JP2003128703A - 糖鎖アスパラギン誘導体の製造方法 - Google Patents
糖鎖アスパラギン誘導体の製造方法Info
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Abstract
(57)【要約】
【課題】医薬品開発等の分野において有用な種々の単離
された糖鎖アスパラギン誘導体を従来に比べて非常に容
易かつ大量に得ることができる糖鎖アスパラギン誘導体
の製造方法、該糖鎖アスパラギン誘導体を製造する工程
を介する糖鎖アスパラギンの製造方法および糖鎖の製造
方法、ならびに新規な糖鎖アスパラギン誘導体、糖鎖ア
スパラギンおよび糖鎖を提供すること。 【解決手段】（ａ）１種もしくは２種以上の糖鎖アスパ
ラギンを含む混合物に含まれる該糖鎖アスパラギンに脂
溶性の保護基を導入して糖鎖アスパラギン誘導体混合物
を得る工程、ならびに（ｂ）該糖鎖アスパラギン誘導体
混合物または該糖鎖アスパラギン誘導体混合物に含まれ
る糖鎖アスパラギン誘導体を加水分解して得られる混合
物をクロマトグラフィーに供して各糖鎖アスパラギン誘
導体を分離する工程を含む糖鎖アスパラギン由来の糖鎖
アスパラギン誘導体の製造方法、前記製造方法を含む糖
鎖アスパラギンの製造方法および糖鎖の製造方法、なら
びにそれらにより得られる糖鎖アスパラギン誘導体、糖
鎖アスパラギンおよび糖鎖。
された糖鎖アスパラギン誘導体を従来に比べて非常に容
易かつ大量に得ることができる糖鎖アスパラギン誘導体
の製造方法、該糖鎖アスパラギン誘導体を製造する工程
を介する糖鎖アスパラギンの製造方法および糖鎖の製造
方法、ならびに新規な糖鎖アスパラギン誘導体、糖鎖ア
スパラギンおよび糖鎖を提供すること。 【解決手段】（ａ）１種もしくは２種以上の糖鎖アスパ
ラギンを含む混合物に含まれる該糖鎖アスパラギンに脂
溶性の保護基を導入して糖鎖アスパラギン誘導体混合物
を得る工程、ならびに（ｂ）該糖鎖アスパラギン誘導体
混合物または該糖鎖アスパラギン誘導体混合物に含まれ
る糖鎖アスパラギン誘導体を加水分解して得られる混合
物をクロマトグラフィーに供して各糖鎖アスパラギン誘
導体を分離する工程を含む糖鎖アスパラギン由来の糖鎖
アスパラギン誘導体の製造方法、前記製造方法を含む糖
鎖アスパラギンの製造方法および糖鎖の製造方法、なら
びにそれらにより得られる糖鎖アスパラギン誘導体、糖
鎖アスパラギンおよび糖鎖。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、糖鎖アスパラギン
誘導体の製造方法および糖鎖アスパラギン誘導体に関す
る。
誘導体の製造方法および糖鎖アスパラギン誘導体に関す
る。
【０００２】
【従来の技術】従来、糖鎖を糖加水分解酵素で分解して
誘導体化する技術が糖鎖の構造解析など、数ミリグラム
スケールの分析研究において利用されている。しかしな
がら、個々の糖鎖の誘導体を大量に得ることはできなか
ったため、グラムスケールでの研究技術の進展は遅れて
いた。そのため、糖鎖の誘導体を、薬品を製造するよう
な合成研究に応用することは難しかった。
誘導体化する技術が糖鎖の構造解析など、数ミリグラム
スケールの分析研究において利用されている。しかしな
がら、個々の糖鎖の誘導体を大量に得ることはできなか
ったため、グラムスケールでの研究技術の進展は遅れて
いた。そのため、糖鎖の誘導体を、薬品を製造するよう
な合成研究に応用することは難しかった。
【０００３】一方、卵黄より糖ペプチドが大量に得られ
ることは知られていた (Biochimicaet Biophysica Acta
1335 (1997) p23 〜32)。しかしながら、図１に示す化
合物１ならびに該化合物１において分岐糖鎖の一方の非
還元末端のシアル酸やガラクトースなど幾つかの糖残基
が欠失した一連の化合物についてのフルオレニルメトキ
シカルボニル（Ｆｍｏｃ）化された糖鎖の誘導体を大量
に得た例はない。また、人の血液中のタンパク質等から
幾つかの種類の糖鎖が少量単離された例はあるが、当該
糖鎖を薬品の製造に使用すると当該薬品に人体に有害な
エイズウイルスや肝炎ウイルス等が混入する危険性があ
るため、当該糖鎖を薬品に応用する技術は問題視されて
いた。
ることは知られていた (Biochimicaet Biophysica Acta
1335 (1997) p23 〜32)。しかしながら、図１に示す化
合物１ならびに該化合物１において分岐糖鎖の一方の非
還元末端のシアル酸やガラクトースなど幾つかの糖残基
が欠失した一連の化合物についてのフルオレニルメトキ
シカルボニル（Ｆｍｏｃ）化された糖鎖の誘導体を大量
に得た例はない。また、人の血液中のタンパク質等から
幾つかの種類の糖鎖が少量単離された例はあるが、当該
糖鎖を薬品の製造に使用すると当該薬品に人体に有害な
エイズウイルスや肝炎ウイルス等が混入する危険性があ
るため、当該糖鎖を薬品に応用する技術は問題視されて
いた。
【０００４】ところで、分岐型糖鎖でその分岐部分の構
造が同じものを有する糖鎖の製造例は数多くある。その
従来技術としては、三種類の方法が存在する。一つ目
は、天然に存在する糖タンパク質からアスパラギン結合
複合型糖鎖を単離精製する方法である。その代表例とし
ては、T. Tamura,et al. Anal.Biochem., 1994, 216, p
335-344 、V. H. Thomas, et al. Carbohydr. Res., 19
98, 306, p387-400 、K.G. Rice, et al., Biochemistr
y, 1993, 32, p 7264-7270 などに記載の方法がある。
これらの方法の利点は、糖鎖を合成する必要がないとい
うことである。しかし、欠点が幾つか存在する。たとえ
ば、前記糖タンパク質由来の糖鎖は、非還元末端部分に
おいて糖残基がランダムに幾つか欠失した糖鎖の混合物
として得られ、当該混合物に含まれる糖鎖はその物理的
・化学的性質が類似しており個々の糖鎖に分離すること
は非常に困難であるので、単一の糖鎖を大量に得ること
は実質的に不可能であった。また、比較的大量に得るた
めに、人血中のタンパク質（Fibrinogenからの単離：C.
H. Hokke, et al, Carbohydr. Res., 305(1997), p463
-468、Human Serum Transferrin からの単離：M. Mizun
o et.al., J. Am. Chem. Soc., 1999, 121, p284-290）
から糖鎖を単離している例がある。前述したように、人
血中のタンパク質には、エイズや肝炎ウイルスが混入し
ている可能性があり、操作を慎重に行う必要がある。し
たがって、得られる糖鎖や、その誘導体を医薬品開発に
利用するのは困難である。また、糖鎖が大量に得られた
としても、その構造は限られており、多種類の構造の糖
鎖やその誘導体が得られた例は実質的に存在しない。
造が同じものを有する糖鎖の製造例は数多くある。その
従来技術としては、三種類の方法が存在する。一つ目
は、天然に存在する糖タンパク質からアスパラギン結合
複合型糖鎖を単離精製する方法である。その代表例とし
ては、T. Tamura,et al. Anal.Biochem., 1994, 216, p
335-344 、V. H. Thomas, et al. Carbohydr. Res., 19
98, 306, p387-400 、K.G. Rice, et al., Biochemistr
y, 1993, 32, p 7264-7270 などに記載の方法がある。
これらの方法の利点は、糖鎖を合成する必要がないとい
うことである。しかし、欠点が幾つか存在する。たとえ
ば、前記糖タンパク質由来の糖鎖は、非還元末端部分に
おいて糖残基がランダムに幾つか欠失した糖鎖の混合物
として得られ、当該混合物に含まれる糖鎖はその物理的
・化学的性質が類似しており個々の糖鎖に分離すること
は非常に困難であるので、単一の糖鎖を大量に得ること
は実質的に不可能であった。また、比較的大量に得るた
めに、人血中のタンパク質（Fibrinogenからの単離：C.
H. Hokke, et al, Carbohydr. Res., 305(1997), p463
-468、Human Serum Transferrin からの単離：M. Mizun
o et.al., J. Am. Chem. Soc., 1999, 121, p284-290）
から糖鎖を単離している例がある。前述したように、人
血中のタンパク質には、エイズや肝炎ウイルスが混入し
ている可能性があり、操作を慎重に行う必要がある。し
たがって、得られる糖鎖や、その誘導体を医薬品開発に
利用するのは困難である。また、糖鎖が大量に得られた
としても、その構造は限られており、多種類の構造の糖
鎖やその誘導体が得られた例は実質的に存在しない。
【０００５】K. G. Rice, et al., Biochemistry, 199
3, 32, p7264-7270、あるいはRice,et al., Neoglycoco
njugate, Academic Press, 1994, ISBN 0-12-440585-1
p286〜321 では、糖加水分解酵素を用いて糖鎖の非還元
末端から糖残基を除去しているが、原料となる単一構造
の糖鎖を大量に得ることができていないので分析スケー
ルでしか実施できていない。E. Meinjohanns（J. Chem.
Soc. Perkin Trans1,1998, p549-560 ）らは、Bovine
Fetuin （ウシ由来の糖タンパク質) から図３に示す化
合物５６を得た後、図２に示す化合物３３を経由して図
１に示す化合物１０を合成している。最初の原料である
化合物５６を得るためにヒドラジン分解反応を利用して
いる。このヒドラジンは毒性が高く、得られる糖鎖の誘
導体を医薬品に応用する場合、微量のヒドラジンの混入
の可能性があるため安全性の点で問題がある。また、シ
アル酸が結合していない化合物５６、３３および１０の
糖鎖の誘導体を少量にしか得ることができていない。
3, 32, p7264-7270、あるいはRice,et al., Neoglycoco
njugate, Academic Press, 1994, ISBN 0-12-440585-1
p286〜321 では、糖加水分解酵素を用いて糖鎖の非還元
末端から糖残基を除去しているが、原料となる単一構造
の糖鎖を大量に得ることができていないので分析スケー
ルでしか実施できていない。E. Meinjohanns（J. Chem.
Soc. Perkin Trans1,1998, p549-560 ）らは、Bovine
Fetuin （ウシ由来の糖タンパク質) から図３に示す化
合物５６を得た後、図２に示す化合物３３を経由して図
１に示す化合物１０を合成している。最初の原料である
化合物５６を得るためにヒドラジン分解反応を利用して
いる。このヒドラジンは毒性が高く、得られる糖鎖の誘
導体を医薬品に応用する場合、微量のヒドラジンの混入
の可能性があるため安全性の点で問題がある。また、シ
アル酸が結合していない化合物５６、３３および１０の
糖鎖の誘導体を少量にしか得ることができていない。
【０００６】二つ目の方法は化学的に糖鎖を合成する方
法である。現在、化学合成法により、単糖を組み合わせ
て１０糖程度に構築することは、J.Seifert et al. Ang
ew Chem Int.Ed. 2000, 39, p531-534の報告例にあるよ
うに可能である。この方法の利点としては、あらゆる糖
鎖の誘導体を得ることが理論的には可能なことである。
しかし、その工程数が膨大なため、大量合成が困難とい
う欠点がある。また、１０個程度の糖残基が結合した糖
鎖を数ミリグラム合成する場合でも、１年近い期間が必
要である。これまでに、幾つかの糖鎖が化学的に合成さ
れた例はあるが、その多くが、目的物である糖鎖を数ミ
リグラム合成できたというのが現状である。
法である。現在、化学合成法により、単糖を組み合わせ
て１０糖程度に構築することは、J.Seifert et al. Ang
ew Chem Int.Ed. 2000, 39, p531-534の報告例にあるよ
うに可能である。この方法の利点としては、あらゆる糖
鎖の誘導体を得ることが理論的には可能なことである。
しかし、その工程数が膨大なため、大量合成が困難とい
う欠点がある。また、１０個程度の糖残基が結合した糖
鎖を数ミリグラム合成する場合でも、１年近い期間が必
要である。これまでに、幾つかの糖鎖が化学的に合成さ
れた例はあるが、その多くが、目的物である糖鎖を数ミ
リグラム合成できたというのが現状である。
【０００７】三つ目の方法としては、酵素反応と化学反
応を組み合わせて糖鎖を合成する方法である。その代表
例としては、Carlo Unverzagt, Angew Chem Int.Ed. 19
96,35, p2350-2353のような報告がある。この方法は、
化学的合成によりある程度の糖鎖を構築後、酵素反応に
より糖残基を糖鎖に付加させ、糖鎖を伸長していく手法
である。しかし、糖を伸長する際に用いる酵素に基質特
異性があるため、糖鎖に導入できる糖の種類に制限があ
る。また、化学合成の工程数が膨大なため大量合成が困
難で、最終目的物を少量にしか得ることができない。ま
た、C.H. Lin(Bioorganic & Medicinal Chemistry, 199
5, p1625-1630)らは、M. Koketsuらが報告した方法（J.
Carbohydrate Chemistry, 1995, 14(6), p833-841）を
用いて、卵黄よりシアリルオリゴ糖ペプチドを得、そし
て、糖加水分解酵素、糖転移酵素を用いて、糖鎖の非還
元末端部分の構造の改変を実施している。この論文中の
図では、非還元末端部分にアスパラギン（Ａｓｎ）残基
のみが１つ結合したような糖鎖が記載されているが、J.
Carbohydrate Chemistry, 1995, 14(6), p833-841で報
告されている方法によれば、糖鎖の非還元末端にアスパ
ラギン以外にリシンなど幾つかのアミノ酸が平均２．５
個結合したものの混合物が得られる。したがって、単一
化合物として糖鎖の誘導体を得ることはできず、また、
分岐型糖鎖の分岐糖鎖の糖残基が任意に欠失した化合物
についての個々の誘導体を大量に得ることについての示
唆もない。C.H. Linらの論文には、糖鎖ペプチドが単一
生成物として得られたという根拠も示されていない。Y.
Ichikawa は、Glycopeptide andRelated Compounds(Ma
rcel Dekker, Inc., 1997, ISBN 0-8247-9531-8, p.79
〜205)の中で、３分岐型の複合型糖鎖を末端から順次糖
加水分解酵素で処理すれば糖鎖の非還元末端から糖鎖を
順次除去でき、様々な糖鎖の誘導体が得られると述べて
いる。しかしながら、酵素処理後、どのようにして個々
の糖鎖を分離するかについては述べられておらず、ま
た、分枝が均一なもののみの合成である。従って、当該
方法によっても分岐型糖鎖の分岐糖鎖の糖残基が任意に
欠失した化合物についての個々の誘導体を大量に得るこ
とはできないものと考えられる。
応を組み合わせて糖鎖を合成する方法である。その代表
例としては、Carlo Unverzagt, Angew Chem Int.Ed. 19
96,35, p2350-2353のような報告がある。この方法は、
化学的合成によりある程度の糖鎖を構築後、酵素反応に
より糖残基を糖鎖に付加させ、糖鎖を伸長していく手法
である。しかし、糖を伸長する際に用いる酵素に基質特
異性があるため、糖鎖に導入できる糖の種類に制限があ
る。また、化学合成の工程数が膨大なため大量合成が困
難で、最終目的物を少量にしか得ることができない。ま
た、C.H. Lin(Bioorganic & Medicinal Chemistry, 199
5, p1625-1630)らは、M. Koketsuらが報告した方法（J.
Carbohydrate Chemistry, 1995, 14(6), p833-841）を
用いて、卵黄よりシアリルオリゴ糖ペプチドを得、そし
て、糖加水分解酵素、糖転移酵素を用いて、糖鎖の非還
元末端部分の構造の改変を実施している。この論文中の
図では、非還元末端部分にアスパラギン（Ａｓｎ）残基
のみが１つ結合したような糖鎖が記載されているが、J.
Carbohydrate Chemistry, 1995, 14(6), p833-841で報
告されている方法によれば、糖鎖の非還元末端にアスパ
ラギン以外にリシンなど幾つかのアミノ酸が平均２．５
個結合したものの混合物が得られる。したがって、単一
化合物として糖鎖の誘導体を得ることはできず、また、
分岐型糖鎖の分岐糖鎖の糖残基が任意に欠失した化合物
についての個々の誘導体を大量に得ることについての示
唆もない。C.H. Linらの論文には、糖鎖ペプチドが単一
生成物として得られたという根拠も示されていない。Y.
