JP2000513351A - フリーラジカル―誘発状態を治療するためのキレート化剤およびその金属キレート - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、式(I)の化合物、またはその金属キレートまたは塩を、ヒトまたはヒト以外の動物の身体中のフリーラジカルの存在に起因する状態の治療または予防に用いられる治療剤の製造に使用する方法を提供する(式(I)において、各Ｒ¹は独立して水素または-CH₂COR⁵を示し；Ｒ⁵はヒドロキシ、所望によりヒドロキシル化されたアルコキシ、アミノまたはアルキルアミド示し；各Ｒ²は独立して基ＸＹＲ⁶を示し；Ｘは単結合、あるいは所望により基Ｒ⁷で置換されたＣ_1-3アルキレンまたはオキソアルキレン基を示し；Ｙは単結合、酸素原子または基ＮＲ⁶を示し；Ｒ⁶は水素原子、基COOR⁸、あるいは所望によりCOOR⁸、CONR⁸ ₂、NR⁸ ₂、OR⁸、=NR⁸、=O、OP(O)(OR⁸)R⁷およびOSO₃Mから選ばれれた１個以上の基で置換されたアルキル、アルケニル、シクロアルキル、アリールまたはアラルキル基であり；Ｒ⁷はヒドロキシ、または所望によりヒドロキシル化され、所望によりアルコキシル化されたアルキルまたはアミノアルキル基であり；Ｒ⁸は水素原子、または所望によりヒドロキシル化され、所望によりアルコキシル化されたアルキル基であり；Ｍは水素原子、または生理的に許容されるカチオンの１当量であり；Ｒ³はＣ_1-8アルキレン基、1,2-シクロアルキレン基または1,2-アリーレン基を示し；各Ｒ⁴は独立して水素またはＣ_1-3アルキルを示す)。これらの化合物は、虚血組織の再潅流に関連する症状の緩和、および放射線-誘発傷害の治療または予防に特に効果的である。

Description

【発明の詳細な説明】 フリーラジカル-誘発状態を治療するための キレート化剤およびその金属キレート 本発明は、医療への、特に身体内のフリーラジカルの存在に起因する状態の治 療、例えば虚血-関連疾患の治療へのキレート化剤およびその金属キレートの使 用に関する。 寿命は短いが反応性の高いフリーラジカルは、久しい以前から、様々な種類の 組織損傷、特に虚血性組織の再潅流中の組織損傷、および放射線-誘発傷害に関 連していると信じられきた。多くのフリーラジカルの生成における重要な因子は 、ヒドロキシル、パーオキシルおよびヒドロパーオキシルフリーラジカルのよう なフリーラジカルの形成を刺激する鉄イオン、および脂質の過酸化を介して膜損 傷を引き起こす一重項酸素の利用可能性にあると信じられている。 虚血-関連疾患、特に冠動脈疾患は、西欧諸国における大多数の死亡の原因で ある。虚血性組織への酸素添加血液の再導入は、多くの場合に、不整脈、心筋「 気絶」、動脈痙攣および内皮損傷を含む様々な形態の心臓機能不全に帰すること がある(Kirschner et al．J．Amer．College of Surgeons 179:103-117(1994)) 。さらに、心臓保護効果を有すると信じられるＮＯの不活性化も起こりうる(例 えばvegh et al．Br．J．Pharmacol．107:910-911（1992）およびLefer et al． Circulation 88:2337-2350（1993）参照)。 最近の研究は、再潅流傷害が、潅流された組織の再酸素供給中に酸素-誘導フ リーラジカルが生成する結果であることを示唆している。これは、初期潅流期間 中に血液および酸素を導入する間のみならず、以前は虚血性であった組織におい て続いて起こる炎症応答の長引いた期間中にも、特にそうである。 従って、身体中のフリーラジカルの存在に由来する状態を治療または予防する ことの可能な化合物、特に再潅流傷害を予防することの可能な化合物に対する持 続した要求が存在するということが認識されよう。 キレート化剤およびその金属キレートの医学的使用は、例えばＸ線、磁気共鳴 造影(MRI)、超音波造影またはシンチグラフィー等のような診断技術において、 よく確立されている。多種多様なキレート化剤およびその金属キレートは公知で あるか、または文献に記載されている。 アミノポリ（カルボン酸またはカルボン酸誘導体）キレート化剤およびその金 属キレートはよく知られており、例えばEP-A-299795、EP-A-71564、DE-A-340105 2、EP-A-203962およびEP-A-436579に記載されている。 ジピリドキシルを基礎としたキレート化剤およびその３価金属とのキレートは 、Taliaferroにより記載されている(Inorg．Chem．23:1183-1192(1984))。