FR2800468A1 - Procede de determination d'elements presents dans un echantillon sanguin - Google Patents

Abstract

L'invention concerne une méthode d'analyse de l'état physiologique ou de la nature de cellules contenues dans un échantillon prélevé chez un patient, caractérisé en ce que l'on mesure l'élasticité et/ ou l'adhésion des cellules dudit échantillon éventuellement en présence d'un réactif spécifique d'un état physiologique ou de la nature desdites cellules et en ce qu'on la compare à l'élasticité et/ ou l'adhésion de cellules témoins en présence ou non dudit réactif.

Description

PROCEDE DE DETERMINATION D'ELEMENTS PRESENTS DANS UN ECHANTILLON SANGUIN.

La présente invention concerne le domaine des tests et des analyses sanguins, notamment en vue de la détermination de réactions immunologiques à la surface des membranes des cellules contenues dans le sang.

L'invention concerne tout particulièrement mais non exclusivement un procédé et un dispositif pour la détermination des antigènes et anticorps présents à la surface de la membrane du globule rouge ou dans un sérum.

Tout autre type de membrane peut être utilisé pour une étude générale de tout type de cellule suivant le même principe (couche lipidique), liposome sur lequel on a préalablement greffé un module rentrant dans une réaction immunologique ou autre (anticorps, antigène).

On connaît déjà plusieurs techniques de mise en évidence des réactions immunologiques antigène anticorps qui sont basés sur les réactions d'agglutination entre les globules rouges. La mise en évidences d'anticorps à la surface des globules rouges est habituellement effectuée par la mise en évidences des réactions d'agglutination pratiquées sur plaque d'opaline, en tube ou par réaction de filtration sur colonne de billes.

Le brevet EP39195 concerne un procédé de détection d'anticorps dans un échantillon d'essai comportant (a) la préparation d'une suspension pratiquement isotonique a faible teneur en ions, contenant ledit échantillon, ayant une teneur sensibilisatrice effective de tétraacétate d'éthylènediamine et contenant également des érythrocytes sous leur forme a charge nettement négative (b) le maintien de ladite suspension pendant au moins trente secondes ; (c) la combinaison de cette suspension avec une quantité d'une solution de polymère appropriée pour provoquer l'agglutination desdits érythrocytes (d) la séparation de la masse agglutinée de polymère et d'érythrocytes ainsi obtenue du liquide surnageant de ladite suspension ; (e) la dispersion de cette masse agglutinée dans une solution saline hypertonique pratiquement neutre ; et (f) le contrôle de la masse agglutinée mise de nouveau en suspension concernant la présence ou l'absence d'anticorps.

Le brevet EP58780 concerne un procédé pour la détermination qualitative des antigènes des érythrocytes dans un fluide par incubation des érythrocytes avec des anticorps de spécificité connue. On introduit le fluide contenant le complexe antigène/ anticorps dans un récipient ayant dans le fond une partie creuse de forme conique ou en coin, la partie creuse au moins du récipient étant revêtue d'une anti-immunoglobuline ou d'une protéine A dirigée contre les anticorps, et l'on centrifuge le fluide contenant le complexe antigène/anticorps au travers d'un coussin consistant en un autre fluide non toxique à pH 6 à 8, la densité du fluide du coussin étant supérieure a la densité de l'autre fluide, et après centrifugation, on détermine la quantité du sédiment par mesure de sa surface qui est proportionnelle a sa quantité.

Le brevet EP557546 concerne le dosage d'un analyte dans une solution d'échantillon aqueux par agglutination d'érythrocytes non fixés. I1 comporte les étapes suivantes . (a) on laisse incuber des érythrocytes avec un ou plusieurs anticorps et/ou dérivés d'anticorps ne conduisant pas à une agglutination prématurée; l'anticorps et/ou le dérivé d'anticorps contre un ou plusieurs antigènes sont orientés sur la membrane d'érythrocytes et les anticorps et/ou les dérivés d'anticorps sont couplés avant ou après l'incubation avec les érythrocytes à un premier partenaire de liaison d'une paire liante d'affinité élevée, (b) on laisse incuber un deuxième partenaire de liaison de la paire liante d'affinité élevée avec les érythrocytes traités en (a) ; le deuxième partenaire de liaison est choisi de telle sorte qu'il présente plus d'un site de liaison par molécule pour le premier partenaire de liaison, (c) on laisse incuber le premier partenaire de liaison de la paire liante d'affinité élevée, qui est couplé avec l'analyte ou/et un déterminant de l'analyte actif vis-à-vis des antigènes, avec les érythrocytes traités en (b), (d) on incube une solution échantillon qui a été traitée avec un anticorps ou dérivé d'anticorps dirigé contre l'analyte avec les érythrocytes traités provenant de (c), (e) on détermine l'absence ou la présence de l'analyte dans la solution échantillon a l'aide de la survenue ou de l'absence d'une réaction d'agglutination.

