FR3087657A1 - Compositions cosmetiques ou nutraceutiques, contenant un extrait de primeveres - Google Patents

Abstract

L'invention concerne la production et les applications cosmétiques et nutraceutiques d'un extrait de primevère comme agent permettant de diminuer le taux de cortisol pour améliorer la souplesse de la peau et lutter contre le vieillissement.

Description

La présente invention concerne l'utilisation Cextraits d'une plante très répandue, notamment en Europe, dans des compositions cosmétiques ou nutraceutiques.

Plus précisément, elle se rapporte à de nouveaux extraits et de nouvelles applie Mons des primevères pour diminuer le taux de cortisol et ainsi diminuer le stress ; composante délétère pour les organes tel que la peau, les cheveux.

On entend par primevère, toutes les espèces du genre Primula, comme par exemple Prirnula yetis, Prirreula vulgaris, Prie-nul° sikkineensis...

En Frante, l'espère la plus fréquente de Primuia est la primevère officinale connue sous le nom de *.g coucoo ». primevère esi connue pour ses propriétés adoucissantes et calmantes des fleurs.

Les feulles sont anti-ecchymotlques.

Toute la plante et particulièrement la racine ont des propriétés analgésiques, anti-spasmodiques, diurétiques, pectorales et expectorantes.

Les fleurs et les feuilles sont corrstibles.

La littérature scientifique mentionne la présence de diverses familles phytochimiques, en particulier les flavonoïdes glycosylés (Planta Med. 1981 an;41(1):96-9).

Des saponosides y ont égaiement été décrits.

Il a été démontré que le cortisol est l'hormone du stress chronique et que sont taux croit avec le niveau de stress.

Par ailleurs, le taux de cortisol ,.7u;gmente avec l'âge et chez la femme au cours de la ménopause (Menopause.

2009 Jul-Aug.,16(4):701-18).

Il a également un impact sur la chute des cheveux.

Le cortisol est délétère pour la masse musculaire chez l'homme.

Le cortisol peut impacter le taux de testostérone (Int J Sports Med.

1996 Aug:17(6):423-8).

Un taux élevé de cortisol serait en relation avec une diminution du taux de testostérone.

Il a été démontré que chez l'homme de 60 ans et plus, un traitement chronique avec des glucocorticoides entraîne une diminution du taux de testostérone.

Le taux de cortisol réduit l'épaisseur de la peau, diminue la synthèse de collagène et la matrice extracellulaire en général.

Il entraîne ainsi un retard de cicatrisation.

En complément de ces éléments, il a été identifié une enzyme, la 11-Beta-HydroxySteroidDeshydrogenase de type 1 (11BFISD1) qui catalyse la biosynthèse du cortisol.

Cette protéine est présente dans la peau au niveau des kératinocytes et des fibroblastes (i Invest Dermatol.

2011 Jan;131(1):30-6.

Epub 2010 Aug 26), L'enzyme augmente avec l'âge et avec la photo-exposition a: augmente ainsi le taux de cor tisol.

Le cortisol entraîne un retard de cicatrisation des plaies.

Par la simulation de synthèse des enzymes de dégradation de la matrice extracellulaire telles que les rnétalloprotéinases et l'inhibition des gènes codants pour les collagènes, l'hypercortisolisme chronique a également un effet de dégraditon jx derme, caractérisé par une diminution des propriétés nnecaniques de la peau (diminution de l'épaisseur du tissu conjonctif sous-jacent) (PLoS One, 2011;6(9):e25039, Epub 2011 Sep 20).

La présente invention décrit de nouveaux extraits de primevère ainsi que leurs applications pour diminuer le taux de cortisol et exercer un rtle antistre_ss sur les organes de l'animal traité, en particulier, de la peau et des cheveux chez l'homme Ces extraits de primevère jouent donc un rôle favorable dans des composaions cosmétiques ou nutraceutiques anti-âge.

Selon l'invention, on a découvert que les extraits de primevère sont capables d'inhiber les enzymes impliquées dans la synthèse du cortisol, comme le HSD1 mentionné précédemment.

Bloquer la biosynthèse du cortisol revient à réduire sa teneur dans les cellules et limiter so action délétère sur les tissus.

Cette action se manifeste sur la peau par l'augmentation de blomargueurs clés, comme le collagène, l'acide hyaluronique ou encore l'élastine.

La présente invention vise précisément à offrir de nouvelles compositions cosmétiques cui nutraceutiques capables de limiter la production de cortisol.

