ITMI20121997A1 - Composizioni fibrinolitiche per la prevenzione e il trattamento degli stati flebotrombotici - Google Patents

Description

Descrizione del brevetto per invenzione industriale avente per titolo:

“COMPOSIZIONI FIBRINOLITICHE PER LA PREVENZIONE E IL TRATTAMENTO DEGLI STATI FLEBOTROMBOTICIâ€

La presente invenzione ha per oggetto composizioni fibrinolitiche per la prevenzione e il trattamento degli stati flebotrombotici.

Sfondo dell’invenzione

La flebotrombosi à ̈ un’affezione caratterizzata dalla formazione di trombi nel lume di una o più vene, per cause non infiammatorie, diversamente cioà ̈ da quanto si verifica nella flebite.

Le cause che possono indurre la malattia sono diverse e possono intervenire singolarmente o insieme ad altre in misura varia: modificazioni della parete venosa, rallentamento della corrente sanguigna, alterazioni della coagulabilità del sangue. Dette cause più frequentemente si osservano nei soggetti in cattive condizioni generali, nei diabetici, nei cardiopatici, negli stati di convalescenza post-chirurgica.

Le sedi preferite sono gli arti inferiori e, in ordine decrescente di frequenza, le vene della pelvi, i rami della vena porta, i seni della dura madre. Il trombo formatosi all’interno della vena aderisce poco alla parete del vaso, per cui con una certa facilità può staccarsi trasformandosi così in un embolo che va ad occludere un vaso lontano.

Con la sua presenza il trombo può obliterare il lume del vaso impedendo completamente il flusso di sangue. Col trascorrere del tempo il trombo, se non si à ̈ disciolto, viene invaso da tessuto connettivo che lo trasforma in una piccola massa fibrosa. In esso poi si possono formare piccoli vasi sanguigni che consentono il ripristino, seppure parziale, della corrente sanguigna. I disturbi legati ad una flebotrombosi ed il quadro clinico provocato da essa variano a seconda della sede e dell’importanza della vena coinvolta: quanto più à ̈ esteso il territorio drenato, tanto più evidenti sono gli effetti derivanti dall’ostacolata circolazione: turgore del letto vascolare venoso, edema nel territorio dipendente da quel vaso, colorito bluastro, dolore più o meno intenso. Spesso, se il vaso à ̈ piccolo, una flebotrombosi può passare inosservata e guarire in altri casi, al contrario, si manifesta con complicazioni delle quali la più temibile à ̈ l’embolia polmonare.

La terapia della flebotrombosi richiede l’immobilizzazione della parte affetta (se si tratta di un arto). Inoltre à ̈ indicato l’uso di farmaci trombolitici.

Il termine generico di bromelina si riferisce a due enzimi proteolitici (ossia una proteina in grado di degradare altre proteine in aminoacidi) presenti nei frutti e gambi di Ananas comosus (famiglia delle Bromeliaceae, da cui il nome).

La concentrazione di bromelina si esprime in unità proteolitiche (o, più comunemente, unità internazionali, U.I.), e in unità ponderali. Il suo utilizzo principale à ̈ come antinfiammatorio ed anti-edematoso. Risulta particolarmente efficace nel trattamento degli stati infiammatori dei tessuti molli associati a trauma, nelle infiammazioni localizzate (specialmente in presenza di edema), e nelle reazioni tissutali postoperatorie. Nell’uso come antiinfiammatorio, si utilizza in dose da 40 mg da due a sei volte al giorno, sebbene sia stata sperimentata a dosaggi ampiamente superiori senza effetti collaterali degni di nota, salvo lievi disturbi gastrointestinali e rare reazioni di ipersensibilità. Altre attività farmacologiche della bromelina includono un’azione antitrombotica, un’attività ipotensiva e la capacità di solubilizzare le placche aterosclerotiche.

La nattokinasi à ̈ un enzima proteolitico che si ottiene per fermentazione da Bacillus subtilis natto di un particolare alimento giapponese a base di semi di soia bolliti.

La nattokinasi à ̈ una serino-proteasi appartenente alla famiglia delle subtilisine con forti capacità di fibrinolisi.

