JP2001517618A - 炎症性および／または自己免疫疾患の治療的処置のための医薬組成物を調製するのに適した６，７−置換２−アミノテトラリンの使用 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 炎症性サイトカインにより誘発される炎症性および／または自己免疫疾患の治療的処置のための医薬組成物の調製のための６,７−置換２−アミノテトラリンの使用が記載されている。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 本発明は、炎症性サイトカインの原因病理的役割が十分に確立されている、敗
血症性ショックの予防的および治療的処置ならびに以下により詳しく定義される
炎症性および／または自己免疫疾患の処置に適した６,７−置換２−アミノテト ラリンおよびそれらの医薬上許容される塩の使用に関する。

【０００２】 敗血症性ショックの処置に有効な６,７−置換２−アミノテトラリンは、よく 知られている。ヨーロッパ特許出願公開ＥＰ−Ａ−０７３０８６１（出典明示に
より本明細書の一部とする）には、一群のこのような６,７−置換２−アミノテ トラリン、特に、化合物(Ｒ,Ｓ)−２−アミノ−６−フルオロ−７−メトキシテ トラリン（ＳＴ ６２６）が開示されている。

【０００３】 本発明に従って用いるための６,７−置換２−アミノテトラリンは、また、全 く異なる治療用途のためであるが、知られている。実際、J Chem Soc (1997), 2
88-93 には、それらの化合物が気管支拡張活性を有することが開示されており；
Tetrahedron let, 22/38, 3707-10, 1981 には、それらの化合物がドーパミン作
動性活性を有する化合物として開示されている。

【０００４】 かかるアミノテトラリンの既知の気管支拡張性およびドーパミン作動性活性と
、炎症性サイトカインの原因病理的役割が十分に確立されている敗血症性ショッ
クおよび炎症性および／または自己免疫疾患におけるそれらの治療活性との間に
関係がないのは明らかである。

【０００５】 本発明の化合物で処置しようとする炎症性および／または自己免疫疾患は、例
えば、慢性関節リウマチ、膵炎、炎症性腸疾患、全身性紅斑性狼瘡、糸球体腎炎
および脳脊髄炎である。

【０００６】 以下、敗血症性ショックについてのみ言及するが、炎症性サイトカインに起因
する他の疾患もまた本発明に従って効果的に処置できることは言うまでもない。

【０００７】 敗血症性ショックは、主に、グラム陰性もしくはグラム陰性細菌、原生動物ま
たはウイルスにより引き起こされる感染症の結果として発症する非常に重篤な臨
床的症候群であり、白血球増加、発熱、頻拍、低血圧ならびに腎不全、呼吸不全
、心不全および肝不全により特徴付けられる。しかしながら、敗血症ショックの
重篤度は、該症候群を引き起こす微生物のタイプには関係していない（Parrillo
J.E., Pathogenetic mechanisms of septic shock, N Engl J Med, 328:1471-1
477, 1993）が、毒性傷害を引き起こす抗原に対する個々の炎症応答に関係して いるということが強調されている。ここ２、３年の間に行われた抗生物質療法お
よび集中治療室における介入プロトコルにおける重大な改良にもかかわらず、シ
ョックは、なおも入院患者の罹患および死亡の主原因の１つである。アメリカ合
衆国において、約１００,０００人／年の死亡がこれに起因していると考えられ ている（Glauser M.P., Zanetti G., Baumgartner J.D. and Cohen J., Septic
shock: Pathogenesis, Lancet, 338:732-736, 1991）。

【０００８】 敗血症性ショックの最も決定的かつ特徴的な特性は、溶菌または微生物代謝に
由来する産生物に対する身体の反応である。

【０００９】 これらの物質のうち最初に同定される物質であって試験的研究に最もよく用い
られる物質は、細菌種によって異なる多糖部分および敗血症対象の血液中にミセ
ルの形態で一定に存在する脂質部分（リピドＡ）から化学的に構成される、グラ
ム陰性細菌壁の成分であるリポ多糖（ＬＰＳ）である。動物に投与した場合、Ｌ
ＰＳは、ショックにおいて遭遇する心臓循環的および神経学的症状の全てを再現
する能力を有する（Olson C., Salzer W.L., McCall C.E., Biochemical, physi
ological and clinical aspects of endotoxaemia, Molec Aspects Med, 10: 51
1-629, 1988）。したがって、それは、凝固性カスケードの内因的および外因的 経路ならびにＴＮＦ、ＩＬ−１およびＩＬ−６などの主にマクロファージ単球由
来のサイトカインの分泌の活性化によって該臨床的症状を誘発させる、一連の事
象における原動力として同定可能である。

