JP2000512278A - 抗―凝固性のペプチジル―アルギニン アルデヒド誘導体 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、一般式（Ｉ）：Ｑ−Ｄ−Ｘａａ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｈ （Ｉ）（式中、Ｑは、式Ｑ’−Ｏ−ＣＯ−のアシル基を示し、その式中のＱ’は、１〜３個の炭素原子のアルキル基を示す、Ｄ−Ｘａａは、３−シクロブチル−Ｄ−アラニル−或いは３−シクロペンチル−Ｄ−アラニル基であり、Ｐｒｏは、Ｌ−プロリル基であり、そして、Ａｒｇは、Ｌ−アルギニル基である）の新規なペプチジル−アルギニン アルデヒド誘導体、およびその有機酸或いは無機酸と形成される酸付加塩および同一物を含有する製薬学的組成物に関する。式（Ｉ）の化合物は、特に、血小板機能および血栓症進行を抑制するとものに、抗−凝固特性の有効な治療効果を有する。

Description

【発明の詳細な説明】 抗−凝固性のペプチジル−アルギニン アルデヒド誘導体 発明の背景技術 本発明は、一般式（Ｉ）； Ｑ−Ｄ−Ｘａａ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｈ （Ｉ） （式中、Ｑは、式Ｑ’−Ｏ−ＣＯ−のアシル基を示し、その式中のＱ’は、１〜 ３個の炭素原子のアルキル基を示す、Ｄ−Ｘａａは、３−シクロブチル−Ｄ−ア ラニル−或いは３−シクロペンチル−Ｄ−アラニル基であり、Ｐｒｏは、Ｌ−プ ロリル残渣であり、そして、Ａｒｇは、Ｌ−アルギニル残渣である）の新規なペ プチジル−アルギニン アルデヒド誘導体、およびその有機酸或いは無機酸と形 成される酸付加塩並びにそれを含有する製薬学的な組成物に関する。 一般式（Ｉ）の新規化合物は、特に、抗−凝固特性、抗−血小板特性および抗 血栓症特性に、有効な治療効果を有する。 本発明の一般式（Ｉ）の化合物の好適な代表例は、次の誘導体である。 エトキシカルボニル−３−シクロブチル−Ｄ−アラニル−Ｌ−プロリル−Ｌ− アルギニン アルデヒド、 メトキシカルボニル−３−シクロブチル−Ｄ−アラニル−Ｌ−プロリル−Ｌ− アルギニン アルデヒド、 エトキシカルボニル−３−シクロペンチル−Ｄ−アラニル−Ｌ−プロリル−Ｌ −アルギニン アルデヒド、 メトキシカルボニル−３−シクロペンチル−Ｄ−アラニル−Ｌ−プロリル−Ｌ −アルギニン アルデヒド、 およびその有機酸或いは無機酸と形成される酸付加塩、好適には、ヘミスルフェ ートである。 定義： アミノ酸、その置換基およびそれから作成されるペプチドの略称は、例えば、 Biochem.J.126,773(1972);Biohemistry 14,449(1975)のような従来技術による。アミノ酸： Arg＝Ｌ-アルギニン[(２Ｒ)-２-アミノ-５-グアニジノ-ペンタン酸]、 Asp＝Ｌ-アスパルイン酸[(２Ｓ)-２-アミノ-３-カルボキシプロピオン酸]、 boroArg＝Ｌ-ボロアルギニン[(１Ｒ)-１-アミノ-４-グアニジノ-ブチルボリック 酸]、 D-Cba＝３-シクロブチル-Ｄ-アラニン[(２Ｒ)-２-アミノ-３-シクロブチルプロ ピオン酸]、 DL-Cbg＝ＤＬ-シクロブチル-グリシン[(2RS)-２-アミノ-２-シクロブチル酢酸] 、 D-Chg＝Ｄ-２-シクロヘキシル-グリシン[(２Ｒ)-２-アミノ-シクロヘキシル-酢 酸］、 D-Cpa＝３-シクロペンチル-Ｄ-アラニン[(２Ｒ)-２-アミノ-３-シクロペンチル プロピオン酸]、 Gla＝ガンマーカルボキシ-Ｌ-グルタミン酸[(２Ｓ)-２-アミノ-４,４-ジカルボ キシブチル酸]、 Glu＝Ｌ-グルタミン酸[(２Ｓ)-２-アミノ-４−カルボキシブチル酸]、 Glp＝Ｌ-ピログルタミン酸[(５Ｓ)-２-ピロリドン-５-カルボン酸]、 Gly＝グリシン(２-アミノ酢酸)、 D-MePhe＝Ｎ-メチル-３-フェニル-Ｄ-アラニン[(２Ｒ)-２-メチルアミノ-３-フ ェニルプロピオン酸]、 D-MePhg＝Ｄ-Ｎ-メチル-フェニルグリシン[(２Ｒ)-２-アミノ-２-フェニル酢酸] 、 Nal(1)＝３-(ナフチ-１-イル)-Ｌ-アラニン[(２Ｓ)-２-アミノ-３-(ナフチ-１- イル)-プロピオン酸]、 D-Phe＝３-フェニル-Ｄ-アラニン[(２Ｒ)-２-アミノ-３-フェニルプロピオン酸] 、 Pro＝Ｌ-プロリン[(２Ｓ)-ピロリジン-２-カルボン酸]、 置換基： Ac＝アセチル、Boc＝ｔ−ブトキシカルボニル、Bz＝ベンゾイル、Eoc＝エトキシ カルボニル、Et＝エチル、iPoc＝イソプロポキシカルボニル、Me＝メチル、4MeP ＝４−メチル−ペンタノイル、Moc＝メトキシカルボニル、pNA＝ｐ−ニトロフェ ニルアミノ、Poc＝プロポキシカルボニル、Tos＝ｐ−トルエン−スルフォニル、 Z＝ベンジロキシカルボニル ペプチドおよび誘導体 アミノ酸のみの略号は、各々Ｌ−アミノ酸を示す。Ｄ−アミノ酸は別々に、例 えば、３−フェニル−Ｄ−アラニン＝D-Pheと表示される。アミノ酸略号の前及 び後のハイフォンは、アミノ基からの無くなった水素或いはカルボキシ基から無 くなったＯＨ基を示す。Eoc-D-Cba-Pro-Arg-Hは、エトキシカルボニル−３−シ クロブチル−Ｄ−アラニル−Ｌ−プロリル−Ｌ−アルギニン アルデヒドを示し 、一方、Bz−IIe-Glu-Gly-Arg-pNAは、ベンゾイル−Ｌ−イソロイシル−Ｌ−グ ルタミル−グリシル−Ｌ−アルギニン ｐ−ニトロアニリドを示す。 既知技術の説明 血液凝固は、生体での保護機構の一部であり、器官壁の損傷が生じたときに、 血液凝固が、形成し、死去への出血を予防するものである。更に、血管病気、止 血及び凝固因子の病理学的活性化が、血液凝固を引き起こし得る。この場合、器 官は、形成された脈管内の血栓及び血栓症進行により、完全に或いは部分的に妨 害される。フィブリン溶解は、保護機構の他の部分を示す。ここに、過剰な血液 凝固は、血栓症中の酵素沈殿と血栓の溶解によっても除去される。 血閉塞過程は、カスケード反応で、一連の触媒酵素反応であり、そこでは、血 漿蛋白質、所謂、凝固因子が連続的に活性化される。その因子は、ローマ数字で 示され、活性形は、”ａ”の文字で示される。慣用名も使用され、従って、フィ ルリノゲン＝因子Ｉ（ｆｌ）であり、フィブリン＝因子Ｉａ（ｆｉｌａ）である 。血清プロテアーゼ(fXlla、fVlla、fXla、flXafXa、fXa及びトロンビン)、いく つかの促進共因子(fVa及びfVllla)及び凝固分子自体（フィブリン）が、すべて 凝固過程間に形成され、ｆＸａ及びトロンビンは、プロテアーゼ形成の間の最後 の ２つの因子である。ｆＸａの作用により形成されたトロンビンは、フィブリノゲ ンの開裂を開始し、フィブリン血栓になる。 血液凝固機構の初期の考え[R.G.MacFarlane,Nature,202,498(1964);E.W.Davie とO.D.Ratnoff,Science,145,1310(1964)]に従って、ｆＸは、２つの方法、内因 性経路と外因性経路により活性化される。前者では、過程は、変換fXI→fXIaを 伴う表面−活性化ｆＸII[fXIIa]により開始され、反応fIX→fIXaが生じる。ｆＸ は、flXaにより活性化される。外因性経路において、過程は、細胞表面レセパタ ーの出現組織因子（ＴＦ）及び[fVII＋TF]或いは[fVII＋TF]コンプレックスの展 開により開始され、ｆＸは、[fVIIa＋TF]コンプレックスにより活性化される。 生態組織内での血餅の発見法によると、組合せ経路の両方の結果が見つけられ る[E.W.Davie等の、Biohemistry 43,10363(1991)の結果、主工程は、次のような ものである。 １．臓器壁損傷或いは病気の場合に、ＴＦは、表面に移動し、血中を循環する因 子VIIの一部を結合する。形成された[fVII＋TF]-コンプレックスは、プロテアー ゼ(fXIIa、fXa、fIXa及びトロンビン)の適当な微量の作用により、小部分の血漿 因子IX及びX(即ち、少量のfIXa及びfXaが形成される)を活性化する活性酵素コン プレックス[fVIIa+TF]に変換される。次に、ＴＦＰＩ（組織因子経路抑制剤、以 前には、リポ蛋白質−付加の凝固抑制剤）の名前の、fXa及び[fVIIa+TF]の両方 によりの共通抑制剤の作用により不活性化される[T.J.Girard等のNature 338,51 8〜520(1989)]。 ２．因子Ｘと共因子VIIIAと共に生成したｆＩＸａは、Ｃａ⁺⁺イオンの存在下で 、ホスホリド表面（ＰＬ）上に、”テナーゼ”コンプレックス[flXa＋fVllla＋f X＋PL＋Ca⁺⁺]を生成する。ｆＸは、ｆＸａに活性化される。 ３．この点で生成されたｆＸａは、プロトロビン(fll)及び共因子Ｖａと共に、 ”プロトロンビナーゼ コンプレックス”[fXa＋fVa＋fll＋PL＋Ca⁺⁺]を生成し 、それは、”テナーゼ”と同じ構造である。このコンプレックス内側では、プロ トロンビンは、トロンビンに変換する。ｆＶ→ｆＶａ及びfV1ll→fVlllaの変換 が、ｆＸａ或いはトロンビンのどちらかにより行われる。 ４．形成されたトロンビンの少量が、fXIaの一部を酵素fXIaに変換し、因子VII 及びVを活性化し、各々fVIIIa及びfVaの量を生成する。今まで、fIXIaの因子を 、酵素fIXaに変換できる。この工程で、Ｘアーゼ−コンプレックスで開始し、ト ロンビン形成で終了する鎖反応と概略される。この過程の繰り返すと、増加した トロンビン量が形成される。 ５．適切な高いトロンビン濃度において、血漿中に溶解したフィブリノゲンは、 部分的に蛋白分解を行う、フィブリンモノマーが、生成され、第１に可溶性フィ ビリンポリマーに付加され、次に、不可溶性フィブリンポリマーに変換される。 ここでも、トロンビンは、fXIIIaとしての役目をし、因子達成重合が、その作用 により行われる[L.LorandとK.Konishi，Arch.Biochem.Biophys.,105,58(1964]。 不溶性フィブリンポリマーは、血凝固と血栓の主成分であり、他は、トロンビ ン作用でも第一義的に生成される血液血漿凝集物である。血栓或いは形成の血凝 固は、血栓の溶解間に溶液に入るときに、新しい共凝集過程を開始する過程の間 に生成されるトロンビンの主成分を取り込むものである[A.K.Gash等のAm.J.Card iol.57,175(1986):R.Kumar等のThrombi.Haemost.72,713(1994)]。 上記の特徴は、血栓形成中のトロンビンの重要な役目を示す。従って、トロン ビンの機能および／或いは形成と関連する、すべての化合物が、血栓症の治療で 非常に重要なものである。 病気予防のため、及びトロンボシスの処置のために、現在最も広く且つ成功し て用いられる化合物は、ヘパリン類およびビタミンＫ拮抗物質クマリン(例えば 、Syncumar及びWarfarin)を生成し、それは、直接のトロンビン抑制剤である。 ヘパリンは、トロンビンとその中性の抑制剤、アンチトロンビン-III(AT-III) の間の反応を触媒する。然し乍ら、ペパリンのこの作用は、AT-IIIの血漿濃度が 、正常レベルの７５％以下になると、なくなる[R.Egbring等のThromb.Haemost.4 2 .225(1979)]。また、上記の血栓により結合されたトロンビンが、ヘパリン−AT -IIIコンプレックスに近付けないような間接的機構により、抑制ができないこ とが重要である[j.I.Weitz等、J.Clin.Invest.86,385(1990)。更に、免疫病理学 的な過程による、処置関連の出血及び血栓塞栓症のような副作用は、両方とも無 視できない[J.M.Walenga等,Clin.Appl.Thrombosis/Haemostasis,2(Suppl.1),S21 〜S27(1996)]。 ビタミンＫ拮抗物質も、経口的に投与でき、その効果は、１６〜２４時間展開 する。それは、何かＧｌａ−含有の凝固因子（即ち、プロトロンビン）の活性形 の展開を抑制する。