FR3145089A1

FR3145089A1 - Produit d’apithérapie liquide et sans alcool concentré sélectivement en polyphénols

Info

Publication number: FR3145089A1
Application number: FR2300636A
Authority: FR
Inventors: Cardinault Nicolas; Jérémie LAVAUR
Original assignee: Bee Terapi
Current assignee: Bee Terapi
Priority date: 2023-01-24
Filing date: 2023-01-24
Publication date: 2024-07-26

Abstract

La présente invention concerne un extrait de propolis liquide ne contenant pas d’alcool, l’extrait comprenant au moins 18% de polyphénols totaux par rapport à la masse totale de l’extrait ainsi que son procédé d’obtention.

Description

Produit d’apithérapie liquide et sans alcool concentré sélectivement en polyphénols

La présente invention se rapporte au domaine technique des extraits naturels.

L’invention a en particulier pour objet un extrait particulier de propolis ainsi que son procédé d’obtention.

Etat de l’art

L’apithérapie est définie comme une branche complémentaire de la médecine utilisant les produits de la ruche à des fins préventives et/ou curatives. Les produits de la ruche sont les éléments récoltés et/ou produits par les abeilles tels que le miel, la propolis, la cire, le venin d’abeille, la gelée royale, le pain d’abeilles et le pollen.

Chaque produit de la ruche possède des vertus thérapeutiques prometteuses, notamment la propolis.

En effet, la propolis est connue depuis l’Antiquité pour ses vertus thérapeutiques. A titre d’exemple, les romains l’utilisaient pour désinfecter et cicatriser des plaies.

La propolis est une substance résineuse, gommeuse et balsamique produite par les abeilles. Elle est la résultante du mélange entre la cire et les sécrétions salivaires d’abeilles mélangées aux substances récoltées sur l’écorce et les bourgeons de plantes ou d’arbres, tels que le peuplier, le bouleau, le saule, l’épicéa et le sapin, le Baccharis ou la Dalbergia.

La propolis est constituée d’un large spectre de polyphénols tels que des acides phénoliques et des flavonoïdes ce qui lui confère des vertus thérapeutiques et notamment des propriétés antibactériennes, antivirales, antifongiques et anti-inflammatoires.

Les polyphénols sont des composés phénoliques d’origine végétale jouant un rôle d’antimicrobiens, antifongiques, antispasmodiques, anti-inflammatoires et antioxydants comme l’apigenine, l’ester phénéthylique d'acide caféique (CAPE), la galangine, la pinocembrine et la chrysine.

Toutefois, la majorité des polyphénols contenus dans la propolis est soluble dans l’éthanol, l’acétone, le benzène et l’éther mais insoluble dans l’eau, ce qui rend difficile la formulation et l’utilisation des extraits de propolis.

D’autre part, la littérature scientifique considère que les polyphénols ont une faible biodisponibilité si situant entre 5 et 15% (Scalbert et al 2000 ; Crespy et al 2003).

Avec une telle biodisponibilité, il est préférable d’avoir un produit à haute teneur en polyphénols pour espérer une concentration sanguine circulante suffisante pour obtenir un effet thérapeutique.

Actuellement, la propolis commercialisée dans des formulations liquides l’est principalement sous la forme d’extraits hydroalcooliques.

Pour optimiser l’extraction des polyphénols, les industriels ont recours à des teneurs en alcool particulièrement élevées pouvant aller au-delà de 80%. Toutefois, la teneur maximale en polyphénols totaux retrouvée dans les produits liquides du commerce dépasse rarement 9%.

En plus d’obtenir une faible teneur en polyphénols totaux, les solutions hydroalcooliques ne sont pas adaptées à toutes les populations. En effet, la présence d’alcool limite son utilisation pour des raisons médicales, religieuses ou liées à l’âge des patients, mais peuvent également entraîner de nombreux symptômes en cas d’ingestion ou projection tels que : irritations, allergies, états de somnolence, agitation, maux de tête, nausées, vertiges ou contre-indications médicales.

D’autre part, les solutions hydroalcooliques ne permettent pas une absorption suffisante des polyphénols que ce soit via une application topique ou par voie orale. En effet, lors de l’ingestion du fait de leur insolubilité aqueuse, les polyphénols vont rapidement précipiter et se coller aux muqueuses buccales limitant ainsi leurs accessibilités à leur lieu d’absorption, à savoir le duodénum. La précipitation des polyphénols en milieu aqueux dans la cavité buccale associée à leur faible biodisponibilité rend l’utilisation de solutions hydroalcooliques particulièrement peu efficace pour des indications thérapeutiques systémiques.

Par conséquent, l’utilisation de solutions hydroalcooliques telles que décrites dans l’art antérieur n’est pas pertinente pour profiter pleinement des bénéfices qu’apportent les polyphénols présents naturellement dans la propolis.

La propolis est également commercialisée dans des extraits aqueux ou huileux. Toutefois, la teneur en polyphénols totaux de ces produits n’excède pas 4% quand ils sont extraits avec ce type de solvant (eau, huile, glycérine). Par ailleurs, ce type de solvant ne permet pas d’extraire l’ensemble des polyphénols de la propolis mais seules les petites molécules les plus polaires mais qui ne sont pas les actives biologiquement.

