JP2000270893A - γ−グルタミルトランスペプチターゼ活性の測定用試薬並びにその測定方法 - Google Patents
γ−グルタミルトランスペプチターゼ活性の測定用試薬並びにその測定方法Info
- Publication number
- JP2000270893A JP2000270893A JP12467199A JP12467199A JP2000270893A JP 2000270893 A JP2000270893 A JP 2000270893A JP 12467199 A JP12467199 A JP 12467199A JP 12467199 A JP12467199 A JP 12467199A JP 2000270893 A JP2000270893 A JP 2000270893A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- reagent
- measuring
- activity
- sample
- oxidase
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 230000000694 effects Effects 0.000 title claims abstract description 91
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 title claims abstract description 80
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 31
- 101710173228 Glutathione hydrolase proenzyme Proteins 0.000 title claims description 12
- 102000006640 gamma-Glutamyltransferase Human genes 0.000 title claims description 11
- 101710107035 Gamma-glutamyltranspeptidase Proteins 0.000 title claims description 10
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 28
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 claims abstract description 26
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 claims abstract description 26
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 claims abstract description 18
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 claims abstract description 18
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims abstract description 18
- 102000016938 Catalase Human genes 0.000 claims abstract description 17
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 claims abstract description 17
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 claims abstract description 17
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 claims abstract description 17
- 125000002642 gamma-glutamyl group Chemical group 0.000 claims abstract description 15
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 claims abstract description 10
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims abstract description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims abstract description 5
- YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N glycylglycine Chemical group [NH3+]CC(=O)NCC([O-])=O YMAWOPBAYDPSLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 9
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 9
- 108010008488 Glycylglycine Proteins 0.000 claims description 5
- 229940043257 glycylglycine Drugs 0.000 claims description 5
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 3
- 101000856500 Bacillus subtilis subsp. natto Glutathione hydrolase proenzyme Proteins 0.000 abstract description 61
