IT8119082A1 - Nuovi antibiotici macrolidici semisintetici, procedimento microbiologico per la loro preparazione e relativo microorganismo, nuovo intermedio per la loro preparazione e composizioni farmaceutiche che li contengono - Google Patents

Nuovi antibiotici macrolidici semisintetici, procedimento microbiologico per la loro preparazione e relativo microorganismo, nuovo intermedio per la loro preparazione e composizioni farmaceutiche che li contengono

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IT8119082A1 ITMI1981A019082A IT1908281A IT8119082A1 IT 8119082 A1 IT8119082 A1 IT 8119082A1 IT MI1981A019082 A ITMI1981A019082 A IT MI1981A019082A IT 1908281 A IT1908281 A IT 1908281A IT 8119082 A1 IT8119082 A1 IT 8119082A1
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Description

- 1 - SAIC BREVETTI S. a. s
DESCRIZIONE
dell'invenzione industriale avente per titolo:
"Nuovi antibiotici macrolidici semisintetici, procedimento microbiologico per la loro preparazione e relativo microorganismo, nuovo intermedio per la loro preparazione e composizioni farmaceutiche che li contengono".
a nome: . PIERREL S. p. A.
di nazionalit?: . . Italiana
con sede a: . Napoli
inventori designati: . Luciano Toscano
o Leonardo Cappelletti <9 >Sto 1 9 08 2 A/ 81 depositata il: . *. . . con il No .
RIASSUNTO
Dalla fermentazione condotta con mutanti bloccati nella sintesi rispettivamente di eritromicina e di oleandomicina, ossia Streptomyces erythreus ATCC 31772 e Streptomyces antibioticus ATCC 31771, usando come substrato un derivato dell'eritronolide B, ossia l'(8S)-8-fluoro-eritronolide B, si ottengono rispettivamente due nuovi antibiotici ed un nuovo antibiotico, tutti della classe degli antibiotici macrolidici.
La preparazione del substrato anzidetto prevede la reazione di 8-9-anidroeritronolide B 6, 9-emiacetale con un com-posto capace di generare fluoro reattivo e l'apertura dell'acetale risultante con acido acquoso e caldo.
- 2 - SAIC BREVETTI S. a. s
DESCRIZIONE
La presente invenzione riguarda nuovi antibiotici macrolidici, utili come agenti antibatterici, ed un procedimento microbiologico per la loro produzione a partire da un nuo vo intermedio, derivato dall'eritronolide B.
L'invenzione ha parimenti per oggetto uri nuovo microorga nismo, utile per la produzione degli antibiotici rriacrolidici dell'invenzione, nonch? il relativo procedimento di preparazione mediante mutagenesi a partire da un ceppo noto. La presente invenzi one riguarda inoltre un nuovo intermedio, derivato dall'eritronolide B, ed il relativo procedimeli to chimico di sintesi.
Come menzionato in precedenza, i nuovi antibiotici macrolidici semisintetici della presente invenzione sono utili come agenti antibatterici; essi presentano, infatti, in confronto con le eritromicine di tipo noto, spettri di attivit? e livelli analoghi o pi? ampi, sono meno suscettibili di degradazione in ambiente acido per cui si prestano ad un miglior assorbimento per via orale; inoltre i loro esteri vengono assorbiti in maniera pi? rapida e completa determi nando livelli ematici pi? elevati e protratti delle basi libere.
Secondo un primo aspetto dell'invenzione, viene preparato un nuovo intermedio, derivato dall'eritronolide B, che vie ne utilizzato nel processo microbiologico di preparazione dei
- 3 SAIC BREVETTI S. a. s.
dei nuovi antibiotici. E' ben noto che l'eritronolide B ? un substrato ottenibile per fermentazione diretta in notevole quantit? e quindi a prezzi economicamente validi utilizzando microorganismi produttori di eritromicina e loro mutanti. D?altro canto, come ? anche ben noto, a parte la produzione di normale eritromicina A, questo substrato non trova uso in altre fermentazioni che possano portare ad antibiotici esenti dagli inconvenienti e problemi presentati dalla stessa eritromicina, mentre dal punto di vista industriale appare massimamente desiderabile una sua uti_ lizzazione. E' stato ora trovato che un derivato dell'eritronolide B, ossia il composto (8S)-8-fluoro-eritronolide B, preparabile per via chimica in modo semplice ed industriai mente vantaggioso, costituisce un . utile substrato per pr? cessi di fermentazione che, utilizzando microorganismi d? rivati per mutagenesi dai ceppi adatti alla produzione microbiologica di eritromicina A, portano ai nuovi antibiotici macrolidici della presente invenzione, come verr? pi? specificamente descritto nel. seguito.
