IT8268431A1

IT8268431A1 - N(vinblastin-23-il) derivati di amminoacidi loro preparazione ed applicazione terapeutica

Info

Publication number: IT8268431A1
Application number: ITTO1982A068431A
Authority: IT
Original assignee: Omnichem Sa
Priority date: 1981-12-08
Filing date: 1982-12-07
Publication date: 1984-06-07
Also published as: IT8268431A0; JPS58116491A; ZA828823B; DK541882A; IE55283B1; LU83822A1; DK161833C; SE452622B; ATA444982A; ES517942A0; IE822906L; NZ202708A; IL67366A0; JPH0449557B2; CA1198422A; OA07270A; NL8204711A; DE3245269A1; AU9084782A; IL67366A

Description

DOCUM ENTAZIONE

RILEGATA

DESCRIZIONE dell'invenzione industriale dal titolo:

"N-(vinblastin-23-il) derivati di amminoacidi, loro preparazione ed applicazione terapeutica"

di: OMNICHEM S.A., nazionalit? belga, Avenue de Broqueville

12, 1150 Bruxelles (Belgio)

Inventori designati: Andr? Benoit L?on TROUET, Kandukuri Sivaprasada Bhushana RAO, Jean Alfred Alphonse HANNARAT

Depositata il: 7 ?.cembre 1982 68431 A/82

* * * * *

La presente invenzione si riferisce a nuovi alcaloidi CD g bis-indolici . Pi? particolarmente, l'invenzione si riferisce 0

?*e a nuovi prodotti di combinazione di amminoacidi con derivati

della vinblastina, al procedimento per la loro preparazione,al- P? la loro applicazione come agenti antitumorali, e a composizioni farmaceutiche che li contengono.

Questi nuovi derivati della vinblastina possono essere utilizzati per il trattamento delle leucemie e dei tumori

maligni nell'uomo.

Gli alcaloidi bisindolici del tipo della vinblastina

seno composti ben noti che possiedono lo scheletro di carbonio della seguente formula generale :

CE AD/tf

I

CH?0

S

Si citerannoia titolo di esempio( la vincaleucoblastina (brevetto statunitense No. 3.097.137), la leurocristina

o vincristina pe la leurosidina (brevetto statunitense No.

3.205.220), il vinglicinato (brevetto belga No. 659.112) e

la vindesina (brevetto belga No. 813.168). Quest'ultimo composto ? stato ottenuto mediante trasformazione chimica della

vinblastina naturale (I, R = OCH , R = COCH ) che ? otte-JL O c O

nuta mediante estrazione a partire da foglie di Catharanthus

roseus. .

La vinblastina, la vincristina e la vindesina sono

messe in commercio per la loro utilizzazione in terapia umana, pi? particolarmente per il trattamento di leucemie e di

certi tumori solidi.

Questi medicamenti possiedono nondimeno degli effetti secondarisfavorevoli. La vincristina ? neurotossica, e

la vinblastina ? fortemente tossica al!livello dei tessuti

ematopoietici.

Il loro meccanismo di azione ? analogo a quello che

? stato postulato per l'azione antimitotica della colchicina.

Questi medicamenti agirebbero attraverso inibizione della

polimerizzazione della tubolina a microtuboli(e successivo

arresto della divisione cellulare in metafase.

L'utilizzazione diicomplessi 1:1 di alcaloidi bisindolici antitumorali con la tubolina ? stata descritta nel

brevetto belga No. 854.053. coa g In certi casi, ne pu? risultare una minore tossicit?

r ? ed un'attivit? chemioterapeutica pi? rilevante di quelle de V ?

'3 gli alcaloidi liberi corrispondenti.

Sono stati esaminati altri derivati ottenuti mediante modificazione chimica della vinblastina. Cosi, il solfato

di vinglicinato (I, solfato, R^ = OCH^, = COCH^N (CH^) ,

Cancer Research 1967, 27, 221-227) ? stato studiato nella

sperimentazione clinica, ma non si ? generalmente rivelato

superiore alla vinblastina ed alla vincristina.

Il brevetto belga No. 813.168 descrive la vindesina

(I, R^ = NH^, R^ = H), ed altri derivati carbossammidici in

della vinblastina. Pubblicazioni posteriori hanno confermato l'interesse terapeutico della vindesina o 3-carbossammide-0?4-deacetil-vinblastina, ma questo composto si ? tuttavia, rivelato inattivo per il trattamento di tumori L 1210

trapiantati nel topo.(C. J. Barnett et al., J. Med. Chem.

