JP2000512862A

JP2000512862A - 置換三環式化合物を調製するのに有用な中間体の酵素的で動的な分割

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Publication number: JP2000512862A
Application number: JP11504496A
Authority: JP
Inventors: ブライアンモーガン，ウイリアム; リュ，ジンチュ
Original assignee: Schering Corp
Current assignee: Merck Sharp and Dohme LLC
Priority date: 1997-06-17
Filing date: 1998-06-15
Publication date: 2000-10-03
Anticipated expiration: 2018-06-15
Also published as: CA2293708A1; WO1998058073A1; JP3421355B2; AU8058398A; AR015892A1; CA2293708C; EP1002123A1; IN187248B; MY133532A; ZA985217B

Abstract

(57)【要約】本発明は、式((+)-Ｉ)の置換(6,11-ジヒドロ-5H-ベンゾ-[5,6]シクロヘプタ[1,2-b]ピリジン11-イル)ピペリジン化合物を調製するプロセスに関し、ここで：R、R¹、R²、R³およびR⁴は、独立して、水素、ハロ、C₁〜C₆アルキル、アミノ、-OCH₃、-OCF₃およびCF₃からなる群から選択され、そして点線は、任意の二重結合を表わす；このプロセスは、以下の工程を包含する：式((±)-II)の化合物のアシル化を酵素的に触媒する工程であって、ここで、これらの変数は、上で定義したとおりであり、そしてその生成物を加水分解して、((+)-I)を得る工程。

Description

【発明の詳細な説明】置換三環式化合物を調製するのに有用な中間体の酵素的で動的な分割発明の分野本発明は、抗ヒスタミン剤としておよびファルネシルタンパク質トランスフェラーゼ(FPT)のインヒビターとして公知の置換三環式化合物の調製で有用な光学的に富化した中間体を調製する酵素的プロセスを提供する。特に、本発明のプロセスは、例えば、国際公開番号第W095/10516号(これは、1995年４月20日に公開された）で開示されたFPTインヒビターの調製で有用な中間体を調製する際に、有用である。発明の背景非ラセミキラル化合物の合成に酵素を使用することは、現在では、よく確立されている。加水分解酵素(プロテアーゼ、エステラーゼおよびリパーゼ)は、使用が容易であり、また、容易に入手できるので、水性条件下および非水性条件下の両方において、キラル的に純粋な分子の調製に使用されている。非水性溶媒中での酵素触媒アシル化反応は、ラセミアルコールおよびアミンの動的分割に広く使用されている。文献には、ラセミ第一級アミンの単一エナンチオマーの選択的アシル化の非常に多くの例がある：スキームＡ：しかしながら、第二級アミンおよび環状アミンの酵素的アシル化は、それ程頻繁には記述されていない：スキームＢ：文献から収集した殆どの例は、アルカラーゼ(alcalase)(Chenら、Biorg.Med.Che m.Lett.,4(1994),443頁)、クロストリジオペプチダーゼＢ(Fortierら、Biotechn ol.Lett.,8(1986),777頁)、α-キモトリプシン(Paradkarら、J.Amer.Chem.soc., 116(1994)，5009頁)、およびアミノアシル-t-RNAシンセターゼ(Nakajimaら、Int ．J．Pept．Protein Res.，28(1986)，1986頁)により触媒されたキラル的に純粋なプロリンエステルまたはアミドのアシル化が関与している。キラル第二級アミンの酵素的アシル化を説明している例は、以下の反応スキームで示す：スキームＣ： (Gutmanら、Tet．