IT8420478A1 - 'amminodisolfuri analoghi della mitoricina quali inibitori di tumori - Google Patents

Description

"AMMINODISOLPURI ANALOGHI DELLA MITCMICINA QUALI INIBITOHI DI TUMORI".

RIASSUNTO

La presente invenzione riguarda analoghi della mitomicina contenenti un gruppo diaolfidrico. Questi composti sono derivati della mitomicina C in cui il 7-amminogruppo porta un sostituente organico incorporante un gruppo disolfidrico. I composti sono inibitori di tumori animali sperimentali.

3o=o=os

DESCRIZIONE

La presente invenzione riguarda analoghi della mitomicina contenenti un gruppo disolfidrico (classe 260 sottoclasse 326.24?). Questi composti sono derivati della mitomicina C in cui il 7-amminogruppo porta un sostituente organico incorporante un gruppo disolfidrico. Questi composti sono inibitori di tumori animali sperimentali.

Nomenclatura - Il nome sistematico del Chemical Ahetracts per la mitomicina C ?:

C 1atf *8a ? ,8btf )/?6-ammino-8-/f(aamine carbonil)-osei)aetil/-1 ,1a,2,8,8a,8b-esaidro-8ametossi-S-metil-azirino/i?' ,3',3f47Pir??olo^T,2ta7? indolo-4,7-dlone

secondo cui il sistema ad anelli azirinopiroloindolioo ? numerato nel modo seguente

8a

l/l

la

Chemical Abstracts

Un sistema corrente di nomenclatura che ha trovato largo uso nella letteratura delle mitomiclne identifica il precedente sistema anulare includente diversi dei sosti, tcanti caratteristici delle mitomiclne come mitosano.

10

CH?CCNH

9a

N-H

/

3 2

Mitosano

Velia presente esposizione la Richiedente ha scelto di usare questo sistema e di fare riferimento all'atomo di azoto azirinico come e all'atomo di azoto dell*?mmino anulare come V . Per quanto riguarda la configurazione sto, - * - v*V JZ reo chimica dei prodotti della presente invenzione, quando li ei identifica col nome radicale "mitosano" o con la formula di struttura, si intende identificare la loro configurazione stereochimica come la stessa della mitomicina G.

La mitomicina C ? un antibiotico che ? prodotto per fermentazione ed ? attualmente in vendita con la approvazione della Food and Drg Administration per la terapia di adenocar cinoraa disseminato dello stomaco e del pancreas in combinazione sperimentale con altri agenti chemoterapeutici approvati e come trattamento palliativo quando altre modalit? non hanno dato esito positivo (Mutamycin('R?')Bristol Laboratories, Syracuse, New York 13201, Physicians' Desk Reference 35th Edition, 1981 pp. 717 e 718). La mitomicina C e la sua produzione per fermentazione ? il soggetto del brevetto U.S.A. N. 3660 578 rilasciato il 2 Maggio 1972 rivendicante la priorit? ad altre domande precedenti inclusa una domanda depositata in Giappone il 6 Aprile 1957?

Le strutture delle mitomicine A, B, Ce della porfiromicina furono pubblicate per primo da J.S. Webb ed altri dei Lederle Laboratories DiVision American Cyanamid Company, J. Amer. Chem. Soc. 84, 3185?3187 (1962). Una delle -trasformazioni chimiche usate in questo studio strutturale per mettere in correlazione la mitomicina A con la mitomicina C ? la con versione della prima, il 7-9c(-dimetossimitosano, mediante reazione con ammoniaca, nella seconda il 7-ammino-9o(-metossimitosano. Lo spostamento del gruppo 7-metossi della mitomicina A ai ? rivelato un* reazione di interesse notevole nel la preparazione di derivati attivi antitumore della mitomicina C. Crii articoli e i brevetti seguenti riguardano ciascuno la conversione della mitomicina A a derivato 7-ammino sostituito della mitomicina C con attivit? antitumore. Lo scopo di questa ricerca era di preparare derivati che fossero pi?. attivi e, particolarmente, che fossero meno tossici della mitomicina C:

Matsul et al. "The Journal of Antihiotioe", ?Q , 189-193 (1968).

Kinoshita et al. J. Ved. Chea. 14, 103-109 (1971).

Iyengar et al. J. Med. Chea. 2?* 975-981 (1981).

lyengar, Sami, Beaere, and Bradner, Abstracte of Pape?

183rd Annua1 Meeting of th? American Chemical Society, March 1982, No. MEDI 72.

Iyengar, et ai. J. Med.Chem. 1983. 26, 16-20.

Iyengar, et al. Abstracte of Papere, 185th

Annual Meeting of th? American Chemical Society, March 1983, Ho. MEDI 82.

I brevetti ohe seguono trattano la preparazione di derivati del 7-aaminoeoetituito-mitosano mediante rea zione della mitomicina A, dalla Mitomicina B, o di un de rivato H1a-sostituito di esse con un'ammina primaria o ee, oondariai

Cosulioh et al. U.S. Patent Ho. 3332 944 patented July 25, 1967

Mate ui et al. U.S. Pateat No. 3420 846 pateated Janoary ^^12^ 7, 1969

Hataai et al. U.S. Pateat Ho. 3450 709 pateated Jtme 17, 1969

Matsui et al. U.S. Pateat Ho. 3514 452 pateated May 26, 1970.

Hakano et al. U.S. Pateat Ho. 4231 936 pateated Hoveaber 4, 1980

Berners, U.S. Pateat Ho. 4268 676 pateated May 19, 1981. Berners, Belg. 893162, pateated May 12, 1982.

1 derivati della mitonicina C aventi nella posizione 7 un sostituente astraine sostituito sono inoltre sta ti preparati per biosintesi diretta cio? addizionando i brodi di fermentazione ooa una serie d? animine primarie e effettuando la convenzionale fermentasi^ ne ddlla mitornicina (C. A. Claridge et al. Abst. of th? Annual Meeting of Amar. Soo. for Microblology 1982. Abs.

028).

La mitomicina C ? la principale mitomieina prodotta per fermentazione ed ? la forma reper?bile in commercio. La tecnologia corrente nella conversione della al tornioina C a mitomioina A da osare nella produzione degli analoghi semisintetiol con asmino sostituito della mitosi cina C cui si fa riferimento nei brevetti e nelle pubbliQvoQ ? oazionl precedenti comporta 1'idrolisi della mltomioiaa

C nel oorrlepondente 7-idrossimitosano, un composto altamente ietabile, e poi la met?laz?one di tale sostanza con diazometano il quale ? una sostanza molto pericolosa da manipolare. Uh tentativo di evitare l'uso di diazometano per la metilazione oomporta l'uso,per la sintesi de_ gli analoghi della mitomiclna C;di 7-acilossi mitoaani (Kjrowa Hakko Kogyo KK Japanese Patent No. J56073-085, Parmdoc No. 56227 D/31).

La presente invenzione riguarda un gruppo di ana loghi della mitomicina C avente un sostituente organico ditio sull'atomo di azoto amminico nella posizione 7. Qua ti composti possono essere rappresentati dalla seguente formulai

H 0

u

P^OCNI^

R -SS-Alk2-N -r

I OCH-

N-R

Q

in cui a ? un gruppo organico,cio? il componente atrut turale di un tiolo organico della formula RySH, e ?lfc2 ?

R hanno i significati riportati sotto. Questi composti

sono descritti alternativamente dalle foxmule I ? II

? ? tv? \V*4 \ pijOCN^

R Alk^-SS-Alk^-?JXH-

N-R

\

R -SS-Alk.-OCH II

'N-R

In coli

Alk1 ? un gruppo aletilenico a catena lineare o ramifica

7

ta avente da 1 a 6 atomi di carbonio quando B ? uni to ad eeao attraverso un suo atomo di carbonio? e da

2 a 6 atomi di carbonio quando B ? unito ad esso a? traverso un suo atomo di zolfo? ossigeno o azoto? e

7

B e -SS- sono in questo caso uniti ad atomi di carbonio differenti.

