FR2965357A1

FR2965357A1 - Utilisation cosmetique de la dermcidine, analogues ou fragments de celle-ci

Info

Publication number: FR2965357A1
Application number: FR1057690A
Authority: FR
Inventors: Caroline Delattre; Audrey Gueniche; Isabelle Castiel; Dominique Bernard
Original assignee: LOreal SA
Current assignee: LOreal SA
Priority date: 2010-09-24
Filing date: 2010-09-24
Publication date: 2012-03-30
Anticipated expiration: 2030-09-24
Also published as: FR2965357B1

Abstract

La présente invention a, notamment, pour objet l'utilisation d'une séquence d'acides aminés de la Dermcidine, d'un analogue ou d'un fragment de celle-ci, d'au moins une séquence d'acides nucléiques codant cette séquence, à titre de biomarqueur de la peau âgée et/ou des signes cutanées du vieillissement.

Description

La présente invention se rapporte au domaine des biomarqueurs de la peau, et plus particulièrement de la peau âgée, ainsi qu'à leur mise en oeuvre à titre de cibles ou d'agents actifs cosmétiques. L'épiderme, partie superficielle de la peau, est un tissu dont les cellules sont jointives et solidaires les unes des autres et reposent sur une membrane basale. Il forme un revêtement externe comprenant des glandes sébacées ou sudoripares et les follicules pileux. Plus précisément, l'épiderme est une structure dont l'homéostasie résulte de la mise en oeuvre d'un ensemble finement régulé de signaux intracellulaires et extracellulaires agissant à toutes les étapes de la prolifération, de la migration, de la différenciation cellulaire, ainsi que de la synthèse des différents composants de la matrice extracellulaire. Ces signaux peuvent, notamment, résulter de l'action de facteurs produits par les kératinocytes. L'épiderme est conventionnellement divisé en une couche basale de kératinocytes contenant, notamment, des cellules souches cutanées et constituant la couche germinative de l'épiderme, une couche dite épineuse constituée de plusieurs couches de cellules polyhédriques disposées sur la couche basale, une couche dite granuleuse comprenant une à trois couches dites de cellules aplaties contenant des inclusions cytoplasmiques distinctes, les grains de kératohyaline, et enfin, un ensemble de couches supérieures, appelé couche cornée, ou stratum corneum, constituée de kératinocytes au stade terminal de leur différenciation, appelés cornéocytes. Le stratum corneum, la partie la plus externe de la peau qui assure la fonction barrière entre l'organisme et l'environnement, et la tige pilaire, partie émergente du follicule pileux qui constitue la chevelure, représentent tous deux l'aboutissement du processus de différenciation des kératinocytes. La différenciation épidermique suit un processus de maturation dans lequel des kératinocytes de la couche basale se différencient et migrent pour aboutir à la formation des cornéocytes, cellules mortes totalement kératinisées. Cette différenciation est la résultante de phénomènes parfaitement coordonnés qui vont conduire au maintien de l'homéostasie de l'épiderme, et conférer à la peau un aspect sain, jeune, lumineux et lisse. Lors du vieillissement, de nombreuses altérations physiologiques de la peau, résultant d'un dysfonctionnement de l'homéostasie de l'épiderme, et notamment d'un dysfonctionnement de la différenciation épithéliale des kératinocytes et/ou de la synthèse des protéoglycanes, se produisent. Les altérations de l'homéostasie de l'épiderme se produisant lors du vieillissement se traduisent principalement par une diminution de la différenciation des kératinocytes entraînant un déficit de la matrice protéique des cellules cornées, par une augmentation des métalloprotéases, et de leur activité de dégradation de la matrice extracellulaire, ainsi que par une diminution de la synthèse des différents glycosaminoglycannes. Lors du vieillissement de la peau, ces altérations se traduisent, généralement, par l'apparition d'un microrelief de la peau plus marqué, voire de ridules, et au final la survenue de rides profondes, une perte de l'élasticité, un toucher rugueux, et une sécheresse cutanée. Sur le plan histologique, un aplatissement de la jonction dermoépidermique et une diminution de l'épaisseur du derme et de l'épiderme sont observés. Le contenu en collagène et en glycosaminoglycannes de la peau est également diminué et la fonction barrière de la peau âgée peut être altérée. De nombreux facteurs épidermiques, dont l'expression, l'activité biologique ou la maturation sont altérées, diminuées ou augmentées, sont connus pour être impliqués, directement ou indirectement, dans la survenue et la manifestation de la peau âgée ou des différents signes du vieillissement cutané associés.

Ces facteurs peuvent être utilisés à titre de bio-marqueurs de la peau, comme cibles de criblage, voire comme actifs cosmétiques. Toutefois, il demeure encore de nombreuses inconnues quant au mécanisme intime et quant à l'ensemble des facteurs impliqués dans le vieillissement de la peau. Ainsi, il demeure un besoin d'identifier de nouveaux biomarqueurs de la peau, et en particulier de la peau âgée ou des signes du vieillissement cutané. Il existe également un besoin de disposer de nouveaux biomarqueurs permettant de caractériser un état de la peau, et en particulier une peau âgée ou des signes du vieillissement cutané. Il existe encore un besoin de disposer de nouveaux outils de criblage d'agents 30 actifs ou de traitements physiques convenant au soin de la peau, et plus particulièrement utiles pour prévenir et/ou traiter la peau âgée ou les signes du vieillissement cutané.

Il existe encore un besoin de disposer de nouveaux actifs ou de nouveaux traitements pour la prévention et/ou le traitement de la peau âgée ou des signes du vieillissement cutané. Il existe encore un besoin de disposer de nouvelles cibles cosmétiques pour le soin de la peau, et en particulier pour la prévention et/ou le traitement de la peau âgée ou des signes du vieillissement cutané. La présente invention a pour objet de satisfaire à ces besoins. Ainsi, la présente invention concerne, selon un de ses premiers objets, l'utilisation (i) d'au moins une séquence d'acides aminés codés par une séquence d'acides nucléiques représentés par SEQ ID NO: 1, d'un analogue ou d'un fragment de ladite séquence d'acides aminés, ou (ii) de ladite séquence d'acides nucléiques, à titre de biomarqueur d'un état de la peau. De préférence, un biomarqueur de l'invention est un biomarqueur de la peau âgée et/ou des signes cutanés du vieillissement.

Au sens de l'invention, on entend par « biomarqueur », une molécule ou l'activité d'une molécule, dont la présence, la teneur ou le degré d'activité est caractéristique d'un processus biologique, physiologique ou pathologique, ou de l'impact ou de l'effet induit par l'administration d'un agent actif ou d'un traitement physique sur un tel processus.

Au sens de l'invention, on entend désigner par « peau » l'ensemble de l'épiderme du corps humain, y compris le cuir chevelu et les lèvres. Plus particulièrement, la peau considérée dans la présente invention est de préférence les lèvres, la peau du visage, du décolleté, des bras ou des jambes, et de manière préférée, la peau du visage et/ou du décolleté.

De manière inattendue, au cours d'une étude de protéomique différentielle par la technologie « iTRAQ », les inventeurs ont observé à partir de protéines extraites de strippings vernis de populations de classes d'âge différentes que la Dermcidine (ou DCD) se révélait être un biomarqueur sensible et spécifique de la peau âgée. Plus précisément, les inventeurs ont observé que le taux d'expression de la Dermcidine, et plus particulièrement de peptides issus de la Dermcidine et identifiés par les séquences SEQ ID NO: 17 et SEQ ID NO: 18 étaient systématiquement diminués dans les peaux âgées par rapport aux peaux jeunes.

A la connaissance des inventeurs, cette protéine antimicrobienne de la surface cutanée n'a jamais été classée comme variant au cours du vieillissement de la peau et encore moins comme l'un des biomarqueurs les plus pertinents ressortant de ce type d'études.

Il est connu que la sudation diminue avec l'âge (Anderson and Kenney 1987 ; Kenney and Fowler 1988) et que la Dermcidine est une protéine sudoripare (Schittek, Hipfel et al., 2001). En revanche, les données expérimentales obtenues par les inventeurs montrent de façon inattendue qu'il existe un déficit spécifique d'expression et/ou de maturation de la DCD au cours du vieillissement cutané, car celle-ci est sous-représentée dans les échantillons cutanés, même par rapport à d'autres protéines d'origine sudoripare. Selon encore un autre de ses objets, la présente invention concerne l'utilisation (i) d'au moins une séquence d'acides aminés de l'invention, ou (ii) d'une séquence d'acides nucléiques de l'invention, pour cribler des agents actifs ou des traitements physiques susceptibles de moduler l'activité, l'expression ou la maturation de ladite séquence d'acides aminés ou de ladite séquence d'acides nucléiques. Les agents actifs ou les traitements physiques criblés peuvent être plus particulièrement destinés à prévenir et/ou traiter la peau âgée et/ou les signes cutanés du vieillissement. Au sens de l'invention on entend par « expression » à l'égard d'une séquence d'acides aminés, par exemple une protéine ou un peptide, ou d'une séquence d'acides nucléiques, par exemple un ARNm, sa teneur ou la variation de sa teneur par rapport à une référence. Au sens de l'invention on entend par « maturation » à l'égard d'une séquence d'acides aminés, par exemple une protéine ou un peptide, ou d'une séquence d'acides nucléiques, par exemple un ARNm, les modifications qui suivent leur synthèse dans un environnement cellulaire. Par exemple, dans le cas d'une séquence d'acides aminés, on entend par « maturation », les modifications post-traductionnelles, telle la glycosylation ou la farnésylation de certains acides aminés, ou les étapes protéolytiques conduisant à l'élimination de séquences dites « signal » ou « sécrétoire » ou à la libération de séquences présentant des propriétés biologiques particulières. Dans le cas d'une séquence d'acides nucléiques, on entend par « maturation », par exemple, l' épissage alternatif d'un ARNm.

