JP2000515392A - 生検におけるヘリコバクターピロリの検出用組成物、検出用キット及び検出方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 ０．５〜４体積％の尿素；０．０５〜０．２体積％のりん酸カリウム；０．８〜１．７体積％のフェナテ試薬溶液；０．００２〜０．００５体積％のｐＫａ６．５〜８．５である指示薬；及び残部の水を含むヘリコバクターピロリの検出用組成物、前記組成物を用いたヘリコバクターピロリの検出用キットが開示され、前記組成物を利用した検出方法は、ヘリコバクターピロリの感染の有無を迅速かつ正確に判定することができ、時間が経過した後も同一の判定結果を得ることができ、内視鏡室で容易に利用することができる。

Description

【発明の詳細な説明】 ［発明の名称］生検におけるヘリコバクターピロリの検出用組成物、検出用キッ ト及び検出方法 ［発明の詳細な説明］ ［発明の属する技術分野］ 本発明は、胃腸疾患の原因菌であるヘリコバクターピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａ -ｃｔｅｒ ｐｙｌｏｒｉ、以下Ｈ・ピロリとする）の検出に関し、より詳しくは 既存のウレアーゼ酵素方法（ｕｒｅａｓｅ ｅｎｚｙｍｅ ｔｅｓｔ）にアンモニ ウムイオンの定量法であるフェナテ法（ｐｈｅｎａｔｅ ｍｅｔｈｏｄ）を応用 して製造されるＨ・ピロリの検出用組成物及びこれを利用した検出用キット（ｋ ｉｔ）及び検出方法に関する。 ［従来の技術］ Ｈ・ピロリは、胃がん及び胃十二指腸潰瘍を初め、胃腸疾患をおこす原因菌と して注目されており、世界保健機構（ＷＨＯ）ではＨ・ピロリを発癌性物質（ｔ ｙｐｅｄ ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎ）に規定した。このようなＨ・ピロリによる胃 腸疾患の治療のためには正確な診断、つまりＨ・ピロリの正確な検出が前提とさ れるべきである。現在までＨ・ピロリの検出のために用いられた方法は内視鏡の 使用有無によって大きく２種類に分けることができるが、内視鏡を使用しない非 観血的方法（ｎｏｎ-ｉｎｖａｓｉｖｅ ｔｅｓｔ）と内視鏡を使用して生検組織 を得、その生検組織を通じて検出する観血的方法（ｉｎｖａｓｉｖｅ ｔｅｓｔ ）がそれである。 ［発明が解決しようとする課題］ 非観血的方法には血清学的方法（ｓｅｒｏｌｏｇｙ ｔｅｓｔ）と¹³Ｃまたは^{1 4} Ｃ−呼吸方法（¹³Ｃ ｏｒ ¹⁴Ｃ Ｂｒｅａｔｈ ｔｅｓｔ）がある。血清学的方 法は、Ｈ・ピロリに対する抗体を測定するものであるが、疾病治療の後、抗体の 水準が低下するまで６ケ月以上要するので抗体が存在するとしても必ず疾病が続 いている状態であるとは限らないという問題点がある。¹³Ｃまたは¹⁴Ｃ−呼吸方 法は、Ｈ・ピロリが存在する場合、¹³Ｃまたは¹⁴Ｃに標識された尿素（ｕｒｅａ ）を摂取すると¹³Ｃまたは¹⁴Ｃに標識された尿素が胃腸内において標識 されたＣＯ₂に転換されて呼気（ｅｘｈａｌｅｄ ａｉｒ）から検出される原理を 利用するものであるが、高価な装備を必要とする理由から余り用いられていない のが実情である。 一方、Ｈ・ピロリを検出するためには観血的方法を用いるのがより一般的であ る。