21, 88, 1978).

I nuovi composti descritti nella presente invenzione

sono capaci di ritardare efficacemente la morte di topi nei

quali si sono trapiantati per via endovenosa (tumori P 388

e L 1210.

Le attivit? su questi tumori sperimentali P 388 si

sono rivelatej sorprendentemente, molto superiori a quelle

degli alcaloidi Vinca di riferimento. Sono state osservate numerose remissioni complete. Sc=s I derivati secondo l'intenzione possiedono, inoltre, ?CO altri vantaggi importanti ed inattesi, in confronto con la V ?

<??>3 vinblastina ed i suoi analoghi noti, in particolare la vindesina.

In particolare, le tossicit? osservate sono generalmente inferiori a quelle corrispondenti alla vindesina o alla vincristina.

La presente invenzione riguarda i derivati della vinblastina corrispondenti alla formula generale II seguente:

nella quale

R rappresenta un estere di amminoacido, eventualmente protetto, eopulato- al frammento vinblastin-23-ile mediante un legame ammidico, il gruppo estere, ramificato o no, possedendo

da 2 a 9 atomi di carbonio, R^ rappresenta un atomo di idrogeno o un gruppo ossidrilico, rappresenta un atomo di idrogeno, un gruppo formilicOjO acilico comprendente da 2 a 9

atomi di carbonio, R_ rappresenta un atomo di idrogeno, un

5

gruppo metilico o un gruppo formilico, con l'esclusione del

caso in cui R rappresenta un gruppo metilico e R rappresen-

5 1

ta un gruppo ?-ossidrilico, come pure loro sali di addizione

* con gli acidi minerali od organici. ?

I nuovi composti secondo l'invenzione corrispondono,

pi? particolarmente, alla formula generale III

I

CCLCH

(III)

i fi?*!.

A

nella quale rappresenta un gruppo ossidrilico od un -atomo

di idrogeno, R^ rappresenta un atomo di idrogeno, un gruppo

formilico o acilico comprendente da 1 a 9 atomi di carbonio;

rappresenta (ogni volta indipendentemente ,un atomo di idro?

geno, un gruppo alchilico, ramificato o no, comprendente da

1 a 8 atomi di carbonio, un gruppo idrossi-C -C -alchilico,

1 8

ammino-idrossi-C -C -alchilico, carbossi-C -C -alchilico,

1 8 1 8

ammido-C -C -alchilico, guanadino-C -C -alchilico, ammino-1 8 1 8

C^-Cg-alchilico, tiol-C^-Cg-alchilico , cisteinil-metilico,

tiometil-etilico , benzilico, idrossibenzilico,

g C3 ?2 /CHj- -''CU-.-*? '3

H (V)

K

oppure R , insieme con l'atomo di carbonio al quale esso ?

3

attaccato, e l'azoto del gruppo ammidico, rappresenta un ci?

clo di azolo o idrossiazolo;

R rappresenta un atomo di idrogeno, un gruppo metilico o

un gruppo formilico, e rappresenta un gruppo alchilico,

lineare o ramificato, avente da 1 a 8 atomi di carbonio, o

un gruppo benzilico, ad esclusione dei composti in cui

= 8 - OH e R = CH ; COOR rappresenta di preferenza un grup-

po carboetossi o carbometossi , come pure loro sali di addi?

zione con acidi minerali od organici.

Pi? particolarmente, il frammento strutturale della

formula III

R 0

,3 ?

-NH-CH-COR

rappresenta un estere di qualsiasi degli amminoacidi naturali

e di loro isomeri ottici di configurazione D, particolarmente:

glieina acido aspartico cistina

alanina acido glutammico metionina

vaiina asparagina fenilalanina

leucina glutammina tirosina

isoleucina arginina triptofano

g serina cn lisina prolina ?2 treonina cisteina istidina ig idrossiprolina o idrossilisina.

Si possono considerare questi composti come dei derivati della 3-decarbometossi-0-4-deacetil-vinblastina-3-carbossammide. Si preferir?( tuttavia(designarli come N-(vinblastin-23-il)- o N-(vincristin-23-il)-derivati di amminoacidi.

I composti preferiti secondo 1<1 >invenzione corrispondono alla formula II nella quale rappresenta un atomo di

idrogeno e la parte di amminoacido ? derivata da uno dei seguenti amminoacidi: L- o D-triptofano, leucina, vaiina, isoleucina, alanina e feriilalanina. Tra questi ultimi, L-triptofano, L-isoleucina e L-alanina si sono rivelati pi? particolarmente interessanti.