L'invention concerne donc une composition cc smétique nutraceutique de 31:inée à diminuer le taux de cortisol d'un animal vivant, caractérisée ce qu'elle contient au moins un agent actif renfermant au moins un extrait de plante du genre itimulo.

Dans un mode de réi lisation, l'extrait de plante est choisi dans le groupe formé par les exl -aits Prirnula yetis, Primula Prienula sikkirreensis et leurs mélanges.

La composition selor l'invention peut comporter 0,01 Vèrsion . .1)-23/10/18 2 2,5% en poids sec, d'au moins un extrait de plante du genre Prirnula sous forme de poudre ou de 0,01 25%,en poids, d'un extrait de plante. du genre Primula si cet extrait est sous forme encapsulée. composition selon l'invention peut, lorsqu'elle est destinée à une application topique, constituer une crème, une huile ou une solutiom l'extrait de plante du genre Priroula étant mélangé à des 5 ingrécyents connus en cosmétique pour obtenir la présentation souhaitée pour l'utilisation envisagée.

On entend par « extrait de primevère », un extrait ou un mélange d'extraits de plante du genre Primula sp de la famille des Primulacées. s'agit plus spécialement d'un extrait ou d'un mélange d'extraits de cellules de Prirmeia sp.

Ce matériel cellulaire peut être obtenu par culture in vitro ou in vivo.

Par culture in vitro, on entend l'ensemble des techniques connues de l'homme du IO métier, qui permettent de manière artificielle, l'obtention d'un végétal ou d'une partie de végétal.

Ainsi, l'extrait peut être un extrait ou un mélange d'extraits d'organe (racine, tige, feuille), voire de cellule.s d'organe, d'eu moins une plante du genre Primuia sp de la famille des Primulacées, ou encore un extrait de cellules indifférenciées d'au moins une telle plante.

Les applications selon rfrivention s'étendent au traitement de la peau humaine.

La 15 présente invention a donc pour objet une utilisation cosmétique d'un extrait de primevère pour améliorer l'état de la peau ou des cheveux par administration topique ou orale, pour diminuer la teneur en cortisol.

Elle a aussi pour objet un traitement cosmétique de lutte contre le vieillissement d'une peau ou de traitement cosmétique d'une m peau jeune ou âgée, ce traitement comprenant auoins.une étape selon laquelle on applique au oins un extrait de primevère sur la peau, pour lui 20 redonoer so m uplesse et/ou élasticité, [invention a donc pour objet une utilisation cosmétique, caractérisée en ce qu'on améliore (état de la peau ou des cheveux par administration topique ou orale d'une composition selon l'invention telle que. précédemment définie.

Dans cette utilisation, on protège ou renforce la fonction barrière de la peau contre un agent extérieur physique, chimique ou biologique par une 25 administration topique ou orale.

L'invention porte aussi sur un traitement cosmétique anti-âge de la peau ou un traitement cosmétique d'une peau âgée, comprenant une étape selon laquelle on applique au moins un extrait de primevère sur la peau.

Ce traitement permet de retarder les phénomènes de vieillissement de la peau, mais aussi de réparer une peau âgée en lui redonnant souplesse et 30 élasticité.

Dans toute application cosmétique de l'invention, un extrait de primevère peut être associé. à au moins un autre agent prcdifférenciant de la peau, comme le calcium, la vitamine D et leurs dérivés ou au moins un autre agent anti-âge ou depigmentant complémentaire connu de l'homme de métier.

35 Selon un autre aspect, l'invention concerne aussi les applications nutraceutiques d'un extrait de primevère, tel que ci-dessus défini.

Un objets selon l'invention est donc une composition nutraceutique comprenant un extrait de primevère, pour diminuer la teneur en cortisol afin de lutter contre le stress.

Dans la visée nutraceutique l'invention, l'extrait de primevère peut être administré par voie orale.

40 Dans une composition de l'invention, l'extrait de primevère peut aussi être associé à au moins7.un agent anti-inflammatoire, antj-àge utilise dans le traitement de rinflammation cutanée.

Un extrait de primevère selon l'invention peut être obtenu par toute méthode d'extraction ou de purification connue de l'homme du métier.

On peut en particulier, citer les procédés d'extraction solide-liquide en milieux alcooliques (notamment éthanoliques), aqueux, ainsi 45 qu'en milieux utilisant des solvants telSque les cétones, les esters, les éthers, les polyols, les solvants chlorés:et les mélanges d'au moins deux des solvants précités, comme les milieux hydroalcooliques.