観血的方法は、胃内視鏡の時、採取された胃生検組織を利用して検出するも のであり、ここでは組織診断的方法（ｈｉｓｔｏｌｏｇｙ）、ＰＣＲ（Ｐｏｌｙ ｍｅｒａｓｅ Ｃｈａｉｎ Ｒｅａｃｔｉｏｎ）方法、培養法（ｃｕｌｔｕｒｅ） 及びウレアーゼ酵素方法（ｕｒｅａｓｅ ｅｎｚｙｍｅ ｔｅｓｔ）がある。組織 学的方法は生検組織に対する通常の組織診断を通じてＨ・ピロリの存在を確認す る方法であり、ＰＣＲ方法は重合酵素の連鎖反応を通じてＨ・ピロリの存在を確 認する方法である。また、培養法は生検組織からＨ・ピロリを直接培養する方法 であるが、これらのすべての方法は容易でなく、時間が多くかかるため、実用的 に用いることができないという問題点がある。 ウレアーゼ酵素方法は、内視鏡室において容易に用いることができ、最も効率 的な方法であって、Ｈ・ピロリが他の微生物に比べて非常に活性度が高いウレア ーゼ酵素を生産する点を利用するものである。つまり、ウレアーゼが存在すると 、検出用キット内に添加された尿素が分解されてアンモニアが発生し、そのため にｐＨが上昇してｐＨ指示薬が反応・発色するようになるが、このようにウレア ーゼの活性度を測定することによってＨ・ピロリを検出する方法である。 現在までウレアーゼ酵素方法を利用して商業化されたキットとしては、「Ｃｌ Ｏｔｅｓｔ」(米国特許第４，７４８，１１３号)、"Ｈｐｆａｓｔ"（米国特許第 ５，４３９，８０１号）及び"Ｐｙｌｏｒｉｔｅｋ"（米国特許第５，３１４，８ ０４号及び第５，４２０，０１６号）がある。ＣｌＯｔｅｓｔに用いられる組成 物は、１０〜４０ｇ／ｌの尿素、１〜５ｇ／ｌの殺菌剤(ｂａｃｔｅｒｉｃｉｄ ｅ)、有効量のｐＫａ６．５〜８．５である指示薬(フェノールレッド)、残部の 水を含有するもので５．０〜６．５のｐＨを持つものである。しかし、ＣｌＯｔ ｅｓｔは前記組成物とＨ・ピロリが生産するウレアーゼ間の反応速度が遅いため に、判定者によって陽性率（ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｒａｔｅ）が異なってくる問題 点かある。従って、約２４時間後にしか診断することができず、内視鏡検査の当 日に診断結果を知ることができないので、患者がもう一度病院を訪問しなければ ならず、さらに24時間以上経過した後には、発色が多様に現われ、明確な診断か 難しくなる。 Ｈｐｆａｓｔは、ＣｌＯｔｅｓｔと基本的には類似しているが、細胞壁洗浄剤 （ｃｅｌｌ ｗａｌｌ ｄｅｔｅｒｇｅｎｔ）を添加し、フェノールレッド、メチ ルレッド及びブロモチモルブルーの混合指示薬として用いるという点で異なる。 Ｈｐｆａｓｔの場合、ｐＨ６．２の暗緑色からＨ・ピロリ陽性と判定し、ｐＨ ６．０の淡緑色はＨ・ピロリ陰性と判定するが、この淡緑色及び暗緑色の正確な 判定が難しいという問題点がある。 Ｐｙｌｏｒｉｔｅｋは、上記ＣｌＯｔｅｓｔ及びＨｐｆａｓｔとは異なって多 重層試験器具（ｍｕｌｔｉｌａｙｅｒ ｔｅｓｔ ｄｅｖｉｃｅ）を用いるもので あって、その主な特徴は、ウレアーゼが反応する部分と反応産物であるアンモニ アを検出する部分が異なる層にあり、各層のｐＨが異なるという点である。 Ｐｙｌｏｒｉｔｅｋは、１時間内に診断結果を知ることができるが、１時間以 後では、判定時の偽陽性率（ｆａｌｓｅ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｒａｔｅ）が増加し 、従って内視鏡検査の際に反応時間を正確に守らないと、偽陽性率が増加する可 能性がある。 