La presente invenzione descrivefpi? particolarmente ,

prodotti di copulazione di amminoacidi con la vincristina, la 0-4-deacetil-vincristina, la deformil-0-4-deacetil-vincristina e la deossi-vinblastinaJi.

Quest'ultimo composto pu? essere ottenuto mediante idrogenazione del1'anidrovinblastinajottenuta mediante disidratazione della vinblastina, o mediante copulazione della vindolina con la catarantina (Potier et al., JACS 98, 7017, 1976).

Quando 1'amminoacido contiene gruppi funzionali nella catena laterale R^ (formula III), come la lisina o la cisteina, pu? essere necessario proteggere questi gruppi funzionali impiegando i metodi ben noti all'esperto del ramo.

Questa protezione pu? essere effettuata, secondo la natura del gruppo da proteggere, mediante l'inserzione di un gruppo benzile, t-butile, benzilossi-carbonile, t- butossi-trifluoroacetil-carbonile fo tritile. Altri agenti ben noti in chimica peptidica possono essere vantaggiosamente utilizzati.

Secondo il procedimento sopra menzionato, i composti secondo l'invenzione possono esser ottenuti a partire da derivati corrispondenti della vinblastina, in modo classico, mediante idrazinolisi seguita da nitrosazione, poi da copulazione con l'estere di amminoacido, secondo lo schema di reazione I

NaNO I

CH-OH

OCOCH OH

COOCH. C-NH-NK HO C-N

estere di amminoacido

/ i

ca Schema I

Il primo stadio consiste nell'aggiungere un eccesso

di idrazina anidra ad una soluzione di vinblastina base in

metanolo anidro.La miscela di reazione viene quindi riscalda?

ta, in atmosfera inerte, per da 12 ore a 12 giorni, ad una

temperatura compresa tra 30 e 70?C. Di preferenza, la tempe?

ratura sar? mantenuta a circa 60?C.

L'idrazide del derivato bis-indolico viene poi isola?

ta mediante aggiunta d'acqua, estrazione con diclorometano

e concentrazione. Il composto pu? essere ulteriormente puri?

ficato mediante cromatografia preparativa (silice neutra).

Nel caso della vincristina, il prodotto ottenuto ? la 0-4-

deacetil-deformil-vincristina-carbossidrazide .

Durante il secondo stadio, la funzione idrazide della <? .<'>tei vinblastina modificata viene trasformata in azide acida..

Questa trasformazione viene effettuata in modo noto, mediante

aggiunta di nitrito di sodio all'idrazide in soluzione in

una miscela acqua-metanolo-acido.

L'acido utilizzato pu? essere l'acido cloridrico.

La temperatura di reazione ? mantenuta tra 0 e 5?C.

Dopo estrazione con un solvente aprotico non solubile nell'acqua, di preferenza il cloruro di metilene, la fase organica

viene parzialmente concentrata.

L?azide acida non ? di preferenza isolata? ma

? portata direttamente in presenza dell<1 >estere di amminoacido o, all<1 >occorrenza, del derivato protetto corrispondente,

r in soluzione in cloruro di metilene. y r s3 La quantit? di amminoacido impiegata ? da 1 a 5 equivalenti di vinblastina-carbossazide modificata.

Il mezzo di reazione ? mantenuto tra -3 e 10?C per

da 8 a 72 ore, il pi? delle volte circa 15 ore. La reazione

? facilmente seguita mediante cromatografia su strato sottile. Ebpo concentrazione, si isola il composto secondo 1'invenzione III,che pu? essere trasformato in solfato(? in un

altro sale di acido minerale od organico, mediante cristallizzazione a partire da una soluzione metanolica dell'acido

corrispondente.

I composti secondo l'invenzione vengono purificati

impiegando le tecniche ben note di cromatografia e di ricri?

stallizzazione.

All'occorrenza, il derivato di 0-4-deacetil-vinblastina, cosi ottenuto, pu? essere riacetilato o direttamente

per dare il derivato della vinblastina II, nel quale =

COCH^ (J. Med. Chem. 22, 391, 1979)(o attraverso formazione

preliminare del 3,4-diacetossi-derivatof seguita da una idrolisi selettiva del gruppo acetossi in posizione 3. Il gruppo

ossidrilico in C pu? essere esterificato, in modo di per

4

s? noto, mediante altri derivati attivi di acidi comprendenti da 2 a 9 atomi di carbonio. I 0-4-formil-derivati vengono

ottenuti mediante formilazione (acido formico-anidride aceti Co3

? ca) dei 0-4-deacetil-derivati corrispondenti, vedere il bre S2

vetto belga No. 660.843. ? a La presente invenzione si estende anche alle applicazioni industriali, e particolarmente farmaceutiche, dei nuovi composti bisindolici.