Ichikawa は、Glycopeptide andRelated Compounds(Ma
rcel Dekker, Inc., 1997, ISBN 0-8247-9531-8, p.79
〜205)の中で、３分岐型の複合型糖鎖を末端から順次糖
加水分解酵素で処理すれば糖鎖の非還元末端から糖鎖を
順次除去でき、様々な糖鎖の誘導体が得られると述べて
いる。しかしながら、酵素処理後、どのようにして個々
の糖鎖を分離するかについては述べられておらず、ま
た、分枝が均一なもののみの合成である。従って、当該
方法によっても分岐型糖鎖の分岐糖鎖の糖残基が任意に
欠失した化合物についての個々の誘導体を大量に得るこ
とはできないものと考えられる。
【０００８】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、医薬品開発
等の分野において有用な種々の単離された糖鎖アスパラ
ギン誘導体を従来に比べて非常に容易かつ大量に得るこ
とができる、糖鎖アスパラギン誘導体の製造方法を提供
することを目的とする。また本発明は、糖鎖アスパラギ
ン誘導体と共に有用な種々の単離された糖鎖アスパラギ
ンおよび糖鎖をそれぞれ従来に比べて非常に容易かつ大
量に得ることができる、糖鎖アスパラギン誘導体を製造
する工程を介する、糖鎖アスパラギンの製造方法および
糖鎖の製造方法を提供することを目的とする。さらに本
発明は、新規な糖鎖アスパラギン誘導体、糖鎖アスパラ
ギンおよび糖鎖を提供することを目的とする。
等の分野において有用な種々の単離された糖鎖アスパラ
ギン誘導体を従来に比べて非常に容易かつ大量に得るこ
とができる、糖鎖アスパラギン誘導体の製造方法を提供
することを目的とする。また本発明は、糖鎖アスパラギ
ン誘導体と共に有用な種々の単離された糖鎖アスパラギ
ンおよび糖鎖をそれぞれ従来に比べて非常に容易かつ大
量に得ることができる、糖鎖アスパラギン誘導体を製造
する工程を介する、糖鎖アスパラギンの製造方法および
糖鎖の製造方法を提供することを目的とする。さらに本
発明は、新規な糖鎖アスパラギン誘導体、糖鎖アスパラ
ギンおよび糖鎖を提供することを目的とする。
【０００９】
【課題を解決するための手段】すなわち、本発明は、
（１） （ａ）１種もしくは２種以上の糖鎖アスパラギ
ンを含む混合物に含まれる該糖鎖アスパラギンに脂溶性
の保護基を導入して糖鎖アスパラギン誘導体混合物を得
る工程、ならびに（ｂ）該糖鎖アスパラギン誘導体混合
物または該糖鎖アスパラギン誘導体混合物に含まれる糖
鎖アスパラギン誘導体を加水分解して得られる混合物を
クロマトグラフィーに供して各糖鎖アスパラギン誘導体
を分離する工程、を含む、糖鎖アスパラギン由来の糖鎖
アスパラギン誘導体の製造方法、（２） （ｂ’）工程
（ｂ）で分離された糖鎖アスパラギン誘導体を糖加水分
解酵素を用いて加水分解する工程をさらに含む前記
（１）記載の糖鎖アスパラギン誘導体の製造方法、
（３） １種もしくは２種以上の糖鎖アスパラギンを含
む混合物が、
（１） （ａ）１種もしくは２種以上の糖鎖アスパラギ
ンを含む混合物に含まれる該糖鎖アスパラギンに脂溶性
の保護基を導入して糖鎖アスパラギン誘導体混合物を得
る工程、ならびに（ｂ）該糖鎖アスパラギン誘導体混合
物または該糖鎖アスパラギン誘導体混合物に含まれる糖
鎖アスパラギン誘導体を加水分解して得られる混合物を
クロマトグラフィーに供して各糖鎖アスパラギン誘導体
を分離する工程、を含む、糖鎖アスパラギン由来の糖鎖
アスパラギン誘導体の製造方法、（２） （ｂ’）工程
（ｂ）で分離された糖鎖アスパラギン誘導体を糖加水分
解酵素を用いて加水分解する工程をさらに含む前記
（１）記載の糖鎖アスパラギン誘導体の製造方法、
（３） １種もしくは２種以上の糖鎖アスパラギンを含
む混合物が、
【化８】
および／または該化合物において１以上の糖残基が欠失
した化合物を含むものである、前記（１）または（２）
記載の糖鎖アスパラギン誘導体の製造方法、（４） 脂
溶性の保護基がフルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍ
ｏｃ）基である前記（１）〜（３）いずれか記載の糖鎖
アスパラギン誘導体の製造方法、（５） 工程（ａ）
が、非還元末端にシアル酸残基を有する１種もしくは２
種以上の糖鎖アスパラギンを含む混合物に含まれる該糖
鎖アスパラギンにＦｍｏｃ基を導入し、かつシアル酸残
基にベンジル基を導入して糖鎖アスパラギン誘導体混合
物を得る工程である、前記（１）〜（３）いずれか記載
の糖鎖アスパラギン誘導体の製造方法、（６） （ａ）
１種もしくは２種以上の糖鎖アスパラギンを含む混合物
に含まれる該糖鎖アスパラギンに脂溶性の保護基を導入
して糖鎖アスパラギン誘導体混合物を得る工程、（ｂ）
該糖鎖アスパラギン誘導体混合物または該糖鎖アスパラ
ギン誘導体混合物に含まれる糖鎖アスパラギン誘導体を
加水分解して得られる混合物をクロマトグラフィーに供
して各糖鎖アスパラギン誘導体を分離する工程、ならび
に（ｃ）工程（ｂ）で分離された糖鎖アスパラギン誘導
体の保護基を除去して糖鎖アスパラギンを得る工程、を
含む、糖鎖アスパラギンの製造方法、（７） （ｂ’）
工程（ｂ）で分離された糖鎖アスパラギン誘導体を糖加
水分解酵素を用いて加水分解する工程、および／または
（ｃ’）工程（ｃ）で得られた糖鎖アスパラギンを糖加
水分解酵素を用いて加水分解する工程、をさらに含む、
前記（６）記載の糖鎖アスパラギンの製造方法、（８）
１種もしくは２種以上の糖鎖アスパラギンを含む混合
物が、
した化合物を含むものである、前記（１）または（２）
記載の糖鎖アスパラギン誘導体の製造方法、（４） 脂
溶性の保護基がフルオレニルメトキシカルボニル（Ｆｍ
ｏｃ）基である前記（１）〜（３）いずれか記載の糖鎖
アスパラギン誘導体の製造方法、（５） 工程（ａ）
が、非還元末端にシアル酸残基を有する１種もしくは２
種以上の糖鎖アスパラギンを含む混合物に含まれる該糖
鎖アスパラギンにＦｍｏｃ基を導入し、かつシアル酸残
基にベンジル基を導入して糖鎖アスパラギン誘導体混合
物を得る工程である、前記（１）〜（３）いずれか記載
の糖鎖アスパラギン誘導体の製造方法、（６） （ａ）
１種もしくは２種以上の糖鎖アスパラギンを含む混合物
に含まれる該糖鎖アスパラギンに脂溶性の保護基を導入
して糖鎖アスパラギン誘導体混合物を得る工程、（ｂ）
該糖鎖アスパラギン誘導体混合物または該糖鎖アスパラ
ギン誘導体混合物に含まれる糖鎖アスパラギン誘導体を
加水分解して得られる混合物をクロマトグラフィーに供
して各糖鎖アスパラギン誘導体を分離する工程、ならび
に（ｃ）工程（ｂ）で分離された糖鎖アスパラギン誘導
体の保護基を除去して糖鎖アスパラギンを得る工程、を
含む、糖鎖アスパラギンの製造方法、（７） （ｂ’）
工程（ｂ）で分離された糖鎖アスパラギン誘導体を糖加
水分解酵素を用いて加水分解する工程、および／または
（ｃ’）工程（ｃ）で得られた糖鎖アスパラギンを糖加
水分解酵素を用いて加水分解する工程、をさらに含む、
前記（６）記載の糖鎖アスパラギンの製造方法、（８）
１種もしくは２種以上の糖鎖アスパラギンを含む混合
物が、
【化９】
および／または該化合物において１以上の糖残基が欠失
した化合物を含むものである、前記（６）または（７）
記載の糖鎖アスパラギンの製造方法、（９） 脂溶性の
保護基がＦｍｏｃ基である前記（６）〜（８）いずれか
記載の糖鎖アスパラギンの製造方法、（１０） 工程
（ａ）が、非還元末端にシアル酸残基を有する１種もし
くは２種以上の糖鎖アスパラギンを含む混合物に含まれ
る該糖鎖アスパラギンにＦｍｏｃ基を導入し、かつシア
ル酸残基にベンジル基を導入して糖鎖アスパラギン誘導
体混合物を得る工程である、前記（６）〜（８）いずれ
か記載の糖鎖アスパラギンの製造方法、（１１）
（ａ）１種もしくは２種以上の糖鎖アスパラギンを含む
混合物に含まれる該糖鎖アスパラギンに脂溶性の保護基
を導入して糖鎖アスパラギン誘導体混合物を得る工程、
（ｂ）該糖鎖アスパラギン誘導体混合物または該糖鎖ア
スパラギン誘導体混合物に含まれる糖鎖アスパラギン誘
導体を加水分解して得られる混合物をクロマトグラフィ
ーに供して各糖鎖アスパラギン誘導体を分離する工程、
（ｃ）工程（ｂ）で分離された糖鎖アスパラギン誘導体
の保護基を除去して糖鎖アスパラギンを得る工程、なら
びに（ｄ）工程（ｃ）で得られた糖鎖アスパラギンのア
スパラギン残基を除去して糖鎖を得る工程、を含む、糖
鎖の製造方法、（１２） （ｂ’）工程（ｂ）で分離さ
れた糖鎖アスパラギン誘導体を糖加水分解酵素を用いて
加水分解する工程、および／または（ｃ’）工程（ｃ）
で得られた糖鎖アスパラギンを糖加水分解酵素を用いて
加水分解する工程、および／または（ｄ’）工程（ｄ）
で得られた糖鎖を糖加水分解酵素を用いて加水分解する
工程、をさらに含む、前記（１１）記載の糖鎖の製造方
法、（１３） １種もしくは２種以上の糖鎖アスパラギ
ンを含む混合物が、
した化合物を含むものである、前記（６）または（７）
記載の糖鎖アスパラギンの製造方法、（９） 脂溶性の
保護基がＦｍｏｃ基である前記（６）〜（８）いずれか
記載の糖鎖アスパラギンの製造方法、（１０） 工程
（ａ）が、非還元末端にシアル酸残基を有する１種もし
くは２種以上の糖鎖アスパラギンを含む混合物に含まれ
る該糖鎖アスパラギンにＦｍｏｃ基を導入し、かつシア
ル酸残基にベンジル基を導入して糖鎖アスパラギン誘導
体混合物を得る工程である、前記（６）〜（８）いずれ
か記載の糖鎖アスパラギンの製造方法、（１１）
（ａ）１種もしくは２種以上の糖鎖アスパラギンを含む
混合物に含まれる該糖鎖アスパラギンに脂溶性の保護基
を導入して糖鎖アスパラギン誘導体混合物を得る工程、
（ｂ）該糖鎖アスパラギン誘導体混合物または該糖鎖ア
スパラギン誘導体混合物に含まれる糖鎖アスパラギン誘
導体を加水分解して得られる混合物をクロマトグラフィ
ーに供して各糖鎖アスパラギン誘導体を分離する工程、
（ｃ）工程（ｂ）で分離された糖鎖アスパラギン誘導体
の保護基を除去して糖鎖アスパラギンを得る工程、なら
びに（ｄ）工程（ｃ）で得られた糖鎖アスパラギンのア
スパラギン残基を除去して糖鎖を得る工程、を含む、糖
鎖の製造方法、（１２） （ｂ’）工程（ｂ）で分離さ
れた糖鎖アスパラギン誘導体を糖加水分解酵素を用いて
加水分解する工程、および／または（ｃ’）工程（ｃ）
で得られた糖鎖アスパラギンを糖加水分解酵素を用いて
加水分解する工程、および／または（ｄ’）工程（ｄ）
で得られた糖鎖を糖加水分解酵素を用いて加水分解する
工程、をさらに含む、前記（１１）記載の糖鎖の製造方
法、（１３） １種もしくは２種以上の糖鎖アスパラギ
ンを含む混合物が、
【化１０】
および／または該化合物において１以上の糖残基が欠失
した化合物を含むものである、前記（１１）または（１
２）記載の糖鎖の製造方法、（１４） 脂溶性の保護基
がＦｍｏｃ基である前記（１１）〜（１３）いずれか記
載の糖鎖の製造方法、（１５） 工程（ａ）が、非還元
末端にシアル酸残基を有する１種もしくは２種以上の糖
鎖アスパラギンを含む混合物に含まれる該糖鎖アスパラ
ギンにＦｍｏｃ基を導入し、かつシアル酸残基にベンジ
ル基を導入して糖鎖アスパラギン誘導体混合物を得る工
程である、前記（１１）〜（１３）いずれか記載の糖鎖
の製造方法、（１６） 一般式：
した化合物を含むものである、前記（１１）または（１
２）記載の糖鎖の製造方法、（１４） 脂溶性の保護基
がＦｍｏｃ基である前記（１１）〜（１３）いずれか記
載の糖鎖の製造方法、（１５） 工程（ａ）が、非還元
末端にシアル酸残基を有する１種もしくは２種以上の糖
鎖アスパラギンを含む混合物に含まれる該糖鎖アスパラ
ギンにＦｍｏｃ基を導入し、かつシアル酸残基にベンジ
ル基を導入して糖鎖アスパラギン誘導体混合物を得る工
程である、前記（１１）〜（１３）いずれか記載の糖鎖
の製造方法、（１６） 一般式：
【化１１】
を有する糖鎖アスパラギン誘導体、（１７） 一般式：
【化１２】
を有する糖鎖アスパラギン誘導体、（１８） 一般式：
【化１３】
を有する糖鎖アスパラギン、ならびに（１９） 一般
式：
式：
【化１４】
を有する糖鎖、に関する。
【００１０】
【発明の実施の形態】本発明の糖鎖アスパラギン誘導体
の製造方法は、たとえば、天然の糖タンパク質に由来す
る糖鎖アスパラギン、好ましくはアスパラギン結合型糖
鎖から得られる糖鎖アスパラギンの混合物に含まれる当
該糖鎖アスパラギンに脂溶性の保護基を導入（結合）し
て糖鎖アスパラギン誘導体の混合物を得た後に当該混合
物を各糖鎖アスパラギン誘導体に分離することを１つの
大きな特徴とする。なお、本明細書において、「糖鎖ア
スパラギン」とはアスパラギンが結合した状態の糖鎖を
いう。また、「アスパラギン結合型糖鎖」とはタンパク
質のポリペプチド中のアスパラギン（Ａｓｎ）の酸アミ
ノ基に、還元末端に存在するＮ−アセチルグルコサミン
がＮ−グリコシド結合した糖鎖群であって、Ｍａｎ（β
１−４）ＧｌｃＮａｃ（β１−４）ＧｌｃＮａｃを母核
とする糖鎖群をいう。「糖鎖アスパラギン誘導体」とは
アスパラギン残基に脂溶性の保護基が結合した状態の糖
鎖アスパラギンをいう。また、化合物の構造式中、「Ａ
ｃＨＮ」はアセトアミド基を示す。
の製造方法は、たとえば、天然の糖タンパク質に由来す
る糖鎖アスパラギン、好ましくはアスパラギン結合型糖
鎖から得られる糖鎖アスパラギンの混合物に含まれる当
該糖鎖アスパラギンに脂溶性の保護基を導入（結合）し
て糖鎖アスパラギン誘導体の混合物を得た後に当該混合
物を各糖鎖アスパラギン誘導体に分離することを１つの
大きな特徴とする。なお、本明細書において、「糖鎖ア
スパラギン」とはアスパラギンが結合した状態の糖鎖を
いう。また、「アスパラギン結合型糖鎖」とはタンパク
質のポリペプチド中のアスパラギン（Ａｓｎ）の酸アミ
ノ基に、還元末端に存在するＮ−アセチルグルコサミン
がＮ−グリコシド結合した糖鎖群であって、Ｍａｎ（β
１−４）ＧｌｃＮａｃ（β１−４）ＧｌｃＮａｃを母核
とする糖鎖群をいう。「糖鎖アスパラギン誘導体」とは
アスパラギン残基に脂溶性の保護基が結合した状態の糖
鎖アスパラギンをいう。また、化合物の構造式中、「Ａ
ｃＨＮ」はアセトアミド基を示す。
【００１１】前記するように、天然の糖タンパク質に由
来する糖鎖は非還元末端の糖残基がランダムに欠失した
糖鎖の混合物である。本発明者らは、意外にも天然の糖
タンパク質に由来する糖鎖、具体的には糖鎖アスパラギ
ンの混合物に含まれる当該糖鎖アスパラギンに脂溶性の
保護基を導入することで、当該保護基が導入された糖鎖
アスパラギン誘導体の混合物を公知のクロマトグラフィ
ーの手法を用いて容易に個々の糖鎖アスパラギン誘導体
に分離することができることを見出した。それにより、
種々の構造を有する糖鎖アスパラギン誘導体をそれぞれ
大量に調製することが可能となった。たとえば、従来分
離が困難であった、図１に示す化合物２と６または化合
物３と７のような似た構造の糖鎖アスパラギン誘導体同
士の分離が可能となり、それらの化合物を各々、容易か
つ大量に調製することができる。また、得られた糖鎖ア
スパラギン誘導体を元に、たとえば、糖加水分解酵素を
順次作用させて糖残基を除去することにより、さらに様
々な糖鎖アスパラギン誘導体を合成することもできる。
来する糖鎖は非還元末端の糖残基がランダムに欠失した
糖鎖の混合物である。本発明者らは、意外にも天然の糖
タンパク質に由来する糖鎖、具体的には糖鎖アスパラギ
ンの混合物に含まれる当該糖鎖アスパラギンに脂溶性の
保護基を導入することで、当該保護基が導入された糖鎖
アスパラギン誘導体の混合物を公知のクロマトグラフィ
ーの手法を用いて容易に個々の糖鎖アスパラギン誘導体
に分離することができることを見出した。それにより、
種々の構造を有する糖鎖アスパラギン誘導体をそれぞれ
大量に調製することが可能となった。たとえば、従来分
離が困難であった、図１に示す化合物２と６または化合
物３と７のような似た構造の糖鎖アスパラギン誘導体同
士の分離が可能となり、それらの化合物を各々、容易か
つ大量に調製することができる。また、得られた糖鎖ア
スパラギン誘導体を元に、たとえば、糖加水分解酵素を
順次作用させて糖残基を除去することにより、さらに様
々な糖鎖アスパラギン誘導体を合成することもできる。
【００１２】このように、糖鎖アスパラギンに脂溶性の
保護基を導入して誘導体化することにより個々の糖鎖ア
スパラギン誘導体の分離が可能となったが、これは、脂
溶性の保護基を導入したことにより糖鎖アスパラギン誘
導体の全体の脂溶性が高まり、たとえば、好適に使用さ
れる逆相系カラムとの相互作用が格段に向上し、その結
果、より鋭敏に糖鎖構造の差を反映して個々の糖鎖アス
パラギン誘導体が分離されるようになったことによると
考えられる。たとえば、本発明において好適に使用され
る脂溶性の保護基であるＦｍｏｃ基の脂溶性は非常に高
い。すなわち、Ｆｍｏｃ基のフルオレニル骨格は、中心
の五員環にベンゼン環が２つ結合した非常に脂溶性の高
い性質の構造をとっており、たとえば、逆相系カラムの
１つであるＯＤＳカラムのオクタデシル基と非常に強い
相互作用を生み、似た構造の糖鎖アスパラギン誘導体の
分離が可能になったものと考えられる。
保護基を導入して誘導体化することにより個々の糖鎖ア
スパラギン誘導体の分離が可能となったが、これは、脂
溶性の保護基を導入したことにより糖鎖アスパラギン誘
導体の全体の脂溶性が高まり、たとえば、好適に使用さ
れる逆相系カラムとの相互作用が格段に向上し、その結
果、より鋭敏に糖鎖構造の差を反映して個々の糖鎖アス
パラギン誘導体が分離されるようになったことによると
考えられる。たとえば、本発明において好適に使用され
る脂溶性の保護基であるＦｍｏｃ基の脂溶性は非常に高
い。すなわち、Ｆｍｏｃ基のフルオレニル骨格は、中心
の五員環にベンゼン環が２つ結合した非常に脂溶性の高
い性質の構造をとっており、たとえば、逆相系カラムの
１つであるＯＤＳカラムのオクタデシル基と非常に強い
相互作用を生み、似た構造の糖鎖アスパラギン誘導体の
分離が可能になったものと考えられる。
【００１３】さらに本発明によれば、後述するように、
得られた糖鎖アスパラギン誘導体の保護基を除去するこ
とにより種々の糖鎖アスパラギンを、また、得られた糖
鎖アスパラギンのアスパラギン残基を除去することによ
り種々の糖鎖を、容易かつ大量に得ることができる。
得られた糖鎖アスパラギン誘導体の保護基を除去するこ
とにより種々の糖鎖アスパラギンを、また、得られた糖
鎖アスパラギンのアスパラギン残基を除去することによ
り種々の糖鎖を、容易かつ大量に得ることができる。
【００１４】本発明の糖鎖アスパラギン誘導体の製造方
法は、具体的には、（ａ）１種もしくは２種以上の糖鎖
アスパラギンを含む混合物に含まれる該糖鎖アスパラギ
ンに脂溶性の保護基を導入して糖鎖アスパラギン誘導体
混合物を得る工程、ならびに（ｂ）該糖鎖アスパラギン
誘導体混合物または該糖鎖アスパラギン誘導体混合物に
含まれる糖鎖アスパラギン誘導体を加水分解して得られ
る混合物をクロマトグラフィーに供して各糖鎖アスパラ
ギン誘導体を分離する工程、を含むものである。
法は、具体的には、（ａ）１種もしくは２種以上の糖鎖
アスパラギンを含む混合物に含まれる該糖鎖アスパラギ
ンに脂溶性の保護基を導入して糖鎖アスパラギン誘導体
混合物を得る工程、ならびに（ｂ）該糖鎖アスパラギン
誘導体混合物または該糖鎖アスパラギン誘導体混合物に
含まれる糖鎖アスパラギン誘導体を加水分解して得られ
る混合物をクロマトグラフィーに供して各糖鎖アスパラ
ギン誘導体を分離する工程、を含むものである。
【００１５】工程（ａ）において使用される１種もしく
は２種以上の糖鎖アスパラギンを含む混合物としては、
アスパラギンの結合した状態の糖鎖を１種もしくは２種
以上含む混合物であれば特に限定されるものではない。
たとえば、アスパラギンが１または複数個結合した糖鎖
を１種もしくは２種以上含む混合物であってもよい。中
でも、入手の容易性の観点から、還元末端にアスパラギ
ンが結合した糖鎖を１種もしくは２種以上含む混合物が
好適である。なお、本明細書において「糖鎖」とは、任
意の単糖が２以上結合したものをいう。
は２種以上の糖鎖アスパラギンを含む混合物としては、
アスパラギンの結合した状態の糖鎖を１種もしくは２種
以上含む混合物であれば特に限定されるものではない。
たとえば、アスパラギンが１または複数個結合した糖鎖
を１種もしくは２種以上含む混合物であってもよい。中
でも、入手の容易性の観点から、還元末端にアスパラギ
ンが結合した糖鎖を１種もしくは２種以上含む混合物が
好適である。なお、本明細書において「糖鎖」とは、任
意の単糖が２以上結合したものをいう。
【００１６】かかる糖鎖アスパラギンの混合物は、公知
の方法により、好ましくは天然の原料、たとえば、乳
汁、ウシ由来フュチュインまたは卵から糖タンパク質お
