JP2000510136A

JP2000510136A - 新規物質ライブラリー及び前記ライブラリーを用いて作製した超分子集合体

Info

Publication number: JP2000510136A
Application number: JP09540498A
Authority: JP
Inventors: ミクルカ，クリスティアン; ヴィントハブ，ノルベルト; クインケルト，ゲルハルト; エッシェンモーゼル，アルベルト
Original assignee: ヘキスト・リサーチ・アンド・テクノロジー・ドイチュラント・ゲーエムベーハー・ウント・コンパニー・カーゲー
Priority date: 1996-05-14
Filing date: 1997-05-09
Publication date: 2000-08-08
Also published as: CA2252815A1; AU2895397A; EP0931038A1; AU718917B2; WO1997043232A1; DE59709869D1; EP0931038B1; DE19619373A1; ATE237568T1

Abstract

(57)【要約】本発明は物質ライブラリー、その作製方法、前記物質ライブラリーを用いる超分子集合体の作製方法、前記物質ライブラリーを用いて作製した前記超分子集合体の使用及び前記物質ライブラリー自体の使用に関する。

Description

【発明の詳細な説明】新規物質ライブラリー及び前記ライブラリーを用いて作製した超分子集合体本発明は、物質ライブラリー、その作製方法、前記物質ライブラリーを用いる超分子集合体の作製方法、前記物質ライブラリーを用いて作製した超分子集合体の使用及び前記物質ライブラリー自体の使用に関する。組み合わせストラテジーは、特に重要構造の発見とその最適化に関する新規活性物質の探索に重要なアプローチであり、構造的に関連する化合物の集合を同時に通常は自動的に合成し、数百、数千又は数百万種に及ぶ各化合物を各々少量ずつ含有する混合物（ライブラリーと呼ぶ）を形成する。合成プロトコールはいずれにせよわかっているので、混合物中のある成分の活性がスクリーニングにより検出されるならば、化学者のその後の作業はその同定に絞られる。初期物質ライブラリーはペプチド等の線状構造をもつ分子から主に構成されたが[Ｋ．Ｓ．Ｌａｍ，Ｓ．Ｅ．Ｓａｌｍｏｎ，Ｅ．Ｍ．Ｈｅｒｓｈ，Ｖ．Ｊ．Ｈｒｕｂｙ，Ｗ．Ｍ．Ｋａｚｍｉｅｒｓｋｉ，Ｒ．Ｊ．Ｋｎａｐｐ，Ｎａｔｕｒｅ１９９１，３５４，８２−８４]、今日では活性物質の分野で重要な複素環等の「小」分子に特に関心が集まっている[Ｌ．Ａ．Ｔｈｏｍｐｓｏｎ，Ｊ．Ａ．Ｅｌｌｍａｎ，Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．１９９６，９６，５５５−６００]。その目的は、重要構造の発見とその最適化を促進するために分子ダイバーシティを生成することである。従来の組み合わせ化学の特徴は、合成が動的制御下に行われる点と、合成による変動が選択から切り離されている点にある。このような従来技術としては、ＲＮＡアプタマーのｉｎｖｉｔｒｏ生成［Ｊ．Ｒ．Ｌｏｒｓｃｈ，Ｊ．Ｗ．Ｓｚｏｓｔａｋ，Ｎａｔｕｒｅ１９９４，３７１，３１−３６］や、組み合わせ法を使用したレセプターの探索［Ｙ．Ｃｈｅｎｇ，Ｔ．Ｓｕｅｎａｇａ，Ｗ．Ｃ．Ｓｔｉｌｌ，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１９９６，１１８，１８１３−１８１４］が挙げられ、後者では、２つの短いペプチドライブラリーをステロイド骨格上に構築し、これに不可逆的に結合している。