【発明の詳細な説明】
オリゴヌクレオチド合成用中間体
本発明はオリゴヌクレオチド用中間体である化学化合物およびそのような化合
物のオリゴヌクレオチド調製における使用に関する。
従って、本発明はその一側面において、式
［式中、Ｂ1はヌクレオシド塩基の基であり、Ｒ1は水素またはヒドロキシ保護基
であり、Ｒ2は水素、ヒドロキシまたは２'ヌクレオシド修飾原子もしくは基であ
り、Ｒ3は置換もしくは非置換Ｃ1〜Ｃ10アルキル、Ｃ2〜Ｃ10アルケニル、Ｃ4〜
Ｃ10シクロアルキルアルキル、Ｃ6〜Ｃ10アリールまたはＣ7〜Ｃ13アラルキル基
であり、Ｚはハロゲンまたは式II
(式中、Ｒ4およびＲ5はそれぞれ独立に置換もしくは非置換Ｃ1〜Ｃ10アルキル、
Ｃ2〜Ｃ10アルケニル、Ｃ4〜Ｃ10シクロアルキルアルキル、Ｃ6〜Ｃ10アリール
またはＣ7〜Ｃ13アラルキル基であるか、またはＲ4が当該基であって、Ｒ5が水
素であるか、またはＲ4およびＲ5はそれらが結合する窒素原子と共に５員環ない
し１３員環のヘテロ環を表わす)で示される基であるか、またはＺは式
(式中、Ｎｕｃは５'ヒドロキシ基を除いた後の天然もしくは合成ヌクレオシドま
たはオリゴヌクレオチド残基であり、その５'メチレンを介して表示した酸素原
子に結合している)で示される基である］
で示される化合物を提供する。
Ｒ3、Ｒ4またはＲ5が置換されたアルキル、アルケニル、シクロアルキルアル
キル、アリールまたはアラルキル基を表わすとき、当該基は、好ましくは、ハロ
ゲン、ヒドロキシ、Ｃ1〜Ｃ4アルコキシ、シアノ、ニトロまたはトリ(Ｃ1〜Ｃ15
ヒドロカルビル)シリル、またはＲ3の場合には、Ｃ1〜Ｃ4アルキルスルホニルま
たはＣ6〜Ｃ10アリールスルホニルにより置換されている。
トリ(Ｃ1〜Ｃ15ヒドロカルビル)シリル基が式Ｉの化合物に存在するとき、該
基は、例えば、トリメチルシリル、トリエチルシリル、トリ−ｎ−プロピルシリ
ル、トリ−イソプロピルシリル、トリ−ｎ−ブチルシリル、トリ−イソブチルシ
リル、イソプロピルジメチルシリル、tert−ブチルジメチルシリルまたは１,１,
２,２−テトラメチルエチルジメチルシリル(テキシルジメチルシリル)などのト
リアルキルシリル；トリフェニルシリルなどのトリアリールシリル；トリベンジ
ルシリルなどのトリアリールアルキルシリル；フェニルジメチルシリル、フェニ
ルジエチルシリル、フェニルジイソプロピルシリルまたはフェニル・ジ−tert−
ブチルシリルなどのアリールジアルキルシリル；またはメチルジフェニルシリル
、イソプロピルジフェニルシリルまたはtert−ブチルジフェニルシリルなどのア
ルキルジアリールシリルである。Ｒ3,Ｒ4またはＲ5がトリ(Ｃ1〜Ｃ15ヒドロカル
ビル)シリル置換基を有する場合、該基は、好ましくは、トリ(Ｃ1〜Ｃ4ヒドロカ
ルビル)シリル、とりわけ、トリメチルシリルである。トリ(Ｃ1〜Ｃ15ヒドロカ
ルビル)シリルとしてのＲ1は、好ましくは、Ｃ1〜Ｃ6アルキルジ(Ｃ6〜Ｃ8アリ
ール)シリル、とりわけ、tert−ブチルジフェニルシリル、または分枝Ｃ2〜Ｃ10
アルキル ジ(Ｃ1〜Ｃ4アルキル)シリル、とりわけ、テキシルジメチルシリルで
ある。
Ｒ1は望ましくない反応に対して５'−ヒドロキシ基を保護し得る如何なるヒド
ロキシ保護基であってもよい。そのような基は周知であり、Ｃ1〜Ｃ10脂肪族、
例えば、アルキル基；Ｃ3〜Ｃ8脂環式、例えば、シクロアルキル基；Ｃ6〜Ｃ10
芳香族、例えば、アリール基；Ｃ7〜Ｃ40芳香脂肪族、例えば、アラルキルまた
はＣ1〜Ｃ4−アルコキシ置換アラルキル基；式−ＣＯＲまたは−ＳＯ2Ｒ(式中、
ＲはＣ1〜Ｃ10脂肪族基、Ｃ3〜Ｃ8脂環式基、Ｃ6〜Ｃ10芳香族基またはＣ7〜Ｃ4 0
芳香脂肪族基；およびトリ(Ｃ1〜Ｃ15ヒドロカルビル)シリル基を包含する。好
ましいＲ1は水素またはオリゴヌクレオチドの合成に常用される５'−保護基であ
り、より好ましくは、水素、Ｃ7〜Ｃ40芳香脂肪族基またはトリ(Ｃ1〜Ｃ15
ヒドロカルビル)シリル基、とりわけ、メトキシトリチル、ジメトキシトリチル
またはトリスtert−ブチルトリチルなどの置換もしくは非置換トリフェニルメチ
ル基、またはtert−ブチルジフェニルシリルなどのＣ1〜Ｃ6アルキルジ(Ｃ6〜Ｃ8
アリール)シリル基、特に、ジメトキシトリチルまたはtert−ブチルジフェニル
シリルである。
２'ヌクレオシド修飾原子または基であるＲ2、すなわち、水素原子またはヒド
ロキシ基の代わりにヌクレオシドの２'位置に結合することのできる原子または
基は、フッ素、塩素または臭素原子などのハロゲン原子；メチル、トリフルオロ
メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、オクチルまたはデシ
ルなどのＣ1〜Ｃ10非置換アルキル；フェニル、トリルまたはキシリルなどのＣ6
〜Ｃ10アリール；ベンジルなどのＣ7〜Ｃ13アラルキル；アミノ；メチルアミノ
、エチルアミノまたはオクチルアミノなどのＣ1〜Ｃ10アルキルアミノ；メチル
チオ、エチルチオまたはオクチルチオなどのＣ1〜Ｃ10アルキルチオ；アチド；
硝酸塩；亜硝酸塩；シアン化物；シアン酸塩；メタンスルホン酸塩；Ｃ1〜Ｃ10
アミノアルキルアミノ；式−ＯＲ6または−ＯＣＯＲ6(式中、Ｒ6はＣ1〜Ｃ30有
機基である)で示される基；置換シリル；ＲＮＡ切断基；コレステリル基；接合
体；リポーター基；介在基(インターカレーター)；オリゴヌクレオチドの薬物動
態性を改善する基；またはオリゴヌクレオチドの薬力学的性質を改善する基であ
る。
好ましいＲ2は水素、ハロゲン、ヒドロキシまたは式−ＯＲ6または−ＯＣＯＲ6