Au sens de l'invention on entend par « activité », à l'égard d'une séquence d'acides aminés, par exemple une protéine ou un peptide, l'activité biologique de la séquence d'acides aminés, le cas échéant après maturation, telle qu'une activité enzymatique, une activité d'agoniste ou d'antagoniste vis-à-vis d'un récepteur, ou d'activateur ou d'inhibiteur d'une enzyme, une activité dite de « structure », ou une activité antimicrobienne. Au sens de l'invention on entend par « activité », à l'égard d'une séquence d'acides nucléiques, par exemple un ARNm, sa traduction. Selon un autre de ses objets, la présente invention concerne l'utilisation (i) d'au moins une séquence d'acides aminés de l'invention, ou (ii) d'au moins une séquence d'acides nucléiques de l'invention, pour caractériser l'efficacité d'un traitement cosmétique de la peau. Selon un mode de réalisation préféré, un traitement cosmétique dont l'efficacité est caractérisée peut être un traitement de la peau âgée et/ou des signes cutanés du vieillissement. Selon encore un autre de ses objets, la présente invention concerne l'utilisation cosmétique d'une quantité efficace (i) d'au moins une séquence d'acides aminés de l'invention, ou (ii) d'au moins une séquence d'acides nucléiques de l'invention, ou (iii) d'au moins un agent modulateur de l'activité, de l'expression ou de la maturation de ladite séquence d'acides aminés ou de ladite séquence d'acides nucléiques, à titre d'agent actif pour prévenir et/ou traiter la peau âgée et/ou les signes cutanés du vieillissement. Au sens de la présente invention, on entend par « quantité efficace » d'un composé de l'invention, une quantité suffisante et nécessaire de ce composé pour obtenir un effet recherché, et plus particulièrement un effet cosmétique ou de soin à l'égard de la peau âgée et/ou des signes cutanés du vieillissement. Au sens de l'invention, on entend par « prévenir », le fait de réduire le risque de survenue ou de ralentir la survenue d'un phénomène donné, à savoir dans la présente invention, la peau âgée et/ou les signes du vieillissement cutané. Selon encore un autre de ses objets, la présente invention concerne l'utilisation d'une quantité efficace (i) d'au moins une séquence d'acides aminés de l'invention, ou (ii) d'au moins une séquence d'acides nucléiques de l'invention, ou (iii) d'au moins un agent modulateur de l'invention, pour préparer un modèle cellulaire épithéliale pluristratifié.

De manière préférée, un modèle cellulaire épithéliale pluristratifié, préparé selon l'invention, peut être un modèle de peau reconstruite. Selon encore un autre de ses objets, la présente invention concerne un procédé pour caractériser un état de la peau âgée et/ou des signes cutanés du vieillissement comprenant au moins les étapes consistant à : a) effectuer, dans un échantillon isolé d'une peau, une mesure qualitative ou quantitative de l'expression, de la maturation ou de l'activité de ladite séquence d'acides aminés ou de ladite séquence d'acides nucléiques, et b) comparer ladite mesure effectuée à l'étape a) à une mesure de référence.

Selon un mode de réalisation préféré, un état de la peau considéré dans l'invention est une peau âgée choisie parmi des peaux ayant subi un vieillissement chronologique et/ou un vieillissement photo-induit. Selon encore un autre de ses objets, la présente invention concerne un procédé de criblage d'agents actifs ou de traitements physiques susceptibles de moduler l'activité, l'expression ou la maturation d'une séquence d'acides aminés de l'invention ou d'une séquence d'acides nucléiques de l'invention, comprenant au moins les étapes consistant à : a) disposer ladite séquence d'acides aminés ou ladite séquence d'acides nucléiques dans des conditions propices à l'activité, l'expression ou la maturation desdites séquences, b) mettre en contact ladite séquence d'acides aminés ou ladite séquence d'acides nucléiques avec au moins un agent actif à tester, ou exposer ladite séquence d'acides aminés ou ladite séquence d'acides nucléiques avec un traitement physique à tester, c) effectuer une mesure qualitative ou quantitative de l'expression, de la 25 maturation ou de l'activité de ladite séquence d'acides aminés ou de ladite séquence d'acides nucléiques, et d) comparer ladite mesure à une mesure de référence. Selon un mode de réalisation préféré de l'invention, le ou les agents actifs ou le ou les traitements physiques criblés peuvent être plus particulièrement dédiés à prévenir 30 et/ou traiter la peau âgée et/ou les signes cutanés du vieillissement.

Selon un mode préféré de réalisation, un procédé ou une utilisation conforme à l'invention peuvent être mis en oeuvre in vivo, in vitro, ou ex vivo, et de manière plus préférée encore in vitro ou ex vivo. Selon encore un autre mode de réalisation, la présente invention concerne un 5 peptide isolé représenté par une séquence d'acides aminés choisie parmi SEQ ID NO: 17 ou SEQ ID NO: 18, un analogue ou un fragment de celle-ci. La présente invention a pour avantage de proposer un nouveau biomarqueur sensible et spécifique de la peau, et en particulier de la peau âgée ou des signes du vieillissement cutané. 10 L'observation de la présence de la Dermcidine dans le stratum corneum, et plus particulièrement de peptides issus spécifiquement de cette protéine, rend avantageusement possible une détermination quantitative ou qualitative de l'expression ou de l'activité de cette protéine, ou des peptides correspondant, par simple prélèvement topique. 15 La méthode de prélèvement peut par exemple être une technique de type stripping consistant à appliquer sur l'épiderme considéré une portion de ruban adhésif. En décollant ce ruban adhésif, une fraction de la surface de la peau est prélevée. Après extraction protéique, celle-ci peut être ensuite analysée par des méthodes conventionnelles, telles que le dosage immuno-enzymatique ELISA ou une analyse Western-Biot, ou plus 20 particulièrement par la méthode de protéomique différentielle iTRAQ telle que définie ci-après. Egalement, la présente invention a pour avantage de pouvoir mettre à disposition un nouveau biomarqueur convenant au criblage de nouveaux agents actifs ou de nouveaux traitements physiques convenant à la prévention et/ou au traitement de la 25 peau âgée et/ou des signes cutanés du vieillissement. Egalement, selon un autre avantage, la présente invention permet de proposer de nouveaux agents actifs convenant à la prévention et/ou au traitement des peaux âgées et/ou des signes cutanés du vieillissement.

30 Séquences d'acides aminés et d'acides nucléiques La Dermcidine ou Preproteolysin (DCD) est une protéine de 110 acides aminés (SEQ ID NO: 11) comportant un peptide signal de 19 acides aminés (SEQ ID NO: 14) dont le gène est localisé sur le chromosome 12, locus 12813.1. Deux isoformes de cette protéine sont recensées, l'une plus courte, isoforme 1 (SEQ ID NO: 12), l'autre plus longue, isoforme 2 (SEQ ID NO: 13). Elle est secrétée dans la sueur (Schittek, Hipfel et al. 2001). Après clivage du peptide signal, la Dermcidine (DCD) est une protéine de 90 acides aminés selon la séquence SEQ ID NO : 16. Après une maturation post-traductionnelle protéolytique, essentiellement par la Cathepsine D, qui a lieu dans la sueur (Baechle, Flad et al., 2006), ce précurseur protéique donne naissance à la DCD-1 (SEQ ID NO: 19) et à la DCD-1L (SEQ ID NO :20) ainsi qu'à de nombreux peptides dont la longueur varie de 25 à 48 aa (Flad, Bogumil et al., 2002). Sauf indication contraire, le terme « Dermcidine » vise à désigner dans la présente demande les séquences d'acides aminés représentées par SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 19 et SEQ ID NO: 20, ayant ou non subi une maturation post-traductionnelle.

Selon un mode de réalisation préféré, on entend désigner par Dermcidine plus particulièrement la séquence d'acides aminés représentée par SEQ ID NO: 16. Parmi les peptides issus de la maturation de la Dermcidine, comme décrit dans US 2008/020976, certains montrent des activités antimicrobiennes contre différents microorganismes, tel que Staphylococcus aureus, Escherichia coli, Enterococcus faecalis, ou Candida albicans. Les peptides antimicrobiens sont dérivés de la partie C-terminale de la protéine. La partie N-terminale de la protéine (SEQ ID NO: 15) est constituée d'un facteur biologiquement actif favorisant la survie cellulaire (Cunningham, Hodge et al. 1998).

Cette protéine est exprimée de façon constitutive dans la glande sudoripare (Rieg, Garb et al. 2004), et est impliquée dans les voies de signalisation de type PI3K/AKT/mTOR particulièrement importante dans les phénomènes de prolifération et de survie cellulaire (Moreira, Strauss et al. 2008). La diminution de la DCD observée dans la sueur des individus souffrant d'atopie pourrait expliquer en partie leur susceptibilité microbienne (Rieg, Steffen et al. 2005). Certains des fragments antimicrobiens ainsi que de la partie N-terminale sont capables de stimuler la production de cytokines/chemokines par des kératinocytes ou d'autres types cellulaires l'impliquant dans la régulation de l'immunité cutanée (Watchorn, Dowidar et al. 2005 ; Niyonsaba, Suzuki et al. 2009). Il a récemment été proposé l'utilisation de la DCD comme un marqueur spécifique particulièrement sensible de la présence de traces de sueur par RT-PCR ou par ELISA utilisable dans le domaine médico- légal (Sakurada, Akutsu et al. 2009).

Selon un mode de réalisation, une séquence d'acides aminés convenant à l'invention peut être codée par une séquence d'acides nucléiques représentées par SEQ ID NO: 1, ou être un analogue ou un fragment de cette séquence d'acides aminés.

Par « analogue d'une séquence d'acides aminés » conforme à l'invention, on entend désigner toute séquence d'acides aminés ayant une identité de séquence d'au moins 85 %, de préférence d'au moins 90 %, et plus préférentiellement d'au moins 95 % avec ladite séquence, et une activité biologique de même nature. Par « activité biologique de même nature » à l'égard d'une séquence d'acides aminés selon l'invention, on entend les propriétés antimicrobiennes ou de stimulation de la survie et/ou de la prolifération cellulaire habituellement attribuées à la Dermcidine. L'identité de séquence peut être déterminée par comparaison visuelle ou au moyen de tout outil informatique généralement utilisé dans le domaine, tel que les programmes BLAST disponibles sur www.ncbi.nlm.nih.gov et utilisés avec les paramètres configurés par défaut. Un analogue conforme à l'invention peut être un agent peptidomimétique. Un analogue d'une séquence d'acides aminés de l'invention peut résulter de modifications issues de mutation ou de variation dans les séquences des peptides selon l'invention provenant soit de la délétion ou de l'insertion d'un ou plusieurs acides aminés, soit de la substitution d'un ou plusieurs acides aminés, soit encore d'un épissage alternatif. Plusieurs de ces modifications peuvent être combinées. Avantageusement, un analogue d'une séquence d'acides aminés de l'invention peut comprendre des substitutions conservatrices par rapport à cette séquence d'acides aminés.

A titre d'exemple de mutations que l'on peut considérer dans la présente invention, il peut être mentionné, de manière non exhaustive, le remplacement d'un ou plusieurs résidus d'acides aminés par des résidus d'acides aminés ayant un indice hydropathique similaire sans pour autant affecter de manière sensible les propriétés biologiques du polypeptide. L'indice hydropathique est un indice attribué aux acides aminés en fonction de leur hydrophobicité et de leur charge (Kyte et al. (1982), J. Mol. Biol., 157 : 105).