また、上記ＣＬＯ ｔｅｓｔ、Ｐｙｌｏｒｉｔｅｋなどのウレアーゼ酵素方法 は、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ ｈｏｍｉｎｉｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃ ｕｓ ｓａｌｉｖａｒｉｕｓ、Ｅ．ａｅｒｏｆａｃｉｅｎｓ、Ｌ．ｆｅｒｍｅｎ ｔｕｍなどの細菌が持っている少量の、活性度が低いウレアーゼとも反応するこ とがあり、判定時間が遅くなる場合、偽陽性率が増加することもある。 本発明は、上記のような従来技術の問題点を解決するために案出されたもので あって、本発明の目的は、胃腸疾患をおこす原因菌であるＨ・ピロリの感染有無 を迅速で正確に判定することができるＨ・ピロリの検出用組成物及び前記組成物 を利用したＨ・ピロリの検出用キット及び検出方法を提供することにある。また 、本発明によれば、時間が経過した後にも同一な判定結果を得ることができ、内 視鏡室において容易に利用することができる。 ［課題を解決するための手段］ 上記のような本発明の目的を達成するために、第一に、本発明は０．５〜４体 積％の尿素、０．０５〜０．２体積％のりん酸カリウム（ＫＨ₂ＰＯ₄），０．８ 〜１．７体積％のフェナテ試薬溶液(ｐｈｅｎａｔｅ ｒｅａｇｅｎｔ ｓｏｌｕ ｔｉｏｎ)、０．００２〜０．００５体積％のｐＫａ６．５〜８．５である指示 薬及び残部の水を含むＨ・ピロリの検出用組成物を提供する。前記組成物のうち 、前記０．８〜１．７体積％のフェナテ試薬溶液は、０．５〜１体積％の硫酸マ ンガン（ｍａｎｇａｎｏｕｓ ｓｕｌｆａｔｅ）溶液、０．２〜０．５体積％の 次亜塩素酸（ｈｙｐｏｃｈｌｏｒｉｔｅ）及び０．１〜０．２体積％のフェナテ 試薬（ｐｈｅｎａｔｅ ｒｅａｇｅｎｔ）からなるのが好ましく、前記指示薬は フェノールレッドであるのが好ましい。また、前記組成物は０．５〜２体積％の ゲル化剤（ｇｅｌｌｉｎｇ ａｇｅｎｔ）を更に含むのが好ましい。特に、前記 組成物は、２体積％の尿素、０．０５体積％のりん酸カリウム、１体積％の硫酸 マンガン溶液、０．５％体積の次亜塩素酸、０．２体積％のフェナテ試薬、０． ００２５体積％のフェノールレッド、１体積％のアガー及び残部の水を含むのが さらに好ましい。また、前記組成物のｐＨは６．０〜７．８であるのが好ましい 。 第二に、本発明は上記素生物から作られ、さらに、上記組成物に、生検組織を 位置させる試験具、上記組成物に０．１ＮのＮａＯＨ溶液１０〜２０μｌをさら に添加して製造される陽性対照具及び生検組織を含まない上記組成物の陰性対照 具を含むＨ・ピロリの検出用キットを提供する。 第三に、本発明は、生検組織を上記組成物と反応させ、上記組成物の色の変化 を観察する段階を含む生検組織からのＨ・ピロリの検出方法を提供する。 ［図面の簡単な説明］ 明細書に組み込まれ、その一部を構成する添付図面は、本発明の実施の形態を 図示し、記述と共に本発明の原理を説明するのに役立つものである。 図１は、本発明による検出用キットの斜視図である。 図２は、本発明による検出用キットの断面図である。 図３は、本発明による検出用キットの使用例を示す図面である。 ［発明の実施の形態］ 以下の詳細な説明では、本発明の好ましい実施の形態のみが、本発明を実施し た発明者が意図する最良の方法を図示することにのみによって示され、説明され ている。本発明は、本発明から逸れることなく、様々な自明な点において変更が 可能であるということが分かるであろう。