JP2000290197A - 多機能プロテアーゼ阻害剤を有効成分とする組成物 - Google Patents

多機能プロテアーゼ阻害剤を有効成分とする組成物

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Abstract

(57)【要約】 【課題】 多機能プロテアーゼ阻害剤の特定の用途の提
供。 【解決手段】 多機能プロテアーゼ阻害剤を有効成分と
するＣｕ／Ｚｎスーパーオキシドジスムターゼ−１酵素
の分解または酵素活性の低減を抑制するための組成物。

Description

【発明の詳細な説明】
【０００１】
【発明の属する技術分野】この発明は多機能プロテアー
ゼ（ＭＣＰ）阻害剤を有効成分とする組成物に関する。
【０００２】
【従来の技術】真核生物細胞は細胞性タンパク質を常に
分解しかつ置き換えている。これは、細胞が異常な形態
を有するタンパク質およびペプチドを選択的かつ迅速に
除去し、調節ペプチドのレベルを調整することにより代
謝経路にわたって制御を発揮し、そして飢餓におけるよ
うな必要な場合にアミノ酸をエネルギーのために供給す
ることを可能にする。ゴールドベルグ(Goldberg, A.L.)
とセント・ジョン(St. John, A.C.)、Annu. Rev. Bioch
em. 45:747-803 (1976)を参照。哺乳類の細胞メカニズ
ムはタンパク質分解の複合的経路を見込んでいる。これ
らの経路のいくつかはアデノシン三リン酸（「ＡＴ
Ｐ」）の形態でのエネルギー投入を必要とするようであ
る。ゴールドベルグとセント・ジョン、上記を参照。
【０００３】多機能プロテアーゼ（ＭＣＰ、一般に「マ
ルチキャタリティックプロテイナーゼ」、「プロテアソ
ーム」、「マルチキャタリティックプロテイナーゼ複合
体」、「マルチキャタリティックエンドペプチダーゼ複
合体」、「20Ｓプロテアソーム」および「インジェンシ
ン」ともまた称される）は高分子量（700kD）の真核細
胞の非リソゾーム性プロテイナーゼ複合体であり、タン
パク質からペプチドおよびアミノ酸への分解の少なくと
も２種の細胞性経路で役割を演じる。オルロウスキ(Orl
owski, M.)、バイオケミストリー(Biochemistry) 29(4
5) 10289-10297(1990)を参照。当該複合体は少なくとも
３種の異なるタイプの加水分解活性を有する。すなわ
ち、（１）ペプチド結合が塩基性アミノ酸のカルボキシ
ル側で切断されるトリプシン様活性；（２）ペプチド結
合が疎水性アミノ酸のカルボキシル側で切断されるキモ
トリプシン様活性；および（３）ペプチド結合がグルタ
ミン酸のカルボキシル側で切断される活性。リヴェ(Riv
ett, A.J.)、ジャーナル オブ バイオロジカル ケミ
ストリー(J. Biol. Chem.) 264:21 12215-12219 (1989)
およびオルロウスキ、上記を参照。
【０００４】ＭＣＰを必要とするタンパク質加水分解の
１個の経路はまたポリペプチド「ユビキチン」も必要と
する。ヘルシュコ(Hershko, A.)とクレチャノフ(Crecha
novh, A.)、Annu. Rev. Biochem. 51:335-364 (1982)。
ＭＣＰ、ＡＴＰおよびユビキチンを必要とするこの経路
は高度に異常なタンパク質、寿命の短いある正常なタン
パク質および増殖する線維芽細胞および成熟する網状赤
血球中のタンパク質の大部分の分解を司るようである。
ドリスコール(Driscoll, J.)とゴールドベルグ(Goldber
g, A.L.)、プロシーディングス オブ ナショナル ア
カデミー オブサイエンス ＵＳＡ(Proc. Natl. Acad.
Sci. U.S.A.) 86:787-791 (1989)を参照。
【０００５】この経路により分解されることになるタン
パク質は、ＡＴＰ依存性の様式でそれらのリシンのアミ
ノ基を介してユビキチンに共有結合される。ユビキチン
に結合されたタンパク質はその後26Ｓプロテアソームに
よるＡＴＰ依存性プロテアーゼ複合体により小さなペプ
チドに分解される。26ＳプロテアソームはＭＣＰをその
タンパク質分解中心として含有する。ゴールドベルグ(G
oldberg, A.L.)とロック(Rock, K.L.)、ネイチャー(Nat
ure) 357:375-379 (1992)。
【０００６】ＭＣＰおよびＡＴＰを必要とするがしかし
ユビキチンを必要としないタンパク質分解の第二の経路
もまた記述されている。ドリスコールとゴールドベル
グ、上記を参照。この過程では、ＭＣＰはＡＴＰ依存性
の様式でタンパク質を加水分解する。ゴールドベルグと
ロック、上記を参照。この過程は骨格筋で観察されてい
る。ドリスコールとゴールドベルグ、上記を参照。しか
しながら、筋肉では、ＭＣＰは他のプロテアーゼ、マル
チパインと相乗作用的に機能することが示唆されてお
り、かように筋肉タンパク質の促進された分解をもたら
す。ゴールドベルグとロック、上記を参照。
【０００７】ＭＣＰは、その活性部位の求核分子がＮ末
端のスレオニン残基のヒドロキシル基であるタンパク質
分解メカニズムにより機能することが報告されている。
かように、ＭＣＰはスレオニンプロテアーゼの最初に知
られた例である。ゼームラー(Seemuller)ら、サイエン
ス(Science) (1995) 268 579-582；ゴールドベルグ(Gol
dberg, A.L.)、サイエンス(Science) (1995) 268 522-5
23を参照。
【０００８】細胞性のタンパク質の合成および分解の経
路の相対活性がどのタンパク質が蓄積されるかもしくは
失われるかを決定する。タンパク質の量の異常損失は、
筋ジストロフィー、心性悪液質、気腫、らい、栄養失
調、骨軟化症、小児急性白血病および癌性悪液質のよう
ないくつかの疾患状態と関連する。筋肉量の損失はまた
老化、長期入院もしくは長期間の病床での療養で、およ
び慢性腰痛でも観察される。
【０００９】脱神経もしくは使用停止で、骨格筋は、大
きさ、タンパク質含量および収縮力の大きな低下につな
がる急速な萎縮を蒙る。この萎縮はヒトでの多くの神経
筋疾患の重要な成分である。タンパク質分解の増強は脱
神経萎縮での筋消耗の主要原因として関連している。フ
ロノ(Furono, K.)ら、ジャーナル オブ バイオケミス
トリー(J. Biochem.) 265/15:8550-8557 (1990)。筋肉
でのタンパク質加水分解に関連する特定の過程（ひとつ
もしくは複数）は同定されていないが、証拠は筋肉タン
パク質の促進された分解でのＭＣＰの関与に結びつけて
入手し得る。例えば、フロノ、上記および公開されたＰ
ＣＴ出願のWO 92／20804号（公開日：1992年11月26
日）を参照。
【００１０】ＭＣＰ活性はいくつかの疾患状態に関連し
ている。例えば、ヒト白血球細胞株でのＭＣＰの異常な
高発現が報告されている。クマトリ(Kumatori, A.)ら、
プロシーディングス オブ ナショナル アカデミー
オブ サイエンス ＵＳＡ(PNAS) 87:7071 (1990)。全
身性エリテマトーデス（「ＳＬＥ」）患者でのＭＣＰに
対する自己抗体もまた報告されている。アリバス(Arrib
as, J.)ら ジャーナルオブ エクスペリメンタル メデ
ィシン(J. Exp. Med.) 173:423-427 (1990)。
【００１１】
【発明が解決しようとする課題】ＭＣＰ複合体を阻害す
ることが可能である作用物質が必要とされる。そうした
作用物質は、例えばＭＣＰ活性の分野で研究を行う者、
および、例えば異常なもしくは異所性のＭＣＰ活性の有
害な影響を制御するために医学分野にある者の双方に価
値のある手段を提供するとみられる。本発明はこれらの
重要な目的に向けられる。
【００１２】
【課題を解決するための手段】本発明は新規の多機能プ
ロテアーゼ（「ＭＣＰ」）阻害剤に向けられる。主題の
発明はまた筋消耗疾患の治療を包含するある疾患に関連
するＭＣＰの阻害方法も含む。
【００１３】ひとつの局面では式
【００１４】
【化１】
【００１５】を有する化合物が提供される。
【００１６】構成要素および好ましい構成要素が以下に
定義される。
【００１７】本発明の化合物は多様な用途において有用
である。例えば、当該化合物は、ＭＣＰ経路のメカニズ
ム的理解のための、および、主要組織適合遺伝子複合体
クラスＩ（ＭＨＣ Ｉ)経路を介するペプチド抗原の提
示に関するインビトロおよびインビボのモデルをさらに
正確にしかつ開発するために研究用途で採用されうる。
【００１８】臨床的な設定では、特許請求の化合物を含
む組成物がＭＣＰ活性の阻害、筋肉量の損失の減少、筋
消耗疾患の治療、スーパーオキシドジスムターゼ分解の
低減およびスーパーオキシドジスムターゼ活性の低下に
より特徴づけられる疾患の治療に使用され得る。
【００１９】方法もまた本発明の化合物の生成のために
提供される。
【００２０】当該化合物のこれらのおよび他の特徴は後
述のように拡大される形態で述べられるであろう。
【００２１】この発明はＭＣＰ阻害剤、これらの阻害剤
を包含する組成物およびこれらの阻害剤の使用方法を提
供する。本発明のＭＣＰ阻害剤は例えば下記式で表され
る：
【００２２】
【化２】
【００２３】式中、Ｒ1は、-Ｃ≡Ｎ、-Ｃ(=Ｏ)ＯＲ9、
フタルイミド基、-ＮＨ-ＳＯ2Ｒ9、および-ＮＨ-Ｊより
なる群から選択され、Ｒ2は、水素原子、ヒドロキシル
基、１個から10個までの炭素原子を有するアルキル基、
および３個から７個までの炭素原子を有するシクロアル
キル基よりなる群から選択され、Ｒ3は-(ＣＨ2)m-ＮＨ-
Ｃ(=Ｎ-Ｒ5)-ＮＨ2、-Ｒ6-ＮＯ2、-Ｒ6-Ｊおよび-Ｒ6-
ＣＮよりなる群から選択され、Ｒ4は-ＣＨ(ＣＨ2-Ｒ7)-
Ｑであり、Ｑは、-ＣＨ-Ｒ8、-Ｃ(=Ｏ)ＣＨ3、-Ｃ(=Ｏ)
ＣＨ2Ｃｌ、-Ｃ(=Ｏ)ＣＨ2Ｂｒ、-Ｃ(=Ｏ)ＣＨ2Ｆ、-Ｃ
(=Ｏ)ＣＨＦ2、-Ｃ(=Ｏ)ＣＦ3、-Ｃ(=Ｏ)Ｃ(=Ｏ)Ｒ7、-
Ｃ(=Ｏ)Ｃ(=Ｏ)ＮＨ-Ｒ7、-Ｃ(=Ｏ)ＣＯ2-Ｒ7、-Ｃ(=
Ｏ)ＣＯ2Ｈ、-Ｂ(ＯＨ)2、
【００２４】
【化３】
【００２５】式中、ｐおよびｑは独立に２もしくは３で
あり、Ｗはシクロアルキル基である、よりなる群から選
択され、Ｒ5は-ＮＯ2、-ＣＮおよび-Ｊよりなる群から
選択され、Ｒ6は-(ＣＨ2)m-ＮＨ-Ｃ(=ＮＨ)-ＮＨ-であ
り、Ｒ7はフェニル基、および１個から８個までの炭素
原子を有するアルキル基であって、前述のアルキル基が
場合によっては１個もしくはそれ以上のハロゲン原子、
アリール基、もしくはヘテロアリール基で置換される、
よりなる群から選択され、Ｒ8は=Ｏ、=Ｎ-ＮＨＣ(=Ｏ)-
ＮＨ2、=Ｎ-ＯＨ、=Ｎ-ＯＣＨ3、=Ｎ-Ｏ-ＣＨ2-Ｃ
6Ｈ5、=ＮＮＨ-Ｃ(=Ｓ)-ＮＨ2および=Ｎ-ＮＨ-Ｊよりな
る群から選択され、Ｒ9は水素原子および１個から６個
までの炭素原子を有するアルキル基であって、前述のア
ルキル基が場合によっては１個もしくはそれ以上のハロ
ゲン原子、アリール基もしくはヘテロアリール基で置換
される、よりなる群から選択され、Ｊは保護基であり、
ｎは３から10までの整数であり、そしてｍは２から５ま
での整数である。
【００２６】いくつかの好ましい態様においてはＲ1は-
Ｃ≡Ｎ、-Ｃ(=Ｏ)ＯＣＨ3、フタルイミド基もしくは-Ｎ
Ｈ-ＳＯ2ＣＦ3であり、また、他の好ましい態様におい
てはＲ2は水素原子もしくはシクロペンチル基である。
【００２７】Ｒ3は好ましくは-(ＣＨ2)3-ＮＨ-Ｃ(=Ｎ-
Ｒ5)-ＮＨ2である。
【００２８】Ｑは好ましくは-ＣＨ-Ｒ8、-Ｂ(ＯＨ)2、-
Ｃ(=Ｏ)Ｃ(=Ｏ)ＮＨ-Ｒ7であるか、または構造：
【００２９】
【化４】
【００３０】を有する。
【００３１】Ｒ5は好ましくは-ＮＯ2、-ＣＮ、-ＰＭ
Ｃ、-ＭＴＲ、-ＭＴＳ、もしくはＴｏｓ基である。
【００３２】Ｒ7は好ましくは-ＣＨ(ＣＨ3)2、-(ＣＨ2)
2-ＣＨ3、-ＣＨ2-ＣＨ3、もしくは-Ｃ6Ｈ5である。
【００３３】Ｒ8は好ましくは=Ｏ、=Ｎ-ＯＨ、=Ｎ-Ｏ-
ＣＨ2-Ｃ6Ｈ5、=ＮＮＨ-Ｃ(=Ｏ)-ＮＨ2もしくは=ＮＮＨ
-Ｃ(=Ｓ)-ＮＨ2である。
【００３４】いくつかの好ましい態様においては、Ｒ1
は-Ｃ(=Ｏ)ＯＣＨ3、フタルイミド基もしくは-ＮＨ-Ｓ
Ｏ2ＣＦ3であり、Ｒ2はシクロペンチル基であり、Ｒ3は
-(ＣＨ 2)3-ＮＨ-Ｃ(=Ｎ-ＮＯ2)-ＮＨ2であり、Ｒ7は-Ｃ
Ｈ(ＣＨ3)2であり、また、Ｒ8は=Ｏである。
【００３５】他の好ましい態様においては、Ｒ1は-Ｃ≡
Ｎであり、Ｒ2はシクロペンチル基であり、Ｒ3は-(ＣＨ
2)3-ＮＨ-Ｃ(=Ｎ-ＮＯ2)-ＮＨ2もしくは-(ＣＨ2)3-ＮＨ
-Ｃ(=Ｎ-Ｊ)-ＮＨ2であり、Ｒ7は-ＣＨ(ＣＨ3)2であ
り、また、Ｒ8は=Ｏである。
【００３６】さらに好ましい態様においては、Ｒ1はＣ
≡Ｎであり、Ｒ2はシクロペンチル基であり、Ｒ3は-(Ｃ
Ｈ2)3-ＮＨ-Ｃ(=Ｎ-ＮＯ2)-ＮＨ2もしくは-(ＣＨ2)3-Ｎ
Ｈ-Ｃ(=Ｎ-Ｊ)-ＮＨ2であり、Ｒ7は-ＣＨ(ＣＨ3)2であ
り、Ｑは-ＣＨ-Ｒ8であり、およびＲ8は=Ｎ-ＮＨＣ(=
Ｏ)-ＮＨ2、=Ｎ-ＯＨ、=Ｎ-ＯＣＨ3、もしくは=Ｎ-Ｏ-
ＣＨ2-Ｃ6Ｈ5である。
【００３７】本明細書で使用されるように、「アルキ
ル」という用語は、エチル基、イソプロピル基およびシ
クロペンチル基のような直鎖状、分枝状および環状の炭
化水素を包含することになる。置換されたアルキル基
は、その１個もしくはそれ以上の水素原子がハロゲン原
子、他の炭化水素基（例えばフェニル基）、ヘテロアリ
ール基またはそこで１個もしくはそれ以上の炭素原子が
酸素原子により中断されている基により置換されている
アルキル基である。好ましいアルキル基は１ないし約８
個の炭素原子を有する。本明細書で使用されるように、
「ハロゲン」という用語はその通常の意味を有し、か
つ、フッ素、塩素、臭素およびヨウ素を包含し、フッ素
が好ましいハロゲンである。本発明中に使用されるよう
な「Ａｒｇ」という用語はアミノ酸「アルギニン」の略
語のようなその通常の意味を有する。
【００３８】いくつかの態様において、本発明の化合物
は保護基を含有する。本明細書で使用されるように、
「保護基」という句は幅広い解釈を認容されることにな
る。保護基はヒドロキシル基、アミノ基およびカルボキ
シル基のような機能性(に選択的に附加されまたそれか
ら除去され得る化学的官能基としてそれ自体既知であ
る。これらの基は化合物に存在し、そうした機能性を当
該化合物が曝される化学的反応条件に対し不活性にす
る。多用な保護基のいずれも本発明で採用されうる。ひ
とつのそうした保護基はフタルイミド基である。本発明
による他の好ましい保護基は以下の式を有する：
【００３９】
【化５】
【００４０】本発明の実際に適するさらなる代表的保護
基はグリーン(Greene, T.W.)とウッツ(Wuts, P.G.M.)、
「プロテクティブ グループス イン オーガニック
シンテシス(Protective Groups in Organic Synthesi
s)」第２版、ウィレイ アンドサンズ(Wiley & Sons)、
1991、に見出されうる。その開示は完全に引用すること
により本明細書に組み込まれる。
【００４１】以前に指摘されたように、ＭＣＰ活性は多
様な障害および疾患と結び付けられている。本明細書に
開示されるような化合物はＭＣＰ活性の阻害に有用であ
り、かつ、こうした化合物の有用性は研究および治療の
双方の設定に応用され得るため、ＭＣＰを本発明の化合
物と接触することによるＭＣＰ活性の阻害の方法論は、
当該化合物をヒトを包含する哺乳類に薬物もしくは製薬
学的作用物質として提供することを包含する。
【００４２】本明細書で使用されるように、「接触」と
いう用語は、接触されるべき部分が相互に物理的接触に
加わるように当該部分が共に配置することを直接的もし
くは間接的に引きこすことを意味する。接触はかように
当該部分を一緒に容器中に置く、もしくはひとりの患者
に部分を複数投与するような物理的作用を包含する。か
ように、例えば、本発明の化合物を、ある疾患もしくは
障害に関連するＭＣＰの異常なおよび／もしくは異所性
の活性と関連するそうした疾患もしくは障害を明示する
ヒト患者に投与することは、「接触」という用語の定義
の範囲内に入る。
【００４３】好ましい態様においては、本発明による製
薬学的組成物がある障害すなわち異常な身体的状況、Ｍ
ＣＰの異常なおよび／もしくは異所性の活性と関連する
疾患もしくは病態生理学的状況に罹っている患者に投与
される。本発明の組成物が投与される障害は、好ましく
は筋肉量の消耗（すなわち損失）、すなわち筋消耗性疾
患を直接的もしくは間接的に生み出すそれらである。こ
れらは筋ジストロフィー、心性悪液質、気腫、らい、栄
養失調、骨軟化症、小児急性白血病、エイズ悪液質およ
び癌性悪液質を包含する。
【００４４】本発明の状況において、「投与」は、当該
製薬学的組成物の患者への導入を意味する。好ましい投
与方法は静脈内、皮下および筋肉内の投与を包含する。
好ましくは、当該化合物は、生理学的食塩水のような製
薬学的に許容し得る担体と組み合わせて当該化合物を含
む製薬学的組成物として投与されるであろう。他の適し
た担体は、レミントンの薬剤学(Remington's Pharmaceu
tical Sciences)（マック パブリッシャーズ カンパ
ニー(Mack Pub. Co.)、イーストン、フィラデルフィア
州、1980）中に見出され得る。
【００４５】本明細書中に記述される化合物の製薬学的
組成物中の濃度は、投与されるべき当該薬物の投薬、採
用される化合物の化学的特徴（例えば疎水性）、および
投与経路を包含する多数の因子に依存して変動するであ
ろう。漠然とは、この発明の化合物は、非経口投与には
約0.1ないし10w/v％の化合物を含有する水性の生理学的
緩衝溶液中で提供されうる。典型的な用量範囲は１日に
体重１kgあたり約１μgから約１gまでであり、好ましい
用量範囲は１日に体重１kgあたり約0.01mgから約100mg
までである。投与されるべき薬物の好ましい投薬は、そ
の疾患もしくは障害の進展の型および程度、特定の患者
の概括的健康状態、選択された化合物の相対的な生物学
的効力、ならびに賦形剤化合物の処方のような変数、さ
らにその投与経路に依存するようである。本明細書で使
用されるような「患者」という用語はいずれかの種類の
脊椎動物を意味する。好ましくは当該患者はヒトであ
る。
【００４６】筋ジストロフィーは神経変性の証拠のない
筋線維の進展性の脱力および変性により特徴づけられる
遺伝子的疾患である。デュシェーヌ(Duchenne)筋ジスト
ロフィー（ＤＭＤ）では、患者は平均67％の筋肉量の減
少を呈し、また、筋緊張性ジストロフィーでは、断片的
筋タンパク質の合成が、非筋肉タンパク質合成でのいか
なる対応する減少なしに平均28％減少することが示され
ている（おそらくタンパク質同化ホルモンもしくは同基
質に対する終末器官の損なわれた応答によるとみられ
る）。促進されるタンパク質分解がＤＭＤ患者の筋肉で
立証されている。
【００４７】重篤なうっ血性心不全（ＣＨＦ）は「心性
悪液質」、すなわち平均19％の体重減少を伴う心筋およ
び骨格筋双方の筋タンパク質の消耗により特徴づけられ
る。心性悪液質は筋線維タンパク質分解の増大した速度
により引き起こされる。
【００４８】気腫は肺胞壁の破壊的変化を伴なう末端の
非呼吸細気管支の遠位の気積の拡大により定義される慢
性閉塞性肺疾患である。低減した肺機能の臨床的症状発
現は、咳、喘鳴、再発性呼吸器感染症、浮腫ならびに機
能障害および短縮された寿命を包含する。チロシンの流
出は気腫患者で47％増加する。また、全身のロイシン流
出は正常に保たれ、全身のロイシン酸化は増大し、そし
て全身のタンパク質合成は減少する。その結果は筋タン
パク質合成の減少であり、全身のタンパク質の代謝回転
および骨格筋量の減少を伴なう。この減少は疾患の進展
および長期の悪化とともにますます明白となる。
【００４９】糖尿病では手の小さな筋肉の広汎性の消耗
が存在する。これは慢性の部分的脱神経（ニューロパチ
ー）による。これはもっとも明白でありかつ長期の疾患
の進展および重篤度とともに悪化する。
【００５０】らいは親指と人差し指の中手骨の間に発生
する筋消耗を伴なう。重篤な栄養失調はとりわけ重篤な
筋消耗により特徴づけられる。
【００５１】骨軟化症はビタミンＤおよびカルシウムの
欠乏により引き起こされる栄養障害である。子どもでは
「くる病」、また成人では「骨軟化症」と称される。骨
の軟化（類骨の過剰蓄積を伴なう損なわれた鉱化作用に
よる）、痛み、脆弱、筋消耗および脱力、食欲不振、な
らびに概括的体重減少により特徴づけられる。栄養失
調、反復する妊娠および授乳（ビタミンＤおよびカルシ
ウムの貯蔵を消耗もしくは枯渇する）、ならびにビタミ
ンＤ抵抗性に起因し得る。
【００５２】小児の急性白血病では骨格筋消耗に帰着す
るタンパク質エネルギーの栄養失調が存在する。研究
は、若干の小児が白血病の診断前でさえも平均27％の筋
肉量の減少を伴なう筋消耗を表すことを示している。同
時の脂肪組織の33〜37％の増加もまた存在し、相対的体
重および四肢の円周の正味の変化に帰着しない。
【００５３】癌性悪液質は固形腫瘍および血液学的悪性
腫瘍のある患者で変化しやすい頻度で発生する複合的症
候群である。臨床的には、癌性悪液質は、脂肪組織およ
び脂肪のない筋肉量の双方の大規模な枯渇を伴なう体重
減少として現され、また、癌に起因する死亡の一因であ
る。癌性悪液質の患者はより短い生存期間および化学療
法に対する低下した応答を有する。筋消耗を生み出す障
害に加え、他の環境および状況が筋肉量の減少と何らか
の様式で結び付けられるように思われる。こうした苦痛
には慢性の腰痛、高齢、疾患もしくは外傷による長期入
院、アルコール中毒症およびコルチコステロイド療法に
よる筋消耗を包含する。
【００５４】研究は、慢性腰痛の重篤な症例では脊髄両
側の筋消耗が存在することを示している。傍脊髄の筋消
耗の低減が痛みを緩和しそして機能を改善する。
【００５５】高齢での一般的な脱力は筋消耗によるとも
また考えられる。身体が加齢すると骨格筋の増大する比
率が線維組織により置換される。その結果は筋力の大き
な低下であるが、しかし、脂肪を含まない集団(mass)で
はわずかな低下にすぎない。
【００５６】研究は、外傷もしくは慢性病を病みかつ長
期間入院した患者では、筋肉量の平均31％の減少を伴な
う持続性の一側性の筋消耗が存在することを示してい
る。研究はまた、これが集中的理学療法で矯正され得る
ことも示している。しかしながら、多くの患者にとっ
て、薬物療法で改善を遂げることがより効果的でありう
る。
【００５７】アルコール中毒患者では前頚骨筋の消耗が
存在する。この近位の筋損傷は神経原性の損傷、すなわ
ち損なわれた解糖性およびホスホリラーゼの酵素活性に
より引き起こされる。この損傷はアルコール濫用の期間
が長くなるほど明らかになりかつ悪化する。コルチコス
テロイドで治療される患者は筋肉量の損失を経験する。
【００５８】ＭＣＰは、ＮＦkappaＢと称される炎症の
細胞内性メディエータを活性化することが示されてい
る。ベウエルレ(Baeuerle, P.A.)とヘンケル(Henkel,
T.) (1994) Annu. Rev. Immunol. 12、141-179を参照。
ＭＣＰの阻害剤は、従って、自己免疫疾患および炎症性
疾患の治療での使用を潜在的に有する。
【００５９】本発明の化合物は前述の疾患および他の疾
患に起因する筋肉量の損失を緩和するのに使用され得
る。加えて、本発明のＭＣＰ阻害剤は家畜および動物の
管理の応用において動物の体重減少に対抗し、もしくは
成長を促進するのに有用である。
【００６０】ＭＣＰは主要組織適合遺伝子複合体クラス
Ｉ（ＭＨＣ Ｉ)経路を介するペプチド抗原の提示に関
係している。ゴールドベルグとロック、上記を参照；ま
た、下で「ロックら」のロック(Rock)ら、セル(Cell)、
78: 761-771 (1994)も参照。ＭＣＰの阻害剤は従って、
ＭＣＨ Ｉ経路の阻害が望まれる研究において、ならび
に、抗原の異所性および／もしくは異常なＭＨＣ-Ｉプ
ロセシングに関連する疾患および障害の緩和において、
研究試薬として有用性を有する。ＭＨＣ-Ｉ分子上に提
示されるペプチドのほとんどの正確な起源が未だ明らか
でないため、および、ＭＣＰがＭＨＣ-Ｉの提示にて役
割を演じうるという証拠が最近蓄積されているため（ロ
ックら、上記）、ＭＨＣ-Ｉの提示のための抗原のタン
パク質分解性プロセシングを妨げる、開示されるＭＣＰ
阻害剤のような試薬はこの経路の重要性の解明において
有用と思われる。
【００６１】驚くべきことに、本発明のＭＣＰ阻害剤は
またＣｕ／Ｚｎスーパーオキシドジスムターゼ-１
（「ＳＯＤ-１」）の活性を高めるのにも有用であるこ
ともまた見出されている。従って、これらの化合物はＳ
ＯＤ-１が欠乏した系の研究のための研究設定、およ
び、ＳＯＤ-１酵素活性での低下により特徴づけられる
神経変性疾患もしくは他の障害（すなわち、そこではそ
うした低下が当該障害の病因に関係している）の治療の
双方で有用である。こうした状況は、パーキンソン病、
アルツハイマー病、ハンチントン病、卒中、外傷および
虚血のような酸化的ストレスを伴なう疾患を包含する。
【００６２】ＳＯＤ-１は毒性のスーパーオキシドアニ
オンＯ2・-のＯ2およびＨ2Ｏ2への不均化を触媒するホモ
ダイマーの金属酵素である。ＳＯＤ-１はフリーラジカ
ルのスカベンジャーであり、従ってスーパーオキシドラ
ジカルの無毒化の第一列の防御として作用する。スーパ
ーオキシドラジカルは有酸素代謝の正常な副産物であ
る。ＳＯＤ-１は主として真核生物に存在し、そして事
実上全ての細胞タイプの細胞質中で見出される。ＳＯＤ
-１は酸素の毒性に対する生理学的応答で不可欠の酵素
であり、かつ、酸化的ストレスに関連する病理学的状況
での治療的作用物質として活発に研究されている。バニ
スター(Bannister)ら、CRC Crit. Rev. Biochem. 22: 1
11-180 (1987)；ハリウェル(Halliwell)ら、メソッヅ
イン エンツィモロジー(Methods in Enzymol.)、186:1
-75 (1990)；グリーンワルド(Greenwald)、Free Rad. B
iol. Med. 8: 201-209 (1990)を参照。
【００６３】ＳＯＤ-１の治療的作用物質としての使用
を妨げている特徴は、外因性に供給される場合のその乏
しい細胞内への到達、および血清中でのその極端に短い
半減期である。従って、細胞内性のＳＯＤ-１の活性を
高める化合物はＳＯＤ-１療法において大きな前進を供
給するとみられる。
【００６４】ＡＬＳは脊髄および脳の大きな運動ニュー
ロンの変性により引き起こされる進行性麻痺性障害であ
る。ＡＬＳ症例のおよそ５〜10％は家族性（ＦＡＬＳ）
であり、また、常染色体性の優性の特性として遺伝され
る。最近、16種の異なるミスセンス変異がＦＡＬＳの家
族のあるサブセットで同定され、また、ＳＯＤ-１をコ
ードする遺伝子内に存在する。ローゼン(Rosen, D.R.)
