,26,30 <SEP> 26 <SEP> - <SEP> 38 <SEP> 5.9 <SEP> 30,5 <SEP> 0,5 <SEP> > p <SEP> > <SEP> 0,3
<tb> <SEP> 31,32,38
<tb> CBAp40 <SEP> I.V. <SEP> 250 <SEP> 6 <SEP> 6 <SEP> 2 <SEP> 34,35,36 <SEP> 34 <SEP> - <SEP> 39 <SEP> 25 <SEP> 36 <SEP> 0,01 <SEP> > p <SEP> > 0,001
<tb> <SEP> 39
<tb> CBAp40 <SEP> I.V. <SEP> 250 <SEP> 10 <SEP> 6 <SEP> 0 <SEP> 28,28,30 <SEP> 28 <SEP> - <SEP> 39 <SEP> 12,8 <SEP> 23,5 <SEP> 0,05 <SEP> > p <SEP> > 0,02
<tb> <SEP> 34,36,39
<tb> PBS <SEP> I.V.<SEP> 0,5 <SEP> ml <SEP> 0 <SEP> 6 <SEP> 0 <SEP> 26,28,28 <SEP> 26 <SEP> - <SEP> 33 <SEP> - <SEP> 28,8 <SEP> TABLEAU 2
Effet sur le développement de la tumeur le Lewis chez la souris de la fraction CBAp40 injectée avant, en même temps ou après la greffe tumorale avec 105 ceilules par voie intramusculaire
Immuno- <SEP> Voie <SEP> d'ino- <SEP> Dose <SEP> Jour <SEP> Nombre <SEP> surstimulant <SEP> culation <SEP> g <SEP> incoula- <SEP> Nombre <SEP> vivants <SEP> au <SEP> mortalité <SEP> Test
<tb> <SEP> tion <SEP> d'animaux <SEP> 60ème <SEP> jour <SEP> souris <SEP> X2
<tb> <SEP> jour
<tb> CBAp40 <SEP> I.V. <SEP> 250 <SEP> -4 <SEP> 10 <SEP> 7 <SEP> 31,45,55 <SEP> 0,1 <SEP> > p <SEP> > <SEP> 0,05
<tb> CBAp40 <SEP> I.V. <SEP> 250 <SEP> 0 <SEP> 10 <SEP> 7 <SEP> 29,43,48 <SEP> 0,1 <SEP> > p <SEP> > <SEP> 0,05
<tb> CBAp40 <SEP> I.V. <SEP> 250 <SEP> 3 <SEP> 10 <SEP> 8 <SEP> 45,48 <SEP> 0,05 <SEP> > <SEP> p <SEP> > <SEP> 0,02
<tb> CBAp40 <SEP> I.V. <SEP> 250 <SEP> 6 <SEP> 10 <SEP> 10 <SEP> - <SEP> p <SEP> = <SEP> 0.001
<tb> CBAp40 <SEP> I.V. <SEP> 250 <SEP> 9 <SEP> 10 <SEP> 8 <SEP> 31,32 <SEP> 0,05 <SEP> > <SEP> p <SEP> > <SEP> 0,02
<tb> PBS <SEP> I.V. <SEP> 0,5 <SEP> ml <SEP> 0 <SEP> 10 <SEP> 3 <SEP> 29,31,34,
<tb> <SEP> 34,35,36.<SEP> 52 <SEP> TABLEAU 3
Effet sur le développement de la tumeur de Lewis chez la souris des germes délipidés (GD) injectés 3, 6 et 9 jours après la greffe tumorale avec 105 cellules par voie intramusculaire
<tb> <SEP> tion <SEP> d'animaux <SEP> 60ème <SEP> jour <SEP> souris <SEP> X2
<tb> <SEP> jour
<tb> CBAp40 <SEP> I.V. <SEP> 250 <SEP> -4 <SEP> 10 <SEP> 7 <SEP> 31,45,55 <SEP> 0,1 <SEP> > p <SEP> > <SEP> 0,05
<tb> CBAp40 <SEP> I.V. <SEP> 250 <SEP> 0 <SEP> 10 <SEP> 7 <SEP> 29,43,48 <SEP> 0,1 <SEP> > p <SEP> > <SEP> 0,05
<tb> CBAp40 <SEP> I.V. <SEP> 250 <SEP> 3 <SEP> 10 <SEP> 8 <SEP> 45,48 <SEP> 0,05 <SEP> > <SEP> p <SEP> > <SEP> 0,02
<tb> CBAp40 <SEP> I.V. <SEP> 250 <SEP> 6 <SEP> 10 <SEP> 10 <SEP> - <SEP> p <SEP> = <SEP> 0.001
<tb> CBAp40 <SEP> I.V. <SEP> 250 <SEP> 9 <SEP> 10 <SEP> 8 <SEP> 31,32 <SEP> 0,05 <SEP> > <SEP> p <SEP> > <SEP> 0,02
<tb> PBS <SEP> I.V. <SEP> 0,5 <SEP> ml <SEP> 0 <SEP> 10 <SEP> 3 <SEP> 29,31,34,
<tb> <SEP> 34,35,36.<SEP> 52 <SEP> TABLEAU 3
Effet sur le développement de la tumeur de Lewis chez la souris des germes délipidés (GD) injectés 3, 6 et 9 jours après la greffe tumorale avec 105 cellules par voie intramusculaire
Immuno- <SEP> Vie <SEP> d'ino- <SEP> Dose <SEP> Jour <SEP> Nombre <SEP> Nombre
