JP2000504317A - 気泡懸濁物と超音波造影剤への応用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は安定した気泡懸濁体を作製するための低分子物質からなる多孔性マトリックスと当該マトリックスの超音波造影剤への応用、並びに当該マトリックス及び当該造影剤の製造方法に関する。

Description

【発明の詳細な説明】 気泡懸濁物と超音波造影剤への応用 本発明は請求項に記載の観点である安定した気泡懸濁体を作成するための多孔 質マトリックス、その超音波造影剤への応用と当該マトリックスと造影剤の製造 方法に関する。 超音波診断はレントゲンや放射性診断法の様なイオン線を負荷することなく、 核磁気共鳴画像診断法に比べてコスト的に見合った形で生理学的および病理生理 学的な状態を診断できる可能性がある。超音波は組織のもつ音響特性によって反 射あるいは吸収される。画像を得るために、組織や体液の持つ異なる音響特性が 利用される。体の組織あるいは液体と気泡の間には大きな密度差があることから 、微小な気泡の形にした気体は超音波用造影剤として特に好適である。この様な 理由から、超音波造影剤を気泡及び／または気体を含有する物質という形で研究 し開発した。 最も簡単な超音波造影剤は水性懸濁液を強く振ったり、超音波処理したり、２ 本のシリンジをつないで水性懸濁液を交互にポンピングすることで得ることがで きる。得られた気泡は界面活性剤及び／または粘調度の高い物質の様な適当な添 加物を加えることで安定させることができる。この種の造影剤としては、例えば 欧州特許第０ ０７７ ７５２号記載のものがある。問題は気泡の数とその大き さが、攪拌方法、攪拌期間、および攪拌強度に大きく異存していることである。 このことが再現性ある製造を難しくし、また大き過ぎることによる塞栓の危険を 調整できなくしている。 同様のタイプの造影剤としては国際特許出願公開第９３／０５８１９号記載の ものがあるが、この造影剤では空気や窒素、二酸化炭 素や希ガス気体といった大気由来の気体の代わりに特定のＱ−ファクターを持つ 気体を使って気泡懸濁物を製造することが推奨されている。この場合、生理学的 溶媒中には僅かにしか溶解しないことを特徴とするハロゲン化炭水化物が一般に は用いられる。特に過フッ化化合物は交換気体として好適である。しかし、この 場合にも−前記同様に−気泡懸濁物を２本のシリンジ間でポンピングしながら第 三の経路で懸濁溶媒に導くため、出来上がった造影剤は不均一であり、また気泡 の大きさの分布も再現性に乏しい。従って、大きな気泡による塞栓のリスクが高 くなる。 気泡懸濁物を使用直前に溶媒を振動させて製造する方法以外に、固形の担体を 用いて処方し、希釈液に再懸濁して気泡をその中から放出させることもできる。 この方法を実施する方法に微粒子懸濁液がある。この種の固形担体としては、境 界面活性型固形物を少なくとも１種類、欧州特許第０ ３６５ ４６７号に公開 されている様な非境界面活性型固形物を少なくとも１種類含む混合物から成る微 粒子が利用できる。 非境界面活性型固形物としては、欧州特許第０ ３６５ ４６７号に記載され た物質以外にも、レントゲン造影剤として利用されている物質を（国際特許出願 公開第９３／００９３０号と国際特許出願公開第９２／２１３８２号）、最終段 階でレントゲン用造影剤を官能基を利用して架橋剤と相互に結合させる様にして も利用できる。 前記微粒子懸濁物は超音波造影剤であり、これを利用して血管系にコントラス ト効果を導入することができる。しかし、コントラストの強度と長さは改善が望 まれる。 微粒子超音波造影剤のその他の例は国際特許出願公開第９５／２１６３１号に 開示されている。この場合には水溶性壁形成体を有機 溶媒（トルオール）に溶解し、ついで水溶性の界面活性剤に乳化して凍結乾燥さ せる。これを再懸濁して生体内で超音波コントラストを示す微粒子懸濁物を得る 。この種の微粒子製超音波造影剤用のフッ化物についても報告されている。 欧州特許第０ ５５４ ２１３号には、空気の変わりにＳＦ₆ を含むガラクト ースを基本とする微粒子も開示されている。この造影剤のコントラスト延長作用 は一般には弱い。 国際特許出願公開第９５／３３９９４号はフッ化物を含む微粒子を開示してい る。気泡の大きさの分布を標準化し、気泡の数を多くすることで超音波造影剤と して利用する上で必要な用量を少なくすることができる。 国際特許出願公開第９５／０３８３５号では特定の気体混合物を含む粒子を基 本とした超音波造影剤が請求している。気体混合物は少なくとも１種類のフッ素 化された気体浸透作用を有する成分と、窒素や酸素そして／あるいは二酸化炭素 の様な通常の気体を少なくとも１種類から成っている。粒子は蛋白質、デキスト リン、デンプンおよびヒドロキシエチルデンプンの様なデンプン誘導体から形成 される。既に記載した様に、気泡の安定化を得るには高分子量を有する前記物質 （＞５００，０００ダルトン）が好適である。しかし、この種の物質は腎臓を通 過できないので肝臓によって別のものに分解されなければならない。こうするこ とで体内分配が良くなる。前記のヒドロキシエチルデンプンは分解されるときに 置換型のオリゴ糖に開裂され、このオリゴ糖は原則的には腎臓で濾過されて排泄 される。考え得る問題点として、網状内皮細胞系の細胞内にヒドロキシデンプン が蓄積することが論じられている。この場合、エチルエーテル化合物はそれ以上 酵素分解されない。現時点ではヒドロキシグルコースの代謝と排泄ならびに想定 できる薬物作用については 不明である［Ｋｅｒｃｈ，Ｉ．；Ｗｉｎｄ，Ｓ．（１９９５）Ｋｒａｎｋｅｎｈ ａｕｓｐｈａｒｍｚｉｅ１６（２）、６２−６３］。さらに、高分子物質は溶解 度が低いため、造影剤を再懸濁した場合に、粒子比を調整しないまま投与する危 険がある。そのために患者に塞栓を誘導する危険がある。 フッ化気体と空気を含む粒子は国際特許出願公開第９５／１６４６７号にも請 求されており、この場合にはフッ化成分の比率は４１％までと制限されている。 国際特許出願公開第９４／０９８２９号はリポソーム含有超音波造影剤を記載 している。気泡安定化界面活性剤としてリン脂質を利用しているが、しかし水に 難溶性の界面活性剤でも良い。この種のリポソームシステムの作成は一般に凍結 乾燥可能な溶媒、例えば３級−ブタノールあるいはＣ₂ Ｃｌ₄ Ｆ₂ を凍結乾燥し て作成する。この種の造影剤の作成に有機溶媒を利用する場合には、溶媒を回収 するたのに大きな努力が必要であり、レントゲン造影剤として利用する場合には 出来上がった産物を注意深く精製する必要がある。溶媒としてハロゲン化炭水化 物、特にＣ₂ Ｃｌ₄ Ｆ₂ の様なフッ化塩化炭水化物（ＦＣＫＷ）を用いる場合に は、さらにオゾン破壊の可能性があることから別の観点からの評価も必要となる 。 本発明の課題は、以下の現技術の欠点を克服した超音波造影剤の製造に利用で きる化合物を提供することである。 ・現在の医薬品としてならびに薬物動態上の問題を解消し、 ・容易かつ有機溶媒を利用することなく製造でき、 ・再現性良く気泡の大きさと数を調整でき、 ・高い造影性能に適した溶解した形状を持ち、 ・造影効果が長続きし、 ・高い気泡安定性を示し、それによって ・腎臓で濾過でき、素早く排泄できるものである。 これらの課題を本発明により克服した。 特に、超音波診断のための診断薬の製造には、低分子の基本体、界面活性剤、 および気体を含む多孔性の固形の水溶性マトリックスから成り、当該気体はマト リックスの多孔内部に封じられている調剤が好適である。 従来技術の微粒子造影剤と異なり、本発明の造影剤は粒子を含まない、多孔性 の固形構造体から作成され、以下多孔性マトリックスと称する。基本的な構造上 の違いを図１と図２に表した。