JP2003113199A

JP2003113199A - 新規親水性ペプチドｙ−２

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Publication number: JP2003113199A
Application number: JP2002260312A
Authority: JP
Inventors: Katsuhiro Osajima; 克裕筬島; Hiroshi Matsufuji; 寛松藤; Toshiro Matsui; 利郎松井; Yutaka Osajima; 豊筬島
Original assignee: Senmi Ekisu Co Ltd
Current assignee: Senmi Ekisu Co Ltd
Priority date: 2002-09-05
Filing date: 2002-09-05
Publication date: 2003-04-18
Anticipated expiration: 2022-09-05
Also published as: JP3483875B2

Abstract

(57)【要約】【解決手段】本発明は、魚肉をアルカリプロテアーゼ
処理して得たペプチドをＯＤＳ処理し、これを０％、次
いで１０％エタノール水溶液で溶離して得た画分からな
る新規ペプチドに関するものである。【効果】本発明に係る新規ペプチドα−２２００（画
分Ｙ−２）は、分子量が２００〜１０，０００であり、
１３８℃で着色、分解するペプチドであって、苦味はほ
どんどなく、すぐれたＡＣＥ阻害活性を示し、栄養剤、
特定保健用食品として使用できるほか、血圧降下剤とし
ても有利に使用できる。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、新規親水性ペプチ
ドＹ−２及びその製造方法に関するものである。

【０００２】

【従来の技術】先に、本発明者らは、魚肉を熱変性処理
した後、中性ないしアルカリプロテアーゼ処理して加水
分解し、酵素を失活せしめた後、分離処理することによ
ってＡＣＥ阻害活性を有するペプチドα−１０００を得
た（特願平４−７２２２７）。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】本発明では、ペプチド
α−１０００から強力なＡＣＥ阻害活性を有するペプチ
ドを分離することを目的とした。

【０００４】

【課題を解決するための手段】本発明においては、ペプ
チドα−１０００の水溶液をＯＤＳ樹脂処理し、その溶
離液のうち、ＡＣＥ（アンジオテンシン変換酵素）阻害
活性の強い画分を分離するのに成功し、更に研究の結
果、本発明の完成に至ったものである。

【０００５】すなわち、本発明によれば、魚肉をアルカ
リプロテアーゼ処理して得たペプチド、α−１０００を
ＯＤＳ処理し、次いでこれをエタノール濃度０〜９９．
５％のエタノール水溶液で溶離してエタノール画分を
得、これらの内から特に親水性の高い画分、苦味の少な
い画分、ＡＣＥ阻害活性の強い画分を分離することによ
り、目的とするペプチドが得られるのである。

【０００６】このようにして得られたエタノール画分の
内、０％エタノール水溶液で溶出する画分、つまり未吸
着の画分（Ｙ−１画分）、及び、１０％エタノール水溶
液で溶出する画分（Ｙ−２画分）は、物性、構造、作用
効果の面においていずれも独特なものであって文献未載
の新規物質であることを確認し、それぞれ、ペプチドα
−２１００及びα−２２００と命名した。

【０００７】そして、これらのペプチドは、親水性で苦
味や魚臭はなく、活性が高く、しかも天然起源で安全で
あり、血圧降下剤の有効成分として、または、血圧降下
性機能食品の有効成分としてすぐれたものである。

【０００８】本発明に係るペプチドは、文献未載の新規
物質であって、魚肉以外の動植物蛋白質からも製造する
ことは可能であるが、先に述べたペプチドα−１０００
を利用しても有利に製造することができる。

【０００９】そこで、ペプチドα−１０００について説
明する。

【００１０】ペプチドα−１０００は魚介類を原料とし
て製造するものであるが、先ず、これを採肉機、デポー
ナー等によって処理して魚肉質を分離する。原料は出来
る限り新鮮なものが好ましい。分離した魚肉は、１０ｋ
ｇ程度のすり身に分割し、このまま次の処理に使用して
もよいが、−２０〜−５０℃、例えば−３０℃程度の冷
気を吹き付けて急速凍結し、−２０〜−２５℃に保存し
おき、必要に応じてこれを適宜使用することにしてもよ
い。

