ITRM20130644A1 - Composizione per la cura dei capelli comprendente caffeina ed estratto di semi di zucca e stella alpina - Google Patents
Composizione per la cura dei capelli comprendente caffeina ed estratto di semi di zucca e stella alpinaInfo
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Description
“COMPOSIZIONE PER LA CURA DEI CAPELLI COMPRENDENTE CAFFEINA ED ESTRATTO DI SEMI DI ZUCCA E STELLA ALPINA”
Descrizione
Campo di applicazione dell’invenzione
La presente invenzione riguarda il settore cosmetico e fitocosmetico e, più precisamente il settore delle composizioni naturali per la cura dei capelli che agiscono da antiandrogeno naturale ed hanno spiccate proprietà antiinfiammatorie, antiossidanti e lenitive per uso nel trattamento anticaduta.
Tecnica nota
L'Alopecia androgenetica, nota anche come calvizie, è la perdita di capelli dovuta ad una suscettibilità del follicolo pilifero alla miniaturizzazione di tipo androgenetico. È la forma di calvizie più comune e interessa il 70% degli uomini e il 40% delle donne in un certo stadio della loro vita. L'uomo tipicamente presenta una recessione dell'attaccatura alle tempie e perdita di capelli al vertice, mentre la donna normalmente ha un diradamento diffuso su tutta la parte alta dello scalpo [1][2][3].
Sembra accertato che l'origine dell'alopecia androgenetica risieda nell'effetto degli ormoni androgeni sui bulbi dei capelli, in particolare, la condizione sembra essere legata all'attività dell’enzima 5-alfa-reduttasi di tipo II, che trasforma il testosterone in diidrotestosterone (DHT). Vengono colpiti solo i bulbi predisposti, infatti, nella calvizie androgenetica vengono persi principalmente i capelli nella regione frontale e nel vertice del capo perché in questa zona l'alfa 5-reduttasi è più attiva, e quindi vi si concentra una maggiore quantità di DHT; per questo motivo la maggior parte delle persone colpite da alopecia androgenetica quasi sempre mantiene capelli sani nella zona della corona, corrispondenti alle aree occipitali e temporali del capo.
Il fenomeno della miniaturizzazione si estende fino alla morte definitiva del bulbo ed alla perdita irreversibile del capello.
Il diidrotestosterone agisce sui follicoli piliferi inducendo una riduzione della durata della fase di crescita del capello (anagen). I capelli non riescono a raggiungere la lunghezza consueta, perché la loro fase di crescita è più breve. Ne deriva un cambiamento di aspetto dei capelli che divengono progressivamente più corti e sottili. Oltre alla riduzione della fase anagen contemporaneamente vi è un prolungamento della fase di riposo del ciclo di vita del capello: i capelli ritardano il rientro nella fase di crescita e il follicolo rimane vuoto per un tempo più prolungato. Il ritardo nel ripristino della fase anagen induce una vera riduzione della densità dei capelli e contribuisce ad aumentare l'evidenza del diradamento della zona, particolarmente nelle fasi più avanzate della malattia.
La miniaturizzazione dei capelli, per effetto della quale i capelli possono presentare un diametro fino 10 volte inferiore al normale, e una lunghezza non superiore agli 8 cm, però, non interessa contemporaneamente tutti i follicoli della regione colpita. Ne deriva una tipica variabilità di calibro e lunghezza dei capelli corrispondente al variabile stato di ciascun follicolo nel processo di miniaturizzazione.
Nei soggetti che rispondono bene ai trattamenti anticaduta dei capelli, diversi farmaci hanno dimostrato di poter rallentare, bloccare e addirittura invertire, almeno per qualche anno, il processo di miniaturizzazione dei capelli causato dalla alopecia androgenetica.
Un inibitore della 5-alfa-reduttasi di tipo II, la finasteride, è il farmaco utilizzato per il trattamento dell’ipertrofia prostatica benigna, del cancro prostatico e dell’alopecia androgenetica. La terapia a base di finasteride va assunta per tutta la vita poiché, dopo alcuni mesi dalla sospensione i capelli tornano a cadere, ed un'eventuale ripresa della terapia non porta agli stessi benefici. Il farmaco agisce abbassando i valori del diidrotestosterone, responsabile della caduta dei capelli. Tra gli effetti collaterali derivanti dall’uso della finasteride il paziente può registrare diminuzione della libido in vario grado fino all'impotenza, diminuzione del liquido seminale e/o quantità spermatica minore, diminuzione delle eiaculazioni, depressione, stanchezza cronica, riduzione del pene, fibrosi del pene e ginecomastia. Si tratta di effetti nella maggioranza dei casi risolvibili con la sospensione del farmaco, tuttavia persistenti in una bassa percentuale di soggetti che lo hanno assunto.