よび／または糖ヘ゜フ゜チト゛の混合物を得、当該混合物に、
たとえば、タンハ゜ク質分解酵素、たとえば、プロナーゼ
（和光純薬社製）、アクチナーゼ-E（科研製薬社製）
や、一般のカルボキシペプチダーゼ、アミノペプチダー
ゼなどの酵素を添加して、公知の反応条件下に反応を行
ってペプチド部分を切断し、当該反応後の反応液とし
て、または反応液より糖鎖アスパラギン以外の成分を公
知の方法、たとえば、ゲル濾過カラム、イオン交換カラ
ムなどを用いた各種クロマトグラフィーや、高速液体ク
ロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を用いた精製法に従って
除去することにより、得ることができる。調製の容易性
の観点から、公知の卵由来の糖ペプチド〔Biochimica e
t Biophysica Acta 1335 (1997) p23 〜32；粗精製ＳＧ
Ｐ（卵黄中のタンパク質、無機塩等を含み、糖ペプチド
が１０〜８０重量％程度含まれる混合物) 〕を使用して
前記混合物を調製するのが好ましい。
の方法により、好ましくは天然の原料、たとえば、乳
汁、ウシ由来フュチュインまたは卵から糖タンパク質お
よび／または糖ヘ゜フ゜チト゛の混合物を得、当該混合物に、
たとえば、タンハ゜ク質分解酵素、たとえば、プロナーゼ
（和光純薬社製）、アクチナーゼ-E（科研製薬社製）
や、一般のカルボキシペプチダーゼ、アミノペプチダー
ゼなどの酵素を添加して、公知の反応条件下に反応を行
ってペプチド部分を切断し、当該反応後の反応液とし
て、または反応液より糖鎖アスパラギン以外の成分を公
知の方法、たとえば、ゲル濾過カラム、イオン交換カラ
ムなどを用いた各種クロマトグラフィーや、高速液体ク
ロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を用いた精製法に従って
除去することにより、得ることができる。調製の容易性
の観点から、公知の卵由来の糖ペプチド〔Biochimica e
t Biophysica Acta 1335 (1997) p23 〜32；粗精製ＳＧ
Ｐ（卵黄中のタンパク質、無機塩等を含み、糖ペプチド
が１０〜８０重量％程度含まれる混合物) 〕を使用して
前記混合物を調製するのが好ましい。
【００１７】また、所望の糖鎖構造を有する糖鎖アスパ
ラギン誘導体を効率的に得るという観点から、さらに当
該混合物に含まれる糖鎖アスパラギンを加水分解して一
部糖残基を予め切断しておくのが好ましい。なお、当該
切断の程度は、少なくとも本明細書にいう「糖鎖」とし
ての構造を保持する範囲内であれば特に限定されるもの
ではない。このようにして得られる混合物としては、た
とえば、図２に示す化合物２４および／または該化合物
において１以上の糖残基が欠失した化合物を含む混合物
をあげることができる。なお、かかる場合、該糖残基が
欠失した化合物が、本明細書にいう「糖鎖」の構造を保
持する観点から、糖残基の欠失は上限で９である。
ラギン誘導体を効率的に得るという観点から、さらに当
該混合物に含まれる糖鎖アスパラギンを加水分解して一
部糖残基を予め切断しておくのが好ましい。なお、当該
切断の程度は、少なくとも本明細書にいう「糖鎖」とし
ての構造を保持する範囲内であれば特に限定されるもの
ではない。このようにして得られる混合物としては、た
とえば、図２に示す化合物２４および／または該化合物
において１以上の糖残基が欠失した化合物を含む混合物
をあげることができる。なお、かかる場合、該糖残基が
欠失した化合物が、本明細書にいう「糖鎖」の構造を保
持する観点から、糖残基の欠失は上限で９である。
【００１８】たとえば、図２に示す化合物２５および２
９は、化合物２４を含む糖鎖アスパラギンの混合物（以
下、化合物２４混合物という）を以下のようにして酸加
水分解することにより当該混合物中に効率的に得られ、
延いては対応する糖鎖アスパラギン誘導体である図１に
示す化合物２および６を効率的に得ることができる。
９は、化合物２４を含む糖鎖アスパラギンの混合物（以
下、化合物２４混合物という）を以下のようにして酸加
水分解することにより当該混合物中に効率的に得られ、
延いては対応する糖鎖アスパラギン誘導体である図１に
示す化合物２および６を効率的に得ることができる。
【００１９】たとえば、化合物２４混合物に対し０．１
規定程度の酸水溶液を適量加え、たとえば、４〜１００
℃にて反応を行う。その際、加水分解反応の進行を薄層
クロマトグラフィー（たとえば、シリカゲル 60F254
（メルク社製）と、展開溶媒として酢酸エチル：メタノ
ール：水＝４：４：３を用いる）で追跡しながら、化合
物２５および２９がもっとも多く得られるところで反応
を停止させる。たとえば、２５℃の条件では５〜１０時
間程度で、１００℃の条件では数分程度で反応を停止さ
せればよい。好ましくは、７０℃で反応を行い、反応開
始後、３５分で反応を停止させて速やかに氷冷する。な
お、反応は、反応液を中和することで停止させることが
できる。また、前記酸としては特に限定するものではな
く、たとえば、塩酸、硫酸、硝酸、トリフルオロ酢酸な
どの無機酸および有機酸、陽イオン交換樹脂、不溶性の
固体試薬などを使用することができる。
規定程度の酸水溶液を適量加え、たとえば、４〜１００
℃にて反応を行う。その際、加水分解反応の進行を薄層
クロマトグラフィー（たとえば、シリカゲル 60F254
（メルク社製）と、展開溶媒として酢酸エチル：メタノ
ール：水＝４：４：３を用いる）で追跡しながら、化合
物２５および２９がもっとも多く得られるところで反応
を停止させる。たとえば、２５℃の条件では５〜１０時
間程度で、１００℃の条件では数分程度で反応を停止さ
せればよい。好ましくは、７０℃で反応を行い、反応開
始後、３５分で反応を停止させて速やかに氷冷する。な
お、反応は、反応液を中和することで停止させることが
できる。また、前記酸としては特に限定するものではな
く、たとえば、塩酸、硫酸、硝酸、トリフルオロ酢酸な
どの無機酸および有機酸、陽イオン交換樹脂、不溶性の
固体試薬などを使用することができる。
【００２０】同様に、化合物２４から化合物３３を前記
混合物中に効率的に得ることもできる。たとえば、化合
物２４混合物に対し前記酸水溶液を適量加え、好ましく
は８０℃で反応を行い、反応開始後、好ましくは６０分
で反応を停止させる。
混合物中に効率的に得ることもできる。たとえば、化合
物２４混合物に対し前記酸水溶液を適量加え、好ましく
は８０℃で反応を行い、反応開始後、好ましくは６０分
で反応を停止させる。
【００２１】また、加水分解は酵素的に行うこともでき
る。その際に用い得る酵素としては、糖加水分解酵素が
好適であり、エンド型、エキソ型いずれの反応様式の酵
素も使用することができる。たとえば、前記同様、化合
物２４から化合物２５および２９を得る場合、シアル酸
を末端より切断する活性を有するシアル酸加水分解酵素
を使用することができる。かかる酵素としては特に限定
されるものではなく、当該活性を有するものであれば、
市販の酵素、新たに単離された酵素、遺伝子工学的に創
製された酵素であってもよい。酵素反応は公知の条件に
従えば良く、その際、前記同様に反応の進行を薄層クロ
マトグラフィーで追跡し、化合物２５および２９がもっ
とも多く得られるところで反応を適宜停止させればよ
い。
る。その際に用い得る酵素としては、糖加水分解酵素が
好適であり、エンド型、エキソ型いずれの反応様式の酵
素も使用することができる。たとえば、前記同様、化合
物２４から化合物２５および２９を得る場合、シアル酸
を末端より切断する活性を有するシアル酸加水分解酵素
を使用することができる。かかる酵素としては特に限定
されるものではなく、当該活性を有するものであれば、
市販の酵素、新たに単離された酵素、遺伝子工学的に創
製された酵素であってもよい。酵素反応は公知の条件に
従えば良く、その際、前記同様に反応の進行を薄層クロ
マトグラフィーで追跡し、化合物２５および２９がもっ
とも多く得られるところで反応を適宜停止させればよ
い。
【００２２】以上のようにして得られた糖鎖アスパラギ
ンを含む混合物を用い、それに含まれる糖鎖アスパラギ
ンに脂溶性の保護基の導入を行う。当該保護基としては
特に限定されるものではなく、たとえば、Ｆｍｏｃ基や
ｔ−ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）基、ベンジル
基、アリル基、アリルオキシカーボネート基、アセチル
基などの、カーボネート系またはアミド系の保護基など
を使用することができる。得られた糖鎖アスパラギン誘
導体を直ちに所望の糖ペプチドの合成に使用できるとい
う観点から、当該保護基としては、Ｆｍｏｃ基またはＢ
ｏｃ基などが好ましく、Ｆｍｏｃ基がより好ましい。Ｆ
ｍｏｃ基はシアル酸など比較的酸性条件に不安定な糖が
糖鎖に存在する場合に特に有効である。また、保護基の
導入は公知の方法（たとえば、Protecting groups in O
rganic chemistry, John Wiley & Sons INC., New York
1991, ISBN 0-471-62301-6を参照）に従って行えばよ
い。
ンを含む混合物を用い、それに含まれる糖鎖アスパラギ
ンに脂溶性の保護基の導入を行う。当該保護基としては
特に限定されるものではなく、たとえば、Ｆｍｏｃ基や
ｔ−ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）基、ベンジル
基、アリル基、アリルオキシカーボネート基、アセチル
基などの、カーボネート系またはアミド系の保護基など
を使用することができる。得られた糖鎖アスパラギン誘
導体を直ちに所望の糖ペプチドの合成に使用できるとい
う観点から、当該保護基としては、Ｆｍｏｃ基またはＢ
ｏｃ基などが好ましく、Ｆｍｏｃ基がより好ましい。Ｆ
ｍｏｃ基はシアル酸など比較的酸性条件に不安定な糖が
糖鎖に存在する場合に特に有効である。また、保護基の
導入は公知の方法（たとえば、Protecting groups in O
rganic chemistry, John Wiley & Sons INC., New York
1991, ISBN 0-471-62301-6を参照）に従って行えばよ
い。
【００２３】たとえば、Ｆｍｏｃ基を用いる場合、糖鎖
アスパラギンを含む混合物に対しアセトンを適量加えた
後、さらに９- フルオレニルメチル-N- スクシニミヂル
カーボネートと炭酸水素ナトリウムを加えて溶解し、２
５℃にてアスパラギン残基へのＦｍｏｃ基の結合反応を
行うことにより、当該糖鎖アスパラギンのアスパラギン
残基にＦｍｏｃ基を導入することができる。
アスパラギンを含む混合物に対しアセトンを適量加えた
後、さらに９- フルオレニルメチル-N- スクシニミヂル
カーボネートと炭酸水素ナトリウムを加えて溶解し、２
５℃にてアスパラギン残基へのＦｍｏｃ基の結合反応を
行うことにより、当該糖鎖アスパラギンのアスパラギン
残基にＦｍｏｃ基を導入することができる。
【００２４】以上の操作により、脂溶性の保護基が導入
された糖鎖アスパラギン誘導体の混合物が得られる。
された糖鎖アスパラギン誘導体の混合物が得られる。
【００２５】次いで、工程（ｂ）において糖鎖アスパラ
ギン誘導体混合物を公知のクロマトグラフィー、特に分
取型のクロマトグラフィーに供して各糖鎖アスパラギン
誘導体に分離する。なお、かかる工程においては、前記
工程（ａ）において得られた糖鎖アスパラギン誘導体混
合物を直接使用することができるが、所望の糖鎖構造を
有する糖鎖アスパラギン誘導体を効率的に得るという観
点から、さらに当該混合物に含まれる糖鎖アスパラギン
誘導体を加水分解に供し一部糖残基を予め切断して得ら
れる糖鎖アスパラギン誘導体の混合物を使用してもよ
い。なお、糖残基の切断の程度は前記同様である。ま
た、加水分解は前記と同様にして行うことができる。
ギン誘導体混合物を公知のクロマトグラフィー、特に分
取型のクロマトグラフィーに供して各糖鎖アスパラギン
誘導体に分離する。なお、かかる工程においては、前記
工程（ａ）において得られた糖鎖アスパラギン誘導体混
合物を直接使用することができるが、所望の糖鎖構造を
有する糖鎖アスパラギン誘導体を効率的に得るという観
点から、さらに当該混合物に含まれる糖鎖アスパラギン
誘導体を加水分解に供し一部糖残基を予め切断して得ら
れる糖鎖アスパラギン誘導体の混合物を使用してもよ
い。なお、糖残基の切断の程度は前記同様である。ま
た、加水分解は前記と同様にして行うことができる。
【００２６】たとえば、化合物３および７を得る場合、
化合物２および６との混合物からそれらを分離するより
も、当該混合物をガラクトース加水分解酵素を用いる加
水分解処理に供することにより、得られた混合物から化
合物３および７をＨＰＬＣでさらに容易に分離でき、か
つ大量にそれぞれの化合物を単一化合物として大量に得
られる。
化合物２および６との混合物からそれらを分離するより
も、当該混合物をガラクトース加水分解酵素を用いる加
水分解処理に供することにより、得られた混合物から化
合物３および７をＨＰＬＣでさらに容易に分離でき、か
つ大量にそれぞれの化合物を単一化合物として大量に得
られる。
【００２７】各糖鎖アスパラギン誘導体のクロマトグラ
フィーによる分離は、適宜、公知のクロマトグラフィー
を単独でまたは複数組み合わせて用いることにより行う
ことができる。
フィーによる分離は、適宜、公知のクロマトグラフィー
を単独でまたは複数組み合わせて用いることにより行う
ことができる。
【００２８】たとえば、得られた糖鎖アスパラギン誘導
体混合物をゲル濾過カラムクロマトグラフィーで精製
後、ＨＰＬＣを用いて精製する。ＨＰＬＣにおいて用い
得るカラムとしては逆相系のカラムが好適であり、たと
えば、ODS 、Phenyl系、ニトリル系や、陰イオン交換系
のカラム、具体的には、たとえば、ファルマシア社製モ
ノQ カラム、イヤトロン社製イアトロビーズカラムなど
が利用可能である。分離条件等は適宜、公知の条件を参
照して調整すればよい。以上の操作により、糖鎖アスパ
ラギン誘導体混合物から所望の各糖鎖アスパラギン誘導
体を得ることができる。図４に本発明の糖鎖アスパラギ
ン誘導体の製造方法における工程の一例を模式的に示
す。
体混合物をゲル濾過カラムクロマトグラフィーで精製
後、ＨＰＬＣを用いて精製する。ＨＰＬＣにおいて用い
得るカラムとしては逆相系のカラムが好適であり、たと
えば、ODS 、Phenyl系、ニトリル系や、陰イオン交換系
のカラム、具体的には、たとえば、ファルマシア社製モ
ノQ カラム、イヤトロン社製イアトロビーズカラムなど
が利用可能である。分離条件等は適宜、公知の条件を参
照して調整すればよい。以上の操作により、糖鎖アスパ
ラギン誘導体混合物から所望の各糖鎖アスパラギン誘導
体を得ることができる。図４に本発明の糖鎖アスパラギ
ン誘導体の製造方法における工程の一例を模式的に示
す。
【００２９】さらに、工程（ｂ）で分離された糖鎖アス
パラギン誘導体を加水分解することにより、所望の糖鎖
構造を有する糖鎖アスパラギン誘導体を効率的に得るこ
とができる〔工程（ｂ’）〕。たとえば、糖鎖アスパラ
ギン誘導体を分離する段階においては混合物に含まれる
糖鎖アスパラギン誘導体の種類を制限して糖鎖アスパラ
ギン誘導体を大まかに分離し、次いで加水分解、たとえ
ば、糖加水分解酵素を用いて加水分解することにより所
望の糖鎖構造を有する糖鎖アスパラギン誘導体を効率的
に得ることができる。なお、加水分解は前記と同様にし
て行うことができる。特に、所望の糖鎖構造を有する糖
鎖アスパラギン誘導体をより効率的に得る観点から、糖
残基の切断様式が明確な糖加水分解酵素を用いて加水分
解するのが好ましい。
パラギン誘導体を加水分解することにより、所望の糖鎖
構造を有する糖鎖アスパラギン誘導体を効率的に得るこ
とができる〔工程（ｂ’）〕。たとえば、糖鎖アスパラ
ギン誘導体を分離する段階においては混合物に含まれる
糖鎖アスパラギン誘導体の種類を制限して糖鎖アスパラ
ギン誘導体を大まかに分離し、次いで加水分解、たとえ
ば、糖加水分解酵素を用いて加水分解することにより所
望の糖鎖構造を有する糖鎖アスパラギン誘導体を効率的
に得ることができる。なお、加水分解は前記と同様にし
て行うことができる。特に、所望の糖鎖構造を有する糖
鎖アスパラギン誘導体をより効率的に得る観点から、糖
残基の切断様式が明確な糖加水分解酵素を用いて加水分
解するのが好ましい。
【００３０】たとえば、ガラクトース残基の除去による
化合物２と６の化合物３と７への変換（図５）は、化合
物２と６を緩衝液（たとえば、リン酸緩衝溶液、酢酸緩
衝溶液、グッド緩衝溶液など）に溶かし、公知の条件に
従ってガラクトース加水分解酵素を用いてガラクトース
残基の切断反応を行うことにより成し得る。なお、化合
物２と６は、それらの混合物であっても、各々単離され
たものであってもよい。この反応で用いるガラクトース
加水分解酵素は市販されている公知のエキソ型の酵素を
利用するのが好ましい。また、同様の活性を有するもの
であれば、新たに単離された酵素、遺伝子工学的に創製
された酵素であってもよい。次いで、前記と同様にし
て、反応後に得られる反応液（糖残基が切断された糖鎖
アスパラギン誘導体の混合物）をクロマトグラフィーに
供し、各糖鎖アスパラギン誘導体を得ればよい。たとえ
ば、分離はＨＰＬＣ(ODSカラム、展開溶媒は50mM酢酸ア
ンモニウム水溶液：アセトニトリル＝82：15) で行うの
が好ましい。
化合物２と６の化合物３と７への変換（図５）は、化合
物２と６を緩衝液（たとえば、リン酸緩衝溶液、酢酸緩
衝溶液、グッド緩衝溶液など）に溶かし、公知の条件に
従ってガラクトース加水分解酵素を用いてガラクトース
残基の切断反応を行うことにより成し得る。なお、化合
物２と６は、それらの混合物であっても、各々単離され
たものであってもよい。この反応で用いるガラクトース
加水分解酵素は市販されている公知のエキソ型の酵素を
利用するのが好ましい。また、同様の活性を有するもの
であれば、新たに単離された酵素、遺伝子工学的に創製
された酵素であってもよい。次いで、前記と同様にし
て、反応後に得られる反応液（糖残基が切断された糖鎖
アスパラギン誘導体の混合物）をクロマトグラフィーに
供し、各糖鎖アスパラギン誘導体を得ればよい。たとえ
ば、分離はＨＰＬＣ(ODSカラム、展開溶媒は50mM酢酸ア
ンモニウム水溶液：アセトニトリル＝82：15) で行うの
が好ましい。
【００３１】N-アセチルグルコサミン残基の除去による
化合物３と７の化合物４と８への変換（図５）は、化合
物３と７を緩衝液（たとえば、リン酸緩衝溶液、酢酸緩
衝溶液、グッド緩衝溶液など）に溶かし、公知の条件に
従ってN-アセチルグルコサミン加水分解酵素を用いてN-
アセチルグルコサミン残基の切断反応を行うことにより
成し得る。また、N-アセチルヘキソサミニダーゼ加水分
解酵素を用いてもよい。なお、化合物３と７は、それら
の混合物であっても、各々単離されたものであってもよ
い。この反応で用いる各酵素は市販されているエキソ型
の酵素を利用するのが好ましい。また、同様の活性を有
するものであれば、新たに単離された酵素、遺伝子工学
的に創製された酵素であってもよい。次いで、前記と同
様にして、反応後に得られる反応液（糖残基が切断され
た糖鎖アスパラギン誘導体の混合物）をクロマトグラフ
ィーに供し、各糖鎖アスパラギン誘導体を得ればよい。
たとえば、分離はＨＰＬＣ(ODSカラム、展開溶媒は50mM
酢酸アンモニウム水溶液：メタノール＝65：35または50
mM酢酸アンモニウム水溶液：アセトニトリル＝82:15)で
行うのが好ましい。
化合物３と７の化合物４と８への変換（図５）は、化合
物３と７を緩衝液（たとえば、リン酸緩衝溶液、酢酸緩
衝溶液、グッド緩衝溶液など）に溶かし、公知の条件に
従ってN-アセチルグルコサミン加水分解酵素を用いてN-
アセチルグルコサミン残基の切断反応を行うことにより
成し得る。また、N-アセチルヘキソサミニダーゼ加水分
解酵素を用いてもよい。なお、化合物３と７は、それら
の混合物であっても、各々単離されたものであってもよ
い。この反応で用いる各酵素は市販されているエキソ型
の酵素を利用するのが好ましい。また、同様の活性を有
するものであれば、新たに単離された酵素、遺伝子工学
的に創製された酵素であってもよい。次いで、前記と同
様にして、反応後に得られる反応液（糖残基が切断され
た糖鎖アスパラギン誘導体の混合物）をクロマトグラフ
ィーに供し、各糖鎖アスパラギン誘導体を得ればよい。
たとえば、分離はＨＰＬＣ(ODSカラム、展開溶媒は50mM
酢酸アンモニウム水溶液：メタノール＝65：35または50
mM酢酸アンモニウム水溶液：アセトニトリル＝82:15)で
行うのが好ましい。
【００３２】マンノース残基の除去による化合物４と８の化
合物５と９への変換（図５）は、化合物４と８を緩衝液