Lett.，33(1992)，3943頁)。スキームＤ： 2-ヒドロキシメチルピペリジンのPPL触媒アシル化 (Asensioら、Tet．Lett.，32(1991)，4197頁) スキームＥ：3-ヒドロキシメチルピペリジンの酵素的アシル化 (Herradonら、S．Synlett(1995)，599頁) スキームＦ：条件：基質、１mmol；カーボネート１mL；酵素、20mg；室温、45時間。 (Orsatら、J．Amer．Chem．Soc.，118(1996)，p．712)。スキームＧ： (Orsatら、J．Amer．Chem．Soc.，118(1996)，712頁)。一般に、これらの分割は、低い反応性および/または選択性という欠点がある。スキームＤおよびＥで示した反応は、おそらく、第一級ヒドロキシルの酵素的アシル化に続いて、非酵素的分子内アシル移動により、起こる。 (上記反応スキームＡ〜Ｈでは、R置換基の命名は、これらの反応を論述する便宜のためであるが、以下の請求されるプロセスでのR置換基の命名と対応していない)。発明の要旨本発明は、式(+)-Ｉの置換(6,11-ジヒドロ-5H-ベンゾ-[5,6]シクロヘプタ[1,2 -b]ピリジン-11-イル)ピペリジン化合物を調製する非常に選択的なプロセスを提供する：ここで： R、R¹、R²、R³およびR⁴は、独立して、水素、ハロ、C₁〜C₆アルキル、アミノ、-OCH₃、-OCF₃およびCF₃からなる群から選択され、そしてこの点線は、任意の二重結合を表わす；このプロセスは、以下の工程を包含する： (1)(a)式(±)-IIの化合物のアシル化を酵素的に触媒して、式(+)-IIIの化合物を得る工程であって、ここで、この変数は、上で定義したとおりである：ここで、この酵素は、加水分解酵素であり、ここで、このアシル化剤は、式R⁵ COOR⁶であり、ここで、R⁵は、C₁〜C₁₅アルキル、ハロメチル、アリール、ベンジルまたはベンジルオキシであり、R⁶は、C₁〜C₆アルキル、C₁〜C₆アルケニル、-C OR⁷、トリフルオロエチル、-CH₂CH(OCOR⁷)CH₂OCOR⁷、ハロメチルまたはベンジルであり、そしてR⁷は、C₁〜C₁₅アルキルである；および (b)式(+)-IIIの化合物を加水分解する工程； (c)必要に応じて、二重結合が存在する工程(a)からの望ましくない異性体を、加熱により、そのラセミ化合物に転化する工程、およびこのラセミ化合物を、酵素的アシル化および加水分解に再びかける工程；または (2)式(±)-IIaの化合物のアシル化を、加水分解酵素で酵素的に触媒する工程であって、ここで、R、R¹、R²、R³およびR⁴は、上で定義したとおりであり、そしてこの結合は、単結合であり、ここで、このアシル化剤は、上で定義したとおりである。このプロセスにより製造される式(+)-Iの好ましい化合物は、R³が水素ではないものである。Rがハロである化合物もまた、好ましい。好ましい化合物のさらに別の群には、R¹が水素であり、そしてR、R²およびR³がハロからなる群から選択されるものである。ハロは、好ましくは、ClまたはBrである。発明の詳細な説明本明細書中で使用する「ハロ」との用語は、フルオロ、クロロ、ブロモおよびヨードを意味し、クロロおよびブロモが好ましい。本明細書中で使用する「アリール」との用語は、フェニル、ナフチル、置換フェニルまたは置換ナフチルを意味し、ここで、「置換」とは、C₁〜C₆アルキル、 C₁〜C₆アルコキシ、ハロ、NO₂およびハロメチルからなる群から独立して選択される１個〜３個の置換基を意味する。当業者は、適切なアシル化酵素が、反対の選択性を有し得ること、従って、直接分割または減法分割のいずれかに関与し得ることを理解する。すなわち、一部の酵素は、所望の異性体をアシル化し得、これらの異性体の分離が必要となり、それに続いて、加水分解されて、所望生成物が得られる(すなわち、工程(1)で請求したような、直接分割)のに対して、他は、望ましくない異性体をアシル化し得、所望の異性体を得るために、これらの異性体の分離だけ(加水分解なし)が必要である(すなわち、工程(2)で請求したような、減法分割)。