【００１０】 この症候群の重要度がここ２、３年の間に増大してきており、その重篤度およ
び不十分な現行治療手段のために、疾患の進行と効果的に戦う能力を有する治療
薬の迅速な発見が非常に望ましい目的となっている。

【００１１】 この度、一連の既知の６,７−置換２−アミノテトラリンが上記疾患の予防お よび治療的処置において強力な活性を示すことを見出した。

【００１２】 本発明の６,７−置換２−アミノテトラリンは、一般式（Ｉ）：

【化３】 で示される遊離塩基および一般式（ＩＩ）：

【化４】 ［式中、 Ｒは、メトキシまたはヒドロキシであり、 Ｘ−は、医薬上許容される酸の一価の陰イオンである］ で示される医薬上許容される塩として示すことができる。一般式（Ｉ）または（
ＩＩ）で示される６,７−置換２−アミノテトラリンのうち、以下の化合物が特 に好ましい： Ｒ＝メトキシ：(Ｒ,Ｓ)−２−アミノ−６,７−ジメトキシテトラリン・塩酸塩（
以下、ＳＴ １２１３と記す） Ｒ＝ＯＨ：(Ｒ,Ｓ)−２−アミノ−６,７−ジヒドロキシテトラリン・塩酸塩（以
下、ＳＴ １２３６と記す）。

【００１３】 式（Ｉ）で示される６,７−置換２−アミノテトラリンの医薬上許容される塩 が意味するものは、好ましくない毒性作用または副作用を起こさない酸とのその
塩である。かかる酸は、薬理学者ならびに調剤術および製薬技術における当業者
によく知られている。

【００１４】 かかる塩の非限定的な例は、クロリド、ブロミド、オロテート、酸アスパルテ
ート、酸シトレート、酸ホスフェート、フマレートおよび酸フマレート、ラクテ
ート、マレエートおよび酸マレエート、酸オキサレート、酸スルフェート、グル
コースホスフェート、タルトレートおよび酸タルトレートである。ＦＤＡ認可の
塩は、Int J Pharm 33 (1986), 201-217 に挙げられている（出典明示により本 明細書の一部とする）。

【００１５】 前臨床試験において、敗血症性ショックにおける物質の可能な防御効果を評価
するために最も広範囲に用いられる方法論的研究法は、実験動物に直接注射した
かまたは該実験動物に接種した感染細胞により多量に放出された毒性物質（外毒
素または内毒素）による中毒実験モデルを使用することである。

【００１６】 以下に、本発明の(Ｒ,Ｓ)−２−アミノ−６,７−ジメトキシテトラリン・塩酸
塩（ＳＴ １２１３）および(Ｒ,Ｓ)−２−アミノ−６,７−ジヒドロキシテトラ リン・塩酸塩（ＳＴ １２３６）により得られた結果を、参照化合物(Ｒ,Ｓ)−２
−アミノ−６−フルオロ−７−メトキシテトラリン・塩酸塩（ＳＴ ６２６）と 比較して示す。上記のとおり、化合物ＳＴ ６２６は、本発明に用いる化合物と 構造的に最も緊密に関係していることが知られている化合物であり、また、同一
の薬理学的活性を有することが知られている。

【００１７】 これらの結果は、本発明の化合物（ＳＴ １２１３およびＳＴ １２３６）の予
防的または治療的活性を既知の化合物ＳＴ ６２６と比較して示されており、ま た、該化合物の有利な薬理学的プロフィール［炎症性サイトカインの血中濃度（
ＴＮＦ、ＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＦＮ−γ濃度）、および血清酸化窒素（ＮＯ
ｘ）濃度の激減］を引き起こすことができる作用機序の一に関して示している。