Le brevet- EP194212 concerne un procédé pour la mise en évidence d'une agglutination érythrocytaire, permettant une lecture facile, directe et prolongée, caractérisé en ce qu'un mélange sérum-hématies est incorporé, après incubation, dans un milieu de gel contenant des anticorps ou non, et que ce mélange est soumis a des conditions de sédimentation, permettant d'un seul trait et en un temps : a) la séparation du sérum et des hématies à l'intérieur du système de test, b) le contact des hématies sensibilisées ou non-sensibilisées avec des anticorps contenus dans le milieu de gel, c) la rétention relative des hématies agglutinées par le gel par rapport aux hématies non agglutinées qui sédimentent.

Le brevet EP305337 concerne un procédé de détection des anticorps, respectivement des antigènes par la mise en évidence optique de complexes liés a un support d'antigènes avec des anticorps en milieu aqueux dans un récipient de réaction, dans lequel on met en contact une solution contenant des anticorps, respectivement des antigènes, avec des antigènes, respectivement des anticorps, liés a un support, une bouillie ou une suspension de particules inertes étant mise dans le récipient de réaction avant cette étape, ensuite de quoi on soumet le mélange à sédimenter à la gravitation, ce par quoi lorsqu'un complexe d' antigènes -anticorps se forme, dans une réaction très positive, il se trouve sur le sédiment des particules inertes, et en réaction faiblement positive, il est présent à l'intérieur des particules inertes, et en l'absence de formation d'un complexe antigènes-anticorps, c'est-à-dire dans une réaction négative, il se trouve sous les particules inertes sédimentées, caractérisé en ce qu'on effectue l'ensemble du procédé dans un seul micro-récipient de réaction. Toutes ces techniques utilisent un adjuvant, par exemple une immunoglobuline de type IgG ou anticomplément, pour mettre en évidence la réaction entre globule rouge et l'anticorps.

Les techniques actuelles ont pour objectif la mise en évidence de liaisons entre les hématies, mais ne travaillent pas sur la réaction entre l'anticorps et la surface du globule rouge.

La détermination de la réaction est effectuée par l'appréciation de l'oeil humain et non par une machine de manière certaine. I1 existe des moyens de détermination de l'existence de réaction utilisant des capteurs CCD qui nécessitent un étalonnage assez précis, ce qui peut induire des erreurs de mesure ou d'interprétation. Il n'est pas aisé de déterminer, dans les cas limites, si une réaction a eu lieu ou non. Les machines nécessitent plusieurs manipulations, ce qui multiplie les risques d'erreur.

L'invention permet d'automatiser la recherche d'anticorps par l'étude du comportement de la membrane du globule rouge dans le cadre d'une réaction immunologique. Les mesures effectuées dans le cadre de l'invention permettent de gérer les résultats directement à partir des échantillons. I1 n'est pas nécessaire d'utiliser des artifices et des moyens détourné pour mesurer de manière certaine les effets dus aux éléments dont on cherche à détecter la présence. L'invention concerne une méthode d'analyse de l'état physiologique et de ses modifications résultant par exemple de réactions spécifiques, ou de la nature de cellules contenues dans un échantillon prélevé chez un patient. On mesure l'élasticité et/ou l'adhésion des cellules de l'échantillon en question, éventuellement en présence d'un réactif spécifique d'un état physiologique ou de la nature desdites cellules et l'on la compare à l'élasticité et/ou l'adhésion de cellules témoins en présence ou non dudit réactif.