- 102000001554 Hemoglobins Human genes 0.000 abstract description 30
- 108010054147 Hemoglobins Proteins 0.000 abstract description 30
- 238000005259 measurement Methods 0.000 abstract description 21
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 abstract description 10
- AHFFWTMLFDZSOF-QMMMGPOBSA-N 53602-84-9 Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)NC1=CC=C([N+]([O-])=O)C(C(O)=O)=C1 AHFFWTMLFDZSOF-QMMMGPOBSA-N 0.000 abstract description 4
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 35
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 3
- JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N Pyridine Chemical compound C1=CC=NC=C1 JUJWROOIHBZHMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 239000000306 component Substances 0.000 description 2
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- WGXUDTHMEITUBO-YFKPBYRVSA-N glutaurine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)NCCS(O)(=O)=O WGXUDTHMEITUBO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- 208000019423 liver disease Diseases 0.000 description 2
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 2
- 239000012264 purified product Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- UMGDCJDMYOKAJW-UHFFFAOYSA-N thiourea Chemical compound NC(N)=S UMGDCJDMYOKAJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000011330 Armoracia rusticana Nutrition 0.000 description 1
- 240000003291 Armoracia rusticana Species 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 108020004206 Gamma-glutamyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Natural products NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012190 activator Substances 0.000 description 1
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 1
- 239000012503 blood component Substances 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000007882 cirrhosis Effects 0.000 description 1
- 208000019425 cirrhosis of liver Diseases 0.000 description 1
- 238000013329 compounding Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002949 hemolytic effect Effects 0.000 description 1
- 150000002460 imidazoles Chemical class 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 238000009533 lab test Methods 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 1
- UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N pyridine Natural products COC1=CC=CN=C1 UMJSCPRVCHMLSP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- -1 that is Substances 0.000 description 1
- 238000006276 transfer reaction Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【課題】測定される血清、血液等の試料について、ヘモ
グロビンの影響を受けずに、γ−ＧＴＰ活性の誤差少な
く正確な測定値を得ることができるγ−ＧＴＰ活性の測
定用試薬および測定方法を提供する。 【解決手段】γ−グルタミル基の受容体基質（ＧｌｙＧ
