JP2000515543A - ヘルペスウイルスにより起こる感染を予防または治療するためのキトサンと組み合わされたヘパリンまたはヘパラン硫酸の使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 ヒトを含む哺乳動物におけるヘルペスウイルスにより起こる感染を予防または治療する医薬を製造するためのキトサンと組み合わされたヘパリンまたはヘパラン硫酸の使用、およびヘルペスウイルスにより起こる感染症を治療する方法。

Description

【発明の詳細な説明】 ヘルペスウイルスにより起こる感染を予防または 治療するためのキトサンと組み合わされたヘパリン またはヘパラン硫酸の使用技術的分野 本発明は、ヘルペスウイルスにより起こる感染を予防または治療するために使 用することのできる医薬を製造するためのある種の硫酸化ポリアニオン性グルコ ースアミノグリカンの使用に関するものである。発明の背景 ヘルペスは、ヒトを含む哺乳動物に感染症を生ずるウイルスのファミリーに対 する一般名称である。大多数の感染に反して、ヘルペスウイルスは普通潜伏感染 と称される感染を生ずる。すなわち、中枢神経系の神経根中において休眠状態で 存在し、その後若干の未知の因子によって活性化された場合に活性な疾患を起こ す。現在、このような感染を治療するために利用することのできる方法はない。 疾患を活性化する因子は、大部分未知であるが、ストレス、発熱、月経、日光な どがウイルスの活性化の原因であり得ると信じられている。実際の見地から、ヘ ルペスウイルスは、典型的に、主な徴候として皮疹を起こす。 単純ヘルペスウイルスの２種の主な型、すなわち、口腔ヘルペスを起こすHSV- 1および性器ヘルペスを起こすHSV-2が知られている。これらのウイルスは、人口 の約10％において再発生する疼痛を与える皮膚および粘膜病変を起こす。疾患の 疼痛および外見上の効果は、もっとも多くの患者の主要な関心事でありそして疼 痛の軽減およびより急速な治癒は、当該技術においてより大きな進歩を示す。治 癒は、大抵の患者において自発的に起こるので、努力の一つの大きな目的は治癒 プロセスの促進および鎮痛効果の 提供にあることに注目すべきである。発明の要約 本発明は、その主な目的として、ヒトを含む哺乳動物におけるヘルペスウイル スにより起こる感染症を予防または治療する新規な技術を提供するものである。 本発明の他の目的は、このような予防または治療に対する医薬の製造に使用さ れる活性成分の新規な組み合わせを提供することである。 さらに、本発明の他の目的は、ヘルペスウイルスにより起こるヒトを含む哺乳 動物における感染を治療する方法を提供することである。 これらの目的および以下の開示から明らかである他の目的のために、本発明は ヒトを含む哺乳動物におけるヘルペスウイルスにより起こる感染症を予防または 治療する医薬を製造するためのキトサンと組み合わされたヘパリンまたはヘパラ ン硫酸の使用に存する新規な技術を提供する。 このような使用において、上記医薬の製造は、ヘパリンおよびキトサンの組み 合わせに基づくことが好ましい。 ヘパリンおよぴヘパラン硫酸は、いくつかの製造業者から市場において商業的 に入手することができる。また、生物学的活性が実質的に変化しないで残ること を条件として、これらの成分の部分的に加水分解された形態も使用することがで きる。 ヘルペスウイルスにより起こる感染症を予防または対処するために使用される 医薬は、異なる物理学的形態、例えば粉末、軟膏、ペースト、ゲル、懸濁液また は溶液とすることができる。使用される形態は、勿論、処置される疾患の性質に 適応される。 本発明の医薬における主成分の一つは、β−Ｄ−グルコースアミン部分から構 成された線状の1,4−結合した多糖である多糖キトサンである。キ トサンは、とりわけ、昆虫およびザリガニの殻を形成する重合体であるキチンの Ｎ−脱アセチル化によって製造される。商業的キチンは、漁業からの廃棄物を構 成するカニおよび小エビの殻から得られる。キチンのアルカリ処理を調節するこ とによって、種々の程度のＮ−アセチル化のキトサンを製造することができる。 水酸化ナトリウムのようなアルカリでキチンを処理する場合は、Ｎ−脱アセチル 化が行われ、この場合、アセトアミド基がアミノ基に変換され、キトサンが形成 される。 キトサンの利用性に影響を与えるキトサンの物理学的性質は、Ｎ−アセチル化 の程度、分子量および均一性に依存する。キトサンは、消化系からのキチナスに よっておよび体液中のリゾチームによって、生分解される。 本発明の使用に関連して、キトサンが多くとも約90％そして好ましくは多くと も約50％のＮ−アセチル化の程度を有することが好ましい。Ｎ−アセチル化の程 度が約25％より小さいことが特に好ましい。 本発明に包含される医薬の２種の主な成分、ヘパリンまたはヘパラン硫酸およ びキトサンは、医薬的に許容し得る特性を有する慣用の担体または賦形剤と組み 合わせて適当に使用される。