【００１８】 敗血症性ショックの動物モデルにおけるＳＴ １２１３およびＳＴ １２３６の
効果の評価 約６週齢の雄性ＢＡＬＢ／ｃマウス（シー・リバー（C. River））を用いた（
実験群につき動物１０匹）。該動物は、恒温２２±２℃および相対湿度５０±１
５％で明るい所で１２時間（午前７時−午後７時）および暗所で１２時間（午後
７時−午前７時）カゴに入れられており、自由に食物および飲料水を摂取した。

【００１９】 試験化合物は、ＳＴ １２１３、ＳＴ １２３６およびＳＴ ６２６（参照化合 物）であった。化合物の溶液のｐＨは、必要に応じて、０.１Ｎ ＮaＯＨを用い て（該溶液を冷却したまま、攪拌下）、ｐＨ５.５以上に調節した。

【００２０】 用いた物質は、ＬＰＳ（エシェリヒア・コリ（Escherichia coli）血清型Ｏ２
６：Ｂ６）、バッチ７３５７０ ＪＢ（ディフコ（Difco））、ＬＰＳ（サルモネ
ラ・ティフォサ（Salmonella typhosa））、バッチ８１Ｈ４０１８（シグマ（Si
gma））、ＳＥＢ（スタフィロコッカス・アウレウス（Staphylococcus aureus）
）、バッチ１４４Ｈ４０２４（シグマ）、およびＤ−ガラクトサミン、バッチ０
３１ＥＥ００２４８５（メルク（Merck））であった。

【００２１】 イー・コリ（E. coli）およびサルモネラ・ティフォサ（S.typhosa）に起因す
る致死率 イー・コリまたはサルモネラ・ティフォサ由来のＬＰＳで動物を処置した。使
用前に、まず内毒素を無菌生理食塩水に溶解し、次いで、ほぼＬＤ₈₀に相当する
投与量１０.０−１２.５ｍｇ／ｋｇ（イー・コリ）および２３.０−２７.０ｍｇ
／ｋｇ（サルモネラ・ティフォサ）で２００μＬの容量にて腹腔内（i.p.）注射
した。 試験化合物を、ＬＰＳでの処置の３０分前および５分後、または内毒素投与の
５分後および３０分後に、それぞれのＬＤ₅₀の約１／１０に相当する投与量で２
００μＬの容量の無菌生理食塩水中にて静脈内（i.v.）投与した。

【００２２】 Ｄ−ガラクトサミンで感作されたマウスにおけるイー・コリＬＰＳに起因する
致死率 動物をＤ−ガラクトサミン（１０００ｍｇ／ｋｇ i.p.）で感作し、同時に、 イー・コリＬＰＳ（０.３０ｍｇ／ｋｇ i.p.）で２００μＬの合計容量にて処置
した。用いたＬＰＳの投与量は、ほぼ、Ｄ−ガラクトサミンで感作された動物に
おける内毒素のＬＤ₈₀に相当していた。 試験化合物を、ＬＰＳ投与の３０分前および５分後または５分後および３０分
後に、それぞれのＬＤ₅₀の約１／１０に相当する投与量で２００μＬの容量の無
菌生理食塩水中にて静脈内（i.v.）投与した。

【００２３】 Ｄ−ガラクトサミンで感作されたマウスにおけるＳＥＢ（スタフィロコッカス
・アウレウス）に起因する致死率 動物をＤ−ガラクトサミン（１０００−１５００ｍｇ／ｋｇ i.p.）で感作し 、同時に、内毒素ＳＥＢ（３ｍｇ／ｋｇ i.p.）で２００μＬの容量にて処置し た。用いたＳＥＢの投与量は、ほぼＬＤ₈₀に相当し、予備実験において決定され
た。 試験化合物を、ＳＥＢ投与の３０分前および５分後または５分後および３０分
後に、それぞれのＬＤ₅₀の約１／１０に相当する投与量で２００μＬの容量の無
菌生理食塩水中にて静脈内（i.v.）投与した。 全試験において１０日間動物を観察し、如何なる死亡も毎日記録した。 片側フィッシャー完全検定（one-tailed Fisher's exact test）を用いて試験
化合物の防御効果の統計的有意性を評価した。