従って、図面及び記述は、全く説明的 なもので、限定的なものではないとみなされるべきである。 以下、本発明をより詳しく説明すると下記の通りである。 本発明者らは、Ｈ・ピロリを検出することにおいて、既存のウレアーゼ酵素方法 を従来用いられていた方法から、変色速度を速くし、陽性対照具と陰性対照具の 試験結果を同時に比較することにより、迅速・正確な判定が可能となる組成物へ 変形させ、判定者の主観による偽陽性率を顕著に低下させようとした。つまり、 既存のウレアーゼ酵素方法を用いた試験キットは単に尿素を分解することにより 発生するアンモニアが水と反応することにより発生するＯＨ^-イオンによるｐＨ の増加を感知するものであるので、本発明者らは、ｐＨの変化速度を増加させる ためにアンモニウムイオン自体を除去しようとし、このためにアンモニウムイオ ンの定量に用いられるフェナテ（ｐｈｅｎａｔｅ）法（Ｓｔａｎｄａｒｄ Ｍｅ ｔｈｏｄｓ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ Ｗａｔｅｒ ａｎｄ Ｗａｓｔｅｗａｔｅｒ １９ｔｈ ｅｄ．１９９５，Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｐｕｂｌ ｉｃ Ｈｅａｌｔｈ Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ，ｐｐ４−８０〜４−８２）を適用 した。 ウレアーゼによる尿素の分解過程を反応式に示すと下記の通りである。 ［反応式１］ （ＮＨ₂）₂ＣＯ＋２Ｈ₂Ｏ→２ＮＨ₃＋Ｈ₂ＣＯ₃ （非可逆反応） （尿素） Ｈ₂ＣＯ₃←→Ｈ⁺＋ＨＣＯ₃ ^- （可逆反応） ２ＮＨ₃＋２Ｈ₂Ｏ←→２ＮＨ₄ ⁺＋２ＯＨ^- （可逆反応） 総反応:（ＮＨ₂）₂ＣＯ＋４Ｈ₂Ｏ→２ＮＨ₄ ⁺＋２ＯＨ^-＋Ｈ⁺＋ ＨＣＯ₃ ^- 本発明の組成物においては上記尿素分解過程の産物であるアンモニウムイオン をインドフェノールブルー（ｉｎｄｏｐｈｅｎｏｌ ｂｌｕｅ）に転換させて尿 素の分解が持続的になされるようにすることによって、ｐＨの増加か迅速になさ れるようにする。前記目的を達成するために非常に有効な水溶液内のアンモニア 濃度の測定方法であるフェナテ法を適用する。フェナテ法は、マンガン触媒下に おいてアンモニアが次亜塩素酸塩基及びフェノールと反応し、インドフェノール ブルーに変化する原理を利用するものであって、反応式に示すと次の通りである 。 ［反応式２］ ２ＮＨ₄ ⁺＋ＯＣｌ^-＋２Ｃ₆Ｈ₅ＯＨ→Ｏ＝Ｃ₆Ｈ₄＝Ｎ・Ｃ₆Ｈ₄−ＮＨ₂ つまり、本発明の組成物においては、既存のウレアーゼ酵素方法に用いられる 組成物にフェナテ試薬溶液を添加し、上記ウレアーゼによる尿素の分解過程から 発生したアンモニウムイオンをインドフェノールブルーに転換させ、反応速度を 速くし、ｐＨ増加を迅速にするわけである。 また、本発明の組成物の中で次亜塩素酸（ＮａＯＣｌ）は、弱いウレアーゼの 活性を抑制する効果があるので、細菌のウレアーゼにより増加した濃度によって 偽陽性率を減らし、時間が経過した後にも判定結果を得ることができるようにす る。本発明においてフェナテ試薬溶液の添加量は、Ｈ・ピロリウレアーゼの活性 が抑制されず、ｐＨ指示薬の色の変化に影響を与えない範囲内で調節する。本発 明の組成物及び各成分の可能な含量範囲は次の通りである。 ０．５〜４体積％の尿素 ０．０５〜０．