治療的な効果を部分的に抑制すること（６０〜７０％）が必 要であり[M.P.EsnoufとC.V.ProwseのBiochim.Biophys.Acta 490,471(1977)]、適 当な薬剤投与により達成でき。ビタミンＫ抗拮抗物質は、然し乍ら、その狭い治 療範囲と強いダイエット組成物への依存性（ビタミンＫ）と多種の個人的な感受 性のために使用が困難である。 トロンビンを直接に抑制する第１の高い能力のある合成化合物は、トリペプチ ド アルデヒドD-Phe-Pro-Arg-H、試験管内でも生体内でも強い抗凝固活性を有 する反転抑制剤であった[S.Bajusz等のペプチド化学、構造と生物学(R.Walterと J.Meienhofer,Eds.)、Ann Arbor Publ.,Ann Arbor，Michigan,USA,603〜608(197 5);Int.J.Peptide Protein Res.12，217(1978)]。D-Phe-Pro-Arg-Hに関連する一 連の化合物が合成される。第１のものの１つは、Boc-D-Phe-Pro-Arg-H[S.Bajusz 等のInt.J.Peptide Protein Res.12，217(1978)]及び同類のクロロメチルケトン （D-Phe-Pro-Arg-CH₂Cl）であり、それらは、非可逆性の抑制剤と証明されてい る[C,KettnerとE.Shaw,Thromb.Res.14,969(1979)]。更に、ペプチドとアシルペ プチドは、ボロアルギニン類(D-Phe-及びBoc-D-Phe-乃至Ac-D-Phe-Pro-boroArg) であり、それらは、可能性のある逆転性のトロンビン抑制剤[C.Ketter等のJ．Bi ol.Chem.265,18289.(1990)]及びBoc-D-Chg-Pro-Arg-Hを含むBoc-D-Phe-Pro-Arg- Hの同類[P.D.Gesellchen及びR.T.Shuman.ヨーロッパ特許出願第０，４７９，４ ８９Ａ２号]である。 水溶液において、D-Phe-Pro-Arg-Hは、同時変換ができると証明されるが、末 端アミノ基をメチル化することにより得られ、母化合物の活性を有するが、適当 な安定性があると証明されているD-MePhe-Pro-Arg-H(GYKI-14766)である[S.Baju sz等の米国特許第４，７０３，０３６号；J.Med.Chem.33,1729(1991)]。血液凝 固及び血栓形成は、化合物により実験動物中で抑制される[D.Bagdy等、Thromb.H aemost,67,357及び68,125(1992);J.V.Jackson等J.Pharm.Exp.Ther.261,546(1992 )];フィブリン溶解性の酵素への抑制作用は、無視できる、血栓崩壊剤と共投与 すると、血栓の溶解を著しく促進した[C.V.Jackson等、J.Cardiovascular Pharm acol.21.587(1993)]、それは、ヘパリン-AT-IIIコンプレックスでは得られない 。D-MePhe-Pro-Arg-Hに関連するいくつかの化合物を合成した。例えば、D-MePhe -Pro-Arg-H[R.T.Shuman等J.Med.Chem.36,314(1993)]。 抗凝固活性（即ち、過程の蛋白分解反応の抑制）を、抗凝固性テスト、例えば 、トロンビン時間（ＴＴ）、活性化部分トロンボプラスチン時間（ＡＰＴＴ）及 びプロトロンビン時間（ＰＴ）テスト[E.J.W.Bovie等Mayo Clinic Laboratory M anual of Haemostasis;W.B.Saunders Co.,Philadelphia(1971)]により測定する 。同時の凝固で抑制された血漿は、凝結され、そして、必要な凝結時間を測定す る。抗凝固剤の作用の後に、凝固時間は、過程での反応の抑制性に比例して長く なる。抗凝固性効果は、参照物（ＩＣ₅₀）に比較して、２倍の凝固時間に伸びる に必要な物質濃度により特徴ずけることができる。個々の凝固性のプロテアーゼ への抗凝固剤の効果は、アミド溶解法により測定される[R.Lottenberg等Methods in Enzymol.80．341(1981);G.Cleason，Blood Coagulation and Fibrinolysis 5 ，411(1994)]。分離された活性因子（例えば、トロンビン，ｆＸａ）及びすの クロモゲン或いはフルオロゲン ペプチド−アミド基体は、各々、抑制剤の存在 下或いは不存在で、反応される。酵素抑制作用は、アミド分解中に測定された抑 制定数（ＩＣ₅₀）により特徴づけられる。 ＴＴテストにおいて、凝固は、血漿クエン酸塩に添加されたトロンビンにより 開始される。システム２２において、トロンビンのｐモル／mlは、官能的であり 、その抑制性は、フィブリノゲン（トロンビンの天然基体の１つ）上で、血漿成 分の存在下で測定される。ＡＰＴＴ及びＰＴテストにおいて、完全凝固過程が生 じる。活性化剤fXが、外因性或いは内因性の経路のいずれかにより、活性化され る。生成したfXaは、プロトロンビンをトロンビンに変換し、そして、逆に、血 漿凝固を開始させる。凝固時間は、それらの１つの酵素が、抑制剤により抑制さ れると、引き伸ばされる。ＡＰＴＴおよびＰＴテストにおいて、最も大きくて、 ４０pmol/mlのＸａが生成され（これは、両システム中に存在する因子Ｘの全量 である）るが、一方、１５０ｐｍｏｌ／ｍｌ（ＡＰＴＴ）及び３５０ｐｍｏｌ／ ｍｌ（ＰＴ）のトロンビンが生成される[B.Kaiser等,Thromb.Res.65,157(1992)] 。 D-MePhe-Pro-Arg-H(C1)の場合、ＴＴ、ＡＰＴＴ及びＰＴテストにおける凝固 時間を２倍に伸ばす濃度は、各々、８７、６２２及び２９１５ｎＭになる。これ らの値及びテストで同じ機能を果たすトロンビンの量（２２、１５０、３５０ｐ ｍｏｌ／ｍｌ）は、同様に上がり、Ｃ１は、ＡＰＴＴ及びＰＴの両テストでトロ ンビン抑制子として機能し、ｆＸａの操作に少ししか影響しないか或いは影響し ないものである。これらの結果と良く一致して、Tos-Gly-Pro-Arg-pNA基体上の トロンビンのアミド溶解効果は、Ｃ１により、ＩＣ₅₀＝２ｎＭ値に抑制され、一 方、相当するBz−IIe-Glu-Gly-Arg-pNA基体上のｆＸａの効果は、ＩＣ₅₀＝９． １ｎＭ値で少しの悪影響があるだけである[Bajusz等の刊行されていない］。 血液凝固機構の固有の特徴は、その処理法が、直接のトロンビン抑制子でのみ 抑制されるばかりでなく、因子妨害トロンビン形成、即ち、ｆＸａ抑制子によっ ても抑制されることである。tik、ＴＡＰ（チック抗凝固ペプチド）から分離さ れた６０−員のポリペプチド[L.Waksman等,Science 248,593(1990);A.B.Kelly等 .,Circulation 86，1411(1992)]及びＤＸ−９０６５ａ（Ｃ２）、合成非ペプチ ド、（＋）−（２Ｓ）−２−［４［［（３Ｓ）−１−アセチミドイル−３−ピロ リジニル］オキシ］フェニル］−３−［７［アミジノ−２−ナフチル］−プロピ オニック酸塩酸塩６水和物[T.Hara等.,Thromb.Haemost.71,314(1994);T.Yokoham a等.,Circulation 92,485(1995)]は、血液凝固及び血栓形成の強い抑制子である 。ｆＸａ及び血漿凝固の両方のアミド溶解効果は、これらの化合物により、ＰＴ 及びＡＰＴＴテストにおいて、強く抑制される。即ち、遊離及びコンプレックス −結合のＸａ因子は、均一に良く抑制され、一方、その特質に従って、特定のｆ Ｘａ抑制子として、トロンビンは、ほとんど抑制されなく、即ち、ＴＴテスト中 での活性を達することができない。4-MeP-Asp-Pro-Arg-H（Ｃ３）(国際特許出願 第９３／１５７５６号)およびBoc-D-Phe-Nal(1)-Arg-H（Ｃ４）（国際特許出願 第９５／１３６９３号）は、ｆＸａの合成ペプチドである。 記号Ｃ３およびＣ４に従って、Z-D-Arg-Gly-Arg-pNA基体上のｆＸａのアミド 溶解活性を各々ＩＣ₅₀＝５７と３０ｎＭに抑制する。抗凝固性についてのデータ は入手できない。このテストでは、Ｃ３とＣ４は、Bz-IIe-Glu-Gly-Arg-pNA基体 上に著しい抑制効果があるが、一方、抗凝固活性は、血漿凝固テストでは無視で きることが証明される。合成のｆＸａ抑制子の文献の（Ｃ２）及び測定された（ Ｃ３−４）の活性が、抗トロンビン化合物Ｃ１と比べて、表１に示される。 表１のデータでは、Ｃ１の場合、抗凝固効果が、トロンビンの抑制性によるが 、Ｃ２の場合には、ｆＸａの抑制性によることが示される。Ｃ３、Ｃ４の著しい ｆＸａ抑制効果は、著しい抗凝固効果を伴わない。プロトロンビナーゼコンプレ ックスでのｆＸａ活性中心は、Ｃ３、Ｃ４をアクセスしないらしく、これらのペ プチドは、溶液中の遊離ｆＸａのみを抑制できる。 表１： 既知の合成抑制剤のｆＸａ抑制性（Ａ）と抗−凝血性効果（Ｂ） ＊^a：プロトロンビン時間（ＰＴ）、活性部分トロンボプラスチン時間（ＡＰＴ Ｔ）及びトロンビン時間（ＴＴ）テストにおいて、参照物に比較して、２倍に凝 固時間にあるペプチド濃度である。 ^b：Bz-IIe-Glu-Gly-Arg-pNAクロモゲン基体上での、単離されたヒトｆＸａで 測定した値。 ^c：ＮＡ＝不活性。 最近の刊行物[N.A.Prager等のCitculation 92、962(1992)]によると、トロン ビンのみならず、血栓／血液凝固中にトラップされ及び溶解中に遊離された因子 Ｘａも、各々、因子Ｖ及びＶＩＩＩの［ｆＶＩＩ＋ＴＦ］−コンプレックスの活 性化による新規な凝固過程を開始し、そして維持することに貢献する。従って、 抗凝固子がトロンビンの抑制に加えて因子Ｘａを抑制できる場合、特にこの抑制 性が凝固−結合のトロンビンおよび因子Ｘａまで広がる場合には、有利である。本発明の簡単な説明 本発明の目的は、経口投与で抗凝固活性を示す既知の化合物に比べて改良され た抗凝固活性のある新規なペプチド誘導体を製造することである。 ＴＴ及びＡＰＴＴテストでのBOC-D-Phe-Pro-Arg-H（Ｃ５）の抗凝固効果は、 トリペプチドアルデヒドＣ１よりも小さいが、ＰＴテストでは、より良く、Ｃ１ よりも１０倍低いＩＣ₅₀で因子Ｘａ抑制することが観察される。Ｃ５でのＢＯＣ 基での置換基は、トリペプチドアルデヒドＣ１よりも小さいが、ＰＴテストでは 、いくらか良好であり、Ｃ１よりも１０倍低いＩＣ₅₀を有する因子Ｘａを抑制す ることが観察された。得られたEoc-D-Phe-Pro-Arg-Hが、３つのテストすべてで 、Ｃ５よりも高い効果を有するので、Ｃ５でのＢＯＣ−基のためのＥｏｃ−基の 置換が、ペプチドの抗凝固効果を変えることが、予想以上に見い出された。更に 、その活性は、ＰＴテストのみならず、ＡＰＴＴテストでも、同様に、より高い もので、一方、そのｆＸａ抑制効果は、ＢＯＣ−ペプチドＣ５と同様である。Mo c-D-Phe-Pro-Arg-H（Ｃ７）の抗凝固効果も、Ｃ６Ｅｏｃ−化合物と同様である が、そのｆＸａ抑制効果は、少し高い。これらの発見したことは、表２に示され る。表２ 構造R-D-Phe-Pro-Arg-Hを有するペプチドアルデヒドの抗−凝血性効果（Ａ） とｆＸａ抑制効果（Ｂ） ＊^a：参照物に比べて２倍に凝固時間を伸ばすペプチド濃度。 ^b：Bz-IIe-Glu-Gly-Arg-pNAクロモゲン基体上でに単離されたヒトｆＸａで測 定した値。 Ｎ−末端アミノ酸が、フェニルアラニンから、３−シクロブチル−アラニンに 変化する場合に、より効果的な抗凝固性化合物が得られるが、一方、均一のシク ロブチル−グリシンが、Ｎ−末端位置に入り、活性が減少する。３−シクロブチ ルアラニンとは別に、３−シクロペンチルアラニンで置換することは、効果的な ペプチジルアルギニンアルデヒドが得られる。メトキシカルボニル或いはプロポ キシカルボニル基が、Ｎ−末端のエトキシカルボニル基を置換すると、活性スペ クトル即ち、個々のテストでの測定活性の比率を変えることが観察された。 