JP2000319191A - サイクリックｇｍｐ特異的ホスホジエステラーゼ阻害剤および性的機能障害改善薬 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】副作用のない、穏やかで長期連用が可能な数種
類の生薬の組み合わせからなる、確実な効果を有する有
用なcGMP−PDE阻害活性を有する医薬組成物の提供。 【解決手段】インヨウカク、オウゴン、オウバク、ジャ
ショウシ、ホコツシ、エゾウコギ、カイクジン、カイ
バ、ガラナ、カンゾウ、コトウニン、サヨウ、サンシ
シ、シャカンゾウ、ジョテイシ、ソウヒョウショウ、チ
クセツニンジン、チモ、ドッカツ、トチュウヨウ、フク
ボンシ、ヤクチニン、マオウ、サイシン、カンショウキ
ョウ、ソヨウ、ケイヒ、ガイヨウ、コウボク、チクヨ
ウ、チクジョ、コウブシ、ゴシュユ、オウレンおよびキ
ジツの一つまたは二つ以上の組み合わせを配合してなる
サイクリックGMP特異的ホスホジエステラーゼ阻害剤。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、サイクリックGMP
特異的ホスホジエステラーゼ（cGMP−PDE）に起因する
種々の機能障害や疾病症状を改善する生薬配合組成物に
関する。特に、陰茎海綿体動脈中に特異的に存在するサ
イクリックGMP特異的ホスホジエステラーゼ（cGMP−PD
E）を阻害することで、海綿体動脈を弛緩させ、老化や
ストレス、糖尿病など種々の病気による機能的異常によ
り引き起こされた性的機能障害の改善に有用な生薬配合
医薬組成物に関する。

【０００２】

【従来の技術】サイクリックグアノシン３',５'-一リン
酸(cGMP)は、生体内において細胞内情報伝達機構の２次
伝達物質として重要な役割を果たしており、種々の細胞
における機能発現の調節に関与している。cGMP−PDEの
阻害剤は、細胞内のcGMP濃度を上昇させると考えられ、
cGMP濃度の上昇は、平滑筋の弛緩、平滑筋細胞の増殖阻
害、血球の内皮細胞への粘着阻害、血小板凝集阻害、感
覚細胞におけるcGMP特異的イオンチャンネルによるカリ
ウムイオンおよびカルシウムイオンの流量の増加、上皮
細胞におけるナトリウムイオン流出促進とそれに伴う利
尿作用と腎臓におけるナトリウムの排出促進、胃腸管に
おける液体および電解質の流出などをもたらすことが知
られている。また、cGMPは、心筋細胞においては、カリ
ウムイオンおよびカルシウムイオンの流入の調節にも関
与していると考えられている。したがって、cGMP−PDE
の阻害剤は、狭心症、高血圧、心筋梗塞、動脈硬化など
の循環器系疾患や、喘息や気管支炎などの閉塞性肺疾
患、アレルギー性喘息、アレルギー性鼻炎、じんましん
などのアレルギー性疾患、過敏性腸症候群などの消化管
の運動性に特徴づけられる疾患、緑内障、勃起機能不
全、雌性機能不全等の性的機能障害の予防および治療な
どに用いることが出来る。また、内皮由来弛緩因子(EDR
F)、ニトロ系血管拡張薬、心房性ナトリウム利尿ペプチ
ドの効果に対する増強作用も期待できる。これまでにcG
MP−PDE阻害剤としては、ザプリナスト(Zaprinast)、E-
4021、シルデナフィル(Sildenafil)などの縮合ピリミジ
ン誘導体およびその類縁化合物が報告されている。(E.S
ybertz and M.Czarniecki, Expert Opinion on Thera
peutic Patents,7,631-639(1997);M.Czarniecki , et.
al., Annual Reports in Medicinal Chemistry,31,61-7
0(1996);特開平10−120681号公報など)。

【０００３】また、従来より、伝統的漢方処方などのよ
うな数種類の生薬を配合した医薬組成物により、様々な
理由による勃起不全障害や性欲減退、性的不感症など性
的機能障害の治療が試みられてきた。また、これらの処
方は、単に性的障害の治療にとどまらず、易疲労感、食
欲不振、下痢などの消化機能障害、冷え症、排尿障害、
不正性器出血など、老化や極度の疲労時、虚弱体質など
に伴う様々な障害の治療も目的としてきた。これらの漢
方処方を含む生薬製剤は、化学薬品に見られるような副
作用がほとんどなく、穏やかで持続的な効果をもたらす
が、作用機序が明確でなく、また、確実な効果をもたら
すわけでは必ずしもない。

【０００４】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、副作
用のない、穏やかで長期連用が可能な数種類の生薬の組
み合わせからなる、確実な効果を有する有用なcGMP−PD
E阻害活性を有する医薬組成物を提供することにある。

【０００５】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、インヨウ
カク、オウゴン、オウバク、ジャショウシ、ホコツシ、
エゾウコギ、カイクジン、カイバ、ガラナ、カンゾウ、
コトウニン、サヨウ、サンシシ、シャカンゾウ、ジョテ
イシ、ソウヒョウショウ、チクセツニンジン、チモ、ド
ッカツ、トチュウヨウ、フクボンシ、ヤクチニン、マオ
ウ、サイシン、カンショウキョウ、ソヨウ、ケイヒ、ガ
イヨウ、コウボク、チクヨウ、チクジョ、コウブシ、ゴ
シュユ、オウレンおよびキジツに強いcGMP−PDE阻害活
性を見出し、この知見に基づいて本発明を完成するに至
った。