（たとえば、リン酸緩衝溶液、酢酸緩衝溶液、グッド緩
衝溶液など）に溶かし、公知の条件に従ってマンノース
加水分解酵素を用いてマンノース残基の切断反応を行う
ことにより成し得る。なお、化合物４と８は、それらの
混合物であっても、各々単離されたものであってもよ
い。この反応で用いるマンノース加水分解酵素は市販さ
れているエキソ型の酵素を利用するのが好ましい。ま
た、同様の活性を有するものであれば、新たに単離され
た酵素、遺伝子工学的に創製された酵素であってもよ
い。次いで、前記と同様にして、反応後に得られる反応
液（糖残基が切断された糖鎖アスパラギン誘導体の混合
物）をクロマトグラフィーに供し、各糖鎖アスパラギン
誘導体を得ればよい。たとえば、分離はＨＰＬＣ(ODSカ
ラム、展開溶媒は、10-200mM程度の酢酸アンモニウムな
どの緩衝溶液とアセトニトリル、あるいはエタノール、
あるいはメタノール、あるいはブタノール、あるいはプ
ロパノールなどの脂溶性のある水溶性有機溶剤を適宜混
ぜて用いることができる。ここに例示する場合、展開溶
媒としては50mM酢酸アンモニウム水溶液：アセトニトリ
ル＝82：18が好適である)で行うのが好ましい。
合物５と９への変換（図５）は、化合物４と８を緩衝液
（たとえば、リン酸緩衝溶液、酢酸緩衝溶液、グッド緩
衝溶液など）に溶かし、公知の条件に従ってマンノース
加水分解酵素を用いてマンノース残基の切断反応を行う
ことにより成し得る。なお、化合物４と８は、それらの
混合物であっても、各々単離されたものであってもよ
い。この反応で用いるマンノース加水分解酵素は市販さ
れているエキソ型の酵素を利用するのが好ましい。ま
た、同様の活性を有するものであれば、新たに単離され
た酵素、遺伝子工学的に創製された酵素であってもよ
い。次いで、前記と同様にして、反応後に得られる反応
液（糖残基が切断された糖鎖アスパラギン誘導体の混合
物）をクロマトグラフィーに供し、各糖鎖アスパラギン
誘導体を得ればよい。たとえば、分離はＨＰＬＣ(ODSカ
ラム、展開溶媒は、10-200mM程度の酢酸アンモニウムな
どの緩衝溶液とアセトニトリル、あるいはエタノール、
あるいはメタノール、あるいはブタノール、あるいはプ
ロパノールなどの脂溶性のある水溶性有機溶剤を適宜混
ぜて用いることができる。ここに例示する場合、展開溶
媒としては50mM酢酸アンモニウム水溶液：アセトニトリ
ル＝82：18が好適である)で行うのが好ましい。
【００３３】ガラクトース残基の除去による化合物１０
の化合物１１への変換（図６）は、化合物１０を緩衝液
（たとえば、リン酸緩衝溶液、酢酸緩衝溶液、グッド緩
衝溶液など）に溶かし、前記同様、公知の条件に従って
ガラクトース加水分解酵素を用いてガラクトース残基の
切断反応を行うことにより成し得る。反応後の反応液
（糖残基が切断された糖鎖アスパラギン誘導体の混合
物）からの糖鎖アスパラギン誘導体の分離は、たとえ
ば、ＨＰＬＣ(ODSカラム、展開溶媒は50mM酢酸アンモニ
ウム水溶液：アセトニトリル＝85：15) で行うのが好ま
しい。
の化合物１１への変換（図６）は、化合物１０を緩衝液
（たとえば、リン酸緩衝溶液、酢酸緩衝溶液、グッド緩
衝溶液など）に溶かし、前記同様、公知の条件に従って
ガラクトース加水分解酵素を用いてガラクトース残基の
切断反応を行うことにより成し得る。反応後の反応液
（糖残基が切断された糖鎖アスパラギン誘導体の混合
物）からの糖鎖アスパラギン誘導体の分離は、たとえ
ば、ＨＰＬＣ(ODSカラム、展開溶媒は50mM酢酸アンモニ
ウム水溶液：アセトニトリル＝85：15) で行うのが好ま
しい。
【００３４】また、化合物１１をさらに任意の糖加水分
解酵素を用いて加水分解することで種々の糖鎖アスパラ
ギン誘導体（たとえば、化合物１１、１２、および１３
等）へ変換することができる。
解酵素を用いて加水分解することで種々の糖鎖アスパラ
ギン誘導体（たとえば、化合物１１、１２、および１３
等）へ変換することができる。
【００３５】N-アセチルグルコサミン残基の除去による
化合物１１の化合物１２への変換（図６）は、化合物１
１を緩衝液（たとえば、リン酸緩衝溶液、酢酸緩衝溶
液、グッド緩衝溶液など）に溶かし、前記同様、公知の
条件に従ってN-アセチルグルコサミン加水分解酵素等を
用いてN-アセチルグルコサミン残基の切断反応を行うこ
とにより成し得る。反応後の反応液（糖残基が切断され
た糖鎖アスパラギン誘導体の混合物）からの糖鎖アスパ
ラギン誘導体の分離は、たとえば、ＨＰＬＣ(ODSカラ
ム、展開溶媒は50mM酢酸アンモニウム水溶液：アセトニ
トリル＝85：18) で行うのが好ましい。
化合物１１の化合物１２への変換（図６）は、化合物１
１を緩衝液（たとえば、リン酸緩衝溶液、酢酸緩衝溶
液、グッド緩衝溶液など）に溶かし、前記同様、公知の
条件に従ってN-アセチルグルコサミン加水分解酵素等を
用いてN-アセチルグルコサミン残基の切断反応を行うこ
とにより成し得る。反応後の反応液（糖残基が切断され
た糖鎖アスパラギン誘導体の混合物）からの糖鎖アスパ
ラギン誘導体の分離は、たとえば、ＨＰＬＣ(ODSカラ
ム、展開溶媒は50mM酢酸アンモニウム水溶液：アセトニ
トリル＝85：18) で行うのが好ましい。
【００３６】マンノース残基の除去による化合物１２の
化合物１３への変換（図６）は、化合物１２を緩衝液
（たとえば、リン酸緩衝溶液、酢酸緩衝溶液、グッド緩
衝溶液など）に溶かし、前記同様、公知の条件に従って
マンノース加水分解酵素を用いてマンノース残基の切断
反応を行うことにより成し得る。反応後の反応液（糖残
基が切断された糖鎖アスパラギン誘導体の混合物）から
の各糖鎖アスパラギン誘導体の分離は、たとえば、高速
液体カラムクロマトグラフィー(ODSカラム、展開溶媒は
50mM酢酸アンモニウム水溶液：アセトニトリル＝82：1
8)で行うのが好ましい。
化合物１３への変換（図６）は、化合物１２を緩衝液
（たとえば、リン酸緩衝溶液、酢酸緩衝溶液、グッド緩
衝溶液など）に溶かし、前記同様、公知の条件に従って
マンノース加水分解酵素を用いてマンノース残基の切断
反応を行うことにより成し得る。反応後の反応液（糖残
基が切断された糖鎖アスパラギン誘導体の混合物）から
の各糖鎖アスパラギン誘導体の分離は、たとえば、高速
液体カラムクロマトグラフィー(ODSカラム、展開溶媒は
50mM酢酸アンモニウム水溶液：アセトニトリル＝82：1
8)で行うのが好ましい。
【００３７】化合物３と７の化合物１４と１９への変換
（図７）は、化合物３と７を緩衝液（たとえば、リン酸
緩衝溶液、酢酸緩衝溶液、グッド緩衝溶液など）に溶か
し、公知の条件に従ってシアル酸加水分解酵素を用いて
シアル酸残基の切断反応を行うことにより成し得る。な
お、化合物３と７は、それらの混合物であっても、各々
単離されたものであってもよい。この反応で用いるシア
ル酸加水分解酵素は市販されているエキソ型の酵素を利
用するのが好ましい。また、同様の活性を有するもので
あれば、新たに単離された酵素、遺伝子工学的に創製さ
れた酵素であってもよい。次いで、前記と同様にして、
反応後に得られる反応液（糖残基が切断された糖鎖アス
パラギン誘導体の混合物）をクロマトグラフィーに供
し、各糖鎖アスパラギン誘導体を得ればよい。たとえ
ば、分離は高速液体カラムクロマトグラフィー(ODSカラ
ム、展開溶媒は50mM酢酸アンモニウム水溶液：アセトニ
トリル＝85：15) で行うのが好ましい。
（図７）は、化合物３と７を緩衝液（たとえば、リン酸
緩衝溶液、酢酸緩衝溶液、グッド緩衝溶液など）に溶か
し、公知の条件に従ってシアル酸加水分解酵素を用いて
シアル酸残基の切断反応を行うことにより成し得る。な
お、化合物３と７は、それらの混合物であっても、各々
単離されたものであってもよい。この反応で用いるシア
ル酸加水分解酵素は市販されているエキソ型の酵素を利
用するのが好ましい。また、同様の活性を有するもので
あれば、新たに単離された酵素、遺伝子工学的に創製さ
れた酵素であってもよい。次いで、前記と同様にして、
反応後に得られる反応液（糖残基が切断された糖鎖アス
パラギン誘導体の混合物）をクロマトグラフィーに供
し、各糖鎖アスパラギン誘導体を得ればよい。たとえ
ば、分離は高速液体カラムクロマトグラフィー(ODSカラ
ム、展開溶媒は50mM酢酸アンモニウム水溶液：アセトニ
トリル＝85：15) で行うのが好ましい。
【００３８】N-アセチルグルコサミン残基の除去による
化合物１４と１９の化合物１５と２０への変換（図７）
は、化合物１４と１９を緩衝液（たとえば、リン酸緩衝
溶液、酢酸緩衝溶液、グッド緩衝溶液など）に溶かし、
前記同様、公知の条件に従ってN-アセチルグルコサミン
加水分解酵素等を用いてN-アセチルグルコサミン残基の
切断反応を行うことにより成し得る。反応後の反応液
（糖残基が切断された糖鎖アスパラギン誘導体の混合
物）からの各糖鎖アスパラギン誘導体の分離は、たとえ
ば、高速液体カラムクロマトグラフィー(ODSカラム、展
開溶媒は50mM酢酸アンモニウム水溶液：アセトニトリル
＝82：18) で行うのが好ましい。
化合物１４と１９の化合物１５と２０への変換（図７）
は、化合物１４と１９を緩衝液（たとえば、リン酸緩衝
溶液、酢酸緩衝溶液、グッド緩衝溶液など）に溶かし、
前記同様、公知の条件に従ってN-アセチルグルコサミン
加水分解酵素等を用いてN-アセチルグルコサミン残基の
切断反応を行うことにより成し得る。反応後の反応液
（糖残基が切断された糖鎖アスパラギン誘導体の混合
物）からの各糖鎖アスパラギン誘導体の分離は、たとえ
ば、高速液体カラムクロマトグラフィー(ODSカラム、展
開溶媒は50mM酢酸アンモニウム水溶液：アセトニトリル
＝82：18) で行うのが好ましい。
【００３９】マンノース残基の除去による化合物１５と
２０の化合物１６と２１への変換（図７）は、化合物１
５と２０を緩衝液（たとえば、リン酸緩衝溶液、酢酸緩
衝溶液、グッド緩衝溶液など）に溶かし、前記同様、公
知の条件に従ってマンノース加水分解酵素を用いてマン
ノース残基の切断反応を行うことにより成し得る。反応
後の反応液（糖残基が切断された糖鎖アスパラギン誘導
体の混合物）からの各糖鎖アスパラギン誘導体の分離
は、たとえば、高速液体カラムクロマトグラフィー(ODS
カラム、展開溶媒は50mM酢酸アンモニウム水溶液：アセ
トニトリル＝82：18) で行うのが好ましい。
２０の化合物１６と２１への変換（図７）は、化合物１
５と２０を緩衝液（たとえば、リン酸緩衝溶液、酢酸緩
衝溶液、グッド緩衝溶液など）に溶かし、前記同様、公
知の条件に従ってマンノース加水分解酵素を用いてマン
ノース残基の切断反応を行うことにより成し得る。反応
後の反応液（糖残基が切断された糖鎖アスパラギン誘導
体の混合物）からの各糖鎖アスパラギン誘導体の分離
は、たとえば、高速液体カラムクロマトグラフィー(ODS
カラム、展開溶媒は50mM酢酸アンモニウム水溶液：アセ
トニトリル＝82：18) で行うのが好ましい。
【００４０】ガラクトース残基の除去による化合物１６
と２１の化合物１７と２２への変換（図８）は、化合物
１６と２１を緩衝液（たとえば、リン酸緩衝溶液、酢酸
緩衝溶液、グッド緩衝溶液など）に溶かし、前記同様、
公知の条件に従ってガラクトース加水分解酵素を用いて
ガラクトース残基の切断反応を行うことにより成し得
る。反応後の反応液（糖残基が切断された糖鎖アスパラ
ギン誘導体の混合物）からの各糖鎖アスパラギン誘導体
の分離は、たとえば、高速液体カラムクロマトグラフィ
ー(ODSカラム、展開溶媒は50mM酢酸アンモニウム水溶
液：アセトニトリル＝85：15) で行うのが好ましい。
と２１の化合物１７と２２への変換（図８）は、化合物
１６と２１を緩衝液（たとえば、リン酸緩衝溶液、酢酸
緩衝溶液、グッド緩衝溶液など）に溶かし、前記同様、
公知の条件に従ってガラクトース加水分解酵素を用いて
ガラクトース残基の切断反応を行うことにより成し得
る。反応後の反応液（糖残基が切断された糖鎖アスパラ
ギン誘導体の混合物）からの各糖鎖アスパラギン誘導体
の分離は、たとえば、高速液体カラムクロマトグラフィ
ー(ODSカラム、展開溶媒は50mM酢酸アンモニウム水溶
液：アセトニトリル＝85：15) で行うのが好ましい。
【００４１】N-アセチルグルコサミン残基の除去による
化合物１７と２２の化合物１８と２３への変換（図８）
は、化合物１７と２２を緩衝液（たとえば、リン酸緩衝
溶液、酢酸緩衝溶液、グッド緩衝溶液など）に溶かし、
前記同様、公知の条件に従ってN-アセチルグルコサミン
加水分解酵素等を用いてN-アセチルグルコサミン残基の
切断反応を行うことにより成し得る。反応後の反応液
（糖残基が切断された糖鎖アスパラギン誘導体の混合
物）からの各糖鎖アスパラギン誘導体の分離は、たとえ
ば、高速液体カラムクロマトグラフィー(ODSカラム、展
開溶媒は50mM酢酸アンモニウム水溶液：アセトニトリル
＝82：18) で行うのが好ましい。
化合物１７と２２の化合物１８と２３への変換（図８）
は、化合物１７と２２を緩衝液（たとえば、リン酸緩衝
溶液、酢酸緩衝溶液、グッド緩衝溶液など）に溶かし、
前記同様、公知の条件に従ってN-アセチルグルコサミン
加水分解酵素等を用いてN-アセチルグルコサミン残基の
切断反応を行うことにより成し得る。反応後の反応液
（糖残基が切断された糖鎖アスパラギン誘導体の混合
物）からの各糖鎖アスパラギン誘導体の分離は、たとえ
ば、高速液体カラムクロマトグラフィー(ODSカラム、展
開溶媒は50mM酢酸アンモニウム水溶液：アセトニトリル
＝82：18) で行うのが好ましい。
【００４２】このように、各糖鎖アスパラギン誘導体を
得た後、さらに各種糖加水分解酵素等を用いて当該誘導
体を加水分解し、糖鎖の非還元末端の糖残基を除去する
ことにより、たとえば、糖鎖の末端の分岐構造が不均一
な様々な糖鎖アスパラギン誘導体をそれぞれ単一化合物
として得ることができる。また、種々の糖加水分解酵素
を用い、加水分解する順番やその種類を変えることで、
より多くの種類の糖鎖アスパラギン誘導体を製造するこ
とができる。
得た後、さらに各種糖加水分解酵素等を用いて当該誘導
体を加水分解し、糖鎖の非還元末端の糖残基を除去する
ことにより、たとえば、糖鎖の末端の分岐構造が不均一
な様々な糖鎖アスパラギン誘導体をそれぞれ単一化合物
として得ることができる。また、種々の糖加水分解酵素
を用い、加水分解する順番やその種類を変えることで、
より多くの種類の糖鎖アスパラギン誘導体を製造するこ
とができる。
【００４３】従来の方法によれば、極限られた糖鎖構造
を有する糖鎖アスパラギン誘導体を分析スケールで得る
のにさえ膨大な時間とコストが必要であったが、本発明
によれば、特別の装置や試薬を必要とすることなく、慣
用のゲルろ過カラム、ＨＰＬＣカラムや、少なくとも３
種類の糖加水分解酵素（たとえば、ガラクトース加水分
解酵素、マンノース加水分解酵素、Ｎ−アセチルグルコ
サミン加水分解酵素）等を使って、２週間程度で所望の
糖鎖構造を有する糖鎖アスパラギン誘導体を１グラム程
度調製することが可能である。
を有する糖鎖アスパラギン誘導体を分析スケールで得る
のにさえ膨大な時間とコストが必要であったが、本発明
によれば、特別の装置や試薬を必要とすることなく、慣
用のゲルろ過カラム、ＨＰＬＣカラムや、少なくとも３
種類の糖加水分解酵素（たとえば、ガラクトース加水分
解酵素、マンノース加水分解酵素、Ｎ−アセチルグルコ
サミン加水分解酵素）等を使って、２週間程度で所望の
糖鎖構造を有する糖鎖アスパラギン誘導体を１グラム程
度調製することが可能である。
【００４４】以上の操作により、たとえば、保護基がＦ
ｍｏｃ基である場合、一般式：
ｍｏｃ基である場合、一般式：
【００４５】
【化１５】
【００４６】を有する糖鎖アスパラギン誘導体を効率的
に得ることができる。かかる糖鎖アスパラギン誘導体と
しては、具体的には、たとえば、図１に示す各化合物を
あげることができる。中でも、化合物１、化合物２〜
９、１１〜２３、７０および７１は本発明において初め
て製造された化合物である。本発明は当該化合物を包含
する。
に得ることができる。かかる糖鎖アスパラギン誘導体と
しては、具体的には、たとえば、図１に示す各化合物を
あげることができる。中でも、化合物１、化合物２〜
９、１１〜２３、７０および７１は本発明において初め
て製造された化合物である。本発明は当該化合物を包含
する。
【００４７】また、本発明の糖鎖アスパラギン誘導体の
製造方法の好ましい態様として、工程（ａ）が、非還元
末端にシアル酸残基を有する１種もしくは２種以上の糖
鎖アスパラギンを含む混合物を用い、該混合物に含まれ
る糖鎖アスパラギンにＦｍｏｃ基を導入し、かつシアル
酸残基にベンジル基を導入して糖鎖アスパラギン誘導体
混合物を得る工程である、糖鎖アスパラギン誘導体の製
造方法を提供する。かかる製造方法によればさらに効率
的に種々の型の糖鎖アスパラギン誘導体を大量に得るこ
とができる。たとえば、図１に示す化合物２と６の分離
効率を向上させ、両化合物の製造を効率的に行うことが
できる。すなわち、化合物２と６の混合物から直接的に
両化合物を明確に分離することは効率的に不利である
が、本態様では、両化合物のシアル酸残基にベンジル基
を導入し、一旦、以下の化合物７６と７７：
製造方法の好ましい態様として、工程（ａ）が、非還元
末端にシアル酸残基を有する１種もしくは２種以上の糖
鎖アスパラギンを含む混合物を用い、該混合物に含まれ
る糖鎖アスパラギンにＦｍｏｃ基を導入し、かつシアル
酸残基にベンジル基を導入して糖鎖アスパラギン誘導体
混合物を得る工程である、糖鎖アスパラギン誘導体の製
造方法を提供する。かかる製造方法によればさらに効率
的に種々の型の糖鎖アスパラギン誘導体を大量に得るこ
とができる。たとえば、図１に示す化合物２と６の分離
効率を向上させ、両化合物の製造を効率的に行うことが
できる。すなわち、化合物２と６の混合物から直接的に
両化合物を明確に分離することは効率的に不利である
が、本態様では、両化合物のシアル酸残基にベンジル基
を導入し、一旦、以下の化合物７６と７７：
【００４８】
【化１６】
【００４９】の混合物として前記工程（ｂ）に供するこ
とになり、化合物７６と７７の分離は比較的容易に行う
ことができることから両化合物を分離でき、次いでベン
ジル基を後述する方法により脱離させれば化合物２と６
の混合物から両化合物を効率的に分離して得ることがで
きる。
とになり、化合物７６と７７の分離は比較的容易に行う
ことができることから両化合物を分離でき、次いでベン
ジル基を後述する方法により脱離させれば化合物２と６
の混合物から両化合物を効率的に分離して得ることがで
きる。
【００５０】化合物２と６の分離がやや困難である一
方、それらのシアル酸残基にベンジル基を導入して得ら
れる化合物７６と７７の分離が容易に行えるのは、シア
ル酸残基のカルボキシル基に脂溶性の高いベンジル基を
導入し、HPLC（高速液体クロマトグラフィー）の逆相カ
ラムとの疎水性相互作用をさらに高めたことによると考
えられる。従って、分離工程（ｂ）において好適に使用
される逆相系カラムとの相互作用が格段に向上し、その
結果、より鋭敏に糖鎖構造の差を反映して両化合物が分
離されるようになったと推定される。
方、それらのシアル酸残基にベンジル基を導入して得ら
れる化合物７６と７７の分離が容易に行えるのは、シア
ル酸残基のカルボキシル基に脂溶性の高いベンジル基を
導入し、HPLC（高速液体クロマトグラフィー）の逆相カ
ラムとの疎水性相互作用をさらに高めたことによると考
えられる。従って、分離工程（ｂ）において好適に使用
される逆相系カラムとの相互作用が格段に向上し、その
結果、より鋭敏に糖鎖構造の差を反映して両化合物が分
離されるようになったと推定される。
【００５１】非還元末端にシアル酸残基を有する１種も
しくは２種以上の糖鎖アスパラギンを含む混合物として
は、かかる構造を有する糖鎖アスパラギンを１種もしく
は２種以上含む混合物であれば特に限定されるものでは
ない。入手容易性の観点から、非還元末端にシアル酸残
基を有し、還元末端にアスパラギンが結合した糖鎖を１
種もしくは２種以上含む混合物が好適である。当該混合
物としては、前記した、図２に示す化合物２４および／
または該化合物において１以上の糖残基が欠失した化合
物を含む混合物が好適である。
しくは２種以上の糖鎖アスパラギンを含む混合物として
は、かかる構造を有する糖鎖アスパラギンを１種もしく
は２種以上含む混合物であれば特に限定されるものでは
ない。入手容易性の観点から、非還元末端にシアル酸残
基を有し、還元末端にアスパラギンが結合した糖鎖を１
種もしくは２種以上含む混合物が好適である。当該混合
物としては、前記した、図２に示す化合物２４および／
または該化合物において１以上の糖残基が欠失した化合
物を含む混合物が好適である。
【００５２】また、所望の糖鎖構造を有する糖鎖アスパ