化合 物N,N'-ジピリドキシルエチレンジアミン-N,N'-ジ酢酸(PLED)は、ガリウムまた はインジウムを含有する放射線治療製剤の製造用キレート化剤として評価された (Green et al．Int．J．Nucl．Med．Biol，12(5):381-386(1985))。 また、多数のPLED誘導体および類似体が、特にキレート化剤N,N'-ビス-(ピリ ドキサール-5-ホスフェート)-エチレンジアミン-N,N'-ジ酢酸（DPDP）およびそ のマンガン(II)キレート、Mn DPDPが、MRIコントラスト媒体中での使用に関して 記載されている(EP-A-290047およびEP-A-292761参照)。 我々は、特定のキレート化剤、特にジピリドキシルおよびアミノポリカルボン 酸を基礎としたキレート化剤、およびその金属キレートが、フリーラジカルによ り引き起こされる組織損傷を治療または予防するのに特に効果的であり、また、 虚血性組織の再潅流に伴う症状を緩和させ得ることを見出した。 一つの観点において、本発明は、下記式Ｉ の化合物、またはその金属キレートまたは塩を、ヒトまたはヒト以外の動物の身 体中のフリーラジカルの存在に起因する状態を治療または予防するのに用いられ る治療剤の製造に使用する方法を提供する (式Ｉにおいて、 各Ｒ¹は独立して、水素または-CH₂COR⁵を示し； Ｒ⁵はヒドロキシ、所望によりヒドロキシル化されたアルコキシ、アミノまた はアルキルアミノ基を示し； 各Ｒ²は独立して、基ＸＹＲ⁶を示し； Ｘは単結合、あるいは所望により基Ｒ⁷で置換されたＣ_1-3アルキレンまたはオ キソアルキレン基を示し； Ｙは単結合、酸素原子または基ＮＲ⁶を示し； Ｒ⁶は水素原子、基COOR⁸、あるいは所望によりCOOR⁸、CONR⁸ ₂、NR⁸ ₂、OR⁸、=N R⁸、=O、OP(O)(OR⁸)R⁷およびOSO₃Mから選択された１個以上の基により置換され たアルキル、アルケニル、シクロアルキル、アリールまたはアラルキル基であり ； Ｒ⁷はヒドロキシ、または所望によりヒドロキシル化され、所望によりアルコ キシル化されたアルキルまたはアミノアルキル基であり； Ｒ⁸は水素原子、または所望によりヒドロキシル化され、所望によりアルコキ シル化されたアルキル基であり； Ｍは水素原子、または生理的に許容されるカチオンの１当量、例えばアルカリ 金属、アルカリ土類金属カチオン、アンモニウムイオンまたは有機アミンカチオ ン、例えばメグルミンイオンの１当量であり； Ｒ³はＣ_1-8アルキレン基、好ましくはＣ_1-6、例えばＣ_2-4アルキレン基、1,2- シクロアルキレン基または1,2-アリーレン基を示し； 各Ｒ⁴は独立して、水素またはＣ_1-3アルキルを示す)。 別の観点において、本発明は、ヒトまたはヒト以外の動物の身体に、式Ｉの化 合物、またはその金属キレートまたは塩を投与することを含む、上記身体中のフ リーラジカルの存在に関連する状態と戦うか、またはこれを予防するためのヒト またはヒト以外の動物の身体の治療方法を提供する。 本発明に使用するのに好適な他のキレート化剤としては、EP-A-299795、EP-A- 71564、DE-A-3401052、EP-A-203962、EP-A-436579の巨大環状の、およびより好 ましくは直鎖状または分岐状のアミノポリカルボン酸キレート化剤、およびリン オキシ酸類似体である。好ましいキレート化剤としては、DTPAおよびEDTA、およ びアミド基の窒素が１個以上のＣ_1-18アルキル基により置換されていてもよいそ のアミド、例えばDTPA.BMAおよびEDTA.BMAが挙げられる。 ここで使用されるとおり、「アルキル」および「アルキレン」という用語は、 直鎖状および分岐状の両方の、飽和および不飽和の炭化水素を包含する。「1,2- シクロアルキレン」という用語は、シスおよびトランスの両方の、５〜８個の炭 素原子を有するシクロアルキレン基およびアルキル置換シクロアルキレン基を包 含する。「1,2-アリーレン」という用語は、フェニルおよびナフチル基、および ６〜１０個の炭素原子を有するそのアルキル置換誘導体を包含する。 特にことわらない限り、全てのアルキル、アルキレンおよびアルケニル部分は 、 好都合には１〜２０個、好ましくは１〜８個、より好ましくは１〜６個、特に好 ましくは１〜４個の炭素原子を含有することができる。 シクロアルキル、アリールおよびアラルキル部分は、好都合には３〜１８個、 好ましくは５〜１２個、特に好ましくは５〜８個の環原子を含有することができ る。フェニルおよびナフチル基を含むアリール部分が好ましい。