Un altro farmaco molto utilizzato allo scopo di prevenire la caduta dei capelli è il minoxidil: una sostanza utilizzata anche per la cura dell'ipertensione. Viene usato topicamente sul bulbo pilifero e agisce da stimolante. Oltre il 70 % dei pazienti ottiene risultati estetici positivi in vario grado, dal mantenimento alla ricrescita. Anche in questo caso l'uso deve essere prolungato nel tempo perché una sua sospensione riporta i capelli ad uno stadio preterapia. Non mancano anche in questo caso effetti collaterali noti tra cui: ipotensione, infiammazioni, eritema, prurito.
Anche l'assunzione sottocutanea di testosterone, specialmente nelle donne, migliora la crescita dei capelli, probabilmente perché stimola i processi anabolici come la crescita dei capelli [4].
Per ovviare ai gravi effetti collaterali correlati all’uso di inibitori della alfa-5-reduttasi, sono stati sviluppati rimedi e prodotti naturali atti a contrastare il fenomeno della caduta dei capelli. La grande diffusione nel mercato di prodotti naturali ha avuto un impatto eccezionale nel settore di riferimento proprio a causa degli effetti secondari indesiderati provocati dai farmaci anticaduta dei capelli, talvolta anche gravi, totalmente assenti nei prodotti naturali. E’ sicuramente per questa ragione che i rimedi naturali contro la caduta dei capelli hanno riscosso così tanto successo nel pubblico e risultano essere oggi una validissima alternativa a rimedi efficaci ma senza dubbio più invasivi.
I prodotti naturali per la cura dei capelli recentemente sviluppati hanno dimostrato di essere in grado innanzitutto di arrestare l’inesorabile perdita dei capelli, secondariamente di stimolare in maniera totalmente naturale la crescita capillare; e di nutrire a fondo i follicoli debilitati ed infine di bloccare la produzione di DHT senza interagire con il testosterone.
Le composizioni naturali per la cura dei capelli a base di caffeina sono particolarmente indicate nel trattamento dell'alopecia androgenetica [5]. Lo studio condotto da Fischer et al. ha dimostrato che la caffeina è in grado di stimolare la crescita dei capelli in vitro e, cosa ancor più importante, di ridurre la soppressione della vitalità follicolare indotta dal testosterone. Nel modello sperimentale adottato, le azioni stimolanti della caffeina sulla crescita dei capelli sono del tutto indipendenti dalla capacità di aumentare l'irrorazione sanguigna, a cui è stato tradizionalmente ascritto l’effetto positivo sulla crescita del capello.
L'addizione di caffeina in uno shampoo è una metodica efficace per far arrivare tale sostanza in seno al follicolo pilifero.
Va inoltre detto che, in aggiunta all’azione diretta del didrotestosterone sul bulbo del capello che influenza la caduta dei capello, anche altri fattori possono intervenire ad indebolire i capelli, primi fra tutti l’utilizzo di cosmetici aggressivi, ed in particolare detergenti tensioattivi, tinture, permanenti, l’esposizione ad agenti inquinanti atmosferici come polveri sottili, gas combusti e raggi UVA/UVB, che a lungo andare contribuiscono ad indebolire la fibra del capello. I capelli soggetti a queste aggressioni perdono di elasticità, volume, pettinabilità e lucentezza, assumendo un aspetto decisamente poco sano. Infatti, i radicali liberi, che sono generati da fattori come la radiazione UV, presente nella luce solare, calore e/o aggressione chimica, sono implicati nel processo di danneggiamento dei capelli, riduzione della brillantezza, perdita del colore dei capelli, ed in ultimo al loro indebolimento e caduta.
In commercio sono disponibili molte composizioni per capelli, che si propongono di ridurre al minimo i danni ai capelli utilizzando agenti particolari quali vitamine e estratti di erbe che riducono la formazione dei radicali liberi.
DESCRIZIONE DELL’INVENZIONE
La presente invenzione fornisce composizioni per la cura dei capelli o composizioni per uso nel trattamento dermocorrettivo, comprendente una miscela sinergica di caffeina ed estratti vegetali scelti tra (a) estratto di semi di Cucurbita pepo, comunemente detta zucca, e (b) estratto di foglie e di fiore di Leontopodium alpinum, comunemente detta stella alpina.