I composti secondo l'invenzione presentano, in particolare, propriet? antitumorali, particolarmente interessanti,

e suscettibili di utilizzazione in terapia umana.

Questi derivati di amminoacido possono essere utilizzati, in particolare, per il trattamento delle leucemie del

tipo L 1210, P 388, di gliomi, linfosarcomi e di altre leucemie o tumori maligni.

In terapia umana, essi sono utilizzati per il trattamento della malattia di Hodgkin, e per altri tumori che possono beneficiare di un trattamento con la vinblastina, la

vincristina e la vindesina.

Questi composti possono anche essere utilizzati in

medicina veterinaria, per il trattamento dei tumori negli

animali.

Altre applicazioni terapeutiche interessanti possono

essere esaminate per questi nuovi derivati di alcaloidi bisindolici. E' stato| infatti ,rilevato che la vinblastina potrebbe essere utilizzata nel trattamento di certe artriti (brevetto statunitense No. 4.208.411), e la vincristina per il trattamento della psoriasi (brevetto statunitense No. 3.749.784). >C3?

C3 Per la loro applicazione terapeutica, i composti se C3 condo l'invenzione, eventualmente sotto forma liofilizzata, ?icgCO vengono di preferenza somministrati per via parenterale, sciolti in un solvente farmaceuticamente accettabile, sotto la

forma di una base o di un sale di addizione di un acido farmaceuticamente accettabile. Tra i sali di addizione si preferiranno i sali non tossici, farmaceuticamente accettabili,

quali i sali di acidi minerali; come l'acido cloridrico, l'acido fosforico e l'acido solforico, o di acidi organici, come l'acido acetico, propionico, succinico, tartarico, ossalico, metansolfonico, benzensolfonico.

L'acqua fisiologica, od altre soluzioni saline tamponate, ad esempio con un fosfato, sono solventi appropriati.

In generale,questi composti possono essere utilizzati ispirandosi a tecniche e a limitazioni che sono note per i trat

tamenti terapeutici con gli altri alcaloidi della classe Vinca.

La sostanza attiva ?( generalmente somministrata ad

una posologia che pu? variare da 0,01 mg a circa 5 mg/kg,

in funzione del derivato utilizzato e dello schema terapeutico adottato. Le dosi settimanali totali variano generalmente da 0,1 mg a circa 35 mg/kg.

Le composizioni secondo l'invenzione sono presentate sotto forme di somministrazione contenenti il principio

attivo alla dose unitaria di 2 a 900 mg.

I composti secondo l'invenzione possono essere utilizt <? >zati da soli od in combinazione con uno o pi? agenti carcino- V r statici, comprendenti ad esempio gli agenti alchilanti, gli

antimetaboliti, quali il m?thotrexate, il 5-fluoro-uracile,

la 6-mercapto-purina, la 6-tio-guanina, gli arabinosidi della citosina e gli antibiotici, quali 1<1 >actinomicina D, la

daunorubicina, 1'adriamicina e il cis-diammino-dicloro-platino. In particolare, questi nuovi derivati della vinblastina possono essere utilizzati associati tra loro.

Gli esempi seguenti illustrano, in modo non limitativo, il procedimento che conduce ai composti secondo l'invenzione.

? VV Esempio 1

1. Preparazione della 0-4-deacetil-N-deformil-vincristina monoidrazide A.

985 mg di vincristina base vengono portati in soluzione in una miscela di 10 mi di idrazina anidra e 10 mi di metanolo. Il mezzo di reazione viene portato a 60?C sotto agitazione per 22 ore. La miscela di reazione viene poi trattata

con acqua e poi con acqua saturata di NaCl. La soluzione acquosa viene estratta 8 volte con 15 mi di diclorometano. Le

fasi organiche riunite vengono trattate con 20 mi d'acqua,

poi con 25 mi di acqua saturata di NaCl, e poi essiccate su

IP

Na^SO^. Dopo filtrazione e concentrazione sottovuoto, si ot- V

tengono 900 mg di 0-4-deacetil-vincristina monoidrazide (purezza superiore a 90%).