Per tali motivi viene spesso impiegata come sostituto naturale di farmaci antiaggreganti e anticoagulanti quali acido acetilsalicilico, ticlopidina e warfarina.

WO 200821987 descrive una preparazione contenente svariati enzimi (proteasi fungina, papaina, bromelina, pancreatina fungina, amilasi, nattokinasi, proteasi-S, lipasi) associati a derivati erbali (rutina, zenzero) e microelementi (calcio, magnesio, potassio e altri elementi) per la prevenzione e il trattamento di tromboflebiti.

Si à ̈ ora trovato, e costituisce l’oggetto dell’invenzione, che l’associazione di solo due enzimi, specificamente bromelina e nattokinasi, in specifici rapporti e opportunamente formulati, esplica un effetto sinergico particolarmente vantaggioso.

Descrizione dell’invenzione

La presente invenzione ha per oggetto composizioni fibrinolitiche per la prevenzione e il trattamento degli stati flebotrombotici, comprendenti come unici ingredienti attivi bromelina e nattokinasi, e l’uso combinato di bromelina e nattokinasi in relazione alle loro proprietà fibrinolitiche.

Secondo un aspetto preferito, le composizioni dell’invenzione comprenderanno gli ingredienti attivi entro i seguenti intervalli:

a) bromelina: tra 20 e 400 mg, preferenzialmente 160 mg/dose/die; e b) nattokinasi verrà impiegata in dosi tra 10 e 100 mg.

Secondo un aspetto più preferito, le composizioni dell’invenzione comprenderanno gli ingredienti attivi nei dosaggi seguenti:

c) bromelina: 160 mg/dose/die; e

d) nattokinasi: 100 mg/dose/die.

Secondo un aspetto preferito, le composizioni dell’invenzione conterranno bromelina e nattokinasi in rapporto ponderale di 1.6:1.

Secondo un aspetto preferito, le composizioni dell’invenzione saranno formulate come compresse bistrato, con un enzima per strato.

Sperimentazione clinica

La verifica dell’efficacia trombolitica di preparazioni di bromelina e di nattokinasi à ̈ stata effettuata in accordo al modello proposto da Astrupt (The fibrin plate method for estimating fibrinolytic activity. Arch Biochem Biophys; 40:346-351, 1952), eseguendo ogni test in triplicato su fibrina bovina e in presenza di 24 unità di plasminogeno, verificando l’azione fibrinolitica della bromelina e della nattokinasi singolarmente e miscelando le due sostanze secondo vari rapporti in peso. Nel modello sopra descritto l’azione della bromelina à ̈ risultata essere di 11.5±2.5 FU/ml mentre quella della nattokinasi di 18.9±3.3 FU/ml. Quando i due enzimi sono stati miscelati insieme in rapporto 1:1 l’azione fibrinolitica si à ̈ dimostrata essere 97.8 ± 13.3 FU/ml con un chiaro effetto sinergico che à ̈ stato confermata riducendo di 1/10 i dosaggi di entrambi gli enzimi e riverificando l’azione fibrinolitica dei due composti in miscela 1:1 in peso. Così operando, l’azione fibrinolitica à ̈ risultata essere 12.7± 2.9 FU/ml, valore simile a quello ottenibile impiegando singolarmente i due enzimi a dosaggi 10 volte superiori.

Eseguendo poi ulteriori test à ̈ stato osservato che il risultato migliore veniva ottenuto miscelando la bromelina e la nattokinasi in rapporto ponderale 1.6:1.