ら、サイエンス(Science) 261:1047-1051 (1993)；トン
(Deng, H.-X.)ら、ネイチャー(Nature) 362:59-62 (199
3)を参照。これらの変異は赤血球および脳組織でのＳＯ
Ｄ-１活性の低減につながり、また、上昇したこの酵素
の代謝回転に帰着する、ＳＯＤ-１タンパク質を不安定
化することが示されている。ボウリング(Bowling, A.
C.)ら、J. Neurochem. 61:2322-2325 (1993)；ボーシェ
ルト(Borchelt,D.R.)ら、プロシーディングス オブ
ナショナル アカデミー オブ サイエンス(Proc. Nat
l. Acad. Sci.) 91:8292-8296 (1994)を参照。加えて、
ＳＯＤ-１とＡＬＳの間の関連の連坐に基づくＡＬＳの
トランスジェニックマウスモデルが記述されている。ブ
ラウン(Brown, R.H.) 331/16 ニューイングランド ジ
ャーナル オブ メディシン(NEJM) 1901 (1994)。
【００６５】われわれは、われわれのＭＣＰ阻害剤がＳ
ＯＤ-１の強力な正の効果物質であることを発見した。
本明細書で「化合物１４」と称される好ましいＭＣＰ阻
害剤は、用量依存性の様式で野生型および変異体のＳＯ
Ｄ-１の分解を特異的に低減する（化合物番号の呼称は
その化合物の合成を開示する実施例の番号に基づく。例
えば化合物１４の合成は以下の実施例１４に述べられ
る）。本明細書で使用されるように、ＳＯＤ-１の分解
の低減はＳＯＤ-１タンパク質が異化される速度を遅延
させることを意味する。
【００６６】
【実施例】本発明は以下の実施例を介してさらに例証さ
れる。これらの実施例は本発明のさらに解明することを
意図され、かつ、追加される(appended)請求の範囲を制
限することを意図されない。
【００６７】実施例１ ヒト組織からの多機能プロテアーゼの単離 死後得られたヒト肝および脳のサンプルを、イオン交換
クロマトグラフィー、硫酸アンモニウム沈殿およびゲル
濾過によるＭＣＰの単離および部分的精製に使用した
（例えば、ドリスコール(Driscoll)とゴールドベルグ(G
oldberg)、プロシーディングス オブ ナショナル ア
カデミー オブ サイエンス(Proc. Natl.Acad. Sci.)
86、787-791 (1989)；ヤマモト(Yamamoto)ら、Biochim.
Biophys.Acta 882、297-304 (1986)）。いずれかの出
発材料について、組織を20％グリセロールを含有する10
倍体積量の20mMトリス−塩酸（ｐＨ7.5）中でホモジェ
ナイズした。40,000×ｇで30分間の遠心分離の後、ＭＣ
Ｐのキモトリプシン様成分のタンパク質分解活性が上清
で検出可能であった（以下を参照）。この上清をホモジ
ェナイズ緩衝液で平衡化したＤＥＡＥ−セファロースフ
ァストフローカラム上で分画した。上清１lそれぞれに
ついて樹脂250mlを使用した。サンプル負荷後、カラム
を約10倍体積量のホモジェナイズ緩衝液で洗浄し、そし
てタンパク質を０から400mMまでの直線塩化ナトリウム
濃度勾配で溶出した（250mlの樹脂につき２l）。フラク
ションをＭＣＰ活性についてアッセイし、そして活性の
フラクションを合わせ、それから80％飽和で硫酸アンモ
ニウムでの沈殿を受けた。沈殿したタンパク質を遠心分
離により収集し、ホモジェナイズ緩衝液に再懸濁し、そ
してウシ血清アルブミン（68kDa）を使用して標準化さ
れたセファクリル Ｓ３００ＨＲカラム（樹脂体積500m
l）上に負荷した。ＭＣＰ活性のただ１個のピークが約6
50kDaの分子量で溶出された。この調製物は他の測定可
能なタンパク質分解活性を含まず、また、６ヵ月を超え
る４℃での保存に際してそのＭＣＰ活性を維持した。こ
の調製物を実験の大部分に使用した。ヒドロキシアパタ
イト−ウルトロゲルカラム（ヤマモトら、上記）上での
当該調製物のさらなる分画はより高度に精製された酵素
を産し、これは、変性ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル
電気泳動によれば、20から35kDaまでのＭrに及ぶ予期さ
れる10を超えるサブユニットから成った。
【００６８】実施例２ ＭＣＰのキモトリプシン様活性およびトリプシン様活性
のアッセイ上に記述されるＭＣＰの単離方法は、そのタ
ンパク質分解活性が潜在的であるがしかしＳＤＳの低濃
度（0.02〜0.05％）の添加により活性化され得る（ヤマ
モトら、上記）酵素複合体を創製した。キモトリプシン
様活性を以下の処置に従いアッセイした。すなわち、96
穴マイクロタイタープレート中でヒトＭＣＰを0.04％Ｓ
ＤＳを含有するホモジェナイズ緩衝液で４ないし10倍希
釈した。ベイケムバイオサイエンス インク(Bachem Bi
oscience Inc.)、キング オブ プルシア、ペンシルバ
ニア州より購入した比色分析基質ＭｅＯＳｕｃ-ＥＶＫ
Ｍ-パラニトロアニリド（メトキシスクシニル-Ｇｌｕ-
Ｖａｌ-Ｌｙｓ-Ｍｅｔ-ｐＮａ）を、ジメチルスルホキ
シド中10mMのストック溶液からの100μMの最終濃度に添
加した。反応体積は穴あたり200μlであった。37℃で様
々な時間インキュベーションした後、遊離のｐＮａの濃
度をバイオテック(Biotech) ＥＬ-３４０マイクロプレ
ートリーダー上で490nmでの吸収を読み測定した。プロ
テアーゼ活性を、基質加水分解が時間とともに直線的に
増大しかつ吸収の変化が遊離のｐＮａの濃度に比例する
条件下で測定した。あるいは、蛍光原性基質、メトキシ
スクシニル-Ｐｈｅ-Ｌｅｕ-Ｐｈｅ-アミドメチルクマリ
ン（エンザイム システムズ プロダクツ(Enzyme Syst
ems Products)、ダブリン、カリフォルニア州）を使用
し、そして蛍光の変化を390nmの励起および460nmでの放
射でモニターした。
【００６９】ヒトＭＣＰのトリプシン様活性は以下の修
飾とともに上に記述されるようにアッセイした。反応を
１mMの２-メルカプトエタノールを補充したトリス−グ
リセロール緩衝液（ｐＨ9.5）中で実施し、また、基質
は蛍光原性基質、ベンジルオキシカルボニル-Ｐｈｅ-Ａ
ｒｇ-ＡＭＣ（100μM）であった。
【００７０】37℃で様々な時間インキュベーションした
後、遊離のＡＭＣの濃度を、390nmの励起フィルターお
よび460nmの放射フィルターをつけたフルオロスカン(Fl
uoroskan)II分光蛍光計上で測定した。プロテアーゼ活
性を、基質加水分解が時間とともに直線的に増大しかつ
蛍光の変化が遊離のＡＭＣの濃度に比例する条件下で測
定した。
【００７１】実施例３ ＭＣＰ阻害剤のＩＣ50値の決定 ＩＣ50値は、一般に、その酵素活性の50％阻害を生み出
すのに必要なある化合物（この場合は開示されるＭＣＰ
阻害剤）の濃度として定義される。ＩＣ50値はその指定
される使用に関する化合物の活性の有用な指標である。
好ましくは、本発明の阻害剤は約10マイクロモルより小
さいＩＣ50値を有する。
【００７２】ＭＣＰのキモトリプシン様活性もしくはト
リプシン様活性の阻害は、基質の添加に先立ち当該酵素
を様々な濃度の推定の阻害剤と37℃で15分間インキュベ
ーションすることにより測定した。各実験条件を３回の
実験で評価し、そして反復の実験を本明細書に記述され
る阻害剤について実行した。
【００７３】実施例４ 細胞性の筋肉分解の阻害の立証：幼若ラットでの加重除
去萎縮の阻害 幼若ラットのヒラメ筋の加重除去萎縮に対するいくつか
の阻害剤の効果を測定した。処置の一般的論考について
はティシュラー(Tischler, M.E.) (1990) メタボリズム
(Metabolism) 39/7:756-763（以下「ティシュラー−199
0」）を参照。
【００７４】幼若雌性シュプラグ−ドーレイ(Sprague-D
awley)ラット（80〜90g）は尾をギプス包帯で固定し、
後肢をジャスパー(Jaspers, S.R.)とティシュラー(Tisc
hler, M.E.) (1984) J. Appl. Physiol. 57:1472-1479
におけるように懸垂した。動物の後肢を各動物を個々に
居住させてケージの床の上に持ち上げた。動物は食餌お
よび水への自由な接近を有し、そして懸垂時および終了
時に体重を測定した。懸垂期間の間、当該動物を毎日チ
ェックしてそれらの爪先がケージの床に接していないこ
と、および、ギプス包帯により尾の膨脹がないことを確
認した。 Ａ．実験デザイン−パート１ 各実験は無作為にそれぞれ５匹の４群に分割した20匹の
ラットの懸垂で開始した。Ａ群はちょうど２日間懸垂
し、より長時間懸垂された他の動物でのヒラメ筋の大き
さを概算するための基礎データを提供した。試験の開始
時に群について平均体重を比較し、そして身体の大きさ
の差異の補正係数として使用した。Ｂ群は、動物の各群
について加重除去の間の緩徐な筋萎縮の能力を立証する
ために加重除去の２日後にマーサリルの水溶液で１個の
四肢のヒラメ筋を処理した第二の対照群であった。マー
サリルは、本明細書で利用されるプロトコールに記述さ
れるように、以前に研究されそしてインビボのモデルで
萎縮を本質的に防止することが立証されている。ティシ
ュラー−1990を参照。加重除去を始めた後２日目に、先
に記述されるように、マーサリルの水溶液（200nM；最
初の体重100gあたり４μl）を１個のヒラメ筋に注入し
た。反対側の筋肉には0.9％生理的食塩水（「ベヒク
ル」）の同体積を注入した。動物はインジツの注入処置
の間、インノーヴァー・ヴェット(Innovar-vet)（体重1
00gあたり10μl）鎮静下に維持した。注入後、動物をさ
らに24時間懸垂し、そしてヒラメ筋を除去した。各実験
のＣ群およびＤ群は開示される化合物の２種の異なる態
様それぞれを試験するのに使用した。動物は、ジメチル
スルホキシド（ＤＭＳＯ）中に含有される１mMのＭＣＰ
阻害剤を一方の脚のヒラメ筋にそしてＤＭＳＯのみを反
対側のヒラメ筋に注入することを除いては、Ｂ群におけ
るように処理した。かように各実験は２個の対照群およ
び本発明のＭＣＰ阻害剤の試験から成った。阻害剤の異
なる対での５個のこうした実験の終了は、各ＭＣＰ阻害
剤の試験について10の「ｎ」値を規定し、また、動物の
２種の異なる発送(shipment)で試験される各阻害剤を提
供した。 Ｂ．ヒラメ筋の処置−パート１ 動物を殺した後、ヒラメ筋を切除し、脂肪および結合組
織を取り除き、そして慎重に重量を測定した。筋肉をそ
の後10％トリクロロ酢酸（ＴＣＡ）中でホモジェナイズ
し、そして沈殿させたタンパク質を遠心分離により沈降
させた。ペレットをその後10％ＴＣＡで１度、およびエ
タノール：エーテル（１：１）で１度洗浄した。最終的
なペレットを１N水酸化ナトリウム４ml中で可溶化し
た。当該サンプルはその後、アルブミンを標準として使
用し、ビウレット法によりタンパク質含量を分析した。 Ｃ．データ解析−パート１ 筋肉の総タンパク質含量に対するＭＣＰ阻害剤の効果
を、主として、未処理の反対側の筋肉との対にした(pai
red)比較により検査した。含量の比を算出し、そしてそ
の後分散分析（「ＡＮＯＶＡ」）により統計学的に解析
した。左脚は、タンパク質含量比が未処理の対照動物で
も同様に比較され得るように、常に処理された脚であっ
た。この方法で、２本の脚のタンパク質含量、および試
験したＭＣＰ阻害剤の相対的有効性を比較することによ
り、有意差が示され得た。ペアードスチューデント検定
もまたそれぞれ別個の処理の影響について実行した。未
処理の対照のデータもまた第２日のタンパク質含量の推
定値を提供した。これはＢ、ＣおよびＤ群それぞれにつ
いて、処理の24時間にわたるタンパク質の変化の近似を
可能にした。 Ｄ．実験デザイン−パート２ 各実験は、阻害剤類のうち１個でタンパク質合成に対す
るその効果について試験される５匹の動物の群の10匹の
動物から成った。反対側のＤＭＳＯ処理した筋肉が阻害
剤処理した筋肉について対になる対照としてはたらいた
ため、対照動物は研究のこの局面については必要とされ
なかった。各群にはパート１のＣおよびＤ群について記
述されるように注入した。インジツ処理の24時間後、タ
ンパク質合成の断片的速度(fractional rate)を双方の
ヒラメ筋で分析した。各筋肉に3Ｈ-フェニルアラニン
（50mM；１μCi/μl）を含有する0.9％生理的食塩水溶
液（最終体重100gあたり3.5μl）を注入した。15分後、
筋肉の中間の２/３を切除しそしてこの筋肉を以下に記
述されるように処置した。 Ｅ．ヒラメ筋の処置−パート２ 筋肉をまず、0.5mMシクロヘキシイミドを含有する0.84
％生理的食塩水中で10分間洗浄してタンパク質合成を停
止させ、そして20mMシクロロイシンで洗浄して細胞内に
フェニルアラニンを捕捉した。この筋肉をその後氷冷２
％過塩素酸2.5ml中でホモジェナイズした。沈殿したタ
ンパク質を遠心分離により沈降した。上清の１個のアリ
コートを液体シンチレーション計測のために取り、そし
てもう１個のアリコートはフェニルアラニンからフェネ
チルアミンへの変換のため処理し、可溶性のフェニルア
ラニン濃度を蛍光測定的に測定した。ガーリック(Garli
ck, P.J.)ら、バイオケミカル ジャーナル(Biochem.
J.)、192 719-723 (1980)およびムノ(Munoz, K.M.)ら、
1993 メタボリズム(Metabolism)、投稿中、を参照。こ
れらの値は細胞内の特異的活性を提供する。筋肉タンパ
ク質中のフェニルアラニンの特異的活性を、タンパク質
を６N塩酸中で加熱することにより加水分解した後に測
定した。放出されたアミノ酸を緩衝液中で可溶化した。
上清フラクションについてのように、１個のアリコート
をシンチレーション計測のために、そしてもう１個をフ
ェニルアラニン分析のために取った。タンパク質合成の
断片的速度を： タンパク質の特異的活性／細胞内の特異的活性×時間 として算出した。 Ｆ．データ解析−パート２ タンパク質合成の分析は各ＭＣＰ阻害剤について対をも
とにした。反対側の筋肉のスチューデントのペアードｔ
検定の比較がタンパク質合成に対する当該阻害剤のいず
れかの効果が存在するかどうかを決定した。タンパク質
分解は、タンパク質累積の断片的速度（パート１から）
を加えたタンパク質合成の断片的速度（パート２から）
としておおよそ算出され得た。ここでタンパク質の損失
はタンパク質の累積に対し負の値をもたらす。
【００７５】質的に、ＭＣＰ阻害剤がタンパク質合成に
影響することなくタンパク質損失を遅延させる能力はタ
ンパク質分解の遅延を指摘する。 Ｇ．結果 第１表は対照の筋肉に対するＭＣＰ阻害剤の効果の欠如
を示す。
【００７６】第２表は加重除去の第３日の間のタンパク
質含量での変化を示す。
【００７７】第３表は加重除去した筋肉タンパク質に対
するＭＣＰ阻害剤の効果を示す。
【００７８】第４表は加重除去した筋肉合成に対するＭ
ＣＰ阻害剤の効果を示す。
【００７９】表中、化合物番号は当該化合物についての
合成経路が述べられる実施例番号を示す。
【００８０】
【表１】
【００８１】
【表２】
【００８２】
【表３】
【００８３】
【表４】
【００８４】実施例５ ＭＨＣ-Ｉプロセシングを使用するＭＣＰ阻害の立証 本発明の化合物を、クラスＩの主要組織適合遺伝子複合
体経路（ＮＨＣ-Ｉ）による外因性ＯＶＡ抗原のプロセ
シングを阻害する能力についてアッセイした。ＭＣＰ阻
害剤を、抗原への露出の間に抗原プロセシング細胞内へ
の当該阻害剤の封入を可能にする機能性抗原プロセシン
グ系に適用し、その後当該プロセシング細胞を固定し
た。Ｔ細胞ハイブリドーマをその後、阻害剤の非存在下
にこのプロセシング細胞に添加し、ペプチド−ＭＨＣ-
Ｉ複合体の発現を決定した。この発現は固定に先立つ抗
原プロセシングを反映する。 Ａ．細胞培養系 細胞は、37℃で５％ＣＯ2に維持した加湿雰囲気中、標
準的培地すなわち10％ウシ胎児血清（ハイクローン(Hyc
lone)、ローガン、ユタ州）、５×10-5Mの２-メルカプ
トエタノール、抗生物質および以下の補助物質すなわち
塩酸Ｌ-アルギニン（116mg/L）、Ｌ-アスパラギン（36m
g/L）、炭酸水素ナトリウム（２g/L）、ピルビン酸ナト
リウム（１mM）、を含むＤＭＥＭ（ギブコ(Gibco)、セ
ントルイス、ミズーリ州）中で培養した。ハーディング
(Harding, C.V.)、(1992) Eur.J. Immunol. 22:1865-18
69も参照。Ｍ１２．Ｂ６細胞（オサミ・カナガワ(Osami
Kanagawa)、ワシントン大学、セントルイス、ミズーリ
州、の恵与）を抗原提示に使用した。この細胞はＭ１
２．Ｃ３マウスＢリンパ球細胞をＣ５７ＢＬ／６マウス
からのＬＰＳ刺激した脾細胞（Ｂリンパ芽細胞の起源）
と融合することにより創造した。従ってそれらはＨ-２b
抗原を発現する。ＤＯＷＢ Ｔハイブリドーマ細胞はＩ
-ＡbもしくはＩ-Ａdのいずれかに結合したＯＶＡ（323
−339）ペプチドに特異的である。ユーデル(Yewdell)
ら、サイエンス(Science) 1988 239:637を参照。Ｂ３．
１ Ｔハイブリドーマ細胞はＯＶＡ（258−276）-Ｋbに
応答する。 Ｂ．電気穿孔法および抗原プロセシングの研究 ＭＨＣ-Ｉ経路によりプロセシングされかつ提示される
には、外因性抗原（卵白アルブミン；ＯＶＡ）がプロセ
シング細胞の細胞質内に浸透しなければならない。ＯＶ
Ａを電気穿孔法によりプロセシング細胞（Ｍ１２．Ｂ６
細胞）の細胞質内に導入した。
【００８５】電気穿孔法は、0.4cmのギャップのキュベ
ットチャンバーを使用し、ギブコ(Gibco) ＢＥＬ電気
穿孔装置で実行した。静電容量は800μF、また、電圧は
50〜300Vであった。電気穿孔法は、４℃でＯＶＡの存在
下、Ｍ１２．Ｂ６細胞を1.5×107個/ml（範囲0.5×107
〜4.0×107）含む血清を含まないＲＰＭＩもしくはＰＭ
ＥＭ（ギブコ(Gbco)）中で実行した。細胞を直ちに氷上
に置いた。様々な阻害剤をその後添加しそして細胞を18
℃もしくは37℃に移した。最後に、細胞を１％パラホル
ムアルデヒドで約10分間軽く固定し、そして37℃で広範
囲に(extensively)洗浄してさらなるプロセシングを防
止した。プロセシングの程度（すなわち表される特異的
なペプチド-ＭＨＣ複合体の濃度）を、Ｂ３．１もしく
はＤＯＢＷＴハイブリドーマ細胞によるＩＬ-２分泌を
促進するＭ１２．Ｂ６細胞の能力により決定した。Ｔ細
胞（105個）を、102チャンバー中37℃で18〜24時間、0.