極めて一般的には、マトリックスが水性マトリック スでありそして担体または賦形剤が、ヘミセルロース、例えばアラビノキシラン およびグルコマンナン、植物ゴム、例えばグアーゴム、イナゴマメゴム、セルロ ースおよびその誘導体、例えばメチルセルロース、エチルセルロース、ヒドロキ シエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、澱粉および澱粉誘導体、例 えばヒドロキシエチル澱粉または架橋した澱粉、微生物由来の多糖、例えばキサ ンタンゴム、カードラン、プルラン、デキストランから選択することのできる粘 度増加多糖を含有することが好ましい。また、アルギ多糖、例えば寒天、カラギ ーナン、アルギン酸も、担体また賦形剤における構成物質として使用することが で きる。 担体または賦形剤に使用される好ましい多糖は、セルロース誘導体、例えばメ チルセルロースである。 本発明医薬において、粘度増加多糖および上記キトサンの組み合わされた量が 医薬の全重量を基にして約10重量％より小さいことが好ましい。 医薬の好ましい物理学的形態は、ゲル形態でありそしてこのようなゲル形態の 医薬において、多糖およびキトサンの上記の組み合わされた量は、好ましくは、 全体としての医薬を基にして、約0.5〜約５重量％の範囲にある。 上記ヘパリンまたはヘパラン硫酸は、好ましくは、約0.1〜約２重量％の量で 医薬中に存在する。 本発明はまたヘルペスウイルスにより起こるヒトを含む哺乳動物における感染 症を予防または治療する方法を提供する。この方法は、組み合わされたヘパリン またはヘパラン硫酸およびキトサンを含有する医薬の有効量を、処置を必要とす る部位に適用する工程からなる。実施例 本発明を、以下の開示において、非限定の実施例に関連して説明する。これら の実施例において、部および％は、特にことわらない限り、重量部および重量％ を意味する。添付図面に関連してこれを説明する。添付図面においては、完成し た医薬を例示する組成物および１種または２種以上の構成成分を除いた組成物の ５種の異なる組成物について、HSV-1プラークの効果を連続希釈試料に対してプ ロットした。 実施例１ 完全な医薬の製造 16％のＮ−脱アセチル化度を有するキトサンの塩酸塩(Pronova Bio-polymers ，Drammen，Norway)を、滅菌濾過した蒸溜水に溶解して、キトサ ンの３％溶液を形成させる。 ４ｇ／Ｌの濃度のメチルセルロースを含有する天然ヘパリンの0.6％溶液を製 造する。 両方の溶液を、オートクレーブ処理し、滅菌条件下で等部で混合する。 ソルビン酸を抗カビ量で防腐剤として加える。 実施例２ ソルビン酸を除く以外は同様な方法で実施例１の組成物を製造した。 実施例３ ソルビン酸およびヘパリンを除く以外は同様な方法で実施例１の組成物を製造 した。 実施例４ ソルビン酸およびキトサンを除く以外は同様な方法で実施例１の組成物を製造 した。 実施例５ ソルビン酸およびヘパリンのほかに、キトサンも除く以外は同様な方法で実施 例１の組成物を製造した。 実施例６ 実験操作 実験に使用した希釈剤は等張NaCl(0.136Ｍ)およびイーグルの最少必須培地(EM EM)である。使用したウイルスは、HSV-1、菌株KOS 321である。 試料を24ウエルプレート中で希釈する。試料１mlを、等張NaCl １mlと混合し 、１：32に希釈されるまで、等張NaCl中で連続２倍希釈する。それぞれの列の最 後のウエルは等張NaClのみを含有する。同じ溶液はまた等張NaClの代わりにEMEM 中で製造される。詳細な操作 １．等張NaCl 100μｌ中のHSV-1の100PFUを試料の連続希釈液に加える。 ２．RTで10分間インキュベートする。 ３．細胞(ミドリサル腎細胞(GMK AHI)、集密的細胞単層、３日令、６ウエルプレ ート）を等張NaClまたはEMEM ２mlで１回洗浄する。 ４．ウイルス−試料混合物１mlを細胞に加える。 ５．RTで１時間インキュベートする。 ６．細胞をEMEM ２mlで２回洗浄する。 ７．標準メチルセルロース溶液３mlを加える。 ８．CO₂インキュベーター中37℃で３日間インキュベートする。 ９．細胞をクリスタルバイオレット溶液で染色し、ウイルスプラークを計数する 。結果 添付図面は、試料希釈(neg．log２）に対してプロットしたHSV-1プラークとし ての結果を図式によって示す。図面に示された結果から理解されるように、１： ２および１：４の希釈は、おそらくメチルセルロースの存在のために、すべての 製剤による阻害を生ずる。１：16および１：32の希釈においては、ヘパリンを含 有する製剤のみが活性である。１：32の希釈まで、ヘパリンおよびキトサンを含 有する製剤の阻害効果は、維持された。 毒性試験は、すべての組成物がGMK細胞に関して非毒性であることを示す。 実施例７ 臨床試験 ゲルの形態の上記実施例１による組成物を使用して以下の臨床試験を実施した 。試験はすべて、HSV-1ウイルスにより起こる口唇感染の予防または治療に関す るものである。事例１ 15才の少年を初期の症状の予防的処置および確立した感染の治療によっ て、反復して処置した。実施例１の組成物の局所適用は、それぞれ、24時間以内 に初期の症状を除去しそして72時間以内に治癒した。