Une séquence d'acides aminés ou un analogue de celle-ci visé par la présente invention peut être une séquence d'acides aminés ayant subi une ou plusieurs maturation(s) post-traductionnelle(s). Par « maturation(s) post-traductionnelle(s) », on entend englober l'ensemble des modifications qu'une séquence d'acides aminés est susceptible de subir à l'issue de sa synthèse dans une cellule, telle que par exemple une ou des phosphorylation(s), une ou des thiolation(s), une ou des acétylation(s), une ou des glycosylation(s), une ou des lipidation(s), telles qu'une farnésylation ou une palmitoylation, un réarrangement structural de type formation de ponts disulfures et/ou de type clivage à l'intérieur de la séquence peptidique.

Un analogue d'une séquence d'acides aminés présente, par ailleurs, sensiblement la même activité biologique que cette séquence d'acides aminés. Il est par ailleurs connu qu'une séquence primaire d'acides aminés, peut comprendre des sites spécifiquement reconnus par des enzymes de type protéase, telles que la trypsine, qui, une fois la reconnaissance de ces sites effective vont induire le clivage de la séquence par protéolyse. Cette protéolyse résulte en la génération de divers peptides, ou fragments de séquences d'acides aminés de l'invention. En conséquence, l'invention s'étend également aux fragments de la Dermcidine, issus le cas échéant de sa protéolyse. Au sens de l'invention, on entend par « fragment d'une séquence d'acides aminés » toute portion de la séquence d'acides aminés conforme à l'invention comprenant de 3 à 48 acides aminés consécutifs de ladite séquence, de préférence de 6 à 36, de préférence 8 à 32, et plus préférentiellement de 10 à 30 acides aminés consécutifs de ladite séquence, et a une activité biologique de même nature. Selon un mode de réalisation, une séquence d'acides aminés convenant à l'invention peut être une séquence d'acides aminés représentée par une séquence choisie parmi SEQ ID NO: 11 à 20, notamment parmi SEQ ID NO: 11, SEQ ID NO: 12, SEQ ID NO: 13, un analogue, ou un fragment de celle-ci.

Selon un mode de réalisation préférée, une séquence d'acides aminés convenant à l'invention peut être une séquence d'acides aminés représentée par une séquence choisie parmi SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO : 19, SEQ ID NO : 20, un analogue, ou un fragment de celle-ci. De manière préférée encore, une séquence d'acides aminés convenant à l'invention peut être une séquence d'acides aminés représentée par une séquence choisie parmi SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, ou SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO : 19 ou SEQ ID NO : 20, un analogue ou un fragment de celle-ci.

De préférence, une séquence d'acides aminés convenant à l'invention peut être une séquence d'acides aminés représentés par une séquence choisie parmi SEQ ID NO : 17, SEQ ID NO : 18, SEQ ID NO : 19 ou SEQ ID NO : 20, un analogue ou un fragment de celle-ci. De manière encore plus préférée, une séquence d'acides aminés convenant à l'invention peut être une séquence d'acides aminés représentée par une séquence choisie parmi SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, un analogue ou un fragment de celle-ci. Selon un autre mode de réalisation, un polypeptide convenant à l'invention peut également être une séquence d'acides aminés naturelle ou synthétique, le cas échéant susceptible d'être obtenue après lyse enzymatique ou chimique de la Dermcidine ou par synthèse chimique ou biologique ou par extraction à partir d'un tissu biologique, comme par exemple la peau, exprimant naturellement cette séquence d'acides aminés ou après transfection de celui-ci, ainsi que les différentes formes post-traductionnelles de celui-ci, ou encore toute séquence d'acides aminés naturelle ou synthétique dont la séquence comprend totalement ou partiellement une séquence d'acides aminés précitée, par exemple les variants et les analogues. L'homme de l'art peut obtenir une séquence d'acides aminés conforme à l'invention au moyen de procédés à base d'ADN recombinant, comme par exemple, ceux décrits dans le manuel « Molecular Cloning - A Laboratory Manual » (2éme édition), Sambrook et al., 1989, Vol. I-III, Coldspring Harbor Laboratory, Coldspring Harbor Press, NY, (Sambrook).

Selon un objet, la présente invention concerne en tant que tel un peptide isolé représenté par une séquence d'acides aminés choisie parmi SEQ ID NO: 17 ou SEQ ID NO: 18, un analogue ou un fragment de celle-ci. Selon un autre mode de réalisation, une séquence d'acides aminés convenant à l'invention peut également être une séquence d'acides aminés telle que définie précédemment, fusionnée avec une autre séquence d'acides aminés, un agent de ciblage hydrophile ou hydrophobe, un précurseur de bio-conversion, un agent de marquage luminescent, radioactif ou colorimétrique. De manière non limitative, on peut citer comme exemple de composés susceptibles d'être couplés à une séquence d'acides aminés conforme à l'invention des protéines fluorescentes comme la « Green Fluorescent Protein », des composés chimiques fluorescents, tels que la rhodamine, la fluorescéine, ou le Texas Red®, des composés phosphorescents, des éléments radioactifs, tels que 3H 14C 35S 1211 ou 125I, ou des agents de marquage colorimétrique comme les substrats chromogènes sensibles à l'action de la galactosidase, de la peroxydase, de la chloramphénicol acétyltransférase, de la luciférase ou de la phosphatase alcaline. Selon la nature des composés susceptibles d'être couplés avec une séquence d'acides aminés de l'invention, le couplage peut être opéré par des procédés chimiques, notamment au moyen de fonctions chimiques réactives ou par des procédés de biologie moléculaire connus de l'homme de l'art. Avantageusement, une séquence d'acides aminés de l'invention peut être codée par une séquence d'acides nucléiques choisie parmi une séquence représentée par SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO: 9, SEQ ID NO: 10, un analogue ou un fragment de celle-ci.

Selon un mode de réalisation, la présente invention concerne également des séquences d'acides nucléiques codant pour une séquence d'acides aminés de l'invention et leur mise en oeuvre dans les différentes utilisations et procédés conformes à l'invention.

Ainsi, la présente invention se rapporte également à une séquence d'acides nucléiques, notamment d'acides désoxyribonucléiques, ou d'acides ribonucléiques, représentée par SEQ ID NO: 1, un analogue ou un fragment de celle-ci.

Au sens de la présente invention, on entend par « fragment de séquence d'acides nucléiques », une séquence d'acides nucléiques comprenant de 9 à 144 paires de bases consécutives de ladite séquence, de préférence de 18 à 108, de préférence 24 à 96, et plus préférentiellement de 30 à 90 paires de bases consécutives de ladite séquence, et codant pour une séquence d'acides aminés ayant une activité biologique de même nature que la séquence d'acides aminés codée par ladite séquence. Au sens de la présente invention, on entend par « analogue d'une séquence d'acides nucléiques » une séquence d'acides nucléiques ayant une identité de séquence d'au moins 85 %, de préférence d'au moins 90 %, et plus préférentiellement d'au moins 95 % avec ladite séquence, et codant pour une séquence d'acides aminés ayant une activité biologique de même nature que la séquence d'acides aminés codée par ladite séquence. Par « analogue d'une séquence d'acides nucléiques », on entend désigner une séquence d'acides nucléiques, éventuellement résultant de la dégénérescence du code des acides nucléiques, et codant pour une séquence d'acides aminés conforme à l'invention, notamment tel que défini précédemment. Selon un mode de réalisation préféré, une séquence d'acides nucléiques de l'invention peut être représentée par une séquence choisie parmi SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO : 9 et SEQ ID NO : 10, un analogue ou un fragment de celle-ci. Une séquence d'acides nucléiques de l'invention peut être de toutes origines possibles, à savoir soit animale, en particulier de mammifères et encore plus particulièrement humaine, soit végétale, soit de micro-organismes, tels que par exemple virus, phages, ou bactéries entre autres, ou encore de champignons, sans préjuger du fait qu'elles soient présentes de manière naturelle ou non dans ledit organisme d'origine. Selon un mode de réalisation, l'invention se rapporte également aux séquences d'acides nucléiques isolées et purifiées codant pour une séquence d'acides aminés considérés selon l'invention, ainsi qu'à leurs analogues et fragments. Une séquence d'acides nucléiques conforme à l'invention peut comprendre une 30 séquence sens, anti-sens ou interférentielle correspondant à une séquence codant pour un polypeptide conforme à l'invention.

L'invention a également pour objet des séquences d'acides nucléiques, notamment d'acides ribonucléiques ou désoxyribonucléiques, comprenant une séquence sens ou anti-sens, notamment « small interferent RNA » (siRNA), correspondant au moins à une séquence codant pour un polypeptide de l'invention ou une séquence d'acides nucléiques représentée par SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO : 9, SEQ ID NO : 10, un analogue ou un fragment de celle-ci.

Peau âgée et signes cutanés du vieillissement Par « peau âgée », on entend un état général de la peau résultant du vieillissement chronologique et/ou du vieillissement photoinduit. Par « signes cutanés du vieillissement », on entend toutes les modifications de l'aspect extérieur de la peau dues au vieillissement qu'il soit d'origine chronologique et/ou photo-induit.

A titre d'exemple de ces modifications considérées dans l'invention, on peut citer les rides et ridules, la peau flétrie, le manque d'élasticité et/ou de tonus de la peau, l'amincissement du derme et/ou la dégradation des fibres de collagène, ce qui entraîne l'apparence de peau molle et ridée. On entend également toutes les modifications internes de la peau qui ne se traduisent pas systématiquement par un aspect extérieur modifié, comme par exemple toutes les dégradations internes de la peau, et plus particulièrement la dégradation des fibres d'élastine, ou fibres élastiques, consécutives à une exposition aux rayonnements ultra-violets. En particulier, les signes cutanés du vieillissement visés par l'invention sont choisis parmi un amincissement de la peau, une perte de fermeté, une perte d'élasticité, une perte de densité, ou une perte de tonicité de la peau, une sécheresse de la peau, l'apparition d'un microrelief de la peau marqué, la formation et/ou la présence de ridules et/ou de rides, une altération de l'éclat du teint de la peau, un aspect papyracé de la peau, une altération de l'odeur de la peau, un affaissement de la peau, et un flétrissement de la peau.

De manière préférée, les signes cutanés du vieillissement visés par l'invention sont choisis parmi un amincissement de la peau, l'apparition d'un microrelief de la peau marqué, la formation et/ou la présence de ridules et/ou de rides, un affaissement de la peau, et un flétrissement de la peau. De manière préférée encore, les signes cutanés du vieillissement visés par l'invention sont choisis parmi l'apparition d'un microrelief de la peau marqué, la formation et/ou la présence de ridules et/ou de rides, un affaissement de la peau, et un flétrissement de la peau.