ラギン誘導体をさらに効率的に得る観点から、前記工程
（ｂ’）を実施するのが好適である。
ラギン誘導体をさらに効率的に得る観点から、前記工程
（ｂ’）を実施するのが好適である。
【００５３】なお、本態様においては糖鎖アスパラギン
誘導体はベンジル基とＦｍｏｃ基が導入されたもの、お
よびＦｍｏｃ基のみが導入されたものがそれぞれ得られ
ることになる。
誘導体はベンジル基とＦｍｏｃ基が導入されたもの、お
よびＦｍｏｃ基のみが導入されたものがそれぞれ得られ
ることになる。
【００５４】糖鎖アスパラギンのシアル酸残基へのベン
ジル基の導入は公知の方法（たとえば、Protecting gro
ups in Organic chemistry, John Wiley & Sons INC.,
NewYork 1991, ISBN 0-471-62301-6を参照）に従えばよ
い。
ジル基の導入は公知の方法（たとえば、Protecting gro
ups in Organic chemistry, John Wiley & Sons INC.,
NewYork 1991, ISBN 0-471-62301-6を参照）に従えばよ
い。
【００５５】以上の操作により、たとえば、一般式：
【００５６】
【化１７】
【００５７】を有する、ベンジル基とＦｍｏｃ基が導入
された糖鎖アスパラギン誘導体を効率的に得ることがで
きる。かかる糖鎖アスパラギン誘導体としては、具体的
に前記化合物７６および７７や、以下の化合物７８：
された糖鎖アスパラギン誘導体を効率的に得ることがで
きる。かかる糖鎖アスパラギン誘導体としては、具体的
に前記化合物７６および７７や、以下の化合物７８：
【００５８】
【化１８】
【００５９】が挙げられる。本態様により得られた糖鎖
アスパラギン誘導体は糖ペプチドの固相合成に直接使用
することができる。該糖鎖アスパラギン誘導体のシアル
酸残基に存在するカルボキシル基はベンジル基により保
護されていることから、ベンジル基を導入していない糖
鎖アスパラギン誘導体と比べ、糖ペプチドの固相合成に
おいては該カルボキシル基が関与する副反応が生ずるこ
となく効率的に所望の糖ペプチドを得ることができる、
という利点を有する。
アスパラギン誘導体は糖ペプチドの固相合成に直接使用
することができる。該糖鎖アスパラギン誘導体のシアル
酸残基に存在するカルボキシル基はベンジル基により保
護されていることから、ベンジル基を導入していない糖
鎖アスパラギン誘導体と比べ、糖ペプチドの固相合成に
おいては該カルボキシル基が関与する副反応が生ずるこ
となく効率的に所望の糖ペプチドを得ることができる、
という利点を有する。
【００６０】また本発明は、種々の単離された糖鎖アス
パラギンを大量に得ることができる糖鎖アスパラギンの
製造方法を提供する。当該方法は、前記糖鎖アスパラギ
ン誘導体の製造方法に従う糖鎖アスパラギン誘導体の製
造工程に続き、さらに、得られた糖鎖アスパラギン誘導
体から保護基を除去する工程を含むものである。
パラギンを大量に得ることができる糖鎖アスパラギンの
製造方法を提供する。当該方法は、前記糖鎖アスパラギ
ン誘導体の製造方法に従う糖鎖アスパラギン誘導体の製
造工程に続き、さらに、得られた糖鎖アスパラギン誘導
体から保護基を除去する工程を含むものである。
【００６１】すなわち、本発明の糖鎖アスパラギンの製
造方法は、（ａ）１種もしくは２種以上の糖鎖アスパラ
ギンを含む混合物に含まれる該糖鎖アスパラギンに脂溶
性の保護基を導入して糖鎖アスパラギン誘導体混合物を
得る工程、（ｂ）該糖鎖アスパラギン誘導体混合物また
は該糖鎖アスパラギン誘導体混合物に含まれる糖鎖アス
パラギン誘導体を加水分解して得られる混合物をクロマ
トグラフィーに供して各糖鎖アスパラギン誘導体を分離
する工程、ならびに（ｃ）工程（ｂ）で分離された糖鎖
アスパラギン誘導体の保護基を除去して糖鎖アスパラギ
ンを得る工程、を含むものである。
造方法は、（ａ）１種もしくは２種以上の糖鎖アスパラ
ギンを含む混合物に含まれる該糖鎖アスパラギンに脂溶
性の保護基を導入して糖鎖アスパラギン誘導体混合物を
得る工程、（ｂ）該糖鎖アスパラギン誘導体混合物また
は該糖鎖アスパラギン誘導体混合物に含まれる糖鎖アス
パラギン誘導体を加水分解して得られる混合物をクロマ
トグラフィーに供して各糖鎖アスパラギン誘導体を分離
する工程、ならびに（ｃ）工程（ｂ）で分離された糖鎖
アスパラギン誘導体の保護基を除去して糖鎖アスパラギ
ンを得る工程、を含むものである。
【００６２】工程（ａ）および（ｂ）は、前記糖鎖アス
パラギン誘導体の製造方法の場合と同様であり、使用さ
れる１種もしくは２種以上の糖鎖アスパラギンを含む混
合物および脂溶性の保護基も前記と同様である。
パラギン誘導体の製造方法の場合と同様であり、使用さ
れる１種もしくは２種以上の糖鎖アスパラギンを含む混
合物および脂溶性の保護基も前記と同様である。
【００６３】工程（ｃ）における糖鎖アスパラギン誘導
体からの保護基の除去は、公知の方法に従って行うこと
ができる（たとえば、Protecting groups in Organic c
hemistry, John Wiley & Sons INC., New York 1991, I
SBN 0-471-62301-6を参照)。たとえば、保護基がＦｍｏ
ｃ基である場合、図９に模式的に示すように、N,N-ジメ
チルホルムアミド（ＤＭＦ）中、糖鎖アスパラギン誘導
体にモルフォリンを加えて反応を行うことによりＦｍｏ
ｃ基を除去することができる。また、Ｂｏｃ基は弱酸を
反応させることで除去することができる。保護基除去
後、所望により適宜、公知の方法、たとえば、ゲル濾過
カラム、イオン交換カラムなどを使用する各種クロマト
グラフィーや、ＨＰＬＣによる分離という方法によって
精製することにより、糖鎖アスパラギンを得てもよい。
体からの保護基の除去は、公知の方法に従って行うこと
ができる（たとえば、Protecting groups in Organic c
hemistry, John Wiley & Sons INC., New York 1991, I
SBN 0-471-62301-6を参照)。たとえば、保護基がＦｍｏ
ｃ基である場合、図９に模式的に示すように、N,N-ジメ
チルホルムアミド（ＤＭＦ）中、糖鎖アスパラギン誘導
体にモルフォリンを加えて反応を行うことによりＦｍｏ
ｃ基を除去することができる。また、Ｂｏｃ基は弱酸を
反応させることで除去することができる。保護基除去
後、所望により適宜、公知の方法、たとえば、ゲル濾過
カラム、イオン交換カラムなどを使用する各種クロマト
グラフィーや、ＨＰＬＣによる分離という方法によって
精製することにより、糖鎖アスパラギンを得てもよい。
【００６４】また、前記糖鎖アスパラギン誘導体の製造
方法と同様、本発明の糖鎖アスパラギンの製造方法の好
ましい態様として、工程（ａ）が、非還元末端にシアル
酸残基を有する１種もしくは２種以上の糖鎖アスパラギ
ンを含む混合物を用い、該混合物に含まれる糖鎖アスパ
ラギンにＦｍｏｃ基を導入し、かつシアル酸残基にベン
ジル基を導入して糖鎖アスパラギン誘導体混合物を得る
工程である、糖鎖アスパラギンの製造方法を提供する。
かかる態様においては工程（ｃ）において、Ｆｍｏｃ基
の除去に加えて、ベンジル基の除去を行う。ベンジル基
の除去は、公知の方法に従って行うことができる（たと
えば、Protecting groups in Organic chemistry, John
Wiley & Sons INC., New York 1991, ISBN 0-471-6230
1-6を参照）。
方法と同様、本発明の糖鎖アスパラギンの製造方法の好
ましい態様として、工程（ａ）が、非還元末端にシアル
酸残基を有する１種もしくは２種以上の糖鎖アスパラギ
ンを含む混合物を用い、該混合物に含まれる糖鎖アスパ
ラギンにＦｍｏｃ基を導入し、かつシアル酸残基にベン
ジル基を導入して糖鎖アスパラギン誘導体混合物を得る
工程である、糖鎖アスパラギンの製造方法を提供する。
かかる態様においては工程（ｃ）において、Ｆｍｏｃ基
の除去に加えて、ベンジル基の除去を行う。ベンジル基
の除去は、公知の方法に従って行うことができる（たと
えば、Protecting groups in Organic chemistry, John
Wiley & Sons INC., New York 1991, ISBN 0-471-6230
1-6を参照）。
【００６５】さらに、前記同様、所望の糖鎖構造を有す
る糖鎖アスパラギンを効率的に得る観点から、工程
（ｂ）で分離された糖鎖アスパラギン誘導体を加水分解
する、および／または工程（ｃ）で得られた糖鎖アスパ
ラギンを加水分解するのが好適である。なお、加水分解
は前記同様にして行うことができる。所望の糖鎖構造を
有する糖鎖アスパラギンをより効率的に得る観点から、
糖加水分解酵素を用いて加水分解する〔工程（ｂ’）お
よび／または工程（ｃ’）〕のがより好ましい。
る糖鎖アスパラギンを効率的に得る観点から、工程
（ｂ）で分離された糖鎖アスパラギン誘導体を加水分解
する、および／または工程（ｃ）で得られた糖鎖アスパ
ラギンを加水分解するのが好適である。なお、加水分解
は前記同様にして行うことができる。所望の糖鎖構造を
有する糖鎖アスパラギンをより効率的に得る観点から、
糖加水分解酵素を用いて加水分解する〔工程（ｂ’）お
よび／または工程（ｃ’）〕のがより好ましい。
【００６６】以上の操作により、たとえば、一般式：
【００６７】
【化１９】
【００６８】を有する糖鎖アスパラギンを効率的に得る
ことができる。かかる糖鎖アスパラギンとしては、具体
的には、たとえば、図２に示す各化合物をあげることが
できる。中でも、化合物２５〜３２、３４〜４６、７２
および７３は本発明において初めて製造された化合物で
ある。本発明は当該化合物を包含する。
ことができる。かかる糖鎖アスパラギンとしては、具体
的には、たとえば、図２に示す各化合物をあげることが
できる。中でも、化合物２５〜３２、３４〜４６、７２
および７３は本発明において初めて製造された化合物で
ある。本発明は当該化合物を包含する。
【００６９】さらに本発明は、種々の単離された糖鎖を
大量に得ることができる糖鎖の製造方法を提供する。当
該方法は、前記糖鎖アスパラギンの製造方法に従う糖鎖
アスパラギンの製造工程に続き、さらに、得られた糖鎖
アスパラギンからアスパラギン残基を除去する工程を含
むものである。
大量に得ることができる糖鎖の製造方法を提供する。当
該方法は、前記糖鎖アスパラギンの製造方法に従う糖鎖
アスパラギンの製造工程に続き、さらに、得られた糖鎖
アスパラギンからアスパラギン残基を除去する工程を含
むものである。
【００７０】すなわち、本発明の糖鎖の製造方法は、
（ａ）１種もしくは２種以上の糖鎖アスパラギンを含む
混合物に含まれる該糖鎖アスパラギンに脂溶性の保護基
を導入して糖鎖アスパラギン誘導体混合物を得る工程、
（ｂ）該糖鎖アスパラギン誘導体混合物または該糖鎖ア
スパラギン誘導体混合物に含まれる糖鎖アスパラギン誘
導体を加水分解して得られる混合物をクロマトグラフィ
ーに供して各糖鎖アスパラギン誘導体を分離する工程、
（ｃ）工程（ｂ）で分離された糖鎖アスパラギン誘導体
の保護基を除去して糖鎖アスパラギンを得る工程、なら
びに（ｄ）工程（ｃ）で得られた糖鎖アスパラギンのア
スパラギン残基を除去して糖鎖を得る工程、を含むもの
である。
（ａ）１種もしくは２種以上の糖鎖アスパラギンを含む
混合物に含まれる該糖鎖アスパラギンに脂溶性の保護基
を導入して糖鎖アスパラギン誘導体混合物を得る工程、
（ｂ）該糖鎖アスパラギン誘導体混合物または該糖鎖ア
スパラギン誘導体混合物に含まれる糖鎖アスパラギン誘
導体を加水分解して得られる混合物をクロマトグラフィ
ーに供して各糖鎖アスパラギン誘導体を分離する工程、
（ｃ）工程（ｂ）で分離された糖鎖アスパラギン誘導体
の保護基を除去して糖鎖アスパラギンを得る工程、なら
びに（ｄ）工程（ｃ）で得られた糖鎖アスパラギンのア
スパラギン残基を除去して糖鎖を得る工程、を含むもの
である。
【００７１】工程（ａ）〜（ｃ）は、前記糖鎖アスパラ
ギンの製造方法の場合と同様であり、使用される１種も
しくは２種以上の糖鎖アスパラギンを含む混合物および
脂溶性の保護基も前記と同様である。
ギンの製造方法の場合と同様であり、使用される１種も
しくは２種以上の糖鎖アスパラギンを含む混合物および
脂溶性の保護基も前記と同様である。
【００７２】また、本発明の糖鎖の製造方法において
も、その好ましい態様として、工程（ａ）が、非還元末
端にシアル酸残基を有する１種もしくは２種以上の糖鎖
アスパラギンを含む混合物を用い、該混合物に含まれる
糖鎖アスパラギンにＦｍｏｃ基を導入し、かつシアル酸
残基にベンジル基を導入して糖鎖アスパラギン誘導体混
合物を得る工程である、糖鎖アスパラギンの製造方法を
提供する。かかる態様においては工程（ｃ）において、
Ｆｍｏｃ基の除去に加えて、ベンジル基の除去を行う。
ベンジル基の除去は、前記方法に従って行うことができ
る。
も、その好ましい態様として、工程（ａ）が、非還元末
端にシアル酸残基を有する１種もしくは２種以上の糖鎖
アスパラギンを含む混合物を用い、該混合物に含まれる
糖鎖アスパラギンにＦｍｏｃ基を導入し、かつシアル酸
残基にベンジル基を導入して糖鎖アスパラギン誘導体混
合物を得る工程である、糖鎖アスパラギンの製造方法を
提供する。かかる態様においては工程（ｃ）において、
Ｆｍｏｃ基の除去に加えて、ベンジル基の除去を行う。
ベンジル基の除去は、前記方法に従って行うことができ
る。
【００７３】工程（ｄ）における糖鎖アスパラギンから
のアスパラギン残基の除去は、公知の方法に従って行う
ことができる。たとえば、図９に模式的に示すように、
糖鎖アスパラギンを無水ヒドラジンと反応させた後、ア
セチル化することによりアスパラギン残基を除去して糖
鎖を得ることができる。また、糖鎖アスパラギンを塩基
性水溶液で加熱還流後、アセチル化することによっても
アスパラギン残基を除去して糖鎖を得ることができる。
アスパラギン残基除去後、所望により適宜、公知の方
法、たとえば、ゲル濾過カラム、イオン交換カラムなど
を使用する各種クロマトグラフィーや、ＨＰＬＣによる
分離という方法によって精製してもよい。
のアスパラギン残基の除去は、公知の方法に従って行う
ことができる。たとえば、図９に模式的に示すように、
糖鎖アスパラギンを無水ヒドラジンと反応させた後、ア
セチル化することによりアスパラギン残基を除去して糖
鎖を得ることができる。また、糖鎖アスパラギンを塩基
性水溶液で加熱還流後、アセチル化することによっても
アスパラギン残基を除去して糖鎖を得ることができる。
アスパラギン残基除去後、所望により適宜、公知の方
法、たとえば、ゲル濾過カラム、イオン交換カラムなど
を使用する各種クロマトグラフィーや、ＨＰＬＣによる
分離という方法によって精製してもよい。
【００７４】さらに、前記同様、所望の糖鎖構造を有す
る糖鎖を効率的に得る観点から、 工程（ｂ）で分離され
た糖鎖アスパラギン誘導体を加水分解する、および／ま
たは工程（ｃ）で得られた糖鎖アスパラギンを加水分解
する、および／または工程（ｄ）で得られた糖鎖を加水
分解するのが好適である。なお、加水分解は前記同様に
して行うことができる。所望の糖鎖構造を有する糖鎖を
より効率的に得る観点から、 糖加水分解酵素を用いて加
水分解する〔工程（ｂ’）および／または工程（ｃ’）
および／または工程（ｄ’）〕のがより好ましい。
る糖鎖を効率的に得る観点から、 工程（ｂ）で分離され
た糖鎖アスパラギン誘導体を加水分解する、および／ま
たは工程（ｃ）で得られた糖鎖アスパラギンを加水分解
する、および／または工程（ｄ）で得られた糖鎖を加水
分解するのが好適である。なお、加水分解は前記同様に
して行うことができる。所望の糖鎖構造を有する糖鎖を
より効率的に得る観点から、 糖加水分解酵素を用いて加
水分解する〔工程（ｂ’）および／または工程（ｃ’）
および／または工程（ｄ’）〕のがより好ましい。
【００７５】以上の操作により、たとえば、一般式：
【００７６】
【化２０】
【００７７】を有する糖鎖を効率的に得ることができ
る。かかる糖鎖としては、具体的には、たとえば、図３
に示す各化合物をあげることができる。中でも、化合物
４８〜５５、５７〜６９、７４および７５は本発明にお
いて初めて製造された化合物である。本発明は当該化合
物を包含する。
る。かかる糖鎖としては、具体的には、たとえば、図３
に示す各化合物をあげることができる。中でも、化合物
４８〜５５、５７〜６９、７４および７５は本発明にお
いて初めて製造された化合物である。本発明は当該化合
物を包含する。
【００７８】このように、本発明によれば、所望の糖鎖
構造を有する糖鎖アスパラギン誘導体、糖鎖アスパラギ
ンおよび糖鎖（以下、３つ併せて糖鎖類という場合があ
る）を安価かつ効率的に大量に製造することができる。
構造を有する糖鎖アスパラギン誘導体、糖鎖アスパラギ
ンおよび糖鎖（以下、３つ併せて糖鎖類という場合があ
る）を安価かつ効率的に大量に製造することができる。
【００７９】かかる糖鎖類は医薬品開発等の分野におい
て非常に有用である。たとえば、医薬品開発における応
用例としては、たとえば、ガンのワクチン合成があげら
れる。細胞がガン化すると体内にはなかった糖鎖が発現
することが知られている。また、当該糖鎖を化学的に合
成し、ワクチンとして個体に投与すると、ガンの増殖が
抑制されることも知られている。そこで、本発明により
所望の糖鎖類を製造することができれば、ガンの治療に
有効なワクチンの合成を行うことが可能である。また、
本発明により得られる糖鎖類を、さらに化学的な反応お
よび糖転移酵素による反応などを組み合わせて新たな糖
残基を結合させて誘導体化し、新規なワクチンの合成を
行うことも可能である。
て非常に有用である。たとえば、医薬品開発における応
用例としては、たとえば、ガンのワクチン合成があげら
れる。細胞がガン化すると体内にはなかった糖鎖が発現
することが知られている。また、当該糖鎖を化学的に合
成し、ワクチンとして個体に投与すると、ガンの増殖が
抑制されることも知られている。そこで、本発明により
所望の糖鎖類を製造することができれば、ガンの治療に
有効なワクチンの合成を行うことが可能である。また、
本発明により得られる糖鎖類を、さらに化学的な反応お
よび糖転移酵素による反応などを組み合わせて新たな糖
残基を結合させて誘導体化し、新規なワクチンの合成を
行うことも可能である。
【００８０】また、たとえば、糖タンパク質であるエリ
スロポエチン（ＥＰＯ）が、その赤血球増殖能により貧
血の治療薬として使われているが、このＥＰＯは糖鎖が
結合していないと活性がでないことが判明している。こ
のように、タンパク質には糖鎖の結合によって生理活性
を発現するものがあるので、たとえば、糖鎖を結合させ
ることができない大腸菌発現系によりタンパク質のみを
大量に調製し、次いで所望の糖鎖構造を有する、本発明
により製造した糖鎖を導入することにより生理活性の発
現を付与したり、また、任意のタンパク質に種々の糖鎖
構造を有する、本発明により製造した糖鎖を導入するこ
とにより、新たな生理活性を有する新規な糖タンパク質
を合成することも可能である。
スロポエチン（ＥＰＯ）が、その赤血球増殖能により貧
血の治療薬として使われているが、このＥＰＯは糖鎖が
結合していないと活性がでないことが判明している。こ
のように、タンパク質には糖鎖の結合によって生理活性
を発現するものがあるので、たとえば、糖鎖を結合させ
ることができない大腸菌発現系によりタンパク質のみを
大量に調製し、次いで所望の糖鎖構造を有する、本発明
により製造した糖鎖を導入することにより生理活性の発
現を付与したり、また、任意のタンパク質に種々の糖鎖
構造を有する、本発明により製造した糖鎖を導入するこ
とにより、新たな生理活性を有する新規な糖タンパク質
を合成することも可能である。
【００８１】また、天然の糖タンパク質に存在する糖鎖
を本発明により製造した糖鎖と置換することにより新た
な生理活性を付与することも可能である。糖タンパク質
が有する糖鎖を本発明により得られた糖鎖と置換する技
術としては、たとえば、P.Sears and C.H. Wong, Scien
ce, 2001, vol291, p2344 〜2350に記載の方法をあげる
ことができる。すなわち、糖タンパク質をβ-N- アセチ
ルグルコサミニダーゼ(Endo-H) で処理してタンパク質
表面のアスパラギン残基にはN-アセチルグルコサミン残
基が１つだけ結合した状態にする。次いで、本発明によ
り得られた糖鎖アスパラギン（たとえば、図２の各化合
物）中の所望の糖鎖をβ-N- アセチルグルコサミニダー
ゼ (Endo-M) を用いて、前記N-アセチルグルコサミン残
基に結合させるという方法があげられる。また、tRNAに
