JP2000319155A

JP2000319155A - マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤、及びこれを含有して成る老化防止用皮膚外用剤

Info

Publication number: JP2000319155A
Application number: JP11129357A
Authority: JP
Inventors: Megumi Obayashi; 恵大林; Hitoshi Masaki; 仁正木; Yuri Okano; 由利岡野
Original assignee: Noevir Co Ltd
Current assignee: Noevir Co Ltd
Priority date: 1999-05-11
Filing date: 1999-05-11
Publication date: 2000-11-21

Abstract

(57)【要約】【課題】紫外線照射により真皮線維芽細胞において産
生が誘導されるマトリックスメタロプロテアーゼに対
し、特異的且つ高い阻害活性を示すマトリックスメタロ
プロテアーゼ阻害剤を得、さらに、紫外線照射により促
進される皮膚の老化の防止，改善に有効な皮膚外用剤を
提供する。【解決手段】トウキ（Angelica acutiloba Kitagaw
a）及びその近縁植物，ニオイウド（Angelica uchiyama
nae Yabe），クチナシ（Gardenia jasminoides Ellis）
及びその同属植物，ワレモコウ（Sanguisorba officina
lis L.）の各植物抽出物、リポ酸，その塩及びその誘導
体より成る群から選択した１種又は２種以上を担体又は
基剤に含有させて、マトリックスメタロプロテアーゼ阻
害剤とし、さらにこのマトリックスメタロプロテアーゼ
阻害剤の１種又は２種以上を外用剤基剤に含有させて、
老化防止用皮膚外用剤を得る。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、真皮線維芽細胞の
産生するＩ型マトリックスメタロプロテアーゼに対し、
特異的な阻害活性を示すマトリックスメタロプロテアー
ゼ阻害剤、及びこれを含有して成る老化防止用皮膚外用
剤に関する。さらに詳しくは、トウキ及びその近縁植
物，ニオイウド，クチナシ及びその同属植物，ワレモコ
ウの各植物抽出物、リポ酸及びその塩或いは誘導体より
成る群から選択される１種又は２種以上を含有して成る
マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤、並びにこれを
含有して成る、特に紫外線により促進される皮膚の老化
防止に有効な皮膚外用剤に関する。

【０００２】

【従来の技術】近年、マトリックス線維の分解を促進す
るマトリックスメタロプロテアーゼと病態との関係につ
いて、多くの知見が得られている。真皮においては、紫
外線照射により線維芽細胞によるマトリックスメタロプ
ロテアーゼの産生が誘導され、その結果、真皮細胞外マ
トリックスの主成分であるコラーゲンの分解が促進さ
れ、しわの形成や弾性の低下といった皮膚の老化が進行
することが知られている。

【０００３】かかる紫外線により促進される皮膚の老化
を改善し、或いは防止するべく、紫外線吸収剤や散乱剤
の皮膚外用剤への配合や、紫外線照射により生じる活性
酸素の消去作用を有する物質のスクリーニングが盛んに
行われてきた。それと同時に、上記したようなコラーゲ
ンの分解に関与するマトリックスメタロプロテアーゼの
活性を阻害する物質のスクリーニングも行われている。

【０００４】たとえば、アシルフェニルグリシン誘導体
（特開平７−１０１９２５）、ザクロ実，レモンバーム
実及び葉，グアバ，ハマメリスといった植物の抽出物
（特開平７−１９６５２６，同７−２９１８７３，同８
−２８３１３３）、ポリポレン酸及びこれを含有するホ
ウロクタケ抽出物（特開平９−４０５５２）、ジカルボ
ン酸（特開平９−１２４４７２）、アスペルギルス属微
生物の産生物質（特開平９−２４１２８７）などが開示
されている。

【０００５】しかしながら、これまでに得られたマトリ
ックスメタロプロテアーゼ阻害剤の中には、細菌性のコ
ラゲナーゼ等に対し強い活性を示し、間質系のマトリッ
クスメタロプロテアーゼに対する特異性の低いものや、
阻害活性の十分でないもの、安定性に欠けるものも存在
していた。