本発明の目的は新規型の物質ライブラリーを提供することにより、物質ライブラリー中に存在する２種以上の同一又は異なる分子種を各々可逆的に組み合わせることによって物質ライブラリーによりその結合性を試験しようとするリガンド又は基質分子の結合部位数を従来の物質ライブラリーに比較して数桁増加することであり、物質ライブラリー中に存在する分子種の組み合わせが被験基質分子の存在下でのみ分子種との適当な結合相互作用により行われるように意図するものである。本発明の別の目的は、物質ライブラリー中に存在する分子種の組み合わせと被験基質分子の結合相互作用により生じる超分子集合体を提供することである。この種の物質ライブラリー及びこの種の超分子集合体は、医薬活性物質、作物保護用活性物質、触媒の製造又は疾病診断に利用できると思われる。最初に述べた目的は、好ましくは物質ライブラリー中に存在する同一又は異なる分子種を分子対合系に結合することにより獲得可能な物質ライブラリーにより達成される。本発明による物質ライブラリーを基質と相互作用させ、これにより形成された超分子集合体を同定し、必要に応じて単離することにより、本発明による物質ライブラリーを用いて超分子集合体を作製することができる。従って、本発明は例えば医薬物質、作物保護用活性物質、触媒の製造、疾病の診断及び対応する診断キットの製造に利用可能な、このように作製された超分子集合体の提供にも関する。同様に、これらの超分子集合体、主に本発明による物質ライブラリーの前駆物質も、医薬物質、作物保護用活性物質、触媒の製造、対応する診断キットの製造を含めた疾病の診断に利用できる。上記文中又は下記の本発明の説明及び請求の範囲で使用する一般用語は次のように定義される。分子種：例えば線状構造をもつ分子(例えばペプチド、特にタンパク質、ペプトイド、線状オリゴ又はポリサッカリド、核酸及びその類似体)、又は例えばモノマー(例えば複素環、特に窒素複素環)、又は線状構造をもたない分子(例えば分枝鎖オリゴもしくはポリサッカリド又は他の抗体)。超分子集合体：非共有力により団結する２種以上の分子種の結合により生成される集合体。対合系：選択性、安定性及び可逆性を特徴とし、好ましくはその性質が例えば温度、ｐＨ、濃度等の熱力学的作用により変化する非共有相互作用の超分子系。例えば、ピラノシル−ＲＮＡ、ＣＮＡ、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ＰＮＡが好ましい。相互作用は好ましくは水素結合、塩橋、スタッキング、金属配位結合、電荷移動錯体及び疎水性相互作用である。物質ライブラリー：異なる構造の化合物、好ましくはオリゴマー又はポリマーペプチド、ペプトイド、サッカリド、核酸、エステル、アセタール又はモノマー（例えば複素環、脂質、ステロイド）の集合。基質：分子、好ましくは医薬物質及び作物保護用活性物質、代謝物、生理的メッセンジャー、重要構造の誘導体、病変時にヒト又は動物体内で生産又は増産される物質、遷移状態類似体又は他のペプチド、特にタンパク質、ペプトイド、線状オリゴもしくはポリサッカリド、核酸及びその類似体、又は例えばモノマー( 例えば複素環、特に窒素複素環)、又は線状構造をもたない分子(例えば分枝鎖オリゴもしくはポリサッカリド又は他の抗体)、物質ライブラリー、並びに薬剤の作用部位、好ましくはレセプター、電位依存性イオンチャンネル、輸送体、酵素及び微生物の生合成ユニット。遷移状態類似体：化学反応の推定遷移状態に構造的に類似するが、遷移状態とは異なり安定的である合成分子種。同定は、超分子集合体の単離又は特性決定でもよいが、対合系と基質に結合した物質ライブラリーの超分子集合体の特定性質、好ましくは非集合種との比較又は集合体形成に関与しない種の共有（化学）結合によるクロマトグラフィー、電気泳動、スペクトル分析又はシグナル（標識）反応の相違に基づく区別が好ましい。