2ml中にＭ１２．Ｂ６細胞（固定された場合２×105個、
生存能力のある場合５×104個）とともに培養した。双
方のＴハイブリドーマがＩＬ-２の分泌による抗原刺激
に応答する（上清中でＩＬ-２依存性のＣＴＬＬ細胞の
増殖および［Ｈ3］チミジンの取り込みによりアッセイ
される。アレン(Allen)ら、ジャーナル オブイムノロ
ジー(J. Immunol.) 132:1077を参照）。
【００８６】これらの研究の結果が第１〜３図に示され
る。第１図は電気穿孔されたＯＶＡのＭ１２．Ｂ６細胞
によるプロセシングに対する化合物１４および１６の影
響を示す。第２図および第３図はＭＨＣ-ＩのＯＶＡプ
ロセシングに対する化合物１４および２０の影響を示
す。双方の化合物はＯＶＡプロセシングを効果的に阻害
する。これらのデータは本発明の化合物のＭＣＰ阻害効
果に対する付加的な支持を提供する。古典的なＭＨＣ-
Ｉ経路がプロテアソームによる抗原分解を必要とするこ
とが認容される。ゴールドベルグら、上記を参照。かよ
うに、当該化合物類は抗原のタンパク質分解的プロセシ
ングの重要性のさらなる理解に利用され得る。
【００８７】実施例６ Ａ．Ｃｕ／Ｚｎスーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ
-１）分解の低減 Ｉ．パート１−クローニングおよび突然変異誘発 マウスのＳＯＤ-１のｃＤＮＡクローンはジム・マハフ
ェイ(Jim Mahaffey)（ノースカロライナ州立大学、ラレ
イ、ノースカロライナ州）より得た。このクローンを、
１）ＡＴＧ開始コドンの直接上流にコザック(Kozak)の
翻訳開始コンセンサスシグナル（すなわち５’−ＧＣＣ
ＧＣＣＡＣＣ−３’）を、２）このコンセンサスシグナ
ルの５’側にHind III制限酵素切断部位を、および３）
当該ｃＤＮＡの３’末端にXho I制限酵素切断部位を組
み込むよう、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）の方法論
により修飾した。ＰＣＲ処置に使用したオリゴヌクレオ
チドプライマーは：５’プライマー（ＥＨ８７）が
５’−ＴＣＧＡＴＣＧＡＡＧＣＴＴＧＣＣＧＣＣＡＣＣ
ＡＴＧＧＣＧＡＴＧＡＡＡＧＣ−３’（配列番号１）、
３’プライマー（ＥＨ８８）が ５’−ＡＧＣＴＡＧＣ
ＣＴＣＧＡＧＣＡＧＡＴＴＡＣＡＧＴＴＴＡＡＴＧ−
３’（配列番号２）であった。得られたＰＣＲ産物を制
限酵素HindIIIおよびXho Iで切断し、そしてHind IIIお
よびXho Iで切断したｐブルースクリプト II ＳＫ+
（ストラタジーン クローニング システムズ(Stratag
ene Cloning Systems)、ラホヤ、カリフォルニア州）中
にクローニングしてｐＳＫ-ＨＸ２を得た。
【００８８】アミノ酸４（Ａｌａ4→Ｖａｌ）（ＧＣＧ
→ＧＴＧ）およびアミノ酸113（Ｉｌｅ113→Ｔｈｒ）
（ＡＴＴ→ＡＣＴ）でのＦＡＬＳ点突然変異は、ホー(H
o)ら、ジーン(Gene) 77:51-59 (1989)により記述される
オーバーラップ伸長ＰＣＲ突然変異誘発法を使用して、
ＳＯＤ-１のｃＤＮＡクローンｐＳＫ-ＨＸ２内に導入し
た。Ｉｌｅ113→Ｔｈｒ変異体は以下のように構築し
た。すなわち、５’のＰＣＲ断片は、ヌクレオチド配列
５’−ＴＴＡＡＴＣＣＴＣＡＣＴＣＴＡＡＧＡＡＡＣ−
３’（配列番号３）（ＳＯＤ-１のｃＤＮＡの第193から
213ヌクレオチド、第１番はＡＴＧ開始コドンのＡ）か
ら成る５’プライマーＥＨ７８、およびヌクレオチド配
列５’−ＴＴＧＴＡＣＧＧＣＣＡＧＴＧＡＴＧＧＡＡＴ
ＧＣＴ−３’（配列番号４）（第351から328ヌクレオチ
ド）から成る３’プライマーＥＨ８４を使用して創製
し、３’のＰＣＲ断片は、ヌクレオチド配列５’−ＡＧ
ＣＡＴＴＣＣＡＴＣＡＣＴＧＧＣＣＧＴＡＣＡＡ−３’
（配列番号５）（第328から351ヌクレオチド）から成る
５’プライマーＥＨ８３、およびヌクレオチド配列５’
−ＴＡＡＴＡＣＧＡＣＴＣＡＣＴＡＴＡＧＧＧ−３’
（配列番号６）ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ（ｐブルースク
リプト II ＳＫ+の第626から645ヌクレオチド）から
成る３’プライマーＥＨ４２を使用して構築した。５’
および３’のＰＣＲ断片双方の50ナノグラムを第二段階
のＰＣＲ反応で組み合わせ、そしてプライマーＥＨ７８
およびＥＨ４２を使用して増幅した。このＰＣＲ産物を
Bal IおよびXhoIで切断しそしてBal IおよびXho Iで切
断したｐＳＫ-ＨＸ２中にクローニングし、かように本
来の255bpのBal I／Xho I断片をＦＡＬＳ変異体断片で
置換した（クローンｐＳＫ-１１３）。
【００８９】Ａｌａ4→Ｖａｌ変異体は以下のように構
築した。すなわち、５’のＰＣＲ断片は、ヌクレオチド
配列５’−ＧＣＡＣＡＣＣＡＣＴＴＴＣＡＴＣＧＣＣＡ
ＴＧＧＴＧＧＣＧＧＣＡＡＧＣＴＴＣＧＡＴＣ−３’
（配列番号７）（＋21から−20ヌクレオチド）から成る
５’プライマーＥＨ１０５、およびヌクレオチド配列
５’−ＡＴＴＡＡＣＣＣＴＣＡＣＴＡＡＡＧＧＧＡ−
３’（配列番号８）（ｐブルースクリプト II ＳＫ+
の第792から773ヌクレオチド）から成る３’プライマー
ＥＨ４１を使用して創製した。３’のＰＣＲ断片は、ヌ
クレオチド配列５’−ＧＡＴＣＧＡＡＧＣＴＴＧＣＣＧ
ＣＣＡＣＣＡＴＧＧＣＧＡＴＧＡＡＡＧＴＧＧＴＧＴＧ
Ｃ−３’（配列番号９）（＋21から−20ヌクレオチド）
から成る５’プライマーＥＨ１０４、およびヌクレオチ
ド配列５’−ＣＴＴＣＡＧＴＴＡＡＴＣＣＴＧＴＡＡ−
３’（配列番号１０）（第123から106ヌクレオチド）か
ら成る３’プライマーＥＨ１０３を使用して創製した。
上のように、５’および３’のＰＣＲ断片双方の50ngを
第二段階のＰＣＲ反応で組み合わせ、そしてプライマー
ＥＨ４１およびＥＨ１０３を使用して増幅した。このＰ
ＣＲ産物をHind IIIおよびRsr IIで切断しそしてHind I
IIおよびRsr IIで切断したｐＳＫ-ＨＸ２中にクローニ
ングし、かように本来の51bpのHind III／Rsr II断片を
ＦＡＬＳ変異体断片で置換した（クローンｐＳＫ-Ａ４
Ｖ）。上に記述される全ＰＣＲ産物はシークェナーゼ法
（ＵＳ バイオケミカル(US Biochemical)、クリーヴラ
ンド、オハイオ州）を使用して配列を決定し、変異の存
在およびいかなるＰＣＲの誤りの存在しないことを確認
した。変異、プライマーおよび制限酵素切断部位の位置
を明らかにするＳＯＤ-１遺伝子の図解が第４図に示さ
れる。
【００９０】ＳＯＤ-１のｃＤＮＡの発現ベクターは野
生型構築物（ｐＳＫ-ＨＸ２）および変異構築物（ｐＳ
Ｋ-１１３およびｐＳＫ-Ａ４Ｖ）をHind IIIおよびXho
Iで切断することにより構築した。ＳＯＤ-１のｃＤＮＡ
配列を含有する３個の得られた546bpの断片それぞれ
を、Hind IIIおよびXho Iで切断したｐｃＤＮＡ Ｉ／
Ｎｅｏ（インヴィトロジェン コープ(Invitrogen Cor
p.)、サンディエゴ、カリフォルニア州）中に別個にク
ローニングし、それぞれｐＣＭＶ-ＨＸ５（野生型ＳＯ
Ｄ）、ｐＣＭＶ-１１３（Ｉｌｅ113→Ｔｈｒ）、および
ｐＣＭＶ-Ａ４Ｖ（Ａｌａ4→Ｖａｌ）を得た。
【００９１】II．パート２ 最初の実験は、ＦＡＬＳ変異体ＳＯＤ-１タンパク質の
低減した安定性がＭＣＰが媒介するタンパク質分解性の
分解によるかどうかを決定するために行った。２９３と
称されるヒト腎細胞株（ヒト２９３細胞もしくは２９３
細胞）をアメリカン タイプ カルチャー コレクショ
ン(American Type Culture Collection)（ＡＴＣＣ）、
12301 パークローン ドライヴ(Parklawn Drive)、ロ
ックヴィル、メリーランド州、20853（ＡＴＣＣ ＃Ｃ
ＲＬ 1573）から得、そして4.6g/Lグルコース、10％熱
不活性化ウマ血清（ギブコ／ライフテクノロジー イン
ク(Gibco/Life Technology Inc.)、ゲイタースバーグ、
メリーランド州）を含むダルベッコ(Dulbecco)の修飾イ
ーグル(Eagle)培地中で増殖させた。ヒト２９３細胞は
５％ＣＯ2雰囲気中37℃で維持した。２９３細胞をリン
酸カルシウム法（チェン(Chen, C.)ら、バイオテクニク
ス(Biotechniques) 6:632 (1988)）を使用して一過性に
トランスフェクションした。ｐＣＭＶ-１１３ ＳＯＤ-
１発現ベクターを２９３細胞に導入し、そして24時間
後、細胞をいずれも５μMの濃度の化合物３４、化合物
１４もしくは化合物２４のいずれかと24時間インキュベ
ーションした。ＭＣＰおよび他のプロテアーゼの既知の
阻害性化合物をジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中で
可溶化した。他の２９３細胞培養系は同体積のＤＭＳＯ
とともにインキュベートするか、もしくはネガティブコ
ントロールとして培地のみの中に残した。
【００９２】試験化合物を受け入れるおよそ48時間前
に、５×105個の２９３細胞を36mmのプレートに植え付
け、そして５％ＣＯ2雰囲気中37℃で維持した。細胞を
ＭＣＰ阻害剤（化合物３４、同１４もしくは同２４）
と、もしくはネガティブコントロールとしてＤＭＳＯ
と、24時間インキュベーションした。細胞ライセート
は、凍結／融解サイクルによりおよそ75μlのリン酸緩
衝液処理生理的食塩水（ＰＢＳ）中で細胞を分解するこ
とにより調製した。細胞ライセートのタンパク質濃度を
ＢＣＡ法（ピアース(Pierce)、ロックフォード、イリノ
イ州）を使用して測定し、そして各サンプルの２ないし
2.5μgをトリス／グリシン／ＳＤＳ（25mMトリス／192m
Mグリシン／0.1％ＳＤＳ）緩衝液系を使用する４〜20％
ポリアクリルアミドゲル（ノヴェックス(Novex)、サン
ディエゴ、カリフォルニア州）上で電気泳動した。タン
パク質を電気溶出によりニトロセルロースフィルターに
転写し、そしてフィルターを30分間のブロット溶液（25
mMトリス緩衝液処理生理的食塩水（１×ＴＢＳ）中５％
粉乳）中でのインキュベーションによりブロッキングし
た。フィルターを一次抗体溶液（ブロット溶液で10,000
倍に希釈）に移し、そして２〜18時間インキュベートし
た。これらの研究で使用した一次抗体はＥ．コリ(E.col
i)で産生した精製マウスＳＯＤ-１（ヘイゼルトン リ
サーチ プロダクツ(Hazelton Research Products)、デ
ンバー、ペンシルバニア州）に対して出現させたポリク
ローナルウサギ抗血清であった。フィルターを１×ＴＢ
Ｓ中で５分間ずつ３度洗浄し、そして二次抗体溶液（ブ
ロット溶液で2,000倍に希釈）中で２時間インキュベー
トした。二次抗体はアルカリフォスファターゼに結合し
たヤギ抗ウサギＩgＧ（バイオラド(Bio-Rad)、リッチモ
ンド、カリフォルニア州）であった。フィルターを１×
ＴＢＳ中で５分間ずつ３度洗浄し、そして、商業的に入
手可能なアルカリフォスファターゼ検出試薬（バイオラ
ド(Bio Rad)、リッチモンド、カリフォルニア州）中で
の５〜60分間のインキュベーションによりアルカリフォ
スファターゼ活性について染色した。ＳＯＤ-１タンパ
ク質に対応する染色されたバンドをドキュゲル(DocuGe
l) Ｖ画像分析システムおよびＲＥＬＰスキャン ソフ
トウェア（スキャンアナリティクス(Scananalytics)、
ビレリカ、マサチューセッツ州）を使用して定量した。
ＳＯＤ-１のレベルはネガティブコントロールに関連す
る誘導の単位（すなわち、コントロールの単位で実験の
単位を割ったもの）として表した。細胞ライセートのイ
ムノブロット分析は、ＳＯＤ-１レベルがＭＣＰ阻害剤
の存在下でインキュベーションした３個のサンプルそれ
ぞれでコントロールのレベルに比較して若干上昇したこ
とを示した（第５図）。これらの結果は、本発明の化合
物によるＭＣＰ阻害がＩｌｅ113→Ｔｈｒ変異体中のＳ
ＯＤ-１タンパク質の増大した蓄積につながり、かつそ
れによってＦＡＬＳ変異を含有する細胞でのＳＯＤ-１
の低減したレベルを司るようにＭＣＰを関連させること
を示す。
【００９３】III．パート３ ＭＣＰ活性がＳＯＤ-１の代謝回転を司ることをさらに
示すため、研究を、野生型のマウスＳＯＤ-１もしくは
ＦＡＬＳ変異体タンパク質すなわちＡｌａ4の代りにＶ
ａｌおよびＩｌｅ113の代りにＴｈｒを安定に産生する
細胞株で行った。マウス本来のＳＯＤ-１および上で言
及された２種のＦＡＬＳ変異体ＳＯＤ-１タンパク質を
安定に発現する細胞株は、ＳＯＤ-１のｃＤＮＡ発現構
築物（上で記述される）での２９３細胞のリン酸カルシ
ウムトランスフェクション（チェン(Chen, C.)ら、バイ
オテクニクス(Biotechniques) 6:632 (1988)）、その後
の１mg/mlのＧ４１８（ジェネティシン［Geneticin］
（商標）、ギブコ／ライフテクノロジー インク(Gibco
/Life Technologies, Inc.)、ゲイタースバーグ、メリ
ーランド州）存在下での増殖によるネオマイシン耐性に
ついての選択により得た。細胞を３週間Ｇ４１８選択中
に維持し、その時点で薬剤選択を除去し、そしてそれぞ
れの形質転換された細胞タイプのＧ４１８耐性コロニー
をさらなる増殖のためプールした。化合物１４をこれら
の研究で利用した。
【００９４】指摘されるＳＯＤ-１アイソフォームを発
現する細胞株を様々な濃度の化合物１４と24時間インキ
ュベーションし、その時点でＳＯＤ-１レベルをイムノ
ブロットの濃度測定スキャンニングにより測定した。Ｓ
ＯＤ-１のレベルはネガティブコントロールからのサン
プルに関連する誘導の単位として表し（上のように）、
また、各データ点は３回の実験の平均である。化合物１
４の用量反応分析は、トランスフォーメーションされた
細胞のこのＭＣＰ阻害剤とのインキュベーションが、お
よそ20μMの濃度の化合物１４とインキュベーションし
たそれらの細胞で起こる最大の蓄積を伴うＳＯＤ-１タ
ンパク質レベルの大きな蓄積につながることを指摘した
（第６図）。さらに、ＳＯＤ-１の蓄積の大きさは様々
なＳＯＤタンパク質の推定される半減期に相関する。野
生型ＳＯＤ-１が最も安定であり、また、Ａｌａ4→Ｖａ
ｌが最も不安定である（ボーシェルト(Borchelt, D.R.)