La mesure de l'élasticité et/ou de l'adhésion des cellules de l'échantillon consiste à a) soumettre les cellules de l'échantillon à un déplacement afin de créer une monocouche de cellules à la surface de cet échantillon, b) émettre un faisceau laser à travers l'échantillon et mesurer la diffraction dudit rayon laser.

Le déplacement de la monocouche consiste préférentiellement en un mouvement circulaire.

Dans une variante, les étapes (a) et (b) sont effectuées simultanément.

Dans une variante préférée, les cellules témoins sont du même type que les cellules de l'échantillon.

La mesure de l'élasticité et/ou l'adhésion des cellules de l'échantillon peut être effectuée en présence d'un réactif choisi parmi des anticorps monoclonaux ou polyclonaux identiques ou différents spécifique de la nature ou d'un état physiologique des cellules.

Une application particulièrement avantageuse consiste à mesurer l'élasticité et/ou l'adhésion d'hématies contenues dans un échantillon de sang d'un sujet. Ces mesures permettent d'effectuer les opérations d'un typage immunologique sanguin : groupage sanguin par les réactions de Beth Vincent ou de Simonin, recherche et identification des anticorps irréguliers, typage cellulaire. Dans une variante a) on soumet les hématies d'un échantillon de sang prélevé chez un sujet à un déplacement afin de créer une monocouche de cellules à la surface de celui-ci, en présence d'un anticorps dirigé contre un antigène présent à la surface et spécifique de la nature ou d'un état physiologique des hématies, b) on émet un faisceau laser à travers les hématies de l'échantillon et l'on mesure la diffraction dudit rayon laser, c) on soumet les hématies d'un ou plusieurs échantillons témoins à un déplacement identique à celui de l'étape (a) en l'absence de l'anticorps, d) on émet un faisceau laser à travers les hématies des échantillons témoins et l'on mesure la diffraction dudit rayon laser, e) on compare les mesures de diffraction effectuées en (b) et (d) afin de déterminer l'état physiologique ou la nature des hématies de l'échantillon prélevé chez le sujet.

La méthode selon l'invention est avantageusement appliquée au typage sanguin, au diagnostic d'une infection d'un sujet et à la mesure du vieillissement de cellules.

Les cellules étudiées peuvent consister en des liposomes, ou tout type de cellule comportant une couche membranaire lipidique. L'identification de bactéries est également rendue possible.

Le procédé objet de l'invention utilise la force centrifuge pour créer une déformation de la surface des cellules. Cette déformation est ensuite mesurée grâce à un faisceau lumineux dont la déviation et la diffraction sont fonction de la déformation des cellules. Les variations du faisceau lumineux sont aisément mesurables de manière automatique. Les propriétés rhéologiques du sang, et notamment les variations de flux des artérioles aux capillaires, sont principalement régies par la capacité intrinsèque de changement de forme du globule. L'étude des propriétés mécaniques des érythrocytes est d'une grande importance en science et en médecine. Leur capacité à se déformer peut aider au diagnostic clinique de diverses maladies. Le principe d'utilisation dans un test immunologique dans le diagnostic est de mettre en relation un support antigénique avec une suspension d'anticorps.

Après un temps d'incubation du mélange antigène/ anticorps, une force centrifuge est appliquée à la chambre contenant le mélange. Le dessin de la flexibilité des globules rouge est étudié. La flexibilité est modifiée si le globule rouge a été mis en contact avec des anticorps spécifiques des sites antigéniques présents à la surface de sa membrane.

L'invention utilise un appareil comportant, dans une première réalisation une chambre réactionnelle destinée à recevoir les globules rouges et les anticorps à analyser. Cette chambre réactionnelle est fixée sur une roue giratoire dont l'axe est actionné par un moteur. Un moteur actionne la roue et la chambre réactionnelle. La vitesse de rotation de la chambre est réglée par un tachymètre relié à un ordinateur. Une diode laser est fixée sur le support entourant la roue giratoire et un capteur CCD est placé fixé de manière à recevoir le faisceau laser transmis par la chambre réactionnelle. Un calculateur réceptionne et analyse les données du capteur.