ＣＮＡ：シクロヘキシルヌクレオオリゴアミド。リン酸−糖主鎖を２−（３− アミノシクロヘキシル）エタン酸ユニットで置換したＤＮＡ構造の合成変異体であり、前記ユニットはペプチド様に相互に結合しており、３−アミノシクロヘキシル置換基は各々４位にヌクレオ塩基をもつ。本発明による物質ライブラリーは、好ましくは１個の長い塩基鎖と２個の短い塩基鎖から構成される対合系であることを特徴とし、２個の短い塩基鎖は異なる点で長い塩基鎖に相補的であるが、相互に非相補的であり、長い塩基鎖との塩基対合時に短い塩基鎖間には少なくとも１塩基のギャップが残され、長い塩基鎖上のその寸法に対応するこのギャップの領域では少なくとも１塩基が非対合状態のままであり、対合ギャップの始点と終点に配置された２個の短い塩基鎖の各々の塩基は各々リンカーにより１個の分子種に結合され、長い塩基鎖中の非対合塩基の少なくとも１個はリンカーにより１個の分子種に結合される。例えば対合オリゴヌクレオチド末端に結合することにより、異なる性質をもつペプチドを制御下に可逆的に組み合わせ、２又は３個構成の群を得ることができる。従って、可能な組み合わせが多数になるため、合成されたペプチドよりも数桁多い異なる結合部位が実験で生成される。熱力学的制御下の組み合わせ変動及び選択の原理の実施とその連関は、組み合わせ法における基本的な技術躍進であり、該当レセプターは基質の存在下でのみ組み合わせにより形成される。このレセプターはこうして基質の存在に反応し、基質が抗原と等価の場合には、本発明の系は同様に「人工免疫系」とみなすことができる。自然界は、免疫応答及び触媒反応からシグナル伝達に至る生物の複雑なプロセスを実施する非常に多数の分子を生産している。このために、自然界は前駆物質分子の広範な組み合わせライブラリーを利用し、これらの前駆物質分子が必要な性質をもつかどうかをチェックしている。恐らくこのストラテジーの最も重要な例は、非常に大きい分子ダイバーシティを生成し、外来抗原に対して高い親和性と選択性をもつレセプターを探索することが可能な免疫系である。安定な結合集合体に本来弱くしか結合しない分子の組み合わせも自然界に広く見られる原理である（ヘテロマー[Ｄ．Ｅ．Ｃｌａｐｈａｍ，Ｎａｔｕｒｅ１９９６，３７９，２９７−２９９]）が、この原理を組み合わせ化学で使用する意義はまだ認識されていない。図１はこのようなレセプターの構造と形成プロセスを模式的に示すものであり、例えば１３個のモノマー構成単位から構成されるオリゴヌクレオチドの中央構成単位にリンカーユニットを介して（ライブラリーとしての）短いペプチド鎖を共有結合する。６個のモノマーユニットから構成される短いオリゴヌクレオチドの２個の末端ユニットにも同様の操作を適用する。その後、これらの３個のユニットを基質（楕円）に提示すると、ペプチド部分と基質の最良結合の競合が開始し、オリゴヌクレオチド間の対合が空間内のペプチド部分の接近を確保する。各段階の可逆性は必須であるため、最も安定な集合体が見いだされるまで各ペプチド領域の交換が行われる。このプロセスは熱力学的制御下に行われ、自動実験分子モデル化に対応する。実際に、このような実験では、３個のライブラリーの一過的に生じる可能な全組み合わせが選択の対象となる。この交換プロセスは温度依存性であり、即ち各鎖の交換は高温になるほど高頻度となるが、同時にペプチド部分と基質の相互作用は弱まる。平衡の凍結、対合パートナーの共有架橋、単離及び集合分離後に、レセプターは遊離形態で得られる。従って、化合物ライブラリーを対合系に結合することを特徴とする超分子集合体の作製方法が考案された。下記方法により熱力学的制御下に作製され、熱力学的制御下に選択結合された超分子集合体は、分子又は分子領域を認識しようとする場合に使用される。