図１は従来技術（欧州特許第０ ３６５ ４６７ 号）による微粒子造影剤の電子顕微鏡像例を示しており、図２は実施例１９によ り作成された本発明の造影剤を等倍で示している（図中の１ｃｍが実際には１． １μｍ）。マトリックスの溶解すると、気泡が放出される孔を明確に知ることが できる。孔の大きさと数は高い再現性を持っている。この場合、気泡の大きさは 実際に孔の大きさによって限定される。またマトリックスから放出される気泡の 数はマトリックスの透過性にも依存する。上記パラメータ（気泡の大きさと数） は様々な製造パラメータによって容易に調整でき、また造影剤の有効性に大きく 影響する。 また、気泡の形成は使用前に溶媒を振とうして作るのではないので、気泡は一 定の形で放出される。放出された気泡は界面活性剤、場合によってはマトリック スの一部として存在する界面活性剤の働きにより安定化する利点がある。これに よって本発明の造影剤では一般に安定した気泡懸濁物を利用できる。 得られる気泡の再現性が良好であるため、気泡の大きさによる肺塞栓のリスク も小さくできる。さらに、マトリックス成分に低分子量で溶解性に優れた物質を 用いることで、不溶性の粒子状の調合成 分を利用したときに伴うリスクを低下する。 本発明の多孔性マトリックスは、一般に分子量が＜１５０００である水溶性の 基本体と、マトリックスに対する比率で０．０１から１０％（ｍ／ｍ）の素早く かつ良く水に溶ける水溶性界面活性剤から成る。基本化合物は必ずしも有機溶媒 に溶解するものでなくてもよいことから、好適な基本体の対象範囲が広くなる。 基本体としては： アミノ酸、ポリアミノ酸、ペプチド、蛋白質、単糖、二糖、三糖、四糖、オリ ゴ糖ならびに多糖、ならびにその誘導体、合成糖と糖誘導体であり、例えばＬ− グリシン、Ｌ−アラニン、Ｌ−バリン、Ｌ−ロイシン、Ｌ−イソロイシン、Ｌ− フェニルアラニン、Ｌ−プロリン、Ｌ−ヒドロキシプロリン、Ｌ−セリン、Ｌ− スレオニン、Ｌ−トリプトファン、Ｌ−アスパラギン、Ｌ−グルタミン、Ｌ−ア ルギニン、Ｌ−ヒスチジン、グリシル−グリシン、グリシル−グリシル−グリシ ン、グルコース、ガラクトース、フルクトース、マンノース、ソルボース、ショ 糖、乳糖、マルトース、トレハロース、ゲンチオビオース、ラクツロース、ツラ ノース、マルトトリオース、メリビオース、メレチトース（Ｍｅｌｉｚｉｔｏｓ ｅ）、マルトテトラオース、マルトペンタオース、スタキオース、アラビノース 、キシロース、リボース、ズルシトール、キシリトール、マンニト−ル、リビト ール、イノシトール、ソルビトール、α、β、γ−シクロデキストリン、ヒドロ キシプロピル−β−シクロデキストリンとその他の誘導体、ならびにデキストラ ン８、デキストリンの様な分子量が＜１５，０００ダルトン以上の重合糖もしく はフィコールの様な合成糖重合体である。 基本体としてはさらにレントゲン造影剤や核磁気共鳴画像用造影剤も好適であ る。例えばイオプロミド、イオトロラン、イオパミド ール、イオヘキソール、ならびにＧｄ−ＤＴＰＡ（ガドペンテット酸）、Ｇｄ− ＤＴＰＡ−ジメグルミン塩（Ｍａｇｎｅｖｉｓｔ）、Ｇｄ−ＥＯＢ−ＤＴＰＡ（ ガドキセット酸、２ナトリウム塩）やガドブトロールがある。 本発明によれば、分子量が＜１５，０００ダルトンの腎臓からの濾過が阻害さ れない物質（Ｓｉｌｂｅｒｎａｇｌ Ｓ．，Ｄｅｓｐｏｐｏｕｌｏｓ Ａ．，Ｔ ａｓｃｈｅｎａｔｌａｓ ｄｅｒ Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｅ，Ｓ．１３２）であ って、少なくとも２糖単位からなる糖が好適であり、特にレントゲン造影剤、な らびに核磁気共鳴画像用造影剤が好適であう。分子量＜１５，０００ダルトンの 物質を用いることは、この種の物質は腎臓から確実に排泄されることから、通常 の技術におる造影剤に比べて明らかに優れている。造影剤成分ならびにその代謝 物が長い間体内に留まることによって体に負担がかかることを防ぐことができる 。また一般的には分子量が小さいほど水溶性が増すので、不溶性の処方成分を用 いた時のリスクを軽減することができる。 界面活性剤としては、水溶性の非イオン性界面活性剤であり、過フッ化炭水化 物を含み／もしくは分子量が＜１５，０００のものが好適である。例えばソルビ タン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキ シエチレンソルビトール脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、 グリセリンポリオキシエチレン脂肪酸エステル、一部水素化することができかつ そのエトキシ化された混合物であることが望ましいエトキシ化モノ−、ジ−、ト リグリセリド、エトキシ化リジンウソール、エトキシ化フェノール、ポリオキシ エチレン脂肪酸アルコールエーテル、ポリグリセロール脂肪酸エステル、ソルビ タン過フッ化脂肪酸エステル、ポリオキエチレンソルビタン過フッ化脂肪酸エス テル、ポリオ キシエチレンソルビトール過フッ化脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン過フッ 化脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン過フッ化脂肪酸アルコールエーテル、ポ リグリセロール過フッ化脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンポリオキシプロピ レン−重合体及び／またはゾニール（Ｚｏｎｙｌｅ、登録商標）の様なフルオロ アルキルポリ（エチレンオキシド）アルコール、サッカライド脂肪酸エーテル、 エトキシ化サッカライド脂肪酸エステル、エトキシ化サッカライド脂肪酸エーテ ル、脂肪酸エタノールアミド、及び／またはエトキシ化脂肪酸エタノールアミド である。 表面活性剤としてはリン脂質、特に水素化されたホスファチピルコリンが好適 である。 気体としては超音波診断薬にすでに使用されているもの、例えば窒素、酸素、 ＣＯ₂ あるいは空気が利用でき、特にフッ素化した気体も利用できる。驚くべき ことに、既存既述による粒子製剤で利用されている様に、既に”典型的”な気体 を利用した時に、生体内での造影作用が強くまた長くなることが観察されていた 。 フッ素化気体を利用する場合には、従来技術による製剤に必要とされた様な混 合した状態で利用する必要はない。 本発明によれば室温ならびに通常圧では次の物質が好適である： テトラフルオロアレン、ヘキサフルオロ−ｌ，３−ブタジエン、デカフルオロ ブタン、過フッ化−１−ブテン、過フッ化−２−ブテン、過フッ化−２−ブチン 、オクタフルオロシクロブタン、過フッ化シクロブタン、過フッ化シクロペンタ ン、過フッ化ジメチルアミン、ヘキサフルオロエタン、テトラフルオロエチレン 、ペンタフルオロチオ（トリフルオロ）メタン、テトラフルオロメタン、過フッ 化プロパンならびに過フッ化プロピレンである。 上記の中で、過フルオロ化物質が特に好適である。 本発明の他の観点は発明によるマトリックスの製造方法に関する。本発明のマ トリックスは無菌条件下にまず基本体水溶液を調整し、さらに特定の比率で気泡 −安定化のための界面活性剤を加えるという簡単な作業から製造できる。分割も しくは一つにまとめた溶液をまず滅菌した後に、すぐに凍結する。凍結物を溶液 性の凝集状態を経ないで直接気体が生成される状態に移行させて水を除く。適当 な条件で水の状態図を得ることができる（図３参照）。所望の気体が吹き込まれ た多孔性マトリックスが残る。完全にガス交換するためには（例えばマトリック スの孔のなかに含まれる残存空気あるいは水蒸気を取り除く）、引き続いて平衡 圧での減圧排気を繰り返すことが推奨される。