２体積％のりん酸カリウム ０．８〜１．７体積％のフェナテ試薬溶液 ０．００２〜０．００５体積％のｐＫａ６．５〜８．５である指示薬 残部の水 上記組成において尿素は、Ｈ・ピロリが生産するウレアーゼの基質として作用 するものであり、０．５〜４体積％程度の含量がＨ・ピロリが生産するウレアー ゼの活性度を測定するのに適正な水準である。 りん酸カリウムは緩衝溶液の役割をするものであって、０.０５〜０.２体積％ が含まれるべきであるが、０．０５体積％未満においては好ましいｐＨの範囲が 得られず、０．２体積％を超過する場合にはｐＨの変化を抑制する傾向がある。 フェナテ試薬溶液は、アンモニウムイオンをインドフェノールブルーに転換さ せる作用と他の微生物のウレアーゼ活性を抑制する作用をするものであって、０ ．８〜１．７体積％か含まれるべきであるか、０．８体積％未満においてはアン モニウムイオンを除去してｐＨの変化速度を増加させる効果と他の微生物のウレ アーゼ活性を抑制する効果が充分でなく、１．７体積％を超過する場合にはｐＨ が高すぎ、他の微生物のウレアーゼだけでなくＨ・ピロリのウレアーゼの活性も 抑制する傾向がある。また、ｐＫａ６．５〜８．５である指示薬は、ｐＨの変化 を感知する役割をするものであって、本発明においてはフェノールレッドが最適 であり、０．００２〜０．００５体積％含まれるのが正確な判定のために好まし い。フェノールレッドは酸性溶液においては黄色に、塩基性溶液においては赤紫 色になる性質を持つ。 上記フェナテ試薬溶液は、詳しくは触媒として作用する硫酸マンガン、アンモ ニウムイオンと反応する反応物として作用する次亜塩素酸及びフェナテ試薬を含 有するものであって、特に１体積％の硫酸マンガン溶液、０．５体積％の次亜塩 素酸及び０．２体積％のフェナテ試薬からなるのが好ましい。また、本発明の組 成物は、０．５〜２体積％のゲル化剤、例えば、アガーをさらに含むのが好まし いが、この場合ソフトゲル（ｓｏｆｔ ｇｅｌ）の形態に用いることができて便 利である。本発明の組成物はｐＨ６．０〜７．８に調節されるのが好ましいが、 この範囲のｐＨを維持するのが正確な判定に役に立つためである。 本発明の組成物のさらに好ましい成分及びその含量範囲は次の通りである。尿 素２体積％、りん酸カリウム０．０５体積％、硫酸マンガン溶液１体積％、次亜 塩素酸０．５体積％、フェナテ試薬０．２体積％、フェノールレッド０．００２ ５体積％、アガー１体積％、残部の水。 一方、本発明において用いられるフェナテ試薬溶液のストック（ｓｔｏｃｋ） 溶液の好ましい組成成分及びその含量は下記の通りである。 硫酸マンガン溶液；ＭｎＳＯ₄・Ｈ₂Ｏ０．０５体積％、残部の蒸留水 次亜塩素酸；ＮａＯＣｌ１体積％、残部の蒸留水 フェナテ試薬；ＮａＯＨ２．５体積％、フェノール８体積％、残部の蒸留 水。 本発明においては上記組成物で製造したゲルに胃内視鏡から得た胃生検組織を 位置させ、上記組成物と反応をおこすようにしてその色の変化を観察する。上記 ゲルは上述の組成物で作られ、陽性対照具は、上記組成物に陽性結果を示す最少 量のＮａＯＨ、つまり０．１ＮのＮａＯＨ溶液１０〜２０μｌを添加して製造さ れ、ＮａＯＨを全く添加しなかった陰性対照具ゲルの色と比較することによって Ｈ・ピロリの感染の有無を判定する。従って、陽性または陰性結果を示す色を一 目で比較するために、陽性対照具と陰性対照具を並べて配置した試験具は、判定 者の主観による誤った試験結果を減らすことができる。 