<tb> stimulant <SEP> culation <SEP> g <SEP> inocule- <SEP> d'animaux <SEP> survivants <SEP> Mortalité <SEP> Test
<tb> <SEP> tion <SEP> au <SEP> 60ème <SEP> souris <SEP> X2
<tb> <SEP> jour <SEP> jour
<tb> GD <SEP> I.V. <SEP> 500 <SEP> 3 <SEP> 10 <SEP> 7 <SEP> 38,45,59 <SEP> 0,1 > p > 0,05
<tb> GD <SEP> I.V. <SEP> 500 <SEP> 6 <SEP> 10 <SEP> 9 <SEP> 31 <SEP> 0,01 > <SEP> p <SEP> > 0,001
<tb> GD <SEP> I.V. <SEP> 500 <SEP> 9 <SEP> 10 <SEP> 7 <SEP> 38,41,43 <SEP> 0,1 > <SEP> p <SEP> > 0,05
<tb> PBS <SEP> I.V.<SEP> 0,5 <SEP> ml <SEP> 6 <SEP> 10 <SEP> 3 <SEP> 29,31,34 <SEP>
<SEP> 34,35,36
<tb> <SEP> 52
<tb> TABLBAU 4
Effet comparé sur le dévaloppement de la tumeur de Lewis chez la souris, des germes délipidés (GD) et du surnageant (LS) de la précipitation de la fraction CBAp40 injectée 6 jours après la greffe tumorale avec 106 cellules par voie intramusculaire
<tb> stimulant <SEP> culation <SEP> g <SEP> inocule- <SEP> d'animaux <SEP> survivants <SEP> Mortalité <SEP> Test
<tb> <SEP> tion <SEP> au <SEP> 60ème <SEP> souris <SEP> X2
<tb> <SEP> jour <SEP> jour
<tb> GD <SEP> I.V. <SEP> 500 <SEP> 3 <SEP> 10 <SEP> 7 <SEP> 38,45,59 <SEP> 0,1 > p > 0,05
<tb> GD <SEP> I.V. <SEP> 500 <SEP> 6 <SEP> 10 <SEP> 9 <SEP> 31 <SEP> 0,01 > <SEP> p <SEP> > 0,001
<tb> GD <SEP> I.V. <SEP> 500 <SEP> 9 <SEP> 10 <SEP> 7 <SEP> 38,41,43 <SEP> 0,1 > <SEP> p <SEP> > 0,05
<tb> PBS <SEP> I.V.<SEP> 0,5 <SEP> ml <SEP> 6 <SEP> 10 <SEP> 3 <SEP> 29,31,34 <SEP>
<SEP> 34,35,36
<tb> <SEP> 52
<tb> TABLBAU 4
Effet comparé sur le dévaloppement de la tumeur de Lewis chez la souris, des germes délipidés (GD) et du surnageant (LS) de la précipitation de la fraction CBAp40 injectée 6 jours après la greffe tumorale avec 106 cellules par voie intramusculaire
Immuno- <SEP> Voie <SEP> Jour <SEP> Mombre
<tb> stimulant <SEP> d'inocu- <SEP> Dose <SEP> inocula- <SEP> Nombra <SEP> survivants <SEP> Mortalité <SEP> test
<tb> <SEP> lation <SEP> g <SEP> tion <SEP> d'animaux <SEP> au <SEP> 60ème <SEP> souris <SEP> X2
<tb> <SEP> jour <SEP> jour
<tb> GD <SEP> I.V. <SEP> 500 <SEP> 6 <SEP> 10 <SEP> 8 <SEP> 28,32 <SEP> p <SEP> < 0,001
<tb> GD <SEP> I.V.<SEP> 250 <SEP> 6 <SEP> 10 <SEP> 3 <SEP> 32,37,40, <SEP> 0,1 <SEP> > p > 0,05
<tb> <SEP> 40,40,41,
<tb> <SEP> 44
<tb> LS <SEP> I.V. <SEP> 250 <SEP> 6 <SEP> 10 <SEP> 2 <SEP> 27,30,30, <SEP> 0,2 <SEP> > p <SEP> > 0,1
<tb> <SEP> 31,32,34,
<tb> <SEP> 40,41
<tb> PBS <SEP> I.V. <SEP> 0,5 <SEP> ml <SEP> 6 <SEP> 10 <SEP> 0 <SEP> 21,23,26,
<tb> <SEP> 27,30,30 <SEP>
<SEP> 30,32,34,31
<tb>
I1 ressort des Tableaux 1 et 2 ci-deasus que la fraction CBAp40 injectée quatre jours ou deux jours avant, le même jour ou trois jours après la greffe tumorale n'influence pas de façon signiìcative le développement de la tumeur. A l'inverse, injectée six jours ou dix jours après la greffe tumorale, la fraction CBAp40 exerce un net effet inhibiteur sur la croissance de la tumeur.Cet effet est le plus prononcé lorsque le traitement est institué six jours après la greffe de la tumeur.