(Ｒ6はメチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、tert−ブ
チル、ｎ−ペンチル、イソペンチル、ｎ−ヘキシル、ｎ−ヘプチル、ｎ−オクチ
ル、２−エチルヘキシル、ｎ−ノニルまたはｎ−デシルなどのＣ1〜Ｃ10アルキ
ル基；ビニル、アリル、メタリル、ブテニル、ペンテニル、ヘキセニル、ヘプテ
ニル、オクテニル、ノネニルまたはデセニルなどのＣ2〜Ｃ10アルケニル基；シ
クロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、メチルシクロ
ペンチル、シクロヘキシル、メチルシクロヘキシル、シクロヘプチルまたはシク
ロオクチルなどのＣ3〜Ｃ8シクロアルキル基；シクロプロピルメチル、シクロブ
チルメチル、シクロヘキシルメチル、メチルシクロヘキシルメチル、シクロ
ヘキシルエチルまたはジメチルシクロヘキシルエチルなどのＣ4〜Ｃ10シクロア
ルキルアルキル基；フェニル、オルト−、メタ−もしくはパラ−トリル、オルト
−、メタ−もしくはパラ−キシリルまたはナフチルなどのＣ6〜Ｃ10アリール基
；またはベンジル、フェニルエチル、ジフェニルメチルまたはトリフェニルメチ
ルなどのＣ7〜Ｃ25アラルキルであり、そのいずれの基も非置換であるか、例え
ば、ハロゲン、ヒドロキシ、Ｃ1〜Ｃ4アルコキシまたはシアノで置換されていて
もよく、あるいはＲ2が式−ＯＲ6のものである場合には、Ｒ6はトリ(Ｃ1〜Ｃ15
ヒドロカルビル)シリル基である)である。より好ましい態様において、Ｒ2は水
素、ヒドロキシ、フッ素、式−ＯＲ6(式中、Ｒ6はＣ1〜Ｃ4アルキル基、Ｃ2〜Ｃ4
アルケニル基、Ｃ7〜Ｃ13アラルキル基または式−(Ｒ7−Ｏ)n−Ｒ8(式中、Ｒ7
はＣ1〜Ｃ4アルキレン基；Ｒ8はＣ1〜Ｃ4アルキル基；ｎは１〜８である)で示さ
れる基である)で示される基であるか、あるいはＲ2は式−ＯＣＯＲ6(式中、Ｒ6
はＣ1〜Ｃ4アルキルまたはＣ6〜Ｃ8アリールである)でしめされる基である。と
りわけ好ましい態様において、Ｒ2は水素、ヒドロキシ、フッ素、メトキシ、エ
トキシ、アリルオキシ、ベンジルオキシ、メトキシエトキシ、−Ｏ−(ＣＨ2ＣＨ2
Ｏ)3ＣＨ3'アセトキシまたはベンゾイルオキシである。
Ｃ1〜Ｃ10アルキルとしてのＲ3,Ｒ4またはＲ5は、例えば、メチル、エチル、
ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、tert−ブチル、ｎ−ペ
ンチル、イソペンチル、ｎ−ヘキシル、ｎ−ヘプチル、ｎ−オクチル、２−エチ
ルヘキシル、ｎ−ノニルまたはｎ−デシルなどの直鎖もしくは分枝した基である
。Ｃ2〜Ｃ10アルケニルとしてのＲ3,Ｒ4またはＲ5は、例えば、ビニル、アリル
、メタリル、ブテニル、ペンテニル、ヘキセニル、ヘプテニル、オクテニル、ノ
ネニルまたはデセニルなどである。Ｃ4〜Ｃ10シクロアルキルアルキルとしての
Ｒ3,Ｒ4またはＲ5は、例えば、シクロプロピルメチル、シクロブチルメチル、シ
クロペンチルメチル、シクロペンチルエチル、メチルシクロペンチルメチル、シ
クロヘキシルメチル、シクロヘキシルエチル、メチルシクロヘキシルメチル、メ
チルシクロヘキシルエチル、ジメチルシクロヘキシルメチルまたはジメチルシク
ロヘキシルエチルなどである。Ｃ6〜Ｃ10アリールとしてのＲ3,Ｒ4またはＲ5は
、例えば、フェニル、ｏ−トリル、ｍ−トリル、ｐ−トリル、ｏ−キシリル、ｍ
−
キシリルまたはｐ−キシリルなどである。Ｃ7〜Ｃ13アラルキルとしてのＲ3,Ｒ4
またはＲ5は、例えば、ベンジル、フェニルエチルまたはジフェニルメチルなど
である。Ｒ3,Ｒ4またはＲ5としての上記の基のいずれもが上記のごとく置換もし
くは非置換であってよい。
Ｒ4およびＲ5が結合した窒素原子と共にヘテロ環を表わす場合、このヘテロ環
は、例えば、ピロリジンのような５−員環、ピペリジン、２,６−ジメチルピペ
リジン、Ｎ−メチルピペラジン、モルホリンまたはチオモルホリン環などの６−
員環、ペルヒドロアゼピン環などの７−員環、ペルヒドロアゾシン環などの８−
員環、ペルヒドロアゾニン環などの９−員環、ペルヒドロアゼシン環などの１０
−員環、アザシクロウンデカン環などの１１−員環、アザシクロドデカン環など
の１２−員環またはアザシクロトリデカン環などの１３−員環である。
Ｒ3は、好ましくは、置換もしくは非置換のＣ1〜Ｃ4アルキル、Ｃ3〜Ｃ5アル
ケニル、Ｃ6〜Ｃ8シクロアルキルアルキルまたはＣ7〜Ｃ9アラルキル基、とりわ
け、メチル、エチル、２−シアノエチル、２,２,２−トリクロロエチル、アリル
、ベンジルまたは２−(トリメチルシリル)エチルである。
式ＩのＺが式IIで示される基であるとき、好ましい態様において、Ｒ4および
Ｒ5は独立に置換もしくは非置換のＣ1〜Ｃ4アルキル、Ｃ3〜Ｃ5アルケニルＣ6〜
Ｃ8シクロアルキルアルキルまたはＣ7〜Ｃ9アラルキルであるか、あるいはＲ4が
Ｃ1〜Ｃ4アルキル、好ましくは、イソプロピルまたはtert−ブチルなどの分枝Ｃ1
〜Ｃ4アルキル、またはベンジルなどのＣ7〜Ｃ9アラルキルであり、Ｒ5が水素
であるか、あるいはＲ4およびＲ5が結合した窒素原子と共に環内に１または２個
のヘテロ原子を有する５−員環もしくは６−員環のヘテロ環を表わす。とりわけ
好ましい態様において、Ｒ4およびＲ5は独立にメチル、エチル、ｎ−プロピル、
イソプロピル、ｎ−ブチル、sec−ブチル、イソブチル、tert−ブチル、アリル
またはベンジルであるか、あるいはＲ4およびＲ5が結合した窒素原子と共にピロ
リジン、ピペリジンまたはモルホリン環を表わす。
