HUP0200103A2

HUP0200103A2 - Eljárás vírus-inaktivált humán gamma-globulin G előállítására

Info

Publication number: HUP0200103A2
Application number: HU0200103A
Authority: HU
Inventors: Teresa López Hernández; Francisco Rabaneda Giménez; Pere Ristol Debart
Original assignee: Probitas Pharma, S.A.
Priority date: 2001-01-17
Filing date: 2002-01-10
Publication date: 2003-08-28
Also published as: HU228252B1; ES2184594B1; EP1225180A2; UY27126A1; HUP0200103A3; US20020151688A1; DE60224310T2; SK582002A3; PT1225180E; US6875848B2; MXPA02000639A; CZ300413B6; AR032242A1; DE60224310D1; JP2003002896A; EP1225180A3; ES2295308T3; CZ2002131A3; EP1225180B1; JP4070468B2

Abstract

A találmány tárgya eljárás vírus-inaktivált humán gamma-globulin Gelőállítására, amely szerint a gamma-globulint etanollal történőfrakcionálással elválasztott frakcióból extrahálják szénhidrátjelenlétében, majd PEG-gel csökkentik a szennyeződések mennyiségét,felviszik egy anioncserélő oszlopra, egy elfolyó folyadékot kapnak,amelynek PEG-tartalmát ezt követően ultraszűréssel csökkentik és afolyadékot betöményítik. Ezután egymást követően egy opcionáliskezelést végeznek savas pH-n, majd legalább egy vírus-inaktiválólépést, amely pasztőrözésből és oldószer/detergens eleggyel valókezelésből áll, ezután a terméket kicsapják és PEG-gel mossák, hogyeltávolítsák a kémiai vírus-inaktiváló reagenseket, majdszolubilizálással és a pH-t megváltoztatva a fehérje szennyeződéseketis, végül ultraszűréssel tisztítják, majd adott esetben vírusszűrésthajtanak végre és ezután 5% vagy 10% fehérje értékre valóbetöményítést végeznek. Ó