<tb> stimulant <SEP> d'inocu- <SEP> Dose <SEP> inocula- <SEP> Nombra <SEP> survivants <SEP> Mortalité <SEP> test
<tb> <SEP> lation <SEP> g <SEP> tion <SEP> d'animaux <SEP> au <SEP> 60ème <SEP> souris <SEP> X2
<tb> <SEP> jour <SEP> jour
<tb> GD <SEP> I.V. <SEP> 500 <SEP> 6 <SEP> 10 <SEP> 8 <SEP> 28,32 <SEP> p <SEP> < 0,001
<tb> GD <SEP> I.V.<SEP> 250 <SEP> 6 <SEP> 10 <SEP> 3 <SEP> 32,37,40, <SEP> 0,1 <SEP> > p > 0,05
<tb> <SEP> 40,40,41,
<tb> <SEP> 44
<tb> LS <SEP> I.V. <SEP> 250 <SEP> 6 <SEP> 10 <SEP> 2 <SEP> 27,30,30, <SEP> 0,2 <SEP> > p <SEP> > 0,1
<tb> <SEP> 31,32,34,
<tb> <SEP> 40,41
<tb> PBS <SEP> I.V. <SEP> 0,5 <SEP> ml <SEP> 6 <SEP> 10 <SEP> 0 <SEP> 21,23,26,
<tb> <SEP> 27,30,30 <SEP>
<SEP> 30,32,34,31
<tb>
I1 ressort des Tableaux 1 et 2 ci-deasus que la fraction CBAp40 injectée quatre jours ou deux jours avant, le même jour ou trois jours après la greffe tumorale n'influence pas de façon signiìcative le développement de la tumeur. A l'inverse, injectée six jours ou dix jours après la greffe tumorale, la fraction CBAp40 exerce un net effet inhibiteur sur la croissance de la tumeur.Cet effet est le plus prononcé lorsque le traitement est institué six jours après la greffe de la tumeur.
Dans la situation de maladie résiduelle (Tableau 2), la fraction CBAp40 injectée six jours après a greffe tumorale conduit à la survie définitive de tous les animaux traités.
Dans des essais comparatifs (Tableau 4), les cellules entieres délipidées (GD), administrées à la dose de 500 pg par souris, six jours après la greffe tumorale, ont exercé un effet antitumoral hautement significatif. L'effet inhibiteur sur le développement tumoral n'est pas majoré (Tableau 3), contrairement à ce que l'on observe avec la fraction CBAp40 (Tableau 2), dans la situation de maladie rési- duelle.
Enfin, à la dose de 250 pg par souris, la fraction
LS, administrée six jours après la greffe tumorale, n'exerce pas d'effet inhibiteur significatif sur la croissance de la tumeur (Tableau 4).
LS, administrée six jours après la greffe tumorale, n'exerce pas d'effet inhibiteur significatif sur la croissance de la tumeur (Tableau 4).
En conclusion, les résultats rapportés dans ce qui précède démontrent que le Corynebacterium aérobie utilisé dans l'expérimentation résumée ci-dessus, a exercé un net effet inhibiteur sur le développement de la tumeur de Lewis.
D'autre part, la fraction CBAp40, isolée à partir de C. catarrhalis par le procédé JOLLES & MIGLIORE-SAMOUR utilisé pour t l'obtention de la fraction P40 à partir de C. granulosum, s'est révélée être douée, comme cette dernière fraction, de pouvoir antitumoral.
Le pouvoir immunostimulant de Corynebacterium catarrhalis a été démontré en utilisant les bactéries entières tuees par chauffage. Les bactéries ont été administrées à la souris (SWISS de 18 g) par voie sous-cutanée ou intraveineuse à une dose de 200 à 400 pg. L'infection a été réalisée en injectant à chaque souris une dose 5 ou 10 DL50 de bactéries E. coli, K. pneumoniae ou L. monocytogenes. Lorsqu'une dose de 5 DL50 de bactéries infectantes a été utilisée, 95 à 100 % de souris ont été protégées par Corynebacterium catarrhalis. La protection est de l'ordre de 80 à 100 % lorsque l'infection a été réalisée avec 10 DL50.
