FR2564093A1

FR2564093A1 - Procede pour la preparation d'adenosine3', 5'-monophosphate cyclique n6-substitue ou des sels correspondants

Info

Publication number: FR2564093A1
Application number: FR8507225A
Authority: FR
Inventors: Shigehiro Kataoka; Ayako Nasu; Nobuyuki Yamaji; Motohiko Kato
Original assignee: Kikkoman Corp
Current assignee: Kikkoman Corp
Priority date: 1984-05-11
Filing date: 1985-05-13
Publication date: 1985-11-15
Also published as: US4751293A; GB2160526B; GB2160526A; JPH058200B2; GB8511949D0; DE3516953A1; JPS60239496A; FR2564093B1

Abstract

PROCEDE POUR LA PREPARATION D'ADENOSINE 3, 5-MONOPHOSPHATE CYCLIQUE N-SUBSTITUE OU D'UN SEL CORRESPONDANT; POUR PREPARER CES COMPOSES REPRESENTES PAR LA FORMULE GENERALE: (CF DESSIN DANS BOPI) DANS LAQUELLE R EST UN RADICAL ALKYLE DROIT OU RAMIFIE DE 1 A 13ATOMES DE CARBONE OU UN RADICAL AROMATIQUE ET B REPRESENTE UN ION HYDROGENE OU UN ION DE METAL ALCALIN, ON FAIT REAGIR UN ADENOSINE 3, 5-MONOPHOSPHATE CYCLIQUE OU UN SEL CORRESPONDANT DE FORMULE GENERALE: (CF DESSIN DANS BOPI) OU A REPRESENTE UN ION HYDROGENE, UN ION DE METAL ALCALIN, UN ION AMMONIUM ORGANIQUE OU UN ION AMMONIUM AVEC UN ALDEHYDE DE FORMULE GENERALE: RCHO (III) OU R EST COMME DEFINI CI-DESSUS A UN PH DE 7,0 OU MOINS ENTRE-10 ET 120C AVEC UN RAPPORT MOLAIRE DE (II) A (III) E 11-40 ET ON REDUIT LE COMPOSE OBTENU AVEC UN HYDRURE METALLIQUE OU DE L'HYDROGENE NAISSANT.

Description

Procédé pour la préparation d'adénosine 3',5'-monophosphate

cyclique N6-substitué ou des sels correspondants.

La présente invention concerne un nouveau procédé

pour la préparation d'adénosine 3',5'-monophosphate cycli-

que N -substitué (désigné ci-après par l'abréviation cAMP

N6-substitué ou des sels correspondants.

Un cAMP N6-substitué est très utile comme inter-

médiaire important employé dans la synthèse de cAMP 6,8-

disubstitué (brevet US n 4 058 659) qui a d'excellentes

activités pharmacologiques y compris des actions anti-in-

flammatoires, d'inhibition de l'agrégation des plaquettes,

hypotensives et cardiotoniques.

Pour préparer un 8-thiobenzyl-cAMP N6-substitué

comme exemple des dérivés 6,8-disubstitués du cAMP, à par-

tir d'un cAMP N6-substitué, on connaît un procédé décrit dans Journal of Medicinal Chemistry, Vol. 23, 242-251

(1980).

Les procédés classiques connus de préparation d'un cAMP N6-substitué comprennent un procédé dans lequel on désamine le cAMP avec un nitrite pour former l'inosine

3',5'-phosphate cyclique puis on chlore avec de l'oxychlo-

rure de phosphore pour obtenir le 6-chloropurine-9-e-D-ri-

bofurannosyl-3',5'-phosphate cyclique que l'on fait ensuite

réagir avec une alcoylamine pour former un cAMP N -substi-

tué (Biochemistry, vol. 11, 2704-2709 (1976)) et un autre dans lequel on fait réagir le cAMP avec un halogénure pour

former un cAMP 1-substitué puis on effectue une transposi-

tion de Dimroth dans une solution alcaline pour former un

cAMP N6-substitué. Cependant, ces deux procédés ont l'in-

convénient d'être compliqués, de former éventuellement des

sous-produits et d'avoir des rendements faibles.