【０００６】すなわち、本発明は、 （１）インヨウカク、オウゴン、オウバク、ジャショウ
シ、ホコツシ、エゾウコギ、カイクジン、カイバ、ガラ
ナ、カンゾウ、コトウニン、サヨウ、サンシシ、シャカ
ンゾウ、ジョテイシ、ソウヒョウショウ、チクセツニン
ジン、チモ、ドッカツ、トチュウヨウ、フクボンシ、ヤ
クチニン、マオウ、サイシン、カンショウキョウ、ソヨ
ウ、ケイヒ、ガイヨウ、コウボク、チクヨウ、チクジ
ョ、コウブシ、ゴシュユ、オウレンおよびキジツの一つ
または二つ以上の組み合わせを配合してなるサイクリッ
クGMP特異的ホスホジエステラーゼ阻害剤； （２）インヨウカク、オウゴン、オウバク、ジャショウ
シ、ホコツシ、エゾウコギ、カイクジン、カイバ、ガラ
ナ、カンゾウ、コトウニン、サヨウ、サンシシ、シャカ
ンゾウ、ジョテイシ、ソウヒョウショウ、チクセツニン
ジン、チモ、ドッカツ、トチュウヨウ、フクボンシおよ
びヤクチニンの一つまたは二つ以上の組み合わせを配合
してなるサイクリックGMP特異的ホスホジエステラーゼ
阻害剤； （３）前記（１）又は（２）に記載のサイクリックGMP
特異的ホスホジエステラーゼ阻害剤を含有する医薬組成
物； （４）前記（１）又は（２）に記載のサイクリックGMP
特異的ホスホジエステラーゼ阻害剤を含有する性的機能
障害改善用組成物； （５）経口用である前記（３）に記載の医薬組成物； （６）経口用である前記（４）に記載の性的機能障害改
善用組成物；に関するものである。

【０００７】本発明の生薬としては、インヨウカク、オ
ウゴン、オウバク、ジャショウシ、ホコツシ、エゾウコ
ギ、カイクジン、カイバ、ガラナ、カンゾウ、コトウニ
ン、サヨウ、サンシシ、シャカンゾウ、ジョテイシ、ソ
ウヒョウショウ、チクセツニンジン、チモ、ドッカツ、
トチュウヨウ、フクボンシおよびヤクチニンのグルー
プ、若しくはこれらのグループに更にマオウ、サイシ
ン、カンショウキョウ、ソヨウ、ケイヒ、ガイヨウ、コ
ウボク、チクヨウ、チクジョ、コウブシ、ゴシュユ、オ
ウレンおよびキジツを加えたグループの中から選ばれた
一つまたは二つ以上組み合わせの生薬が挙げられる。こ
こで、上記コウボクには、ワコウボクおよびカラコウボ
クのいずれも含まれる。また、ケイヒには、いわゆるケ
イシも含まれる。

【０００８】上記グループのうち、より好ましい成分と
してはインヨウカク、ジャショウシ、ホコツシ、カイク
ジン、カイバ、サヨウ、ソウヒョウショウ、フクボン
シ、ケイヒ、ガイヨウ、コウブシ、ゴシュユおよびオウ
レンが挙げられる。これらもまた同様に、一つまたは二
つ以上の組み合わせで用いることができる。

【０００９】後述する試験例の結果から明らかなとおり
本発明の生薬はいずれもcGMP−PDE阻害活性を示すもの
であるが、これらは、古来単味又は漢方方剤として薬用
されてきたものであり、それぞれ慣用された方法にした
がって得られる生薬末又は抽出成分をそのまま用いるこ
とができる。生薬末又は抽出成分の形態も、通常の市販
品又はその加工品を使用することができる。生薬末とし
ては、例えば、乾燥刻み加工品を更に細かく粉砕した粉
末状（微粉末状）の乾燥品として使用してもよい。ま
た、本発明の生薬からの抽出成分の形態は特に制限され
るものではなく、例えば乾燥エキス、エキス末、軟エキ
ス、流エキス、エタノール又はエタノールと水を含むチ
ンキ等いずれの形態でも使用できる。好ましい本発明の
生薬には、製剤化の自由度の高い抽出成分、例えば乾燥
エキス末などが含まれる。

【００１０】抽出は、慣用の方法、例えば、抽出溶媒に
より前記生薬から活性成分を抽出することより行うこと
ができる。抽出溶媒としては、例えば水、親水性溶媒又
はこれらの混合物を使用する場合が多い。前記親水性溶
媒には、例えばメタノール、エタノール、プロパノー
ル、イソプロパノール、ブタノール、イソブタノール、
s−ブタノール、t−ブタノール等のアルコール類；メチ
ルセロソルブ、エチルセロソルブなどのセロソルブ類；
アセトンなどのケトン類；ジオキサン、テトラヒドロフ
ランなどのエーテル類；ピリジン、モルホリン、アセト
ニトリル、N,N-ジメチルホルムアミド、ジメチルアセト
アミド、N−メチルピロドリンなどの含窒素溶媒などが
挙げられる。これらの親水性溶媒は、単独又は2種以上
の混合溶媒として使用してもよい。