Spettro di risonanza magnetica nucleare (CDC1

MHz)

9,76 (s, IH), 8,37 (s, IH), 8,06 (s, IH), 7,53 (d,

IH), 7,24 e 7,07 (m, 3H), 6,82 (s, IH), 6,22 (s, 1), 5,87

(dd, IH), 5,67 (d, IH), 5,43 (s, IH), 4,03 (s, IH), 3,94 (s,

3H), 3,86 (s, IH), 3,73 (s, 3H), 3,52 (s, 3H), 2,82 (s, 2H),

2,51 (s, IH), 0,93 (2t, 2 x 3H).

Spettro di massa (ionizzazione per impatto elettronico)

154, 294, 355, 413, 524, 555, 695, 710, 723, 736,

739, 755 (M 1) - 768, 769, 782

calcolato per C H N 0? : 754.942.

42 54 6 7

2. Preparazione dell'azide acida della vincristina modi?

ficata.

Una soluzione di 850 mg di vincristina monoidrazide

A, in 20 mi di metanolo, viene trattata con 63 mi di HC11N

e 175,5 mg di nitrito di sodio per 15 minuti a 0?C.

La soluzione, mantenuta a 0?C, viene poi neutraliz?

zata con NaHCO a 0?C, p poi estratta 6 volte con 15 mi di

diclorometano. Le fasi organiche riunite vengono essiccate

su Na^SO^, filtrate e poi concentrate sottovuoto, senza ri cC3s Ci scaldare, fino ad ottenere circa 10 mi di soluzione. C5

* 3. Copulazione con il triptofanato di etile ??g 300 mg di triptofanato di etile vengono poi aggiunti,

sotto agitazione, a circa 4?C, e la reazione viene seguita

mediante cromatografia su strato sottile. Dopo 10 giorni,

il prodotto di copulazione viene purificato mediante separa?

zione cromatografica (40 g di gel di silice 60, solvente di

eluizione etere/metanolo Saturo d? NH , 96 : 4, v : v). Si

3

raccolgono cos? frazioni di 15 mi(che vengono controllate

mediante cromatografia su strato sottile. Si raccoglie dap?

prima 1'amminoacido non copulato (frazioni 30 a 40). Si cam?

bia l'eluente (etere/metanolo saturo di NH 86 : 14), e si

3

raccolgono i derivati copulati in tre porzioni: frazioni 44

e 4530 mg, frazioni 46-53257 mg, frazioni 54-60115 mg).

La seconda porzione ? costituita da N-(0-4-deacetil

deformil-vincristin-23-il) triptofanato di etile la, omogeneo alla cromatografia su strato sottile.

Spettro di massa: 984, 970, 956 (M<+ >+ 1) 913, 912,

899 (DCJ isobutano) calcolato per C H N 0 : 955, 181

55 66 6 9

Spettro UV (CH^ H):

max : 282 (4,20) - 290 (4,18) - 322 (3,96)

min : 254 - 287 - 305

, -1,

Spettro IR: (era )

3400 - 2920 - 1720 - 1660 - 1610 - 1485 - 1450 - 1370 - 1345

1330 - 1290 - 1220 - 1165 - 1130 - 1025 - 1005 - 920 - 885

830 - 740 i Spettro RMN (CDC1 ) 360 MHz (ppm) p co o <p>3 8,50 (s, IH)

8,03 (s, 2H)

7.77 (d, IH)

7,60 (d, IH)

7,57 (d, IH)

6,95 (s, IH)

6,35 (s, IH)

5,89 (d.d., IH)

5.78 (d, IH)

4,75 (q, IH)

3,88 (s, 3H)

3,67 (s, 3H)

1,23 (t, 3H)

0,98 (t, 3H)

0,89 (t, 3H)

N-(0-4-deacetil-vincristin-23-i1)-triptofanato di

etile Ib.

Il derivato deformilato la (257 mg) viene riformilato applicando il metodo descritto nel brevetto belga No. 811.110.

Il prodotto grezzo cosi ottenuto viene purificato mediante separazione cromatografica, utilizzando una colonna

di 20 cm (gel di silice, 30 g) ed impiegando successivamente 3 eluenti: etere/MeOH sat. di NH 92 : 8., 88 : 12, 86 :

3

14. L'effluente viene raccolto in frazioni di 15 mi. Le fra? zioni 44 a 54 (34,1 mg) contengono il derivato N-riformilato jj Ib.

Spettro di massa (DCI all<1 >isobutano)

1011, 997, 983 (M<+ >+ 1), 970, 982, 996, 998, 999, 1012.

