JPS6287058A - 新規ペプチド - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分野） 本発明は、ペプチドに関するものであるが、更に詳細に
は本発明は文献未載の新規ペプチドに関するものであり
、蛋白質関連技術分野、栄養剤。

栄養食品、調味料、医薬といった技術分野、及び水産物
の有効利用という面で水産業の技術分野でも広く重用さ
れるものである。

（従来の技術） 魚介肉ペプチドは、魚介類を酸、アルカリ、酵素等で加
水分解して得たエキス成分中に含有されるが、これらエ
キス成分から有用なペプチドのみを大量に且つ精製した
状態で抽出、分離する方法は未だ開発されていない。

ましてや、呈味性にすぐれ、栄養強化にも有用であるの
みならず、血圧降下作用のほか数多くの医薬効果をも併
有し、しかも後記するような独特の物性、構造を有する
本発明に係るペプチドは。

文献に記載されておらず全く新規なものである。

つまり１本発明に係るペプチドは、物性及び作用効果の
両面からして、従来開発されたことがなく全く未知のも
のである。

（発明の目的） 魚介類、例えば、イワシ、サバ、サンマ、等の不飽和脂
肪酸による動脈硬化予防作用が最近注目されている。そ
こで本発明者等は、魚介類の他の成分にも有用な生理活
性物質が存在するのではないかとの着想を得、魚介肉の
ペプチドに着目した。

そして魚介肉のペプチドには強肝作用のほかにも数多く
の生理活性があるのみならず、呈味性、栄養強化性が充
分に活用できることの新知見を得、これを確立して工業
的に広く有効利用する目的で本発明はなされたものであ
る。

（発明の開示） 上記目的達成のために、本発明者らは大量にかつ高純度
のペプチドを製造するため、鋭意研究を行なった結果、
魚介類にタンパク分解酵素を作用させることにより、目
的とするペプチドを生成させることができ、かつ更にこ
のペプチドを大量にかつ高純度に単離精製することがで
きるという事実を知見し、本発明を完成したものである
。

従って本発明によれば、魚介類をタンパク分解酵素で処
理することにより、ペプチドを生成させ。

ついでこれをアルコール分画、イオン交換樹脂処理する
ことによって分離、精製することによって［」的とする
ペプチドが得られるのである。

このようにして得られたペプチドは、物性、構造のみな
らずその作用効果においても独特なものであって文献未
載の新規物質であることを確認し、ＤＡＮ　−１００と
命名した。

本ペプチドは魚介類を原料として製造するものであるが
、先ず、これを採肉機、デボーナー等によって処理して
魚肉質を分離する。原料は出来る限り新鮮なものが好ま
しい。分離した魚肉は、１０−程度のすり身に分割し、
このまま次の処理に使用してもよいが、−２０〜−５０
℃０例えば−３０’Ｃ。

程度の冷気を吹き付けて急速凍結し、−２０〜−２５℃
に保存しておき、必要に応じてこれを適宜使用するよう
にしてもよい。

魚介類としては、イワシ、アジ、マグロ、カツオ、サン
マ、サバ等赤身魚；ヒラメ、タイ、キス、コノシロ、タ
ラ、ニシン５ブリ等白身魚；サメ、エイ等軟骨魚肉；ワ
カサギ、コイ、イワナ、ヤマメ等淡水魚肉；アイザメ、
アンコウ等深海魚肉のほか、エビ、カニ、タコ、アミ類
等も適宜使用できる。

本発明においては、採肉した後、粉砕機等によって魚介
肉を粉砕し、加水し、酵素適温（使用酵素によって異な
るが、２０〜６０℃程度）にまで加温し、　ｐＨも適値
（ｐｌ＋３〜９程度）に調整し、蛋白分解酵素を加えて
、１〜３０時間処理する。希望するのであれば粉砕魚介
肉を加水した後攪拌タンク内で４０〜６０℃程度に１〜
５時間保持して自己消化せしめ２　しかる後に酵素を′
添加して分解せしめてもよい。

蛋白分解酵素としては、蛋白質を分解し得る酵素であれ
ばすべての酵素が単独で又は混合して使用し得る。その
起源は、動植物のほか微生物に求めることができ、ペプ
シン、レニン、トリプシン、キモトリプシン、パパイン
、プロメレインのほか、細菌プロテアーゼ、糸状菌プロ
テアーゼ、放線菌プロテアーゼ等も広く利用できる。こ
れらの酵素は、通常、市販されているものが使用される
が。

未精製の酵素、酵素を含有した培養液、麹といった固体
又は液体の酵素含有物も、目的により必要に応じて使用
することができる。

０．１％濃度のプロテアーゼ液を使用した場合、魚肉と
してイワシのような赤身肉を処理するときには、　ｐ１
１４．１．４５℃で約１７時間、又はＰＨ５，９，４８
℃で約４時間で酵素処理は終了する。