可能な限り純粋な気相を得るため に、平衡圧に達する直前には真空度は＜０．１ｍバールでなければならない。所 望の気相下に、後にキットの直接の一部として使用できる密閉された容器内で製 造することが好ましい。 本発明の製造方法は、有機溶媒の利用を避けることができるという優れた利点 がある。また、難溶解性もしくは溶解に時間のかかる、あるいは水にただ分散す るだけの物質を扱うときに求められる様な、面倒な技術を利用しなくて済む。従 って、現行の標準的なレントゲン造影剤成分は本発明の製剤には役立たない。こ のことはエコロジー的な観点からも、また製品の安全性の観点からも極めて大き な利点である。多くの有機溶媒について、最少量もしくは最低濃度においても発 癌性あるいは突然変異性が疑われている。 本発明のマトリックスに水性溶媒を加えることで、簡単に所望の、粒子を含ま ない超音波造影剤を製造できる。水性溶媒は医師自身で使用直前に加えることが できる。水性溶媒には、医薬品に通常使用されている補助剤、例えば等浸透圧性 および粘度増加のための添加物を加えることができる。液体を加えられたマトリ ックスを強く 振る必要はない。こうして作られた造影剤は、血液と等張もしくは血液とほぼ等 張であるという特徴を有している。この造影剤は再懸濁した直後に注射すること ができる。当該造影剤の濃度は懸濁液１ミリリットル当たり１０から６００ｍｇ であり、好ましくは５０から４００ｍｇである。本造影剤は体重ｋｇあたり０． ０１から０．２０ｍｌの用量で使用される。 本発明の造影剤はあらゆる超音波の画像形成モード、例えばＭ−、Ｂ−、ドッ プラーモードでの応用に好適であり、さらに非線形効果でのモード、例えばハー モニック−、およびハーモニックパワーモードでも同様に使用でき、高い再現性 を得ることができる。 マトリックスより発生する気泡の数は、現行の造影剤より遥かに多いため、従 って当該造影剤は顕著に改良された造影効果を有しており、特に検査のための時 窓期間が大きく延長できる（生体内実験４１−５２を参照）。 以下実施例により本発明をより詳細に説明するが、本発明はもとよりこれに限 定されるものではない。 実施例１ ２０ｇのデキストラン（ＭＧ：〜１２００ｇ／ｍｏｌ）に、０．２ｇのＺｏｎ ｙｌ（登録商標）ＦＳＯ−１００（ＭＧ：〜７２５ｇ／ｍｏｌ）と８０ｇの水を 加える。これを完全に溶解させるまで攪拌する。溶解液５ｇを別容器に取り、液 体窒素で凍結する。液体の凝固状態を経ないで固形状態から直接ガス形成状態に 移行できる条件下に水を取り去った後、デカフルオロブタンを用いて気体交換を 行う。１０ｍｌの水に再懸濁したマトリックス材料１グラム当たりに０．５６− ７．４６μｍの範囲の気体を１２．３×１０⁹ 気泡発生させて多孔性マトリック スを作成する。気泡の数と大きさはＭｅ ｌｖｅｒｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ社のレーザー回折計、タイプマスターシリ ーズ１０００を用いて測定した。 実施例２ １０ｇのデキストラン（ＭＧ：〜１２００ｇ／ｍｏｌ）に０．１ｇのＺｏｎｙ ｌ（登録商標）ＦＳＯ−１００（ＭＧ：〜７２５ｇ／ｍｏｌ）と９０ｇの水を加 える。ついで実施例１記載の作業を行う。１０ｍｌの水に再懸濁すると、物質１ グラム当たり０．５６−７．４６μｍの範囲の気泡が３．７×１０⁹ 発生する。 実施例３ ２０ｇのデキストラン（ＭＧ：〜８０００ｇ／ｍｏｌ）に０．２ｇのＺｏｎｙ ｌ（登録商標）ＦＳＯ−１００（ＭＧ：〜７２５ｇ／ｍｏｌ）と８０ｇの水を加 える。ついで実施例１記載の作業を行う。１０ｍｌの水に再懸濁すると、物質１ グラム当たり０．５６−７．４６μｍの範囲の気泡が１０．５×１０⁹ が発生す る。 実施例４ ３０ｇのラフィノース（ＭＧ：５９４ｇ／ｍｏｌ）に０．３ｇのＺｏｎｙｌ（ 登録商標）ＦＳＯ−１００（ＭＧ：〜７２５ｇ／ｍｏｌ）と７０ｇの水を加える 。ついで実施例１記載の作業を行う。１０ｍｌの水に再懸濁した後に、２６２ｍ ｏｓｍｏｌの浸透圧調整剤を用いて浸透圧をほぼ等張に調整する。物質１グラム 当たり０．５６−７．４６μｍの範囲の気泡１４．６×１０⁹ 発生する。 実施例５ ２０ｇのトレハロース（ＭＧ：３４２ｇ／ｍｏｌ）に０．２ｇのＺｏｎｙｌ（ 登録商標）ＦＳＯ−１００（ＭＧ：〜７２５ｇ／ｍｏｌ）と８０ｇの水を加える 。ついで実施例１記載の作業を行う。１０ｍｌの水に再懸濁した後に、２７２ｍ ｏｓｍｏｌの浸透圧調整剤を用いて浸透圧をほぼ等張に調整する。物質１グラム 当たり０．５ ６−７．４６μｍの範囲の気泡が９．４×１０⁹ 発生する。 実施例６ ２０ｇのマルトース（ＭＧ：３４２ｇ／ｍｏｌ）に０．２gのＺｏｎｙｌ（登 録商標）ＦＳＯ−１００（ＭＧ：〜７２５ｇ／ｍｏｌ）と８０ｇの水を加える。 ついで実施例１記載の作業を行う。１０ｍｌの水に再懸濁した後に、２８１ｍｏ ｓｍｏｌの浸透圧調整剤を用いて浸透圧をほぼ等張に調整する。物質１グラム当 たり０．５６−７．４６μｍの範囲の気泡が８．２×１０⁹ 発生する。 実施例７ ４０ｇのマルトオリゴ糖（ＭＧ：〜６８４ｇ／ｍｏｌ）に０．４ｇのＺｏｎｙ ｌ（登録商標）ＦＳＯ−１００（ＭＧ：〜７２５ｇ／ｍｏｌ）と６０ｇの水を加 える。ついで実施例１記載の作業を行う。１０ｍｌの水に再懸濁した後に、３１ ４ｍｏｓｍｏｌの浸透圧調整剤を用いて浸透圧をほぼ等張に調整する。物質１グ ラム当たり０．５６−７．４６μｍの範囲の気泡が３０．０×１０⁹ 発生する。 実施例８ ２０ｇのマルトオリゴ糖（ＭＧ：〜６８４ｇ／ｍｏｌ）に０．２ｇのＺｏｎｙ ｌ（登録商標）ＦＳＯ−１００（ＭＧ：〜７２５ｇ／ｍｏｌ）と８０ｇの水を加 える。完全に溶解するまで攪拌する。溶液を１０ｇ取り別容器に移し、液体窒素 で凍結する。水を完全に除くと多孔性マトリックスが残る。１０ｍｌの水に再懸 濁した後に、３１０ｍｏｓｍｏｌの浸透圧調整剤を用いて浸透圧をほぼ等張に調 整する。物質１グラム当たり０．５６−７．４６μｍの範囲の気泡が１９．１× １０⁹ 発生する。 実施例９ ３０ｇのメレチトース（ＭＧ：５２２ｇ／ｍｏｌ）に０．４ｇのＺｏｎｙｌ（ 登録商標）ＦＳＯ−１００（ＭＧ：〜７２５ｇ／ｍｏ ｌ）と７０ｇの水を加える。ついで実施例１記載の作業を行う。１０ｍｌの水に 再懸濁した後に、３１５ｍｏｓｍｏｌの浸透圧調整剤を用いて浸透圧をほぼ等張 に調整する。物質１グラム当たり０．５６−７．４６μｍの範囲の気泡が４．３ ×１０⁹ 発生する。 実施例１０ ３０ｇのメリビオース（ＭＧ：３６０ｇ／ｍｏｌ）に０．３ｇのＺｏｎｙｌ（ 登録商標）ＦＳＯ−１００（ＭＧ：〜７２５ｇ／ｍｏｌ）と７０ｇの水を加える 。完全に溶解するまで攪拌する。この溶液を４ｇ取って別容器に移し、液体窒素 で凍結する。水を完全に除くと多孔性マトリックスが残る。８ｍｌの水に再懸濁 した後に、３０６ｍｏｓｍｏｌの浸透圧調整剤を用いて浸透圧をほぼ等張に調整 する。物質１グラム当たり０．５６−７．４６μｍの範囲の気泡が４．３×１０⁹ 発生する。 実施例１１ ３０ｇのマルトトリオース（ＭＧ：５０４ｇ／ｍｏｌ）に０．３ｇのＺｏｎｙ ｌ（登録商標）ＦＳＯ−１００（ＭＧ：〜７２５ｇ／ｍｏｌ）と７０ｇの水を加 える。完全に溶解するまで攪拌する。この溶液を３ｇ取って別容器に移し、液体 窒素で凍結する。水を完全に除くと多孔性マトリックスが残る。６ｍｌの水に再 懸濁した後に、２９６ｍｏｓｍｏｌの浸透圧調整剤を用いて浸透圧を等張に調整 する。物質１グラム当たり０．５６−７．４６μｍの範囲の気泡が３．６×１０⁹ 発生する。 実施例１２ ３０ｇのＧｄ−ＥＯＢ−ＤＴＰＡ（ＭＧ：７２６ｇ／ｍｏｌ）（ガドキセティ ク酸、２ナトリウム）に０．３ｇのＺｏｎｙｌ（登録商標）ＦＳＯ−１００（Ｍ Ｇ：〜７２５ｇ／ｍｏｌ）と７０ｇの水を加える。完全に溶解するまで攪拌する 。