FR3146578A1 - Nouvelle association à base de probiotiques, compositions la contenant et ses utilisations - Google Patents

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Cyrille TELINGE
Mégane MORIN
Alain Geloen
Mathilde BREZINS
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Laboratoire Dinnovation Cosmetique Et Dermatologique
LABORATOIRE D'INNOVATION COSMETIQUE ET DERMATOLOGIQUE
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Laboratoire Dinnovation Cosmetique Et Dermatologique
LABORATOIRE D'INNOVATION COSMETIQUE ET DERMATOLOGIQUE
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Abstract

TITRE : NOUVELLE ASSOCIATION À BASE DE PROBIOTIQUES, COMPOSITIONS LA CONTENANT ET SES UTILISATIONS La présente invention concerne la fourniture d’une nouvelle association à base de probiotiques et les compositions nutraceutiques ou pharmaceutiques comprenant ladite nouvelle association. La présente invention concerne également l’utilisation à des fins nutraceutiques ou à des fins pharmaceutiques de ces compositions. (pas de figure)

Description

NOUVELLE ASSOCIATION À BASE DE PROBIOTIQUES, COMPOSITIONS LA CONTENANT ET SES UTILISATIONS DOMAINE DE L’INVENTION
La présente invention concerne la fourniture d’une nouvelle association à base de probiotiques et les compositions nutraceutiques ou pharmaceutiques comprenant ladite nouvelle association. La présente invention concerne également l’utilisation à des fins nutraceutiques ou à des fins pharmaceutiques de ces compositions.
 ART ANTERIEUR
Avec l’industrialisation et l’exposition à des denrées pauvres en nutriments, le microbiote intestinal ne cesse de perdre en biodiversité ; c’est notamment ce que confirment plusieurs études comparant le microbiote intestinal de l’homme moderne et celui des peuples de « chasseurs-cueilleurs », qui ont gardé les habitudes alimentaires de nos ancêtres. Ces peuples de « chasseurs-cueilleurs », ont un microbiote très riche avec une grande diversité bactérienne, et seraient beaucoup moins touchés par certaines maladies modernes. Aussi et pour pallier cet appauvrissement, la consommation de probiotiques dans nos sociétés modernes est conseillée.
Les probiotiques sont définis comme « des microbes vivants qui, lorsqu'ils sont administrés en quantités adéquates, confèrent des avantages pour la santé de l'hôte ». Pour être utilisé, ces micro-organismes doivent répondre à des critères de sécurité pour la consommation et être capables de survivre pendant le passage gastro-intestinal. Parmi eux, les plus couramment utilisé en nutraceutique sont celles de genreLactobacillusetBifidobacteria, lesquels regroupent plusieurs dizaines d’espèces autorisées et pour chaque espèce, il existe plusieurs variétés de souches différentes.
A ce jour et bien que de nombreux produits soient disponibles, aucun n’est satisfaisant et aucun ne permet de reproduire un écosystème gastro-intestinal favorable à la santé humaine semblable à celui des susdits « chasseurs-cueilleurs ».
BREF APERÇU
Dans ce contexte, les inventeurs ont développé l’invention ci-après dont le premier but est de fournir une nouvelle association comprenant (ou constituée de) trois probiotiques et au moins un polyphénol. Un deuxième but de l’invention est de fournir des compositions nutraceutiques ou pharmaceutiques comprenant ladite nouvelle association. Et un autre but de l’invention concerne l’utilisation à des fins nutraceutiques ou à des fins pharmaceutiques de ces compositions.
 DESCRIPTION DETAILLEE
En préambule, l’invention se rapporte aux objets tels qu’ils sont définis ci-après et sauf indication contraire ou si le contexte s’y oppose, tous les termes ont leur sens ordinaire dans le(s) domaine(s) concerné(s).
De manière générale, un premier objet de l’invention concerne une association comprenant (ou constituée de) :
  • un mélange de probiotiques comprenant (ou constitué de) :
    • la souche BIO 6870 deL. rhamnosus(autres numéros de collection à l’American Type Culture CollectionATCC ; Manassas, Virginie : ATCC53103, LMG18243) ;
    • la souche BIO 5478 deB. infantisdéposée à la Collection Nationale de Cultures de Microorganismes (CNCM ; Institut Pasteur, 25-28 rue du Docteur Roux, F-75724 PARIS CEDEX 15) sous le numéro CNCM I-5090 ; et
    • la souche BIO 5480 deB. bifidumdéposée à la Collection Nationale de Cultures de Microorganismes (CNCM ; Institut Pasteur, 25-28 rue du Docteur Roux, F-75724 PARIS CEDEX 15) sous le numéro CNCM I-5091,
et
  • au moins un polyphénol et/ou au moins un extrait de plante comprenant au moins un polyphénol.
A cet égard, il convient de noter que les inventeurs ont trouvé de façon surprenante que l’association de ces trois souchesLactobacillus rhamnosus,Bifidobacterium infantisetBifidobacterium bifidumavec au moins un polyphénol (en particulier celui issu de la vigne) a permis la croissance des souches de l’invention. Ils ont également démontré que l’association spécifique de l’invention présentait une action de réparation de la muqueuse intestinale bénéfique grâce à la synergie inattendue de l’effet du polyphénol avec celui de l’effet des souches de l’invention. Utilisée comme principe actif dans une composition, les inventeurs mettent ainsi à disposition de tous une association singulière permettant à la fois la réparation de l’intestinviala diminution de la perméabilité intestinale et une recolonisation de l’intestin par les probiotiques eux-mêmes, et donc une meilleure assimilation des nutriments à l’image du système gastro-intestinal des susdits « chasseurs-cueilleurs ».
Par « probiotiques », on entend des microorganismes tels que les bactéries ou les levures, non pathogènes et non toxiques qui, délivrés vivants en quantité suffisante dans l’intestin, contribuent au maintien de l’équilibre de la flore et au renforcement de la muqueuse intestinale du fait des effets bénéfiques qu’ils apportent en termes de nutrition et de santé.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention a pour objet l’association ci-dessus, dans laquelle ledit mélange de probiotiques comprend (ou est constitué) :
  • de 55 % à 85 % en masse de la souche BIO 6870 deL. rhamnosus(autres numéros de collection à l’American Type Culture CollectionATCC ; Manassas, Virginie : ATCC53103, LMG18243) par rapport à la masse dudit mélange ;
  • de 10 % à 40 % en masse de la souche BIO 5478 deB. infantisdéposée à la CNCM sous le numéro CNCM I-5090 par rapport à la masse dudit mélange ; et
  • de 1 % à 30 % en masse de la souche BIO 5480 deB. bifidumdéposée à la CNCM sous le numéro CNCM I-5091 par rapport à la masse dudit mélange.
Par « de 55 % à 85 % en masse de la souche BIO 6870 deL. rhamnosus(autres numéros de collection à l’American Type Culture CollectionATCC ; Manassas, Virginie : ATCC53103, LMG18243) par rapport à la masse dudit mélange », on entend que la masse de la souche BIO 6870 deL. rhamnosuspar rapport à la masse dudit mélange peut être comprise de 55 % à 85 %, 60 % à 80 %, de 65 % à 75 %, de 55 % à 80 %, de 55 % à 75 %, de 55 % à 70 %, de 55 % à 65 %, de 55 % à 60 %, de 60 % à 85 %, de 65 % à 85 %, de 70 % à 85 %, de 75 % à 85 % ou de 80 % à 85 %. Cela signifie également qu’elle peut être de 55 %, 60 %, 65 %, 70 %, 75 %, 80 % ou 85 %.
