HK192595A - Recombinant plasmids useable for the expression of heterologous proteins in bacillus - Google Patents

Recombinant plasmids useable for the expression of heterologous proteins in bacillus

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HK192595A
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mature
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psm
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HK192595A
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Toma Salvatore
Grandi Guido
Colletti Elisabetta
Riboli Barbara
Cosmina Paola
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Eniricerche S.P.A.
Sclavo S.P.A.
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Claims (25)

  1. Vektor, der für die Clonierung einer ein heterologes Protein codierenden DNA-Sequenz nützlich ist, dadurch gekennzeichnet, daß er die Ursprünge für die funktionelle Replikation in Bacillus und in Escherichia coli, die Gene, die die Resistenz gegenüber den Antibiotika Kanamycin, Ampicillin und Chloramphenicol codieren, und einen starken künstlichen Promotor enthält, der die Transkription einer dicistronischen Messenger-RNA kontrolliert, die die Resistenz gegenüber Ampicillin und Chloramphenicol codiert.
  2. Vektor nach Anspruch 1, in dem der Ursprung für die funktionelle Replikation in Bacillus der vom Plasmid pUB110 ist.
  3. Vektor nach Anspruch 1, in dem der Ursprung für die funktionelle Replikation in Escherichia coli der vom Plasmid pBR322 ist.
  4. Vektor nach Anspruch 1, in dem die Nucleotidsequenz des künstlichen Promotors die folgende ist:
  5. Vektor nach Anspruch 1, in dem die DNA-Sequenz ein immunologisch oder biologisch aktives Protein codiert.
  6. Vektor nach Anspruch 5, in dem das heterologe Protein eine reife Untereinheit des Pertussistoxins ist.
  7. Vektor nach Anspruch 1, hinterlegt als Bacillus subtilis SMS 118 (pSM 214) (ATCC 67320).
  8. Rekombinantes Plasmid, das für die Expression eines heterologen Proteins nützlich ist, erhalten durch die Entfernung des β-Lactamasegens mit EcoRI- und HindIII-Restriktionsenzymen aus dem Clonierungsvektor gemäß der Definition in den Ansprüchen 1 bis 7, und die Clonierung von DNA-Sequenzen, die das heterologe Protein codieren, in die Restriktionsstellen.
  9. Rekombinantes Plasmid nach Anspruch 8, wobei das heterologe Protein eine Untereinheit von Pertussistoxin ist.
  10. Rekombinantes Plasmid pSM226 (ATCC 67321) nach Anspruch 9, in dem die DNA-Sequenz die reife S2-Untereinheit codiert.
  11. Rekombinantes Plasmid pSM228 (ATCC 67322) nach Anspruch 9, in dem die DNA-Sequenz die reife S3-Untereinheit codiert.
  12. Rekombinantes Plasmid pSM244 (ATCC 67324) nach Anspruch 9, in dem die DNA-Sequenz die reife S4-Untereinheit codiert.
  13. Rekombinantes Plasmid pSM243 (ATCC 67323) nach Anspruch 9, in dem die DNA-Sequenz die reife S5-Untereinheit codiert.
  14. Mikroorganismus, der mit einem rekombinanten Plasmid nach den Ansprüchen 8 bis 13 transformiert ist.
  15. Mikroorganismus nach Anspruch 14, ausgewählt aus Escherichia coli und Bacillus subtilis.
  16. Mikroorganismus nach Anspruch 15, nämlich Bacillus subtilis SMS 118.
  17. Bacillus subtilis SMS 118 (pSM226) (ATCC 67321).
  18. Bacillus subtilis SMS 118 (pSM228) (ATCC 67322).
  19. Bacillus subtilis SMS 118 (pSM244)(ATCC 67324).
  20. Bacillus subtilis SMS 118 (pSM243) (ATCC 67323).
  21. Verfahren zur Herstellung von heterologen Proteinen, dadurch gekennzeichnet, daß ein gemäß den Ansprüchen 14 bis 20 transformierter Mikroorganismus in einem Flüssigmedium, das Stickstoff-, Kohlenstoffquellen und Mineralsalze enthält, in Gegenwart von Chloramphenicol gezüchtet wird.
  22. Verfahren nach Anspruch 21, in dem der Mikroorganismus B. subtilis SMS 118 (pSM226) (ATCC 67321) ist und das heterologe Protein die reife S2-Untereinheit ist.
  23. Verfahren nach Anspruch 21, in dem der Mikroorganismus B. subtilis SMS 118 (pSM228) (ATCC 67322) ist und das heterologe Protein die reife S3-Untereinheit ist.
  24. Verfahren nach Anspruch 21, in dem der Mikroorganismus B. subtilis SMS 118 (pSM244) (ATCC 67324) ist und das heterologe Protein die reife S4-Untereinheit ist.
  25. Verfahren nach Anspruch 21, in dem der Mikroorganismus B. subtilis SMS 118 (pSM243) (ATCC 67323) ist und das heterologe Protein die reife S5-Untereinheit ist.
HK192595A 1987-03-03 1995-12-21 Recombinant plasmids useable for the expression of heterologous proteins in bacillus HK192595A (en)

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