【００１１】特に、cGMP−PDEに対して高い阻害作用を
有する成分を効率よく抽出するためには、例えば、メ
タノール、エタノールなどの炭素数１〜３程度の水溶性
アルコール（特にエタノール）またはこれらのアルコ
ール（特にエタノール）と水との混合溶液を抽出溶媒と
して用いるのが有用である。水と親水性溶媒との混合溶
媒を前記抽出溶媒として使用する場合は、水と親水性溶
媒との割合は、広い範囲、例えば、水／親水性溶媒＝95
／5〜5／95（重量比）程度の範囲から適当に選択でき
る。好ましい割合は、例えば、水／親水性溶媒＝90／10
〜50／50（重量比）、特に85／15〜60／40（重量比）程
度である。このような溶媒は、本発明の生薬に対して１
〜１００重量部を抽出に使用する。好ましくは５〜５０
重量部、更に好ましくは、５〜２０重量部である。

【００１２】抽出操作は、適当な温度、例えば、10℃〜
溶媒の還流温度、好ましくは15〜70℃程度で行うことが
出来、室温で冷浸抽出することもできる。抽出時間は、
加熱抽出の場合、３０分間以上、好ましくは３０分間〜
２時間、更に好ましくは１〜２時間である。また、冷浸
抽出の場合は、３日間以上、好ましくは３〜３０日間、
更に好ましくは５〜１４日間である。

【００１３】抽出溶媒により抽出された抽出液は、その
まま使用してもよく、水などで希釈してもよく、抽出し
たエキスを濃縮した濃縮エキスとしても使用できる。通
常、抽出液を濃縮した濃縮エキス、抽出物に必要により
添加剤を添加して、スプレードライ、凍結乾燥などの方
法により粉末化した乾燥エキスとして使用する場合が多
い。

【００１４】本発明の生薬の使用量は、cGMP−PDEに対
する阻害活性が発現する有効量であればよく、剤形、投
与経路、年齢、性的機能障害の程度や種類などにより異
なるが、例えば、投与単位あたりおよび成人1日あた
り、乾燥エキス換算で、0.1〜5,000mg、好ましくは1〜
2,000mg、さらに好ましくは10〜500mgになるように使用
される。１日の投与回数は特に制限されず、1回又は数
回に分けて投与できる。

【００１５】本発明の生薬には、更に副成分としてトチ
ュウ、ニンジン、ロクジョウ、ジオウ、サンヤク、サン
シュユ、タクシャ、ブクリョウ、ボタンピ、ブシ、オン
ジ、ゴミシ、クコシ、トシシ、ニクジュヨウ等の生薬を
配合することもできる。これら副成分は、例えばトチュ
ウ、ニンジンおよびロクジョウの組み合わせ、ジオウ、
サンヤク、サンシュユ、タクシャ、ブクリョウ、ボタン
ピおよびブシの組み合わせのように組合せて、本発明の
生薬に配合するのが好ましい。この場合の本発明の生薬
に対する副成分の配合比率は、１：１〜２０（乾燥エキ
ス換算重量比）、好ましくは１：１〜１０、更に好まし
くは１：１〜５である。

【００１６】本発明の医薬組成物は、製剤の形態に応じ
て、例えば、混和、混練、造粒、打錠、コーティング、
滅菌処理、乳化などの慣用の方法で製造することができ
る。これらの製剤の製造に関しては、日本薬局方製剤総
則の各項に準じて製造することができる。本発明の医薬
組成物は通常経口的に投与されるが、この場合の医薬組
成物の形態は特に制限されるものでなく、例えば、錠
剤、顆粒剤、細粒剤、丸剤、カプセル剤、チュアブル剤
などの固形製剤、場合によっては、シロップ剤、懸濁
剤、乳剤などの液剤であってもよい。

【００１７】製剤の調製には、製剤の種類に応じて慣用
の担体成分が使用できる。例えば、固形製剤の調製に
は、慣用成分、例えば、デンプン、乳糖、ショ糖、マン
ニトール、コーンスターチなどの糖類、結晶セルロー
ス、カルボキシメチルセルロース、軽質無水ケイ酸など
の賦形剤；ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリド
ン、ポリビニルエーテル、エチルセルロース、アラビア
ゴム、トラガント、ゼラチン、ヒドロキシプロピルセル
ロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、クエン
酸カルシウム、デキストリン、ペクチンなどの結合剤；
ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、
タルク、ポリエチレングリコール、コロイドシリカ等の
滑沢剤；デンプン、カルボキシメチルセルロース、カル
ボキシメチルセルロースカルシウム、クロスカルメロー
スナトリウムなどの崩壊剤、崩壊補助剤、保湿剤、界面
活性剤などが使用できる。

【００１８】液剤の調製には、慣用成分、例えば、注射
用水、水、エチルアルコール、エチレングリコールなど
の溶剤、エタノール、ポリエチレングリコール、プロピ
レングリコール、D−マンニトール、コレステロール、
トリエタノールアミン、炭酸ナトリウム、クエン酸ナト
リウムなどの溶解補助剤、ステアリルトリエタノールア
ミン、ラウリル硫酸ナトリウム、レシチン、モノステア
リン酸グリセリンなどの界面活性剤；ポリビニルアルコ
ール、ポリビニルピロリドン、カルボキシメチルセルロ
ースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシメチル
セルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシ
プロピルセルロースなどの親水性高分子などの懸濁化
剤；リン酸塩、酢酸塩、炭酸塩、クエン酸塩などの緩衝
剤、ブドウ糖、アミノ酸などを使用することができる。

【００１９】前記固形製剤や液剤には、必要に応じて、
保存剤、可溶化剤、乳化剤、分散剤、増粘剤、可塑剤、
吸着剤、香料、着色剤、矯味矯臭剤、甘味剤、防腐剤、
抗酸化剤などを使用することができる。