Par « de 10 % à 40 % en masse de la souche BIO 5478 deB. infantisdéposée à la CNCM sous le numéro CNCM I-5090 par rapport à la masse dudit mélange », on entend que la masse de la souche BIO 5478 deB. infantis(CNCM I-5090) par rapport à la masse dudit mélange peut être comprise de 10 % à 40 %, de 15 % à 35 %, de 20 % à 30 %, de 10 % à 35 %, de 10 % à 30 %, de 10 % à 25 %, de 10 % à 20 %, de 10 % à 15 %, de 15 % à 40 %, de 20 % à 40 %, de 25 % à 40 %, de 30 % à 40 % ou de 35 % à 40 %. Cela signifie également qu’elle peut être de 10 %, 15 %, 20 %, 25 %, 30 %, 35 % ou 40 %.
Par « de 1 % à 30 % en masse de la souche BIO 5480 deB. bifidumdéposée à la CNCM sous le numéro CNCM I-5091 par rapport à la masse dudit mélange », on entend que la masse de la souche BIO 5480 deB. bifidum(CNCM I-5091) par rapport à la masse dudit mélange peut être comprise de 1 % à 30 %, de 5 % à 25 %, de 10 % à 20 %, de 1 % à 25 %, de 1 % à 20 %, de 1 % à 15 %, de 1 % à 10 %, de 1 % à 5 %, de 5 % à 30 %, de 10 % à 30 %, de 15 % à 30 %, de 20 % à 30 % ou de 25 % à 30 %. Cela signifie également qu’elle peut être de 1 %, 5 %, 10 %, 15 %, 20 %, 25 % ou 30 %.
Aussi et selon un autre mode de réalisation, l’invention a pour objet l’association ci-dessus, dans laquelle ledit mélange de probiotiques comprend (ou est constitué) :
  • de 60 % à 80 % en masse de la souche BIO 6870 deL. rhamnosus(autres numéros de collection à l’American Type Culture CollectionATCC ; Manassas, Virginie : ATCC53103, LMG18243) par rapport à la masse dudit mélange ;
  • de 15 % à 35 % en masse de la souche BIO 5478 deB. infantisdéposée à la CNCM sous le numéro CNCM I-5090 par rapport à la masse dudit mélange ; et
  • de 1 % à 15 % en masse de la souche BIO 5480 deB. bifidumdéposée à la CNCM sous le numéro CNCM I-5091 par rapport à la masse dudit mélange.
En particulier, l’invention a également pour objet l’association ci-dessus, dans laquelle ledit mélange de probiotiques comprend (ou est constitué) :
  • de 70 % en masse de la souche BIO 6870 deL. rhamnosus(autres numéros de collection à l’American Type Culture CollectionATCC ; Manassas, Virginie : ATCC53103, LMG18243) par rapport à la masse dudit mélange ;
  • de 25 % en masse de la souche BIO 5478 deB. infantisdéposée à la CNCM sous le numéro CNCM I-5090 par rapport à la masse dudit mélange ; et
  • de 5 % en masse de la souche BIO 5480 deB. bifidumdéposée à la CNCM sous le numéro CNCM I-5091 par rapport à la masse dudit mélange.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention a pour objet l’association ci-dessus, dans laquelle ledit mélange de probiotiques comprend (ou est constitué) :
  • soit des probiotiques viables lyophilisés, possiblement en huile, encapsulés, ou microencapsulés ;
  • soit des probiotiques viables dans des liquides, dans des gels ou dans des émulsions.
Toutefois, il convient de noter que l’invention ne se limite pas aux formulations susmentionnées et que d’autres formulations non citées peuvent être envisagées.
Par « viables », on entend que les probiotiques (bactéries) de l’invention ne sont ni tyndallisés, ni lysés, ni désactivés par un processus thermique, chimique ou mécanique, et qu’ils ne sont pas un extrait de bactéries mais des bactéries entières. Autrement dit, il s’agit de bactéries vivantes capables de coloniser un milieu, de s’y alimenter et notamment de s’y multiplier.
En particulier, l’invention a pour objet l’association ci-dessus, dans laquelle ledit mélange de probiotiques comprend (ou est constitué de) des probiotiques viables lyophilisés. En particulier, l’invention a également pour objet l’association ci-dessus, dans laquelle ledit mélange de probiotiques comprend (ou est constitué de) des probiotiques viables encapsulés ou microencapsulés. En particulier, l’invention a également pour objet l’association ci-dessus, dans laquelle ledit mélange de probiotiques comprend (ou est constitué de) des probiotiques viables sous forme active dans des huiles, des liquides, des gels ou des émulsions.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention a pour objet l’association ci-dessus, dans laquelle ledit mélange de probiotiques comprend (ou est constitué de) des probiotiques non viables, notamment des probiotiques sous forme tyndallisée, lysée, ou désactivée par un processus thermique, chimique ou mécanique,
et ne représentant qu’une partie de la cellule et non la bactérie entière. A noter que ces probiotiques non viables peuvent également être encapsulés, microencapsulés, dans des huiles, dans des liquides, dans des gels ou dans des émulsions.
Par « non viables » et par opposition à « viables », on entend que les probiotiques (bactéries) de l’invention sont tyndallisés, lysés, ou désactivés par un processus thermique, chimique ou mécanique, et qu’ils sont un extrait de fragments de bactéries. Autrement dit, il s’agit de morceaux de bactéries non vivants incapables de coloniser un milieu, de s’y alimenter et de s’y multiplier.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention a pour objet l’association ci-dessus, laquelle comprend l’un au moins des sécrétomes (ou des métabolites) produits par lesdits probiotiques.
Par « sécrétome », on entend l’ensemble des molécules organiques et inorganiques sécrétées par les probiotiques de l’invention. Par « métabolites », on entend les composés organiques issus du métabolisme des probiotiques de l’invention. Autrement dit, sécrétomes et métabolites constituent des post-biotiques, c’est-à-dire des produits dérivés de bactéries, tels que les acides aminés, les peptides et les vitamines, qui peuvent être utilisés pour améliorer la santé humaine.
Par « polyphénols », on entend une famille de molécules organiques largement présente dans le règne végétal, puisqu’issus du métabolisme secondaire des plantes. Ils sont caractérisés par la présence d’au moins deux groupes phénoliques associés en structures plus ou moins complexes. Ces composés, aux propriétés antioxydantes peuvent être purs ou contenu dans un extrait de plante. Il existe également des polyphénols semi-naturels (i.e.issus d’un végétal et transformés) ou synthétiques.
Aussi et selon un autre mode de réalisation, l’invention a pour objet l’association ci-dessus, dans laquelle ledit au moins un polyphénol est choisi parmi : un polyphénol naturel, un polyphénol semi-naturel et un polyphénol synthétique.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention a également pour objet l’association ci-dessus, dans laquelle ledit au moins un polyphénol est choisi parmi :
  • les dérivés d’acide cinnamique ;
  • les dérivés d’acide hydroxybenzoïque ;
  • les acides phénoliques ;
  • les flavanols ;
  • les flavonols ;
  • les flavones ;
  • les isoflavones ;
  • les stilbènes, en particulier le resvératrol et/ou le ptérostilbène ;
  • les lignanes ;
  • les lignines ;
  • les anthocyanines et les anthocyanidines, en particulier les Oligo-ProanthoCyanidines (OPC) ;
  • les tanins condensés ; et
  • leurs mélanges.
Par « leurs mélanges », on entend que l’invention peut mettre en œuvre un mélange de polyphénols choisis dans la liste ci-dessus. Par exemple, un tel mélange peut comprendre : un mélange de dérivés d’acide cinnamique et de flavanols ; ou un mélange de stilbènes, de lignanes et de lignines ;etc.Aussi et par « au moins un polyphénol », on entend que l’association peut comprendre deux, trois, quatre, cinq,etc., polyphénols en mélange. De préférence, les polyphénols de l’invention sont différents de la quercétine.