Claims

Szabadalmi igénypontok

1. Eljárás vírus-inaktivált humán gamma-globulin G előállítására, azzal jellemezve, hogy a gamma-globulint etanollal történő frakcionálással elválasztott frakcióból extraháljuk szénhidrát jelenlétében, majd PEG-gel csökkentjük a szennyeződések mennyiségét, felvisszük egy anioncserélő oszlopra, elfolyó folyadékot kapunk, amelynek PEG-tartalmát ezt követően ultraszűréssel csökkentjük és a folyadékot betöményítjük, hogy egymást követően egy opcionális kezelést végezzünk savas pH-η, majd legalább egy vírus-inaktiváló lépést, amely pasztőrözésből és oldószer/detergens eleggyel való kezelésből áll, ezután a terméket kicsapjuk és PEG-gel mossuk, hogy eltávolítsunk bármilyen kémiai vírusinaktiváló reagenst, majd szolubilizálással és a pH-t megváltoztatva a fehérje szennyeződéseket is, végül ultraszűréssel tisztítjuk, hogy csökkentsük a térfogatot és a PEG-tartalmat, majd adott esetben vírus-szűrést hajtunk végre és ezután 5 vagy 10 % fehérje értékre való betöményítést végzünk.
2. Az 1. igénypont szerinti eljárás vírus-inaktivált humán gamma-globulin G előállítására, azzal jellemezve, hogy az etanolos frakcionálással elkülönített frakció előnyösen a ll+lll-as frakció.
3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás vírus-inaktivált humán gammaglobulin G előállítására, azzal jellemezve, hogy a szénhidrát előnyösen cukoralkohol, előnyösebben egy 2 és 10 tömeg% közötti koncentrációjú szorbit.
4. Az 1-3. igénypontok bármelyike szerinti eljárás vírus-inaktivált humán gamma-globulin G előállítására, azzal jellemezve, hogy a PEG-gel történő csapadékképzést 2,5 - 5,5 tömeg% koncentráción és 4,8 - 5,5 pH-η végezzük.
5. Az 1-4. igénypontok bármelyike szerinti eljárás vírus-inaktivált humán gamma-globulin G előállítására, azzal jellemezve, hogy a gyantaoszlopra injektált oldat pH-ját 5,7 és 6,3 közé állítjuk be.
6. Az 1-5. igénypontok bármelyike szerinti eljárás vírus-inaktivált humán gamma-globulin G előállítására, azzal jellemezve, hogy az anioncserélő oszlop előnyösen DEAE-agaróz gyantát tartalmaz és 1 és 2,5 g közötti mennyiségű ll+lll frakció/ml gyanta töltet bevitelét teszi lehetővé.
7. Az 1-6. igénypontok bármelyike szerinti eljárás vírus-inaktivált humán gamma-globulin G előállítására, azzal jellemezve, hogy az oszlopról elfolyó folyadékot 100 kDa névleges molekuláris vágási értékű membránokon keresztül ultraszűrjük, előnyösen nem kevesebb, mint 3 térfogatnyi olyan oldattal szemben diaszűrjük, amely egy cukoralkoholt, előnyösen 2-10 tömeg/térfogat% koncentrációjú szorbitot tartalmaz, és a szűrést 4,0 - 4,8 pH-η és 120 kPa alatti transzmembrán-nyomáson végezzük.
8. Az 1-7. igénypontok bármelyike szerinti eljárás vírus-inaktivált humán gamma-globulin G előállítására, azzal jellemezve, hogy a tetszés szerinti savas kezelést előnyösen 3,95 - 4,05 pH-értéken, 35-38 °C-on, 1-4 órán keresztül végezzük egy cukoralkohol, előnyösen 2-10 tömeg/térfogat% koncentrációjú szorbit jelenlétében.
9. Az 1-8. igénypontok bármelyike szerinti eljárás vírus-inaktivált humán gamma-globulin G előállítására, azzal jellemezve, hogy a cukoralkohol, előnyösen 25-35 tömeg% koncentrációjú szorbit jelenlétében végzett pasztőrözés után injekcióhoz használatos vízzel hígítást végzünk 25 tömeg% vagy kevesebb cukoralkohol koncentrációra és 1 és 3 tömeg/térfogat% közötti fehérje koncentrációra, mielőtt a kémiai inaktiváló kezelést az oldószer/detergens eleggyel elvégezzük.
10. Az 1-9. igénypontok bármelyike szerinti eljárás vírus-inaktivált humán gamma-globulin G előállítására, azzal jellemezve, hogy az oldószer/detergens eleggyel vírus-inaktivált oldatot injekcióhoz használatos vízzel felhígítjuk, előnyösen minden kg oldathoz 1-2 kg-ot adva, és amint a pH-t 7,0 és 9,0 közötti értékre, előnyösen 7,8 és 8,4 közötti értékre beállítottuk, csapadékképzést végzünk PEG hozzáadásával, 12 és 17 tömeg% közötti végső koncentrációra.
11. Az 1-10. igénypontok bármelyike szerinti eljárás vírus-inaktivált humán gamma-globulin G előállítására, azzal jellemezve, hogy a PEG-gel kapott csapadék szuszpenzióját egy előnyösen 0,1 - 0,45 mikron pórusméretű, tangenciális áramú szűrőmembránon elválasztjuk, a térfogat kiindulási értékének 4-8-adára történő csökkentése segítségével.