Il termine "composizione per la cura dei capelli" o “per uso nel trattamento dermocorrettivo” come qui utilizzato comprende, ma non si limita a, shampoo, balsami, tinture per capelli, schiume, gel, creme, cere, maschere, paste strutturati, spray stilizzanti, lozioni e risciacqui, tutti adatti per l'uso sui peli dei mammiferi, quali quelli del cuoio capelluto, barba, baffi, preferibilmente sui capelli umani.
Le composizioni per la cura dei capelli della presente invenzione possono comprendere prodotti convenzionali per l’igiene e la cura dei capelli e/o prodotti specifici salva capelli, lozioni, che possono essere utilizzati per esempio anche come pretrattamenti protettivi precedenti a calore o a trattamento chimico del capello.
Le proprietà fitoterapiche della composizione secondo l’invenzione sono dovute all’effetto sinergico di caffeina, estratto di semi di zucca ed all’estratto di foglie e di fiori di stella alpina.
L’estratto di semi di zucca è noto per essere ricco in betasteroli, strutturalmente simili agli androgeni e agli estrogeni; trattandosi di composti lipofili, tali sostanze si ritrovano in gran quantità anche nell'olio che da essi si ricava. Queste sostanze si sono dimostrate utili per abbassare i livelli di colesterolo, migliorare i sintomi da carenza estrogenica nella post-menopausa, ed alleviare i sintomi dell'ipertrofia prostatica. Dai semi di zucca si ottiene principalmente un olio, che rappresenta all ́incirca il 40-50% in peso, sfruttato per il suo ricco contenuto in acidi grassi essenziali, soprattutto acido linoleico e vitamina E. Proprio il contenuto di acido linoleico, è fondamentale per l ́effetto fitoterapico positivo esercitato nelle iperlipoprotinemie e nei disturbi prostatici.
Le ipotesi sul meccanismo d ́azione indicano che il complesso liposterolico in esso contenuto rappresenta la frazione attiva dell ́olio dei semi di zucca che lo rende un rimedio elettivo come coadiuvante nel trattamento dell ́ipertrofia prostatica benigna (IBP), attraverso l ́inibizione dell ́enzima 5-alfa-reduttasi.
Leontopodium alpinum, la cosiddetta stella alpina, è una pianta erbacea perenne dall'aspetto cespitoso delle alte quote alpine appartenente alla famiglia delle Asteraceae.
Estratti di stella alpina sono ampiamenti utilizzati in cosmetica per la preparazione di creme solari, latti solari, creme anti-invecchiamento.
In erboristeria si trovano prodotti antirughe e rigeneranti delle cellule della pelle, preparati con cellule staminali della pianta. Il prodotto è un concentrato di principi attivi dalla notevole capacità antiossidante, rigenerante e citoprotettiva.
I principi attivi presenti nell’estratto della stella alpina sono acido clorogenico, luteolina, tannini, fitosterolo, mucillagini, flavonoidi che conferiscono alla pianta, ed al suo estratto, proprietà astringenti, emollienti, lenitive, toniche, antiossidanti, antinfiammatorie, antidiarroiche, sedative.
Secondo la presente invenzione è fornita una composizione per la cura dei capelli comprendente una combinazione di componenti naturali, priva di tensioattivi chimici e quindi atossica e non irritante, che quando combinati insieme forniscono un miglioramento sinergistico della loro attività offrendo una migliorata azione anticaduta dei capelli ed un’azione protettiva della salute e del benessere dei capelli, in particolare contro gli agenti dello stress ossidativo.
La combinazione di caffeina, estratto di semi di zucca ed estratto di fiori e di foglie di stella alpina fornisce un principio attivo fitocosmetico rivitalizzante in grado di eliminare le scorie ed impurità che alterano il ciclo di vita del capello, agendo da antiandrogeno naturale, con spiccate proprietà antiinfiammatorie, antiossidanti e lenitive.
I principi attivi che costituiscono la miscela sinergistica utilizzata nella presente invenzione sono già noti per le loro individuali abilità di inibire la caduta dei capelli, prevenire il danno ossidativo nei capelli, tuttavia l’insegnamento innovativo secondo l’invenzione è che alcune combinazioni di tali principi attivi, hanno un’efficacia superiore a quanto atteso. Ciò è stato dimostrato sperimentalmente, attraverso specifiche prove comparative.
La quantità di estratto di semi di zucca presente nella composizione per la cura dei capelli secondo l’invenzione va da 4,5% ad 1,5% del peso totale, preferibilmente è il 3% del peso totale; l’estratto di fiori e di foglie di stella alpina è presente in quantità variabile tra 1 e 2% del peso totale, preferibilmente 1,5%, mentre la quantità di caffeina varia tra 0,5 e 2% in peso totale della composizione, preferibilmente è 0,7%.