【００１１】魚介類としては、イワシ、アジ、マグロ、
カツオ、サンマ、サバ等赤身魚；ヒラメ、タイ、キ
ス、コノシロ、タラ、ニシン、ブリ等白身魚；サメ、エ
イ等軟骨魚肉；ワカサギ、コイ、イワナ、ヤマメ等淡水
魚肉；アイザメ、アンコウ等深海魚肉のほか、エビ、カ
ニ、タコ、アミ類等も適宜使用できる。

【００１２】採肉した後、粉砕機等によって魚介類を粉
砕し、原料重量に対して１／２量〜２０倍量、好ましく
は等量〜１０倍量の加水を行った後、加熱処理し、もっ
て、自己消化酵素を失活させ、且つ雑菌を死滅させると
ともに、タンパク質を熱変性させて後に行う酵素反応効
率を上昇せしめる。加熱条件としては、このような作用
が奏される条件であればすべての条件が利用できるが、
例えば６５℃以上、２〜６０分、好ましくは８０℃以
上、５〜３０分とするのがよい。

【００１３】次いで、アンモニア水か、水酸化ナトリウ
ム（カリウム）水溶液等アルカリ剤を加えて、使用する
蛋白分解酵素の適値にｐＨを調整し（例えばアルカリプ
ロテアーゼの場合は、ｐＨ７．５以上、好ましくは８以
上）、温度も酵素適温（使用酵素によって異なるが、２
０〜６５℃、アルカリプロテアーゼの場合は３５〜６０
℃、好ましくは４０〜５５℃）に加温し、蛋白分解酵素
を加えて３０分〜３０時間（アルカリプロテアーゼの場
合は３０分〜２５時間、好ましくは１〜１７時間）処理
する。

【００１４】蛋白分解酵素としては、中性又はアルカリ
性条件下で蛋白質を分解し得る酵素であればすべての酵
素が単独で又は混合して使用し得る。その起源は、動植
物のほかに微生物に求めることができ、レニン、トリプ
シン、キモトリプシン、パパイン、プロメレインのほ
か、細菌プロテアーゼ、糸状菌プロテアーゼ、放線菌プ
ロテアーゼ等も広く利用できる。これらの酵素は通常、
市販されているものが使用されるが、未精製の酵素、酵
素を含有した培養液、麹といった固体又は液体の酵素含
有物も、目的により必要に応じて使用することができ
る。酵素の添加量としては０．１％〜５．０％程度でも
よい。

【００１５】次いで、必要あれば中和処理を行った後、
７０℃（好適には８０℃）以上の温度に２〜６０分間
（好適には５〜３０分間）保持し、酵素を失活させると
ともに後に行う分離を良好ならしめる。加熱失活処理
後、バイブスクリーン等による濾過によって粗分離し、
必要によりジェクター処理した後、遠心分離処理して、
浮遊物、沈殿物を除去する。

【００１６】次に、ケイソウ土等濾過助剤（例えばセラ
イト）を用いて濾過し、濾液を活性炭処理して（０．０
５〜２０％Ｗ／Ｖ、好ましくは０．１〜１０％Ｗ／Ｖ使
用、２０〜６５℃、好ましくは２５〜６０℃、１５分〜
４時間、好ましくは３０分〜２時間）、脱臭、脱色、精
製する。

【００１７】これを減圧濃縮（０〜５０℃）その他常法
にしたがって濃縮し（３０Ｂｘ程度にまで）た後、必要
あれば再度遠心分離又は濾過してペプチド原液を得る。
このようにして得たペプチド原液は、殺菌（ＵＨＴＳＴ
その他常法による）した後、容器に充填して製品（α−
１０００（液体））とする。また、希望するのであれ
ば、更に濃縮したりあるいは逆に希釈したり、また、噴
霧乾燥、凍結乾燥等の常法によって６０メッシュ程度に
粉末化し、これを袋等の容器に充填して製品（α−１０
００（粉末））とすることもできる。これらの製品は、
冷蔵ないし冷凍保管する。