2. Détermination de l'activité inductrice d'interféron dans
deux fractions isolées de Corynebacterium catarrhalis
(CBAp40 et CEA LS).
deux fractions isolées de Corynebacterium catarrhalis
(CBAp40 et CEA LS).
Matériels et méthodes
Fractions : deux fractions de C. catarrhalis ont été es
sayées, à savoir la fraction insoluble CBAp40 et la frac
tion soluble CBA LS (représentant le produit résiduel de la
préparation de la fraction CBAp40) et les germes délipidés
ont été utilisés comme référence.
Fractions : deux fractions de C. catarrhalis ont été es
sayées, à savoir la fraction insoluble CBAp40 et la frac
tion soluble CBA LS (représentant le produit résiduel de la
préparation de la fraction CBAp40) et les germes délipidés
ont été utilisés comme référence.
Animaux : Souris SWISS (Rennemoulin) de 20 g de poids cor
porel. Des lots de 10 souris ont été utilisés pour chaque
détermination.
porel. Des lots de 10 souris ont été utilisés pour chaque
détermination.
Doses et voies d'inoculation : les produits ont été injec
tés à la dose de 250 pg, (produits lyophilisés remis en
suspension ou en solution dans PBS sous le volume de 0,5ml)
soit par la voie intraveineuse (I.V.). soit par la voie
intrapéritonéale (I.P.).
tés à la dose de 250 pg, (produits lyophilisés remis en
suspension ou en solution dans PBS sous le volume de 0,5ml)
soit par la voie intraveineuse (I.V.). soit par la voie
intrapéritonéale (I.P.).
Les souris témoins ont reçu 0,5 ml de PBS par la
voie I.V. ou I.P.
voie I.V. ou I.P.
Titrage : des prélèvements sanguins ont été effectués par
voie rétro-orbitaire, 1, 2,4, 8, 24 et 48 heures, après
l'injection des fractions.
voie rétro-orbitaire, 1, 2,4, 8, 24 et 48 heures, après
l'injection des fractions.
Un sérum-étalon titrant 60 000 U.I. a été utilisé
comme référence pour le calcul de l'activité en U.I.
comme référence pour le calcul de l'activité en U.I.
La lignée continue de cellules de testicules de sou
ris L929 a été utilisée pour le titrage. Les cellules ont
été cultivées en milieu GLASGOW modifié, contenant 10 % de
sérum foetal de veau (SVF). Le titrage a été effectué sur
plaques en plastique (NUNCLON Microtest). Chaque cupule a
reçu 0,05 ml de sérum à tester dilué du 1/5 au 1/360 ou le
sérum de référence dilué du 1/400 au 1/12600. Dans chaque
cupule, on distribue alors 3.104 cellules sous un volume
de 0,05 mi. Les cellules sont cultivées pendant 24 heures
à 37 C en présence d'air contenant 5 % de CO2. Le milieu contenu dans les cupules est alors rejeté et il est remplacé par du virus de la stomatite vésiculaire (VSV) (une particule par cellule, soit 3,104 particules virales) sous un volume de 0,1 ml.Après une nouvelle incubation de 18 heures, la DCT50 est établie pour le témoin virus, le sérum-étalon et pour le sérum à tester (des animaux traités par les fractions ou le PBS). Le nombre d'unités est calculé par comparaison avec le serum de réf érence.
ris L929 a été utilisée pour le titrage. Les cellules ont
été cultivées en milieu GLASGOW modifié, contenant 10 % de
sérum foetal de veau (SVF). Le titrage a été effectué sur
plaques en plastique (NUNCLON Microtest). Chaque cupule a
reçu 0,05 ml de sérum à tester dilué du 1/5 au 1/360 ou le
sérum de référence dilué du 1/400 au 1/12600. Dans chaque
cupule, on distribue alors 3.104 cellules sous un volume
de 0,05 mi. Les cellules sont cultivées pendant 24 heures
à 37 C en présence d'air contenant 5 % de CO2. Le milieu contenu dans les cupules est alors rejeté et il est remplacé par du virus de la stomatite vésiculaire (VSV) (une particule par cellule, soit 3,104 particules virales) sous un volume de 0,1 ml.Après une nouvelle incubation de 18 heures, la DCT50 est établie pour le témoin virus, le sérum-étalon et pour le sérum à tester (des animaux traités par les fractions ou le PBS). Le nombre d'unités est calculé par comparaison avec le serum de réf érence.
RESULTATS
Les résultats sont rapportés dans le Tableau 5 ciaprès et, sous forme de graphiques, dans les figures 1, 2 et 3 annexées.
Les résultats sont rapportés dans le Tableau 5 ciaprès et, sous forme de graphiques, dans les figures 1, 2 et 3 annexées.
Les résultats reproduits dans les figures 1 et 2 ont été obtenus avec le lot nO 1 de CBAp40, alors que ceux reproduits dans la figure 3 l'ont été avec le lot nO 2.