Ainsi, les extraits liquides de propolis ne contenant pas d’alcool présent sur le marché ne sont pas suffisamment concentrés en polyphénols pour espérer une concentration sanguine suffisante pour exercer un effet biologique.

D’autres formulations de la propolis peuvent également être retrouvées dans le commerce, par exemple sous forme brute, sous forme de gomme ou en gélules.

La propolis sous forme brute à l’avantage de contenir l’intégralité des polyphénols présent naturellement, toutefois elle contient également toutes les substances indésirables potentiellement toxiques.

La propolis sous forme de gomme présente une très faible concentration en polyphénols car il est particulièrement difficile d’ajouter une grande quantité de propolis dans le procédé de fabrication de la gomme.

La propolis sous forme de gélules est issue d’un broyage en présence d’une grande quantité d’excipient et nécessite une technologie très développée et couteuse pour obtenir une poudre non collante et fortement concentrée en polyphénols.

Il existe donc un besoin pour un nouvel extrait de propolis liquide permettant de surmonter les inconvénients de l’art antérieur, en particulier la fourniture d’un extrait de propolis liquide comprenant une teneur importante en polyphénols d’intérêts limitant les effets indésirables tout en conservant ou améliorant les vertus thérapeutiques de la propolis.

Pour répondre à ce besoin, l’invention propose un nouvel extrait de propolis liquide ne contenant pas d’alcool, comprenant au moins 18% de polyphénols totaux par rapport à la masse de l’extrait.

Plus particulièrement, l’extrait selon l’invention est sélectivement concentré en polyphénols d’intérêts, préférentiellement en apigenine, ester phénéthylique d'acide caféique (CAPE), galangine, chrysine, pinocembrine et leurs mélanges.

Un tel extrait est particulièrement utile dans le contexte de l’invention et surmonte les inconvénients de l’art antérieur, celui-ci permet de s’affranchir des effets indésirables de l’alcool tout en conservant ou améliorant les vertus thérapeutiques de la propolis.

Préférentiellement, ledit extrait comprend, en masse de polyphénols totaux de l’extrait :
- au moins 0.4% d’apigenine
- au moins 2.6% d’ester phénéthylique d'acide caféique (CAPE)
- au moins 6.0% de galangine
- au moins 8.0% de chrysine ; et
- au moins 8.0% de pinocembrine.

Avantageusement, l’extrait selon l’invention comprend une teneur importante en polyphénols présentant un intérêt en santé humaine ou animale.

L’extrait selon l’invention peut ainsi être utilisé comme médicament ou complément alimentaire chez l’Homme ou l’animal.

Plus particulièrement, ledit extrait peut être utilisé dans des produits cosmétiques, des produits de désinfection, des produits de conservation, des produits de traitement de surface mais également dans des textiles ou dans le traitement du bois.

Selon un autre aspect, l’invention vise aussi un procédé d’obtention de l’extrait selon l’invention comprenant notamment le broyage de la propolis brute, une macération dans un solvant d’extraction, une filtration, une évaporation de l’alcool présent dans le solvant d’extraction, une solubilisation du résidu dans un solvant, une décantation, un lavage et une nouvelle filtration et enfin une évaporation des solvants résiduels.

Préférentiellement, le solvant d’extraction comprend de l’hydroxyde de potassium ou de l’hydroxyde de sodium.

Ce procédé permet de façon surprenante d’obtenir un extrait sélectivement concentré en polyphénols d’intérêts, notamment en apigenine, CAPE, galangine, chrysine, pinocembrine et leurs mélanges.

D’autres caractéristiques et avantages ressortiront de la description détaillée de l’invention, des exemples et des figures uniquement illustratifs et nullement limitatifs de la portée de l’invention.

Brève description des Figures

Essai comparatif de l’extraction des 5 polyphénols d’intérêts en fonction des procédés d’extraction.

Description détaillée de l’invention

Définitions

Par « propolis » au sens de l'invention, on entend une substance résineuse, gommeuse et balsamique constituée de cire et de sécrétions salivaires des abeilles mélangées aux substances récoltées sur écorces et bourgeons de plantes ou arbres.

Par « propolis brute » au sens de l’invention, on entend la propolis directement obtenue dans la ruche des abeilles sans aucune étape de traitement préalable.

Par « extrait de propolis » au sens de l’invention, on entend un extrait comprenant au moins un ensemble de molécules, l’extrait est obtenu à partir de toute propolis récoltée transformée par un procédé d’extraction permettant d’enlever les impuretés présentes dans l’extrait brut et/ou de concentrer la propolis en un ou plusieurs de ses constituants.

Par « ne contenant pas d’alcool » ou « sans alcool » au sens de l’invention, on entend que l’extrait selon l’invention contient une teneur inférieure à 0,1% d’alcool. Cette teneur en alcool peut être mesurée par des techniques bien connues de l’homme du métier telle que par distillation, par densitométrie électronique ou par ébulliométrie.