AllCg ? un gruppo alchilenlco a catena lineare o ramificata avente da 2 a 6 atomi di carbonio portante faool-7

tativamente un sostituente B , in cui gli atomi di zolfo e di azoto connessi ad esso e l'eventuale

7

sostituente B connesso ad esso attraverso ossigeno? zolfo o azoto? sono attaccati a differenti ato mi di carbonio di AllCg?

o llk1 e Alk 2 possono contenere un doppio legamo, u oo ?W B ? idrogeno, alchlle inferiore, aloanoile inferiore, b?nzoile o benzo?le sostituito in eoi detto sostituente ? alehile Inferiore, aleossi inferiore, alo, animino o nitro,

?7

B b scelto dal grappo costituito da idross?* alo, cumino, alchilanmino o dialehilamaino aranti da 1 a 12 a tomi di carbonio, aloanoilaamino, benzoilammino o benzoilammino A-sostitolto , naftoilaimino o naftoil?-amnino A-eoetitoito, cioloalchile o oioloalchile A-soetitoito aventi ciascono da 3 a 8 elementi Dell'anello, oicloalchenile o cicloalohenile A-eostitnito aventi ciascuno da 5 a 8 elementi nell'anello, fenile o fenile A-sostitoito, naftile o naftile A-soatlto, on gruppo eletrociclioo scelto dal gruppo costituito da gruppi eteroatomioi e eteroaliciclioi aventi da 1 a 2 anelli, da 3 a 8 elementid'anello in eia ecun anello, e da 1 a A eteroatomi soelti da ossigeno, azoto e zolfo, aleossi o alchiltio aventi claaou no da 1 a 6 atomi d? carbonio, oarbossi, alooseiearbonile avente da 1 a 7 atomi di earbonio, fenossiear bonlle o fenoeslearbonlle A-eoetitoito, fenosel o fe, noesi A-sostitulto, naftossi o naftossi A-sostitulto, alcossicarbonilammino avente da 2 a 6 atomi di earb? nio, guanldlno, ureido (-IHOOHHg), I-alobilureilene

? *\X* (-NHCOHHalkyl) aveste da 2 a 7 atomi di carbonio, H^-aloaloh?l ureilene avente da 3 a 7 atomi di oarbonio, H^-aloalchil-H^-nitroso oreilene arante da 3 a 7 atomi di carbonio, e dlalchilamminocarbonile aventa da 3 a 13 atomi di carbonio, in coi detto costituente A ? scelto dal groppo costituito da uno o due gruppi alohiliei inferiori, alcanoilici inferi? ri, alcessi inferiori, alo, ammino, idrossi o nitro? e

R8

? scelto dal gruppo costituito da alohile di 1-12 a tomi di carbonio, alohenile o alehinlle aventi ciascuno da 3 a .12 atomi di carbonio, eicloalchile ? vente da 3 a 8 elementi d'anello, eicloalchile A-so, stituito avente da 3 a 8 elementi d'anello, cicloni chenile avente da 5 a 8 elementi d'anello, fenile, fenile A-sostituito, naftile, naftile A-sostituito, un gruppo eterociclico scelto dal gruppo costituitoViu da gruppi eteroaromatioi e eteroaliciclici aventi da 1 a 2 anelli, da 3 a 8 elementi d'anello in ciascun anello, e da la 4 eteroatomi scelti da ossigeno, a. zoto e zolfo, in cui detto sostituente A h scelto dal gruppo costituito da uno o due gruppi alchilioi inferiori, alcanoilici inferiori, alcosei inferiori, g

alo, ammino, idrossi o nitro, e R e l'atomo d? sol fo adiacente costituiscono insieme S-oisteln?le in eoi dette grappo S-cistelnilieo pa? essere esterifioa|-U^^ to, eallfleate o unito entro on legane peptidioo.

Ite sostanze della presente invenzione sono inib?? tori di timori sperimentali negli animali? Rese sono prepg, rate per reazione di un amminodisolfuro delle formale III o IT

R Alk.j-SS-?lkgNHg III H8-SS?Alfc2HH2 IT oon an derivato del mitosano della formala T

OCH

''N-FT

in coi T ? un gruppo facilmente spostabile per reazione con an'ammina primaria a dare an derivato della mitomici-7

na C N -sostituito. Tali derivati del mitosano includono la mitoaicina A e i suoi omologhi di formula T in oui 7 ? on gruppo aleossi inferiore di 1-6 atomi di carbonio? Un altro ? il derivato della formala T in coi 7 ? il grug. po amaidino della formula TI

R5

R3R4I?C?H- TI

in cult

E5 ? idrogeno (preferito)? alenile inferiore? fenile? alohil inferiore-fenile, aleossi inferiore-fenile, alo o fenile, am inofenile o nitrofenile, e

E"* e H* sono, indipendentemente, alchile inferiore, oppnre, assieme con l'atomo di azoto al qtu?e eono attaccati, costitniecono pirrolidina, 2-o 3-alchillnferie re-jpirrolidina, piperidina, 2-, 3-, o 4-alchile in feriore-piperidina , 2,6-dialchilinferiore-piperid^ na, piperazina, plpirazina ^-sostituita (in cui dot to 4-sost?tuente ? alchile o cartaicoesi aventi eia econo da 1 a 8 atomi di carbonio, fenile, metilfeni le, metoaeifenlle, alofenile, nitrofenile o benzile), azepina, 2-, 3-, 4-, o 5-alchilinferiore-azspina, morfolina, tiomorfoline , tlomorfolina-1-ossido, o tiomorfoline-1,1-d?ossldo,

in cui

ciascuno dei predetti gruppi alchile inferiore, aloanoile inferiore e alcossiinferiore contiene da 1 a 6 atomi di carbonio?

Gli ultimi sono derivati ammidinici della aitomieina C e sono descritti nella domanda della stessa Richiedente No? di serie 385149 depositata il 4 Giugno 1982.

La reazione tra il derivato del mitosano di formai la 7 e 1'amminobisolfuro di fomule ZIX o IV avviene in un mezzo di reazione organico liquido anidro ad una temperatura nell'intervallo da circa -15 a 50?C. 2' preferita ? na temperatura nell'intervallo da 0 a 20?C? Si pu? inpi?

& o gare qualsiasi messo di reazione organico liquido anidro purch? esao eia stabile nelle condizioni di reazione e non partecipi alla reazione in modo deleterio? Con il reagente mitosanieo di formula 7 Tengono impiegate da 1 a 4-porzio ni molari dell'amminodisolfuro delle formale III o 17. Di preferenza sono impiegate quantit? equlmolari dei due reagenti. Si uaa un periodo di reazione di diverse or? ey meglio, da circa 8 a 50 ore. Il prodotto ? ricuperato cromatograficamente , il ohe pu? opportunamente comportare la e. vaporazione del mezzo di reazione organico liquido e la cromatografia del residuo.

Gli amminodisolfuri delle formule III e 17 sono composti noti e possono essere preparati con diversi mete. di. Per esempio, essi possono essere fatti per reazione del tiolo appropriato H7'Allc^SH o H8SH con un sale di Bunte della formula

RH2Alk2SS03Na VII

o con un aolfeniltiocarbonato della formula

0

NHgAlkgSSCOCH-j 71II

Klayman et al. Journal of Organio Chemistry 2?, 3737-3738 (1964) hanno preparato i seguenti disolfuri ool metodo del sale di Bunte

2-amminoetil n-butil disolfuro

2-amminoetil n-esil disolfuro

Q O O

o * IV 2-amminoetil n-ottil dieolfuro

2-amminoet?l n-decil dieolfuro

2-amminoetil fenil dieolfuro

2-amminoetil bonail dieolfuro?

Il metanolo ? risultato essere il solvente di reazione preferito per la reazionedel sale du Sante con t?olo. Sono risultate temperature d? reazione preferite quando si usa questo solvente quelle da 0 a -10*Ce Con altri sol? venti erano necessarie temperature pih elevate. L'inconveniente principale di questo metodo ? la formazione d? d?solfuri simmetrici come sottoprodotto, presumibilmente in conseguenza del disproporzionamento del disolfuro misto ri chiesto?

I materiali di partenza d?solfur? misti delle formule III e IT sono preferibilmente preparati afrtraverso la reazione del tiolo appropriato con un solfenilt?ocar bonato d? formula Vili. Questo ? il metodo d? S. J. Brois et al. Journal of th? American Chemical Society ?2, 7269-7270 (1970). Generalmente questo procedimento di preparazione comporta di aggiungere il tiolo ad una soluzione me, tanol?ca dell'ammino-alchilsolfen?lt?ooarbonato di formala ???? e di lasciare procedere la reazione ad una tempera tura nell'intervallo da 0 a 25?C. I tempi di reazione variano da una reazione praticamente istantanea fino a diver

'lai ???