II procedimento chimico per la preparazione del nuovo intermedio secondo la presente invenzione ? rappresentato dallo schema che segue:
4 SAIC BREVETTI S. a. s.
Pi
CM fZT) o-HO?- .un \ 1 <?*>?^01. OH
CH
EH,'<' >CM, CM,* CH
C,H, CaHi
II
F. PMJ
OH,.,
HO-. --OH
CH,
C,H
III
e si caratterizza per gli stadi di:
a) reazione di 8, 9-anidroer?tronolide B 6, 9-emiacetale (I) con un reattivo capace di generare fluoro elettrofilo, preferibilmente scelto tra fluorossi-perfluoro-alcani {aventi formula generale C F OF) e percloril fluoruro, per formare (8S)- 8-fluoro-eritronolide B-6, 9; 9, 11 -acefale (II), in presenza di un solvente organico inezie ed a bassa temperatura;
b) reazione del .composto (II) con acido acquoso caldo con formazione del composto (III) desiderato.
Con riferimento allo stadio (a)<; >tra i reattivi della classe dei fluorossi-perfluoro-alcani quello maggiormente usato ? il fluorossi-trifluoro-metano, che ? reperibile in commercio.
Altri reagenti contenenti atomi di fluoro aventi carica po
5 SAIC BREVETTI S. a. s.
sitiva che si possono utilizzare in questa reazione com-prendono fluorossi-zolfo-pentafluoruro, fluoro molecolare ed il piombo tetraacetato-acido fluoridrico.
Tra i solventi di reazione sono contemplati gli idrocarbu ri clorurati come il triclorofluorometano (Freon 11), cloroformio, cloruro di metilene e simili, tetraidrofurano e loro miscele. E' preferibile effettuare la. reazione a basse temperature, preferibilmente nell'intervallo da -75?C a -85?C, sotto agitazione continua.
La reazione risulta solitamente completata in un tempo compreso tra 15 minuti circa ed un'ora.
Per quanto riguarda il secondo stadio di reazione, si utilizzano acidi acquosi organici o minerali, quali acido ace tico od acido cloridrico. Per la reazione si possono adottare temperature comprese tra circa 30?C e circa 150?C, la reazione essendo preferibilmente condotta alla tempera tura di riflusso. Il prodotto risultante (III) viene ricuperato in forma purificata mediante ricristallizzazione o croma tografia.
Poich? i composti (II) e (III) sono nuovi, essi costituiscono anche parte dell'invenzione.
L'invenzione oltre che Sull'intermedio (III) si basa su di un nuovo mutante, Streptomyces erythreus ATCC 31772, di tipo bloccato, ottenuto per mutagenesi con metodi chimici (ossia con agenti mutageni chimici), con irradiazione con
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raggi U. V. oppure raggi X, mediante azione di fagi e si-mili. La coltura dello Streptomyces erythreus ATCC 31772 usando il composto (III) come substrato porta alla produzione di due nuovi antibiotici macrolidici della classe delle eritromicine, (nel seguito denominati P 80202 e P 80203), aventi rispettivamente Rf di 0, 9 ed 1, 13 rispetto all'eritromicina A e di 0, 85 e 1, 06 rispetto all'eritromicina B, detti antibiotici avendo inoltre colorazioni specifiche se trattati con reagenti cromatici e riscaldati, ossia il primo avendo colorazione scura ed il secondo colorazione viola scuro.
Forma inoltre oggetto dell'invenzione un procedimento microbiologico per la preparazione di un nuovo antibiotico macrolidico della classe delle eritromicine che si caratte_ rizza per il fatto che il composto (III) viene utilizzato come substrato per la fermentazione con un nuovo mutante, Streptomyces antibioticus ATCC 31771 che da origine ad un antibiotico (P 80204) avente Rf' di 1, 06 rispetto all'eritromicina A e di 0. 9 rispetto all'oleandomicina.
La coltivazione dei microorganismi Streptomyces erythreus ATCC 31772 e Streptomyces antibioticus ATCC 31771 usando (8S)-8)fluoro-eritronolide B (III) come substrato per produrre gli antibiotici desiderati pu? essere condotta in conformit? a varie tecniche di fermentazione.