Par « broyage à froid » au sens de l’invention, on entend que la propolis brute a été exposée à une température inférieure à 0°C pendant une période d’au moins une heure avant la réalisation du broyage selon l’invention.

Par « absorption systémique » au sens de l’invention, on entend la capacité des polyphénols à traverser la membrane entérocytaire et à être mesurés dans le plasma.

Par « forme aglycone » au sens de l’invention, on entend que les polyphénols présents dans l’extrait ne sont plus liés à des sucres et/ou des acides gras.

Par « saponification douce » au sens de l’invention, on entend une hydrolyse chimique réalisée avec une concentration en base forte comprise entre 0,01 et 0,1 M permettant de concentrer l’extrait selon l’invention en polyphénols sous forme aglycones sans pour autant les dégrader.

Extrait selon l’invention

La présente invention a donc pour objet un extrait liquide de propolis ne contenant pas d’alcool, comprenant au moins 18% de polyphénols totaux par rapport à la masse totale de l’extrait, préférentiellement au moins 19%, encore plus préférentiellement au moins 20%.

De manière surprenante, les inventeurs ont réussi à obtenir un extrait sans alcool et comprenant une concentration en polyphénols largement supérieure aux extraits liquides de propolis connus à ce jour.

Selon un mode de réalisation préféré, l’extrait selon l’invention comprend une teneur entre 18 et 35% de polyphénols totaux par rapport à la masse totale de l’extrait, encore plus préférentiellement entre 19 et 35%, notamment entre 20 et 30%.

La teneur en polyphénols totaux est préférentiellement mesurée par la méthode de référence décrite dans le document suivant « Bankova, Vassya&Popova, Milena & Trusheva, Boryana. (2016). New emergingfields of application of propolis. Macedonian Journal of Chemistry and Chemical Engineering. 35. 1 10.20450/mjcce.2016.864 ».

Dans un mode de réalisation particulièrement préféré, l’extrait selon l’invention comprend, en masse de polyphénols totaux de l’extrait :
- au moins 0,4% d’apigenine, préférentiellement au moins 0,6%
- au moins 2,6% de CAPE, préférentiellement au moins 2,9%
- au moins 6,0% de galangine, préférentiellement au moins 7%
- au moins 8,0% de chrysine, préférentiellement au moins 8,5% et
- au moins 8,0% de pinocembrine, préférentiellement au moins 9,2%.

Ainsi, l’extrait selon l’invention est concentré en polyphénols présentant un intérêt majeur en santé humaine, notamment la pinocembrine, la galangine, l‘apigenine, la chrysine et le CAPE et leurs mélanges.

Selon un mode de réalisation préféré, l’extrait selon l’invention est un extrait liquide, anhydre et ne contenant pas d’alcool. Ainsi, selon ce mode de réalisation, l’extrait de propolis est d’aspect huileux.

Avantageusement, l’extrait selon l’invention ne précipite pas au contact de l’eau, notamment l’eau présente dans la sphère buccale permettant ainsi une absorption intestinale des polyphénols.

De façon préférée, l’extrait de propolis selon l’invention se présente sous forme liquide à température ambiante, préférentiellement à 22°C.

Dans un mode de réalisation préféré, l’extrait liquide présente une viscosité comprise entre 25 et 900 mPa.s, plus préférentiellement comprise entre 50 et 450 mPa.s.

Dans le contexte de l’invention, la viscosité est mesurée à 20 °C à l’aide d’un viscosimètre de Brookfield bien connu de l’art antérieur.

Avantageusement, la viscosité de l’extrait liquide selon l’invention lui permet d’être facilement intégré dans une formulation liquide.

L’extrait selon l’invention est obtenu à partir de propolis pouvant provenir de toute origine botanique bien identifiée. L’extrait selon l’invention peut être obtenu à partir d’au moins une propolis choisie parmi la propolis de peuplier, la propolis de Baccharis et la propolis de Dalbergia. Préférentiellement l’extrait selon l’invention est obtenu à partir de propolis de peuplier.

Selon un mode de réalisation, l’extrait selon l’invention comprend au moins 70% de polyphénols sous forme aglycones par rapport aux polyphénols totaux de l’extrait, préférentiellement au moins 85%, encore plus préférentiellement au moins 90%.

La mesure de la concentration en polyphénols aglycones dans l’extrait selon l’invention peut être mesuré par comparaison d’une analyse de l’extrait avant et après traitement avec tout enzyme capable d'hydrolyser les liaisons β-glucosidiques, préférentiellement des glucosidases.

La présence majoritaire de polyphénols sous forme aglycones dans l’extrait selon l’invention est particulièrement intéressante. En effet, les polyphénols sous forme aglycones est la seule forme absorbable par les entérocytes et par conséquent mieux assimilés par l’organisme, notamment chez l’Homme et l’animal.

Selon un autre mode de réalisation de l’invention, l’extrait selon l’invention est susceptible d’être obtenu par un procédé comprenant une étape de saponification de la propolis, préférentiellement une étape de saponification douce.

Selon une variante, l’extrait selon l’invention comprend également, en masse des polyphénols totaux de l’extrait :
- une teneur en acide caféique inférieure à 0,02%,
- une teneur en acide férulique inférieure à 0,02%, et
- une teneur en acide p-coumarique inférieure à 0,08%.