式ＩのＺが式IIIの基であるとき、該残基Ｎｕｃは５'ヒドロキシ基を除去した
後の天然もしくは合成ヌクレオシド残基であり、例えば、アデノシン、シチジン
、グアノシン、チミジン、ウリジン、２−アミノアデノシン、６−Ｎ−ベンジル
ア
デノシン、５−Ｎ−メチルシチジン、４−Ｎ−ベンゾイルシチジン、５−プロピ
ニルシチジン、２−Ｎ−イソブチリルグアノシン、Ｎ−ベンジルオキシメチルチ
ミジンまたは５−フルオロウラシルなど、あるいはそれから誘導されるジヌクレ
オチド、トリヌクレオチドまたは高次オリゴマーであるオリゴヌクレオチドであ
り、天然の連鎖、すなわち、ホスホロチオエートまたはメチルホスホネートなど
のリン酸ジエステル、ヌクレオシド間連鎖またはその合成類似体、あるいはその
ようなヌクレオシド間連鎖のＰ(III)前駆体である。
式ＩのＢ1は天然産ヌクレオシドに見出される塩基由来の基であり、例えば、
窒素原子上に保護基が置換もしくは非置換したものであってもよく、該保護基は
、例えば、アセチルのどの脂肪族アシル基、ベンゾイルまたはニトロベンゾイル
などの芳香族アシル基、またはベンジルオキシメチルなどのアラルキルオキシア
ルキル保護基により置換されたもの、あるいはそのような塩基の合成類似体であ
る。ヌクレオチド化学で常用され、Ｂ1の窒素原子上に存在してもよい他の型の
保護基は、Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミジン、Ｎ,Ｎ−ジメチルアセトアミジンお
よびＮ−メチルピロリジン・アミジン基などのアミジン基、およびアミノ基をカ
ルバメート基に変換するtert−ブトキシカルボニルなどのアルコキシカルボニル
基を包含する。
このように、Ｂ1はプリンまたはピリミジン由来の基であって、例えば、アデ
ニン、グアニン、シトシン、チミンまたはウラシル、あるいはそれら塩基の類似
体、例えば、２−アミノアデニン、６−ヒドロキシプリン、５−メチルシトシン
、５−プロピニルシトシン、５−フルオロウラシル、５−プロピニルウラシルま
たはジヒドロウラシル、あるいは、そのような基が窒素原子上に、例えば、上記
のごとき保護基を置換した基である。
Ｚが式IIIの基である場合の確かな好ましい態様において、Ｎｕｃとは上記の
ごときヌクレオシドまたはオリゴヌクレオチドの残基であり、その末端３'位置
が固相オリゴヌクレオチド合成に用いられる支持体などの固形支持体、例えば、
長鎖アルキルアミノ基を有する制御多孔性ガラス(ＣＰＧ)などの不活性シリカ−
ベース支持体にスクシニル基のようなリンカーを介して結合している。固形支持
体はまた、支持体上で合成するオリゴヌクレオチドに対して３'末端修飾基とし
て作用する基を有していてもよい。
本発明化合物は可能な異性体の１つの形態、例えば、ジアステレオ異性体、光
学異性体、そのラセミ化合物もしくは混合物としての形態でもよい。式Ｉの化合
物の好ましい異性体は式IVの化合物である。
（式中、Ｂ1,Ｒ1,Ｒ2およびＲ3は前記定義のとおりである）
式Ｉのとりわけ好ましい特定化合物は後記実施例記載の化合物である。
Ｚが式IIの基である場合の式Ｉの化合物は、Ｚがハロゲンである場合の式Ｉの
化合物、すなわち、式
(式中、Ｂ1,Ｒ1,Ｒ2およびＲ3は前記定義のとおりであり、Ｙはハロゲンである)
で表わされる化合物と式
(式中、Ｒ4およびＲ5は前記定義のとおりである)で表わされる化合物とを反応さ
せることにより調製される。この反応は有機溶媒、例えば、クロロホルムなどの
ハロゲン化炭化水素中、ピリジンなどの第三級窒素塩基の存在下に−７８℃ない
し５０℃の温度、好ましくは、−３０℃ないし２５℃で実施することができる。
式Ｖの化合物は、式VIIの化合物を非酸化的にハロゲン化することにより調製
することができる。
（式中、Ｂ1,Ｒ1,Ｒ2およびＲ3は前記定義のとおりである）
非酸化的ハロゲン化反応は、式VIIの化合物と非酸化的ハロゲン化試薬、例えば
、トリフェニルジクロロホスホランまたはジクロロトリス(２,４,６−トリブロ
モフェノキシ)ホスホランなどのハロホスホランとを塩基、好ましくは、ピリジ
ンなどの第三級窒素塩基の存在下に、有機溶媒(ピリジンでもよいが、好ましく
は、クロロホルムなどのハロ炭化水素)中、−２０℃ないし６０℃の温度、好ま
しくは０℃ないし５０℃で実施することができる。
式VIの化合物は市販品として入手可能であるか、既知手法により調製すること
ができるアミンである。
式VIIの化合物およびその調製法はＷＯ９６／０８５０３に記載されている。
Ｚが式IIIで示される基である場合の式Ｉの化合物は、Ｒ1がヒドロキシ保護基
であり、Ｚが式IIで示される基である場合の式Ｉの化合物と、遊離の５'ヒドロ
キシ基を有する天然もしくは合成ヌクレオシドまたはオリゴヌクレオチド(１つ
またはそれ以上のＰ(III)前駆体分子内ヌクレオシド連鎖をもつオリゴヌクレオ
チドを包含する)と反応させることにより調製することができる。反応は溶液中
または上記のように固体担体に結合させたヌクレオシドまたはヌクレオチドで実
施することができる。該反応は、通常のオリゴヌクレオチド合成において、３'
ホスホラミダイト基含有ヌクレオシドと遊離５'ヒドロキシ基含有ヌクレオシド
もしくはオリゴヌクレオチド間のカップリング反応として知られる条件下および
手法を用いて実施可能であることが見出されている(例えば、‘Oligonucleotide
s and Analogues，A Practical Approach’ed．F．Eckstein，IRL Press，1991
参照)。
このように、Ｚが式IIで示される基である場合の式Ｉの化合物は、テトラゾー