La figure 1 représente graphiquement l'activité inductrice d'interféron de la fraction CBAp40 et de cellules délipidées, administrées par voie I V. à la dose de 200 îjg par souris.
La figure 2 représente graphiquement l'activité inductrice d'interféron de la fraction CBA LS administrée par voies I.V. et I.P. à la dose de 250 pg par souris, et
La figure 3 représente graphiquement l'activité inductrice d'interféron de la fraction CBAp40 et de la fraction CBA LS administrées par voie I.P. à la dose de 250 pg par souris.
La figure 3 représente graphiquement l'activité inductrice d'interféron de la fraction CBAp40 et de la fraction CBA LS administrées par voie I.P. à la dose de 250 pg par souris.
La figure 1 montre que la production d'interféron est induite à la 2ème heure par le CBAp40 et à un taux plus faible par les germes délipidés. Pour le CBAp40, on observe une forte décroissance dès la 4ème heure, alors qu'avec les germes délipidés le taux varie peu.
La figure 2 résume les résultats obtenus avec la fraction soluble CBA LS. On observe la production d'un taux élevé d'interféron dès la 1ère heure si le produit est ad ministré par voie I.V., et à partir de la 2ème heure si le produit est injecté par la voie I.P. On observe une chute importante du taux d'interféron à partir de la 4ème heure.
Les résultats de la comparaison de l'activité inductrice d'interféron du CBAp40 et de CBA LS sont résumés dans la figure 3. La fraction CBA LS est inductrice d'in- interféron à la 1ère heure avec un maximum d'activité atteint à la 2ème heure (400 U.I.). En revanche, la fraction
CBAp40 ne permet la production d'interféron qu'à un taux faible à la 2ème heure, mais à un taux élevé à la 24ème heure (400 U.I.).
CBAp40 ne permet la production d'interféron qu'à un taux faible à la 2ème heure, mais à un taux élevé à la 24ème heure (400 U.I.).
Chez les souris témoins (PS), on n'a pas constaté la présence d'interféron.
Les résultats rapportés ci-dessus indiquent que les cellules bactériennes entières délipidées de C. catarrhalis sont pratiquement depourvues d'activité inductrice d'inter féron (cf. figure 1). En revanche, tant la fraction CBAp40 que la fraction CBA LS, sont capables d'induire la formation d'interféron. Cependant, ces deux fractions doivent agir de façons différentes, puisque la cinétique d'apparition de I'interféron est différente. Avec la fraction
CBAp40, le maximum d'activité est atteint à la 24ème heure (cf. figure 3), alors que pour la fraction CBA LS, le maximum d'activité s'observe vers la lère-2ème heure (cf. figures 2 et 3).
CBAp40, le maximum d'activité est atteint à la 24ème heure (cf. figure 3), alors que pour la fraction CBA LS, le maximum d'activité s'observe vers la lère-2ème heure (cf. figures 2 et 3).
D'autre part, on note avec la fraction CBA LS une différence d'activité en fonction de la voie d'administra tion,- la voie I.P. étant plus efficace que la voie I.V., et une différence d'activité d'un lot à l'autre, lot I (figure 2) et lot II (figure 3).
TABLEAC 5
Activité inductrice d'interféron de la fraction CBAp40. CBA Ls et genmes délipidés administrés par voie I.V. ou I.P. à des souris des souris de 20 g.
Activité inductrice d'interféron de la fraction CBAp40. CBA Ls et genmes délipidés administrés par voie I.V. ou I.P. à des souris des souris de 20 g.