Les demanderesses ont effectué de nombreuses re-

cherches pour résoudre les difficultés précitées. L'inven-

tion repose sur la découverte qu'un cAMP N -substitué ou un de ses sels peut être préparé de façon très efficace lorsqu'on laisse réagir le cAMP ou un de ses sels avec un

aldéhyde puis on réduit le produit réactionnel.

- Le but principal de l'invention est de fournir un

procédé efficace pour la préparation d'un cAMP N -substi-

tué ou d'un de ses sels.

L'invention fournit un procédé pour la prépara-

tion d'un adénosine 3',5'-monophosphate cyclique N6-substi-

tué du d'un de ses sels représentés par la formule générale:

NHCH2R1

N N

EN Nô

o 0 _ (I) a O=p-O OH O B@ dans laquelle R1 représente un radical alcoyle à chaîne

droite ou ramifiée de 1 à 13 atomes de carbone ou un radi-

cal aromatique et e représente. un ion hydrogène ou un ion de métal alcalin, qui consiste à faire réagir un adénosine 3',5'-monophosphate cyclique ou un de ses sels représentés par la formule générale: NH2

N N

iNAN (II) S St

O= P-O OH

OOA dans laquelle A représente un ion hydrogène, un ion de métal alcalin, un ion ammonium organique ou un ion ammonium, avec un aldéhyde représenté par la formule générale:

R1CHO (III)

dans laquelle R1 est comme défini ci-dessus, dans des con-

ditions telles que le pH soit de 7,0 ou moins, la tempéra-

ture soit de -10 à 120 C et le rapport molaire du composé

(II) au composé (III) soit de 1/1-40, et à réduire le com-

posé obtenu avec un hydrure métallique ou de l'hydrogène naissant. l'invention va maintenant être décrite de façon détaillée. Le cAMP ou son sel (II) que l'on utilise comme matière de départ dans le présent procédé, sont préparés par exemple de la façon suivante. On cultive une bactérie

du genre Microbacterium capable de produire du cAMP à par-

tir de l'adénine, du xylose ou du ribose et d'un phosphate minéral, dans un milieu contenant de l'adénine, du xylose ou du ribose et un phosphate minéral et on recueille le cAMP dans le milieu de culture (brevet japonais publié n 34/1972). De plus, lorsqu'on fait réagir le cAMP libre

isolé avec des hydroxydes, des carbonates ou des hydrogéno-

carbonates de métaux alcalins ou de métaux alcalino-terreux, ou des amines, de préférence des trialcoylamines, il se forme dans la partie de la molécule du cAMP o le fragment

d'acide phosphorique est combiné, des sels de métaux alca-

lins, par exemple le sel de sodium ou de.potassium, des sels de métaux alcalino-terreux, par exemple le sel de cal-

cium et le sel de magnésium, ou des sels d'ammonium orga-

nique, par exemple le sel de triéthylamine et le sel de tributylamine. Comme substituant R1 dans l'aldéhyde représenté

par la formule générale (III), on peut mentionner des radi-

caux alcoyles à chaîne droite ou ramifiée ayant 1 à 13 ato-

mes de carbone, tels que par exemple les radicaux méthyle, éthyle, propyle, isopropyle, butyle, isobutyle, pentyle, isopentyle, hexyle, isohexyle, heptyle, octyle, nonyle, décyle, undécyle et tridécyle; et des radicaux aromatiques tels que par exemple les radicaux phényle, furyle, tolyle,

hydroxyphényle, méthoxyphényle et chlorophényle.