ら、)ら、プロシーディングス オブ ナショナル ア
カデミー オブ サイエンス ＵＳＡ(Proc. Natl. Aca
d. Sci.)、91:8292-8296 (1994)）。これらのデータ
は、ＦＡＬＳ変異が、おそらく誤ったフォールディング
のため、およびＭＣＰによる分解に対する変異体の標的
のこれらのタンパク質に起因する構造変化の結果とし
て、当該ＳＯＤ-１を不安定化するという仮説と矛盾し
ない。これらの結果はまた、化合物１４が、ＳＯＤ-１
の分解におけるＭＣＰの役割をさらに支持する、野生型
ＳＯＤ-１タンパク質の代謝回転に対する統計学的に有
意の影響を有することを立証する。
【００９５】IV．パート４ ＳＯＤ-１の代謝回転でのＭＣＰ活性の特異性を立証す
る（そしてカルシウム活性化性プロテアーゼのカルパイ
ンおよびリソゾームのプロテアーゼのような他の主要な
タンパク質分解経路の可能性のある関与を排除する）た
め、２種の形質転換された細胞株（上に記述される、１
種は野生型タンパク質を、そして他方はＡｌａ4→Ｖａ
ｌ変異のあるＳＯＤ-１タンパク質を産生する）を様々
なプロテアーゼ阻害剤とともにインキュベーションする
実験を実行した。これらの阻害剤のそれぞれは独特のタ
ンパク質分解活性について特異的である。すなわち、化
合物１４はＭＣＰを阻害する；細胞浸透性の「カルパイ
ン」阻害剤（カルパインはシステインプロテアーゼであ
る）の「カルペプチン」（ノヴァバイオケム ＵＳＡ(N
ovabiochem USA)、ラホヤ、カリフォルニア州、カタロ
グ番号03-34-0051；ＣＢＺ-Ｌｅｕ-Ｎｌｅ-アルデヒ
ド、Biochem. Biophys. Res. Comm. (1988) 153:120
1）；およびＤＫ-３（エンザイム システムズ プロダ
クツ(Enzyme SystemsProducts)、ダブリン、カリフォル
ニア州；ＣＢＺ-Ｐｈｅ-Ａｌａ-ＣＨＮ2）はリソゾーム
のプロテアーゼの活性を阻害する。加えて、細胞を化合
物１６とともにインキュベーションした。この化合物は
本発明のとりわけ好まれる化合物すなわち化合物１４に
比較してより強力でないＭＣＰ阻害剤である。指摘され
るＳＯＤ-１アイソフォームを発現する細胞株を、以下
のプロテアーゼ阻害剤、すなわち20μMの化合物１４、1
0μMのカルペプチン、５μMのＤＫ-３、20μMの化合物
１６、もしくはネガティブコントロールとしてのＤＭＳ
Ｏ、と24時間インキュベーションした。阻害剤との24時
間のインキュベーションの後、ＳＯＤ-１のレベルをイ
ムノブロットの濃度測定スキャンニングにより測定し
た。ＳＯＤ-１のレベルは上のように未処理のサンプル
に関連する誘導の単位として表す。各データ点は３回の
実験からの結果の平均である。
【００９６】結果は第７図に提示される。Ａｌａ4→Ｖ
ａｌ変異ＳＯＤ-１の代謝回転はＭＣＰ活性の作用であ
ること、および、好まれる化合物１４によるＭＣＰの特
異的阻害のみがＳＯＤ-１タンパク質の蓄積での大きな
（３倍）増大につながることが見られ得る。カルパイン
もしくはリソゾームのプロテアーゼの阻害剤とのインキ
ュベーションはＳＯＤ-１の代謝回転に評価できる影響
を有しなかった。さらに、化合物１４での処理は野生型
ＳＯＤ-１の蓄積のわずかな増大という、用量反応研究
でもまたすでに観察された知見に帰着した。一緒にする
と、これらの研究は、ＭＣＰ活性は形質転換された２９
３細胞株でのＳＯＤ-１代謝回転に決定的であること、
および、化合物１４によるＭＣＰ阻害が細胞内でのＳＯ
Ｄ-１タンパク質の上昇につながることを立証する。 阻害剤の合成 以下は本発明の化合物の調製の例示的合成経路を提供す
る。他の合成プロトコール、および以下の合成スキムの
修飾は、本開示を用意すれば当業者には容易に明らかと
なるであろう。
【００９７】本発明の阻害剤は、ザ ペプタイズ：アナ
リシス、シンテシス、バイオロジー(The Peptides: Ana
lysis, Synthesis, Biology)、第１巻 (1979)、グロス
(Gross)ら編、アカデミック プレス(Academic Press)
に記述される、および、以下の実施例８−１１に詳細に
記述される溶液相の技術を使用するよく知られた合成処
置により導入されうるアミド結合を組み込む。
【００９８】当該阻害剤は、実施例１４−３８に記述さ
れるように、断片： Ｒ1-(ＣＨ2)n-ＣＨ(Ｒ2)-ＣＯＯＨ および Ｈ2Ｎ-ＣＨ(Ｒ3)-ＣＯＮＨ−Ｒ4 の別個の合成および結合（結合処置Ｉ）により調製され
うる。
【００９９】あるいは、下の実施例３９−４２に記述さ
れるように、それらは断片： Ｒ1-(ＣＨ2)n-ＣＨ(Ｒ2)-ＣＯＮＨ-ＣＨ(Ｒ3)-ＣＯＯＨ
および Ｈ2Ｎ−Ｒ4 の別個の合成および結合（結合処置II）により調製され
うる。
【０１００】置換基Ｑが１個のアルデヒド基を含有する
場合（すなわちＨ2Ｎ-Ｒ4があるアミノ酸由来のアミノ
アルデヒド例えばＨ2Ｎ-ＣＨ(ＣＨ2Ｒ7）-ＣＨＯである
場合）、アセタール保護された必要なアミノアルデヒド
は、ガセック(Gacek)ら、テトラヘドロン(Tetrahedro
n)、30、4233 (1974)により記述されるように、もしく
は実施例１２に記述される処置により、合成しうる。結
合が完遂した後（結合処置ＩもしくはIIを介して）、ア
セタール保護基を実施例１１（方法Ｅ）に記述されるよ
うに除去して遊離のアルデヒド基を遊離させうる。
【０１０１】Ｑがメチルケトンまたはジアゾメチルケト
ン、ブロモメチルケトンもしくはクロロメチルケトンで
ある場合（すなわちＨ2Ｎ-Ｒ4がα-アミノ置換されたメ
チルケトンまたはあるアミノ酸由来のα-ジアゾメチル
ケトン、α-ブロモメチルケトンもしくはα-クロロメチ
ルケトンである場合）、結合処置IIはとりわけ都合がよ
い。クロロメチルケトンの塩酸塩は購入されうる（ベイ
ケム バイオサイエンス インク(Bachem Bioscience I
nc.)、キング オブ プルシア、ペンシルバニア州）
か、もしくは、その後にジアゾメチルケトンを生じるジ
アゾメタンとの反応が続くＢｏｃ保護されたアミノ酸の
混合無水カルボン酸への変換により調製され得る。ブロ
モメチルケトンおよびクロロメチルケトンは、ケトナー
(Kettner)ら、Arch. Biochem. Biophys. 162、56(197
4)、フィットカウ(Fittkau)、J. Prakt. Chem. 315、10
37 (1973)もしくは1995年６月15日に公表されたジンマ
ーマン(Zimmerman)ら、PCT WO 第95/15749号により記述
されるようなジアゾメチルケトンの臭化水素もしくは塩
化水素との反応により調製される。
【０１０２】対応するメチルケトン類は、ケトナー(Ket
tner)ら、米国特許第4,652,552号により記述されるよう
にクロロメチルケトンの水素化分解により調製されう
る。
【０１０３】Ｑがα-ジフルオロメチルケトンである場
合は、対応する１-アミノ-３，３-ジフルオロ-２-プロ
パノールは結合処置IIにより調製されかつ結合され得、
そして得られるジフルオロアルコールはトレイノール(T
rainor)とシュタイン(Stein)、米国特許第4,923,890号
により記述される処置によりジフルオロケトンに酸化さ
れ得る。
【０１０４】Ｑがトリフルオロメチルケトンである場合
（すなわちＨ2Ｎ-Ｒ4がアミノ酸由来のトリフルオロメ
チルケトン例えばＨ2Ｎ-ＣＨ(ＣＨ2-Ｒ7）-ＣＯＣＦ3で
ある）、必要なケトンはインペリアリ(Imperiali)とア
ベレス(Abeles)、バイオケミストリー(Biochemistry) 2
5、3760および補足ページ(1986)により記述されるよう
に調製されうる。
【０１０５】Ｑがあるアミノ酸由来のモノフルオロメチ
ルケトンである場合（すなわちＨ2Ｎ-Ｒ4がフルオロメ
チルケトン基を含有する場合例えばＨ2Ｎ-ＣＨ(ＣＨ2-
Ｒ7)-ＣＯＣＨ2Ｆ）、必要なケトンは、Ｂｏｃ保護され
たアミノ酸およびフルオロマロン酸ベンジルマグネシウ
ムを使用して、欧州特許出願EP第442,754号のパーマー
(Palmer)の処置により調製されうる。Ｂｏｃ保護基の除
去の後にアミンが結合処置IIを使用して結合され得る。
あるいは、モノフルロメチルケトンが実施例４２に記述
されるように対応するアルコールの酸化により調製され
得る。
【０１０６】Ｑがブロモアミノ酸誘導体である場合（す
なわちＱが-Ｂ(ＯＨ)2もしくはその環状エステル）、こ
の環状エステルは本質的にシェンヴィ(Shenvi)、米国特
許第4,537,773号により記述されるように調製され、そ
して、結合処置IIにより結合した後、場合によっては、
シェンヴィ(Shenvi)とケトナー(Kettner)により米国特
許第4,499,082号および同第5,187,157号に、ならびにジ
ャーナル オブ バイオロジカル ケミストリー(J. Bi
ol. Chem.) 259、15106 (1984)に記述されるように、遊
離ペプチドホウ素酸(boronic acid)に変換され得る。
【０１０７】Ｑがα-ジケトンもしくはα-ケトエステル
である場合（すなわちＱが-Ｃ(=Ｏ)Ｃ(=Ｏ)Ｒ7もしくは
-Ｃ(=Ｏ)ＣＯ2Ｒ7）、必要なアミノジケトンもしくはα
-ケトエステルはアンジェラストロ(Angelastro)ら、J.
Med. Chem. 33、13 (1990)およびその中の引用文献によ
り記述されるように調製され得る。α-ケトエステルは
加水分解されるかもしくはアミド化され、対応するα-
ケト酸もしくはアミドを産生する。α-ケトアミドもま
た、ハルベソン(Harbeson)ら、J. Med. Chem.37、2918-
2929 (1994)の処置の修飾により、商業的に入手し得る
Ｂｏｃ保護されたアミノ酸から調製されうる。この後者
の非常に有用な処置では、Ｂｏｃ保護されたアミノ酸は
続けてＮ，Ｏ-ジメチルヒドロキシアミド、アルデヒ
ド、シアノヒドリン、α-ヒドロキシカルボン酸、およ
びα-ヒドロキシカルボキサミドに変換される：
【０１０８】
【化６】
【０１０９】ここでＲ1はＢｏｃ-ＮＨ-ＣＨ(ＣＨ2Ｒ7)-
である。
【０１１０】Ｂｏｃ基は酸性条件下で除去され、そして
中和後、遊離のアミノ残基が結合処置IIにおけるように
結合されてα−ヒドロキシカルボキサミドを生じる。こ
れはその後酸化されα−ケトカルボキサミド阻害剤を与
える：
【０１１１】
【化７】
【０１１２】実施例７ 方法Ａ：混合無水物法： スキム：
【０１１３】
【化８】
【０１１４】Ｘはフルオレニルメチルオキシカルボニル
（Ｆｍｏｃ）基もしくはｔ-ブチルオキシカルボニル
（Ｂｏｃ）基；Ｙはアセタールもしくはアミノアルデヒ
ドの他の保護基 ＡＡ1はアミノ酸 ＡＡ2はアミノアルデヒド Ｎ-メチルモルフォリン（ＮＭＭ）（１等量）を、テト
ラヒドロフラン（ＴＨＦ）中の保護されたアミノ酸の攪
拌した溶液に添加した。混合物を−15℃まで冷却し、ク
ロロギ酸イソブチル（ＩＢＣＦ）（1.1等量）で処理
し、そして10分間反応させた。その後、遊離塩基の形態
のアミノアルデヒド成分、その後にＮＭＭ（1.1等量、
酸塩の場合は2.2等量）を添加した。攪拌は−15℃で30
分間、そしてその後３〜４時間室温で進行した。反応混
合物を酢酸エチル（ＥｔＯＡｃ）150〜200ml中に溶解し
た。得られた溶液を水、５％炭酸水素ナトリウム（Ｎａ
ＨＣＯ3）、２％クエン酸水溶液、そして最後に水で、
連続的に洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウム（Ｎａ
2ＳＯ4）もしくは硫酸マグネシウム（ＭｇＳＯ4）で乾
燥し、溶媒を減圧下除去し、そしてかように得られる生
成物を石油エーテルと摩砕した。かように得られる固形
物のペプチドを濾別し、乾燥しそして特徴づけした。
【０１１５】実施例８ 方法Ｂ：Ｆｍｏｃ基の脱保護処置： スキム：
【０１１６】
【化９】
【０１１７】酢酸エチル（ＥｔＯＡｃ）中の30％ジメチ
ルホルムアミド（ＤＭＦ）混合物中のＦｍｏｃ保護され
たペプチド（0.2ないし４mmol）をジエチルアミン（Ｄ
ＥＡ）の50〜60倍過剰とともに室温で２時間処理した。
溶媒を30℃で減圧下に蒸発し、そして石油エーテルを残
渣に添加した。沈殿物が形成された場合はそれを濾過し
そして乾燥した。他の場合は、得られるガム状物質を石
油エーテルと繰り返し摩砕し、そしてこのガム状物質を
真空下に保存した。
【０１１８】実施例９ 方法Ｃ：ペプチドへのキャッピング基もしくはアミノ酸
の添加： スキム：
【０１１９】
【化１０】
【０１２０】キャッピング基（遊離カルボン酸として）
もしくは保護されたアミノ酸（１等量）、ヘキサフルオ
ロリン酸ベンゾトリアゾール-１-イロキシ-トリス-（ジ
メチルアミノ）-ホスホニウム（ＢＯＰ）（1.1等量）お
よび１-ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）
（１等量）をＤＭＦ５mLに溶解しその後ＮＭＭ（2.2等
量）を加えた。５分後、ペプチドもしくはカルボキシル
基を保護されたアミノ酸の脱保護した塩基性成分を添加
し、ｐＨを８に調整しそして混合物を３〜４時間攪拌し
た。それをその後ＥｔＯＡｃ150〜300mLで希釈し、そし
て水、２％炭酸水素ナトリウム、水、２％クエン酸およ
び水で連続的に抽出した。有機層を乾燥しそして乾固ま
で蒸発させ、キャッピングされたもしくはＮ-保護され
たペプチドを得た。
【０１２１】実施例１０ 方法Ｄ：カルボベンジルオキシ（ＣＢＺ−）基の除去の
処置： 酢酸エチル（15mL）中のＣＢＺ保護されたペプチドもし
くはアミノ酸誘導体（１g）の溶液を0.2gの炭素上のＰ
ｄ／Ｃ（50重量％の水を含有する炭素上の10％Ｐｄ）と
混合し、そして40psiで４時間水素化した。溶液をセラ
イト[Celite]（商標）（ケイソウ土）を通して濾過し、
そして乾固まで蒸発させ、未保護のペプチドもしくはア
ミノ酸の誘導体を得た。
【０１２２】実施例１１ 方法Ｅ：アセタールのアルデヒドへの変換 ３mLのＴＨＦ中のペプチドアセタール（１等量）溶液を
３mLの塩酸水溶液（２M）と混合し、そして0.5〜２時間
攪拌した。溶媒を蒸発により除去し、そして最終残渣を
水で希釈しそして凍結乾燥してペプチドアルデヒドを得
た。
【０１２３】実施例１２ 方法Ｆ：ロイシナールジエチルアセタールの調製：
【０１２４】
【化１１】
【０１２５】段階１：ＮＭＭ（10mL）をＴＨＦ250mL中
のＣＢＺ-Ｌｅｕ-ＯＨ（25g、93mmol）の溶液に添加し
た。この溶液を−15℃に冷却し、クロロギ酸イソブチル
（ＩＢＣＦ）13mLで処理し、そして10分間反応させた。
その後、ＤＭＦ40ml中の塩酸Ｎ，Ｏ-ジメチルヒドロキ
シルアミン（9.36g、96mmol）の懸濁液およびＮＭＭ10m
lを添加した。攪拌４時間後、混合物を400mlのＥｔＯＡ
ｃで希釈し、そしてこの溶液を水、５％炭酸水素ナトリ
ウム溶液、水、２％クエン酸および水で連続的に洗浄し
た。有機層を硫酸マグネシウムで乾燥しそして蒸発して
無色油状物質19.0gを得た。 段階２：段階１よりの油状物質（19g）のエーテル200mL
中の溶液を−78℃まで冷却し、そして水素化アルミニウ
ムリチウム（ＬｉＡｌＨ4）のエーテル溶液（1.0M）120
mLを45分間にわたり滴下した。当該溶液を30分間攪拌
し、そして１M硫酸水素カリウム（ＫＨＳＯ4）200mLを
窒素雰囲気下に滴下した。有機層を分離し、硫酸水素カ
リウム（１M）溶液で洗浄し、乾燥（硫酸マグネシウ
ム）しそして蒸発して無色液体（ＣＢＺ-Ｌｅｕ-Ｈ）を
得た。 段階３：オルトギ酸トリエチル104mLを、無水エタノー
ル（ＥｔＯＨ）100mL中のＣＢＺ-Ｌｅｕ-Ｈ（12g）およ
びｐ−トルエンスルホン酸（0.9g）の溶液に30分間かけ
て添加した。混合物を30分間攪拌し、そしてその後蒸発
しかつエーテル500mLで希釈した。エーテル層を炭酸水
素ナトリウムおよび塩化ナトリウムの飽和溶液で連続的
に洗浄した。黄味がかった茶色の半固形物を冷ヘキサン
から再結晶し、ＣＢＺ-ロイシナールジエチルアセター
ルの灰白色針状晶を得た。1Ｈ ＮＭＲ（300ＭHz、ＣＤ
Ｃｌ3）δ：7.28（ｍ、５Ｈ）、5.03（ｓ、２Ｈ）、4.7
7（ｄ、１Ｈ）、4.27（ｄ、１Ｈ）、3.8（ｍ、１Ｈ）、
3.63（ｍ、２Ｈ）、3.43（ｍ、２Ｈ）、1.6（ｄｄ、２
Ｈ）、1.30（ｍ、２Ｈ）、1.12（ｍ、６Ｈ）、0.83
（ｄ、６Ｈ）。 段階４：段階３よりの生成物（14.8g）を方法Ｄを使用
して2.5gのＰｄ／Ｃで水素化し、4.09gのロイシナール
ジエチルアセタールを油状物質として得た。1Ｈ ＮＭ
Ｒ（300ＭHz、ＣＤＣｌ3）δ：4.16（ｄ、１Ｈ）、3.70
（ｍ、３Ｈ）、3.75（ｍ、２Ｈ）、2.87（ｍ、１Ｈ）、
1.78（ｍ、１Ｈ）、1.33（ｍ、２Ｈ）、1.23（ｍ、６
Ｈ）、0.935（ｄｄ、６Ｈ）。
【０１２６】実施例１３ 方法Ｇ：Ｐ３模倣物(mimics)の合成（命名法については
シェヒター(Schechter,I.)とバーガー(Burger, A.) (19
67) Biochem. Biophys. Res. Commun. 27:157-162 を参
照）
【０１２７】
【化１２】
【０１２８】段階１：シクロペンタン酢酸ベンジルの調
製 ベンゼン（60mL）中のシクロペンチル酢酸（10.02g、7
8.2mmol）、ベンジルアルコール（8.45g、78.2mmol）お
よびｐ-トルエンスルホン酸一水和物（1.48g、78.2mmo
l）の混合物をディーン・シュタルク(Dean-Stark)の水
分離器を使用して２時間還流した。冷却後、ベンゼンを
除去し、そして混合物をエーテル（50mL）で希釈しさら
に炭酸水素ナトリウム飽和溶液、飽和食塩水溶液で逐次
洗浄し、乾燥しかつ蒸発して当該化合物（15.40g）を油
状物質として得た。1Ｈ ＮＭＲ（300ＭHz、ＣＤＣ
ｌ3）δ：7.35（ｍ、５Ｈ）、5.10（ｓ、２Ｈ）、2.40
（ｄ、Ｊ＝８Hz、２Ｈ）、2.26（ｍ、１Ｈ）、1.81
（ｍ、２Ｈ）、1.6（ｍ、４Ｈ）、1.18（ｍ、２Ｈ）。 段階２：２-シクロペンチル-10-ヨウ化デカン酸ベンジ
ルの調製 ＴＨＦ（20mL）およびヘキサン（８mL）の混合物中のジ
イソプロピルアミドリチウム（20mmol）の冷却した（−
78℃）溶液（対応するジイソプロピルアミンおよびｎ-
ブチルリチウムよりインジツに得られる）に、無水ＴＨ
Ｆ（10mL）中の段階１で得た化合物（3.96g、18mmol）
をゆっくりと添加した。混合物を30分間攪拌し、そして
ヘキサメチルホスホルアミド（3.50g，20mmol）中の
１，８-ジヨウ化オクタン（7.19g、20mmol）を添加し
た。この混合物を−78℃で30分間攪拌し、２時間かけて
ゆっくりと０℃にし、そして12％塩化ナトリウム水溶液
50mLの注意深い添加により反応を停止した。混合物をエ
ーテルで抽出し、食塩水で洗浄し、乾燥しそして溶媒を
蒸発した。粗生成物を、溶出液としてヘキサンないしヘ
キサン中１％ＥｔＯＡｃを使用するシリカでのフラッシ
ュクロマトグラフィーにより油状物質（3.23g）まで精
製した。1Ｈ ＮＭＲ（300ＭHz、ＣＤＣｌ3）δ：7.35
（ｍ、５Ｈ）、5.15（ｓ、２Ｈ）、3.20（ｔ、８Hz、２
Ｈ）、2.20（ｍ、１Ｈ）、1.2−1.8（ｍ、２２Ｈ）。 段階３：10-シアノ-２-シクロペンチルデカン酸ベンジ
ルの調製 15mLの無水ＤＭＳＯ中の段階２よりのヨウ化エステル
（3.99g、8.7mmol）およびシアン化ナトリウム（0.47
g、9.6mmol）の混合物を70〜75℃で30分間加熱した。冷
却後、反応混合物を氷（約40g）上に注ぎ、エーテル中
に抽出しそして水および飽和食塩水で逐次洗浄した。有
機層を濃縮し油状物質（2.89g）を得た。1ＨＮＭＲ（30
0ＭHz、ＣＤＣｌ3）δ：7.35（ｍ、５Ｈ）、5.15（ｓ、
２Ｈ）、2.30（ｔ、８Hz、２Ｈ）、2.20（ｍ、１Ｈ）、
2.00（ｍ、１Ｈ）、1.3−1.8（ｍ、22Ｈ）。 段階４：10-Ｎ-フタルイミド-２-シクロペンチルデカン
酸ベンジルの調製 ８mLのＤＭＦ中の段階２よりの化合物（1.21g、2.6mmo
l）およびフタルイミドカリウム（0.536g、３mmol）の
混合物を70〜75℃で30分間加熱した。冷却後、反応混合
物を氷（約40g）上に注ぎ、60mLのエーテル中に抽出し
た。合わせた有機層を水および飽和食塩水で洗浄し、そ
して無色油状物質（1.24g）まで濃縮した。1Ｈ ＮＭＲ
（300ＭHz、ＣＤＣｌ3）δ：7.85（ｍ、２Ｈ）、7.70
（ｍ、２Ｈ）、7.35（ｍ、５Ｈ）、5.10（ｓ、２Ｈ）、
3.65（ｔ、８Hz、２Ｈ）、2.20（ｍ、１Ｈ）、2.00
（ｍ、１Ｈ）、1.22−1.18（ｍ、２２Ｈ）。 段階５：10-シアノ-２-シクロペンチルデカン酸の調製 無水ＭｅＯＨ（35mL）中の段階３よりのシアノエステル
（2.89g、８mmol）および10％Ｐｄ−Ｃ（0.6g、デグサ
(DeGussa)、水分含量50％）の混合物を２時間水素化し
た（42〜26psi）。反応混合物をセライト［Celite］
（商標）パッドを通して濾過し、そして無色油状物質ま
で濃縮した。1Ｈ ＮＭＲ（300ＭHz、ＣＤＣｌ3）δ：
2.35（ｔ、８Hz、２Ｈ）、2.20（ｍ、１Ｈ）、2.00
（ｍ、１Ｈ）、1.3−1.9（ｍ、22Ｈ）。 段階６：２−シクロペンチル-10-Ｎ-フタルイミドデカ
ン酸の調製 段階５の処置に従い、段階４の生成物（0.41g）を表題
の化合物（0.31g）に変換した。1Ｈ ＮＭＲ（300ＭH
z、ＣＤＣｌ3）δ：7.85（ｍ、２Ｈ）、7.70（ｍ、２
Ｈ）、3.70（ｔ、８Hz、２Ｈ）、2.15（ｍ、１Ｈ）、1.
95（ｍ、１Ｈ）、1.10−1.85（ｍ、２２Ｈ）。 段階７：10-トリフルオロメタンスルホンアミド-２-シ
クロペンチル-デカン酸ベンジルエステルの調製
【０１２９】
【化１３】
【０１３０】メタノール（８mL）中の段階４よりのエス
テル（0.874g、1.7mmol）およびヒドラジン一水和物
（0.425g、0.41mL、8.5mmol）の混合物を還流下に30分
間加熱し、濃縮し、そして残渣をエーテルで摩砕して白
色沈殿物を得、これを濾別した。濾液を濃縮して油状物
質（0.540g）を得た。この油状物質を−10℃に冷却した
ジクロロメタン（８mL）に溶解し、そしてこれにトリエ
チルアミン（0.324mL）その後トリフルオロメタンスル
ホニルクロリド（0.25mL）を添加した。温度を１時間に
わたってゆっくりと室温にした。反応混合物をその後
水、２％塩酸、水および飽和食塩水で洗浄した。有機層
を油状物質まで濃縮し、そして、溶出液としてヘキサン
中10％ＥｔＯＡｃを使用するシリカゲルでのフラッシュ
クロマトグラフィーにより精製し、10-トリフルオロメ
タンスルホンアミド-２-シクロペンチル-デカン酸ベン
ジルエステルを油状物質（0.25g）として得た。1Ｈ Ｎ
ＭＲ（300ＭHz、ＣＤＣｌ3）δ：7.35（ｍ、５Ｈ）、5.