Par ailleurs et comme précédemment mentionné, ces polyphénols peuvent être issus de baies (myrtilles, cranberry), du thé vert et du café, du cactus, du raisin, de la vigne, de la grenade, des agrumes,etc.Selon un autre mode de réalisation, l’invention a donc pour objet l’association ci-dessus, dans laquelle ledit au moins un extrait de plante comprenant au moins un polyphénol est choisi parmi :
  • un extrait de baie, en particulier de myrtilles et/ou de cranberry ;
  • un extrait de thé, en particulier les extraits deCamellia Sinensis;
  • un extrait de café ;
  • un extrait de cacao ;
  • un extrait de chicorée ;
  • un extrait de cactus ;
  • un extrait de raisin, en particulier un extrait sec de pépins de raisinsVitis vinifera;
  • un extrait de vigne ;
  • un extrait de vin ;
  • un extrait de grenade ;
  • un extrait d’agrumes, en particulier d’orange et/ou de citron ;
  • un extrait huileux riche en polyphénols, en particulier l’huile d’olive ; et
  • un extrait de bois ;
  • un extrait de fruits ou de légumes riche en polyphénols, en particulier un extrait de brocoli, un extrait d’oignon et un extrait d’aubergine,
  • un extrait de noix ;
  • un extrait de lin ;
  • un extrait de curcuma ;
  • un extrait d’ail ;
  • un extrait de coriandre ;
  • un extrait de gingembre ; et
  • leurs mélanges,
et est de préférence un extrait sec de pépins de raisins (Vitis vinifera).
Par « leurs mélanges », on entend que l’invention peut mettre en œuvre un mélange d’extraits choisis dans la liste ci-dessus. Par exemple, un tel mélange peut comprendre : un mélange d’extrait de noix et de lin ; ou un mélange d’extrait de baies, de thé et de raisin ;etc.Aussi et par « au moins un extrait de plante comprenant au moins un polyphénol », on entend que l’association peut comprendre deux, trois, quatre, cinq,etc., extraits de plante comprenant au moins un polyphénol en mélange. De préférence, ces extraits sont exempts de quercétine ou sont préalablement traités de tel façon qu’ils n’en contiennent pas.
En particulier, un autre mode de réalisation de l’invention a pour objet l’association ci-dessus, dans laquelle ledit au moins un polyphénol est choisi parmi :
  • les dérivés d’acide cinnamique ;
  • les dérivés d’acide hydroxybenzoïque ;
  • les acides phénoliques ;
  • les flavanols ;
  • les flavonols ;
  • les flavones ;
  • les isoflavones ;
  • les stilbènes, en particulier le resvératrol et/ou le ptérostilbène ;
  • les lignanes ;
  • les lignines ;
  • les anthocyanines et les anthocyanidines, en particulier les Oligo-ProanthoCyanidines (OPC) ;
  • les tanins condensés ; et
  • leurs mélanges,
et/ou dans laquelle ledit au moins un extrait de plante comprenant au moins un polyphénol est choisi parmi :
  • un extrait de baie, en particulier de myrtilles et/ou de cranberry ;
  • un extrait de thé, en particulier les extraits deCamellia Sinensis;
  • un extrait de café ;
  • un extrait de cacao ;
  • un extrait de chicorée ;
  • un extrait de cactus ;
  • un extrait de raisin, en particulier un extrait sec de pépins de raisinsVitis vinifera;
  • un extrait de vigne ;
  • un extrait de vin ;
  • un extrait de grenade ;
  • un extrait d’agrumes, en particulier d’orange et/ou de citron ;
  • un extrait huileux riche en polyphénols, en particulier l’huile d’olive ; et
  • un extrait de bois ;
  • un extrait de fruits ou de légumes riche en polyphénols, en particulier un extrait de brocoli, un extrait d’oignon et un extrait d’aubergine,
  • un extrait de noix ;
  • un extrait de lin ;
  • un extrait de curcuma ;
  • un extrait d’ail ;
  • un extrait de coriandre ;
  • un extrait de gingembre ; et
  • leurs mélanges,
et est de préférence un extrait sec de pépins de raisinsVitis vinifera. Autrement dit, l’invention peut mettre en œuvre un mélange comprenant au moins un polyphénol et au moins un extrait de plante comprenant au moins un polyphénol.
De manière générale, un second objet de l’invention concerne une composition comprenant en tant que substance active l’association définie ci-dessus (ci-après association de l’invention), laquelle association est sous forme unitaire et à une dose comprise de 1 mg à 5 000 mg,
en combinaison avec un véhicule acceptable.
Alternativement, ce second objet concerne une composition comprenant l’association de l’invention, laquelle association est sous forme administrable à une dose comprise de 0,01 mg/kg à 50 mg/kg (rapportée à un Homme de 70 kg),
en combinaison avec un véhicule acceptable.
Par « véhicule acceptable », on entend toute matière qui est appropriée à une utilisation dans un produit nutraceutique ou pharmaceutique.
Par « sous forme administrable », on entend les compositions de l’invention sont administrables à l’Homme notamment par voie orale.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention a pour objet la composition ci-dessus, dans laquelle ledit mélange de probiotiques comprend de 107cfu à 1018cfu par g de ladite composition. Par « cfu », on entend l’abréviation de l’expression anglaiseColony Forming Unit(en français : Unité Formant Colonie) communément admise laquelle est un indicateur permettant de dénombrer la quantité de microorganismes.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention a pour objet la composition ci-dessus, dans laquelle ledit au moins un polyphénol et/ou ledit au moins un extrait de plante comprenant au moins un polyphénol est à une quantité comprise de 1 mg à 1 000 mg par g de ladite composition.
En particulier, un autre mode de réalisation de l’invention a pour objet la composition ci-dessus, dans laquelle ledit mélange de probiotiques comprend de 107cfu à 1018cfu par g de ladite composition,
et/ou dans laquelle ledit au moins un polyphénol et/ou ledit au moins un extrait de plante comprenant au moins un polyphénol est à une quantité comprise de 1 mg à 1 000 mg par g de ladite composition.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention a pour objet la composition ci-dessus, dans laquelle ladite association comprend au moins deux préparations différentes (i.e.distinctes), l’une comprenant ledit mélange de probiotiques et l’autre comprenant ledit au moins un polyphénol et/ou ledit au moins un extrait de plante comprenant au moins un polyphénol,
lesdites au moins deux préparations étant soit sous forme de préparations combinées, soit sous forme de préparations séparées.
Par « sous forme de préparations combinées », on entend que :
  • la préparation comprenant ledit mélange de probiotiques ; et
  • la préparation comprenant ledit au moins un polyphénol et/ou ledit au moins un extrait de plante comprenant au moins un polyphénol,
sont physiquement dans le même contenant et/ou la même formulation, par exemple une gélule.
Par « sous forme de préparations séparées », on entend que :
  • la préparation comprenant ledit mélange de probiotiques ; et
  • la préparation comprenant ledit au moins un polyphénol et/ou ledit au moins un extrait de plante comprenant au moins un polyphénol,
ne sont pas physiquement dans le même contenant et/ou la même formulation, par exemple dans deux gélules distinctes.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention a pour objet la composition ci-dessus, dans laquelle lesdites au moins préparations différentes, combinées ou séparées, ont une forme galénique choisie parmi : une gélule gastro-résistante, une microencapsulation, une capsule molle, une poudre, un liquide, un gel, une huile, un comprimé gastro-résistant et un sirop gastro-résistant.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention a pour objet la composition ci-dessus, dans laquelle lesdites au moins préparations différentes, combinées ou séparées, sont formulées sous la forme d’une denrée alimentaire, en particulier une pastille, un bonbon, un chocolat ou une gomme molle (gummies).
Selon un autre mode de réalisation, l’invention a pour objet la composition ci-dessus, laquelle comprend en outre d’autres principes actifs tels que :
  • d’autres probiotiques ;
  • des vitamines (vitamine A, vitamine C, vitamine D, vitamine E, vitamine K, vitamine B1, vitamine B2, vitamine B3, vitamine B5, vitamine B6, vitamine B8, vitamine B9, vitamine B12) ;
  • des acides aminés, en particulier des acides aminés essentiels (histidine, isoleucine, leucine, lysine, méthionine, phénylalanine, thréonine, tryptophane et la valine)
  • des sels minéraux (e.g.calcium, fer, magnésium et sodium) ;
  • etc.