Selon un mode de réalisation, l’extrait selon l’invention ne comprend pas au moins une molécule choisie parmi le farnésyl, l’acide caféique, l’acide férulique et l’acide p-coumarique.

Selon un autre mode de réalisation, l’extrait selon l’invention ne comprend pas au moins deux molécules choisies parmi l’acide caféique, l’acide férulique et l’acide p-coumarique.

Selon un autre mode de réalisation, l’extrait selon l’invention ne comprend pas d’acide caféique, d’acide férulique, d’acide p-coumarique et de farnésyl.

Avantageusement, l’extrait selon l’invention est sélectivement concentré en 5 polyphénols et possède une teneur très faible, voire nulle, d’autres molécules présentent initialement dans l’extrait brute de propolis.

Selon une variante, l’extrait selon l’invention est constitué d’apigenine, de chrysine, d’ester phénéthylique d’acide caféique (CAPE), de galangine et de pinocembrine.Selon une variante, l’extrait selon l’invention peut comprendre également au moins un additif.

L’extrait de propolis selon l’invention peut contenir comme additif au moins un composé choisi parmi les huiles, les cires, les tensioactifs, les co-tensioactifs, les épaississants et/ou gélifiants, les humectants, les colorants, les conservateurs, les charges, les tenseurs, les anti-agglomérants, les séquestrants et leurs mélanges, sans que cette liste soit limitative.

Bien entendu, l’Homme du métier veillera à choisir les éventuels composés complémentaires, actifs ou non-actifs, et leur quantité, de telle sorte que les propriétés avantageuses de l’extrait de propolis ne soient pas, ou sensiblement pas, altérées par l’adjonction envisagée.

L’extrait selon l’invention peut être obtenu par tout procédé adapté. Selon un mode de réalisation particulièrement préféré, l’extrait selon l’invention est susceptible d’être obtenu selon un procédé comprenant les étapes suivantes :
a) Broyage d’au moins une propolis brute,
b) Macération de la poudre de propolis obtenue à l’étape a) dans un solvant d’extraction,
c) Filtration du macérat obtenu à l’étape b) et récupération du filtrat,
d) Evaporation du filtrat obtenu à l’étape c) formant un résidu,
e) Mélange du résidu obtenu à l’étape d) avec un mélange de solvant organique et de solvant aqueux sous agitation,
f) Décantation du mélange obtenu à l’étape e) et récupération de la phase organique
g) Lavage de la phase organique obtenue à l’étape f) à l’aide de sels de sulfate de sodium anhydres,
h) Filtration de la phase organique obtenu à l’étape g),
i) Evaporation du solvant organique et récupération d’un extrait de propolis liquide comprenant au moins 18% de polyphénols totaux par rapport à la masse totale de l’extrait.

Dans le contexte de l’invention, le solvant d’extraction de l’étape b) est un mélange de solvant organique, de solvant aqueux et d’une base forte. Au sens de l’invention, l’étape b) est une étape de saponification, préférentiellement une étape de saponification douce.

Avantageusement, la base forte va rompre les liaisons sucres-polyphénols permettant ainsi d’obtenir une majorité de polyphénols sous forme aglycone les rendant facilement assimilables par la muqueuse intestinale, en particulier d’être directement assimilable par la muqueuse intestinale sans traitement enzymatique préalable.

Selon un autre mode de réalisation de l’invention, l’extrait selon l’invention est obtenu par un procédé comprenant une étape de saponification de la propolis, préférentiellement une étape de saponification douce de la propolis.

Procédé

Aussi, selon un autre aspect, l’invention a pour objet un procédé d’obtention d’un extrait selon l’invention comprenant au moins la mise en œuvre des étapes suivantes :
a) Broyage d’au moins une propolis brute,
b) Macération de la poudre de propolis obtenue à l’étape a) dans un solvant d’extraction,
c) Filtration du macérat obtenu à l’étape b) et récupération du filtrat,
d) Evaporation du filtrat obtenu à l’étape c) formant un résidu,
e) Mélange du résidu obtenu à l’étape d) avec un mélange de solvant organique et de solvant aqueux sous agitation,
f) Décantation du mélange obtenu à l’étape e) et récupération de la phase organique,
g) Lavage de la phase organique obtenue à l’étape f) à l’aide de sels de sulfate de sodium anhydres,
h) Filtration de la phase organique obtenu à l’étape g),
i) Evaporation du solvant organique et récupération d’un extrait de propolis liquide comprenant au moins 18% de polyphénols totaux par rapport à la masse totale de l’extrait.

De façon préférée, la propolis brute utilisée à l’étape a) comprend au moins 45% de résine, préférentiellement au moins 55% de résine, encore plus préférentiellement au moins 60% de résine

Avantageusement, la concentration en résine de la propolis brute est un indicateur fiable de la qualité de celle-ci, plus une propolis brute à une teneur en résine élevée plus la concentration en principes actifs dans l’extrait selon l’invention sera élevée.