L'invention a donc aussi pour objet un procédé d'obtention d' (ou des) extrait(s) de plante de la composition selon l'invention, caractérisé en ce que l'on effectue une extraction solide/liquide de la plante, éventuelleMent broyée, dans un milieu solvant comportant au moins un 50 solvant pris dans le groupe formé par l'eau, les alcools, les cétones, les éthers, les polyols, les solvants vérsibn ree-23.10/18 3 chlorés et le CO, supercritique.

Dans un tel procédé, l'extrait peut être réalisé dans un mélange eau/glycérine dans une proportion allant de 10% à 90% d'eau .en volume, pendant un temps compris entre 1 et 4 heures sous faible agitation, à température ambiante.

Avantageusement, l'extraction solide/liquide est effectuée sur les parties aériennes de la plarte du genre Primai°.

5 Des méthodes alternatives aux solvants peuvent aussi être envisagées comme le CO., supercritique ou les micro-ondes.

Les extraits de plante du genre Primula peuvent être utilisés tels quels, sous forme liquide ou en poudre, non purifiés ou purifiés.

Si l'extrait est en poudre, son séchage peut être conduit par toute technique bien 10 connue de l'homme du métier.

L'extrait peut être sécaé par atomisation, évaporation ou lyophilisation.

La poudre ainsi obtenue peut être encapsulée dans des liposomes ou autres vecteurs et supports pour une meilleure homogénéité de la composition et une meilleure diffusion du principe actif notamment sur la peau.

Les extraits de primevère peuvent être associés dans les compositions selon l'invention 15 avec des substances augmentant la protection cutanée.

A titre d'exemple mais de maniére non limitative, on peut citer les associations avec des mucopolysaccharides, des vitamines, des céramides, des substances antradicalaires ou des filtres U.V.

De même, l'activité anti-âge des extraits selon l'invention est particulièrement intéressante quand ils sont associés avec des substances :.iyant un effet cicatrisant comme des 20 protéines, racide hyaluronique, des acides aminés, et/ou avec des substances anti-inflammatoires, anti-âge, après-solaire ou avec des actifs anti--acné et anti-den latoses.

L'activité protectrice des extraits de l'invention vis-à-vis des radicaux libres et des UV. est également très intéressante dans le domaine capillaire, no laminent dans le cas d'associaton avec des substances facilitant le bon état du cuir chevelu et de celui du cheveu, comme des minéraux, des 25 vitamines, des céramides, des extraits protéiques, des mucm:olysaccharides, des acides de fleurs ou de fruits.

Les compositions de l'invention sont tout particulièrement adaptées à une application topique pour prévenir etiou traiter de nombreuses altérationS cutanées.

Pour une utilisation cosmétique, les compositions de l'invention peuvent se présenter 30 sous la forme de crèmes, gels, lotions, laits, émulsions HIE et E/I-1, solutions, onguents, pulvérisateurs, huiles corporelles, lotions capillaires, shampooings, lotions après--rasage, savons, bâtons protecteur des lèvres, bâtons et crayons pour maquillage.

Les compositions peuvent comprendre tous excipients nécessaires à leur formulation. -Ainsi, lorsqu'elles sont sous la forme de gel, elles comprennent des excipients appropriés tels que esters de cellulose ou d'autres agents 35 gélifiants, tels que le Carbopol', la gomme de guar, ou analogues.

Ces compositions cosmétiques peuvent aussi prendre la forme de lotion ou :solution dans laquelle les extraits et/ou molécules sont sous formé encapsulée, par exemple dans des microsphères.

Ces microsphères peuvent par exemple être constituées de corps gras, d'agar-agar et d'eau.

Les agents actifs peuvent être aussi incorporés dans des vecteurs de type liposomes, 40 glycosphères, dans des chylornicrons, des macro-, micro-, name-particules ainsi que les macro--, micro-et nana-capsules et peuvent aussi être adsorbés sur des paffin:ères organiques poudreux, lus talcs, bentonites et autres supports minéraux.

Ces émulsions joulaSent d'une bonne stabilité et peuvent être conservées pendant le temps nécessaire pour une unisation à des températures comprises entre 0 et 50 sans qu'il y ait sédimentation des constituants ou séparation des phases.