本発明の詳細な説明 本発明は、一般式（Ｉ）； Ｑ−Ｄ−Ｘａａ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｈ （Ｉ） （式中、Ｑは、式Ｑ’−Ｏ−ＣＯ−のアシル基を示し、その式中のＱ’は、１〜 ３個の炭素原子のアルキル基を示す、Ｄ−Ｘａａは、３−シクロブチル−Ｄ−ア ラニル−或いは３−シクロペンチル−Ｄ−アラニル基であり、 Ｐｒｏは、Ｌ−プロリル基であり、そして、 Ａｒｇは、Ｌ−アルギニル基である）の新規なペプチド アルデヒド誘導体、お よびその有機酸或いは無機酸と形成される酸付加塩並びにそれを含有する製薬学 的な組成物に関する。 一般式（Ｉ）の化合物（式中、Ｑ、Ｑ’、Ｘａａ、Ｐｒｏ及びＡｒｇは上記の 定義である）が、グアニジノ基をベンジロキシカルボニル基で保護して、アシル ペプチドＱ−Ｄ−Ｘａａ−Ｐｒｏを、Ｌ−アルギニンラクタムと縮合させ、次に 、得られた保護されたトリペプチドラクタムを、式Ｑ−Ｄ−Ｘａａ−Ｐｒｏ−Ａ ｒｇ（Ｚ）−Ｈの保護されたトリペプチドアルデヒドに還元し、そして、一般式 （Ｉ）のペプチド誘導体を、有機或いは無機の酸と形成させた付加塩として、単 離することにより、製造される。 出発原料として用いる、アシル−ジペプチド、Ｑ−Ｄ−Ｘａａ−Ｐｒｏが、例 えば、塩基性媒体中で、Ｄ−Ｘａａアミノ酸を、クロロ蟻酸のＱ’アルキルエス テルとアシル化することにより、製造され、このように得られたＱ−Ｄ−Ｘａａ アシルアミノ酸を、Ｌ−プロリンに結合させる。 プロリンに結合させるために必要なＱ−Ｄ−Ｘａａは、ラセミ体ＤＬ−Ｘａａ 化合物をアシル化し、ＤＬ−アシルアミノ酸を、そのメチルエステルに変換し、 Ｑ−ＤＬ−Ｘａａ−ＯＭｅラセミ体エステルを分割することにより、製造される 。このようにして得たＱ−Ｄ−Ｘａａ−ＯＭｅを、次に、鹸化し、必要なＱ−Ｄ −Ｘａａアシルアミノ酸にする。 本発明の一般式（Ｉ）の化合物（式中、Ｑ、Ｘａａ、Ｐｒｏ、Ａｒｇは上記の 同じ意義である）は、試験管内でも生体内でも強い抗凝固活性を示し、著しく高 い生体適用性を有する。 一般式（Ｉ）の化合物の試験管中の抗凝固性効果は、プロトロンビン時間（Ｐ Ｔ）、活性化部分トロンボプラスチン時間（ＡＰＴＴ）及びトロンビン時間（Ｔ Ｔ）テストにより測定された[D.Bagdy等;Thromb.Haemost.67.326(1992)]。化合 物のｆＸａ−抑制効果は、Bz-IIe-Glu-Gly-Arg-pNAクロモゲン基体（方法Ｍ６参 照）を用いることにより測定された。 得られた結果は、表３に示される。Ｃ１トロンビン抑制子、Ｃ６ Ｅｏｃ−Ｄ −Ｐｈｅ−化合物およびＣ８ Ｅｏｃ−ＤＬ−Ｃｂａ−同類の相当するデータが 、参照として役立つ。表において、化合物は、ＰＴ活性の減少オーダーで並べら れる。データは、Ｐｈｅと比べて、そして、同類のシクロブチルグリシン（ＤＬ −系のＣ８、Ｃ９及びＣ１０の化合物を参照）と比較して、末端Ｃｂａ−及びＣ ｐａ−部分の長所の効果を正確に示す（化合物１、４および６参照）。 表３ ＰＴ活性の減少オーダーでの、新規なペプチジルアルデヒド（１−４、一般式 Ｑ−Ｄ−Ｘａａ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｈ）及び参照化合物（Ｃ１、Ｃ６及びＣ８〜 Ｃ１０）の抗凝固子（Ａ）及びｆＸａ抑制（Ｂ）効果＊^a：参照物に比較して２倍のトロンビン時間延長を誘導するペプチド濃度 ^b：各化合物の製造法を示す実施例番号 ^c：分離させたヒトｆＸａを有するBz-IIe-Glu-Gly-Arg-pNA基体上で測定した 値 組織プラスミノゲン活性子（ｔＰＡ）及びウロキナーゼ（ＵＫ）により誘導さ れた、プラスミン（ＰＬ）上及びプラスミン形成上の本発明の新規化合物の抑制 効果を、フィブリン−血小板法[D.Bagdy等;Thromb.Haemost.67.326(1992)]によ り検査する。化合物Ｃ１とＣ５は、参照；対照としての役目をする。Ｃ１の抗フ ィブリン溶解効果は、生体内で著しくない、そして、実験的な血栓を溶解するた めの補助薬として用いられ、一方、Ｃ５の抗フィブリン溶解活性は、生体内で良 く検出できる[C.V.Jackson等,J.Cardiovasc.Phamacol.21,587(1993)]。表４にお いて、新規化合物１および２で得られた結果は、Ｃ１とＣ５とのものと比べて、 実施例として示される。 ＩＣ₅₀値（欄Ａ）に加え、Ｃ１に関連した化合物の効率が、上げられる（欄Ｂ ）。後者のデータは、化合物Ｃ１と同様に、新規化合物Ｃ１、Ｃ２の抗フィブリ ノ溶解活性は、中和され；３つの酵素に対するその活性は、化合物Ｃ５に対して ３．２〜４．５〜３９倍低いことを示している。 表４ フィブリン血小板法^aにより測定した、血漿（ＰＬ）へと組織プラスミノゲン 活性化子（ｔＰＡ）及びウロキナーゼ（ＵＫ）により誘導されたプラスミン形成 への、本発明の新規ペプチジル−アルギニンアルデヒド及び同様の構造を有する 参照化合物の抑制効果（ＩＣ₅₀） *^a：ＩＣ₅₀＝ペプチド濃度（μＭ）フィブリン血小板上での加水分解領域は、 参照化合物に比べて５０％に減少する。 ^b：Ｃ１の活性（１／ＩＣ₅₀＝１）に関する値。 ^c：各化合物の製造を説明する実施例番号と同じ。 凝固−結合のｆＸａ及びトロンビン並びにフィブリンゲル−結合のトロンビン への一般式（Ｉ）の新規化合物の抑制効果が、化合物１〜３とともに、表５に示 され：Ｃ１の各値は、参照として用いられる。血漿−凝固は、血小板−富裕のヒ ト血漿を再石灰化することにより得られ、そして、フィブリンゲルは、ヒトフィ ブリノゲンをヒトトロンビンにより凝固することにより得られる。ｆＸａ及びト ロンビンの活性測定のために、Z-D-Arg-Gly-Arg-pNA或いはTos-Gly-Pro-Arg-pNA 基体は、方法Ｍ１〜Ｍ３と一致させて使用された。表５ 凝固結合性ｆＸａ及びトロンビン及びフィブリン−ゲル結合トロンビン^a上への 本発明の新規なペプチジル−アルギニン アルデヒドの抑制効果(ＩＣ₅₀、μＭ)＊^a：ＩＣ５０値の測定において、ｆＸａ活性とトロンビンは、方法Ｍ２とＭ３ に従って、Moc-D-Chg-Gly-Arg-pNA或いはTos-Gly-Pro-Arg-pNA基体について測定 する。 ^b：参照物（Ｃ１）の新規化合物を説明する実施例の数と同じものである。 これらのデータは、Eoc−化合物１と３が、ＩＣ₅₀により、１マイクロモルの 濃度以下に、トロンビンのみならず血漿凝固−結合のｆＸａでも抑制する。 一般式（Ｉ）の化合物の抗凝固性及び血小板凝固抑制効果が、ニュージーラン ド白ウサギで、Ｄ．バグデイ等[Thromb.Haemost.67,357(1992)]の方法により生 体外で研究した。化合物は、緩衝された等方性の生理的食塩水中に溶解され、静 脈注射（０．０４〜５．０ｍｇ／kg）で投与され、或いは、輸液（０．２５〜５ ．０ｍｇ／kg／ｈ）により、或いは皮下注射（０．５〜６．０ｍｇ／kg）により 、或いは経口（２．５〜２０ｍｇ／kg）で投与される。この化合物の効果は、既 に３０分間内に検出でき、経口投与法で行われ、ピーク値は、６０〜１８０分後 に達し、治療レベルが、３〜＞６時間にわたり投与量に依存して維持される。 エトキシカルボニル−３−シクロブチル−Ｄ−アラニル−Ｌ−プロリル−Ｌ− アルギニンアルデヒド（１）の生体内効果が、表６、７に詳細に示される。Ｃ１ の相当する値は、参照として挙げられる。化合物は、５ｍｇ／kgの投与量で経口 投与される。３０〜６０分毎に心臓動脈から採取された血液試料が分析される。 全血液凝固時間（ＷＢＣＴ）及びトロンビン誘導血液血小板凝集（ＰＡＩ）の抑 制が測定された。血液試料から得た血漿クエン酸塩における、活性化部分的トロ ンボプラスチン時間（ＡＰＴＴ）及びトロンビン時間（ＴＴ）が測定された。Ａ ＰＴＴ及びＴＴ値が表６に挙げられ、そして、ＷＢＣＴ及びＰＡＩ値が表７に示 される。 表６と７のデータは、新規な化合物１が、参照剤Ｃ１よりも、長く利く抗凝固 剤および抗凝集効果を有することを示す。 表６ 比較凝固時間^aによるＡＰＴＴ及びＴＴテストでの５ｍｇ／kgの経口投与量で のウサギでの、Eoc-D-Cba-Pro-Arg-H(1)と参照としてのD-MePhe-Pro-Arg-H(C1) の抗凝血効果 ＊^a：処理された動物と非処理の動物で測定された凝固時間の比率、 療法値は、イタリックで示す。表７ 比較凝固時間^aと百分率の抑制値によるＷＢＣＴテストでの５ｍｇ／kgの経口 投与量でのウサギでの、Eoc-D-Cba-Pro-Arg-H(1)と参照としてのD-MePhe-Pro-Ar g-H(C1)の抗凝固性と血小板凝集抑制値(PAI) ＊^a：処理された動物と非処理の動物で測定された凝固時間の比率、 療法値は、イタリックで示す。 一般式（Ｉ）の本発明の化合物は、次の病気の処置と予防に用いられる：血栓 及び／或いは高凝固性が含まれ、深い動脈血栓、脈動塞栓症、静脈血栓、不安定 狭心症、心筋梗塞、心房細動、及び血栓ベースの発作を含む：アテローム硬化症 において、高いリスクの患者の外科予防法或いは他の外科予防法として、冠状動 脈の病気、大脳静脈の血栓病を予防するために使用される。ネフローゼの場合、 高凝固性の病気の場合；悪性腫瘍及び炎症の場合、また、糖尿病の場合に、補助 薬治療のために、再閉塞の予防のために、経皮的な透過性の血管再建の血栓に適 用できる。他の抗凝固剤の投与が、攻撃できない場合、或いは、禁忌の場合、即 ち、抗トロンビンＩＩＩがない場合、ヘパリン或いはヘパリン誘導性の血小板減 少症（ＨＩＴ）の場合に、クマリンの場合の妊娠の場合に適用できる。 本発明の化合物とその製薬上許容される塩は、治療目的のみ用いられ、好適に は、製薬学的処方物の形で用いられる。本発明はまたそれらの処方物に関する。 製薬学的処方物は、一般式（Ｉ）の本発明の化合物或いはその製薬上許容され る塩の効果量および既知の製薬上容認される担体、充填材料、希釈剤及び／或い は他の製薬学的な賦形剤を有する。 前記の担体、希釈剤或いは充填材料は、水、アルコール、ゼラチン、ラクトー ス、サックロース、スターチ、ペクチン、ステアリン酸マグネシウム、ステアリ ン酸、タルカム、動物或いは植物源の油、更に、グリコール、例えば、プロピレ ングリコール、或いはポリエチレングリコールを用いる。製薬学的賦形剤は、保 存剤、種々の天然或いは合成のエマルジョン化剤、分散剤或いは濡れ剤、色彩材 料、香料、集積促進剤および他の活性成分の生適用性を改良する薬剤を用いるこ とができる。 本発明の製薬学的組成物は、通常の処方物で製造でき、例えば、経口組成物（ 口から投与される、例えば、錠剤、カプセル、粉末、ピル、糖剤或いは粒状剤） にでき、そして、非経口組成物（注射、輸液、坐薬、硬膏或いは軟膏のような、 胃腸内服システムを避けた投与薬剤）として製造できる。 本発明の化合物の治療投与量レベルは、個々の健康状態及び患者の年齢による 、そして、それに従って、変化でき、そのレベルは、医者の意図する処置により 決められる。機能の抑制及び／或いはトロンビン形成が、予防法のために、治療 目的のために、必要である病気の場合に、日当り経口的或いは非経口的（例えば 、静脈注射）の０．０１〜１０００ｍｇ／kg体重の投与量を投与し、好適には、 ０．２５〜２０ｍｇ／kg体重の投与量を投与する。 本発明の一般式（Ｉ）の化合物を、血栓剤（例えば、ｔＰＡ或いはウロキナー ゼ）と一緒に投与され、動脈或いは静脈中で形成されたトロンビの溶解を促進し 、その再形成を効率的に予防する。このような場合、本発明の化合物を、血栓薬 剤と同時に、或いは血栓装置の直後に、投与することが好適である。 以下の実施例が説明されるが、それは、本発明の保護範囲を制限するものでは ない。 実施例に記録されるＲ_f値は、吸着剤としてシリカゲル(DC-Alufolien Kieselg el 60 F₂₅₄、メルク、ダルムスタット）を用い、次の展開溶媒での薄膜クロマト グラフィにより測定される。 １．エチル アセテート ２．エチル アセテート−ピリジン−酢酸−水（４８０：２０：６：１１） ５．