【００２４】 結果 イー・コリＬＰＳに起因する致死率 イー・コリＬＰＳによるこのショックの実験モデルで得られた結果を表１（Ａ
およびＢ）に示す。化合物ＳＴ １２１３は、ＬＰＳ投与の３０分前および５分 後に投与した場合、ＬＰＳに起因する致死率を有意に低下させる（ｐ＜０.００ １）（表１Ａ）。かかる防御は、また、抗原投与後処置プロトコルにおいても、
統計的有意性は低下するが（ｐ＜０.０５）得られる（表１Ｂ）。

【００２５】

【表１】

【００２６】 サルモネラ・ティフォサＬＰＳに起因する致死率 このサルモネラ・ティフォサＬＰＳによる内毒素性ショックの実験モデルにお
いて、化合物ＳＴ １２１３およびＳＴ １２３６は、抗原投与前および後に投与
した場合、致死率を有意に低下させる（それぞれ、ｐ＜０.００１およびｐ＜０.
０５）（表２）。 ＳＴ １２１３は、第２の抗原投与後処置プロトコルにおいて投与した場合、 低い程度であるが、その防御効果を保持する（表３）。

【００２７】

【表２】

【００２８】

【表３】

【００２９】 Ｄ−ガラクトサミンで感作されたマウスにおけるイー・コリＬＰＳに起因する
致死率 動物をＤ−ガラクトサミンで感作し、同時に、イー・コリＬＰＳで処置した。
化合物ＳＴ １２３６は、致死率を有意に低下させた（ｐ＜０.００１）（表４）
。

【００３０】

【表４】

【００３１】 Ｄ−ガラクトサミンで感作されたマウスにおける内毒素ＳＥＢ（スタフィロコ
ッカス・アウレウス）に起因する致死率 Ｄ−ガラクトサミンで感作されたマウスにおける内毒素ＳＥＢによるショック
のこの実験モデルで得られた結果を表５および６に示す。 化合物ＳＴ １２１３およびＳＴ １２３６は、抗原投与の３０分前および５分
後に投与した場合、対照と比較して致死率を低下させる（それぞれ、生存率の増
加＝４６％および９０％）。抗原投与後処置の後、防御効果は、統計的に有意で
あることが立証されていないが、保持される（表６）。

【００３２】

【表５】

【００３３】

【表６】

【００３４】 ラット全血培養物におけるＬＰＳに起因する血清ＴＮＦ（腫瘍壊死因子）濃度
に対するＳＴ １２１３およびＳＴ １２３６の効果の評価 近年、多くの制限があるが、グラム陰性細菌のリポ多糖が血流中に放出されて
免疫系細胞と接触するような内毒素血症の生理病理学的条件を模倣する実験モデ
ルとしてＬＰＳにより刺激された全血細胞の培養物が用いられている。実際、こ
の実験モデルは、最近、ＴＮＦおよびＩＬ−１の放出の、可能性ある阻害剤の評
価に採用された（GC Riceら, Shock, 4:254-266, 1994、AJH Gearingら, Nature
, 370:555-557, 1994、K Tschaikowsky, Biochim Biophys Acta, 1222:113-121,
1994、A Haziotら, J Immunol, 152:5868-5876, 1994）。 これらの実験には体重１７５−２００ｇの雄性ウィスター（Wistar）ラット（
シー・リバー）を用いた。 該動物は、恒温２２±２℃および相対湿度５０±１５％で明るい所で１２時間
（午前７時−午後７時）カゴに入れられており、自由に食物および飲料水を摂取
した。 試験化合物は、ＳＴ １２１３およびＳＴ １２３６であった。 用いた内毒素は、サルモネラ・ティフォサ由来のＬＰＳ、バッチ８１Ｈ４０１
８（シグマ）であった。

【００３５】 断頭により屠殺したウィスター・ラットからヘパリン処理血液試料（０.４５ ０ｍＬ／試験管）を採取した。無菌生理食塩水に溶解した試験化合物（最終濃度
０.０５０ｍＭ）の０.０２５ｍＬの容量（２０ｘ溶液）を、血液試料を入れた試
験管に添加した。５％ＣＯ₂湿雰囲気下、３７℃で１時間インキュベートした該 試験管にサルモネラ・ティフォサ由来のＬＰＳ（最終ＬＰＳ濃度＝１μｇ／ｍＬ
）０.０２５ｍＬ（２０ｘ溶液）を添加した。試験管を同条件下で４時間インキ ュベートし、次いで、１０,０００ｒｐｍで５分間遠心分離に付し、ＴＮＦアッ セイまでの間、上清を−８０℃で冷凍保存した。

