JP2000505433A

JP2000505433A - レトロウイルス感染の処置のための３―アミノ―４―ヒドロキシ安息香酸の使用

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Publication number: JP2000505433A
Application number: JP9528401A
Authority: JP
Inventors: チェゲ，ジョゼフ
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 1996-02-07
Filing date: 1997-02-05
Publication date: 2000-05-09
Also published as: WO1997028795A1; ZA971036B; AP868A; GB9602444D0; AP9801307A0; AU1559097A; EP0900079A1; US6319951B1; AP9700928A0

Abstract

(57)【要約】３−アミノ−４−ヒドロキシ安息香酸またはその誘導体はレトロウイルス、および特にＨＩＶ感染の処置のための医薬の製造に使用される。３−アミノ−４−ヒドロキシ安息香酸またはその誘導体はまたビタミンＢ₁₂、葉酸またはビタミンＣのいずれかまたは２個またはそれ以上のこれらの組み合わせと共に、製薬学的担体と組み合わせて医薬組成物中に含まれる。

Description

【発明の詳細な説明】レトロウイルス感染の処置のための３−アミノ−４−ヒドロキシ安息香酸の使用本発明はウイルス感染の処置のための医薬の製造における３−アミノ−４−ヒドロキシ安息香酸またはその誘導体の使用および３−アミノ−４−ヒドロキシ安息香酸またはその誘導体を含む医薬組成物に関する。より具体的に、本発明は、レトロウイルス感染、特に、しかし排他的ではなくＨＩＶ感染の処置のための医薬の製造における３−アミノ−４−ヒドロキシ安息香酸またはその誘導体の使用に関する。後天性免疫不全症候群(ＡＩＤＳ)は、ヒト免疫不全ウイルス(ＨＩＶ)によりもたらされる複合疾病であり、医学の歴史において１９８１年に最初に同定された。原因ウイルスは１９８３年に同定された。これはレトロウイルスと呼ばれるＲＮＡウイルスに属する。レトロウイルスは１９４０年に発見された。後に、ジャレットは家ネコにおける白血病および免疫不全をもたらすレトロウイルスを発見した。１９７０年に、テミンおよびバルティモアはそれぞれＲＮＡからＤＮＡへの転写をもたらす酵素逆転写酵素を発見した。ここから、ヒトレトロウイルスの研究が開始され、ＨＴＬＶ−Ｉ(１９７９)、ＨＴＬＶ−II(１９８２)およびＨＴＬＶ−III、ＨＩＶの分類学的同当物(ロバート・ガロ博士)の発見が導かれた。ＨＴＬＶ−Ｉはヒト細胞を不死化し、Ｔ−細胞白血病および熱帯性痙性パラパレーシス(Tropical Spas tic Paraparesis)と呼ばれるミエロパシーを導く。ＨＴＬＶ−IIは既知の疾病の原因とはならない。ＨＴＬＶ−III(ＨＩＶ)は、ＨＩＶ−１およびＨＩＶ−２として存在し、両方ともヒト免疫不全をもたらす。サル免疫不全ウイルス(ＳＩＶ) もまた存在し、サルに同様の免疫不全症をもたらす。ＨＩＶは３つの主な経路で体内に入る： (ａ)母／子−垂直伝播が、胎盤の損傷または感染生殖母細胞(精子または卵子)を介して出生前に起こるか(先天的伝播)、出生してから、胎児口腔粘膜に損傷がある場合、母乳補給により(出生後伝播)起こる； (ｂ)感染血液または血液生産物の輸血を介して； (ｃ)特に、生殖器に性器潰瘍がある場合、性的接触を介して。垂直感染以外の全ての他の経路は水平伝播と呼ばれる。一度血中に入ったら、ＨＩＶは以下のＣＤ₄＋ve細胞に結合、吸着、粘着および浸透により侵入する： (ｉ)ＣＤ₄リンパ球 (ii)単核球 (iii)マクロファージ (iv)リンパ節の小胞細胞 (ｖ)消化管(ＧＩＴ)および尿生殖器管(ＧＵＴ)の樹状細胞 (vi)皮膚のランゲルハン細胞 (vii)ＣＮＳの小膠細胞 (viii)ＣＮＳの多核巨細胞。ＨＩＶ複製を支持し、ＣＤ₄マーカーを有しない他の細胞は：ニューロン、グリア細胞、Ｂ−リンパ球、結腸−直腸表皮細胞および骨髄のミエロイド前駆細胞を含む。