<SEP> Interféron <SEP> Unitée <SEP> Internationales
<tb> <SEP> Dose <SEP> Voie
<tb> Figures <SEP> produits <SEP> g <SEP> administra- <SEP> H <SEP> E <SEP> U <SEP> R <SEP> E <SEP> S
<tb> N <SEP> tion
<tb> <SEP> 1 <SEP> 2 <SEP> 4 <SEP> 8 <SEP> 24 <SEP> 48
<tb> 1 <SEP> CBAp40 <SEP> 200 <SEP> I.V. <SEP> 8 <SEP> 38,4 <SEP> 12,8 <SEP> 9,6 <SEP> 6,4
<tb> <SEP> genmes <SEP> délipidés <SEP> 200 <SEP> I.V. <SEP> 6,4 <SEP> 12,8 <SEP> 9,6 <SEP> 12,8 <SEP> 12,8
<tb> <SEP> P.B.S. <SEP> 0,5 <SEP> ml <SEP> I.V. <SEP> 3,2 <SEP> 3,2 <SEP> 3,2 <SEP> 3,2 <SEP> 3,2
<tb> 2 <SEP> CBA <SEP> LS <SEP> 250 <SEP> I.V. <SEP> 1400 <SEP> 1200 <SEP> 800 <SEP> 80
<tb> <SEP> CBA <SEP> LS <SEP> 250 <SEP> I.P. <SEP> 50 <SEP> 400 <SEP> 300 <SEP> 100
<tb> <SEP> P.B.S. <SEP> 0,5 <SEP> ml <SEP> I.P. <SEP> 3.2 <SEP> 3,2 <SEP> 3,2 <SEP> 3,2
<tb> 3 <SEP> CBAp40 <SEP> 250 <SEP> I.P. <SEP> 25 <SEP> 50 <SEP> 25 <SEP> 25 <SEP> 400 <SEP> 100
<tb> <SEP> CBA <SEP> LS <SEP> 250 <SEP> I.P. <SEP> 100 <SEP> 400 <SEP> 300 <SEP> 100 <SEP> 40
<tb> <SEP> P.B.S <SEP> 0,50 <SEP> ml <SEP> I.P. <SEP> 3,2 <SEP> 3,2 <SEP> 3,2 <SEP> 3.2 <SEP> 3,2
<tb>
<tb> <SEP> Dose <SEP> Voie
<tb> Figures <SEP> produits <SEP> g <SEP> administra- <SEP> H <SEP> E <SEP> U <SEP> R <SEP> E <SEP> S
<tb> N <SEP> tion
<tb> <SEP> 1 <SEP> 2 <SEP> 4 <SEP> 8 <SEP> 24 <SEP> 48
<tb> 1 <SEP> CBAp40 <SEP> 200 <SEP> I.V. <SEP> 8 <SEP> 38,4 <SEP> 12,8 <SEP> 9,6 <SEP> 6,4
<tb> <SEP> genmes <SEP> délipidés <SEP> 200 <SEP> I.V. <SEP> 6,4 <SEP> 12,8 <SEP> 9,6 <SEP> 12,8 <SEP> 12,8
<tb> <SEP> P.B.S. <SEP> 0,5 <SEP> ml <SEP> I.V. <SEP> 3,2 <SEP> 3,2 <SEP> 3,2 <SEP> 3,2 <SEP> 3,2
<tb> 2 <SEP> CBA <SEP> LS <SEP> 250 <SEP> I.V. <SEP> 1400 <SEP> 1200 <SEP> 800 <SEP> 80
<tb> <SEP> CBA <SEP> LS <SEP> 250 <SEP> I.P. <SEP> 50 <SEP> 400 <SEP> 300 <SEP> 100
<tb> <SEP> P.B.S. <SEP> 0,5 <SEP> ml <SEP> I.P. <SEP> 3.2 <SEP> 3,2 <SEP> 3,2 <SEP> 3,2
<tb> 3 <SEP> CBAp40 <SEP> 250 <SEP> I.P. <SEP> 25 <SEP> 50 <SEP> 25 <SEP> 25 <SEP> 400 <SEP> 100
<tb> <SEP> CBA <SEP> LS <SEP> 250 <SEP> I.P. <SEP> 100 <SEP> 400 <SEP> 300 <SEP> 100 <SEP> 40
<tb> <SEP> P.B.S <SEP> 0,50 <SEP> ml <SEP> I.P. <SEP> 3,2 <SEP> 3,2 <SEP> 3,2 <SEP> 3.2 <SEP> 3,2
<tb>
Claims (10)
- 20) Nouvelle fraction douée d'activité adjuvante, immunostimulante, antibactérienne et inductrice d'interféron, dépourvue de toxicité, caractérisée en ce qu'elle est obtenue à partir d'une souche de bactéries aérobies soumise à un traitement de délipidation suivi d'une extraction douce des cellules délipidées, par broyage et homogénéisation en milieu aqueux, en présence ou non d'un détergent nonionique.
- 30) Nouvelle fraction douée de propriétés adjuvantes, immunostimulantes et antibactériennes selon laRevendication 1, caractérisée en ce qu'elle est constituée par des cellules entières de bactéries aérobies délipidées.40) Nouvelle fraction adjuvante, immunostimulante, antibactérienné et inductrice d'interféron, dépourvue de toxicité, selon la Revendication 2, caractérisée en ce qu'elle est constituée par une fraction particulaire insoluble extraite de cellules bactériennes entières de bactéries aérobies délipidées.
- 50) Nouvelle fraction adjuvante, immunostimulante et antibacterienne selon la Revendication 3, caractérisée en ce qu'elle est constituée par des cellules entières délipidées d'une souche de Corynebacterium aérobie nouvellement isolée, dénommée Corynebacterium catarrhalis, déposée auprès de la Collection Nationale de Cultures de Microorganismes tenue par 1'INSTITUT PASTEUR, en date du 21 Février 1980, sous le numéro I-116.
- 60) Nouvelle fraction adjuvante, immunostimulante, douée d'activité antibactérienne et inductrice d'interféron, dépourvue de toxicité, selon la Revendication 4, caractérisée en ce qu'elle est constituée par une fraction particulaire insoluble extraite de cellules bactériennes, délipidées, de Corynebacterium catarrhalis.