【００２０】本発明の医薬および医薬組成物は、古来よ
り薬用に用いられてきた生薬成分を主成分として用いる
ため、毒性や副作用がなく、きわめて安全性の高いもの
であり、ヒトを含む哺乳動物に安全に投与できる。本発
明の医薬はcGMP−PDEに起因する種々の機能障害や疾患
症状の改善に有効であり、特に、種々の原因による勃起
機能不全など性機能障害の治療に有効である。

【００２１】

【発明の実施の形態】以下、実施例を挙げて本発明をよ
り詳細に説明するが、本発明はこれらの実施例により限
定されるものではない。

【００２２】

【実施例】生薬乾燥エキス 以下の実施例で用いる生薬は、刻み50gに約7倍量（すな
わち350ml）の30容量％エタノール水溶液を添加し、30
r.p.m.で攪拌しながら50℃で1.5時間抽出した。標準篩
（呼び寸法75μm）を用いて濾過し、残渣を30容量％エ
タノール水溶液150mlで洗浄した。回収した濾液と洗浄
液を合わせて、吸引濾過した。回収濾液を温度50℃以下
で約50mlとなるまで減圧濃縮して、軟エキスを得た。こ
の軟エキスを24時間凍結乾燥して、乾燥エキス末を得
て、これを用いた。各々の用量はこのエキス末の重量を
示す。

【００２３】実施例１（製剤例・処方例） 以下、本発明の好ましい製剤例を記載するが、本発明は
これらに限定されるものではない。なお、下記例におい
て特に断らない限り、各成分の配合量は成人1日服用量
を示し、常法に従い製剤化するものとする。

【００２４】［製剤例1］ （処方） 成人1日服用量（3包中） インヨウカク乾燥エキス末 500mg ジャショウシ乾燥エキス末 100mg カンゾウ乾燥エキス末 200mg ケイヒ乾燥エキス末 200mg ガイヨウ乾燥エキス末 300mg クコシ乾燥エキス末 300mg ニクジュヨウ乾燥エキス末 500mg 結晶セルロース 1,200mg デンプン 500mg ヒドロキシプロピルセルロース 180mg乳糖 520mg 合計 4,500mg 上記処方に従い、混合末を製し、日本薬局方製剤総則、
顆粒剤の項に準じて顆粒剤を製造した。

【００２５】［製剤例2］ （処方） 成人1日服用量（3包中） インヨウカク乾燥エキス末 500mg ホコツシ乾燥エキス末 500mg オウゴン乾燥エキス末 200mg チクセツニンジン乾燥エキス末 200mg シャカンゾウ乾燥エキス末 200mg サヨウ乾燥エキス末 200mg トシシ乾燥エキス末 150mg オンジ乾燥エキス末 150mg 結晶セルロース 900mg デンプン 600mg ヒドロキシプロピルセルロース 180mg乳糖 720mg 合計 4,500mg 上記処方に従い、日本薬局方製剤総則、顆粒剤の項に準
じて顆粒剤を製造した。

【００２６】［製剤例3］ 〔素錠〕 （処方） 成人1日服用量（9錠中） インヨウカク乾燥エキス末 500mg カイクジン乾燥エキス末 100mg カイバ乾燥エキス末 100mg ソウヒョウショウ乾燥エキス末 100mg カンゾウ乾燥エキス末 200mg 結晶セルロース 444mg デンプン 295mg ヒドロキシプロピルセルロース 103mg ステアリン酸マグネシウム 20mg乳糖 700mg 小計 2,562mg

【００２７】〔糖衣錠〕 素錠 2,544 mg タルク 1,141.1mg アラビアゴム 75.3mg 酸化チタン 46.3mg白糖 1,104.3mg 合計 4,911mg 上記処方に従い、日本薬局方製剤総則、錠剤の項に準じ
て素錠および糖衣錠を製造した。

【００２８】 ［製剤例4］ （処方） 成人1日服用量（60ml中） トチュウ乾燥エキス末 60mg ニンジン乾燥エキス末 100mg ロクジョウ乾燥エキス末 100mg インヨウカク乾燥エキス末 100mg ホコツシ乾燥エキス末 200mg ケイヒ乾燥エキス末 100mg 精製白糖 3,000mg パラオキシ安息香酸ブチル 7.5 mg フレーバー 0.06ml 水酸化ナトリウム 適量 精製水（加えて全量） 60ml 上記処方に従い、日本薬局方製剤総則、液剤の項に準じ
て液剤を製造した。濾過した後、滅菌してガラスビンに
充填した。

【００２９】試験例 本発明の生薬のホスホジエステラーゼに対する阻害活性
を、公知の方法(Thompson, W. J.ら、Biochemistry 10,
311(1971), J. D. Johnsonら、Anal. Chem. 162,291(1
987),R. J. Schillingら、Anal. Chem. 216,154(199
4)、Phosphodiesterase[³H]cGMP SPA enzyme assay kit
（アマシャム社）など)に準じた以下の方法に従って測
定した。