この溶液を３ｇ取って別 容器に移し、液体窒素で凍結する。水を完全に除くと多孔性マトリックスが残る 。１０ｍｌの水に再懸濁した後に、３４４ｍｏｓｍｏｌの浸透圧調整剤を用いて ほぼ等張に調整する。物質１グラム当たり０．５６−７．４６μｍの範囲の気泡 が２４．６×１０⁹ 発生する。 実施例１３ ３０ｇのガドブトロール（ＭＧ：６０５ｇ／ｍｏｌ）に０．３ｇのＺｏｎｙｌ （登録商標）ＦＳＯ−１００（ＭＧ：〜７２５ｇ／ｍｏｌ）と７０ｇの水を加え る。完全に溶解するまで攪拌する。この溶液を３ｇ取って別容器に移し、液体窒 素で凍結する。水を完全に除くと多孔性マトリックスが残る。５ｍｌの水に再懸 濁した後に、２６９ｍｏｓｍｏｌの浸透圧調整剤を用いてほぼ等張に調整する。 物質ｌグラム当たり０．５６−７．４６μｍの範囲の気泡が２０．１×１０⁹ 発 生する。 実施例１４ ３０ｇのガドペンテット酸（ＭＧ：５４８ｇ／ｍｏｌ)に０．３ｇのＺｏｎｙ ｌ（登録商標）ＦＳＯ−１００（ＭＧ：〜７２５ｇ／ｍｏｌ）と７０ｇの水を加 える。完全に溶解するまで攪拌する。この溶液を３ｇ取って別容器に移し、液体 窒素で凍結する。水を完全に除くと多孔性マトリックスが残る。７ｍｌの水に再 懸濁した後に、２８２ｍｏｓｍｏｌの浸透圧調整剤を用いてほぼ等張に調整する 。物質１グラム当たり０．５６−７．４６μｍの範囲の気泡が２９．１×１０⁹ 発生する。 実施例１５ ３０ｇのイオパミドール（ＭＧ：７７７ｇ／ｍｏｌ）に０．３ｇのＺｏｎｙｌ （登録商標）ＦＳＯ−１００（ＭＧ：〜７２５ｇ／ｍｏｌ）と７０ｇの水を加え る。完全に溶解するまで攪拌する。この 溶液を４ｇ取って別容器に移し、液体窒素で凍結する。水を完全に除くと多孔性 マトリックスが残る。５ｍｌの水に再懸濁した後に、２６８ｍｏｓｍｏｌの浸透 圧調整剤を用いてほぼ等張に調整する。物質１グラム当たり０．５６−７．４６ μｍの範囲の気泡が２６．３×１０⁹ 発生する。 実施例１６ １５ｇのイオパミドール（ＭＧ：７７７ｇ／ｍｏｌ）に０．１５ｇのＺｏｎｙ ｌ（登録商標）ＦＳＯ−１００（ＭＧ：〜７２５ｇ／ｍｏｌ）と８５ｇの水を加 える。完全に溶解するまで攪拌する。この溶液を８ｇ取って別容器に移し、液体 窒素で凍結する。水を完全に除くと多孔性マトリックスが残る。５ｍｌの水に再 懸濁した後に、３４３ｍｏｓｍｏｌの浸透圧調整剤を用いてほぼ等張に調整する 。物質１グラム当たり０．５６−７．４６μｍの範囲の気泡が１６．９×１０⁹ 発生する。 実施例１７ ３０ｇのイオヘキソール（ＭＧ：８２１ｇ／ｍｏｌ）に０．３ｇのＺｏｎｙｌ （登録商標）ＦＳＯ−１００（ＭＧ：〜７２５ｇ／ｍｏｌ）と７０ｇの水を加え る。ついで実施例１記載の作業を行う。５ｍｌの水に再懸濁した後に、２６４ｍ ｏｓｍｏｌの浸透圧調整剤を用いてほぼ等張に調整する。物質１グラム当たり０ ．５６−７．４６μｍの範囲の気泡が２４．４×１０⁹ 発生する。 実施例１８ ２０ｇのイオトロラン（ＭＧ：１６２６ｇ／ｍｏｌ）に０．２ｇのＺｏｎｙｌ （登録商標）ＦＳＯ−１００（ＭＧ：〜７２５ｇ／ｍｏｌ）と８０ｇの水を加え る。完全に溶解するまで攪拌する。この溶液を１０ｇ取って別容器に移し、液体 窒素で凍結する。水を完全に除くと多孔性マトリックスが残る。３ｍｌの水に再 懸濁した後に 、２５６ｍｏｓｍｏｌの浸透圧調整剤を用いてほぼ等張に調整する。物質１グラ ム当たり０．５６−７．４６μｍの範囲の気泡が１０．３×１０⁹ 発生する。 実施例１９ ４０ｇのイオプロミド（ＭＧ：７９１ｇ／ｍｏｌ）に０．４ｇのＺｏｎｙｌ（ 登録商標）ＦＳＯ−１００（ＭＧ：〜７２５ｇ／ｍｏｌ）と６０ｇの水を加える 。ついで実施例１記載の作業を行う。６ｍｌの水に再懸濁した後に、２８９ｍｏ ｓｍｏｌの浸透圧調整剤を用いて等張にする。物質１グラム当たり０．５６−７ ．４６μｍの範囲の気泡が２２．４×１０⁹ 発生する。 実施例２０ ２０ｇのイオプロミド（ＭＧ：７９１ｇ／ｍｏｌ）に０．２ｇのＺｏｎｙｌ（ 登録商標）ＦＳＯ−１００（ＭＧ：〜７２５ｇ／ｍｏｌ）と８０ｇの水を加える 。完全に溶解するまで攪拌する。この溶液を１０ｇ取って別容器に移し、液体窒 素で凍結する。水を完全に除くと多孔性マトリックスが残る。６ｍｌの水に再懸 濁した後に、２９１ｍｏｓｍｏｌの浸透圧調整剤を用いてほぼ等張に調整する。 物質１グラム当たり０．５６−７．４６μｍの範囲の気泡が２１．９×１０⁹ 発 生する。 実施例２１ ２３ｇのＭａｇｎｅｖｉｓｔ（登録商標）（ＭＧ：９３８ｇ／ｍｏｌ）に０． ２３ｇのＺｏｎｙｌ（登録商標）ＦＳＯ−１００（ＭＧ：〜７２５ｇ／ｍｏｌ） と７７ｇの水を加える。完全に溶解するまで攪拌する。この溶液を３ｇ取って別 容器に移し、液体窒素で凍結する。水を完全に除くと多孔性マトリックスが残る 。５ｍｌの水に再懸濁した後に、３４２ｍｏｓｍｏｌの浸透圧調整剤を用いてほ ぼ等張に調整する。物質１グラム当たり０．５６−７．４６μｍの 範囲の気泡が６．１６×１０⁹ 発生する。 実施例２２ ４０ｇのイオプロミド（ＭＧ：７９１ｇ／ｍｏｌ）に０．４ｇのＴｒｉｔｏｎ （登録商標）−Ｘ−１００（ＭＧ：〜８７４ｇ／ｍｏｌ）と６０ｇの水を加える 。ついで実施例１記載の作業を行う。６ｍｌの水に再懸濁した後に、２９０ｍｏ ｓｍｏｌの浸透圧調整剤を用いて等張にする。物質１グラム当たり０．５６−７ ．４６μｍの範囲の気泡が９．５６×１０⁹ 発生する。 実施例２３ ４０ｇのイオプロミド（ＭＧ：７９１ｇ／ｍｏｌ）に０．４ｇのＴｗｅｅｎ（ 登録商標）２０（ＭＧ：７１８ｇ／ｍｏｌ）と６０ｇの水を加える。ついで実施 例１記載の作業を行う。６ｍｌの水に再懸濁した後に、２８９ｍｏｓｍｏｌの浸 透圧調整剤を用いて等張にする。物質１グラム当たり０．５６−７．４６μｍの 範囲の気泡が１６．５５×１０⁹ 発生する。 実施例２４ ４０ｇのイオプロミド（ＭＧ：７９１ｇ／ｍｏｌ）に０．４ｇのＣｒｅｍｏｐ ｈｏｒｅ（登録商標）ＲＨ４０（ＭＧ：〜２７００ｇ／ｍｏｌ）と６０ｇの水を 加える。ついで実施例１記載の作業を行う。６ｍｌの水に再懸濁した後に、２９ １ｍｏｓｍｏｌの浸透圧調整剤を用いて等張にする。物質１グラム当たり０．５ ６−７．４６μｍの範囲の気泡が１１．０５×１０⁹ 発生する。 実施例２５ ４０ｇのイオプロミド（ＭＧ：７９１ｇ／ｍｏｌ）に０．４ｇのＲｅｗｏｄｅ ｒｍ（登録商標）Ｌｉ４８−５０（ＭＧ：〜３８００ｇ／ｍｏｌ）と６０ｇの水 を加える。ついで実施例１記載の作業を行う。６ｍｌの水に再懸濁した後に、２ ８８ｍｏｓｍｏｌの浸透圧 調整剤を用いて等張にする。物質１グラム当たり０．５６−７．４６μｍの範囲 の気泡が２４．０５×１０⁹ 発生する。 実施例２６ ４０ｇのイオプロミド（ＭＧ：７９１ｇ／ｍｏｌ）に０．４ｇのＳｏｌｕｔｏ ｌ（登録商標）ＨＳ１５（ＭＧ：〜１０００ｇ／ｍｏｌ）と６０ｇの水を加える 。ついで実施例１記載の作業を行う。６ｍｌの水に再懸濁した後に、２８９ｍｏ ｓｍｏｌの浸透圧調整剤を用いて等張にする。物質１グラム当たり０．５６−７ ．４６μｍの範囲の気泡が１３．４６×１０⁹ 発生する。 実施例２７ ４０ｇのイオプロミド（ＭＧ：７９１ｇ／ｍｏｌ）に０．４ｇのＬｕｔｒｏｌ （登録商標）Ｆ６８（ＭＧ：〜８６００ｇ／ｍｏｌ）と６０ｇの水を加える。つ いで実施例１記載の作業を行う。６ｍｌの水に再懸濁した後に、２９０ｍｏｓｍ ｏｌの浸透圧調整剤を用いて等張にする。物質１グラム当たり０．５６−７．４ ６μｍの範囲の気泡が１７．６８×１０⁹ 発生する。 実施例２８ ４０ｇのイオプロミド（ＭＧ：７９１ｇ／ｍｏｌ）に０．４ｇのＳｐａｎ（登 録商標）８５（ＭＧ：１０２８ｇ／ｍｏｌ）と６０ｇの水を加える。ついで実施 例１記載の作業を行う。６ｍｌの水に再懸濁した後に、２９１ｍｏｓｍｏｌの浸 透圧調整剤を用いて等張にする。物質１グラム当たり０．５６−７．４６μｍの 範囲の気泡が２０．