【００１８】このようにして得た、液状、ペースト状な
いし粉末状のペプチドがα−１０００である。

【００１９】ペプチドα−１０００（スプレードライ粉
末）の物理化学的性質は、下記表１、表２に示すとおり
である。

【００２０】（表１）ペプチドα−１０００（粉末）の物理化学的性質（Ａ）分子量：２００〜１０，０００（セファデックス
Ｇ−２５カラムクロマトグラフィーによる）（Ｂ）融点：１１９℃で着色（分解点）（Ｃ）比旋光度 [α]_D ²⁰＝−２２° （Ｄ）溶剤に対する溶解性：水に易溶；エタノール、ア
セトン、ヘキサンにはほとんど溶解しない。（Ｅ）酸性、中性、塩基性の区別：中性ｐＨ６．０〜
８．０（１０％溶液）（Ｆ）外観、成分：白色粉末：水分５．１４％（減圧加熱乾燥法）；蛋白質
８７．５％（ケルダール法、窒素・蛋白質換算係数６．
２５）；脂質０％（ソックスレー抽出法）；灰分５．０
％（直接灰化法）。（Ｇ）ＵＶスペクトル：図１に示すとおり。（Ｈ）ＩＲスペクトル：図２に示すとおり。（Ｉ）特性：魚肉由来であり、加熱によって自己消化酵
素を失活させ、蛋白分解酵素で加水分解して得たペプチ
ドである。（Ｊ）アミノ酸組成：表２に示すとおり。

【００２１】分析方法：アミノ酸自動分析法（ただし、シスチンは、
過ギ酸酸化処理後、塩酸加水分解し、測定した。トリプ
トファンは、高速液体クロマトグラフ法を用いた。）

【００２２】ここに得られるペプチドα−１０００の水
溶液をＯＤＳ樹脂などのペプチド吸着性樹脂に通し、水
などで洗浄した後、各種濃度のエタノールなどで溶離流
下を行い、各画分のなかからＡＣＥ阻害活性の強い画分
をとり、目的とするペプチドを得るのである。そしてこ
れらエタノール画分の内、エタノール濃度０〜２０％の
エタノール水溶液を用いて溶離させて得られる画分に、
特に強いＡＣＥ阻害活性や苦味の低下が認められ、目的
とするペプチドを得るのに成功した。

【００２３】本発明のペプチドは、ＡＣＥ阻害剤として
の利用、例えば血圧降下剤ないし血圧降下を目的として
特定保健用食品向けペプチドとしても使用することがで
きる。したがって本ペプチドは、調味料、栄養強化用食
品といった食品ないしは動物飼料添加剤として使用され
るほか、上記した独特の生理活性の故に、高血圧性疾病
の予防、ある場合には治療のために、医薬として、また
は輸液、健康食品、臨床栄養食品等としても巾広く使用
することができる。

【００２４】食品として使用する場合には、ペプチドを
そのまま添加したり、他の食品ないしは食品成分と併用
したりして適宜常法にしたがって使用できる。また、医
薬として使用する場合には、経口又は非経口投与するこ
とができる。経口投与の場合には、例えば常法にしたが
い、錠剤、顆粒剤、粉末剤、カプセル剤、散剤とするこ
とができ、又、非経口投与の場合には、例えば注射薬製
剤、点滴剤、坐剤等として使用することができる。

【００２５】以下、本発明を参考例及び実施例によって
更に詳しく説明する。

【００２６】

【参考例１】新鮮イワシをデボーナーで処理して採肉し
た。採肉した魚肉質を１０ｋｇのすり身に分割し、これ
を−３０℃以下で急速凍結した後、粉砕機で粉砕した後
等量の水を加え、これをタンクに送り、１００℃に１０
分間加熱して自己消化酵素を失活させ、熱変性させた。
次いでアンモニア水を加えてｐＨを１０．０に調整し
た。