本発明による検出用キットの斜視図を図１に、側面図を図２にそれそれ示した 。また、本発明による検出用キットの使用例を図３に示した。前記図１〜３にお いて１はカバー、２は容器(ｃｏｎｔａｉｎｅｒ)、好ましくは透明なアクリル材 質の容器、３は本発明による検出用組成物、４は試験具、５は生検標本空間、好 ましくは不透明に処理して側面から生検標本が見えないようにしたもの、６は陰 性対照具、７は陽性対照具及び８は生検試料をそれそれ示すものである。 本発明の好ましい実施例及び比較例を記載する。しかし、下記の実施例は、本 発明の一実施例に過ぎず、本発明か下記の実施例に限られるわけではない。 ［実施例１］Ｈ・ピロリの検出用組成物の製造 まず、下記の組成のストック溶液を準備した。 尿素２０体積％、りん酸カリウム２体積％、フェノールレッド０．０１体積％ 、アガー２体積％。 フェナテ試薬溶液のストック溶液として硫酸マンガン溶液はＭｎＳＯ₄・Ｈ₂Ｏ ５０ｍｇに蒸留水を添加して１００ｍｌになるようにし、次亜塩素酸は１０％、 ＮａＯＣ１１０ｍｌに蒸留水を添加して１００ｍｌになるようにして濃縮塩酸に てｐＨを６．８に調整し、フェナテ試薬はＮａＯＨ２．５ｇ、フェノール８ｍｌ に蒸留水を添加して１００ｍｌになるようにして準備した。上記アガー溶液を１ ５分間オートクレーブ（１２１℃、 1.5気圧）した後、５５℃の水槽に使用する まで放置し、下記のように２倍試薬を製造した。前記尿素ストック溶液１０ｍｌ 、前記りん酸カリウムストック溶液２．５ｍｌ、前記フェノールレッドストック 溶液２５ｍｌ、前記硫酸マンガン溶液１ｍｌ、前記次亜塩素酸０．５ｍｌ、前記 フェナテ試薬０．２ｍｌを混合し、ここに蒸留水を添加して５０ｍｌになるよう に した。前記製造された２倍試薬を０．２μｍのフィルタにて除菌した後、２％ア ガー溶液と同量を混合した。その結果、組成物の最終濃度は下記の通りであり、 この時、最終ｐＨは７．５であった。 ２％尿素、０．０５％りん酸カリウム、０．０００５％硫酸マンガン、０． ００５％ＮａＯＣｌ、０．２％フェナテ試薬(０．００５％ＮａＯＨ、０．０１ ６％フェノール)、０．００２５％フェノールレッド、１％アガー。 ［実施例２］Ｈ・ピロリ検出用キットの製造 実施例１において製造した組成物をマルチウォールプレートの一つのウォール に注入して胃内視鏡から得た胃生検組織を位置させるように試験具を作り、上記 製造した組成物を他のウォールに注入し、上記組成物に０．１ＮのＮａＯＨ１０ μｌをさらに添加して陽性対照具を作り、製造した組成物を別のウォールに注入 して陰性対照具を作ってＨ・ピロリ検出用キットを製作した。前記検出用キット をＰＥＴ（Ｐｙｌｏｒｉ Ｅａｓｙ Ｔｅｓｔ）ｋｉｔと命名した。 ［試験例１］ 患者の生検組織を採取した後、その生検組織に対してＣｌＯｔｅｓｔ及び実施 例２のＰＥＴを同時に遂行し、時間別に陽性率を比較してその結果を下記の表１ に示した。 その結果ＰＥＴは１時間以内に全休陽性の７６．９％を確認することができ、 ３時間後には全体陽性の１００％を確認することができた。反面、ＣｌＯｔｅｓ ｔは１７．６〜３０％だけの陽性を確認することができ、24時間後にのみ１０ ０％の陽性率を確認することができた。しかし、24時間後には明確な区分をする ことができないあいまいな色が現われ、陽性率は、判定者によって３８．４％（ １０／２６）〜（６５．３％（１７／２６）のように差異が出た。