- 70) Nouvelle fraction inductrice d'interféron, caractérisée en ce qu'elle est constituée par une fraction hydrosoluble extraite de cellules entières, dé-lipidées, d'une souche de Corynebacterium aérobie nouvellement isolée, dénommée Corynebacterium catarrhalis, déposée en date du 21 Février 1980 sous le numéro I-116, auprès de la Collection Nationale de Cultures de Nicroorganismes tenue par 1'INSTITUT PASTEUR.
- 80) Nouvelle composition pharmaceutique, caractérisée en ce qu'elle contient en tant que constituant actif, une fraction thérapeutiquement active de bactéries aérobies selon l'une quelconque des Revendications 1 à 7, associée à un véhicule d'administration approprié.
- 90) Nouvelle composition pharmaceutique, caractérisée en ce qu'elle contient en tant que constituants actifs la fraction particulaire insoluble selon la Revendication 6 seule ou associée à un autre constituant actif, tel qu'un vaccin, notamment, ainsi qu'à un.véhicule d'administration approprié.
- 100) Procédé de préparation de fractions adjuvantes, immunostimulantes et douées d'activité antibactérienne, selon la Revendication 1, caractérisé en ce que l'on obtient lesdites fractions en soumettant des cellules entières de bactéries aérobies à un traitement de délipidation approprié.11 ) Procédé selon la Revendication 10, caractérisé en ce que les cellules délipidées sont soumises à un traitement d'extraction douce par broyage et homogénéisation en milieu aqueux, en présence ou non d'un détergent non-ionique, pour recueillier une fraction particulaire insoluble douée de propriétés adjuvantes, immunostimulantes, antibactériennes et inductrices d'interféron, et une fraction hydrosoluble.
- 120) Procédé selon la Revendication 1O, caractérisé en ce qu'il est appliqué au traitement du Corynebacterium aérobie dénommé Corynebacterium catarrhalis, déposé en date du 21 Février 1980 sous leruméro I-116 auprès de la Collection Nationale de Cultures de Microorganismes tenue par 1'INSTITUT PASTEUR.
- 130) Procédé selon les Revendications 10 et 1f, caractérisé en ce qu'il est appliqué au traitement duCorynebacterium catarrhalis pour recueillir une fraction particulaire insoluble douée de propriétés adjuvantes, immunostimulantes, antibacteriennes et inductrices d9interfé- ron, et une fraction hydrosoluble douée de propriétés inductrices d'interféron.
Priority Applications (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR8008976A FR2480604A1 (fr) | 1980-04-22 | 1980-04-22 | Fractions nouvelles extraites de bacteries aerobies, douees de proprietes antitumorales, antibacteriennes et inductrices d'interferon et leur procede de preparation |
| US06/254,254 US4479935A (en) | 1980-04-22 | 1981-04-15 | Fractions extracted from aerobic bacteria, endowed with antitumoral, antibacterial and interferon inducing properties, and process for their preparation |
| BE1/10201A BE888430A (fr) | 1980-04-22 | 1981-04-15 | Fractions nouvelles extraites de bacteries aerobies, douees de proprietes antitumorales, antibacteriennes et industrices d'interferon et leur procede de preparation, |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR8008976A FR2480604A1 (fr) | 1980-04-22 | 1980-04-22 | Fractions nouvelles extraites de bacteries aerobies, douees de proprietes antitumorales, antibacteriennes et inductrices d'interferon et leur procede de preparation |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FR2480604A1 true FR2480604A1 (fr) | 1981-10-23 |
| FR2480604B1 FR2480604B1 (fr) | 1984-02-17 |
Family
ID=9241205
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FR8008976A Granted FR2480604A1 (fr) | 1980-04-22 | 1980-04-22 | Fractions nouvelles extraites de bacteries aerobies, douees de proprietes antitumorales, antibacteriennes et inductrices d'interferon et leur procede de preparation |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| BE (1) | BE888430A (fr) |
| FR (1) | FR2480604A1 (fr) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1987003202A1 (fr) * | 1985-11-26 | 1987-06-04 | Sibar Srl | Fraction obtenue a partir de listeria monocytogenes presentant une activite therapeutique, son procede de preparation et composition pharmaceutique la contenant |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| LU57091A1 (fr) * | 1968-10-15 | 1970-04-16 | ||
| FR2218888A1 (fr) * | 1973-02-23 | 1974-09-20 | Wellcome Found | |
| FR2268531A1 (fr) * | 1974-04-25 | 1975-11-21 | Anvar | |