【００３６】 １％ＦＣＳを添加したＲＰＭＩ培地中でＴＮＦ生物活性を測定した。ＴＮＦア
ッセイのために、ＴＮＦを含有する試料（ＴＮＦ標準、培養上清、血清、生物学
的流体など）の連続希釈液（５０μＬ）を９６ウェル・プライマリア（Primaria
）マイクロタイタープレート中で直接調製した。１％ＦＣＳを添加したＲＰＭＩ
培地中で調製した最終濃度４μｇ／ｍＬのアクチノマイシンＤ−マンニトール（
５０μＬ）をウェルに添加した。この阻害剤は、ＴＮＦに対する細胞感受性を増
強する。

【００３７】 Ｌ９２９（ＴＮＦの毒性作用に対して感受性のあるネズミ線維肉腫）の細胞４
×１０⁵個／ｍＬの標準懸濁液１００μＬを各ウェルに添加した。適当な対照で あるアクチノマイシンＤ対照（細胞＋アクチノマイシン、ただし、ＴＮＦを含ま
ない）および細胞対照（培養培地のみの存在下の細胞）もまた調製した。

【００３８】 さらに、５％ＣＯ₂で３７℃で１８時間インキュベートした後、本明細書にお いて以下に記載する方法に従って新しく調製した１ｍｇ／ｍＬ ＸＴＴ（３'−[ １−[(フェニルアミノ)−カルボニル]−３,４−テトラゾリウム]−ビス(４−メ トキシ−６−ニトロ)ベンゼン-スルホン酸ナトリウム・水和物）および１２５μ
Ｍ ＰＭＳ（フェナジンメトスルフェート）からなる溶液で細胞を染色した。

【００３９】 ＰＭＳ母液は、１００ｍＭであり（暗所で＋４℃で約２０日間安定）、ＰＢＳ
にＰＭＳを溶解し、次いで、簡単な超音波処理によりＰＭＳを完全に溶解するこ
とにより調製される。次いで、１００ｍＭ ＰＭＳ溶液をＸＴＴで１：８００に 希釈して、ＸＴＴ １ｍｇ／ｍｌ中１２５μＭのＰＭＳ最終濃度を得る。ＸＴＴ −ＰＭＳ染色混合物は、使用前に濾過しなければならない。

【００４０】 １８時間のインキュベーション終了後、各ウェルにＸＴＴ−ＰＭＳ染色溶液５
０μＬを添加してそれぞれ０.２ｍｇ／ｍＬおよび２５μＭのＸＴＴおよびＰＭ Ｓ最終濃度を有する２５０μＬの最終容量を得ることにより細胞を染色した。培
養培地２００μＬ＋ＸＴＴ−ＰＭＳ染色溶液５０μＬを含有するウェルからなる
「ブランク」もまた調製した。 該マイクロタイタープレートを５％ＣＯ₂で３７℃で２−２.５時間インキュベ
ートした（合計インキュベーション時間＝約２０時間）。

【００４１】 ４５０ｎｍ読取り波長および６２０ｎｍ参照波長を用い、マイクロタイタープ
レートリーダーを用いて、各試料の吸光度を測定した（比色マイクロタイタープ
レートリーダーは、試料の吸光度から「ブランク」の吸光度を自動的に差し引く
ようにプログラムされた）。

【００４２】 以下に記載するようにＴＮＦ力価を算出した。定義により、生物活性の１単位
は、アクチノマイシン−Ｄ吸光度の半最大値（semimaxiaml value）（＝５０％ ）により与えられる。 試料の希釈により、直線部分が方程式：ｙ＝ａｘ＋ｂで示される吸光度曲線を
得る。ａ値およびｂ値（コンピュータ処理した直線回帰分析により得られる）を
挿入し、ｙをアクチノマイシン−Ｄ対照の半最大吸光度（１生物学的単位に相当
する）と置き換えた後、試料希釈の逆数を表すｘについて方程式を解く。得られ
た値は、Ｕ／ｍＬで表されるＴＮＦ力価を提供する。 データを、両側スチューデントｔ−検定（two-tailed Student's t-test）を 用いて分析した。