エチル アセテート−ピリジン−酢酸−水（４５：２０：６：１１） ６．エチル アセテート−ピリジン−酢酸−水（２４０：２０：６：１１） ７．エチル アセテート−ピリジン−酢酸−水（４８０：１０：３：５．５） ９．エチル アセテート−ピリジン−酢酸−水（１２０：２０：６：１１） 13．エチル アセテート−ｎ−ブタノール−酢酸−水（１：１：１：１） 実施例で特定された容量因子（k’）を、次のような装置"Pharmacia LKB Anal ytical HPLS System Two"により測定した。カラム： ”ＶＹＤＡＣ Ｃ−１８逆転層：１０mm、３００Ａ、４×２５０mm”緩衝液Ａ： ０．１％トリフルオロ酢酸水緩衝液Ｂ： ０．１％トリフルオロ酢酸のアセトニトリル １ml／分流速にされる勾配： Ｉ：０〜５分、０〜２５％Ｂ、次に、イソクラテック２５％Ｂ； II：０〜３０分、０〜６０％Ｂ． 溶離液のペプチド含有量の検出は、２１４ｎｍでの紫外線により測定した。試 料濃度は、１mg/ml緩衝液Ａ、注入容量２５μｌであった。 ＨＰＬＣ分析（Ｉ或いはII）中に適用された勾配は、実施例の個々の工程での 短縮の後のブラケットで特定される。 アシルアルギニン アルデヒドは、平衡構造中に、存在して、即ち、アルデヒ ド、アルデヒドハイドライトおよび２つのアミノシクロール形にある。ＨＰＬＣ 分析中に、アルデヒドハイドライトおよび両アミノシクロール形が、分離ピーク として現れ、従って、実施例で説明されるアシルアルギニン アルデヒドは、２ つ或いは３つのｋ’値により、特定される。 質量スペクトル：ＦＡＢ正イオン化測定が、フィニガン(Finnigan)MAT 8430装 置中で行われる。試料は、ｍ−ニトロベンジルアルコール マトリックス中に溶 解され、イオン源中に直接に導入される。ペプチジル−アルギニン アルデヒド のスペクトルにおいて、付加的な分子−イオンが検出可能であり、ｍ−ニトロベ ンジル−アルコール（ＮＢＡ）：［Ｍ＋Ｈ］⁺および［Ｍ＋Ｈ＋ＮＢＡ］⁺と形成 された付加化合物．実施例において、従って、ＦＡＢスペクトルデータが特定さ れる。 ＥＳＩ正イオン化測定は、ＶＧクアトロQuattro:(Fisons)装置中で行われる。 試料は、１％(v/v)の蟻酸含有のアセトニトリル−水（１：１）の混合物中に溶 解させ、１０mlの試料−ループ形で、１５〜２５ml／分の流速でイオン源中に導 入される。 特定の旋性（［α］_D）は、２０℃で測定された。実施例１ エトキシカルボニル−３−シクロブチル−Ｄ−アラニル−Ｌ−プロピ ル−Ｌ−アルギニン アルデヒド(Eoc-D-Cba-Pro-Arg-H)ヘミスルフェート 工程１ ：エトキシカルボニル−３−シクロブチル−Ｄ−アラニル−Ｌ−プロリル −Ｎ^G−ベンジロキシ−カルボニル−Ｌ−アルギニン−ラクタム ３．２８ｇ（８．４ミリモル）のｔ−ブトキシカルボニル−Ｎ^G−ベンジロキ シカルボニル−Ｌ−アルギニン−ラクタム[S.Bajuszと共同研究者：J.Med.Chem. 33,1729(1990)]を、8mlのクロロホルム中に懸濁し、次に、ＨＣｌガス（０．１ １〜０．１５ｇ／ml）で飽和された１０mlのエチルアセテートを一定に撹拌し、 氷で冷却しがら添加する。反応物は、［Rf(9)＝０．９１(Boc-化合物)：０．０ ７（遊離化合物）］の薄層クロマトグラフィにかける。最後に、反応混合物を、 １８mlのジエチルエーテルで希釈し、形成された結晶質を濾過し、５mlのアセト ン、５mlのジエチルエーテルで洗浄し、水酸化カリウムペレット上の真空デシケ ータ上で乾燥する。得られたＮ^G−ベンジロキシカルボニル−Ｌ−アルギニンラ クタム塩化水素を、８mlのジメチルホルムアミド中に溶解し、−２０℃に冷却し 、以下の製造された混合無水塩に添加する。 ２．５ｇ（８ミリモル）のエトキシカルボニル−３−シクロブチル−Ｄ−アラ ニル−Ｌ−プロリン（実施例１、工程Ｅ）を、−２０℃に冷却した８mlのジメチ ルホルムアミドに溶解する。一定撹拌しながら、０．９ml（８ミリモル）のＮ− メチル−モルフォリンと１．０５ml（８ミリモル）のイソブチノレクロロホルム を導入し、次に、１０分間撹拌した後、上記のＮ^G−ベンジロキシカルボニル− Ｌ−アルギニンラクタム塩化水素溶液と、２．３５ml（１６．８ミリモル）のト リエチルアミンを導入する。反応混合物を、３０分間、−１０℃で撹拌し、次に 、０℃で１時間撹拌する。その塩を、濾過し、廃棄し、ロ液を、４０mlのベンゼ ンで希釈する。溶液を、３×１０mlの水で洗浄し、１０mlの１ＭのＫＨＳＯ₄-溶 液で、そして再び、３×１０mlの水で洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、 溶媒を、２．０〜２．５ｋＰａの圧力で蒸発せしめる。得られた生成物を、７０ ｇキーゼルゲル６０で作られたカラム上に適用し、エチルアセテートで溶離する 。純粋物質[Rf(1)＝０．５０]を含有する部分を注入し、溶媒を、２．０〜２． ５ｋＰａの圧力で蒸発せしめる。油状残渣は、石油系エーテルで、摩擦し、濾過 し、乾燥する。 収率：３．０ｇ（6４％） Ｒ_f(1)＝０．５０ ［α］_D＝−４７．４°（ｃ＝１、ＴＨＦ中） ＦＡＢマススペクトルデータは、期待の構造（５８５［Ｍ＋Ｈ］⁺）を確認する 。工程２ ：エトキシカルボニル−３−シクロブチル−Ｄ−アラニル−Ｌ−プロリル −Ｎ^G−ベンジロキシ−カルボニル−Ｌ−アルギニン アルデヒド ２．２７ｇ（４．６ミリモル）のエトキシカルボニル−３−シクロブチル−Ｄ −アラニル−Ｌ−プロリル−Ｎ^G−ベンジロキシカルボニル−Ｌ−アルギニンラ クタム（実施例１、工程１）を、１５mlのテトラヒドロフラン中に溶解させ、そ こに、テトラヒドロフラン中に溶解した３．６ミリモルのリチウムアルミニウム ハイドライドを、−５０℃以下の温度で一定撹拌で添加する。反応の進行は、溶 媒システム(6)中の薄層クロマトグラフィにより監視され、そして、更に、リチ ウムアルミニウムハイドライドを、必要のときに添加する。冷却された０．５Ｍ 硫酸溶液を反応混合物に一定撹拌下で添加し、溶液がｐＨ３になるまで冷却する 。得られた溶液は、２×１５mlのｎ−ヘキサンで洗浄し、次に、３×２０mlの塩 化メチレンで洗浄する。塩化メチレン抽出液を注入し、３×１５mlの水で洗浄し 、１５mlの冷却５％ＮａＨＣＯ₃-溶液で、そして再び、１５mlの水で洗浄し、無 水硫酸ナトリウム上で乾燥し、そして、溶媒を、２．０〜２．５ｋＰａの圧力で 蒸発せしめる。残渣は、１０mlのベンゼンに溶解し、そして、シクロヘキサンで 沈殿化せしめる。濾過、乾燥した後の重量は、１．８ｇ（６５％）である。 Ｒ_f(6)＝０．３０ ［α］_D−３０．８°（ｃ＝１、テトラヒルドフラン中） ＦＡＢマススペクトルは、仮定の構造（５８７［Ｍ＋Ｈ］⁺）を確認する。工程３ ：エトキシカルボニル−３−シクロブチル−Ｄ−アラニル−Ｌ−プロリル −Ｌ−アルギニン−アルデヒド ヘミスルフェート １．５８ｇ（２．７ミリモル）のエトキシカルボニル−３−シクロブチル−Ｄ −アラニル−Ｌ−プロリル−Ｎ^G−ベンジロキシカルボニル−Ｌ−アルギニン− アルデヒド（実施例１、工程２）を、１４mlのエタノール、２．７mlの０．５Ｍ の硫酸、３．２mlの水に溶解し、そして、６mlのエタノール中に懸濁された０． １７ｇのＰｄ／Ｃ触媒を添加し、そのシステムを、１０℃で水素化する。反応の 進行は、薄層クロマトグラフィで監視し、１５分間で完了する。触媒は、濾別さ れ、溶液は、２．０〜２．５ｋＰａの圧力で、７〜９mlの容量に濃縮化される。 残渣を、２０mlの水で希釈し、６mlの塩化エチレンで抽出し、水溶液を、室温で 、２４時間放置する。そのｐＨは、ＯＨ−サイクル中のダウエックスDowexAG 1- X8樹脂で、３．５に調整され、溶液は、冷凍乾燥される。収率：１．０ｇ（７８ ％） Ｒ_f(5)＝０．４４ ［α］_D＝−７５．５°（ｃ＝１、水中） ＨＰＬＣ（１）：ｋ’＝５．５３；６．２０及び７．１７． ＦＡＢマススペクトルは、仮説の構造（４５３［Ｍ＋Ｈ］⁺）を確認する。 出発物質は、次のように製造できる。エトキシカルボニル−３−シクロブチル−Ｄ−アラニル−Ｌ−プロリン（Eoc-D- Cba-Pro） 工程Ａ： エトキシカルボニル−３−シクロブチル−ＤＬ−アラニン １０ｇ（７０ミリモル）の３−シクロブチル−ＤＬ−アラニン[A.Burger等の 、J.Med.Chem.6,221(1963)]を、７０mlの２ＭのＮａＯＨ溶液中に溶解し、＋５ ℃に冷却し、１１．１ml（１１６．２ミリモル）のエチルクロロホルメートを、 一定撹拌下で滴加する。撹拌は、２時間、この温度で継続し、更に、室温で２時 間継続する。反応混合物を、次に２０mlのジエチルエーテルで洗浄し、酸性化し た後に、ｐＨ１の溶液を、３×２０mlの酢酸エチルで抽出する。注入された抽出 液を、ブラインで洗浄し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、溶媒を２．０〜２． ５ｋＰａの圧力で、蒸発せしめる。得られた油は、純粋生成物［収率：１３．１ ｇ（８７％）、Ｒ_f(７)＝０．８］とされ、次の工程には更なる処理をせずに使 用する。工程Ｂ： メチル エトキシカルボニル−３−シクロブチル−ＤＬ−アラニネート １１ｇ（５１ミリモル）のエトキシカルボニル−３−シクロブチル−ＤＬ−アラ ニン（実施例１、工程Ａ）を、１００mlのメタノールに溶解し、−１５℃に冷却 し、次に、１０ml（１３７ミリモル）の塩化チオニルを一定撹拌下で添加する。 更に冷却することなく攪拌を続ける。反応混合物が室温になってから、撹拌を更 に２時間継続する。次に、溶液を２．０〜２．５ｋＰａの圧力で、蒸発せしめる 。残渣油を、４０mlの酢酸エチル中に溶解せしめ、１０mlの１ＮのＨＣｌ、２× １０mlの５％ＮａＨＣＯ₃および２×１０mlの水で洗浄し、無水硫酸ナトリウム 上で乾燥し、２．０〜２．５ｋＰａの圧力で、蒸発乾固する。残渣は、純粋であ ると考えられる［収率：１０．８ｇ（９２％）、Ｒ_f(1)＝０．８５、Ｒ_f(6)＝０ ．６５］とされ、次の工程には更なる処理をせずに使用する。工程Ｃ： メチル エトキシカルボニル−３−シクロブチル−Ｄ−アラニネート アシルアミノ酸メチルエステルの酵素加水分解は、自動滴定器中で、ｐＨ＝７ ．５で行われ、それは、２つの反応容器を有する（その１つは、１００mlの容量 を有し、他は、２５０mlの容量である）。試薬は、１ＭのＮａＯＨ溶液である。 １０．８ｇ（４７ミリモル）のメチルエトキシカルボニル−３−シクロブチル −ＤＬ−アラニネート（工程Ｂで合成された）を、２５０mlの容積の滴定器中の ２０mlのベンゼン中に溶解する。１００mlの水を添加し、溶液のｐＨを、１Ｍの ＮａＯＨで撹拌下で７．５に調整する。４０ｍｇの酵素[Subtilisin Carlsberg 、Protease,Type VIII(Sigma)]を添加し、７．５に調整されたｐＨは、滴定中は 、この値に保持される。酵素加水分解は、３時間で完了される。相を分離する。 水性相から、純粋のエトキシカルボニル−３−シクロブチル−Ｌ−アラニンが単 離される。ベンゼン相は、２×１０mlの５％ＮａＨＣＯ₃で、２×１０mlの水で 洗浄され、無水硫化ナトリウム上で乾燥され、２．０〜２．５ｋＰａの圧力で、 蒸発せしめられる。得られた黄帯色油は、純粋で考えられ、次の工程には更なる 処理をせずに使用される。工程Ｄ： エトキシカルボニル−３−シクロブチル−Ｄ−アラニン 工程Ｃの油状生成物を、２０mlのエタノール中に溶解し、そして、１０mlの２ ．５ＭのＮａＯＨ溶液を添加する。混合物を、室温で２時間撹拌し、２．０〜２ ．５ｋＰａの圧力で、蒸発せしめる。残渣を、３０mlの水に溶解し、１０mlのジ エチルエーテルで洗浄し、３Ｍの塩化水素酸でｐＨ＝１に酸性化し、３×１０ml の酢酸エチルで抽出される。注入された有機抽出物を、ブラインで洗浄し、無水 硫酸ナトリウム上で乾燥し、２．０〜２．５ｋＰａの圧力で、蒸発する。収率： ４．３ｇ（９０％）の油状生成物［Rf(2)＝０．