ｌｙ）を含む第一の試薬と、γ−グルタミル基の供与体
基質（Ｇｌｕ−ＣＡＮＡ、Ｇｌｕ−ｐＮＡ）を含む第二
の試薬よりなり、さらに酸化酵素（ペルオキシダーゼ、
カタラーゼ）または酸化酵素および防腐剤（アジ化ナト
リウム）を含むγ−ＧＴＰ活性測定用試薬。酸化酵素な
どの共存下で試薬と試料との反応で生成する物質の波長
域４００〜４５０ｎｍにおける単位時間当りの吸光度変
化の測定により、試料のγ−ＧＴＰ活性を決定する。
グロビンの影響を受けずに、γ−ＧＴＰ活性の誤差少な
く正確な測定値を得ることができるγ−ＧＴＰ活性の測
定用試薬および測定方法を提供する。 【解決手段】γ−グルタミル基の受容体基質（ＧｌｙＧ
ｌｙ）を含む第一の試薬と、γ−グルタミル基の供与体
基質（Ｇｌｕ−ＣＡＮＡ、Ｇｌｕ−ｐＮＡ）を含む第二
の試薬よりなり、さらに酸化酵素（ペルオキシダーゼ、
カタラーゼ）または酸化酵素および防腐剤（アジ化ナト
リウム）を含むγ−ＧＴＰ活性測定用試薬。酸化酵素な
どの共存下で試薬と試料との反応で生成する物質の波長
域４００〜４５０ｎｍにおける単位時間当りの吸光度変
化の測定により、試料のγ−ＧＴＰ活性を決定する。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、血清等の生体試料
中に存在する酵素γ−グルタミルトランスペプチターゼ
（γ−グルタミルトランスフェラーゼとも称される、以
下これをγ−ＧＴＰと略する。）の活性を測定するため
の試薬、並びに、その試薬を用いるγ−ＧＴＰ活性の測
定方法に関する。より詳しくは、本発明は、酵素活性の
測定値の経時的変化を抑え、試料のγ−ＧＴＰ活性をよ
り正確に測定することができるγ−ＧＴＰ活性測定のた
めの試薬および方法に関する。
中に存在する酵素γ−グルタミルトランスペプチターゼ
（γ−グルタミルトランスフェラーゼとも称される、以
下これをγ−ＧＴＰと略する。）の活性を測定するため
の試薬、並びに、その試薬を用いるγ−ＧＴＰ活性の測
定方法に関する。より詳しくは、本発明は、酵素活性の
測定値の経時的変化を抑え、試料のγ−ＧＴＰ活性をよ
り正確に測定することができるγ−ＧＴＰ活性測定のた
めの試薬および方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】γ−ＧＴＰは、基質（ペプチド等）より
５−Ｌ−グリタミル基を切り取り、アミノ酸に転移する
反応（５−Ｌ−グリタミルアミノ酸の生成）を触媒する
酵素である。この形質膜酵素は、動物の体内にひろく分
布し、γ−グリタミル回路の主役を果たすものと考えら
れている。そして特に、肝硬変等の種々の肝疾患を患う
人にあっては、肝および血清中のγ−ＧＴＰ活性の値が
健常値より上昇することから、γ−ＧＴＰ活性値の測定
は、肝疾患の診断において必須の臨床検査項目となって
いる。一般に臨床検査においてγ−ＧＴＰ活性の値は、
その測定用試薬を用いて決定されている。従来のγ−Ｇ
ＴＰ活性測定用試薬は、γ−グルタミル基の受容体基質
としてグリシルグリシン（ＧｌｙＧｌｙ）を含む一つの
試薬と、γ−グルタミル基の供与体基質としてＬ−γ−
グルタミル−３−カルボキシ−４−ニトロアニリド（Ｇ
ｌｕ−ＣＡＮＡ）もしくはＬ−γ−グルタミル−４−ニ
トロアニリド（Ｇｌｕ−ｐＮＡ）等を含むもう一つの試
薬との組合せよりなる。そして、これら試薬を測定され
るべき血液、血清等の試料に順に添加し、試料中のγ−
ＧＴＰによる酵素反応によって生成する物質の、波長域
４００〜４５０ｎｍにおける単位時間当りの吸光度変化
を測定することにより、試料のγ−ＧＴＰ活性値は算定
されている。
５−Ｌ−グリタミル基を切り取り、アミノ酸に転移する
反応（５−Ｌ−グリタミルアミノ酸の生成）を触媒する
酵素である。この形質膜酵素は、動物の体内にひろく分
布し、γ−グリタミル回路の主役を果たすものと考えら
れている。そして特に、肝硬変等の種々の肝疾患を患う
人にあっては、肝および血清中のγ−ＧＴＰ活性の値が
健常値より上昇することから、γ−ＧＴＰ活性値の測定
は、肝疾患の診断において必須の臨床検査項目となって
いる。一般に臨床検査においてγ−ＧＴＰ活性の値は、
その測定用試薬を用いて決定されている。従来のγ−Ｇ
ＴＰ活性測定用試薬は、γ−グルタミル基の受容体基質
としてグリシルグリシン（ＧｌｙＧｌｙ）を含む一つの
試薬と、γ−グルタミル基の供与体基質としてＬ−γ−
グルタミル−３−カルボキシ−４−ニトロアニリド（Ｇ
ｌｕ−ＣＡＮＡ）もしくはＬ−γ−グルタミル−４−ニ
トロアニリド（Ｇｌｕ−ｐＮＡ）等を含むもう一つの試
薬との組合せよりなる。そして、これら試薬を測定され
るべき血液、血清等の試料に順に添加し、試料中のγ−
ＧＴＰによる酵素反応によって生成する物質の、波長域
４００〜４５０ｎｍにおける単位時間当りの吸光度変化
を測定することにより、試料のγ−ＧＴＰ活性値は算定
されている。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】しかし、かかる従来の
γ−ＧＴＰ活性の測定法においては、測定される試料が
過度の血液成分を含む溶血試料であるとき、測定用試薬
との共存下において試料の波長域４００ｎｍ付近におけ
る吸収ピークが経時的に減少するという兆候が見られ、
この結果、γ−ＧＴＰ活性の測定域であるところの波長
域４００〜４５０ｎｍにおける単位時間当りの吸光度変
化が見かけ上小さなものとなり、よって、試料のγ−Ｇ
ＴＰ活性の測定値には、かなりの負誤差が生じるという
問題があった。これは、溶血試料中のヘモグロビンがγ
−ＧＴＰと測定用試薬との反応を阻害ないしは抑制する
ことによるものと推量されている。γ−ＧＴＰ活性の測
定がなされる実際の試料は、ヒトまたは動物の血液、血
清もしくは血漿など、溶血試料であることが多い。した
がって、上記のγ−ＧＴＰ活性の測定法において誤差の
少ない正確な測定を確立するためには、試料中のヘモグ
ロビンによる影響を取り除くことが是非とも必要とされ
る。
γ−ＧＴＰ活性の測定法においては、測定される試料が
過度の血液成分を含む溶血試料であるとき、測定用試薬