次いで中和した後、８０℃以上の温度に５〜３０分間保
持して酵素を失活させる。加熱失活処理後、バイブロス
クリーン等によって濾過し、必要によリジェクタ−処理
した後、シャープレス遠心分雛機等を用いて例えばｉｏ
、ｏｏｏ〜３０．ＯＯＯｒｐｍで遠心分離する。

これを常法によ濃縮しく３０Ｂｘ程度にまで）だ後、再
度遠心分離してペプチド原液を得る。

こうして得たペプチド原液は、精製ペプチド原料として
使用するほか、このまま、ないしは濃縮（必要に応じて
希釈）して、調味料、栄養剤、健康食品、臨床栄養食、
＠液、ドリンク剤等に使用することができる。

次いで、ペプチド原液は、活性炭を加えて攪拌して脱色
した後濾過する。濾液にアルコールを加えて放置する。

アルコールとしては、メタノール。

エタノール、プロパツール、イソプロパツール。

ブタノール等が好適であるが、他のアルコールを使用し
てもさしつかえない。アルコールは冷時使用しく０−１
０℃）、ペプチド原液と等量ないし３０倍以上使用する
。冷アルコール添加後、冷室に３０分〜３時間以上放置
して沈殿を生成せしめる。

得られた沈殿は、加水して溶液となし、クロマトゲラフ
処理するのであるが、ペプチド原液の場合と同様に、沈
殿物をそのまま前記した各種の用途に使用してもよい。

上記溶液は、イオン交換樹脂で処理するが、樹脂として
は、カチオン交換樹脂、特に強酸性カチオン交換樹脂を
使用する。例えば、これらの樹脂を充填したカラムに上
記溶液を注入し、水洗したあと希アンモニア水等のアル
カリ水溶液で溶出し、溶出液を得る。

得られた溶出液は、減圧濃縮等の方法によりアンモニア
を除去した後、必要に応じて濃縮して、常法にしたがっ
て凍結乾燥等の方法によって粉末化し、目的とする塩基
性ペプチドを得る。前記したように、上記溶出液を、濃
縮又は希釈して、各種の用途に使用してもよい。

このようにして得られたペプチドは、文献未知でしかも
極めて有用な新規なものであって、　ＤＡＮ−１００と
命名した。

ペプチドＤＡＮ　−１００の物理化学的性質は次のとお
りである。

１、元素分析値 Ｃ；４１．５％、Ｈ；６．７％、Ｎ；１６．９％。

○；　３４．９％ ２、分子量 セファデックスＧ−２５カラムクロマトグラフイーによ
り分子量１万以下、５００以上と推定される。

３、融点　　１７３℃ ４、比旋光度　　［α］Ｄ　　２３゜ ５、ＵＶスペクトル　　特異な吸収は認められない。

６、ＩＲスペクトル　　図面のとおり ７、溶剤に対する溶解性 水、メタノール、ＤＭＳＯ等極性溶媒に可溶であるが、
クロロホルム、ヘキサン等非極性溶媒に不溶 ８、呈色反応 ニンヒドリン反応　　　　十 ビウレット反応　　　　　十 銅−フォーリン反応　　　十 フェノール硫酸反応　　　− ９、塩基性、酸性、中性の区別 弱塩基性、ｐＨ９，６０（１０％溶液）１０、物質の色
、形状 白色粉末 １１、水分含量 ４．０１％（常圧乾燥法） １２、塩分 ８．１９％（ＣΩとして電位差滴定法により測定）１３
、全窒素及びアミノ醜態窒素 Ｔ−Ｎ　：　１６．８１％（ミクロケールプール法）ア
ミノ醜態−Ｎ　：　２．４６％（ホルモール法）本発明
に係るペプチドは、呈味作用のほか、次のような各種の
生理活性作用を有している：成長促進作用、血圧降下作
用、貧血症予防作用、抗潰瘍作用１強肝作用、更には、
糖尿病、肥満症、高脂血症、動脈硬化症等の改善作用。

したがって本ペプチドは、調味料、栄養強化用食品とい
った食品ないしは動物飼料添加剤として使用されるほか
、上記した独特の生理活性の故に、各種疾病の予防、あ
る場合には治療のために、医薬として、または輸液、健
康食品、臨床栄養食品等としても巾広く使用することが
できる。

食品として使用する場合には、ペプチドをそのまま添加
使用したり、他の食品ないしは食品成分と併用したりし
て適宜常法にしたがって使用できる。また、医薬として
使用する場合には、経口又は非経口投与することができ
る。経口投与の場合には、例えば常法にしたがい、錠剤
、顆粒剤、粉末剤、カプセル剤、散剤とすることができ
、又、非経口投与の場合には、例えば注射薬製剤、点滴
剤、坐剤等として使用することができる。