【００３０】（１）ヒト肺由来ホスホジエステラーゼＶ
をコードする遺伝子のクローニング cDNAのクローニングは、ジーントラッパーポジティブ選
択システム（ギブコビーアールエル社）を用いて行っ
た。選択した大腸菌を培養後、DNAを抽出し、Thermo Se
quenase Core Sequencing Kit（アマシャム社）を用い
て反応を行い、SQ-3000 DNAシーケンサー（日立社）に
より、cDNA断片の塩基配列を決定した。取得したクロー
ンは、配列番号：２で表される２４９９個の塩基配列を
含有する３０３６個の塩基配列を有していた。このcDNA
断片には、配列番号：１で表される８３３個のアミノ酸
からなる新規ホスホジエステラーゼＶがコードされてい
た。また、公知のウシ由来ホスホジエステラーゼＶ（Li
nda M. McAllieterら、J. Biol. Chem. 268（30）、228
69（1993）、NCBI GenBank Accession No. L16545）と
のアミノ酸レベルでの相同性は92％であった。本発明の
ヒト肺由来ホスホジエステラーゼＶをコードするプラス
ミドpPDE50を大腸菌（Escherichia coli）DH10Bに導入
して、形質転換体：大腸菌（Escherichia coli）DH10B/
pPDE50を得た。

【００３１】（２）大腸菌発現ベクターの構築 上記（1）で得られたヒト肺由来ホスホジエステラーゼ
ＶをコードするcDNAをEcoRIとXhoIで切断し、同様に処
理したpGEX4T−2（ファルマシア社）とライゲーション
した。ライゲーション液を用いて大腸菌BL21（フナコシ
社）を形質転換し、本発明のヒト肺由来ホスホジエステ
ラーゼＶを発現する大腸菌（Escherichiacoli）BL21/pP
DE51を取得した。 この形質転換体：大腸菌（Escherichia coli）BL21/pPD
E51は、平成10年7月13日から通商産業省工業技術院生命
工学工業研究所（NIBH）に寄託番号FERM BP−6417とし
て、平成10年6月18日から財団法人・醗酵研究所（IFO）
に寄託番号IFO 16185として寄託されている。

【００３２】（３）組換え型ヒト肺由来ホスホジエステ
ラーゼＶの大腸菌での発現と精製 上記（2）で得られた大腸菌（Escherichia coli）BL21/
pPDE51を用いて、本発明の組換え型ヒト肺由来ホスホジ
エステラーゼＶを取得した。大腸菌での発現および精製
はGST Gene Fusion System（ファルマシア社）添付のプ
ロトコールに準じて行った。その結果、目的の約100kDa
の組換え型ヒト肺由来ホスホジエステラーゼＶが1Lの大
腸菌培養液から、12.5mg取得できた。

【００３３】（４）ヒト肺由来ホスホジエステラーゼＶ
のホスホジエステラーゼ活性の検出 ヒト肺由来ホスホジエステラーゼＶのホスホジエステラ
ーゼ活性の検出は、Phosphodiesterase［³H］cGMP SPA
enzyme assay kit（アマシャム社）を用いて行った。そ
の結果、上記（２）で得た酵素溶液にホスホジエステラ
ーゼ活性が認められた。また、pGEX４T−２をBL21に形
質転換したものをコントロールとして用いたが、これに
はホスホジエステラーゼ活性は認められなかった。

【００３４】（５）阻害剤探索系の設定 ９６穴プレート（OPTIプレート、パッカード社）に緩衝
液（０．５M Tris−HCL （pH7.5）、８３ｍM MgCl₂、 1
7mM EGTA）10μL、上記（3）で得られた組換え型ヒト肺
由来ホスホジエステラーゼＶ（0.025mg／mL）10μL、超
純水65μL、阻害剤サンプル5μL、[³H]cGMP 10μLを添
加し、30℃にて30分間反応した。反応終了後、SPA bead
s溶液(18mg／mL Yttrium silucate beads、18mM ZnSO₄)
50μLを添加し、約20分間、室温で放置した後、シンチ
レーションカウンター(Topcount、パッカード社)を用い
て測定した。無添加の場合の放射活性(1780cpm)に対
し、組換え型ヒト肺由来ホスホジエステラーゼＶを添加
した場合は、10367cpmの放射活性を示した。この反応に
各種濃度のホスホジエステラーゼＶの阻害剤であるシル
デナフィル(Drugs of Future22(2)、1997)を添加するこ
とによりホスホジエステラーゼ活性は阻害され、シルデ
ナフィルは約2nMでこの酵素反応を50％阻害した。この
ことから、本アッセイ系を用いて、ホスホジエステラー
ゼ阻害剤の探索が可能であることを確認した。

【００３５】（６）阻害剤探索の実施 上記（５）で設定した方法を用いて、本発明の生薬の組
換え型ヒト肺由来ホスホジエステラーゼ阻害活性を測定
した。その結果を表１に示す。

【表１】

【００３６】

【発明の効果】本発明の生薬は、優れたcGMP−PDE阻害
活性を有しており、 cGMP−PDEに起因する循環器系疾患
（狭心症、高血圧、うっ血性心不全、肺高血圧症、アテ
ローム性動脈硬化証、血管開存性低下症、血管狭窄症、
末梢血管疾患、脳卒中など）、閉塞性肺疾患（慢性喘
息、気管支炎など）、アレルギー性疾患（アレルギー性
喘息、アレルギー性鼻炎、蕁麻疹など）、消化管の運動
性に特徴づけられる疾患（過敏性腸症候群など）、性的
機能障害（勃起機能不全、雌性機能不全など）、糸球体
疾患、尿細管間質性疾患、腎不全、糖尿病合併症、緑内
障、早産または月経困難症など種々の疾患機能不全の予
防・治療剤として使用することが出来る。