【０００６】また、真皮コラーゲン線維束の乱れを改善
する作用を有するものとして、ウルソール酸類、バラ科
のビワ及びモモ、クロウメモドキ科ナツメ、キク科ヤグ
ルマギク、シソ科タイム，ローズマリー，セージ，シ
ソ，オドリコソウ及びセイヨウハッカの抽出物が知られ
ているが、これらによりコラーゲン線維を再構築するに
は長時間を要し、抗炎症作用を有する物質との併用が望
ましいことが示されている（特開平１１−１２１２
２）。

【０００７】

【発明が解決しようとする課題】そこで本発明において
は、紫外線照射により真皮線維芽細胞において産生が誘
導されるマトリックスメタロプロテアーゼに対し、特異
的且つ高い阻害活性を示すマトリックスメタロプロテア
ーゼ阻害剤を得、さらにこれを用いて、紫外線照射によ
り促進される皮膚の老化の防止，改善に有効な皮膚外用
剤を提供することを目的とした。

【０００８】

【課題を解決するための手段】上記の課題を解決するべ
く、真皮線維芽細胞により産生されるマトリックスメタ
ロプロテアーゼに対する阻害活性を指標としてスクリー
ニングを行った。その結果、トウキ及びその近縁植物，
ニオイウド，クチナシ及びその同属植物，ワレモコウの
各植物抽出物、リポ酸及びその塩或いは誘導体が良好な
阻害活性を示し、さらに皮膚外用剤製剤中においても安
定に阻害活性を保持することができ、しかも皮膚に対す
る安全性も高いことを見いだした。これらは、紫外線照
射の際に共存させた場合、その後に誘導されるマトリッ
クスメタロプロテアーゼの産生を有効に阻害することが
でき、本発明者らは前記物質より選んだ１種又は２種以
上を担体又は基剤に含有させることにより、本発明に係
るマトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤を得た。そし
て、このマトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤を用い
て、紫外線により促進される皮膚の老化の防止，改善に
有効な皮膚外用剤を得た。

【０００９】すなわち本発明においては、トウキ（Ange
lica acutiloba Kitagawa）及びその近縁植物，ニオイ
ウド（Angelica uchiyamanae Yabe），クチナシ（Garde
niajasminoides Ellis）及びその同属植物，ワレモコウ
（Sanguisorba officinalisL.）の各植物抽出物、リポ
酸，その塩及びその誘導体より成る群から選択した１種
又は２種以上を担体又は基剤に含有させて、マトリック
スメタロプロテアーゼ阻害剤とし、さらにこのマトリッ
クスメタロプロテアーゼ阻害剤の１種又は２種以上を外
用剤基剤に含有させて、老化防止用皮膚外用剤を得る。

【００１０】

【発明の実施の形態】本発明において用いるトウキ（An
gelica acutiloba Kitagawa）は、セリ科に属する二年
草で、生薬「当帰」（Angelicae Radix）の基原植物で
ある。この近縁植物としては、ホッカイトウキ（Angeli
ca acutiloba var. sugiyamae Hikino），ミヤマトウキ
（Angelica acutiloba var. iwatensis Hikino），中国
産当帰であるAngelica sinensis Dielsが挙げられる。
また、朝鮮，中国東北産当帰として用いられるニオイウ
ド（Angelica uchiyamanae Yabe）も用いることができ
る。

【００１１】本発明において用いるクチナシ（Gardenia
jasminoides Ellis）は、アカネ科に属する常緑低木
で、生薬「サンシシ」（Gardeniae Fructus）の基原植
物である。この同属植物としては、Gardenia jasminoid
es var. grandiflora Nakai，コクチナシ（Gardenia ra
dicans Thunb.）が挙げられる。

【００１２】本発明において用いるワレモコウ（Sangui
sorba officinalis L.）は、バラ科に属する多年草で、
生薬「チユ」の基原植物である。

【００１３】本発明においては、上記各植物の溶媒によ
る抽出物を用いる。抽出には、上記各植物の花，葉，
茎，果実，根茎，根等の各部位を用いることができ、ま
た全草又は全木を用いてもよいが、それぞれ生薬として
用いられる部位、すなわちトウキ及びその近縁植物につ
いては根、クチナシ及びその同属植物については果実、
ワレモコウについては根及び根茎を用いることが好まし
い。