これらの細胞の罹患は、ＣＤ₄表面マーカー以外の他のものの存在を示唆する。１.宿主細胞に侵入した後、ＨＩＶ一本鎖ＲＮＡは複製して、他方を形成する。ある点で二本鎖になり、宿主ＤＮＡに結合するＤＮＡを形成し、プロウイルスを形成し、宿主細胞が生存する限りウイルス感染を“永久”とする。ウイルスにより確立されたその宿主との関係は： (１)共生−プロウイルスおよびへルペスウイルスのように (２)細胞変性−宿主細胞を殺す (３)肥大性−融解し、発疹を形成し、それは次いで限界サイズに到達した後破裂し、細菌により二次感染される (４)癌原性−白血病のように癌にかかる。ウイルス感染の処置は、上記のどの関係に処置を向けるべきかに依存する。ＨＩＶは宿主生化学を活用し、ウイルスＲＮＡおよびＤＮＡを形成し、翻訳阻害タンパク質(ＴＰＩ)を分泌することにより宿主生化学を無力にする。このように罹患した細胞は酵素、ホルモンおよびＡＴＰ形成ができない。ＡＴＰエネルギーの欠如によりグルコース、アミノ酸、他の代謝物および老廃物の活発な輸送の維持ができなくなる。電解質を調節するためのギブス−ドナン平衡(Gibbs-Donna nequilibrium)の維持がまたできなくなる。これらの全ての機能喪失と、さらに宿主細胞膜におけるウイルス酵素の融解作用が細胞死をもたらす。これらの細胞変性作用は、ＨＩＶ結合および挿入のための表面マーカーを有し、ＨＩＶにより能動的に追跡され、接触が促進されるため、ＣＤ₄リンパ球で最大である。これらのリンパ球は原則として、細胞介在およびホルモン性タイプの両方の免疫性のコントローラーである。それらが多く殺された場合、体の免疫性は衰え、体は、ウイルス、真菌、細菌および原形生物の日和見感染(Ｏ．Ｉｓ)に屈服する。日和見感染は、健康体は原因生物との共生平衡で生存できるため、そう呼ばれる。生物は、低免疫性の生物では優位に立ち、通常はならない病原性となる。日和見感染による攻撃は、ＨＩＶ／ＡＩＤＳに顕著な特徴である。ＣＤ₄の自然の進行がＨＩＶ／ＡＩＤＳの予後および進行の評価に使用される。数が少なければ少ない程、疾病がより進んでおり、予後が悪い。図１はＨＩＶ／ＡＩＤＳにおけるＣＤ₄の自然減少のグラフを示す。ＣＤ₄の数は３０−５０／mm³年で減少する。患者のＣＤ₄数のグラフ上の点は、大まかにどのくらいの長さ彼がウイルスを保持していたかおよび彼の予後を示す。本発明による処置は、ＣＤ₄数を増加させ、進行の曲線を左に戻す。感染は、ＥＬＩＳＡまたはウエスタン・ブロット試験によるＨＩＶに対する抗体の試験により確認され、感染後２−４週間で陽性となる。子供は、生存後１８ヶ月まで試験で陽性であるが、ＨＩＶを有しない可能性があることを意味する、受動母体抗体を保持し得る。ＨＩＶ／ＡＩＤＳの処置は、ＨＩＶの存在が確認された後の任意の段階で行う。日和見感染が発症する前に、初期にＨＩＶを殺すことが有利である。従って、早いスクリーニングが推奨される。宿主生化学を使用したウイルスによるＲＮＡおよびＤＮＡの合成は、多くのビタミンＢ₁₂、葉酸およびビタミンＣを消費する。Ｂ₁₂の枯渇は全ＡＩＤＳの症例において常に観られることが判明している。今日までのＨＩＶ／ＡＩＤＳを予防および／または処置するための医薬は限られている。ＨＩＶ感染はＣＤ₄：ＣＤ₈比率を逆転させる。この逆転は永久である。これを正常に戻す医薬は、本発明の医薬を除いて知られていない。抗ＨＩＶ医薬として適切であるために、物質は以下の一つ、二つまたは三つ全てを満たさなければ成らない： (ｉ)患者の免疫を増加できる。 (ii)体内のＨＩＶの複製を停止できる。 (iii)患者体内からＨＩＶを除去できる。３−アミノ−４−ヒドロキシ安息香酸は化学式Ｃ₇Ｈ₇ＮＯ₃および構造式：を有する。これは白色粉末であり、水に難溶性である。この化合物は、先に糖尿病の処置のために、欧州特許０４７４８７４に記載のようにメイラード(Maillard)反応阻害剤として経口で使用されている。実際上卵子に精子が浸透するために必須である、Ａ染色体タンパク質分解酵素ヒアルロニダーゼを不活性化するために、誤って殺精子と考えられ、膣避妊製剤の活性成分としても使用されている。ここ２５年、３−アミノ−４−ヒドロキシ安息香酸は酒石酸、クエン酸、炭酸水素ナトリウムおよび炭酸ナトリウムのような他の化合物と共に、殺精子発泡錠剤として使用されている。錠剤からの泡は精子の子宮頸への走入を遮断し、受精を困難にする。