との共存下において試料の波長域４００ｎｍ付近におけ
る吸収ピークが経時的に減少するという兆候が見られ、
この結果、γ−ＧＴＰ活性の測定域であるところの波長
域４００〜４５０ｎｍにおける単位時間当りの吸光度変
化が見かけ上小さなものとなり、よって、試料のγ−Ｇ
ＴＰ活性の測定値には、かなりの負誤差が生じるという
問題があった。これは、溶血試料中のヘモグロビンがγ
−ＧＴＰと測定用試薬との反応を阻害ないしは抑制する
ことによるものと推量されている。γ−ＧＴＰ活性の測
定がなされる実際の試料は、ヒトまたは動物の血液、血
清もしくは血漿など、溶血試料であることが多い。した
がって、上記のγ−ＧＴＰ活性の測定法において誤差の
少ない正確な測定を確立するためには、試料中のヘモグ
ロビンによる影響を取り除くことが是非とも必要とされ
る。
【０００４】従来、γ−ＧＴＰ活性の測定の間における
ヘモグロビンの影響を防止することを目的として、チオ
尿素をγ−ＧＴＰ活性測定用試薬に含有させる方法（特
公平６−１２９９８号）とか、ピリジン類、イミダゾー
ル類またはヒスタミン類をγ−ＧＴＰ活性測定用試薬に
含有させる方法（特公平３−５６４２５号）が提案さ
れ、知られている。しかし、これらの方法は、ヘモグロ
ビンによる影響を十分満足に抑えることができず、その
効果は未だ不十分なものである。また一般に、アジ化ナ
トリウムは防腐剤として酵素活性測定用試薬に添加され
ることがあるが、上記のγ−ＧＴＰ活性測定用試薬にあ
っては、アジ化ナトリウムが配合されると、γ−ＧＴＰ
活性の測定値における負誤差がより増大する傾向にある
ことが、本発明者らの研究により判明されている。
ヘモグロビンの影響を防止することを目的として、チオ
尿素をγ−ＧＴＰ活性測定用試薬に含有させる方法（特
公平６−１２９９８号）とか、ピリジン類、イミダゾー
ル類またはヒスタミン類をγ−ＧＴＰ活性測定用試薬に
含有させる方法（特公平３−５６４２５号）が提案さ
れ、知られている。しかし、これらの方法は、ヘモグロ
ビンによる影響を十分満足に抑えることができず、その
効果は未だ不十分なものである。また一般に、アジ化ナ
トリウムは防腐剤として酵素活性測定用試薬に添加され
ることがあるが、上記のγ−ＧＴＰ活性測定用試薬にあ
っては、アジ化ナトリウムが配合されると、γ−ＧＴＰ
活性の測定値における負誤差がより増大する傾向にある
ことが、本発明者らの研究により判明されている。
【０００５】本発明は、上述した従来の事情を考慮して
なされたものであって、その課題とするところは、測定
される血清等の試料について、その中に含まれるヘモグ
ロビンの影響を受けずに、γ−ＧＴＰ活性の正確な測定
値を得ることができるγ−ＧＴＰ活性測定用試薬を提供
することにある。また、本発明は、試料をγ−ＧＴＰ活
性測定用試薬と反応させ、生成する物質の波長域４００
〜４５０ｎｍにおける単位時間当りの吸光度変化の測定
により、試料のγ−ＧＴＰ活性を決定する方法におい
て、試料のγ−ＧＴＰ活性値を、ヘモグロビンの影響を
受けずに、誤差少なく正確に測定することができるγ−
ＧＴＰ活性の測定方法を提供することにある。本発明の
その他の課題は、特許請求の範囲を含む明細書の記載を
参照することにより、理解される。
なされたものであって、その課題とするところは、測定
される血清等の試料について、その中に含まれるヘモグ
ロビンの影響を受けずに、γ−ＧＴＰ活性の正確な測定
値を得ることができるγ−ＧＴＰ活性測定用試薬を提供
することにある。また、本発明は、試料をγ−ＧＴＰ活
性測定用試薬と反応させ、生成する物質の波長域４００
〜４５０ｎｍにおける単位時間当りの吸光度変化の測定
により、試料のγ−ＧＴＰ活性を決定する方法におい
て、試料のγ−ＧＴＰ活性値を、ヘモグロビンの影響を
受けずに、誤差少なく正確に測定することができるγ−
ＧＴＰ活性の測定方法を提供することにある。本発明の
その他の課題は、特許請求の範囲を含む明細書の記載を
参照することにより、理解される。
【０００６】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記の技
術的課題を解決するべく鋭意研究した結果、適当量の酸
化酵素、例えばペルオキシダーゼまたはカタラーゼを予
めγ−ＧＴＰ活性測定用試薬に、好適にはそのγ−グル
タミル受容体基質のグリシルグリシン試薬に含有させて
おくと、その測定用試薬を用いて溶血試料のγ−ＧＴＰ
活性を測定する場合に、測定用試薬との共存下において
溶血試料の波長域４００ｎｍ付近における吸収ピークの
経時的な減少が実質見られず、従って、γ−ＧＴＰによ
る転移反応にて生成する物質の波長域４００〜４５０ｎ
ｍにおける単位時間当りの吸光度変化を測定して酵素活
性を決定する方法において、試料のγ−ＧＴＰ活性値
を、試料中のヘモグロビンの影響を受けずに、正確に測
定することができるという事実を見い出した。さらに、
本発明者らは、酸化酵素に加え、防腐剤つまりアジ化ナ
トリウムを予めγ−ＧＴＰ活性測定用試薬に含有させて
おくと、その試薬を用いた上記のγ−ＧＴＰ活性の測定
法において、試料がたとえヘモグロビン濃度が高い溶血
試料であっても、試料のγ−ＧＴＰ活性値をさらに一層
正確に測定することができることを見い出し、本発明を
完成した。
術的課題を解決するべく鋭意研究した結果、適当量の酸
化酵素、例えばペルオキシダーゼまたはカタラーゼを予
めγ−ＧＴＰ活性測定用試薬に、好適にはそのγ−グル
タミル受容体基質のグリシルグリシン試薬に含有させて
おくと、その測定用試薬を用いて溶血試料のγ−ＧＴＰ
活性を測定する場合に、測定用試薬との共存下において
溶血試料の波長域４００ｎｍ付近における吸収ピークの
経時的な減少が実質見られず、従って、γ−ＧＴＰによ
る転移反応にて生成する物質の波長域４００〜４５０ｎ
ｍにおける単位時間当りの吸光度変化を測定して酵素活
性を決定する方法において、試料のγ−ＧＴＰ活性値
を、試料中のヘモグロビンの影響を受けずに、正確に測
定することができるという事実を見い出した。さらに、
本発明者らは、酸化酵素に加え、防腐剤つまりアジ化ナ
トリウムを予めγ−ＧＴＰ活性測定用試薬に含有させて