【００３７】

【配列表】 <110> Takeda Chemical Industries, LTD. <120> cGMP-PDE inhibitor and medicine for treatment of sexual dysfunctio n <130> A99041 <160> 2 <210> 1 <211> 833 <212> PRT <213> Human <400> 1 Met Leu Pro Phe Gly Asp Lys Thr Arg Glu Met Val Asn Ala Trp Phe 1 5 10 15 Ala Glu Arg Val His Thr Ile Pro Val Cys Lys Glu Gly Ile Arg Gly 20 25 30 His Thr Glu Ser Cys Ser Cys Pro Leu Gln Gln Ser Pro Arg Ala Asp 35 40 45 Asn Ser Val Pro Gly Thr Pro Thr Arg Lys Ile Ser Ala Ser Glu Phe 50 55 60 Asp Arg Pro Leu Arg Pro Ile Val Val Lys Asp Ser Glu Gly Thr Val 65 70 75 80 Ser Phe Leu Ser Asp Ser Glu Lys Lys Glu Gln Met Pro Leu Thr Pro 85 90 95 Pro Arg Phe Asp His Asp Glu Gly Asp Gln Cys Ser Arg Leu Leu Glu 100 105 110 Leu Val Lys Asp Ile Ser Ser His Leu Asp Val Thr Ala Leu Cys His 115 120 125 Lys Ile Phe Leu His Ile His Gly Leu Ile Ser Ala Asp Arg Tyr Ser 130 135 140 Leu Phe Leu Val Cys Glu Asp Ser Ser Asn Asp Lys Phe Leu Ile Ser 145 150 155 160 Arg Leu Phe Asp Val Ala Glu Gly Ser Thr Leu Glu Glu Val Ser Asn 165 170 175 Asn Cys Ile Arg Leu Glu Trp Asn Lys Gly Ile Val Gly His Val Ala 180 185 190 Ala Leu Gly Glu Pro Leu Asn Ile Lys Asp Ala Tyr Glu Asp Pro Arg 195 200 205 Phe Asn Ala Glu Val Asp Gln Ile Thr Gly Tyr Lys Thr Gln Ser Ile 210 215 220 Leu Cys Met Pro Ile Lys Asn His Arg Glu Glu Val Val Gly Val Ala 225 230 235 240 Gln Ala Ile Asn Lys Lys Ser Gly Asn Gly Gly Thr Phe Thr Glu Lys 245 250 255 Asp Glu Lys Asp Phe Ala Ala Tyr Leu Ala Phe Cys Gly Ile Val Leu 260 265 270 His Asn Ala Gln Leu Tyr Glu Thr Ser Leu Leu Glu Asn Lys Arg Asn 275 280 285 Gln Val Leu Leu Asp Leu Ala Ser Leu Ile Phe Glu Glu Gln Gln Ser 290 295 300 Leu Glu Val Ile Leu Lys Lys Ile Ala Ala Thr Ile Ile Ser Phe Met 305 310 315 320 Gln Val Gln Lys Cys Thr Ile Phe Ile Val Asp Glu Asp Cys Ser Asp 325 330 335 Ser Phe Ser Ser Val Phe His Met Glu Cys Glu Glu Leu Glu Lys Ser 340 345 350 Ser Asp Thr Leu Thr Arg Glu His Asp Ala Asn Lys Ile Asn Tyr Met 355 360 365 Tyr Ala Gln Tyr Val Lys Asn Thr Met Glu Pro Leu Asn Ile Pro Asp 370 375 380 Val Ser Lys Asp Lys Arg Phe Pro Trp Thr Thr Glu Asn Thr Gly Asn 385 390 395 400 Val Asn Gln Gln Cys Ile Arg Ser Leu Leu Cys Thr Pro Ile Lys Asn 405 410 415 Gly Lys Lys Asn Lys Val Ile Gly Val Cys Gln Leu Val Asn Lys Met 420 425 430 Glu Glu Asn Thr Gly Lys Val Lys Pro Phe Asn Arg Asn Asp Glu Gln 435 440 445 Phe Leu Glu Ala Phe Val Ile Phe Cys Gly Leu Gly Ile Gln Asn Thr 450 455 460 Gln Met Tyr Glu Ala Val Glu Arg Ala Met Ala Lys Gln Met Val Thr 465 470 475 480 Leu Glu Val Leu Ser Tyr His Ala Ser Ala Ala Glu Glu Glu Thr Arg 485 490 495 Glu Leu Gln Ser Leu Ala Ala Ala Val Val Pro Ser Ala Gln Thr Leu 500 505 510 Lys Ile Thr Asp Phe Ser Phe Ser Asp Phe Glu Leu Ser Asp Leu Glu 515 520 525 Thr Ala Leu Cys Thr Ile Arg Met Phe Thr Asp Leu Asn Leu Val Gln 530 535 540 Asn Phe Gln Met Lys His Glu Val Leu Cys Arg Trp Ile Leu Ser Val 545 550 555 560 Lys Lys Asn Tyr Arg Lys Asn Val Ala Tyr His Asn Trp Arg His Ala 565 570 575 Phe Asn Thr Ala Gln Cys Met Phe Ala Ala Leu Lys Ala Gly Lys Ile 580 585 590 Gln Asn Lys Leu Thr Asp Leu Glu Ile Leu Ala Leu Leu Ile Ala Ala 595 600 605 Leu Ser His Asp Leu Asp His Arg Gly Val Asn Asn Ser Tyr Ile Gln 610 615 620 Arg Ser Glu His Pro Leu Ala Gln Leu Tyr Cys His Ser Ile Met Glu 625 630 635 640 His His His Phe Asp Gln Cys Leu Met Ile Leu Asn Ser Pro Gly Asn 645 650 655 Gln Ile Leu Ser Gly Leu Ser Ile Glu Glu Tyr Lys Thr Thr Leu Lys 660 665 670 Ile Ile Lys Gln Ala Ile Leu Ala Thr Asp Leu Ala Leu Tyr Ile Lys 675 680 685 Arg Arg Gly Glu Phe Phe Glu Leu Ile Arg Lys Asn Gln Phe Asn Leu 690 695 700 Glu Asp Pro His Gln Lys Glu Leu Phe Leu Ala Met Leu Met Thr Ala 705 710 715 720 Cys Asp Leu Ser Ala Ile Thr Lys Pro Trp Pro Ile Gln Gln Arg Ile 725 730 735 Ala Glu Leu Val Ala Thr Glu Phe Phe Asp Gln Gly Asp Arg Glu Arg 740 745 750 Lys Glu Leu Asn Ile Glu Pro Thr Asp Leu Met Asn Arg Glu Lys Lys 755 760 765 Asn Lys Ile Pro Ser Met Gln Val Gly Phe Ile Asp Ala Ile Cys Leu 770 775 780 Gln Leu Tyr Glu Ala Leu Thr His Val Ser Glu Asp Cys Phe Pro Leu 785 790 795 800 Leu Asp Gly Cys Arg Lys Asn Arg Gln Lys Trp Gln Ala Leu Ala Glu 805 810 815 Gln Gln Glu Lys Met Leu Ile Asn Gly Glu Ser Gly Gln Ala Lys Arg 820 825 830 Asn