従って、本発 明によるＰＥＴを利用する場合、より迅速な判定が可能であることが分かる。 その次に、ＰＥＴの結果がＰＣＲ方法と一致する程度を調査してみた。ここで ＰＣＲ方法は、Ｈ・ピロリ検出に最も特徴的で敏感なものとして知られている２ ６ｋＤａ蛋白質遺伝子を増幅させる方法を用いた。(Ｈｏ，Ｓ，ｅｔ ａｌ．１９ ９１，Ｄｉｒｅｃｔ Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ Ｃｈａｉｎ Ｒｅａｃｔｉｏｎ Ｔｅ ｓｔ ｆｏｒ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ ｏｆ Ｈ．ｐｙｌｏｒｉ ｉｎ Ｈｕｍａｎ ａ ｎｄ Ａｎｉｍａｌｓ，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．２９ ｐｐ２５４３ 〜２５４９)。その結果を下記の表２に示した。 上記表２から本発明のＰＥＴを用いた場合、２６の生検組織すべてがＰＣＲ方 法の結果と一致することが分かり、ＣｌＯｔｅｓｔの場合、その一致率は、６１ ．５〜８０．７％であることが分かった。従って、本発明のＰＥＴがＣｌＯｔｅ ｓｔより正確な判定が可能であることが分かる。 ［試験例２］ 胃内視鏡の時、採取した生検組織を−２０℃の冷蔵庫に１週間保管した後に試 験例１と同一な方法にてＰＥＴ及びＣｌＯｔｅｓｔを実施して、その結果を比較 して表３及び表４に示した。 上記表３及び４から、本発明によるＰＥＴを用いると、Ｈ・ピロリのウレアー ゼ活性がある程度減少した生検組織に対しても正確な判定が可能であることが分 かる。 本発明は、胃腸疾患をおこす原因菌であるＨ・ピロリ感染の有無を迅速で正確 に知ることができるＨ・ピロリの検出用組成物を提供することができ、時間が経 過した後にも同一な判定結果を得ることができ、この組成物は、内視鏡室におい て容易に利用することができる。本発明は、Ｈ・ピロリの検出用キット及びＨ・ ピロリ検出用組成物の使用方法を提供する。 ［試験例３］ ＰＥＴのＨ・ピロリ特異性について調査するために、胃内視鏡の時に採取した 生検組織から分離されたＨ・ピロリ菌とＳｔａｐｈｌｏｃｏｃｃｕｓ ｈｏｍｉ ｎｉ-ｓ菌に対してウレアーゼの分解能を調査した。調査方法は、Ｈ・ピロリ菌 とＳ．ｈｏｍｉｎｉｓ菌を培養した後、適当な数の菌を持つように滅菌された蒸 留水に希釈し、試験例１と同一な方法にてＰＥＴ及びＣｌＯｔｅｓｔを実施して 比較し、その結果を表５に示した。 上記表５から、本発明によるPETを用いると、Ｈ・ピロリのウレアーゼ活性に 対して速い反応を見せ、他の細菌のウレアーゼ活性に対しては低い反応を見せて 特異性が高い診断が可能であることが分かった。 本発明の好ましい実施の形態が上記で詳細に説明されたが、当業者が理解し得 る、ここに教示された基本的な発明の概念の変更または修正は、以下の請求項に 定義される本発明の精神及び範囲内にある。