おくと、その試薬を用いた上記のγ−ＧＴＰ活性の測定
法において、試料がたとえヘモグロビン濃度が高い溶血
試料であっても、試料のγ−ＧＴＰ活性値をさらに一層
正確に測定することができることを見い出し、本発明を
完成した。
【０００７】したがって、本発明は、γ−グルタミル基
の受容体基質を含む第一の試薬と、γ−グルタミル基の
供与体基質を含む第二の試薬よりなるγ−ＧＴＰ活性測
定用試薬において、酸化酵素または酸化酵素および防腐
剤を第一の試薬、第二の試薬もしくはこれら両試薬に配
合してなるか、または、酸化酵素または酸化酵素および
防腐剤を含む第三の試薬を備えてなることを特徴とす
る、γ−ＧＴＰ活性測定用試薬に関する。より具体的に
は、本発明のγ−ＧＴＰ活性測定用試薬は、１）γ−グ
ルタミル基の受容体基質としてグリシルグリシン（Ｇｌ
ｙＧｌｙ）を含む第一の試薬と、γ−グルタミル基の供
与体基質としてＬ−γ−グルタミル−３−カルボキシ−
４−ニトロアニリド（Ｇｌｕ−ＣＡＮＡ）、Ｌ−γ−グ
ルタミル−４−ニトロアニリド（Ｇｌｕ−ｐＮＡ）もし
くはこれらの塩を含む第二の試薬よりなり、さらに、ペ
ルオキシダーゼもしくはカタラーゼのような酸化酵素、
または、そのような酸化酵素および防腐剤（アジ化ナト
リウム）を第一の試薬、第二の試薬もしくはこれら両試
薬に配合してなるか、または、２）上記の第一の試薬お
よび第二の試薬と、ペルオキシダーゼもしくはカタラー
ゼのような酸化酵素または酸化酵素および防腐剤（アジ
化ナトリウム）を含む第三の試薬よりなる（つまり、三
種の試薬キット）。また、本発明は、上記の試薬を用い
たγ−ＧＴＰ活性の測定方法、つまり試料をγ−ＧＴＰ
活性測定用試薬と、ペルオキシダーゼもしくはカタラー
ゼのような酸化酵素または酸化酵素および防腐剤の共存
下で反応させ、そして生成する物質の波長域４００〜４
５０ｎｍにおける単位時間当りの吸光度変化の測定によ
り、試料のγ−ＧＴＰ活性を決定する方法にも関する。
の受容体基質を含む第一の試薬と、γ−グルタミル基の
供与体基質を含む第二の試薬よりなるγ−ＧＴＰ活性測
定用試薬において、酸化酵素または酸化酵素および防腐
剤を第一の試薬、第二の試薬もしくはこれら両試薬に配
合してなるか、または、酸化酵素または酸化酵素および
防腐剤を含む第三の試薬を備えてなることを特徴とす
る、γ−ＧＴＰ活性測定用試薬に関する。より具体的に
は、本発明のγ−ＧＴＰ活性測定用試薬は、１）γ−グ
ルタミル基の受容体基質としてグリシルグリシン（Ｇｌ
ｙＧｌｙ）を含む第一の試薬と、γ−グルタミル基の供
与体基質としてＬ−γ−グルタミル−３−カルボキシ−
４−ニトロアニリド（Ｇｌｕ−ＣＡＮＡ）、Ｌ−γ−グ
ルタミル−４−ニトロアニリド（Ｇｌｕ−ｐＮＡ）もし
くはこれらの塩を含む第二の試薬よりなり、さらに、ペ
ルオキシダーゼもしくはカタラーゼのような酸化酵素、
または、そのような酸化酵素および防腐剤（アジ化ナト
リウム）を第一の試薬、第二の試薬もしくはこれら両試
薬に配合してなるか、または、２）上記の第一の試薬お
よび第二の試薬と、ペルオキシダーゼもしくはカタラー
ゼのような酸化酵素または酸化酵素および防腐剤（アジ
化ナトリウム）を含む第三の試薬よりなる（つまり、三
種の試薬キット）。また、本発明は、上記の試薬を用い
たγ−ＧＴＰ活性の測定方法、つまり試料をγ−ＧＴＰ
活性測定用試薬と、ペルオキシダーゼもしくはカタラー
ゼのような酸化酵素または酸化酵素および防腐剤の共存
下で反応させ、そして生成する物質の波長域４００〜４
５０ｎｍにおける単位時間当りの吸光度変化の測定によ
り、試料のγ−ＧＴＰ活性を決定する方法にも関する。
【０００８】
【発明の実施の形態】本発明に従う測定用試薬および測
定方法は、ヒトまたは動物の血液、血清もしくは血漿な
どの生体内由来の試料を検体として、そのγ−ＧＴＰ活
性を測定する場合に有効に適用することができる。特
に、本発明は、ヘモグロビンの影響を受けやすい試料、
即ち血清および血漿を対象とするγ−ＧＴＰ活性の測定
において、優れた効果を発揮する。本発明に従うγ−Ｇ
ＴＰ活性測定用試薬は、酸化酵素および防腐剤の添加を
除いて、従来の調製技術、特に第一および第二の各試薬
における配合技術を同様に適用することができる。すな
わち、γ−グルタミル基の受容体基質としてＧｌｙＧｌ
ｙを含む第一の試薬も、またγ−グルタミル基の供与体
基質としてＧｌｕ−ＣＡＮＡ、Ｇｌｕ−ｐＮＡもしくは
これらの塩を含む第二の試薬も、酸化酵素および防腐剤
以外のその他の成分について、従来と同様な配合組成で
よく、また慣用の成分、例えば緩衝液、安定剤、賦活
剤、防腐剤などを同時に添加することも可能である。従
って、これら試薬は、例えば日本臨床化学会勧告法に従
う配合組成にて調製することができる。本発明に使用さ
れる酸化酵素としては、ペルオキシダーゼ、カタラーゼ
もしくはこれらの組合せが好適である。ペルオキシダー
ゼとしては、例えば西洋ワサビより得られた精製品が使
用され、またカタラーゼとしては、例えば微生物もしく
はウシ臓器より得られた精製品が使用される。ペルオキ
シダーゼは、試料中のヘモグロビン濃度にも依るが、通
常、１〜１０Ｕ／ｍＬの範囲で使用され、その好ましい
使用量は、２．５〜５．０Ｕ／ｍＬである。また、カタ
ラーゼは、同じく試料中のヘモグロビン濃度にも依る
が、通常、１０００〜１００００Ｕ／ｍＬの範囲で使用
され、その好ましい使用量は、２０００〜６０００Ｕ／
ｍＬである。また、本発明に従うγ−ＧＴＰ活性の測定
方法は、その測定用試薬に酸化酵素または酸化酵素およ
び防腐剤が予め添加されている点を除いて、従来より慣
用されているγ−ＧＴＰ活性の測定技術および手順を同
様に適用することができる。従って、例えば従来利用さ
れている自動分析器を用いて、試料のγ−ＧＴＰ活性を
自動測定することも、本発明の範囲に包含される。
定方法は、ヒトまたは動物の血液、血清もしくは血漿な
どの生体内由来の試料を検体として、そのγ−ＧＴＰ活
性を測定する場合に有効に適用することができる。特
に、本発明は、ヘモグロビンの影響を受けやすい試料、
即ち血清および血漿を対象とするγ−ＧＴＰ活性の測定