泡が表面張力を作り、これが精子を不動化し、受精のための卵子まで到達しない。可溶性炭酸ナトリウムは精液中のカルシウムイオンと反応し、不溶性炭酸カルシウム(白亜)を形成し、精子を拘束し( それらが泥沼を泳いでいるかのように)、子宮への走入をまた阻止し、精子は受精のために卵子に到達できない。精子がその卵子への道を見つけても、透明膜と呼ばれる卵子の被膜を通過できない。なぜなら、３−アミノ−４−ヒドロキシ安息香酸が透明膜を通過する経路を消化するためのタンパク質分解酵素を不活性化するからである。３−アミノ−４−ヒドロキシ安息香酸はインビトロでＨＩＶを殺すことが報告されている(例えば、the Lancet 1988，1:643)。ＨＩＶ感染の９５％が性的接触による伝播のため、３−アミノ−４−ヒドロキシ安息香酸の避妊用泡状物、コンドーム（および滑剤）、座薬、ペッサリーおよび殺精子剤への使用はＨＩＶ伝播を減少させるのに寄与し得る。３−アミノ−４−ヒドロキシ安息香酸の作用経路は酵素阻害であり、殺精子ではなく、その避妊特性は精子不動化によるものであり、精子を殺すことによるものではない。３−アミノ−４−ヒドロキシ安息香酸が精子を殺すという先に受け入れられていた理論は、その受け入れられている抗ＨＩＶ特性(インビトロで証明)にもかかわらず、この化合物のインビボでの使用を否定することになった。これは、化合物はヒト細胞の一つのタイプを殺せば、例え全てのヒト細胞でないにしても、多くの他の細胞を殺すことが予期されるという医学の知識から当然である。従って、本発明は、レトロウイルス感染の予防または処置のための医薬の製造における３−アミノ−４−ヒドロキシ安息香酸またはその誘導体の使用を提供する。最も好ましくは、レトロウイルスはＨＴＬＶであり、より更に好ましくはＨＩＶである。本発明の活性成分は、疾病、特にレトロウイルス感染によりもたらされる疾病を予防、改善、処置または治癒させるために使用する食物以外の物質としての医薬の全ての態様をカバーする。活性成分３−アミノ−４−ヒドロキシ安息香酸の最も有効な投与は３から１０ mg／kgである。投与の最も有利な投与のタイミングは８から１２時間毎である。この投与のクールが少なくとも２８日続いた場合、最良の結果が達成される。更に、本発明は、製薬学的に許容される担体中の３−アミノ−４−ヒドロキシ安息香酸を投与することを含む、レトロウイルス感染の予防または処置の方法を提供する。レトロウイルスはＨＩＶであり得る。活性成分３−アミノ−４−ヒドロキシ安息香酸またはその誘導体は、一つまたはそれ以上の日和見感染を発症しているレトロウイルス感染の予防または処置のために、ビタミンＢ₁₂(シアノコバラミン)、葉酸(プテロイルグルタミン酸)またはビタミンＣの一つまたはそれ以上と組み合わせて使用し得る。活性成分３−アミノ−４−ヒドロキシ安息香酸は、患者が日和見感染を発症していないレトロウイルス感染、特にＨＩＶに対する使用に適している。ビタミンＢ₁₂、葉酸またはビタミンＣの一つまたはそれ以上、好ましくは３つ全部と組み合わせた３−アミノ−４−ヒドロキシ安息香酸は、１つまたはそれ以上の日和見感染を発症しているレトロウイルス感染(好ましくはＨＩＶ)の予防または処置に適している。更なるアジュバント活性成分および／またはアジュバント医薬をＴ.Ｂ.、Ｐ.Ｃ.Ｐ. 、クリプトコッカス髄膜炎、赤痢等のような日和見感染を発症している患者に投与し得る。本発明はまた、製剤学的に許容される担体と組み合わせて、ビタミンＢ₁₂、葉酸、ビタミンＣのいずれか、またはこれらの二つまたはそれ以上の組み合わせと共に３−アミノ−４−ヒドロキシ安息香酸を含む経口または注射投与のための医薬組成物も提供する。好ましくは３−アミノ−４−ヒドロキシ安息香酸は医薬組成物中に２５から２００mg、より好ましくは２５、５０、１００または２００mg の量で存在する。これらの投与量はレトロウイルス疾患、特にＨＩＶの処置のための最も有効な濃度に適している。好ましくは組成物はビタミンＢ₁₂、葉酸およびビタミンＣを含む。パラベンまたはパラヒドロキシ安息香酸のエステルが静細菌特性を有するとして既知である。３−アミノ−４−ヒドロキシ安息香酸の化学構造はＣ−３に付加的アミノ基が結合したパラヒドロキシ安息香酸である。従って、３−アミノ−４−ヒドロキシ安息香酸またはその誘導体は静細菌作用も有する。