Dans la mise en pratique du procédé de l'inven-

tion, on fait tout d'abord réagir un composé de formule (II) avec un aldéhyde de formule (III) dans un solvant pour former un composé de type imine correspondant. Des solvants appropriés comprennent l'eau, des alcools, par exemple le méthanol et l'éthanol; des éthers, par exemple

le tétrahydrofuranne et le dioxanne; des amides, par exem-

ple le diméthylformamide et le diméthylacétamide; des aci-

des organiques carboxyliques et leurs esters, par exemple l'acide acétique, l'acétate d'éthyle et l'acide butyrique;

et des hydrocarbures halogénés, par exemple le dichloromé-

thane et le chloroforme. Ces solvants sont utilisés séparé-

ment ou en mélanges.

Le rapport de l'aldéhyde de formule (III) au com-

posé de formule (II) dans le mélange réactionnel doit être égal ou supérieur à l'équimolarité et est généralement de 1 à 40, de préférence de 5 à 25 moles de l'aldéhyde pour

une mole du composé de formule (II). Le pH du mélange réac-

tionnel est égal ou inférieur à 7 pour ne pas gêner la for-

mation du composé intermédiaire de type imine.

Le composé de type imine obtenu comme intermé-

diaire est ensuite réduit pour former le composé désiré de formule (I). La réduction est effectuée soit en présence

de réducteurs tels que des hydrures métalliques, par exem-

ple le borohydrure de sodium, le cyanoborohydrure de so-

dium, l'hydrure de lithium et d'aluminium et le cyanohydru-

re de lithium et d'aluminium, ou des boranes, ou par emploi

de l'hydrogène naissant formé par la réaction entre des mé-

taux tels que le zinc, l'amalgame de zinc, l'étain et le

fer ét des acides tels que l'acide acétique, l'acide chlor-

hydrique et l'acide sulfurique. Les solvants précités peu-

vent également être utilisés pour effectuer la réduction.

Lorsque la réduction est effectuée en présence d'un réduc-

teur, on préfère ajouter un agent déshydratant tel qu'un

tamis moléculaire ou un anhydride d'acide. Lorsqu'on uti-

lise un hydrure métallique comme réducteur, on préfère,

pour favoriser la réaction, maintenir le système réaction-

nel dans des conditions acides correspondant à un pH de 7 ou moins. Comme exemples d'acides utilisés à cet effet, on peut mentionner des acides minéraux tels que le chlorure d'hydrogène, l'acide chlorhydrique, l'acide sulfurique et l'acide nitrique; des acides de Lewis tels que le chlorure

de magnésium et le sulfate d'ammonium; et des acides orga-

niques tels que l'acide formique, l'acide acétique, l'acide propionique, l'acide butyrique,, l'acide benzoïque, l'acide

phtalique et l'acide p-toluènesulfonique.

Dans un des modes de réalisation préférés de l'invention, on effectue la réaction entre le composé de

formule (II) et l'aldéhyde de formule (III) dans des condi-

tions réductrices. Les conditions réactionnelles précitées peuvent également être utilisées dans ce cas. Les réactions de formation et de réduction de l'imine intermédiaire sont effectuées à une température comprise généralement dans la

gamme de -10 à 120 C, de préférence de 10 à 85 C.

l'isolement et la purification du composé désiré de formule (I) sont effectués selon les techniques habi- tuelles appropriées, séparément ou en combinaison, telles que par exemple la chromatographie sur colonne avec du gel de silice, de l'alumine, une résine échangeuse d'ions ou du charbon activé, la recristallisation, la précipitation

par ajustement du pH, le relargage avec du chlorure de so-

dium et l'extraction avec des solvants organiques.