において、優れた効果を発揮する。本発明に従うγ−Ｇ
ＴＰ活性測定用試薬は、酸化酵素および防腐剤の添加を
除いて、従来の調製技術、特に第一および第二の各試薬
における配合技術を同様に適用することができる。すな
わち、γ−グルタミル基の受容体基質としてＧｌｙＧｌ
ｙを含む第一の試薬も、またγ−グルタミル基の供与体
基質としてＧｌｕ−ＣＡＮＡ、Ｇｌｕ−ｐＮＡもしくは
これらの塩を含む第二の試薬も、酸化酵素および防腐剤
以外のその他の成分について、従来と同様な配合組成で
よく、また慣用の成分、例えば緩衝液、安定剤、賦活
剤、防腐剤などを同時に添加することも可能である。従
って、これら試薬は、例えば日本臨床化学会勧告法に従
う配合組成にて調製することができる。本発明に使用さ
れる酸化酵素としては、ペルオキシダーゼ、カタラーゼ
もしくはこれらの組合せが好適である。ペルオキシダー
ゼとしては、例えば西洋ワサビより得られた精製品が使
用され、またカタラーゼとしては、例えば微生物もしく
はウシ臓器より得られた精製品が使用される。ペルオキ
シダーゼは、試料中のヘモグロビン濃度にも依るが、通
常、１〜１０Ｕ／ｍＬの範囲で使用され、その好ましい
使用量は、２．５〜５．０Ｕ／ｍＬである。また、カタ
ラーゼは、同じく試料中のヘモグロビン濃度にも依る
が、通常、１０００〜１００００Ｕ／ｍＬの範囲で使用
され、その好ましい使用量は、２０００〜６０００Ｕ／
ｍＬである。また、本発明に従うγ−ＧＴＰ活性の測定
方法は、その測定用試薬に酸化酵素または酸化酵素およ
び防腐剤が予め添加されている点を除いて、従来より慣
用されているγ−ＧＴＰ活性の測定技術および手順を同
様に適用することができる。従って、例えば従来利用さ
れている自動分析器を用いて、試料のγ−ＧＴＰ活性を
自動測定することも、本発明の範囲に包含される。
【０００９】
【実施例】以下、本発明の最良の実施形態と思われる実
施例を説明することにより、本発明をより明確なものに
する。
施例を説明することにより、本発明をより明確なものに
する。
【００１０】（試料）管理血清をベースとし、そして、
これに、精製水によって適当な濃度に調製された溶血ヘ
モグロビン（Ｈｂ）溶液を９：１容の割合で添加するこ
とにより、ヘモグロビン（Ｈｂ）濃度０、１００、２０
０、３００、４００および５００ｍｇ／ｄＬよりなる６
種類の試料を調製した。これら６種類の同じ試料をいず
れの例においても使用した。
これに、精製水によって適当な濃度に調製された溶血ヘ
モグロビン（Ｈｂ）溶液を９：１容の割合で添加するこ
とにより、ヘモグロビン（Ｈｂ）濃度０、１００、２０
０、３００、４００および５００ｍｇ／ｄＬよりなる６
種類の試料を調製した。これら６種類の同じ試料をいず
れの例においても使用した。
【００１１】（γ−ＧＴＰ活性の測定手順）次の各例に
おいて、それぞれ、γ−グルタミル基の受容体基質Ｇｌ
ｙＧｌｙを含む試薬１と、γ−グルタミル基の供与体基
質Ｇｌｕ−ＣＡＮＡを含む試薬２とを準備した。試薬１
には、酸化酵素としてペルオキシダーゼ（例１、２）も
しくはカタラーゼ（例３、４）が添加され、または、酸
化酵素に加え、アジ化ナトリウムが添加されている（例
２、４）。いずれの例においても、比較のため、酸化酵
素および防腐剤が添加されていない点を除いて、試薬１
と同様組成の試薬１ａを準備した。各試料のγ−ＧＴＰ
活性は、日立７１７０型自動分析装置（日立製作所株式
会社製）を使用し、次の手順で操作することにより、測
定した。各例において、まず７μＬの試料に、９０μＬ
の試薬１（または試薬１ａ）を添加し、この混合物を３
７℃にて５分間反応させ、続いて、２７０μＬの試薬２
を添加し、この混合物を３７℃にて反応させる。反応開
始より１分後から４分後までにわたって反応混合物の４
０５ｎｍ（主波長）および５０５ｎｍ（副波長）におけ
る吸光度を測定する。そして、測定値より１分間当たり
の吸光度変化を求め、よって予め得られたＫファクター
に基づいて各試料のγ−ＧＴＰ比活性を算出した。
おいて、それぞれ、γ−グルタミル基の受容体基質Ｇｌ
ｙＧｌｙを含む試薬１と、γ−グルタミル基の供与体基
質Ｇｌｕ−ＣＡＮＡを含む試薬２とを準備した。試薬１
には、酸化酵素としてペルオキシダーゼ（例１、２）も
しくはカタラーゼ（例３、４）が添加され、または、酸
化酵素に加え、アジ化ナトリウムが添加されている（例
２、４）。いずれの例においても、比較のため、酸化酵
素および防腐剤が添加されていない点を除いて、試薬１
と同様組成の試薬１ａを準備した。各試料のγ−ＧＴＰ
活性は、日立７１７０型自動分析装置（日立製作所株式
会社製）を使用し、次の手順で操作することにより、測
定した。各例において、まず７μＬの試料に、９０μＬ
の試薬１（または試薬１ａ）を添加し、この混合物を３
７℃にて５分間反応させ、続いて、２７０μＬの試薬２
を添加し、この混合物を３７℃にて反応させる。反応開
始より１分後から４分後までにわたって反応混合物の４
０５ｎｍ（主波長）および５０５ｎｍ（副波長）におけ
る吸光度を測定する。そして、測定値より１分間当たり
の吸光度変化を求め、よって予め得られたＫファクター
に基づいて各試料のγ−ＧＴＰ比活性を算出した。
【００１２】例１：ペルオキシダーゼ（ＰＯＤ）による
ヘモグロビンの影響回避 表１よりわかるように、ＰＯＤが添加されたγ−ＧＴＰ
活性測定用試薬は、ＰＯＤが添加されていないγ−ＧＴ
Ｐ活性測定用試薬とは異なり、ヘモグロビン（Ｈｂ）が
含まれていない試料だけでなく、それが高濃度で存在す
る試料にあっても、ヘモグロビン（Ｈｂ）の影響無く、
γ−ＧＴＰ活性を正確に測定することができる。
ヘモグロビンの影響回避 表１よりわかるように、ＰＯＤが添加されたγ−ＧＴＰ
活性測定用試薬は、ＰＯＤが添加されていないγ−ＧＴ
Ｐ活性測定用試薬とは異なり、ヘモグロビン（Ｈｂ）が
含まれていない試料だけでなく、それが高濃度で存在す
る試料にあっても、ヘモグロビン（Ｈｂ）の影響無く、
γ−ＧＴＰ活性を正確に測定することができる。
【００１３】例２：ペルオキシダーゼ（ＰＯＤ）および