In aggiunta alla sinergistica miscela naturale di caffeina, estratto di semi di zucca ed estratto di fiori e di foglie di stella alpina, la composizione per la cura dei capelli secondo l’invenzione comprende ulteriori componenti, additivi, eccipienti, profumi ed agenti coloranti ben noti agli esperti del ramo.
A titolo indicativo, la composizione comprende ulteriormente zinco, in forma di sale di zinco dell’acido pirrolidincarbossilico (zinco PCA). La particolare struttura aminoacidica del sale di zinco dell’acido pirrolidincarbossilico conferisce sia la capacità di legare e trattenere l’acqua, grazie alla presenza di gruppi funzionali idrofili, che proprietà condizionanti, in virtù della presenza di cariche negative che interagiscono con le cariche positive delle proteine costituenti la pelle e i capelli. Inoltre, al sale di zinco dell’acido pirrolidincarbossilico sono attribuite proprietà antiseborroiche, antimicrobiche e anti-acne.
La composizione può ulteriormente comprendere agenti regolanti il valore del pH, quali, a titolo esemplificativo e non limitativo, idrossido di sodio, ed altri equivalenti noti nel settore, in quantità idonea a mantenere il valore del pH della composizione compreso tra 5,5 e 6,5, preferibilmente tra 5,9 e 6,3 in un intervallo di temperatura compreso tra 4° C e 40 °C..
La composizione può ulteriormente comprendere agenti idratanti ed umettanti quali, a titolo di esempio non limitativo, il pantenolo e la glicerina.
L’utilizzo del pantenolo, cioè la forma alcolica ridotta dell’acido pantotenico (vitamina B5), in ambito cosmetico è preferito rispetto a quello dell’acido pantotenico, per la maggior stabilità della forma alcolica. Il pantenolo possiede caratteristiche chimico-fisiche che ne rendono facile l’utilizzo, come la solubilità in acqua. In virtù della sua spiccata azione idratante, emolliente e lenitiva, è l’ingrediente d’elezione in molti prodotti dermocosmetici destinati a pelli secche o irritate. Il pantenolo viene usato in campo cosmetico nei prodotti per il trattamento e l’igiene della cute e dei capelli. Oltre alle note proprietà idratanti, il pantenolo è indicato anche per l’attività emolliente e lenitiva, ad esempio per attenuare gli eritemi e le dermatiti causate da lunghe esposizioni ai raggi ultravioletti. In particolare, nell’ambito della cosmesi tricologica viene utilizzato per le sue proprietà idratanti nei confronti del cuoio capelluto, poiché in grado di conferire il giusto grado di umidità al capello, prevenendo disidratazione e fragilità; è inoltre indicato per le proprietà emollienti in prodotti che fungono da supporto alla messa in piega e come condizionante nei confronti della cheratina dei capelli. Non è tossico, sensibilizzante e non irrita la cute.
La glicerina rappresenta l’agente umettante più usato in ambito cosmetologico ed è ben tollerata dalla cute. A basse concentrazioni è utile per preservare dalla disidratazione il prodotto in cui è contenuto; a dosaggi elevati svolge un’ottima attività idratante e plastificante nei confronti dell’epidermide. In virtù delle sue capacità idratanti, lubrificanti ed emollienti nei confronti della cute del cuoio capelluto, la glicerina viene utilizzata secondo l’invenzione nella composizione per uso dermocosmetico nel trattamento della caduta dei capelli.
Una caratteristica particolarmente vantaggiosa della composizione per la cura dei capelli secondo l’invenzione consiste nel fatto di non contenere tensioattivi chimici, quali per esempio, SLS (sodio lauril solfato), SLES (sodio lauriletere solfato) e molecole strutturalmente e funzionalmente affini, presenti nella maggior parte dei prodotti detergenti per viso, corpo e capelli, ove vengono impiegate per il loro forte potere detergente. Per la loro forte economicità molecole di tensioattivi chimici vengono impiegate in moltissimi prodotti cosmetici e farmaceutici, in particolare nei prodotti detergenti per la cute, ma per il loro eccessivo potere sgrassante risultano aggressivi irritanti e sensibilizzanti per la pelle. SLS e SLES possono danneggiare il follicolo pilifero, comportando perdita di capelli e notevoli arrossamenti cutanei.
Solventi che possono essere ulteriormente presenti nella composizione secondo l’invenzione sono acqua, alcool denaturato, ed altri agenti atti a favorire la solubilizzazione dei vari componenti noti nel settore.