アラルキル基と しては、フェニルＣ_1-3アルキル、特にベンジルが好ましい。 所望によりヒドロキシ基により置換されていてもよい基の場合は、これはモノ 置換であってもポリ置換であってもよく、ポリ置換の場合には、アルコキシおよ び／またはヒドロキシ置換基はアルコキシ基によって担われていてもよい。 式Ｉにおいて、Ｒ⁵は好ましくはヒドロキシ、Ｃ_1-8アルコキシ、エチレングリ コール、グリセロール、アミノまたはＣ_1-8アルキルアミドである。好ましくは 、各Ｒ¹は-CH₂COR⁵を示し、ここでＲ⁵はヒドロキシである。 式Ｉの化合物において、Ｘは好ましくは単結合、またはCH₂、(CH₂)₂、CO、CH₂ CO、CH₂CH₂COまたはCH₂COCH₂である。好ましくは、Ｙは単結合を示す。 式Ｉの化合物は、二つのピリジル環上に同一または異なったＲ²基を有してい てよく、これらは同一または異なった環の位置に結合していてよい。しかしなが ら、置換が5-位および6-位に、最も特別には6-位に、すなわちヒドロキシ基に対 してパラ-位にあることが特に好ましい。Ｒ²基が同一であり、かつ同じ位置に、 例えば6,6'にある化合物が特に好ましい。 基Ｒ⁶として好ましいものは、モノ-またはポリ（ヒドロキシまたはアルコキシ ル化）アルキルまたは式OP(O)(OR⁸)R⁷の基である。 Ｒ⁷は、好ましくはヒドロキシ、または非置換のアルキルまたはアミノアルキ ル基である。 基Ｒ²のために特に好ましいものとしては、CHR⁷OCO(CH₂)_xPhおよび CHR⁷OCO(CH₂CO)_xPh(ここで、ｘは１〜３である)、CHR⁷OCOBu^t、CH₂N(H)R^6'、CH₂ N(R^6')₂、N(H)R^6'、N(R^6')₂、CH₂OH、CH₂OR^6'、COOR^6'、CON(H)R^6'、CON(R^6')₂ またはOR^6'(ここで、R^6'はモノ-またはポリ-ヒドロキシル化された、好ましくは Ｃ_1-4、特に好ましくはＣ_1-3アルキル基である)、(CH₂)_nCOOR^7'(ここで、ｎは１ 〜６である)、COOR^7'(ここで、R^7'はＣ_1-4、好ましくはＣ_1-3アルキル基、特に 好ましくはメチル基である)、CH₂OSO₃ ^-M、CH₂CH₂COOH、CH₂OP(O)(OH)(CH₂)₃NH₂ 、CH₂OP(O)(OH)CH₃またはCH₂OP(O)(OH)₂基である）が挙げられる。よりいっそう 好ましくは、Ｒ²は式CH₂OP(O)(OH)₂の基を示す。 Ｒ³がエチレンであり、Ｒ²が上記に列挙したものの何れかである式Ｉの化合物 は、特に好ましい。 本発明の方法に使用される化合物の好ましい金属キレートは、金属イオンがア ルカリ金属およびアルカリ土類金属から、および原子番号２２〜３１，４２、４ ４および５８〜７０を有する金属から選択されたものであり、より特別には、１ ０⁹〜１０²⁵、好ましくは１０¹⁰〜１０²⁴、より好ましくは１０¹¹〜１０²³、例 えば１０¹²〜１０²²の範囲のＫ_aを有するキレートである。特に好ましいキレー トは、鉄以外の金属とのキレートであり、これらは、対応する鉄（Fe³⁺）キレー トのＫ_a値よりも小さく、好ましくは少なくとも千分の一のより小さいＫ_a値を有 する。好適なイオンとしては、Ｎａ⁺、Ｍｎ²⁺、Ｃａ²⁺、Ｚｎ²⁺、Ｃｕ²⁺、Ｃｕ⁺ 、Ｇｄ³⁺およびＭｇ²⁺が挙げられる。Ｍｎ²⁺が特に好ましい。 アミノポリカルボン酸のキレートとしては、Mn DTPA.BMAおよびMn EDTA.BMAが 、本発明に係る使用のために特に好ましい。 本発明に係る使用のためにより特別に好ましいものは、化合物N,N'-ビス-(ピ リドキサール-5-ホスフェート)-エチレンジアミン-N,N'-ジ酢酸またはN,N'- ビス（3-ヒドロキシ-2-メチル-5-ホスホノメチル-4-ピリジルメチル）-エチレン ジアミン-N,N'-ジ酢酸(以下、DPDPという)、およびそのマンガン(II)キレート、 Mn(DPDP)である。 キレートの全ての不安定な水素が、錯化金属イオンにより置換されているわけ ではない場合は、残りの不安定な水素原子を、無機および／または有機塩基また はアミノ酸の生理的に生物適合性のカチオンにより置換することによって、キレ ートの生物許容性および／または溶解性を増加させることができる。好適な無機 カチオンとしては、Ｌｉ⁺、Ｋ⁺、Ｎａ⁺および特にＣａ²⁺が挙げられる。好適な 有機カチオンとしては、アンモニウム、置換アンモニウム、エタノールアミン、 ジエタノールアミン、モルホリン、グルカミン、N,N-ジメチルグルカミン、リジ ン、アルギニンまたはオルニチンが挙げられる。 