\?V Jjpj ae ore a seconda del particolare tiole impiegato. Il progre, ? dire della reazione pah essere seguito miearando la presen aa di tiolo non reagito nel recipiente di reazione. 8e la reazione ? piuttosto lenta, si pah aggiungere ana quantit? catalitica di trietilammina con accelerante della reazione.

Quella che segue ? una enumerazione di tioli rap, presentativi delle formule H'Alk^H^o R SH ohe possono eese^ re convertiti, attraverso la reazionecol sale di Buste 711 o con solfeniltiocarbonato Vili, a produrre gli intermedi delle formule III e 17 che, a loro volta, sono convertiti nei prodotti delle presente invenzione nel modo descritto. Bel caso di tioli della seguente enumerazione contenenti am mino, ? generalmente opportuno convertirli prima in una forma protetta, preferibilmente nel derivato y?-(trimetileilii)etos8ioarbonilanminieo, prima di effettuare la conver alone a intermedi delle formule III o 17 e la reazione con l'intermedio mitoaanleo della formula 7. Il gruppo ?-(trimet ileilil)etaoBB?carhonilamminlco pu? poi essere enocesalvamente scisso per trattamento con fluoruro ditetra? etilammonio in acetonitrile (L.A. Carpino et al?, J.C.S.

Chea. Coma., 358 (1978)) dando 1*amminocomposto libero di formala I o II richiesto

HSCH3

HSCH2CH3

HSCH2CH2CH3

HSCH (CH3)2

HS(CH2)3CH3 KS-CH-CH 2 3

3 H5CS2CH (CK3)2 CH3

I J

??- r? rw

ES-CH2-CH=CH2

ES-CH2-CH-C (CH3)2 HS-CH2-C^CH

HS-CH2-<>C-CH3 co Q

$ oo - 16 - 3

HS (CH2,)nOR 2-4, Rx -_H, CCS CH.

3'

HS (CHd,.)nCXR n*l-3, X-0, NH , NRV R, R^-H, CE^

HS (C3J H n-2-4

2,)TiN 2,

0 HS (CE2,)nNHR1 n-2-4 # R^CH3, CH2CH3, CH2CH2CH3, &CH3

BS (C-?,)_NR1R2 n-2-4, R1/R2-CH3, CH2CH3

G?? "

? **

HS?CH-O?2NH2

CH

I 3

HS-C-CH 2VT*-I 2

CH.

CK-

KS-CH2 CE-NH.

?3 '

ES-CH2 C-NH,

CH.

HS-CH2CH2SCE3

HS-CH2CH2NHC (CH3)3

CH.

I 2

HS-CH,-Cc-CH,NHR' 1 H, CH3, CCH.

2 1l 2

CH.

O

HS-CH2CH2-NH ?o

CH2 n-3-5

HS-CS,CH,-N ^ i

\ (CH2)n

CK^NR1 R2

KS-CH-CT jNR1.^ R^*H , CK3 ? R2 - B, CH

HS-CH-j-CH-Cri-NHR1 R^H , CH, .

N1KRi?1

HS-CH2-CK-CH2NH2

P!2NH2

HS -Cri2-Cn-CH2NH2

HS-CH ,-CH-NH

2 I

co2K

HS- CH2-(p?-CH2-iffl 2

C02K

HS-CH,-CS-CS?-CO,H

2 I ? 2 2

Nn,

CH,CO,H

? 2 2

ES-CH,CH ,CH

2 *?I>?

HS(CH2)n n-l-3,R2?H, CH3, R1?^ , CH3

KHR1

o O

I HS-CH-CH-NHCCH.

HS-CH2CH2-N-CE3 HS?<i OCH NE.

ES-CH2-^H-CH2NH2 HS-CH

H.

NH.

CH 3 NK l. n

E5-CH,-C C- NH2 s-CH2-<[ 2 I

CH

?

NH

BS-CH,-CH-&-NH,

2 I 2 ??<Q> OCH-

HS-CH2-CH-CH-CH2NH2 ES-ar<> NE

HS-CH2-C-CH2NH2

HS-CH ni CH2

HS -CH2PCH?CH2CH2NH2 HS-CH.,-Qi-CH,0H

2 I 2

OH CH-

5-tio?D-gluoo?La

=H3 HS-CH2CH2NH ?o HS-CK2-CH-CH2NH2

OH HS-CK2CH2-NH?

N E BS-CH2CE2-NH-^ JJ HS-CH,-C-CH, OH

2 I 2

NH2

HS-CK2-C3??CM2OH

ter

iO <P

- 19 - co

? O

HS-CH2-CH2-0-C-CH3

CH3

?-o

HS-<^ )-N(CH3)2

B5 CH

3

NH-HS-C \

-^pNH2

KSHQ NHCH.

BS -? -KHCCH.

B5 CO2H

H5

ST

N? K

BS JL CH;

(S (P o tn o 20 o Ttrt?

%

X=N,0 Y=H

HS x?s *-E, Cl, OCH2CB3

H5

\ /y

HS

*-D

?< 3

HS< 3 H-H; CH.

HS ?Q

H

H5

X-NH , S

HS NH.

?&? <$ - 21 - uco>

% o

HS

HS "fN(CK3)2

HS-CH

HS-CH2 CK-CE-O

HS-CH

CH2NH2

0

HS-CH. V * NHCC3?.

HS- (CH,)

4 ?

-&

HS-(G?2) rQ

? ??? ??.O 1 n-1 ,2

0? ? co ? *Ai?V?

?

SS-(CH2) ??< 3

HS- (CH2)

OCH2CH3

HS-(CH2)

?

'ES-(CH2J

HS-(CH2) rO X- 0, S, ?3

KS- (CH2)'-ci ? - 0, S, NH

HS-(CH2) X ? 0, S, NH

X - 0, S, NH

HS- (CH23???

HS- (CH2) NH. X - 0, Sf NH

N(CK3)2

HS-CH2?0

HS-CH R1 - B, CH3

R1

/<? 23 - ??D?

HS?CH??s. ^NR R-H, CH.

HS-CH2-CH2 -? X - 0, NH, NCH3

HS??iiD ?? ? H , CH.

HS-CH2?<5. RA - E, CH.

HS-CE.,-^ NR1 Ra-H, CH.

ES ^Q n* RA ? H , CH.

HS-q ?A-E, CH.

Ri

KSo-C R1?*, CH.

HS-(CH2)n-^ n-1-3, m?1?3

24 - ?? CO

?? /.??\

KS-CH R2?K, CH3, R^ H, CH3, NH?

HS-CH^ ^ R1 H.1*H , CK3

!U

HS-CHfO 51 R ?H / CE.

CE-NH.

ES S-^N ?K2

CE.

B! ! ,SV^X^ NH2 ES'^ -^ DH

CT ,

/*^ OH

^ ? N

ES v^ -^oa

HS^ ?N(CH3)2

ES

4

- 25 - f?f ??\

\?v -Attivit? contro la leucemia Marina P-388

La tavola I contienei risultati di prove di laboratorio con topi fumine CUP^ cui era stato impianta to intraperitonealmente un inoeulo tumorale di 10? cella le di asciti della leucemia marina P-388 e che sono stati trattati oon diverse dosi o di un composto d? prova delle formule I o II o con la mitomicina C. I composti erano som ministrati per iniezione intraperitoneale. Per ciascuna quantit? di dosaggio ai usavano gruppi d? sei topi ? questi erano trattati oon una singola dose del composto il giorno dell'inoculazione? In ciascuna serie di esperimenti si in eludeva un gruppo di 10 topi di controllotrattati con soluzione salina. I gruppi trattati con la mitomicina C era no inclusi come controllo positivo. S? impiegava un programma di 30 giorni, determinando il tempo medio di eoprav vivenza, in giorni, per ciascun gruppo di topi e annotando il numero d? sopravvissuti al termine del periodo di 30 giorni. I topi erano pesati prima del trattamento e di nuovo il sesto giorno. La variazione di peso veniva presa come misura della tossicit? del medicinale? Si impiegavano topi del peso d? 20 g ciascuno e una perdita d? peso ammon tante fino a circa 2 g non era considerata eccessiva. I risultati sono stati determinati in termini di T/C ? che ? il rapporto fra il tempo di sopravvivenza media del grog, po trattato e il tempo di sopravvivenza media del gruppo