８］での大部分は、次の工程で 使用され、残りは、次のように、結晶質塩に変換される。 ０．４３ｇ（２ミリモル）の油状のエトキシカルボニル−３−シクロブチルー Ｄ−アラニン（実施例１、工程Ｄ）を、１０mlのジエチルエーテル中に溶解し、 ０．２３ml（２．１ミリモル）のシクロヘキシルアミンを添加する。分離した結 晶は、濾過され、ジエチルエーテルで洗浄され、真空デシケータで乾燥される。 収率：０．５７ｇ（９０％） 融点：１２９〜１３１℃ ［α］_D＝３．９３°（ｃ＝１、メタノール中） 元素分析の結果：式Ｃ₁₆Ｈ₃₀Ｎ₂Ｏ₄（３１４．４２） 計算値：Ｃ６１．１２％、Ｈ９．６２％、Ｎ８．９１％ 測定値：Ｃ６１．３０％、Ｈ９．８０％、Ｎ８．６０％工程Ｅ： エトキシカルボニル−３−シクロブチル−Ｄ−アラニル−Ｌ−プロリン ３．７ｇ（１７．２ミリモル）のエトキシカルボニル−３−シクロブチル−Ｄ −アラニン（実施例１、工程Ｄ）を、６０mlのテトラヒドロフラン中に溶解し、 ０℃に冷却し、次に、４．８５ｇ（２４．５ミリモル）の２，４，５−トリクロ ロフェノールと５．０６ｇ（２４．５ミリモル）のジシクロヘキシル−カルボジ イミドを添加する。反応混合物を、室温で２時間撹拌し、分離したジシクロヘキ シルウレアから濾過し、次に、テトラヒドロフランで洗浄する。ロ液および洗浄 液を注ぎ、２．０〜２．５ｋＰａの圧力で、蒸発せしめる。残渣を、２５mlのジ エチルエーテル−石油エーテル混合物（１：１）中に溶解し、不溶性のジシクロ ヘキシルウレアは、濾別され、ロ液は、再び蒸発せしめる［濾過されたジシクロ ヘキシルウレアは、各々、４．９ｇ（８９％）になり、そして、０．６ｇ（１１ ％）になる］。油状の２，４，５−トリクロロフェニル エトキシカルボニル− ３−シクロブチル−Ｄ−アラニネートを、４０mlのピリジン中に溶解し、２．１ ２ｇ（１８．４ミリモル）の微粉末Ｌ−プロリンを、３．４３ml（２４．６ミリ モル）のトリエチルアミンと共に、添加する。反応混合物を、室温で３時間撹拌 し、次に、２．０〜２．５ｋＰａの圧力で、蒸発せしめる。残渣を、５０mlの酢 酸エチルと５０mlの１ＭのＨＣｌの間に分散せしめる。第１に、有機相を、１０ mlの１Ｍ ＨＣｌで洗浄し、２×１０mlの水で洗浄し、５％ＮａＨＣＯ₃の３× １００mlで抽出せしめる。合わされた重炭酸塩抽出物を、６Ｍ ＨＣｌで、ｐＨ ３に酸性化し、次に、ジエチルエーテルの３×２０mlで抽出せしめる。エーテル 柚出物を合わせ、水で酸がないように洗浄し、無水硫化ナトリウム上で乾燥し、 蒸発乾固する。収率：３．２ｇ（６０％）油 Ｒ_f(6)＝０．４９． ＦＡＢマススペクトルは、仮説の構造（３１３［Ｍ＋Ｈ］⁺）を確認する。実施例２ メトキシカルボニル−３−シクロブチル−Ｄ−アラニル−Ｌ−プロリ ル−Ｎ^G−ベンジロキシカルボニル−Ｌ−アルギニン アルデヒド(MOC-D-Cba-Pr o-Arg-H)ヘミスルフェート 工程１ ：メトキシカルボニル−３−シクロブチル−Ｄ−アラニル−Ｌ−プロリル −Ｎ^G−ベンジロキシカルボニル−Ｌ−アルギニン ラクタム １．６４ｇ（４．２ミリモル）のｔ−ブトキシカルボニル−Ｎ^G−ベンジロキ シカルボニル−Ｌ−アルギニン ラクタム[S.Bajusz等のJ.Med.Chem.33.1729(19 90)]及び１．２５ｇ（４．０ミリモル）のメトキシカルボニル−３−シクロブチ ル−Ｄ−アラニル−Ｌ−プロリン（実施例２、工程Ｃ）を用いて、これらの結合 と最終生成物のクロマトグラフィ精製を、実施例１、工程１に従って、試薬と溶 媒の比率量を用いて、行う。純粋な最終生成物［Rf(1)＝０］を含有する部分を 合わせ、２．０〜２．５ｋＰａの圧力で、蒸発せしめる。その残渣を、石油系エ ーテルで摩擦し、沢過し、パラフィンターニングと五酸化燐の上のデシケータ中 で乾燥せしめる。 収率：１．１５ｇ（５０％） Ｒ_f(2)＝０．４５〜０．４７． ［α]_D＝−４３．５°（ｃ＝１、テトラヒドロフラン中） ＦＡＢマススペクトルは、仮説の構造（５７１［Ｍ＋Ｈ］⁺、７２４［Ｍ＋Ｈ＋ ＮＢＡ］⁺）を確認する。工程２ ：メトキシカルボニル−３−シクロブチル−Ｄ−アラニル−Ｌ−プロリル −Ｎ^G−ベンジロキシカルボニル−Ｌ−アルギニン アルデヒド １．０６ｇ（１．８ミリモル）のメトキシカルボニル−３−シクロブチル−Ｄ −アラニル−Ｌ−プロリル−Ｌ−アルギニン ラクタム（実施例２、工程１）を 、実施例１、工程２に記載の方法に従って、試薬と溶媒の比率量を用いて、還元 せしめる。 収率：０．７６ｇ（７３％） Ｒ_f(9)＝０．４７． ［α]_D＝−３７．５°（ｃ＝１、テトラヒドロフラン中）． ＦＡＢマススペクトルは、仮説の構造（５７３[Ｍ＋Ｈ]⁺、７２６[Ｍ＋Ｈ＋ＮＢ Ａ]⁺）を確認する。工程３ ：メトキシカルボニル−３−シクロブチル−Ｄ−アラニル−Ｌ−プロリル −Ｎ^G−ベンジロキシカルボニル−Ｌ−アルギニン アルデヒド ヘミスルフェ ート ０．６９ｇ（１．２ミリモル）のメトキシカルボニル−３−シクロブチル−Ｄ −アラニル−Ｌ−プロリル−Ｎ^G−ベンジロキシカルボニル−Ｌ−アルギニンア ルデヒド（実施例２、工程２）を、実施例１、工程３に記載の方法に従って、試 薬と溶媒の比率量を用いて、水素化分解せしめる。 収率：０．５３ｇ（９１％） ＨＰＬＣ（II）：ｋ’＝４．７４；５．４７及び５．８２． ［α]_D＝−６０．９°（ｃ＝１、水中） ＦＡＢマススペクトルは、仮説の構造（４３９［Ｍ＋Ｈ］⁺、５９２［Ｍ＋Ｈ＋ ＮＢＡ］⁺）を確認する。 出発物質は、次のようにして製造できる。メトキシカルボニル−３−シクロブチル−Ｄ−アラニル−Ｌ−プロリン(MOC-D-C ba-Pro) 工程Ａ ：メトキシカルボニル−３−シクロブチル−ＤＬ−アラニン ４．３ｇ（３０ミリモル）の３−シクロブチル−ＤＬ−アラニン[A.Burger等 のJ.Med.Chem.6.221(1963)]を、１５mlの２Ｍ ＮａＯＨ溶液中に溶解し、０℃ に冷却し、同時に、１６．５mlの２Ｍ ＮａＯＨ溶液と２．５５ml（３３ミリモ ル）のメチルクロロホルメートを、強く撹拌しながら、添加する。撹拌は、この 温度で３０分間継続し、そして、室温で２時間継続する。反応混合物を、４０ml の水で希釈し、１０mlのジエチルエーテルで抽出し、３Ｍ ＨＣｌでｐＨ３に酸 性化する。生成物を、酢酸エチル（４×２０ml）で洗浄し、抽出物を合わせ、２ ０mlの水で洗浄し、無水硫化ナトリウム上で乾燥し、２．０〜２．５ｋＰａの圧 力で、蒸発せしめる。油状残渣［５．３ｇ（８８％）、Rf(7)＝０．６１］を、 次の工程に、更なる精製なしで使用する。工程Ｂ ：メトキシカルボニル−３−シクロブチル−Ｄ−アラニン ５．０３ｇ（２５ミリモル）のメトキシカルボニル−３−シクロブチル−ＤＬ −アラニン（実施例２、工程Ａ）を、実施例１、工程Ｂ−Ｄに記載の方法に従っ て、試薬と溶媒の比率量を用いて、処理する。 収率：２．２２ｇ（１１ミリモル）油状生成物、 ［Ｒ_f(7)＝０．６１］工程Ｃ ：メトキシカルボニル−３−シクロブチル−Ｄ−アラニル−Ｌ−プロリン １．２１ｇ（６ミリモル）のメトキシカルボニル−３−シクロブチル−Ｄ−ア ラニン（実施例２、工程Ｂ）を、実施例１、工程Ｅに記載の方法に従って、試薬 と溶媒の比率量を用いて、処理する。収率：１．６ｇ（５．４ミリモル、９０％ ）油状生成物、［Ｒ_f(9)＝０．４８］とされ、その大部分を工程１に直接使用し 、その残りは、次のようにして結晶質に変換する。 ０．３０ｇ（１ミリモル）の油状メトキシカルボニル−３−シクロブチル−Ｄ −アラニル−Ｌ−プロリンを、５mlのジエチルエーテル中に溶解し、０．２１ml （１．０５ミリモル）のジシクロヘキシルアミンを添加する。分離した結晶を濾 別し、ジエチルエーテルで洗浄し、真空デシケータ中で乾燥する。 収率：０．４３ｇ（９０％） 融点：１４９．５〜１６４℃ 元素分析の結果：式Ｃ₂₄Ｈ₄₅Ｎ₃Ｏ₅（４７９．６４） 計算値：Ｃ６５．１０％、Ｈ９．４６％、Ｎ８．７６％： 測定値：Ｃ６０．４％、Ｈ８．９８％、Ｎ１０．４７％実施例３ イソプロポキシカルボニル−３−シクロブチル−Ｄ−アラニル−Ｌ− プロリル−Ｌ−アルギニン アルデヒド(iPoc-D-Cba-Pro-Arg-H)ヘミスルフェー ト 工程１ ：イソプロポキシカルボニル−３−シクロブチル−Ｄ−アラニル−Ｌ−プ ロリル−Ｎ^G−ベンジロキシカルボニル−Ｌ−アルギニン ラクタム ０．４３ｇ（１．１ミリモル）のｔ−ブトキシカルボニル−Ｎ^G−ベンジロキ シカルボニル−Ｌ−アルギニン ラクタム[S.Bajusz等のJ.Med.Chem.33.1729(19 90)]及び０．３３ｇ（１ミリモル）のイソプロポキシカルボニル−３−シクロブ チル−Ｄ−アラニル−Ｌ−プロリン（実施例３、工程Ｃ）を用いて、これら成分 の結合とその生成物のクロマトグラフィ精製を、実施例１、工程１に従って、試 薬と溶媒の比率量を用いて、行う。純粋な最終生成物［Rf(1)＝０．５５］を含 有する部分を合わせ、２．０〜２．５ｋＰａの圧力で、蒸発せしめる。その残渣 を、石油系エーテルでもみ、濾過し、デシケータ中で乾燥せしめる。 収率：０．３ｇ（５０％） Ｒ_f(1)＝０．５５、 ＦＡＢマススペクトルは、仮説の構造（５９９［Ｍ＋Ｈ］⁺、７５２［Ｍ＋Ｈ＋ ＮＢＡ］⁺）を確認する。工程２ ：イソプロポキシカルボニル−３−シクロブチル−Ｄ−アラニル−Ｌ−プ ロリル−Ｎ^G−ベンジロキシカルボニル−Ｌ−アルギニン アルデヒド ０．２６ｇ（０．４３ミリモル）のイソプロポキシカルボニル−３−シクロブ チル−Ｄ−アラニル−Ｌ−プロリル−Ｎ^G−ベンジロキシカルボニル−Ｌ−アル ギニン−ラクタム（実施例２、工程１）を、実施例１、工程２に記載の方法に従 って、試薬と溶媒の比率量を用いて、水素化分解せしめる。 収率：０．１５ｇ．Ｒ_f(6)＝０．３０． ＦＡＢマススペクトルは、仮説の構造（６０１［Ｍ＋Ｈ］⁺、７５４［Ｍ＋Ｈ＋ ＮＢＡ］⁺）を確認する。工程３ ：イソプロポキシカルボニル−３−シクロブチル−Ｄ−アラニル−Ｌ−プ ロリル−Ｌ−アルギニン アルデヒド ヘミスルフェート ０．１３ｇ（０．２ミリモル）のイソプロポキシカルボニル−３−シクロブチ ル−Ｄ−アラニル−Ｌ−プロリル−Ｎ^G−ベンジロキシカルボニル−Ｌ−アルギ ニン アルデヒド（実施例２、工程２）を、実施例１、工程３の記載の方法によ り、試薬と溶媒の比率量を用いて、処理される。 収率：０．０７ｇ（７５％）． ＨＰＬＣ（１）：ｋ’＝３．６９；４．１５及び５．０４． ＦＡＢマススペクトルは、仮説の構造（４６７［Ｍ＋Ｈ］⁺、６２０[Ｍ＋Ｈ＋Ｎ ＢＡ]⁺）を確認する。 出発物質は、次のようにして製造できる。イソプロポキシカルボニル−３−シクロブチル−Ｄ−アラニル−Ｌ−プロリン（ iPoc-D-Cba-Pro） 工程Ａ： ３−シクロブチル−Ｄ−アラニン １．０ｇ（５ミリモル）のメトキシカルボニル−３−シクロブチル−Ｄ−アラ ニン（実施例２、工程２）に対して、１０mlの６Ｍ ＨＣｌを添加し、３時間、 環流加熱する。この溶液を、２．０〜２．５ｋＰａの圧力で、蒸発せしめ、その 残渣を、５mlの水に溶解し、蒸発乾固し、そして、この処理法を繰り返す。微量 の水を、エタノール−ベンゼン混合物による共沸点蒸留法により除去する。残り の油を、１０mlのエタノールに溶解し、５ミリモルの１，２−エポキシ−プロパ ンを添加する。冷却後、沈殿物を濾過し、固体を、ジエチルエーテルにより洗浄 し、乾燥する。 収率：０．６５ｇ（９０％）の３−シクロブチル−Ｄ−アラニン． Ｒ_f(13)＝０．６５． ［α］_D＝−３４．７°（ｃ＝１、１Ｍ ＨＣｌ中）． 元素分析の結果：式Ｃ₇Ｈ₁₃ＮＯ₂． 計算値：Ｃ５８．７１％、Ｈ９．１５％、Ｎ９．７８％： 測定値：Ｃ５８．７０％、Ｈ９．３０％、Ｎ９．５０％工程Ｂ ：イソプロポキシカルボニル−３−シクロブチル−Ｄ−アラニン ０．５７ｇ（４ミリモル）の３−シクロブチル−Ｄ−アラニンを、１Ｍ Ｎａ ＯＨ溶液とジオキサンの１：１混合物８ml中に溶解する。この混合物を、０℃に 冷却し、同時に、４mlの１Ｍ ＮａＯＨ溶液と４mlのイソプロピル クロロホル メート（トルエン中の濃縮１Ｍ）を、強く撹拌しながら、添加する。