45 Les compositions cosmétiques de l'invention ccrnprennent de l'ordre de 0,01 à 5% en poids, préférentiellement entre 0,1 et 2,5%, d'extrait de prienevère lorsqu'elles sont sous forme de poudre et de l'ordre de 0,01 à 25% en poids, préférentielleMent entre 0,5 et 10%, lorsqu'elles sont sous forme encapsulée.

Les pourcentages donnés ci-dessus ,,ont exprimés en poids d'extrait sec de primevère par rapport au poids de la compositon finale.

Vèrs ion 23/10118 4 Pour la préparation de ces compositions, les extraits de primevère sont mélangés aux excipient généralement employés en cosmétique.

Les compositions cosmétiques de l'invention peuvent aussi contenir des additifs ou des adjuvants usuels en cosmétologie, comme par exemple des agents antibactériens ou des parfums, 5 mais aussi des lipides d'extraction et/ou de synthèse, polymères gélifiants et viscosants, des tensio- actifs et émulsifiants, des principes actifs hydro ou liposolubles, des extraits de plantes, des extraits tissulaires, des extraits marins et des actifs de synthèse.

L'utilisation cosmétique ou derrnocosmétique d'extraits comprend tous les soins du corps et de la peau y compris les produits solaires, protecteurs et bronzants, les produits anti-âge, 10 anti-seborrhéïques, toniques, les produits assurant l'amélioration de l'aspect de la peau y compris le traitement acnéique, les rougeurs cutanées, le traitement du cuir chevelu et celui de la chute des cheveux.

Les compositions cosmétiques de la présente invention peuvent aussi comprendre d'autres principes actifs complémentaires choisis pour leur action, par exemple pour la protection 15 solaire, l'effet anti-rides, l'activité antiradicalaire et antioxydante, l'activité anti-irritante, la nutrition cellulaire, la respiration cellulaire, l'hydratation et la régénération cellulaire, les traitements anti- séborrhéiques, ainsi que d'autres principes actifs ayant une action sur la tonicité cutanée, la protection du cheveu.

Les compositions cosméelqu.E.is de la présente invention sont de préférence à utiliser 20 quotidiennement en les appliquant une ou plusieurs fois par jour.

Les compositions cosmétiques de la présente invention sont très bien tolérées, elles ne présentent aucune phototoxicité et leur application sur la peau, pour des périodes de temps prolongées, n'implique aucun effet systémique.

En conséquence, de manière générale, l'invention se rapporte notamment à l'utilisation d'un extrait de primevère, pour la préparation d'une composition cosmétique ou nutraceutique destinée à réduire le taux de cortisol et par conséquent limiter l'effet du stress chronique sur le vieillissement naturel ou induit de l'organisme.

La présente invention est maintenant illustrée, de manière non limitative, par les 25 exemples 1 à 4 suivants.

L'exemple 1 illustre un procédé de préparation d'un extrait de coucou selon l'invention.

Les exemples 2 à 4 illustrent les propriétés biologiques revendiquées selon l'invention.

L'exemple 5 illustre un exemple de formulation à partir d'un extrait de coucou selon 30 Exemple 1: Obtention d'An extrait de coucou PrImula 'tels 330 g de fleurs de Primula verts sèches et broyées sont mises à macérer dans 6kg d'eau et 4kg de glycérine, pendant une durée de 2h.

L'extrait est filtré jusqu'à obtention d'une solution limpide.

Nous 35 obtenons un extrait de base nommé EX2Gi4145.

Cet extrait est alors ajusté dans la glycérine pour respecter un titre en composés et une stabilité microbiologique.

Cette procédure a permis d'obtenir 9 kg d'extrait.

Cette méthode permet de produire l'extrait S3GJ4186 testé plus loin.

Un procédé alternatif est le suivant : 900 g de fleurs de Prirnula yetis sèches et broyées sont mises à 40 macérer dans 10,8L d'éthanol et 7,2L d'eau, pendant une durée de 24h.

L'extrait est ensuite filtré jusqu'a obtention d'une solution limpide.

L'extrait est ensuite décoloré à l'aide 45g de charbon actif; puis l'extrait est filtré à nouveau.

L'éthanol est ensuite évaporé à pression réduite, puis l'extrait est séché 'par atomisation.

Cette procédure a permis d'obtenir 120 g d'extrait sec.