請求したプロセスで使用するのに適切な市販の酵素には、Altus ChiroCLEC^TMP C(Pseudomonas cepacia);Amano Lipase AY-30(Candida rugosa);Meito Lipase M Y(Candida rugosa)、Meito Lipase AL(Achromobacter sp.)、Meito Lipase QLC( Alcaligenes sp.)およびMeito Lipase QLG(Alcaligenes sp.);Toyobo LIP-300およびLIP-301(Pseudomonas sp.);NovoSP435およびNovozym 435(Candidaantarctic a lipase B)；Boehringer Mannheim Lipase(Pseudomonas sp.);ならびにBoehrin ger Chirazyme^TM L3(Candidarugosa)、ChiraZyme^TM L4(Pseudomonassp.)およびC hiraZyme^TM L6(Pseudomonas sp,)が挙げられる。好ましい酵素には、Toyobo LIP-300/301、Altus Chiro CLEC^TMPC、Boehringer Mannheim Lipase、Novo SP435およびNovozym435がある。式R⁵COOR⁶のアシル化剤は、市販されているか、または公知方法により調製できる。好ましいアシル化剤には、トリフルオロエチルアセテート(TFEOAc)、トリフルオロエチルブチレート(TFEOBu)、トリフルオロエチルイソブチレート(TFEOi Bu)、トリフルオロエチルベンゾエート(TFEBenz)、トリアセチンまたはトリブチリンがある。この酵素的アシル化は、溶媒(例えば、酢酸アルキル(例えば、酢酸メチル(MeO Ac)または酢酸イソプロピル)、t-ブチルメチルエーテル(TBME)、テトラヒドロフラン(THF)、アセトン、アセトニトリル、t-アミルアルコール、t-ブチルアルコール、ピリジンまたはジオキサン)中で行われ得る。あるいは、このアシル化剤は、この溶媒として供し得る。この溶媒としても作用し得る好ましいアシル化剤には、トリフルオロエチルイソブチレートがある。この反応は、０℃〜50℃、好ましくは、25℃〜30℃(例えば、室温)の範囲の温度で行われる。この反応時間は、18〜48時間の範囲であり、24時間が好ましい。この酵素は、この出発物質の量の約１〜２倍の割合で、好ましくは、この量の約２倍の割合で、添加される。このアシル化剤は、この酵素がこの出発物質の量の２倍で存在するとき、出発物質の約2〜10倍、好ましくは、出発物質の量の約３倍で存在する。この加水分解は、当該技術分野で周知の標準的な手順を用いて、行われる。例えば、このアシル化化合物は、H₂SO₄のような酸を用いて、還流される。望ましい異性体は、次いで、NaOHのような塩基を添加することによって沈殿させることにより、回収される。この反応は、好ましくは、無水条件下にて行われる。この溶媒、または溶媒として使用するときのアシル化剤は、無水であり得、または溶媒中、または溶媒として使用するときのアシル化剤中の出発物質の溶液は、この酵素を添加する前に、共沸蒸留により乾燥され得る。この酵素を、この溶液に添加する前に、好ましくは、＜700ppmの水まで、真空下にて乾燥すべきである。ラセミ化合物IIの酵素的イソブチリル化(isobutyrylation)から、望ましくない(-)異性体を回収し得る。ジフェニルエーテルまたはジエチレングリコールジブチルエーテル(５〜15：１、v/v)中にて、200〜260℃で、好ましくは、0.5〜26 時間にわたって210℃で、(-)-IIを加熱することにより、ラセミ化合物IIへの完全なラセミ化が起こり、この化合物は、93〜99％の純度で、収率77〜95％で回収され得る。回収したラセミ化合物IIは、上記と同じ条件下にて、酵素的イソブチリル化を受ける。