La composizione secondo l’invenzione si presenta in forma idonea ad essere applicata topicamente sui capelli e sulla cute, in particolare del capo, in forma liquida a vario grado di viscosità, gel, unguento, crema, pasta.
Un ulteriore oggetto della presente invenzione è il fornire un metodo per il trattamento anti caduta dei capelli mediante l’applicazione topica sui capelli e sulla cute del capo della composizione come descritta.
L’invenzione sarà ora illustrata con riferimento ad esempi formulativi e saggi sperimentali non limitativi descritti di seguito.
Esempio 1 – Trattamento dermocorrettivo
In una forma di realizzazione particolarmente preferita la composizione secondo l’invenzione ha la seguente formulazione
Ingredienti % in quantita totale Acqua distillata 64.530 Alcool denaturato. 22.560 Glicerina 6.425 Estratto di semi di Cucurbita 3.000
pepo
Estratto di fiore e di foglie 1.500
di Leontopodium alpinum
Zinco PCA 0.700
Caffeinaa 0.700
Pantenolo 0.375
Canfora 0.200
Idrossido di sodio 0.010
CI 15510 0.0001
DATI SPERIMENTALI
Esempio 2 - Challenge test
Nel presente studio è stata valutata la capacità preservante della composizione per la cura dei capelli secondo l’invenzione, attraverso la contaminazione artificiale del prodotto stesso ed il controllo della vitalità dei ceppi microbici inoculati nel prodotto a tempi prestabiliti tramite il cosiddetto “challenge test”.
Il prodotto sottoposto al challenge test viene suddiviso in aliquote uguali, ognuna delle quali viene contaminata artificialmente con uno o più ceppi microbici, scelti tra batteri Gram positivi, Gram negativi, muffe e lieviti. A tempi prefissati viene valutata la vitalità di ciascun ceppo microbico all’interno del prodotto o della composizione. In base alla presenza o meno di microbi vivi e al loro numero ai diversi tempi di controllo, viene valutato se la capacità preservante è idonea a garantire la protezione della composizione da eventuali contaminazioni microbiche che possono occorrere sia durante la produzione che durante l’utilizzo da parte del consumatore finale.
Procedura
Il prodotto, o composizione, da sottoporre al test viene inizialmente analizzato per escludere la presenza al suo interno di microrganismi vivi (conta microbica totale in piastra). Accertata l’adeguatezza del campione, esso viene suddiviso in quattro aliquote uguali, ognuna delle quali viene contaminata artificialmente con ceppi microbici di batteri Gram positivi, batteri Gram negativi, muffe o lieviti. La vitalità di ciascun ceppo considerato viene misurata al fine di determinare l’entità della contaminazione subita da ogni aliquota di prodotto.
Durante tutta la durata del test le aliquote di campione vengono mantenute a temperatura ambiente e al buio.
Ad intervalli di tempo prestabiliti e pari a: 48 ore, 7 giorni, 14 giorni e 28 giorni dall’inoculazione la vitalità microbica in ogni aliquota di campione viene nuovamente valutata. A questi tempi è quindi possibile conoscere la concentrazione di microbi rimasti vivi all’interno della composizione. Dal confronto di questi numeri con quelli della contaminazione iniziale, viene valutata la riduzione di vitalità ottenuta per ogni ceppo microbico utilizzato.
I risultati delle valutazioni di vitalità sono espressi come concentrazione microbica in valori di Unità formanti colonia per grammo di prodotto (Ufc/g) Un sistema preservante può ritenersi adeguato quando nel corso del challenge test si presentano le seguenti condizioni:
Batteri: riduzione di 3 logaritmi al settimo giorno rispetto all’inoculo iniziale; riduzione fino a <10 Ufc/g di prodotto dal quattordicesimo giorno in poi.
Muffe e Lieviti: riduzione di 1 logaritmo al settimo giorno rispetto all’inoculo iniziale; riduzione di 2 logaritmi al quattordicesimo giorno rispetto all’inoculo iniziale; riduzione fino a <10 Ufc/g di prodotto al ventottesimo giorno.
Se non si verificano queste condizioni la capacità preservante del prodotto o composizione in esame sarà da considerarsi inadeguata.
Risultati
Dopo aver preliminarmente valutato l’adeguatezza della composizione avente la formulazione dell’esempio 1 al challenge test, si è proceduto al test vero e proprio ottenendo i risultati presentati in tabella 1
Tabella 1
Tempo Batteri Gram Batteri Gram - Lieviti Muffe Staphylococcus Pseudomonas Candida A spergillus aureus aeruginosa albicans niger Inoculo
iniziale 3,lxlO<6>7,6xl0<6>8,lxl0<5>2 , 4x10<5>
48 ore <10 <10 <10 1,0x10<2>7 giorni <10 <10 <10 <10 14 giorni <10 <10 <10 <10 28 giorni <10 <10 <10 <10 Risultati espressi in Ufc/g di composizione.
