HUP0303902A2 - Interleukin-18-indukáló anyag - Google Patents
Interleukin-18-indukáló anyag Download PDFInfo
- Publication number
- HUP0303902A2 HUP0303902A2 HU0303902A HUP0303902A HUP0303902A2 HU P0303902 A2 HUP0303902 A2 HU P0303902A2 HU 0303902 A HU0303902 A HU 0303902A HU P0303902 A HUP0303902 A HU P0303902A HU P0303902 A2 HUP0303902 A2 HU P0303902A2
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- interleukin
- whey protein
- inducing
- protein hydrolysate
- hydrolysate
- Prior art date
Links
- 102000003810 Interleukin-18 Human genes 0.000 title claims abstract description 94
- 108090000171 Interleukin-18 Proteins 0.000 title claims abstract description 94
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 title claims abstract description 67
- 108010046377 Whey Proteins Proteins 0.000 claims abstract description 73
- 235000021119 whey protein Nutrition 0.000 claims abstract description 73
- 102000007544 Whey Proteins Human genes 0.000 claims abstract description 72
- 239000003531 protein hydrolysate Substances 0.000 claims abstract description 46
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 36
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims abstract description 11
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 claims abstract description 10
- 239000004365 Protease Substances 0.000 claims description 27
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 claims description 23
- 102100037486 Reverse transcriptase/ribonuclease H Human genes 0.000 claims description 20
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 18
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 17
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 17
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 16
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 14
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 claims description 14
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 claims description 14
- 102000004157 Hydrolases Human genes 0.000 claims description 13
- 108090000604 Hydrolases Proteins 0.000 claims description 13
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 claims description 9
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 claims description 9
- 244000063299 Bacillus subtilis Species 0.000 claims description 8
- 235000014469 Bacillus subtilis Nutrition 0.000 claims description 8
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 8
- 239000000413 hydrolysate Substances 0.000 claims description 5
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 claims description 5
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 claims description 4
- 239000008267 milk Substances 0.000 claims description 4
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 claims description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 32
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 22
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 18
- 235000019419 proteases Nutrition 0.000 description 17
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 15
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 15
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 15
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 14
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 11
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 11
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 11
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 11
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 10
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 9
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 9
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 9
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 9
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 9
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 9
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 102000014171 Milk Proteins Human genes 0.000 description 8
- 108010011756 Milk Proteins Proteins 0.000 description 8
- 235000021239 milk protein Nutrition 0.000 description 8
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 8
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 7
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 7
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 7
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 7
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 6
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 6
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 6
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 6
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 6
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 6
- 238000011160 research Methods 0.000 description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 5
- 230000008569 process Effects 0.000 description 5
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 5
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 5
- 108010009736 Protein Hydrolysates Proteins 0.000 description 4
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 4
- 239000002775 capsule Substances 0.000 description 4
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 4
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 4
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 4
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 4
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 description 4
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 4
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 4
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 3
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 3
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 3
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 3
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 3
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 3
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 3
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 3
- 235000019256 formaldehyde Nutrition 0.000 description 3
- 229960004279 formaldehyde Drugs 0.000 description 3
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 3
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 3
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 3
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 description 3
- 210000002490 intestinal epithelial cell Anatomy 0.000 description 3
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 3
- -1 pH regulators Substances 0.000 description 3
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 3
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 3
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 3
- 235000020183 skimmed milk Nutrition 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 3
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 3
- 102000003390 tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 3
- 108010004032 Bromelains Proteins 0.000 description 2
- 108010076119 Caseins Proteins 0.000 description 2
- 108010071942 Colony-Stimulating Factors Proteins 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 108010059378 Endopeptidases Proteins 0.000 description 2
- 102000005593 Endopeptidases Human genes 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000015696 Interleukins Human genes 0.000 description 2
- 108010063738 Interleukins Proteins 0.000 description 2
- 240000002605 Lactobacillus helveticus Species 0.000 description 2
- 235000013967 Lactobacillus helveticus Nutrition 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 2
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 description 2
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 2
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 2
- 230000003266 anti-allergic effect Effects 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 2
- 235000019835 bromelain Nutrition 0.000 description 2
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 2
- 108010079058 casein hydrolysate Proteins 0.000 description 2
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 2
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 2
- 235000020247 cow milk Nutrition 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 2
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 2
- 208000026278 immune system disease Diseases 0.000 description 2
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 2
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 2
- 230000031037 interleukin-18 production Effects 0.000 description 2
- 229940054346 lactobacillus helveticus Drugs 0.000 description 2
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 description 2
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 description 2
- 229940055729 papain Drugs 0.000 description 2
- YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N phenylmethanesulfonyl fluoride Chemical compound FS(=O)(=O)CC1=CC=CC=C1 YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 2
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 description 2
- BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L potassium carbonate Substances [K+].[K+].[O-]C([O-])=O BWHMMNNQKKPAPP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 description 2
- 108010043393 protease N Proteins 0.000 description 2
- 229910001220 stainless steel Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000010935 stainless steel Substances 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 125000006325 2-propenyl amino group Chemical group [H]C([H])=C([H])C([H])([H])N([H])* 0.000 description 1
- TYMLOMAKGOJONV-UHFFFAOYSA-N 4-nitroaniline Chemical compound NC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 TYMLOMAKGOJONV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012935 Averaging Methods 0.000 description 1
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 1
- 238000011725 BALB/c mouse Methods 0.000 description 1
- 241000186000 Bifidobacterium Species 0.000 description 1
- 241000186012 Bifidobacterium breve Species 0.000 description 1
- 241001608472 Bifidobacterium longum Species 0.000 description 1
- 102000007644 Colony-Stimulating Factors Human genes 0.000 description 1
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 description 1
- LEVWYRKDKASIDU-QWWZWVQMSA-N D-cystine Chemical compound OC(=O)[C@H](N)CSSC[C@@H](N)C(O)=O LEVWYRKDKASIDU-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 1
- 206010012438 Dermatitis atopic Diseases 0.000 description 1
- 208000030453 Drug-Related Side Effects and Adverse reaction Diseases 0.000 description 1
- 239000004097 EU approved flavor enhancer Substances 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 208000004262 Food Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- 206010016946 Food allergy Diseases 0.000 description 1
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 1
- 101000960954 Homo sapiens Interleukin-18 Proteins 0.000 description 1
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 description 1
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 1
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 1
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 1
- 102000000589 Interleukin-1 Human genes 0.000 description 1
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 description 1
- 102000003814 Interleukin-10 Human genes 0.000 description 1