その利点は、常に同一のライブラリーがますます新規になりつつある選択の問題を組み合わせにより非常に迅速に解決できるという点にある。これらの用途は、特に以下の通りである。ａ）生物学的に関連する物質の分子認識、即ち診断。診断法の開発は特に代謝物や例えば継続的に突然変異する病原体等の被認識基質種に対応しなければならないので、この方法の利点は明白である。ｂ）生物学的に関連する物質の分子認識、即ち薬剤設計。本発明の方法は、例えば薬理的レセプターに結合してこれを刺激又は遮断するという点で活性物質として又は活性物質の開発用モデルとしてそれ自体機能する高選択性超分子集合体を生成する。他方、超分子集合体は活性物質の相互作用プロフィルの作成にも利用できるので、活性物質の開発におけるレセプターとしても機能する。ｃ）例えば触媒抗体としての使用という意味で遷移状態類似体を基質として提供することにより、触媒的に活性な超分子集合体を熱力学的制御下に構成する[ Ｌ．Ｃ．Ｈｓｉｅｈ−Ｗｉｌｓｏｎ，Ｘ．−Ｄ．Ｘｉａｎｇ，Ｐ．Ｇ．Ｓｃｈｕｌｔｚ，Ａｃｃ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｓ．１９９６，２９，１６４−１７０]。操作例１製法及び性質が周知である［Ｓ．Ｐｉｔｓｃｈ，Ｓ．Ｗｅｎｄｅｂｏｒｎ，Ｂ．Ｊａｕｎ，Ａ．Ｅｓｃｈｅｎｍｏｓｅｒ，Ｈｅｌｖ．Ｃｈｉｍ．Ａｃｔａ１９９３，７６，２１６１−２１８３］ピラノシル−ＲＮＡを対合系として使用する(図２参照)。Ｄ−リボースとヌクレオ塩基アデニン及びチミンから出発し、結合が可能なホスホロアミダイトを前記文献に記載されているように調製し、オリゴヌクレオチド合成器を使用して必要なヘキサマー及びトリデカマー配列を調製する。トリデカマーは配列２’−ＡＡＴＴＡＡＴ^*ＡＴＡＴＡＴをもち、一方のヘキサマーは配列２’−Ｔ^*ＴＡＡＴＴ−４’をもち、他方のヘキサマーは配列２’−ＡＴＡＴＡＴ^*−４’をもち、ここでＴ^*はリンカーヌクレオチド構成単位である。リンカーヌクレオチド構成単位はウラシルヌクレオシドから出発して文献公知の方法により合成し、ヨウ化[Ｗ．−Ｗ．Ｓｙ，Ｓｙｎｔｈ．Ｃｏｍｕｎ．１９９０，２０，３３９１−３３９４]、プロパルギルフタルイミドとの反応及び水素化［Ｋ．Ｊ．Ｇｉｂｓｏｎ，Ｓ．Ｊ．Ｂｅｎｋｏｖｉｃ，ＮｕｃｌｅｉｃＡｃｉｄｓＲｅｓ．１９８７，１５，６４５５−６４６７］により必要な構成単位を得る。文献に記載されているようにオリゴヌクレオチドのヒドラジン分解とヨードアセチル化を行う[Ｔ．Ｚｈｕ，Ｓ．Ｓｔｅｉｎ，ＢｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅＣｈｅｍ．１９９４，５，３１２−３１５]。多重ペプチド合成器を用いて市販アミノ酸モノマーから出発し、Ｎ末端システインをリンカーユニットとし、テトラペプチドを化合物ライブラリーとして調製する。ライブラリーを３分割し、各々室温で水性緩衝溶液中で２種のヘキサマー配列及びトリデカマー配列と反応させ、必要な結合体を得、逆相クロマトグラフィーにより精製する[ Ｔ．Ｚｈｕ，Ｓ．Ｓｔｅｉｎ，ＢｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅＣｈｅｍ．１９９４，５，３１２−３１５]。対合実験で紫外線吸収の低下に基づき相補的ユニットの対合を検出する。操作例２ −ＣＮＡペンタマーの固相合成（図４）固相上で各構成単位の段階的取り込みにより、ペプチド又はオリゴヌクレオチド合成と同様にＣＮＡオリゴマーを合成した。このために、必要な試薬を過剰に加え、未反応量を単純洗浄段階により再び除去した。使用したポリマー支持体は、水溶液及び有機溶剤の両者に良好な膨潤性をもつポリオキシエチレン（ＰＯＥ）／ポリスチレンコポリマー（ＴｅｎｔａｇｅｌＳＨＭＢ，０．２３ｍｍｏｌ／ｇ）とした。