Sulla base dei risultati ottenuti le capacità di preservazione della composizione analizzata sono da considerarsi adeguate avendo soddisfatto tutti i requisiti stabiliti dal protocollo.
Esempio 3 - Test di irritazione su epidermide ricostruita in vitro
Il test utilizza un supporto prodotto in vitro a partire da cellule epiteliali umane in grado di comportarsi in modo simile all'epidermide umana naturale. Su questo supporto viene valutato il potere irritante della composizione avente la formulazione dell'esempio 1, valutando il grado di vitalità che il modello mantiene dopo il contatto con il campione. La scelta di ricorrere a test in vitro per la valutazione dell’irritazione è dettata da motivi pratici, in quanto si preferiscono le valutazioni strumentali a quelle soggettive, e da motivi etici, per la salvaguardia dei volontari utilizzati nelle prove in vivo.
Materiali e metodo
I supporti utilizzati nel test consistono di frammenti di epidermide ricostituita in vitro a partire da cheratinociti umani normali di superficie pari a 0,33 cm<2>, costituiti da un pluristrato cellulare sviluppatosi sopra ad un filtro inerte di policarbonato. Nel pluristrato cellulare è possibile riconoscere strati profondi costituiti da cellule vive, che rispecchiano morfologicamente e funzionalmente gli strati profondi dell’epidermide umana. Queste cellule si dividono attivamente e, spostandosi verso gli strati più superficiali, tendono ad accumulare cheratina, fino a trasformarsi in cellule morte, costituenti principali dello strato corneo. Lo strato corneo che si sviluppa nel modello di epidermide è in grado di svolgere, nei confronti dei prodotti applicati, una funzione barriera molto simile a quella svolta naturalmente dallo strato corneo epidermico. È quindi possibile riprodurre in vitro l’effetto che l’applicazione di tali prodotti potrebbe avere in vivo.
Saggio di proliferazione cellulare mediante MTT L’MTT è un sale di tetrazolio solubile in acqua che, in soluzione, assume una colorazione gialla. Il MTT sciolto viene convertito da enzimi cellulari in un composto di colore blu, chiamato formazano, insolubile in acqua. Solamente le cellule vitali, che possiedono enzimi mitocondriali attivi, sono in grado di trasformare il sale di tetrazolio in formazano. La quantità di formazano formatasi in una coltura cellulare, dopo un tempo di contatto prestabilito, sarà dunque proporzionale alla presenza di cellule vitali nella coltura stessa. Valutando spettrofotometricamente la quantità di formazano formatosi è possibile quindi valutare la vitalità delle cellule presenti nella coltura in esame.
Materiali e metodo
La composizione dell’esempio 1 è stata applicata sulla superficie del frammento di epidermide tramite un pennello e viene quindi a contatto con lo strato corneo ricostituito in vitro. Proprio come lo strato corneo naturale, lo strato corneo ricostituito in vitro media la sua penetrazione fino agli strati epidermici più profondi. Se il prodotto è in grado di superare la barriera costituita dallo strato corneo, può influenzare le cellule vive degli strati epidermici profondi, esercitando la sua azione citotossica.
La composizione analizzata viene applicata sul modello di epidermide in quantità non inferiore a 32 mg/cm<2>. L’esposizione al campione viene mantenuto per 42 minuti, successivamente si procede al lavaggio, fino alla completa eliminazione del campione applicato con soluzione fisiologica a temperatura ambiente. I frammenti di epidermide ricostruita in vitro vengono incubati in condizioni di coltura standard per le successive 42 ore, in modo da permettere la riparazione dei danni cellulari lievi non significativi e il completamento dei danni profondi. Al termine di questo periodo di recupero, viene valutata la vitalità degli strati cellulari basali.
L’eventuale danno agli strati epidermici basali viene valutato, al termine del periodo di riposo, tramite il test del MTT che permette di considerare se la composizione ha non solo danneggiato le cellule degli strati epidermici profondi, ma ne ha causato anche la morte. La valutazione si basa quindi sulla vitalità cellulare dei frammenti trattati con la composizione analizzata rispetto a quella dei frammenti utilizzati come controllo.
Come controllo negativo vengono utilizzati frammenti trattati con soluzione fisiologica e che quindi rappresentano le prestazioni che si sarebbero ottenute in condizioni ottimali dai frammenti di epidermide utilizzati.