請求されるプロセスの好ましい実施態様は、以下の反応スキームで示される：スキーム１：スキーム２：スキーム３：請求されるプロセスの特に好ましい実施態様は、以下の反応スキームにより表わされる：スキーム1A：スキーム2A：異性体を分割して式Ｉの化合物を得るために使用される従来方法は、化学量論量の分割剤を用いるキラルクロマトグラフィーまたは化学分割による、式(±)-I Iaの化合物の分割を包含した。本明細書中で請求されるプロセスは、この分割を行うために生体触媒を使用し、この生体触媒は、15回まで再使用できる。さらに、化合物IIbは、その二重結合の周りの制限された回転のために、室温では、キラルアトロプ異性体である。しかしながら、これらの異性体は、高温では、ラセミ化され得る。IIbの酵素的分割を行うことにより、望ましくない(-)異性体は単離され得、200〜260℃(好ましくは、210℃)でラセミ化され得、次いで、さらに酵素的アシル化にかけられて、(±)-IIIaの処理能力が高まる。このプロセスの生成物は、ファルネシルタンパク質トランスフェラーゼインヒビター(例えば、国際公開番号第WO95/10516号(これは、1995年４月20日に公開された)で開示されたもの)として有用な三環式化合物の調製で有用な中間体である。以下の表は、これらの反応の種々のパラメータを変えた結果を示す。これらの表の殆どでは、このプロセスにより調製された式Ｉの化合物は、以下の置換基を有する。RおよびR³は、それぞれ、ブロモであり、R¹およびR⁴は、それぞれ、水素であり、そしてR²は、クロロである；当業者は、異なるR基で置換した化合物が、類似の様式で反応すると予想されることを理解する。これらの表および本明細書中の他の部分にある用語は、以下の意味を有する：ee_sは、エナンチオマー過剰な未反応出発物質である；ee_pは、エナンチオマー過剰な生成物である；ｃは、転化率(ee_s/(ee_s+ee_p))である;Eは、エナンチオマー比率である:(In[(1-ee_s )(1-c)/In[(1+ee_s)(1-c)]またはIn[1-c(1+ee_p)]/In[1-c(1+ee_p)])；Acは、アセチルであり、OAcは、アセテートであり、Meは、メチルであり、Etは、エチルであり、Prは、プロピルであり、そしてTFEは、トリフルオロエチルである。酵素的エステル交換Ａ．スクリーニング結果一般手順：TBME(1.0mL)中の(±)-IIc(10mg)および酵素(2〜100mg)の混合物に、T FEOAc(0.06mL、20当量)を添加したが、但し、実験１および４を、溶媒およびアシル化剤の両方としてのMeOAc(1.0mL)と共に、CaCO₃(30〜40mg)の存在下にて、行った。これらの反応系を、室温にて、250rpmで振とうし、そして薄層クロマトグラフィーによりモニターした。問題の反応は、キラルHPLCにより分析し、その結果は、表１に示す。表１． (±)-IIcアシル化スクリーニング：248個の酵素調製物から得た結果条件：実験２、３、5〜11：(±)-IIc、10mg；トリフルオロエチルアセテート、2 0当量；TBME、1.0mL；室温、250rpm。実験１、４：(±)-IIc、10mg；CaCO₃、30 〜40mg；MeOAc、1.0mL(溶媒およびアシル化剤として)；室温；250rpm。実験12： (±)-IIc、12mg；トリフルオロエチルアセテート、５当量；TBME．1.0mL；室温、250rpm。Ｂ．溶媒の効果一般手順：適切な溶媒(2.0mL)中の(±)-IIc(19〜25mg)およびToyobo LIP-300(1 〜25mg)の混合物に、TFEOAc(0.2mL、40当量)を添加した。反応系を、＋４℃にて、250rpmで振とうし、そしてTLCおよびキラルHPLCによりモニターした。これらの結果は、表２にある。表２．Toyobo LIP-300を用いた(±)-IIcのアセチル化に対する溶媒の効果条件：(±)-IIc、19〜25mg；Toyobo LIP-300、19〜25mg；トリフルオロエチルアセテート、40当量；溶媒、2.0mL；250rpm；＋４℃。