４５×１０⁹ 発生する。 実施例２９ ３０ｇのイオヘキソール（ＭＧ：８２１ｇ／ｍｏｌ）に０．３ｇのＺｏｎｙｌ （登録商標）−ＦＳＮ（ＭＧ：〜９５０ｇ／ｍｏｌ）と７０ｇの水を加える。つ いで実施例１記載の作業を行う。５ｍｌ の水に再懸濁した後に、２６９ｍｏｓｍｏｌの浸透圧調整剤を用いてほぼ等張に する。物質１グラム当たり０．５６−７．４６μｍの範囲の気泡が２３．８１× １０⁹ 発生する。 実施例３０ ３０ｇのガドブトロール（ＭＧ：６０５ｇ／ｍｏｌ）に０．３ｇのＳｏｌｕｔ ｏｌ（登録商標）ＨＳ１５（ＭＧ：〜１０００ｇ／ｍｏｌ）と７０ｇの水を加え る。完全に溶解するまで攪拌する。この溶液を３ｇ取って別容器に移し、液体窒 素で凍結する。水を完全に除くと多孔性マトリックスが残る。５ｍｌの水に再懸 濁した後に、２７１ｍｏｓｍｏｌの浸透圧調整剤を用いてほぼ等張に調整する。 物質１グラム当たり０．５６−７．４６μｍの範囲の気泡が６．６４×１０⁹ 発 生する。 実施例３１ ４０ｇのイオプロミド（ＭＧ：７９１ｇ／ｍｏｌ）に０．４ｇのＺｏｎｙｌ（ 登録商標）−ＦＳＯ−１００（ＭＧ：〜７２５ｇ／ｍｏｌ）と６０ｇの水を加え る。ついで実施例１記載の作業を行う。続いて乾燥した後、ヘキサフルオロエタ ンでガス交換する。６ｍｌの水に再懸濁した後に、２８９ｍｏｓｍｏｌの浸透圧 調整剤を用いて等張にする。物質１グラム当たり０．５６−７．４６μｍの範囲 の気泡が４．０７×１０⁹ 発生する。 実施例３２ ４０ｇのイオプロミド（ＭＧ：７９１ｇ／ｍｏｌ）に０．４ｇのＴｒｉｔｏｎ （登録商標）−Ｘ−１００（ＭＧ：８７４ｇ／ｍｏｌ）と６０ｇの水を加える。 ついで実施例１記載の作業を行う。その後乾燥てからヘキサフルオロエタンでガ ス交換する。６ｍｌの水に再懸濁した後に、２９０ｍｏｓｍｏｌの浸透圧調整剤 を用いて等張にする。物質１グラム当たり０．５６−７．４６μｍの範囲の気泡 が３．０１×１０⁹ 発生する。 実施例３３ ４０ｇのイオプロミド（ＭＧ：７９１ｇ／ｍｏｌ）に０．４ｇのＴｗｅｅｎ（ 登録商標）２０（ＭＧ：７１８ｇ／ｍｏｌ）と６０ｇの水を加える。ついで実施 例１記載の作業を行う。続いて乾燥した後、ヘキサフルオロエタンでガス交換す る。６ｍｌの水に再懸濁した後に、２８９ｍｏｓｍｏｌの浸透圧調整剤を用いて 等張にする。物質１グラム当たり０．５６−７．４６μｍの範囲の気泡が４．２ ７×１０⁹ 発生する。 実施例３４ ４０ｇのイオプロミド（ＭＧ：７９１ｇ／ｍｏｌ）に０．４ｇのＣｒｅｍｏｐ ｈｏｒ（登録商標）ＲＨ４０（ＭＧ：〜２７００ｇ／ｍｏｌ）と６０ｇの水を加 える。ついで実施例１記載の作業を行う。続いて乾燥した後、ヘキサフルオロエ タンでガス交換する。６ｍｌの水に再懸濁した後に、２９１ｍｏｓｍｏｌの浸透 圧調整剤を用いて等張にする。物質１グラム当たり０．５６−７．４６μｍの範 囲の気泡が１．７６×１０⁹ 発生する。 実施例３５ ４０ｇのイオプロミド（ＭＧ：７９１ｇ／ｍｏｌ）に０．４ｇのＲｅｗｏｄｅ ｒｍ（登録商標）Ｌｉ４８−５０（ＭＧ：〜３８００ｇ／ｍｏｌ）と６０ｇの水 を加える。ついで実施例１記載の作業を行う。それから乾燥し、ヘキサフルオロ エタンでガス交換する。６ｍｌの水に再懸濁した後に、２８８ｍｏｓｍｏｌの浸 透圧調整剤を用いて等張にする。物質１グラム当たり０．５６−７．４６μｍの 範囲の気泡が９．５８×１０⁹ 発生する。 実施例３６ ４０ｇのイオプロミド（ＭＧ：７９１ｇ／ｍｏｌ）に０．４ｇの Ｓｏｌｕｔｏｌ（登録商標）ＨＳ１５（ＭＧ：〜１０００ｇ／ｍｏｌ）と６０ｇ の水を加える。ついで実施例１記載の作業を行う。乾燥後、ヘキサフルオロエタ ンでガス交換する。６ｍｌの水に再懸濁した後に、２８９ｍｏｓｍｏｌの浸透圧 調整剤を用いて等張にする。物質１グラム当たり０．５６−７．４６μｍの範囲 の気泡が２．５２×１０⁹ 発生する。 実施例３７ ４０ｇのイオプロミド（ＭＧ：７９１ｇ／ｍｏｌ）に０．４ｇのＬｕｔｒｏｌ （登録商標）Ｆ６８（ＭＧ：〜８６００ｇ／ｍｏｌ）と６０ｇの水を加える。つ いで実施例１記載の作業を行う。乾燥後、ヘキサフルオロエタンでガス交換する 。６ｍｌの水に再懸濁した後に、２９０ｍｏｓｍｏｌの浸透圧調整剤を用いて等 張にする。物質１グラム当たり０．５６−７．４６μｍの範囲の気泡が４．３２ ×１０⁹ 発生する。 実施例３８ ４０ｇのイオプロミド（ＭＧ：７９１ｇ／ｍｏｌ）に０．４ｇのＳｐａｎ（登 録商標）８５（ＭＧ：１０２８ｇ／ｍｏｌ）と６０ｇの水を加える。ついで実施 例１記載の作業を行う。乾燥後、ヘキサフルオロエタンでガス交換する。６ｍｌ の水に再懸濁した後に、２９１ｍｏｓｍｏｌの浸透圧調整剤を用いて等張にする 。物質１グラム当たり０．５６−７．４６μｍの範囲の気泡が６．６５×１０⁹ 発生する。 実施例３９ ３０ｇのイオヘキソール（ＭＧ：８２１ｇ／ｍｏｌ）に０．３ｇのＺｏｎｙｌ （登録商標）−ＦＳＮ（ＭＧ：〜９５０ｇ／ｍｏｌ）と７０ｇの水を加える。つ いで実施例１記載の作業を行う。乾燥後、ヘキサフルオロエタンでガス交換を行 う。５ｍｌの水に再懸濁し た後に、２６９ｍｏｓｍｏｌの浸透圧調整剤を用いてほぼ等張にする。物質１グ ラム当たり０．５６−７．４６μｍの範囲の気泡が８．２５×１０⁹ 発生する。 実施例４０ ３０ｇのガドブトロール（ＭＧ：６０５ｇ／ｍｏｌ）に０．３ｇのＳｏｌｕｔ ｏｌ（登録商標）ＨＳ１５（ＭＧ：〜１０００ｇ／ｍｏｌ）と７０ｇの水を加え る。完全に溶解するまで攪拌する。この溶液を３ｇ取って別容器に移し、液体窒 素で凍結する。それから実施例１に従い作業を行う、乾燥後、へキサフルオロエ タンでガス交換を行う。５ｍｌの水に再懸濁した後に、２７１ｍｏｓｍｏｌの浸 透圧調整剤を用いてほぼ等張に調整する。物質１グラム当たり０．５６−７．４ ６μｍの範囲の気泡が２．１１×１０⁹ 発生する。 実施例４１ 実施例２２作成の本発明の造影剤の生体への応用。 ビーグル犬［雌、体重１１．２ｋｇ（ＫＧＷによる）］を麻酔し（およそ２／ ３窒素と、およそ１／３Ｎ₂ Ｏ１．５−２％エンフルランの吸引麻酔剤、自然呼 吸による吸引）、心臓の超音波検査の準備をした。試験は超音波システムマーク ＨＰ（７７０２０Ｅ型、５ＭＨｚトランスダクター）を用いＢ−モードで実施し た。実験動物に試験物質を静脈注射（実施例２２の本発明の造影剤）した。対照 物質として国際特許出願公開第９５／２２９９４号に類似の造影剤（実施例１２ ）を使用した。 使用した用量は本発明の造影剤ならびに対照物質ともに０．１ｍｇ／ｋｇＫＧ Ｗである。結果は図４に強度の経時変化として表した。本発明の造影剤では、平 坦（ゆっくりと低下）な線は−以下図５〜８共に同様に見られる−が認められた 。このことから、本発明の造影剤は従来技術による造影剤に比べ、静脈注射後長 時間造影効果 を維持していることが分かる。この造影特性によって、医師は長時間の検査が可 能になる（検査窓）。さらに追加の注射による患者の負担を少なくすることがで き、コスト／利便性が向上する。 実施例４２ 実施例２７により作成された本発明造影剤の生体内への応用。 実施例４１記載の方法と同様にして実施した。試験物質は実施例２７）に記載 した製剤を使用し、対照物質には国際特許出願公開第９５／２２９９４号（実施 例１２）の造影剤を使用した。対照物と試験物質の用量は同一でそれぞれ０．１ ｍｇ／ｋｇＫＧＷである。 強度−時間経過を図５に示した。 実施例４３ 実施例２８により作成された本発明造影剤の生体内への応用。 実施例４１記載の方法と同様にして、実験動物に１１．９ｋｇＫＧＷの用量で 投与し実施した。試験物質は実施例２８に記載した製剤を使用し、対照物質には 欧州特許第０３６５４６７号（実施例１）の造影剤を使用した。実施例２８の本 発明の造影剤は０．０５ｍｌ／ｋｇの用量で、対照物質は０．２ｍｌ／ｋｇの用 量で用いた。