45 Ces deux extraits sont titrés en fiavonoïdes glycosylés. l'invention.

Vérsion e-23110118 a Exemple 2 : Evaluation de la cvtotoxicité de l'ex ualt réalisé selon l'exemple 1 Principe: L'étude de la viabilité cellulaire en présence des principes actifs à tester est réalisée grâce à un test au 5 MTT1 Le NITT est un sel de tétrazolium dont le cycle est transformé par des déshydrogénases mitachondriales.

Le substrat jaune est transformé en un produit bleu fonce par les cellules vivantes, mais pas par les cellules mortes ou le milieu de culture.

Ce test calorimétrique permet de lier l'intensité de la coloration au nombre de cellules vivantes.

I. absorbance à 550 nm est directement proportionnelle au nombre de fibroblastes vivants.

10 Préparation des solutions mères des extraits : L'extrait (53614186) est dilué directement dans le milieu de cuture afin d'obtenir une solution à 1%, Mode opératoire : Des plaques de 96 puits sont ensemencées à raison de 5000 fibroblastes par puits, Après 24 heures de culture, les principes actifs à tester sont ajoutés.

Douze concentrations de chaque principe actif 15 sont testées.

Les principes actifs sont dissous directement =Jans du milieu de culture à partir des snlutionsnoè/es.

Résultats Une augmentation significative de ia viabilité cellulaire est observée en présence de 0,0075% d'Actif 1 20 (53614186) par rapport au groupe Témoin, Une diminution significative de la viabilité celltFaire est Observée avec 0,01%, 0,025% et 0,05% d'actif par rapport au groupe Témoin.

Cependant la viabilité reste supérieure à '80% (Figure 1).

Les concentrations d'Actq fetenues pour la suite de l'étude sont : 0,05%; 0,25% et 1%.

25 Exemple 3: Evaluation des activités anti-âgc.s dans des cultures de fibroblastes épidermiques humains normaux L'extrait selon l'exemple 1 est maintenant testé sur sa capacité à moduler certains biomarqueurs de la matrice extracellulaire, 30 Culture et traitement des monocouches A confluence, les fibroblastes sont trypsines et ensemencés dans des plaques 6 puits à raison de 0,08.10c cellules par puits.

Après 24 heures de cultures, 2 ml de milieu avec ou sans actif sont ajoutés.

L'Actif est dilués aux concentrations choisies dans du milieu de culture DMEMIc.

Après 48 heures de culture en présence de l'actif le surnageant est prélevé sur antiprotéase (10%).

Les aliquots sont 35 conservés à -80°C jusqu'aux dosages.

Les monocouches cellulaires sont lavées avec du PBS et 400 pl de NaOH 0,1N sont ajoutés.

Le lysat cellulaire est conservé à -20°C jusqu'au dosage des protéines.

Dosages : Dosage du collagène 1,fs.

Principe 40 La quantité de collagène produite par les cellules est déteriiinée par dosage ELISA (Enzyme-Linked immunosorbent Assay, kit Liscri Life Science).

Les échantillons sont déposés dans une plaque 96 puits pré-coatée avec un anticorps spécifique du collagène III. es standards et les échantillons sont déposés dans la plaque avec une solution d'anticorps anti-collagène III couplé à la biotine.

La révélation se fait par ajout d'une solution d'avidine couplée à etHorseradish Peroxydase» (HRP) puis 45 de substrat TMB, Enfin, la réaction enzymatique est stoppée par ajout d'une solution d'acide Version n'-23./20/18 6 sulfurique.

La coloration obtenue est proportionnelle à la quantité e collagène Ilf et la densités optiques est effectuée immédiatement< lecture des 'te.

Mode opératoire 5 100 pl d'échantillon ou de standard sont déposés dans chaque puits.

Après 2 heures d'incubation à 37°C, les puits sont vidés et 100 pi du réactif de détection A sont ajoutés.

Après une incubation d'une heure à 37°C, les puits sont lavés 3 fois avec la solution de lavage. 100 pl du réactif de détection 3 sont ensuite déposés et la plaque est incubée 30 minutes à 37°C. 5 lavages sont effectués puis 90 p.1 10 de la solution de substrat sont ajoutés dans les puits.

Au bout de 20 minutes à 37°C et à l'abri de la lumière, une coloration bleue propor:ionnelle à la quantité de collagène i apparaît. 50 pl de la solution stop sont ajoutés et la lecture-des densités optiques est effectuée immédiatement à 450 nm (spectrophotomètre Muitiscan Ex, Thermo). tte Calculs 15 La courbe standard est tracée en représentant les densités optiques en fonction de la quantité de collagène de la garnme étalon.