- 108090000174 Interleukin-10 Proteins 0.000 description 1
- 102000013462 Interleukin-12 Human genes 0.000 description 1
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 description 1
- 102000003816 Interleukin-13 Human genes 0.000 description 1
- 108090000176 Interleukin-13 Proteins 0.000 description 1
- 102000004388 Interleukin-4 Human genes 0.000 description 1
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 1
- 102000000743 Interleukin-5 Human genes 0.000 description 1
- 108010002616 Interleukin-5 Proteins 0.000 description 1
- 102000004890 Interleukin-8 Human genes 0.000 description 1
- 108090001007 Interleukin-8 Proteins 0.000 description 1
- 238000007696 Kjeldahl method Methods 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 241000186660 Lactobacillus Species 0.000 description 1
- 244000199885 Lactobacillus bulgaricus Species 0.000 description 1
- 235000013960 Lactobacillus bulgaricus Nutrition 0.000 description 1
- 241000194036 Lactococcus Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 108010058846 Ovalbumin Proteins 0.000 description 1
- 108010067372 Pancreatic elastase Proteins 0.000 description 1
- 102000016387 Pancreatic elastase Human genes 0.000 description 1
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 1
- 206010039085 Rhinitis allergic Diseases 0.000 description 1
- 108010022999 Serine Proteases Proteins 0.000 description 1
- 102000012479 Serine Proteases Human genes 0.000 description 1
- 244000057717 Streptococcus lactis Species 0.000 description 1
- 235000014897 Streptococcus lactis Nutrition 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 230000000172 allergic effect Effects 0.000 description 1
- 201000010105 allergic rhinitis Diseases 0.000 description 1
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000000845 anti-microbial effect Effects 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 1
- 201000008937 atopic dermatitis Diseases 0.000 description 1
- 208000010668 atopic eczema Diseases 0.000 description 1
- 229940009291 bifidobacterium longum Drugs 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 239000013592 cell lysate Substances 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- OIQPTROHQCGFEF-UHFFFAOYSA-L chembl1371409 Chemical compound [Na+].[Na+].OC1=CC=C2C=C(S([O-])(=O)=O)C=CC2=C1N=NC1=CC=C(S([O-])(=O)=O)C=C1 OIQPTROHQCGFEF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 1
- 229940047120 colony stimulating factors Drugs 0.000 description 1
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 description 1
- 229960003067 cystine Drugs 0.000 description 1
- 230000016396 cytokine production Effects 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007123 defense Effects 0.000 description 1
- 229960003964 deoxycholic acid Drugs 0.000 description 1
- KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N deoxycholic acid Chemical compound C([C@H]1CC2)[C@H](O)CC[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H]([C@@H](CCC(O)=O)C)[C@@]2(C)[C@@H](O)C1 KXGVEGMKQFWNSR-LLQZFEROSA-N 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 230000000857 drug effect Effects 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 229940066758 endopeptidases Drugs 0.000 description 1
- 230000007071 enzymatic hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006047 enzymatic hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 239000010200 folin Substances 0.000 description 1
- 235000020932 food allergy Nutrition 0.000 description 1
- 238000004186 food analysis Methods 0.000 description 1
- 235000019264 food flavour enhancer Nutrition 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 239000007903 gelatin capsule Substances 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000008240 homogeneous mixture Substances 0.000 description 1
- 102000043959 human IL18 Human genes 0.000 description 1
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 1
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 208000030603 inherited susceptibility to asthma Diseases 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 229960003130 interferon gamma Drugs 0.000 description 1
- 230000014828 interferon-gamma production Effects 0.000 description 1
- 229940047124 interferons Drugs 0.000 description 1
- 229940076144 interleukin-10 Drugs 0.000 description 1
- 229940117681 interleukin-12 Drugs 0.000 description 1
- 229940028885 interleukin-4 Drugs 0.000 description 1
- 229940100602 interleukin-5 Drugs 0.000 description 1
- 229940096397 interleukin-8 Drugs 0.000 description 1
- XKTZWUACRZHVAN-VADRZIEHSA-N interleukin-8 Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@@H](NC(C)=O)CCSC)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N1[C@H](CCC1)C(=O)N1[C@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@H](CO)C(=O)N1[C@H](CCC1)C(N)=O)C1=CC=CC=C1 XKTZWUACRZHVAN-VADRZIEHSA-N 0.000 description 1
- 229940047122 interleukins Drugs 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 210000004347 intestinal mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 210000002510 keratinocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000001865 kupffer cell Anatomy 0.000 description 1
- 229940039696 lactobacillus Drugs 0.000 description 1
- 229940004208 lactobacillus bulgaricus Drugs 0.000 description 1
- 239000007937 lozenge Substances 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 239000004570 mortar (masonry) Substances 0.000 description 1
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 1
- 239000002674 ointment Substances 0.000 description 1
- 210000002997 osteoclast Anatomy 0.000 description 1
- 229940092253 ovalbumin Drugs 0.000 description 1
- 235000020030 perry Nutrition 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 229910000027 potassium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000008476 powdered milk Nutrition 0.000 description 1
- 238000003825 pressing Methods 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 230000026011 regulation of ossification Effects 0.000 description 1
- 238000005316 response function Methods 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 1
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 1
- 230000005740 tumor formation Effects 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
- 235000008939 whole milk Nutrition 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/01—Hydrolysed proteins; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/01—Hydrolysed proteins; Derivatives thereof
- A61K38/012—Hydrolysed proteins; Derivatives thereof from animals
- A61K38/018—Hydrolysed proteins; Derivatives thereof from animals from milk
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P33/00—Antiparasitic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Immunology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Zoology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
A találmány tárgyát aktív összetevőként tejsavóprotein-hidrolizátumottartalmazó interleukin-18-indukáló anyag képezi. A találmány szerintihidrolizátum készítésekor a tejsavóproteint előnyösen 20-30%-osmértékig hidrolizálják, majd a hidrolizátumból egy 10 000 D fölöttimolekulatömegű frakciót eltávolítanak ultraszűréses eljárással, és akapott hidrolizátum IL-18-indukáló anyagként alkalmazható. Ó
Description
··
Interleukin-18-indukáló anyag
A találmány tárgyát aktív összetevőként tejsavóprotein-hidrolizátumot tartalmazó interleukin-18-indukáló anyag képezi.
A találmány szerinti hidrolizátum készítésekor a tej savóproteint előnyösen 20-30%-os mértékig hidrolizáljuk, majd a hidrolizátumból egy 10.000 D fölötti molekulatömegű frakciót eltávolítunk ultraszűréses eljárással, és a kapott hidrolizátum IL-18 idukáló anyagként alkalmazható.
Általánosságban elfogadott, hogy a hematopoetikus sejtek növekedéséhez és differenciálódásához specifikus növekedési- és differenciálódási faktorokra van szükség. Az érett vérsejtek, pl. a vörösvérsejtek, granulociták, makrofágok, acidofil sejtek, vérlemezkék és limfociták kialakulásához vezető folyamatban nagyszámú differenciálódási és növekedési faktor vesz részt.
Másrészt az élő szervezet immunválasszal reagál a baktériumok vagy vírusok okozta fertőzésre, a daganatképződésre, a citotoxikus hatásokra stb. Az immunválaszt a benne részt vevő immunsejtek közötti közvetett és közvetlen kölcsönhatások befolyásolják. Az utóbbi években a daganatterápiával kapcsolatos kutatásokban az immunrendszer működésére ható, az idegen anyagok elleni védekezőképességet javító immunmodulátor anyagokra terelődött a figyelem.
Az összefoglalóan „citokineknek” nevezett anyagokról [ide tartoznak pl. az interleukinok, a kolónia stimuláló faktorok, a tumomekrózis faktor (TNF) és az interferonok] egymás után kiderült, hogy részt vesznek a differenciálódásban, a növekedésben és az immunválaszfunkciókban. A citokinek gyógyászati készítményként történő alkalmazására szolgáló eljárások érdekében géntechnológiai úton történő előállításukra is kísérleteket tettek.
Az interleukin-18 (a továbbiakban esetenként „IL-18”) az immunrendszerbeli információátvivő anyagok egyike. Ezt a citokint az első leírásokban még interferon-γ indukáló faktornak nevezték [8-27189, 8-191098, 9-289896 számú japán nyitott szabadalmi bejelentések; Nature 378, 6552 (1995)], de a későbbiekben már az „IL-18” megnevezést alkalmazták rá [Journal of Immunology 156, 4274 (1996)].
Az interleukin-18 szerkezetileg az interleukin-1 családba tartozó protein, amely funkcionálisan az interleukin-12-vel rokon. Az interleukin-18 a T-sejtek és a „natural killer” sejtek interferon-γ termelésének erőteljes indukálószere. Emellett az interleukin-18 indukálni képes a
-2granulocita-makrofág kolónia stimuláló faktor, a tumornekrózis faktor, az interleukin-4, az interleukin-5, az interleukin-8, az interleukin-10 és az interleukin 13 termelését is. Az interleukin-18 mindezeken túl fokozza a „natural killer” sejtek citotoxicitását és proliferációját [Macrophage Journal 6, 5 (1999)]; Kohei Miyazono és Kazuo Sugamura: „Cytokine and Growth Factor, Revised Edition”, pp. 46-47. kiad.: Yodosha (1998)]. A interleukin emellett elnyomja az osteoclastok kialakulását és feltételezhetően közvetlenül szerepet játszik a csontképzés szabályozásában [New Function of Cytokine and Life Phenomenon”, Special Issue of „Experimental Medicine”, 18. kötet, pp. 178-179., szerk.: Atsushi Miyajima, kiad.: Yodosha (2000)]. A fenti jellemzőinek köszönhetően az interleukin-18 allergiaellenes-, gyulladáscsökkentő-, vírusellenes-, antimikrobiális-, daganatellenes ágensként és immunológiai megbetegedések terápiájára történő alkalmazásával kapcsolatban előrehaladott kutatások folynak.
A jelenlegi kutatások egy része az interleukin-18 erős interferon-γ indukáló hatásával kapcsolatos. Jelentős kutatásokat végeznek továbbá az immunológiai megbetegedések terápiájában és megelőzésében feltehetően lényegi szerepet betöltő, a citokin in vivo vagy in vitro indukálásáért vagy amplifikálásáért felelős faktorral kapcsolatban is. Ez idáig már számos citokin-indukáló faktorról beszámoltak. A kutatások eredményeként sikeresen meghatározták egyes citokin-indukáló faktorok szerkezetét és működését, és ezen alapulva különböző megbetegedések kezelésére szolgáló, kereskedelmi forgalomban kapható gyógyászati készítményeket hoztak létre, amelyek az orvoslásban jelenleg is alkalmaznak.