本発明に係る使用のためのキレート化剤およびその金属キレートは、再潅流- 誘発傷害、例えば血栓融解治療の間に、心-肺バイパス、経皮内腔横断冠状血管 形成術（percutaneous transluminal coronary angioplasty(PTCA)）の後、およ び心臓移植を含む心臓外科において起こることのある不整脈および内皮損傷の治 療または予防において、特に効果的である。ここに記載された化合物の好ましい 使用は、例えば重篤または急性の心筋虚血から生じる心筋梗塞の後の心筋再潅流 による傷害を減少させる使用である。 本発明の化合物のもう一つの使用は、例えば心臓、肝臓、腎臓または脳の移植 片による臓器移植に関連する使用である。これに関して、本化合物は、ドナーま たはレシピエントに、移植片手術の前、その間またはそれに続いて投与すること ができる。本化合物の好ましい使用は、その中で臓器を移植の前に保存できる臓 器移植片溶液としての使用である。 本発明に係る化合物の使用は、プロ-炎症性障害の治療または予防、特に例え ば放射線療法における放射線-誘発傷害の治療または予防においても、効果的で ある。 本発明の方法に用いられるキレート化剤およびその金属キレートは、虚血性組 織の再潅流の後に投与すると、効果的である。しかしながら、このような化合物 はまた、冠血流の断絶が始まった後ではあるが再潅流が始まる前に投与すると、 例えば心筋虚血後の再潅流-誘発傷害を防止するのにも効果的である。その結果 、本発明の方法は、例えば心-肺バイパス、PTCAの間および心臓外科において心 筋虚血が予想される場合のみならず、例えば心拍停止の間および血栓崩壊の間に 心筋虚血が予定されない場合にも適用できる。これに関して、ここに記載された 化合物は、血栓崩壊への付加物として特に有用である。 従って、もう一つの観点からみて、本発明は、本発明に係るキレート化剤、ま たはその金属キレートまたは塩を、１種以上の血栓融解剤、および少なくとも１ 種の製剤上許容される担体または賦形剤と一緒に含む製剤組成物を提供する。 さらにもう一つの観点において、本発明は、本発明に係るキレート化剤、また はその金属キレートまたは塩、およびこれとは別に、血栓融解処置の間に同時に 、別個にまたは続いて用いられる血栓融解剤を含有するパックを提供する。 また別の観点において、本発明は、本発明に係るキレート化剤、またはその金 属キレートまたは塩を１種以上の血栓融解剤と一緒に、血栓融解処置の間に用い られる薬剤の製造に使用する方法を提供する。 本発明はさらに、ヒトまたはヒト以外の動物の身体に、有効量の式Ｉの化合物 、またはその金属キレートまたは塩、および血栓融解剤を、血栓崩壊処置の間に 同時に、別個にまたは続いて投与することを含む、ヒトまたはヒト以外の動物の 身体を治療する方法を提供する。 本発明により用いるのに好適な血栓融解剤の例としては、アスピリン、プラス ミン、プロウロキナーゼ、ストレプトキナーゼ、組織プラスミノーゲン活性化因 子、ウロキナーゼ、ヒルジンおよび抗血栓剤が挙げられる。 本発明の化合物は、この技術分野で公知の方法により製造することができる。 アミノポリカルボン酸を基礎とするキレート化剤の製造に好適な方法は、EP-A-2 99795、EP-A-71564、DE-A-3401052、EP-A-203962およびEP-A-436579に記載され ている。 ジピリドキシル化合物の製造に際して、化合物PLEDを出発材料として使用して 、また、従来の手法を用いて適切に誘導体化して、式Ｉの化合物を得ることがで きる。 式Ｉの化合物を製造するのに好適な方法は、例えばEP-A-290047に記載されて いる。 あるいは、式Ｉの化合物は、対応するピリドキサール化合物を、アルキレンジ アミンと、Taliaferro（上記）により記載されたPLEDの製造手法に従って反応さ せることによって製造することができる。 あるいは、本発明に係る化合物は、下記の工程の一つ以上を含む方法により製 造することができる： (a) 下記式IIの化合物 を下記式(III)のジアミン H₂N-R³-NH₂ (III) （これらの式中、Ｒ³およびＲ⁴は上記で定義したとおりであり、Ｒ^2'は所望に より保護された上記で定義したとおりのＲ²である）と反応させる； (b) 工程(a)で得られた式(IV)の化合物 （式中、Ｒ³、Ｒ⁴およびＲ^2'は上記で定義したとおりである）を水素化する； (c) 式(V)の化合物 （式中、Ｒ³、Ｒ⁴およびＲ^2'は上記で定義したとおりである）を、ハロ酢酸、好 ましくはブロモ酢酸と反応させ、必要に応じ、使用した保護基を除去する； および (d) 式Ｉの化合物を、そのキレート錯体または塩に変換する。 