L’invention regroupant un aspect nutraceutique et un aspect pharmaceutique, on comprend que de manière générale, un autre objet de l’invention concerne une composition nutraceutique comprenant en tant que substance active l’association de l’invention, laquelle association est sous forme unitaire et à une dose comprise de 1 mg à 400 mg,
en combinaison avec un véhicule nutraceutiquement acceptable.
Par « une dose comprise de 1 mg à 400 mg », on entend que cette dose peut être comprise de 1 mg à 400 mg, de 50 mg à 350 mg, de 100 mg à 300 mg, de 150 mg à 250 mg, de 1 mg à 350 mg, de 1 mg à 300 mg, de 1 mg à 250 mg, de 1 mg à 200 mg, de 1 mg à 150 mg, de 1 mg à 100 mg, de 1 mg à 50 mg, de 50 mg à 400 mg, de 100 mg à 400 mg, de 150 mg à 400 mg, de 200 mg à 400 mg, de 250 mg à 400 mg, de 300 mg à 400 mg ou de 350 mg à 400 mg. Cela signifie également qu’elle peut être de 1 mg, 50 mg, 100 mg, 150 mg, 200 mg, 250 mg, 300 mg, 350 mg ou 400 mg.
Par « véhicule nutraceutiquement acceptable », on entend toute matière qui est appropriée à une utilisation dans un produit nutraceutique. A titre de véhicule nutraceutiquement acceptable, on peut citer par exemple la maltodextrine, le phosphate dicalcique, le phosphate tricalcique, le phosphate de calcium, l’alginate de calcium, la carbonate de magnésium, l’acide stéarique, le stéarate de magnésium, le dioxyde de silicium, le chlorure de calcium, la gomme arabique, la gomme de cellulose, la gomme ou les fibres d’acacia, la farine de riz, la fécule de pommes de terre, l’amidon de maïs, l’amidon de riz, l’amidon de blé, l’amidon de pommes de terre, la fibre de pois, les triglycérides d’acides gras, la farine de coco, l’hydroxypropylméthylcellulose, la cellulose micro cristalline, la gélatine, la pectine, la cellulose, la silice, le glycérol, la glycérine, l’huile de tournesol, la lécithine de tournesol, la lécithine de soja, l’hypromellose, l’isomalt, les fibres d'avoine, la gomme gellane, la cire de carnauba, le pullulan,etc.
Alternativement, cet autre objet concerne une composition nutraceutique comprenant l’association de l’invention, laquelle association est sous forme administrable (e.g.par voie orale) à une dose comprise de 0,01 mg/kg à 5 mg/kg (rapportée à un Homme de 70 kg),
en combinaison avec un véhicule nutraceutiquement acceptable.
Par « une dose comprise de 0,01 mg/kg à 5 mg/kg », on entend que cette dose peut être comprise de 0,01 mg/kg à 5 mg/kg, de 0,1 mg/kg à 5 mg/kg, de 1 mg/kg à 5 mg/kg, de 2 mg/kg à 5 mg/kg, de 3 mg/kg à 5 mg/kg, de 4 mg/kg à 5 mg/kg, de 0,01 mg/kg à 4 mg/kg, de 0,01 mg/kg à 3 mg/kg, de 0,01 mg/kg à 2 mg/kg, de 0,01 mg/kg à 1 mg/kg, de 0,01 mg/kg à 0,1 mg/kg, de 0,1 mg/kg à 4 mg/kg ou de 1 mg/kg à 3 mg/kg. Cela signifie également qu’elle peut être de 0,01 mg/kg, 0,1 mg/kg, 1 mg/kg, 2 mg/kg, 3 mg/kg, 4 mg/kg ou 5 mg/kg.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention a pour objet la composition nutraceutique ci-dessus, dans laquelle ledit mélange de probiotiques comprend de 107cfu à 1012cfu par g de ladite composition nutraceutique.
Par « ledit mélange de probiotiques comprend de 107cfu à 1012cfu par g de ladite composition nutraceutique », on entend que la quantité de probiotiques par g de ladite composition nutraceutique peut être comprise de 107cfu à 1012cfu, de 108cfu à 1011cfu, de 109cfu à 1010cfu, de 107cfu à 1011cfu, de 107cfu à 1010cfu, de 107cfu à 109cfu, de 107cfu à 108cfu, de 108cfu à 1012cfu, de 109cfu à 1012cfu, de 1010cfu à 1012cfu ou de 1011cfu à 1012cfu. Cela signifie également qu’elle peut être de 107cfu, 108cfu, 109cfu, 1010cfu, 1011cfu ou 1012cfu par g de ladite composition nutraceutique.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention a pour objet la composition nutraceutique ci-dessus, dans laquelle ledit au moins un polyphénol et/ou ledit au moins un extrait de plante comprenant au moins un polyphénol est à une quantité comprise de 1 mg à 400 mg par g de ladite composition nutraceutique.
Par « une quantité comprise de 1 mg à 400 mg par g de ladite composition nutraceutique », on entend que la quantité dudit au moins un polyphénol et/ou dudit au moins un extrait de plante comprenant au moins un polyphénol par g de ladite composition nutraceutique peut être comprise de 1 mg à 400 mg, de 50 mg à 350 mg, de 100 mg à 300 mg, de 150 mg à 250 mg, de 1 mg à 350 mg, de 1 mg à 300 mg, de 1 mg à 250 mg, de 1 mg à 200 mg, de 1 mg à 150 mg, de 1 mg à 100 mg, de 1 mg à 50 mg, de 50 mg à 400 mg, de 100 mg à 400 mg, de 150 mg à 400 mg, de 200 mg à 400 mg, de 250 mg à 400 mg, de 300 mg à 400 mg ou de 350 mg à 400 mg. Cela signifie également qu’elle peut être de 1 mg, 50 mg, 100 mg, 150 mg, 200 mg, 250 mg, 300 mg, 350 mg ou 400 mg par g de ladite composition nutraceutique.
En particulier, un autre mode de réalisation, l’invention a pour objet la composition nutraceutique ci-dessus, dans laquelle ledit mélange de probiotiques comprend de 107cfu à 1012cfu par g de ladite composition nutraceutique,
et/ou dans laquelle ledit au moins un polyphénol et/ou ledit au moins un extrait de plante comprenant au moins un polyphénol est à une quantité comprise de 1 mg à 400 mg par g de ladite composition nutraceutique.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention a pour objet la composition nutraceutique ci-dessus, dans laquelle ladite association comprend au moins deux préparations différentes, l’une comprenant ledit mélange de probiotiques et l’autre comprenant ledit au moins un polyphénol et/ou ledit au moins un extrait de plante comprenant au moins un polyphénol,
lesdites au moins deux préparations étant soit sous forme de préparations combinées, soit sous forme de préparations séparées.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention a pour objet la composition nutraceutique ci-dessus, dans laquelle lesdites au moins préparations différentes, combinées ou séparées, ont une forme galénique choisie parmi : une gélule gastro-résistante, une microencapsulation, une capsule molle, une poudre, un liquide, un gel, une huile, un comprimé gastro-résistant et un sirop gastro-résistant.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention a pour objet la composition nutraceutique ci-dessus, dans laquelle lesdites au moins préparations différentes, combinées ou séparées, sont formulées sous la forme d’une denrée alimentaire, en particulier une pastille, un bonbon, un chocolat ou une gomme molle (gummies).