反応混合物 を、１時間この温度で撹拌し、そして、更に、室温で５時間撹拌する。ジオキサ ンとトルエンを２．０〜２．５ｋＰａの圧力で、分留する。残りの水溶液を、５ mlのジエチルエーテルで洗浄し、次に、１Ｍ ＫＨＳＯ₄によりｐＨ３に酸性化 する。乳濁液を、３×５mlの酢酸エチルで抽出し、合わせた抽出物を水で洗浄し 、無水硫化ナトリウム上で乾燥する。２．０〜２．５ｋＰａの圧力で、蒸発せし めた後には、収率：０．８３ｇ（９０％）である。 Ｒ_f(6)＝０．６０； ［α］_D＝＋９．５°（ｃ＝０．５、メタノール中）工程Ｃ： イソプロポキシカルボニル−３−シクロブチル−Ｄ−アラニル−Ｌ−プ ロリン ０．４６ｇ（２ミリモル）のイソプロポキシカルボニル−３−シクロブチル− Ｄ−アラニン（実施例３、工程Ｂ）を、実施例１、工程Ｅに記載の方法に従って 、試薬と溶媒の比率量を用いて、処理する。 収率：１．３ｇ（４．３５ミリモル、８７％）油、 Ｒ_f(2)＝０．４０． ＦＡＢマススペクトルは、仮定の構造（３２７[Ｍ＋Ｈ]⁺）を確認する。実施例４ エトキシカルボニル−３−シクロペンチル−Ｄ−アラニル−Ｌ−プロ リル−Ｌ−アルギニンアルデヒド（Eoc-D-Cpa-Pro-Arg-H）ヘミスルフェート 工程１： エトキシカルボニル−３−シクロペンチル−Ｄ−アラニル−Ｌ−プロリ ル−Ｎ^G−ベンジロキシカルボニル−Ｌ−アルギニン ラクタム ２．９３ｇ（７．５ミリモル）のｔ−ブトキシカルボニル−Ｎ^G−ベンジロキ シカルボニル−Ｌ−アルギニン ラクタム[S.Bajusz等のJ.Med.Chem.33.1729(19 90)]及び２．３ｇ（７．１ミリモル）のエトキシカルボニル−３−シクロペン チル−Ｄ−アラニル−Ｌ−プロリン（実施例４、工程Ｃ）を用いて、これら成分 の結合とその生成物のクロマトグラフィ精製を、実施例１、工程１に従って、試 薬と溶媒の比率量を用いて、行う。純粋な最終生成物［Rf(1)＝０．５５］を含 有する部分を合わせ、２．０〜２．５ｋＰａの圧力で、蒸発せしめる。その残渣 油を、ｎ−ヘキサンでもみ、濾別し、ｎ−ヘキサンで洗浄し、真空デシケータ中 で乾燥せしめる。 収率：２．５ｇ（５９％） Ｒ_f(1)＝０．５５． ［α］_D＝−４８．６°（ｃ＝１、テトラヒドロフラン中）． ＦＡＢマススペクトルは、仮説の構造(５９９[Ｍ＋Ｈ]⁺、７５２[Ｍ＋Ｈ＋ＮＢ Ａ]⁺)を確認する。工程２： エトキシカルボニル−３−シクロペンチル−Ｄ−アラニル−Ｌ−プロリ ル−Ｎ^G−ベンジロキシカルボニル−Ｌ−アルギニン アルデヒド ２．３４ｇ（３．９ミリモル）のエトキシカルボニル−３−シクロペンチル− Ｄ−アラニル−Ｌ−プロリル−Ｎ^G−ベンジロキシカルボニル−Ｌ−アルギニン ラクタム（実施例４、工程１）を、実施例１、工程２に記載の方法に従って、 試薬と溶媒の比率量を用いて、還元せしめる。 収率：１．７５ｇ（７４．７％） Ｒ_f(6)＝０．４２． ［α］_D＝−３４．４°（ｃ＝１、テトラヒドロフラン中）． ＦＡＢマススペクトルは、仮説の構造(６０１［Ｍ＋Ｈ］⁺、７５４[Ｍ＋Ｈ＋Ｎ ＢＡ]⁺)を確認する。工程３： エトキシカルボニル−３−シクロペンチル−Ｄ−アラニル−Ｌ−プロリ ル−Ｌ−アルギニン アルデヒド ヘミスルフェート １．５９ｇ（２．６５ミリモル）のエトキシカルボニル−３−シクロペンチル −Ｄ−アラニル−Ｌ−プロリル−Ｎ^G−ベンジロキシカルボニル−Ｌ−アルギニ ン アルデヒド（実施例４、工程２）を、実施例１、工程３に記載の方法に従っ て、試薬と溶媒の比率量を用いて、水素化分解せしめる。 収率：１．１３ｇ（８３％） Ｒ_f(3)＝０．３７． ［α］_D＝−３４．４°（ｃ＝１、水中）． ＨＰＬＣ（１）：ｋ’＝４．７６；５．４０及び７．３２． ＦＡＢマススペクトルは、仮説の構造（４６７［Ｍ＋Ｈ］⁺、６２０[Ｍ＋Ｈ＋Ｎ ＢＡ]⁺）を確認する。 出発物質は、次のようにして製造できる。エトキシカルボニル−３−シクロブチル−Ｄ−アラニル−Ｌ−プロリン （Eoc-D-Cpa-Pro） 工程Ａ： エトキシカルボニル−３−シクロペンチル−ＤＬ−アラニン ７．８７ｇ（５０ミリモル）の３−シクロペンチル−ＤＬ−アラニン[P.R.Pal 等のJ.Am.Chem.Soc.,78,5116(1956)]を、実施例１、工程Ａに記載の方法に従っ て、試薬と溶媒の比率量を用いて、処理する。但し、反応混合物からの生成物は 、２×５０mlのジエチルエーテルで抽出し、無水硫化ナトリウム上で乾燥し、２ ．０〜２．５ｋＰａの圧力で、蒸発せしめる。収率：１０．５５ｇ（９８％）の 白色で非晶質粉末は、［Rf(2)＝０．８４］で、次の工程に精製なしで使用され る。工程Ｂ： エトキシカルボニル−３−シクロペンチル−Ｄ−アラニン ７．８ｇ（３４ミリモル）のエトキシカルボニル−３−シクロペンチル−ＤＬ −アラニン（実施例４、工程Ａ）を、実施例１、工程Ｂ、Ｃ、Ｄに記載の方法に 従って、試薬と溶媒の比率量を用いて、処理する。油［Rf(6)＝０．０６２］の ［収率：３．４５ｇ（８８．６％）］の大部分は、直接に、工程Ｃに使用される 。残りは、次のようにして結晶塩に変換される。 ０．４６ｇ（２ミリモル）の油状のエトキシカルボニル−３−シクロペンチル −Ｄ−アラニンを、１０mlのジエチルエーテル中に溶解し、０．４２ml（２．１ ミリモル）のジシクロヘキシルアミンを添加する。沈殿物を濾別し、ジエチルエ ーテルにより洗浄し、真空デシケータ中で乾燥する。 収率：０．７４ｇ（９０％）結晶塩： 融点：１３８〜１４０℃． ［α］_D＝−１．５°（ｃ＝１、メタノール中） 元素分析の結果：式Ｃ₂₃Ｈ₄₂Ｎ₂Ｏ₄（４１０．５８） 計算値：Ｃ６７．２８％、Ｈ１０．３１％、Ｎ６．８１％： 測定値：Ｃ６７．４０％、Ｈ１０．４０％、Ｎ６．８０％工程Ｃ： エトキシカルボニル−３−シクロペンチル−Ｄ−アラニル−Ｌ−プロリ ン ２．４３ｇ（１０．５ミリモル）のエトキシカルボニル−３−シクロペンチル −Ｄ−アラニン（実施例４、工程Ｂ）を、実施例１、工程Ｅに記載の方法に従っ て、試薬と溶媒の比率量を用いて、処理する。得られた２，４，５−トリクロロ フェニルエステルを、１．１５ｇ（１０ミリモル）のＬ−プロリンと結合すると 、油状生成物の生成物の収率：２．３ｇ（７１％）である。 Ｒ_f(6)＝０．５３． ＦＡＢマススペクトルは、仮説の構造（３２７［Ｍ＋Ｈ］⁺）を確認する。 参照化合物の合成 合成１ エトキシカルボニル−３−フェニル−Ｄ−アラニル−Ｌ−プロリル−Ｌ−アルギ ニン アルデヒド(Eoc-D-Phe-Pro-Arg-H)へミスルフェート 工程１： エトキシカルボニル−３−フェニル−Ｄ−アラニル−Ｌ−プロリル−Ｎ^G −ベンジロキシカルボニル−Ｌ−アルギニン ラクタム ２．３ｇ（５．８ミリモル）のｔ−ブトキシカルボニル−Ｎ^G−ベンジロキシ カルボニル−Ｌ−アルギニン ラクタム[S.Bajusz等のJ.Med.Chem.33.1729(1990 )]及び１．６７ｇ（５ミリモル）のエトキシカルボニル−３−フェニル−Ｄ−ア ラニル−Ｌ−プロリン（合成例１、工程Ｃ）を用いて、これら成分の結合とそ の生成物の精製を、実施例１、工程１に従って、試薬と溶媒の比率量を用いて、 行う。純粋な最終生成物［Rf(1)＝０．３７］を含有する部分を合わせ、２．０ 〜２．５ｋＰａの圧力で、蒸発せしめる。その残渣を、真空デシケータ中で乾燥 せしめる。 収率：１．１８ｇ（６０％）の油． ＦＡＢマススペクトルは、仮説の構造（６０７［Ｍ＋Ｈ］⁺）を確認する。工程２： エトキシカルボニル−３−フェニル−Ｄ−アラニル−Ｌ−プロリル−Ｎ^G −ベンジロキシカルボニル−Ｌ−アルギニン アルデヒド ０．９ｇ（１．５ミリモル）のエトキシカルボニル−３−フェニル−Ｄ−アラ ニル−Ｌ−プロリル−Ｎ^G−ベンジロキシカルボニル−Ｌ−アルギニン ラクタ ム（合成例１、工程１）を、実施例１、工程２に記載の方法に従って、試薬と溶 媒の比率量を用いて、還元せしめる。 収率：０．３３ｇ（３６％）． Ｒ_f(1)＝０．１６．工程３： エトキシカルボニル−３−フエニル−Ｄ−アラニル−Ｌ−プロリル−Ｌ −アルギニン アルデヒド ヘミスルフェート ０．３３ｇ（０．５４ミリモル）のエトキシカルボニル−３−フェニル−Ｄ− アラニル−Ｌ−プロリル−Ｎ^G−ベンジロキシカルボニル−Ｌ−アルギニン ア ルデヒド（合成例１、工程２）を、実施例１、工程３に記載の方法に従って、試 薬と溶媒の比率量を用いて、処理する。 収率：０．２６ｇ（９２％）． ＨＰＬＣ（１）：ｋ’＝４．００；４．４５及び５．４５． ＦＡＢマススペクトルは、仮説の構造（４７５［Ｍ＋Ｈ］⁺、６２８[Ｍ＋Ｈ＋Ｎ ＢＡ]⁺）を確認する。 出発物質は、次のようにして製造できる。エトキシカルボニル−３−フェニル−Ｄ−アラニル−Ｌ−プロリン （Eoc-D-Phe-Pro） 工程Ａ： エトキシカルボニル−３−フェニル−Ｄ−アラニン １６．５ｇ（０．１モル）の３−フェニル−Ｄ−アラニンを、実施例１、工程 Ａに記載の方法に従って、試薬と溶媒の比率量を用いて、処理する。但し、最終 生成物の酢酸エチル溶液から溶媒を蒸発した後、得られた油状物は、真空デシケ ータ中で乾燥する。 収率：１４．６ｇ（５５％）． Ｒ_f(9)＝０．７０．工程Ｂ： エトキシカルボニル−３−フェニル−Ｄ−アラニン Ｎ−ヒドロキシ− サクシンイミデート １４．５ｇ（５５．４ミリモル）のエトキシカルボニル−３−フェニル−Ｄ− アラニン（合成例１、工程Ａ）と、６．４ｇ（５６ミリモル）のＮ−ヒドロキシ −サクシンイミドを、６０mlのテトラヒドロフランに溶解する。溶液を０℃に冷 却し、１１．５ｇ（５６ミリモル）のジシクロヘキシル−カルボジイミドを撹拌 しなら、添加する。撹拌を、この温度で１０時間行い、次に、混合物を濾過し、 ロ液を２．０〜２．５ｋＰａの圧力で、蒸発せしめる。その残渣をベンゼンから 結晶化する。その結晶を濾過し、ベンゼンとジエチルエーテルで洗浄し、真空デ シケータ中で乾燥する。 収率：１１．３ｇ（６０％）． Ｒ^f(10)＝０．５３． ［α］_D＝＋５８．１°（ｃ＝１、ジメチルホルムアミド中）． ＦＡＢマススペクトルは、仮説の構造（３３５［Ｍ＋Ｈ］⁺）を確認する。 元素分析の結果：式Ｃ₁₆Ｈ₁₈Ｎ₂Ｏ₆（３３４．３３） 計算値：Ｃ５７．４８％、Ｈ５．４２％、Ｎ８．３０％： 測定値：Ｃ５７．４０％、Ｈ５．４０％、Ｎ８．３０％工程Ｃ： エトキシカルボニル−３−フェニル−Ｄ−アラニル−Ｌ−プロリン ３．３４ｇ（１０ミリモル）のエトキシカルボニル−３−フェニル−Ｄ−アラ ニン ヒドロキシサクシンイミデート（合成例１、工程Ｂ）を、１５mlのピリジ ン中に溶解し、１．１５ｇ（１０ミリモル）のＬ−プロリンと１．４ml（１０ミ リモル）のトリエチルアミンを添加する。反応混合物を室温で１０時間撹拌し、 次に、２．０〜２．５ｋＰａの圧力で、蒸発せしめる。残渣を３０mlの５％Ｎａ ＨＣＯ₃溶液と１０mlのジエチルエーテルの間に分配せしめる。水性相を、３× ５mlのジエチルエーテルで洗浄し、合わせた有機洗浄物を、５mlの５％ＮａＨＣ Ｏ₃-溶液で抽出する。重炭酸相を合わせて、１Ｍ ＫＨＳＯ₄溶液でｐＨ３に酸 性化し、３×１０mlの酢酸エチルにより抽出する。合わせた有機抽出物を無水硫 化ナトリウム上で乾燥し、２．０〜２．５ｋＰａの圧力で、蒸発せしめる。油状 残渣を、ジエチルエーテルで結晶化し、結晶を濾過し、ジエチルエーテルで洗浄 し、真空デシケータ中で乾燥せしめる。 収率：２．６ｇ（７７％） 融点：１４１〜１４３℃ Ｒ_f(6)＝０．４０ ＦＡＢマススペクトル（３３５［Ｍ＋Ｈ］⁺）は、仮説の構造を確認する。 元素分析の結果：式Ｃ₁₇Ｈ₂₂Ｎ₂Ｏ₅（３３４．３３） 計算値：Ｃ６１．０６％、Ｈ６．６３％、Ｎ８．３８％ 測定値：Ｃ６１．１０％、Ｈ６．７０％、Ｎ８．１％ 合成例２メトキシカルボニル−３−フェニル−Ｄ−アラニル−Ｌ−プロリル−Ｌ−アルギ ニン アルデヒド(Moc-D-Phe-Pro-Arg-H)ヘミスルフェート 工程１： メトキシカルボニル−３−フェニル−Ｄ−アラニル−Ｌ−プロリル−Ｎ^G −ベンジロキシカルボニル−Ｌ−アルギニン ラクタム ４．１ｇ（１０．