式IIのピリドキシルホスフェート、ピリドキサールおよびその他の化合物、お よび式IIIのアルキレンジアミン、シクロアルキレンジアミンおよびアリーレン 化合物は、容易に入手できる公知の化合物であるか、あるいはこの技術分野 で公知の手法により合成することができる。 工程(a)の反応は、好適な溶剤、例えばアルコール（例えばメタノール）中で ０〜６０℃の範囲の温度で行うことが好都合であろう。 Ｒ²基が同一である式Ｉの化合物を得るために、式IIIのジアミンを２モル当量 の式IIの化合物と反応させてもよい。Ｒ²基が異なる式Ｉの化合物を製造するた めには、式IIIのジアミンを、先ず、所望のＲ^2'基を有する式IIの第一化合物と 反応させ、次いで、こうして得られた反応生成物を、異なるＲ^2'基を有する式II の第二化合物と反応させる。 工程(b)の水素化は、従来の手法を用いて、例えばパラジウムまたは白金触媒 を用いて行うことかできる。 本発明に係る使用のための金属キレートは、この技術分野で公知の従来の手法 により形成することができる。一般的に、このような方法は、金属酸化物または 金属塩（例えば硝酸塩、塩化物または硫酸塩）を、水または低級アルコール、例 えばメタノール、エタノールまたはイソプロパノールに溶解または懸濁させるこ とを伴う。この溶液または懸濁液に、水または低級アルコール中の等モル量のキ レート化剤を加え、混合物を、必要に応じて穏やかにまたは沸点まで加熱しなが ら、反応が完結するまで撹拌する。形成されたキレート塩が使用した溶剤に不溶 性であるならば、反応生成物は濾過により単離される。反応生成物が可溶性であ るならば、これは例えば噴霧乾燥または凍結乾燥により蒸発乾固することにより 単離される。 生成したキレートに酸基、例えばリン酸基がまだ存在しているならば、酸性キ レート塩を、生理的に許容されるカチオンを生じさせる無機および／または有機 塩基またはアミノ酸との反応によって中性キレート塩に変換し、これを単離する ことが有利である。 キレート化剤のカルボン酸基およびリン酸基は、エステル化してカルボキシレ ートおよびホスフェートエステルを生成することによって中和することもできる 。このようなエステルは、対応するアルコールから、この技術分野で公知の従来 の手法によって製造することができる。好適なエステルとしては、例えば１〜１ ８個の炭素原子を有する直鎖状または分岐状アルコール、１〜１８個、好ましく は１〜６個の炭素原子を有する１価または多価のアルキルアミノアルコール、例 えばセリノールまたはジエタノールアミン、および１〜１８個の炭素原子を有す る多価アルコール、例えばエチレングリコールまたはグリセロールのエステルが 挙げられる。 金属キレートが全体的な電荷を担っている場合は、生理的に許容されるカウン ターイオン、例えばアンモニウム、置換アンモニウム、アルカリ金属またはアル カリ土類金属（例えばカルシウム）カチオン、あるいは無機酸または有機酸から 誘導されるアニオンとの塩の形態で使用することが好都合であろう。これに関し て、メグルミン塩が特に好ましい。 本発明の治療剤は、従来の医薬または獣医薬用の処方助剤、例えば安定剤、抗 酸化剤、オスモラリティー調節剤、緩衝剤、ｐＨ調節剤などを用いて処方するこ とができ、また、非経口投与または経小腸投与、例えば注射または注入、あるい は外部排泄管を有する体腔、例えば胃腸菅、膀胱または子宮内への直接投与に適 する形態であってよい。従って、本発明の剤は、従来の製剤投与形態、例えばタ ブレット、カプセル、散剤、溶液、懸濁液、分散液、シロップ、坐剤などであっ てよい。しかしながら、生理的に許容される担体媒質、例えば注射用水中の溶液 、懸濁液または分散液が一般的に好ましい。 従って、本発明に係る化合物は、生理的に許容される担体または賦形剤を用い て当業者によく知られた方法により、投与のために処方することができる。例え ば、本化合物を、所望により製剤上許容される賦形剤を添加して、水性媒質中に 懸濁または溶解させ、次いで得られた溶液または懸濁液を滅菌することができる 。好適な添加剤としては、例えば生理的に生物適合性の緩衝剤(例えばトロメタ ミン塩酸塩)、キレート化剤（例えばDTPA、DTPA-ビスアミドまたは式Ｉの非錯化 キレート化剤）またはカルシウムキレート錯体（例えばカルシウムDTPA、CaNaDT PA-ビスアミド、式Ｉのキレート化剤のカルシウム塩またはキレート）の添加(例 えば0.01〜10モル％)、あるいは、所望により、カルシウムまたはナトリウム塩 （例えば、本発明に係るキレート化剤などの金属キレート錯体と組み合わせた、 塩化カルシウム、アスコルビン酸カルシウム、グルコン酸カルシウムまたは乳酸 カルシウム）の添加（例えば1〜50モル％）が挙げられる。 