【００３８】 <210> 2 <211> 2499 <212> DNA <213> Human <400> 2 ATGTTGCCCT TTGGAGACAA AACAAGAGAA ATGGTCAATG CATGGTTTGC TGAGAGAGTT 60 CACACCATCC CTGTGTGCAA GGAAGGTATC AGAGGCCACA CCGAATCTTG CTCTTGTCCC 120 TTGCAGCAGA GTCCTCGTGC AGATAACAGT GTCCCTGGAA CACCAACCAG GAAAATCTCT 180 GCCTCTGAAT TTGACCGGCC TCTTAGACCC ATTGTTGTCA AGGATTCTGA GGGAACTGTG 240 AGCTTCCTCT CTGACTCAGA AAAGAAGGAA CAGATGCCTC TAACCCCTCC AAGGTTTGAT 300 CATGATGAAG GGGACCAGTG CTCAAGACTC TTGGAATTAG TGAAGGATAT TTCTAGTCAT 360 TTGGATGTCA CAGCCTTATG TCACAAAATT TTCTTGCATA TCCATGGACT GATATCTGCT 420 GACCGCTATT CCCTGTTCCT TGTCTGTGAA GACAGCTCCA ATGACAAGTT TCTTATCAGC 480 CGCCTCTTTG ATGTTGCTGA AGGTTCAACA CTGGAAGAAG TTTCAAATAA CTGTATCCGC 540 TTAGAATGGA ACAAAGGCAT TGTGGGACAT GTGGCAGCGC TTGGTGAGCC CTTGAACATC 600 AAAGATGCAT ATGAGGATCC TCGGTTCAAT GCAGAAGTTG ACCAAATTAC AGGCTACAAG 660 ACACAAAGCA TTCTTTGTAT GCCAATTAAG AATCATAGGG AAGAGGTTGT TGGTGTAGCC 720 CAGGCCATCA ACAAGAAATC AGGAAACGGT GGGACATTTA CTGAAAAAGA TGAAAAGGAC 780 TTTGCTGCTT ATTTGGCATT TTGTGGTATT GTTCTTCATA ATGCTCAGCT CTATGAGACT 840 TCACTGCTGG AGAACAAGAG AAATCAGGTG CTGCTTGACC TTGCTAGTTT AATTTTTGAA 900 GAACAACAAT CATTAGAAGT AATTTTGAAG AAAATAGCTG CCACTATTAT CTCTTTCATG 960 CAAGTGCAGA AATGCACCAT TTTCATAGTG GATGAAGATT GCTCCGATTC TTTTTCTAGT 1020 GTGTTTCACA TGGAGTGTGA GGAATTAGAA AAATCATCTG ATACATTAAC AAGGGAACAT 1080 GATGCAAACA AAATCAATTA CATGTATGCT CAGTATGTCA AAAATACTAT GGAACCACTT 1140 AATATCCCAG ATGTCAGTAA GGATAAAAGA TTTCCCTGGA CAACTGAAAA TACAGGAAAT 1200 GTAAACCAGC AGTGCATTAG AAGTTTGCTT TGTACACCTA TAAAAAATGG AAAGAAGAAT 1260 AAAGTTATAG GGGTTTGCCA ACTTGTTAAT AAGATGGAGG AGAATACTGG CAAGGTTAAG 1320 CCTTTCAACC GAAATGACGA ACAGTTTCTG GAAGCTTTTG TCATCTTTTG TGGCTTGGGG 1380 ATCCAGAACA CGCAGATGTA TGAAGCAGTG GAGAGAGCCA TGGCCAAGCA AATGGTCACA 1440 TTGGAGGTTC TGTCGTATCA TGCTTCAGCA GCAGAGGAAG AAACAAGAGA GCTACAGTCG 1500 TTAGCGGCTG CTGTGGTGCC ATCTGCCCAG ACCCTTAAAA TTACTGACTT TAGCTTCAGT 1560 GACTTTGAGC TGTCTGATCT GGAAACAGCA CTGTGTACAA TTCGGATGTT TACTGACCTC 1620 AACCTTGTGC AGAACTTCCA GATGAAACAT GAGGTTCTTT GCAGATGGAT TTTAAGTGTT 1680 AAGAAGAATT ATCGGAAGAA TGTTGCCTAT CATAATTGGA GACATGCCTT TAATACAGCT 1740 CAGTGCATGT TTGCTGCTCT AAAAGCAGGC AAAATTCAGA ACAAGCTGAC TGACCTGGAG 1800 ATACTTGCAT TGCTGATTGC TGCACTAAGC CACGATTTGG ATCACCGTGG TGTGAATAAC 1860 TCTTACATAC AGCGAAGTGA ACATCCACTT GCCCAGCTTT ACTGCCATTC AATCATGGAA 1920 CACCATCATT TTGACCAGTG CCTGATGATT CTTAATAGTC CAGGCAATCA GATTCTCAGT 1980 GGCCTCTCCA TTGAAGAATA TAAGACCACG TTGAAAATAA TCAAGCAAGC TATTTTAGCT 2040 ACAGACCTAG CACTGTACAT TAAGAGGCGA GGAGAATTTT TTGAACTTAT AAGAAAAAAT 2100 CAATTCAATT TGGAAGATCC TCATCAAAAG GAGTTGTTTT TGGCAATGCT GATGACAGCT 2160 TGTGATCTTT CTGCAATTAC AAAACCCTGG CCTATTCAAC AACGGATAGC AGAACTTGTA 2220 GCAACTGAAT TTTTTGATCA AGGAGACAGA GAGAGAAAAG AACTCAACAT AGAACCCACT 2280 GATCTAATGA ACAGGGAGAA GAAAAACAAA ATCCCAAGTA TGCAAGTTGG GTTCATAGAT 2340 GCCATCTGCT TGCAACTGTA TGAGGCCCTG ACCCACGTGT CAGAGGACTG TTTCCCTTTG 2400 CTAGATGGCT GCAGAAAGAA CAGGCAGAAA TGGCAGGCCC TTGCAGAACA GCAGGAGAAG 2460 ATGCTGATTA ATGGGGAAAG CGGCCAGGCC AAGCGGAAC 2499