Biomarqueur La présente invention concerne l'utilisation d'au moins une séquence d'acides 10 aminés de l'invention, ou d'au moins une séquence d'acides nucléiques de l'invention, à titre de biomarqueur d'un état de la peau. De manière préférée, une utilisation conforme à l'invention permet de caractériser un état de la peau tel que la peau âgée et/ou les signes cutanés du vieillissement. 15 Selon un mode de réalisation, une diminution de l'activité, de l'expression ou de la maturation dudit biomarqueur peut être indicative d'une peau âgée et/ou de signes cutanés du vieillissement. La présente invention concerne, selon un autre de ses aspects, l'utilisation d'au moins une séquence d'acides aminés de l'invention, ou d'au moins une séquence d'acides 20 nucléiques de l'invention, pour caractériser l'efficacité d'un traitement cosmétique de la peau, et de préférence de la peau âgée et/ou des signes cutanés du vieillissement. Selon un mode de réalisation, une augmentation de l'activité, de l'expression ou de la maturation dudit biomarqueur peut être indicative d'un traitement cosmétique efficace pour exercer un effet bénéfique sur la peau et plus préférentiellement un effet à 25 l'égard de la peau âgée et/ou de signes cutanés du vieillissement. Dans une utilisation conforme à l'invention, une diminution ou une augmentation de l'activité, de l'expression ou de la maturation dudit biomarqueur peut être déterminée par comparaison à une mesure de référence obtenue selon toute méthode connue de l'homme de l'art. 30 Une « mesure de référence » au regard d'un paramètre donné, est une mesure qualitative ou quantitative de ce paramètre effectuée dans des conditions dites « contrôles » ou « normales », par exemple déterminée dans un échantillon de référence, ou déterminée dans un échantillon en l'absence d'un traitement présumé avoir un effet sur le paramètre. Par exemple, une mesure de référence pour une séquence d'acides aminés ou une séquence d'acides nucléiques conforme à l'invention peut être une valeur quantitative ou qualitative relative à l'expression, la maturation ou l'activité desdites séquences déterminée dans un échantillon de peau jeune et physiologiquement saine, ou déterminée dans un échantillon de peau, notamment de peau âgée, avant un traitement cosmétique. De préférence, une mesure de référence est une mesure statistique, c'est à dire ayant été répétée sur différents échantillons de sorte à obtenir une moyenne.

La mesure de référence peut être effectuée parallèlement ou séquentiellement à la mesure test. Elle peut également être une mesure « historique », c'est-à-dire effectuée antérieurement à la mesure test, et stockée, par exemple dans une base de données, en vue d'une utilisation ultérieure.

Une comparaison de la mesure test à une mesure de référence, et une observation d'une déviation ou d'une absence de déviation entre les deux mesures, permet de tirer une information quant au paramètre mesuré, par exemple la diminution ou l'augmentation l'expression, de la maturation ou de l'activité d'une séquence d'acides aminés ou d'une séquence d'acides nucléiques conformes à l'invention.

Une telle information peut être ultérieurement mise en oeuvre pour déterminer le caractère jeune ou âgée d'une peau. Un procédé selon l'invention peut également être effectué sur un échantillon de peau, prélevé à partir d'un modèle cellulaire épidermique, ou d'une peau isolée reconstruite afin d'en qualifier l'état.

Selon un mode de réalisation, l'invention concerne un procédé, en particulier in vitro ou ex vivo, pour caractériser un état de la peau. Un procédé de l'invention permet avantageusement de caractériser un état âgé de la peau et/ou des signes du vieillissement cutané, et plus particulièrement de caractériser 30 un état âgé de la peau d'origine chronologique et/ou photo-induit. Selon un autre mode de réalisation, l'invention concerne un procédé cosmétique, ou non thérapeutique, en particulier in vitro ou ex vivo, pour caractériser l'efficacité d'un traitement cosmétique de la peau, et de préférence de la peau âgée et/ou des signes cutanés du vieillissement, chez un individu en ayant besoin, comprenant au moins les étapes consistant à : a) effectuer, avant la mise en oeuvre du traitement cosmétique, dans un premier échantillon de peau isolé prélevé chez ledit individu, au moins une première mesure qualitative ou quantitative de l'expression, de la maturation ou de l'activité d'au moins une séquence d'acides aminés de l'invention ou d'au moins une séquence d'acides nucléiques de l'invention, b) effectuer, après la mise en oeuvre du traitement cosmétique, dans un second échantillon de peau isolé prélevé chez ledit individu, au moins une seconde mesure, qualitative ou quantitative de l'expression, de la maturation ou de l'activité de ladite séquence d'acides aminés de l'invention ou de ladite séquence d'acides nucléiques de l'invention, et c) comparer les première et deuxième mesures, notamment afin d'en déduire 15 une information relative à un effet au moins de la mise en oeuvre du traitement cosmétique. Il va de soit que les mesures effectuées aux étapes a) et b) doivent être comparables l'une à l'autre, et donc être relatives au même paramètre. De manière préférée, un procédé de l'invention permet de mettre en évidence un effet d'un traitement cosmétique susceptible de faire régresser la peau âgée et/ou les 20 signes cutanés du vieillissement.

La mesure qualitative ou quantitative de l'expression, de la maturation ou de l'activité d'une séquence d'acides nucléiques de l'invention peut être déterminée par toute méthode connue de l'homme de l'art. 25 A titre d'exemple de méthodes convenant à l'invention, il peut être fait mention de la réaction de polymérisation en chaîne (PCR), quantitative (Q-PCR) ou non, en présence ou non de transcriptase inverse (RT-PCR ou Q-RT-PCR), du Northern-blot, de la méthode « ribonuclease protection assay », des méthodes avec des puces à ADN, des méthodes avec des puces transcriptomiques, des méthodes avec des puces à 30 oligonucléotides, des méthodes d'hybridation in situ. A titre d'exemple d'agents convenant à la détection d'une séquence d'acides nucléiques de l'invention, et en particulier d'une séquence d'ARNm, il peut être fait mention de sondes d'acides nucléiques marquées pouvant s'hybrider à une séquence d'acides nucléiques de l'invention. Une telle sonde d'acide nucléique peut être aisément obtenue par toute méthode connue de l'homme de l'art.

Ainsi, les séquences d'acides nucléiques conformes à l'invention peuvent être utilisées pour réaliser des amorces oligonucléotidiques sens et/ou anti-sens, qui s'hybrident dans des conditions de forte stringence à au moins une des séquences SEQ ID NO: 1, SEQ ID NO: 2, SEQ ID NO: 3, SEQ ID NO: 4, SEQ ID NO: 5, SEQ ID NO: 6, SEQ ID NO: 7, SEQ ID NO: 8, SEQ ID NO : 9, SEQ ID NO : 10, un analogue ou un fragment celle-ci. L'expression d'une séquence d'acide nucléique peut également être déterminée, de manière indirecte, par la détermination de l'expression de la séquence d'acides aminées codée par ladite séquence, au moyen de toute technique connue dans le domaine, telle que le Western-Biot, l'ELISA, la méthode de BRADFORD ou de LOWRY, ou comme indiqué ci-après. La mesure qualitative ou quantitative, de l'expression, de la maturation, ou de l'activité d'une séquence d'acides aminés de l'invention peut être effectuée au moyen de toute méthode connue de l'homme de l'art. A titre de méthodes de détection de l'expression, de la maturation, ou de l'activité d'une séquence d'acides aminés, il peut être fait mention du Western-blot, du Slot-blot, du Dot-blot, des méthodes ELISA (Enzyme Linked Immuno-Sorbent Assay) de type singleplex ou multiplex, des méthodes de protéomique ou de glycomique, de coloration de polypeptides dans un gel de polyacrylamide par un colorant à base d'Argent, par le bleu de Coomassie ou par le SYPRO, de l'immunofluorescence, de l'absorption UV, de méthodes immunohistochimiques en microscopie classique, électronique ou confocale, de FRET (fluorescence resonance energy transfer/transfert d'énergie par résonance de fluorescence), des méthodes de TR-FRET (time resolved FRET/FRET en résolution de temps), des méthodes de FLIM (fluorescence lifetime imaging microscopy/imagerie par microscopie en temps de fluorescence), des méthodes de FSPIM (fluorescence spectral imaging microscopy/imagerie par microscopie en spectre de fluorescence), des méthodes de FRAP (fluorescence recovery alter photobleaching/recouvrement de fluorescence après photoblanchiment), des méthodes par gène rapporteur, des méthodes d'AFM (atomic force microscopy/microscopie par force atomique), des méthodes de résonance plasmonique de surface, des méthodes de microcalorimétrie, des méthodes de cytométrie en flux, des méthodes de biosenseurs, des méthodes de radioimmuno-essais (RIA), des méthodes de focalisation isoélectrique, et des tests enzymatiques, des méthodes mettant en oeuvre des puces à peptides, des puces à sucre, des puces d'anticorps, des méthodes de spectrométrie de masse, des méthodes de spectrométrie de type SELDI-TOF (Ciphergen). De façon plus générale, des méthodes de dosage immunoenzymatiques à partir de solutions de protéines, plus quantitatives et sensibles peuvent en particulier être utilisées. Ces méthodes de type ELISA associent des couples d'anticorps de capture et de détection spécifique de l'antigène ciblé. Des anticorps commerciaux ou des anticorps polyclonaux, monoclonaux ou recombinants développés spécifiquement peuvent être utilisés. Des techniques ELISA multiplexes de grande capacité peuvent également être mises en oeuvre. On peut ainsi citer l'approche multiplexe de type anticorps sur billes Luminex (par exemple Bioplex de Bio-Rad), de type anticorps sur surface plane (« antibodies-arrays ») (par exemple approche proposée par la société MesoScale Discovery). En particulier, il peut être avantageux de détecter l'expression d'une séquence d'acides aminés de l'invention au moyen d'un anticorps, le cas échéant sous une forme marquée. Un tel anticorps peut être marqué au moyen d'une substance détectable directement ou détectable par réaction avec un autre réactif. Par « anticorps », on entend désigner de manière générale des anticorps monoclonaux ou polyclonaux, ainsi que des fragments d'immunoglobuline susceptibles de lier un antigène et qui peuvent être produits par toute technique de génie génétique connue de l'homme de l'art ou par coupure enzymatique ou chimique d'anticorps intact.

Un anticorps susceptible d'être utilisé à titre d'outil d'évaluation d'un état d'un épiderme peut être obtenu par tout procédé connu de l'homme de l'art, tel que décrit dans « Antibodies: A Laboratory Manual », Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (1990). Selon un mode de réalisation préféré, il peut être avantageux de détecter 30 l'expression d'une séquence d'acides aminés de l'invention au moyen d'une méthode protéomique différentiel « iTRAQ ».