La composition nutraceutique de l’invention étant un complément alimentaire, on comprend que de manière générale un autre objet de l’invention concerne l’utilisation de la composition nutraceutique de l’invention chez un sujet sain, pour :
  • renforcer l’imperméabilité intestinale ;
  • améliorer l’état global de l’intestin et/ou l’absorption des nutriments ;
  • enrichir le microbiote intestinale ;
  • prévenir les troubles digestifs et/ou intestinaux ;
  • améliorer l’état de la peau ; du système nerveux ; des yeux ; des oreilles ; du cœur ; des os ; du système reproductif féminin ; du système reproductif masculin ; du foie ; des voies respiratoires ; des fonctions cognitives et/ou du microbiote cutanée, vaginale, buccale et/ou nasale ; et/ou
  • réguler la pousse des cheveux, des ongles et/ou la prise de poids.
Par « sujet sain », on entend un individu (homme, femme ou enfant) ne souffrant d’aucune pathologie nécessitant un suivant médical ponctuel et/ou régulier.
Selon un autre mode de réalisation, un autre objet de l’invention concerne l’utilisation ci-dessus, dans laquelle l’association de l’invention est administrée à une dose journalière comprise de 1 mg à 400 mg (en particulier sans limite de temps).
Par « dose journalière », on entend la dose administrée par jour (ou par 24 heures). Cette dose, comprise de 1 mg à 400 mg par jour, peut être administrée en une fois ou en plusieurs fois réparties sur la journée (par exemple à chaque repas). Par « comprise de 1 mg à 400 mg » on entend que cette dose journalière peut être comprise de 1 mg à 400 mg, de 50 mg à 350 mg, de 100 mg à 300 mg, de 150 mg à 250 mg, de 1 mg à 350 mg, de 1 mg à 300 mg, de 1 mg à 250 mg, de 1 mg à 200 mg, de 1 mg à 150 mg, de 1 mg à 100 mg, de 1 mg à 50 mg, de 50 mg à 400 mg, de 100 mg à 400 mg, de 150 mg à 400 mg, de 200 mg à 400 mg, de 250 mg à 400 mg, de 300 mg à 400 mg ou de 350 mg à 400 mg. Cela signifie également qu’elle peut être de 1 mg, 50 mg, 100 mg, 150 mg, 200 mg, 250 mg, 300 mg, 350 mg ou 400 mg.
Précédemment, il a été fait mention que l’invention regroupe un aspect nutraceutique et un aspect pharmaceutique. Aussi, on comprend que de manière générale, un autre objet de l’invention concerne une composition pharmaceutique comprenant en tant que substance active l’association de l’invention, laquelle association est sous forme unitaire et à une dose comprise de 500 mg à 5 000 mg,
en combinaison avec un véhicule pharmaceutiquement acceptable.
Par « une dose comprise de 500 mg à 5 000 mg » on entend que cette dose peut être comprise de 500 mg à 5 000 mg, de 1 000mg à 4 500 mg, de 1 500 mg à 4 000 mg, de 2 000 mg à 3 500 mg, de 2 500 mg à 3 000 mg, de 500 mg à 4 500 mg, de 500 mg à 4 000 mg, de 500 mg à 4 000 mg, de 500 mg à 3 500 mg, de 500 mg à 3 000 mg, de 500 mg à 2 500 mg, de 500 mg à 2 000 mg, de 500 mg à 1 500 mg, de 500 mg à 1 000 mg, de 1 000 mg à 5 000 mg, de 1 500 mg à 5 000 mg, de 2 000 mg à 5 000 mg, de 2 500 mg à 5 000 mg, de 3 000 mg à 5 000 mg, de 3 500 mg à 5 000 mg, de 4 000 mg à 5 000 mg ou de 4 500 mg à 5 000 mg. Cela signifie également qu’elle peut être de 500 mg, 1 000 mg, 1 500 mg, 2 000 mg, 2 500 mg, 3 000 mg, 3 500 mg, 4 000 mg, 4 500 mg ou 5 000 mg.
Par « véhicule pharmaceutiquement acceptable », on entend toute matière appropriée à une utilisation dans un produit pharmaceutique. A titre d’exemple de véhicule pharmaceutiquement acceptable, on peut citer la maltodextrine, le phosphate dicalcique, le phosphate tricalcique, le phosphate de calcium, l’alginate de calcium, la carbonate de magnésium, l’acide stéarique, le stéarate de magnésium, le dioxyde de silicium, le chlorure de calcium, la gomme arabique, la gomme de cellulose, la gomme ou les fibres d’acacia, la farine de riz, la fécule de pommes de terre, l’amidon de maïs, l’amidon de riz, l’amidon de blé, l’amidon de pommes de terre, la fibre de pois, les triglycérides d’acides gras, la farine de coco, l’hydroxypropylméthylcellulose, la cellulose micro cristalline, la gélatine, la pectine, la cellulose, la silice, le glycérol, la glycérine, l’huile de tournesol, la lécithine de tournesol, la lécithine de soja, l’hypromellose, l’isomalt, les fibres d'avoine, la gomme gellane, la cire de carnauba, le pullulan,etc.D’autres exemples de véhicules pharmaceutiquement acceptables sont choisis dans le groupe constitué des prolamines, c’est-à-dire des protéines de réserve accumulées par les plantes de la famille des Poacées comme les céréales.
Alternativement, cet autre objet concerne une composition pharmaceutique comprenant l’association de l’invention, laquelle association est sous forme administrable (e.g.par voie orale) à une dose comprise de 10 mg/kg à 50 mg/kg (rapportée à un Homme de 70 kg),
en combinaison avec un véhicule pharmaceutiquement acceptable.
Par « une dose comprise de 10 mg/kg à 50 mg/kg », on entend que cette dose peut être comprise de 10 mg/kg à 50 mg/kg, de 15 mg/kg à 45 mg/kg, de 20 mg/kg à 40 mg/kg, de 25 mg/kg à 35 mg/kg, de 10 mg/kg à 45 mg/kg, de 10 mg/kg à 40 mg/kg, de 10 mg/kg à 35 mg/kg, de 10 mg/kg à 30 mg/kg, de 10 mg/kg à 25 mg/kg, de 10 mg/kg à 20 mg/kg, de 10 mg/kg à 15 mg/kg, de 15 mg/kg à 50 mg/kg, de 20 mg/kg à 50 mg/kg, de 25 mg/kg à 50 mg/kg, de 30 mg/kg à 50 mg/kg, de 35 mg/kg à 50 mg/kg, de 40 mg/kg à 50 mg/kg ou de 45 mg/kg à 50 mg/kg. Cela signifie également qu’elle peut être de 10 mg/kg, 15 mg/kg, 20 mg/kg, 25 mg/kg, 30 mg/kg, 35 mg/kg, 40 mg/kg, 45 mg/kg ou 50 mg/kg.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention a pour objet la composition pharmaceutique ci-dessus, dans laquelle ledit mélange de probiotiques comprend de 1013cfu à 1018cfu par g de ladite composition pharmaceutique.
Par « ledit mélange de probiotiques comprend de 1013cfu à 1018cfu par g de ladite composition pharmaceutique », on entend que la quantité de probiotiques par g de ladite composition pharmaceutique peut être comprise de 1013cfu à 1018cfu, de 1014cfu à 1017cfu, de 1015cfu à 1016cfu, de 1013cfu à 1017cfu, de 1013cfu à 1016cfu, de 1013cfu à 1015cfu, de 1013cfu à 1014cfu, de 1014cfu à 1018cfu, de 1015cfu à 1018cfu, de 1016cfu à 1018cfu ou de 1017cfu à 1018cfu. Cela signifie également qu’elle peut être de 1013cfu, 1014cfu, 1015cfu, 1016cfu, 1017cfu ou 1018cfu par g de ladite composition pharmaceutique.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention a pour objet la composition pharmaceutique ci-dessus, dans laquelle ledit au moins un polyphénol est à une quantité comprise de 500 mg à 1 000 mg par g de ladite composition pharmaceutique.