Dopo completamento della fermentazione, si possono uti
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lizzare svariate procedure per l'isolamento e la purifica-zione degli antibiotici.
Tra le procedure consigliabili per l'isolamento e la purificazione rientrano le tecniche di estrazione con solvente, sia in forma discontinua che in colonne di estrazione liqui^ do-liquido in controcorrente, e la cromatografia a permeazione di gel. Secondo una procedura preferita, gli antibiotici prodotti in conformit? alla presente invenzione ven gono ricuperati dal mezzo di coltura mediante separazione del micelio e di tutto il solido non disciolto dal brodo di fermentazione con mezzi convenzionali quali filtia zione o centrifugazione. Gli antibiotici P 80202, P 80203 e P 80204 vengono quindi estratti dal brodo filtrato e centrifugato usando tecniche di estrazione con distribuzione in contro corrente oppure con lavorazione a lotti. L?estrazione con solvente pu? essere effettuata usando un'intervallo di pH compre so tra 8 e 10 ed impiegando come solvente un solvente organico inerte. Solventi adatti includono alcool, co me metanolo, etanolo e simili, idrocarburi clorurati quali cloroformio, cloruro di metilene e simili, etil acetato butil acetato, amil acetato, acetone, metil isobutilchetone ed aceto nitrile, il metil isobutilchetone essendo preferito. La purificazione finale degli antibiotici anzidetti pu? essere realizzata mediante cromatografia su gel permeabili. Dopo filtrazione o centrifugazione del mezzo di fermenta
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zione, ? possibile impiegare cromatografia su strato sottile oppure cromatografia in fase liquida ad alta pressione per individuare mediante analisi gli antibiotici in questione. In aggiunta ? anche possibile utilizzare vantaggiosamente la tecnica della bioautografia.
ESEMPIO 1
Ottenimento del mutante Streptomyces erythreus ATCC 31772 Una sospensione di spole di Streptomyce erytreus produttore di eritromicina ? stata sottoposta a trattamento muta geno con raggi ultravioletti (massimo di emissione 250 nm) ad una dose tale da uccidere circa il 99, 6% delle spore (circa 3000 erg/cmq).
Le spore sopravvissute sono state piastrate su un terreno nutritivo e le colonie risultanti sono state analizzate per la loro incapacit? di produrre eritromicina utilizzando la tecnica descritta da A. Kelner (1949) J. Bact. 5^7 , 73) . I mutanti bloccati nella sintesi dell'eritromicina (circa il 2% dei s?prav?ssuti) sono stati quindi analizzati per la loro capacit? di riconoscere e trasformare il composto (III) come substrato in nuovi composti ad attivit? antibiotica;
ESEMPIO 2
Preparazione di (8S) -8-fluoro-etritronolide B-6, 9; 9, 11-acetale (II)
E<1 >stata preparata una soluzione di fluorossi trifluorometano in CC1, F a -80?C; un eccesso di CF OF (solitamente
? ?3
- 9 - <? >SAIC BREVETTI S. a. s.
di circa 2 volte) ? stato disciolto in CC1 F (preventivamen te raffreddato a ->.S0?C su ghiaccio secco) mediante aggiun-ta lenta del gas attraverso un tubo di spurgo (mentre il cilindro contenente CF OF veniva continuamente pesato su o
una bilancia elettrica Sartorious). La sua concentrazione ? stata determinata mediante titolazione iodometrica. La soluzione di CF OF/CC1 F a -80?C oppure -85?C ? stata O
lentamente aggiunta ad una soluzione contenente 3, 845 g (0, 010 moli) di 8, 9-anidroeritroriolide B 6, 9-emiacetale (I ), descritto nel? brevetto statunitense No. 3697547, in CC1 F/CH CI (295 ml/370 mi) a circa -80<?>C, sottoposta ad agitazione magnetica con ossido di calcio (g 1, 920) per allontanare l'acido fluoridrico. L'andamento della reazione ? stata periodicamente controllata mediante cromatografia liquida ad alta pressione (HPLC), in relazione alla scomparsa del picco caratteristico del composto I.
Dopo scomparsa (oppure minimizzazione) del picco, compo sto (I) l'agitazione ? stata continuata per 5 minuti ed azo to gassoso ? stato fatto gorgogliare attraverso la soluzio ne per allontanare l'eccesso di CF OF a - 80?C e la so
?
luzione ? stata lasciata riscaldare fino a temperatura am biente. La soluzione ? stata lavata con una soluzione satura di NaHCO (650 mi), e quindi lavata fino a nuetralit? o
con acqua ed in ultimo essiccata su Na^SO^.