【００１４】上記植物は生のまま抽出操作に供してもよ
いが、抽出効率を考えると、細切，乾燥，粉砕等の処理
を行った後抽出を行うことが好ましい。抽出は、抽出溶
媒に浸漬して行う。抽出効率を上げるため撹拌を行った
り、抽出溶媒中でホモジナイズすることもできる。抽出
温度としては、５℃程度から抽出溶媒の沸点以下の温度
とするのが適切である。抽出時間は、４時間〜１４日間
程度とするのが適切である。

【００１５】抽出溶媒としては、水の他、メタノール，
エタノール，プロパノール，イソプロパノール，ブタノ
ール等の低級アルコール、1,3-ブチレングリコール，プ
ロピレングリコール，ジプロピレングリコール，1,2-ペ
ンタンジオール，グリセリン等の多価アルコール、エチ
ルエーテル，プロピルエーテル等のエーテル類、酢酸エ
チル，酢酸ブチル等のエステル類、アセトン，エチルメ
チルケトン等のケトン類などの極性有機溶媒、及びこれ
らの２種以上による混合溶媒が好ましく用いられる。ま
た、生理食塩水，リン酸緩衝液，リン酸緩衝生理食塩水
等を用いてもよい。

【００１６】上記植物の抽出物は、そのままでもマトリ
ックスメタロプロテアーゼ阻害剤に添加できるが、濃
縮，乾固したものを水や極性有機溶媒に再度溶解した
り、或いはマトリックスメタロプロテアーゼ阻害作用を
損なわない範囲で脱色，脱臭等の精製処理を行った後に
添加してもよい。また保存のためには、精製処理の後凍
結乾燥し、用時に溶媒に溶解して用いることが好まし
い。

【００１７】また本発明においては、リポ酸，その塩及
び誘導体を用いることができる。リポ酸の塩としては、
アルカリ金属塩，アルカリ土類金属塩，アミン塩，アン
モニウム塩，塩基性アミノ酸塩等が挙げられ、リポ酸の
誘導体としては、リポアミド，ジヒドロリポ酸及びその
塩、ジヒドロリポアミド，リポイルリシン等が挙げられ
る。

【００１８】本発明に係るマトリックスメタロプロテア
ーゼ阻害剤は、上記の各植物の抽出物，リポ酸及びその
塩，リポ酸の誘導体より成る群から１種又は２種以上を
選択したものをそのまま用い、或いは担体に添加して得
る。担体としては、水、エタノール，プロパノール，ブ
タノール等低級アルコールなどの極性有機溶媒、これら
の混合液といった液状担体、各種乳濁液、各種クリーム
基剤、軟膏基剤、ゲル、粉体などが用いられる。従っ
て、本発明に係るマトリックスメタロプロテアーゼ阻害
剤は、ローション剤，懸濁剤，乳剤，クリーム剤，軟膏
剤，ゲル剤，粉末等の形態で提供することができる。ま
た、リポソームやマイクロカプセルに内包させた状態と
することもできる。なお、本発明に係るマトリックスメ
タロプロテアーゼ阻害剤には、本発明の特徴を損なわな
い範囲で、抗酸化剤，防菌防黴剤，紫外線吸収剤等の安
定化剤や、吸収促進剤等を添加することもできる。

【００１９】さらに本発明においては、上記に記載した
マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤の１種又は２種
以上を外用剤基剤に含有させて、皮膚の老化防止及び改
善に有効な皮膚外用剤を提供する。かかる皮膚外用剤
は、ローション剤，懸濁剤，乳剤，クリーム剤，軟膏
剤，ゲル剤等の形状で提供することができる。また、化
粧水，乳液，クリーム，パック剤等皮膚用の化粧料や、
化粧下地用ローション又はクリーム、乳液状，クリーム
状，軟膏状，固形状の各種ファンデーション等のメイク
アップ化粧料、日焼け止めローション又はクリーム等の
日焼け止め化粧料、ハンドローション又はクリーム，レ
ッグローション又はクリーム，ボディローション又はク
リーム等のボディ化粧料などとしても提供することがで
きる。

【００２０】本発明に係る老化防止用皮膚外用剤におい
ても、上記マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤の他
に、本発明の特徴を損なわない範囲で、各種油分，界面
活性剤，低級一価アルコール，保湿剤，多価アルコー
ル，細胞賦活剤，抗酸化剤，美白剤，紫外線吸収剤，防
菌防黴剤，顔料，色素類，香料等、一般的な皮膚外用剤
添加成分を加えることができる。