La propolis brute utilisée à l’étape a) peut provenir de toute origine botanique bien identifiée. Préférentiellement, la propolis brute est choisie parmi la propolis de peuplier, la propolis de Baccharis, la propolis de Dalbergia et leurs mélanges.

Avantageusement, la propolis de peuplier, la propolis de Baccharis et la propolis de Dalgerbia sont naturellement riches en polyphénols.

De façon préférée, la propolis brute de l’étape a) est une propolis de peuplier.

Le broyage de l’étape a) peut être effectué par écrasement, percussion, abrasion ou cisaillement. Préférentiellement, le broyage de l’étape a) est effectué par cisaillement.

Selon un mode de réalisation préféré, le broyage de l’étape a) est effectué à froid, c’est-à-dire à une température inférieure à 0°C.

Dans un mode de réalisation particulièrement préféré, les particules constituant le broyat obtenu à l’étape a) présentent un diamètre compris entre 0,1 et 1mm, préférentiellement entre 0,2 et 0,6mm.

Avantageusement, l’étape de broyage selon l’invention améliore grandement la concentration en polyphénols dudit extrait en augmentant la surface d’échange entre la propolis brute et le solvant d’extraction de l’étape b).

Dans le contexte de l’invention, le solvant d’extraction de l’étape b) comprend un solvant organique, un solvant aqueux et une base forte. Au sens de l’invention, l’étape b) est une étape de saponification, préférentiellement une saponification douce.

Avantageusement, la base forte va rompre les liaisons sucres-polyphénols permettant ainsi d’obtenir une majorité de polyphénols sous forme aglycone les rendant facilement assimilables par la muqueuse intestinale, en particulier d’être directement assimilables par la muqueuse intestinale sans traitement enzymatique préalable.

De façon préférée, le solvant d’extraction de l’étape b) comprend un mélange de solvant organique/solvant aqueux et d’une base forte, le ratio solvant/base forte est compris entre 1/10 et 1/4 en volumes. Le mélange de solvant organique/solvant aqueux de l’étape b) présente préférentiellement un ratio compris entre 40/60 à 90/10 en volumes, encore plus préférentiellement un ratio compris entre 70/30 et 85/15 en volumes.

Le solvant organique présent dans le solvant d’extraction de l’étape b) est préférentiellement choisi parmi l’éthanol et le méthanol.

Le solvant aqueux présent dans le solvant d’extraction de l’étape b) peut être de l’eau.

De façon préférée, la base forte de l’étape b) est présente à une concentration comprise entre 0,01 et 0,1 M, préférentiellement entre 0,02 et 0,08 M encore plus préférentiellement à une concentration de 0,03 M.

Avantageusement, une concentration en base forte comprise entre 0,01 et 0,1 M permet de concentrer l’extrait selon l’invention en polyphénols sous forme aglycones sans pour autant les dégrader.

La base forte présente dans le solvant d’extraction de l’étape b) peut-être choisie parmi l’hydroxyde de potassium et l’hydroxyde de sodium. Préférentiellement, la base forte présente dans le solvant d’extraction de l’étape b) est l’hydroxyde de sodium.

Le solvant d’extraction de l’étape b) est préférentiellement choisi parmi un mélange d’éthanol/eau et d’hydroxyde de sodium ou de méthanol/eau et d’hydroxyde de sodium.

La macération de l’étape b) est effectuée sous agitation permanente préférentiellement à l’aide d’un vortex adapté au volume de broyat, un mélangeur à pâles, un système de sonication ou d’un système d’ultrasons.

La durée de la macération de l’étape b) peut varier en fonction du volume de broyat issu de l’étape a) entre 2 heures et 10 jours.

La filtration de l’étape c) peut être effectuée par filtration successive, filtration centrifuge ou décantation gravitaire successive avec filtration sur filtre ou filtration sur plaque.

Selon un mode de réalisation préféré, la filtration de l’étape c) comprend une filtration centrifuge successive avec des filtres en nylon allant de 200 µm jusqu’à 5 µm.

Avantageusement, le filtrat obtenu à l’étape c) est limpide et sans sédiment.

L’évaporation de l’étape d) ou i) peut être réalisée sous vide à une pression comprise entre 100 et 300mbar et à une température comprise entre 30 et 60°C.

L’évaporation de l’étape d) est préférentiellement réalisée sous vide à une pression comprise entre 100 et 300mbar et une température comprise entre 30 et 60°C, encore plus préférentiellement à une pression de 140mbar et une température comprise entre 45 et 50°C.

Dans le cadre de l’invention, l’évaporation doit être rapide tout en adoptant une température aussi faible que possible afin de préserver les polyphénols de la propolis.

Avantageusement, l’évaporation de l’étape d) permet d’obtenir un résidu avec une teneur en alcool inférieure à 0,1%. Les techniques pour déterminer la teneur en alcool sont bien connues de l’homme du métier. Dans le contexte de l’invention, la teneur est déterminée par distillation et par densitométrie électronique ou par ébulliométrie.

De façon préférée, le mélange de l’étape e) est réalisé sous agitation à l’aide d’un vortex adapté au volume de résidu ou un mélangeur à pales.