SAK; ??? ??/'? ? s. a. s.
- 10 -
Dalla rimozione del solvente si ? ottenuto un prodotto grezzo che mediante cristallizzazione da acetone -esano dava 3, 450 g di (8S)-8-fluoro-eritronolide B-6, 9; 9,11-acetale - 20 (II) avente le seguenti caratteristiche: p. f. 191 -2??; /dCj 42, 6 (C 1, 0 in metanolo); UV (metanolo): nessun assorbimento corrispondente ad un gruppo chetonico; IH (KBr) 3540, 3450, 1735, 1460, 1260, 1170, 1060, 1035, 980, 925, 875, 450 cm \
L'analisi per C H FO ha dato i seguenti valori:
21 35 6
calcolata (percento) C 62, 67; H 8, 76; F 4, 72
Trovata (percento) C 62, 63; H 8, 82; F 4, 81.
ESEMPIO 3
Preparazione di (8S)-8-fluoro-eritronolide B (III)
Una miscela formata da 4, 830 g (0, 012 moli) di (8S)-8-flu? ro-eritronolide B -6, 9; 9, 11-acetale (II) e 3000 mi di una soluzione acquosa (pH=3) di acido acetico ? stata portata a ricadere a 110?C per 15 minuti sotto agitazione e quindi sono stati aggiunti 220 mi di acido acetico. Dopo un'ora a 110?C tutto il materiale di partenza era disciolto. Il riscal damento ? stato continuato per mezz'ora e la soluzione ? stata quindi raffreddata quanto pi? rapidamente possibile a temperatura ambiente, resa neutra con NaHCO^ ed ?strat_ ta con etil acetato.
La soluzione di etil acetato dopo anidrificazione su solfato di sodio ? stata evaporata a secchezza sotto vuoto.
11 - SAIO BREVETTI S. a. S.
Quando il prodotto grezzo ? stato purificato mediante cromatografia in colonna di gel di silice (rapporto 1 : 50) con cloruro di metilene -metanolo (95:5) come eluente, sono sta ti ottenuti 1, 8 g di (8S)-8-fluoro-eritronolide B (III). Dalla cristallizzazione da acetone-esano sono stati ottenuti aghi incolori aventi le seguenti caratteristiche:
p. f 247-8?C \max (metanolo) 288 m ,u (? = 26) /o( -' / D -30 ? (C 1, 0 in metanolo); IR (KBr) 3540, 1727, 1703, 1460, 1330, 1270, 1175, 1130, 1075, 1050, 1015, 940, 920, 895, 960 cm<"1>.
All'analisi per Cg jH FO :
calcolata (percento) C 59, 98; H 8, 87; F 4, 52
Trovata (percento) C 59, 92; H 9, 00; F 4, 59
ESEMPIO 4
Preparazione degli antibiotici P 80202 e P 80203
Una coltura inseminata di Streptomyces erytrheus ATCG 31772, un mutante bloccato nella biosintesi dell'eritromicina, ? stata preparata in un mezzo costituito da (in grammi per litro) saccarosio 30, 0; melasso di canna 8, 0; olio di semi di soia 9, 0; (NEL ) SO . 2, 0; .CaCO 7, 0.
?? ? ? ?
La coltura ? stata incubata a 33?C per 48 ore su shaker rotativo. L'inoculo ? stato aggiunto ad un livello del 5% (V/V) in beute di ?.rlenmeyer da 250 mi contenenti 30 mi di un mezzo di fermentazione avente la seguente composizione in grammi per litro: destrina di mais 30, 0; amido
<' >- 12 - SAIO BREVETTI S. a. .
?s di mais grezzo 40, 0; farina di semi di soia 30, 0; olio di semi di soia 20, 0; (NH ) SO 2, 0 e CaCO 6, 0.
? ? O
Le beute di fermentazione sono state incubate a 33?C su shaker rotante (220 rmp, corsa di 4 cm) per 24 ore.
5 A ciascuna beuta sono stati aggiunti 15 mg di (8S)-8-fluoro-- e ritrono lode B (III) in forma finemente suddivisa sterilizzato sotto luce ultravioletta per 15 minuti, e l'incubazione con sbattimento ? stata continuat a per 96 ore.