Ezzel szemben a fentiekben említett gyógyászati készítményekben alkalmazott indukáló faktorok szinte mindegyike csupán a készítmény parenterális beadásakor fejti ki hatását, így a gyógyászati kezelés alkalmazását a beadási mód és a vele járó esetleges nem kívánatos gyógyszerreakciók vagy mellékhatások korlátozzák.
A találmány tárgyát hatását szájon át történő beadás esetén kifejtő interleukin-18indukáló szer képezi, amely beadási mód csak elvétve vált ki nem kívánatos gyógyszerreakciót és amely pl. antiallergén hatással is rendelkezik.
A tejprotein citokin-képződésre gyakorolt hatására vonatkozó, a citokin indukáló faktorok keresésére irányuló kutatásaink eredményeként kimutattuk, hogy a tejsavóprotein-hidrolizátum elősegíti az interleukin-18 képződését.
A fentiekben felvetett problémára megoldást kínáló találmányunk tárgyát a következők képezik.
(1) Interleukin- 18-indukáló anyag, amely aktív összetevőként interleukin-18-indukáló hatású, tej savóprotein hidrolázzal végzett hidrolizálásával nyert tejsavóprotein-hidrolizátumot tartalmaz.
(2) Az (1) szerinti interleukin-18-indukáló anyag, amely anyag előállítására alkalmazott hidroláz a következők közül egy vagy több lehet: Bacillus subtilis proteáz, tejsavbaktériumproteáz, állati- vagy növényi eredetű proteáz.
(3) Az (1) vagy (2) szerinti interleukin-18-indukáló anyag, amely esetében a tejsavóprotein-hidrolizátum hidrolízisének aránya 20-30% közötti.
(4) Az (1) - (3) bármelyike szerinti interleukin-18-indukáló anyag, amelynek előállítása során egy 10.000 D molekulatömegű frakció eltávolításra került a tejsavóprotein-hidrolizátumból.
(5) A (4) szerinti interleukin-18-indukáló anyag, amelynek előállítása során a 10.000 D molekulatömegű frakció ultraszűréssel lett eltávolítva a tejsavóprotein-hidrolizátumból.
(6) Az (1)-(5) bármelyike szerinti interleukin-18-indukáló anyag, amely legalább 0,1 tömeg százalékban tartalmaz tejsavóprotein-hidrolizátumot.
(7) Eljárás interleukin-18-indukáló hatással rendelkező tejsavóprotein-hidrolizátum előállítására, amely során tej savóproteint hidrolázzal hidrolizálunk, majd az így nyert hidrolizátumból egy 10.000 D-nál nagyobb molekulatömegű frakciót ultraszüréssel eltávolítunk.
A leírásban ellenkező értelmű jelzés hiányában a hidrolízis fokát kivéve a százalékos arány tömégszázalékra vonatkozik.
Az alábbiakban részletesen ismertetjük a találmány szerinti megoldást.
A találmány szerinti interleukin-18-indukáló szer aktív hatóanyagként interleukin-18indukáló hatással rendelkező, tej savóprotein hidrolázzal végzett hidrolizálásával nyert tejsavóprotein-hidrolizátumot tartalmaz. A találmány szerinti interleukin-18-indukáló szer előállításához alapanyagként alkalmazott tej savóprotein tetszőleges eredetű lehet, amennyiben az alapanyag fő összetevőként tej savóproteint tartalmaz. Előnyös azonban kereskedelmi forgalomban kapható tej savóproteineket alkalmazni, amilyenek például a tejsavóprotein-kondenzátum (WPC) vagy a tejsavóprotein-izolátum (WPI). Alternatív módon, a tej savóprotein tejből, sovány tejből, teljes tejporból vagy sovány tejporból a hagyományos eljárásokkal állítható elő.
A következőkben a tej savóprotein hidrolázzal történő hidrolizálására szolgáló eljárást ismertetjük részletesebben. A tej savóprotein nyersanyagot vízben vagy meleg vízben diszpergáljuk és oldjuk. Az oldat koncentrációja a találmány szerinti megoldás szempontjából nem le
-4nyeges. A hatékonyság és működőképesség szempontjából ugyanakkor rendszerint előnyös, ha a proteintartalomra számított koncentráció 5-15% közötti.
A szaprofita baktériumok okozta szennyeződés előidézte romlás megelőzése szempontjából előnyös, ha a tej savóproteint tartalmazó oldatot 10 perc és 15 másodperc közötti időtartamban, 70-90°C közötti hőmérsékleten sterilizáljuk.
Előnyös továbbá, ha a tej savóproteint tartalmazó oldat pH-ját lúgos vagy savas természetű anyag hozzáadásával a hidroláz pH-optimumára vagy annak közeiére állítjuk be. A találmány szerinti megoldásban erre a célra tetszőleges sav vagy lúg igénybe vehető, amennyiben azok élelmiszeripari vagy gyógyászati célú felhasználása engedélyezett. A lúg lehet többek között nátrium-hidroxid, kálium-hidroxid, kálium-karbonát, a sav pedig pl. sósav, citromsav, foszforsav vagy ecetsav lehet.
A fentieket követően a tej savóprotein oldathoz hidroláz oldatot adunk. A találmány szerinti megoldásban a hidroláz pontos típusa nem korlátozó jelentőségű, amennyiben az protein hidrolizálására alkalmas. A hidroláz előnyösen endopeptidáz. Endopeptidázként számos enzim igénybe vehető, ilyenek pl. a szerinproteázok, pl. a tripszin és az elasztáz, valamint a cisztinproteázok, pl. a papain és a bromelain. Közelebbről, a találmány szerinti megoldásban előnyösnek tekintett proteázok a Bacillus subtilis proteáz, a tejsavbaktérium-proteáz, valamint az állati- vagy növényi eredetű proteázok. Az „eredetű” kifejezés arra utal, hogy eredetileg az említett szervezet tartalmazza a proteázt, és nem arra, hogy a proteáz belőle lett kinyerve. így pl. a Bacillus subtilis által termelt proteázt kódoló gént Escherichia coli-ba juttatva és ott expresszálva előállított proteáz Bacillus subtilis-bó\ „származik”.
A találmány szerinti megoldásban Bacillus subtilis-bó\ származó proteázként kereskedelmi forgalomban kapható termékek is igénybe vehetők. Ilyenek pl. a Protease N (Amano Enzyme Inc.) és a Bioprase (Nagase Chemtex Corporation). A Bacillus subtilis-bó\ származó proteázt 1 g tej savóproteinre számítva 100-5000 PUN egység mennyiségben alkalmazzuk (az említett egység pontos jelentését a későbbiekben részletezzük). A Bacillus subtilis-bó\ származó proteáz kazeinnel (Merck Ltd., Hammerstein) történő reagáltatásakor egy PUN egység a Folin-reagens 1 g tirozinnak megfelelő allil-aminosawal 30°C-on 1 percig tartó reakciója eredményeként kapott színreakcióval egyenértékű enzimaktivitást jelöl.
A tej savbaktériumból származó proteáz az 54-36235 számú japán szabadalmi irat „Alkalmazott enzimek” c. része 6. rovatának 4. sorában ismertetett eljárás szerint állítható elő. Ennek során tej savbaktériumot ismert eljárás szerint tenyésztünk (pl. 48-43878 számú japán szabadalmi irat), majd a tápközeg centrifugálásával tej savbaktériumból álló sejtüledéket nye- 5 rünk. A sejtüledéket sterilizált vízben szuszpendáljuk, majd a tej savbaktérium üledéket centrifugáljuk, ezt a folyamatot kétszer ismételjük. A sejtüledéket 20% koncentrációban sterilizált vízben szuszpendáljuk, majd sejtüledék-roncsoló berendezéssel (pl. „Dyno Mill”, KDL-típus; Willy Bachnfen Engineering Works) roncsoljuk, ezt követően liofilizálással a tej savbaktériumból származó proteázport hozunk létre belőle. A tej savbaktérium többek között Lactococcus nembe tartozó baktérium, pl. Lactococcus lactis, Lactobacillus nembe tartozó baktérium, pl. Lactobacillus helveticus vagy Lactobacillus bulgaricus, valamint Bifidobacterium nembe tartozó baktérium, pl. Bifidobacterium breve vagy Bifidobacterium longum lehet.