La quantité de collagène de chaque échantillon est déterminée grâce à cette courbe standard.

Lesconcentrations de collagène III sont exprimées en ng/mg de protéines.

Dosage de l'élastine 20 tçff Principe La quantité d'élastine produite par les cellules est déterminée par dosage ELISA (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, kit Usai Life Science).

Les échantillons sont déposés dans une plaque 96 puits pré-coatée avec un anticorps spécifique de l'élastine.

Les standards et les échantillons sont déposés 25 dans la plaque avec une solution d'anticorps anti-élastine couplé à la biotine, La révélation se fait par ajout d'une solution d'avidine couplée à la 4iorseradish Peroxydase» (HRP) puis de substrat TMB.

Enfin, la réaction enzymatique est stoppée par ajout d'une solution d'acide sulfurique.

La coloration obtenue est proportionnelle à la quantité d'élastine et la lecture des densités optiques est effectuée immédiatement. 30 'te Mode opératoire ed'échantillon dilué au 1/10'1'' o 1001.11 -de standard sont déposés dans chaque puits.

Après 1 heures d'incubation à 37°C, les puits sont vidés et 100 pl du réactif de détection A sont ajoutés.

Après une incubation d'une heure à 37`C, ies puits sont lavés 3 fois avec la solution de lavage. 100 !if du réactif de détection B sont ensuite déposés et la plaque est incubée 30 minutes à 37°C.

Cinq lavages 35 sont effectués puis 90 pl de la solution de substrat sont ajoutés dans les puits.

Au bout de 20 minutes à 37`C et à l'abri de :a lumière, une coloration bleue proportionnelle à la quantité d'élastine apparaît. pl de la solution stop sont ajoutés et la lecture des densités optiques est effectuée immédiatement à 450 nm (spectrophotomètre Multiscan Ex, Thermo). 40 'Se calculs La courbe standard est tracée en représentant les densités optiques en fonction de la quantité d'élastine de la gamme étalon.

La quantité d'élastine de chaque échantillon est déterminée grâce à cette courbe standard, Les concentrations d'élastine sont exprimées en ng/mg de protéines.

45 Dosage de l'acide hyaluronique 9 Principe différents échantillons est déterminée par dosage ELISA à l'aide d'un kit TECO'.

Ce kit est un dosage sandwich La quantité d'acide hyaluronique d (Enzyrne-Linked Immunosorbent Ass ikrsior '-23710/1 7 sensible qui utilise d'une part des microplaques recouvertes par la protéine de liaison de l'acide hyaluronique (HABP) et d'autre part la protéine de liaison HABP conjuguée à HRP pour la détection.

La protéine de liaison HABP conjuguée à HRP se lie à l'acide hyaluronique contenu dans l'échantillon, puis réagit avec le substrat.

L'intensité de la couleur est proportionnelle au taux d'AH contenu dans 5 les échantillons, Mode opératoire 100 pi de standard ou 100 pl d'échantillon dilués au 1/100'''' sont déposés dans chaque puits.

La plaque est incubée 2 heures à température ambiante, sous agitation.

Après lavage de la plaque, 100 10 pl de conjugué HRBP-HRP sont déposés dans chaque puits; La plaque est incubée 30 minutes à température ambiante, sous agitation.

Après lavage des pub, 100 pille substrat TMB sont ajoutés.

La plaque est incubée 30 minutes à température ambiante, à l'obscurité et sous agitation.

La réaction est stoppée par l'ajout de 100 pl de solution stop par puits.

La lecture des densités optiques est immédiatement effectuée à 450 nm. 15 le Calculs La droite d'étalonnage est tracée en représentant la DO eo fonction de la concentration d'acide hyaluronique.

Une droite de régression est ensuite tracée et les quantités d'acide hyaluronique contenues dans les échantillons sont déterminées grâce à fteluation de cette droite de régression, 20 Les concentrations d'acide hyaluronique sont exprimées en pg/mg de protéines.

Dosage des protéines par la méthode de Pierce 7irge.

Principe L'acide bicinchoninique (BCA) sous forme de sel de sodium soluble en milieu aqueux réagit de façon stable, sensible et hautement spécifique avec les ions cuivrew.