Trattamento dei campioni in cromatografia su strato sottile le:
alla fine del periodo di fermentazione un campione del brodo di fermentazione avente un'attivit? di circa 900 -1000 mcg/ml (titolo espresso come eritromicina A) ? stato centrifugato ed il liquido sovranatante ? stato chiarificato me-15 diante aggiunta di volumi uguali di una soluzione acquosa al 10% (P/V) di ZnSO^ e di una soluzione acquosa al 4% (P/V) di idrossido di sodio . Dopo centrifugazione il liquido sovranatante limpido ? stato estratto mediante agitazione vorticosa con un terzo del suo volume di etil aceta-20 to. Un campione della parte organica ? stato depositato su una piastra di gel di silice G e sviluppato in CH^Cl^-MetOH-H?0-NH OH concentrato (90: 9, 5 : 0, 5 : 1) per
2 4
2 ore; le macchie sono state localizzate con reagente a spruzzo di metanolo- anisaldeide -acido solforico concentra-5 to-acido acetico, (85:05:5:10) ed i composti attivi sono sta_
- 13 - SAIC BREVETTI S. a. s. ti rivelati mediante bioautografia su piastre inoculate con Sarcina lutea ATCC 9341.
I risultati della TLC hanno mostrato la scomparsa del ' (8S)-8-fluoro-eritronolide B (III) aggiunto e la comparsa dei due composti attivi il cui valore di Rf rispetto alla eritromicina A sono rispettivamente di 0, 9 e 1, 13 (0,85
y
ed 1, 06 rispetto all? eritromicina B Inoltre essi present a no reazioni cromatiche differenti dopo applicazione di un reagente a spruzzo e<~ >riscaldamento: colore marrone scuro per il composto pi? lento (antibiotico P 80202) e colore violascuro per l' altro composto (antibiotico P 80203).
ESEMPIO . 5
Purificazione degli antibiotici P 80202 et P 80203
Secondo il procedimento descritto nell'esempio 4 precedente, diverse fermenttazioni per un volume totale di 1400 mi a cui vi erano stati aggiunti 0, 50 g di (8S)-8-fluoro-eritronol?de B sono state filtrate sottovuoto dopo aggiunta sotto agitazione di Hyflo Supercell (4% peso/volume). Il solido ? stato lavato con acqua e i filtrati combinati sono stati regolati a pH 5,5 con acido acetico. SI ? aggiunto NaCl (20% peso/jvolume) per ottenere una soluzione satura; questa ? stata estratta tre volte con un volume di etil acetato. La fase acquosa ? stata evaporata sotto pressione ridotta fino ad un volume di 100? mi, regolata a pH 8, 8 con NH^OH 2N ed estratta con un volume uguale di metil
- 14 SAIC BREVKr
isobutilchetone. Gli estratti con ? lvente organico combina-ti sono stati lavati 2 volte con met? volume di KH?PO^
2 4 0, 1 M e quindi ancora una volta con acqua. Dopo esiccamento (Na SO ) ed allontanamento del solvente sottovuoto, il residuo ? stato purificato mediante cromatografia in colonna su Sephadex LH 20 (marchio registrato) (rapporto 1:100). preparata in cloroformio.
L'eluizione con concentrazioni crescenti di metanolo in cloroformio hanno dato frazioni che contenevano soltanto l'antibiotico P 80202 e frazioni che contenevano .l'antibiotico P 80203.
ESEMPIO 6
Preparazione dell'antibiotico 80204
Una coltura pre-inoculata di S. antibioticus ATCC 31771, mutante bloccato nella biosintesi dell'oleandomicina, ? sta ta preparata in un mezzo costituito (in grammi per litro di acqua deionizzata) da farina di semi di soia, 30, 0; cereiose 15, 0; autolisato di lievito 1, 0; oliodi semi di soia 30, 0; MgSO . 7H 0 e Ca CO 10, 0; il pH del mezzo veniva regolato a 7, 2 prima della sterilizzazione.
Dopo 24 ore a 28 C su shaker,.<' >rotante , questa coltura ? stata utilizzata per inoculare lo stesso mezzo ad una concentrazione del 2% (V/V) ed ? stata ulteriormente incubata nelle stesse condizioni per 16 ore.
Questo inoculo ? stato addizionato alla concentiaz ione del - 15 - SAIC BREVETTI S. a. s.