ポリマーのアミノエチル官能基にヒドロキシメチルベンゾイル（ＨＭＢ）リンカーを付け、対称無水物法により５倍量を使用し(ＤＩＣ２．５当量添加)、ＤＣＭ中で２０時間かけてアシル化触媒ＤＭＡＰ（２．５当量）を加えることにより、第１の構成単位の結合を行った。得られた結合量は０．１７ｍｍｏｌ／ｇであった。アミノ官能基のＢｏｃ保護基をＤＣＭ中５０％ＴＦＡで脱離した後、樹脂を１ＭＤＩＥＡ／ＤＭＦで中和した。次のサイクルは、次のモノマーの結合とＢｏｃ保護基の脱離の繰り返しから構成した。結合は、ＤＭＦ（４０μｌ）中の活性化試薬ＨＡＴＵ（３当量）でモノマー構成単位（３当量）を予備活性化後に１ＭＤＩＥＡ／ＤＭＦ（６当量）と２Ｍルチジン／ＤＭＦ（１２当量）を加えて実施した。結合時間は室温で３〜４時間とした。４回の結合サイクル後にＮ末端Ｂｏｃ保護基を脱離し、１５分間かけてメタノール中２ＮＮａＯＨで樹脂からペンタマーを分離した。脱離用溶液を樹脂から濾去し、５５℃に２時間維持した。２ＮＨＣｌで中和後、３０分で１０％→４０％Ｂ（溶媒Ａ：水＋０．１％ＴＦＡ、Ｂ：アセトニトリル＋０．１％ＴＦＡ）の勾配溶離（１ｍｌ／ｍｉｎ）を用いてＣ１８ＲＰ−ＨＰＬＣ（Ｈｉｂａｒプレパックトカラム２５０−４，ＲＰ−１８，５μｍ）で精製した。ＣＮＡ（ＡＡＴＡＴ）の合成は（Ｓ）−ＣＮＡ−チミンモノマー構成単位を結合したＴｅｎｔａｇｅｌ−ＨＭＢ樹脂１０ｍｇ（１．７μｍｏｌ）を用いて実施した。全ＣＮＡ構成単位はＳ構造をもつ。左から右に記載する配列はペプチド化学で一般的なＮ末端からＣ末端に向かう記述方法に対応する。ＣＮＡ（ＡＡＴＡＴ）：ＨＰＬＣ：Ｒｔ＝１４．３０分；ＵＶ：λｍａｘ＝２６４ｎｍ；ＥＳＩ−ＭＳ：[Ｍ＋Ｈ]⁺ _calc１３６２．０，［Ｍ＋２Ｈ］²⁺ _calc６８１．０；[Ｍ＋Ｈ]⁺ _exp１３６１．８，［Ｍ＋２Ｈ］²⁺ _exp６８１．５。ＣＮＡペンタマ−ＣＮＡ（ＡＡＴＡＴ）の脱塩後、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒＬａｍｂｄａ２ＵＶ−ＶＩＳスペクトロメーターで０〜８０℃にわたり６種の異なる濃度（ｐＨ７．０のＴｒｉｓＨＣｌ緩衝液中１．５〜５０μＭ）で２６５ｎｍの温度依存性吸収を測定した。これらの可逆的Ｓ字形遷移プロットの一次導関数から融点が得られる（１３μＭでＴｍ＝４２℃）(図５)。 −ペプチド−ＣＮＡ結合体の固相合成上記ＣＮＡペンタマーを樹脂から分離する前にＮ末端にジペプチドライブラリーを付けた。配列はＸＯ−ＣＮＡ（ＡＡＴＡＴ）である。Ｘはアラニン、アスパラギン酸、ロイシン、リジン及びセリンの５種のＬ−アミノ酸から選択した混合位置を表す。Ｏは規定位置を表し、このサブライブラリーにはＯ＝Ｌ−リジンを選択する。ＤＭＦ中の活性化試薬ＨＡＴＵ（６当量）でアミノ酸構成単位（６当量）を予備活性化後に１ＭＤＩＥＡ／ＤＭＦ（７当量）を加えてＢｏｃ−Ｌｙｓ（Ｆｍｏｃ）−ＯＨをＢｏｃ脱保護ＣＮＡペンタマーＣＮＡ（ＡＡＴＡＴ）に結合した。結合時間は３時間とした。スプリット樹脂法によりＸ位を導入した。Ｎ末端Ｂｏｃ保護基の脱離後、樹脂の量（５ｍｇ）にＤＭＦ：ＤＣＭ（１：１）１０μｌを加え、混合物を２０μｌずつ５等分した。各々オリゴマー樹脂約１ｍｇを用いて別個の反応容器で各アミノ酸の結合を同時に実施した。ＨＡＴＵ（５０当量）で予備活性化後に室温で３時間１ＭＤＩＥＡ／ＤＭＦ（１００当量）を加え、５０倍量の各Ｂｏｃ保護アミノ酸Ｂｏｃ−Ａｌａ−ＯＨ，Ｂｏｃ−Ａｓｐ（ＯＦｍ）−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ、Ｂｏｃ−Ｓｅｒ−ＯＨ及びＢｏｃ −Ｌｙｓ（Ｆｍｏｃ）−ＯＨを結合した。Ｎ末端Ｂｏｃ保護基の脱離後、Ｆｍｏｃ保護基を４０％ピペリジン／ＤＭＦ（２０分）で脱離した。