Par traitement avec des hydroxydes, carbonates ou hzdrogénocarbonates de métaux alcalins ou de métaux alcalino-terreux, l'ammoniac ou des amines, par exemple la triéthylamine et la tributylamine, le composé de formule (I) sous la forme de l'acide libre, peut être transformé

en les sels correspondants formés dans la partie de sa mo-

lécule o le fragment d'acide phosphorique cyclique est combiné. Comme exemples de cAMP N -substitué et des sels correspondants représentés par la formule générale (I) que l'on peut obtenir selon l'invention, on peut mentionner le N6-éthyl-cAMP, le N6-propyl-cAMP, le N6-isopropyl-cAMP, le N6-butyl-cAMP, le N6-isobutyl-cAMP, le N6-pentyl-cAMP, le N6-isopentylcAMP, le N6-néopentyl-cAMP, le N6-hexyl-cAMP,

le N -isohexyl-cAMP, le N -heptyl-cAMP, le N -isoheptyl-

cAMP, le N6-octyl-cAMP, le N6-nonyl-cAMP, le N6-décyl-cAMP,

le N6-undécyl-cAMP, le N -dodécyl-cAMP, le N -tridécyl-

cAMP, le N -tétradécyl-cAMP, le N -benzyl-cAMP, le N -p-

méthylbenzyl-cAMP, le N6-m-méthylbenzyl-cAMP, le N -p-chlo-

robenzyl-cAMP, le N6-p-hydroxybenzyl-cAMP, le N6-p-méthoxy- j.

benzyl-cAMP, le N6-furfuryl-cAMP, et leurs sels de métaux alcalins. Selon l'invention, il est possible de préparer

efficacement un adénosine 3',5'-monophosphate cyclique N6-

substitué et les sels correspondants qui sont des intermé-

diaires dans la préparation d'adénosine 3',5'-monophosphate

N6,8-disubstitué ayant d'excellentes activités pharmacolo-

giques. L'invention est illustrée ci-après de façon plus

détaillée par des exemples non limitatifs.

Exemple 1.

Préparation de N6-butyl-cAMP.

(A) Dans 10 ml d'acide acétique, on dissout 1,03 g du sel de tributylamine du cAMP. On ajoute à la solution

obtenue 1,8 ml de n-butyraldéhyde et 127 mg de cyanoboro-

hydrdre de sodium. On agite le mélange à la température or-

dinaire. Après 40 minutes et 140 minutes, on ajoute chaque fois au mélange 127 mg de cyanoborohydrure de sodium. On

agite le mélange pendant une nuit. Après addition d'un pe-

tit volume d'eau au mélange, on chasse le solvant par dis-

tillation sous pression réduite pour laisser une substance huileuse. On dissout la substance huileuse dans un petit

volume d'eau, on ajuste le pH à 2 avec de l'acide chlorhy-

drique 2 N et on adsorbe sur une colonne de charbon activé de 1,8 x 23 cm. Après lavage à l'eau, on élue la colonne avec un mélange méthanol-eauhydroxyde d'ammonium à 28 % (10/10/1 en volume). On recueille l'éluat et on évapore à sec sous pression réduite. On dissout la substance ayant l'apparence du caramel obtenue, dans un petit volume de

méthanol, puis on ajuste le pH à 2 avec de l'acide chlorhy-

drique 2 N et on fractionne et purifie par chromatographie

sur une couche mince de gel de silice (solvant de dévelop-

pement: mélange méthanol-chloroforme (4/6 en volume)) pour

recueillir par grattage la bande (Rf X 0,4) dont l'absorp-

tion ultraviolette correspond au composé désiré. On extrait avec du méthanol la fraction recueillie et on évapore à sec sous pression réduite pour obtenir 700 mg (rendement 90 %) de N-butyl-cAMP. On dissout la substance ainsi obtenue dans une solution 2 N d'hydroxyde de sodium puis on ajuste le pH à 2 avec de l'acide chlorhydrique 2 N et on recristallise

pour obtenir un composé fondant à 187-189 C (décomposition).