【００２１】

【実施例】さらに本発明の特徴について、実施例により
詳細に説明する。

【００２２】まず、本発明に係るマトリックスメタロプ
ロテアーゼ阻害剤の実施例を示す。

【００２３】［実施例１］トウキ（Angelica acutilo
ba Kitagawa）の根を油通しして乾燥したもの１００ｇ
を粉砕し、５０容量％エタノール水溶液９００ｍｌ中に
加えて、２０℃にて５日間撹拌抽出を行った。抽出液を
ろ過してろ液を回収し、ロータリーエバポレーターにて
１／１０容量まで減圧濃縮し、濃縮物を再度５０容量％
エタノール水溶液１００ｍｌに溶解した。

【００２４】［実施例２］クチナシ（Gardenia jasmi
noides Ellis）の果実１００ｇを細切して５０容量％エ
タノール水溶液９００ｍｌ中に加えて、１５℃にて７日
間撹拌抽出を行った。抽出液をろ過してろ液を回収し、
ロータリーエバポレーターにて１／１０容量まで減圧濃
縮した。

【００２５】［実施例３］ワレモコウ（Sanguisorba
officinalis L.）の根茎１００ｇの乾燥粉末を５０容量
％エタノール９００ｍｌ中に加えて１０℃で浸漬し、１
０日間抽出を行った。デカンテーションにより抽出液を
回収してロータリーエバポレーターにて濃縮乾固し、乾
固物を２０容量％エタノール１００ｍｌに溶解した。

【００２６】［実施例４］リポ酸２０．６ｍｇをエタ
ノールに溶解して１００ｍｌとし、１．０ｍＭの溶液と
した。

【００２７】［実施例５］リポ酸４１．２ｍｇをスク
ワランに溶解して１００ｍｌとし、２．０ｍＭの溶液と
した。

【００２８】［実施例６］リポ酸ナトリウム２２．８
ｍｇを精製水に溶解して１００ｍｌとし、１．０ｍＭの
溶液とした。

【００２９】上記実施例のうち、実施例１〜実施例４に
ついて、紫外線照射により誘導されるＩ型マトリックス
メタロプロテアーゼ産生に対する阻害作用を、次のよう
にして評価した。まず、ヒト線維芽細胞を２×１０⁴個
／ウェルとなるように９６穴プレートに播種し、牛胎仔
血清５(w/v)％を添加したダルベッコ基礎培地（ＤＭＥ
Ｍ）にて、３７℃で２４時間培養した。Ｈａｎｋｓ(+)
液で洗浄した後、培地を、試料を含むＨａｎｋｓ(+)液
０．２ｍｌに交換し、４０Ｊ／ｃｍ²の長波長紫外線
（ＵＶＡ）を照射した。次いで培地を０．１(w/v)％牛
血清アルブミンを含有するＤＭＥＭに交換して３７℃で
２４時間培養した後、生細胞数を計測し、培地上清中の
Ｉ型マトリックスメタロプロテアーゼ活性を測定した。
培地上清中のＩ型マトリックスメタロプロテアーゼ活性
は、最終濃度０．０４ｍｇ／ｍｌのトリプシンを添加し
て３７℃で１５分間インキュベートした後、最終濃度
０．２ｍｇ／ｍｌの大豆トリプシン阻害剤を添加し、こ
れについて、フルオレセインイソチオシアネート（ＦＩ
ＴＣ）で標識したＩ型コラーゲンを基質として用いて測
定した。すなわち、０．２５ｍｇ／ｍｌのＦＩＴＣ標識
Ｉ型コラーゲンを含有する５０ｍＭトリス塩酸緩衝液
（ｐＨ７．５、０．２Ｍ塩化ナトリウム，５ｍＭ塩化カ
ルシウム及び０．０２(w/v)％アジ化ナトリウムを含
む）５０μｌを、前記トリプシン処理した培地上清５０
μｌに加え、遮光下にて３５℃で２時間反応させた。次
いで４０ｍＭのο-フェナントロリン（phenanthrolin
e）５μｌを加えて反応を停止した後、３５℃にて３０
分間コラーゲンの変性処理を行い、エタノールと０．１
７Ｍトリス塩酸緩衝液（ｐＨ９．５、０．６７Ｍ塩化ナ
トリウムを含む）との容量比７：３の混合液５０μｌを
添加し、変性されたコラーゲンのみを抽出した。２，０
００ｒｐｍで１５分間遠心分離し、上清の蛍光強度を励
起波長４９５ｎｍ，蛍光波長５２０ｎｍで測定した。