試験結果は図６に強度−時間経過の形で表した。いずれの場合でも 、本発明の造影剤では使用量が少ないにもかかわらず強いコントラストが長い間 維持されていた。 実施例４４ 実施例２９により作成された本発明造影剤の生体内への応用。 実施例４３記載の方法と同様にして作業した。試験物質は実施例２９に記載し た製剤を使用し、対照物質には欧州特許第０３６５４６７号（実施例１）の造影 剤を使用した。 本発明の造影剤は０．０５ｍｌ／ｋｇＫＧＷの用量で、対照物質は０．２ｍｌ ／ｋｇＫＧＷの用量で用いた。試験の結果は強度−時 間経過の形で図７に表した。 実施例４５ 実施例１９により作成された本発明造影剤の生体内への応用。 ビーグル犬（雌、９．７ｋｇＫＧＷ）を麻酔し、その後は実施例４１記載の方 法と同様にして作業した。試験物質としては実施例１９に記載した製剤を使用し 、対照物質には国際特許出願公開第９５／２２９９４号（実施例１２）の造影剤 を使用した。 対照物質と試験物資つの用量は０．１ｍｌ／ｋｇＫＧＷである。 強度−時間経過を図８に示した。 実施例４６ 実施例５により作成された本発明造影剤の生体内への応用： 実施例４５記載の方法と同様にして作業した。試験物質としては実施例５に記 載した製剤を使用し、対照物質としては国際特許出願公開第９５／２２９９４号 （実施例１２）の造影剤を使用した。対照物質と試験物質の用量は同一で０．１ ｍｌ／ｋｇＫＧＷである。 試験の結果は図９に示した。図はイヌの心臓である。それぞれ以下を示す： （ａ）造影前 （ｂ）対照物質の最大造影 （ｃ）試験物質の最大造影 （ｄ）最大造影１分後の造影（対照物質） （ｅ）最大造影１分後の造影（試験物質） 図より明らかな如く、本発明の造影剤は特に長期間の検査でも有効であった。 実施例４７ 実施例１１により作成された本発明造影剤の生体内への応用： 実施例４１記載の方法と同様にして作業した。試験物質としては 実施例１１に記載した製剤を使用し、対照物質としては国際特許出願公開第９５ ／２２９９４号（実施例１２）の造影剤を使用した。対照物質と試験物質の用量 は同一で０．１ｍｌ／ｋｇＫＧＷである。 試験結果は図１０に示す。（ａ）から（ｅ）までの意味図９に同じである。 実施例４８ 実施例３１，３５，３９で作成した本発明の造影剤の生体への応用。 ビーグル犬（雌、９．６ｋｇＫＧＷ）を麻酔し（およそ２／３窒素と、およそ １／３Ｎ₂ Ｏ、１．５−２％エンフランからなる吸引麻酔剤を自然呼吸で吸引さ せた）、心臓の超音波検査の準備をした。検査は超音波システムマークＨＰ（７ ７０２０Ｅ型、５ＭＨｚトランスダクター）を用いＢ−モードで実施した。実験 動物に実施例３１，３５，３９により製造した試験物質もしくは国際特許出願公 開第９５／１１９９４号（実施例１２）に類似の従来技術による造影剤注射液を 対照物質として静脈注射した。 使用した用量は本発明の造影剤ならびに対照物質ともに０．１ｍｇ／ｋｇＫＧ Ｗである。結果は強度値の形で表１に示した。本発明の造影剤は、静脈注射で投 与した場合でも、対照物質に比べて明らかに強い造影レベルを示することが分か る。 実施例４９ 実施例４，８，９で作成した本発明の造影剤の生体への応用。 ビーグル犬（雌、９．７ｋｇＫＧＷ）を麻酔し（およそ２／３窒素と、およそ １／３Ｎ₂ Ｏ、１．５−２％エンフランからなる吸引麻酔剤、自然吸引）、心臓 の超音波検査の準備をした。検査は超音波システムマークＨＰ（７７０２０Ｅ型 、５ＭＨｚトランスダクター）を用いＢ−モードで実施した。実験動物に実施例 ４，８，９により作成した試験物質もしくは国際特許出願公開第９５／２２９９ ４号（実施例１２）に類似の方法で作成された従来技術による造影剤注射液を対 照物質として静脈注射した。 使用した用量は本発明の造影剤ならびに対照物質ともに０．１ｍｇ／ｋｇＫＧ Ｗである。結果は表２に強度−時間曲線の積算値（密度単位×秒）の形で示した 。本発明の造影剤は静脈注射で投与した場合でも、高い積算値を示すことが分か る。 実施例５０ 実施例８と１９で作成した本発明の造影剤の生体への応用。 ビーグル犬（雄、１５．５ｋｇＫＧＷ）を麻酔し（２３％窒素と、１−３％エ ンフランからなる吸引麻酔剤、残りは窒素：自然吸引）、大腿動脈からスペクト ラルドップラー信号を取るように準備をした。検査は超音波システムＡＴＬ Ｕ Ｍ−９にＬ１０−５型トランスダクタ−を装着したもので実施した。実験動物に 実施例８あるいは１９により作成した試験物質、もしくは国際特許出願公開第９ ５／２２９９４号（実施例１２）の方法で作成し造影剤注射液を対照物質として 静脈注射した。注射用量は０．１ｍｇ／ｋｇＫＧＷである。 スペクトラルドップラー信号を強度を利用して評価し、時間に対して表示した 。強度−時間−曲線下面積（積算値）を表３に示した。実施例５１ ビーグル犬（雌、９．７ｋｇＫＧＷ）を麻酔し（およそ２／３０₂ ：およそ１ ／３Ｎ₂ Ｏ；１．５−３％エンフランからなる吸引麻酔剤；自然吸人）、腎臓の 灌流試験の準備をする。試験は超音波システムマークＨＰ（Ｓｏｎｏｓ１０００ 型、５ＭＨｚ）を用いカラードップラーモードで実施した。実験動物は固定され 、実施例２２の造影剤を静脈注射（０．１ｍｇ／ｋｇＫＷＧ）された。投与後、 腎臓の灌流画像を投薬まえのものと比較すると、明らかに改善されていた。 実施例５２ ビーグル犬（雌、９．７ｋｇＫＧＷ）を麻酔し（およそ２／３０₂ ：およそ１ ／３Ｎ₂ Ｏ；１．５−３％エンフランからなる吸引麻酔剤；自然吸入）、腹部大 動脈の超音波検査の準備をした。試験は超音波システムマークＡＴＬタイプＵＭ ９に超音波発信装置Ｃ１０−５を装着しハーモニックＢモードで実施した。実験 動物は固定され、実施例８の造影剤を静脈注射（用量０．１ｍｇ／ｋｇＫＷＧ） された。投与終了直後、血管腔のエコーが顕著になった。注射前は血管腔は増強 されていなかった。 実施例５３ ４０ｇのイオプロミド（ＭＧ：７９１ｇ／ｍｏｌ）に０．４ｇのエトキシ化脂 肪酸モノエタノールアミド（ＡｍｉｎｏｌＮ（登録商標）、ＭＧ：４８０ｇ／ｍ ｏｌ）と６０ｇの水を加える。ついで実施例１記載の作業を行う。６ｍｌの水に 再懸濁した後に、浸透圧調整剤を用いて等張にする。物質１グラム当たり０．５ ６−７．４６μｍの造影分解能の気泡が２０．３４×１０⁹ 発生する。 実施例５４ ０．６７ｇのパルミチン酸−ステアリン酸ショ糖７を１００ｇの水に加え、超 音波にて加温する。これを冷却して、僅かに濁った安定した液を得る。このオパ ール色の液６０ｇに４０ｇのイオプロミド（ＭＧ：７９１ｇ／ｍｏｌ）を加える 。さらに実施例１記載の作業を行う。６ｍｌの水に再懸濁した後に、浸透圧調整 剤を用いて等張にする。物質１グラム当たり０．５６−７．４６μｍの造影分解 能の気泡が６２．０１×１０⁹ 発生する。 実施例５５ ４０ｇのイオプロミド（ＭＧ：７９１ｇ／ｍｏｌ）に６０ｇのパルミチン酸− ステアリン酸ショ糖１５−液（ｗ＝０．６７％）を加える。ついで実施例１記載 の作業を行う。６ｍｌの水に再懸濁した後に、浸透圧調整剤を用いて等張にする 。物質１グラム当たり０．５６−７．４６μｍの造影分解能の気泡が３８．９７ ×１０⁹ 発生する。 実施例５６ ０．６７ｇのパルミチン酸−ステアリン酸ショ糖７を１００ｇの水に加え、超 音波にて加温する。これを冷却して、僅かに濁った安定した液を得る。このオパ ール色の液６０ｇに４０ｇのイオプロミド（ＭＧ：７９１ｇ／ｍｏｌ）を加える 。さらに実施例１記載の作業を行う。過フッ化エタンでガス交換を行う。６ｍｌ の水に再懸濁 した後に、浸透圧調整剤を用いて等張にする。物質１グラム当たり０．５６−７ ．４６μｍの造影分解能の気泡が２．８２×１０⁹ 発生する。 実施例５７ ０．６７ｇのパルミチン酸−ステアリン酸ショ糖７を１００ｇの水に加え、超 音波にて加温する。