Ｃ．アシル化剤の効果一般手順：TBME(2.0mL)中の(±)-IIc(20mg)および酵素(19〜26mg)の混合物に、このアシル化剤(20当量)を添加したが、但し、実験８は、溶媒およびアシル化剤として、MeOAc(2.0mL)を使用し、実験11は、10当量のアシル化剤を使用し、そして実験18は、88当量のアシル化剤を使用した。これらの反応系を、＋４℃で振とうした実験11以外は、室温にて、250rpmで振とうし、そしてこれらの反応系は、 TLCおよびキラルHPLCによりモニターした。実験４、５、10、11，17、18および1 9以外は、全ての反応系は、研究(workup)の対象になり、ここで、この生成物および出発物質は、分離用TLCにより分離され、エナンチオマーの過剰量を、別々に決定した。これらの結果は、表３に集める。表３．Toyobo LIP-300を用いた(±)-IIcのアシル化におけるアシル化剤の効果条件：(±)-IIc、20mg；Toyobo LIP-300、19〜26mg；TBME、２mL；アシル化剤、 20当量；250rpm；室温。例外：実験10、溶媒およびアシル化剤としてのMeOAc；実験11、アシル化剤10当量および＋４℃；実験18、88当量のアシル化剤；実験19 、(±)-IIc、10mg；アシル化剤、５当量。( ±)-IIcの酵素的イソブチリル化Ａ．酵素調査一般手順：TBME(1.0mL)中の(±)-IIc(25mg)、TFEOiBu(0.04mL、５当量)、４Åモレキュラーシーブ(25〜40mg)および酵素(６〜27mg)の混合物を、室温にて、250r pmで、23.5時間振とうした。これらの反応系を、キラルHPLCによりモニターし、その結果を、表４に集める。表４．TBME中の種々の酵素調製物を用いた(±)-IIcのイソブチリル化条件：(±)-IIc(25mg、50mM)、トリフルオロエチルイソブチレート(５当量)、酵素(6〜27mg)、４Åシーブ(25〜40mg)、TBME(1.0mL)、250rpm、室温、23.5時間。Ｂ．溶媒の効果一般手順：実験１〜９については、溶媒をアシル化剤として使用した実験１〜３以外は、(±)-IIc(49〜57mg)、４Åモレキュラーシーブ(47〜59mg)およびToyobo LIP-300(50〜55mg)を、適切な溶媒(2.0mL)に懸濁し、そしてトリフルオロエチルイソブチレート(0.08mL、５当量)を添加した。これらの反応系を、室温にて、25 0rpmで、22.5時間振とうした。実験10〜25にっいては、溶媒をアシル化剤として使用した実験17〜23以外は、 (±)-ＩIc(70mg)、Toyobo LIP-300(70mg)およびトリフルオロエチルイソブチレート(５当量)の混合物を、適切な溶媒(2.0mL)中にて、300rpmおよび30℃で、24 時間振とうした。キラルHPLC分析の結果を、表５に集める。表５．Tovobo LIP-300を用いた(±)-IIcのイソブチリル化に対する溶棋の効要条件：実験１〜９：(±)-IIc(50mg、50mM)、Toyobo LIP-300(50〜55mg)、TFEOiB u(5 当量、溶媒をアシル化剤として使用した実験１〜３以外)、溶媒(2.0mL)、４剌Å シーブ(47〜59mg)、250rpm、室温、22.25時間。実験10〜25：(±)-IIc(70mg、75mM)、Toyobo LIP-300(70mg)；溶媒(2.0mL)、T FEOiBu(５当量、溶媒をアシル化剤として使用した実験17〜23以外)、30℃、300r pm、24時間。( ±)-IIdの酵素的分割Ａ．ChiroCLEC PCを用いた(±)-IIdのアシル化表６．種々の溶媒中でのChiroCLEC PCを用いた(±)-IIdのアセチル化条件：(±)-IId(５〜９mg)、TFEOAc(12〜20当量)、CLEC PC(4.5〜9.1mg)、溶媒( 1.0mL)、室温、250rpm。Ｂ．