N-アセチルグルコサミンを結合させておいて、大腸菌な
どの発現系を利用してN-アセチルグルコサミン残基を有
する糖タンパク質を合成後、本発明により得られた糖鎖
アスパラギン中の所望の糖鎖をEndo-Mを用いて導入する
ことも可能である。
を本発明により製造した糖鎖と置換することにより新た
な生理活性を付与することも可能である。糖タンパク質
が有する糖鎖を本発明により得られた糖鎖と置換する技
術としては、たとえば、P.Sears and C.H. Wong, Scien
ce, 2001, vol291, p2344 〜2350に記載の方法をあげる
ことができる。すなわち、糖タンパク質をβ-N- アセチ
ルグルコサミニダーゼ(Endo-H) で処理してタンパク質
表面のアスパラギン残基にはN-アセチルグルコサミン残
基が１つだけ結合した状態にする。次いで、本発明によ
り得られた糖鎖アスパラギン（たとえば、図２の各化合
物）中の所望の糖鎖をβ-N- アセチルグルコサミニダー
ゼ (Endo-M) を用いて、前記N-アセチルグルコサミン残
基に結合させるという方法があげられる。また、tRNAに
N-アセチルグルコサミンを結合させておいて、大腸菌な
どの発現系を利用してN-アセチルグルコサミン残基を有
する糖タンパク質を合成後、本発明により得られた糖鎖
アスパラギン中の所望の糖鎖をEndo-Mを用いて導入する
ことも可能である。
【００８２】また、現在、糖タンパク質を治療薬として
利用する際の問題として、投与された糖タンパク質の代
謝速度が速いことがあげられる。これは、糖タンパク質
の糖鎖末端に存在するシアル酸が生体内で除去されると
直ちに当該糖タンパク質が肝臓により代謝されることに
よる。そのため、ある程度の量の糖タンパク質を投与す
る必要がある。そこで、本発明により糖鎖の末端に除去
されにくいシアル酸を新たに組み込んだ糖鎖を製造し、
対象タンパク質に当該糖鎖をEndo-Mを利用して導入すれ
ば、生体内での糖タンパク質の代謝速度を制御すること
が可能となり、投与する糖タンパク質の量を低くするこ
とも可能である。
利用する際の問題として、投与された糖タンパク質の代
謝速度が速いことがあげられる。これは、糖タンパク質
の糖鎖末端に存在するシアル酸が生体内で除去されると
直ちに当該糖タンパク質が肝臓により代謝されることに
よる。そのため、ある程度の量の糖タンパク質を投与す
る必要がある。そこで、本発明により糖鎖の末端に除去
されにくいシアル酸を新たに組み込んだ糖鎖を製造し、
対象タンパク質に当該糖鎖をEndo-Mを利用して導入すれ
ば、生体内での糖タンパク質の代謝速度を制御すること
が可能となり、投与する糖タンパク質の量を低くするこ
とも可能である。
【００８３】
【実施例】以下、実施例により本発明をより具体的に説
明するが、本発明はかかる実施例に限定されるものでは
ない。各化合物の構造式および番号を図１〜３に示す。
なお、1H-NMRのデータは、実施例１〜７については30℃
でHODを4.8ppmとして、実施例８〜４５については30℃
で内部標準としてアセトンのメチル基のシグナルを2.22
5ppm、HODを4.718ppmとして測定して得られた値であ
る。また、Fmoc基が除去された化合物については測定溶
媒中に５０mMの炭酸水素アンモニウムを共存させて測定
した。
明するが、本発明はかかる実施例に限定されるものでは
ない。各化合物の構造式および番号を図１〜３に示す。
なお、1H-NMRのデータは、実施例１〜７については30℃
でHODを4.8ppmとして、実施例８〜４５については30℃
で内部標準としてアセトンのメチル基のシグナルを2.22
5ppm、HODを4.718ppmとして測定して得られた値であ
る。また、Fmoc基が除去された化合物については測定溶
媒中に５０mMの炭酸水素アンモニウムを共存させて測定
した。
【００８４】実施例１ 化合物２４の合成
卵由来粗精製ＳＧＰ（シアリルグリコペプチド）2.6gを
トリス−塩酸・塩化カルシウム緩衝溶液（TRIZMA BASE
0.05mol/l 、塩化カルシウム0.01mol/l 、pH7.5 ）100m
l に溶解させた。これにアジ化ナトリウム58mg (772 μ
mol)とアクチナーゼ-E（科研製薬社製）526mg を加え、
37℃で静置した。65時間後、再びアクチナーゼ-Eを263m
g 加え、更に37℃で24時間静置した。この溶液を凍結乾
燥した後、残留物をゲル濾過カラムクロマトグラフィー
（Sephadex G-25 、2.5 φ×1m、展開溶媒は水、流速は
1.0ml/min・）で２回精製し、目的の図２に示す化合物２
４を1.3g (555 μmol)得た。ＳＧＰに含まれる糖鎖の構
造を以下に示す。
トリス−塩酸・塩化カルシウム緩衝溶液（TRIZMA BASE
0.05mol/l 、塩化カルシウム0.01mol/l 、pH7.5 ）100m
l に溶解させた。これにアジ化ナトリウム58mg (772 μ
mol)とアクチナーゼ-E（科研製薬社製）526mg を加え、
37℃で静置した。65時間後、再びアクチナーゼ-Eを263m
g 加え、更に37℃で24時間静置した。この溶液を凍結乾
燥した後、残留物をゲル濾過カラムクロマトグラフィー
（Sephadex G-25 、2.5 φ×1m、展開溶媒は水、流速は
1.0ml/min・）で２回精製し、目的の図２に示す化合物２
４を1.3g (555 μmol)得た。ＳＧＰに含まれる糖鎖の構
造を以下に示す。
【００８５】
【化２１】
【００８６】また、得られた化合物２４の物理的データ
は以下の通りである。1 H-NMR(D２O、30℃) 5.15 (1H, s, Man4- H１), 5.06 (1H, d, GlcNAc1- H
１), 4.95 (1H, s, Man4'-H１), 4.82 (1H, s, Man3- H
１), 4.69 (1H, d, GlcNAc2- H１), 4.67 (2H, d,GlcNA
c5, 5'- H１), 4.53 (2H, d, Gal6, 6'- H１), 4.34
(1H, d, Man3- H２), 4.27 (1H, d, Man4'- H２)， 4.1
9 (1H, d, Man4- H２), 3.03 (1H, dd, Asn-βCH), 3.0
0 (1H, dd, Asn- βCH), 2.76 (2H,dd, NeuAc7, 7'- H
３ｅｑ), 2.15 (18H, s ×6, -Ac), 1.79 (2H, dd, Neu
Ac7, 7'-H３ａｘ)
は以下の通りである。1 H-NMR(D２O、30℃) 5.15 (1H, s, Man4- H１), 5.06 (1H, d, GlcNAc1- H
１), 4.95 (1H, s, Man4'-H１), 4.82 (1H, s, Man3- H
１), 4.69 (1H, d, GlcNAc2- H１), 4.67 (2H, d,GlcNA
c5, 5'- H１), 4.53 (2H, d, Gal6, 6'- H１), 4.34
(1H, d, Man3- H２), 4.27 (1H, d, Man4'- H２)， 4.1
9 (1H, d, Man4- H２), 3.03 (1H, dd, Asn-βCH), 3.0
0 (1H, dd, Asn- βCH), 2.76 (2H,dd, NeuAc7, 7'- H
３ｅｑ), 2.15 (18H, s ×6, -Ac), 1.79 (2H, dd, Neu
Ac7, 7'-H３ａｘ)
【００８７】実施例２ 化合物１、２、６および１０の
合成 実施例１で得られた化合物２４（609mg, 261μmol）を
水20.7mlに溶解させ、さらに0.1 規定塩酸13.8mlを加え
た。この溶液を70℃で35分間加熱した後速やかに氷冷
し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加えpH7 とした。
これを凍結乾燥した後、残留物をゲル濾過カラムクロマ
トグラフィー（Sephadex G-25 、2.5 φ×1m、展開溶媒
は水、流速は1.0ml/min・）で精製したところ、図２に示
す化合物２４、化合物２５および２９、化合物３３の混
合物534mg を得た。この4 成分はそれぞれを単離するこ
となく次の工程に進めた。
合成 実施例１で得られた化合物２４（609mg, 261μmol）を
水20.7mlに溶解させ、さらに0.1 規定塩酸13.8mlを加え
た。この溶液を70℃で35分間加熱した後速やかに氷冷
し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液を加えpH7 とした。
これを凍結乾燥した後、残留物をゲル濾過カラムクロマ
トグラフィー（Sephadex G-25 、2.5 φ×1m、展開溶媒
は水、流速は1.0ml/min・）で精製したところ、図２に示
す化合物２４、化合物２５および２９、化合物３３の混
合物534mg を得た。この4 成分はそれぞれを単離するこ
となく次の工程に進めた。
【００８８】なお、得られた糖鎖混合物の物理的データ
は以下の通りである。1 H-NMR (D２O 、30℃) 5.13 (s, Man4-H１), 5.12 (s, Man4- H１), 5.01 (d,
GlcNAc1- H１ ), 4.94 (s, Man4'- H１ ), 4.93 (s, Ma
n4'- H１ ), 4.82 (s, Man3- H１), 4.60 (d, GlcNAc2-
H１ ), 4.58 (d, GlcNAc5, 5'- H１ ), 4.47 (dd, Ga
l6, 6' - H１ ),4.44 (d, Gal6, 6'- H１ ), 4.24 (d,
Man3- H２ ), 4.19 (d, Man4'- H２ ) ，4.11 (d, Man4
- H２ ), 2.97 (bdd, Asn-βCH), 2.72(dd, NeuAc7- H
３ｅｑ, NeuAc7- H３ｅｑ), 2.64 (bdd, Asn-βCH), 2.
15 (s×5, -Ac), 1.79 (dd, NeuAc7- H３ａｘ , NeuAc
7'- H３ａｘ )
は以下の通りである。1 H-NMR (D２O 、30℃) 5.13 (s, Man4-H１), 5.12 (s, Man4- H１), 5.01 (d,
GlcNAc1- H１ ), 4.94 (s, Man4'- H１ ), 4.93 (s, Ma
n4'- H１ ), 4.82 (s, Man3- H１), 4.60 (d, GlcNAc2-
H１ ), 4.58 (d, GlcNAc5, 5'- H１ ), 4.47 (dd, Ga
l6, 6' - H１ ),4.44 (d, Gal6, 6'- H１ ), 4.24 (d,
Man3- H２ ), 4.19 (d, Man4'- H２ ) ，4.11 (d, Man4
- H２ ), 2.97 (bdd, Asn-βCH), 2.72(dd, NeuAc7- H
３ｅｑ, NeuAc7- H３ｅｑ), 2.64 (bdd, Asn-βCH), 2.
15 (s×5, -Ac), 1.79 (dd, NeuAc7- H３ａｘ , NeuAc
7'- H３ａｘ )
【００８９】得られた糖鎖の混合物429mg をアセトン1
6.3mlと水11.2mlに溶解させた。ここに９−フルオレニ
ルメチル-N- スクシニミヂルカーボネート（155.7mg ，
461.7μmol）と炭酸水素ナトリウム（80.4mg，957 μmo
l）を加え、室温で２時間攪拌した。この溶液をエバポ
レーターに供してアセトンを除き、残りの溶液をゲル濾
過カラムクロマトグラフィー（Sephadex G-25 、2.5 φ
×1m、展開溶媒は水、流速は1.0ml/min・）で精製したと
ころ、図１に示す化合物１、化合物２および６、化合物
１０の混合物309mg が得られた。この混合物をＨＰＬＣ
（ODS カラム、展開溶媒は50mM酢酸アンモニウム水溶
液：メタノール＝65：35、2.0 φ×25cm、流速3ml/min
）を用いて精製したところ、51分後に化合物１が、67
分後に化合物２および６の混合物が、93分後に化合物１
０が溶出した。それぞれを取り分け凍結乾燥を行った
後、ゲル濾過カラムクロマトグラフィー（Sephadex G-2
5 、2.5 φ×30cm、展開溶媒は水、流速は1.0ml/min・）
で脱塩することで目的の化合物２および６の混合物150m
g を得た。
6.3mlと水11.2mlに溶解させた。ここに９−フルオレニ
ルメチル-N- スクシニミヂルカーボネート（155.7mg ，
461.7μmol）と炭酸水素ナトリウム（80.4mg，957 μmo
l）を加え、室温で２時間攪拌した。この溶液をエバポ
レーターに供してアセトンを除き、残りの溶液をゲル濾
過カラムクロマトグラフィー（Sephadex G-25 、2.5 φ
×1m、展開溶媒は水、流速は1.0ml/min・）で精製したと
ころ、図１に示す化合物１、化合物２および６、化合物
１０の混合物309mg が得られた。この混合物をＨＰＬＣ
（ODS カラム、展開溶媒は50mM酢酸アンモニウム水溶
液：メタノール＝65：35、2.0 φ×25cm、流速3ml/min
）を用いて精製したところ、51分後に化合物１が、67
分後に化合物２および６の混合物が、93分後に化合物１
０が溶出した。それぞれを取り分け凍結乾燥を行った
後、ゲル濾過カラムクロマトグラフィー（Sephadex G-2
5 、2.5 φ×30cm、展開溶媒は水、流速は1.0ml/min・）
で脱塩することで目的の化合物２および６の混合物150m
g を得た。
【００９０】なお、得られた化合物１の物理的データは
以下の通りである。1 H-NMR (D２O 、30℃) 7.99 (2H, d, Fmoc), 7.79 (2H, d, Fmoc), 7.55 (4H,
m, Fmoc), 5.15 (1H, s,Man4- H１), 5.06 (1H, d, Glc
NAc1- H１), 4.95 (1H, s, Man4'-H１), 4.82 (1H, s,
Man3- H１), 4.69 (1H, d, GlcNAc2- H１), 4.67 (2H,
d, GlcNAc5, 5'-H１), 4.53 (2H, d, Gal6, 6'- H１),
4.34 (1H, d, Man3- H２), 4.27 (1H, d, Man4'- H
２)， 4.19 (1H, d, Man4- H２), 3.03 (1H, bdd, Asn-
βCH), 3.00(1H, bdd, Asn-βCH), 2.76 (2H, dd, Neu
Ac7, 7'- H３ｅｑ ), 2.15 (18H, s×6, -Ac), 1.79 (2
H, dd, NeuAc7, 7'-H３ａｘ)；HRMS Calcd for C103H
154N8NaO66[M＋Na+] 2581.8838, found 2581.8821.
以下の通りである。1 H-NMR (D２O 、30℃) 7.99 (2H, d, Fmoc), 7.79 (2H, d, Fmoc), 7.55 (4H,
m, Fmoc), 5.15 (1H, s,Man4- H１), 5.06 (1H, d, Glc
NAc1- H１), 4.95 (1H, s, Man4'-H１), 4.82 (1H, s,
Man3- H１), 4.69 (1H, d, GlcNAc2- H１), 4.67 (2H,
d, GlcNAc5, 5'-H１), 4.53 (2H, d, Gal6, 6'- H１),
4.34 (1H, d, Man3- H２), 4.27 (1H, d, Man4'- H
２)， 4.19 (1H, d, Man4- H２), 3.03 (1H, bdd, Asn-
βCH), 3.00(1H, bdd, Asn-βCH), 2.76 (2H, dd, Neu
Ac7, 7'- H３ｅｑ ), 2.15 (18H, s×6, -Ac), 1.79 (2
H, dd, NeuAc7, 7'-H３ａｘ)；HRMS Calcd for C103H
154N8NaO66[M＋Na+] 2581.8838, found 2581.8821.
【００９１】また、得られた化合物２および６の混合物
の物理的データは以下の通りである。1 H-NMR (D２O 、30℃) 7.99 (d, Fmoc), 7.79 (d, Fmoc), 7.55 (m, Fmoc), 5.
14(s,Man4-H１), 5.12 (s, Man4- H), 5.00 (d, GlcNAc
1- H１), 4.94 (s, Man4'- H１ ), 4.93 (s, Man4'- H
１ ), 4.82 (s, Man3- H１), 4.60 (d, GlcNAc2- H１
), 4.58 (d, GlcNAc5, 5'- H１ ), 4.46 (dd, Gal6,
6' - H１), 4.44 (d, Gal6, 6'- H１), 4.24 (d, Man3-
H２), 4.19 (d, Man4'- H２ ) ，4.11 (d, Man4- H２
), 2.97 (bdd,Asn-βCH), 2.72 (dd, NeuAc7- H３ｅｑ
, NeuAc7- H３ｅｑ), 2.64 (bdd, Asn-βCH), 2.15 (s
×5, -Ac), 1.79 (dd, NeuAc7- H３ａｘ ， NeuAc7'- H
３ａｘ )
の物理的データは以下の通りである。1 H-NMR (D２O 、30℃) 7.99 (d, Fmoc), 7.79 (d, Fmoc), 7.55 (m, Fmoc), 5.
14(s,Man4-H１), 5.12 (s, Man4- H), 5.00 (d, GlcNAc
1- H１), 4.94 (s, Man4'- H１ ), 4.93 (s, Man4'- H
１ ), 4.82 (s, Man3- H１), 4.60 (d, GlcNAc2- H１
), 4.58 (d, GlcNAc5, 5'- H１ ), 4.46 (dd, Gal6,
6' - H１), 4.44 (d, Gal6, 6'- H１), 4.24 (d, Man3-
H２), 4.19 (d, Man4'- H２ ) ，4.11 (d, Man4- H２
), 2.97 (bdd,Asn-βCH), 2.72 (dd, NeuAc7- H３ｅｑ
, NeuAc7- H３ｅｑ), 2.64 (bdd, Asn-βCH), 2.15 (s
×5, -Ac), 1.79 (dd, NeuAc7- H３ａｘ ， NeuAc7'- H
３ａｘ )
【００９２】また、得られた化合物１０の物理的データ
は以下の通りである。1 H-NMR (D２O 、30℃) 7.99 (2H, d, Fmoc), 7.79 (2H, d, Fmoc), 7.55 (4H,
m, Fmoc), 5.12 (1H, s,Man4- H１), 5.06 (1H, d, Glc
NAc1- H１), 4.93 (1H, s, Man4'- H１), 4.82(1H, s,
Man3- H１), 4.69 (1H, d, GlcNAc2- H１), 4.67 (2H,
d, GlcNAc5, 5'- H１), 4.53 (2H, d, Gal6, 6'- H
１), 4.34 (1H, d, Man3- H２), 4.27 (1H,d, Man4'- H
２)， 4.19 (1H, d, Man4- H２), 3.03 (1H, bdd, Asn-
βCH), 3.00 (1H, bdd, Asn-βCH), 2.15 (12H, s ×
4, -Ac)；HRMS Calcd for C81H120N6NaO50[M＋Na+] 199
9.6930, found 1999.6939.
は以下の通りである。1 H-NMR (D２O 、30℃) 7.99 (2H, d, Fmoc), 7.79 (2H, d, Fmoc), 7.55 (4H,
m, Fmoc), 5.12 (1H, s,Man4- H１), 5.06 (1H, d, Glc
NAc1- H１), 4.93 (1H, s, Man4'- H１), 4.82(1H, s,
Man3- H１), 4.69 (1H, d, GlcNAc2- H１), 4.67 (2H,
d, GlcNAc5, 5'- H１), 4.53 (2H, d, Gal6, 6'- H
１), 4.34 (1H, d, Man3- H２), 4.27 (1H,d, Man4'- H
２)， 4.19 (1H, d, Man4- H２), 3.03 (1H, bdd, Asn-
βCH), 3.00 (1H, bdd, Asn-βCH), 2.15 (12H, s ×
4, -Ac)；HRMS Calcd for C81H120N6NaO50[M＋Na+] 199
9.6930, found 1999.6939.