ルまたは５−(４−ニトロフェニル)テトラゾールなどのアミン−プロトン化カッ
プリング触媒(活性化剤)の存在下にヌクレオシドまたはオリゴヌクレオチドと反
応させ、Ｚが式IIIで示される基である式Ｉの化合物を生成させることができる
。この反応は−２０℃ないし５０℃、好ましくは室温で実施することができる。
Ｚが式IIIで示される基である場合の式Ｉの化合物は、Ｎｕｃのオリゴヌクレ
オチド残基よりも多いヌクレオシド単位を有するオリゴヌクレオチドの調製用中
間体である。従って、本発明は、式
(式中、Ｂ1,Ｒ1,Ｒ3およびＮｕｃは前記定義のとおりであり、Ｘは酸素またはイ
オウである)で示される化合物の製造法をも提供し、その要旨はＺが式IIIで示さ
れる基である式Ｉの化合物を酸化反応に付し、Ｘが酸素である式VIIIのオリゴヌ
クレオチドを形成するか、または硫化反応に付し、Ｘがイオウである式VIIIのオ
リゴヌクレオチドを形成することを特徴とする。
式ＩにおいてＺが式IIIの基である化合物の酸化または硫化反応は、亜リン酸
エステル・ヌクレオシド間の連鎖をそれぞれ酸化または硫化するために用いる方
法により実施することができる。従って、式ＩにおいてＺが式IIIの基である化
合物の酸化反応は、例えば、オリゴヌクレオチド合成において亜リン酸エステル
・ヌクレオシド間の連鎖を酸化する反応として知られる条件および手法を用い、
ヨードおよび水で処理するか、またはtert−ブチルヒドロペルオキシドなどのヒ
ドロペルオキシドで処理することにより実施することができる。式ＩにおいてＺ
が式IIIの基である化合物の硫化反応は、例えば、オリゴヌクレオチド合成にお
いて亜リン酸エステル・ヌクレオシド間の連鎖を硫化する反応として知られる手
法を用い、有機溶媒(通常、二硫化炭素)中三級アミンの存在下にイオウで処理す
るか、[３Ｈ]１,２−ベンゾジチオール−３−オン−１,１−ジオキシド(ビュー
ケイジ(Beaucage)試薬)で処理するか、またはテトラエチルチウラムで処理する
ことにより実施する。酸化反応、硫化反応とも一般に室温で実施する。
従って、本発明は、他の側面において、保護された５'ヒドロキシ基と３'位に
式
(式中、Ｒ3,Ｒ4およびＲ5は上記定義のとおりである)で示される基を有するヌク
レオシドを、遊離の５'ヒドロキシ基を有する天然もしくは合成ヌクレオシド
またはオリゴヌクレオチドとのヌクレオシド・カップリング反応に付し、式(式
中、Ｒ3は上記定義のとおりである)で示されるヌクレオシド間の連鎖を有するオ
リゴヌクレオチド前駆体を形成させ、該前駆体を式
(式中、Ｒ3は上記定義のとおりであり、Ｘは酸素またはイオウである)で示され
るヌクレオシド間の連鎖を有するオリゴヌクレオチドに変換するが、その場合、
該前駆体を酸化することにより式ＸＩにおいてＸが酸素であるヌクレオシド間連
鎖を有するオリゴヌクレオチドとし、また、該前駆体を硫化することにより式Ｘ
ＩにおいてＸがイオウであるヌクレオシド間連鎖を有するオリゴヌクレオチドと
することを特徴とするオリゴヌクレオチドの製造法を提供する。
３'位に式IXの基を有するヌクレオシド、遊離の５'ヒドロキシ基を有するヌク
レオシドまたはオリゴヌクレオチド、および当該反応を実施する方法はこれまで
に記述したとおりである。
Ｎｕｃが固形支持体に連結したヌクレオシドまたはオリゴヌクレオチドの残基
である式VIIIのオリゴヌクレオチドを処理して５'保護基Ｒ1を除去し、得られる
５'ヒドロキシ末端オリゴヌクレオチドを、所望の長さのオリゴヌクレオチドが
得られるまで、保護５'ヒドロキシル基を有し、３'位に固形支持体に連結した式
VIIIの脱保護ジヌクレオチド上の遊離５'ヒドロキシ基と反応し得る、あるいは
反応するように活性化されている基を有する天然もしくは合成ヌクレオシドまた
はオリゴヌクレオチドとの連続的カップリング反応に付す。このように、式VIII
のオリゴヌクレオチドを、３'ホスホラミダイト、Ｈ−ホスホネートまたはホス
ホジエステル基と保護５'ヒドロキシ基を有するヌクレオシドまたはオリゴヌク
レオチドとカップルさせるか、式ＩにおけるＺが式IIの基である化合物とカップ
ル反応させ、鎖長が延びたオリゴヌクレオチドを生じる。該鎖長延伸オリゴヌク
レオチドは、所望の長さのオリゴヌクレオチドが得られるまで、更なる代替反応
により次々に鎖長を延伸することができる。３'ホスホラミダイト、Ｈ−ホスホ
ネートまたはホスホジエステル基を有するヌクレオシドまたはオリゴヌクレオチ
ドを用いる場合、該カップリング反応はオリゴヌクレオチド合成において既知の
手法を用い実施することができる。式ＩにおいてＺが式IIの基である化合物を用
いる場合、該カップリング反応は上記のとおりに実施することができる。このよ
うに、３'ホスホラミダイトまたは式ＩにおいてＺが式IIの基である化合物を用
いる場合、カップリング・サイクルは酸化または硫化工程を伴うが、一方、３'
Ｈ−ホスホネートを用いる場合、酸化または硫化反応は鎖長延伸が完了して後に
実施し、３'ホスホジエステルを用いる場合、酸化反応は必要ない。
所望数のヌクレオシドを有するオリゴヌクレオチドが合成された段階で、該オ
リゴヌクレオチドは常用の方法、例えば、トリフルオロ酢酸のような水性有機酸
での処理によりジメトキシトリチル基などのヒドロキシ保護基を除去してもよい
。オリゴヌクレオチドを固形支持体上で合成した場合には、この処理は支持体か
ら該オリゴヌクレオチドを脱離する前または脱離した後に実施してもよい。脱離
は例えば濃アンモニア水での処理のような常法を用いて実施し得るが、この処理
に