Par « ledit au moins un polyphénol est à une quantité comprise de 500 mg à 1 000 mg par g de ladite composition pharmaceutique », on entend que la quantité dudit au moins un polyphénol et/ou dudit au moins un extrait de plante comprenant au moins un polyphénol par g de ladite composition pharmaceutique peut être comprise de 500 mg à 1 000 mg, de 550 mg à 950 mg, de 600 mg à 900 mg, de 650 mg à 850 mg, de 700 mg à 800 mg, de 500 mg à 950 mg, de 500 mg à 900 mg, de 500 mg à 850 mg, de 500 mg à 800 mg, de 500 mg à 750 mg, de 500 mg à 700 mg, de 500 mg à 650 mg, de 500 mg à 600 mg, de 500 mg à 550 mg, de 550 mg à 1 000 mg, de 600 mg à 1 000 mg, de 650 mg à 1 000 mg, de 700 mg à 1 000 mg, de 750 mg à 1 000 mg, de 800 mg à 1 000 mg, de 850 mg à 1 000 mg, de 900 mg à 1 000 mg, ou de 950 mg à 1 000 mg. Cela signifie également qu’elle peut être de 500 mg, 550 mg, 600 mg, 650 mg, 700 mg, 750 mg, 800 mg, 850 mg, 900 mg, 950 mg ou 1 000 mg par g de ladite composition pharmaceutique.
En particulier, un autre mode de réalisation de l’invention a pour objet la composition pharmaceutique ci-dessus, dans laquelle ladite association comprend au moins deux préparations différentes, l’une comprenant ledit mélange de probiotiques et l’autre comprenant ledit au moins un polyphénol et/ou ledit au moins un extrait de plante comprenant au moins un polyphénol,
lesdites au moins deux préparations étant soit sous forme de préparations combinées, soit sous forme de préparations séparées.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention a pour objet la composition pharmaceutique ci-dessus, dans laquelle lesdites au moins préparations différentes, combinées ou séparées, ont une forme galénique choisie parmi : une gélule gastro-résistante, une microencapsulation, une capsule molle, une poudre, un liquide, un gel, une huile, un comprimé gastro-résistant et un sirop gastro-résistant.
Selon un autre mode de réalisation, l’invention a pour objet la composition pharmaceutique ci-dessus, dans laquelle lesdites au moins préparations différentes, combinées ou séparées, sont formulées sous la forme d’une denrée alimentaire, en particulier une pastille, un bonbon, un chocolat ou une gomme molle (gummies).
La composition pharmaceutique de l’invention étant un médicament, on comprend que de manière générale un autre objet de l’invention la composition pharmaceutique de l’invention pour son utilisation chez un patient pour :
  • renforcer l’imperméabilité intestinale ;
  • améliorer l’état global de l’intestin et/ou l’absorption des nutriments ;
  • enrichir le microbiote intestinale ;
  • prévenir les troubles digestifs et/ou intestinaux ;
  • améliorer l’état de la peau ; du système nerveux ; des yeux ; des oreilles ; du cœur ; des os ; du système reproductif féminin ; du système reproductif masculin ; du foie ; des voies respiratoires ; des fonctions cognitives et/ou du microbiote cutanée, vaginale, buccale et/ou nasale ; et/ou
  • réguler la pousse des cheveux, des ongles et/ou la prise de poids.
Par « patient », on entend un individu (homme, femme ou enfant) souffrant d’une pathologie nécessitant un suivant médical ponctuel et/ou régulier
Selon un autre mode de réalisation, un autre objet de l’invention concerne la composition pharmaceutique de l’invention pour son utilisation ci-dessus, dans laquelle l’association de l’invention est administrée à une dose journalière comprise de 500 mg à 5 000 mg (en particulier sans limite de temps).
Par « dose journalière », on entend la dose administrée par jour (ou par 24 heures). Cette dose, comprise de 500 mg à 5 000 mg par jour, peut être administrée en une fois ou en plusieurs fois réparties sur la journée (par exemple à chaque repas). Par « comprise de 500 mg à 5 000 mg » on entend que cette dose peut être comprise de 500 mg à 5 000 mg, de 1 000mg à 4 500 mg, de 1 500 mg à 4 000 mg, de 2 000 mg à 3 500 mg, de 2 500 mg à 3 000 mg, de 500 mg à 4 500 mg, de 500 mg à 4 000 mg, de 500 mg à 4 000 mg, de 500 mg à 3 500 mg, de 500 mg à 3 000 mg, de 500 mg à 2 500 mg, de 500 mg à 2 000 mg, de 500 mg à 1 500 mg, de 500 mg à 1 000 mg, de 1 000 mg à 5 000 mg, de 1 500 mg à 5 000 mg, de 2 000 mg à 5 000 mg, de 2 500 mg à 5 000 mg, de 3 000 mg à 5 000 mg, de 3 500 mg à 5 000 mg, de 4 000 mg à 5 000 mg ou de 4 500 mg à 5 000 mg. Cela signifie également qu’elle peut être de 500 mg, 1 000 mg, 1 500 mg, 2 000 mg, 2 500 mg, 3 000 mg, 3 500 mg, 4 000 mg, 4 500 mg ou 5 000 mg.
A tout égard, il convient de noter que les différents aspects de l’invention, ainsi que les différents modes de réalisation de celle-ci sont interdépendants. Ces derniers peuvent donc être combinés entre eux pour obtenir des aspects et/ou des modes de réalisation préférés de l’invention non explicitement décrits. Ceci est également valable pour l’ensemble des définitions fourni dans la présente description, lequel s’applique à tous les aspects de l’invention et ses modes de réalisation. A titre d’exemple, les quantités de probiotiques et/ou de polyphénols dans les compositions de l’invention peuvent être celles de l’association de l’invention.
En outre, la présente invention est illustrée, sans toutefois s’y limiter, par les Figures et Exemples suivants.
LISTE DES FIGURES
La représente une photographie des tubes après incubation à 30°C sans agitation pendant 18 heures. Le tube de gauche (‘MCLG’) comprend du milieu DMEM Avec un indicateur coloré de l'activité métabolique des souches, à base de phénol sans bactérie et les trois tubes de droite comprennent respectivement de gauche à droite la soucheB. bifidum, le soucheB. infantiset la soucheL rhamnosus. A noter que le milieu DMEM comprend un indicateur coloré de l'activité métabolique des souches à base de phénol et qu’un changement de couleur témoigne de la présence de souches vivantes.
La représente la cinétique de prolifération des bactériesL. rhamnosusdans du milieu DMEM à 30°C. Les valeurs représentent le nombre de pixels ayant un indice de réfraction entre 1,341 et 1,346.
La représente la cinétique de prolifération des bactériesB. infantisdans du milieu DMEM à 30°C. Les valeurs représentent le nombre de pixels ayant un indice de réfraction entre 1,341 et 1,346.
La représente la cinétique de prolifération des bactériesB. bifidumdans du milieu DMEM à 30°C. Les valeurs représentent le nombre de pixels ayant un indice de réfraction entre 1,341 et 1,346.
La représente des microphotographies des bactériesL rhamnosusà T0 à 1 mg/mL dans du DMEM (A) et après 2 heures (B) d’incubation à 30°C. L’image représente des indices de réfraction des bactéries, ce qui a permis d’évaluer le nombre des bactéries à partir des pixels ayant un indice de réfraction entre 1,341 et 1,346.
La représente l’effet de l’extrait deVitis viniferaseul (VV) et de l’extrait deVitis viniferaen association avec un mélange de milieux de culture bactériens filtrés (VV+B) sur la TEER. Les résultats sont exprimés en % de la TEER initiale de l’insert. Des lettres différentes indiquent des différences significatives au seuil de p<0.05.
La représente l’effets de différentes concentrations de l’extrait deVitis viniferaseul (VV1, VV2) ou en présence d’un mélange de milieux de culture bactériens filtrés (VV1B, VV2B). Des lettres différentes indiquent des différences significatives au seuil de p<0.05.