【００９３】実施例３ 化合物３および７の合成
実施例２で得られた化合物２および６の混合物（224mg
，97μmol)とウシ血清アルブミン24mgをHEPES 緩衝溶
液（50mM,pH6.0）22mlに溶解させ、さらにDiplococcus
pneumoniae由来β- ガラクトシダーゼ(1.35U) を加え
た。この溶液を37℃で15時間静置した後、凍結乾燥を行
った。残留物をＨＰＬＣ(ODSカラム、2.0 φ×25cm、展
開溶媒は50mM酢酸アンモニウム水溶液：アセトニトリル
＝85：15、流速3ml/min)で精製したところ、129 分後に
図１に示す化合物３が、134 分後に化合物７が溶出し
た。それぞれを取り分け、凍結乾燥を行った。続いてＨ
ＰＬＣ(ODSカラム、2.0 φ×25cm、展開溶媒は最初の15
分間が水、16分後から30分後までは水：アセトニトリル
（容量比）＝10：0 から85：15、31分後から45分後まで
は水：アセトニトリル＝85：15から80：20になるように
グラジエントを掛けた。流速は3.0ml/min・) を用いて脱
塩処理を行ったところ、目的とする化合物３が81mg、化
合物７が75mg得られた。
，97μmol)とウシ血清アルブミン24mgをHEPES 緩衝溶
液（50mM,pH6.0）22mlに溶解させ、さらにDiplococcus
pneumoniae由来β- ガラクトシダーゼ(1.35U) を加え
た。この溶液を37℃で15時間静置した後、凍結乾燥を行
った。残留物をＨＰＬＣ(ODSカラム、2.0 φ×25cm、展
開溶媒は50mM酢酸アンモニウム水溶液：アセトニトリル
＝85：15、流速3ml/min)で精製したところ、129 分後に
図１に示す化合物３が、134 分後に化合物７が溶出し
た。それぞれを取り分け、凍結乾燥を行った。続いてＨ
ＰＬＣ(ODSカラム、2.0 φ×25cm、展開溶媒は最初の15
分間が水、16分後から30分後までは水：アセトニトリル
（容量比）＝10：0 から85：15、31分後から45分後まで
は水：アセトニトリル＝85：15から80：20になるように
グラジエントを掛けた。流速は3.0ml/min・) を用いて脱
塩処理を行ったところ、目的とする化合物３が81mg、化
合物７が75mg得られた。
【００９４】なお、得られた化合物３の物理的データは
以下の通りである。1 H-NMR (D２O 、30℃) 7.99 (2H, d, Fmoc), 7.79 (2H, d, Fmoc), 7.55 (4H,
m, Fmoc), 5.15 (1H, S,Man4-H１), 5.06 (1H, d, GlcN
Ac1-H１), 4.95 (1H, s, Man4'-H１), 4.82 (1H, s, Ma
n3-H１), 4.69 (1H, d, GlcNAc2-H１), 4.67 (2H, d, G
lcNAc5,5'-H１),4.53 (1H, d, Gal6'-H１), 4.34 (1H,
d, Man3-H２), 4.27 (1H, d, Man4'-H２)， 4.19 (1H,
d, Man4-H２), 2.97 (1H, bdd, Asn-βCH), 2.76 (1H,
dd, NeuAc7'-H３ｅｑ ), 2.61 (1H, bdd, Asn-βCH),
2.15 (15H, s ×5, -Ac), 1.79 (1H, dd, NeuAc7'-H３
ａｘ )；HRMS Calcd for C86H127N7NaO53 [M＋Na+] 212
8.7356, found 2128.7363.
以下の通りである。1 H-NMR (D２O 、30℃) 7.99 (2H, d, Fmoc), 7.79 (2H, d, Fmoc), 7.55 (4H,
m, Fmoc), 5.15 (1H, S,Man4-H１), 5.06 (1H, d, GlcN
Ac1-H１), 4.95 (1H, s, Man4'-H１), 4.82 (1H, s, Ma
n3-H１), 4.69 (1H, d, GlcNAc2-H１), 4.67 (2H, d, G
lcNAc5,5'-H１),4.53 (1H, d, Gal6'-H１), 4.34 (1H,
d, Man3-H２), 4.27 (1H, d, Man4'-H２)， 4.19 (1H,
d, Man4-H２), 2.97 (1H, bdd, Asn-βCH), 2.76 (1H,
dd, NeuAc7'-H３ｅｑ ), 2.61 (1H, bdd, Asn-βCH),
2.15 (15H, s ×5, -Ac), 1.79 (1H, dd, NeuAc7'-H３
ａｘ )；HRMS Calcd for C86H127N7NaO53 [M＋Na+] 212
8.7356, found 2128.7363.
【００９５】また、得られた化合物７の物理的データは
以下の通りである。1 H-NMR(D２O、30℃) 7.99 (2H, d, Fmoc), 7.79 (2H, d, Fmoc), 7.55 (4H,
m, Fmoc), 5.15 (1H, S,Man4-H１), 5.06 (1H, d, GlcN
Ac1-H１), 4.95 (1H, s, Man4'-H１), 4.82 (1H, s, Ma
n3-H１), 4.69 (1H, d, GlcNAc2-H１), 4.67 (2H, d, G
lcNAc5,5'-H１),4.53 (1H, d, Gal6-H１), 4.34 (1H,
d, Man3-H２), 4.27 (1H, d, Man4'-H２)， 4.19 (1H,
d, Man4-H２), 2.97 (1H, bdd, Asn-βCH), 2.76 (1H,
dd, NeuAc7-H３ｅｑ), 2.60 (1H,b dd, Asn-βCH), 2.1
5 (15H, s ×5, -Ac), 1.79 (1H,dd, NeuAc7-H３ａ
ｘ)；HRMS Calcd for C86H125N7Na3O53[M＋Na+] 2172.6
995,found 2172.7084.
以下の通りである。1 H-NMR(D２O、30℃) 7.99 (2H, d, Fmoc), 7.79 (2H, d, Fmoc), 7.55 (4H,
m, Fmoc), 5.15 (1H, S,Man4-H１), 5.06 (1H, d, GlcN
Ac1-H１), 4.95 (1H, s, Man4'-H１), 4.82 (1H, s, Ma
n3-H１), 4.69 (1H, d, GlcNAc2-H１), 4.67 (2H, d, G
lcNAc5,5'-H１),4.53 (1H, d, Gal6-H１), 4.34 (1H,
d, Man3-H２), 4.27 (1H, d, Man4'-H２)， 4.19 (1H,
d, Man4-H２), 2.97 (1H, bdd, Asn-βCH), 2.76 (1H,
dd, NeuAc7-H３ｅｑ), 2.60 (1H,b dd, Asn-βCH), 2.1
5 (15H, s ×5, -Ac), 1.79 (1H,dd, NeuAc7-H３ａ
ｘ)；HRMS Calcd for C86H125N7Na3O53[M＋Na+] 2172.6
995,found 2172.7084.
【００９６】実施例４ 化合物４および８の合成
実施例３で得られた化合物３および７の混合物（90mg,4
7.3 μmol)をそれぞれ分離することなく、ウシ血清アル
ブミン8mg と共にHEPES 緩衝溶液（50mM,pH6.0）8.1ml
に溶解させ、さらにBovine kidney 由来β- グルコサミ
ニダーゼ（シグマアルドリッチ社製、from Bovine kidn
ey）を2.88U 加えた。この溶液を37℃で18時間静置した
後凍結乾燥し、残留物をＨＰＬＣ(ODSカラム、2.0 φ×
25cm、展開溶媒は50mM酢酸アンモニウム水溶液：メタノ
ール＝65：35、流速3ml/min)で精製したところ、117 分
後に図１に示す化合物４が、127 分後に化合物８が溶出
した。それぞれを取り分け、凍結乾燥を行った。続いて
ＨＰＬＣ(ODSカラム、2.0φ×25cm、展開溶媒は最初の1
5分間が水、16分後から30分後までは水：アセトニトリ
ル＝10：0 から85：15、31分後から45分後までは水：ア
セトニトリル＝85：15から80：20になるようにグラジエ
ントを掛けた。流速は3.0ml/min・) を用いて脱塩処理を
行ったところ、目的とする化合物４が40mg、化合物８が
37mg得られた。
7.3 μmol)をそれぞれ分離することなく、ウシ血清アル
ブミン8mg と共にHEPES 緩衝溶液（50mM,pH6.0）8.1ml
に溶解させ、さらにBovine kidney 由来β- グルコサミ
ニダーゼ（シグマアルドリッチ社製、from Bovine kidn
ey）を2.88U 加えた。この溶液を37℃で18時間静置した
後凍結乾燥し、残留物をＨＰＬＣ(ODSカラム、2.0 φ×
25cm、展開溶媒は50mM酢酸アンモニウム水溶液：メタノ
ール＝65：35、流速3ml/min)で精製したところ、117 分
後に図１に示す化合物４が、127 分後に化合物８が溶出
した。それぞれを取り分け、凍結乾燥を行った。続いて
ＨＰＬＣ(ODSカラム、2.0φ×25cm、展開溶媒は最初の1
5分間が水、16分後から30分後までは水：アセトニトリ
ル＝10：0 から85：15、31分後から45分後までは水：ア
セトニトリル＝85：15から80：20になるようにグラジエ
ントを掛けた。流速は3.0ml/min・) を用いて脱塩処理を
行ったところ、目的とする化合物４が40mg、化合物８が
37mg得られた。
【００９７】なお、得られた化合物４の物理的データは
以下の通りである。1 H-NMR (D２O 、30℃) 8.01 (2H, d, Fmoc), 7.80 (2H, d, Fmoc), 7.56 (4H,
m, Fmoc), 5.22 (1H, s,Man4-H１), 5.08 (1H, d, GlcN
Ac1-H１), 4.94 (1H, s, Man4'-H１), 4.84 (1H, s, Ma
n3-H１), 4.69 (1H, d, GlcNAc2-H１), 4.67 (1H, d, G
lcNAc5-H１), 4.55 (1H, d, Gal6-H１), 4.33 (1H, dd,
Man3-H２), 4.20 (1H, dd, Man4-H２),4.15 (1H, dd,
Man4'-H２), 2.97 (1H, bdd, Asn-βCH), 2.76 (2H, d
d, NeuAc7,7'-H３ｅｑ ), 2.62 (1H,bdd, Asn- βCH),
2.15 (12H, s ×4, -Ac), 1.79 (2H, dd, NeuAc7, 7'-
H３ａｘ )；HRMS Calcd for C78H114N6NaO48[M＋Na+] 1
925.6562, found 1925.6539.
以下の通りである。1 H-NMR (D２O 、30℃) 8.01 (2H, d, Fmoc), 7.80 (2H, d, Fmoc), 7.56 (4H,
m, Fmoc), 5.22 (1H, s,Man4-H１), 5.08 (1H, d, GlcN
Ac1-H１), 4.94 (1H, s, Man4'-H１), 4.84 (1H, s, Ma
n3-H１), 4.69 (1H, d, GlcNAc2-H１), 4.67 (1H, d, G
lcNAc5-H１), 4.55 (1H, d, Gal6-H１), 4.33 (1H, dd,
Man3-H２), 4.20 (1H, dd, Man4-H２),4.15 (1H, dd,
Man4'-H２), 2.97 (1H, bdd, Asn-βCH), 2.76 (2H, d
d, NeuAc7,7'-H３ｅｑ ), 2.62 (1H,bdd, Asn- βCH),
2.15 (12H, s ×4, -Ac), 1.79 (2H, dd, NeuAc7, 7'-
H３ａｘ )；HRMS Calcd for C78H114N6NaO48[M＋Na+] 1
925.6562, found 1925.6539.
【００９８】また、得られた化合物８の物理的データは
以下の通りである。1 H-NMR (D２O 、30℃) 7.99 (2H ,d, Fmoc), 7.79 (2H, d, Fmoc), 7.55 (4H,
m, Fmoc), 5.15 (1H, S,Man4- H１), 5.06 (1H, d, Glc
NAc1- H１), 4.95 (1H, s, Man4'- H１), 4.82(1H, s,
Man3- H１), 4.69 (1H, d, GlcNAc2- H１), 4.67 (2H,
d, GlcNAc5, 5'- H１), 4.53 (2H, d, Gal6, 6'- H１),
4.34 (1H, d, Man3- H２), 4.27 (1H,d, Man4'- H２),
2.97 (1H, bdd, Asn-βCH２), 2.76 (1H, dd, NeuAc7'
- H３ｅｑ ), 2.61 (1H, bdd, Asn-βCH２), 2.15 (12
H, s×4, -Ac), 1.79 (1H, dd, NeuAc7'- H３ａｘ)；HR
MS Calcd for C78H114N6NaO48[M＋Na+] 1925.6562, fou
nd1925.6533.
以下の通りである。1 H-NMR (D２O 、30℃) 7.99 (2H ,d, Fmoc), 7.79 (2H, d, Fmoc), 7.55 (4H,
m, Fmoc), 5.15 (1H, S,Man4- H１), 5.06 (1H, d, Glc
NAc1- H１), 4.95 (1H, s, Man4'- H１), 4.82(1H, s,
Man3- H１), 4.69 (1H, d, GlcNAc2- H１), 4.67 (2H,
d, GlcNAc5, 5'- H１), 4.53 (2H, d, Gal6, 6'- H１),
4.34 (1H, d, Man3- H２), 4.27 (1H,d, Man4'- H２),
2.97 (1H, bdd, Asn-βCH２), 2.76 (1H, dd, NeuAc7'
- H３ｅｑ ), 2.61 (1H, bdd, Asn-βCH２), 2.15 (12
H, s×4, -Ac), 1.79 (1H, dd, NeuAc7'- H３ａｘ)；HR
MS Calcd for C78H114N6NaO48[M＋Na+] 1925.6562, fou
nd1925.6533.
【００９９】実施例５ 化合物５の合成
実施例４で得られた化合物４（30mg, 473 μmol)とウシ
血清アルブミン3mg をHEPES 緩衝溶液（50mM,pH6.0）6
mlに溶解させ、さらにJack Beans由来α- マンノシダー
ゼを10U 加えた。この溶液を37℃で21時間静置した後凍
結乾燥し、続いてＨＰＬＣ(ODSカラム、2.0 φ×25cm、
展開溶媒は最初の15分間が水、16分後から30分後までは
水：アセトニトリル＝10：0 から85：15、31分後から45
分後までは水：アセトニトリル＝85：15から80：20にな
るようにグラジエントを掛けた。流速は3.0ml/min・) を
用いて精製したところ、目的とする図１に示す化合物５
が20mg得られた。
血清アルブミン3mg をHEPES 緩衝溶液（50mM,pH6.0）6
mlに溶解させ、さらにJack Beans由来α- マンノシダー
ゼを10U 加えた。この溶液を37℃で21時間静置した後凍
結乾燥し、続いてＨＰＬＣ(ODSカラム、2.0 φ×25cm、
展開溶媒は最初の15分間が水、16分後から30分後までは
水：アセトニトリル＝10：0 から85：15、31分後から45
分後までは水：アセトニトリル＝85：15から80：20にな
るようにグラジエントを掛けた。流速は3.0ml/min・) を
用いて精製したところ、目的とする図１に示す化合物５
が20mg得られた。
【０１００】なお、得られた化合物５の物理的データは
以下の通りである。1 H-NMR (D２O 、30℃) 8.01 (2H, d, Fmoc), 7.80 (2H, d, Fmoc), 7.56 (4H,
m, Fmoc), 5.00 (1H, d,GlcNAc1-H１), 4.95 (1H, s, M
an4'-H１), 4.84 (1H, s, Man3-H１), 4.67 (1H, d, Gl
cNAc2-H１), 4.56 (1H, d, GlcNAc5-H１), 4.44 (1H,
d, Gal6-H１), 4.11 (1H, dd, Man4'-H２), 4.07 (1H,
dd, Man3-H２), 2.97 (1H, bdd, Asn-βCH), 2.76 (1H,
dd, NeuAc7'-H３ｅｑ ), 2.62 (1H, bdd, Asn-βCH),
2.15 (12H,s ×4, -Ac), 1.79 (2H, dd, NeuAc7'- H３
ａｘ )；HRMS Calcd for C72H104N6NaO43[M＋Na+] 176
3.6034, found 1763.6074.
以下の通りである。1 H-NMR (D２O 、30℃) 8.01 (2H, d, Fmoc), 7.80 (2H, d, Fmoc), 7.56 (4H,
m, Fmoc), 5.00 (1H, d,GlcNAc1-H１), 4.95 (1H, s, M
an4'-H１), 4.84 (1H, s, Man3-H１), 4.67 (1H, d, Gl
cNAc2-H１), 4.56 (1H, d, GlcNAc5-H１), 4.44 (1H,
d, Gal6-H１), 4.11 (1H, dd, Man4'-H２), 4.07 (1H,
dd, Man3-H２), 2.97 (1H, bdd, Asn-βCH), 2.76 (1H,
dd, NeuAc7'-H３ｅｑ ), 2.62 (1H, bdd, Asn-βCH),
2.15 (12H,s ×4, -Ac), 1.79 (2H, dd, NeuAc7'- H３
ａｘ )；HRMS Calcd for C72H104N6NaO43[M＋Na+] 176
3.6034, found 1763.6074.
【０１０１】実施例６ 化合物９の合成
実施例4 で得られた化合物８(40 mg, 630 μmol)とウシ
血清アルブミン5 mgをHEPES 緩衝溶液（50mM,pH6.0）7.
8 mlに溶解させ、Jack Beans由来α- マンノシダーゼを
38 U加えた。この溶液を37℃で63時間静置した後凍結乾
燥し、続いてＨＰＬＣＣ(ODSカラム、2.0 φ×25cm、展
開溶媒は最初の15分間が水、16分後から30分後までは
水：アセトニトリル＝10:0から85：15、31分後から４５
分後までは85:15 から80:20 になるようにグラジエント
を掛けた。流速は3.0 ml/min) を用いて精製したとこ
ろ、目的とする化合物９が30 mg 得られた。
血清アルブミン5 mgをHEPES 緩衝溶液（50mM,pH6.0）7.
8 mlに溶解させ、Jack Beans由来α- マンノシダーゼを
38 U加えた。この溶液を37℃で63時間静置した後凍結乾
燥し、続いてＨＰＬＣＣ(ODSカラム、2.0 φ×25cm、展
開溶媒は最初の15分間が水、16分後から30分後までは
水：アセトニトリル＝10:0から85：15、31分後から４５
分後までは85:15 から80:20 になるようにグラジエント
を掛けた。流速は3.0 ml/min) を用いて精製したとこ
ろ、目的とする化合物９が30 mg 得られた。
【０１０２】なお、得られた化合物９の物理的データは
以下の通りである。1 H-NMR (D２O 、30℃) 8.01 (2H, d, Fmoc), 7.80 (2H, d, Fmoc), 7.56 (4H,
m, Fmoc), 5.23(1H, s,Man4-H１), 5.08 (1H, d, GlcNA
c1-H１), 4.53 (1H, d, Gal6-H１), 4.32 (1H,dd, Man3
-H２), 4.28 (1H, dd, Man4-H２), 2.81 (1H, bdd, Asn
-βCH), 2.76 (1H, dd, NeuAc7-H３ｅｑ), 2.59 (1H, b
dd, Asn-βCH), 2.13 (12H, s ×4, -Ac), 1.80 (1H, d
d, NeuAc7H３ａｘ )；HRMS Calcd for C72H104N6NaO
43[M＋Na+]1763.6034, found 1763.6041.
以下の通りである。1 H-NMR (D２O 、30℃) 8.01 (2H, d, Fmoc), 7.80 (2H, d, Fmoc), 7.56 (4H,
m, Fmoc), 5.23(1H, s,Man4-H１), 5.08 (1H, d, GlcNA
c1-H１), 4.53 (1H, d, Gal6-H１), 4.32 (1H,dd, Man3
-H２), 4.28 (1H, dd, Man4-H２), 2.81 (1H, bdd, Asn
-βCH), 2.76 (1H, dd, NeuAc7-H３ｅｑ), 2.59 (1H, b
dd, Asn-βCH), 2.13 (12H, s ×4, -Ac), 1.80 (1H, d
d, NeuAc7H３ａｘ )；HRMS Calcd for C72H104N6NaO
43[M＋Na+]1763.6034, found 1763.6041.