12. Az 1-11. igénypontok bármelyike szerinti eljárás vírus-inaktivált humán gamma-globulin G előállítására, azzal jellemezve, hogy a tangenciális áramú szűrőmembrán segítségével visszatartott, PEG-gel képezett csapadékot ugyanabban a készülékben mossuk, előnyösen 4 vagy több térfogatnyi olyan oldat adagolásával, amely a csapadékképzés körülményeivel azonos vagy ahhoz hasonló tulajdonságú összetétellel rendelkezik.
13. Az 1-12. igénypontok bármelyike szerinti eljárás vírus-inaktivált humán gamma-globulin G előállítására, azzal jellemezve, hogy a kimosott, PEG-gel képezett csapadék szuszpenzióját ugyanabban a tangenciális áramú szűrőkészülékben tesszük oldhatóvá 5,5 alatti pH-jú savas oldat adagolásával, amely oldat egy szénhidrátot tartalmaz, előnyösen ecetsavval előállítva, 1 mM - 10 mM-ra beállított koncentráción, amelyhez előnyösen 5-20 tömeg% cukoralkoholt adunk, előnyösen lúggal 4,0 - 4,5 pH-értékre beállítva.
14. Az 1-13. igénypontok bármelyike szerinti eljárás vírus-inaktivált humán gamma-globulin G előállítására, azzal jellemezve, hogy a PEG-gel készített, kimosott csapadék szuszpenziójához adandó, savas szolubilizáló oldat az említett szuszpenzió mennyiségének 2,5 - 4,5-szerese, így a PEG végső koncentrációja 2 és 4 tömeg%, előnyösen 2,8 és 3,4 tömeg% között van, és a szénhidrát, előnyösen a cukoralkohol koncentrációja 5-20 tömeg%.
15. Az 1-14. igénypontok bármelyike szerinti eljárás vírus-inaktivált humán gamma-globulin G előállítására, azzal jellemezve, hogy a szolubilizált terméket 7,5 - 8,5 pH-értékre állítjuk be lúg hozzáadásával, majd az oldhatatlan nagy molekulatömegű aggregátumokat kicsapjuk, és előnyösen szűréssel elválasztjuk.
16. Az 1-15. igénypontok bármelyike szerinti eljárás vírus-inaktivált humán gamma-globulin G előállítására, azzal jellemezve, hogy a nagy molekulatömegű aggregátumoktól lényegében mentes szűrletet diaszűrjük, és 100 kDa névleges molekuláris vágási értékű ultraszűrő membránokon keresztül betöményítjük, amint a pH-t 4,0 - 4,8-ra beállítottuk, előnyösen egy olyan oldat nem kevesebb, mint 5 térfogatnyi mennyiségére vonatkozóan, amely oldat egy cukoralkoholt, előnyösen 2-10 tömeg/térfogat% szorbitot tartalmaz és a szűrést 120 kPa alatti transzmembrán-nyomáson végezzük, és a fehérje koncentráció 1-3 tömeg/térfogat%.
17. Az 1-16. igénypontok bármelyike szerinti eljárás vírus-inaktivált humán gamma-globulin G előállítására, azzal jellemezve, hogy a diaszűrt és előnyösen ΙΟ tömeg/térfogat% fehérjére betöményített, 4,4 és 5,0 közötti pH-ra beállított oldatot előnyösen 25 ± 5 °C-ra melegítjük, majd adott esetben nanoszűréssel történő vírus-elválasztást végzünk olyan membránokon keresztül, amelyek 50 nm vagy kisebb, előnyösen körülbelül 20 nm névleges pórusméretűek, a fehérje 90 %nál nagyobb menyiségének a visszanyerésével és 1 kg fehérje/m² terület szűrési termelékenységgel, vagy szintén előnyösen 15 és 20 nm közötti névleges pórusméretűek, 80 % feletti fehérje visszanyeréssel.
18. Az 1-17. igénypontok bármelyike szerinti eljárás vírus-inaktivált humán gamma-globulin G előállítására, azzal jellemezve, hogy a diaszűrt és adott esetben vírus-szűrt oldatot ultraszűréssel betöményítjük egy 100 kDa névleges molekuláris vágási értékkel rendelkező vagy kisebb pórusméretű membránon keresztül, előnyösen 5-10 tömeg/térfogat% értékre, és a pH 5-6 értékre történő beállítása, tisztítás és steril szűrés után a végső tartályban lévő oldat több, mint 99 %, előnyösen több, mint 99,9 % monomer-dimer molekulaformát tartalmaz látható részecskék nélkül és 5 NTU-nál kisebb zavarossággal, az IgA (0,003 mg/ml-nél kevesebb) és IgM (0,002 mg/ml-nél kevesebb) kimutatható mennyisége nélkül, a PEG-tartalom 500 ppm alatt van, a nem-ionos detergens 50 ppm-nél kevesebb, kimutathatatlan szerves oldószerrel (3,6 ppm-nél kevesebb), az antikomplement aktivitás kevesebb, mint 1 CH50/mg fehérje, az Fc fragmenssel rendelkező teljes molekuláris szerkezet 100% feletti, és az IgG alosztályok megoszlásának fiziológiai tartományával.
19. Az 1-18. igénypontok bármelyike szerinti eljárás vírus-inaktivált humán gamma-globulin G előállítására, azzal jellemezve, hogy a becsomagolt végtermék minimum 15-napos karanténon megy át 25 °C-on, az oldat átlátszónak bizonyul és látszólag mentes a látható részecskéktől, és 2 - 8 °C tartósítási hőmérsékleten, egészen 25 °C-ig stabil.
20. Vírus-inaktivált humán gamma-globulin G, amely az 1-19. igénypontok szerinti eljárásnak megfelelően van előállítva.

A meghatalmazott

Τ' X p.

GÖDÖLLE, KÉKES, MÉSZÁROS & SZABÓ Szabadalmi és Védjegy Iroda

1024 Budapest, Keleti Károly u. 13/b Frankné dr. Machytka Daisy szabadalmi ügyvivő