これを冷却して、僅かに濁った安定した液を得る。このオパ ール色の液６０ｇに４０ｇのイオプロミド（ＭＧ：７９１ｇ／ｍｏｌ）を加える 。完全に溶解するまで攪拌する。この液全体をデカフロロブタン液内に浸して凍 結する。固体から気体発生状態に直接移行する条件下で水を除いた後に、産物１ ｇをとってデカフルオロブタンを用いてガス交換する。３ｍｌの水に再懸濁した 後に、浸透圧調整剤を用いて等張にする。物質１グラム当たり０．５６−７．４ ６μｍの造影分解能の気泡が３４．０７×１０⁹ 発生する。 実施例５８ ０．４ｇの水素化したホスファチジルコリン（ＰｒｏＬｉｐｏＨ、登録商標） を６０ｇの水に加え、ついで０．４ｇのイオプロミド（ＭＧ：７９１ｇ／ｍｏｌ ）を加える。さらに実施例１記載の作業を行う。６ｍｌの水に再懸濁した後に、 浸透圧調整剤を用いて等張にする。物質１グラム当たり０．５６−７．４６μｍ の造影分解能の気泡が２７．９７×１０⁹ 発生する。 実施例５９ ０．４ｇの水素化した油を含まないダイズレシチン（Ｅｐｉｋｕｒｏｎ１００ Ｈ、登録商標）を６０ｇの水に加え、ついで０．４ｇのイオプロミド（ＭＧ：７ ９１ｇ／ｍｏｌ）を加える。さらに実施例１記載の作業を行う。６ｍｌの水に再 懸濁した後に、浸透圧調整剤を用いて等張にする。物質１グラム当たり０．５６ −７．４６μ ｍの造影分解能の気泡が５２．９７×１０⁹ 発生する。 実施例６０ １．５ｇのパルミチン酸−ステアリン酸ショ糖７を１００ｇの水に加え、超音 波にて加温する。これを冷却して、僅かに濁った安定した液を得る。このオパー ル色の液７０ｇに３０ｇのマルトオリゴ糖（ＭＧ：６８４ｇ／ｍｏｌ）と０．１ ｇＰＶＡ（ＭＧ：１００００ｇ／ｍｏｌ）を加える。得られた液４ｇを別容器に 取る。続いて実施例１に従い作業する。６ｍｌの水に再懸濁した後に、浸透圧調 整剤を用いて等張にする。物質１グラム当たり０．５６−７．４６μｍの造影分 解能の気泡が９．３７×１０⁹ 発生する。 実施例６１ ０．６ｇの水素化したホスファチジルコリン（ＰｒｏＬｉｐｏＨ、登録商標） を７０ｇの水に加え、ついで３０ｇのマルトオリゴ糖（ＭＧ：６８４ｇ／ｍｏｌ ）を加える。この液を４ｇとって別容器に移す。実施例１記載の作業を行う。６ ｍｌの水に再懸濁した後に、浸透圧調整剤を用いて等張にする。物質１グラム当 たり０．５６−７．４６μｍの造影分解能の気泡が２１．０８×１０⁹ 発生する 。 実施例６２ ４０ｇのイオプロミド（ＭＧ：７９１ｇ／ｍｏｌ）に０．０４ｇのモノラウリ ン酸ポリオキエチレンソルビタン（Ｔｗｅｅｎ２１、登録商標）と６０ｇの水を 加える。これを完全に溶解するまで攪拌する。得られた液から５ｇを取って、別 容器に移し、液体プロパン内に漬けて凍結する。個体からガス形成状態に直接移 行する条件下において水を取り除いてから、凝集塊を溶かし、デカフルオロブタ ンでガス交換する。６ｍｌの水に再懸濁した後に、浸透圧調整剤を用いて等張に する。物質１グラム当たり０．５６−７．４６μｍの 造影分解能の気泡が３．７７×１０⁹ 発生する。 実施例６３ ０．６７ｇのパルミチン酸−ステアリン酸ショ糖７を１００ｇの水に加え、超 音波にて加温する。これを冷却して、僅かに濁った安定した液を得る。このオパ ール色の液６０ｇに４０ｇのイオプロミド（ＭＧ：７９１ｇ／ｍｏｌ）を加える 。得られた液から５ｇを取って、別容器に移し、液体ブタン内に漬けて凍結する 。個体からガス形成状態に直接移行する条件下に於いて水を取り除いてから、凝 集塊を溶かし、デカフルオロブタンでガス交換する。さらに実施例１記載の作業 を行う。６ｍｌの水に再懸濁した後に、浸透圧調整剤を用いて等張にする。物質 １グラム当たり０．５６−７．４６μｍの造影分解能の気泡が３４．１６×１０⁹ 発生する。 実施例６４ ４０ｇのイオプロミド（ＭＧ：７９１ｇ／ｍｏｌ）に水を加え、完全に溶解す る。０．４ｇの水素化したホスファチジルコリン（ＰｒｏＬｉｐｏＨ、登録商標 ）を３級ブタノールで完全に溶解する。上記の液を一つにまとめてから、水を加 えて総重量１００ｇとする。その後実施例１に従い作業を行う。６ｍｌの水に再 懸濁した後に、浸透圧調整剤を用いて等張にする。物質１グラム当たり０．５６ −７．４６μｍの造影分解能の気泡が１５．９５×１０⁹ 発生する。 実施例６５ ２０ｇのスタキオース（ＭＧ：７３９ｇ／ｍｏｌ）に０．４ｇの水素化したホ スファチジルコリン（ＰｒｏＬｉｐｏＨ、登録商標）と８０ｇの水を加える。こ の液から２．５ｇを取り出し別容器に移す。その後実施例１に従い作業を行う。 ２．５ｍｌの水に再懸濁した後に、浸透圧調整剤を用いて等張にする。 実施例６６ ビーグル犬（雌、１１．８ｋｇ体重）を麻酔し（２３％窒素と、１−３％エン フランからなる吸引麻酔剤、残りは窒素：自然吸引）、大腿動脈からスペクトラ ルドップラー信号を取るように準備をした。検査は超音波システムＡＴＬ ＵＭ −９にＬ１０−５型トランスダクタ−を装着したもので実施した。実験動物を固 定し、実施例５４により作成した灌流物質（０．０５ｍｌ／ｋｇ）、または欧州 特許第０ ３６５ ４６７号（実施例１、０．２ｍｌ／ｋｇ）の方法で作成した 造影剤注射液を対照物質として静脈注射した。図１１には両薬注射時の強度−時 間−変化を示す。本発明の造影剤が明らかに強く長期間持続する造影効果を有し ていることが分かる。 実施例６７ ビーグル犬（雌、１１．９ｋｇ体重）を麻酔し（２３％窒素と、１−３％エン フランからなる吸引麻酔剤、残りは窒素：自然吸引）、大腿動脈からスペクトラ ルドップラー信号を取るように準備をした。検査は超音波システムＡＴＬ ＵＭ −９にＬ１０−５型トランスダクタ−を装着したもので実施した。実験動物を固 定し、実施例５８により作成した灌流物質（０．０５ｍｌ／ｋｇ）、または欧州 特許第０ ３６５ ４６７号（実施例１、０．２ｍｌ／ｋｇ）の方法で作成した 造影剤注射液を対照物質として静脈注射した。図１２には両薬注射時の強度−時 間−変化を示す。本発明の造影剤が明らかに強く長期間持続する造影効果を有し ていることが分かる。 実施例６８ ビーグル犬（雌、１２．１ｋｇ体重）を麻酔し（２３％窒素と、１−３％エン フランからなる吸引麻酔剤、残りは窒素：自然吸引）、大腿動脈からスペクトラ ルドップラー信号を取るように準備をした。検査は超音波システムＡＴＬ ＵＭ −９にＬ１０−５型トラン スダクタ−を装着したもので実施した。実験動物を固定し、実施例５９により作 成した灌流物質（０．０５ｍｌ／ｋｇ）、または欧州特許第０ ３６５ ４６７ 号（実施例１、０．２ｍｌ／ｋｇ）の方法で作成した造影剤注射液を対照物質と して静脈注射した。強度−時間曲線下の面積は対照の２５２．２％であった。 実施例６９ ビーグル犬（雌、１２．１ｋｇ体重）を麻酔し（２３％窒素と、１−３％エン フランからなる吸引麻酔剤、残りは窒素：自然吸引）、大腿動脈からスペクトラ ルドップラー信号を取るように準備をした。検査は超音波システムＡＴＬ ＵＭ −９にＬ１０−５型トランスダクタ−を装着したもので実施した。実験動物を固 定し、実施例６４により作成した灌流物質（０．０５ｍｌ／ｋｇ）、または欧州 特許第０ ３６５ ４６７号（実施例１、０．２ｍｌ／ｋｇ）の方法で作成した 造影剤注射液を対照物質として静脈注射した。強度−時間曲線下の面積は対照の ２２３．８％であった。 実施例７０ ビーグル犬（雄、１７．１ｋｇ体重）を麻酔し（２３％窒素と、１−３％エン フランからなる吸引麻酔剤、残りは窒素：自然吸引）、大腿動脈からスペクトラ ルドップラー信号を取るように準備をした。検査は超音波システムＡＴＬ ＵＭ −９にＬ１０−５型トランスダクタ−を装着したもので実施した。実験動物を固 定し、実施例６５により作成した灌流物質（０．０５ｍｌ／ｋｇ）、または欧州 特許第０ ３６５ ４６７号（実施例１、０．