際して、該オリゴヌクレオチドの合成に用いた１つまたはそれ以上のヌクレオシ
ドの環外窒素原子上に存在する保護基もまた除去される。脱保護により生成した
末端５'ヒドロキシルは、例えば、BeaucageおよびIyer,(Tetrahedron 49，1925
〜63(1993))により記載された手法を用い、リン酸基または他の５'修飾基などの
５'末端修飾基を導入するために反応させることができる。
本発明を以下の実施例により説明する。
各実施例の化合物およびその前駆体の式において、Ｅｔはエチル、Ｍｅはメチ
ル、Ｔは１−チミニル、ｔ−Ｂｕはtert−ブチル、Ｐｈはフェニル、そしてＤＭ
Ｔｒはジメトキシトリチルである。
各実施例に用いた化合物およびその前駆体は以下のように調製する。化合物Ａ この化合物はＷＯ９６／０８５０３の化合物８７であり、ＷＯ９６／０８５０３
の実施例８４に記載のとおりに調製する。化合物Ｂ 化合物Ａ(０.８５ｇ、１.２２mmol)を無水メタノール(１０ml)に溶かし、この
溶液にナトリウムメトキシド(４.４Ｎメタノール溶液１.５ml)を加える。室温で
１６時間かき混ぜた後、濃縮し、フラッシュ・シリカ・カラムクロマトグラフィ
ー(グラジエント溶出−クロロホルム、メタノール、トリエチルアミン １００
：２０：１〜１００：３５：１)により精製し、更に、生成物を水性０.５％トリ
エチルアミンの溶液としてダウエックス５０Ｗ−Ｘ２イオン交換カラム(トリエ
チルアミン型)を通して精製し、濃縮すると化合物Ｂを得る。31
Ｐｎｍｒ1Ｈデカップリング(ＣＤ3ＯＤ,１６２ＭＨｚ)δ２３.７ppm。化合物Ｃ この化合物はＷＯ９６／０８５０３の化合物８４であり、ＷＯ９６／０８５０
３の実施例８１に記載のとおりに調製する。化合物Ｄ 化合物Ｂ(５００mg、０.７１mmol)およびジシクロヘキシルカルボジイミド(１
８９mg、０.９２mmol)を乾燥ＴＨＦ(５.４ml)に溶かし、この溶液に３−ヒドロ
キシプロピオニトリル(５８μｌ、０.８５mmol)をアルゴン下室温で加える。得
られる溶液を５５℃で２時間加熱する。冷却後、混合物を濾過し、酢酸エチル(
２０ml)で希釈し、水および食塩水で洗浄し、Ｎａ2ＳＯ4で乾燥、濾過、濃縮す
る。得られる生成物をジクロロメタン(５ml)に採り、濾過、濃縮(この工程はジ
シクロヘキシル尿素を除去するために繰り返すことが必要)すると化合物Ｄが得
られるが、このものはリンにおけるジアステレオ異性体の混合物として単離され
る。
別途方法：化合物Ｂ(１２.３ｇ、１７.４mmol)およびジシクロヘキシルカルボ
ジイミド(３.９４ｇ、１９.１mmol)をＴＨＦ(１２０ml)に溶かし、この溶液にア
ルゴン下３−ヒドロキシプロピオニトリル(１.４２ml、２０.８mmol)を加え、得
られる混合物を６０℃で４時間加熱する。略半量まで濃縮し、等容量の酢酸エチ
ルで希釈し、濾過して生成する沈殿を除去する。有機層は濾過物を酢酸エチルで
洗浄後約２００mlとなるが、これを水(４ｘ８０ml)および飽和食塩水で洗浄し、
硫酸ナトリウム上乾燥し、濃縮する。得られる固形物をアセトニトリル(２００m
l)に再溶解し、ヘキサン(６ｘ５０ml)で抽出する。アセトニトリル層を次いで濃
縮し、高減圧下に乾燥すると化合物Ｄを得る。
実測値：Ｃ ６２.２％；Ｈ ５.９％；Ｎ ６.５％
Ｃ35Ｈ38Ｎ3Ｏ8Ｐ・Ｈ2Ｏとして計算値：Ｃ ６２.０５％；Ｈ ５.９５％；Ｎ
６.２％31
Ｐｎｍｒ1Ｈデカップリング(１６２ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3)δ３７.５、３７.３pp
m。化合物Ｅ この化合物はＷＯ９６／０８５０３の化合物１００であり、ＷＯ９６／０８５
０３の実施例９８に記載のとおりに調製する。化合物Ｆ 化合物Ｅ(０.４７ｇ、０.６０mmol)、ジシクロヘキシルカルボジイミド(ＤＣ
Ｃ)(０.１４８ｇ、０.７２mmol)およびトリエチルアミン塩酸塩(０.２４ｇ、１.
８mmol)を無水クロロホルム(３ml)に溶かし、この溶液にアルゴン下３−ヒドロ
キシプロピオニトリル(８１μｌ、１.２mmol)を加える。得られる混合物を６０
℃で４時間加熱する。次いで、この混合物を減圧下に濃縮し、酢酸エチル(５０m
l)に採り、濾過する。得られる澄明溶液を水(３ｘ２０ml)および食塩水(８ｘ２
０ml)で抽出する。硫酸ナトリウム上乾燥し、濾過、減圧下に濃縮するとＤＣＣ
を含む粗製生成物として得る。この粗製物をアセトニトリルに溶解し、ヘキサン
で繰り返し抽出することでＤＣＣを除去する。
実測値：Ｃ ６３.３５％；Ｈ ６.５０％；Ｎ ８.８０％
Ｃ40Ｈ46Ｎ5Ｏ7Ｐ・Ｈ2Ｏとして計算値：Ｃ ６３.４０％；Ｈ ６.４０％；Ｎ
９.２５％31
Ｐｎｍｒ1Ｈデカップリング(１６２ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3)δ３８.１、３７.４pp
m。化合物Ｇ 化合物Ｂ(１.０ｇ、１.４１mmol)をジクロロメタン(１５ml)に溶かし、この溶
液にアルゴン気流下５℃でトリエチルアミン(９８μｌ、０.７１mmol)を添加し
、次いで、メチルクロロホルメート(１４２μｌ、１.８４mmol)を滴下する。５
分後、溶液を室温に戻し、４５分間かき混ぜる。混合物をＣＨ2Ｃｌ2で希釈し、
水洗、乾燥(Ｎａ2ＳＯ4)し、濃縮する。フラッシュ・シリカ・カラムクロマトグ
ラフィー(溶出液：酢酸エチル：メタノール、１０：１)により精製すると、リン
におけるジアステレオマー混合物として化合物Ｇを得る。31
Ｐｎｍｒ1Ｈデカップリング(ＣＤＣｌ3、１６２ＭＨｚ)δ３７.３および３７.