Les protéines réagissent avec les ions cuivriques en milieu alcalin pour produire des ions cuivreux. 1:L'eux molécules de BCA réagissent avec un ion cuivreux pour former un complexe violet qui montre un pic d'absorption à 562 nm. ¶ Mode opératoire 30 Une gamme d'étalonnage (0-2 rngiml) est réalisée à partir d'une solution de sérum albumine bovine. 20 pl de chaque point de la gamme d'étalonnage ou d'échantillon sont placés dans des puits d'une plaque de 96 puits, en duplicate. 200 pl de réactif de Pieral sont ajoutés et la plaque est incubée pendant 30 minutes à 37°C.

L'absorbante est lue immédiatement à 550 nm (spectrophotomètre Multiscan Ex, Thermo). -'.4t Calculs La gamme permet de tracer une droite d'étalonnage à partir dé laquelle la concentration en protéines des échantillons est déterminée.

Les résultats sont exprimés ei mg de protéines/ml.

40 Calculs et analyses statistiques : Les valeurs sont exprimées par la moyenne erreur-type de la distribution des moyennes (sem).

Une analyse de variance à un facteur est réalisée, suivie si nécessaire d'un test Fisher.

Les significativités ne sont retenues que lorsque p<0,05.

45 Résultats : Dosage du collagène Hl rsi0 8 La synthèse de collagène est significativement augmentée en présence de vitamine C à 50 phi par rapport au groupe Témoin et en présence de l'Actif 1 à 0,05% et 0,25%.

Une augmentation significative de la synthèse de collagène III est observée en présence de 1% de l'Actif 1p" rapport aux groupes Témoin, A1-0,05% et A1-0,25% (Figure 2).

5 Dosage de l'élastine La synthèse d'élastine est significativern. ent augmentée en presence de vitamine C à 100 p_M par rapport au groupe Témoin.

Une augmentation significative de la synthèse d'élastine est observée en présence de 0,05% de l'Actif 1 par rapPort aux groupes Témoin et Vit C (Figure 3). ?0 Dosage d'acide hyaluronique La synthèse d'acide hyaluronique est significativement augmentée en présence d'USE' à 10 ng/m1 par rapport au groupe Témoin.

Une augmentation significative de la synthèse d'acide hyaluronique est observée en présence de 0,05% et de de l'Actif 1 par rapport au groupe Témoin.

Une diminution 15 significative de la synthèse d'acide hyaluronique est observée en présence de 0,05% et 0,25% d'Actif 1 par rapport au groupe EGF.

Une augmentation significative de la synthèse d'acide hyaluronique est observée en présence de 1% d'Actif 1 par rapport aux autres groupes (Figure 4).

Exemple 4: ff , seon' 20 lexem umanesH501etH5D2isoées ple 1 sur un modèle d'inhibition Protocole L'essai utilise la technologie en fluorescence HRTF (Hor)ogenous lime Resolved Fluorescence), qui est basée sur la compétition entre ie cortisol non marqué et le cortisol marqué avec XL665 25 permettant la fixation à un anticorps spécifique du cortisol marqué avec du cryptane.

Comme 1-15Di convertît la cortisone en cortisol et H5D2 convertit le cortisol en cortisone, le signal HTRE peut être utilisé pour déterminer l'activité FISD1 et HS02.

Le signal Ff FRP est inversement proportionnel à la concentration en cortisol mesurée.

L'enzyme humaine FiSD1 a été testée dans son état actif avec de la cortisone et du NADPH tandis que HSD2 a été testée avec du cortisol et du NAD.

30 Le composé EX2GJ4145 a été testé stir HSD1 aux concentrations de 1,5, 0,5, 0,17, 0,056 et 0,019 memL et sur H5D2 aux concentrations de 15, 5, 1,7, 0,56 et 0,19 mg/mL.

L'IC50 a été déterminée si possible.

Le composé de référence, l'aCide glycyrrhétinique a été pris comme référence pour valider le test._ Résultats' Les résultats indiquent que l'IC50 pourlextrait EX2614145 est de 40,7 iternt pour liSD1 tandis qu'il n'y a pas d'effet sur l'enzyme H502 aux concentrations testées, Les courbes d'inhibition permettant de calculer ces IC50 sont présentées dans la Figure 5.

Concluion L'extrait de coucou inhibe l'enzyme hurnaine 11501, enzyme responsable de la production du cortisol sans affecter HSD2, , 4.5 Exemple 5 Formulation.dermo-cosmétique d'un extrait de coucou.