Lors de la rotation de la chambre réactionnelle, les globules rouges forment alors une monocouche à la surface intérieure de la chambre réactionnelle. Par effet de la force centrifuge, les globules rouges subissent une déformation à la périphérie extérieure et sont répartis en monocouche sur la face externe de l'intérieur de la chambre réactionnelle. Il est également possible d'effectuer les mesures avec la présence d'une deuxième couche. La présence d'un nombre supérieur de couches rend l'ensemble des mesures plus difficile à réaliser et fait perdre beaucoup de précision au procédé, sans rendre les mesures impossibles à réaliser. La diode laser émet un faisceau lumineux, préalablement dévié par un miroir, qui traverse la chambre réactionnelle pour aller sur le capteur CCD fixé à la perpendiculaire de la diode. Le calculateur réceptionne les données en provenance du capteur, analyse puis compare les signaux obtenus.

Il est connu que lorsque des ondes lumineuses traversent des ouvertures de taille réduite, elles subissent une déviation que l'on décrit comme un phénomène de diffraction et/ou d'absorption. Dans l'instrumentation selon l'invention, l'absorption est négligeable et n'est pas prise en compte dans les mesures. La déformation des cellules est visualisée par la figure de diffraction obtenue par un rayon du laser. Pour l'acquisition des images, on utilise une barrette CCD.

En particulier, la flexibilité de 1a membrane, va permettre de dévier le rayon laser et va donner un changement d'image spécifique de cette grandeur physique. L'adhérence du globule rouge peut être ainsi une valeur mesurable.

Dans une variante avantageuse, des mesures simultanées peuvent être effectuées dans une roue munie de plusieurs chambres réactionnelles, permettant ainsi des mesures en présence de témoin ou d'hématies de spécificité différentes. Il est également possible d'étudier le vieillissement des hématies par l'évolution de leur déformabilité. Une membrane ayant capturé un anticorps montre un modèle de diffraction du rayon-laser différent de cette même membrane dans la solution témoin en absence d'anticorps. Pendant la première phase de sédimentation, le signal de diffraction va apparaître avec la formation de la monocouche cellulaire. La fréquence de rotation est augmentée et l'on observe l'évolution de la figure de diffraction. Cette diffraction est liée au modèle de déformation de l'hématie.

Ces nouvelles méthodes possèdent un fort pouvoir discriminant. Cette technique permet une mesure rapide et physiologique, pour une population de cellules du module élastique de courbure B.

L'objectif est donc la recherche d'améliorations de l'appareil, de nouvelles méthodes de mesure et de développement des applications cliniques. D'un point de vue théorique, des modèles sont cependant nécessaires pour accéder à des paramètres physiques, d'élasticité et de viscosité. Les influences de divers facteurs chimiques, et physiques sur le signal recueilli doivent aussi être explorées. L'utilisation de cet appareil est aussi envisageable pour d'autres types de cellules et ce aussi bien en recherche qu'en application médicale.

Les paramètres mesurables concernent trois étapes distinctes du procédé selon l'invention.

On peut effectuer des mesures de la sédimentation, des propriétés géométriques, de l'agrégation, de la densité, etc. Dans ce cas, on mesure le temps de sédimentation, c'est-à-dire le temps entre le début de l'application de la force gravitationnelle et le moment de la première évolution d'une figure de diffraction.

Un deuxième type de mesure consiste en les mesures statiques des propriétés élastiques. On peut mesurer Delta G, mesure de la déformabilité autour d'une géométrie moyenne, c'est-à-dire l'augmentation de la force G nécessaire pour l'induction d'un changement de géométrie d'intensité définie. Une seconde variable est Kappa, le module élastique de courbure, évalué par comparaison avec modélisation précoce. La variable Istat concerne le changement maximal d'amplitude du schéma du premier ordre par la force appliquée. Enfin, l'adhésion consiste en la mesure par évaluation du changement persistant de la figure de diffraction après l'application d'une force gravitationnelle importante.

Un dernier type de mesure concerne les mesures dynamiques des propriétés viscoélastiques. Dans ce cas, l'on mesure le demi-temps de la relaxation, temps nécessaire pour établir la moyenne du changement d'intensité finale après un changement de la force abrupte, et l'Idyn, changement maximal d'intensité d'amplitude de la figure de diffraction du premier ordre par une force alternante en rapport de fréquence.

