HK192595A - Recombinant plasmids useable for the expression of heterologous proteins in bacillus - Google Patents

Recombinant plasmids useable for the expression of heterologous proteins in bacillus

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HK192595A
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HK192595A
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Ada Velati Bellini
Toma Salvatore
Grandi Guido
Colletti Elisabetta
Riboli Barbara
Cosmina Paola
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Eniricerche S.P.A.
Sclavo S.P.A.
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Claims (25)

  1. Vecteur utile pour le clonage d'une séquence d'ADN codant pour une protéine hétérologue, caractérisé en ce qu'il contient les origines de réplication fonctionnelle que l'on trouve dans Bacillus et dans Escherichia coli, les gènes qui codent pour la résistance aux antibiotiques comprenant la kanamycine, l'ampicilline et le chloramphénicol, et un puissant promoteur artificiel qui contrôle la transcription d'un ARN messager dicistronique, codant pour la résistance à l'ampicilline et au chloramphénicol.
  2. Vecteur selon la revendication 1, dans lequel l'origine de réplication fonctionnelle que l'on trouve dans Bacillus est celle du plasmide pUB110.
  3. Vecteur selon la revendication 1, dans lequel l'origine de réplication fonctionnelle que l'on trouve dans Escherichia coli est celle du plasmide pBR322.
  4. Vecteur selon la revendication 1, dans lequel la séquence nucléotidique du promoteur artificiel, est :
  5. Vecteur selon la revendication 1, dans lequel la séquence d'ADN code pour une protéine immunologiquement ou biologiquement active.
  6. Procédé selon la revendication 5, dans lequel la protéine hétérologue est une sous-unité mature de la toxine coquelucheuse.
  7. Vecteur selon la revendication 1, déposé en tant que Bacillus subtilis SMS 118 (pSM 214) (ATCC 67320).
  8. Plasmide recombinant, utile pour l'expression d'une protéine hétérologue, obtenu par retrait à partir du vecteur de clonage, défini dans les revendications 1 à 7, du gène de la β-lactamase, à l'aide des enzymes de restriction EcoRI et HindIII, et clonage des séquences d'ADN codant pour la protéine hétérologue dans les sites de restriction.
  9. Plasmide recombinant selon la revendication 8, dans lequel la protéine hétérologue est une sous-unité de la toxine coquelucheuse.
  10. Plasmide recombinant pSM226 (ATCC 67321) selon la revendication 9, dans lequel la séquence d'ADN code pour la sous-unité mature S2.
  11. Plasmide recombinant pSM228 (ATCC 67322) selon la revendication 9, dans lequel la séquence d'ADN code pour la sous-unité mature S3.
  12. Plasmide recombinant pSM244 (ATCC 67324) selon la revendication 9, dans lequel la séquence d'ADN code pour la sous-unité mature S4.
  13. Plasmide recombinant PSM243 (ATCC 67323) selon la revendication 9, dans lequel la séquence d'ADN code pour la sous-unité mature S5.
  14. Micro-organisme transformé avec un plasmide recombinant défini dans les revendications 8 à 13.
  15. Micro-organisme selon la revendication 14, choisi parmi Escherichia coli et Bacillus subtilis.
  16. Micro-organisme selon la revendication 15, qui est Bacillus subtilis SMS 118.
  17. Bacillus subtilis SMS 118 (pSM226) (ATCC 67321).
  18. Bacillus subtilis SMS 118 (pSM228) (ATCC 67322).
  19. Bacillus subtilis SMS 118 (pSM244) (ATCC 67324).
  20. Bacillus subtilis SMS 118 (pSM243) (ATCC 67323).
  21. Procédé de préparation de protéines hétérologues, caractérisé en ce qu'on cultive un micro-organisme transformé selon les revendications 14 à 20, dans un milieu liquide contenant des sources d'azote, de carbone et des sels minéraux, en présence de chloramphénicol.
  22. Procédé selon la revendication 21, dans lequel le micro-organisme est B. subtilis, SMS 118 (pSM226) (ATCC 67321), et la protéine hétérologue est la sous-unité S2 mature.
  23. Procédé selon la revendication 21, dans lequel le micro-organisme est B. subtilis, SMS 118 (pSM228) (ATCC 67322), et la protéine hétérologue est la sous-unité S3 mature.
  24. Procédé selon la revendication 21, dans lequel le micro-organisme est B. subtilis, SMS 118 (pSM244) (ATCC 67324), et la protéine hétérologue est la sous-unité S4 mature.
  25. Procédé selon la revendication 21, dans lequel le micro-organisme est B. subtilis, SMS 118 (pSM243) (ATCC 67323), et la protéine hétérologue est la sous-unité S5 mature.
HK192595A 1987-03-03 1995-12-21 Recombinant plasmids useable for the expression of heterologous proteins in bacillus HK192595A (en)

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