15（ｓ、ブロード、１Ｈ）、5.10（ｓ、２Ｈ）、3.25
（ｍ、１Ｈ）、2.20（ｍ、１Ｈ）、2.00（ｍ、１Ｈ）、
1.10−1.7（ｍ、22Ｈ）。 段階８：２-シクロペンチル-10-（トリフルオロメタン
スルホンアミド）-デカン酸の調製 段階５で記述されるのと同じ処置に従い、段階７より得
た化合物（0.25g）を表題の化合物（0.20g）に油状物質
として変換した。1Ｈ ＮＭＲ（300ＭHz、ＣＤＣｌ3）
δ：6.60−5.60（ｂ、１Ｈ）、3.30（ｄ、８Hz、２
Ｈ）、2.15（ｍ、１Ｈ）、1.90（ｍ、１Ｈ）、1.1−1.8
（ｍ、２２Ｈ）。
【０１３１】
【化１４】
【０１３２】段階９：８-ヨウ化カプリル酸ｔ-ブチルの
調製 表題の化合物を、段階２の化合物について記述されるよ
うな処置に従い、酢酸ｔ-ブチル（1.16g）および１，６
-ジヨウ化ヘキサン（4.06g）から油状物質（2.13g）と
して合成した。1Ｈ ＮＭＲ（300ＭHz、ＣＤＣｌ3）
δ：3.20（ｔ、８Hz、２Ｈ）、2.20（ｔ、８Hz、２
Ｈ）、1.75−1.85（ｍ、２Ｈ）、1.55−1.65（ｍ、２
Ｈ）、1.45（ｓ、９Ｈ）、1.25−1.43（ｍ、６Ｈ）。 段階１０：２-シクロペンチルデカン-１，10-ジオン酸-
１-ベンジル-10-ｔ-ブチルエステルの調製 段階２に記述されるような処置を使用し、段階１よりの
エステル（6.92g）および段階９よりのヨウ化エステル
（11.37g）を反応させて表題の化合物（7.44g）の油状
物質を得た。1Ｈ ＮＭＲ（300ＭHz、ＣＤＣｌ3）δ：
7.35（ｍ、５Ｈ）、5.10（ｓ、２Ｈ）、2.20（ｍ、３
Ｈ）、2.00（ｍ、１Ｈ）、1.45（ｓ、９Ｈ）、1.0−1.9
（ｍ、20Ｈ） 段階１１：２-シクロペンチルデカン-１，10-ジオン酸-
１-ベンジル-10-メチルエステルの調製 段階１０よりのジエステル（2.86g、７mmol）のジクロ
ロメタン（30mL）溶液および90％ＴＦＡ10mLを30分間攪
拌した。蒸発の後得られる生成物をジクロロメタン（10
mL）およびメタノール（６mL）の混合物中に溶解した。
当該溶液を−20℃で攪拌し、そしてそれに塩化チオニル
（６mL）を２時間かけてゆっくりと添加した。溶媒を蒸
発し、そして残渣をジエチルエーテル（20mL）に溶解し
た。有機層を飽和炭酸水素ナトリウム溶液、水および食
塩水で逐次洗浄し、乾燥し、蒸発しそしてシリカゲル上
でフラッシュクロマトグラフィーし（溶出液：２％Ｅｔ
ＯＡｃ−ヘキサン）、生成物を油状物質（2.05g）とし
てもたらした。1Ｈ ＮＭＲ（300ＭHz、ＣＤＣｌ3）
δ：7.35（ｍ、５Ｈ）、5.10（ｓ、２Ｈ）、3.65（ｓ、
３Ｈ）、2.30（ｔ、８Hz、２Ｈ）、2.20（ｍ、１Ｈ）、
2.00（ｍ、１Ｈ）、1.10−1.90（ｍ、10Ｈ）。 段階１２：２-シクロペンチルデカン-１，10-ジオン酸-
10-メチルエステルの調製 段階５に記述されるような処置を使用し、段階１１より
の化合物（4.96g）を表題の化合物（3.66g）に油状物質
として変換した。1Ｈ ＮＭＲ（300ＭHz、ＣＤＣｌ3）
δ：3.65（ｓ、３Ｈ）、2.30（ｔ、８Hz、２Ｈ）、2.15
（ｍ、１Ｈ）、2.00（ｍ、１Ｈ）、1.10−1.19（ｍ、20
Ｈ）。 段階１３：６-シアノヘキサン-１-スルフィン酸ナトリ
ウム塩の調製
【０１３３】
【化１５】
【０１３４】水冷却管、メカニカルスターラーおよび滴
下ロートを取りつけた三ツ口フラスコ中、95％エタノー
ル中75mL中の１-ブロモ-６-シアノヘキサン（8.04g、4
2.3mmol）溶液を置いた。混合物を還流まで加熱し、そ
してそれに水50mL中の亜硫酸ナトリウム（8.00g、63.5m
mol）溶液を30分間かけてゆっくりと添加した。この混
合物を２時間加熱し、そしてその後減圧下に濃縮した。
残渣を95％エタノール（200ml）に溶解し、沸騰するま
で加熱しそして濾過した。濾液を濃縮しそして氷浴中で
冷却した。沈殿物を濾過により収集しそして乾燥して白
色固形物3.00gを得た。さらに濃縮した母液は当該生成
物2.2gの別のバッチを産生した。1Ｈ ＮＭＲ（300ＭH
z、ＤＭＳＯ-ｄ6）δ：2.50（ｔ、Ｊ＝８Hz、２Ｈ）、
2.40（ｔ、８Hz、２Ｈ）、1.55（ｍ、４Ｈ）、1.3
（ｍ、４Ｈ）。 段階１４：６-シアノヘキサン-１-塩化スルホニルの調
製 段階１３よりの生成物（0.340g、1.6mmol）、塩化チオ
ニル(0.95g、８mmol）および１滴のＤＭＦの混合物を75
〜80℃で30分間加熱した。冷却後、溶媒を除去し、そし
て残渣を氷水（５mL）で処理した。有機層をエーテル30
mL中に抽出し、そして合わせた有機層を３％炭酸水素ナ
トリウム溶液および水で洗浄し、乾燥（硫酸マグネシウ
ム）しそして濾過した。濾液を活性炭（ダルコ(Darc
o)）で処理し、濾過しそして濃縮して、さらなる精製な
しに使用される無色油状物質（0.240g）を得た。
【０１３５】実施例１４−３８は第５表中に列挙される
ＭＣＰ阻害剤の合成を記述する。対応する精製条件は第
６表中に列挙される。
【０１３６】
【表５】
【０１３７】
【表６】
【０１３８】
【表７】
【０１３９】
【表８】
【０１４０】
【表９】
【０１４１】
【表１０】
【０１４２】実施例１４ 10-シアノ-２-シクロペンチルデカノイル-Ｎg-ニトロ-
Ｌ-アルギニル-Ｌ-ロイシナール
【０１４３】
【化１６】
【０１４４】段階１：フルオレニルメチルオキシカルボ
ニルＮg-ニトロ-Ｌ-アルギニル-Ｌ-ロイシナールジエチ
ルアセタール Ｆｍｏｃ-Ａｒｇ(ＮＯ2)-ＯＨ（4.41g、10mmol）を方法
Ａ（実施例７）に従い、1.29mLのＩＢＣＦ、2.2mLのＮ
ＭＭおよび10mLのＴＨＦ（実施例７の方法ＡでのＤＭＦ
の代わりに）を使用してＬｅｕ-アセタール（1.89g、10
mmol）と結合した。粗ペプチドを無定形の固体として得
た。1Ｈ ＮＭＲ（300ＭHz、ＣＤＣｌ3）δ：7.75
（ｄ、２Ｈ）、7.55（ｄ、２Ｈ）、7.4（ｍ、２Ｈ）、
7.29（ｍ、２Ｈ）、6.21（ｄ、１Ｈ）、5.91（ｄ、１
Ｈ）、4.30（ｍ、５Ｈ）、3.66（ｍ、３Ｈ）、3.63
（ｄ、２Ｈ）、3.32（ｍ、２Ｈ）、1.72（ｍ、４Ｈ）、
1.29（ｍ、２Ｈ）、1.17（ｂ、６Ｈ）、0.89（ｍ、６
Ｈ）。 段階２：Ｎg-ニトロ-Ｌ-アルギニル-Ｌ-ロイシナールジ
エチルアセタール Ｆｍｏｃ基を、段階１よりの生成物3.5gから脱保護法Ｂ
（実施例８）を使用して除去した。遊離塩基（2.5g）を
半固形物として得た。1Ｈ ＮＭＲ（300ＭHz、ＤＭＳＯ
-ｄ6）δ：8.6（ｂ、１Ｈ）、7.61（ｄ、１Ｈ）、4.27
（ｄ、１Ｈ）、3.90（ｍ、１Ｈ）、3.59（ｍ、１Ｈ）、
3.45（ｍ、４Ｈ）、3.14（ｍ、２Ｈ）、1.54（ｍ、４
Ｈ）、1.33（ｍ、３Ｈ）、1.10（ｔｔ、６Ｈ）、0.83
（ｄｄ、６Ｈ）。 段階３：10-シアノ-２-シクロペンチル-デカノイル-Ｎg
-ニトロ-Ｌ-アルギニル-Ｌ-ロイシナールジエチルアセ
タール 方法Ｃ（実施例９）に従い、ＤＭＦ16mL中の方法Ｇより
の10-シアノ-２-シクロペンチル-デカン酸（２g、7.5mm
ol）を、ＢＯＰ（3.34g、7.5mmol）およびＨＯＢｔ（1.
01g、7.5mmol）を使用して段階２の生成物（2.15g、5.5
mmol）と処理し、粗ペプチド（3.85g）を薄黄色固体と
して得た。1Ｈ ＮＭＲ（300ＭHz、ＤＭＳＯ-ｄ6）δ：
8.31（ｂｄ、１Ｈ）、8.0（ｂｄ、１Ｈ）、7.83（ｄ、
１Ｈ）、4.34（ｍ、１Ｈ）、4.24（ｄ、１Ｈ）、3.91
（ｍ、１Ｈ）、3.56（ｍ、４Ｈ）、3.43（ｍ、２Ｈ）、
3.16（ｍ、２Ｈ）、2.47（ｔ、３Ｈ）、2.03（ｍ、１
Ｈ）、1.76（ｍ、２Ｈ）、1.15−2.0（ｍ、25Ｈ）、1.0
7（ｍ、６Ｈ）、0.81（ｄ、６Ｈ）。 段階４：30％ＴＦＡを含有するアセトニトリル（ＡＣ
Ｎ）10mL中の段階３の生成物（0.2g）の溶液を１時間攪
拌し、そして溶媒を蒸発し、そして化合物１４をジエチ
ルエーテルを使用して沈殿させた。ＨＰＬＣ精製条件は
第６表中に示す。1Ｈ ＮＭＲ（300ＭHz、ＤＭＳＯ-
ｄ6）δ：9.38（ｓ、１Ｈ）、8.56（ｂ、１Ｈ）、8.3
（ｄ、１Ｈ）、7.99（ｄｄ、１Ｈ）、4.38（ｍ、１
Ｈ）、4.17（ｍ、１Ｈ）、3.37（ｍ、４Ｈ）、3.17
（ｍ、２Ｈ）、2.26（ｔ、３Ｈ）、1.0−2.0（ｍ、27
Ｈ）、0.86（ｄｄ、６Ｈ）。
【０１４５】実施例１５ 10-シアノ-２-シクロペンチル-デカノイル-Ｎg-（２，
２，５，７，８-ペンタメチルクロマン-６-スルホニ
ル）-Ｌ-アルギニル-Ｌ-ロイシナール
【０１４６】
【化１７】
【０１４７】段階１：10-シアノ-２-シクロペンチル-デ
カノイル-Ｎg-（２，２，５，７，８-ペンタメチルクロ
マン-６-スルホニル）-Ｌ-アルギニル-Ｌ-ロイシナール
ジエチルアセタール 方法Ｃ（実施例９）に従い、10-シアノ-２-シクロペン
チル-デカン酸（２mmol、実施例１３の方法Ｇ中の段階
５より）を、Ｎg-（２，２，５，７，８-ペンタメチル
クロマン-６-スルホニル）-Ｌ-アルギニル-Ｌ-ロイシナ
ールジエチルアセタール（1.8mmol、化合物１４中の段
階２から）と結合し、当該化合物を固形物として得た。 段階２：10-シアノ-２-シクロペンチル-デカノイル-Ｎg
-（２，２，５，７，８-ペンタメチルクロマン-６-スル
ホニル）-Ｌ-アルギニル-Ｌ-ロイシナール 方法Ｅ（実施例１１）に従い、段階１よりの生成物（0.
3g）を化合物１５（0.2g）に変換しそしてＨＰＬＣによ
り精製した。1Ｈ ＮＭＲ（300ＭHz、ＤＭＳＯ-ｄ6）
δ：9.38（ｓ、１Ｈ）、8.23（ｄ、１Ｈ）、7.8（ｓ、
１Ｈ）、7.72（ｄ、１Ｈ）、7.49（ｔ、１Ｈ）、7.48
（ｓ、１Ｈ）、4.34（ｍ、１Ｈ）、4.14（ｍ、１Ｈ）、
3.05（ｍ、２Ｈ）、2.60（ｔ、２Ｈ）、2.50（ｓ、３
Ｈ）、2.46（ｓ、３Ｈ）、2.25（ｍ、４Ｈ）、2.00
（ｓ、３Ｈ）、1.74（ｔ、２Ｈ）、1.6−1.0（ｍ、25
Ｈ）、1.13（ｓ、６Ｈ）、0.82（ｄｄ、６Ｈ）。
【０１４８】実施例１６ 10-シアノ-２-シクロペンチル-デカノイル-Ｎg-ニトロ-
Ｌ-アルギニル-Ｌ-ロイシナールセミカルバゾン
【０１４９】
【化１８】
【０１５０】塩酸セミカルバジド（0.20mmol）、酢酸ナ
トリウム（0.3mmol）および水（0.5mL）をエタノール4.
5mL中の化合物１４（0.050g、0.089mmol）の溶液に添加
しかつ室温で一夜攪拌した。溶媒を除去しそして得られ
る化合物１６を第６表中に指摘されるようにＨＰＬＣに
より精製した。1Ｈ ＮＭＲ（300ＭHz、ＤＭＳＯ-ｄ6）
δ：9.91（ｓ、１Ｈ）、8.51（ｓ、２Ｈ）、8.04（ｄ、
１Ｈ）、7.95（ｄ、１Ｈ）、7.40（ｓ、１Ｈ）、7.09
（ｄ、１Ｈ）、6.29（ｓ、２Ｈ）、4.44（ｍ、１Ｈ）、
4.33（ｍ、１Ｈ）、3.16（ｓ、２Ｈ）、2.08−1.00
（ｍ、33Ｈ）、0.87（ｄｄ、６Ｈ）。
【０１５１】実施例１７ 10-シアノ-２-シクロペンチル-デカノイル-Ｎg-ニトロ-
Ｌ-アルギニル-Ｌ-ロイシナールオキシム
【０１５２】
【化１９】
【０１５３】塩酸ヒドロキシルアミン（0.037g、0.534m
mol）を、ピリジン（0.175g、2.2mmol）中の実施例１４
の段階４の生成物（0.05g、0.089mmol）の溶液に室温で
そしてその後80℃で30分添加した。生成物を第６表中に
指摘されるようにＨＰＬＣにより精製した。
【０１５４】実施例１８ 10-シアノ-２-シクロペンチル-デカノイル-Ｎg-ニトロ-
Ｌ-アルギニル-Ｌ-ロイシナール-Ｏ-メチルオキシム
【０１５５】
【化２０】
【０１５６】実施例１７の処置に従い、化合物１８を、
塩酸Ｏ-メチルヒドロキシルアミン（0.031g、0.38mmo
l）を使用して調製し、そして第６表中に指摘されるよ
うにＨＰＬＣにより２個のピークの混合物として単離し
た。
【０１５７】実施例１９ 10-シアノ-２-シクロペンチル-デカノイル-Ｎg-ニトロ-
Ｌ-アルギニル-Ｌ-ロイシナール-Ｏ-ベンジルオキシム
【０１５８】
【化２１】
【０１５９】実施例１７の調製でのような処置に従い、
化合物１９を、化合物１４（0.05g、0.089mmol）、塩酸
ヒドロキルシアミンＯ-ベンジル（0.043g、0.267mmol）
およびピリジン（0.092mL、1.14mmol）を使用して作成
した。当該化合物はＨＰＬＣ精製で２個のピークとして
分離された。
【０１６０】実施例２０ ９-メトキシカルボニル-２-シクロペンチル-ノナノイル
-Ｎg-（２，２，５，７，８-ペンタメチルクロマン-６-
スルホニル）-Ｌ-アルギニル-Ｌ-ロイシナール
【０１６１】
【化２２】
【０１６２】段階１：Ｆｍｏｃ-Ｎg-（２，２，５，
７，８-ペンタメチルクロマン-６-スルホニル）-Ｌ-ア
ルギニル-Ｌ-ロイシナールジエチルアセタール 方法Ｃ（実施例９）に従い、Ｆｍｏｃ-Ｎg-（２，２，
５，７，８-ペンタメチルクロマン-６-スルホニル）-Ｌ
-アルギニン（3.31g、５mmol）を、ＤＭＦ12mL中のＢＯ
Ｐ（2.21g、５mmol）、ＨＯＢｔ（0.67g、５mmol）およ
びＮＭＭ（0.7mL）を使用してＬ-ロイシナールジエチル
アセタール（0.85g、実施例１２の方法Ｆより）と結合
しジペプチドアセタール（3.24g）を得た。1Ｈ ＮＭＲ
（300ＭHz、ＣＤＣｌ3）δ：7.89（ｓ、１Ｈ）、7.78
（ｄ、２Ｈ）、7.6（ｄ、２Ｈ）、7.4（ｔ、２Ｈ）、7.
31（ｔ、３Ｈ）、6.4（ｄ、２Ｈ）、5.92（ｄ、１
Ｈ）、4.58（ｍ、１Ｈ）、4.43（ｍ、１Ｈ）、4.35
（ｍ、３Ｈ）、3.69（ｍ、２Ｈ）、3.53（ｍ、２Ｈ）、
3.30（ｍ、２Ｈ）、2.6（ｔ、２Ｈ）、2.58（ｓ、６
Ｈ）、2.12（ｓ、３Ｈ）、1.80（ｔｔ、２Ｈ）、1.64
（ｍ、３Ｈ）、1.32（ｍ、10Ｈ）、1.18（ｑ、６Ｈ）、
0.89（ｔ、６Ｈ）。 段階２：Ｎg-（２，２，５，７，８-ペンタメチルクロ
マン-６-スルホニル）-Ｌ-アルギニル-Ｌ-ロイシナール 方法Ｂ（実施例８）に従い、Ｆｍｏｃ基を段階１よりの
生成物（1.6g）から除去して半固形物（1.3g）を得た。
1Ｈ ＮＭＲ（300ＭHz、ＤＭＳＯ-ｄ6）δ：7.6（ｄ、
１Ｈ）、6.76（ｂ、１Ｈ）、6.46（ｂ、１Ｈ）、4.27
（ｄ、１Ｈ）、3.9（ｍ、１Ｈ）、3.58（ｍ、１Ｈ）、
3.44（ｍ、４Ｈ）、3.11（ｔ、１Ｈ）、3.01（ｍ、２
Ｈ）、2.58（ｔ、２Ｈ）、2.47（ｓ、６Ｈ）、2.03
（ｓ、３Ｈ）、1.77（ｔ、２Ｈ）、1.5（ｍ、５Ｈ）、
1.26（ｓ、６Ｈ）、1.09（ｍ、６Ｈ）、0.83（ｄｄ、６
Ｈ）。 段階３：９-メトキシカルボニル-２-シクロペンチル-ノ
ナノイル-Ｎg-（２，２，５，７，８-ペンタメチルクロ
マン-６-スルホニル）-Ｌ-アルギニル-Ｌ-ロイシナール
ジエチルアセタール 方法Ｃ（実施例９）に従い、９-メトキシカルボニル-２
-シクロペンチル-ノナン酸（0.56g）を、ＤＭＦ５mL中
のＢＯＰ（0.66g、1.5mmol）、ＨＯＢｔ（0.202g、1.5m
mol）およびＮＭＭ（2.2mL、２mmol）を使用してＮg-
（２，２，５，７，８-ペンタメチルクロマン-６-スル
ホニル）-Ｌ-アルギニル-Ｌ-ロイシナールジエチルアセ
タール（0.7g、1.1mmol）と結合し、生成物（1.8g）を
固形物として得た。1Ｈ ＮＭＲ（300ＭHz、ＤＭＳＯ-
ｄ6）δ：7.5−8.0（ｍ、２Ｈ）、6.66（ｍ、１Ｈ）、
6.4（ｍ、１Ｈ）、4.32（ｍ、１Ｈ）、4.24（ｄ、１
Ｈ）、3.93（ｍ、１Ｈ）、3.57（ｍ、６Ｈ）、3.44
（ｍ、４Ｈ）、3.04（ｍ、２Ｈ）、2.59（ｔ、２Ｈ）、
2.48（ｓ、６Ｈ）、2.28（ｍ、３Ｈ）、2.03（ｓ、３
Ｈ）、1.77（ｔ、２Ｈ）、1.48（ｍ、22Ｈ）、1.26
（ｓ、６Ｈ）、1.1（ｔｔ、９Ｈ）、0.81（ｔ、６
Ｈ）。 段階４：９-メトキシカルボニル-２-シクロペンチル-ノ
ナノイル-Ｎg-（２，２，５，７，８-ペンタメチルクロ
マン-６-スルホニル）-Ｌ-アルギニル-Ｌ-ロイシナール 方法Ｅ（実施例１１）に従い、段階１よりの化合物（0.
2g）を化合物２０に変換しそしてＨＰＬＣにより直接精
製した。1Ｈ ＮＭＲ（300ＭHz、ＤＭＳＯ-ｄ6）δ：9.
37（ｓ、１Ｈ）、8.2−7.4（ｍ、２Ｈ）、6.69（ｂｒ
ｍ、１Ｈ）、6.4（ｂｒｍ、１Ｈ）、4.3（ｍ、２Ｈ）、
3.58（ｓ、３Ｈ）、3.03（ｍ、２Ｈ）、2.60（ｔ、２
Ｈ）、2.48（ｓ、６Ｈ）、2.26（ｍ、４Ｈ）、2.03
（ｓ、３Ｈ）、1.77（ｔ、２Ｈ）、1.47（ｂｒｍ、28
Ｈ）、1.24（ｓ、３Ｈ）、0.80（ｄｄ、６Ｈ）。
【０１６３】実施例２１ ９-メトキシカルボニル-２-シクロペンチル-ノナノイル
-Ｎg-（４-メトキシ-２，３，６-トリメチル-ベンゼン-
１-スルホニル）-Ｌ-アルギニル-Ｌ-ロイシナール
【０１６４】
【化２３】
【０１６５】段階１：９-メトキシカルボニル-２-シク
ロペンチル-ノナノイル-Ｎg-（４-メトキシ-２，３，６
-トリメチルベンゼン-１-スルホニル）-Ｌ-アルギニル-
Ｌ-ロイシナールジエチルアセタール 方法Ｃ（実施例９）に従い、９-メトキシカルボニル-２
-シクロペンチル-ノナン酸（1.2mmol、方法Ｇの段階１
２より）を、Ｎg-（４-メトキシ-２，３，６-トリメチ
ルベンゼン-１-スルホニル）-Ｌ-アルギニル-Ｌ-ロイシ
ナールジエチルアセタール（1.0mmol）と結合し、当該
ペプチドを固形物として得た。 段階２：方法Ｅ（実施例１１）に従い、段階１よりのア
セタールを化合物２１に変換しそしてＨＰＬＣにより精
製した。1Ｈ ＮＭＲ（300ＭHz、ＣＤＣｌ3／ＤＭＳＯ-
ｄ6）δ：9.42（ｓ、１Ｈ）、8.25（ｄ、１Ｈ）、7.92
（ｄ、１Ｈ）、7.84（ｓ、１Ｈ）、6.4（ｍ、２Ｈ）、
4.40（ｍ、１Ｈ）、4.20（ｍ、１Ｈ）、3.80（ｓ、３
Ｈ）、3.57（ｓ、３Ｈ）、3.26（ｍ、２Ｈ）、2.64
（ｓ、３Ｈ）、2.55（ｓ、３Ｈ）、2.36（ｍ、２Ｈ）、
2.07（ｓ、３Ｈ）、1.8−1.0（ｍ、30Ｈ）、0.87（ｄ
ｄ、６Ｈ）。
【０１６６】実施例２２ ９-メトキシカルボニル-２-シクロペンチル-ノナノイル
-Ｎg-（２，２，５，７，８-ペンタメチルクロマン-６-
スルホニル）-Ｌ-アルギニル-Ｌ-ノルロイシナール
【０１６７】
【化２４】
【０１６８】段階１：９-メトキシカルボニル-２-シク
ロペンチル-ノナノイル-Ｎg-（２，２，５，７，８-ペ
ンタメチルクロマン-６-スルホニル）-Ｌ-アルギニル-
Ｌ-ノルロイシナールジエチルアセタール 方法Ｃ（実施例９）を使用し、９-メトキシカルボニル-
２-シクロペンチル-ノナン酸（１mmol）を、ＤＭＦ５mL
中のＢＯＰ（１mmol）、ＨＯＢｔ（１mmol）およびＮＭ
Ｍ（2.5mmol）を使用して、Ｎg-（２，２，５，７，８-
ペンタメチルクロマン-６-スルホニル）-Ｌ-アルギニル
-Ｌ-ノルロイシナールジエチルアセタール（0.69mmol、
方法Ｂに従い実施例３０の段階１より得る）と結合し
た。反応混合物を4.5時間攪拌し、そして当該ペプチド
を単離した（0.37g、0.42mmol）。 段階２：９-メトキシカルボニル-２-シクロペンチル-ノ
ナノイル-Ｎg-（２，２，５，７，８-ペンタメチルクロ
マン-６-スルホニル）-Ｌ-アルギニル-Ｌ-ノルロイシナ
ール 方法Ｅ（実施例１１）に従い、段階１よりの生成物（0.