アジ化ナトリウムによるヘモグロビンの影響回避 表１と表２の対比より、ＰＯＤ非添加のγ−ＧＴＰ活性
測定用試薬において、アジ化ナトリウムを共存させる
と、γ−ＧＴＰ活性値に対するヘモグロビン（Ｈｂ）の
影響がかなり増大することがわかる。それにもかかわら
ず、まったく意外なことに、アジ化ナトリウムとともに
ＰＯＤが添加されたγ−ＧＴＰ活性測定用試薬にあって
は、ヘモグロビン（Ｈｂ）の影響が何ら無くなり、ヘモ
グロビン（Ｈｂ）を高濃度で含む試料であっても、γ−
ＧＴＰ活性の正確な測定が可能になることがわかる。
アジ化ナトリウムによるヘモグロビンの影響回避 表１と表２の対比より、ＰＯＤ非添加のγ−ＧＴＰ活性
測定用試薬において、アジ化ナトリウムを共存させる
と、γ−ＧＴＰ活性値に対するヘモグロビン（Ｈｂ）の
影響がかなり増大することがわかる。それにもかかわら
ず、まったく意外なことに、アジ化ナトリウムとともに
ＰＯＤが添加されたγ−ＧＴＰ活性測定用試薬にあって
は、ヘモグロビン（Ｈｂ）の影響が何ら無くなり、ヘモ
グロビン（Ｈｂ）を高濃度で含む試料であっても、γ−
ＧＴＰ活性の正確な測定が可能になることがわかる。
【００１４】例３：カタラーゼ（ＣＡＴ）によるヘモグ
ロビンの影響回避 表３よりわかるように、ＣＡＴが添加されたγ−ＧＴＰ
活性測定用試薬は、ＣＡＴが添加されていないγ−ＧＴ
Ｐ活性測定用試薬とは異なり、ヘモグロビン（Ｈｂ）が
含まれていない試料だけでなく、それが高濃度で存在す
る試料にあっても、ヘモグロビン（Ｈｂ）の影響無く、
γ−ＧＴＰ活性を正確に測定することができる。
ロビンの影響回避 表３よりわかるように、ＣＡＴが添加されたγ−ＧＴＰ
活性測定用試薬は、ＣＡＴが添加されていないγ−ＧＴ
Ｐ活性測定用試薬とは異なり、ヘモグロビン（Ｈｂ）が
含まれていない試料だけでなく、それが高濃度で存在す
る試料にあっても、ヘモグロビン（Ｈｂ）の影響無く、
γ−ＧＴＰ活性を正確に測定することができる。
【００１５】例４：カタラーゼー（ＣＡＴ）およびアジ
化ナトリウムによるヘモグロビンの影響回避 表３と表４の対比より、ＣＡＴ非添加のγ−ＧＴＰ活性
測定用試薬において、アジ化ナトリウムを共存させる
と、γ−ＧＴＰ活性値に対するヘモグロビン（Ｈｂ）の
影響がかなり増大することがわかる。それにもかかわら
ず、まったく意外なことに、アジ化ナトリウムとともに
ＣＡＴが添加されたγ−ＧＴＰ活性測定用試薬にあって
は、ヘモグロビン（Ｈｂ）の影響が殆ど無くなり、ヘモ
グロビン（Ｈｂ）を高濃度で含む試料であっても、γ−
ＧＴＰ活性の正確な測定が可能になることがわかる。
化ナトリウムによるヘモグロビンの影響回避 表３と表４の対比より、ＣＡＴ非添加のγ−ＧＴＰ活性
測定用試薬において、アジ化ナトリウムを共存させる
と、γ−ＧＴＰ活性値に対するヘモグロビン（Ｈｂ）の
影響がかなり増大することがわかる。それにもかかわら
ず、まったく意外なことに、アジ化ナトリウムとともに
ＣＡＴが添加されたγ−ＧＴＰ活性測定用試薬にあって
は、ヘモグロビン（Ｈｂ）の影響が殆ど無くなり、ヘモ
グロビン（Ｈｂ）を高濃度で含む試料であっても、γ−
ＧＴＰ活性の正確な測定が可能になることがわかる。
【００１６】
【発明の効果】以上説明したように、本発明によれば、
つまり本発明のγ−ＧＴＰ活性測定用試薬を用いること
により、測定される血清等の試料について、その中に含
まれるヘモグロビンの影響を受けずに、γ−ＧＴＰ活性
の正確な測定値を得ることができるという効果が得られ
る。また、別の側面において、本発明の測定方法によれ
ば、即ち試料を本発明のγ−ＧＴＰ活性測定用試薬と反
応させ、生成する物質の波長域４００〜４５０ｎｍにお
ける単位時間当りの吸光度変化の測定によりγ−ＧＴＰ
活性を決定する方法において、試料のγ−ＧＴＰ活性値
を、ヘモグロビンの影響を受けずに、誤差少なく正確に
測定することができるという効果が得られる。したがっ
て、本発明に従う測定用試薬および測定方法は、ヒトや
動物の臨床検査において肝疾患の正確な診断に寄与する
ことができるという利益を有するものである。
つまり本発明のγ−ＧＴＰ活性測定用試薬を用いること
により、測定される血清等の試料について、その中に含
まれるヘモグロビンの影響を受けずに、γ−ＧＴＰ活性
の正確な測定値を得ることができるという効果が得られ
る。また、別の側面において、本発明の測定方法によれ
ば、即ち試料を本発明のγ−ＧＴＰ活性測定用試薬と反
応させ、生成する物質の波長域４００〜４５０ｎｍにお
ける単位時間当りの吸光度変化の測定によりγ−ＧＴＰ
活性を決定する方法において、試料のγ−ＧＴＰ活性値
を、ヘモグロビンの影響を受けずに、誤差少なく正確に
測定することができるという効果が得られる。したがっ
て、本発明に従う測定用試薬および測定方法は、ヒトや
動物の臨床検査において肝疾患の正確な診断に寄与する
ことができるという利益を有するものである。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 合田 保 茨城県笠間市稲田字弥六内３−５ 株式会 社カイノス笠間研究所内 Ｆターム(参考） 4B063 QA01 QA19 QQ03 QQ26 QR02 QR41 QR48 QR51 QR57 QS20 QX01
Claims (5)
- 【請求項１】 γ−グルタミル基の受容体基質を含む第
一の試薬と、γ−グルタミル基の供与体基質を含む第二
の試薬よりなるγ−グルタミルトランスペプチターゼ活
性測定用試薬において、酸化酵素または酸化酵素および
防腐剤を前記第一の試薬、前記第二の試薬またはこれら
両試薬に配合してなるか、または、酸化酵素または酸化
酵素および防腐剤を含む第三の試薬を備えてなることを
特徴とする、γ−グルタミルトランスペプチターゼ活性
測定用試薬。 - 【請求項２】前記受容体基質はグリシルグリシンであ
り、また前記供与体基質はＬ−γ−グルタミル−３−カ
ルボキシ−４−ニトロアニリド、Ｌ−γ−グルタミル−
４−ニトロアニリドまたはこれらの塩であるところの請
求項１記載のγ−グルタミルトランスペプチターゼ活性
測定用試薬。 - 【請求項３】前記酸化酵素は、ペルオキシダーゼ、カタ