? di controllo tattato con soluzione salina moltiplicato IM\ per cento. Sii animali di controllo trattati oon soluzio ne salina morirono usualmente entro 9 giorni. Lo "effetto massimo" nella tarda seguente ? espresso come T/C i? ed ? indicata la dose ohe d? tale effetto. I valori fra parentesi sono i valori ottenuti con la mitomicina C usa ta come controllo positivo nello stesso esperimento. Co s? pu? essere valutata una misura della attivit? delle presenti sostanze rispetto alla mitomicina C. Un effetto minimo in termini di T/C i? era considerato 125. La dose ef ficace minima riportata nella tavola seguente ? quella do se che d? un T/C i? di circa 125. 1 due valori riportati in ciascun caso nella colonna della "variazione media di peso" sono, rispettivamente, la variazione di peso media per topo alla massima dose efficace e quella alla minima dose efficace

?^ss TABELLA I *tri\ Inibizione della leucemia marina p?388

Dose

Effetto massimo Variazione effettiva media di Composto N? % f/c dose minima1 pesa 2

(BL-6787 >333(294) 3,2(3,2) 0,2 -1,2,-0,3

(BL-6796) 7375(250) 6,4(3,T) <0,2 -2,5,-0,9

(BL-6832) 172(194) 6,4(3,2) 0,8 -2,8,-0,9

(BL-6790) >333(294) 12,8(3,2) <0,2 -2,4, 0

(BL-6789) 183(294) 12,8(3,2) 0,4 -0,6,+0,8

(BL-6788) 200(294) 12,8(3,2) 0,2 -0,6,-0,2

(BL-6795) 188(250) 6,4(3,2) 0,8 -0,8,+0,1

(BMY-25036) 219(319) 3,2(3,2) <0,2 -1,3,-0,6

(BMY-25066) 194(194) 3,2(1,6) <0 ,2 -1,8,-0,7

(BMY-25067) 331(194) 12,8(1,6) <0,2 -3,3,-1,1

m?/kg di peso del corpo

grammi per topo, giorni 1-6,alle dosi efficaci massima e minima, La Tavole II oontiene i risultati di prore titumore osando il melanoma erilnppato in topi. Si impiegavamo topi EDF^ e in oasi ei inoculava subeutaneanente l'impianto tamorale. Si oaara un programma di prora di 60 giorni. Si aearano grappi di 10 topi per eia seuna quantit? di dosaggio esaminata e si determinare il tempo medio di soprarrirensa per elaseon grappo. Gli animali di controllo inocalati nello stesso modo come animali di prora e trattati col veicolo di iniezione e senza medi cinale presentavano un tempo medio di sopravvivenza di 24,5 giorni. Come misura della efficacia si osava il tem po di sopravvivenza relativo a quello del controlli (T/C ?) e si determivanano la dose efficace massima e la dose efficace minima per oiaecnn composto in esame. La dose ef ficace minima era definita quella dose presentante un valore T/C ? di 125. Ber ogni livello di dosaggio gli anima li di prova venivano trattati col composto in esame nei giorni 1, 5 e 9 per via intravenosa.

Tabella II

Inibizione del melanoma B16

Composto Effetto massimo Dose e la varlaalone me No ce ???nima dia di peso2 T/C ? Boss

1 (BL-6787) 122 3,0 3,0 -2,7,-2 ,7 6 (HL-6789) 163 3,0 4 3,0 1,8,-1 ,8 6 (BL-6789)3 161 6,0 <.3,0 1,4 ,-1,3 CO

2* D 1 mg/kg di peso del corpo

2

grammi per topo, giorni 1-15, alle dosi effioaei massima e minima

^ trattamento nei giorni 5, 9 e 13

Anche il composto No? 3 (BL-6T96) veniva valutato per la sua efficacia contro il melanoma B16 sviluppa to in topi BDF.J. In questo esperimento gli calmali erano inoculati col tumore per via interperitoneale e il trattamento col composto di prova era anoh'esso mediante iniezio, ne intraperitoneale? Il trattamento avveniva nei giorni 1, 5 e 9 come prima, e si determinavano i tempi medi di soprawivenea. Anche qui la dose effioaoe minima era conoideista quella dose ohe d? un T/C i? uguale 125* A una dose di 1 mg per Icg del composto no. 3, sei di dieci animali sopprawivevano per l'intero periodo di prova di 60 giorni (T/C % ? 235) e presentavano una variazionemedia di peso di 0,1 g il giorno 5. A una dose di 0,5 mg/kg il tempo medio di sopravvivensa era 4-2,0 (T/C ? = 165) indicando ohe la dose effioaoe minima fc inferiore a 0,5 mg/kg. Nella medesi, ma prova la mitomicina C presentava un T/C i? uguale a 165 a una dose di 3 mg/kg. Questa era la dose efficace massima della mitomicina C in questo esperimento. E' quindi evidO? te ohe il composto No. 3 ? di diverse volte pi?.potente con tro il melanoma B16 nei topi rispetto alla mitomiolna ??

O cVoi ? Si determinavamo gli effetti dei composti 1 (BL-6787) e 3 (BL-6796) somministrati intravenosamente eoi conteggi totale e differensiale delle ooliale bianche del sangne (WBC) di topi. Entrambi i composti risultavano essere mielosoppressivi, ma chiaramente meno della mitomicina C. I risultati sono riportati nella Tavola III. I dati per il composto 1 e per la mitomicina C sono stati ottenuti nello stesso esperimento fornendo oosl un confronto diretto. Il composto 1 era alquanto menomlelosoppressivo 1 dati per il composto 3? ottenuti da un esperimento distinto, suggeriscono una mielosoppressioneancora minore, ma non era disponibile un confronto diretto con gli altri due composti.

TABELLA III

Conteggi delle cellule Bianche del sangue

Composto Dose Cellule per cc.(xlO

No. ?A g., iv) Pretrattamento Giorno 4 Giorno 7

1 (BL-6787) 6,4 t* 10 0,7 4 0,5 8 0,8

n 1,5 0,3 0,2 0,04

1 8,2 0,6 3,7 0,5

1 (BL-6787) 3,2 t 10 0,6 7 ? 0,5 7 0,7

n 1,0 0,2 0,6 0,1

1 9,1 0,8 6,2 0,5 i OJ

3 (BL-6796) 8,8 t 10 0,6 4 0,7 11 0,7 I n 1,5 0,1 0,5 0,1

1 7,8 0,6 3,7 0,5

3 (BL-6796) 6,6 t 10 0,4 5 0,4 10 0,9

n 1,7 0,1 0,5 0,1

1 8,3 0,6 4,0 0,3

(? )? ^OssiTABELLA III (pontirotazione)

Conteggi delle cellule bianohe del sangue

Composto Dose Cellule per cc. (x10

No. (mq./kq ., IV) Pretrattamento Giorno 4 Giorno 7

mltomloina 6,4 t 10,0 0,2 3 0,2 7 0,5

n 1,0 0,2 0,1 0,02

1 9,0 0,3 2,5 0,2

mit?miolna C 3,2 t 9,0 0,7 4,0 0,7 9 0,5

n 0 ,7 0,1 0,2 0,02

l 8,4 0,6 4,0 0,7

* t = conteggio totale delle cellule bianche del sangue

n = neutrofili

1 = linfociti.

*

4L fb 'ossi.

In considerazione della attivit? antitumorale osservata in tumori animali sperimentali e della manoanza di a na indebita attivit?mielosoppressiva in confronto alla mi tomioina C, l'invenzione include l'uso delle sostanze della presente invenzione per inibire tumori nei mammiferi. Per tale scopo essi sono somministrati slstematioamente ad un mammifero portante un tumore in mia dose antitumorale ef fieaoe, sostanzialmente non tossica.

I composti della presente invenzione sono desti^ nati principalmente all'uso mediante iniezione nel modo prese occh? uguale e per aleuni degli stessi scopi della mi tomicina C, Possono essere impiegate dosi alquanto maggiori o minori a seconda della particolare sensibilit? deltumore. Basi sono facilmente distribuiti come composizioni farmaceutiche secche contenenti diluenti, tamponi, stabilizzanti, solubillzzanti e gli ingredienti usuali nella pratica farmaceutica. Queste composizioni vengono poi combinate con un mezzo liquidoiniettabilein maniera estemporanea appena prima dell'uso. Liquidi iniettabili adatti includono aequa, soluzione salina isotoniea eoo.