Une telle méthode est connue de l'homme de l'art et peut avantageusement être mise en oeuvre comme décrit dans les exemples ci-après. De manière particulière, par « activité » à l'égard d'une séquence d'acides aminés de l'invention on entend une activité antimicrobienne, une activité de stimulation de la survie cellulaire, une activité de stimulation de la prolifération cellulaire, ou une activité de réduction ou de prévention de la peau âgée et/ou des signes cutanés du vieillissement, comme indiqué ci-dessus. Une telle activité peut être déterminée par toute méthode connue de l'homme de l'art, comme par exemple, par évaluation de la prolifération ou de la survie de cellules épidermiques en cultures, telles que des kératinocytes, ou par évaluation de l'activité antimicrobienne sur des bactéries en culture, telles que Staphylococcus aureus ou Escherichia coli. De manière préférée, la détermination d'un état de la peau ou la caractérisation de l'efficacité d'un traitement cosmétique de la peau peuvent être effectuées par mesure de la variation de l'expression d'une séquence d'acides aminées de l'invention, et de préférence représentée par une séquence choisie parmi SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ ID NO : 19 ou SEQ ID NO : 20, un analogue ou un fragment de celle-ci.

Les procédés de l'invention sont particulièrement avantageux dans la mesure où leur mise en oeuvre ne nécessite pas de recourir à une technique invasive. Un échantillon d'épiderme peut ainsi être obtenu par des techniques dites de « stripping » et directement analysé par une technique d'analyse conventionnelle connue de l'homme de l'art.

Ces strippings sont des surfaces collantes appliquées à la surface de l'épiderme comme le Blenderm de 3M, le D'squam (adhésif commercial de CuDERM), la colle cyanoacrylate ou la méthode du « stripping » vernis. Grâce à ces « strippings », les cornéocytes adhérents et le contenu de leurs espaces intercellulaires peuvent être prélevés et soumis par la suite à une extraction permettant d'avoir accès au contenu protéique.

Le prélèvement d'un échantillon convenant à un procédé de l'invention peut aussi être effectué de façon plus directe par « lavages » de la surface cutanée, au moyen par exemple d'accessoires de type turbine à ailette, de type cellule à spirale telle que décrit dans le brevet FR 2 667 778 associée à un circuit fluidique, ou simplement par ajout/prélèvement d'une goutte de tampon à la surface de la peau. A titre indicatif, d'autres méthodes de prélèvement adaptées à la mise en oeuvre de l'invention peuvent être mentionnées, telles que des méthodes par grattage de la partie supérieure du stratum corneum au moyen d'un système bilames. Cette technique permet de recueillir des squames qui peuvent ensuite être directement analysés par différentes techniques pour déterminer les taux en minéraux, aminoacides ou lipides. Avantageusement, un des marqueurs de l'invention peut être mise en oeuvre à des fins de sélection préclinique, plus efficace et plus rigoureuse, d'individus, en vue d'évaluer l'efficacité de traitement ou d'actif cosmétique pour le soin de la peau. Egalement, un biomarqueur de l'invention peut avantageusement être mis en oeuvre comme indiqué précédemment pour évaluer l'efficacité d'un agent actif, in vitro, ex vivo ou in vivo. Egalement, un biomarqueur de l'invention peut être mis en oeuvre pour établir 15 un conseil personnalisé d'un traitement cosmétique pour un individu en fonction de son profil d'expression de biomarqueurs cutanés.

Criblage Selon un de ses aspects, la présente invention concerne l'utilisation d'une 20 séquence d'acides aminés, d'acides nucléiques de l'invention, pour cribler ou dans un procédé de criblage, en particulier in vitro ou ex vivo, d'agents actifs ou de traitements physiques, convenant particulièrement au soin de la peau. Les agents actifs ou les traitements physiques criblés peuvent notamment convenir au soin de la peau âgée, et/ou à la prévention et/ou au traitement des signes 25 cutanés du vieillissement. Une utilisation ou un procédé de l'invention peuvent comprendre la comparaison d'une mesure de l'activité, de l'expression ou de la maturation d'une séquence d'acide aminés ou d'une séquence d'acides nucléiques conforme à l'invention à une mesure de référence. 30 Une mesure de référence peut être telle que définie précédemment.

En particulier une mesure de référence peut être une valeur quantitative ou qualitative relative à l'expression, la maturation ou l'activité desdites séquences déterminée dans un échantillon en l'absence d'agent actif ou de traitement physique testé. Ainsi, une mesure de référence peut être obtenue en réitérant les étapes d'un procédé de l'invention, et notamment les étapes a), b) et c) d'un procédé de l'invention tel que défini précédemment, en l'absence de composés biologiques ou chimiques, ou de traitements physiques à tester. Une comparaison de la mesure test à une mesure de référence, et une observation d'une déviation ou d'une absence de déviation entre les deux mesures, permet de tirer une information quant à l'effet de l'agent actif ou du traitement physique testé. La détermination quantitative ou qualitative de l'expression, de la maturation ou de l'activité d'une séquence d'acides aminés ou d'une séquence d'acides nucléiques de l'invention peut être effectuée par toute méthode connue de l'homme de l'art, et notamment comme décrit précédemment.

Selon un mode de réalisation, le criblage d'un agent actif ou d'un traitement physique susceptible de moduler l'activité d'une séquence d'acides aminées de l'invention peut se faire par mesure de l'activité ou de l'expression d'une molécule cible appartenant aux voies de signalisation ou de métabolisme dans lesquelles peut être impliqué ladite d'une séquence d'acides aminées, tel que par exemple un système de gène reporteur. Selon un mode de réalisation, un procédé de l'invention peut être mis en oeuvre dans un système acellulaire, i.e. dans un système ne comprenant pas de cellules mais reproduisant des fonctions cellulaires, ou dans un échantillon cellulaire isolé. Un procédé conforme à l'invention peut être effectué sur un échantillon cellulaire isolé, un échantillon acellulaire, sur une séquence d'acides aminés isolée ou sur une séquence d'acides nucléiques isolée de l'invention, obtenus par biopsie cutanée, à partir de cellules en culture, notamment à partir d'un modèle épidermique, ou d'un prélèvement de surface cutané non-invasif, notamment par adhésif (« tape-stripping ») de stratum corneum ou par simple lavage, comme décrit précédemment.

Avantageusement, à titre d'échantillon cellulaire convenant à l'invention, on peut mentionner un échantillon de kératinocytes ou tout autre type cellulaire de la peau exprimant une séquence d'acides aminés de l'invention.

De manière préférée, le criblage d'un agent actif ou d'un traitement physique peut être effectuée par mesure de la variation de l'expression, en présence et en absence de l'agent actif ou du traitement physique criblé, d'une séquence d'acides aminées de l'invention, et de préférence représentée par une séquence choisie parmi SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, ou SEQ ID NO: 18, un analogue ou un fragment de celle-ci.

Agent modulateur Au sens de la présente invention, on entend par « agent modulateur » ou « agent actif ou un traitement physique susceptible de moduler l'expression, la maturation ou l'activité d'une séquence d'acides aminées ou d'une séquence d'acides nucléiques conformes à l'invention», tout composé ou phénomène physique susceptible d'agir, directement ou indirectement, sur au moins une séquence d'acides aminées ou une séquence d'acides nucléiques conformes à l'invention, ou sur un élément d'une voie de signalisation intra ou extra-cellulaire, ou d'une voie métabolique, ou de régulation de la transcription et/ou de la traduction impliquant ladite séquence d'acides aminées ou ladite séquence d'acides nucléiques. Au sens de l'invention, on entend par « moduler », au regard d'un effet donné, l'action de stimuler ou d'inhiber cet effet. Les agents actifs ou les traitements physiques issus d'un criblage selon 20 l'invention peuvent être avantageusement utilisés à des fins cosmétiques, notamment au regard de la peau âgée ou des signes cutanés du vieillissement.

Selon un mode de réalisation, un agent actif de à l'invention peut être un agent stimulateur de l'activité, de l'expression ou de la maturation d'une séquence d'acides 25 aminées de l'invention. En particulier, un agent stimulateur peut être choisi parmi choisi parmi un lysat de Bifidobacterium sp. et un mélange composé d'un lysat de Bifidobacterium sp. et de phytosphingosine-salicylate. De manière préféré un lysat de Bifidobacterium sp. peut être un lysat de 30 Bifidobacterium longum. Un lysat de Bifidobacterium longum convenant à l'invention peut être le lysat enregistré sous le nom INCI : Bifidat ferment Lysate, sous le nom EINECS : Bifidobacterium longum, sous le N° EINECS : N° 306-168-4, et sous le N° CAS : N° 96507-89-0. Un tel lysat est notamment commercialisé sous la dénomination Repair Complex CLR® par la société K. RICHTER GmbH. Un mélange composé d'un lysat de Bifidobacterium sp. et de phytosphingosine-salicylate selon l'invention peut comprendre un lysat de Bifidobacterium longum tel que défini précédemment et un dérivé de phytosphingosine-salicylate. Un dérivé de phytosphingosine-salicylate convenant à l'invention peut être le dérivé commercialisé par la société EVONICK GOLDSCHMIDT sous la dénomination Phytosphingosine SLC®. Un mélange selon l'invention peut comprendre un lysat de Bifidobacterium sp. à raison de 10 % et un dérivé de phytosphingosine-salicylate à raison de 0,002 %. A titre d'agent modulateur susceptible d'être criblé selon une utilisation ou un procédé conforme à l'invention, on peut également mentionner les anticorps, ou les ARN interférents.

Compositions La présente invention concerne également des compositions, notamment cosmétiques, comprenant dans un milieu physiologiquement ou cosmétiquement acceptable une quantité efficace d'au moins une séquence d'acides aminés de l'invention, ou d'au moins une séquence d'acides nucléiques de l'invention, ou d'au moins un agent actif apte à moduler l'activité, l'expression ou la maturation de ladite séquence d'acides aminés ou de ladite séquence d'acides nucléiques. Plus particulièrement, l'invention concerne une composition cosmétique comprenant un peptide représenté par une séquence d'acides aminés choisie parmi SEQ ID NO: 17 ou SEQ ID NO: 18, un analogue ou un fragment de celle-ci ou une séquence d'acides nucléiques codant pour un tel peptide. Au sens de la présente invention, on entend désigner par « milieu physiologiquement acceptable », un milieu convenant à l'administration d'une composition par voie topique sur la peau, le cuir chevelu, ou les lèvres, ou par voie orale ou par voie parentérale telle que la voie intradermique ou sous-cutanée.

Une composition de l'invention peut contenir des adjuvants habituels dans le domaine considéré, tels que des gélifiants hydrophiles ou lipophiles, des additifs hydrophiles ou lipophiles, des conservateurs, des antioxydants, des solvants, des parfums, des charges, des filtres, des absorbeurs d'odeurs et des matières colorantes. Les quantités des différents constituants des compositions selon l'invention sont celles classiquement utilisées dans les domaines considérés.