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (71)出願人 ロエ イムホワン 韓国 463―065 キュンキ―ドウ セオン ナム―シティ ブンダン―ク マエソン― ドン アルム―マウル ドーサンアパート 421―1401 (71)出願人 キム ジュンタイク 韓国 463―050 キュンキ―ドウ セオン ナム―シティ ブンダン―ク セオヒェオ ン―ドン91 ハンヤンアパート 314― 1601 (71)出願人 ハー ユンチル 韓国 135―110 ソウル カンナム―ク アプグージェオン―ドン ハンヤンアパー ト 51―1201 (71)出願人 チョエ タエブー 韓国 143―752 ソウル クワンジン―ク クワンジャン―ドン 145―８ ワーカ ーヒルアパート 52―501 (72)発明者 リー ジョンホワ 韓国 330―830 チョーンチェオンナム― ドウ チェオナン―シティ セオンッジオ ―エアップ ヨバン―リ ユキョウンアパ ート 105―109 (72)発明者 リー ハックサン 韓国 465―011 キュンキ―ドウ ハナム ―シティ デオックプーン１―ドン 420 ―52 (72)発明者 ロエ イムホワン 韓国 463―065 キュンキ―ドウ セオン ナム―シティ ブンダン―ク マエソン― ドン アルム―マウル ドーサンアパート 421―1401 (72)発明者 キム ジュンタイク 韓国 463―050 キュンキ―ドウ セオン ナム―シティ ブンダン―ク セオヒェオ ン―ドン91 ハンヤンアパート 314― 1601 (72)発明者 ハー ユンチル 韓国 135―110 ソウル カンナム―ク アプグージェオン―ドン ハンヤンアパー ト 51―1201 (72)発明者 チョエ タエブー 韓国 143―752 ソウル クワンジン―ク クワンジャン―ドン 145―８ ワーカ ーヒルアパート 52―501

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 ［請求項１］ a）０．５〜４体積％の尿素； b）０．０５〜０．２体積％のりん酸カリウム； c）０．８〜１．７体積％のフェナテ試薬溶液； d）０．００２〜０．００５体積％のｐＫａ６．５〜８．５である指示薬；及び e）残部の水； を含むヘリコバクターピロリの検出用組成物。 ［請求項２］ 上記０．８〜１．７体積％のフェナテ試薬溶液は、 a）０．５〜１体積％の硫酸マンガン溶液、 b）０．２〜０．５体積％の次亜塩素酸、 c）０．１〜０．２体積％のフェナテ試薬、 からなる請求項１に記載のヘリコバクターピロリの検出用組成物。 ［請求項３］ 上記指示薬はフェノールレッドである請求項１に記載のヘリコバクターピロリ の検出用組成物。 ［請求項４］ ０．５〜２体積％のゲル化剤をさらに含むものである請求項１に記載のヘリコ バクターピロリの検出用組成物。 ［請求項５］ a）２体積％の尿素、 b）０．０５体積％のりん酸カリウム、 c）１体積％の硫酸マンガン、 d）０．５体積％の次亜塩素酸、 e）０．２体積％のフェナテ試薬、 f）０．００２５体積％のフェノールレッド、 g）１体積％のアガー、及び h）残部の水、 を含むものである請求項４に記載のヘリコバクターピロリの検出用組成物。 ［請求項６］ ｐＨ６．０〜７．８である請求項１に記載のヘリコバクターピロリの検出用組 成物。 ［請求項７］ a）請求項４に記載の組成物でできた、生検組織を位置させる試験具； b）請求項４に記載の組成物に０．１ＮのＮａＯＨ溶液１０〜２０μｌをさら に添加して製造される陽性対照具；及び c）請求項４に記載の組成物から作られ、生検組織を位置させない陰性対照具 ； を含むヘリコバクターピロリの検出用キット。 ［請求項８］ a）生検組織を請求項１に記載の組成物と反応させ； b）前記生検組織と反応した組成物の色の変化を観察する； 段階を含む生検組織からのヘリコバクターピロリの検出方法。