Tutte le temperature nei procedimenti sperimentali che seguono sono espresse in ?C. Gli spettri di risonanza magnetica protonioa (? BMR) sono stati registrati su uno spettrometro Yarian XL? 100 o su uno spettrometro Jeol TX-90Q (90 KHz) in piridina a meno ohe non sia indicato al -JO - <5 ? O

S

frinenti? Gli spettri infrarosei (IH) sono stati ottonati U o ? vv9 oon ano epettrofstonotro di Beohnan Modello 4-240 e i valo_ ri IR sono V asseina in on?\ la cromatografia in strato sottile (TLC) ? stata condotta su lastre di gel di silice prerivestite della E. Merck da 0,25 mm (60?-254) usando

luce ultravioletta e/o vapori di iodio come agente visualizzante. La cronatografia istantanea (J* Org. Chem. 14? 2923? 1978) ? stata attuata usando silice Woelm (32-63 um).

I solventi sono stati evaporatia pressioneridotta esottoi 50eC. Procedimento 1

7-/2-(benzilditio)etila?nlno7-9a-netoseinltosano (Composto 1)

Attraverso la miternieina A

A una soluzione di 200 ng (0,28 mmoli) di S-benzilditioetilammina in 2 mi di metanolo contenente 300 mg di trietilammina si aggiungevano 99 ng (28,3 mmoli) di mitomicina A in metanolo (10 mi) fra 0 e 4?C. Si agitava la soluzione risultante a 20?C per 2 ore e mezza. Si controllava il progredire della reazione mediante TLC usando un sistema solvente di metanolo/clorofomio 10/90 v/v. Si concentrava la miscela di reazione a pressione ridotta ot tenendo un residuo solido secco che per cromatografia lstan tanea (35 g di gel di silice) osando metanolo-dicloromet& no 7*93 v/v (800mi)come eluente forniva il composto del titolo (87 ng, 5936) come solido amorfo paro?

35 - (?SY/ ?\??)\'

[?V'' /Co ""?0 1? HHR (90 MHz, piridina d^,?)* 2,08(?, 3?), 2f74(at 3H),X^ V 3,16 (d, 1?, J=6Hz), 3,24 (?, 3H), 3,40-4,20(m, 6?), 4,04 (?, 2?), 4,56(d, 1?, J?14Hz), 5,08(t, 1H, J-12H?), 5,40

(dd, 1H, J=6, 12Hz), 7,44(be, 5H).

IE(BKr) , j?max, cnf1 ! 3440, 3350, 3290, 3060, 3020, 1720,

1635, 1560, 1325, 1060.

Analisi cale, per ?24?281?4?532 * ?*_55?80; ?, 5,46; ?, 10,84;

3, 12,41

trovata C, 55,08; ?, 5,31; ?, 10,52; S, 12,10.

Procedimento 2

M-/2-(2-agminoetilditio)etil7acetanmide (Composto 2}

a. Metodo con sale di Bunte

Si agitava per 10 minuti a temperatura ambiente una soluzione di 695 mg di acido 2-amminoetantiosolforioo (4,59 maoli) in 7 mi di metanolo contenente 318 mg (7,95 samoli) di idroseido sodico, e poi si raffreddava a 0?C. A questa soluzione si aggiungeva H-aoetilcisteammina, 357 mg (3,43 mmoli) e si agitava la soluzione per altri 10 minuti.

La soluzione torbida risultante era diluita a oirca 60 mi oon metanolo e questa soluzione era poi aoidifioata mediante l'aggiunta cauta di cloruro d'aeetile (624 mg|7,95 mmoli). La soluzione limpida era evaporata dando un solido ceroso che era usato direttamente per la conversione a composto 3.

b. Metodo ool solfeniltiocarbonato

Si usava il metodo di S.J. Broie et al? (loe. oit?). Si trattava il metil-2-amminoetilsolfeniltioear bonato oloridrato in soluzione metamolioa oon aoetiloisteammina a 0?C. La reazione, eenza accelerante trietilaaminico, era praticamente istantanea.

Procedimento 3

7-/2-(2-acetilamminoetilditio)etil*m?lno7-9a-metoBB?nitosano (Composto 3)

A una soluzione di 100 mg (0,29 mmoli) di mito, micina A in 4 mi di metanolo contenente 200 mg (198 mmoli di trietilammina si aggiungeva a circa 0?C una soluzione di circa 400 mg di composto 2 in 2 mi di metanolo. Il pr? cipitato che compariva era rimoaeo per filtrazione e il filtrato limpido era lasciato a riposo a temperatura ambiente per 4 ore. Si evaporava la soluzione fino ad ottone, re un residuo secco e si effettuava la cromatografia istan tanea su gel di silice (10 g) usando la tecnica di eluizio, ne con gradiente (da Ai? a 8?6 di metanolo in cloruro di metilene). ii prodotto richiesto era il componente della zo na blu pi?.rapidamente mobile ohe era isolato come solido amorfo pesante 45 mg (31,5 j>). Si otteneva un campione per analisi triturando il solido con 5# di cloruro di metilene in esano e essiccando il solido

1H Biffi (100 MHz, piridina *5?^)* 2,06(?, 3H), 2,10(?, 3H)f 2,76(ba, 1H), 2,80-3,20(m, 5H), 3,24(e, 3H), 3,60(dd, 1Hf - 37 - O in & o J=12 a 2Hz), 3,70-4,10(m, 5H), 4,54(d, 1H,J?12Hz), 5,04(t, 1H, J?10Hz), 5,38(dd, 1H, J*4 a 10Hz).

IH(KBr), v>max, em?1 : 3420, 3350, 3290, 1720, 1635, 1656,

1330, 1060

Analisi cale, par C2i? gli506S2* H? 5,67; H, 13,68;

S, 12,51

trovata C, 49,33*^ , 6??4.J *? 13,20;

S, 11,48

Prooedimento 4

7-/?-(ottilditio )etilammino/-9a-metosainitosano (composto 4) Attraverso il 7-ammidinoB08tituito-9a-netoB8?initoBano

A ona soluzione di 60 mg (0,15 amoli) di 7-(dimetilamminometilen)ammino-9a-metossimitoeano in metanolo (1 mi) contenente trietilammina (0,2 mi) si aggiungevano 139 mg (0,54 mmoli) di cloridrato di 2-(ottilditio)etilam <? mina. Si lasciava la soluzione a riposo fra 0 e 4?C per 48 ore. La cromatografia in strato sottile usando metanolooloruro di metilene 10:90 v/v rivelava che il compoeto di partenza dicolore verde era stato consumato e era visibile una zona preponderante blu (??=0,6). Si concentrava la soluzione a pressione ridotta ottenendo un reeiduo solido che era sottoposto a cromatograf?a instantanea su gel d? silice (12 g) usando cloruro di metilene-metanolo 20/1 v/v come solvente di eluizione. Si otteneva il composto del titolo come solido amorfe (27 mg, 34?0 il cui spettro

PNV? ? SUB (100 MHz) ? dato nella Tavola IV.

Procedimenti 5-22

Applicazione di avariate ditioammine

Le amine identificate nella Tavola IV possono essere fatte reagire come descritto in uno de? procedimeli ti 1, 3 o 4 per ottenere i prodotti delle formule I e II che Bono identificati nella tavola.

I dati analitici e spettrali per alcune delle sostanze precedenti e per alcune identificate nella Tavola IV sono presentanti nella Tavola V.