Toyobo LIP-300を用いた(±)-IIdのアシル化表７．種々の溶媒中でのToyobo LIP-300を用いた(±)-IIdのアセチル化条件：(±)-IId、6.5〜12.8mg；TFEOAC、0.08mL、30〜50当量；酵素、2.8〜8.4m g；溶媒、2.0mL；室温、250rpm、溶媒(2.0mL)をアシル化剤として使用した実験1 2〜14以外。Ｃ．Toyobo LIP-300を用いた(±)-IIdのイソブチリル化表８．種々の溶媒中でのToyobo LIP-300を用いた(±)-IIdのイソブチリル化条件：(±)-IId、50mg；Toyobo LIP-300、50mg；TFEOiBu、0.08mL、５当量；溶媒、2.0mL；250rpm；室温。Ｄ．NOVOSP435を用いた(±)-IIdのアシル化表９．種々の溶媒/温度でのNovo SP435を用いた(±)-IIdのアセチル化条件：実験１、３〜７、９、13〜15：(±)-IId、７〜11mg；TFEOAc、50mL、14〜 25当量；SP435、８〜13mg；溶媒、2.0mL室温、250rpm。実験２、８、10〜12：(±)-IId、12〜15mg；TFEOAc、100mL、25〜31当量(溶媒をアシル化剤として使用した実験２以外)；SP435、４〜７mg；溶媒、2.0mL；250 rpm。表10．Novo SP435で触媒した種々のアシル化剤を用いた(±)-IIdのアシル化条件：実験１、４〜９、11〜17、19：(±)-IId、4.9mg；TBMEまたは純粋アシル化剤、1.0mL；SP435、6.2〜10.8mg；250rpm；室温。実験２、21〜24：(±)-IId、9〜12mg；MeCNまたは純粋アシル化剤、2.0mL；SP43 5、５〜７mg；CaCO₃、42〜33mg、250rpm；室温。実験10、18、20：(±)-IId、11〜16mg；溶媒、2.0mL；SP435、６〜８mg；NaHCO₃ 、34〜37mg(実験10以外)、250rpm；室温。実験３：(±)-IId、15mｇ；アシル化剤/溶媒、2.0mL；SP435、４mg；250rpm；室温。Ｅ．他の基質条件：実験１：１、５mg；LIP-301、10mg；トリフルオロエチルイソブチレート、10当量；TBME、1.0mL；200rpm；室温実験２：２、5.4mg；LIP-30L16.6mg；トリフルオロエチルイソブチレート、20当量;TBME、1.0mL；200rpm；室温実験３：３、0.2ｇ；LIP-301、0.4ｇ；トリフルオロエチルイソブチレート、10 当量；TBME、４mL；200rpm；室温。以下は、本発明の方法の好ましい実施態様の詳細な実施例である。実施例１ TBME(600mL)中の(±)-IIc(20ｇ、42.7mmol、分析による純度98％)の混合物を、室温で、１時間攪拌し、次いで、濾過して、少量の不溶物質を除去した。この溶液を共沸蒸留により乾燥した；200mLを蒸留した後、この反応混合物に、さらに200mLのTBMEを添加した。全体で400mLを蒸留した後、溶液の含水量(Karl-Fisc her)は、214ppmであった。この反応混合物に、Toyobo LIP-300(40ｇ；1282ppmの水)を添加し、そして0.5時間攪拌した；この段階での含水量は、250 ppmであった。トリフルオロエチルイソブチレート(19.1mL、３当量)を添加し、この混合物を室温で攪拌した。この反応は、24時間後に停止した。この酵素を濾過により除去し、そしてTBME(100mL)で洗浄した。合わせた濾液を、0.5M H₂SO₄(100mL、50mL、50mL)で抽出した。合わせた酸性抽出物を、50％NaOH(15mL)および水(150mL)の混合物にゆっくりと(60分間)添加した。沈殿した固形物を濾過し、そして乾燥して、(-)-Ic(10.6ｇ、分析による純度96％、収率52.1％；76.7％ee)を得た。この反応混合物を、６M H₂SO₄(２×30mL)で抽出した。