【００４３】 結果 この実験モデルを用いて得られた表７に示される結果は、程度は様々であるが
、試験化合物がＬＰＳで刺激された血液培養物によるＴＮＦ産生を減少させるこ
とを示している。実際、化合物ＳＴ １２３６およびＳＴ １２１３は、各々、Ｔ
ＮＦ濃度を５９％および３１％減少させている。

【００４４】

【表７】

【００４５】 マウスにおけるＬＰＳに起因する血清ＴＮＦ濃度に対するＳＴ １２１３およ びＳＴ １２３６の効果の評価 約６週齢の雄性ＢＡＬＢ／ｃマウス（シー・リバー）を用いた（実験群につき
動物１０匹）。 該動物は、恒温２２±２℃および相対湿度５０±１５％で明るい所で１２時間
（午前７時−午後７時）および暗所で１２時間（午後７時−午前７時）カゴに入
れられており、自由に食物および飲料水を摂取した。

【００４６】 試験化合物は、ＳＴ １２１３、ＳＴ １２３６およびＳＴ ６２６（参照化合 物）であった。化合物の溶液のｐＨは、必要に応じて、０.１Ｎ ＮaＯＨを用い て（該溶液を冷却したまま、攪拌下）、ｐＨ５.５以上に調節した。 用いた物質は、ＬＰＳ（イー・コリ血清型Ｏ２６：Ｂ６由来）、バッチ７３５
７０ ＪＢ（ディフコ）、ＬＰＳ（サルモネラ・ティフォサ）、バッチ８１Ｈ４ ０１８（シグマ）、Ｄ−ガラクトサミン、バッチ０３１ＥＥ００２４８５（メル
ク）であった。

【００４７】 イー・コリおよびサルモネラ・ティフォサＬＰＳに起因する致死率 実験条件は、上記条件と厳密に同一であった。

【００４８】 Ｄ−ガラクトサミンで感作されたマウスにおけるイー・コリＬＰＳに起因する
致死率 実験条件は、上記条件と厳密に同一であった。 両実験モデルにおいて、血液試料は、抗原投与（ＴＮＦ血清ピーク濃度）の９
０分後に採取した。 エーテル麻酔したマウスを、眼窩後方空洞の穿刺により放血させた。血液試料
を室温で２時間インキュベートし、得られた血清を３０００ｒｐｍで２０分間遠
心分離に付し、ＴＮＦアッセイまでの間、−８０℃で冷凍保存した。 １％ＦＣＳを含有するＲＰＭＩ培地中でＴＮＦ生物活性を測定した。 ＴＮＦ含有試料の５０μＬ／ウェル連続希釈液をプライマリア・マイクロタイ
タープレートに直接添加した。用いた実験条件は、上記条件と同一であった。 データを、片側スチューデントｔ−検定を用いて分析した。

【００４９】 結果 イー・コリおよびサルモネラ・ティフォサＬＰＳに起因する致死率 これらの実験モデルにて得られた結果は、化合物ＳＴ １２１３が、イー・コ リＬＰＳに起因するＴＮＦ濃度を有意に減少させ（ｐ＜０.０１）（表８）、サ ルモネラ・ティフォサＬＰＳを用いた実験において血清ＴＮＦ濃度をさらに実質
的に減少させる（ｐ＜０.０００１）（表９）ことを明らかにする。

【００５０】

【表８】

【００５１】

【表９】

【００５２】 Ｄ−ガラクトサミンで感作されたマウスにおけるイー・コリＬＰＳに起因する
致死率 Ｄ−ガラクトサミンで感作された動物におけるイー・コリＬＰＳに起因するＴ
ＮＦ産生のこの実験モデルを用いて得られた結果を表１０に示す。 化合物ＳＴ １２３６は、Ｄ−ガラクトサミンで感作されたマウスにおいてＬ ＰＳに起因するＴＮＦの放出を有意に減少させる（ｐ＜０.０００１）。