この作用は、好ましくは一個またはそれ以上のビタミンＢ₁₂、葉酸およびビタミンＣと組み合わせて、付加的日和見感染細菌感染の処置に有用である。好ましくは、医薬組成物は、３−アミノ−４−ヒドロキシ安息香酸を、２０mc gまでのビタミンＢ₁₂、１０mgまでの葉酸および５０mgまでのビタミンＣと組み合わせて含む。より更に好ましくは、２５、５０、１００または２００mcgの３ −アミノ−４−ヒドロキシ安息香酸を１０mcgのビタミンＢ₁₂、５mgの葉酸および２５mgのビタミンＣと組み合わせて含む。本組成物の好ましい投与のための形態は、糖衣錠である。糖衣錠の処方およびその製造法は当分野で既知である。本発明は図面を参照しつつ説明される：図１はＡＩＤＳ患者のＣＤ₄細胞数の経時的低下のグラフである。図２は実施例４の結果の棒グラフである。活性成分３−アミノ−４−ヒドロキシ安息香酸は、０.５mg／ｌの濃度で宿主培養ヒトリンパ球に障害を与えることなく、宿主核、細胞質およびまた細胞外のＨＩＶを完全に不活性にするかまたは“殺す”(Hicks et al.,Lancet 1989;2:14 22-3)。これは、この濃度で３−アミノ−４−ヒドロキシ安息香酸がヒトリンパ球およびそれを広げて人体に安全であるが、ＨＩＶには致死であることを示す(M edicineDigest Vol．12No．4April 1986)。本化合物はまた核まで細胞膜を浸透できる。ＨＩＶの結晶を３−アミノ−４−ヒドロキシ安息香酸に３０秒間軽く浸した時、ＨＩＶは培養ヒトリンパ球への感染能力を失う(Medicine Digest Vol．14 No ．9September 1988)。ＨＩＶをこのように処理せずにヒトリンパ球に接触させた場合、後者は感染する。細胞をこのように処置して、次にこれらを非処理ＨＩＶに接触させても感染を阻害しない。これは３−アミノ−４−ヒドロキシ安息香酸がＨＩＶを殺すが、ヒトリンパ球は殺さないことを示す。３−アミノ−４−ヒドロキシ安息香酸の２０,０００mg／ｌを超える濃度はヒト細胞を“殺す”。我々はヒト細胞障害無しにＨＩＶを不活性化または“殺す” のに０．５mg／ｌの濃度が必要であることを先に示している。３−アミノ−４− ヒドロキシ安息香酸の濃度が２０,０００mg／ｌに到達するには、ＨＩＶを破壊してから離れており、次いでヒト細胞の破壊が始まる。これが、投与量を薬理学的知識およびデータに基づいて決定しなければならない理由である。我々はウイルスを破壊し、ヒト細胞を助けるのに体内にわずか０.５mg／ｌの濃度を必要とすることを示している。ヒト細胞に致死であり得る投与量は実際非常に大量であり、即ち２０ｇ／ｌである。これは３−アミノ−４−ヒドロキシ安息香酸の安全域が非常に高数値であり、また３−アミノ−４−ヒドロキシ安息香酸のＨＩＶ感染処置における安全性を確実にする。前記の因子から、３−アミノ−４−ヒドロキシ安息香酸の治療係数を算定した。国際的薬理学原則は、ヒトの安全のためにヒト処置に使用する医薬の治療係数は一単位、即ち１より大きいことを要求している。係数が１より大きい場合、患者は医療的管理なしに、そして副作用を経験することなく医薬を投与されることができる。しかしながら、治療係数が１より小さい場合、危険が利点より勝ることがある。医療的管理の利用が要求されている抗癌剤の投与がこれに当る。この背後にある理由は、薬剤が癌性ヒト細胞を破壊すると考えられるからである。正常ヒト細胞と癌性ヒト細胞の間の差異は、予期されるように、微小である。ＨＩＶと正常ヒト細胞の間の差異は大きいことが予測される。これは、３−アミノ− ４−ヒドロキシ安息香酸の治療係数がこのように大きい理由を示す。３−アミノ−４−ヒドロキシ安息香酸の治療係数は：である。３−アミノ−４−ヒドロキシ安息香酸の指数は４０,０００であり、ＨＩＶ処置のための医薬としての３−アミノ−４−ヒドロキシ安息香酸の安全性を支持するのに良好な数学的証拠である。ＨＩＶ／ＡＩＤＳの処置のための３−アミノ−４−ヒドロキシ安息香酸を使用した我々の実験は、わずか一つの一貫していない副作用を有する。これは非常に弱い悪心および嘔吐であり、それ自体は非常に有用な治療薬の使用を不可と判定する主要な副作用ではない。セプトリンは同様な作用をもたらす。３−アミノ− ４−ヒドロキシ安息香酸の場合、この時々の副作用は投与前の食事、投与前の香味剤の投与または医薬をカプセル形に製造することにより避けることができる。