事例２ 48才の男性を初期の症状に対して予防的に処置した。結果は、上記事例１にお けると同じであった。事例３ ９才の少女を、確立した疾患に対しておよび予防的処置において、実施例１の 医薬を使用して処置することができた。事例４ 十分に進行した唇感染を有する３才の少年を、典型的に、上記の実施例１の組 成物で処置した。これは、２日以内に感染を停止させ、４日以内に治癒させた。事例５ 52才の男性を、確立した疾患の治療および初期の症状の予防的処置について実 施例１のゲルを使用して処置することができた。 ウイルス細胞増殖の阻害および臨床試験に関する上述した結果は、すべて、ヘ ルペスウイルスにより起こる感染症に対する本発明の組成物の目ざましい効果を 立証する。このような感染をヘパリンおよびキトサンの組み合わせを使用して処 置することができるという事実は、実際、意外で驚くべきことである。本発明は 、何れの特定の理論または作用の機作にも限定されないが、組成物に使用したマ トリックスは活性形態のヘパリンをゆっくり放出させるものと思われる。キトサ ンを包含するマトリックスは、イオン結合によってヘパリンと結合し、その結果 、ヘパリンは、酵素ヘパリナスのような処置の環境中に存在する酵素によって不 活性化されないとみなすことができる。酵素分解および不活化に対するヘパリン の感受性を考 慮すると、これは明らかに意外なことである。 変更は当業者に明らかであるので、上述した発明が上述した実施化に限定され ないことは理解されるべきである。従って、本発明の範囲は請求項によってのみ 限定される。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＤＥ， ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，Ｌ Ｕ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ， ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，Ｓ Ｄ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ， ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＥ，Ｄ Ｋ，ＤＫ，ＥＥ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ ，ＧＨ，ＨＵ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ， ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，Ｌ Ｖ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ， ＳＫ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，Ｕ Ｇ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．ヒトを含む哺乳動物におけるヘルペスウイルスにより起こる感染を予防また は治療する医薬を製造するためのキトサンと組み合わされたヘパリンまたはヘパ ラン硫酸の使用。 ２．製造がヘパリンおよびキトサンの組み合わせに基づくものである請求項１記 載の使用。 ３．キトサンが多くとも約90％そして好ましくは多くとも約50％のＮ−アセチル 化度を有する請求項１または２記載の使用。 ４．キトサンが約25％より小さいＮ−アセチル化度を有する請求項３記載の使用 。 ５．医薬がさらに医薬的に許容し得る担体または賦形剤を含有する上記請求項の 各項の何れかの項記載の使用。 ６．医薬が粉末、軟膏、ペースト、ゲル、懸濁液、溶液またはフィルムの形態で ある上記請求項の各項の何れかの項記載の使用。 ７．担体または賦形剤が、粘度増加多糖からなる請求項５または６記載の使用。 ８．粘度増加多糖がセルロース誘導体によって構成される請求項７記載の使用。 ９．医薬が水性マトリックスからなる上記請求項の各項の何れかの項記載の使用 。 10．キトサンと一緒に粘度増加多糖が約10重量％より少ない量で医薬中に存在す る請求項６〜８の何れかの項記載の使用。 11．医薬がゲルの形態である請求項10記載の使用。 12．キトサンと一緒に粘度増加多糖が約0.5〜約５重量％の量で医薬中に存在す る請求項11記載の使用。 13．ヘパリンまたはヘパラン硫酸が約0.1〜約２重量％の量で医薬中に存在する 上記請求項の各項の何れかの項記載の使用。 14．組み合わされたヘパリンまたはヘパラン硫酸およびキトサンを含有する医薬 の有効量を、処置を必要とする部位に適用する工程からなるヘルペスウイルスに より起こるヒトを含む哺乳動物における感染を予防または治療する方法。 15．医薬がヘパリンおよびキトサンを含有する請求項14記載の方法。 16．医薬が粉末、軟膏、ペースト、ゲル、懸濁液、溶液またはフィルムの形態で ある請求項14または15記載の方法。