【００２７】これに市販のアルカリプロテアーゼ製品の
０．１％液を加え、４５℃に１７時間保持して酵素分解
を行った。次いで１５分間煮沸して酵素を失活せしめ
た。

【００２８】これをバイブスクリーン（１５０メッシ
ュ）に通し５０００ｒｐｍでジエクター処理した後、シ
ャープレス遠心分離機で処理し（１５０００ｒｐｍ）、
ケイソウ土を濾過助剤として用い、濾過処理したものを
ペプチド原液とした。

【００２９】上記で得たペプチド原液に活性炭を１％Ｗ
／Ｖ加え、３０℃で６０分間攪拌した後濾過して濾液を
得た。これを常法にしたがって減圧濃縮した後、常法に
したがってＵＨＴＳＴ殺菌を行って、α−１０００（液
体）製品を得、これを更に常法にしたがって噴霧乾燥し
て粒径６０メッシュのα−１０００（粉末）製品を得、
それぞれこれらの製品は冷凍保管した。

【００３０】このようにして調製したペプチドα−１０
００（粉末）について、セファデックスＧ−２５カラム
を用い、下記の条件でゲル濾過した結果、図３の結果が
得られ、分子量は２００〜１０，０００であることが判
明した。カラムサイズ：径１６×９５０ｍｍ、溶出剤：
０．１Ｍホスフェートバッファー（ｐＨ７．０）、分
画：２ｍｌ／チューブ、流速：１０ｍｌ／ｈ、分子量マ
ーカー：バシトラシン（分子量１４５０）。

【００３１】上記によって得たα−１０００（液体）
は、水分含量が７３．６％（減圧加熱乾燥法）であっ
て、淡黄色を呈し、その１０％溶液のｐＨは７．５を示
し、魚臭もなく苦味も認められなかった。その成分につ
いての分析、及び、アミノ酸組成についての測定を行っ
た結果、下記する表３及び表４に示す結果が得られた。

【００３２】（表３）ペプチドα−１０００（液体）の成分分析 ────────────────────────────────── 分析試験項目結果分析方法 ────────────────────────────────── たんぱく質 24.8％ケルダール法（＊１）脂質 0％ソックスレー抽出法灰分 1.6％直接灰化法繊維 0％ヘンネベルグストーマン改良法糖質 0％（＊２）エネルギー 99kcal/100g （＊３）アミノ態窒素 1.2％バンスライク法鉄 0.11mg/100g ｏ−フェナントロリン吸光光度法カルシウム 4.5mg/100g 原子吸光光度法ナトリウム 211mg/100g 原子吸光光度法重金属（Ｐｂとして） 1.9ppm 硫化ナトリウム比色法ヒ素（Ａｓ₂Ｏ₃として）3.7ppm ＤＤＩＣ−Ａｇ吸光光度法ヒスタミン検出せず高速液体クロマトグラフ法 ────────────────────────────────── 注釈＊１．窒素・たんぱく質換算係数：６．２５＊２．計算式：１００−（水分＋たんぱく質＋脂質＋繊維＋灰分）＊３．エネルギー換算係数：たんぱく質，４；脂質，９；炭水化物（繊維＋糖質），４

【００３３】分析方法：アミノ酸自動分析法（ただし、シスチンは、
過ギ酸酸化処理後、塩酸加水分解し測定した。トリプト
ファンは、高速液体クロマトグラフ法を用いた。）

【００３４】

【実施例１】参考例１で得られたペプチドα−１０００
（粉末）５ｇを５００ｍｌの脱イオン水で溶解し、ＯＤ
Ｓ樹脂（ＹＭＣＯＤＳ−ＡＱ１２０−Ｓ５０）カラ
ム（３．５×１３ｃｍ）に流してペプチドを吸着させ、
脱イオン水で洗浄し、次に、０％、１０％、２５％、５
０％及び９９．５％のエタノール水溶液各５００ｍｌで
溶離させ、それぞれ、Ｙ−１、Ｙ−２、Ｙ−３、Ｙ−４
及びＹ−５の画分を得た。これらの画分は、いずれもす
ぐれたＡＣＥ阻害活性を示した。風味については、Ｙ−
１は苦味は全くなく、Ｙ−２も苦味はほとんどなかっ
た。そして、Ｙ−３、Ｙ−４となるにしたがい苦味が強
くなる傾向が認められた。