Analyse élémentaire:

C H N

Trouvée (%) 42,26 5,22 17,61 Théorique (%) 42,32 5,41 17,63 pour C14H20N506P.2/3 H2 UV: Hcmax ON (C) 263 (19300) nm max (B) Dans 5 ml d'acide acétique, on dissout 527 mg du sel de tributylamine du cAMP. Après addition de 1 ml de n-butyraldéhyde et 40 mg de borohydrure de sodium, on agite le mélange à la température ordinaire. Après avoir encore ajouté 230 mg de borohydrure de sodium, on agite à nouveau le mélange pendant une nuit. On traite ensuite le mélange

comme en (A) pour obtenir 291 mg (rendement 74 %) de N6-

butyl-cAMP, le produit désiré.

(C) Dans une solution 1 N d'hydroxyde de sodium, on dissout par neutralisation 1 g de cAMP. A la solution obtenue, on ajoute 5 ml de tampon acétate 5 M (pH 3,9),

ml d'acide acétique, 5 ml d'éthanol-, 4 ml de n-butyral-

déhyde, 500 mg de poudre de zinc et 100 mg de sulfate de

cuivre. On ajoute au mélange chauffé à 80 C, après une heu-

re, 500 mg de poudre de zinc, puis, après 5 heures, 1,5 ml

de n-butyraldéhyde et 500 mg de. poudre de zinc et finale-

ment, après 8 heures, 1 ml de n-butyraldéhyde, 200 mg de sulfate de cuivre et 500 mg de poudre de zinc. Après les additions successives, on laisse le mélange réagir pendant une nuit à 80OC. On filtre le mélange réactionnel et on lave le résidu avec du méthanol et de l'eau. On combine le

filtrat et les liquides de lavage et on concentre. On mé-

lange le concentré avec un petit volume d'eau et d'acide chlorhydrique 2 N et on adsorbe sur une colonne de charbon activé, 1,8 x 24 cm. On lave la colonne avec de l'eau et on élue avec un mélange éthanol-eau-hydroxyde d'ammonium à 28 % (10/10/1 en volume). On évapore l'éluat à sec sous pression réduite. On traite le résidu comme dans l'exemple

1 pour obtenir 807 mg (rendement 69 %) de N6-butyl-cAMP.

Exemple 2.

Préparation de N6-isobutyl-cAMP.

Dans 10 ml d'acide acétique, on dissout 1,03 g du sel de tributylamine du cAMP. Après addition de 2,8 ml d'isobutyraldéhyde et 130 mg de cyanoborohydrure de sodium, on agite le mélange à la température ordinaire. On ajoute de plus au mélange 373 mg de cyanoborohydrure de sodium en une période de 2 jours. On mélange le mélange réactionnel

avec un petit volume d'eau et on chasse le solvant par dis-

tillation sous pression réduite. On dissout la substance huileuse résiduelle dans un petit volume d'eau puis on ajuste le pH à 2 avec de l'acide chlorhydrique 2 N et on

absorbe sur une colonne de charbon activé, 1,8 x 22 cm.

Après lavage à l'eau, on élue la colonne avec un mélange

méthanol-eau-hydroxyde d'ammonium à 28 % (10/10/1 en volu-

me). On évapore l'éluat sous pression réduite. On dissout le résidu dans un petit volume de méthanol, puis on ajuste

le pH à 2 avec de l'acide chlorhydrique 2 N et on fraction-

ne et purifie par chromatographie en couche mince sur gel de silice (solution de développement: méthanol-chloroforme = 35/65 en volume). On recueille par grattage la bande (Rf X 0,34) d'absorption ultraviolette correspondant au composé désiré et on extrait par le méthanol. On évapore l'extrait à sec sous pression réduite pour obtenir 333,2 mg (rendement 43, 3 %) de N6-isobutyl-cAMP fondant à 196-199 C (décomposition). Analyse élémentaire:

C H N

Trouvée (%) 42,15 5,20 17,50 Théorique (%) 42,32 5,41 17,63 pour C14H2o0 N506P.2/3 H2 UV: ÀHCl O,1N (ó) 262,5 (18800) nm max

Exemple 3.

Préparation du sel de sodium du N6-isobutyl-cAMP.