La quantité de séquence d'acides aminés, ou de séquence d'acides nucléiques de l'invention, ou d'agent actif conformes à l'invention contenue dans une composition de l'invention, encore dite « quantité efficace » est, bien entendu, fonction de la nature de l'actif et de l'effet recherché et peut donc varier dans une large mesure. Pour donner un ordre de grandeur, une composition peut contenir une séquence d'acides aminés, ou une séquence d'acides nucléiques, ou un agent actif conformes à l'invention en une quantité représentant de 0,00001 % à 50 % du poids total de la composition, en particulier en une quantité représentant de 0,001 % à 10 % du poids total de la composition, et plus particulièrement en une quantité représentant de 0,1 % à 1 % du poids total de la composition.

Selon un autre mode de réalisation, une composition cosmétique de l'invention peut comprendre, en outre, au moins un agent actif cosmétique et/ou thérapeutique additionnel.

Actifs additionnels Comme exemples d'agents actifs additionnels utilisables dans le cadre de la présente invention, il peut être fait mention d'huiles cosmétiques, telles que les huiles de silicone, les huiles végétales de type triglycérides, les huiles hydrocarbonées telles que l'huile de PARLEAM et les esters d'acides gras et d'alcool gras. Il peut également être possible d'utiliser d'autres agents actifs permettant d'améliorer l'état de la peau et/ou de ses annexes, tels que des actifs hydratants ou humidifiants ou des agents actifs permettant d'améliorer la barrière lipidique naturelle, tels que des céramides, des sulfates de cholestérol et/ou des acides gras, et leurs mélanges. Il peut également être possible d'utiliser des enzymes ayant une activité sur la peau et/ou de ses annexes, telles que des protéases, des lipases, des glucosidases, des amidases, des cérébrosidases et/ou des mélanases, et leurs mélanges. Comme autres exemples d'agents actifs convenant à la mise en oeuvre de la présente invention figurent : des actifs analgésiques, des actifs anti-levures, des actifs antibactériens, des actifs antiparasitaires, des actifs antifongiques, des actifs antiviraux, des actifs anti-inflammatoires stéroïdiens, des actifs anesthésiques, des actifs antiprurigineux, des actifs kératolytiques, des actifs anti-radicaux libres, des actifs anti-séborrhéiques, des actifs antipelliculaires, des actifs anti-acnéiques, des actifs visant à prévenir le vieillissement de la peau et/ou à améliorer son état, des actifs anti-dermatites, des actifs anti-irritants, des actifs immuno-modulateurs, des actifs pour le traitement de la peau sèche, des actifs anti-transpirants, des actifs anti-psoriatiques, des actifs protecteurs contre les UV, des actifs antihistaminiques, des actifs cicatrisants, des actifs auto-bronzants, des antioxydants tels que le thé vert ou des fractions actives de celui-ci, la glycérine, la laponite, la caféine, des huiles essentielles aromatiques, des colorants, des actifs dépigmentants, des lipo-régulateurs, des actifs adoucissants, rafraîchissants, déodorants, insensibilisants, blanchissants, nourrissants, des actifs diminuant la différenciation et/ou la prolifération et/ou la pigmentation cutanée, et leurs mélanges. A titre d'actifs additionnels susceptibles de convenir plus particulièrement à l'invention, on peut mentionner également des microorganismes probiotiques, autres que ceux considérés dans le lysat précédemment décrit, des actifs prébiotiques, des actifs favorisant la synthèse de facteur de défense de la peau, des actifs permettant de rétablir l'équilibre différentiation/prolifération des cellules de l'épiderme, en particulier tels que des actifs de type retinol ou retinol-like, des actifs hydratants ou des actifs stimulant l'activité de protéase cutanée, notamment de la Cathépsine D.

Utilisation cosmétique La présente invention concerne l'utilisation cosmétique d'une quantité efficace d'au moins une séquence d'acides aminés ou d'acides nucléiques de l'invention ou d'au moins un agent modulateur de l'activité, de l'expression ou de la maturation de ladite séquence d'acides aminés ou de ladite séquence d'acides nucléiques, et notamment un agent modulateur tel que défini précédemment, à titre d'agent actif pour prévenir et/ou traiter la peau âgée et/ou les signes cutanés du vieillissement. Selon un autre aspect, la présente invention concerne un procédé cosmétique, ou non thérapeutique, pour prévenir et/ou traiter une peau âgée et/ou des signes cutanés du vieillissement chez un individu en ayant besoin, le procédé comprenant au moins une étape consistant à administrer audit individu, au moins une composition comprenant à titre d'agent actif (i) au moins une séquence d'acides aminés de l'invention ou (ii) au moins une séquence d'acides nucléiques de l'invention, ou (iii) au moins un agent modulateur de l'activité, de l'expression ou de la maturation desdites séquences de l'invention, notamment tels que définis ci-avant.

Un procédé ou une utilisation de l'invention permettent de prévenir et/ou traiter le vieillissement cutané, notamment chronologique et/ou photo-induit. Un procédé ou une utilisation de l'invention permettent de conférer et/ou de restaurer un aspect jeune à la peau, se manifestant par une peau lisse, élastique, tonique, ou ferme, ou un teint lumineux.

Un procédé ou une utilisation de l'invention permettent de prévenir et/ou réduire la présence d'un microrelief marqué de la peau, en particulier au niveau de la commissure des lèvres et des pattes d'oies. Un procédé ou une utilisation de l'invention permettent de renforcer les propriétés barrières de la peau.

De manière préférée, un procédé de l'invention peut comprendre l'application par voie topique sur au moins une partie de la peau d'un individu en ayant besoin, en particulier sur la peau du visage et/ou du décolleté, d'au moins une couche d'une composition topique de l'invention. Avantageusement, un procédé de l'invention par voie topique peut comprendre 20 l'application sur la peau, et notamment sur la peau du visage, d'une composition de l'invention sous forme d'un masque. Un procédé cosmétique par voie topique selon l'invention peut avantageusement comprendre l'application d'une composition de l'invention, en association de manière simultanée, successive ou séparée dans le temps avec une 25 composition cosmétique ou dermatologique additionnelle distincte de la composition de l'invention et destinée au soin et/ou au maquillage de la peau. Selon un autre mode de réalisation préféré, un procédé cosmétique de l'invention peut être mis en oeuvre par voie orale, notamment par administration d'au moins une composition alimentaire ou diététique à visée cosmétique. 30 Selon un autre mode de réalisation préféré, un procédé cosmétique de l'invention peut être mis en oeuvre par voie parentérale. La mise en oeuvre par voie parentérale d'un procédé cosmétique de l'invention est effectuée à l'exclusion de toute intervention chirurgicale et ne vise qu'à exercer un traitement de surface de la peau à des fins esthétiques. Ainsi, un procédé cosmétique de l'invention par voie parentérale est mis en oeuvre par toute technique d'injection ou dispositif convenant à une injection intraépidermique et/ou intradermique et/ou sous-cutanée. Une telle administration peut être effectuée, par exemple, par mésothérapie. Un procédé cosmétique par voie parentérale ne se traduit donc que par une effraction superficielle de la peau et sort donc de tout cadre médical ou thérapeutique.

Pour la voie parentérale, on pourra alternativement privilégier l'administration par patch à visée systémique. Un procédé cosmétique selon l'invention peut être mis en oeuvre de façon journalière, par exemple à raison d'une administration unique par jour, ou d'une administration fractionnée en deux ou trois fois par jour, par exemple une fois le matin et une fois le soir. Un procédé cosmétique selon l'invention peut être mis en oeuvre sur une période de temps variant d'une semaine à plusieurs semaines, voire plusieurs mois, cette période pouvant par ailleurs être répétée après des périodes de non traitement pendant plusieurs mois, voire plusieurs années.

A titre d'exemple, de procédé cosmétique selon l'invention on peut prévoir une administration d'une composition de l'invention, par exemple, à raison de 1, 2 ou 3 fois par jour, ou plus, et généralement sur une durée prolongé d'au moins 4 semaines, voire 4 à 15 semaines, avec le cas échéant une ou plusieurs périodes d'interruption.

Peau reconstruite Selon un autre aspect, la présente invention concerne l'utilisation d'une quantité efficace d'au moins une séquence d'acides aminés de l'invention, ou d'au moins une séquence d'acides nucléiques de l'invention, ou d'au moins un agent modulateur de l'invention pour préparer un modèle cellulaire épithélial pluristratifié, de préférence un modèle de peau reconstruite.

L'intérêt de développer des modèles organotypiques les plus proches de conditions in-vivo est grand pour l'évaluation sécurité et efficacité des actifs et formules à applications cosmétiques et dermatologiques. L'utilisation d'au moins une séquence d'acides aminés de l'invention, ou d'au moins une séquence d'acides nucléiques de l'invention, ou d'au moins un agent modulateur de l'invention dans un milieu de culture est susceptible d'améliorer la qualité des modèles développés. Selon un autre aspect, la présente invention concerne un procédé de préparation d'un modèle cellulaire épithélial pluristratifié isolé, et de préférence une peau reconstruite isolée comprenant, au moins l'étape de mettre en contact au moins une quantité efficace d'au moins une séquence d'acides aminés, ou d'au moins une séquence d'acides nucléiques, ou d'au moins un agent modulateur conformes à l'invention avec des cellules susceptibles de générer une peau reconstruite isolée, et notamment des kératinocytes. Un modèle de peau reconstruite peut comprendre différents types cellulaires, tels des kératinocytes, des fibroblastes, des cellules de Langerhans et des mélanocytes. Les cellules de type fibroblastes peuvent être irradiées ou non. De tels modèles et leur préparation sont connus de l'homme de l'art.

Selon encore un autre aspect, la présente invention concerne également un procédé de préparation d'un modèle cellulaire épithélial pluristratifié, de préférence un modèle de peau reconstruite, comprenant au moins une étape de mise en culture de cellules d'au moins un type cellulaire dudit modèle, lesdites cellules ayant été génétiquement modifiées pour supprimer l'expression d'une séquence d'acides aminés ou d'une séquence d'acide nucléiques de l'invention.

L'obtention de cellules génétiquement modifiées pour supprimer l'expression d'une séquence d'acides aminés ou d'une séquence d'acide nucléiques de l'invention, cellules dites « knock-out », peut être réalisée par toute méthode connue de l'homme de l'art. A titre d'exemple, de telles cellules peuvent être obtenues par transfection et recombinaison homologue d'un fragment d'acide nucléique venant s'insérer dans ou prendre la place du gène exprimant la séquence d'acides aminés dont l'expression est à supprimer.