【００３５】

【参考例２】実施例１において得られたＹ−１画分は、
下記する表５、表６に示すような物理化学的性質を有
し、α−１０００に比べて、ＡＣＥ阻害活性にすぐれ、
色及び味の面では大幅な改良が認められた。このような
ペプチドは、文献未載でしかも極めて有用な新規物質で
あって、これをα−２１００と命名した。

【００３６】（表５）Ｙ−１の物理化学的性質（Ａ）分子量：２００〜１０，０００（ＡＳＡＨＩＰＡ
ＫＧＳ−３２０高速液体クロマトグラフィーによる）（図４）（Ｂ）融点：６５℃で着色した（分解点）（Ｃ）比旋光度：[α]_D ²⁰＝−１１° （Ｄ）溶剤に対する溶解性：水に易溶であるが、エタノ
ール、アセトン、ヘキサンにほとんど溶解しない。（Ｅ）酸性、中性、塩基性の区別：中性ｐＨ５．０〜
８．０（１０％溶液）（Ｆ）物質の外観：白色〜淡黄色粉末。（Ｇ）成分：水分６．５８％（常圧加熱乾燥法）；蛋白
質７３．９４％（ケルダール法、窒素・蛋白質換算係数
６．２５）；脂質０％（ソックスレー抽出法）；灰分
９．８５％（直接灰化法）（Ｈ）ＵＶスペクトル：図５（Ｉ）ＩＲスペクトル：図６（Ｊ）アミノ酸組成：表６

【００３７】分析方法：アミノ酸自動分析法

【００３８】

【実施例２】実施例１において得られたＹ−２画分、す
なわちＯＤＳカラムクロマトグラフィーにより溶出した
１０％エタノール画分は、下記する表７、表８に示すよ
うな物理化学的性質を有し、また、ＡＣＥ阻害活性は非
常に高く（ＩＣ₅₀（ｍｇ蛋白／ｍｌ）：０．０１５、こ
れに対してα−１０００は０．２６３）、苦みはほとん
どなく、味についても格別の問題点は認められなかっ
た。このようなペプチドは文献未載でしかも極めて有用
な新規物質であって、これをα−２２００と命名した。

【００３９】（表７）Ｙ−２の物理化学的性質（Ａ）分子量：２００〜１０，０００（ＡＳＡＨＩＰＡ
ＫＧＳ−３２０高速液体クロマトグラフィーによる）
（図７）（Ｂ）融点：１３８℃で着色した（分解点）（Ｃ）比旋光度〔α〕_D ²⁰＝−４０° （Ｄ）溶剤に対する溶解性：水に易溶であるが、エタノ
ール、アセトン、ヘキサンにほとんど溶解しない。（Ｅ）酸性、中性、塩基性の区別：中性ｐＨ５．０〜
８．０（１０％溶液）（Ｆ）物質の外観：白色〜淡黄色粉末。（Ｇ）成分：水分２．７２％（常圧加熱乾燥法）；蛋白
質８７．２５％（ケルダール法、窒素・蛋白質換算係数
６．２５）；脂質０％（ソックスレー抽出法）；灰分
０．２０％（直接灰化法）（Ｈ）ＵＶスペクトル：図８（Ｉ）ＩＲスペクトル：図９（Ｊ）アミノ酸組成；表８

【００４０】分析方法：アミノ酸自動分析法

【００４１】

【実施例３】Ｙ−２画分の官能評価を次のようにして行
った。評価は、うまみ、苦味、魚臭の３項目について、
非常に強いと感じたときを５として６点評点で行い
（５：非常に強いと感じたもの→０：何も感じないも
の）、下記の表９の結果を得た。この結果から、Ｙ−２
画分は、うまみは多少弱いものの、苦味や魚臭は低いこ
とが明らかにされた。