本化合物を、例えば経口投与のために水または生理食塩水中の懸濁液形態に処 方しようとする場合は、少量の可溶性キレートを、経口溶液中に伝統的に存在す る不活性成分および／または界面活性剤および／または矯味矯臭用芳香剤の１種 以上と混合することができる。 本発明に係る金属キレートの好ましい投与方式は、非経口投与、例えば静脈内 または動脈内投与である。非経口投与可能な形態、例えば静脈内溶液は、滅菌さ れているべきであり、生理的に許容できない物質を含んでいてはならず、また、 、投与に際して刺激または他の不利な効果を最小限にするために、低いオスモラ リティーを有するべきであり、従って組成物は、好ましくは等張性であるか、ま たは僅かに高張性であるべきである。好適なベヒクルとしては、非経口溶液の投 与に慣習的に用いられる水性ベヒクル、例えば塩化ナトリウム注射液、リンゲル 注射液、デキストロース注射液、デキストロースおよび塩化ナトリウム注射液、 乳酸添加リンゲル注射液、およびRemington's Pharmaceutical Sciences，15th ed.，Easton:Mack Publishing Co.，pp．1405-1412および 1461-1487（1975）およびThe National Formulary XIV，14th ed．Washington:A merican Pharmaceutical Association（1975）に記載されているような他の溶液 が挙げられる。これらの溶液は、非経口溶液に普通に用いられる保存剤、抗微生 物剤、緩衝剤および抗酸化剤、および、キレートと共存可能であり、かつ製品の 製造、保存および使用に支障をきたさない賦形剤および他の添加剤を含有するこ とができる。 本発明に係る治療剤は、溶液、懸濁液または分散液の形態にある場合は、キレ ート化剤または金属キレートを、一般的に１リットル当たり0.0001〜5.0モル、 好ましくは１リットル当たり0.01〜0.1モルの範囲の濃度で含有する。しかしな がら、好都合ならば、治療剤は、投与に先立って希釈するための、より濃厚な形 態で供給することもできる。 本発明に係る治療剤は、好都合には体重１kg当たり10^-2〜100μｍｏｌの化合 物、例えば体重１kg当たり約10μｍｏｌの量で投与することができる。 本発明を、以下の非限定的実施例により、添付の図面を参照して、さらに説明 する。 図１は、MnDPDP(30μＭ)の存在下での低酸素および再酸素供給の間のラット心 臓における左心室発生圧(left ventricular developed pressure，LVDP)の変化 を示す。LVDPはコントロール期間で得られた値の％として表される。平均値±SD が示される。^*は二つのグループ間の有意差を示す(p<0.05)。 図２は、MnDPDP(30μＭ)の存在下での低酸素および再酸素供給の間のラット心 臓における乳酸脱水素酵素(LDH)の心筋放出を示す。LDH放出はIU/mlで表される 。平均値±SDが示される。^*は二つのグループ間の有意差を示す(p〈0.05)。 図３は、NaClで処理した後のブタ心臓における梗塞の程度を示す。 図４は、MnDPDPで処理した後のブタ心臓における梗塞の程度を示す。実施例１ 低酸素および再酸素供給の間の心筋傷害に対するMnDPDPの保護効果を、エクス ビボで実証した。方法 単離したラット心臓を、ランゲンドルフ（Langendorff）方式で３７℃におい て一定の流速（10ml/min）で潅流させた。潅流媒質（グルコース含有クレブス・ ヘンゼライト（Krebs Henseleit's）重炭酸塩緩衝液）を、正常酸素状態の間は ９５％Ｏ₂＋５％ＣＯ₂で、低酸素の間は９５％Ｎ₂＋５％ＣＯ₂で平衡化した。収 縮機能の主要な指標である左心室（LV）発生圧（LVDP）を、圧力変換器および記 録装置に接続された液体充填LVバルーンを用いて測定した。冠流出液は、標準的 酵素技術により心筋乳酸脱水素酵素(LDH)放出を測定するために時間間隔をおい て収集した。 実験時間コース（１７０分）は次のとおりの期間であった：コントロール期間 は０〜２０分(２０分間の正常酸素潅流)；低酸素期間は２０〜１４０分(１２０ 分間の低酸素潅流)；および再酸素供給期間は１４０〜１７０分(３０分間の正常 酸素潅流)。二つの実験グループを研究した：(a)全低酸素期間中＋再酸素供給の 最初の１０分の間、潅流液中にMnDPDP 30μＭを存在させたMnDPDP グループ(n= 3)；および（b）未処理のコントロールグループ(n=3)。