ペプチド−ＣＮＡオリゴマー結合体を各々メタノール中２ＮＮａＯＨで１５分間かけて樹脂から分離した。脱離用溶液を樹脂から濾去し、５５℃に２時間維持した。２ＮＨＣｌで中和後、３０分で１０％Ｂ→４０％Ｂ（溶媒Ａ：水＋０．１％ＴＦＡ、Ｂ：アセトニトリル＋０．１％ＴＦＡ）の勾配溶離（１ｍｌ／ｍｉｎ）を用いてＣ１８ＲＰ−ＨＰＬＣ（Ｈｉｂａｒプレパックトカラム２５０−４，ＲＰ−１８，５μｍ）で精製した。 HPLC: Ala-Lys-CNA(AATAT)Rt＝15.47分 Asp-Lys-CNA(AATAT)Rt＝15.30分 Leu-Lys-CNA(AATAT)Rt＝16.08分 Lys-Lys-CNA(AATAT)Rt＝15.34分 Ser-Lys-CNA(AATAT)Rt＝15.29分 ESI-MS: Ala-LyS-CNA(AATAT)[M+H]⁺ _calc1561.6;[M+H]⁺ _exp1561.4 Asp-Lys-CNA(AATAT)[M+H]⁺ _calc1605.7;[M+H]⁺ _exp1605.3 Leu-Lys-CNA(AATAT)[M+H]⁺ _calc1603.8;[M+H]⁺ _exp1603.4 LyS-LyS-CNA(AATAT)[M⁺H]⁺ _calc1619.3;[M+H]⁺ _exp1619.0 Ser-Lys-CNA(AATAT)[M+H]⁺ _calc1577.7;[M+H]⁺ _exp1578.7 各成分の特性決定後、ＨＰＬＣフラクションを合わせた。ペプチドライブラリーＣＮＡオリゴマーＸＬｙｓ−ＣＮＡ（ＡＡＴＡＴ）の脱塩後、ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒＬａｍｂｄａ２ＵＶ−ＶＩＳスペクトロメーターで０〜６０℃ にわたって（ｐＨ７．０のＴｒｉｓＨＣｌ緩衝液中）５０μＭで２６５ｎｍの温度依存性吸収を測定した。この温度プロットの一次導関数から融点が得られる（５０μＭでＴｍ＝７℃）(図６)。ＸＬｙｓ−ＣＮＡ（ＡＡＴＡＴ）のＵＶスペクトルはライブラリ−ＣＮＡ（ＡＡＴＡＴ）を付けていないペンタマーと同様に０ ℃と６０℃で定性的に相違する。吸収最大の波長は０℃の２６１．４ｎｍ（Ｅ＝０．３４２７）から６０℃の２６３．８ｎｍ（Ｅ＝０．３６２６）にシフトし、従って、超分子集合体即ち平衡組み合わせライブラリーの存在が立証される(図７)。本明細書中の略語は次の意味である。Ｂｏｃ＝第３ブチルオキシカルボニルＤＣＭ＝ジクロロメタンＤＩＣ＝ジイソプロピルカルボジイミドＤＩＥＡ＝ジイソプロピルエチルアミンＤＭＡＰ＝ジメチルアミノピリジンＤＭＦ＝ジメチルホルムアミドＦｍｏｃ＝フルオレニルメチルオキシカルボニルＨＡＴＵ＝Ｏ−［７−アザベンゾトリアゾール−１−イル］−１，１，３，３− テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェートＴＦＡ＝トリフルオロ酢酸。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者ヴィントハブ，ノルベルトドイツ連邦共和国デー―65795 ハッテルスハイム，アカーツィエンシュトラーセ 28 (72)発明者クインケルト，ゲルハルトドイツ連邦共和国デー―61479 グラスヒュッテン，シャオインスラント 32 (72)発明者エッシェンモーゼル，アルベルトスイス国ツェーハー―8700 キュスナッハト，ベルクシュトラーセ９

Claims