TABELLA IV

Altri prodotti delle formule I ? II

n Aik -Proc. No. formula o H8

Aik2 Reagente amnninioo

HjN(Cll2) - -(cu > - 2-aianinoetil disolfuro

I1 fenile ',CH2,?' 2-amminoetil fenil disolfuro

II n-butile -(CHJ)2~ 2-emminoetil n-butil disolfuro

-(CH2>2- 2-(2-ajnrainoetilditio)etil_/acetanmide

(H ? -COCH ) CllCONHCIICM -3 3 2 2

OJ vo IIOCH2CH2 -(cii^| 2-(2-amminoetilditio)etanolo

10 11 a - 2-(2--amminoetilditio)piridina

11 11 CH O- (CH2)2- 2-emminoetil 4-metossifenil disolfuro

12 11 NO? (CH2>2- 2-emminoetil 4-nitrofenil disolfuro

? *s. O

? o o R7M k,

Proc. No. Formula Altc- Reagente amminico

kl CtH?COHH(i:H2)j- -<?? ? 2-(2-anminoetilditio)etil_/benzammide

1? CHjO^^ CONH|CH2)J- -(CH2)2- N-/2-(2-amminoetilditio)etil_/anisammide _

??,-Q cONH(CH2i2- -<CH2I2- N-/?2-(2-amminoetilditio)etil_/-*4-nitrobenzammide

ij 4-oloro-2-naftile -(c?2)2- 2?amminoetil 4-cloro?2-naftil disolfuro

? II CH1OJCCHCI12- -(CH2J2- S-(2-emrainoetilditio)cisteina, estere metilico HM2<X:HCM2L?6II?

3-(2-^unminoetilditio)fenilalanilcieteina, i LB CHJOJCC'HCH2-NHCOCIICH2Ctll? estere metilico ^

! i

19 I CMJOJC<CH2)6- -ICH2)2- Acido 6?mercaptoeptanoico, estere metilico

20 1 t>cV 6-/ (oiolopropil)metilditio_/esilaomina

21 2-amrainoetil 2-fenossietil disolfuro

22 M 2-pirlmidile -ICM2)2- 2-(2-amninoetilditio)pirimidina

*

o o Oo*v A Mk|-

Proc. Ho. Formula o R_ Alk Reagente amminioo

23 II li (CH2)2 (CH2I2 1-^ 2?(2-amminoetilditio)etil/-2-pirrolicione

24 li G -(CH2)2 2 2-(amminoetilditio)_/benzimij]idazolo

o>

2S CJHJO?-NHCIIJCIIJ (CH2)2- 2-ajnminoetil 2-etoe8icarbonilamminoetil

disolfuro 1

?f? Nll

26 H2N?-NH(CH2> - (CH2)2- 2-amminoetil 3-guanidinopropil disolfuro l

140

I

27 C1(CHj)^NC'ONH(Cll ) - -<CK2)2 H2NCH2CI?2-SS-CH2

CICHJCHJNCONHCHJ NO

0 o IR

* 7 a

Proc. No. Foriun?a* R Alk. - o R Alk Reagente acuminico

28 1I 2-amrainoetil 2-nitrofenil

w -(cV i

dieolfuro **

NO,

29 II NO2- *CH2?2 2-anminoetil 2,4-dinitrofenil

dieolfuro**

NO,

30 li (CH2?2 2-^unminoetil 3-?itro-2-pirid.il I / \

dieolfuro ro N

I

31 II NO, ? 2-amminoetil 5_?it*O-2-pirldil

\ (CH2)2_

Nf7 disolfuro

*R delle formile I e II ? H a meno ohe non sia indicato altrimenti*

??Preparato per reazione del cloruro di 2-nitrofenilsolfenile o del cloruro di 2,4-dinitrofenileolfenile oon ci?ridrato di oisteammina in tetraidrofurano a 0?C aecondo il metodo

generale di Y* Nagao ed altri, Tetrahedron Lettere N?* 50, PP 5021-5024 (1978)?

o > ?t

TABELLA V

Dati 1H NMR

m (KBr), max

Composto (piridina d^ ) 1

citi Analisi elementare

A

4 0,87 (m , IH), 1,23{ba, ?0?), 1,70 3440, 3350, 3290, T. C.55,74; H.7,11; N,30,40; S,11,90

(n, 2H), 2,171?, IH), 2,76(t, 2950, 2920, 1720, I'? C,56,09; H,6,86; N,10,48; S,12,15

2H, 7IIx), 2,76(ha, IH), 3,00 1635, 1560, 1320,

(t, 2H, 7Hz), 3,14(d, IH, 4Hz), 1060

3,24(a, 3H), 3,60(dd, IH. 3,

12Hz). 3,80-4,20(ni, 3H), 4,54(d,

IH, 12Hz), 5,06(t, IH, 10Hz),

5,40 (dd, IH, 4, 10Hz)

5 2 ,08(a, 3H), 2,72(d, IH. 4Hz), 3400, 3280, 2930. T C, 45,13; H,6,17j N.13,85; S,12,68

2,80-3, 30(01, 5M), 3,20(a, 3H), 1710, 1635, 1560, F C, 44,B2; H,5,33; N,12,96; S,12,44

3,4 4(t, 2H), 3,56(dd, IH, 2, 1330, 1060

12Hz ), 3,70-4,10(ra, 3H). 4,48 I -tfc (d, IH, 12Hz), 4,96(t, IH. 10Hz), OJ 5,33 (dd, IH, 10, 4Hz) I

2,04(a, 3H), 2,76(bs, IH). 3,00 3440, 3350. 3290, *P. C,53,06; H.5,42; N,10,76; S,12,32

(m, 3H), 3,26(a, 3H), 3,62(d, 2960, 2930, 1720. F. C,53,41; H.4,73; N.10,70; S.12,52

IH, 14Hz), 3,72-4,12(m, 3H), 1635, 1560, 1330,

4 ,52(d, IH, 14Hz), 5,40(dd, IH, 1060

6. 12Hz)

O

O

& Mi TABELLA V (Continuazione)

Dati 1H NMR tH(KDr). ?'max

ce?l

Composto (piridina d , ) Analisi elementare

~?

7b 0,60-1,80(1?, 711), 2,12(e, IH). 3440, 3350. 3290, T.C, 52,26; H,6,26; N,11,61; S,13,29

2,77(?, Iti. 2,96(t, 211. 2950, 2920, 1715, F.C.52,78; H,6,87; N.9,89; 5,10,38

8Hi|, 3,12(d, 111). 3,24(9, IH). 1635. 1560, 1320,

3,60(dd , IH. 2, 14Hz|. 3,02(m, 1060

3H). 4,50(d, IH. 14Hz), 5,36(dd,

IH. 6, I2Hz)

8-'c 2,05(9. 311), 2,13(9. 3H), 2,15 3420. 3350, 3290, T. C,49,90; H,5,64i N,12,65; S.11,58

i (B, 3H), ).00(ra. 4H), 3,201s, 2030, 1710, 1650, ?. C.48,95; H.5,37; N,12,22; S,12,54

IH). 3,48(dd, IH), 3,60(3.1, IH 1635, 1560, 1320, *

I

2, 14Hx). 3j77(d, 111. 5Hz), 1060

3,90(??. 411), 4,06(dd, IH, 4, I

10HZ), 4,59(t, IH, 10Hz|, 4,74

(d, IH. 14Hz), 5,61(03, IH, 4,

10Hz), 7,28, 7,64

9b 2,12(8, IH), 2,76(bs, IH). 3,12 3430, 3360, 3280, T. C,48,50) II,5,57; N,11,91; S,13,63

(?. 5H>, 3,24(9, )H|, 3,60 (d<l, 2920, 1710. 1630, F. C,48,73; H.5,82; N,11,06; S.13,67

IH. 2, 14Hi), 4,00(n, 611), 4.52 1550, 1325, 1055

(d, IH, 14H?I, 5,04(1, IH, 12Hz),

5,40(dd. IH. 6, 12Mz)

O TABELLA V (oontinuazione)

Dati 1H NMR IH(KDr). v me*

Composto (piridina d , ? ) ci?-*

j Analisi elementare

10b 2,041a, IH), 2.74(bs, IH), 1,0B 3430, 3350, 3280, T. C,52,47) H,5,00j N,13,91) S,12,73

(m, IH), 1,24la, IH), 3,60(dd, IH, 2930, 1720, 1630, F. C,46,17| H,4,42; N,11,88; S,ll,26

2, 14Hi), 3,92(m. }H), 4,52|d, IH, 1555, 1325, 1060,

14Hz), 5,02(t, )H, 12Hz), 5,36(dd,

IH, 6, 12Hz), 7,16, 7,56. 8,72

b

11 2,04(9, IH), 2,72(bs, IH), 3,04 3440, 3360, 3300, T C,54,12i H,5,30i N,10,52) S,12,04

(m, 311), 3,22(9, 3H), 3,58<dd, IH, 2940, 1720, 1635, F C,53,30, H,5,32) N,10,61; S,12,13