合わせた抽出物を、８時間にわたって、加熱還流し、室温まで冷却し、次いで、その温度を＜40℃で維持しつつ、50％NaOH(70mL)および氷(170g)の混合物にゆっくりと(90分間)添加した。沈殿した固形物を濾過し、そして乾燥して、(+)-Ic(8.8ｇ、分析による純度 97％、収率43.4％；98.4％ee)を得た。実施例２ (-)-II(27.30ｇ、純度94％、81.4％ee)をジフェニルエーテル(137mL)に溶解し、そして還流状態にて、N₂下にて、40分間加熱し、その時点までに、そのeeは、＜１％であった。この混合物を室温まで冷却し、そしてTBME(500mL)で希釈した。この溶液の分析により、95.8％の溶液収率が明らかとなった。この溶液を0.5M H₂SO₄(２×218 mL)で抽出し、合わせた酸性抽出物を、50％NaOH(45mL)および水(405mL)の激しく攪拌した混合物に、１時間にわたって、ゆっくりと添加した。0.5時間攪拌した後、沈殿した固形物を濾過により集め、そして水(820mL)で洗浄した(26.11ｇ、収率94.6％、1.0％ee)。実施例３酵素的分割：第一サイクル R-イソブチルアミド(+)-IIIbの調製：(±)-IIc(93.0ｇ，0.2mol)をTBME(2.0L) に溶解し、そして室温で１時間攪拌した。この反応混合物を濾過し、その不溶物質を、追加のTBME(約1.0L)で洗浄し、そして濾液の容量を2.9Lに調節した。次いで、(±)-IIcの溶液を共沸蒸留により乾燥して、1.0Lの溶媒を除去した。この溶液を室温まで冷却し、そしてToyobo LIP-301(200ｇ)を添加した。室温で１時間攪拌した後、トリフルオロエチルイソブチレート(90mL、0.56mol)を一度に添加した。この反応系を、室温で、N₂下にて、24時間攪拌した。次いで、この酵素を濾過により除去し、そしてTBME(0.9L)で洗浄した。合わせた濾液を、0.5M H₂SO₄の３部分(450mL、225mLおよび225mL)で連続的に抽出した。これらの合わせた酸性抽出物は、未反応(-)-IIcを含有していた。次いで、その有機相を、６M H₂SO₄の２部分(135mLおよび135mL)で抽出した。これらの合わせた酸性抽出物は、生成物であるイソブチルアミド(+)-IIIbを含有していた。 (+)-Icの単離：合わせた６M H₂SO₄抽出物を、還流状態で、14.5時間加熱し、次いで、室温まで冷却した。次いで、この反応混合物を、NH₄OH(900mL)およびCH₃ CN(270mL)の激しく攪拌した冷混合物にゆっくりと添加した。沈殿した固形物を濾過し、水で洗浄し、そして乾燥した(40.5ｇ、43.5％；0.960ee)。 (-)-IIbの単離：合わせた0.5M H₂SO₄抽出物を、NH₄OH(450mL)およびCH₃CN(270 mL)の激しく攪拌した冷混合物にゆっくりと添加した。沈殿した固形物を濾過し、水で洗浄し、そして乾燥した(40.5ｇ、43.5％；0.960ee)。 (-)-IIbのラセミ化。ジフェニルエーテル(190mL)を減圧下にて、5〜10分間脱気し、次いで、5〜10分間にわたって、N₂でパージした。(-)-IIb(38ｇ、81mmo l)を添加し、この混合物を、N₂下にて攪拌し、そして245℃まで加熱した。この反応混合物を、245℃で２時間維持し、そうするとすぐに、ラセミ化が完了した。室温まで冷却した後、この反応混合物をTBME(570mL)で蒸留し、そして濾過した。この濾液を、0.5M H₂SO₄の２部分(190mLおよび95mL)で抽出した。これらの抽出物を合わせ、木炭(19ｇ)を添加し、この混合物を、１時間にわたって、還流状態まで加熱した。冷却した後、この混合物をCeliteで濾過し、その床を、0.5M H₂SO₄(95mL)で洗浄した。合わせた濾液を、NH₄OH(190mL)およびCH₃CN(114mL)の激しく攪拌した冷混合物にゆっくりと添加した。沈殿した固形物を濾過し、水で洗浄し、そして乾燥した(31.9ｇ、84.0％)。ジフェニルエーテルに代えてジエチレングリコールジブチルエーテルを用い、 210℃で約12時間加熱して、同様の操作を行い得る。