Calcolato per C H N 0 = 983, 192.

56 66 6 10

Spettro UV (CH OH)

3

max : 270 (4,18) - 290 (4,11)

plateau 280 (4,12) spalla (4,03)

Spettro I.R. (KBr)

bande a 3400- 3040 - 2960 - 2920 - 2880 - 2850 - 1735 - 1725

1680 - 1670 - 1665 - 1610 - 1490 - 1450 - 1225 - 745.

Esempio 2

N-(0-4-deacetil-deoaei-4 -vinblastin-23-il-B)-triptofanato di etile le.

La 0-4-deacetil-deossi-vinblastin-idrazide viene preparata secondo la procedura ripresa nel brevetto statunitense No. 4.203.898 (Lilly, colonna 24, riga 51 e seguenti).

500 mg dell'idrazide in 12 mi di metanolo vengono

poi trattati con 37 mi di HC1 IN e 104 mg di NaNO^ per 15

minuti a 0?C.

La.soluzione viene poi neutralizzata con NaHCO e

3

poi estratta 6 volte con 15 mi di diciorometano. Le fasi or 1

*? ganiche vengono essiccate su Na SO e concentrate fino ad CO2

2 4 ?3 ottenere un volume di circa 10 mi.

L'azide in soluzione viene poi portata in<~>contatto

con triptofanato di etile (300 mg) a 4?C sotto agitazione.

La reazione viene seguita mediante cromatografia su strato

sottile (etere, MeOH). Dopo 6 giorni, la reazione ? terminata ,ed LI prodotto di copulazione viene purificato mediante

cromatografia su colonna di gel di silice (18 cm, 30 g), eluizione con frazioni di 15 mi.

I seguenti eluenti sono stati successivamente utilizzati :

etere 96 MeOH saturato con NH 4 frazioni 1 - 49

3

92 8 frazioni 50 - 57

86 14 frazioni 71 - 90.

Le frazioni 50 - 57 contengono il prodotto di copulazione desiderato (108 mg) le.

Il solfato viene preparato mediante precipitazione in etere (2% H SO /etanolo).

2 4

Spettro UV del solfato (CH^OH)

max : 224 (4,63) - 272 (4,32)

min : 247 (4,03)

spalla : 286 (4,22) - 312 (3,72)

Spettro IR (KBr)del solfato

3420 - 3060 - 2960 - 2930 - 2880 - 2600 debole) - 1725 -1660 - 1615 - 1500 - 1455 - 1430 - 1375 1230 - 1105 - 1060

-1

1015 - 920 - 745 cm .

Spettro RMN (CDCl^) 360 MHz dell base in ppm 9,46 s IH 3.58 s RH

8,34 s IH 3,47 s IH

7,92 s IH 2,82 s 2H

7,67 d IH 2,77 s 3H

7,59 d IH 2.59 s IH

7,53 d IH 1,14 t 3H

7,30 d IH 0,95 t 3H

6,51 s IH 0,87 t 3H

6,04 s IH

m. quasi s. centrato su 5,81

4,94 q IH

4,18 d IH

4,05 q 2H

3,77 s 3H

Spettro di massa della base

DCX isobutano

M 1<+ >a 954 M 14 1<+ >a 968 M 28 1<+ >a 982

ioni a 153 - 155 - 157 - 171 - 172 - 185 - 186 - 199 - 213

223 - 227 - 255 - 257 - 279 - 281 - 283 - 285 - 349

398 - 459 - 516 - 569 - 952 - 953 - 955 - 967 - 969

981 - 983.

Calcolato per C ?H N O : 953,208. S 56 68 6 8 cs Os GB

5 Esempio 3 C3

C3 N-(0-4-deacetil-4 '-deossi-vinblastin-23-il-8)-iso- iB *3 leucinato di etile.

Una soluzione di 0-4-deacetil-4'-deossi-vinblastin?-idrazide (0,6 g; 0,79 mN - vedere il brevetto statunitense

No. 4.203.898, colonna 24, riga 51) in una miscela di 15 mi

di metanolo e 45 mi di HC1 IN viene raffreddata a -7?C. Si

aggiungono 0,15 g di NaNO^ alla soluzione, e si prosegue l'agitazione per 13 minuti a -7?C. Dopo aggiunta di una soluzione acquosa satura di NaHCO fino a raggiungere un pH di

9, la soluzione ottenuta viene estratta 4 volte con CH CI .

2 2

Le fasi organiche combinate vengono lavate con una soluzione

satura di NaCl ed essiccate su MgSO .