3% (V/V) in beute di Erlenmeyer da 250 mi contenenti 30 mi di un mezzo di fermentazione avente la seguente composizione (in grammi per litro):
cereiose 40. 0; farina di semi di soia 20, 0; farina di mais 3, 0; lievito di birra secco 2, 0 e CaCO 20, 0.
O
Le beute per la fermentazione sono state incubate a 2Q?C su shaker rotante (240 rpm, corse di 4 cm) per 32 ore. 14 mg di (8S)-8-fluoro-eritronolide B (III) in forma finemente suddivisa sono? stati aggiunti a ciascuna beuta e la incubazione di sbattimento ? stata continuata per 54 ore. Alla fine di questo periodo, il titolo della coltura espresso come eritromicina A ? di 100-120 mcg/ml. Il trattamento del brodo di fermentazione per l'analisi TLC ? stato effettuato con il sistema e le condizioni indicate nell?esempio 4. In conformit? a questa tecnica viene rivelato un nuovo composto attivo (antibiotico P 80204) che segna la scomparsa del substrato aggiunto. Il suo Rf rispetto all'eritromicina A ? di 1, 06 ed ? di 0, 9 rispetto all 'ole and omic ina.
ESEMPIO 7
Purificazione dell'antibiotico P 80204
Da 15 fermentazioni effettuate in beute di Erlenmeyer, agi-tate e condotte come descritto nel precedente esempio 6, la brodocoltura totale derivante ? stata trattata con un volume uguale di metanolo. Dopo l'aggiunta dello Hyflo Supercell in 30 min. . sotto agitazine la miscela ? stata
filtrata. Il solido ? stato lavato con acqua-metanolo(l :1) ed
i filtrati combinati sono stati evaporati sotto pressioone
ridotta fino a met? del volume di partenza.
Il pH della soluzione ? stato regolato ad 8, 2mediante aggiunta di KOH si ? aggiunto NaCl (20% P/V) fino a rag; giungere circa la condizione di saturazione e la soluzione ? stata estra_t ta 3 volte con quantit? pari ad un terzo di volume di metil isobutilchetone. Gli estratti con solvente organico combinati sono stati lavati con Na HPO 0, 1 M quindi con acqua.
La soluzione organica dopo anidrificazione su Na^SO^ ?
stata evaporata a secchezza sotto vuoto. Il residuo ? stato purificato su una colonna di gel di silice (rapporto 1:100) preparata in cloroformio. L?eluizione con concentrazioni crescenti di metanolo in cloroformio ha dato frazioni sottoposte ad esame mediante cromatografia su strato sottile
e cromatografia liquida ad alta pressione. Le frazioni contenenti il singolo componente P 80204 sono state riunite .
ed evaporate a secchezza.
17 - SAIC BREVETTI S. a. s.
RIVENDICAZIONI
1) Streptomyces erythreus ATCC 31772, utile per processi microbiologici per la preparazione di antibiotici e bloccato nella sintesi di eritromicina.
2) Procedimento per la preparazione di Streptomyces erythreus ATCC 31772, caratterizzato dal fatto che un ceppo di Streptomyces erythreus produttore di eritromicina viene sottoposto a mutagenesi mediante irradiazione con raggi u. v. con caratteristiche di emissione e dosaggio tali da uccidere almeno il 99% delle spore, e le spore sopravissute vengono analizzate e selezionate in base alla loro ca pacit? di riconoscere e trasformare (8S)-8-fluoro-eritrono lide B in qualit? di substrato per un processo di fermentazione.
3) Procedimento secondo la rivendicazione 2, caratterizza^ to dal fatto che detta irradiazione con raggi ultravioletti viene effettuata con raggi aventi un massimo di emissione a 254 nm e con un dosaggio di 3000 erg. /cmq.
4) (8S)-8-fluoro-eritronolide B avente formula:
DH
1.
o
III
- 18 - SAIC BREVETTI S. a. s.
5) (8S)-8-fluoro-eritronolide B-6, 9j 9, 11-acetale, avente formula:
F y CH<n>i
, o..Lcti,
.- OH
tH
CH,?
C,H
CH,
6) Procedimento per la preparazione dei composti delle rivendicazioni 4 e 5, caratterizzato dal fatto che:
(a) 8, 9-anidroeritronolide B-6, 9-emiacetale viene reagito con un reattivo capace di generare fluoro elettrofilo, in un solvente organico ed a bassa temperatura, e (b) il prodotto di reazione viene fatto reagire a caldo con un acido acquoso.