37g、0.42mmol）を化合物２２（0.33g）に変換しそして
ＨＰＬＣにより精製した。1Ｈ ＮＭＲ（300ＭHz、ＤＭ
ＳＯ-ｄ6）δ：9.29（ｓ、１Ｈ）、7.79（ｄ、１Ｈ）、
7.89（ｄ、１Ｈ）、7.31（ｔ、１Ｈ）、7.26（ｓ、２
Ｈ）、4.17（ｍ、１Ｈ）、3.94（ｍ、１Ｈ）、3.49
（ｓ、３Ｈ）、2.94（ｍ、２Ｈ）、2.74（ｔ、２Ｈ）、
2.51（ｔ、２Ｈ）、2.37（ｓ、６Ｈ）、2.20（ｍ、４
Ｈ）、1.94（ｓ、３Ｈ）、1.14（ｓ、６Ｈ）、1.0−1.8
（ｍ、３Ｈ）、0.74（ｔ、３Ｈ）。
【０１６９】実施例２３ ９-メトキシカルボニル-２-シクロペンチル-ノナノイル
-Ｎg-ニトロ-Ｌ-アルギニル-Ｌ-ロイシナール
【０１７０】
【化２５】
【０１７１】段階１：９-メトキシカルボニル-２-シク
ロペンチル-ノナノイル-Ｎg-ニトロ-Ｌ-アルギニル-Ｌ-
ロイシナールジエチルアセタール 方法Ｃ（実施例９）に従い、９-メトキシカルボニル-２
-シクロペンチル-ノナン酸（0.66g、0.33mmol）を、Ｄ
ＭＦ７mL中のＢＯＰ（0.146g、0.33mmol）、ＨＯＢｔ
（0.0449g、0.33mmol）およびＮＭＭ（0.105g、0.95mmo
l）を使用して実施例１４の段階２よりの生成物（0.109
g、0.28mmol）と結合し、段階１の表題の化合物（0.124
g）を得た。1Ｈ ＮＭＲ（300ＭHz、ＣＤＣｌ3）δ：8.
31（ｍ、２Ｈ）、6.69（ｂｒｄ、１Ｈ）、6.15（ｂｒ
ｄ、１Ｈ）、4.5（ｍ、１Ｈ）、4.33（ｍ、１Ｈ）、4.1
8（ｍ、１Ｈ）、3.67（ｓ、３Ｈ）、3.53（ｍ、４
Ｈ）、3.32（ｍ、２Ｈ）、2.68（ｍ、２Ｈ）、2.29
（ｔ、３Ｈ）、2.0−1.0（ｂｍ、34Ｈ）、0.90（ｄｄ、
６Ｈ）。 段階２：方法Ｅ（実施例１１）に従い、当該ペプチド
（段階１より、0.124g）を化合物２３（0.106g）に変換
した。1Ｈ ＮＭＲ（300ＭHz、ＤＭＳＯ-ｄ6）δ：9.39
（ｓ、１Ｈ）、8.54（ｍ、１Ｈ）、8.31（ｄ、１Ｈ）、
7.99（ｂｒｄ、２Ｈ）、4.36（ｍ、１Ｈ）、4.15（ｍ、
１Ｈ）、3.33（ｓ、３Ｈ）、3.16（ｍ、２Ｈ）、2.27
（ｔ、２Ｈ）、2.03（ｍ、２Ｈ）、1.0−1.7（ｍ、28
Ｈ）、0.83（ｄｄ、６Ｈ）。
【０１７２】実施例２４ ２-シクロペンチル-10-Ｎ-フタルイミド-デカノイル-Ｎ
g-ニトロ-Ｌ-アルギニル-Ｌ-ロイシナール
【０１７３】
【化２６】
【０１７４】段階１：２-シクロペンチル-10-Ｎ-フタル
イミド-デカノイル-Ｎg-ニトロ-Ｌ-アルギニル-Ｌ-ロイ
シナールジエチルアセタール 方法Ｃ（実施例９）に従い、方法Ｇの段階６よりの生成
物（0.25g、0.65mmol）を、ＤＭＦ５mL中のＢＯＰ（0.2
88g、0.65mmol）、ＨＯＢｔ（0.088g、0.65mmol）およ
びＮＭＭ（0.130mL、0.130mmol）を使用して実施例１４
の段階２よりの生成物（0.195g、0.5mmol）と結合し、
表題の化合物（0.557g）を固形物として得た。1Ｈ Ｎ
ＭＲ（300ＭHz、ＤＭＳＯ-ｄ6）δ：8.57（ｂｒｍ、１
Ｈ）、7.91（ｄ、１Ｈ）、7.85（ｂｒｄ、４Ｈ）、7.55
（ｄ、１Ｈ）、4.32（ｍ、１Ｈ）、4.23（ｄｄ、１
Ｈ）、3.90（ｍ、１Ｈ）、3.55（ｔ、３Ｈ）、3.43
（ｍ、４Ｈ）、3.14（ｍ、２Ｈ）、2.0（ｂｒｍ、１
Ｈ）、1.74（ｂｒｍ、２Ｈ）、2.0−1.15（２ｂｒｍ、2
8Ｈ）、1.09（ｔｔ、６Ｈ）、0.79（ｄｄ、６Ｈ）。 段階２：２-シクロペンチル-10-Ｎ-フタルイミド-デカ
ノイル-Ｎg-ニトロ-Ｌ-アルギニル-Ｌ-ロイシナール 方法Ｅ（実施例１１）を使用し、段階１の生成物（0.45
g）を化合物２４（0.32g）に変換した。1Ｈ ＮＭＲ（3
00ＭHz、ＤＭＳＯ-ｄ6）δ：9.38（ｓ、１Ｈ）、8.31
（ｄ、１Ｈ）、8.00（ｄ、１Ｈ）、7.85（ｍ、４Ｈ）、
4.38（ｍ、１Ｈ）、4.15（１、１Ｈ）、3.57（ｔｔ、３
Ｈ）、3.15（ｍ、２Ｈ）、2.00（ｍ、１Ｈ）、1.9−1.0
（ｂｒｍ、30Ｈ）、0.86（ｄｄ、６Ｈ）。
【０１７５】実施例２５ 10-（トリフルオロメタンスルホニル）アミノ-２-シク
ロペンチル-デカノイル-Ｎg-ニトロ-Ｌ-アルギニル-Ｌ-
ロイシナール
【０１７６】
【化２７】
【０１７７】段階１：（トリフルオロメタンスルホニ
ル）10-アミノ-２-シクロペンチル-デカノイル-Ｎg-ニ
トロ-Ｌ-アルギニル-Ｌ-ロイシナールジエチルアセター
ル 方法Ｃ（実施例９）を使用し、10-（トリフルオロメタ
ンスルホニル）アミノ-２-シクロペンチル-デカン酸
（0.199g、0.51mmol）を、ＤＭＦ ５mL中のＢＯＰ（0.
22g、0.51mmol）、ＨＯＢｔ（0.069g、0.51mmol）およ
びＮＭＭ（0.052mL、0.47mmol）を使用して実施例１４
の段階２よりの生成物（0.175g、0.45mmol）と結合し
た。当該アセタールを固形物（0.42g）として得た。1Ｈ
ＮＭＲ（300ＭHz、ＣＤＣｌ3）δ：6.06（ｂｒｍ、１
Ｈ）、5.81（ｍ、１Ｈ）、4.53（ｍ、１Ｈ）、4.32
（ｄ、１Ｈ）、4.13（ｍ、１Ｈ）、3.73（ｑ、４Ｈ）、
3.53（ｍ、２Ｈ）、3.30（ｑ、３Ｈ）、2.0−1.0（２ｂ
ｒｍ、36Ｈ）、0.99（ｄｄ、６Ｈ）。 段階２：10-（トリフルオロメタンスルホニル）アミノ-
２-シクロペンチル-デカノイル-Ｎg-ニトロ-Ｌ-アルギ
ニル-Ｌ-ロイシナール 方法Ｅ（実施例１１）に従い、段階１よりの生成物（0.
35g）を化合物２５（0.17g）に変換した。1Ｈ ＮＭＲ
（300ＭHz、ＤＭＳＯ-ｄ6）δ：9.27（ｓ、１Ｈ）、8.4
6（ｂｒｍ、１Ｈ）、4.30（ｍ、１Ｈ）、3.87（ｍ、１
Ｈ）、3.09（ｍ、５Ｈ）、2.8−1.0（ｂｒｍ、30Ｈ）、
0.78（ｄｄ、６Ｈ）。
【０１７８】実施例２６ モノメチルアゼライル-Ｎg-ニトロ-Ｌ-アルギニル-Ｌ-
ロイシナール
【０１７９】
【化２８】
【０１８０】段階１：モノメチルアゼライル-Ｎg-ニト
ロ-Ｌ-アルギニル-Ｌ-ロイシナールジエチルアセタール 方法Ｃ（実施例９）に従い、表題の化合物を、ＤＭＦ12
mL中のアゼライン酸モノメチルエステル（0.708g、3.5m
mol）、ＢＯＰ（1.55g、3.5mmol）、ＨＯＢｔ（0.47g、
3.5mmol）およびＮＭＭ（0.38mL、3.5mmol）、Ｎg-ニト
ロ-Ｌ-アルギニル-Ｌ-ロイシナールジエチルアセタール
（実施例８の方法Ｂに従い実施例１４の段階２より得
る）（1.306g、3.5mmol）を使用して作成した。当該ペ
プチドを無定形の固形物（2.17g）として得た。1Ｈ Ｎ
ＭＲ（300ＭHz、ＣＤＣｌ3）δ：6.58（ｄ、１Ｈ）、6.
04（ｄ、１Ｈ）、4.47（ｍ、１Ｈ）、4.30（ｄ、１
Ｈ）、4.17（ｍ、１Ｈ）、3.67（ｓ、３Ｈ）、3.53
（ｍ、２Ｈ）、3.2−3.4（ｔ、ｄ、２Ｈ）、2.3（ｍ、
３Ｈ）、2.2（ｔ、１Ｈ）、1.83（ｍ、１Ｈ）、1.2−1.
8（ｍ、24Ｈ）、1.2（ｍ、３Ｈ）、0.9（ｄ、３Ｈ）。 段階２：モノメチルアゼライル-Ｎg-ニトロ-Ｌ-アルギ
ニル-Ｌ-ロイシナール 方法Ｅ（実施例１１）に従い、当該ペプチドアセタール
（段階１より）（250mg）を化合物２６（0.22g）に変換
した。1Ｈ ＮＭＲ（300ＭHz、ＤＭＳＯ-ｄ6）δ：9.38
（ｓ、１Ｈ）、7.73（ｄ、１Ｈ）、4.30（ｍ、１Ｈ）、
4.09（ｍ、１Ｈ）、3.57（ｓ、３Ｈ）、3.15（ｍ、２
Ｈ）、3.01（ｑ、１Ｈ）、2.75（ｍ、１Ｈ）、2.24
（ｍ、７Ｈ）、1.50（ｍ、12Ｈ）、1.24（ｂ、14Ｈ）、
0.86（ｍ、６Ｈ）。
【０１８１】実施例２７ モノメチルアゼライル-Ｎg-ニトロ-Ｌ-アルギニル-Ｌ-
フェニルアラニナール
【０１８２】
【化２９】
【０１８３】段階１：フェニルアラニナールジエチルア
セタール ＣＢＺ-Ｐｈｅ-ＯＨ（6.0g、２mmol）を、ロイシナール
ジエチルアセタールで使用される同じ処置（方法Ｆ、実
施例１２）に従いフェニルアラニナールジエチルアセタ
ールに変換した。 段階２：Ｆｍｏｃ-Ａｒｇ(ＮＯ2)-ＯＨ ＴＨＦ60mL中のフルオレニルメチルオキシカルボニル-
Ｎ-ヒドロキシスクシンイミジルエステル（32mmol）溶
液を、水70mL中のＮg-ニトロ-Ｌ-アルギニン（35mmol）
および炭酸水素ナトリウム（70mmol）の攪拌した溶液に
添加した。乳状溶液は１時間後に透明になり、そしてこ
の溶液を固形のクエン酸でｐＨ２〜３まで酸性化し、そ
して300mLのＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を水で１度
洗浄し、乾燥しそして蒸発して当該化合物を白色固形物
として得た（26.8mmol）。 段階３：Ｆｍｏｃ-Ａｒｇ(ＮＯ2)-樹脂 ＤＭＦ40mL中の９-フルオレニルメチルオキシカルボニ
ル-Ｎg-ニトロ-Ｌ-アルギニン（段階２より、26.8mmo
l）、ＢＯＰ（30mmol）、ＨＯＢｔ（30mmol）およびＮ
ＭＭ（55mmol）の溶液をＰＡＣ樹脂（ポリスチレン−１
％ジビニルベンゼンに取り付けられたα-メチルフェナ
シルリンカー、置換0.97mmol/g、ベイケムバイオサイエ
ンス インク(Bachem Bioscience, Inc)、キング オブ
プルシア、フィラデルフィア州、により供給される）
10gと混合しそして４時間攪拌した。樹脂を濾別し、Ｄ
ＭＦ、ＤＣＭおよびＭｅＯＨで洗浄し、そして乾燥して
最終生成物Ｆｍｏｃ-Ａｒｇ(ＮＯ2)-樹脂（11.1g）を得
た。この樹脂Ｆｍｏｃ-Ａｒｇ(ＮＯ2)-樹脂（11.1g）
を、ピペリジン（30％）、ＤＭＦ（35％）およびトルエ
ン（35％）を含有する溶液100mLで処理しそして2.5時間
攪拌した。Ｆｍｏｃが除去された樹脂を濾過し、そして
ＤＣＭ／ＤＭＦ（50：50）およびＭｅＯＨで連続して洗
浄して生成物（9.2g）を得た。 段階４：ＭｅｏＡｚ：Ａｒｇ(ＮＯ2)-樹脂 アゼライン酸モノメチル（20mmol）を、Ａｒｇ(ＮＯ2)-
樹脂（9.2g）、ＢＯＰ（20mmol）、ＨＯＢｔ（20mmol）
およびＮＭＭ（ｐＨを８に調整するため）の攪拌したス
ラリーに添加した。一夜攪拌後、アゼライン酸モノメチ
ル（10mmol）、ＢＯＰ（20mmol）、ＨＯＢｔ（10mmol）
およびＮＭＭ（20mmol）の混合物を添加しかつ24時間攪
拌した。当該樹脂をＤＭＦ、ＤＣＭおよびメタノールで
洗浄し、樹脂10.56gを得た。 段階５：モノメチルアゼライル-Ｎg-ニトロ-Ｌ-アルギ
ニン 段階４よりの生成物（10.56ｇ）を、67％ＤＣＭ（30
％）ＴＦＡおよび（３％）アニソールの100mLの溶液中
で５時間攪拌した。このスラリーを濾過しそして溶媒を
蒸発し、さらにエーテルで摩砕して当該ペプチド（1.11
g、2.75mmol）を得た。 段階６：モノメチルアゼライル-Ｎg-ニトロ-Ｌ-アルギ
ニル-Ｌ-フェニルアラニナールジエチルアセタール 方法Ｃ（実施例９）に従い、メトキシアゼライル-Ｎg-
ニトロ-Ｌ-アルギニン（１mmol）を、ＢＯＰ（1.3mmo
l）、ＨＯＢｔ（1.3mmol）およびＮＭＭ（ｐＨを８に調
整するため）を使用してＬ-フェニルアラニナールジエ
チルアセタール（1.3mmol）と結合し、標題のペプチド
（0.82mmol）を得た。 段階７：モノメチルアゼライル-Ｎg-ニトロ-Ｌ-アルギ
ニル-Ｌ-フェニルアラニナール 方法Ｅ（実施例１１）を使用し、段階６よりの生成物
（0.82mmol）を標題の化合物２６（0.81mmol）に変換し
た。1Ｈ ＮＭＲ（300ＭHz、ＣＤＣｌ3）δ：9.59
（ｓ、１Ｈ）、8.36（ｓ、１Ｈ）、7.49（ｓ、１Ｈ）、
7.31−7.09（ｍ、７Ｈ）、6.71（ｄ、１Ｈ）、4.69
（ｍ、１Ｈ）、4.60（ｍ、１Ｈ）、3.66（ｓ、３Ｈ）、
3.41（ｍ、２Ｈ）、3.27（ｍ、２Ｈ）、2.31（ｔ、２
Ｈ）、2.2（ｔ、２Ｈ）、1.80−1.2（ｍ、14Ｈ）。
【０１８４】実施例２８ モノメチルアゼライル-Ｎg-（２，２，５，７，８-ペン
タメチルクロマン-６-スルホニル）-Ｌ-アルギニル-Ｌ-
ロイシナール
【０１８５】
【化３０】
【０１８６】段階１：モノメチルアゼライル-Ｎg-
（２，２，５，７，８-ペンタメチルクロマン-６-スル
ホニル）-Ｌ-アルギニル-Ｌ-ロイシナールジエチルアセ
タール 方法Ｃ（実施例９）に従い、アゼライン酸モノメチル
（1.42g、7.0mmol）を、各7.0mmolのＢＯＰ、ＨＯＢｔ
およびＮＭＭを使用してＮg-（２，２，５，７，８-ペ
ンタメチルクロマン-６-スルホニル）-Ｌ-アルギニル-
Ｌ-ロイシナールジエチルアセタール（3.06g、5.0mmo
l、実施例２０の段階２より得る）と結合し、当該化合
物（3.43g）を固形物として得た。1Ｈ ＮＭＲ（300ＭH
z、ＣＤＣｌ3）δ：6.58（ｄ、１Ｈ）、6.04（ｄ、１
Ｈ）、5.4（ｂｒ、１Ｈ）、5.06（ｂｒ、１Ｈ）、4.47
（ｍ、１Ｈ）、4.30（ｄ、１Ｈ）、4.17（ｍ、１Ｈ）、
3.67（ｓ、３Ｈ）、3.53（ｍ、４Ｈ）、3.23（ｄ、１
Ｈ）、3.19（ｔ、２Ｈ）、2.30（ｍ、２Ｈ）、2.2（ｔ
ｔ、２Ｈ）、2.0−1.25（２ｂｒｍ、17Ｈ）、1.20（ｔ
ｔ、６Ｈ）、0.90（ｄｄ、６Ｈ）。 段階２：モノメチルアゼライル-Ｎg-（２，２，５，
７，８-ペンタメチルクロマン-６-スルホニル）-Ｌ-ア
ルギニル-Ｌ-ロイシナール 方法Ｅ（実施例１１）を使用し、段階１よりの生成物
（0.30g）を化合物２８（0.22g）に変換した。1Ｈ Ｎ
ＭＲ（300ＭHz、ＤＭＳＯ-ｄ6）δ：9.38（ｓ、１
Ｈ）、8.5（ｂｒ、１Ｈ）、4.30（ｍ、１Ｈ）、4.09
（ｍ、１Ｈ）、3.57（ｓ、３Ｈ）、3.15（ｍ、２Ｈ）、
3.00（ｔ、２Ｈ）、2.75（ｍ、２Ｈ）、2.12（ｔ、２
Ｈ）、1.8−1.20（２ｂｒｍ、17Ｈ）、0.86（ｄｄ、６
Ｈ）。
【０１８７】実施例２９ モノメチルアゼライル-Ｎg-（２，２，５，７，８-ペン
タメチルクロマン-６-スルホニル）-Ｄ-アルギニル-Ｌ-
ロイシナール
【０１８８】
【化３１】
【０１８９】段階１：９-フルオレニルメトキシカルボ
ニル-Ｎg-（２，２，５，７，８-ペンタメチルクロマン
-６-スルホニル）-Ｄ-アルギニル-Ｌ-ロイシナールジエ
チルアセタール 方法Ｃ（実施例９）に従い、９-フルオレニルメトキシ
カルボニル-Ｎg-（２，２，５，７，８-ペンタメチルク
ロマン-６-スルホニル）-Ｄ-アルギニン（３mmol）を、
ＤＭＦ５mL中のＢＯＰ（３mmol）、ＨＯＢｔ（３mmol）
およびＮＭＭ（５mmol）を使用してロイシナールジエチ
ルアセタール（2.5mmol）と結合し、当該ペプチド（1.7
2g、２mmol）を固形物として得た。 段階２：ＭｅＯＡｚ-Ｄ-Ａｒｇ（ＰＭＣ）-ロイシナー
ルジエチルアセタール 方法Ｃ（実施例９）を使用し、アゼライン酸モノメチル
（1.0mmol）を、ＤＭＦ５mL中のＢＯＰ（１mmol）、Ｈ
ＯＢｔ（１mmol）およびＮＭＭ（３mmol）を使用して、
方法Ｂ（実施例８）に従い段階１の標題の化合物より得
たＮg-（２，２，５，７，８-ペンタメチルクロマン-６
-スルホニル）-Ｄ-アルギニル-Ｌ-ロイシナールジエチ
ルアセタール（0.54g、0.88mmol）と結合し、当該化合
物を得た（0.735g）。 段階３：モノメチルアゼライル-Ｎg-（２，２，５，
７，８-ペンタメチルクロマン-６-スルホニル）-Ｄ-ア
ルギニル-Ｌ-ロイシナール 方法Ｅ（実施例１１）を使用し、段階２よりの生成物
（0.1g）を化合物２９に変換しそしてＨＰＬＣにより精
製した。1Ｈ ＮＭＲ（300ＭHz、ＣＤＣｌ3）δ：9.49
（ｓ、１Ｈ）、7.74（ｔ、１Ｈ）、7.43（ｄ、１Ｈ）、
6.43（ｄ、１Ｈ）、6.34（ｓ、２Ｈ）、4.60（ｍ、１
Ｈ）、4.51（ｓ、３Ｈ）、4.54（ｓ、３Ｈ）、4.37
（ｍ、１Ｈ）、3.66（ｓ、３Ｈ）、3.31（ｍ、２Ｈ）、
2.63（ｔ、２Ｈ）、2.26（ｍ、４Ｈ）、2.09（ｓ、３
Ｈ）、1.80（ｔ、２Ｈ）、1.57（ｍ、７Ｈ）、1.26
（ｍ、16Ｈ）、0.90（ｄｄ、６Ｈ）。
【０１９０】実施例３０ モノメチルアゼライル-Ｎg-（２，２，５，７，８-ペン
タメチルクロマン-６-スルホニル）-Ｌ-アルギニル-Ｌ-
ノルロイシナール
【０１９１】
【化３２】
【０１９２】段階１：Ｆｍｏｃ-Ｎg-（２，２，５，
７，８-ペンタメチルクロマン-６-スルホニル）-Ｌ-ア
ルギニル-Ｌ-ノルロイシナール Ｆｍｏｃ-Ａｒｇ（ＰＭＣ）-ＯＨ（２mmol）を、ＤＭＦ
６mL中のＢＯＰ（２mmol）、ＨＯＢｔ（２mmol）および
ＮＭＭ（６mmol）を使用して、方法Ｃ（実施例９）に従
い、ノルロイシナールジエチルアセタール（２mmol、Ｌ
ｅｕ-アセタールの調製での処置に従いＣＢＺ-Ｎｌｅ-
ＯＨより得た）と結合し、当該ペプチド（1.37g、1.64m
mol）を得た。 段階２：ＭｅＯＡｚ-Ａｒｇ（ＰＭＣ）-Ｌ-ノルロイシ
ナールジエチルアセタール 方法Ｃ（実施例９）に従い、アゼライン酸モノメチル
（２mmol）を、ＢＯＰ（２mmol）、ＨＯＢｔ（２mmol）
およびＮＭＭ（６mmol）を使用して、Ａｒｇ（ＰＭＣ）
-ノルロイシナールジエチルアセタール（1.39mmol、実
施例８の方法Ｂに従い段階１より得た）と結合し、そし
て一夜攪拌した。翌日、アゼライン酸モノメチル、ＢＯ
Ｐ、ＨＯＢｔおよびＮＭＭの各１mmolを添加しそして４
時間攪拌した。反応混合物を実施例９の方法Ｃのように
加工し、当該ぺプチド（0.37g、0.84mmol）を得た。 段階３：方法Ｅ（実施例１１）に従い、段階２よりの生
成物（0.94g、0.84mmol）を化合物３０（0.58g）に変換
した。1Ｈ ＮＭＲ（300ＭHz、ＣＤＣｌ3）δ：9.54
（ｓ、１Ｈ）、7.49（ｔ、１Ｈ）、6.74（ｄ、１Ｈ）、
6.26（ｓ、２Ｈ）、6.23（ｄ、１Ｈ）、4.58（ｍ、１
Ｈ）、4.31（ｍ、１Ｈ）、3.66（ｓ、３Ｈ）、3.34
（ｍ、２Ｈ）、2.63（ｔ、２Ｈ）、2.58（ｓ、３Ｈ）、
2.56（ｓ、３Ｈ）、2.29（ｔ、２Ｈ）、2.23（ｔ、２
Ｈ）、1.9−1.5（ｍ、22Ｈ）、1.30（ｓ、６Ｈ）、0.86
（ｔ、３Ｈ）。
【０１９３】実施例３１ モノメチルアゼライル-Ｎg-（ｐ-トルエンスルホニル）
-Ｌ-アルギニル-Ｌ-ロイシナール
【０１９４】
【化３３】
【０１９５】段階１：Ｆｍｏｃ-Ｎg-（ｐ-トルエンスル
ホニル）-Ｌ-アルギニル-Ｌ-ロイシナールジエチルアセ
タール 方法Ｃ（実施例９）を使用し、Ｆｍｏｃ-Ｎg-（ｐ-トル
エンスルホニル）-Ｌ-アルギニン（５mmol）を、ＤＭＦ
15mL中のＨＢＴＵ（5.5mmol）、ＨＯＢｔ（5.5mmol）お
よびＮＭＭ（11mmol）を使用して、ロイシナールジエチ
ルアセタール（5.5mmol）と結合した。当該ペプチドを
固形物として単離した（2.86g、3.96mmol）。 段階２：モノメチルアゼライル-Ｎg-（ｐ-トルエンスル
ホニル）-Ｌ-アルギニル-Ｌ-ロイシナールジエチルアセ
タール 方法Ｃ（実施例９）に従い、アゼライン酸モノメチル
（６mmol）を、ＤＭＦ15mL中のヘキサフルオロリン酸１
-ベンゾトリアゾール-１-イル-１，１，３，３，-テト
ラメチルウロニウム（ＨＢＴＵ）（６mmol）、ＨＯＢｔ
（６mmol）およびＮＭＭ（12mmol）を使用しそして一夜
攪拌して、Ｎg-（ｐ-トルエンスルホニル）-Ｌ-アルギ
ニル-Ｌ-ロイシナールジエチルアセタール（2.7g、4.7m
mol、実施例８の方法Ｂを使用して段階１より得た）と
結合した。反応収量は、アゼライン酸モノメチル（３mm
ol）およびジフェニルホスホリルアジド（３mmol）を添
加することにより増やされ、そして、４時間攪拌して当
該ペプチド（1.92g）を固形物として得た。 段階３：モノメチルアゼライル-Ｎg-（ｐ-トルエンスル
ホニル）-Ｌ-アルギニル-Ｌ-ロイシナール 方法Ｅ（実施例１１）に従い、段階２よりの生成物（1.