【００５３】

【表１０】

【００５４】 マウスにおけるイー・コリまたはＳＥＢ内毒素に起因する血清インターメイキ
ン−１β（ＩＬ−１β）、インターロイキン−６（ＩＬ−６）およびインターフ
ェロン−γ（ＩＦＮ−γ）濃度に対するＳＴ １２１３の効果の評価 約６週齢の雄性ＢＡＬＢ／ｃマウス（シー・リバー）を用いた（実験群につき
動物１０匹）。該動物を、恒温２２±２℃および相対湿度５０±１５％で明るい
所で１２時間（午前７時−午後７時）および暗所で１２時間（午後７時−午前７
時）カゴに入れられており、自由に食物および飲料水を摂取した。 試験化合物は、ＳＴ １２１３であった。 用いた物質は、イー・コリＯ２６：Ｂ６由来ＬＰＳ、バッチ７３５７０ ＪＢ （ディフコ）、ＳＥＢ（スタフィロコッカス・アウレウス）、バッチ１４４Ｈ４
０２４（シグマ）、およびＤ−ガラクトサミン、バッチ０３１ＥＥ００２４８５
（メルク）であった。

【００５５】 イー・コリＬＰＳに起因する致死率 実験条件は、上記条件と厳密に同一であった。

【００５６】 Ｄ−ガラクトサミンで感作されたマウスにおけるスタフィロコッカス・アウレ
ウス由来のＳＥＢに起因する致死率 実験条件は、条件と厳密に同一であった。 両モデルにおいて、ＩＬ−６については抗原投与の２時間後、ＩＬ−１βにつ
いては抗原投与の４時間後、ＩＦＮ−γについては抗原投与の６時間後に血液試
料を採取した。 エーテル麻酔したマウスを、眼窩後方空洞の穿刺により放血させた。血液試料
を室温で２時間インキュベートし、得られた血清を３０００ｒｐｍで２０分間遠
心分離に付し、アッセイまでの間、−８０℃で冷凍保存した。

【００５７】 用いたアッセイキットにおいて指示された方法に従って生物学的アッセイを行
った。詳しくは、以下のものを用いた： − マウスＩＬ−１βイムノアッセイ（ＭＬＢ００、アール・アンド・ディ・
システムズ（R&D Systems））、 − マウスＩＬ−６ＥＩＡキット（８−６７０６、パーセプティブ・ダイアグ
ノスティック（PerSeptive Diagnostics））、 − マウスＩＦＮ−γＥＩＡキット（８−６７１６、パーセプティブ・ダイア
グノスティック）。 データは、片側スチューデントｔ−検定を用いて分析した。

【００５８】 結果 イー・コリＬＰＳに起因する致死率 この実験モデルを用いて得られた結果を表１１に示す。 化合物ＳＴ １２１３は、ＩＦＮ−γの産生を有意に減少させるが（ｐ＜０.０
００１）、分析した残り２つのサイトカインの濃度は減少しない。

【００５９】

【表１１】

【００６０】 Ｄ−ガラクトサミンで感作されたマウスにおけるスタフィロコッカス・アウレ
ウスＳＥＢに起因する致死率 この実験モデルを用いて得られた結果を表１２に示す。 化合物ＳＴ １２１３は、血清ＩＬ−１βおよびＩＬ−６濃度を有意に減少さ せるが、血清ＩＦＮ−ガンマ濃度は減少しない。