【図面の簡単な説明】

【図１】試験例で用いたヒト肺由来ホスホジエステラー
ゼＶのアミノ酸配列を示す。

【図２】試験例で用いたヒト肺由来ホスホジエステラー
ゼＶのアミノ酸配列を示す。図１のつづきである。

【図３】試験例で用いたヒト肺由来ホスホジエステラー
ゼＶをコードするＤＮＡを含むＤＮＡの配列を示す。

【図４】試験例で用いたヒト肺由来ホスホジエステラー
ゼＶをコードするＤＮＡを含むＤＮＡの配列を示す。図
３のつづきである。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き Ｆターム(参考） 4C088 AB04 AB12 AB16 AB17 AB18 AB29 AB32 AB33 AB38 AB40 AB41 AB51 AB59 AB60 AB62 AB63 AB64 AB65 AB76 AB79 AB81 AB85 AB99 AC04 AC05 AC06 AC11 AC13 AD09 AD11 AD13 BA03 BA06 BA07 BA08 BA10 MA02 MA07 MA08 MA52 NA14 ZA33 ZA34 ZA36 ZA40 ZA42 ZA45 ZA54 ZA59 ZA66 ZA81 ZA89 ZB13 ZC20

Claims (6)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】インヨウカク、オウゴン、オウバク、ジャ
   ショウシ、ホコツシ、エゾウコギ、カイクジン、カイ
   バ、ガラナ、カンゾウ、コトウニン、サヨウ、サンシ
   シ、シャカンゾウ、ジョテイシ、ソウヒョウショウ、チ
   クセツニンジン、チモ、ドッカツ、トチュウヨウ、フク
   ボンシ、ヤクチニン、マオウ、サイシン、カンショウキ
   ョウ、ソヨウ、ケイヒ、ガイヨウ、コウボク、チクヨ
   ウ、チクジョ、コウブシ、ゴシュユ、オウレンおよびキ
   ジツの一つまたは二つ以上の組み合わせを配合してなる
   サイクリックGMP特異的ホスホジエステラーゼ阻害剤。
2. 【請求項２】インヨウカク、オウゴン、オウバク、ジャ
   ショウシ、ホコツシ、エゾウコギ、カイクジン、カイ
   バ、ガラナ、カンゾウ、コトウニン、サヨウ、サンシ
   シ、シャカンゾウ、ジョテイシ、ソウヒョウショウ、チ
   クセツニンジン、チモ、ドッカツ、トチュウヨウ、フク
   ボンシおよびヤクチニンの一つまたは二つ以上の組み合
   わせを配合してなるサイクリックGMP特異的ホスホジエ
   ステラーゼ阻害剤。
3. 【請求項３】請求項１又は２に記載のサイクリックGMP
   特異的ホスホジエステラーゼ阻害剤を含有する医薬組成
   物。
4. 【請求項４】請求項１又は２に記載のサイクリックGMP
   特異的ホスホジエステラーゼ阻害剤を含有する性的機能
   障害改善用組成物。
5. 【請求項５】経口用である請求項３に記載の医薬組成
   物。
6. 【請求項６】経口用である請求項４に記載の性的機能障
   害改善用組成物。