92g、2.8mmol）を化合物３１（1.64g）に変換した。1Ｈ
ＮＭＲ（300ＭHz、ＤＭＳＯ-ｄ6）δ：9.37（ｓ、１
Ｈ）、8.97（ｄ、１Ｈ）、8.37（ｄ、１Ｈ）、7.66
（ｄ、２Ｈ）、7.37（ｍ、１Ｈ）、7.29（ｄ、２Ｈ）、
7.03（ｓ、１Ｈ）、6.63（ｓ、１Ｈ）、4.09（ｍ、１
Ｈ）、3.57（ｓ、３Ｈ）、3.44（ｍ、１Ｈ）、3.04
（ｍ、２Ｈ）、2.26（ｓ、３Ｈ）、2.33（ｔ、２Ｈ）、
2.13（ｔ、２Ｈ）、2.80−1.09（ｍ、７Ｈ）、0.86（ｄ
ｄ、６Ｈ）。
【０１９６】実施例３２ モノメチルアゼライル-Ｎg-（４-メトキシ-２，３，６-
トリメチルベンゼン-１-スルホニル）-Ｌ-アルギニル-
Ｌ-ロイシナールセミカルバゾン
【０１９７】
【化３４】
【０１９８】バサク(Basak, A.)ら、Int. J. Peptide P
rotein Res. 36 7-17 (1990)を参照。90％ＥｔＯＨ３mL
中のＭｅＯＡｚ-Ａｒｇ（ＭＴＲ）-Ｌｅｕ-Ｈ（実施例
３４）（67mg、0.10mmol）、塩酸セミカルバジド（11m
g、0.1mmol）および酢酸ナトリウム（９mg、0.11mmol）
の混合物を70℃に18時間加熱した。反応混合物を濃縮
し、薄黄色の固形物(化合物３２）を得た。これをその
後第６表中のようにＨＰＬＣにより精製した。1Ｈ Ｎ
ＭＲ（300ＭHz、ＣＤＣｌ3）δ：7.91（ｔ、１Ｈ）、7.
09（ｄ、１Ｈ）、6.68（ｓ、１Ｈ）、6.22（ｓ、１
Ｈ）、4.37−4.46（ｍ、１Ｈ）、4.2−4.3（ｍ、１
Ｈ）、4.04（ｄ、１Ｈ）、3.7（ｓ、３Ｈ）、3.58
（ｓ、３Ｈ）、2.6（ｓ、３Ｈ）、2.27（ｄｄ、２
Ｈ）、2.05、2.12（ｓ、３Ｈ）、1.2−1.64（ｍ、12
Ｈ）、0.85（ｔ、６Ｈ）。
【０１９９】実施例３３ モノメチルアゼライル-Ｎg-（４-メトキシ-２，３，６-
トリメチルベンゼン-１-スルホニル）-Ｌ-アルギニル-
Ｌ-ロイシナールチオセミカルバゾン
【０２００】
【化３５】
【０２０１】実施例３２と同じ段階に従い、化合物３３
を、90％ＥｔＯＨ２mL中の実施例３４の化合物（51mg、
0.07mmol）およびチオセミカルバジド（７mg、0.07mmo
l）より作成した。
【０２０２】実施例３４ モノメチルアゼライル-Ｎg-（４-メトキシ-２，３，６-
トリメチルベンゼン-１-スルホニル）-Ｌ-アルギニル-
Ｌ-ロイシナール
【０２０３】
【化３６】
【０２０４】段階１：方法Ｃ(実施例９）に従い、９-フ
ルオレニルメチルオキシカルボニル-Ｎg-（４-メトキシ
-２，３，６-トリメチルベンゼン-１-スルホニル）-Ｌ-
アルギニル-Ｌ-ロイシナールジエチルアセタールを、９
-フルオレニルメチルオキシカルボニル-Ｎg-（４-メト
キシ-２，３，６-トリメチルベンゼン-１-スルホニル）
-Ｌ-アルギニンおよびＬ-ロイシナールジエチルアセタ
ールより調製した。 段階２：モノメチルアゼライル-Ｎg-（４-メトキシ-
２，３，６-トリメチルベンゼンスルホニル）-Ｌ-アル
ギニル-Ｌ-ロイシナール 方法Ｃ(実施例９）に従い、アゼライン酸モノメチル
（６mmol）を、Ｎg-（４-メトキシ-２，３，６-トリメ
チルベンゼン-１-スルホニル）-Ｌ-アルギニル-Ｌ-ロイ
シナールジエチルアセタール（５mmol、実施例８の方法
Ｂを使用して段階１から得た）と結合し、そして当該ペ
プチドを無定形の固形物（3.3g）として単離した。 段階３：メトキシアゼライル-Ｎg-（４-メトキシ-２，
３，６-トリメチルベンゼン-１-スルホニル）-Ｌ-アル
ギニル-Ｌ-ロイシナール。
【０２０５】段階２よりの生成物（0.5g)を、実施例１
１の方法Ｅに従って化合物３４（0.36g）に変換した。1
Ｈ ＮＭＲ（300ＭHz、ＣＤＣｌ3）δ：9.54（ｓ、１
Ｈ）、7.51（ｓ、１Ｈ）、6.74（ｄ、１Ｈ）、6.57
（ｓ、Ｈ）、6.40（ｓ、２Ｈ）、6.31（ｓ、１Ｈ）、4.
66（ｍ、１Ｈ）、4.41（ｍ、１Ｈ）、3.87（ｓ、３
Ｈ）、3.70（ｓ、３Ｈ）、3.33（ｍ、２Ｈ）、2.73
（ｓ、３Ｈ）、2.66（ｓ、３Ｈ）、2.33（ｔ、２Ｈ）、
2.26（ｔ、２Ｈ）、2.17（ｓ、３Ｈ）、2.00−1.26
（ｍ、17Ｈ）、0.96（ｄｄ、６Ｈ）。
【０２０６】実施例３５ メトキシアゼライル-Ｎg-（２，４，６-トリメチルベン
ゼン-１-スルホニル）-Ｌ-アルギニル-Ｌ-ロイシナール
【０２０７】
【化３７】
【０２０８】段階１：Ｆｍｏｃ-Ｎg-（２，４，６-トリ
メチルベンゼン-１-スルホニル）-Ｌ-アルギニル-Ｌ-ロ
イシナールジエチルアセタール ジオキサン（10mL）中の４M塩酸溶液をジオキサン10mL
中のＢｏｃ-Ａｒｇ（ＭＴＳ）-ＯＨ（６mmol）の溶液に
添加した。30分後、溶媒を除去し、そしてエーテルを添
加し、沈殿物を収集しそして乾燥した（3.21g、９mmo
l）。塩酸Ａｒｇ-ＭＴＳ-ＯＨを、トシル誘導体の調製
について記述されるような処置（実施例３１）に従って
Ｆｍｏｃ-Ａｒｇ（ＭＴＳ）-ＯＨに変換し、標題の化合
物を白色固形物（2.09g）として得た。 段階２：Ｆｍｏｃ-Ａｒｇ（ＭＴＳ）-Ｌｅｕ-アセター
ル 方法Ｃ（実施例９）に従い、Ｆｍｏｃ-Ａｒｇ（ＭＴ
Ｓ）-ＯＨ（3.361mmol）を、ＤＭＦ15mL中のＨＢＴＵ
（４mmol）、ＨＯＢｔ（４mmol）およびＮＭＭ(10mmo
l）を使用してロイシナールジエチルアセタール（４mmo
l）と結合し、標題のペプチド（1.05g）を得た。 段階３：ＭｅＯＡｚ-Ａｒｇ（ＭＴＳ）-Ｌｅｕ-アセタ
ール 方法Ｃを使用し、アゼライン酸モノメチル（1.2mmol）
を、ＤＭＦ３mL中のＢＯＰ（1.2mmol）、ＨＯＢｔ（1.2
mmol）およびＮＭＭ(3.6mmol）を使用して、Ａｒｇ（Ｍ
ＴＳ）-Ｌｅｕ-アセタール（0.85mmol、実施例８の方法
Ｂに従い段階２より得る）と結合し、そして一夜攪拌し
て、標題のペプチドを半固形物（0.59g）として得た。 段階４：メトキシアゼライル-Ｎg-（２，４，６-トリメ
チルベンゼン-１-スルホニル）-Ｌ-アルギニル-Ｌ-ロイ
シナール 方法Ｅ（実施例１１）に従い、段階３の生成物（0.59
g）を化合物３５（0.54g）に変換し、そしてＨＰＬＣに
より精製した。1Ｈ ＮＭＲ（300ＭHz、ＣＤＣｌ 3）
δ：9.49（ｓ、１Ｈ）、7.53（ｓ、１Ｈ）、6.90（ｓ、
２Ｈ）、6.81（ｄ、１Ｈ）、6.40（ｂｓ、３Ｈ）、4.61
（ｍ、１Ｈ）、4.38（ｍ、１Ｈ）、3.67（ｓ、３Ｈ）、
2.67（ｓ、６Ｈ）、2.29（ｔ、２Ｈ）、2.20（ｔ、２
Ｈ）、2.0−1.20（ｍ、19Ｈ）、0.91（ｄｄ、６Ｈ）。
【０２０９】実施例３６ ６-シアノ-ヘキサン-１-スルホニル-Ｎg-（２，２，
５，７，８-ペンタメチルクロマン-６-スルホニル）-Ｌ
-アルギニル-Ｌ-ロイシナール
【０２１０】
【化３８】
【０２１１】段階１：６-シアノ-ヘキサン-１-スルホニ
ル-Ｎg-（２，２，５，７，８-ペンタメチルクロマン-
６-スルホニル）-Ｌ-アルギニル-Ｌ-ロイシナールジエ
チルアセタール 方法Ｇ（実施例１３）の段階１４よりの６-シアノ-ヘキ
サン-１-スルホニルクロリド（0.19g、0.89mmol）を、
ＤＭＦ１mL中の実施例２０の段階２よりの生成物（0.55
g、0.899mmol）の溶液に添加し、そしてこの溶液のｐＨ
をＮＭＭを使用して８に調整した。攪拌４時間後、反応
混合物を方法Ａ（実施例７）に記述されるように加工
し、標題化合物（0.466g）を得た。 段階２：６-シアノ-ヘキサン-１-スルホニル-Ｎg-
（２，２，５，７，８-ペンタメチルクロマン-６-スル
ホニル）-Ｌ-アルギニル-Ｌ-ロイシナール 方法Ｅ（実施例１１）を使用し、段階１よりの生成物
（0.297g）を化合物３６（0.22g）に変換し、そして第
６表中に記述されるようにＨＰＬＣにより精製した。1
Ｈ ＮＭＲ（300ＭHz、ＤＭＳＯ-ｄ6）δ：9.37（ｓ、
１Ｈ）、6.83（ｂ、１Ｈ）、6.43（ｂ、１Ｈ）、3.88
（ｍ、１Ｈ）、3.77（ｍ、１Ｈ）、3.01（ｍ、２Ｈ）、
2.80（ｍ、２Ｈ）、2.55（ｔ、２Ｈ）、2.46（ｓ、６
Ｈ）、2.0（ｓ、３Ｈ）、1.75（ｍ、５Ｈ）、1.6−1.3
（ｍ、15Ｈ）、1.23（ｓ、６Ｈ）、0.84（ｄｄ、６
Ｈ）。
【０２１２】実施例３７ ２-ナフトイル-Ｎg-ニトロ-Ｌ-アルギニル-Ｌ-ロイシナ
ール
【０２１３】
【化３９】
【０２１４】段階１：２-ナフトイル-Ｎg-ニトロ-Ｌ-ア
ルギニル-Ｌ-ロイシナールジエチルアセタール 塩化２-ナフトイル（0.104g、0.55mmol）を、ＤＭＦ２m
L中の実施例１４の段階２よりの生成物の溶液に添加
し、そしてＮＭＭ（0.18mL)および標題の生成物を加工
して標題化合物を固形物として得た（0.22g）。1Ｈ Ｎ
ＭＲ（300ＭHz、ＣＤＣｌ3）δ：8.92（ｂ、１Ｈ）、8.
0−7.91（ｍｍ、10Ｈ）、6.93（ｄ、１Ｈ）、5.07
（ｍ、１Ｈ）、4.37（ｄ、１Ｈ）、4.17（ｍ、１Ｈ）、
3.69（ｍ、３Ｈ）、3.53（ｍ、３Ｈ）、3.38（ｍ、２
Ｈ）、1.77、1.58、1.4（ｍｍ、５Ｈ）、0.83（ｄｄ、
６Ｈ）。 段階２：２-ナフトイル-Ｎg-ニトロ-Ｌ-アルギニル-Ｌ-
ロイシナール 方法Ｅ（実施例１１）を使用し、段階１よりの生成物
（0.17g）を化合物３７（60mg）に変換した。1Ｈ ＮＭ
Ｒ（300ＭHz、ＤＭＳＯ-ｄ6）δ：9.43（ｓ、１Ｈ）、
8.72（ｄ、１Ｈ）、8.53（ｍ、２Ｈ）、8.0（ｍ、６
Ｈ）、7.6（ｍ、２Ｈ）、6.20（ｍ、１Ｈ）、4.57
（ｍ、１Ｈ）、4.14（ｍ、１Ｈ）、3.92（ｍ、１Ｈ）、
3.2（ｍ、２Ｈ）、3.0（ｄ、１Ｈ）、1.77（ｍ、５
Ｈ）、0.86（ｍ、６Ｈ）。
【０２１５】実施例３８ ＣＢＺ-７-アミノヘプタノイル-Ｎg-ニトロ-Ｌ-アルギ
ニル-Ｌ-ロイシナール
【０２１６】
【化４０】
【０２１７】段階１：ＣＢＺ-７-アミノヘプタノイル-
Ｎg-ニトロ-Ｌ-アルギニル-Ｌ-ロイシナールジエチルア
セタール 方法Ｃ（実施例９）に従い、ＣＢＺ-７-アミノヘプタン
酸（0.7g、2.5mmol）を、ＢＯＰ（1.1g、2.5mmol）、Ｈ
ＯＢｔ（0.34g、2.5mmol）およびＮＭＭ(0.253mL、2.5m
mol）を使用して実施例１４の段階２の生成物（0.78g、
2.0mmol）と結合し、当該ペプチドを半固形物として得
た。これを次の段階で直接使用した。 段階２：ＣＢＺ-７-アミノヘプタノイル-Ｎg-ニトロ-Ｌ
-アルギニル-Ｌ-ロイシナール 方法Ｅ（実施例１１）に従い、段階１よりのアセタール
を、当該反応を５時間攪拌した後に化合物３８（0.8g）
に変換した。1Ｈ ＮＭＲ（300ＭHz、ＤＭＳＯ-ｄ6）
δ：9.30（ｓ、１Ｈ）、8.47（ｓ、１Ｈ）、8.46（ｓ、
１Ｈ）、8.29（ｄ、１Ｈ）、8.11（ｔ、１Ｈ）、7.80
（ｓ、１Ｈ）、7.64（ｄ、１Ｈ）、7.31（ｓ、１Ｈ）、
7.23（ｓ、５Ｈ）、4.91（ｓ、２Ｈ）、4.23（ｍ、１
Ｈ）、4.00（ｍ、１Ｈ）、3.51（ｑ、２Ｈ）、3.27
（ｍ、２Ｈ）、2.89（ｑ、２Ｈ）、2.11（ｔ、２Ｈ）、
2.03（ｔ、２Ｈ）、1.7−1.00（ｍ、10Ｈ）、0.77（ｄ
ｄ、６Ｈ）。
【０２１８】実施例３９〜４２は第７表中に列挙される
ＭＣＰ阻害剤の合成を記述する。
【０２１９】
【表１１】
【０２２０】実施例３９ 10-シアノ-２-シクロペンチル-デカノイル-Ｎg-ニトロ-
Ｌ-アルギニル-Ｌ-ロイシンクロロメチルケトン
【０２２１】
【化４１】
【０２２２】これおよび以下の３個の実施例では、本発
明の阻害剤は結合処置IIにより調製される。各場合にお
いて、本明細書に記述されるように調製される10-シア
ノ-２-シクロペンチル-デカノイル-Ｎg-ニトロ-Ｌ-アル
ギニンを酵素反応性のアミノ酸誘導体と結合して阻害剤
を産生する。これらの阻害剤は２個もしくはそれ以上の
ジアステレオマーの混合物として得られ、それらはいく
つかの場合にはＨＰＬＣにより分離されうる。 Ａ）10-シアノ-２-シクロペンチル-デカノイル-Ｎg-ニ
トロ-Ｌ-アルギニンメチルエステル 方法Ｃ（実施例９）の処置に従い、ＤＭＦ26mL中の実施
例１３の段階５よりの10-シアノ-２-シクロペンチル-デ
カン酸（2.4g；11mmol）を、塩化ジヒドロＮg-ニトロ-
Ｌ-アルギニンメチルエステル（2.86g、11mmol）、ＢＯ
Ｐ（6.6g、15mmol）、ＨＯＢｔ（1.62g、12mmol）およ
びＮＭＭ3.6mL（33mmol）と攪拌し、当該メチルエステ
ル4.8gを泡状固形物として得た。1Ｈ ＮＭＲ（300ＭH
z、ＣＤＣｌ 3）δ：8.75（ｂｓ、１Ｈ）、7.81（ｂｓ、
２Ｈ）、6.42（ｄ、１Ｈ）、4.67（ｔ、１Ｈ）、3.82
（ｓ、３Ｈ）、3.75（ｍ、１Ｈ）、3.32（ｍ、１Ｈ）、
2.15（ｔ、２Ｈ）、2.05−1.12（ｍ、28Ｈ）。 Ｂ）10-シアノ-２-シクロペンチル-デカノイル-Ｎg-ニ
トロ-Ｌ-アルギニン メタノール30mL中の上のパート「Ａ」よりのメチルエス
テル5.5gの溶液を1.00N水酸化ナトリウム水溶液24mLで
処理した。２時間後、２％炭酸水素ナトリウム水溶液10
0mLを添加し、そして得られる溶液をエーテル100mLで抽
出した。水層を分離しそして３％クエン酸水溶液で酸性
化し、それから酢酸エチル250mLで抽出した。得られる
有機層を分離し、無水硫酸マグネシウムで乾燥し、そし
て蒸発して無色ガム状物質を得た。これは石油エーテル
との摩砕に際し重さ4.4gである微細白色粉末に固化し
た。1Ｈ ＮＭＲ（300ＭHz、ＣＤＣｌ3）δ：10.6（ｂ
ｓ、１Ｈ）、8.75（ｂｓ、１Ｈ）、7.82（ｂｓ、２
Ｈ）、6.41（ｄ、１Ｈ）、4.67（ｔ、１Ｈ）、3.71
（ｍ、１Ｈ）、3.32（ｍ、１Ｈ）、2.15（ｔ、２Ｈ）、
2.04−1.12（ｍ、30Ｈ）。 Ｃ）10-シアノ-２-シクロペンチル-デカノイル-Ｎg-ニ
トロ-Ｌ-アルギニル-Ｌ-ロイシンクロロメチルケトン 上のパート「Ｂ」よりの生成物467mg（1.0mmol）および
塩酸ロイシンクロロメチルケトン（ベイケム バイオサ
イエンス インク(Bachem Bioscience, Inc.)、キング
オブ プルシア、ペンシルバニア）270mg（1.0mmol）
の混合物、ＢＯＰ440mg（1.0mmol）およびＤＭＦ4.0mL
中のＨＯＢｔ135mg（１mmol）をＮＭＭ0.33mL（３mmo
l）で処理した。４時間後、混合物を酢酸エチル75mLで
希釈し、２％炭酸水素ナトリウム水溶液、水、３％クエ
ン酸水溶液および最後に水で洗浄した。有機層を分離し
かつ乾燥（硫酸マグネシウム）し、そして最後に蒸発し
て薄黄色の粘稠な油状物質を得た。この化合物を、溶出
に酢酸エチルを使用するシリカゲル６０−Ｈの９×1/2
インチカラムでのフラッシュクロマトグラフィーにより
精製した。得られる溶液を蒸発し無色のガム状物質を得
た。これを酢酸エチル／エーテル１：１中において固化
させ、無色固形物のクロロメチルケトン198mgを得た。
ＨＰＬＣが２種のジアステレオマーの存在を指摘し、こ
れを調製ＲＰ−ＨＰＬＣにより分離した。水−アセトニ
トリルの濃度勾配（40分間でアセトニトリル30〜80％）
中、22.58分（ジアステレオマーａ）および23.7分（ジ
アステレオマーｂ）のピークを単離した。 ジアステレオマーａ：1Ｈ ＮＭＲ（300ＭHz、ＣＤＣｌ
3）δ：8.53（ｂｓ、１Ｈ）、7.61（ｂｓ、２Ｈ）、7.3
1（ｂｓ、１Ｈ）、6.69（ｄ、１Ｈ）、4.73（ｍ、１
Ｈ）、4.65（ｍ、１Ｈ）、4.28（ｑ、２Ｈ）、3.53
（ｍ、１Ｈ）、3.31（ｔ、１Ｈ）、2.32（ｔ、２Ｈ）、
1.90−1.11（ｍ、31Ｈ）、0.93（ｑ、６Ｈ）。 ジアステレオマーｂ：1Ｈ ＮＭＲ（300ＭHz、ＣＤＣｌ
3）δ：8.53（ｂｓ、１Ｈ）、7.61（ｂｓ、２Ｈ）、7.3
1（ｂｓ、１Ｈ）、6.79（ｄ、１Ｈ）、4.73（ｍ、１
Ｈ）、4.65（ｍ、１Ｈ）、4.28（ｑ、２Ｈ）、3.53
（ｍ、１Ｈ）、3.31（ｔ、１Ｈ）、2.32（ｔ、２Ｈ）、
1.90−1.11（ｍ、31Ｈ）、0.93（ｑ、６Ｈ）。
【０２２３】実施例４０ 10-シアノ-２-シクロペンチル-デカノイル-Ｎg-ニトロ-
Ｌ-アルギニル-ホウ化ロイシンピナコールエステル
【０２２４】
【化４２】
【０２２５】10-シアノ-２-シクロペンチル-デカノイル
-Ｎg-ニトロ-Ｌ-アルギニン（実施例３９、上のパート
「Ｂ」）467mg（1.0mmol）およびシェンヴィ(Shenvi)、
米国特許第4,537,773号の方法により調製した塩酸ホウ
化ロイシンピナコールエステル264mg（1.9mmol）、ＢＯ
Ｐ440mg（1.0mmol）およびＨＯＢｔ135mg（1.0mmol）の
ＤＭＦ5.0mL中の溶液をＮＭＭ0.33mL（３mmol）で処理
した。２時間後、混合物を酢酸エチル75mLで希釈し、そ
して２％炭酸水素ナトリウム水溶液および水で洗浄し、
それから有機層を分離し、乾燥（硫酸マグネシウム）し
さらに蒸発して薄茶色の粉末410mgを得た。この固形物
をクロロホルムで洗浄して生成物290mgを灰白色の固形
物として得た。これはＨＰＬＣで単一ピークを表した。
1Ｈ ＮＭＲ（300ＭHz、ＣＤＣｌ3）δ：8.53（ｂｓ、
１Ｈ）、7.65（ｂｓ、２Ｈ）、6.71（ｔ、１Ｈ）、4.61
（ｍ、１Ｈ）、3.52（ｍ、１Ｈ）、3.31（ｍ、２Ｈ）、
3.05（ｍ、１Ｈ）、2.82（ｍ、１Ｈ）、2.38（ｔ、２
Ｈ）、2.06−1.42（ｍ、28Ｈ）、1.22（ｓ、12Ｈ）、1.