A fentiek szerint előállított enzimből 20-200 aktivitási egységet adunk 1 g tej savóproteinhez (az aktivitási egység magyarázatát Id. később). Az aktivitási egységet a következő eljárás szerint állapítjuk meg. Az enzimoldat előállításához a proteázt tartalmazó port 0,2 g/100 ml koncentrációban 0,1 M foszfátpufferben (pH - 7,0) diszpergáljuk vagy oldjuk. Ezzel párhuzamosan leucinil-p-nitroanilid („Leu-pNA”; Kokusan Chemical Co. Ltd.) 0,1 M foszfátpufferben (pH = 7,0) történő feloldásával 2 mM-os szubsztrátoldatot állítunk elő. A szubsztrátoldat és az enzimoldat 1-1 ml-ét 5 percig 37°C-on reagáltatjuk. Ezt követően a reakciót 2 ml 30%-os ecetsav hozzáadásával állítjuk le. A reakcióelegyet membránszűrőn átszűrjük, majd a kapott filtrátum abszorbanciáját 410 nm-en méljük. Az 1 pmol Leu-pNA 1 perc alatt történő lebontásához szükséges enzimmennyiséget 1 aktivitási egységnek nevezzük. A proteáz aktivitását a következő képlet szerint határozzuk meg.
Aktivitási egység (1 g porra) = 20 x (A/B)
A fenti kifejezésben az A és a B a minta és a 0,25 mM p-nitroanilin 410 nm-en mért abszorbanciáját jelenti.
Az állati- és vagy növényi eredetű proteáz lehet pl. tripszin, papain vagy bromelain.
A találmány szerinti megoldásban egy, vagy kettő vagy több hidroláz alkalmazható. Két vagy több enzim alkalmazása esetén az egyes enzimreakciók egyidejűleg vagy elkülönítve végezhetők.
Az oldatot, amelyhez az enzimet adjuk, a tej savóprotein enzim általi hidrolízisének megkezdéséhez megfelelő hőmérsékleten, pl. 30-60 C-on, előnyösen 45-55 C-on tartjuk. A reakciót az enzimatikus hidrolízis monitorozása mellett a hidrolízis kívánt arányának eléréséig folytatjuk. A találmány szerinti interleukin-18-indukáló anyag aktív hatóanyagaként alkalmazott tejsavóprotein-hidrolizátum kinyerése érdekében végzett hidrolízis aránya előnyösen 2030% közötti.
-6A protein hidrolízisének aránya a következőképpen számítható ki. A minta teljes nitrogéntartalmát a Kjeldahl-eljárás szerint számítjuk ki [„Method of Food Analysis”, p. 102, szerk.: Japanese Society for Food Science and Technology, kiad.: Korin Publishing Co., Ltd. (1984)], a mintabeli nitrogén által képzett formol mennyiségét a formoltitrálási eljárással állapítjuk meg [„Experiments of Food Engineering”, 1. kiadás, p. 547, szerk.: Mitsuda és mtsai., kiad.: Yokendo (1970)], a hidrolízis arányát pedig a fentiek szerint megállapított értékekből a következő képlet szerint számítjuk ki:
Hidrolízis aránya = (formol nitrogén mennyisége/összes nitrogén mennyiség) x 100.
Az enzimreakciót a hidrolízisoldatban lévő enzim inaktiválásával állítjuk le. Az enzimreakció leállítását a megszokott módon, melegítéses inaktiváló kezeléssel végezhetjük el. A sikeres inaktiváláshoz szükséges hőmérséklet és behatási idő az alkalmazott enzim hőstabilitásának figyelembe vételével állapítható meg. Az inaktiváláshoz elegendő például a 80130°C-on 30 perc és 2 másodperc közötti időtartamban végzett kezelés.
Előnyös, ha a fentiek szerint kapott reakcióoldat pH-ját savval, pl. citromsavval 5,5-7,0 közöttire állítjuk be.
Előnyösnek tekintjük, ha a fentiek szerint előállított tejsavóprotein-hidrolizátumból eltávolítjuk a 10.000 D-t meghaladó molekulatömegű frakciót. Az „eltávolítás” kifejezés a 10.000 D-t meghaladó molekulatömegű frakció egy részének és egészének eltávolítását egyaránt magában foglalja. Előnyös ugyanakkor, ha az említett frakciót teljes egészében eltávolítjuk. Amennyiben az interleukin-18-indukáló funkció megmarad, még az sem okoz problémát, ha a 10.000 D-t meghaladó molekulatömegű frakció eltávolítása eredményeként a 10.000 Dnál nem nagyobb molekulatömegű frakcióbeli nagy molekulatömegű összetevők mennyisége csökkent is. A 10.000 D-t meghaladó molekulatömegű frakció eltávolítása pl. ultraszűréssel oldható meg. Az ultraszűrés ismert berendezéssel pl. ultraszűrő modullal végezhető (Asahi Kaséi Corporation).
A tejsavóprotein-hidrolizátumot tartalmazó oldat kinyert állapotában is alkalmazható. Alternatív módon, amennyiben szükséges, a kapott oldatból ismert eljárás segítségével koncentrált oldat is kialakítható, majd a koncentrált oldat ismert eljárás segítségével történő kiszárításával port nyerhetünk.
A fentiek szerint előállított tejsavóprotein-hidrolizátum interleukin-18-indukáló hatással rendelkezik. Ennek megfelelően a tejsavóprotein-hidrolizátum előállításához alkalmazott feltételek a tejsavóprotein-hidrolizátum interleukin-18-at indukáló képessége alapján határozhatók
-7 meg. A találmány szerinti megoldásban az „interleukin-18-indukció” kifejezés alatt az interleukin- 18-at termelő sejtek interleukin-18 termelésének indukcióját értjük.
Az interleukin-18-at biológiai szövetek és sejtek termelik, ilyenek pl. a makrofágok, pl. a Kupffer-sejtek, a bélnyálkahártya hámsejtjei és a hám keratinocitái. A bélhámszövet interleukin-18 termelése különösen nagy mértékű. Az interleukin-18 in vivo termelésének nagy részéért feltehetően a bélhámsejtek felelősek. Ennek megfelelően a találmány szerinti interleukin-18-indukáló anyag által kiváltott interleukin-18 termelés legegyszerűbben a biológiai rendszerbeli expressziós rendszernek megfelelő környezetet biztosító sejtvonal alkalmazásával igazolható. Az interleukin-18 termelésére előnyösen vastagbél-eredetű sejtvonalat alkalmazunk. Ilyenek például a következő sejtvonalak: Caco-2, COLO205, SK-CO-1, SW48, T84, HT-29, HCT-15 és LSI80.
Az interleukin-18 termelése a találmány szerinti interleukin-18-indukáló anyag sejttenyészethez adásával érhető el. Ennek során előnyösnek tekintjük, ha az aktív hatóanyagként alkalmazott tejsavóprotein-hidrolizátum legalább 1 pg/ml koncentrációban van jelen a sejttenyészetben. A sejtvonal tenyésztésére megfelelő, kereskedelmi forgalomban kapható tenyésztőközeg, pl. RPMI-1640 vagy „Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium” (a továbbiakban szükség esetén „DMEM tápközeg”) alkalmazható. A tenyésztés folytatására alkalmas a „Dulbecco’s Modified Eagle’s Medium” / „Ham’s F12 Medium” keveréke (a továbbiakban szükség esetén „DMEM/F12 tápközeg”). A fenti tápközeghez 5-20% emberi szérum, szarvasmarha szérum vagy magzati boíjúszérum is adható. Szükség esetén a tápközeg .emberi szérum· albuminnal, szarvasmarha szérumalbuminnal, antibiotikumokkal, ellenanyagokkal vagy 2merkaptoetanollal is kiegészíthető. A poliakrilamidgél-elektroforézissel szeparált interleukin-18 anti-IL-18 ellenanyag alkalmazásán alapuló westem-blot eljárással mutatható ki.
Ismert, hogy az immunglobulin E (IgE) ellenanyag általánosságban allergiás tüneteket, pl. bronchusasztmát, allergiás orrgyulladást, atópiás bőrgyulladást és táplálékallergiát okoz. Másrészről az is tudott, hogy az interleukin-18 in vivo elnyomja az IgE ellenanyag termelését [„Immune Rewievs 2001”, Special Issue of „Experimental Medicine”, 19. kötet, 5. szám, p. 189, szerk.: Hajime Toriyama, kiad.: Yodosha (2001); Clinical Immunology 30, 191 (1998)]. Ennek megfelelően a találmány szerinti interleukin-18-indukáló anyag szájon át történő beadásával előidézett interleukin-18-indukció az IgE ellenanyag-termelés elnyomásának vizsgálatával is igazolható.