ラーゼまたはこれらの組合せであることを特徴とする、
請求項１または２記載のγ−グルタミルトランスペプチ
ターゼ活性測定用試薬。 - 【請求項４】前記防腐剤は、アジ化ナトリウムであるこ
とを特徴とする、請求項１または２記載のγ−グルタミ
ルトランスペプチターゼ活性測定用試薬。 - 【請求項５】試料をγ−グルタミルトランスペプチター
ゼ活性測定用試薬と反応させ、生成する物質の波長域４
００〜４５０ｎｍにおける単位時間当りの吸光度変化の
測定により、試料のγ−グルタミルトランスペプチター
ゼ活性を決定する方法において、試料と前記試薬との反
応を酸化酵素または酸化酵素および防腐剤の共存下で行
なうことを特徴とする、γ−グルタミルトランスペプチ
ターゼ活性の測定方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP12467199A JP2000270893A (ja) | 1999-03-27 | 1999-03-27 | γ−グルタミルトランスペプチターゼ活性の測定用試薬並びにその測定方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP12467199A JP2000270893A (ja) | 1999-03-27 | 1999-03-27 | γ−グルタミルトランスペプチターゼ活性の測定用試薬並びにその測定方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2000270893A true JP2000270893A (ja) | 2000-10-03 |
Family
ID=14891189
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP12467199A Pending JP2000270893A (ja) | 1999-03-27 | 1999-03-27 | γ−グルタミルトランスペプチターゼ活性の測定用試薬並びにその測定方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2000270893A (ja) |
-
1999
- 1999-03-27 JP JP12467199A patent/JP2000270893A/ja active Pending
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Vanderlinde | Measurement of total lactate dehydrogenase activity | |
| US7815788B2 (en) | Creatinine sensor calibration | |
| IE44183B1 (en) | Method and reagent for determining the activity of creatinekinase-mb | |
| EP0114381B1 (en) | Reagent for measuring direct bilirubin by enzymatic method and method for measurement thereof | |
| Husain et al. | [44] Reversible resolution of flavoproteins into apoproteins and free flavins | |
| EP0426100B1 (en) | Stabilized enzyme compositions | |
| CN107870170A (zh) | 一种酶化学发光法测定糖化血清白蛋白的试剂盒 | |
| US4116774A (en) | Method for the determination of enzyme activities | |
| US4339533A (en) | Stabilization of creatine kinase (CK) and its application as a reference standard | |
| JPH01108997A (ja) | 血液又は血液から導出した試料中の血清のフルクトスアミン含量を特異的に測定する方法及び試薬、及び非特異的還元作用を有するか、又は／及び溷濁を惹起する試料成分を除去する方法 | |
| JPH07155196A (ja) | 生体成分の測定法 | |
| JP2000270893A (ja) | γ−グルタミルトランスペプチターゼ活性の測定用試薬並びにその測定方法 | |
| JP4130724B2 (ja) | キレート物質を含む測定試薬 | |
| JP2994831B2 (ja) | コレステロールの定量法および定量用試薬 | |
| JP2909316B2 (ja) | 酵素含有組成物及び酵素活性の安定化方法 | |
| JP3674450B2 (ja) | Ｇｐｔ測定用試薬 | |
| US5834227A (en) | Kit for assaying creatine kinase | |
| EP0721986A2 (en) | Creatine kinase reagent | |
| JP4544598B2 (ja) | 液状試薬および保存方法 | |
| Kanemitsu et al. | Characterization of two types of mitochondrial creatine kinase isolated from normal human cardiac muscle and brain tissue | |
| JP3448864B2 (ja) | 酵素活性測定用試薬 | |
| JP2805805B2 (ja) | スーパーオキサイドジスムターゼの測定法及び測定用試薬 | |
| JP3161316B2 (ja) | クレアチンキナーゼ活性測定用液状試薬 | |
| JP3823461B2 (ja) | γ−グルタミルトランスペプチダーゼ活性測定用試薬 | |
| JPH0984598A (ja) | 酵素活性を測定する方法及び試薬 |