化合物Ｈ トリアゾール(２０.７ｇ、０.３mol)を乾燥ピリジンとの共蒸発(４ｘ５０ml)
により注意深く乾燥し、次いで、ピリジン(８０ml)に溶かし、アルゴン下０℃に
冷却する。トリエチルアミン(４１.８ml、０.３mol)を加え、混合物をオキシ塩
化リン(６.８７ml、７５mmol)を添加しながらかき混ぜる。得られる溶液を０℃
で１５分間かき混ぜる。注意深く乾燥(３ｘ５０mlピリジンとの共蒸発)した化合
物８３(ＷＯ９６／０８５０３の化合物、ＷＯ９６／０８５０３の実施例８０に
記載のとおりに調製)(２０.６ｇ、３０mmol)をピリジン(５０ml)に溶かした溶液
を滴下する。得られる強い着色溶液を室温に戻す。１８時間後、混合物を濃縮し
、ＴＨＦ(３００ml)に溶解する。濃アンモニア(９０ml)を加え、混合物を室温で
１８時間かき混ぜる。濃縮し、フラッシュ・シリカ・カラムクロマトグラフィー
(グラジエント溶出、酢酸エチル＋１０％〜２５％メタノール)により精製すると
、リンにおけるジアステレオ異性体混合物として化合物Ｈを得る。31
Ｐｎｍｒ1Ｈデカップリング(ＣＤ3ＯＤ,１６２ＭＨｚ)δ５０.０および４９.
５ppm。化合物Ｊ 化合物Ｈ(７.８７ｇ、１１.５mmol)を乾燥ＴＨＦ(１１０ml)に溶かし、その溶
液にアルゴン下、トリエチルアミン(６.４ml、４５.９mmol)を添加し、得られる
溶液に塩化ベンゾイル(２.００ml、１７.２１mmol)を添加しながら−７０℃に冷
却する。この溶液を室温に戻し、一夜かき混ぜる。得られる混合物を部分的に濃
縮し、酢酸エチル中に溶解し、水で二度、次いで食塩水で一度洗浄する。この溶
液をＮａ2ＳＯ4上で乾燥し、濃縮して、フラッシュ・シリカ・カラムクロマトグ
ラフィー（グラジエント溶出、ヘキサン：酢酸エチル１：５〜純酢酸エチル)に
より精製すると、リンにおける２ジアステレオ異性体混合物として化合物Ｊを得
る。31
Ｐｎｍｒ1Ｈデカップリング(ＣＤＣｌ3、１６２ＭＨｚ)δ４７.０および４６.
８ppm。
実測値：Ｃ ６１.８５％；Ｈ ７.２５％；Ｎ ５.１０％
Ｃ42Ｈ56Ｏ8Ｎ3ＰＳｉ・３／２Ｈ2Ｏとして計算値：Ｃ ６１.７５％；Ｈ ７.
３０％；Ｎ ５.１５％化合物Ｋ 化合物Ｊ(１４.５ｇ、１８.３４mmol)を乾燥ＴＨＦ(１６０ml)を溶かし、その
溶液にフッ化テトラブチルアンモニウムのＴＨＦ溶液(２０.２ml、２０.２mmol)
をゆっくりと加える。その得られる溶液を室温で６時間かき混ぜ、黄色油状物を
生じるまで蒸発し、次いで、フラッシュ・シリカ・カラムクロマトグラフィー(
グラジエント溶出、酢酸エチル〜酢酸エチル：エタノール７：１)により精製す
ると、リンにおける２ジアステレオ異性体混合物として化合物Ｋを得る。31
Ｐｎｍｒ1Ｈデカップリング(ＣＤＣｌ3、１６２ＭＨｚ)δ４８.９および４８.
８ppm。
実測値：Ｃ ５５.６５％；Ｈ ７.００％；Ｎ ７.３５％
Ｃ26Ｈ38Ｏ8Ｎ3Ｐ・１／２Ｈ2Ｏとして計算値：Ｃ ５５.７０％；Ｈ ７.００
％；Ｎ ７.５０％化合物Ｌ 化合物Ｋ(２.４８ｇ、４.５０mmol)をトルエン(３ｘ２０ml)からの共蒸発によ
り注意深く乾燥する。次いで、室温、アルゴン下にジクロロメタン(４５ml)を加
え、更にエタノール(２.６２ml、４５mmol)を加える。得られる溶液をかき混ぜ
、塩化トリメチルシリル(５.６９ml、４５.０mmol)を添加しながら−１５℃に冷
却する。得られる混合物をアルゴンで十分に脱ガスし、ゆっくりと室温に戻す。
室温で６時間かき混ぜた後、混合物をジクロロメタンで希釈し、炭酸水素ナトリ
ウム溶液で二度洗浄し、Ｎａ2ＳＯ4上で乾燥、濃縮すると、リンにおける２ジア
ステレオ異性体混合物として化合物Lを得る。31
Ｐｎｍｒ1Ｈデカップリング(ＣＤＣｌ3、１６２ＭＨｚ)δ３５.５および３４.
２ppm。
実測値：Ｃ ５５.５％；Ｈ ６.１０％；Ｎ ９.７０％
Ｃ20Ｈ26Ｎ3Ｏ6Ｐとして計算値：Ｃ ５５.１５％；Ｈ ６.００％；Ｎ ９.６
５％化合物Ｍ 化合物Ｌ(４.７９ｇ、１１.０mmol)を乾燥ピリジンとの共蒸発(６ｘ５０ml)に
より注意深く乾燥し、次いで、ピリジン(８０ml)に溶かし、トリエチルアミン(
３.１ml、２２mmol)を加え、更に室温、アルゴン下で塩化ジメトキシトリチル(
４.１０ｇ、１２.１mmol)を加える。室温、１６時間後、混合物を濃縮し、−２
０℃で一夜貯蔵する。得られる固形物をＴＨＦ(５０ml)、トリエチルアミン(１
５ml)および水(１０ml)に溶解し、室温で７時間かき混ぜる。得られる混合物を
濃縮し、フラッシュ・シリカ・カラムクロマトグラフィー(グラジエント溶出、
酢酸エチル：トリエチルアミン５０：１〜酢酸エチル：メタノール：トリエチル
アミン５５：４５：２)により精製すると、化合物Ｍを得る。31
Ｐｎｍｒ1Ｈデカップリング(ＣＤＣｌ3、２０２ＭＨｚ)δ２２.４ppm。
実測値：Ｃ ６４.５％；Ｈ ６.６５％；Ｎ ６.４％
Ｃ45Ｈ55Ｎ4Ｏ8Ｐ・３／２Ｈ2Ｏとして計算値：Ｃ ６４.５％；Ｈ ６.９５％
；Ｎ ６.７％化合物Ｎ 化合物Ｎは、出発原料として化合物Ｂの代わりに化合物Ｍを用い、アセトニト
リル−ヘキサンによる分配を省略する以外は、化合物Ｄについて記載した代替方
法により調製する。31
Ｐｎｍｒ1Ｈデカップリング(ＣＤＣｌ3、１６２ＭＨｚ)δ３７.２および３６.