結果 図１は、コントロール期間で得られた値の％として表されるLVDPが、低酸素 および再酸素供給期間中にMnDPDP 30μＭを存在させた場合に１５〜４０％高か ったことを示している。グループ間の差は、低酸素の終わり、および再酸素供給 の最初の５分間で有意であった。 図２は、MnDPDPが再酸素供給時に心筋LDH放出を大いに減少させたことを示し ている。Ｏ₂再導入後の最大放出（平均値±SD）は、コントロールおよびMnDPDP グループにおいて、それそれ654±268IU/min（３分目）および148±108IU/min（ ２分目）であった。蓄積したLDH放出もまた、同様の有意差：すなわちコントロ ール心臓では9505±3562IU/30min、およびMnDPDP処理心臓では2887±1461IU/min を示した。 低酸素および再酸素供給中の向上した収縮機能、および再酸素供給時の減少し た酵素漏出は、低酸素＋再酸素供給中のMnDPDP 30μＭによる心筋保護の証拠で ある。実施例２ 方法 ブタをペントバルビトンナトリウム35mg/kgの静脈内投与（i.v.）で麻酔した 。挿管した後、人工呼吸器を用い、必要に応じて合計３０％までのＯ₂を補充し た室内空気で動物を換気した。麻酔は0.5〜5mg/kg/hrのネムブタールを連続的に 注入して維持した。 開胸術を行って心臓を露出させ、種々の血行動態測定のために動物にカテーテ ルを挿入した。物質投与のために、もう１本のカテーテルも頚静脈内に入れた。 血中ガスの測定（Ｏ₂、ＣＯ₂）の準備中に、時間間隔をおいて血液サンプルを採 取した。 少なくとも３０分間平衡化した後、ブタに1.5mg/kg i.v.のリドカインを与え 、閉鎖-誘発不整脈を減少させた。１０分の後、10μmol/kg MnDPDPまたは相当す る体積の0.9% NaCl（1ml/kg）を動物に与えた。３０分の後、左冠状動脈(LAD)の 左前下行枝を二つの安全な血管クランプで閉鎖した。 ４０分の後、クランプを除去してLADを再潅流させた。さらに１２０分の後、 心臓を摘出し、冠状動脈を再び閉鎖し、心臓に蛍光性中心体を潅流させて、危険 状態にある領域、すなわち閉鎖中に潅流されない領域を示した。心室を８〜９枚 の薄片にスライスした。テトラゾリウムで染色した後、梗塞のサイズを測定し、 危険領域の％として表した。結果 典型的な結果は、添付の図３および４に示されている。 梗塞サイズは、MnDPDP-処理動物（約６％の危険領域）の場合よりも、0.9%NaC l-処理動物（約４５％の危険領域）の場合に大きかったことが分かる。 図３および４から、マンガン化合物 MnDPDP（mangafodipir）は、LADを閉鎖 する前に動物に注射すると、予想外にも、心筋を閉鎖-再潅流の有害効果から保 護することが分かる。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，Ｌ Ｕ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ， ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，Ｓ Ｄ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ， ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＳ，Ｆ Ｉ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＨ，ＨＵ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ， ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，Ｍ Ｘ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ， ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ (72)発明者 トワート，ロバートソン 英国 ストーク ポージス エスエル２ ４ピーティー，セフトン パドック 13