５ミリモル）のｔ−ブトキシカルボニル−Ｎ^G−ベンジロキ シカルボニル−Ｌ−アルギニン ラクタム[S.Bajusz等のJ.Med.Chem.33.1729(19 90)]及び２．８８ｇ（９ミリモル）のメトキシカルボニル−３−フェニル−Ｄ− アラニル−Ｌ−プロリン（合成例１、工程Ｃ）を用いて、これら成分の結合を、 実施例１、工程１に従って、試薬と溶媒の比率量を用いて、行う。粗生成物を 、シクロヘキサンからの結晶化により精製する。 収率：４．６５ｇ（８６％）． 融点：７２〜８２．７℃ Ｒ_f(2)＝０．５６． ［α］_D＝＋７２．９°（ｃ＝１、テトラヒドロフラン中）． ＦＡＢマススペクトルは、仮説の構造（５９３［Ｍ＋Ｈ］⁺、７４６[Ｍ＋Ｈ＋Ｎ ＢＡ]⁺）を確認する。工程２： メトキシカルボニル−３−フェニル−Ｄ−アラニル−Ｌ−プロリル−Ｎ^G −ベンジロキシカルボニル−Ｌ−アルギニン アルデヒド ４．１３ｇ（７ミリモル）のメトキシカルボニル−３−フェニル−Ｄ−アラニ ル−Ｌ−プロリル−Ｎ^G−ベンジロキシカルボニル−Ｌ−アルギニン ラクタム （合成例２、工程１）を、実施例１、工程２に記載の方法に従って、試薬と溶媒 の比率量を用いて、還元する。但し、塩化メチレン溶媒を蒸発させた後に、油状 最終生成物を、ジエチルエーテルで結晶化する。結晶を濾過し、ジエチルエーテ ルで洗浄し、真空デシケータ中で乾燥する。 収率：３．０６ｇ（７４％）． 融点：１０３〜１０７℃． Ｒ_f(6)＝０．４４． ［α］_D＝−６９°（ｃ＝１、テトラヒドロフラン中）． ＦＡＢマススペクトルは、仮説の構造（５９５［Ｍ＋Ｈ］⁺、７４８[Ｍ＋Ｈ＋Ｎ ＢＡ]⁺）を確認する。工程３： メトキシカルボニル−３−フェニル−Ｄ−アラニル−Ｌ−プロリル−Ｌ −アルギニン アルデヒド ヘミスルフェート ２．６８ｇ（４．５ミリモル）のメトキシカルボニル−３−フェニル−Ｄ−ア ラニル−Ｌ−プロリル−Ｎ^G−ベンジロキシカルボニル−Ｌ−アルギニンアルデ ヒド（合成例２、工程２）を、実施例１、工程２に記載の方法に従って、試薬と 溶媒の比率量を用いて、処理する。 収率：２．１５ｇ（９４％）． ［α］_D＝−８７．６°（ｃ＝１、水中）． ＨＰＬＣ（１）：ｋ’＝３．３；３．５７及び４．０９． ＦＡＢマススペクトルは、仮説の構造（４６１［Ｍ＋Ｈ］⁺、６１４[Ｍ＋Ｈ＋Ｎ ＢＡ]⁺）を確認する。 出発物質は、次のようにして製造できる。メトキシカルボニル−３−フェニル−Ｄ−アラニル−Ｌ−プロリン （Moc-D-Phe-Pro） 工程Ａ： メトキシカルボニル−３−フェニル−Ｄ−アラニン ジシクロヘキシル アミン塩 ５ｇ（３０ミリモル）のＤ−フェニルアラニンを、１５mlの２ＭのＮａＯＨ溶 液に溶解し、０℃に冷却し、同時に１６．５mlの２ＭのＮａＯＨ溶液と２．５５ ml（３３ミリモル）のメチルクロロホルメートを添加する。混合物をこの温度で ３０分間撹拌し、次に、室温で、２時間撹拌する。４０mlの水で希釈し、その混 合物を、１０mlのジエチルエーテルで洗浄し、３Ｍ ＨＣｌによりｐＨ３に酸性 化し、４×２０mlの酢酸エチルにより抽出する。合わせた有機抽出物を水（２０ ml）で洗浄し、無水硫化ナトリウム上で乾燥し、２．０〜２．５ｋＰａの圧力で 、蒸発せしめる。残渣を、６０mlのジイソプロピルエーテル中に溶解し、６ml（ ３０ミリモル）のジシクロヘキシルアミンを添加する。分離した結晶を濾別し、 ジイソプロピルエーテルで洗浄し、空気中で乾燥する。 収率：１１．５ｇ（２８．５％） Ｒ_f(2)＝０．５６． 融点：１６７〜１７０℃． ［α］_D＝−３７．９°（ｃ＝０．５、エタノール中）． 元素分析の結果：式Ｃ₂₃Ｈ₃₆Ｎ₂Ｏ₄（４０４．５３）． 計算値：Ｃ６８．２８％、Ｈ８．９７％、Ｎ６．９２％： 測定値：Ｃ６８．３０％、Ｈ９．１５％、Ｎ６．７５％．工程Ｂ： メトキシカルボニル−３−フェニル−Ｄ−アラニン ２，４，５−トリ クロロフェニル エステル １１．３ｇ（２８ミリモル）のメトキシカルボニル−３−フェニル−Ｄ−アラ ニン−ジシクロヘキシルアンモニウム塩（合成例２、工程Ａ）を、７５mlの酢酸 エチルと３０．５mlの１Ｍ ＫＨＳＯ₄に分配する。相を分離し、有機抽出物を 水で中和洗浄し、無水硫化ナトリウム上で乾燥し、２．０〜２．５ｋＰａの圧力 で、１５ml量に濃縮する。冷却した（約０℃）残渣に対して、５．５ｇ（２８ミ リモル）の２，４，５−トリクロロフェノール及び５．７５ｇ（２８ミリモル） のジシクロヘキシル カルボジイミドを添加し、そして、反応混合物を一昼夜放 置する。分離したジシクロヘキシルウレアを濾別し、ロ液を蒸発せしめる。油状 残渣をエタノールから結晶化する。結晶を濾過し、ジエチルエーテルで洗浄し、 真空デシケータ中で乾燥する。 収率：６．８６ｇ（６１％） 融点：１０９〜１１０℃． Ｒ_f(4)＝０．８４． 元素分析の結果：式Ｃ₁₇Ｈ₁₄ＮＯ₄Ｃｌ₃（４０２．６６）． 計算値：Ｃ５０．７０％、Ｈ３．５０％、Ｎ３．４８％、Ｃｌ２６．４２％． 測定値：Ｃ５０．８０％、Ｈ３．２０％、Ｎ３．４０％、Ｃｌ２６．６０％．工程Ｃ： メトキシカルボニル−３−フェニル−Ｄ−アラニル−Ｌ−プロリン ４．８３ｇ（１２ミリモル）のメトキシカルボニル−３−フェニル−Ｄ−アラ ニル−２，４，５−トリクロロフェニル エステル（合成例２、工程Ｂ）を、１ ２mlのピリジン中に溶解し、次に、１．３８ｇ（１２ミリモル）の微粉Ｌ−プロ リンと１．６８ml（１２ミリモル）のトリエチルアミンを撹拌しながら添加する 。反応混合物を、１６時間撹拌し、次に、２．０〜２．５ｋＰａの圧力で、蒸発 せしめる。その残渣を、４０mlの５％ＮａＨＣＯ₃に溶解し、その溶液を３×７m lのジエチルエーテルで抽出する。合わせたエーテル相を、７mlの５％ＮａＨＣ Ｏ₃で洗浄する。重炭酸洗浄液を合わせて、３Ｍ ＨＣｌでｐＨ３に酸性化し、 ３×１０mlの酢酸エチルで抽出する。抽出物を無水硫化ナトリウム上で乾燥し、 ２．０〜２．５ｋＰａの圧力で、蒸発せしめる。残渣をジエチルエーテルで結晶 化し、結晶を濾過し、ジエチルエーテルで洗浄し、そして、真空デシケータ中で 乾燥する。 収率：３．０５ｇ（７９％）． 融点：１５４〜１５７℃． Ｒ_f(2)＝０．４７． ＦＡＢマススペクトルは、仮説の構造（３２１［Ｍ＋Ｈ］⁺）を確認する。 合成例３エトキシカルボニル−３−シクロブチル−ＤＬ−アラニル−Ｌ−プロリル−Ｌ− アルギニン アルデヒド(Eoc-DL-Cba-Pro-Arg-H)ヘミスルフェート 工程１： エトキシカルボニル−３−シクロブチル−ＤＬ−アラニル−Ｌ−プロリ ル−Ｎ^G−ベンジロキシカルボニル−Ｌ−アルギニン ラクタム １．３５ｇ（３．４６ミリモル）のｔ−ブトキシカルボニル−Ｎ^G−ベンジロ キシカルボニル−Ｌ−アルギニン ラクタム[S.Bajusz等のJ.Med.Chem.33.1729( 1990)]及び１．０３ｇ（３．３ミリモル）のエトキシカルボニル−３−シクロブ チル−ＤＬ−アラニル−Ｌ−プロリン（合成例３、工程Ａ）を用いて、これら成 分の結合とその最終生成物のクロマトグラフィ精製を、実施例１、工程１に従っ て、試薬と溶媒の比率量を用いて、行う。純粋な最終生成物［Rf(1)＝０．５０ ］を含有する部分を合わせ、２．０〜２．５ｋＰａの圧力で、蒸発せしめる。そ の残渣を、ｎ−ヘキサンで滴定し、濾過し、ｎ−ヘキサンで洗浄し、真空デシケ ータ中で乾燥せしめる。 収率：１．０ｇ（５１％）． Ｒ_f(1)＝０．５０． ＥＳＩマススペクトルは、仮説の構造（５８５［Ｍ＋Ｈ］⁺）を確認する。工程２： エトキシカルボニル−３−シクロブチル−ＤＬ−アラニル−Ｌ−プロリ ル−Ｎ^G−ベンジロキシカルボニル−Ｌ−アルギニン アルデヒド ０．９４ｇ（１．６ミリモル）のエトキシカルボニル−３−シクロブチル−Ｄ Ｌ−アラニル−Ｌ−プロリル−Ｎ^G−ベンジロキシカルボニル−Ｌ−アルギニン ラクタム（合成例３、工程１）を、実施例１、工程２に記載の方法に従って、 試薬と溶媒の比率量を用いて、還元する。 収率：０．６４ｇ（６８％）． Ｒ_f(6)＝０．３０． ＥＳＩマススペクトルは、仮説の構造（５８７［Ｍ＋Ｈ］⁺）を確認する。工程３： エトキシカルボニル−３−シクロブチル−ＤＬ−アラニル−Ｌ−プロリ ル−Ｌ−アルギニン アルデヒド ヘミスルフェート ０．５９ｇ（１．０ミリモル）のエトキシカルボニル−３−シクロブチル−Ｄ Ｌ−アラニル−Ｌ−プロリル−Ｎ^G−ベンジロキシカルボニル−Ｌ−アルギニン アルデヒド（合成例３、工程２）を、実施例１、工程３に記載の方法に従って 、試薬と溶媒の比率量を用いて、処理する。 収率：０．３９ｇ（７８％）． ＨＰＬＣ（１）：ｋ’＝５．５５；６．２７及び７．０９． ＦＡＢマススペクトルは、仮説の構造（４５３［Ｍ＋Ｈ］⁺、６０６[Ｍ＋Ｈ＋Ｎ ＢＡ]⁺）を確認する。 出発物質は、次のようにして製造できる。エトキシカルボニル−３−シクロブチル−ＤＬ−アラニル−Ｌ−プロリン （Eoc-DL-Cba-Pro） 工程Ａ： エトキシカルボニル−３−シクロブチル−ＤＬ−アラニル−Ｌ−プロリ ン １．１３ｇ（５．２５ミリモル）のエトキシカルボニル−３−シクロブチル− ＤＬ−アラニン（実施例１、工程Ａ）を、実施例１、工程Ｅに記載の方法に従っ て、試薬と溶媒の比率量を用いて、処理すると、油状の２，４，５−トリクロロ フェニルエステルが得られ、それを、０．５８ｇ（５．０ミリモル）の微粉末Ｌ −プロリンと結合させる。 収率：１．１ｇ（７１％）の油． Ｒ_f(6)＝０．５３． ＥＳＩマススペクトルは、仮説の構造（３１３［Ｍ＋Ｈ］⁺）を確認する。 合成例４エトキシカルボニル−３−シクロペンチル−ＤＬ−アラニル−Ｌ−プロリル−Ｌ −アルギニン アルデヒド(Eoc-DL-Cpa-Pro-Arg-H)ヘミスルフェート 工程１： エトキシカルボニル−３−シクロペンチル−ＤＬ−アラニル−Ｌ−プロ リル−Ｎ^G−ベンジロキシカルボニル−Ｌ−アルギニン ラクタム ３．７ｇ（９．５ミリモル）のｔ−ブトキシカルボニル−Ｎ^G−ベンジロキシ カルボニル−Ｌ−アルギニン ラクタム[S.Bajusz等のJ.Med.Chem.33.1729(1990 )]及び２．９４ｇ（９．０ミリモル）のエトキシカルボニル−３−シクロペンチ ル−ＤＬ−アラニル−Ｌ−プロリン（合成例４、工程Ａ）を用いて、これら化合 物を、実施例１、工程１に従って、試薬と溶媒の比率量を用いて、行う。純粋な 最終生成物を含有する部分を合わせ、２．０〜２．５ｋＰａの圧力で、蒸発せし め、その残渣を、ｎ−ヘキサンで滴定する。固体生成物を濾過し、ｎ−ヘキサン で洗浄し、真空デシケータ中で乾燥する。 収率：２．８７ｇ（５４％）． Ｒ_f(1)＝０．５５． ＥＳＩマススペクトルは、仮説の構造（５９９［Ｍ＋Ｈ］⁺）を確認する。工程２： エトキシカルボニル−３−シクロペンチル−ＤＬ−アラニル−Ｌ−プロ リル−Ｎ^G−ベンジロキシカルボニル−Ｌ−アルギニン アルデヒド ２．７５ｇ（４．６ミリモル）のエトキシカルボニル−３−シクロペンチル− ＤＬ−アラニル−Ｌ−プロリル−Ｎ^G−ベンジロキシカルボニル−Ｌ−アルギニ ン ラクタム（合成例４、工程１）を、実施例１、工程２に記載の方法に従って 、試薬と溶媒の比率量を用いて、還元する。 収率：１．７４ｇ（６４％）． Ｒ_f(6)＝０．４２． ＥＳＩマススペクトルは、仮説の構造（６０１［Ｍ＋Ｈ］⁺）を確認する。工程３： エトキシカルボニル−３−シクロペンチル−ＤＬ−アラニル−Ｌ−プロ リル−Ｌ−アルギニン アルデヒド ヘミスルフェート １．２ｇ（２．０ミリモル）のエトキシカルボニル−３−シクロペンチル−Ｄ Ｌ−アラニル−Ｌ−プロリル−Ｎ^G−ベンジロキシカルボニル−Ｌ−アルギニン アルデヒド（合成例４、工程２）を、実施例１、工程３に記載の方法に従って、 試薬と溶媒の比率量を用いて、処理する。 収率：０．８ｇ（７８％）． ＨＰＬＣ（１）：ｋ’＝３．９６；４．４及び４．９２．ＦＡＢマススペクトル は、仮説の構造（４６７［Ｍ＋Ｈ］⁺、６２０[Ｍ＋Ｈ＋ＮＢＡ]⁺）を確認する。 出発物質は、次のようにして製造できる。エトキシカルボニル−３−シクロペンチル−ＤＬ−アラニル−Ｌ−プロリン （Eoc-DL-Cpa-Pro） 工程Ａ： エトキシカルボニル−３−シクロペンチル−ＤＬ−アラニル−Ｌ−プロ リン ３．