８ppm。
ＭＳ(ＦＡＢ)Ｍ／Ｚ ７６３(ＭＨ+)。実施例１ 慎重に乾燥した化合物Ｃ(４０mg、７０μmol)をピリジン(８０μｌ、１mmol)
含有ジュウテリオクロロホルム(０.５ml)に溶かした溶液に、ジクロロトリフェ
ニルホスホラン(１１３mg、３５０μmol)を加える。得られる混合物を振盪し、
該ホスホランを溶解させ、次いで常温に放置する。反応の進行を31Ｐｎｍｒによ
りモニターする。生成物である化合物１は２０１ppmで共鳴する。１６時間後、
追加のジクロロトリフェニルホスホラン(４５mg、１４０μmol)を加える。更に
２４時間後、31Ｐｎｍｒは反応が９５％終了していることを示す。ジイソプロピ
ルアミン(総量１５０μｌ、１.０７mmol)を−３０℃で粗製反応混合物に３０μ
ｌずつ加える。得られる混合物を室温に戻し、ジクロロメタン(２０ml)で希釈し
、脱イオン水(２ｘ１０ml)で二度洗浄し、乾燥（Ｎａ2ＳＯ4）後、濃縮する。フ
ラッシュ・シリカ・カラムクロマトグラフィー(グラジエント溶出、４：１〜２
：１ヘキサン−酢酸エチル)により精製すると、化合物２を２ジアステレオ異性
体の混合物として得る。31
Ｐｎｍｒ1Ｈデカップリング(ＣＤＣｌ3、１６２ＭＨｚ)δ１２３.０、１２２.
３。実施例２ 実施例１の手法を用い、化合物Ｄ(３０mg、４４μmol)を先ず化合物３に変換
し、次いで、実施例１で用いたジイソプロピルアミンをピロリジン(５６μｌ、
０.６７mmol)と置き換え、化合物４に変換する。実施例３
5'-TTT tTC TCT CTC TCT-3'(式中、ｔは化合物４から誘導されるヌクレオシド
単位を表わす)の配列を有するオリゴヌクレオチド１を標準固相ホスホラミダイ
ト・オリゴヌクレオチド合成法(Oligonucleotides and Analogues A Practical
Approach，ed．F．Eckstein，IRL Press 1991)により調製するが、ただし、合成
の適切な時点で通常の３'−ホスホラミダイト−置換ヌクレオシドの代わりに化
合物４を用い、結果として式ＩのＺが式IIIの基である化合物(式中、Ｎｕｃはオ
リゴヌクレオチドＴＣ ＴＣＴ ＣＴＣ ＴＣＴ残基を示す)を形成させ、次い
で標準的酸化工程において酸化して、式VIIIのＸが酸素であるオリゴヌクレオチ
ドとする；このオリゴヌクレオチドは更にカップリングしてオリゴヌクレオチド
１とする。実施例４ ビス(トリクロロメチル)カーボネート(１.０１ｇ、３.４０mmol)を乾燥ジクロ
ロメタン(１０ml)に溶かし、この溶液にトリフェニルホスフィン(２.６８ｇ、１
０.２１mmol)を乾燥ジクロロメタン(８ml＋７ml洗浄液)に溶かした溶液をアルゴ
ン気流下、攪拌、５℃で加える。この混合物を直ちに室温まで５分で昇温し、次
いでピリジン(１.２４ml)を添加し、混合物を完全に混合、５℃まで再冷却する
。得られる淡褐色溶液に化合物Ｄ(３.４５ｇ、５.１１mmol)のピリジン(１.２４
ml)含有乾燥ジクロロメタン(１０ml＋５ml洗浄液)溶液を加える。添加終了後、
溶液を室温まで昇温する。室温で１時間かき混ぜた後の混合物は化合物３(31Ｐ
ｎｍｒδ２０６.７ppm)を含んでいる。この混合物を−３０℃に冷却し、ジイソ
プロピルアミン(３.５７ml、２７mmol)を５分間で加える。混合物は１０分を要
して室温に戻し、次いで減圧下に半容量まで濃縮する。この溶液を直ちにフラッ
シュ・シリカクロマトグラフィーカラム(３００ｇ、シリカ)に移し、ヘキサン：
テトラヒドロフラン：トリエチルアミン(２５：２５：１)で溶出する。一部精製
物のフラクションを与える。不純フラクションは更にフラッシュ・シリカクロマ
トグラフィーに付し、ヘキサン：テトラヒドロフラン：ジクロロメタン：トリエ
チルアミン(２５：２５：１０：１)で溶出する。生成フラクションのすべてをプ
ールし、濃縮すると化合物５が白色泡状物として、また、リンにおけるジアステ
レオ異性体の混合物として単離される。
実測値：Ｃ ６６.２％；Ｈ ７.２５％；Ｎ ７.５％
Ｃ41Ｈ51Ｏ7Ｎ4Ｐとして計算値：Ｃ ６６.３％；Ｈ ６.９％；Ｎ ７.５５％31
Ｐｎｍｒ1Ｈデカップリング(１６２ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3)δ１２８.３、１２７.