15（ｍ、２Ｈ）、0.92（ｍ、６Ｈ）。
【０２２６】実施例４１ 10-シアノ-２-シクロペンチル-デカノイル-Ｎg-ニトロ-
Ｌ-アルギニル-ロイシンα-ケトエチルアミド
【０２２７】
【化４３】
【０２２８】Ａ）10-シアノ-２-シクロペンチル-デカノ
イル-Ｎg-ニトロ-Ｌ-アルギニル-（１-エチルアミノカ
ルボニル１-ヒドロキシ-４-メチル）-２-ペンチルアミ
ド ＤＭＦ5.0mL中の10-シアノ-２-シクロペンチル-デカノ
イル-Ｎg-ニトロ-Ｌ-アルギニン467mg（1.0mmol）およ
び塩酸３-アミノ-２-ヒドロキシ-５-メチル-ヘキサン酸
Ｎ-エチルアミド（ハーブソン(Harbeson)ら、J. Med. C
hem. 37、2918-29(1994)の方法により調製した）225mg
の溶液を、ＢＯＰ440mg（１mmol）、ＨＯＢｔ135mg（１
mmol）およびＮＭＭ0.33mL（３mmol）で処理した。２時
間攪拌後、溶液を酢酸エチル75mLで希釈し、そして２％
炭酸水素ナトリウム水溶液、水、３％クエン酸水溶液、
水で洗浄し、そして乾燥（硫酸マグネシウム）して、蒸
発後、ヒドロキシ化合物540mgを灰白色の固形物として
得た。1Ｈ ＮＭＲ（300ＭHz、ＣＤＣｌ3）δ：8.53
（ｂｓ、１Ｈ）、7.73（ｂｓ、２Ｈ）、7.04（ｂｍ、１
Ｈ）、6.83（ｔ、１Ｈ）、4.52（ｍ、１Ｈ）、4.19
（ｍ、１Ｈ）、4.11（ｑ、２Ｈ）、3.46（ｑ、２Ｈ）、
3.26（ｍ、２Ｈ）、2.35（ｔ、２Ｈ）、1.91（ｍ、２
Ｈ）、1.83（ｍ、２Ｈ）、1.8−1.2（ｍ、28Ｈ）、1.13
（ｔ、３Ｈ）、0.88（ｍ、６Ｈ）。 Ｂ）10-シアノ-２-シクロペンチル-デカノイル-Ｎg-ニ
トロ-Ｌ-アルギニル-ロイシンα-ケトエチルアミド 上のパート「Ａ」よりのヒドロキシ化合物250mgの無水
ジクロロメタン6.0mL中の溶液を０℃に冷却し、そして
デス−マーチン(Dess-Martin)試薬（デス(D.B. Dess)と
マーチン(J.C. Martin)、ジャーナル オブ オーガニ
ック ケミストリー(J. Org. Chem.) 48、4156-4158 (1
983)）225mg（約0.5mmol）と攪拌した。
【０２２９】当該反応を室温まで温まらせそして２時間
攪拌した。この濁った懸濁液を酢酸エチル50mLで希釈
し、そして細かい焼結ガラスフィルターを通して濾過し
た。濾液を10％チオ硫酸ナトリウム水溶液で、その後飽
和塩化ナトリウムで洗浄した。それを乾燥（硫酸マグネ
シウム）しそして蒸発して白色粉末のケトアミド生成物
180mgを得た。これを水−アセトニトリル濃度勾配系（4
0分間で40〜70％アセトニトリル）を使用する調製ＲＰ-
ＨＰＬＣにより精製した。18.07分（ジアステレオマー
ａ）および19.54分（ジアステレオマーｂ）のピークを
収集した。 ジアステレオマーａ：1Ｈ ＮＭＲ（300ＭHz、ＣＤＣｌ
3）δ：8.45（ｂｓ、１Ｈ）、7.58（ｂｓ、２Ｈ）、7.0
4（ｂｍ、２Ｈ）、6.57（ｔ、１Ｈ）、5.33（ｔ、１
Ｈ）、4.60（ｍ、１Ｈ）、3.51（ｍ、１Ｈ）、3.33
（ｍ、３Ｈ）、2.35（ｔ、２Ｈ）、1.91−1.11（ｍ、34
Ｈ）、0.94（ｍ、６Ｈ）。 ジアステレオマーｂ：1Ｈ ＮＭＲ（300ＭHz、ＣＤＣｌ
3）δ：8.45（ｂｓ、１Ｈ）、7.48（ｂｓ、２Ｈ）、7.2
5（ｍ、１Ｈ）、7.04（ｔ、１Ｈ）、6.85（ｍ、１
Ｈ）、6.62（ｄ、１Ｈ）、5.32（ｔ、１Ｈ）、4.81
（ｍ、１Ｈ）、4.58（ｍ、１Ｈ）、3.51（ｍ、１Ｈ）、
3.35（ｍ、３Ｈ）、2.35（ｔ、２Ｈ）、1.95−1.11
（ｍ、32Ｈ）、0.98（ｍ、６Ｈ）。
【０２３０】実施例４２ 10-シアノ-２-シクロペンチル-デカノイル-Ｎg-ニトロ-
Ｌ-アルギニル-フェニルアラニンフルオロメチルケトン
【０２３１】
【化４４】
【０２３２】Ａ）１-ニトロ-２-フェニルエタンの合成 室温のクロロホルム（400mL）およびイソプロパノール
（75mL）中のトランス-β-ニトロスチレン（5.25g、0.0
35mol）およびシリカゲル（10g、230〜400メッシュ）の
攪拌している混合物に、テトラヒドロホウ酸ナトリウム
（5.50g、0.145mol）を45分間にわたってゆっくりと添
加した。反応混合物をさらに15分間攪拌し、そしてその
後10％塩酸（20mL）で慎重に反応を停止した。分離され
た固形物を濾過しそしてクロロホルム（50mL）で洗浄し
た。合わせた濾液および洗液を水（１×20mL）、食塩水
（１×20mL）で洗浄し、そして無水硫酸ナトリウムで乾
燥した。減圧下での溶媒の蒸発で粗材料を得、これをフ
ラッシュクロマトグラフィー（シリカゲル、８％酢酸エ
チル−ヘキサン）により精製して、１-ニトロ-２-フェ
ニルエタン2.86gを無色油状物質（スパイス臭）として
得た；Ｒf（ヘキサン中10％酢酸エチル）：0.40；1Ｈ
ＮＭＲ（300ＭHz、ＣＤＣｌ3）δ：7.40−7.20（ｍ、５
Ｈ）、4.60（ｔ、２Ｈ）、3.30（ｔ、２Ｈ）。 Ｂ）１-フルオロ-２-ヒドロキシ-３-ニトロ-４-フェニ
ルブタンの合成 ジクロロメタン（11.60mL、0.0232mo
l）中の塩化オキザリル（２M）の冷却した（-78℃）溶
液にジメチルスルホキシド（3.65ｇ、3.32mL、0.0467mo
l）をゆっくりと添加した。反応混合物を15分間攪拌し
た。ジクロロメタン（10mL）中の２-フルオロエタノー
ル（1.16g、0.0181mol）の溶液をその後反応フラスコ中
にゆっくりと導入した。さらに15分間攪拌した後、反応
混合物を無水ジクロロメタン（180mL）で希釈し、そし
てトリエチルアミン（9.20g、12.63mL、0.090mol）をそ
れに添加した。攪拌をさらに２時間継続し、それまでに
温度を室温にまで上げた。この時点で、無水ジクロロメ
タン（10mL）中の１-ニトロ-２-フェニルエタン（2.74
g、0.0181mol）の溶液を反応混合物に添加し、そして攪
拌を一夜継続した。混合物をその後水（１×30mL）、４
％塩酸（３×20mL）、水（１×20mL）、飽和炭酸水素ナ
トリウム溶液（２×20mL）および食塩水（１×20mL）で
洗浄した。無水硫酸ナトリウムで乾燥しそして溶媒の蒸
発で粗材料を得、これをフラッシュクロマトグラフィー
（シリカゲル、25％酢酸エチル−ヘキサン）により精製
して、生成物をエリスロおよびスレオの異性体として得
た。合わせた収量は3.01gであった。この処置の一般的
な記述はインペリアリ(Imperiali, B.)ら、テトラヘド
ロンレターズ(Tetrahedron Lett.) 27(2)、135 (1986)
中およびレヴェス(Revesz, L.)ら、テトラヘドロン レ
ターズ(Tetrahedron Lett.) 35(52)、9693 (1994)中に
見出され得る。
【０２３３】異性体ａは白色固形物、融点71〜73℃であ
った；Ｒf（ヘキサン中30％酢酸エチル）：0.46；1Ｈ
ＮＭＲ（300ＭHz、ＣＤＣｌ3）δ：7.40−7.10（ｍ、５
Ｈ）、4.90（ｍ、１Ｈ）、4.60（ｍ、１Ｈ）、4.50−4.
30（ｍ、２Ｈ）、3.45−3.25（ｍ、２Ｈ）、2.70（ｄ、
１Ｈ）。
【０２３４】異性体ｂは無色油状物質であった；Ｒ
f（ヘキサン中30％酢酸エチル）：0.42；1Ｈ ＮＭＲ
（300ＭHz、ＣＤＣｌ3）δ：7.40−7.15（ｍ、５Ｈ）、
4.90（ｍ、１Ｈ）、4.65（ｍ、１Ｈ）、4.50（ｍ、１
Ｈ）、4.20（ｍ、１Ｈ）、3.40−3.30（ｍ、２Ｈ）、2.
90（ｄ、１Ｈ）。 Ｃ）３-アミノ-１-フルオロ-２-ヒドロキシ-４-フェニ
ルブタンの合成 上の異性体ａ（0.48g、2.25mmol）、
無水エタノール（20mL）およびラネーニッケル（触媒）
の混合物を、パー(Parr)の装置中で５時間水素化（60ps
i）した。セライトパッドを通しての濾過および溶媒の
蒸発でアミン異性体ａ410mgを得た。上の異性体ｂ（800
mg、3.75mmol）の同様の処理でアミン異性体ｂ510mgを
得た。
【０２３５】アミン異性体ａは白色固形物、融点64〜67
℃であった；1Ｈ ＮＭＲ（300ＭHz、ＣＤＣｌ3）δ：
7.40−7.10（ｍ、５Ｈ）、4.70（ｄ、１Ｈ）、4.50
（ｄ、１Ｈ）、3.90−3.70（ｍ、１Ｈ）、3.30−3.10
（ｍ、１Ｈ）、2.95（ｄｄ、１Ｈ）、2.60−2.45（ｑ、
１Ｈ）、2.20−1.70（ブロード、３Ｈ）。
【０２３６】アミン異性体ｂは白色固形物、融点67〜70
℃であった；1Ｈ ＮＭＲ（300ＭHz、ＣＤＣｌ3）δ：
7.40−7.10（ｍ、５Ｈ）、4.70（ｄ、１Ｈ）、4.55
（ｄ、１Ｈ）、3.70−3.50（ｍ、１Ｈ）、3.20−3.00
（ｍ、１Ｈ）、2.95（ｄｄ、１Ｈ）、2.60−2.45（ｑ、
１Ｈ）、2.20−1.65（ブロード、３Ｈ）。 Ｄ）10-シアノ-２-シクロペンチル-デカノイル-Ｎg-ニ
トロ-Ｌ-アルギニル-（４-フルオロ-３-ヒドロキシ-１-
フェニル）-２-ブチルアミド ＤＭＦ5.0mL中の10-シア
ノ-２-シクロペンチル-デカノイル-Ｎg-ニトロ-Ｌ-アル
ギニン467mg（1.0mmol）および３-アミノ-１-フルオロ-
２-ヒドロキシ-４-フェニル-ブタン183mg（1.0mmol）の
溶液を、ＢＯＰ440mg（1.0mmol）、ＨＯＢｔ135mg（1.0
mmol）およびＮＭＭ0.33mL（３mmol）で処理した。２時
間攪拌後、溶液を酢酸エチル75mLで希釈し、そして、２
％炭酸水素ナトリウム水溶液、水、３％クエン酸水溶
液、水で洗浄しそして乾燥（硫酸マグネシウム）して、
蒸発後に480mgのヒドロキシ化合物を灰白色の固形物と
して得た。；1Ｈ ＮＭＲ（300ＭHz、ＣＤＣｌ3＋ｄ6-
ＤＭＳＯ）δ：8.15（ｂｓ、１Ｈ）、7.82（ｂｓ、２
Ｈ）、7.21（ｍ、６Ｈ）、5.05（ｔ、１Ｈ）、4.51
（ｍ、１Ｈ）、4.22（ｍ、１Ｈ）、3.82（ｍ、１Ｈ）、
3.75（ｍ、２Ｈ）、2.95（ｑ、２Ｈ）、2.35（ｔ、２
Ｈ）、2.04−1.13（ｍ、31Ｈ）。 Ｅ）10-シアノ-２-シクロペンチル-１-デカノイル-Ｎg-
ニトロ-Ｌ-アルギニル-フェニルアラニンフルオロメチ
ルケトン 無水ジクロロメタン6.0mL中の上のパート「Ｃ」よりの
ヒドロキシ化合物250mgの溶液を０℃に冷却し、そして
デス-マーチン(Dess-Martin)試薬225mg（約0.5mmol）と
攪拌した。反応を室温まで温まらせかつ２時間攪拌し
た。濁った懸濁液を酢酸エチル50mLで希釈し、そして微
細な焼結グラスフィルターを通して濾過した。濾液を10
％チオ硫酸ナトリウム水溶液でおよびその後飽和塩化ナ
トリウムで洗浄した。それを乾燥（硫酸マグネシウム）
しそして蒸発して、180mgの白色固形物を得た。ＨＰＬ
Ｃ精製の後、42mgの純粋なフルオロメチルケトン生成物
を得た。1Ｈ ＮＭＲ（300ＭHz、ＣＤＣｌ3）δ：8.56
（ｂｓ、１Ｈ）、7.62（ｂｓ、２Ｈ）、7.42（ｔ、１
Ｈ）、7.21（ｍ、５Ｈ）、6.63（ｍ、１Ｈ）、5.05−4.
53（ｍ、４Ｈ）、3.46（ｍ、１Ｈ）、3.18（ｍ、２
Ｈ）、2.98（ｑ、２Ｈ）、2.33（ｔ、２Ｈ）、2.04−1.
13（ｍ、27Ｈ）。
【０２３７】この明細書に引用される公表された文書の
それぞれは完全に引用することにより本明細書に組み込
まれる。
【０２３８】当業者は、多数の変更および修飾が本発明
の好まれる態様に対しなされうること、および、そうし
た変更および修飾が本発明の精神を離れることなくなさ
れうることを正しく認識するであろう。従って、追加さ
れる(appended)請求の範囲が全ての同等の変動を本発明
の真の精神および範囲内に含まれるように包含すること
が意図される。
【０２３９】
【配列表】 <110> セフアロン・インコーポレーテッド Cephalon, Inc. <120> 多機能プロテアーゼ阻害剤を有効成分とする組成物 <130> ２００００１０１１ <150> ＰＣＴ／ＵＳ９５／１４９２１ <151> １９９５−１１−１４ <160> １０ <210> １ <211> ３６ <212> ＤＮＡ <213> Ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ <220> <223> Ｃｕ／ＺｎスーパーオキシドジスムターゼのｃＤＮＡのＡＴＧ開始コド ンの上流にコザックのコンセンサス配列とＨｉｎｄ ＩＩＩ制限酵素切断部位を 組み入れるために合成 <400> １ tcgatcgaag cttgccgcca ccatggcgat gaaagc 36 <210> ２ <211> ３０ <212> ＤＮＡ <213> Ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ <220> <223> マウスのＣｕ／ＺｎスーパーオキシドジスムターゼのｃＤＮＡの３’末 端にＸｈｏ Ｉ制限酵素切断部位を組み入れるために合成 <400> ２ agctagcctc gagcagatta cagtttaatg 30 <210> ３ <211> ２１ <212> ＤＮＡ <213> Ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ <220> <223> マウスのＣｕ／ＺｎスーパーオキシドジスムターゼのｃＤＮＡにおける １９３−２１３の配列を参考に合成 <400> ３ ttaatcctca ctctaagaaa c 21 <210> ４ <211> ２４ <212> ＤＮＡ <213> Ｍｕｓ <220> <223> マウスのＣｕ／ＺｎスーパーオキシドジスムターゼのｃＤＮＡにおける ３５１−３２８の配列を参考に合成 <400> ４ ttgtacggcc agtgatggaa tgct 24 <210> ５ <211> ２４ <212> ＤＮＡ <213> Ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ <220> <223> マウスのＣｕ／ＺｎスーパーオキシドジスムターゼのｃＤＮＡにおける ３２８−３５１の配列を参考に合成 <400> ５ agcattccat cactggccgt acaa 24 <210> ６ <211> ２０ <212> ＤＮＡ <213> Ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ <220> <223> ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ ＩＩ ＳＫ＋における６２６−６４５の配列 を参考に合成 <400> ６ taatacgact cactataggg 20 <210> ７ <211> ４１ <212> ＤＮＡ <213> Ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ <220> <223> マウスのＣｕ／ＺｎスーパーオキシドジスムターゼのｃＤＮＡにおける ＋２１−−２０の配列を参考に合成 <400> ７ gcacaccact ttcatcgcca tggtggcggc aagcttcgat c 41 <210> ８ <211> ２０ <212> ＤＮＡ <213> Ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ <220> <223> ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ ＩＩ ＳＫ＋における７９２−７７３の配列 を参考に合成 <400> ８ attaaccctc actaaaggga 20 <210> ９ <211> ４１ <212> ＤＮＡ <213> Ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ <220> <223> マウスのＣｕ／ＺｎスーパーオキシドジスムターゼのｃＤＮＡにおける ＋２１−−２０の配列を参考に合成 <400> ９ gatcgaagct tgccgccacc atggcgatga aagtggtgtg c 41 <210> １０ <211> １８ <212> ＤＮＡ <213> Ａｒｔｉｆｉｃｉａｌ Ｓｅｑｕｅｎｃｅ <220> <223> マウスのＣｕ／ＺｎスーパーオキシドジスムターゼのｃＤＮＡにおける １２３−１０６の配列を参考に合成 <400> １０ cttcagttaa tcctgtaa 18
【図面の簡単な説明】
【図１】Ｍ１２．Ｂ６細胞による電気穿孔されたＯＶＡ
のプロセシングに対する開示されるＭＣＰ阻害剤の態様
の影響を示す。
【図２】本発明のひとつの態様によるプロセシングの阻
害に対するＯＶＡ濃度の影響を示す。
【図３】本発明のひとつの態様によるプロセシングの阻
害に対するＯＶＡ濃度の影響を示す。
【図４】ＳＯＤ-１遺伝子ならびにＦＡＬＳ変異、制限
酵素切断部位およびＰＣＲプライマーの場所を明確にす
る物理的地図を示す。
【図５】ＭＣＰ阻害剤の態様の５μMとのインキュベー
ション後の一過性にトランスフェクションされた２９３
細胞中のＳＯＤ-１レベルの定量を示す。
【図６】本発明のひとつの態様に対する多様なＳＯＤ-
１アイソフォームの用量応答を示す。
【図７】ＳＯＤ-１の代謝回転がＭＣＰ活性の作用であ
ることを示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 43/00 １１１ Ａ６１Ｐ 43/00 １１１ Ｃ０７Ｃ 311/06 Ｃ０７Ｃ 311/06 311/64 311/64 337/06 337/06 Ｃ０７Ｄ 311/70 Ｃ０７Ｄ 311/70 Ｃ０７Ｆ 5/02 Ｃ０７Ｆ 5/02 Ｃ Ｃ０７Ｋ 5/023 Ｃ０７Ｋ 5/023 (72)発明者 ロバート・サイマン アメリカ合衆国デラウエア州19801ウイル ミントン・ビタースイートドライブ2646 (72)発明者 サンカー・チヤタージー アメリカ合衆国ペンシルベニア州19096ウ インウツド・ヘンリーロード228 (72)発明者 ジエイムズ・シー・カウアー アメリカ合衆国ペンシルベニア州19348ケ ネツトスクエア・ウイロウグレンロード 605

Claims (2)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】 多機能プロテアーゼ阻害剤および製薬学
    的に許容し得る担体を含んでなるＣｕ／Ｚｎスーパーオ
    キシドジスムターゼ−１酵素の分解を抑制するための組
    成物。
  2. 【請求項２】 多機能プロテアーゼ阻害剤および製薬学
    的に許容し得る担体を含んでなるＣｕ／Ｚｎスーパーオ
    キシドジスムターゼ−１酵素活性の低減を特徴とする疾
    患の治療のための組成物。
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