Dans un mode de réalisation particulièrement préféré de l’invention, le mélange de l’étape e) est effectué sous agitation jusqu’à ce que le résidu obtenu à l’étape d) soit entièrement dissout.

Le solvant organique de l’étape e) est préférentiellement choisi parmi l’acétate d’éthyle, l’acétate de méthyle et l’éther diméthylique et leurs mélanges.

Le solvant aqueux de l’étape e) peut être de l’eau.

De façon préférée, le mélange de solvant organique/solvant aqueux de l’étape e) est un mélange d’acétate d’éthyle / eau.

Le mélange de solvant organique/solvant aqueux de l’étape e) présente préférentiellement un ratio compris entre 30/70 à 90/10 en volumes, encore plus préférentiellement un ratio compris entre 50/50 et 80/20 en volumes.

Dans un mode de réalisation particulièrement préféré de l’invention, le mélange de solvant organique/ solvant aqueux de l’étape e) est un mélange d’acétate d’éthyle/eau dans un ratio de 50/50 en volumes.

Le ratio résidu/solvant du mélange de l’étape e) est préférentiellement compris entre 1/3 et 1/4 (poids/volume).

La décantation de l’étape f) peut être effectuée par décantation gravitaire ou centrifugation.

L’étape g) de lavage de la phase organique à l’aide de sels de sulfate de sodium permet avantageusement de piéger les molécules d’eau restantes dans la phase organique.

Avantageusement, la quantité de sel de sulfates de sodium est introduite en excès dans la phase organique afin de piéger toutes les molécules d’eau.

L’étape h) de filtration de la phase organique obtenue à l’étape g) permet quant à elle d’éliminer les cristaux de sels de la phase organique et d’obtenir ainsi une phase organique ne contenant pas d’eau.

La filtration de l’étape h) est réalisée sur un filtre présentant des mailles suffisamment étroites pour retirer les cristaux de sels de la phase organique. L’homme du métier est parfaitement capable de choisir un filtre présentant une taille de mailles adapté en fonction de la taille des cristaux de sels. A titre d’exemple non limitatif, le papier whatmann N°4 ou un filtre à café est suffisant pour retirer lesdits cristaux.

L’évaporation de l’étape i) est préférentiellement réalisée sous vide à une pression comprise entre 150 et 300mbar et une température comprise entre 30 et 60°C, encore plus préférentiellement à une pression comprise entre 200 et 250mbar et une température comprise entre 40 et 45°C.

Avantageusement, le procédé selon l’invention permet l’obtention d’un extrait visqueux fluide peu collant à température ambiante et comprend une teneur importante en polyphénols d’intérêt.

Plus particulièrement, le procédé selon l’invention permet l’obtention d’un extrait de propolis liquide et ne contenant pas l’alcool présentant une viscosité comprise entre 20 et 450 mPa.s.

Le procédé selon l’invention permet de concentrer sélectivement la teneur en polyphénols d’intérêts, notamment en apigenine, CAPE, galangine, pinocembrine et chrysine.

Exemples

Exemple 1 : Exemple de procédé selon l’invention

Le procédé d’extraction de la propolis comprend la mise en œuvre des étapes suivantes :

Broyage d’une propolis brute de Peuplier préalablement congelée jusqu’à obtention de particules de diamètre compris entre 0,2 et 0.6mm,
Macération de la poudre de propolis obtenue à l’étape a) dans un mélange de éthanol/eau dans un ratio 70/30 en volumes ainsi que de l’hydroxyde de sodium à une concentration de 0,025 M,
Filtration du macérat obtenu à l’étape b) par filtration successive et récupération du filtrat,
Evaporation sous vide à une pression de 140mbar et une température de 45°C du filtrat obtenu à l’étape c) formant un résidu contenant une teneur en alcool inférieure à 0,1%,
Mélange du résidu obtenu à l’étape d) avec un mélange d’acétate d’éthyle et d’eau sous agitation,
Décantation du mélange obtenu à l’étape e) par décantation gravitaire et récupération de la phase acétate d’éthyle
Lavage de la phase organique obtenue à l’étape f) à l’aide de sels de sulfate de sodium anhydres,
Filtration de la phase organique obtenu à l’étape g),
Evaporation sous vide à une pression de 200mbar et une température de 45°Cde l’acétate d’éthyle et récupération d’un extrait de propolis liquide comprenant au moins 18% de polyphénols totaux par rapport à la masse totale de l’extrait.

Le procédé selon l’invention permet ainsi d’obtenir un extrait de propolis liquide ne contenant pas d’alcool et sélectivement concentré en polyphénols d’intérêts. Aussi, ledit extrait comprend une teneur importante en 5 polyphénols dont les concentrations mesurées à l’aide de la méthode de Chromatographie Liquide Haute Performance (HPLC) de référence telle que décrite par Bankova, V. et al. 2016 sont présentées dans le tableau 1.

Tableau 1 : Mesure de la concentration moyenne en polyphénols d’intérêts obtenus à partir du procédé décrit ci-dessus sur 10 échantillons.