Dans 10 ml d'acide acétique, on dissout 1,03 g du sel de tributylamine du cAMP. Après addition de 1,8 ml d'isobutyraldéhyde et 50 mg de borohydrure de sodium, on agité le mélange à la temperature ordinaire. On ajoute au mélange 0,4 ml d'isobutyraldéhyde et au total 480 mg de borohydrure de sodium en 5 portions, chaque portion étant d'environ 100 mg, en une période de 2 jours. On mélange le mélange réactionnel avec un petit volume d'eau et on chasse

le solvant par distillation sous pression réduite. On dis-

sout une substance huileuse résiduelle dans un petit volume

d'eau puis on ajuste le pH à 2 avec de l'acide chlorhydri-

que 2 N et on adsorbe sur une colonne de charbon activé 1,8 x 26 cm. Après-lavage à l'eau, on élue la colonne avec un mélange méthanol-eauhydroxyde d'ammonium à 28 % (10/10/1

en volume). On évapore l'éluat à sec sous pression réduite.

On dissout le résidu dans un petit volume d'eau puis on ajuste le pH à 10 avec une solution d'hydroxyde de sodium 2 N et on fractionne et purifie par chromatographie en couche mince sur gel de silice.(solvant de développement: méthanol-chloroforme = 4/6 en volume). On recueille par grattage la bande (Rf % 0,43) d'absorption ultraviolette

correspondant au composé désiré et on extrait par le métha-

nol. On évapore l'extrait à sec sous pression réduite pour

obtenir 431 mg (rendement 53,6 %) du sel de sodium du N6-

isobutyl-cAMP. On dissout le sel ainsi obtenu dans un petit

volume d'eau et on ajuste à pH 2 avec de l'acide chlorhy-

drique 2 N. Par addition d'éthanol à la solution, on ob-

tient un précipité blanc dont le spectre infrarouge, le spectre ultraviolet et le point de fusion correspondent essentiellement à ceux du N -isobutyl-cAMP de l'exemple 2.

Exemple 4.

Préparation du N6-n-octyl-cAMP.

(A) Dans 10 ml d'acide acétique, on dissout 1,03 g du sel de tributylamine du cAMP. Après addition de 3,1 ml de n-octylaldéhyde et 105 mg de cyanoborohydrure de sodium, on agite le mélange à la température ordinaire. Après 2,5 heures et 5 heures, on ajoute respectivement au mélange Tg et 40 mg de cyanoborohydrure de sodium. Après 7 heures, on ajoute un tamis moléculaire (4 A 1/16) et on poursuit l'agitation du mélange pendant une nuit. On filtre le mélange réactionnel et on lave le tamis moléculaire au méthanol. On combine le filtrat et les liquides de lavage

et on chasse le solvant par distillation sous pression ré-

duite. On met le résidu en suspension dans un petit volume

d'eau puis on ajuste le pH à 2 avec de l'acide chlorhydri-

que 2 N et on adsorbe sur une colonne de charbon activé, 1,8 x 21 cm. On lave la colonne à l'eau et on élue avec un mélange de méthanol-eauhydroxyde d'ammonium à 28 % (10/10/1

en volume). On évapore l'éluat à sec sous pression réduite.

On dissout le résidu dans un petit volume de méthanol et on fractionne et purifie par chromatographie en couche mince

sur gel de silice (solvant de développement: méthanol-chlo-

roforme = 2/3 en volume). On recueille par grattage la ban-

de (Rf % 0,47) d'absorption ultraviolette correspondant au composé désiré et on extrait avec du méthanol. On évapore l'extrait à sec sous pression réduite pour obtenir 645,5 mg

(rendement 70,5 %) du sel d'ammonium du N6-n-octyl-cAMP.