4

La soluzione viene concentrata fino ad un volume di

15 mi, e si aggiunge isoleucinato di etile (1,25 mN). Il sol

vente viene poi evaporato a pressione ridotta. Il residuo

viene purificato su colonna cromatografica (SIO^, 60 g) ed

eluito con etere : CH OH / NH (96 : 4). Si ottengono 0,25

3 3

g di un prodotto amorfo (resa 35%).

Spettro di massa: (ionizzazione molec. isobutano)

880 (M<+>), 894, 836, 849, 832, 445; 391, 355 cm<'1>

C ,?? ?_0 = 880,1

51 69 5 8

Punto di fusione 180-190?C

& = 104? (c = 0,154)

-1

IR (CHC1 )3470, 2970, 1728, 1655, 1612, 1502 cm &?G UV (CH30H) 289, 268, 216 nm

P RMN (CDC13) 7,9 (NH), 654 e 6,06 Hg, H , 5,81 (<H>14?<H>15)> V P

4,60 (CHC02(NH), 3,76 COgCH,^, 3,58 C^ -0, 3,33 e 2,85 (H^

e H ?*1, 2,73 (N-CH ), 0,69 (H-15').

3 3

Tossicit? acuta - determinazione della LD

50

La tossicit? acuta del composto dell'esempio 2 N-(0-4-deacetil- deosei-4 '-vinblastin-23-il-fi) triptofanato di etile ? stata studiata su topi NMRI femmine. Dosi crescenti di

medicamento vengono somministrate per via endovenosa in una

iniezione. La percentuale di mortalit? viene seguita in funzi?ne del tempo. I valori di LD^ ottenuti per il composto

dell'esempio 2 (deossi-VTrpE) e per un prodotto di riferimento (deossi-vinblastina = deossi-VBL)(sono riportati in

appresso :

Medicamento LD

50

Deossi VBL 20

Deossi VTrpE (le) 91,5

Il derivato deossi VTrpE ? quindi meno tossico del composto di riferimento.

Attivit? antitumorale

L'attivit? chemioterapica del sale solfato di deossi VTrpE ? stata studiata sulle leucemie linfoblastiche L 1210 e P 388.

1. L 1210

Topi femmine DBA vengono inoculati con 10 cellule leucemiche. Il prodotto viene somministrato per via endovenosa l'indomani dell'innesto??la dose di 50 mg/kg. La mortalit? degli animali viene seguita in funzione del tempo. La tabella 1 riporta i risultati ottenuti con il composto dell'esempio 2 (le). Alla dose esaminata, il derivato ? pi? attivo della VBL. Questa superiorit? ? stata confermata rispetto alla deossi VBL.

2. P 388

4 Topi femmine DBA ricevono per via endovenosa 10 cellule leucemiche. I prodotti vengono somministrati per via endovenosa l'indomani dell'innesto. La mortalit? degli animali viene seguita nel corso del tempo. I risultati sono riportati nella tabella 1. La deossi VTrpE ? nettamente pi? attiva del composto di riferimento e presenta una percentuale molto notevole di sopravviventi a lungo termine.

TABELLA 1

ter Percentuale di Percentuale di

rimer? di

Timore Prodotto Dose giorno sopravviventi sopravviventi

animali V

30 al giorno 30 al giorno 60

L-1210 . VBL 8 10 10,4 57,6 0 0

VBL 19 10 5, 8 -21,6 0 0

Deossi-VTrpE 50 IO 11 ,2 70 0 0

P-388 Deossi-

VBL 4 5 15 , 6 56 0 0

Deossi-

VBL 8 5 5,8 -42 0 0

Deossi- ? V S VTrpE 30 10 16, 5 58,7 0 0 r 3

40 15 30 191 67 53

50 15 30 191 87 73,3

55 IO 30 212 80 60

60 10 30 212 90 90

Topi femmina DBA^ vengono inoculati per via endovenosa con 10

cellule leucemiche . I medicamenti sono somministrati per via

endovenosa alle dosi e schemi precisati .

MST = median survival time = giorni medi di sopravvivenza

ILS % - % of increase in life span = percentuale di aumento

della durata di sopravvivenza.