Come controllo positivo viene utilizzato il trattamento con soluzione acquosa di SDS al 5%. Le prestazioni dei frammenti di epidermide trattati in questo modo sono da considerare come dovute ad un trattamento irritante dopo breve esposizione.
Ogni trattamento è stato eseguito in doppio, compresi i controlli negativi e positivi, utilizzando contemporaneamente due frammenti di epidermide ricostituita.
Secondo il protocollo per la valutazione del potere irritante dei composti e per la loro etichettatura secondo il criterio di classificazione EU, perché il test possa essere considerato valido la densità ottica media della soluzione estratta al termine del saggio MTT dal campione controllo negativo deve essere almeno 0,7 e la deviazione standard non deve superare il 18%; mentre, la vitalità percentuale, ottenuta confrontando la densità ottica della soluzione estratta al termine del saggio MTT con quella relativa al controllo negativo, deve essere inferiore al 40% e la deviazione standard della vitalità percentuale non deve superare il 18%. Inoltre, il controllo positivo deve risultare irritante per la pelle se valutato in base ai criteri di interpretazione dei risultati del test. In base a tali criteri un campione analizzato viene valutato come irritante per la pelle se la vitalità percentuale ottenuta dal MTT test risulta inferiore o uguale al 50%. Il campione analizzato viene valutato come non irritante per la pelle se la vitalità percentuale ottenuta dal MTT test risulta superiore al 50% [6-9].
Risultati:
Controllo negativo: densità ottica media soluzione = 1,322, deviazione standard = 0,05
Controllo positivo: vitalità percentuale = 1,4% deviazione standard = 0,0 %
Il controllo positivo è risultato effettivamente irritante per il campione di epidermide ricostruita in vitro.
La composizione secondo la formulazione dell’esempio 1 sottoposta al saggio come descritto ha mostrato una vitalità percentuale pari al 96,3% con deviazione standard uguale a 10,1, pertanto non è irritante per la pelle.
Attualmente la richiedente della presente domanda di brevetto stanno conducendo ulteriori studi volti a comprendere il meccanismo chimico-fisico alla base di quanto osservato.
Esempio 4 – Stabilità cosmetica
Il presente saggio è volto a valutare la stabilità della composizione di formulazione secondo l’esempio 1 quando sottoposto a condizioni di stress forzato (a 4°C, 25°C, 40°C) per un periodo di ventotto giorni. Un’aliquota del campione è stata lasciata a temperatura ambiente come riferimento. Durante tale periodo, il controllo dei parametri chimico-fisici e/o delle proprietà organolettiche delle aliquote è stato eseguito settimanalmente ad ogni punto di temperatura in esame.
All’inizio della sperimentazione (T=0) e al termine (T=28) sull’aliquota a 40°C, è stata effettuata anche l’analisi dei metalli Nichel, Cromo e Cobalto mediante assorbimento atomico, dopo digestione del campione tramite mineralizzatore Milestone.
Materiali e metodi
Per lo svolgimento del saggio è stata utilizzata la seguente strumentazione:
pHmetro: ORION SA720
Assorbimento atomico: novAA400 Analitik Jena Mineralizzatore: Milestone Start D
La composizione a temperatura ambiente all’inizio dell’osservazione presenta le seguenti caratteristiche:
stato fisico: liquido
colore : arancione
odore: caratteristico
pH 5,93
Nelle tabelle sottostanti sono riportati gli parametri della composizione valutati i differenti condizioni di stress.
Tabella 2
TEMPERATURA 4 °C ± 2 °C
T=7gg T=14gg T=21gg T=28gg stato fisico immutato immutato immutato immutato colore immutato immutato immutato immutato odore immutato immutato immutato immutato pH 6,26 6,22 6,03 6,16 Tabella 3
TEMPERATURA 25 °C ± 2 °C
T=7gg T=14gg T=21gg T=28gg stato fisico immutato immutato immutato immutato colore immutato immutato immutato immutato odore immutato immutato immutato immutato pH 6,24 6,20 6,09 6,17 Tabella 4
TEMPERATURA 40 °C ± 2 °C
T=7gg T=14gg T=21gg T=28gg stato fisico immutato immutato immutato immutato colore immutato immutato immutato immutato odore immutato immutato immutato immutato pH 5,99 6,15 6,10 6,12 Nichel - - - <0,1 Cromo - - - <0,1 Cobalto - - - <0,1 La composizione è stata sottoposta anche a condizioni di shock termico sperimentale alternando la sua temperatura da 4°C per tre giorni a 40 °C per tre giorni per due volte, ed anche in questo caso la composizione ha mantenuto inalterate le sue caratteristiche.