2, 14Hz), 3,68(?, 311), 3,92(?, 1555, 1335, 1060

3H), 4,52(d. 111, I4llz), 5,04(t,

IH, 12Ha), 5,38(dd, IH, 6, 12Hz),

7,34 (AD quartetto4H) I

12b vn 2,04(s, 3H), 2.74(bs, IH), 3,08 3460, 3360, 3300, T. C,50,45) H,4,60i N,12,79) S,ll,71 t (?, 3H), 3,24(9, 3H), 3,60 (dd, IH, 2940, 1720, 1635, r. C,49,25) H,4,5?) N,12,78) S,11,69

2, 14Hz), 3,96(19, 3H), 4,S2(d, IH, 1555, 1340, 1060

14Hz), 5,04(t, IH, 12Hz), 5,40

(dd, IH. 6, 12Hz), 8,04

(AB quartetto,4H)

?( )+ Tabella V (Continuazione)

Composto ? HMH (piridina i ) IR (KBr), \wax Analisi elementare

(e?'*)

2,00(s, 3111, 2,I7<?, 1HI, 2,77(lis, IH) neo, 1150, 3285, T: C, 48,33; H, 4,47; N, 12,04 3,01(1, 2H), 3,17|bs, IH), l,21|s, 3H|, 2940, 1720, 1635, F: C, 48,37; H, 4,56; N, 12,02 3,60(d, IH, 12,8 Hz), 3,87|dl, 2MI, 1560, 1510, 1450, (corretto ??*?,4? i CH ci i 4,00(dd, IH, 4,2 Hz, 11,1 Hz), 4,51(d, IH, 1315, IOGO

12,8 Hz), 5,10(1, IH), 5,40(dd, IH, 4,2 Hz,

10.1 Hz), 7,32(?, 2H), 7,71(t, IH), 8,2B

(dd, HI)

I

?fk OS

29? 3,031s, IH), 2,15(bs, IH), 2,75(bs, IH), 1460, 1160, 1290, T: C, 44,51; H, 3,97; N, 13,25 |

3.14(1, 2H), 1,24Is, IH), l,24(bs, IH), 3105, 2940, 1715, F: C, 44,56; H, 3,93; N, 12,115 3,60(d, IH), 3,94Idi, 2H), 4,00(dd, IH, 1635, 1555, 1140, (corretto per o,5M % CH^CI^) 4.1 Hz, 11,2 Hz), 4,50(d, IH, 12,7 Hz), 1060

5,16(dd, IH, 4,1 Hz, 10,3 Hz), 7,32(n, IH),

8,51(>, IH)

30^ 2,08(s, IH), 2,??(?, IH), 2,77(bs, IH), 1,17 1460, 1150, 1280, T: C, 45,72; H, 4,26; H, 14,22

(?, IH), 3,24(s, IH), 3,61(d, IH, 12,4 Hz), 1065, 2910, 1720, F: C, 45,72; H, 4,39; M, 14,31 3,87(di, 2H), 4,03(dd, IH, 4,1 Hz, 11,1 Hz), 1610, 1550, 1115, (oorretto per o,5H % CH^CI^I 4,55(d, IH, 12,7 Hz), 5,1211, IH), 5,42(dd, 1060

IH, 4,2 Hz, 10,3 Hz), 7,13ldd, IH, 4,8 Hz, ?S?C/ T

8,4 Hz), 7,85(1, IH), 0,50(d, IH, 8,2 HzI, ?e * 9,ll(d, IH, 4,8 Hz) o.v? Tabella V (Continuazione)

i.

Composto ilNMR ?piridinad ,<T) IR (KBi), Vna* Analisi elementare

~5 ?1.

U )

b

31 2,04(5, 3H), 2,04(bs, IH), 2,76(bs, ?HI, 346%, 334%, 32??, T: C, 46,18; H, 4,29; N, 14,43

3,12(a, 3H), 3,22(5, 3H), 3,%6(d, IH, 3060, 2930, 1720 F: C, 46,19; H, 4,32; N, 13,91 14 llz), 3.90(a, 3U), 4,48(d, IH, 14 Hz), 1630, 1%8%, 1%%%, (corretto per o,4h \ CH^CI^) %,00U, IH, 12,0 tir), %,36|dd, IH, 1340, 10%%

Hi, 12,0 Hz), 7,92(d, IH, 10,0 Hz), 8,%2

(dd, IH, 4 Hz, 10 Kz), 9,52(d, HI, 4 llz)

I

-e?. -4 I

a. Spettro NMR 100 MHz

b. Spettro NMR 90 MHz

c. Preparato per acilazione del comp?rto 5 con anidride acetica e piridina

d . ? = Teorico, P - Trovato

e. Spettro NMR 360 MHz

(? * ? io9

EIYERDICAZIONI

1. Composto avente la formula

o ^CH2O?CNB2

R?-SS-A1>L -li

J?-R

in euii

Alfcg ? un gruppo alchilenico a catena lineare o ramificata avente da 2 a 6 atomi di carbonio portante facoltati-

7

vamente un sostituente B in eoi gli atomi di zolfo e *

Q

* di azoto connoosi ad esso e l'eventuale sosti?

7

tuente E connesso ad esso attraverso oss?geno 1 zolfo o azoto sono attaccati a differenti atomi di carbonio dell'Alfcg,

B ? idrogeno, alchile inferiore, alcanoile inferiore,

benzoile o benzoile sostituito in cui detto sostituente ? alchile inferiore,_alcossi inferiore, alo, animino o nitro,

H7 ? scelto dal gruppo costituito da idrossi, alo, ai*?

mino, alchilammino o dialchilammino aventi da 1 a

12 atomi d? carbonio, alcenoilaminino, benzoilammino o benzoilasmino A-sostituito, naftoilammino o naftoilamnino A-sostituito, oicloalchile o cicloal

chile A-eostituito aventi, ciascuno, da 3 a 8 elementi di anello, cicloalchenile o cicloalchenile

A-sostituito aventi ciascuno da 5 a 8 elementi di

anello, fenile o fenile A-sostituito, naftile o

naftile A-sostituito, un gruppo eterociclico scelto dal gruppo costituito da gruppi etoroaromaticl

e eteroaliciclici aventi da 1 a 2 anelli,? 3 a 8 elementi d'anello in ciascun anello, e da 1 a 4 eteroatomi scelti da ossigeno,azoto e zolfo, alcossi

o alchiltio aventi ciascuno da 1 a 6 atomi di oar

bonio, oarbossi, alcossicarbonile di 1-7 atomi di carbonio, fenossioarbonlle o fenossicarbonile A-sg,

stitoito? fenoaei o fenoaai A-eoatitoito, naftoeai o naftosai A-eoatitoito, aleoaa?carbonilammino avente da 2 a 6 atomi d? carbonio, goanidino, araldo

(-NHCONHg), IC-alehilureilene (-HHCONHalchile) avente da 2 a 7 atomi di carboniot N^-aloalehilureilene a-?ente da 3 a 7 atomi di carbonio, N^-aloalchil-lf^-nitroaourellene avente da 3 a_7 atomi di oarbonio, e dialchilamminocarbonile aventeda 3 a 13 atomi di carbonio, in cui detto sostituente A ? scelto dal gruppo costituito da ano o dae gruppi alchlllci inferiori, alcano?lici inferiori, alooaai inferiori, alo, ammino, idrossi o nitro, e

g

B ? un gruppo organico?

2. Compoeto aoelto dal grappo avente la formala I o la formula II:

H o it

R Alk SS-Alk

I

E 0 0

.CH-OCNE.

R -SS-AIJC

II

;A,

'<??y in coi i

Alk1 ? ozi grappo alchilenieo a catena lineare o ramifica 7

ta avente da 1 a 6 atomi di carbonio quando E ? uni, to ad caso attraverso un euo atomo di carbonio, e da 2 a 6 atomi di carbonio quando R ? unito ad esao at traverso un suo atomo di zolfo, ossigeno o azoto, e 7

B e -SS- sono in tal caso uniti a differenti atomi di carbonio,

Alkg ? un gruppo alchilenioo a catena lineare o ramificata avente da 2 a 6 atomi di carbonio,portante faccitati, vamente un sostituente B7, in cui gli atomi di zolfo e di azoto connessi ad esso e l'eventuale sosti?