A titre non limitatif, nous présentons dans le tableau 1 un exemple de formule incorporant un extrait 50 de primevère.

Skrsion n'-23/10/18 35 40 9 L'extrait de coucou hydrosoluble est incorporé directement dans l'émulsion au cours du refroidissement, sous agitation, à une température inférieure u 40°C.

5 Tableau 11 Exemple de formule intégrant un extrait de Primulu selon l'invention. ittm". wumsda /qua hnrnsseur 1 % EAU PU RIFIEE 77,54 MONTANOV 202 Aruz.hd cuh01 ur, d behenyi aboho! ,,nr.£ .11c.ch44 glu cusicie j 3,00 h MTANG V L Cl 4-?2 A.,:t-inclis (Eincf) Cl 2-20 All<ACilucodde Sep= 1,50 DUO ZENO KT Propane-id chc4phiee Ste4rebede pubob 8,00 - ELLIANOL G Otlydociewnd BASE 7,00 ARISTOFLEXALIC ,h5irrurburr 4cryir.hiderahhiteureei V. copohne, Garent 0,80 ExTRAIT OF COUCOU ? .J. rareenphetre Cle.:.:20 r4.2è:E. 1,00 0.70 0,04 PHENO)OETOL iPherlareltec.: ISAMP40 ULTRA PC 1Tromeihrenre AGDE crrRIQUE '014h cul d Ereintb,9 100.00 . - lo ikrsicen e- 23/10/18

Claims (4)

1. REVENDICATIONS -1. Composition cosmétique. ou nutraceutique destinée à diminuer le taux de cortisoi d'un animal vivant, caractériséeen ce qu'ene contient au moins un agent actif renfermant au moins un extrait de plante du genre Primula.
2. 2. Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce que l'extrait de plante est choisi dans le groupe formé-par les extraits de Pranuia verts, Parnuta vulgaris, PrifTWIC 10 sikkiinensis et leurs mélanges.
3. 3. Composition selon l'une 5 es revendications 1 ou 2, caractérisée en ce qu'elle comporte de 0,01 à 2,5% en poids sec, d'au moins un extrait de plante du genre Priam:da 7-sous forme de poudre ou de 0,01 à 25% en poids, d'un extrait de plante du genre Primai° si cet extrait est sous forme encapsulée. 15
4. 4. Composition selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisée en ce qu'elle constitue une crème, une huile Qu une solution si on la destine à une application topique, l'extrait de plante du genre Primula étant mélangé à des ingrédients connus en cosmétique pour obtenir la présentation souhaitée pour l'utilisation envisagée. Utilisation cosmétique d'une composition selon l'une des revendications 1 à 4, 20 caractérisée en ce qu'elle améliore l'état de la peau ou des cheveux par administration topique ou orale. .,6, Utilisation selon la revendication 5, caractérisée en ce qu'on obtient des effets anti-âge sur la peau' ou les cheveux d'un sujet humain. 7. Utilisation selon la revendication 6, caractérisée en ce que les effets anti-âge se 25 manifestent sur une peau jeune ou âgée. 8. Utilisation selon l'une .des revendications 5 à 7, caractérisée en ce que, l'administration topique ou ore)e permet sur une peau sèche ou âgée, d'obtenir une augmentation de sa souplesse et/ou de son élasticité. 9. Utilisation selon l'une 'des revendications 5 à 8, caractérisée en ce que l'on 30 protège ou renforce la fonction barrière de la peau contre un agent extérieur physique, chimique ou biologique par une administration topique ou orale. 10, Procédé d'obtention de {ou des} exirait(s) de plante de fa composition selon l'une des revendications 1 à 4, caractérise en ce que l'on effectue une extraction scande/liquide dela plante, éventuellement broyée, dans un milieu solvant comportant au moins un 15 solvant pris dans le groupe formé par l'eau, les alcools, les cétones, les éthers, les polyols, les solvants chlorés et le CO2 suPercritique. Procédé selon la revendication 10, caractérisé en ce que l'extrait solide/liquide est réalisé dans un mélange eau/giyzérine dans une proportion allant de 10% à 90% d'eau en volume/ pendant un temps compris entre 1 et 4 heures sous faible aflation, à 40 température ambiante. 12. Procédé selon l'une dés revendications 10 ou 11, caractérisé en ce que l'extraction colide/liquide est effectuée sur les parties aériennes de la plante du genre ranula. 45 50