【００３０】実施例１〜実施例４について、試料の最終
濃度とＩ型マトリックスメタロプロテアーゼ活性との関
係を、試料を添加しない場合の前記酵素活性を１００と
して示したインデックスにより、それぞれ表１〜表４に
示した。

【００３１】

【表１】

【００３２】表１より明らかなように、本発明の実施例
１は非常に強いＩ型マトリックスメタロプロテアーゼ阻
害作用を示し、ＵＶＡにより誘導されるＩ型マトリック
スメタロプロテアーゼの活性を、０．００２ｍｇ／ｍｌ
で５８％、０．０５ｍｇ／ｍｌで２５％まで阻害してい
た。

【００３３】

【表２】

【００３４】表２より、ＵＶＡにより誘導されるＩ型マ
トリックスメタロプロテアーゼの活性に対する本発明の
実施例２の阻害効果は、０．００２ｍｇ／ｍｌ〜０．０
１ｍｇ／ｍｌの濃度で最大となり、最大阻害率は約３０
％程度であることが示された。

【００３５】

【表３】

【００３６】表３においても、本発明の実施例３が強い
Ｉ型マトリックスメタロプロテアーゼ阻害作用を有する
ことが示されるが、阻害作用は０．０２５ｍｇ／ｍｌ程
度で最大（阻害率６３％）となっていた。

【００３７】

【表４】

【００３８】本発明の実施例４については、表４におい
て示されるように、リポ酸の最終濃度にして０．０２５
ｍＭ程度で若干の阻害効果が認められ、０．０５ｍＭで
はＵＶＡにより誘導されるＩ型マトリックスメタロプロ
テアーゼ活性を６０．３％まで阻害していた。

【００３９】続いて、本発明に係る老化防止用皮膚外用
剤についての実施例を示す。

【００４０】［実施例７］皮膚老化防止用ローション剤（１）エタノール１０．００（重量％）（２）ヒドロキシエチルセルロース１．００（３）マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤０．０２（実施例１）（４）パラオキシ安息香酸メチル０．１０（５）精製水８８．８８製法：(1)〜(4)を順次(5)に添加し、均一に溶解する。

【００４１】［実施例８］皮膚老化防止用乳剤（１）ステアリン酸０．２０（重量％）（２）セタノール１．５０（３）ワセリン３．００（４）流動パラフィン７．００（５）ポリオキシエチレン(10E.O.)モノオレイン酸１．５０エステル（６）酢酸トコフェロール０．２５（７）グリセリン５．００（８）パラオキシ安息香酸メチル０．１０（９）トリエタノールアミン１．００（10）精製水８０．４０（11）マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤０．０５（実施例２）製法：(1)〜(6)の油相成分を混合，加熱して均一に溶解
し、７０℃に保つ。一方、(7)〜(10)の水相成分を混
合，加熱して均一とし、７０℃とする。この水相成分に
前記油相成分を撹拌しながら徐々に添加して乳化し、冷
却した後４０℃にて(11)を添加，混合する。

【００４２】［実施例９］皮膚老化防止用ゲル剤（１）ジプロピレングリコール１０．００（重量％）（２）カルボキシビニルポリマー０．５０（３）水酸化カリウム０．１０（４）パラオキシ安息香酸メチル０．１０（５）精製水８９．２７（６）マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤０．０３（実施例３）製法：(5)に(2)を均一に溶解した後、(1)に(4)を溶解し
て添加し、次いで(3)を加えて増粘させ、(6)を添加，混
合する。