EXEMPLES
Potentialisation d’un extrait de Vitis vinifera et de souches bactériennes probiotiques sur la TEER.
MATÉRIELS & MÉTHODES
Traitement des cellules.
Les études ont été réalisées sur la souche Caco 2 dans le milieu DMEM (Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium, 4,5 g/L, Sigma Aldrich) complémenté avec 10 % de sérum de veau (PAA Laboratories) plus antibiotiques : streptomycine pénicilline (100 units/mL, Sigma Aldrich). Les cellules ont été ensemencées sur des inserts (Reiner, 12 wells, membrane 0.4μm) 600 000 cellules par insert et conservées au minimum 3 semaines afin d’obtenir une TEER significative et stable. Le milieu de culture a été changé trois fois par semaine.
Protocole expérimental.
Les solutions testées ont été préparées extemporanément. Le milieu de culture a été retiré de l’insert. Un stress mécanique provoque une diminution de la TEER (transepithelial electric resistance). Les variations de la TEER ont été mesurées en réponse aux différentes solutions testées : une solution contrôle (C), une solution comprenant un extrait deVitis vinifera L., une solution comprenant un mélange de milieux de culture bactériens filtrés (cf. Traitement des bactériesci-après) et une solution comprenant un extrait deVitis vinifera L.et un mélange de milieux de culture bactériens filtrés (cf. Traitement des bactériesci-après).
La TEER a été mesurée à l’aide du millicell (ERS-2 Millipore) avant et une heure après le traitement. Les résultats ont été exprimés en % de la TEER initiale.
Analyses statistiques.
Les données sont présentées sous forme de moyennes plus ou moins l’erreur standard sur la moyenne (SEM). L’analyse statistique a été réalisée à l’aide du logiciel Statview 4 pour Windows, par un test d’analyse de variance one way ANOVA suivi d’un testpost hocFisher, protected least significance difference [PLSD]. Les différences ont été établies différentes au seuil de p<0.05.
Traitement des bactéries.
Les bactéries ont été mises en solution dans du DMEM (4,5 g/L glucose) incubées sans agitation à 30°C pendant 18 heures. Les solutions ont été filtrées à 0,2 μm et les solutions conservées à 4°C. Un mélange a été réalisé aux proportions de 70 %, 25 % et 5 % respectivement pourL. rhamnosus(souche BIO 6870 ; LMG18243 anciennement ATCC53103),B. infantis(souche BIO 5478 ; CNCM I-5090) etB. bifidum(souche BIO 5480 ; CNCM I-5091). Une quantité de 20 μL/mL de ce mélange a été testée. Ce protocole a été décidé pour deux raisons.
La première est qu’il n’est pas possible de mettre les bactéries en contact direct avec les cellules intestinales dans un modèlein vitro. En effet, il ne serait plus possible de les retirer du milieu de culture et les bactéries se mettraient à proliférer et finiraient par tuer les cellules, altérant la TEER et empêchant toute conclusion.
La seconde est que dans les conditions physiologiques, les bactéries ne sont jamais en contact direct avec les entérocytes, ceux-ci étant protégés par une couche de mucus. C’est donc ce qui est secrété par les bactéries qui agit sur les entérocytes et non le contact direct des bactéries sur ceux-ci.
Finalement, tester le milieu produit par les bactéries a donc été une stratégie plus proche des conditions physiologiques que le contact direct des cellules avec celles-ci.
RÉSULTATS
Croissance bactérienne dans du DMEM
Les bactéries des différentes souches ont été placées à 2 mg/mL dans du DMEM à 30°C sans agitation pendant 18 heures. A l’issue de cette incubation, un changement de couleur significatif des tubes comprenant les bactéries a été observé par rapport au tube sans bactérie ( ). En effet, le milieu contrôle (tube ‘MCLG’ à gauche) est rouge (gris sombre sur la photographie en noir et blanc), dû à la présence de phénol, marqueur de pH alors que la couleur des tubes comprenant les bactéries est davantage jaune orangé (nuance de gris clair sur la photographie en noir et blanc). Ce changement de couleur (donc de pH) a donc mis en évidence l’activité métabolique des bactéries et leur capacité à vivre et croître dans le milieu de culture.
Pour preuve, après avoir décidé de mesurer la prolifération bactérienne en utilisant un microscope qui mesure les indices de réfractions (Nanolive), les données brutes ci-après ont été obtenues, à partir desquelles une cinétique de prolifération a pu être construite pour chacune des souches (Figures 2 à 4).
L. rhamnosus
(souche BIO 6870 ; LMG18243) 		B. infantis
(souche BIO 5478 ; CNCM I-5090) 		B. bifidum
(souche BIO 5480 ; CNCM I-5091)
0 3202 8345 3994
10 4159 10837 8368
20 5504 13385 11337
30 6491 14628 13855
40 7657 14995 18333
50 9871 16090 21986
60 10369 16412 23825
70 11843 18390 23890
80 12992 18736 23169
90 13495 20569 23191
100 14950 23299 25604
110 15050 23807 25518
120 14952 25210 20588
Tableau 1. Evolution du nombre de pixels ayant un indice de réfraction entre 1,341 et 1,346 en fonction du temps (min), caractérisant la présence des souches de probiotiques de l’invention.
Finalement, ces premières données ont démontré que les souches de probiotiques de l’invention à savoir :
  • L. rhamnosus(souche BIO 6870 ; LMG18243 anciennement ATCC53103) ;
  • B. infantis(souche BIO 5478 ; CNCM I-5090) ; et
  • B. bifidum(souche BIO 5480 ; CNCM I-5091),
prolifèrent dans le milieu de culture DMEM. Ceci a d’ailleurs été confirmé par la prise de microphotographies ( ).
Effet de l’extrait de Vitis vinifera L. sur la TEER, en présence ou non de solution issue de bactéries
Après avoir mis en œuvre le protocole expérimental décrit ci-dessus, une première série de données a été obtenue (Tableau 2).
Répétitions C VV VV+B Bact
1 67,9 75,4 81,6 79,9
2 65,6 70,2 79,9 62,0
3 70,6 69,7 79,1 76,0
4 78,1 78,3 82,9 77,7
Moyenne 70,5 73,4 80,9 73,9
SEM 2,7 2,1 0,9 4,0
Tableau 2. Valeurs des TEER après différent traitements. Les mesures ont été réalisées une heure après le traitement.
C : contrôle, VV : extrait de Vitis vinifera, VV+B : extrait de Vitis viniferas + mélange de milieux de culture bactériens filtrés et Bact : mélange de milieux de culture bactériens filtrés.
Il a été observé que le mélange de milieux de culture bactériens filtrés n’a pas exercé d’effet significatif sur les TEER (73,9 ± 4,0) par rapport aux contrôles (70,5 ± 2,7). L’extrait deVitis viniferaseul n’a également pas eu d’effet sur la TEER (73,4 ± 2,1). A la différence de ces derniers, l’association d’un extrait deVitis viniferaet d’un mélange de milieux de culture bactériens filtrés a eu un effet significatif sur la TEER (80,9 ± 0,9) comparé à celui des témoins (70,5 ± 2,7) ( ).
Fort de ce premier résultat, il a été décidé d’optimiser la concentration de l’antioxydant (i.e.extrait deVitis vinifera). Pour cela, le même protocole expérimental a été mis en œuvre, dans lequel deux concentrations différentes de l’extrait deVitis viniferaont été testées : 10 µM (VV1) et 20 μM (VV2) seules ou en présence de la même quantité de mélange de milieux de culture bactériens filtrés (20 μL/mL, 70% : 25% : 5%,L. rhamnosus:B. infantis:B. bifidumrespectivement) (VV1B, VV2B). Une seconde série de données a ainsi été obtenue (Tableau 3).