Az interleukin-18 IgE ellenanyag termelésre gyakorolt gátlása előnyösen a ’’helper” Tsejtek közül a Th 1-nek a Th2 rovására történő indukálásán keresztül érvényesül. Kimutatták,
-8hogy az IgGl ellenanyag és IgG2a ellenanyag termelése a Thl és Th2 in vivo egyensúlyának indikátora [Cell Technology 19, 1828 (2000); Clinical Immunology 30, 191 (1998)]. Az interleukin-18 indukálásának hatása az ellenanyagok vérbeli koncentrációja arányának mérésén keresztül állapítható meg.
A tejsavóprotein-hidrolizátum, amely a találmány szerinti interleukin-18-indukáló anyag aktív összetevője tejből származó természetes termék, ennélfogva a szájon át történő felvétel után jelentős stabilitást mutat. A tejsavóprotein-hidrolizátum megtalálható pl. a naponta fogyasztott tehéntejben. A tejsavóprotein-hidrolizátum nem toxikus és hosszabb időn keresztül történő, folyamatos felvétele esetén is csak elvétve okoz kedvezőtlen gyógyszerhatást vagy mellékhatást. Ennek megfelelően a tejsavóprotein-hidrolizátum beadására bármely beadási mód igénybe vehető, ilyen pl. a szájon át történő beadás. A tejsavóprotein-hidrolizátumból ismert eljárások segítségével pl. tabletta, kapszula, pasztilla, szirup, granulátum, por vagy kenőcs állítható elő. A drog vagy gyógyászati készítmény előállításához a tejsavóprotein-hidrolizátum mellett a drogelőállításban általában igénybe vett egyéb összetevők, pl. vivőanyagok vagy töltőanyagok, pH-szabályozó anyagok, színezőanyagok, ízesítőszerek vagy ízjavító anyagok is alkalmazhatók. Emellett a készítmény bármely már ismert, vagy a jövőben megismerendő, interleukin-18-indukáló aktivitással rendelkező anyaggal is kombinálható.
A találmány szerinti interleukin-18-indukáló anyag egyik megvalósítási módjaként a tejsavóprotein-hidrolizátum élelmiszer aktív hatóanyaga is lehet és belőle interleukin-18-indukáló hatással rendelkező élelmiszer állítható elő.
A találmány szerinti interleukin-18-indukáló anyag interleukin-18-indukáláshoz szükséges aktív hatóanyaga, a tejsavóprotein-hidrolizátum a végső keverék legalább 0,1 tömegszázalékában keverhető be a készítményekbe.
A találmány szerinti interleukin-18-indukáló anyag alkalmazott adagja többek között a páciens korától és tüneteitől függ. Az interleukin-18-indukció elérése érdekében azonban előnyös, ha az interleukin-18-indukáló anyag napi adagja legalább a 100 mg/testtömeg kg adag egy része.
A találmány szerinti megoldást az alábbiakban példákkal illusztrálva részletesebben ismertetjük. A találmány szerinti megoldás azonban nem korlátozódik az alábbi példákra.
1. példa
Savóprotein-hidrolizátum előállítása
Kereskedelmi forgalomban kapható tej savóprotein kondenzátum (83% proteintartalom; Ária Foods Ingredients) 10 grammját 90 g, 106 mg nátrium-hidroxidot (San-Ei Gen F. F. I.
• · · · « ♦ * · · -··♦*> » ·< ** w *
-9Inc.) tartalmazó tisztított vízben oldva pH = 8,5 kémhatású tejsavóprotein-oldatot kaptunk. A tejsavóprotein-oldathoz 14940 aktivitási egység (1800 aktivitási egység /lg protein) „Protease N”-t (Amano Enzyme Inc.), 1660 aktivitási egység (200 aktivitási egység / 1 g protein) „Bioprase”-t (Nagase Chemtex Corporation), 830 aktivitási egység (100 aktivitási egység /lg protein) Lactobacillus helveticus roncsolt sejtüledéket, valamint 10375 aktivitási egység (1250 aktivitási egység / 1 g protein) tripszint (Novozymes) adtunk, majd a hidrolízis elősegítése érdekében az oldat hőmérsékletét 50°C-on tartottuk. Az enzimreakciót a hidrolízis aránya alapján monitoroztuk. Amikor a hidrolízis aránya elérte a 25,7%-ot, az oldat 10 percre 85°C-ra történő melegítésével inaktiváltuk az enzimeket. Ezután az oldatot 10°C-ra hűtöttük. A tejsavóprotein-hidrolizátumot 10.000 D molekulatömegnél frakcionáló ultraszűrő membránegységen (SLP-0053, Asahi Kaséi Corporation) bocsátottuk át. Az így nyert frakció liofilizálásával kb. 8,3 g por alakú tejsavóprotein-hidrolizátumot nyertünk.
2. példa
Interleukin-18-indukáló anyag előállítása (1)
Egy 1000 ml-es mozsárba (Nakashima Seisakusho Co. Ltd.) 20 g kristályos cellulózt (Wako Pure Chemical Industries) helyeztünk, majd a felvétel elősegítése érdekében 20 ml vizet adtunk hozzá. Ezt követően előzetesen 48-as méretű szűrőn (Wakamori) átszűrt laktóz (Meggle GmbH) 25 g-ját, majd az 1. példa szerint előállított tej savóprotein 55 g-ját adtuk a keverékhez. Az így kapott nedves anyagot 20-as méretű rozsdamentes acél szűrőre helyeztük (Wakamori), majd az anyagot kézzel átnyomva rozsdamentes acél tányérra juttattuk, az így képződött granulátumot a száradás érdekében gyorsan egyenletesen szétterítettük. A granulátumból ezután két napon át 25°C-on szárítógéppel végzett szárítással miniatűr granulátumot hoztunk létre. A granulátumot polietilénből készített 20-as méretű szűrőn (Wakamori) bocsátottuk át. A szűrőn átjutott granulátumot széles papírlapon egyenletesen szétterítettük. Ehhez az anyaghoz korábban 48-as szűrőn átbocsátóit 2 g magnézium-sztearátot (Kanto Kagaku) adtunk, majd az anyagokból kézi keveréssel homogén keveréket hoztunk létre. A keverékből tablettakészítő berendezéssel (KT-2, Kimura Seisakusho) 8 mm átmérőjű R-rúd alkalmazásával, 10 tabletta készítésének megfelelő nyomóerő mellett tablettákat hoztunk létre. A tabletták tömege 6,2 g, Monsanto-féle keménységük 3,5-5,0 kg volt. Ezen az úton 16 db interleukin-18indukáló hatású tablettát hoztunk létre, amelyek kb. 50% tejsavóprotein-hidrolizátumot tartalmaztak.
- 10’M .· . ί * * V · ♦ ·
J- ·· > «
3. példa
Interleukin- 18-indukáló anyag előállítása (2)
Hatszáz g laktózt (Meggle GmbH), 400 g kukoricakeményítőt (Nissin Seifun), 400 g kristályos cellulózt (Wako Pure Chemical Industries) és az 1. példa szerint előállított tejsavóprotein-hidrolizátum 600 g-ját 50-es méretű szűrön (Yamato Scientific Co., Ltd.) átbocsátva nyert por alakú anyagot 0,5 mm-es vastagságú polietilén zsákba töltöttük, majd többszöri fel-le forgatással összekevertük, végül az anyagot 275 mg-os adagokban teljesen automatizált kapszulatöltő berendezés („prés” típusú, Sesser Pedini) segítségével kapszulákba (Japan Elanco, No. 1 zselatinkapszula, Op. Yellow No. 6 test, üres tömeg 75 mg) töltöttük. A fentiek eredményeként 7000 db, interleukin-18-indukáló hatású kapszulát nyertünk.
1. példaértékű vizsgálat
Ebben a vizsgálatban az interleukin-18-indukáló hatást tanulmányoztuk.
(1) Vizsgálati minták
Az 1., 2., 3. és 4. minta elkészítéséhez az 1. példa szerint előállított tejsavóprotein-hidrolizátumot 0,1 pg/ml, 1 g/ml, 10 g/ml és 100 g/ml koncentrációban 5% magzati borjúszérumot (GIBCO) tartalmazó DMEM/F-12 tápközegben (ICN Biomedicals, Inc., katalógusszám: 1-800-854-0530) oldottuk. Kontroll mintaként 100 pg/ml koncentrációban 5% magzati boíjúszérumot tartalmazó DMEM/F-12 tápközegben szarvasmarha szérumalbumint oldottunk. Tejprotein kontroll minta előállítása érdekében az 1. példában a tej savóprotein kondenzátumot kazeinre cserélve hidrolízissel nyert kazein-hidrolizátumot 100 pg/ml koncentrációban 5% magzati boíjúszérumot tartalmazó DMEM/F-12 tápközegben oldottuk.