【００４２】

【００４３】このようにＹ−２画分は、異味や異臭がな
いので、無味無臭が要求される食品素材として好適であ
り、またすぐれたＡＣＥ阻害活性とも相まって、Ｙ−２
画分は、機能性食品素材としての適用性がきわめて高い
ことが判明した。

【００４４】

【発明の効果】本発明によって得られた新規ペプチドは
ほとんど苦味もないので、飲食品自体ないし添加物とし
て使用できるだけでなく、すぐれたＡＣＥ阻害活性を有
するので、保健用食品として血圧上昇を抑制ないし予防
のために使用することができ、また、ＡＣＥ阻害剤ない
し血圧降下剤として各種の剤型に製剤化して医薬として
も有利に使用できる。

【図面の簡単な説明】

【図１】ペプチドα−１０００のＵＶスペクトルを図示
したものである。

【図２】ペプチドα−１０００のＩＲスペクトルを図示
したものである。

【図３】ペプチドα−１０００のゲル濾過パターンを図
示したものである。

【図４】Ｙ−１画分の分子量ＨＰＬＣパターンを図示し
たものである。

【図５】Ｙ−１画分のＵＶスペクトルを図示したもので
ある。

【図６】Ｙ−１画分のＩＲスペクトルを図示したもので
ある。

【図７】Ｙ−２画分の分子量ＨＰＬＣパターンを図示し
たものである。

【図８】Ｙ−２画分のＵＶスペクトルを図示したもので
ある。

【図９】Ｙ−２画分のＩＲスペクトルを図示したもので
ある。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｋ 35/60 Ａ６１Ｋ 35/60 38/55 37/64 (72)発明者松井利郎福岡市城南区別府３−２−10 千万喜ビル 503号 (72)発明者筬島豊愛媛市東区舞松原２−24−26 Ｆターム(参考） 4B018 MD20 MD22 MD74 ME04 MF01 MF12 4C084 AA06 AA07 BA04 BA05 CA45 DC40 NA14 ZA42 ZC17 ZC20 4C087 AA04 BB29 CA03 CA22 CA23 CA45 NA14 ZA42 ZC17 ZC20 4H045 AA10 AA20 AA30 BA09 CA50 EA01 EA07 EA20 FA70 GA20 HA02 HA03 HA04

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】下記の物理化学的性質を有するペプチド
α−２２００（画分Ｙ−２）。（Ａ）分子量：２００〜１０，０００（ＡＳＡＨＩＰＡ
ＫＧＳ−３２０高速液体クロマトグラフィーによ
る）（Ｂ）融点：１３８℃で着色、分解する。（Ｃ）溶剤に対する溶解性：水に易溶であるが、エタノ
ール、アセトン、ヘキサンにほとんど溶解しない。（Ｄ）物質の外観：白色〜淡黄色粉末。（Ｅ）成分：水分２．７２％（常圧加熱乾燥法）；蛋白
質８７．２５％（ケルダール法）；脂質０％（ソックス
レー抽出法）；灰分０．２０％（直接灰化法）。
【請求項２】下記の物理化学的性質を有するペプチド
α−１０００をＯＤＳ樹脂に吸着せしめ、エタノール濃
度０％のエタノール水溶液でペプチドα−２１００（画
分Ｙ−１）を溶離した後、エタノール濃度１０％のエタ
ノール水溶液で溶離することを特徴とする請求項１に記
載のペプチドα−２２００（画分Ｙ−２）の製造方法。（Ａ）分子量：２００〜１０，０００（セファデックス
Ｇ−２５カラムクロマトグラフィーによる）（Ｂ）融点：１１９℃で着色（分解点）（Ｃ）比旋光度 [α]_D ²⁰＝−２２° （Ｄ）溶剤に対する溶解性：水に易溶；エタノール、ア
セトン、ヘキサンにはほとんど溶解しない。（Ｅ）酸性、中性、塩基性の区別：中性（Ｆ）外観、成分：白色粉末：水分５．１４％（減圧加熱乾燥法）；蛋白質
８７．５％（ケルダール法、窒素・蛋白質換算係数６．
２５）；脂質０％（ソックスレー抽出法）；灰分５．０
％（直接灰化法）。