Si à ̈ inoltre valutata l’efficacia dell’associazione di bromelina e nattokinasi in paragone con l’associazione di enzimi proteolitici e altri componenti descritta in WO 2008/02198, sempre impiegando il modello di Astrupt. Si à ̈ valutata pertanto l’azione fibrinolitica dei singoli composti, della miscela totale e della miscela dei soli singoli enzimi in assenza cioà ̈ dei derivati erbali. Abbiamo osservato che, singolarmente, gran parte dei composti (proteasi fungina, papaina, pancreatina, amilasi, proteasi-S) à ̈ risultata scarsamente attiva rispetto a bromelina e nattokinasi. Queste due ultime, attive rispettivamente per valori di 125±13.2 FU/ml e 139.5±34.7 FU/ml, sono infatti risultate non meno di 100 volte più attive degli altri singoli enzimi. Totalmente inattivi sono invece risultati i derivati erbali e i microelementi. La miscela di tutti gli ingredienti (enzimi, erbali e microelementi) ha determinato un’attività fibrinolitica comunque inferiore a quella ottenuta dalle sole bromelina e nattokinasi in miscela. La miscela totale ha infatti dimostrato un’azione fibrinolitica di 47.9±11.8 FU/ml, la miscela di tutti gli enzimi di 52.7±8.4 FU/ml mentre l’associazione di Bromelina e nattokinasi insieme di 1127.67±119.6 FU/ml. Questi test hanno chiaramente dimostrato che l’associazione bromelina e nattokinasi risulta più efficace dell’associazione rivendicata in WO200821987 e dell’associazione dei singoli enzimi ivi descritti. Questo fenomeno potrebbe essere legato a possibili antagonismi che si creano miscelando strutture proteiche diverse, e strutture proteiche con molecole di derivazione erbale, che entrano in competizione per i medesimi epitopi molecolari sulla fibrina rendendo inefficiente o poco efficiente il processo fibrinolitico.

Formulazioni

Le composizioni dell’invenzione potranno essere formulate in modo adatto alla somministrazione per via orale e saranno preparate secondo metodi convenzionali ben noti in tecnica farmaceutica, come quelli descritti in “Remington’s Pharmaceutical Handbook†, Mack Publishing Co., N.Y., USA, utilizzando eccipienti, diluenti, agenti di carica, anti-agglomeranti, aromi, dolcificanti, accettabili per il loro uso finale.

Come già accennato, secondo un aspetto preferito, le composizioni dell’invenzione saranno formulate come compresse bistrato, con un enzima per strato; entrambi gli strati saranno gastro-protetti e a cessione programmata intestinale tempo-dipendente della durata di circa 4-8 ore. Questo tipo di rilascio à ̈ reso possibile dall’impiego nel nucleo centrale di ogni strato di methocel o metholose a diverso grado di polimerizzazione miscelato in rapporto 1:1 con avicel o microcel a loro volta pre-miscelati in rapporto 1:1 con una miscela, precostituita in rapporto 1:05, di mannitolo e dicalcio fosfato. La filmatura gastro-protetta à ̈ poi ottenibile impiegando gomma lacca (shellac) direttamente in bassina industriale di capacità tra 10 e 300 kg, preferenzialmente 50 kg. La filmatura potrà essere resa infine più resistente con un ulteriore passaggio in bassina industriale ed uso concomitante di miscele 1:0.5:0.5 di ammonio carbonato, trietilcitrato e gomma lacca.

Esempi di formulazione dell’invenzione sono riportati di seguito.

Esempio 1) Compresse gastro-protette a cessione programmata contenenti:

- bromelina 80 mg

- nattokinasi 50 mg

Esempio 2) Compresse bistrato, gastro-protette a cessione programmata contenenti per strato:

- bromelina 160 mg

- nattokinasi 100 mg

Esempio 3) Granulato gastro-protetto, ottenuto su letto fluido, contenente:

- bromelina 320 mg

- nattokinasi 200 mg

Claims (6)

1. RIVENDICAZIONI 1. Composizioni comprendenti come unici ingredienti attivi bromelina e nattokinasi.
2. 2. Composizioni secondo la rivendicazione 1 in cui il rapporto ponderale fra bromelina e nattokinasi à ̈ 1.6:1.
3. 3. Composizioni secondo la rivendicazione 1 o 2 comprendenti gli ingredienti attivi entro i seguenti intervalli: a) bromelina: tra 20 e 400 mg; e b) nattokinasi: tra 10 e 200 mg.
4. 4. Composizioni secondo una o più delle rivendicazioni precedenti in forma adatta alla somministrazione orale.
5. 5. Composizioni secondo la rivendicazione 4 in forma di compresse bistrato, in cui ogni strato contiene un singolo enzima ed à ̈ gastro-protetto e a cessione programmata intestinale tempo-dipendente della durata di circa 4-8 ore.
6. 6. Combinazione di nattokinasi e bromelina per uso nel trattamento di tromboflebiti.