【特許請求の範囲】１．同一又は異なる分子種を分子対合系に結合することにより獲得可能な物質ライブラリー。２．分子種が物質ライブラリー中に存在する請求項１に記載の物質ライブラリー。３．対合系が核酸である請求項１又は２に記載の物質ライブラリー。４．対合系がＤＮＡである請求項３に記載の物質ライブラリー。５．対合系がＲＮＡである請求項３に記載の物質ライブラリー。６．対合系がピラノシル−ＲＮＡである請求項３に記載の物質ライブラリー。７．対合系がＰＮＡである請求項１又は２に記載の物質ライブラリー。８．対合系がＣＮＡである請求項１又は２に記載の物質ライブラリー。９．分子種が線状構造をもつ分子である請求項１から８の一項以上に記載の物質ライブラリー。１０．分子種がペプチドである請求項９に記載の物質ライブラリー。１１．分子種がペプトイドである請求項９に記載の物質ライブラリー。１２．分子種がオリゴ又はポリサッカリドである請求項１から９の一項以上に記載の物質ライブラリー。１３．分子種が核酸又はその類似体である請求項９に記載の物質ライブラリー。１４．分子種がモノマーである請求項１から８の一項以上に記載の物質ライブラリー。１５．対合系が１個の長い塩基鎖と２個の短い塩基鎖から構成され、２個の短い塩基鎖は異なる点で長い塩基鎖に相補的であるが、相互に非相補的であり、長い塩基鎖との塩基対合時に短い塩基鎖間には少なくとも１塩基のギャップが残され、長い塩基鎖上のその寸法に対応するこのギャップの領域では少なくとも１塩基が非対合状態のままであり、対合ギャップの始点と終点に配置された２個の短い塩基鎖の各々の塩基は各々リンカーにより請求項１、２及び９から１４の一項以上に記載の１個の分子種に結合され、長い塩基鎖中の非対合塩基の少なくとも１個はリンカーにより請求項１、２及び９から１４の一項以上に記載の１個の分子種に結合される請求項３から８の一項以上に記載の物質ライブラリー。１６．請求項１から１５のいずれか一項に記載の物質ライブラリーを基質と相互作用させ、これにより形成された超分子集合体を同定し、必要に応じて単離することを特徴とする超分子集合体の作製方法。１７．基質がペプチドである請求項１６に記載の方法。１８．基質がペプトイドである請求項１６に記載の方法。１９．基質がオリゴ又はポリサッカリドである請求項１６に記載の方法。２０．基質が核酸又はその類似体である請求項１６に記載の方法。２１．基質が医薬物質である請求項１６に記載の方法。２２．基質が作物保護用活性物質である請求項１６に記載の方法。２３．基質が化学反応の遷移状態における１種以上の分子の類似体である請求項１６に記載の方法。２４．基質が代謝物である請求項１６に記載の方法。２５．基質が生理的メッセンジャーである請求項１６に記載の方法。２６．基質が病変時にヒト又は動物体内で生産又は増産される物質である請求項１６に記載の方法。２７．基質が薬剤の作用部位、好ましくはレセプター、電位依存性イオンチャンネル、輸送体、酵素及び微生物の生合成ユニットである請求項１６に記載の方法。２８．請求項１６から２７のいずれか一項に記載の方法により獲得可能な超分子集合体。２９．医薬活性物質の製造における請求項２８に記載の超分子集合体の使用。３０．作物保護用活性物質の製造における請求項２８に記載の超分子集合体の使用。３１．触媒の製造における請求項２８に記載の超分子集合体の使用。３２．疾病の診断における請求項２８に記載の超分子集合体の使用。３３．診断用キットの製造における請求項２８に記載の超分子集合体の使用。３４．請求項２８に記載の超分子集合体を含む診断用キット。３５．疾病の診断における請求項１から１５の一項以上に記載の物質ライブラリーの使用。３６．診断用キットの製造における請求項１から１５の一項以上に記載の物質ライブラリーの使用。３７．触媒の製造における請求項１から１５の一項以上に記載の物質ライブラリーの使用。３８．同一でも異なってもよい分子種を対合系に結合することを特徴とする請求項１から１５の一項以上に記載の物質ライブラリーの作製方法。３９．アミノシクロヘキシルエタン酸ユニットを含むシクロヘキシルヌクレオオリゴアミド。