２ｍｌ／ｋｇ）の方法で作成した 造影剤注射液を対照物質として静脈注射した。強度−時間曲線下の面積は対照の １８１．０％であった。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，Ｌ Ｕ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＵ，Ａ Ｚ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＮ，ＣＺ，ＥＥ ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ， ＫＲ，ＫＺ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＶ，ＭＤ，Ｍ Ｇ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＲＯ ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ， ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者 フリッツ，トーマス ドイツ連邦共和国，デー−12169 ベルリ ン，エリセンシュトラーセ ２ (72)発明者 サドマン，フィオレッタ ドイツ連邦共和国，デー−13357 ベルリ ン，バッドシュトラーセ 64

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．低分子基本体、界面活性剤、ならびに気体を含む多孔性の固形の水溶性マ トリックスにあって、当該気体が当該マトリックスの孔内に封じ込められている 超音波診断用物質の製造のための材料。 ２．基本体としてアミノ酸、多アミノ酸、ペプチド、蛋白質、単糖、二糖、三 糖、四糖、オリゴ糖、ならびに多糖、ならびにそれらの誘導体、合成糖およびそ の誘導体からなる分子量１５，０００ダルトン未満の水溶性基本体を含む請求項 １の多孔性マトリクッス。 ３．基本体として、Ｌ−グリシン、Ｌ−アラニン、Ｌ−バリン、Ｌ−ロイシン 、Ｌ−イソロイシン、Ｌ−フェニルアラニン、Ｌ−プロリン，Ｌ−ヒドロキシプ ロリン、Ｌ−セリン、Ｌ−スレオニン、Ｌ−トリプトファン、Ｌ−アスパラギン 、Ｌ−グルタミン、Ｌ−アルギニン、Ｌ−ヒスチジン、グリシル−グリシン、グ リシル−グリシル−グリシン、グルコース、ガラクトース、フルクトース、マン ノース、ソルボース、サッカロース、ラクトース、マルトース、トレハロース、 ゲンチオビオース、ラクツロース、ツラノース、マルトトリオース、メリビオー ス、メレチトース、マルトテトラオース、マルトペンタオース、スタキオース、 アラビノース、キシロース、リボース、ズルシトール、キシリトール、マンニト ール、リビトール、イノシトール、ソルビトール、α、β、γ−シクロデキスト リン、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、デキストラン８、デキス トリン及び／またはフィコールを含む請求項１ないし２の多孔性マトリックス。 ４．基本体としてレントゲン造影剤あるいは核磁気共鳴画像診断用造影剤を含 む請求項１または２に記載の多孔性マトリックス。 ５．基本体としてイオプロミド、イオトロラン、イオパミドール 及び／またはイオヘキソールを含む請求項４の多孔性マトリックス。 ６．基本体としてＧｄ−ＤＴＰＡ（ガドペンテン酸）、Ｇｄ−ＤＴＰＡ−ジメ グルミン塩（Ｍａｇｎｅｖｉｓｔ）、Ｇｄ−ＥＯＢ−ＤＴＰＡ（ガドキセット酸 、２ナトリウム塩）及び／またはガドブトロールを含む請求項４に記載の多孔性 マトリックス。 ７．界面活性剤として水溶性の非イオン性界面活性剤を含み、マトリックスに 対する表面活性剤の比率が０．０１から１０％（ｍ／ｍ）である請求項１〜６の いずれか１項に記載の多孔性マトリックス。 ８．界面活性剤としてソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビ タン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビトール脂肪酸エステル、ポリオ キシエチレン脂肪酸エステル、グリセリンポリオキシエチレン脂肪酸エステル、 必要に応じて一部を水素化し得るエトキシ化モノ−、ジ−、トリグリセリドもし くはこれらのエトキシ化混合物、エトキシ化リジヌス油、エトキシ化フェノール 、ポリオキシエチレン脂肪酸アルコールエーテル、ポリグリセロール脂肪酸エス テル、ソルビタン過フッ化脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタン過フ ッ化脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン−ソルビトール過フッ化脂肪酸エステ ル、ポリオキシエチレン過フッ化脂肪酸エステル、エトキシ化リジヌス油、ポリ オキシエチレン過フッ化脂肪アルコールエーテル、ポリグリセロール過フッ化脂 肪酸エステル、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレン−ポリマー、フルオロ アルキルポリ（エチレンオキシド）アルコールサッカライド脂肪酸エステル、サ ッカライド脂肪酸エーテル、エトキシ化サッカライド脂肪酸エステル、エトキシ 化サッカライド脂肪酸エーテル、脂肪酸エタノールアミド及び／またはエトキシ 化脂肪酸エタ ノールアミドを含む請求項１〜７のいずれか１項に記載の多孔性マトリックス。 ９．界面活性剤としてリン脂質を含む請求項１〜７のいずれか１項に記載の多 孔性マトリックス。 １０．界面活性剤として、過フッ化炭水化物基本成分及び／または分子量が＜ １５，０００ダルトンである界面活性剤を含む請求項１〜９のいずれか１項に記 載の多孔性マトリックス。 １１．気体として窒素、酸素、ＣＯ₂ 、空気及びフッ化化気体形成化合物を含 む請求項１〜１０の多孔性マトリックス。 １２．気体としてテトラフルオルアレン、ヘキサフルオロ−１，３−ブタジエ ン、デカフルオロブタン、過フッ化−１−ブテン、過フッ化−２−ブテン、過フ ッ化−２−ブチン、オクタフルオロシクロブタン、過フッ化シクロブテン、過フ ッ化シクロペンタン、過フッ化ジメチルアミン、ヘキサフルオロエタン、テトラ フルオロエチレン、ペンタフルオロチオ（トリフルオロ）メタン、テトラフルオ ロメタン、過フッ化プロパン及び／または過フッ化プロピレンを含む請求項１〜 １１の多孔性マトリックス。 １３．気体として過フッ化化物質を含む請求項１〜１２の多孔性マトリックス 。 １４．水溶性賦形剤溶媒として、場合によっては医薬品に通常使用される添加 物を含むこともある水を含む請求項１〜１３のいずれか１項に記載の多孔性マト リックスから作製される超音波造影剤。 １５．賦形剤溶媒として生理的電解質溶液、１もしくは２価以上のアルコール 、または単糖もしくは二糖の水溶液を含む請求項１４の超音波造影剤。 １６．次よりなる気泡含有超音波造影剤製造用キット、 ａ）内容物を無菌条件下に取り出すことができる栓を備え、かつ 水溶性懸濁溶媒が充填された第一の容器と ｂ）無菌条件下に懸濁溶媒を加えることができる栓を備え、かつ請求項第１〜 １３のいずれか１項に記載の多孔性マトリックスと気体が充填され、第一の容器 に充填された懸濁溶媒が完全に入るだけの容積を有する第二の容器。 １７．まず所望の基本体水溶液を作製し、場合によってこれに気体安定化のた めに界面活性剤を加え、ついで作製された溶液を凍結乾燥し、十分に乾燥した後 に多孔性マトリックスを所望する気体で換気することを特徴とする請求項１〜１ ３のいずれか１項に記載の多孔性マトリックスの製造方法。