１ｇ（１３．５ミリモル）のエトキシカルボニル−３−シクロペンチル− ＤＬ−アラニン（実施例４、工程Ａ）を、実施例１、工程Ｅに記載の方法に従っ て、試薬と溶媒の比率量を用いて、処理すると、油状の２，４，５−トリクロロ フェニルエステルが得られ、それを、Ｌ−プロリンと結合する。 収率：３．１ｇ（７４％）． Ｒ_f(6)＝０．５０． ＥＳＩマススペクトルは、仮説の構造（３２７［Ｍ＋Ｈ］⁺）を確認する。 合成例５エトキシカルボニル−ＤＬ−シクロブチル−グリシル−Ｌ−プロリル−Ｌ−アル ギニン アルデヒド(Eoc-DL-Cbg-Pro-Arg-H)ヘミスルフェート １．２ｇ（３．０ミリモル）のｔ−ブトキシカルボニル−Ｎ^G−ベンジロキシ カルボニル−Ｌ−アルギニン ラクタム[S.Bajusz等のJ.Med.Chem.33.1729(199 0)]及び０．６９ｇ（２．３ミリモル）のエトキシカルボニル−ＤＬ−シクロブ チル−グリシル−Ｌ−プロリン（合成例５、工程Ａ）を用いて、これら成分を各 ブロック化トリペプチドラクタム［Rf(1)＝０．３２］と結合し、ブロック化ト リペプチドアルデヒド［Rf(9)＝０．５３］に還元し、脱ブロック化することを 、実施例１、工程１、２、３に従って、試薬と溶媒の比率量を用いて行う。 収率：０．２２ｇ． ＨＰＬＣ（１）：ｋ’＝２．７４；２．９６及び３．４１． ＦＡＢマススペクトルは、仮説の構造（４３９［Ｍ＋Ｈ］⁺、５９２[Ｍ＋Ｈ＋Ｎ ＢＡ]⁺）を確認する。 出発物質は、次のようにして製造できる。エトキシカルボニル−ＤＬ−シクロブチル−グリシル−Ｌ−プロリン （Eoc-DL-Cbg-Pro） 工程Ａ： エトキシカルボニル−ＤＬ−シクロブチル−グリシル−Ｌ−プロリン ０．７８ｇ（６．０ミリモル）のＤＬ−シクロブチル−グリシン[T.H.Porter 等のArch.Biochem.Biophys，179，266(1977)]を、アシル化し［Ｒ_f(7)＝０．６ ０］、２，４，５−トリクロロフェノール［Rf(4)＝０．８４］と反応させ、実 施例１、工程ＡとＥに記載の方法に従って、試薬と溶媒の比率量を用いて、Ｌ− プロリンと結合する。 収率：０３．６８ｇ（５０％）の油． Ｒ_f(2)＝０．１７及び０．２２． ＦＡＢマススペクトルは、仮説の構造（２９９［Ｍ＋Ｈ］⁺）を確認する。 方法方法Ｍ１ ヒト血小板からの血餅の製造 ａ）血小板−富裕血漿が、ヒト血液と３．８％クエン酸ナトリウム溶液の９：１ の混合物を５分間２４０×ｇで遠心分離処理にかけることにより製造される。 ｂ）２００μｌの血小板−富裕血漿と８０μｌの４０ｍＭ ＣａＣｌ₂溶液を室 温に１時間放置する。このように形成された血餅を、ゆっくりと撹拌しながら、 ６×２mlの０．９％ＮａＣｌ溶液で洗浄し、残渣の酵素（トロンビン及び因子Ｘ ａ）を除去する。洗浄媒体を、トロンビン様の活性のために次のようにアッセイ 処理する。 ｃ）４００μｌの洗浄媒体に対して、１００μｌの１ｍＭ Ｔｏｓ−Ｇｌｙ−Ｐ ｒｏ−Ａｒｇ−ｐＮＡ基体溶液を添加し、その混合物を、３０分間３７℃で培養 し、次に、反応は、１００μｌの５０％酢酸により停止される。この混合物から 、１５０μｌのアリコートを、９６−井のマイクロ滴定皿上に適用し、吸光係数 を、４０５ｎｍで測定した[ELISA READER SLIT Laborinstrument GmbH,オースト リア）。洗浄する効率の場合、吸光係数が、対照のものの５％より小さい。方法Ｍ２ 血餅結合因子Ｘａの抑制性の測定 ａ）０．１−１．０−１０及び１００μｇ／mlの溶液が、０．０２％ヒトアルブ ミンを含有する０．１Ｍトリス−緩衝液（ｐＨ＝８．５）中のペプチド抑制子か ら製造される。 ｂ）洗浄媒体（方法Ｍ１）を引き出した後に、４００μｌのペプチド溶液（各濃 度で３つの試料）を、血餅に添加し、対照物としての４００μｌの緩衝液ともに 、５分間、３７℃で培養する。次に、１００μｌの２ｍＭのＭｏｃ−Ｄ−Ｃｈｇ −Ｇｌｙ−Ａｒｇ−ｐＮＡ基体を、各容器に添加し、更に、３０分間、３７℃で 培養する。反応は、１００μｌの５０％ＡｃＯＨで停止される。 ｃ）各反応溶液から、１５０μｌを、９６−井のマイクロ滴定皿に適用し、吸光 係数を、４０５ｎｍで測定した（ELISA READER SLT Laborinstrument GmbH、オ ーストリア）。ＩＣ₅₀（５０％抑制に必要なペプチド濃度）を、参照と比較して 平均吸光性からグラフ的に測定する。方法Ｍ３ 血餅結合の血栓症抑制性の測定 ａ）溶液は、方法Ｍ２／ａに従って、ペプチド抑制子から作成される。 ｂ）洗浄媒体を取り出した後に、血餅（方法Ｍ１）を、４００μｌのペプチド溶 液（各濃度で３つの試料）と混合し、次に、試料を、参照としての別の４００μ ｌの緩衝液と一緒に、５分間、３７℃で培養する。次に、１００μｌの１ｍＭの Ｔｏｓ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−ｐＮＡ基体溶液を添加し、培養を更に、３０ 分間３７℃で継続する。 実験は、Ｍ２／ｃに従って、継続される。方法Ｍ４ フィブリン血餅の製造 ａ）各反応容器に、２００μｌのヒトフィブリノゲン（ＳＩＧＭＡ）、２５μｌ の２５ＮＩＨ／Ｅ／ｍｌヒトトロンビン（ＳＩＧＭＡ）及び４０μｌの１００ｍ Ｍ ＣａＣｌ₂溶液を入れて、混合物を、１時間２０〜２２℃に放置する。フィ ブリン血餅を、ゆっくりと撹拌しながら、等浸透性のＮａＣｌ溶液（３×２ml） で洗浄し、微量のトロンビンおよび５分間で沈殿したものを除去する。洗浄の呼 応率は、方法Ｍ１／ｃによりチェックする。方法Ｍ５ フィブリン血餅結合性の抑制性の測定 ａ）０．１−１．０−１０及び１００μｇ／mlの溶液を、ペプチド抑制子から、 Ｈｅｐｅｓ／ＮａＣｌ緩衝液（０．００１Ｍ Ｈｅｐｅｓ及び０．１ＭのＮａＣ ｌ、ｐＨ＝７．４）とともに作製する。 ｂ）測定は、Ｍ３／ｂにより継続される。方法Ｍ６ ９６−井 微量滴定血小板上の溶解の因子Ｘａ抑制性の測定 ａ）燐酸塩緩衝液（０．１Ｍ燐酸ナトリウム及び０．０５Ｍ塩化ナトリウム、ｐ Ｈ＝７．４）により、１．３Ｅ／ml溶液を、ヒト因子Ｘａ（ＳＩＧＭＡ）から製 造され、そして、０．１−１．０−１０及び１００μｇ／ml溶液は、ペプチド抑 制子から製造される。Ｂｚ−ＩＩｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ａｒｇ−ｐＮＡ基体を 、分留水溶液（０．３３ｎＭ）中で使用する。 ｂ）参照と各ペプチド抑制子溶液（各々の濃度で３つの試料）から、３０−３０ μｌの部分を、井の中に入れる。３０μｌの因子Ｘａ、９０μｌの緩衝液及び１ ５０μｌの基体を、ペプチド溶液に添加し、そして、その吸光係数を、１０分間 、４０５ｎｍにおいて、測定する。その後は、工程は、Ｍ２／ｃと同じものであ る。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，Ｌ Ｕ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ， ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，Ｓ Ｄ，ＳＺ，ＵＧ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ ，ＡＺ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ， ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，Ｈ Ｕ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ， ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，Ｒ Ｏ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＪ，ＴＭ ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ (72)発明者 バラバーシュ，エーヴァ ハンガリー共和国 ハー―1025 ブダペス ト プスタセリ ウート ６ (72)発明者 フェヘール，アンドラーシュ ハンガリー共和国 ハー―1118 ブダペス ト ティーズケー ウッツァ ６ (72)発明者 サボー，ガブリエラ ハンガリー共和国 ハー―1132 ブダペス ト ヴァーツィ ウート ８ (72)発明者 セール，エルジェーベト ハンガリー共和国 ハー―1106 ブダペス ト ヘヴェシュ ウッツァ 64 (72)発明者 ヴェークヘユイ，イレーン ハンガリー共和国 ハー―1021 ブダペス ト ラバンツ ウッツァ ６／ベー (72)発明者 ラヴィツ，エミリア ハンガリー共和国 ハー―1150 ブダペス ト フランコヴィチェ エム ウッツァ 33 (72)発明者 カサーシュ，エーヴァ ハンガリー共和国 ハー―1045 ブダペス ト ニャール ウッツァ 69 (72)発明者 ランゴー，ヨージェフ ハンガリー共和国 ハー―1031 ブダペス ト アムフィテアートルム ウッツァ 11 (72)発明者 モラヴチク，イムレ ハンガリー共和国 ハー―1095 ブダペス ト メシュテル ウッツァ 38 (72)発明者 セケル，アーグネシュ ハンガリー共和国 ハー―1041 ブダペス ト デアーク エフ ウッツァ 81 (72)発明者 タシュツレル，ジュジャンナ ハンガリー共和国 ハー―1031 ブダペス ト アムフィテアートルム ウッツァ 27 (72)発明者 トート，ガーボル ハンガリー共和国 ハー―1163 ブダペス ト ヴェレシュペー ウッツァ 74 (72)発明者 モハイ，ジュジャンナ ハンガリー共和国 ハー―1173 ブダペス ト バラートゥカ ウッツァ 48 (72)発明者 サルカイ，アンナ マーリア ハンガリー共和国 ハー―1151 ブダペス ト セドゥリゲト ウッツァ 10 (72)発明者 マック，クラーラ ハンガリー共和国 ハー―2623 キシュマ ロシュ リゲト ウッツァ 26

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．一般式（Ｉ） Ｑ−Ｄ−Ｘａａ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｈ （Ｉ） （式中、Ｑは、式Ｑ’−Ｏ−ＣＯ−のアシル基を示し、その式中のＱ’は、１〜 ３個の炭素原子のアルキル基を示す、Ｄ−Ｘａａは、３−シクロブチル−Ｄ−ア ラニル−或いは３−シクロペンチル−Ｄ−アラニル基であり、Ｐｒｏは、Ｌ−プ ロリル基であり、そして、Ａｒｇは、Ｌ−アルギニル基である）の新規なペプチ ジル−アルギニン アルデヒド誘導体、およびその有機酸或いは無機酸と形成さ れる酸付加塩。 ２．エトキシカルボニル−３−シクロブチル−Ｄ−アラニル−Ｌ−プロリル−Ｌ −アルギニン アルデヒドおよびその酸付加塩。 ３．メトキシカルボニル−３−シクロブチル−Ｄ−アラニル−Ｌ−プロリル−Ｌ −アルギニン アルデヒドおよびその酸付加塩。 ４．エトキシカルボニル−３−シクロペンチル−Ｄ−アラニル−Ｌ−プロリル− Ｌ−アルギニン アルデヒドおよびその酸付加塩。 ５．メトキシカルボニル−３−シクロペンチル−Ｄ−アラニル−Ｌ−プロリル− Ｌ−アルギニン アルデヒドおよびその酸付加塩。 ６．活性成分として、少なくとも１つの一般式（Ｉ）の化合物（Ｑ、Ｄ−Ｘａａ 、ＰｒｏおよびＡｒｇの意味は、請求項１に記載のものである）或いは、その製 薬上許容される酸付加塩を、製薬工業上で一般的に使用される担体および／或い は添加剤と混合されたことを特徴とする製薬学的組成物。 ７．Ｑ、Ｄ−Ｘａａ、ＰｒｏおよびＡｒｇの意味は、請求項１に記載であるもの の一般式（Ｉ）の薬剤としての用途の一般式（Ｉ）の化合物。 ８．Ｑ、Ｄ−Ｘａａ、ＰｒｏおよびＡｒｇの意味は、請求項１に記載であるもの の一般式（Ｉ）の、血栓症および／或いは血閉塞を治療および予防するための薬 剤としての用途の一般式（Ｉ）の化合物。