IT8123109A1

IT8123109A1 - Nuovi derivati dell'acido chenodesossicolico

Info

Publication number: IT8123109A1
Application number: ITMI1981A023109A
Authority: IT
Original assignee: Scolastico Carlo
Priority date: 1981-07-24
Filing date: 1981-07-24
Publication date: 1983-01-24
Also published as: GB2105723A; IT1167479B; US4439366A; JPS5824596A; FR2510558B1; JPS6159638B2; GB2105723B; IT8123109A0; DE3225529C2; FR2510558A1; DE3225529A1

Description

MiJdio Consulenza Brereffuale s.r.T.

^768 M DESCRIZIONE dell*invenzi?ne industriale dal titolo:

V

??/ymf ^JIOOffT DERIVATI DELL'ACIDO CHENODESOSSICOLICO"

a nome: 1) CARLO SCOLASTICO

2) CESARE SIRTOHI

3) DAVID KRITCHEVSKY

a : 1) Via Vallianeri 13B - Milano

2) Piazzetta Bossi 1 - Milano

3) 36 Street at Spruce, Philadelphia, Pa 19105 (U?S?A*)

di nazionalit? :

1) italiana

2) italiana

3) statunitense

ed elettivamente domiciliati a tutti gli effetti di legge presso il mandatario Studio Consulenza Brevettila le - Via Senato n? 24 - Milano

Inventori: 1) Carlo Scolastico

2) Cesare Sirtori

3) David Kritohevsky

Depositata il 24 luglio 1981 No? ^ 3 1 0 9 A/iOf

R I A S S U N T O

Si descrivono nuovi acidi 7-acil-chenodeeossicoliJ ci di formula (I) i

UVMIIUIUUB mera lume SJ.I.

- 2

COOH

??

(I)

HO O-C-R

H II

0

nella quale B-CO rappresenta il residuo di un acido carbossilico lineare, saturo o insaturo, recante 3-1& atomi di oarbonio, oppure il residuo d'un acido oicloalcancarbossilico recante 3-7 atomi di carbonio nell'anello cicloalcanico, dotati di propriet? terapeutiche contro la calcolosi biliare, le discinesie biliari e la ipertrigliceridemia?

DESCRIZIONE DELL * INVENZIONE

La presente invenzione ha per oggetto nuovi derivati dell'acido chenodesossicolico,, e precisamente acidi 7-aoil-chenodesoseioelioi di formula (I)

COOH

(I)

0? C? R

n

nella quale R-CO rappresenta il residuo di un acido carbos Bilico lineare, saturo o insaturo, recante 3?18 atomi di carbonio, Appure il residuo d'un acido cicloni csncarbossilico recante 3-7 atomi di carbonio nell*a nello cioloalcanico?

In particolare, R-CO pu? rappresentare il residuo a?ilico degli acidi acetico, butirrico, caprilico, laurilico, paimitico, stearico, oleico, linoleico, arachidonico, ciclopropanoarbossilico, ciclobutanoar bossilico, ciclopentanoarbossilico, cicloesancarbossi Ileo?

La terapia con acido chenodesossicol&co nel campo della calcolosi biliare e ormai affermata (Coyen et al?, li? Bngl. J. Med?, 292? 604, 1975)? l?acido chenodesos sicolico, arriccliendo di acidi biliari la bile coleci etica, diminuisce in m?do progressivo la litogenicit? e pu? portare alla dissolusione di calcoli biliari ricchi in colesterolo? Pi? di recente, l'impiego dell'acido ohenodesossicolico ? stato suggerito anche nel trattamento delle discinesie biliari e delle ipertriglioeridemie (Angelin et al?, J. Lipid Hes. 19, 1017, 1978).

l'effetto anti-litiasioo dell'acido chenodesossioo, lico ? limitata nell'uomo, sia dagli effetti oollatsra li soggettivi (nausea, diarrea) sia dal metabolismo stesso dell'acido biliare, che subisoe o una 7a-deidrossilazione, o un'ossidazione a 7-chetoderivato inat tiv?. Questa ossidazione, ohe avviene a livello inte stinale, ? mediata da prodotti enzimatici di origine batterica (Ferrari et al,, FEBS Lett, 7J>, 176, 1977), e blocca il circolo enteroepatico dell'acido ohenod(8 sossicolico, risultandone prodotti inattivi e limitali do l'efficacia terapeutica dell'agente anti-litiasico? Vi ? inoltre il sospetto che la formazione di metaboliti dell'acido chenodessosioolico possa condurre a prodot ti a tossicit? diretta sull'intestino, come dimostra to da diverse ricerche sperimentali (Sauer et al,, Zschr, Gastroenterol,, VJ., 236, 1979)?