On obtient la forme acide libre du N6-n-octyl-cAMP fondant à 180-182 C par dissolution du sel dans l'eau et ajustement

du pH de la solution obtenue à 2 avec de l'acide chlorhy-

drique 2 N. Analyse élémentaire:

C H N

Trouvée (%) 47,91 6,37 15,32 Théorique (%) 48,0 6,49 15,55 Pour C18H28N506P.l/2 H2 UV: Hcl O,1N (c) 263 (18200) nm max (B) Dans 15 ml d'acide acétique, on dissout 1,05 g

du sel de sodium du cAMP. Après addition de 6,2 ml de n-oc-

tylaldéhyde et 150 mg de cyanoborohydrure de sodium, on agi-

te le mélange à la température ordinaire. Après 2 heures, 4 heures et 7 heures, on ajoute respectivement au mélange mg, 100 mg et 100 mg de cyanoborohydrure de sodium. On

poursuit l'agitation pendant une nuit. On mélange le mélan-

ge réactionnel avec un petit volume d'eau et on chasse le solvant par distillation sous pression réduite. On met le

-résidu en suspension dans un petit volume d'eau et on ad-

sorbe la suspension, après ajustement du pH à 2 avec de

l'acide chlorhydrique 2 N, sur une colonne de charbon ac-

tivé, 1,8 x 24 cm. Après lavage à l'eau, on élue la colonne avec un mélange méthanol-eau-hydroxyde d'ammonium à 28 %

(10/10/1 en volume) et on évapore l'éluat à sec sous pres-

sion réduite. On dissout le résidu dans un petit volume de méthanol et on fractionne et purifie par chromatographie

sur une couche mince de gel de silice (solvant de dévelop-

pement: méthanol-chloroforme = 2/3 en volume). On recueil-

le par. grattage la bande (Rf X 0,47) d'absorption ultra-

violette correspondant au composé désiré et on extrait par

le méthanol. On évapore l'extrait à sec sous pression ré-

duite pour obtenir 971,5 mg (rendement 73,4 %) du sel d'am-

monium du N6-n-octyl-cAMP. On obtient la forme acide libre du N6-n-octylcAMP par dissolution du sel dans l'eau et ajustement du pH de la solution obtenue à 2 avec de l'acide chlorhydrique 2 N.

Exempel 5.

Préparation du N -benzyl-cAMP. Dans 10 ml d'acide acétique, on dissout 1, 03 g du sel de tributylamine du cAMP. Après addition de 2 ml de benzaldéhyde et 110 mg de cyanoborohydrure de sodium, on agite le mélange à la température ordinaire. On ajoute de plus au mélange 545 mg de cyanoborohydrure de sodium en une période de 2 jours. On mélange le mélange réactionnel avec

un petit volume d'eau et on chasse le solvant par distilla-

tionsous pression réduite. On dissout le résidu dans un

petit volume d'eau, puis on ajuste le pH à 2 avec de l'aci-

de chlorhydrique 2 N et on adsorbe sur une colonne de char-

bon activé 1,8 x 23 cm. Après lavage à l'eau, on élue la colonne avec un mélange méthanol-eau-hydroxyde d'ammonium à 28 % (10/10/1 en volume) et on évapore l'éluat à sec sous pression réduite. On dissout le résidu dans du méthanol puis on ajuste le pH à 2 avec de l'acide chlorhydrique 2 N et on fractionne et purifie par chromatographie en couche

mince sur gel de silice (solvant de développement: métha-

nol-chloroforme = 2/3 en volume). On recueille par grattage

la bande (Rf X 0,42) d'absorption ultraviolette correspon-

dant au composé désiré et on extrait par le méthanol. On évapore l'extrait à sec sous pression réduite pour obtenir 617,9 mg (rendement 73, 6 %) de N -benzyl-cAMP fondant à

193-195 C (décomposition).

Analyse élémentaire:

C H N

Trouvée (%) 46,50 4,66 15,84 Théorique (%) 46,72 4,58 16,03 Pour C17H18N506P.H20 Uv: ÀC,1 (E) 264 (19100) nm max

Exemple 6.

Préparation du sel de sodium du N6-furfuryl-cAMP.