L'invention concerne également l'ensemble des éléments permettant la mise en oeuvre du procédé de détermination des anticorps présent dans le sérum ou des antigènes présents à la surface du globule rouge.

En plus de l'appareillage spécifique, il est nécessaire de posséder pour la recherche d'anticorps réguliers - des hématies phénotypées pour un dépistage, avantageusement entre deux et quatre . la réponse consiste en l'absence ou la présence d'un anticorps (technique usuelle) pour couvrir l'ensemble des anticorps habituellement recherchés.

- douze à vingt hématies phénotypées pour identifier un anticorps . on obtient le nom du ou des anticorps présent(s).

I1 est également nécessaire d'utiliser une solution de dilution dans laquelle on dilue les hématies, avant de les mettre dans la chambre réactionnelle. Cette solution de dilution peut consister en une solution tampon, une solution conservatrice ou potentialisatrice. Les hématies sont utilisées à une faible concentration en tampon. Il est possible d'utiliser le procédé selon l'invention dans la recherche de groupe sanguin, que ce soit suivant la réaction de Beth Vincent pour la mise en évidence des antigènes présents à la surface des hématies à l'aide des antisérum anti-A, anti-B, et anti-AB et anti-D pour le système Rhésus, ou suivant la réaction de Simonin pour la mise en évidence des anticorps présents dans le sérum à l'aide des hématies A1, A2, B, O. Plus généralement on peut effectuer la recherche des antigènes C, c, E, e Kell ainsi que les autres systèmes présents à la surface des globules rouges en utilisant des antisérums spécifiques.

La mise en évidence de relations antigène- anticorps basée sur une modification de l'élasticité d'une membrane est une application particulièrement intéressante du procédé selon l'invention. I1 est possible d'effectuer des recherches d'anticorps irréguliers (d'agglutinines irrégulières) à la surface du globule rouge. La recherche du groupe sanguin et du phénotype sanguin sont facilités par le procédé selon l'invention. De manière générale, l'étude de vitesse de sédimentation des globule rouge est permise par cette méthode, ainsi que l'étude des modifications biorhéologiques du sang en vue d'un diagnostic, comme la vitesse de sédimentation déjà utilisée en laboratoire d'analyse médical. Tout type de membrane peut être utilisé Bicouche lipidique, liposome, latex ou tout autre matériau pourvu d'un modèle d'élasticité, etc.

On peut fournir directement des roues comportant le ou les réactifs à l'intérieur. Concernant le mode opératoire. L'invention sera mieux comprise avec la description d'une utilisation particulière, non limitative on effectue ici la mesure d'une différence de comportement d'élasticité et/ou d'adhésion d'une membrane en rapport avec des variations physiologiques dans l'environnement de la dite membrane.

Le modèle de membrane étudié ici est l'hématie (C'est une membrane principalement composée d'une bicouche lipidique). La dite hématie va être mise en suspension dans 1 - Une solution comportant un anticorps correspondant à un antigène présent à sa surface afin de provoquer une réaction.

2 - Une solution isotonique ne comportant pas d'anticorps correspondants aux antigènes présent à la surface de l'hématie.(milieu témoin négatif) Les deux mélanges sont introduits à deux endroits différents dans une même chambre réactionnelle. Cette chambre va être soumise à une même force centrifuge.

On utilise des hématies dont le phénotype immunologique est défini en vue de mettre en évidence des anticorps présents dans un sérum humain ou, inversement, des anticorps connus pour mettre en évidence des antigènes présents à la surface de l'hématie.

On pratique une dilution des hématies révélatrices ou indicatrice dans un tampon physiologique, un sérum physiologique ou solution de conservation isotonique pour obtenir une concentration finale de environ 0,05%.

Un volume de la dilution est introduit dans une chambre réactionnelle. Un volume de sérum à tester est introduit dans cette même chambre.

Une force centrifuge (dont l'intensité est fonction du diamètre de la roue) est appliquée à la chambre circulaire. L'image de diffraction de la lumière en provenance du laser est ensuite recueillie puis analysée. La roue possède un ensemble de dispositifs à chambres multiples. Ces dispositifs sont disposés sur la roue circulaire. La fermeture de ces dispositifs est permise par une bande caoutchouc ou latex avec un couvercle posé par clipsage ou tout autre moyen de les rendre étanches.