８ppm。
Ｍ／Ｚ(ＥＳ+)７４３(Ｍ＋Ｈ)+
(ＥＳ-)７４１(Ｍ−Ｈ)- 実施例５ 化合物６および７を実施例４の方法に従って調製するが、ただし、化合物Ｄは
化合物Ｆに置き換える。反応は同じモル量の試薬を用い実施するが、濃度は半分
とする。調製の初期段階では、反応は１時間よりもむしろ２時間続行させて化合
物６(31Ｐｎｍｒδ２０５.７ppm)を生じる。最終処理では粗製物を２度水洗し、
濃縮し、フラッシュ・シリカ・カラムクロマトグラフィー(溶出液：酢酸エチル
／メタノール１０：１＋２％ Ｅｔ3Ｎ)により精製すると化合物７を２ジアス
テレオマーの混合物として得る。
実測値：Ｃ ６３.８５％；Ｈ ７.０５％；Ｎ ９.５５％
Ｃ46Ｈ59Ｎ6Ｏ6Ｐ・２Ｈ2Ｏとして計算値：Ｃ ６４.２５％；Ｈ ７.３５％；
Ｎ ９.８０％31
Ｐｎｍｒ1Ｈデカップリング(ＣＤＣｌ3、１６２ＭＨｚ)δ１２８.６、１２８.
１ppm。
Ｍ／Ｚ(ＥＳ+)８２３(ＭＨ+)実施例６ 化合物８および９を実施例４の方法に従って調製するが、ただし、化合物Ｄは
化合物Ｇに置き換える。調製の初期段階では化合物８(31Ｐｎｍｒδ２０７.７pp
m)を生じる。最終精製はフラッシュ・シリカ・カラムクロマトグラフィーを繰り
返し実施するが、先ず、ヘキサン／酢酸エチル２：１＋２％Ｅｔ3Ｎで溶出し、
次いで、ヘキサン／ジエチルエーテル１：３＋２％Ｅｔ3Ｎで溶出すると化合物
９を２ジアステレオマーの混合物として得る。31
Ｐｎｍｒ1Ｈデカップリング(ＣＤＣｌ3、２０２ＭＨｚ)δ１２８.８および１
２７.８ppm。
Ｍ／Ｚ(ＥＳ+)(７０４、７０５、７０６、ＭＨ+)
(ＥＳ-)(７０２、７０３、７０４、Ｍ−Ｈ-)実施例７ 化合物１０を実施例６の方法に従って調製するが、ただし、実施例６で用いた
ジイソプロピルアミンをジメチルアミンに置き換え、中間体化合物８をＴＨＦ中
ジメチルアミンの２.０モル溶液と反応させる。フラッシュ・シリカ・カラムク
ロマトグラフィー(溶出液：酢酸エチル／ヘキサン３：１＋２％Ｅｔ3Ｎ)による
最終精製で、化合物１０を２ジアステレオマーの混合物として得る。31
Ｐｎｍｒ1Ｈデカップリング(ＣＤＣｌ3、１６２ＭＨｚ)δ１４４.３および１
４４.２ppm。実施例８ 化合物１１および１２を実施例１０の方法に従って調製するが、ただし、化合
物Ｄは化合物Ｎに置き換える。この場合、最終生成物である化合物１２はフラッ
シュ・シリカ・カラムクロマトグラフィー(ヘキサン−ＴＨＦ−トリエチルアミ
ン５０：５０：１)で精製する。31
Ｐｎｍｒ1Ｈデカップリング(ＣＤＣｌ3、１６２ＭＨｚ)δ１２８.１および１
２７.６ppm。
ＭＳ(ＥＳ+)８４６、８４７、８４８(ＭＨ)+
(ＥＳ-)８４４、８４５、８４６(Ｍ−Ｈ)- 実施例９〜１５
以下の修飾オリゴヌクレオチドをホスホラミダイト法を用いる標準ＤＮＡ合成
技術により調製した。すべてのカップリング反応を二重カップリングにより実施
する；すなわち、オリゴヌクレオチド結合支持体を２〜３秒間ホスホラミダイト
溶液または修飾溶液に触れさせた後、該溶液をモノマー溶液の新鮮バッチと置き
換える。ホスホラミダイトとのカップリングの場合には、支持体を酸化またはチ
オ化(硫化)の前に洗浄する。式ＩのＺが式IIの基である修飾モノマー(ホスホラ
ミダイトとしても知られる)とのカップリングの場合には、支持体を洗浄せずに
直ちに酸化またはチオ化溶液に接触させる。この操作はPIII中間体結合支持体の
潜在的水解を最小限とする。
以下に示す修飾オリゴヌクレオチドのヌクレオチド配列において、Ｔ、Ｃ、Ａ
およびＧはそれらの通常の意味を有し、通常のホスホラミダイトモノマーから誘
導されるものであり、ｔは化合物５から誘導されるヌクレオチド単位を示し、ｃ
は化合物７から誘導されるヌクレオチド単位を示し、化合物５および化合物７は
合成の適切な時点で用いられる。硫化したヌクレオチド間連鎖はｓにより示され
る。他のすべてのヌクレオチド間連鎖は酸化される。実施例９
5' TTTTtCTCTCTCTCT 3'
ＴＯＦ ＭＳ 実測値＝
理論値＝４４２４.３実施例１０
5' tttttCTCTCTCTCT 3'
ＴＯＦ ＭＳ 実測値＝４４１５.３
理論値＝４４１５.９実施例１１
5' GCGttttttttttGCG 3'
ＴＯＦ ＭＳ 実測値＝４８５９.８
理論値＝４８６５実施例１２
5' TTTTTTTTTTTTTTTtttT 3'
ＴＯＦ ＭＳ 実測値＝５７０９.３
理論値＝５７１１.７実施例１３
5' ttctcGsCsCsCsGsCsTsCsCstcctcC 3'
ＴＯＦ ＭＳ 実測値＝６０８６.６
理論値＝７００１.５実施例１４
5' tstscstscsGsCsCsCsGsCsTsCsCstscscstscsC 3'
ＴＯＦ ＭＳ 実測値＝６２１４.５
理論値＝６２４６.１実施例１５
5' tstscstscsGsCsTsGsGsTsGsAsGstststscsA 3'
ＴＯＦ ＭＳ 実測値＝６０９２.９
理論値＝６１１４
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(81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ，
ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，Ｌ
Ｕ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ
，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，
ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，Ｓ
Ｄ，ＳＺ，ＵＧ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ
，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＵ，ＢＡ，ＢＢ
，ＢＧ，ＢＲ，ＣＡ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＥＥ，ＧＥ，
ＧＨ，ＨＵ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＰ，ＫＲ，ＬＣ，Ｌ
Ｋ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＶ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＸ，ＮＯ
，ＮＺ，ＰＬ，ＲＯ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＴＲ，ＴＴ，
ＵＡ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ
(72)発明者 アルトマン，カール―ハインツ
スイス、ツェーハー―4153ライナッハ、タ
ネンヴェーク５番
(72)発明者 ダグラス，マーク・エドワード
イギリス、エスケイ10・５ビーアール、チ
ェシャー、マックルズフィールド、ボーリ
ントン、カンバーランド・ドライブ17番