Egalement, il peut être possible de supprimer l'expression d'un gène donné par transfection dans la cellule d'une séquence d'acide nucléique codant pour un ARN interférant spécifique de l'ARNm issu du gène dont l'expression est à supprimer.

Au sens de la présente invention, « un » doit se comprendre, sauf indication contraire, au sens de « au moins un ». Les exemples et figures ci-après sont présentés à titre illustratif et non limitatif de l'invention.

EXEMPLES

Exemple 1 Expression de la Dermcidine dans la peau 1- Matériels et méthodes a- Protocole iTRAQ La détection de l'expression de la Dermcidine (DCD) a été réalisée au moyen de la méthode iTRAQ (Isobaric Tagging Reagents for Quantitative Proteomic Analysis) développée par la société Applied Biosystems. Cette méthode permet la quantification de peptides préalablement marqués par un Tag isobarique. Il existe 4 tags différents et on peut comparer jusqu'à 4 types d'échantillons distincts dans une même analyse LC/MS-MS.

Le principe de cette méthode est le suivant : - Digestion d'extraits protéiques et marquage : Dans un premier temps, chaque extrait protéique est digéré par une enzyme protéolytique : la trypsine. Dans un second temps, chaque mélange peptidique obtenu est marqué avec un Tag isobarique d'une masse totale 145, comprenant un groupe « reporter » de masse 114, 115, 116 ou 117, et un groupe « balance » de masse 31, 30, 29 ou 28, liés entre eux par un 30 site de fragmentation MS. Le marquage est obtenu par réaction du Peptide Reactive Group de chaque tag avec les amines primaires des peptides (extrémité N-terminale des peptides ou la chaîne latérale des lysines ou des tyrosines. - Analyse LC/MS-MS et quantification : Après l'étape de marquage, les échantillons sont mis en commun et analysés par spectrométrie de masse. Un peptide donné, présent dans plusieurs échantillons, aura une masse parente identique mais son spectre de fragmentation MS/MS va générer la masse du groupe rapporteur caractéristique de chacun des réactifs iTRAQ. La comparaison de l'intensité de chaque ion rapporteur (114, 115, 116 ou 117) permet alors la quantification du peptide. La méthode iTRAQ est plus précisément décrite par Zieske (J. Exp. Bot., 2006, 57 :1501) ou Wiese et al. (Proteomics, 2007, 7 :340). b- Prélèvement et traitement des échantillons cutanés Des prélèvements de type stripping-vernis de stratum corneum d'une surface de 90 cm', sont obtenus selon le protocole décrit par Mehul et al., J. Biol. Chem., 2000, 275(17):12841-7, au niveau de la face externe de la jambe. Deux groupes de sujets sont prélevés : 1) Groupe « Peau Jeune » : 18-40 ans, 27 sujets masculins ; 2) Groupe « Peau Agée » : supérieur à 60 ans, 35 sujets masculins. Ces prélèvements de peau sont ensuite analysés par protéomique au moyen de la technique dite de « marquage isobarique », précédemment décrite, en utilisant le kit iTRAQ Reagents Multiplex kit (4352135), d'Applied Biosystems, conformément aux instructions du fabricant.

2- Résultats Parmi les protéines identifiées, les peptides représentés par les séquences 25 SEQ ID NO: 17 et SEQ ID NO: 18 issus de la Dermcidine (N° accession P81605 - Réf.: Swissprot/Uniprot) sont détectés et quantifiés dans quatre expériences. Les résultats de quantification de la Dermcidine sont donnés dans le tableau suivant : Protéine Expérience N° Ratio 116/114 âgé / jeune 1 2 3 4 Moyenne Ecart-type Dermcidine 0,3937 0,2465 0,4356 0,4209 0,37 0,09 Ces résultats montrent que le ratio iTRAQ moyen âgé/jeune est égal à 0,37 ± 0,09. Cette mesure traduit une forte expression de la Dermcidine dans les peaux du groupe « Peau jeune », et une forte diminution de son expression dans les peaux du groupe « Peau âgée ». La Dermcidine se révèle donc être un biomarqueur intéressant et spécifique de la peau, et plus particulièrement d'un état âgé de la peau.

L'expression de l'Apolipoprotéine D et de la chaîne lourde de la Cathepsine D a été mesurée à titre de données comparatives. Les résultats obtenus sont exprimés dans le tableau suivant. Protéine Expérience N° Ratio 116/114 âgé / jeune 1 2 3 4 Moyenne Ecart-type Apolipoprotéine D 0,7975 0,7455 0,8205 0,9062 0,82 0,07 Chaîne lourde de 0,9580 1,1068 0,9595 0,9537 0,99 0,07 la Cathepsine D En comparaison de la Dermcidine, l'Apolipoprotéine D et la chaîne lourde de la Cathépsine D ne sont que très légèrement sous-exprimées dans le groupe « Peau âgée » par rapport au groupe « Peau jeune ». Cette étude valide ainsi l'utilisation de la Dermcidine à titre de biomarqueur d'exception de la peau, et plus particulièrement de la peau âgée.20 Exemple 2 Effet d'un lysat de Bifidobacterium sp. sur l'expression de la Dermcidine

1- Matériels et méthodes Les prélèvements d'échantillons de peaux, et les mesures de l'expression de la Dermcidine sont réalisés comme indiqué à l'exemple 1. Les volontaires sont des sujets féminins âgés de 30 à 65 ans. Ils ont été combinés et répartis en deux sous-groupes selon le traitement administré, un groupe « Placebo », et un groupe « Traité ».

Le groupe « Traité » reçoit par voie topique, sur la jambe, à raison de 2 fois par jour, matin et soir, pendant 56 jours, soit 2 mois, une composition comprenant 10 % de Repair Complexe dans une formule support correspondant à une émulsion huile dans eau déminéralisée Arlacel/Myrj contenant 5 % de Parleam, 15 % de cyclopentasiloxane, 3 % de glycérine et 2 % de vaseline.

Le Repair Complexe comprend un lysat de Bifidobacterium longum enregistré sous le nom INCI : Bifida ferment Lysate, sous le nom EINECS : Bifidobacterium longum, sous le N° EINECS : N° 306-168-4, et sous le N° CAS : N° 96507-89-0. Ce lysat est commercialisé sous la dénomination Repair Complex CLR® par la société K. RICHTER GmbH.

Le groupe « Placebo » reçoit en revanche uniquement la formule support.

Pour chaque condition sujets « Traité » et « Placebo », une moyenne des ratios J56/JO est obtenue, permettant ainsi d'évaluer l'effet du traitement. Les ratios J56/JO sont calculés selon la formule suivante : % effet du traitement = 100 * Ratio J56/JO « Traité » - Ratio J56/JO « Placebo » ratio J56/JO «Placebo »25 2- Résultats Les données brutes obtenues à l'issue de l'analyse sont les suivantes : Expérience 1 Ratio J56/JO Ratio J56/JO Traité Placebo 2,70 3,10 Expérience 2 Ratio J56/JO Ratio Placebo J56/JO Traité 1,00 1,62 La valeur moyenne du ratio J56/JO «Placebo » est de 1,85, alors que la valeur 5 moyenne du ratio J56/JO « Traité » est de 2,36. Le traitement par le Repair Complex® se traduit par une augmentation du signal de 27 % par rapport au placebo. Ainsi l'administration, par voie topique, d'un lysat de Bifidobacterium longum accroît l'expression de la Dermcidine d'environ 30 % après 2 mois de traitement. 10 L'administration, par voie topique, d'un lysat de Bifidobacterium sp. permet donc de restaurer un niveau d'expression de la Dermcidine au niveau de la peau, et notamment de la peau âgée, propice à renforcer son action de protection de la peau, à renforcer les propriétés barrières de la peau, et à réduire les signes cutanés du vieillissement. 15 Cette étude valide en outre l'utilisation de la Dermcidine à titre de biomarqueur pour évaluer l'efficacité d'un traitement cosmétique de la peau âgée, ainsi qu'à titre d'outil de criblage de nouveaux agents actifs destinés au traitement de la peau âgée.

Exemple 3 20 Effet d'un mélange lysat de Bifidobacterium longum et de phytosphingosine salicylate sur l'expression de la Dermcidine

1- Matériels et méthodes

25 Les prélèvements d'échantillons de peaux, et les mesures de l'expression de la Dermcidine sont réalisés comme indiqué à l'exemple 1.

Les volontaires sont des sujets féminins âgés de 40 à 45 ans. Chaque sujet est son propre témoin, les deux bras sont prélevés mais un seul est traité avec le produit testé et le second bras reçoit un placebo. Le bras « Traité » reçoit par voie topique, à raison de 2 fois par jour, matin et soir, pendant 56 jours, soit 2 mois, une composition comprenant 10 % de Repair Complexe et 0,002 % de Phytosphingosine-SLC dans une formule support correspondant à une émulsion huile dans eau déminéralisée Arlacel/Myrj contenant 5 % de Parleam, 15 % de cyclopentasiloxane, 3 % de glycérine et 2 % de vaseline. Le Repair Complexe comprend un Bifidobacterium longum enregistré sous le nom INCI : Bifida ferment Lysate, sous le nom EINECS : Bifidobacterium longum, sous le N° EINECS : N° 306-168-4, et sous le N° CAS : N° 96507-89-0. Ce lysat est commercialisé sous la dénomination Repair Complex CLR® par la société K. RICHTER GmbH. Le dérivé phytosphingosine-salicylate est celui commercialisé par la société 15 EVONICK GOLDSCHMIDT sous la dénomination Phytosphingosine SLC®. Le bras « Placebo » reçoit uniquement la formule support. Pour chaque condition « Traité » et « Placebo », une moyenne des ratios J56/JO est obtenue comme indiqué précédemment, permettant ainsi d'évaluer l'effet du traitement.

20 2- Résultats Les données brutes obtenues à l'issue de l'expérience sont les suivantes : Expérience n 1 Ratio J56/JO Ratio J56/JO Placebo Traité 0.75 1.66 Expérience n°2 Ratio J56/JO Ratio J56/JO Placebo Traité 0.45 0.81 La valeur moyenne du ratio J56/JO « Placebo » est de 0,6, alors que la valeur moyenne du ratio J56/JO « Traité » est de 1,235. 25 L'effet traitement est égal à 105%, et traduit un doublement de l'expression de la Dermcidine par rapport au « Placebo ».

Ainsi l'administration, par voie topique, d'un mélange comprenant un lysat de Bifidobacterium longum et de la phytosphingosine-salicylate accroît l'expression de la Dermcidine de plus de 100 %. L'administration, par voie topique, d'un mélange comprenant un lysat de Bifidobacterium longum et de la phytosphingosine-salicylate permet donc de restaurer un niveau d'expression de la Dermcidine au niveau de la peau, et notamment de la peau âgée, propice à renforcer son action de protection de la peau, à renforcer les propriétés barrières de la peau, et à réduire les signes cutanés du vieillissement.