2 ou 4 chambres individuelles peuvent être envisagées par dispositif circulaire.

Dans une réalisation particulière, la chambre réactionnelle est une chambre rectangulaire en verre ou en matière plastique d'environ 20 mm*20 mm*2 mm. Cette chambre est introduite sur une roue giratoire dans un emplacement dédié à cet effet.

Dans une réalisation préférée, la suspension de globule rouge est incubée à 37 C et est mise en suspension à 0,05 % dans 1g/1 de glucose et 0,25 g/1 d'albumine bovine.

Il est important d'utiliser des hématies révélatrices excessivement diluées. Avantageusement, elles sont fraîchement lavées et ramenées à une dilution de 0,05%. On met à cet effet 3 à 5 gouttes de sang total dans un tube à essai et l'on ajoute 5 ml de solution saline isotonique. On effectue alors une centrifugation de 10 minutes à 3000 RPM. On enlève ensuite par retournement l'ensemble du surnageant. L'opération est renouvelée 3 fois. Le culot d'hématies récupéré après la dernière centrifugation est à considérer comme étant à une concentration de 90 %. On utilise cette estimation pour pratiquer une dilution permettant d'avoir une concentration finale à 0,05%.

Le sérum à tester est recueilli après coagulation, sédimentation et centrifugation du sang de patient d'origine veineuse.

Les hématies du patient sont prélevées après ponction veineuse et mises en suspension en solution 0,05% en solution albumine glucose ou en milieu de conservation du commerce, ou en solution saline isotonique à<B>0,9%</B> NaCl pour usage immédiat. Pour certain patient présentant des variations physiologiques significatives le lavage des hématies peut être nécessaire (comme précédemment, on effectue un triple lavage en suspension isotonique à 0.9% NaCl par centrifugation et l'on rejette le surnageant).

Le sérum test contenant les anticorps peut être à l'état liquide. S'il vient du commerce, il peut nécessiter des dilutions en accord avec les recommandations du fabricant. Le sérum test peut aussi être préalablement greffé dans la chambre réactionnelle. Ce sera le cas pour les sérums test destinés à la recherche d'antigène à la surface de globule rouge (réaction de Beth Vincent, phénotypage)ces sérums test peuvent être préalablement déposés et déshydratés à la surface in vitro face externe de la chambre de réaction dans le but d'étudier le phénomène d'adhésion des globules rouges.

Dans une première variante, on effectue une préparation préalable en tube.

On met dans un tube à essai 50 microlitres (1 goutte) de la suspension. On ajoute une goutte du sérum à tester (50 microlitres). On laisse incuber à 37 C dans un bain marie pendant 10-20 minutes.(Ce temps peut être variable en fonction des milieux utilisés). À la suite de cette incubation, on introduit dans la chambre réactionnelle le volume de ce mélange dans la proportion guidée par la forme et le volume de la chambre.

Dans le cas de la chambre décrite précédemment, un volume de 20 microlitres est suffisant.

Une agglutination spontanée et massive peut être mise en évidence durant cette période, elle est à prendre en compte dans les résultats finaux.

On peut utiliser une ou plusieurs diode(s) laser pour émettre le faisceau lumineux. Les diodes sont fixées sur un cadre entourant la roue giratoire. Le rayon laser dévié par un miroir, traverse la chambre de lecture pour aller au capteur CCD fixé à la perpendiculaire des diodes.

L'ordinateur synchronise la lecture, réceptionne et analyse les données en provenance du capteur CCD. Les images réceptionnées par les capteurs CCD sont transmises à l'ordinateur qui compare et interprète les signaux obtenus.

Le rayon laser traverse un grand nombre de cellule, La surface étudiée correspond à 1 mm2 d'une monocouche d'hématies. (La suspension d'hématies est environ à 0.05 %).

Claims (13)

REVENDICATIONS

1) Méthode d'analyse de l'état physiologique ou de la nature de cellules contenues dans un échantillon prélevé chez un patient, caractérisé en ce que l'on mesure l'élasticité et/ou l'adhésion des cellules dudit échantillon éventuellement en présence d'un réactif spécifique d'un état physiologique ou de la nature desdites cellules et en ce qu'on la compare à l'élasticité et/ou l'adhésion de cellules témoins en présence ou non dudit réactif.