【００４３】［実施例１０］皮膚老化防止用クリーム（水中油型）（１）ミツロウ６．０（重量％）（２）セタノール５．０（３）還元ラノリン８．０（４）スクワラン２７．５（５）グリセリル脂肪酸エステル４．０（６）親油型グリセリルモノステアリン酸エステル２．０（７）ポリオキシエチレン(20E.O.)ソルビタン５．０モノラウリン酸エステル（８）プロピレングリコール５．０（９）パラオキシ安息香酸メチル０．１（10）精製水３２．４（11）マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤５．０（実施例４）製法：(1)〜(7)の油相成分を混合，加熱して均一に溶解
し、７５℃に保つ。一方、(8)〜(10)の水相成分を混
合，加熱して均一とし、７５℃とする。この水相成分に
前記油相成分を添加して予備乳化した後、ホモミキサー
にて均一に乳化し、冷却後４０℃にて(11)を添加，混合
する。

【００４４】［実施例１１］皮膚老化防止用水中油型乳剤性軟膏（１）白色ワセリン２５．００（重量％）（２）ステアリルアルコール２５．００（３）マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤２．５０（実施例５）（４）グリセリン１２．００（５）ラウリル硫酸ナトリウム１．００（６）パラオキシ安息香酸メチル０．１０（７）精製水３４．３９（８）マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤０．０１（実施例１）製法：(1)〜(5)の油相成分を混合，溶解して均一とし、
７５℃に加熱する。一方、(6)を(7)に溶解して７５℃に
加熱し、これに前記油相成分を添加して乳化し、冷却後
４０℃にて(8)を添加，混合する。

【００４５】［実施例１２］日焼け止め用油中水型クリーム（１）スクワラン３８．００（重量％）（２）グリセリルジイソステアリン酸エステル３．００（３）マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤３．００（実施例５）（４）パラメトキシ桂皮酸2-エチルヘキシル３．００（５）オキシベンゾン１．５０（６）有機変性ベントナイト１．５０（７）シリコーン処理酸化チタン３．００（８）1,3-ブチレングリコール５．００（９）パラオキシ安息香酸メチル０．１０（10）精製水４１．７８（11）マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤０．０２（実施例２）（12）香料０．１０製法：(1)〜(6)を混合，加熱して溶解し、(7)を分散し
て７０℃とし、油相とする。一方、(9)を(8)に溶解して
(10)に加えて混合し、７０℃に加熱する。前記油相に水
相を添加し、ホモジナイザー処理して乳化後冷却し、４
０℃にて(11)，(12)を添加，混合する。

【００４６】［実施例１３］メイクアップベースクリーム（１）ステアリン酸１２．００（重量％）（２）セタノール２．００（３）グリセリルトリ2-エチルヘキサン酸エステル２．５０（４）自己乳化型グリセリルモノステアリン酸２．００エステル（５）プロピレングリコール１０．００（６）パラオキシ安息香酸メチル０．１０（７）水酸化カリウム０．３０（８）精製水６９．４８（９）酸化チタン１．００（10）ベンガラ０．１０（11）黄酸化鉄０．４０（12）マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤０．０２（実施例３）（13）香料０．１０製法：(1)〜(4)の油相成分を混合，加熱して均一に溶解
し、７５℃に保つ。一方、(5)〜(8)の水相成分を混合，
加熱して均一とし、これに(9)〜(11)を添加してホモミ
キサーにて均一に分散した後、７５℃とする。この水相
成分に前記油相成分を添加して予備乳化した後、ホモミ
キサーにて均一に乳化し、冷却後４０℃にて(12)，(13)
を添加，混合する。

【００４７】［実施例１４］乳液状ファンデーション（１）ステアリン酸２．０（重量％）（２）スクワラン５．０（３）ミリスチン酸オクチルドデシル５．０（４）セタノール１．０（５）デカグリセリルモノイソパルミチン酸エステル９．０（６）1,3-ブチレングリコール６．０（７）水酸化カリウム０．１（８）パラオキシ安息香酸メチル０．１（９）精製水４８．６（10）酸化チタン９．０（11）タルク７．４（12）ベンガラ０．５（13）黄酸化鉄１．１（14）黒酸化鉄０．１（15）マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤５．０（実施例６）（16）香料０．１製法：(1)〜(5)の油相成分を混合，加熱して均一に溶解
し、７５℃に保つ。一方、(6)〜(9)の水相成分を混合，
加熱して均一とし、これに(10)〜(14)を添加してホモミ
キサーにて均一に分散した後、７５℃とする。この水相
成分に前記油相成分を添加して予備乳化した後、ホモミ
キサーにて均一に乳化し、冷却後４０℃にて(15)，(16)
を添加，混合する。