A 1,03 g du sel de tributylamine du cAMP, on ajoute 10 ml de méthanol et 2 ml d'acide acétique. On agite

le mélange pour former une solution. On ajoute à la solu-

tion 2,7 ml de furfural et 126 mg de cyanoborohydrure de sodium. Au mélange agité à la température ordinaire, on ajoute de plus 756 mg de cyanoborohydrure de sodium en une période de 2 jours. On mélange le mélange réactionnel avec

un petit volume d'eau et on chasse le solvant par distilla-

tionssous pression réduite. On dissout le résidu dans un petit volume d'eau puis on ajuste le pH à 2 avec de l'acide chlorhydrique 2 N et on adsorbe sur une colonne de charbon

activé 1,8 x 26 cm. Après lavage à l'eau, on élue la colon-

ne avec un mélange méthanol-eau-hydroxyde d'ammonium à 28 % (10/10/1 en volume). On évapore l'éluat à sec sous pression réduite. On dissout le résidu dans un petit volume d'une

solution 1 N d'hydroxyde de sodium et on fractionne et pu-

rifie par chromatographie en couche mince sur gel de silice (solvant de développement: méthanol-chloroforme = 3/7 en volume). On recueille par grattage la bande (Rf X 0,14)

dont l'absorption ultraviolette correspond au composé dé-

siré et on extrait par le méthanol. On évapore l'extrait à sec sous pression réduite pour obtenir 560 mg (rendement %) du sel de sodium du N6furfuryl-cAMP ayant un point

de fusion de 220-223 C (décomposition).

Analyse élémentaire:

C H N

* Trouvée (%) 39,27 3,67 14,96 Théorique (%) 39,31 3,95 15,28 Pour C 15H15N507PNa.3/2 H2 UV ÀHcl ' (E) 264 (17050) nm max

Claims

REVENDICATIONS

1. Procédé pour la préparation d'un adénosine

3',5'-monophosphate cyclique N6-substitué ou un sel corres-

pondant représentés par la formule générale:

NHCH2R1

N N

iN AN

10. 1

O=P O OH

O B

dans laquelle R1 représente un radical alcoyle à chaîne

droite ou ramifiée de 1 à 13 atomes de carbone ou un radi-

cal aromatique et Be représente un ion hydrogène ou un ion de métal alcalin, caractérisé en ce qu'il consiste à faire réagir un adénosine 3', 5'-monophosphate cyclique ou un sel correspondant représenté par la formule générale: NH2

N

(II) 3O

1 O O

O-- P O OH

0 A dans laquelle As représente un ion hydrogène, un ion de métal alcalin, un ion ammonium organique ou un ion ammonium avec un aldéhyde représenté par la formule générale:

R CHO (III)

dans laquelle R1 est comme défini ci-dessus, dans des con-

ditions telles que le pH soit égal ou inférieur à 7,0, la temperature soit de -10 à 120 C et le rapport molaire du composé (II) au composé (III) soit de 1/1-40, et à réduire

le composé obtenu avec un hydrure métallique ou de l'hydro-

gène naissant.

2. Procédé selon la revendication 1, dans lequel As est H+, Na+, K+, la triéthylamine, la tributylamine, ou NH3.

3. Procédé selon la revendication 1, dans lequel

le radical aromatique représenté par R1 est un radical phé-

nyle, furyle, tolyle, hydroxyphényle, méthoxyphényle ou chlorophényle.

4. Procédé selon la revendication 1, dans lequel

B est H+, Na+ ou K+.

5. Procédé selon la revendication 1, dans lequel le solvant est au moins un composant du groupe constitué par l'eau, le méthanol, l'éthanol, le tétrahydrofuranne, le dioxanne, le diméthylformamide, le diméthylacétamide, l'acide acétique, l'acétate d'éthyle, l'acide butyrique,

le dichlorométhane et le chloroforme.

6. Procédé selon la revendication 1, dans lequel

la température de réaction est dans la gamme de 10 à 85 C.