	Apigenine	CAPE	galangine	pinocembrine	chrysine
Concentration (g/100g)	0,12	0,52	1,52	2,0	2,48

Exemple 2 : Exemple de procédé selon l’invention

Broyage d’une propolis brute de Peuplier préalablement congelée jusqu’à obtention de particules de diamètre compris entre 0,2 et 0.6mm.
Macération de la poudre de propolis obtenue à l’étape a) dans un mélange de méthanol/eau dans un ratio 85/15 en volumes ainsi que de l’hydroxyde de sodium à une concentration de 0,02 M
Filtration du macérat obtenu à l’étape b) par filtration successive et récupération du filtrat
Evaporation sous vide à une pression de 250mbar et une température de 35°C du filtrat obtenu à l’étape c) formant un résidu contenant une teneur en alcool inférieure à 0,1%
Mélange du résidu obtenu à l’étape d) avec un mélange d’acétate d’éthyle et d’eau sous agitation
Décantation du mélange obtenu à l’étape e) par décantation gravitaire et récupération de la phase acétate d’éthyle
Lavage de la phase organique obtenue à l’étape f) à l’aide de sels de sulfate de sodium anhydres
Filtration de la phase organique obtenu à l’étape g)
Evaporation sous vide à une pression de 200mbar et une température de 45°C de l’acétate d’éthyle et récupération d’un extrait de propolis liquide comprenant au moins 18% de polyphénols totaux par rapport à la masse totale de l’extrait.

Exemple 3 : Exemple de procédé selon l’invention

Broyage d’une propolis brute de Peuplier préalablement congelée jusqu’à obtention de particules de diamètre compris entre 0,2 et 0.6mm.
Macération de la poudre de propolis obtenue à l’étape a) dans un mélange de éthanol/eau dans un ratio 50/50 en volumes ainsi que de l’hydroxyde de sodium à une concentration de 0,04 M.
Filtration du macérat obtenu à l’étape b) par filtration successive et récupération du filtrat
Evaporation sous vide à une pression de 150mbar et une température de 50°C du filtrat obtenu à l’étape c) formant un résidu contenant une teneur en alcool inférieure à 0,1%
Mélange du résidu obtenu à l’étape d) avec un mélange d’éther diméthylique et d’eau sous agitation
Décantation du mélange obtenu à l’étape e) par décantation gravitaire et récupération de la phase d’éther diméthylique
Lavage de la phase organique obtenue à l’étape f) à l’aide de sels de sulfate de sodium anhydres
Filtration de la phase organique obtenu à l’étape g)
Evaporation sous vide à une pression de 200mbar et une température de 40°C de l’acétate d’éthyle et récupération d’un extrait de propolis liquide comprenant au moins 18% de polyphénols totaux par rapport à la masse totale de l’extrait.

Exemple 4 : Essai comparatif entre un procédé d’extraction hydroalcoolique classique et un procédé selon l’invention en comparant la concentration en polyphénols totaux.

Des essais ont été réalisés pour démontrer la capacité d’extraction des polyphénols du procédé selon l’invention comparé à une extraction hydroalcoolique classique connue de l’Homme du métier.

L’extraction hydroalcoolique décrit dans cet exemple est une extraction hydroalcoolique classique de référence réalisée dans les meilleures conditions bien connues de l’art antérieur.

L’extraction hydroalcoolique de l’exemple 2 est réalisée de la manière suivante :
- Broyage de la propolis brute
- Macération dans de l’éthanol à 70° sous agitation pendant 2 heures
- Filtration et récupération de l’extrait hydroalcoolique.

La teneur en polyphénols totaux est mesurée par la méthode de référence décrite par Bankova, Vassya&Popova, Milena &Trusheva, Boryana. (2016). New emergingfields of application of propolis. Macedonian Journal of Chemistry and Chemical Engineering. 35. 1. 10.20450/mjcce.2016.864.

Tableau 2 : Comparaison de la concentration en polyphénols totaux (PPTx) entre le procédé selon l’invention et un procédé d’extraction hydroalcoolique.

	Teneur en PPTx (g/100g)± SEM	% augmentation ± SEM	Nb d’échantillons
Extraction hydroalcoolique	13,8 ± 0,4	52,3 ± 7,2	10
Procédé selon l’invention	21,03 ± 1,2	52,3 ± 7,2	10

On constate que le procédé selon l’invention permet d’obtenir une concentration 52% supérieure en polyphénols totaux par rapport à un extrait liquide contenant de l’alcool.

Plus particulièrement, on observe dans la que l’extrait selon l’invention est plus concentré en molécules d’intérêts sélectionnées par les inventeurs (l’apigenine, le CAPE, la galangine, le pinocembrine et la chrysine) que dans un extrait obtenu par une extraction hydroalcoolique classique de référence et bien connue de l’art antérieur.

Par conséquent, l’extrait selon l’invention présente une concentration particulièrement élevée en polyphénols d’intérêt par rapport aux extraits liquides présents sur le marché. Plus particulièrement, l’extrait selon l’invention est sélectivement concentré en 5 polyphénols d’intérêts à des concentrations largement supérieures à ce qui existe à ce jour dans l’art antérieur.