Claims

RIVENDICAZIONI

1. A titolo di nuovi composti, i derivati della vinblastina corrispondenti alla formula generale II seguente :

eoa g HO * s p co 0 rg

nella quale

R rappresenta un estere di amminoacido, eventualmente protetto, copulato al frammento vinblastin-23-ile mediante un legame ammidico, il gruppo estere, ramificato o no, possedendo

da 2 a 9 atomi di carbonio, rappresenta un atomo di idrogeno o un gruppo ossidrilico, R^ rappresenta un atomo di idrogeno, un gruppo formilico od acilico comprendente da 2

a 9 atomi di carbonio, R rappresenta un atomo di idrogeno,

, 5

un gruppo metilico o un gruppo formilico, ad esclusione del

caso dove R^ rappresenta un gruppo metilico e rappresenta

un gruppo ??ossidrilico, come pure loro sali di addizione

con gli acidi minerali od organici.

2. Composti della formula generale III

CO?CH

(Ili)

-3

OR

nella quale R^ rappresenta un gruppo ossidrilico o un atomo ?s di idrogeno, rappresenta un atomo di idrogeno, un gruppo

formilico od acilico comprendente da 1 a 9 atomi di carbonio;

R^ rappresenta ^gni volta indipendentemente(un atomo di idrogeno, un gruppo alchilico ramificato o no, comprendente da

1 a 8 atomi di carbonio, un gruppo idrossi-C -C -alchilico,

1 8

ammino-idrossi-C -C -alchilico, carbossi-C -C -alchilico,

1 8 1 8

ammido-C^-Cg-alchilico, guanadino-C^-Cg-alchilico, ammino-C^-Cg-alchilico, tiol-C^-Cg-alchilico, cisteinil-metilico,

tiometil-etilico, benzilico, idrossibenzilico,

/C?2-

(IV)

oppure rappresenta^con l'atomo di carbonio al quale ? attaccato e con l'atomo di azoto del gruppo ammidico, un ciclo

di azolo od idrossiazolo;

R rappresenta un atomo di idrogeno, un gruppo metili-5

co od un gruppo formilico, e R rappresenta un gruppo alchili

co, lineare o ramificato, avente da 1 a 8 atomi di carbonio,

o un gruppo benzilico, ad esclusione dei composti dove R

= fl - OH e R = CH , come pure loro sali di addizione con

5 3

acidi minerali od organici

3. Composti secondo le rivendicazioni 1 e 2, caratterizzati dal fatto che si tratta del N-(0-4-deacetil-vincristin- E?3 23-il)-L-triptofanato di etile o di metile^ dei suoi sali ? co ?a di addizione con acidi farmaceuticamente accettabili.

Composti secondo le rivendicazioni 1 e 2, caratterizzati dal fatto che si tratta del N-(0-4-deacetil-deformil

vincristin-23-il)-L-triptofanato di etile o di metile(e dei

suoi sali di addizione con acidi farmaceuticamente accettabili.

Composti secondo le rivendicazioni 1 e 2, caratterizzati dal fatto che si tratta del N-(0-4-deacetil-deossi-vinblastin-23-il-B)-L-triptofanato di etile,e dei suoi sali di

addizione con acidi farmaceuticamente accettabili.

6. Composti secondo le rivendicazioni da 1 a 5 caratterizzati dal fatto che si tratta dei sali di addizione 1 : 1

con l'acido solforico.

7. Composizione farmaceutica> utilizzata in medicina umana e veterinaria per il trattamento di malattie neoplastiche, caratterizzata dal fatto di contenere uno o pi? derivati definiti in una qualsiasi delle rivendicazioni da 1 a 6.

8. Composizione farmaceutica secondo la rivendicazione 7, caratterizzata dal fatto di essere sotto una forma di somministrazione nella quale il principio attivo ? presente ad una do

se unitaria compresa tra circa 2 e 900 mg.

9. Composizione farmaceutica secondo la rivendicazione 7, caratterizzata dal fatto che il principio attivo ? il N-(0-4-deacetil-vincristin-23-il)-L-triptofanato di etile, eventual? mente sotto la forma di un sale di addizione con un acido far v maceuticamente accettabile.

10. Composizione farmaceutica secondo la rivendicazione 7, caratterizzata dal fatto che il principio attivo ? il N-(0-4-deacetil-deformil-vincristin-23-il)-L-triptofanato di etile, eventualmente sotto la forma di un sale di addizione con un acido farmaceuticamente accettabile.

11. Composizione farmaceutica secondo la rivendicazione 7, caratterizzata dal fatto che si tratta del<' >N-{0-4-deacetil-deossi-vinblastin-23-il B)-L-triptofanato di etile e del solfato corrispondente.

*****

Si attesta la perfetta conformit? del testo che precede.