| FR2269961A1 (fr) * | 1974-05-06 | 1975-12-05 | Anvar | |
| FR2283694A2 (fr) * | 1974-09-04 | 1976-04-02 | Anvar | Extraits hydrosolubles de mycobacteries de faible poids moleculaire, leur preparation et leur emploi |
| FR2374042A1 (fr) * | 1976-06-04 | 1978-07-13 | Merieux Inst | Nouveau medicament immunostimulant et son procede de preparation |
-
1980
- 1980-04-22 FR FR8008976A patent/FR2480604A1/fr active Granted
-
1981
- 1981-04-15 BE BE1/10201A patent/BE888430A/fr not_active IP Right Cessation
Patent Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| LU57091A1 (fr) * | 1968-10-15 | 1970-04-16 | ||
| FR2020758A1 (en) * | 1968-10-15 | 1970-07-17 | Merieux Charles | Immunity stimulation against bacterial infec- - tions |
| FR2218888A1 (fr) * | 1973-02-23 | 1974-09-20 | Wellcome Found | |
| FR2268531A1 (fr) * | 1974-04-25 | 1975-11-21 | Anvar | |
| FR2269961A1 (fr) * | 1974-05-06 | 1975-12-05 | Anvar | |
| FR2283694A2 (fr) * | 1974-09-04 | 1976-04-02 | Anvar | Extraits hydrosolubles de mycobacteries de faible poids moleculaire, leur preparation et leur emploi |
| FR2374042A1 (fr) * | 1976-06-04 | 1978-07-13 | Merieux Inst | Nouveau medicament immunostimulant et son procede de preparation |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| CA1977 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1987003202A1 (fr) * | 1985-11-26 | 1987-06-04 | Sibar Srl | Fraction obtenue a partir de listeria monocytogenes presentant une activite therapeutique, son procede de preparation et composition pharmaceutique la contenant |
| EP0230556A1 (fr) * | 1985-11-26 | 1987-08-05 | SIBAR Srl | Fraction obtenue à partir de Listeria monocytogenes possédant une activité thérapeutique, procédé pour sa préparation et composition pharmaceutique la contenant |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| FR2480604B1 (fr) | 1984-02-17 |
| BE888430A (fr) | 1981-10-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US6814961B1 (en) | Method for enhancing stem cell trafficking | |
| EP0035429A1 (fr) | Complexe vaccinal contenant un antigène spécifique et vaccin le contenant | |
| FR2486400A1 (fr) | Medicaments a base de levures ou de leurs extraits insolubles | |
| CA1037028A (fr) | Extraits de corynebacteries hydrosolubles, procede d'extraction et utilisation du produit | |
| DE69213943T2 (de) | Kurzzeitige stimulierung von lymphozyten mit anti-cd3 antikörpern um ihre in vivo aktivität zu steigern | |
| EP0015175B1 (fr) | Médicament constitué de Pichia ou d'extraits de Pichia | |
| CH641204A5 (fr) | Substance antitumorale obtenue par culture de mycelium. | |
| EP0037522A2 (fr) | Dérivés de l'entérotoxine thermostable de Escherichia Coli et leur préparation | |
| EP0035937B1 (fr) | Utilisation de Hansenula ou d'extraits de Hansenula, comme médicament | |
| EP0071515B1 (fr) | Procédé d'obtention de polyosides capsulaires, polyosides capsulaires ainsi obtenus et leur application à la préparation de vaccins | |
| EP0089266B2 (fr) | Procédé de préparation de protéoglycanes immunostimulants inducteurs d'interféron, protéoglycanes obtenus et médicament les contenant | |
| CA2063721C (fr) | Medicament immunostimulant a base de glycopeptidolipides polaires de mycobacterium chelonae | |
| US4479935A (en) | Fractions extracted from aerobic bacteria, endowed with antitumoral, antibacterial and interferon inducing properties, and process for their preparation | |
| JPS58131917A (ja) | 抗動脈硬化剤 | |
| CA1117882A (fr) | Procede d'obtention d'un nouveau produit biologique et le produit en resultant | |
| JPS60146834A (ja) | 歯周炎抑制用抗体の製法及び同抗体を含有する歯周炎抑制用組成物 | |
| JPS5852227A (ja) | 淋菌からの免疫原性複合体 | |
| DE2408724A1 (de) | Biologische extrakte und verfahren zu ihrer herstellung | |
| Smith | Effect of route of vaccination on the immune response of mice to a single dose of heat-killed Mycoplasma mycoides var. mycoides | |
| EP0139551A2 (fr) | Medicament immunomodulateur d'origine biologique et son procédé de préparation | |
| JPH04300898A (ja) | 新規糖タンパク複合体およびその製造方法 | |
| HU210826B (en) | Process for the preparation of an extracellular exopolymer and pharmaceutical compositions containing the same | |
| FR2536281A1 (fr) | Compositions pharmaceutiques permettant de reguler les fonctions phagocytaires | |
| JPH1171297A (ja) | 癌細胞アポトーシス誘導能増強剤及び癌細胞アポトーシス誘導性組成物 | |
| FR2497809A1 (fr) | Polysaccharide mps-80 de haute masse moleculaire et sa preparation |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| ST | Notification of lapse |