【００４８】［実施例１５］油性軟膏型ファンデーション（１）固形パラフィン３．０（重量％）（２）マイクロクリスタリンワックス６．０（３）ミツロウ２．０（４）ワセリン１２．０（５）酢酸ラノリン１．０（６）スクワラン６．０（７）パルミチン酸イソプロピル１６．０（８）ビタミンＥ０．２（９）マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤２．０（実施例５）（10）タルク１７．５（11）カオリン１５．０（12）酸化チタン１５．０（13）ベンガラ１．０（14）黄酸化鉄３．０（15）黒酸化鉄０．２（16）香料０．１製法：(1)〜(8)を８５℃で溶解し、これに(9)を添加，
混合した後、(10)〜(15)を十分混合，粉砕して、撹拌し
ながら添加する。次いでコロイドミルで磨砕分散し、(1
6)を添加，混合して脱気した後、７０℃で容器に流し込
んで冷却する。

【００４９】［実施例１６］ハンドクリーム（１）セタノール４．００（重量％）（２）ワセリン２．００（３）流動パラフィン１０．００（４）グリセリルモノステアリン酸エステル１．５０（５）ポリオキシエチレン(60E.O.)グリセリル２．５０イソステアリン酸エステル（６）酢酸トコフェロール０．５０（７）グリセリン２０．００（８）パラオキシ安息香酸メチル０．１０（９）精製水５９．３８（10）マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤０．０１（実施例２）（11）マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤０．０１（実施例３）製法：(1)〜(6)の油相成分を混合，加熱して均一に溶解
し、７５℃に保つ。一方、(7)〜(9)の水相成分を混合，
加熱して均一とし、７５℃とする。この水相成分に前記
油相成分を添加して予備乳化した後、ホモミキサーにて
均一に乳化し、冷却後４０℃にて(10)，(11)を添加，混
合する。

【００５０】上記本発明に係る老化防止用皮膚外用剤に
ついての実施例のうち、実施例７〜実施例１１につい
て、紫外線によるしわの発生に対する防止効果を評価し
た。なお各実施例において、配合した実施例１〜実施例
５のマトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤を、それぞ
れこれらにおいて溶媒として用いた５０容量％エタノー
ル水溶液，２０容量％エタノール水溶液，エタノール及
びスクワランに代替したものをそれぞれ比較例１〜比較
例５とし、同時に評価を行った。しわの発生防止効果
は、ヘアレスマウス５匹を１群とし、各群について実施
例及び比較例各０．２ｇをそれぞれ１日１回背部に塗布
し、１Ｊ／ｃｍ²／週のＵＶＡを５０週間照射し、ヘア
レスマウスにおけるしわの発生状況を観察し、表５に示
す判定基準に従って点数化して行った。この際、精製水
のみを塗布した群を対照とした。結果は各群の平均値を
算出し、ＵＶＡ照射日数との関係により表６に示した。

【００５１】

【表５】

【００５２】

【表６】

【００５３】表６に示されるように、対照群において
は、ＵＶＡ照射日数が４０週を超える頃には形成された
しわの深さは中程度にまで達し、５０週後には深いしわ
の発生が認められていた。これに対し本発明の実施例塗
布群では、いずれにおいても有意なしわの発生の抑制が
認められ、５０週後において微小ないし軽微なしわが認
められた程度であった。特に、実施例７，実施例９及び
実施例１１塗布群においては、顕著なしわの発生抑制が
認められていた。一方比較例塗布群では、酢酸トコフェ
ロールを含有する比較例２塗布群で発生したしわの程度
の軽減が若干認められた他は、有意なしわの発生抑制或
いは軽減は認められなかった。