悪心は一次的である。医薬は好ましくは約２８日投与する。最小阻害濃度０.５mg／ｌおよび治療係数４０,０００のデータから、８時間毎の３−１０mg／kgの最適投与量が算出される。高投与量は、悪心および嘔吐のような他の問題が存在するが、傷害を受けずに投与し得る。３−アミノ−４−ヒドロキシ安息香酸の抗微生物活性は単純ヘルペスウイルス、ＨＩＶ、細菌(ナイセリア・ゴノロエアエ、トレポネマ・パリドゥム、エシェリキア・コリ)、真菌、カンジダ・アルビカンズおよび原生動物トリコモナ・ヴァギナリスで確立されている。この広い抗微生物活性は、全微生物に適用される作用の機構を示唆する。本発明の活性成分は、ヒト代謝に影響しないレベルでタンパク質合成を阻害することにより作用すると考えられる。この構造はスルホンアミドの基本構造と似ている。従って、３−アミノ−４−ヒドロキシ安息香酸はこれらの微生物で競合的タンパク質合成阻害を示す可能性がある。構造はチミンアナログのものと似ており、恐らく、タンパク質合成指示の読み間違いをもたらすある点でＤＮＡおよびｍＲＮＡに取りこまれ、それにより非機能性物質の形成を導き、従って微生物を殺すことにより作用する。ＨＩＶを水性３−アミノ−４−ヒドロキシ安息香酸へ３０秒間軽く浸すと、ウイルスを非感染性にする。この変性はタンパク質合成の阻害には短すぎる。これは、gp120、gp160またはgp41でのウイルスコートへの非可逆的結合によってのみ可能であり、これによりウイルスそれ自体を標的細胞のＣＤ₄表面マーカーに結合できなくする。この場合、結合、粘着、浸透、複製および宿主細胞生化学の阻害は起こらず、ウイルスは死ぬか、体内に残る(無害)かまたは排出され、宿主はまったく健康なままである。ヒアルロニダーゼにするように、ＨＩＶが宿主細胞に侵入するのに必須な融解酵素をまた不活性化し得る。明らかな浸出液のある淋病の患者に１.６ｇの３−アミノ−４−ヒドロキシ安息香酸を経口で投与すると、浸出は１２時間以内に止まるが、処置後２４時間で再発した。これは、３−アミノ−４−ヒドロキシ安息香酸が静細菌性であり、充分に消化管から吸収されることを示す。浸出が２４時間後に再発するという事実は、血中の３−アミノ−４−ヒドロキシ安息香酸が１２時間までは充分にあるが、排泄によって不充分な血清濃度まで減少することを示す。これは、３−アミノ−４−ヒドロキシ安息香酸が良好に吸収および排泄され、８時間毎または１２時間毎の頻度で投与した場合、適切な血清濃度を提供することを示す。実施例実施例１ニワトリ、ウサギおよびヒツジでの安全性実験５００ｇのニワトリを使用し、３−アミノ−４−ヒドロキシ安息香酸の水溶液を９日間、プラスチックシリンジを使用して、強制的に食道に圧入した。１.５kgの体重のウサギ６匹に９日間、３−アミノ−４−ヒドロキシ安息香酸の注射用水溶液を腹腔内注射した（飲まなかったため）。１５kgのヒツジに、水に溶解した３−アミノ−４−ヒドロキシ安息香酸を、毎日６０ccビンを使用して、無理やり口から飲ませた。１０日目に、３−アミノ− ４−ヒドロキシ安息香酸を注射用水に溶解して、i.v.で投与した(ヒツジを１Ｍジアゼパム２０mgで鎮静させた後)。困難であることが分かり、３−アミノ−４ −ヒドロキシ安息香酸の全８００mgの丸薬を腹腔内投与した。以下の表は、ニワトリに経口的に、６匹のウサギに腹腔内的に、そしてヒツジに経口的および腹腔内的に９日間にわたり徐々に増加させた投与量で投与した３ −アミノ−４−ヒドロキシ安息香酸を示す。次いで、ヒツジに８００mgの単−３−アミノ−４−ヒドロキシ安息香酸を腹腔内的に投与した(＝５３.３３mg/kg)。これらの動物実験で副作用は見られなかった。３−アミノ−４−ヒドロキシ安息香酸が危険であるなら、ウサギで１３３.３mg／kgおよびヒツジで５３.３mg／ kgに到達する腹腔内投与で有害な作用がもっと見られるであろう。推奨される臨床投与量は１日当たり３−１０mg／kgであることは注意すべきである。実施例２ヒトボランティアにおける安全性試験各人は３−アミノ−４−ヒドロキシ安息香酸を経口で摂取した。１および３の人のみが嘔吐無しの悪心を経験した。実施例３３−アミノ−４−ヒドロキシ安息香酸で処置したＨＩＶ／ＡＩＤＳ患者の臨床的観察処置は、経口で各患者に２００mgの３−アミノ−４−ヒドロキシ安息香酸をtd sで１４日、投与した。 (１)Ｂ.Ｎ.は３０歳の先生であり、彼の妻が１９９１年４月にＡＩＤＳで死亡した。彼は一般的な虚弱、体重減少、活動している時に疲れやすいこと、再発性扁桃炎、口腔潰瘍、頚部リンパ節症、痒い皮膚発疹および食物を飲み込む時の痛みを発症している。彼の体重は処置後に４４から４８kg増え、ヘモグロビンは１１.６９％から１６％に増えた。リンパ球は相対的に３９％から４９％に増えた。彼の徴候および症状は６ヶ月の処置により無くなった。１年半後の追跡で、彼が仕事を病気で休んだのは１日たりとも無かったことが示された。 (２)Ｌ.Ｗ.は結婚して一人の子供がいる看護婦であった。彼女の病状は、寝汗、体重減少、頚部リンパ節の肥大、口腔潰瘍、食物を飲み込むときの痛み、精神的混乱および一般的な虚弱として始まった。彼女は病因で寝たきりであり、浴室や手洗いに行くことができなかった(便器に頼っていた)。彼女は１９９２年１２月３１日にシカ・ナーシング・ホーム(Thika Nursing Home)にストレッチャーで移され、３−アミノ−４−ヒドロキシ安息香酸を開始した。５日以内に、彼女は助け無しで手洗いおよび浴室に行けた。彼女は精神的に直り、口腔潰瘍、生殖器傷およびリンパ節肥大が処置の２週目に直った。彼女は４１kgから４３.５kgに体重が増え、即ち、３週間で２.５kg増え、公共のタクシーのみで医院に行けた。 (３)Ｊ.Ｋ.は、一般的な虚弱、口腔潰瘍、食物を飲み込むときの痛み、下痢および食欲減退を発症した。２週間後、彼は体重が５kg増え、徴候および症状が無くなった。 (４)Ｗ.Ｋ.は２週間で２kg体重が増えた。 (５)Ｊ.Ｍ.は処置２週間で１kg体重が増えた。 (６)Ｐ.Ｋ.は高度色素沈着発疹を発症し、常に掻いて出血していた。２週間の処置で発疹がひき、色素沈着も正常な皮膚の色に戻った。彼女は２週間で２kg 体重が増えた。 (７)Ｎ.Ｎ.は、立てないため体重を量ることすらできないほど処置を開始したとき重病であった。彼女は２フィートのベットにあがれず、床で寝ていた。処置５日目、彼女は家事ができるようになり、仕事場に給料を貰いに行き、買い物に商店にさえ行けた。 (８)Ｂ.Ｎ.は６ヶ月の処置で４４kgから５３kgに体重が増え、ヘモグロビンが１２．１から１４.９％に増えた。 (９)Ｆ.Ｋ.は４９歳の男性であり、１９９４年７月２７日に処置のために来る７年前に血清陽性と診断され、最も印象的な進行を成した。彼が来た時、彼は食欲不振、口腔潰瘍、まっすぐな薄い絹状毛、嘔吐、消耗、下痢および肛門潰瘍を発症していた。彼はまた足首の右中央部に３つの２cmの傷および左中心くるぶしに二つの他の傷があり、７ヶ月治療が無理であった。彼の足に浮腫があり、左足首は腫れていた。彼は立ったり歩いたりできず、脇を二人の男性に支えられていた。処置２４時間後、下痢が止まった。３日目までに彼は助け無しで立って歩けた。３日目までに嘔吐および下痢は無くなった。２週目の終わりまでに手におえなかった傷が治り、全ての徴候および症状が無くなった。最も興味深いことは、彼が、３−アミノ−４−ヒドロキシ安息香酸処置前に臨終の聖餐(病気および死の最後の聖餐)をしていたことである。彼は１９９４年９月１日に忙しいホテルの出納係としての仕事に戻った。１９９５年１月２２日に医師が彼を訪ねた時には完全に健康であり、１９９５年５月１９日、即ち、わずか２週間のみの治療から９ヶ月後まだ健康であった。彼の状態および進行はＨＩＶ／ＡＩＤＳ研究について非常に重要な観察を提供した。 (ａ)３−アミノ−４−ヒドロキシ安息香酸での処置で、患者は最初の１月で平均５kg体重が増えたが、彼は非常に劇的な改善の６ヶ月でわずか１kg しか体重が増えなかった。 (ｂ)６ヶ月目までに彼のへモグロビンは１１.９％−１０.９９％＝１ｇ％しか増加しなかったが、彼は最も大きな改善をした。処置中を通して、血清鉄は正常であった。 (ｃ)彼を精査して、糖尿病であることが分かり、これが体重が増えなかった理由であるようである。 (ｄ)彼の糖尿病の完全な発症は中断した。 (ｅ)他のＨＩＶ／ＡＩＤＳ患者が糖尿病であることが判明しており、ＨＩＶ／ＡＩＤＳと糖尿病の間に関連のあることを意味する。 (ｆ)６週間の処置により、彼の薄い絹状毛髪は正常なアフロタイプに戻った。質問に、彼は処置の前は櫛を必要としなかったが、６週間の処置後、櫛でとくことが必要になったと答えた。 (ｇ)彼の血液像を試験して、患者がＡＺＴを摂取してたかと医学教授が質問した。彼はＡＺＴを数クール摂取していたことを確認した。正常鉄存在下でＡＺＴが骨髄枯渇および貧血をもたらすことは確立された事実である。 (10)Ｌ.Ｎ.は９番の患者の妻であり、３−アミノ−４−ヒドロキシ安息香酸での２週間の処置で、新しい服を買わなければならないほど、８kg体重が増えた。実施例４３−アミノ−４−ヒドロキシ安息香酸でのＨＩＶ／ＡＩＤＳ処置後のＴ−細胞観察要約症状を示すおよび無症状の血清陽性個体を２週間、３−アミノ−４−ヒドロキシ安息香酸(２００mg tds経中で処置した。ＣＤ₄：ＣＤ₈比を処置前および処置後３ヶ月に取った。全ての個体で種々のレベルでＣＤ₈レベルが減少し、ＣＤ₄；ＣＤ₈比率が上昇して免疫学的改善を示すことが判明した。インビトロでＨＩＶを不活性化するこの固有の能力を基本にして、３−アミノ−４−ヒドロキシ安息香酸は感染した個体中のＨＩＶを抑制するか不活性化するようである。導入３−アミノ−４−ヒドロキシ安息香酸は、リンパ球への副作用無く、０.５mg ／mlの最小濃度でヒトリンパ球内で培養されているＨＩＶを不活性化することが示されている。実施例１および２で示した安全性試験はニワトリ、ウサギ、ヒツジおよびヒトボランティアで行い、安全性を証明した。耐容性の悪心および時々の嘔吐のみが副作用として示されている。約２０名の患者が処置され、臨床的、血液学的および体重増加により評価され、改善したことが判明した。合併症を発症しているものは必要な場合、アジュバント医薬を投与した。３−アミノ−４−ヒドロキシ安息香酸が抗−ＨＩＶ作用を有することを確認する試験において、患者を処置し、Ｔ−細胞変化の観察により評価した。３−アミノ−４−ヒドロキシ安息香酸が培養ＨＩＶを完全に不活性化するという背景知識により、Ｔ−細胞の変化により定量的に測定できるＨＩＶ感染のある抑制が寄与されることが予測された。材料および方法利用可能な限り、個体を無作為に選んだ(３人の男性および４名の女性)。彼らのＴ−細胞数を処置前および処置後３ヶ月に測った。彼らは２００mg tds経口で３−アミノ−４−ヒドロキシ安息香酸を投与され、毎日３−アミノ−４−ヒドロキシ安息香酸を摂取している限り、２週間、追跡された。その後、投薬のこのクールの後、１週間毎、続いて１月毎に追跡された。結果結果を図２にグラフとして示す。ＣＤ₄の平均増加は２０８であった。医薬ＡＺＴの報告されている相当する増加は８１である。これらの結果は、免疫学的改善のあることを示す。従って、３−アミノ−４− ヒドロキシ安息香酸は抗ＨＩＶ薬の少なくとも一つの要求を満たす。実施例５ＨＩＶに対する薬剤としての３−アミノ−４-安息香酸の使用におけるある重要な観察２週間、１日１回のみ経口で２００mgの３−アミノ−４−ヒドロキシ安息香酸を投与された患者ＪＥ００１−ＪＥ００１５で成され、彼らのＴ−細胞数を６週間後にのみ分析した。 (１)結果は、２００mg tdsを２週間投与された患者リファレンスＪＣ００４と比較して非常に乏しく、投与は３×／日より少なくない投与および長期間必要であることを示す。入手可能になった時の定量的ＰＣＲによるウイルス負荷の連続研究で、３−アミノ−４−ヒドロキシ安息香酸の投与の最適投与量および期間を示す。 (２)ＣＤ₄細胞を３ヶ月より早く計数したとき、処置の開始より低くさえある低い値を示す傾向がある。この説明は、ＨＩＶを担持するＣＤ₄細胞が、３−アミノ−４−ヒドロキシ安息香酸がその中のウイルスを殺した後に死ぬことである。その後、それらを破壊するＨＩＶ無しの他のＣＤ₄由来の前駆細胞として、全ＣＤ₄数は処置前よりも幾分高くなることが判明した。加えて、臨床での試験的基本および血液学的発見は以下の観察を示す。 (ａ)最初の処置１ヶ月内に平均体重増加は５kgである。 (ｂ)処置２週間以内に寝たきりの患者が立ちあがれ、軽い仕事ができる。 (ｃ)食欲不振は５日以内になくなる。 (ｄ)下痢は１−３回の処置で止まる。 (ｅ)熱および虚弱は処置１週間以内になくなる。 (ｆ)嘔吐は二日以内に無くなる。 (ｇ)発疹および傷の高度色素沈着は５日以内になくなる。 (ｉ)へモグロビンは１月以内に正常化する。 (ｊ)２日以内に睡眠の深さおよびリズムが正常化する。 (ｋ)口腔および肛門生殖器潰瘍は１週間以内に治癒する。 (ｌ)不健康な様子は１週間内に正常化する。実施例６血液サンプルを電子顕微鏡およびＨＩＶ培養のために、２名の患者の処置前および処置後に取った。電子顕微鏡では処置前にはＨＩＶ粒子が見られるが、処置２８日後には見られない。処置前に取った培養はＨＩＶが生育するが、３−アミノ−４−ヒドロキシ安息香酸処置２８日後のは生育しない。これは、３−アミノ−４−ヒドロキシ安息香酸が、２８日間、３mg／kg tdsで投与された場合、患者血液からＨＩＶを根絶することを示す。従って、抗ＨＩＶ医薬としての資格を有する。