Appare quindi importante poter disporre, per la terapia cranica della calcolosi biliare, di derivati che consenta lo un riciclo continuo dell'acido chenodesossicolico e ne riducano la possibilit? di inatti vazione a livello intestinale.

Si ? ora trovato che i 7-acilderivati di formula (I) (che d'ora in poi verranno anche indicati con la sigla CDC-7-esterl) resistono in misura imprevedibile ? tale inattivazione, consentendo una significativa riduzione delle dosi quotidiane e/oppure un significa tivo aumento degli intervalli di somministrazione. Gii acilderivati (I) si dimostrano pressoch? privi di tossi -'-MilHJ0,p 5XJT

5

cit? animale e, nel corso di esperienze su calcolosi sperimentali, hanno rivelato un'attivit? anti-litiasica che- soprattutto in alcuni termini - ? nettamente superiore a quella dell'acido ohenodessosicolico? Inoltre, i

CDC-7-e steri (I) si sono dimostrati in possesso di un'intero ssante attivit? ipotrigliceridemizzante.

Pertanto, un altro oggetto della presente invenzio ne ? costituito da composizioni farmaceutiche per la terapia della caloolosi biliare, delle discinesie hi li ari e della ipertrigliceridemia, caratterizzate dal fatto di essere costituite da uno o pi? CDG-7-e steri

(I) in qualit? di principi attivi.

Un ulteriore oggetto dell'invenzione ? costituito dall'uso dei composti (I) per la terapia delle calco, losi biliari, delle discinesie biliari e della ipertriglieeridemia. Per "uso" nel senso dell'invenzione sono da intendersi tutte le operazioni inerenti alla preparazione dei composti in oggetto, compresa la loro purificazione, la loro formulazione in forme farmaceu tiche adatte alla somministrazione, e/oppure il loro confezionamento, in ^recipienti adatti alla somministra zione stessa.

Infine, l'invenzione riguarda un procedimento per la preparazione dei CDC-7-e steri (I) , consistente nell'idrolisi alcalina selettiva dei 3,7-diacilderiva

ti del ehenodesossieolato di metile, di formula (II), in base allo schema qui sotto riportato:

H_C

COOCH.

ci) OH"

E-C-0 O-C-R

H

(XI)

dove H-CO ha i significati sopra precisati? L'idrolisi selettiva sopra schematizzata si effettua con idroseido di sodio o di potassio in solventi costituiti da misoele di alcoli inferiori con acqua, o di metilcellosolve con acqua, o analoghe?

Alla loro volta, i 3,7-diaeilderivati (II) sono ag cessibili per acilaziene del ohenodesossioolato di meti le con derivati attivati degli acidi R-COOH, ad esem pio i oloruri o le anidridi omogenee o miste, oppertu namente in presenza di accettori di acidit?? Un procei dimento di diaoilazione particolarmente semplice, e accompagnato da buoni rendimenti, ? costituito dalla reazione tra chenodessosicolato di metile e cloruri . adii ci (o anidridi) in pirldina?

Dopo l'idrolisi selettiva sopra illustrata, i CDC-7-e steri di formula (I) vengono isolati e purificati per cristallizzazione, o - quando siano liquidi a tem paratura ambiente - per cromatografia su colonna, oppor tomamente su silice*

Crii esempi che seguono'illustrano il procedimento dell'invenzione?

ESEMPIO 1

Acido 7-butirril-ohenodeasosioolico (formula t-con

n-pr?pile )

a) Una soluzione di 1 millimole di ohenodesossicolato di metile in 1,42 mi di piridina viene trattata con 9,8 minimeli di anidride butirrica. La miscela viene scaldata a riflusso per tre ore, quindi versata sot to agitazione in ghiaccio e acidificata a 1 oon HCl 1i1. Il precipitato viene estratto con CH2C12; la soluzione organica ? lavata con soluzione satura di NaHCO^, poi con acqua sino a neutralit?? Si secca su Ha2S0^ e si evapora sotto vuoto sino a pese costante? Il prodotto ottenuto, costituito dal 3,7-dibutirrilchenodesossicolato di metile, viene usato senza ult? riori purificazioni per la reazione successiva?

b) Una soluzione di 1 millimole del diacilderivato, ot tenuto seoondo a), in 4,46 mi di metanolo viene addi zionata di 2,23 mi d'acqua e di 0, 23 mi di KOH in soluzione acquosa al 50$? Si scalda all*ebollizione, in atmosfera inerte, sino a ohe l'esame cromatografia co conferma 1'avvenuta idrolisi (60-90 minuti); si evapora sotto vuoto il metanolof si acidifica a pH 2 con HC1 1:1 e si estrae con cloruro,di metilene? L'e stratte viene essiccato su Na^SO^ ed evaporato a se? ohezza; per ricrietallizzazione da metanolo si ottici ne il prodotto desiderato allo stato puro? F.f? 192-94?C? (I dati analitisi sono esposti in Tabella 1).