本発明に係るペプチドは、天然起原であるために毒性が
全くないか又は極めて低く、きわめて安全である（ＬＤ
ＳＯ＞　３，０００ｍｇ／Ｋｇ皮下、）５，０００ｍｇ
／Ｋｇ経口：いずれもラット）。

実施例１ 新鮮イワシをデボーナーで処理して採肉した。

採肉した魚肉質を１０ｋｇのすり身に分割した。これを
粉砕機で粉砕した後等量の水を加え、４５〜４８℃に加
熱し、これを攪拌タンクに移して同温に２〜３時間保持
して自己消化分解せしめた。次いでｐＨを４．１に調節
した。

これにブナチーム（市販プロテアーゼ製剤商品名）の０
．１％液を加え、４５°Ｃに１７時間保持して酵素分解
を行った。中和し、次いで１５分間煮沸して酵素を失活
せしめた。

これをバイブロスクリーン（１５０メツシユ）で濾過し
、濾液を５００Ｏｒｐｍでジェクター処理した後、シャ
ープレス遠心分離機で処理しく１５．ＯＯＯｒｐｍ）　
。

２０　Ｂｘとなるまで常温加熱濃縮し、そして再度シャ
ープレス遠沈処理（１５，０００ｒｐｍ）　してペプチ
ド原液（ＤＡＮ−Ｎｏ２）を得た。

実施例２ 上記で得たベプタイド原液（ｐＨ６，２２）を１８４ｏ
ｎ＋Ｑとり、これに活性炭１００ｇを加え６０分間攪拌
した後濾過して濾液（ｐＨ６，１２）１５００ｍ１２を
得た。

濾液を１００ｍρとり、これに冷メタノールを２０００
ｍＱ加え、冷室に６０分間放置して沈殿を生ぜしめた。

生じた沈殿物に水を加えて溶液（Ｅ）を得た。

実施例３ 」二記溶液（Ｅ）をｌ　００ｍ１２とり５　これをダウ
エックス５０１１　（）！”）を充填したカラム（φ５
　Ｘ　１５ｃｍ）に注入した。

そして、水２０００ｍＱを用いて樹脂を水洗し、　２Ｎ
−Ｎ８４０Ｈ２５０＋＋＋Ｑを用いて溶出し、得られた
溶出液を常法によりアンモニヤ除去後凍結乾燥してペプ
チドＤＡＮ　−１００の白色粉末を得た。

応用例１ 醤油５００ｇ、液糖２００ｇ、みりん５００ｇに、実施
例１で得たペプチド原液ＤＡＮ−Ｎｏ２を１ｋｇ加えて
攪拌し、熟成タンク中で５日間熟成せしめた後、殺菌、
ビン詰して、風味のすぐれた割醤油調味料を得た。

応用例２ ビタミンＣ２０ｇ、グラニユー糖５０ｇ、コーンスター
チと乳糖の等景況合物３０ｇに、実施例３で得たペプチ
ドＤＡＮ　−１００を５０ｇ加えて充分に混合した。

混合物を１００等分して袋に詰め、１袋ｉ、ｓ　ｇのス
ティック状栄養健康食品を１００袋製造した。

応用例３ 肝臓の５４％を切除した体重的２００ｇの雄性ウェスタ
ー系ラットを自由摂食摂木下、実施例３で得たペプチド
ＤＮＡ−１００を連続経口投与（３−１０ｇ／Ｋｇ体重
、３−２７日間）した後、断頭し、直ちに開腹して、肝
臓の採取を行って、肝湿重量を測定した６肝湿重欲は、
対照群（普通食のみ）と比較して、各群全てに増殖率３
−１４％（１０頭平均値）の値を得た。

上記結果から明らかなように、本ペプチドは顕著な肝再
生作用を示し、強肝剤としてきわめて有用であることが
判明した。投与量は、患者の症状、年令によっても異な
るが、０．１〜１０００ｍｇ／ｋｇ／ｄａｙで１日１〜
４回投与する。

応用例４ （１）実施例３で得たペプチドＤＡＮ　−１００Ｌｏｇ
（２）塩化ナトリウム　　　　　　　　　　　　　９ｇ
（３）クロロブタノール　　　　　　　　　　　　５ｇ
（４）炭酸水素ナトリウム　　　　　　　　　　　１ｇ
全成分を蒸留水１０００ｏ＋Ｑに溶解し、これを５００
ｍＱの点滴ビン２本に分注し、栄養輸液を得た。

【図面の簡単な説明】

図面は、本発明に係るペプチドＤＡＮ−１００のＩＲス
ペクトルを図示したものである。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 魚介類を蛋白分解酵素で処理し、得られた処理物をアル
   コール分画し、更にこれをイオン交換樹脂処理して得ら
   れた新規ペプチド。