【手続補正書】特許法第１８４条の８第１項【提出日】１９９８年３月１０日（１９９８．３．１０）【補正内容】好ましくは、医薬組成物は、３−アミノ−４−ヒドロキシ安息香酸を、２０mc gまでのビタミンＢ₁₂、１０mgまでの葉酸および５０mgまでのビタミンＣと組み合わせて含む。より更に好ましくは、２５、５０、１００または２００mcgの３ −アミノ−４−ヒドロキシ安息香酸を１０mcgのビタミンＢ₁₂、５mgの葉酸および２５mgのビタミンＣと組み合わせて含む。本組成物の好ましい投与のための形態は、糖衣錠である。糖衣錠の処方およびその製造法は当分野で既知である。本発明は図面を参照しつつ説明される：図１はＡＩＤＳ患者のＣＤ₄細胞数の経時的低下のグラフである。図２は実施例４の結果の棒グラフである。活性成分３−アミノ−４−ヒドロキシ安息香酸は、０.５mg／ｌの濃度で宿主培養ヒトリンパ球に障害を与えることなく、宿主核、細胞質およびまた細胞外のＨＩＶを完全に不活性にするかまたは“殺す”(Hicks et al.,Lancet 1989;2:14 22-3)(Medicine Digest Vol．12 No．4 April 1986)。本化合物はまた核まで細胞膜を浸透できる。ＨＩＶの結晶を３−アミノ−４−ヒドロキシ安息香酸に３０秒間軽く浸した時、ＨＩＶは培養ヒトリンパ球への感染能力を失う(Medicine Digest Vol．14 No ．9September 1988)。ＨＩＶをこのように処理せずにヒトリンパ球に接触させた場合、後者は感染する。細胞をこのように処置して、次にこれらを非処理ＨＩＶに接触させても感染を阻害しない。これは３−アミノ−４−ヒドロキシ安息香酸がＨＩＶを殺すが、ヒトリンパ球は殺さないことを示す。３−アミノ−４−ヒドロキシ安息香酸の２０,０００mg／ｌを超える濃度はヒト細胞を“殺す”。我々はヒト細胞障害無しにＨＩＶを不活性化または“殺す” のに０．５mg／ｌの濃度が必要であることを先に示している。３−アミノ−４− ヒドロキシ安息香酸の濃度が２０,０００mg／ｌに到達するには、ＨＩＶを破壊してから離れており、次いでヒト細胞の破壊が始まる。これが、投与量を薬理学的知識

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ)，ＵＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＨＵ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ

Claims

【特許請求の範囲】１．レトロウイルス感染の予防または処置のための医薬の製造における３−アミノ−４−ヒドロキシ安息香酸の使用。２．レトロウイルスがＨＩＶである、請求項１記載の使用。３．医薬が、３−アミノ−４−ヒドロキシ安息香酸を約１２時間毎に３から１０mg／kgの量で投与するように含む、請求項１または２に記載の使用。４．投与を約２８日続ける、請求項３記載の使用。５．３−アミノ−４−ヒドロキシ安息香酸を投与することを含む、レトロウイルス感染を予防または処置する方法。６．レトロウイルスがＨＩＶである、請求項５記載の方法。７．３−アミノ−４−ヒドロキシ安息香酸またはその誘導体を、ビタミンＢ₁₂ 、葉酸またはビタミンＣまたはこれらの２個またはそれ以上と共に、製薬的に許容される担体と組み合わせて含む、経口または注射投与用医薬組成物。８．３−アミノ−４−ヒドロキシ安息香酸が２５から２００mgの量で存在する、請求項７記載の医薬組成物。９．ビタミンＢ₁₂が２０mgまでの量存在し、葉酸が１０mgまでの量存在し、ビタミンＣが５０mgまでの量で存在する、請求項７または８に記載の医薬組成物。１０．組成物が糖衣錠の形である、請求項７から９のいずれかに記載の医薬組成物。