酵素的分割：第二サイクルラセミ化した（±)-IIc(30ｇ、64mmol)をTBME(600mL)に溶解し、濾過し、その容量を900mLに調節した。次いで、この溶液を共沸蒸留により乾燥して、溶媒300 mLを除去した。この混合物を冷却し、そしてToyobo LIP-301(60ｇ；上記第一サイクルから回収した)を添加した。この混合物を１時間攪拌し、次いで、トリフルオロエチルイソブチレート(30mL、190mmol)を添加した。室温で、N₂下にて、2 4時間攪拌した後、次いで、この反応混合物を濾過し、その酵素ケーキをTBME(30 0mL)で洗浄した。合わせた濾液を、0.5M H₂SO₄の３部分(150mL、75mLおよび75mL )で抽出して、未反応(-)-IIcを除去した。次いで、その有機相を、６M H₂SO₄の２部分(45mLおよび45mL)で抽出し、これらを合わせて、16時間還流した。次いで、冷却した反応混合物を、NH₄OH(300mL)およびCH₃CN(90mL)の激しく攪拌した冷混合物にゆっくりと添加した。沈殿した(+)-Icを濾過し、水で洗浄し、そして乾燥した：(13ｇ、43％；0.986ee)。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＮ，ＣＺ，ＥＥ，ＧＥ，ＧＷ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＧ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＴ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ

Claims

【特許請求の範囲】１．式(+)-Ｉの置換(6,11-ジヒドロ-5H-ベンゾ-[5,6]シクロヘプタ[1,2-b]ピリジン-11-イル)ピペリジン化合物を調製する方法：ここで： R，R¹、R²、R³およびR⁴は、独立して、水素、ハロ、C₁〜C₆アルキル、アミノ、-OCH₃、-OCF₃およびCF₃からなる群から選択され、そして点線は、任意の二重結合を表わし；該方法は、以下の工程を包含する： (1)(a)式(±)-IIの化合物のアシル化を酵素的に触媒して、式(+)-IIIの化合物を得る工程であって、ここで、変数は、上で定義したとおりである：ここで、該酵素は、加水分解酵素であり、ここで、アシル化剤は、式R⁵COOR⁶であり、ここで、R⁵は、C₁〜C₁₅アルキル、ハロメチル、アリール、ベンジルまたはベンジルオキシであり、R⁶は、C₁〜C₆アルキル、C₁〜C₆アルケニル、-COR⁷、トリフルオロエチル、-CH₂CH(OCOR⁷)CH₂OCOR⁷、ハロメチルまたはベンジルであり、そしてR⁷は、C₁〜C₁₅アルキルである；そして (b)式(+)-IIIの化合物を加水分解する工程； (c)必要に応じて、二重結合が存在する工程(a)からの望ましくない異性体を、加熱により、そのラセミ化合物に転化する工程、および該ラセミ化合物を、酵素的アシル化および加水分解に再びかける工程；または (2)式(±)-IIaの化合物のアシル化を、加水分解酵素で酵素的に触媒する工程であって、ここで、R、R¹、R²、R³およびR⁴は、上で定義したとおりであり、そして該結合は、単結合であり、ここで、該アシル化剤は、上で定義したとおりである。２．次式の化合物を調製する請求項１に記載の方法：該方法は、前記酵素として、Toyobo LIP-300、Toyobo LIP-301またはAltus Ch iroCLEC^TMPCおよび前記アシル化剤として、トリフルオロエチルアセテート、トリフルオロエチルブチレート、トリフルオロエチルイソブチレート、トリフルオロエチルベンゾエート、トリアセチンまたはトリブチリンを用いて、次式の化合物のアシル化を酵素的に触媒する工程：それに続いて、加水分解し、そして必要に応じて、それに続いて、望ましくない異性体を該ラセミ化合物に再転化し、そして該ラセミ化合物を酵素的アシル化および加水分解に再びかける工程を包含する。