BIBLIOGRAPHIE

Anderson, R. K. and W. L. Kenney (1987). « Effect of age on heat-activated sweat gland density and flow during exercise in dry heat» J. Appl. Physiol. 63(3): 1089- 1094. Baechle, D., T. Flad, et al. (2006). « Cathepsin D is present in human eccrine sweat and involved in the postsecretory processing of the antimicrobial peptide DCD-1L » J. Biol. Chem. 281(9):5406-5415. Cunningham, T. J., L. Hodge et al. (1998) « Identification of a survival-10 promoting peptide in medium conditioned by oxidatively stressed cell lines of nervous system origin » J. Neurosci 18(18):7047-7060. Flad, T., R. Bogumil et al. (2002) « Detection of dermcidin-derived peptides in sweat by ProteinChip Technology. » J. Immunol. Methods 270(1): 53-62. Kenney, W. L. and S. R. Fowler (1988) « Methylcholine-activated eccrine 15 sweat gland density and output as a function of age » J. Appl. Physiol. 65(3):1082-1086. Kyte et al., (1982), J. Mol. Biol., 157: 105. Mehul B. et al., (2000) « Identification and Cloning of a New Calmodulin-like Protein from Human Epidermis » J. Biol. Chem. 275(17):12841-12847 Moreira, D. F, B. E. Strauss et al. (2008) « Genes up- and down-regulated by 20 dermcidin in breast cancer: a microarray analysis » Genet. Mol. Res. 7(3): 925-932. Niyonsaba, F. A. Suzuki et al. (2009) « The human antimicrobial peptide dermcidin activates normal human keratinocytes » Br. J. Dermatol. 160(2): 243-249. Rieg, S.C., Garbe et al. (2004) « Dermcidin is constitutively produced by eccrine sweat gland and is not induced in epidermal cells under inflammatory skin 25 conditions » Br. J. Dermatol. 151(3): 534-539. Rieg S., II Steffen et al. (2005) « Deficiency of dermcidin-derived antimicrobial peptides in sweat of patients with atopic dermatitis correlates with an impaired innate defense of human skin in vivo » J. Immunol. 174(12):8003-8010. Sakurada K., T. Akutsu, et al., (2009) « Detection of dermcidin for sweat 30 identification by real-time RT-PCR and ELISA» Forensic. Sci. Int. 2010 Jan. 30;194(1-3):80-4. Epub 2009 Nov. 13.

Sambrook et al., 1989, Vol. I-III, Coldspring Harbor Laboratory, Coldspring Harbor Press, NY. Schittek, B, R. Hipfel et al. (2001) : « Dermcidin: a novel human antibiotic peptide secreted by sweat glands » Nat. Immunol. 2(12): 1133-11137.

Watchorn, T. M. N. Dowidar et al. (2005) « The chachectic mediator proteolysis inducing factor activates NF-kappaB and STAT3 in human Kupffer cells and monocytes » Int. J. Oncol. 27(4): 1105-1111. Wiese et al., (2007) « Protein labeling by iTRAQ: A new tool for quantitative mass spectrometry in proteome research » Proteomics 7(3):340-350 Zieske et al. (2006) « A perspective on the use of iTRAQ reagent technology for protein complex and profiling studies » J. Exp. Bot. 57(7):1051-1058.

Claims

REVENDICATIONS1. Utilisation (i) d'au moins une séquence d'acides REVENDICATIONS1. Utilisation (i) d'au moins une séquence d'acides aminés codée par une séquence d'acides nucléiques représentée par SEQ ID NO: 1, d'un analogue ou d'un fragment de ladite séquence d'acides aminés, ou (ü) de ladite séquence d'acides nucléiques, à titre de biomarqueur d'un état de la peau âgée et/ou des signes cutanés du vieillissement.
2. Utilisation selon la revendication précédente, dans laquelle ladite séquence d'acides nucléiques est représentée par une séquence choisie parmi SEQ ID NO: 2 à SEQ 10 ID NO: 10, un analogue ou un fragment de celle-ci.
3. Utilisation selon la revendication 1 ou 2, dans laquelle ladite séquence d'acides aminés est représentée par une séquence choisie parmi SEQ ID NO: 11 à SEQ ID NO: 20, un analogue ou un fragment de celles-ci, et de préférence est choisie parmi SEQ ID NO: 16, SEQ ID NO: 17, SEQ ID NO: 18, SEQ iD Nb : 19, SEQ ID NO : 20, un analogue ou un fragment de celle-ci.
4. Utilisation selon l'une quelconque des revendications précédentes, dans laquelle une diminution de l'activité, de l'expression ou de la maturation dudit biomarqueur est indicative d'une peau âgée et/ou de signes cutanés du vieillissement.
5. Utilisation (i) d'au moins une séquence d'acides aminés telle que définie 20 en revendications 1 à 3, ou (ii) d'au moins une séquence d'acides nucléiques telle que définie-en revendications 1 ou 2, pour cribler des agents actifs ou des traitements physiques susceptibles de moduler l'activité, l'expression ou la maturation de ladite séquence d'acides aminés ou de ladite séquence d'acides nucléiques.
6. Utilisation (i) d'au moins une séquence d'acides aminés telle que définie 25 en revendications l à 3, ou (ii) d'au moins une séquence d'acides nucléiques telle que définie en revendications 1 ou 2, pour caractériser l'efficacité d'un traitement cosmétique de la peau.
7. Utilisation selon la revendication précédente, dans laquelle le traitement cosmétique est un traitement cosmétique de la peau âgée et/ou des signes cutanés du 30 vieillissement.
8. Utilisation cosmétique d'une quantité efficace (i) d'au moins une séquence d'acides aminés telle que définie en revendications 1 à 3, ou (ii) d'au moins une séquence 39d'acides nucléiques telle que définie en revendications 1 ou 2, ou (iii) d'au moins un agent modulateur de l'activité, de l'expression ou de la maturation de ladite séquence d'acides aminés ou de ladite séquence d'acides nucléiques, à titre d'agent actif pour prévenir et/ou traiter la peau âgée et/ou les signes cutanées du vieillissement.
9. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 4 et 7 et 8, dans laquelle les signes cutanés du vieillissement sont choisis panai un amincissement de la peau, une perte de fermeté, une perte d'élasticité, une perte de densité, ou une perte de tonicité de la peau, une sécheresse de la peau, l'apparition d'un microrelief de la peau marqué, la formation et/ou la présence de ridules et/ou de rides, une altération de l'éclat du teint de la peau, un aspect papyracé de la peau, une altération de l'odeur de la peau, un affaissement de la peau, et un flétrissement de la peau.
10. Utilisation d'une quantité efficace (i) d'au moins une séquence d'acides aminés telle que définie en revendications 1 à 3., ou (ii) d'au moins une séquence d'acides nucléiques telle que définie en revendications 1 ou 2, ou d'au moins un agent modulateur tel que défini en revendication 8 pour préparer un modèle cellulaire épithélial pluristratifié, de préférence un modèle de peau reconstruite.
11. Procédé in vitro ou ex vivo pour caractériser un état de la peau âgée et/ou les signes cutanées du vieillissement comprenant au moins les étapes consistant à : a) effectuer, dans un échantillon isolé d'une peau, une mesure qualitative ou quantitative de l'expression, de la maturation ou de l'activité de ladite séquence d'acides aminés telle que définie en revendications 1 à 3 ou de ladite séquence d'acides nucléiques telle que définie en revendications 1 ou 2, et b) comparer ladite mesure effectuée à l'étape a) à une mesure de référence.
12. Utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 4 et 7 à 9, ou procédé selon la revendication 11, dans laquelle ou lequel la peau âgée est choisie parmi des peaux ayant subi un vieillissement chronologique et/ou un vieillissement photo-induit.
13. Procédé de criblage in vitro ou ex vivo d'agents actifs ou de traitements physiques susceptibles de moduler l'activité, l'expression ou la maturation d'une séquence d'acides aminés telle que définie en revendications 1 à 3, ou d'une séquence d'acides nucléiques telle que définie en revendications 1 ou 2, comprenant au moins les étapes consistant à :a) disposer ladite séquence d'acides aminés ou ladite séquence d'acides nucléiques dans des conditions propices à l'activité, l'expression ou la maturation desdites séquences, b) mettre en contact ladite séquence d'acides âminés ou ladite séquence d'acides nucléiques avec au moins un agent actif à tester, ou exposer ladite séquence d'acides aminés ou ladite séquence d'acides nucléiques avec un traitement physique à tester, c) effectuer une mesure qualitative ou quantitative de l'expression, de la maturation ou de l'activité de ladite séquence d'acides aminés ou de ladite séquence 10 d'acides nucléiques, et d) comparer ladite mesure à une mesure de référence.
14. Procédé cosmétique pour prévenir et/ou traiter une peau âgée et/ou des signes cutanés du vieillissement chez un individu en ayant besoin, comprenant au moins une étape consistant à administrer audit individu, au moins une composition comprenant à 15 titre d'agent actif (i) au moins une séquence d'acides aminés telle que définie eri revendications 1 à 3, ou (ii) au moins une séquence d'acides nucléiques telle que définie en revendications 1 ou 2, ou (iii) au. oins un agent modulateur de l'activité, de l'expression ou de la maturation desdites séquences.
15. Procédé cosmétique, in vitro ou ex vivo, pour caractériser l'efficacité d'un 20 traitement cosmétique de la peau chez un individu en ayant besoin, comprenant au moins les étapes consistant à : a) effectuer, avant la anise en oeuvre du traitement cosmétique, dams un premier échantillon de peau isolé prélevé chez ledit individu, au moins une première mesure qualitative ou quantitative de l'expression, de la maturation ou de l'activité d'au moins une 25 séquence d'acides aminés telle que définie en revendications 1 à 3, ou d'au moins une séquence d'acides nucléiques telle que définie en revendications 1 ou 2, b) effectuer, après la mise en oeuvre dû traitement cosmétique, dans un second échantillon de peau isolé prélevé chez ledit individu, au moins une seconde mesure, qualitative ou quantitative de l'expression, de la maturation ou de l'activité de ladite 30 séquence d'acides aminés ou de ladite séquence d'acides nucléiques, et c) comparer les première et deuxième mesures, notamment afin d'en déduire une information relative à uti effet au moins de la mise en oeuvre du traitement cosmétique.
16. Peptide isolé représenté par une séquence d'acides aminés choisie parmi SEQ ID N0: 17 ou SEQ ID NO: 18, Im analogue ou un fragment de celle-ci.
17. Composition cosmétique comprenant un peptide tel que défini en revendication 16 ou une séquence d'acides nucléiques codant pour un tel peptide.