Claims

Extrait liquide de propolis ne contenant pas d’alcool, comprenant au moins 18% de polyphénols totaux par rapport à la masse totale de l’extrait.
Extrait selon la précédente revendication, caractérisé en que l’extrait comprend entre 18% et 35% de polyphénols totaux par rapport à la masse totale de l’extrait.
Extrait selon l’une des revendications précédentes, caractérisé en ce que l’extrait comprend, en masse de polyphénols totaux de l’extrait :
- au moins 0,4% d’apigenine
- au moins 2,6% d’ester phénéthylique d'acide caféique (CAPE)
- au moins 6,0% de galangine
- au moins 8,0% de chrysine ; et
- au moins 8,0% de pinocembrine.
Extrait selon l’une des précédentes revendications, caractérisé en ce que l’extrait comprend au moins 70% de polyphénols sous forme aglycones par rapport aux polyphénols totaux de l’extrait.
Extrait selon l’une des revendications précédentes, caractérisé en ce que l’extrait est obtenu à partir d’au moins une propolis choisie parmi la propolis de peuplier, la propolis de Baccharis et la propolis de Dalbergia et leurs mélanges.
Extrait selon l’une des revendications précédentes, caractérisé en ce que l’extrait présente une viscosité comprise entre 25 et 900 mPa.s mesurée à 20°C à l’aide d’un viscosimètre de Brookfield.
Extrait de propolis liquide selon l’une des précédentes revendication, caractérisé en ce que l’extrait est susceptible d’être obtenu par un procédé comprenant une étape de saponification.
Extrait de propolis liquide selon l’une des précédentes revendication, caractérisé en ce que l’extrait est susceptible d’être obtenu par un procédé comprenant la mise en œuvre des étapes suivantes :
a) Broyage d’au moins une propolis brute,
b) Macération de la poudre de propolis obtenue à l’étape a) dans un solvant d’extraction,
c) Filtration du macérat obtenu à l’étape b) et récupération du filtrat
d) Evaporation du filtrat obtenu à l’étape c) formant un résidu,
e) Mélange du résidu obtenu à l’étape d) avec un mélange de solvant organique et de solvant aqueux sous agitation,
f) Décantation du mélange obtenu à l’étape e) et récupération de la phase organique,
g) Lavage de la phase organique obtenue à l’étape f) à l’aide de sels de sulfate de sodium anhydres,
h) Filtration de la phase organique obtenu à l’étape g),
i) Evaporation du solvant organique et récupération d’un extrait de propolis liquide ne contenant pas d’alcool comprenant au moins 18% de polyphénols totaux par rapport à la masse totale de l’extrait.
Procédé d’obtention d’un extrait selon l’une des précédentes revendications, caractérisé en ce qu’il comprend la mise en œuvre des étapes suivantes :
a) Broyage d’au moins une propolis brute,
b) Macération de la poudre de propolis obtenue à l’étape a) dans un solvant d’extraction,
c) Filtration du macérat obtenu à l’étape b) et récupération du filtrat
d) Evaporation du filtrat obtenu à l’étape c) formant un résidu,
e) Mélange du résidu obtenu à l’étape d) avec un mélange de solvant organique et de solvant aqueux sous agitation,
f) Décantation du mélange obtenu à l’étape e) et récupération de la phase organique,
g) Lavage de la phase organique obtenue à l’étape f) à l’aide de sels de sulfate de sodium anhydres,
h) Filtration de la phase organique obtenu à l’étape g),
i) Evaporation du solvant organique et récupération d’un extrait de propolis liquide comprenant au moins 18% de polyphénols totaux par rapport à la masse totale de l’extrait.
Procédé selon la revendication 9, caractérisé en ce que le broyage de l’étape a) est effectué à froid.
Procédé selon l’une des revendications 9 ou 10, caractérisé en ce que les particules constituant le broyat obtenu à l’étape a) présentent un diamètre compris entre 0,1 et 1mm
Procédé selon l’une des revendication 9 à 11, caractérisé en ce que le solvant d’extraction de l’étape b) comprend un solvant organique, un solvant aqueux et une base forte.
Procédé selon la précédente revendication, caractérisé en ce que la base forte est présente à une concentration comprise entre 0,01 et 0,1 M.
Procédé selon la précédente revendication, caractérisé en ce que la base forte est choisie parmi l’hydroxyde de potassium ou l’hydroxyde de sodium.
Procédé selon l’une des revendications 9 à 14, caractérisé en ce que l’évaporation de l’étape d) est réalisée sous vide à une pression comprise entre 100 et 300mbar et à une température comprise entre 30 et 60°C.
Procédé selon l’une des revendications 9 à 15, caractérisé en ce que le mélange de solvant organique et de solvant aqueux de l’étape e) est un mélange d’acétate d’éthyle et d’eau.
Procédé selon l’une des revendication 9 à 16, caractérisé en ce que l’évaporation de l’étape i) est réalisée sous vide à une pression comprise entre 150 et 300mbar et à une température comprise entre 40 et 45°C.
Procédé selon l’une des revendications 9 à 17, caractérisé en ce que la décantation est réalisée par décantation gravitaire ou centrifugation.