Az interleukin-18 indukálására Caco-2 (ATCC HTB-37) jelű bélhámsejt-vonalat alkalmaztunk.
(2) Vizsgálati eljárás
A Caco-2 jelű bélhámsejt-vonal sejtjeinek 1 x 104 mennyiségét 5% magzati boíjúszérumot tartalmazó DMEM/F-12 tápközegben szuszpendáltuk. Az így kapott szuszpenzióból 1-1 ml-t 12 üregű tenyésztőtálca (Falcon) üregeibe juttattunk, majd a sejteket hat napig, konfluens állapotuk eléréséig tenyésztettük. Ezt követően a sejteket két alkalommal DMEM/F-12 tápközeggel mostuk, majd az üregekbe az 1-4. minták, a kontroll minta, a tejprotein kontroll minta és az 5% magzati borjúszérumot tartalmazó DMEM/F-12 tápközeg 1-1 ml-ét mértük, majd az inkubálást további 8 órán át folytattuk. A tenyésztést követően a tenyészetek felülúszóját aspirátor berendezés segítségével leszívtuk, majd a sejteket 4°C-on két alkalommal Dulbecco- 11 féle foszfát-pufferolt sóoldattal (a továbbiakban „PBS”) mostuk. Ezután a sejteket 0,1% nátrium-dodecil-szulfátot (a továbbiakban „SDS”), 1% NP40-et, 0,5% nátrium-dezoxikolátot és 0,5 mM fenilmetánszulfonil-fluoridot tartalmazó PBS oldat 0,2 ml-ével lizáltuk. A sejtlizátumot a felülúszó kinyerése érdekében 10.000 fordulat/perc sebességgel 4°C-on 10 percen keresztül centrifugáltuk. Ebben a vizsgálatban az 1-4. minták, a kontroll minta, a tejprotein kontroll minta és az 5% magzati boíjúszérumot tartalmazó DMEM/F-12 tápközeg jelenlétében tenyésztett sejtek lizátumának felülúszóját 1-4. mintának, kontroll csoportnak, tejprotein kontroll csoportnak és negatív kontroli csoportnak neveztük.
Az egyes csoportok esetében megállapítottuk a minták proteintartalmát. Minden egyes csoportbeli proteinminta 10 μg-ját nem-redukáló állapotban 16%-os SDS poliakrilamid elektroforézis gélen (TEFCO) elektroforetizáltuk. Ezt követően a gélen szétválasztott proteineket blottoló membránra (Hybond-P, Amersham Pharmacia) vittük. A blottoló membránt 5%os koncentrációjú, PBS-ben hígított sovány tejjel (DIFCO) blokkoltuk. Ezt követően a membránt 0,5 pg/ml koncentrációjú primer emberi interleukin-18 ellenanyaggal (MBL) 4°C-on 12 órán át kezeltük. A blottoló membránt ezután mostuk, majd 1:5000 arányban hígított, peroxidázzal jelzett szekunder anti-egér IgG (MBL) oldatával 1 órán át inkubáltuk. A szekunder ellenanyaggal történt kezelés után a membránt mostuk, majd „ECL Plus” (Amersham Pharmacia) fluoreszcens szubsztrátoldattal kezeltük. Közvetlenül ez után a fluoreszcens reakciót röntgenfilm alkalmazásával mutattuk ki. Az így előállított képet denzitométer segítségével számszerű értékekké alakítottuk. A csoportok interleukin-18-indukáló aktivitását a negatív csoporthoz (mint 100%-hoz) viszonyított relatív aktivitásként határoztuk meg.
(3) Vizsgálati eredmények
A fentiekben részletezett vizsgálat eredményeit az 1. táblázat tartalmazza. Az 1. táblázatban az egyes csoportok interleukin-18-indukáló aktivitása látható. Amint az jól látható, a tejsavóprotein-hidrolizátum koncentrációjának emelésével az 1-4. kísérleti csoportok esetében nőtt az interleukin-18-indukáló aktivitás mértéke. Azt is megállapítottuk továbbá, hogy a fenti körülmények között a tejsavóprotein-hidrolizátum legalább 1 pg/ml-es tápközegbeli koncentrációjánál lehetett interleukin-18-indukáló aktivitást megfigyelni. A kontroll csoportként alkalmazott szarvasmarha szérumalbumin és a tejprotein kontroll csoportként alkalmazott kazeinhidrolizátum nem fokozta az interleukin-18 termelését. E vizsgálat eredményei alapján az interleukin-18-indukáló aktivitás a tejsavóprotein-hidrolizátumnak volt köszönhető.
1. táblázat
| Vizsgálati csoport | IL-18-indukáló aktivitás (%) |
| 1. kísérleti csoport | 95,7 |
| 2. kísérleti csoport | 125,0 |
| 3. kísérleti csoport | 147,7 |
| 4. kísérleti csoport | 214,7 |
| Kontroll csoport | 90,3 |
| Tejprotein kontroll csoport | 92,3 |
2. példaértékű vizsgálat
Ezt, a szérumbeli IgE ellenanyag mennyiségének meghatározásán alapuló vizsgálatot a találmány szerinti interleukin-18-indukáló anyag hatékony adagjának megállapítása érdekében végeztük.
(1) Vizsgált minták
A vizsgálathoz az 1. példa szerint előállított tejsavóprotein-hidrolizátumot alkalmaztunk 30 mg/ml koncentrációban élettani sóoldatban (Otsuka Pharmaceutical Co. Ltd.) oldva. Az élettani sóoldatot (Otsuka Pharmaceutical Co. Ltd.) negatív kontrollként is igénybe vettük.
(2) Vizsgálati eljárás
Kísérleti állatként 50, véletlenszerűen 10 állatból álló kísérleti csoportokba sorolt hat hetes hímivarú BALB/c egeret (Charles River Japan) alkalmaztunk.
Antigénként 1 mg alumínium-hidroxid adjuvánshoz (Wako Pure Chemical Industries) adszorbeált 2,5 pg ovalbumint (Sigma) használtunk, amelyet intraperitoneális injektálással juttattunk a kísérleti állatokba. A beadás után az állatokat három napig nem kezeltük. A vizsgált mintákat három egymást követő napon gyomorszondán keresztül adtuk be, a tejsavóproteinhidrolizátum beadott adagja az egyes vizsgálati csoportok esetében 0 mg/testtömeg kg/nap (negatív kontroll), 30 mg/testtömeg kg/nap, 100 mg/testtömeg kg/nap és 300 mg/testtömeg kg/nap volt. Az állatokat ezután 4 napig nem kezeltük, majd három egymást követő napon újabb kezelést végeztünk. Egy nap elteltével az egerek szívéből vett vérből szérummintákat nyertünk.
A szérumminták IgE koncentrációját ELISA-val állapítottuk meg. Ennek során primer ellenanyagként R3 5-92 jelzésű anti-egér IgE monoklonális ellenanyag (PharMingen) oldatát 96 üregű mikrotiter tálcára (Nunc) jutattuk és egy éjszakán át 4°C-on adszorbeáltattuk. Ezután
- 13 szarvasmarha szérumalbuminnal blokkoló kezelést végeztünk, majd a lemez üregeibe jutattuk a vizsgált szérummintákat. Ezt követően szekunder ellenanyagként R35-118 jelzésű biotin-jelzett anti-egér IgE monoklonális ellenanyag (PharMingen) oldatát, majd peroxidázzal jelzett avidin D-t (Vector Laboratories) juttattunk az üregekbe. A színreakció kialakulását peroxidáz szubsztrátoldat (Kirkegaard & Perry Laboratories, Inc.) mint színreakciót okozó pufferoldat hozzáadásával értük el. Az IgE koncentrációt a reakcióoldat abszorbanciájának 405 nm-es hullámhosszon történő mérésével állapítottuk meg. A kísérleti csoportokba tartozó 10 állat esetében kapott értékek átlagolásával határoztuk meg az egyes kísérleti csoportokra jellemző IgE koncentrációt.