Répétitions C B VV1 VV1B VV2 VV2B
1 73,7 70,5 56,7 90,0 73,7 104,7
2 84,2 85,5 88,9 86,1 82,4 91,3
3 81,4 81,8 88,2 94,3 85,3 82,9
4 85,2 81,7 86,6 86,9 90,6 90,6
5 80,9 69,1 78,3 90,5 78,2 84,4
6 72,5 77,3 74,8 77,7 76,8 82,9
Moyenne 79,7 77,7 78,9 87,6 81,2 89,5
SEM 2,2 2,7 5,0 2,3 2,5 3,4
Tableau 3. Valeurs des TEER après différents traitements. Les mesures ont été réalisées une heure après le traitement : VV1 = extrait deVitis vinifera10 μM et VV2 = extrait deVitis vinifera20 μM.
C : contrôle, B : mélange de milieux de culture bactériens filtrés, VV1 : extrait de Vitis vinifera 10 µM, VV1B : extrait de Vitis viniferas 10 µM + mélange de milieux de culture bactériens filtrés, VV2 : extrait de Vitis vinifera 20 µM et VV2B : extrait de Vitis viniferas 20 µM + mélange de milieux de culture bactériens filtrés.
La plus forte concentration en extrait deVitis vinifera, a augmenté les TEER par rapport au contrôle. Le mélange de milieux de culture bactériens filtrés n’a eu aucun effet sur les TEER. Enfin, les associations VV1B et VV2B ont eu un effet par rapport au contrôle ( ).
Finalement, ces résultats ont permis de mettre en évidence l’existence d’une synergie inattendue des effets de l’extrait deVitis viniferaen association avec un mélange de milieux de culture bactériens filtrés issu de l’incubation des bactériesL. rhamnosus,B.infantisetB. bifidumsur la TEER. Cet effet bénéfique observé peut donc être exploité pour fournir de nouveaux compléments alimentaires (compositions nutraceutiques) et/ou de nouvelles compositions pharmaceutiques.

Claims (10)

  1. Association comprenant :
    • un mélange de probiotiques comprenant :
      • la souche BIO 6870 deL. rhamnosus(autres numéros de collection à l’American Type Culture CollectionATCC ; Manassas, Virginie : ATCC53103, LMG18243) ;
      • la souche BIO 5478 deB. infantisdéposée à la CNCM sous le numéro CNCM I-5090 ; et
      • la souche BIO 5480 deB. bifidumdéposée à la CNCM sous le numéro CNCM I-5091,
    et
    • au moins un polyphénol et/ou au moins un extrait de plante comprenant au moins un polyphénol.
  2. Association selon la revendication 1, dans laquelle ledit mélange de probiotiques comprend :
    • de 55 % à 85 % en masse de la souche BIO 6870 deL. rhamnosus(autres numéros de collection à l’American Type Culture CollectionATCC ; Manassas, Virginie : ATCC53103, LMG18243) par rapport à la masse dudit mélange ;
    • de 10 % à 40 % en masse de la souche BIO 5478 deB. infantisdéposée à la CNCM sous le numéro CNCM I-5090 par rapport à la masse dudit mélange ; et
    • de 1 % à 30 % en masse de la souche BIO 5480 deB. bifidumdéposée à la CNCM sous le numéro CNCM I-5091 par rapport à la masse dudit mélange.
  3. Association selon la revendication 1 ou 2, dans laquelle ledit mélange de probiotiques comprend :
    • soit des probiotiques viables lyophilisés, possiblement en huile, encapsulés, ou microencapsulés ;
    • soit des probiotiques viables dans des liquides, dans des gels ou dans des émulsions.
  4. Association selon l’une quelconque des revendications 1 à 3, dans laquelle ledit au moins un polyphénol est choisi parmi :
    • les dérivés d’acide cinnamique ;
    • les dérivés d’acide hydroxybenzoïque ;
    • les acides phénoliques ;
    • les flavanols ;
    • les flavonols ;
    • les flavones ;
    • les isoflavones ;
    • les stilbènes, en particulier le resvératrol et/ou le ptérostilbène ;
    • les lignanes ;
    • les lignines ;
    • les anthocyanines et les anthocyanidines, en particulier les Oligo-ProanthoCyanidines (OPC) ;
    • les tanins condensés ; et
    • leurs mélanges,
    et/ou dans laquelle ledit au moins un extrait de plante comprenant au moins un polyphénol est choisi parmi :
    • un extrait de baie, en particulier de myrtilles et/ou de cranberry ;
    • un extrait de thé, en particulier les extraits deCamellia Sinensis;
    • un extrait de café ;
    • un extrait de cacao ;
    • un extrait de chicorée ;
    • un extrait de cactus ;
    • un extrait de raisin, en particulier un extrait sec de pépins de raisinsVitis vinifera;
    • un extrait de vigne ;
    • un extrait de vin ;
    • un extrait de grenade ;
    • un extrait d’agrumes, en particulier d’orange et/ou de citron ;
    • un extrait huileux riche en polyphénols, en particulier l’huile d’olive ; et
    • un extrait de bois ;
    • un extrait de fruits ou de légumes riche en polyphénols, en particulier un extrait de brocoli, un extrait d’oignon et un extrait d’aubergine,
    • un extrait de noix ;
    • un extrait de lin ;
    • un extrait de curcuma ;
    • un extrait d’ail ;
    • un extrait de coriandre ;
    • un extrait de gingembre ; et
    • leurs mélanges,
    et est de préférence un extrait sec de pépins de raisinsVitis vinifera.
  5. Composition nutraceutique comprenant en tant que substance active l’association selon l’une quelconque des revendications 1 à 4, laquelle association est sous forme unitaire et à une dose comprise de 1 mg à 400 mg,
    en combinaison avec un véhicule nutraceutiquement acceptable.
  6. Composition nutraceutique selon la revendication 5, dans laquelle ledit mélange de probiotiques comprend de 107cfu à 1012cfu par g de ladite composition nutraceutique,
    et/ou dans laquelle ledit au moins un polyphénol et/ou ledit au moins un extrait de plante comprenant au moins un polyphénol est à une quantité comprise de 1 mg à 400 mg par g de ladite composition nutraceutique.
  7. Composition nutraceutique selon la revendication 5 ou 6, dans laquelle ladite association comprend au moins deux préparations différentes, l’une comprenant ledit mélange de probiotiques et l’autre comprenant ledit au moins un polyphénol et/ou ledit au moins un extrait de plante comprenant au moins un polyphénol,
    lesdites au moins deux préparations étant soit sous forme de préparations combinées, soit sous forme de préparations séparées.
  8. Composition nutraceutique selon la revendication 7, dans laquelle lesdites au moins préparations différentes, combinées ou séparées, ont une forme galénique choisie parmi : une gélule gastro-résistante, une microencapsulation, une capsule molle, une poudre, un liquide, un gel, une huile, un comprimé gastro-résistant et un sirop gastro-résistant.
  9. Composition nutraceutique selon la revendication 7, dans laquelle lesdites au moins préparations différentes, combinées ou séparées, sont formulées sous la forme d’une denrée alimentaire, en particulier une pastille, un bonbon, un chocolat ou une gomme molle.
  10. Utilisation de la composition nutraceutique selon l’une quelconque des revendications 5 à 9 chez un sujet sain, pour :
    • renforcer l’imperméabilité intestinale ;
    • améliorer l’état global de l’intestin et/ou l’absorption des nutriments ;
    • enrichir le microbiote intestinale ;
    • prévenir les troubles digestifs et/ou intestinaux ;
    • améliorer l’état de la peau ; du système nerveux ; des yeux ; des oreilles ; du cœur ; des os ; du système reproductif féminin ; du système reproductif masculin ; du foie ; des voies respiratoires ; des fonctions cognitives et/ou du microbiote cutanée, vaginale, buccale et/ou nasale ; et/ou
    • réguler la pousse des cheveux, des ongles et/ou la prise de poids.
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