【００６１】

【表１２】

【００６２】 マウスにおけるイー・コリＬＰＳに起因する血清酸化窒素（ＮＯｘ）に対する
ＳＴ １２１３の効果の評価 約６−７週齢の雄性ＢＡＬＢ／ｃマウス（シー・リバー）を用いた（実験群に
つき動物６−９匹）。 該動物は、恒温２２±２℃および相対湿度５０±１５％で明るい所で１２時間
（午前７時−午後７時）および暗所で１２時間（午後７時−午前７時）カゴに入
れられており、自由に食物および飲料水を摂取した。 試験化合物は、ＳＴ １２１３であった。 用いた内毒素は、予め無菌生理食塩水に溶解したイー・コリＯ２６：Ｂ６由来
のＬＰＳ、バッチ７３５７０（ディフコ）であり、５ｍｇ／ｋｇの用量で腹腔内
注射した。 ＬＰＳ投与の＋５分後および＋３０分後、化合物ＳＴ １２１３およびＳＴ ６
２６（参照化合物）を、ＬＤ₅₀の約１／１０に相当する６ｍｇ／ｋｇの用量でi.
v.投与した。 エーテル麻酔したマウスを、眼窩後方空洞の穿刺により放血させ、ＬＰＳ投与
の２０時間後に血液試料を摂取した時、ＮＯｘがマウスにおけるその血清ピーク
濃度に達した。 ヘパリン処理した試験管に入れた血液を２２００ｒｐｍで１０分間遠心分離に
付し、ＮＯｘアッセイまでの間、−８０℃で冷凍保存した。 試験前、試料を蒸留水で１：３に希釈し、次いで、ウルトラフリー（Ultrafre
e）−ＭＣ、１０,０００ＮＭＷＬミリポア（Millipore）フィルター（カタログ 番号ＵＦＣ３ＬＧＣ００）上で４７００ｇで９０分間遠心分離に付した。 試料のＮＯｘについてのアッセイは、最近市販されているカブル（Cabru）製 のアッセイキット（ニトレート／ニトライト（Nitrate／Nitrite）アッセイキッ
ト、カタログ番号７８０００１）を用いて行った。 データは、両側スチューデントｔ−検定を用いて分析した。

【００６３】 結果 この実験モデルで得られた結果を表１３に示す。 化合物ＳＴ １２１３は、抗原投与後に投与した場合、ＢＡＬＢ／ｃマウスに おけるイー・コリＬＰＳに起因するＮＯｘ濃度を有意に減少させる（４２％減少
）。 同一実験モデルにおいて、参照化合物ＳＴ ６２６は、ＮＯｘの血清中濃度を 有意に減少させない（２１％減少）。

【００６４】

【表１３】

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 43/00 Ａ６１Ｐ 43/00 (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ) ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ， ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，Ｄ Ｋ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＵ ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ， ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，Ｍ Ｄ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ， ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，Ｕ Ｚ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＷ (72)発明者 ビト・ルッジエロ イタリア、イ−00181ローマ、ビア・ルニ ャーノ・イン・テベリナ32番 Ｆターム(参考） 4C206 AA01 AA03 FA31 KA04 MA01 MA04 NA14 ZA02 ZA66 ZA81 ZA89 ZB11 ZB15 ZB35

Claims (6)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 炎症性サイトカインにより誘発される炎症性および／または
   自己免疫疾患の治療的処置のための医薬組成物を調製するのに適した一般式（Ｉ
   ）： 【化１】 で示される６,７−置換２−アミノテトラリンまたは一般式（ＩＩ）： 【化２】 ［式中、 Ｒは、メトキシまたはヒドロキシであり、 Ｘ^-は、医薬上許容される酸の一価の陰イオンである］ で示されるその医薬上許容される塩の使用。
2. 【請求項２】 医薬組成物が敗血症性ショックの予防的および治療的処置に
   適している請求項１記載の使用。
3. 【請求項３】 医薬組成物が慢性関節リウマチ、膵炎、炎症性腸疾患、全身
   性紅斑性狼瘡、糸球体腎炎および脳脊髄炎の治療的処置に適している請求項１記
   載の使用。
4. 【請求項４】 医薬上許容される酸の一価の陰イオンがクロリド、ブロミド
   、オロテート、酸アスパルテート、酸シトレート、酸ホスフェート、フマレート
   および酸フマレート、ラクテート、マレエートおよび酸マレエート、酸オキサレ
   ート、酸スルフェート、グルコースホスフェート、タルトレートおよび酸タルト
   レートから選択される請求項１ないし３いずれか１項記載の使用。
5. 【請求項５】 ６,７−置換２−アミノテトラリンが(Ｒ,Ｓ)−２−アミノ−
   ６,７−ジメトキシテトラリン・塩酸塩である請求項１ないし３いずれか１項記 載の使用。
6. 【請求項６】 ６,７−置換２−アミノテトラリンが(Ｒ,Ｓ)−２−アミノ−
   ６,７−ジヒドロキシテトラリン・塩酸塩である請求項１ないし３いずれか１項 記載の使用。