(3) Vizsgálati eredmények
A vizsgálat eredményeit a 2. táblázat tartalmazza. A 2. táblázatban az interleukin-18indukáló anyag beadott mennyisége és az IgE koncentráció közötti összefüggés látható. Amint a táblázat adataiból kiderül, a legalább 100 mg/kg testtömeg kg/nap adagban alkalmazott tejsavóprotein-hidrolizátum gátolta az IgE ellenanyag képződését. Ez az eredmény az IgE ellenanyag termelését gátló interleukin-18 sikeres in vivo indukálására utal.
2. táblázat
| Az interleukin-18-indukáló anyag adagja (mg/ttkg/nap) | IgE koncentráció (ng/ml) |
| 0 | 3965,2 |
| 30 | 3543,1 |
| 100 | 2684,3 |
| 300 | 2015,1 |
3. példaértékű vizsgálat
Ezt, a szérumbeli IgGl és Ig2a ellenanyagok koncentrációja arányának meghatározásán alapuló vizsgálatot a találmány szerinti interleukin-18-indukáló anyag hatékony adagjának megállapítása érdekében végeztük.
(1) Vizsgált minták
A vizsgálathoz az 1. példa szerint előállított tejsavóprotein-hidrolizátumot alkalmaztunk 30 mg/ml koncentrációban élettani sóoldatban (Otsuka Pharmaceutical Co. Ltd.) oldva. Az élettani sóoldatot (Otsuka Pharmaceutical Co. Ltd.) negatív kontrollként is igénybe vettük.
(2) Vizsgálati eljárás
A szérumminták IgGl és IgG2a koncentrációját a 2. példaértékű vizsgálatban ismertetett ELISA-val határoztuk meg, azzal a különbséggel, hogy primer ellenanyagként A85-3 jelzésű anti-egér IgGl monoklonális ellenanyag (PharMingen) oldatát valamint RÍ 1-89 jelzésű anti5 egér IgG2a monoklonális ellenanyag (PharMingen) oldatát alkalmaztuk, szekunder ellenanyagként pedig A85-1 jelzésű, biotin-jelzett anti-egér IgGl monoklonális ellenanyag (PharMingen) oldatát valamint RÍ9-15 jelzésű biotin-jelzett anti-egér Ig2a monoklonális ellenanyag (PharMingen) oldatát vettük igénybe.
(3) Vizsgálati eredmények
A vizsgálat eredményét a 3. táblázatban foglaltuk össze. A 3. táblázatban az interleukin-18-indukáló anyag beadott mennyisége és az IgGl/Ig2a koncentráció aránya közötti összefüggés látható. Amint a táblázat adataiból kiderül, a találmány szerinti interleukin18-indukáló anyag beadott mennyiségének növelésével csökkent az IgGl/Ig2a koncentrációhányados értéke. Ilyen lényeges mértékű változás a legalább 100 mg/kg testtömeg kg/nap 15 adagban alkalmazott tejsavóprotein-hidrolizátum esetén volt megfigyelhető. A vizsgálat eredményei arra utalnak, hogy az interleukin-18 termelés indukálásával a Thl-et előnyben részesítő körülmények alakultak ki. Az interleukin-18 adagjának optimális mennyisége megegyezett a 2. példaértékű vizsgálatban megállapítottal.
3. táblázat
| Az interleukin-18-indukáló anyag adagja (mg/ttkg/nap) | IgGl/IgG2a koncentráció-hányados |
| 0 | 0,664 |
| 30 | 0,593 |
| 100 | 0,435 |
| 300 | 0,419 |
Ipari alkalmazhatóság
A fentiekben részletezettek szerint a találmány tárgyát aktív összetevőként tejsavópro25 tein-hidrolizátumot tartalmazó interleukin-18-indukáló anyag képezi. A találmány szerinti megoldás a következőket igazolja.
(1) Lehetőség van az interleukin-18 hatékony indukálására.
(2) Mivel az interleukin-18-indukáló anyag tejproteinből származik, így csak elvétve okoz kedvezőtlen gyógyszerhatást. A találmány szerinti interleukin-18-indukáló anyag hosszú időn keresztül, folyamatosan alkalmazható.
(3) A találmány szerinti interleukin-18-indukáló anyag szájon át adagolható. A hagyományos injekciós gyógyszerformával szemben ez a kiszerelés kényelmesen és rendkívül sokoldalúan alkalmazható.
(4) A találmány szerinti interleukin-18-indukáló anyag viszonylag olcsó alapanyagból, tehéntejből állítható elő, és tömegtermelésre is alkalmas.
Claims (7)
- SZABADALMI IGÉNYPONTOK1. Interleukin-18-indukáló anyag, amely aktív összetevőként interleukin-18-indukáló hatású, tej savóprotein hidrolázzal végzett hidrolizálásával nyert tejsavóprotein-hidrolizátumot tartalmaz.
- 2. Az 1. igénypont szerinti interleukin-18-indukáló anyag, amely anyag előállítására alkalmazott hidroláz a következők közül egy vagy több lehet: Bacillus subtilis proteáz, tejsavbaktérium-proteáz, állati- vagy növényi eredetű proteáz.
- 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti interleukin-18-indukáló anyag, melynek esetében a tejsavóprotein-hidrolizátum hidrolízisének aránya 20-30% közötti.
- 4. Az 1-3. igénypontok bármelyike szerinti interleukin-18-indukáló anyag, amelynek előállítása során egy 10.000 D molekulatömegű frakció eltávolításra került a tejsavóproteinhidrolizátumból.
- 5. A 4. igénypont szerinti interleukin-18-indukáló anyag, amelynek előállítása során a 10.000 D molekulatömegű frakció ultraszűréssel lett eltávolítva a tejsavóprotein-hidrolizátumból.
- 6. Az 1-5. igénypontok bármelyike szerinti interleukin-18-indukáló anyag, amely teljes tömegére vonatkoztatva legalább 0,1 százalékban tartalmaz tejsavóprotein-hidrolizátumot.
- 7. Eljárás interleukin-18-indukáló hatású tejsavóprotein-hidrolizátum előállítására, azzal jellemezve, hogy az eljárás során tej savóproteint hidrolázzal hidrolizálunk, majd az így nyert hidrolizátumból egy 10.000 D-nál nagyobb molekulatömegű frakciót ultraszűréssel eltávolítunk.A meghatalmazott:DANUBIASzabadalmi és Védjegy Iroda Kft.dr. Pc^o^Arpád szabadalmi ügyvivő
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2001334120A JP2003137804A (ja) | 2001-10-31 | 2001-10-31 | インターロイキン−１８誘導剤 |
| PCT/JP2002/011228 WO2003037364A1 (fr) | 2001-10-31 | 2002-10-29 | Agent inducteur de l'interleukine-18 (il-18) |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HUP0303902A2 true HUP0303902A2 (hu) | 2004-03-01 |
| HUP0303902A3 HUP0303902A3 (en) | 2010-01-28 |
Family
ID=19149304
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU0303902A HUP0303902A3 (en) | 2001-10-31 | 2002-10-29 | Interleukin-18 inducing agent |
Country Status (10)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US20040063633A1 (hu) |
| EP (1) | EP1344530A4 (hu) |
| JP (1) | JP2003137804A (hu) |
| KR (1) | KR100575022B1 (hu) |
| AU (1) | AU2002344421B2 (hu) |
| CA (1) | CA2432289C (hu) |
| HU (1) | HUP0303902A3 (hu) |
| NO (1) | NO331608B1 (hu) |
| NZ (1) | NZ526743A (hu) |
| WO (1) | WO2003037364A1 (hu) |
Families Citing this family (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2005350452A (ja) * | 2004-05-14 | 2005-12-22 | Meiji Milk Prod Co Ltd | ＩｇＥ産生抑制作用を有する組成物およびＩｇＥ産生抑制方法 |
| KR100979448B1 (ko) * | 2008-03-06 | 2010-09-02 | 건국대학교 산학협력단 | 유청 단백질 가수분해물과 프로바이오틱(ｐｒｏｂｉｏｔｉｃ) 유산균을 첨가한 기능성 음료 및그의 제조방법 |
| US20110130637A1 (en) * | 2008-03-20 | 2011-06-02 | University Of Dundee | Protein product for modifying cardiovascular health |
| JP5969225B2 (ja) * | 2012-03-09 | 2016-08-17 | 雪印メグミルク株式会社 | 骨強化剤 |