7

tuente H connesso ad esso attraverso ossigeno, zolfo o azoto, sono attaccati a differenti atomi di carbonio dell'Alk^,

Allc1 e Alfcg possono contenere un doppio legame,

B ? idrogeno, alcbile inferiore, alcanoile inferiore, benzoile o benzoile sostituito in cui detto sostituen te ? alohile inferiore, alcossi inferiore, alo, ammi, no o nitro,

7

B & scelto dal gruppo costituito da idrossi, alo, animino, alchilammino o dialohilammino aventi da 1 a 12 atomi di carbonio, alcanoilammino, benzoilammino o ben zoilaffimino-4-sostituito^kaftoilammino o naftoilammino A-sostitulto, cioloalchile o cioloalchile A-sostituito a

li?

? ?;00? venti ciaecuno da 3 a 8 elementi d'anello? ciclonichenile o cicloalchenile A-sostituito aventi ciascuno da 5 a 8 elementi d'anello, fenile o fenile A-sostituito, naftile o naftile A-soetituito, un gruppo ete, rooiclico scelto dal gruppo costituito da gruppi ete_ roaromatici ed eteroal?oiolici aventi da 1 a 2 anelli* da 3 a 8 elementi d'anello in ciascun anello, e da 1 a 4 eteroatomi scelti da ossigeno, azoto e zolfo, al cossi o alchiltio aventi ciascuno da 1 a 6 atomi di carbonio, carboesi, alcoeeicarbonile avente da 1 a 7 atomi di carbonio, fenossicarbonile o fenossicarboni le A-sostituito, fenossi o fenossi A-sostituito, naf tossi o naftossi A-sostituito, alcossioarbonilammino avente da 2 a 6 atomi d? carbonio, guan?d?no, ureido (-NHCONH^), H-alchilureilene (-NHCONHalchile) avente da 2 a 7 atomi di carbonio, H^-aloalchilureilene avente da 3 a 7 atomi di carbonio, ??^-aloalchil-N^-ni trosoureilene avente da 3 a 7 atomi di carbonio, e dialchilammino carbonile avente da 3 a 13 atomi d? oar bonio, in cui detto sostituente A ? scelto dal gruppo costituito da 1 o 2 gruppi alchilic? inferiori, al cano?lic? inferiori ,alcossi inferiori, alo, ammino, idrossi o nitro, e

?8 & scelto dal gruppo costituito da alchile d? 1-12 atom? di carbonio? alchenile o alchim ie aventi eia

ecuno da 3 a 12 atomi di carbonio, cicloalchile aven te da 3 a 8 elementi d'anello, cicloalchile A-sostituito avente da 3 a 8 elementi d?anello, cicloalche. nile avente da 5 a 8 elementi d'anello, fenile, feni. le A-sostituito, naftile, naftile A-eostituito, un gruppo eterociclico scelto dal gruppo costituito da gruppi eteroaromatici e eteroaliciclici aventi da 1 a 2 anelli, da 3 a 8 elementi d'anello in ciascun a nello e da 1 a 4 eteroatomi ecelti da ossigeno, azo to e ?olfo, in cui detto sostituente A ? scelto dal gruppo costituito da uno o due gruppi alchilici inferiori, alcanoilici inferiori, alcossi inferiori, alo,

8

animino, idross? o nitro, e E e l'atomo di zolfo adiacente costituitscono assieme S-cisteinile in cui detto gruppo S-cisteinilico pu? essere esterificato, salificato o unito entro un legame peptidico.

3? Composto secondo la rivendicazione 2 avente la fozmula I in cui Alk^ ? etilene e R ? idrogeno.

4. Composto secondo la rivendicazione 3 in cui Alk^ ? etilene.

5. Composto secondo la rivendicazione 2 noto col nome chimico di 7*-,/2-(2-amminoetilditio)etilammino7-9ametossimitosano.

6. Composto secondo la rivendicazione 2 avente il nome chimico 7-/2-C2-acetilamminoetilditio)etilammino/*

9> 9a-metossimitosano

7. Composto secondo la rivendicazione 2 avente la formula II in cui Alk2 ? etilene e R ? idrogeno.

8 Composto secondo la rivendicazione 7 in cui Q

R ? alchile.

9. CompoBO secondo la rivendicazione 2 avente il nome chimico 7-/^2-(ottilditio)etilamminq/-9a-metossimitosa no.

10. Composto secondo la rivendicazione 2 avente il nome chimico 7-/2-(n-butilditio)etilammino/-9a-metoBsimitosano?

11. Composto secondo la rivendicazione 2,* 7-/2-(benzilditio)etilamminq/-9a-me tose imitosano.

12. Procedimento per inibire la crescita di un tumore nei mammiferi il quale comprende la somministrazio. ne sistemica ad un mammifero portante un tumore di una do, se efficace antitumoralev sostanzialmente non tossica, di un composto eecondo la rivendicazione 2.

13. Procedimento per la preparazione di un com posto secondo la rivendicazione 2 il quale comprende il contatti di da 1 a 4 proporzioni molecolari di una ammina avente le formule III o IV

E^Alk^SS-Al^NHg R8-SS-Alk2NH2

III IV

con 1 proporzione molecolare di un mitosano della formula V %J$)

? ^CK'2OCNH2

.N-R

v

in cui B, E7, B8, Alk^ e Alk^ sono gli stessi definiti nella rivendicazione 2 e Y ? alcossi inferiore di 1-6 atomi di car bonio oppure un gruppo avente la formula VI

B5

E EN-C=N- '

? J 4

VI

in cui

B5 ? idrogeno| alchile inferiore, fenile, alchil inferiorefenile, alcossi inferiore-fenile, alofenile, amminofeni^ le o nitrofenile,

E3 e E4 sono, indipendentemente, alchile inferiore, oppure, assieme con l'atomo di azoto al quale sono attaccati, co, stituiscono pirrolidina, 2-, o 3-alchilinferiore-pirrol^ dina, piperidina, 2-, 3-, o 4-alchilinferiore-piperidina, 2 ,6-dialchilinferiore-piperidina, piperazina, piperazina 4-sostituita (in cui detto 4-sostituente ? alchile o car balcoss? aventi ciascuno da 1 a 8 atomi di carbonio, fenile, metilfenile, metossifenile, alofenile, nitrofenile o benzile), azepina, 2-, 3-, 4-, o 5-alchile inferioreazepina, morfolina, tiomorfd ina, tiomorfoline-1-ossido

* ? - ' o tioraorfolina-1,1-di?ssido,

* <

in cui

? ciascuno dei suddetti gruppi alchilici inferiori, al canoilici inferiori e alcosei inferiori contiene da 1 a 6 atomi di carbonio,

in condizioni di reazione, in un liquido organico inerte alla reazione, ad una temperatura da circa -15 a 50?C, per un periodo di una durata sufficiente a dar luogo alla formazione di una quantit? apprezzabile del prodotto di fprmu ' la I o di formula II. ? -14. Composto secondo la rivendicazione 2 avente il nome chimico 7~/2-{fenilditio)etilamminq/-9a-metossimitosano.

15. Composto secondo la rivendicazione 2 avente il nome chimico 7-/2-(2-idrossietilditio)etilammino/-9a-metossimitosano.

16.-Composto secondo la rivendicazione 2 avente il nome chimico 7-/2-(2-piridilditio)etilammin?/-9a-metossimitosano

17? Composto secondo la rivendicazione 2 avente il nome chimico 7-/2-(4-metossifenilditio)etilammino7-9ametosaimitosano.

18. Composto secondo la rivendicazione 2 avente il nome chimico 7-/2-(4-nitrofenilditio)etilammino/-9a-metossimitosano.

.? 19. Composto secondo la rivendicazione 2 aveni

M te il nome chimico 7-/2-(2-nitrofenilditio)etilammino/-9ametossimitosano .

20. Composto secondo la rivendioazione 2 avente il n?me chimico 7-/2-(2^-dinitrofenilditiojetilammino/^ ametossimitosano.

21. Composto second? la rivendicazione 2 avente il nome chimico 7-/2-(3-nitro-2-piridilditio)etilammino/-9a-metossimitosano .

? ? 22. Composto secondo la rivendicazione 2 avente il nome chimico 7-/2-(5-nitro-2-p?ridilditio)etilammino/-9a-metossimitosano

mento. E' quindi evidan te che il composto No. 3 ? di diverse volte pi?.potente con tro il melanoma B16 nei topi rispetto alla mitomicina C.