ESEMPIO 2

Acido 7-palmitoil-chenodesos8?colico (formula I, con 2t= CH3-(CH2)14-)?

a) Si tratta la soluzione di 1 minimele di chenodesossieolato di metile in 2 mi di piridina con 2,5 mil limoli di doner? di palmitoile? Si scalda a riflussso per un'ora, quindi si versa in ghiaccio, si acidifi ca con HC1 1:1 a pH 1 e si isola il 3,7-dipalmitoilchenodesossicolato di metile come descritto de11*esom pio 1a)?

b) Il composto grezzo ottenuto come sopra viene trat tato con idrossido ?i potassio in metanolo acquoso, secondo le modalit? indicate nell'esempio 1b)? L'olio ottenuto al termine dell'operazione viene cromatogra fato su silice, in rapporto 1:20, impiegando come eluen te miscele esano/acetato d'etile in rapporto di polarit? * ?l.l,

- 9 -oresoente da 9:1 a 6:4?

La Tabella 1 riassume alouni dati oaratteristici di CDC-7?esteri di formula (l)t ottenuti con il pr? cedimento secondo l'invenzione?

TABELLA 1

p.f. ?c BQIT* di Orisi* Formula

c

rato 192-94 metanolo

?28<H>46?5 H

p[r?- C lato 173-75 metanolo/H^O

<C>28<H>44?5 H

C

lato 133-35 metanolo/HgO ?3*4?5 H

la t o C 97-99 die tile terc/e sano ?AA H

tato olio - C W , H

C

? olio - ?4?2?5 H

e ato olio - C W , H Studio Consiflenu ?

11

I CDG-7-esteri sopra riportati presentano allo NMH (in CDCl^, riferimento interno TM5) i seguenti segnali caratteristici i

3,15/3,27 - 3,80/4,00 (1H, m, J?H0H) ;

4,70/4,85 - 5,00/5,90 (1H, m, ^CH-O-OC-B) ;

5,90/6,65 - 6,30/7,10 (2H, m, -COOH, -OH).

Oleato e linoleato presentano inoltre segnali rispettivamente a 5,27-5,60 (2H, m, CH=CH) e a 5,05-5,75 (4H, 2 CH=CH)?

Nello spettro IK tutti i composti (l) presentano assorbimenti a 3540 e 3420 enf<"1 >(OH), e a 1720 em<?1 >(banda allargata, COOH, O-OC-E).

Inattivit? biologica dei composti in oggetto ? sta ta saggiata su modello della calcolosi biliare nel Criceto Siriano? In questo modello (Barn e Christensen, Acta Path. Microbici? Scand. 30. 236, 1952) gli ani mali sono esposti a una dieta semipurificata oontenen te 74,3# di saccarosio, 20# di caseina, 5# di miscela di sali, 0,5# di miscela vitaminica e 0,2# di cloruro di colina. La dieta, come pure l'acido chonodesossicolico e i suoi derivati, sono somministrati per un periodo di 53 giorni. Alla fine del trattamento gli animali sono sacrificati e la bile viene olassificarta come chiara 0 opaca; vengono naturalmente contati gli animali portatori di calooli biliari.

1 risultati esposti nella Tabella 2 dimostrano che l'acido chenodesessicolico, somministrato allo 0,2# della dieta, non esercita alcun effetto significative n? sulle caratteristiche della bile n? sull'incidenza di calcolosi, anche per una lieve tossicit? che ha ri dotto il numero degli animali superstiti (19 su 25).

Derivati,a catena relativamente corta (acetato, laurilato e butirrato) sono in grado di ridurre invece il numero di calcoli biliari, seppure in modo non stati eticamente significativo. TniFiwa ? derivati a catena lunga insaturi (oleato e linde ato) seno in grado di mantenere una bile chiara nella grande maggioranza degli ani mali e di prevenire totalmente l'insorgenza di calco lesi.

/

TABELLA 2

Incidenza di calcolosi in criceti trattati con dieta litogena (gruppi di 25 animali trattati per 53 giorni) .