2) Méthode selon la revendication 1, caractérisée en ce que la mesure de l'élasticité et/ou de l'adhésion des cellules de l'échantillon consiste à a) soumettre les cellules de l'échantillon à un déplacement afin de créer une monocouche de cellules à la surface de celui-ci, b) émettre un faisceau laser à travers l'échantillon et mesurer la diffraction dudit rayon laser.

3) Méthode selon la revendication 2, caractérisée en ce que le déplacement de l'étape (a) est un mouvement circulaire.

4) Méthode selon l'une des revendications 2 ou 3, caractérisée en ce que les étapes (a) et (b) sont effectuées simultanément.

5) Méthode selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que les cellules témoins sont du même type que les cellules de l'échantillon.

6) Méthode selon l'une quelconque de revendications précédentes, caractérisée en ce que la mesure de l'élasticité et/ou l'adhésion des cellules de l'échantillon est effectuée en présence d'un réactif choisi parmi des anticorps monoclonaux ou polyclonaux identiques ou différents spécifique de la nature ou d'un état physiologique des cellules.

7) Méthode selon l'une quelconque de revendications précédentes, caractérisée en ce que l'on mesure l'élasticité et/ou l'adhésion d'hématies contenues dans un échantillon de sang d'un sujet.

8) Méthode selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisée en ce que a) on soumet les hématies d'un échantillon de sang prélevé chez un sujet à un déplacement afin de créer une monocouche de cellules à la surface de celui-ci, en présence d'un anticorps dirigé contre un antigène présent à la surface et spécifique de la nature ou d'un état physiologique des hématies, b) on émet un faisceau laser à travers les hématies de l'échantillon et l'on mesure la diffraction dudit rayon laser, c) on soumet les hématies d'un ou plusieurs échantillons témoins à un déplacement identique à celui de l'étape (a) en l'absence de l'anticorps, d) on émet un faisceau laser à travers les hématies des échantillons témoins et l'on mesure la diffraction dudit rayon laser, e) on compare les mesures de diffraction effectuées en (b) et (d) afin de déterminer l'état physiologique ou la nature des hématies de l'échantillon prélevé chez le sujet.

9) Méthode selon l'une quelconque des revendications précédentes appliquée au typage immunologique sanguin : groupage sanguin par les réactions de Beth Vincent ou de Simonin, recherche et identification des anticorps irréguliers, typage cellulaire consistant à mesurer l'élasticité et/ou l'adhésion des cellules dudit échantillon éventuellement en présence d'un réactif spécifique d'un état physiologique ou de la nature desdites cellules et en ce qu'on la compare à l'élasticité et/ou l'adhésion de cellules témoins en présence ou non dudit réactif.

10) Méthode selon l'une quelconque des revendications 1 à 9 appliquée au diagnostic d'une infection d'un sujet consistant à mesurer l'élasticité et/ou l'adhésion des cellules dudit échantillon éventuellement en présence d'un réactif spécifique d'un état physiologique ou de la nature desdites cellules et en ce qu'on la compare à l'élasticité et/ou l'adhésion de cellules témoins en présence ou non dudit réactif.

11) Méthode selon l'une quelconque des revendications 1 à 6 appliquée à la mesure du vieillissement de cellules consistant à mesurer l'élasticité et/ou l'adhésion des cellules dudit échantillon éventuellement en présence d'un réactif spécifique d'un état physiologique ou de la nature desdites cellules et en ce qu'on la compare à l'élasticité et/ou l'adhésion de cellules témoins en présence ou non dudit réactif.

12) Méthode selon la revendication 11 appliquée aux liposomes consistant à mesurer l'élasticité et/ou l'adhésion des cellules dudit échantillon éventuellement en présence d'un réactif spécifique d'un état physiologique ou de la nature desdites cellules et en ce qu'on la compare à l'élasticité et/ou l'adhésion de cellules témoins en présence ou non dudit réactif.

13) Méthode selon l'une quelconque des revendications 1 à 6 caractérisée en ce que l'on mesure la présence de bactéries.