| JP2013184961A (ja) * | 2012-03-09 | 2013-09-19 | Snow Brand Milk Products Co Ltd | 骨強化剤 |
| US9345741B2 (en) | 2013-03-15 | 2016-05-24 | Mead Johnson Nutrition Company | Nutritional composition containing a peptide component with adiponectin simulating properties and uses thereof |
| US8889633B2 (en) | 2013-03-15 | 2014-11-18 | Mead Johnson Nutrition Company | Nutritional compositions containing a peptide component with anti-inflammatory properties and uses thereof |
| US9138455B2 (en) | 2013-03-15 | 2015-09-22 | Mead Johnson Nutrition Company | Activating adiponectin by casein hydrolysate |
| US9345727B2 (en) | 2013-03-15 | 2016-05-24 | Mead Johnson Nutrition Company | Nutritional compositions containing a peptide component and uses thereof |
| US9352020B2 (en) | 2013-03-15 | 2016-05-31 | Mead Johnson Nutrition Company | Reducing proinflammatory response |
| US9289461B2 (en) | 2013-03-15 | 2016-03-22 | Mead Johnson Nutrition Company | Reducing the risk of autoimmune disease |
| KR101583888B1 (ko) | 2013-12-19 | 2016-01-08 | 현대자동차주식회사 | 스파클 감이 향상된 도료 조성물과 그 도장방법 |
Family Cites Families (16)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3857966A (en) * | 1973-08-16 | 1974-12-31 | Gen Foods Corp | Process for bland, soluble protein |
| US3970520A (en) * | 1973-09-17 | 1976-07-20 | General Foods Corporation | Nutritionally improved foodstuffs |
| IE48036B1 (en) * | 1977-10-18 | 1984-09-05 | Nordstjernan Ab | Process for the preparation of a hydrolysed product from whole corn,and such a product |
| CH635491A5 (fr) * | 1979-01-26 | 1983-04-15 | Nestle Sa | Procede de desamerisation d'un hydrolysat de proteines et hydrolysat desamerise obtenu. |
| US4378376A (en) * | 1981-01-09 | 1983-03-29 | Ralston Purina Company | Simulated milk protein replacer of improved suspension characteristics |
| SE459140B (sv) * | 1986-11-25 | 1989-06-12 | Albuglobe Ab | Hydrolys av vassleprotein foer att underlaetta avskiljning av fett daerifraan |
| EP0321603A1 (fr) * | 1987-12-23 | 1989-06-28 | Societe Des Produits Nestle S.A. | Procédé de préparation d'un hydrolysat de protéines de lactosérum et d'un aliment hypoallergéniques |
| JP3091772B2 (ja) * | 1991-03-12 | 2000-09-25 | カルピス株式会社 | アンジオテンシン変換酵素阻害ペプチド組成物 |
| JP3510639B2 (ja) * | 1991-06-28 | 2004-03-29 | カルピス株式会社 | インターロイキン産生能を調節する機能を持たせた機能性食品又は健康食品 |
| FR2688135B1 (fr) * | 1992-03-09 | 1995-06-09 | Oreal | Composition cosmetique pour le maintien de la coiffure, contenant un proteine de lait et/ou un hydrolysat de proteine de lait et un hydrolysat de keratine. |
| US5405637A (en) * | 1993-06-30 | 1995-04-11 | Bristol-Myers Squibb Company | Milk protein partial hydrolysate and infant formula containing same |
| FI104465B (fi) * | 1995-06-14 | 2000-02-15 | Valio Oy | Proteiinihydrolysaatteja allergioiden hoitamiseksi tai estämiseksi, niiden valmistus ja käyttö |
| JPH09194393A (ja) * | 1996-01-22 | 1997-07-29 | Meiji Milk Prod Co Ltd | 免疫寛容を誘導する方法、免疫寛容誘導食品キットおよび免疫寛容誘導剤キット |
| US5994511A (en) * | 1997-07-02 | 1999-11-30 | Genentech, Inc. | Anti-IgE antibodies and methods of improving polypeptides |
| JPH1135468A (ja) * | 1997-07-17 | 1999-02-09 | Meiji Milk Prod Co Ltd | 核酸とその成分を用いたｉ型アレルギー 抑制食品及び抑制剤 |
| MY129566A (en) * | 1999-01-19 | 2007-04-30 | Nestle Sa | A hypoallergenic composition containing tolerogenic peptides inducing oral tolerance |
-
2001
- 2001-10-31 JP JP2001334120A patent/JP2003137804A/ja active Pending
-
2002
- 2002-10-29 HU HU0303902A patent/HUP0303902A3/hu unknown
- 2002-10-29 US US10/451,587 patent/US20040063633A1/en not_active Abandoned
- 2002-10-29 KR KR1020037008883A patent/KR100575022B1/ko not_active Expired - Fee Related
- 2002-10-29 AU AU2002344421A patent/AU2002344421B2/en not_active Ceased
- 2002-10-29 WO PCT/JP2002/011228 patent/WO2003037364A1/ja not_active Ceased
- 2002-10-29 NZ NZ526743A patent/NZ526743A/en not_active IP Right Cessation
- 2002-10-29 CA CA2432289A patent/CA2432289C/en not_active Expired - Fee Related
- 2002-10-29 EP EP02779932A patent/EP1344530A4/en not_active Withdrawn
-
2003
- 2003-06-27 NO NO20032979A patent/NO331608B1/no not_active IP Right Cessation
-
2006
- 2006-10-12 US US11/580,173 patent/US20070031506A1/en not_active Abandoned
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US20070031506A1 (en) | 2007-02-08 |
| AU2002344421A1 (en) | 2003-05-12 |
| EP1344530A4 (en) | 2005-03-16 |
| JP2003137804A (ja) | 2003-05-14 |
| AU2002344421B2 (en) | 2005-03-03 |
| CA2432289C (en) | 2011-02-22 |
| KR20040019271A (ko) | 2004-03-05 |
| KR100575022B1 (ko) | 2006-05-02 |
| WO2003037364A1 (fr) | 2003-05-08 |
| NO20032979L (no) | 2003-08-28 |
| CA2432289A1 (en) | 2003-05-08 |
| NO331608B1 (no) | 2012-02-06 |
| HUP0303902A3 (en) | 2010-01-28 |
| NZ526743A (en) | 2005-04-29 |
| NO20032979D0 (no) | 2003-06-27 |
| US20040063633A1 (en) | 2004-04-01 |
| EP1344530A1 (en) | 2003-09-17 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR100494741B1 (ko) | 알레르기의치료또는예방방법 | |
| BR122022016606B1 (pt) | Lactobacillus paracasei mortos pelo aquecimento, medicamento, alimento ou bebida, ração, agente promotor da produção de il-12 e uso | |
| Ashaolu et al. | Immunomodulatory effects of pepsin-educed soy protein hydrolysate in rats and murine cells | |
| CN1525863A (zh) | 来自乳酸菌的脂磷壁酸及其调节革兰氏阴性菌、可能致病的革兰氏阳性菌介导的免疫应答的用途 | |
| HUP0303902A2 (hu) | Interleukin-18-indukáló anyag | |
| JP6637725B2 (ja) | ウイルス感染症の予防及び／又は治療剤 | |
| CN1694954A (zh) | 用于降低由螺杆菌引起炎症的乳酸菌的选择和应用 | |
| US7731955B2 (en) | Interleukin-6 suppressive agent | |
| US20220023360A1 (en) | Composition for promoting antimicrobial peptide production | |
| KR20130024960A (ko) | 장관면역 조정제 | |
| Tanaka | ANTIMICROBIAL ACTIVITY OF LACTOFERRIN AND | |
| JP5515031B2 (ja) | 経口免疫寛容を誘導するペプチド組成物およびその調製方法 | |
| JPH07179355A (ja) | ＩｇＧおよびＩｇＭクラスの抗体産生を促進する 免疫賦活剤 | |
| JP2009137982A (ja) | インターロイキン−１８誘導剤 | |
| RU2230113C1 (ru) | Способ получения пробиотического бактериального препарата, содержащего структурные компоненты микробной клетки | |
| KR20090115860A (ko) | 면역 조절제 | |
| CN102753190B (zh) | 血中尿酸值降低剂 | |
| JP2006213688A (ja) | Ｎｋ活性増強剤 | |
| WO2025220685A1 (ja) | 免疫賦活用組成物及び免疫賦活方法 | |
| WO2025018384A1 (ja) | 新規乳酸菌、新規乳酸菌を含む組成物及びその製造方法 | |
| Meena et al. | Effect of Lactobacillus helveticus and Dahi on β-Glucuronidase and β-Galactosidase Enzyme Activities in Mice against Infection of Salmonella enteritidis | |
| TWI343260B (en) | Novel antihypertensive peptide and use thereof | |
| Коростелева | Korosteleva MM |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| FD9A | Lapse of provisional protection due to non-payment of fees |