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １． 下記式Ｉ の化合物、またはその金属キレートまたは塩を、ヒトまたはヒト以外の動物の身 体中のフリーラジカルの存在に起因する状態を治療または予防するのに用いられ る治療剤の製造に使用する方法 （式Ｉにおいて、 各Ｒ¹は独立して、水素または-CH₂COR⁵を示し； Ｒ⁵はヒドロキシ、所望によりヒドロキシル化されたアルコキシ、アミノまた はアルキルアミド示し； 各Ｒ²は独立して、基ＸＹＲ⁶を示し； Ｘは単結合、あるいは所望により基Ｒ⁷で置換されたＣ_1-3アルキレンまたはオ キソアルキレン基を示し； Ｙは単結合、酸素原子または基ＮＲ⁶を示し； Ｒ⁶は水素原子、基COOR⁸、あるいは所望によりCOOR⁸、CONR⁸ ₂、NR⁸ ₂、OR⁸、=N R⁸、=O、OP(O)(OR⁸)R⁷およびOSO₃Mから選択された１個以上の基により置換され たアルキル、アルケニル、シクロアルキル、アリールまたはアラルキル基であり ； Ｒ⁷はヒドロキシ、または所望によりヒドロキシル化され、所望によりアルコ キシル化されたアルキルまたはアミノアルキル基であり； Ｒ⁸は水素原子、または所望によりヒドロキシル化され、所望によりアルコキ シル化目れたアルキル基であり； Ｍは水素原子、または生理的に許容されるカチオンの１当量であり； Ｒ³はＣ_1-8アルキレン基、1,2-シクロアルキレン基または1,2-アリーレン基を 示し； 各Ｒ⁴は独立して、水素またはＣ_1-3アルキルを示す）。 ２． 上記式Ｉにおいて、 Ｒ⁵がヒドロキシ、Ｃ_1-8アルコキシ、エチレングリコール、グリセロール、ア ミノまたはＣ_1-8アルキルアミドであり； Ｘが単結合、またはCH₂、(CH₂)₂、CO、CH₂CO、CH₂CH₂COまたは CH₂COCH₂から選択される基であり； Ｙが単結合であり； Ｒ⁶がモノ-またはポリ（ヒドロキシまたはアルコキシル化）アルキル基または 式OP(O)(OR⁸)R⁷の基であり； Ｒ⁷がヒドロキシ、または非置換のアルキル基またはアミノアルキル基である 請求項１に記載の使用方法。 ３． 上記式Ｉにおいて、Ｒ³がエチレンであり、各Ｒ¹が-CH₂COR⁵を示し、ここ でＲ⁵がヒドロキシである請求項１または請求項２に記載の使用方法。 ４． 上記式Ｉの化合物が、N,N'-ビス-（ピリドキサール-5-ホスフェート）-エ チレンジアミン-N,N'-ジ酢酸である請求項１〜３の何れかに記載の使用方法。 ５． 上記金属キレートが、アルカリ金属、アルカリ土類金属、および原子番号 ２２〜３１、４２、４４および５８〜７０を有する金属から選択される金属イオ ンを含む請求項１〜４の何れかに記載の使用方法。 ６． 上記金属キレートが、１０⁹〜１０²⁵の範囲のＫ_aを有する請求項５に記載 の使用方法。 ７． 上記金属キレートが、１０¹²〜１０²²の範囲のＫ_aを有する請求項５に記 載の使用方法。 ８． 上記金属キレートが、対応する鉄(Fe³⁺)キレートのＫ_aの少なくとも千分 の一のより小さいＫ_aを有する請求項５に記載の使用方法。 ９． 上記金属イオンが、Ｎａ⁺、Ｍｎ²⁺、Ｃａ²⁺、Ｃｕ⁺、Ｃｕ²⁺、Ｍｇ²⁺、Ｇ ｄ³⁺およびＺｎ²⁺から選択される請求項５〜８の何れかに記載の使用方法。 １０． 上記化合物が、N,N'-ビス-（ピリドキサール-5-ホスフェート）-エチレ ンジアミン-N,N'-ジ酢酸のマンガン(II)キレートである請求項１〜９の何れかに 記載の使用方法。 １１． 上記治療剤が、再潅流-誘発傷害の治療または予防に用いられるもので ある請求項１〜１０の何れかに記載の使用方法。 １２． 上記傷害が、心筋再潅流の結果ある請求項１１に記載の使用方法。 １３． 上記傷害が、血栓融解治療、心-肺バイパス、経皮内腔横断冠状血管形 成術に関連するか、あるいは心臓外科または移植外科の結果である請求項１１に 記載の使用方法。 １４． 上記治療剤が、放射線-誘発傷害の治療または予防に用いられるもので ある請求項１〜１０の何れかに記載の使用方法。 １５． 請求項１〜１０の何れかで定義された式Ｉの化合物、またはその金属キ レートまたは塩を、血栓融解剤および少なくとも１つの製剤上許容される担体ま たは賦形剤と一緒に含有する製剤組成物。 １６． 請求項１〜１０の何れかで定義された式Ｉの化合物、またはその金属キ レートまたは塩、およびこれとは別個に、血栓崩壊処置の間に同時に、別個にま たは続いて使用するための血栓融解剤を含むパック。 １７． 請求項１〜１０の何れかで定義された式Ｉの化合物、またはその金属キ レートまたは塩を血栓融解剤と一緒に、血栓崩壊処置の間に用いられる薬剤の製 造に使用する方法。 １８． ヒトまたはヒト以外の動物の身体に、請求項１〜１０の何れかで定義さ れた式Ｉの化合物、またはその金属キレートまたは塩の有効量を投与ことを含む 、上記身体中のフリーラジカルの存在に関連する状態と戦うか、またはこれを予 防するためのヒトまたはヒト以外の動物の身体の治療方法。