# bile bile

della obi ara opaca calceli dieta

Controlli 8/25 7/25 10/25 (32#) (28#) (40#)

Chenodesossicolico (CDC) 0.200 5/19 6/19 8/19 (26#) (32#) (42#)

CDO-7-acetate ( <0 >) 0.214 9/20 5/20 6/20 (45#) (25#) (30#)

CDO-7-laurilato 0.293 7/22 7/22 8/22 (32#) (32#) (36#)

CLC-7-bu tirrato 0.236 3/24 15/24 6/24 (13#) (63#) (25#)

CD C-7? oleato 0^335 16/25 9/25 0/25 (64#) (36#) (0#) CDC-7-linoleato 0.336 16/24 8/24 0/24 (67#) (33#) (0#)

(?) E. Hanser, E. Baun??Lrtnerf K. Meyer, Helyetica Chimica Acta,

La tossicit? sperimentale dei composti ? stata sag - 14 Consuf<* ?>?<? >ffreveftu^r? sr (.

giata nel topo Swiss (peso medio 25-30 g per i masohi e 20-25 g per le femmine)? Per la determinazione della tossicit? i composti sono stati somministrati a dosag gi da 10 mg/kg a 2000 mg/kg, sospesi in earbossimetil cellulosa, in modo da somministrare 0,5 mi di sospen Siene a un topo di 20 g? Dopo singole somministrazioni di ogni composto gli animali sono stati seguiti per 10 giorni? Tutti i composti testati e cio?: acido che modesossioolieo (CDC), CDG-7-acetato, CDC-7-lauzilato, CDC?7-butirrato, CDC-7-oleato e CDC-7-linoleato, non hanno determinato alcuna mortalit? nel test sopra de scritto, por cui la loro Di/50 dev'essere considerata superiore a 2000 mg/kg? Durante l'esperimento di deter Binazione di tossicit? acuta gli animali non hanno manifestato alcun segio chiaro di tossicit??

Si oonolude quindi che esteri in posizione 7 dell'acido ohenodesossicolico con acidi grassi a lunga patena insaturi non manifestano alcuna tossicit? acu ta nell'animale da laboratorio e si dimostrano eccezionalmente attivi nella calcolosi sperimentale del criceto dove l'acido ohenodesossicolico ? praticamente inattivo, a dosi equivalenti?

I composti di formula (I) possono essere somministra ti a pazienti affetti da calcolosi biliare, da discinesie biliari o da ipertriglieeridemia in dosi di 50

RI V E N D I C A Z I O NI

1. Come nuovi composti, acidi 7<-acil-chenodesossico lici di formula (i)

H.C

CH

C00H

CH

(I)

0-0-R

nella quale R-CO rappresenta il residuo di un acido carbos Bilico lineare, saturo o insaturo, recante 3-18 atomi di carbonio, oppure il residuo d'un acido cicloal cancarbossilico recante 3-7 atomi di carbonio nell'a nello cicloalcanico.

2. Come nuovo composto secondo la rivendicazione 1, l?acido 7-butirril-cbenodesossicolico?

3? Come nuovo composto secondo la rivendicazione 1, l'acido 7-(ciclopropil-carbonil)chanodesossicolico?

4? Come nuovo cocmposto secondo la rivendicazione 1, l'acido 7-eapriloil-clienodeso88icolico?

5# Come nuovo composto secondo la rivendicazione 1, : l'acido 7?lauroil-chenodesoest-eolico?

6? Come nuovo composte secondo la rivendicazione 19 1<1>acido 7*~palmito?l-chenodeso88icolico?

7? Come nuovo composto secondo la rivendicazione 1, l'acido 7*Oleil-chenodeBossieolico?

8, Come nuovo composto secondo la rivendicazione 1, l'acido 7-linoleil-chenodeBossicolico?

9? Processo per la preparazione dei composti seoondo le rivendicazioni 1-8, caratterizzato dal fatto ohe si sottopongono a idrolisi alcalina selettiva 3,7-dia cilderivati del chenodesossicolato di metile di formula (II), secondo il seguente sohemax

H G

CH COOCH

3 3

B-C-0 O-C-B

(II)

dove B-CO ha i significati sopra precisati?

10? Ihrocesso secondo la rivendicazione 9, caratteri? zato dal fatto che l'idrolisi viene realizzata con idressidi di sodio o di potassio*

Claims

11 Processo secondo le rivendicazioni 9-10, caratte rizzato dal fatto che l'idrolisi viene realizzata in solventi costituiti da miscele di alcoli inferiori con acqua o di metilcellosolve con acqua?

12 Composizioni farmaoeutiche per la terapia della calcolosi biliare, delle discinesie biliari e della ipertrigLiceridemia, caratterizzate dal fatto che in qualit? di principio attivo contengono, o sono co stituite da, uno o pi?.composti secondo le rivendica zioni 1-8.

Milano, 24 luglio 1981

Studio CoAsdenza Brevetfuaie &r.f.

l?Uffi/ale Rogante (pjotroj