【００５４】次に、女性パネラーによる使用試験を行っ
た。この際にも、各実施例において配合した実施例１〜
実施例６のマトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤を、
それぞれの調製に用いた溶媒に代替したものを比較例１
〜比較例１０とした。使用試験は、２０才代〜５０才代
の通常戸外で作業する女性２０名を１群とし、５月中旬
〜６月中旬の１カ月間、各群に実施例及び比較例のそれ
ぞれをブラインドにて１日２回使用させ、使用前後の皮
膚のしわ及び皮膚弾性の変化を観察して行った。皮膚の
しわについては写真撮影後の目視評価及びレプリカ法に
より評価し、皮膚弾性についてはキュートメーターによ
る測定により評価した。結果は、各パネラーについて使
用後の皮膚のしわ及び皮膚弾性を使用前と比べて、「改
善」，「やや改善」，「変化なし」，「やや悪化」，
「悪化」の５段階にて評価し、各評価を得たパネラー数
にて表７に示した。

【００５５】

【表７】

【００５６】表７より明らかなように、本発明の実施例
使用群ではいずれにおいても、皮膚のしわ及び皮膚弾性
の悪化傾向を認めたパネラーはおらず、皮膚のしわにつ
いては８０％以上、皮膚弾性については９０％以上のパ
ネラーにおいて、改善又はやや改善されたと評価されて
いた。特に、紫外線吸収剤を併用する実施例１２使用群
で、高い改善率が認められた。これに対し比較例使用群
では、皮膚のしわ及び皮膚弾性について明確に改善され
たと評価されたパネラーは存在せず、皮膚のしわについ
ては７５％以上、皮膚弾性については６５％以上のパネ
ラーで症状の改善が見られなかった。また比較例６使用
群以外では、１０〜３５％のパネラーにおいて各症状の
悪化傾向を認めていた。紫外線吸収剤を含有する比較例
６使用群においても、皮膚のしわについては１名、皮膚
弾性については２名において症状がやや悪化し、皮膚の
しわ及び皮膚弾性ともに、症状の改善傾向の見られたパ
ネラー数は対応する実施例１２使用群に比べて顕著に少
なかった。

【００５７】なお、本発明の実施例７〜実施例１６につ
いては、上記の使用期間中に含有成分の析出，分離，凝
集，変色，変臭といった状態変化は全く見られなかっ
た。また各実施例使用群において、皮膚刺激性反応や皮
膚感作性反応を示したパネラーも存在しなかった。

【００５８】

【発明の効果】以上詳述したように、本発明により、紫
外線照射により真皮線維芽細胞において産生が誘導され
るマトリックスメタロプロテアーゼに対し、特異的且つ
高い阻害活性を示すマトリックスメタロプロテアーゼ阻
害剤を得ることができ、さらにこれを用いることによっ
て、紫外線照射により促進される皮膚の老化の防止，改
善に有効な皮膚外用剤を提供することができた。

フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｋ 35/78 Ａ６１Ｋ 35/78 ＮＣＨ // Ｃ０７Ｄ 339/04 Ｃ０７Ｄ 339/04 (72)発明者岡野由利滋賀県八日市市岡田町字野上112−１株式会社ノエビア基礎研究所内Ｆターム(参考） 4C023 MA03 4C083 AA082 AA111 AA112 AB032 AB232 AB242 AB432 AB442 AC012 AC022 AC072 AC102 AC122 AC242 AC352 AC402 AC422 AC442 AC472 AC482 AC542 AC782 AC861 AD092 AD152 AD282 AD512 AD662 BB51 CC03 CC04 CC05 CC11 CC12 CC19 DD22 DD23 DD27 DD31 DD33 DD41 EE12 EE17 4C086 AA01 AA02 BB04 MA01 MA02 MA04 MA07 MA63 NA14 ZA89 ZC20 4C088 AB13 AB41 AB51 AC01 AC03 AC04 AC05 AC06 AC11 AC13 BA08 BA09 BA10 MA02 MA63 NA14 ZA89 ZC20

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】トウキ（Angelica acutiloba Kitagaw
a）及びその近縁植物，ニオイウド（Angelica uchiyama
nae Yabe），クチナシ（Gardenia jasminoides Ellis）
及びその同属植物，ワレモコウ（Sanguisorba officina
lis L.）の各植物抽出物、リポ酸，その塩及びその誘導
体より成る群から選択した１種又は２種以上を含有して
成るマトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤。
【請求項２】請求項１に記載したマトリックスメタロ
プロテアーゼ阻害剤の１種又は２種以上を有効成分とし
て含有して成る、老化防止用皮膚外用剤。