Per il periodo di osservazione e per le condizioni di prova a cui è stato sottoposto, non presenta alcuna variazione significativa dei parametri chimico-fisici e delle proprietà organolettiche. Pertanto, la composizione è considerata stabile se conservata e mantenuta nelle normali e prevedibili condizioni di stoccaggio.
BIBLIOGRAFIA
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[5] Fischer TW, Hipler UC, Elsner P "Effect of caffeine and testosterone on the proliferation of human hair follicles in vitro". Int. J. Dermatol.
2007; 46:27-35.
[6] OECD (2010): OECD guideline for the testing of chemicals n°439: In vitro skin irritation: Reconstructed Human Epidermis Test Method.
[7] Statement on the scientific validity of in-vitro test for skin irritation testing. European Centre for the Validation of Alternative Methods (ECVAM), 5th November 2008.
[8] Statement on the validity of in-vitro tests for skin irritation. European Centre for the Validation of Alternative Methods (ECVAM), 27th April 2007.
[9] Performance standards for applying human skin human skin models to in vitro skin irritation testing, ECVAM SIVS : final Draft performance standards version 2007-05-25.
Claims (8)
- RIVENDICAZIONI 1) Composizioni per la cura dei capelli comprendenti un’associazione sinergica di caffeina ed estratto di semi di Cucurbita pepo e di estratto di foglie e di fiori di Leontopodium alpinum per uso nel trattamento delle anomalie della cute del cuoio cappelluto e nella caduta dei capelli.
- 2) Composizioni per la cura dei capelli secondo la rivendicazione 1 in cui la quantità di estratto di semi di Cucurbita pepo va da 4,5% a 1,5% del peso totale, l’estratto di foglie e di fiori di Leontopodium alpinum è presente in quantità variabile tra 1 e 2% del peso totale, mentre la quantità di caffeina varia tra 0,5 e 2% in peso totale della composizione.
- 3) Composizioni per la cura dei capelli secondo le rivendicazioni 1 e 2 in cui la quantità di estratto di semi di Cucurbita pepo presente è pari al 3 % del peso totale, l’estratto di foglie e di fiori di Leontopodium alpinum è presente in quantità pari all’1,5%, mentre la quantità di caffeina è pari a 0,7% del peso totale.
- 4) Composizione per la cura dei capelli secondo le rivendicazioni da 1 a 3, atossica e non irritante caratterizzata dal fatto di essere costituita da composti naturali e di essere priva di tensioattivi chimici.
- 5) Composizione per la cura dei capelli secondo le rivendicazione da 1 a 4, caratterizzata dal fatto di comprendere ulteriormente idrossido di sodio, od altri equivalenti noti nel settore, in quantità idonea a mantenere il valore del pH della composizione compreso tra 5,5 e 6,5, preferibilmente tra 5,9 e 6,3 in un intervallo di temperatura tra 4 °C e 40°C.
- 6) Composizione per la cura dei capelli secondo le rivendicazione da 1 a 5, caratterizzata dal fatto di comprendere ulteriormente sale di zinco dell’acido pirrolidincarbossilico, glicerina, pantenolo.
- 7) Composizione per la cura dei capelli secondo le rivendicazioni da 1 e 6, caratterizzata dal fatto di comprendere ulteriormente componenti, agenti umettanti, additivi, eccipienti, profumi ed agenti coloranti ben noti agli esperti del ramo.
- 8) Composizione per la cura dei capelli secondo le rivendicazioni da 1 a 7, caratterizzata dal fatto di avere la seguente formulazione: % in peso totale Acqua distillata 64,530 Alcool denaturato 22,560 Glicerina 6,425 Estratto di semi di Cucurbita 3,000 pepo Estratto di foglie e di fiori 1,500 di Leontopodium alpinum Zinco PCA 0,700 Caffeina 0,700 Pantenolo 0,375 Canfora 0,200 Idrossido di sodio 0,010 CI 15510 0,0001 9) Composizione per la cura dei capelli secondo le rivendicazioni da 1 a 8, caratterizzata dal fatto di essere in forma idonea alla somministrazione topica sulla cute del cuoio capelluto, in particolare in forma shampoo, balsami, tinture per capelli, schiume, gel, creme, cere, maschere, paste strutturati, spray stilizzanti, lozioni e risciacqui.
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|---|---|---|---|---|
| US20090274677A1 (en) * | 2008-05-02 | 2009-11-05 | Elliot James Isaacs | Antioxidant for use in cosmetic, medicated and pharmaceutical preparations |
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2013
- 2013-11-22 IT IT000644A patent/ITRM20130644A1/it unknown
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