7) Procedimento secondo la rivendicazione 6, caratterizzato dal fatto che detto composto capace di generare fluoro elettrofilo ? un fluorossi-perfluoroalcano, avente formula C F OF.
n 2n+l
8) Procedimento secondo la rivendicazione 7, caratterizzato dal fatto che detto fluorossi-p?rfluoro-alcano ? fluorossi-trifluorom etano.
9) Procedimento secondo la rivendicazione 6, caratterizzato dal fatto che detto composto capace di generare fluoro elettrofilo ? scelto tra perclorilfluoruro, fluorossi-zolfo-pentafluoruro, fluoro molecolare e piombo<'>tretraaceta
- 19 - SAIC BREVETTI S. a. s.
to-acido fluoridrico.
10) Procedimento secondo la rivendicazione 6, caratterizzato dal fatto che detto solvente di reazione ? un idrocar-buro clorurato.
11) Procedimento secondo la rivendicazi?ne 10, caratterizzato dal fatto che detto idrocarburo clorurato ? scelto tra triclorofluorometano, cloroformio, cloruro di metilene e loro miscele.
12) Procedimento secondo la rivendicazione 6, caratterizzato dal fatto che detto stadio (a) della reazione viene effettuato ad una temperatura compresa tra -75* 0 e -85<e>C, sotto agitazione continua.
13) Procedimento secondo la rivendicazione 6, caratterizzato dal fatto che detto stadio (b) della reazione viene effettuato a temperatura compresa tra 30? C e 150?C.
14) Procedimento secondo la rivendicazione 13, caratterizzato dal fatto che detto stadio (b) viene effettuato alla temperatura di riflusso della miscela di reazione.
15) Procedimento secondo la rivendicazione 6, caratterizzato dal fatto che detto acido acquoso ? scelto tra acido acetico ed acido cloridrico.
16) Procedimento microbiologico per la produzione di antibiotici macrolidici, caratterizzato dal fatto che la fermentazione viene effettuata, in modo di per se noto, usando Streptomyces erythreus , ATCC 31772 quale microorga- 20 - SAIC BREVETTI S. a. s.
nismo di biosintesi ed (8S)-8-fluoro-eritronolide B quale substrato della fermentazione.
17) Procedimento microbiologico per la produzione di antibiotici macrolidici, caratterizzato dal fatto che la fermert azione viene effettuata, in modo di per se noto, usando Strepi omyces antibioticus ATCC 31771 quale microorganismo di biosintesi ed (8S)-8-fluoro-eritronolide B quale substrato della fermentazione.
18) Procedimento per la preparazione di nuovi antibiotici macrolidici secondo le rivendicazioni 16 o 17, caratterizzato dal fatto che dalla coltura, completata la fermentazione, si isolano gli antibiotici prodotti, dopo controllo con tecniche di cromatografia su strato sottile ed bioautografia o prove con reattivi cromatici a spruzzo.
19) Procedimento secondo la rivendicazione 18, caratteri^ zato dal fatto che l'isolamento viene effettuato mediante estrazione con solvente.
20) Nuovo antibiotico macrolidico, caratterizzato dal fatto di essere ottenuto da Streptomyces erythreus ATCC . 31772 usando (8S)- 8-fluoro-eritronolide B come substrato ed avente Rf di 0, 9 rispetto all'eritromicina A e di 0, 85 rispetto all'eritromicina B.
21) Nuovo antibiotico macrolidico, caratterizzato dal fatto di essere ottenuto da Streptomyces erythreus ATCC

Claims (1)

  1. - 21 - S AIC BREVETTI S. a. s.
    31772 usando (8S)-8-fluoro-eritronolide B come substrato ed avente Rf di 1, 13 rispetto all'eritromicina A e di 1, 06 rispetto all'eritromi cina B.
    22) Nuovo antibiotico macrolidico, caratterizzato dal fatto di essere ottenuto da Streptomyces antibioticus ATCC 31771 usando (8S)-8-fluoro-eritronolide B come substrato ed avente Rf di 1, 06 rispetto all'eritromicina A e di 0, 9 rispetto all'oleandomicina.
    p. p. PIERREL S. p. A.
    p. SAI/OBREVETTI S. a. s.
    di [Eia./ wll I/rag<!tti & C.
    Mt * Ro ow '<a>' o) ro
    Brei
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