【０１０３】実施例７ Ｆｍｏｃ基の脱保護（化合物３
３の合成） 実施例２で得られた化合物１０（10.5mg，5.27μmol)を
50％モルホリン／N,N-ジメチルホルムアミド溶液1.4ml
に溶解させ、室温・アルゴン雰囲気下で2 時間反応させ
た。この溶液にトルエン3ml を加え、35℃でエバポレー
ターに供した。この操作を三回繰り返し、反応溶媒を取
り除いた。残留物をゲル濾過カラムクロマトグラフィー
（Sephadex G-25 、2.5 φ×30cm、展開溶媒は水、流速
は1.0ml/min・）で精製したところ、目的とする図２に示
す化合物３３が7mg 得られた（収率は76％）。なお、得
られた化合物の構造は、実施例２から得られる化合物３
３と1H-NMRスペクトルが一致したことから確認した。
３の合成） 実施例２で得られた化合物１０（10.5mg，5.27μmol)を
50％モルホリン／N,N-ジメチルホルムアミド溶液1.4ml
に溶解させ、室温・アルゴン雰囲気下で2 時間反応させ
た。この溶液にトルエン3ml を加え、35℃でエバポレー
ターに供した。この操作を三回繰り返し、反応溶媒を取
り除いた。残留物をゲル濾過カラムクロマトグラフィー
（Sephadex G-25 、2.5 φ×30cm、展開溶媒は水、流速
は1.0ml/min・）で精製したところ、目的とする図２に示
す化合物３３が7mg 得られた（収率は76％）。なお、得
られた化合物の構造は、実施例２から得られる化合物３
３と1H-NMRスペクトルが一致したことから確認した。
【０１０４】化合物３３の物理的データは以下の通りで
ある。1 H-NMR (30℃) δ5.12 (s, 1H, Man4-H-1), 5.07 (d, 1H, J = 9.7 Hz,
GlcNAc1- H-1), 4.92 (s, 1H, Man4'-H-1), 4.76 (s,
1H, Man3-H-1), 4.62 (d, 1H, J = 8.0 Hz, GlcNAc2-H-
1), 4.58 (d, 2H, J = 7.8 Hz, GlcNAc5,5'-H-1), 4.47
(d, 2H, J = 7.9Hz, Gal6,6'-H-1), 4.24 (bd, 1H, Ma
n3-H-2), 4.19 (bdd, 1H, J = 3.2 Hz, 1.4 Hz, Man4'-
H-2), 4.12 (bdd, 1H, J = 3.2 Hz, 1.4 Hz, Man4-H-
2), 2.93 (dd, 1H, J = 4.5 Hz, 17.0 Hz, Asn-βCH),
2.93 (dd, 1H, J = 6.8 Hz, 17.0 Hz, Asn-βCH), 2.08
(s, 3H, Ac), 2.05 (s, 6H, Ac×2), 2.01 (s, 3H, A
c)
ある。1 H-NMR (30℃) δ5.12 (s, 1H, Man4-H-1), 5.07 (d, 1H, J = 9.7 Hz,
GlcNAc1- H-1), 4.92 (s, 1H, Man4'-H-1), 4.76 (s,
1H, Man3-H-1), 4.62 (d, 1H, J = 8.0 Hz, GlcNAc2-H-
1), 4.58 (d, 2H, J = 7.8 Hz, GlcNAc5,5'-H-1), 4.47
(d, 2H, J = 7.9Hz, Gal6,6'-H-1), 4.24 (bd, 1H, Ma
n3-H-2), 4.19 (bdd, 1H, J = 3.2 Hz, 1.4 Hz, Man4'-
H-2), 4.12 (bdd, 1H, J = 3.2 Hz, 1.4 Hz, Man4-H-
2), 2.93 (dd, 1H, J = 4.5 Hz, 17.0 Hz, Asn-βCH),
2.93 (dd, 1H, J = 6.8 Hz, 17.0 Hz, Asn-βCH), 2.08
(s, 3H, Ac), 2.05 (s, 6H, Ac×2), 2.01 (s, 3H, A
c)
【０１０５】実施例８ 化合物14の合成
化合物3(28mg, 21.3μmol)とウシ血清アルブミン1.0mg
をHEPES緩衝溶液（50mM, pH5.0, 454μL）に溶解させ、
ノイラミニダーゼ（シグマアルドリッチ社製、from Vib
lio Cholerae, 198mU）を加えた。この溶液を37℃で20
時間静置した後、HPLC分析により反応終了を確認した。
反応溶液をHPLC(YMC Packed Column D-ODS-5 S-5 120A
ODS No.2020178、20×250mm、展開溶媒は50mM酢酸アン
モニウム水溶液：アセトニトリル＝80：20、流速4mL/mi
n)で精製した。更にODSカラム(コスモシール75C18-OP
N、15×100mm、最初にH2Oを50mL流し、次に25％アセト
ニトリルを流して溶出させた)で脱塩したところ、目的
とする化合物14(17mg, 収率70％)が得られた。得られた
化合物の物理的データは以下の通りである。
をHEPES緩衝溶液（50mM, pH5.0, 454μL）に溶解させ、
ノイラミニダーゼ（シグマアルドリッチ社製、from Vib
lio Cholerae, 198mU）を加えた。この溶液を37℃で20
時間静置した後、HPLC分析により反応終了を確認した。
反応溶液をHPLC(YMC Packed Column D-ODS-5 S-5 120A
ODS No.2020178、20×250mm、展開溶媒は50mM酢酸アン
モニウム水溶液：アセトニトリル＝80：20、流速4mL/mi
n)で精製した。更にODSカラム(コスモシール75C18-OP
N、15×100mm、最初にH2Oを50mL流し、次に25％アセト
ニトリルを流して溶出させた)で脱塩したところ、目的
とする化合物14(17mg, 収率70％)が得られた。得られた
化合物の物理的データは以下の通りである。
【０１０６】1H-NMR (30℃)
δ7.91 (d, 2H, J = 7.5 Hz, Fmoc), 7.71 (d, 2H, J =
7.5 Hz, Fmoc), 7.51 (dd, 2H, J = 7.5 Hz, Fmoc),
7.43 (dd, 2H, J = 7.5 Hz, Fmoc),5.12 (s, 1H,Man4-H
-1), 4.99 (d, 1H, J = 9.5 Hz, GlcNAc1-H-1), 4.92
(s, 1H, Man4'-H-1), 4.76 (s, 1H, Man3-H-1), 4.58
(d, 1H, J = 8.0 Hz, GlcNAc2-H-1), 4.55 (d, 1H, J =
8.4 Hz, GlcNAc5'-H-1), 4.47 (d, 1H, J = 7.8 Hz, G
al6'-H-1), 4.34 (t, 1H, Fmoc), 4.24 (bd, 1H, J =
1.9 Hz Man3-H-2), 4.18 (bdd, 1H, J= 1.4 Hz, 3.3 H
z, Man4-H-2), 4.11 (bdd, 1H, J = 1.4 Hz, 3.5 Hz, M
an4'-H-2), 2.72 (bdd, 1H, J = 3.0 Hz, 15.7 Hz, Asn
-βCH), 2.52 (bdd, 1H, J = 8.7 Hz, 15.7 Hz, Asn-β
CH), 2.06, 2.05, 2.04, 1.89 (each s, each 3H, Ac);
HRMS Calcd for C75H110N6NaO45[M＋Na+] 1837.6402,
found 1837.6471
7.5 Hz, Fmoc), 7.51 (dd, 2H, J = 7.5 Hz, Fmoc),
7.43 (dd, 2H, J = 7.5 Hz, Fmoc),5.12 (s, 1H,Man4-H
-1), 4.99 (d, 1H, J = 9.5 Hz, GlcNAc1-H-1), 4.92
(s, 1H, Man4'-H-1), 4.76 (s, 1H, Man3-H-1), 4.58
(d, 1H, J = 8.0 Hz, GlcNAc2-H-1), 4.55 (d, 1H, J =
8.4 Hz, GlcNAc5'-H-1), 4.47 (d, 1H, J = 7.8 Hz, G
al6'-H-1), 4.34 (t, 1H, Fmoc), 4.24 (bd, 1H, J =
1.9 Hz Man3-H-2), 4.18 (bdd, 1H, J= 1.4 Hz, 3.3 H
z, Man4-H-2), 4.11 (bdd, 1H, J = 1.4 Hz, 3.5 Hz, M
an4'-H-2), 2.72 (bdd, 1H, J = 3.0 Hz, 15.7 Hz, Asn
-βCH), 2.52 (bdd, 1H, J = 8.7 Hz, 15.7 Hz, Asn-β
CH), 2.06, 2.05, 2.04, 1.89 (each s, each 3H, Ac);
HRMS Calcd for C75H110N6NaO45[M＋Na+] 1837.6402,
found 1837.6471
【０１０７】実施例９ 化合物19の合成
化合物7(20mg, 9.4μmol)とウシ血清アルブミン1.6mgを
HEPES緩衝溶液（50mM,pH5.0, 323μL）に溶解させ、ノ
イラミニダーゼ（シグマアルドリッチ社製、from Vibli
o Cholerae, 141mU）を加えた。この溶液を37℃で18時
間静置した後、HPLC分析により反応終了を確認した。続
いてHPLC(YMC Packed Column D-ODS-5 S-5 120A ODS
No.2020178、20×250mm、展開溶媒は50mM酢酸アンモニ
ウム水溶液：アセトニトリル＝80：20、流速4mL/min)で
精製した。更にODSカラム(コスモシール75C18-OPN、15
×100mm、最初にH2Oを50mL流し、次に25％アセトニトリ
ルを流して溶出させた)で脱塩したところ、目的とする
化合物19(13mg, 収率76％)を得た。得られた化合物の構
造は1H-NMRが標品と一致したことから確認した。
HEPES緩衝溶液（50mM,pH5.0, 323μL）に溶解させ、ノ
イラミニダーゼ（シグマアルドリッチ社製、from Vibli
o Cholerae, 141mU）を加えた。この溶液を37℃で18時
間静置した後、HPLC分析により反応終了を確認した。続
いてHPLC(YMC Packed Column D-ODS-5 S-5 120A ODS
No.2020178、20×250mm、展開溶媒は50mM酢酸アンモニ
ウム水溶液：アセトニトリル＝80：20、流速4mL/min)で
精製した。更にODSカラム(コスモシール75C18-OPN、15
×100mm、最初にH2Oを50mL流し、次に25％アセトニトリ
ルを流して溶出させた)で脱塩したところ、目的とする
化合物19(13mg, 収率76％)を得た。得られた化合物の構
造は1H-NMRが標品と一致したことから確認した。
【０１０８】実施例１０ 化合物15の合成
化合物4(45mg, 24μmol)とウシ血清アルブミン1.7mgをH
EPES緩衝溶液（50mM,pH5.0, 820μL）に溶解させ、ノイ
ラミニダーゼ（シグマアルドリッチ社製、from Viblio
Cholerae, 134mU）を加えた。この溶液を37℃で14時間
静置した後、HPLC分析により反応終了を確認した。続い
て、反応溶液をHPLC(YMC Packed ColumnD-ODS-5 S-5 12
0A ODS No.2020178、20×250mm、展開溶媒は50mM酢酸ア
ンモニウム水溶液：アセトニトリル＝80：20、流速4mL/
min)で精製した。更にODSカラム(コスモシール75C18-OP
N、15×100mm、最初にH2Oを50mL流し、次に25％アセト
ニトリルを流して溶出させた)で脱塩したところ、目的
とする化合物15(28mg, 収率74%)が得られた。得られた
化合物の物理的データは以下の通りである。
EPES緩衝溶液（50mM,pH5.0, 820μL）に溶解させ、ノイ
ラミニダーゼ（シグマアルドリッチ社製、from Viblio
Cholerae, 134mU）を加えた。この溶液を37℃で14時間
静置した後、HPLC分析により反応終了を確認した。続い
て、反応溶液をHPLC(YMC Packed ColumnD-ODS-5 S-5 12
0A ODS No.2020178、20×250mm、展開溶媒は50mM酢酸ア
ンモニウム水溶液：アセトニトリル＝80：20、流速4mL/
min)で精製した。更にODSカラム(コスモシール75C18-OP
N、15×100mm、最初にH2Oを50mL流し、次に25％アセト
ニトリルを流して溶出させた)で脱塩したところ、目的
とする化合物15(28mg, 収率74%)が得られた。得られた
化合物の物理的データは以下の通りである。
【０１０９】1H-NMR (30℃)
δ7.92 (d, 2H, J = 7.5 Hz, Fmoc), 7.71 (d, 2H, J =
7.5 Hz, Fmoc), 7.51 (dd, 2H, J = 7.5 Hz, Fmoc),
7.44 (dd, 2H, J = 7.5 Hz, Fmoc), 5.10 (s, 1H,Man4-
H-1), 4.99 (d, 1H, J = 9.5 Hz, GlcNAc1-H-1), 4.92
(s, 1H, Man4'-H-1), 4.76 (s, 1H, Man3-H-1) 4.58
(d, 2H, GlcNAc2,5'-H-1), 4.47 (d, 1H, J= 8.0 Hz, G
al6'-H-1), 4.35 (t, 1H, Fmoc), 4.24 (bd, 1H, J =
1.9 Hz, Man3-H-2), 4.11 (bs, 1H, Man4'-H-2), 4.07
(bs, 1H, Man4-H-2), 2.72 (bd, 1H,J = 15.5 Hz, Asn
-βCH), 2.52 (bdd, 1H, J = 8.7 Hz, 15.5 Hz, Asn-β
CH),2.06, 2.04, 1.89 (each s, each 3H, Ac); HRMS C
alcd for C67H97N5NaO40[M＋Na+] 1634.5608, found 16
34.5564
7.5 Hz, Fmoc), 7.51 (dd, 2H, J = 7.5 Hz, Fmoc),
7.44 (dd, 2H, J = 7.5 Hz, Fmoc), 5.10 (s, 1H,Man4-
H-1), 4.99 (d, 1H, J = 9.5 Hz, GlcNAc1-H-1), 4.92
(s, 1H, Man4'-H-1), 4.76 (s, 1H, Man3-H-1) 4.58
(d, 2H, GlcNAc2,5'-H-1), 4.47 (d, 1H, J= 8.0 Hz, G
al6'-H-1), 4.35 (t, 1H, Fmoc), 4.24 (bd, 1H, J =
1.9 Hz, Man3-H-2), 4.11 (bs, 1H, Man4'-H-2), 4.07
(bs, 1H, Man4-H-2), 2.72 (bd, 1H,J = 15.5 Hz, Asn
-βCH), 2.52 (bdd, 1H, J = 8.7 Hz, 15.5 Hz, Asn-β
CH),2.06, 2.04, 1.89 (each s, each 3H, Ac); HRMS C
alcd for C67H97N5NaO40[M＋Na+] 1634.5608, found 16
34.5564
【０１１０】実施例１１ 化合物70の合成
化合物15(11mg, 6.8μmol)とウシ血清アルブミン1.5mg
をHEPES緩衝溶液（50mM, pH5.0, 269μL）に溶解させ、
β-ガラクトシダーゼ（生化学工業社製、from Jack Bea
ns, 11μL, 275mU）を加えた。この溶液を37℃で14時間
静置した後、HPLC分析により反応終了を確認した。反応
溶液をHPLC(YMC Packed Column D-ODS-5S-5 120A ODS
No.2020178、20×250mm、展開溶媒は50mM酢酸アンモニ
ウム水溶液：アセトニトリル＝80：20、流速4mL/min)で
精製した。更にODSカラム(コスモシール75C18-OPN、15
×100mm、最初にH2Oを50mL流し、次に25％アセトニトリ
ルを流して溶出させた)で脱塩したところ、目的とする
化合物70(6.3mg, 収率64％)が得られた。得られた化合
物の物理的データは以下の通りである。
をHEPES緩衝溶液（50mM, pH5.0, 269μL）に溶解させ、
β-ガラクトシダーゼ（生化学工業社製、from Jack Bea
ns, 11μL, 275mU）を加えた。この溶液を37℃で14時間
静置した後、HPLC分析により反応終了を確認した。反応
溶液をHPLC(YMC Packed Column D-ODS-5S-5 120A ODS
No.2020178、20×250mm、展開溶媒は50mM酢酸アンモニ
ウム水溶液：アセトニトリル＝80：20、流速4mL/min)で
精製した。更にODSカラム(コスモシール75C18-OPN、15
×100mm、最初にH2Oを50mL流し、次に25％アセトニトリ
ルを流して溶出させた)で脱塩したところ、目的とする
化合物70(6.3mg, 収率64％)が得られた。得られた化合
物の物理的データは以下の通りである。
【０１１１】1H-NMR (30℃)
δ7.91 (d, 2H, J = 7.5 Hz, Fmoc), 7.70 (d, 2H, J =
7.5 Hz, Fmoc), 7.50 (dd, 2H, J = 7.5 Hz, Fmoc),
7.43 (dd, 2H, J = 7.5 Hz, Fmoc), 5.10 (s, 1H,Man4-
H-1), 4.99 (d, 1H, J = 9.5 Hz, GlcNAc1-H-1), 4.91
(s, 1H, Man4'-H-1), 4.76 (s, 1H, Man3-H-1), 4.55
(d, 2H, GlcNAc2,5'-H-1), 4.32 (t, 1H, Fmoc), 4.24
(bs, 1H, Man3-H-2), 4.10 (bs, 1H, Man4-H-2), 4.06
(bs, 1H, J= 1.3 Hz, Man4'-H-2), 2.72 (bd, 1H, J =
14.0 Hz, Asn-βCH), 2.52 (bdd,1H, J = 9.5 Hz, 14.
8 Hz, Asn-βCH), 2.06, 2.05, 1.89 (each s, each 3
H, Ac); MS(Fab) Calcd for C61H88N5O35[M＋H+] 145
0.5, found 1450.4
7.5 Hz, Fmoc), 7.50 (dd, 2H, J = 7.5 Hz, Fmoc),
7.43 (dd, 2H, J = 7.5 Hz, Fmoc), 5.10 (s, 1H,Man4-
H-1), 4.99 (d, 1H, J = 9.5 Hz, GlcNAc1-H-1), 4.91
(s, 1H, Man4'-H-1), 4.76 (s, 1H, Man3-H-1), 4.55
(d, 2H, GlcNAc2,5'-H-1), 4.32 (t, 1H, Fmoc), 4.24
(bs, 1H, Man3-H-2), 4.10 (bs, 1H, Man4-H-2), 4.06
(bs, 1H, J= 1.3 Hz, Man4'-H-2), 2.72 (bd, 1H, J =
14.0 Hz, Asn-βCH), 2.52 (bdd,1H, J = 9.5 Hz, 14.
8 Hz, Asn-βCH), 2.06, 2.05, 1.89 (each s, each 3
H, Ac); MS(Fab) Calcd for C61H88N5O35[M＋H+] 145
0.5, found 1450.4
【０１１２】実施例１２ 化合物20の合成
化合物8(47mg, 25μmol)とウシ血清アルブミン1.9mgをH
EPES緩衝溶液（50mM,pH5.0, 840μL）に溶解させ、ノイ
ラミニダーゼ（シグマアルドリッチ社製、from Viblio
Cholerae, 369mU）を加えた。この溶液を37℃で37時間
静置した後、HPLC分析により反応終了を確認した。反応
溶液を凍結乾燥し、続いてHPLC(YMC Packed Column D-
ODS-5 S-5 120A ODS No.2020178、20×250mm、展開溶媒
は50mM酢酸アンモニウム水溶液：アセトニトリル＝80：
20、流速4mL/min)で精製した。更にODSカラム(コスモシ
ール75C18-OPN、15×100mm、最初にH2Oを50mL流し、次
に25％アセトニトリルを流して溶出させた)で脱塩した
ところ、目的とする化合物20(26mg, 収率65%)を得た。
得られた化合物の物理的データは以下の通りである。
EPES緩衝溶液（50mM,pH5.0, 840μL）に溶解させ、ノイ
ラミニダーゼ（シグマアルドリッチ社製、from Viblio
Cholerae, 369mU）を加えた。この溶液を37℃で37時間
静置した後、HPLC分析により反応終了を確認した。反応
溶液を凍結乾燥し、続いてHPLC(YMC Packed Column D-
ODS-5 S-5 120A ODS No.2020178、20×250mm、展開溶媒
は50mM酢酸アンモニウム水溶液：アセトニトリル＝80：
20、流速4mL/min)で精製した。更にODSカラム(コスモシ
ール75C18-OPN、15×100mm、最初にH2Oを50mL流し、次
に25％アセトニトリルを流して溶出させた)で脱塩した
ところ、目的とする化合物20(26mg, 収率65%)を得た。
得られた化合物の物理的データは以下の通りである。
【０１１３】1H-NMR (30℃)
δ7.92 (d, 2H, J = 7.5 Hz, Fmoc), 7.71 (d, 2H, J =
7.5 Hz, Fmoc), 7.51 (dd, 2H, J = 7.5 Hz, Fmoc),
7.43 (dd, 2H, J = 7.5Hz, Fmoc), 5.12 (s, 1H,Man4-H
-1), 4.99 (d, 1H, J = 9.4 Hz, GlcNAc1-H-1), 4.91
(s, 1H, Man4'-H-1), 4.77 (s, 1H, Man3-H-1), 4.57
(bd, 2H, GlcNAc2,5'-H-1), 4.46 (d, 1H, J= 7.5 Hz,
Gal6'-H-1), 4.34 (t, 3H, Fmoc), 4.24 (bs, 1H, Man
4'-H-2), 4.19 (bs, 1H, Man4-H-2), 2.72 (bd, 1H, J
= 15.5 Hz, Asn-βCH), 2.52 (bdd, 1H, J = 9.2 Hz, 1
5.5 Hz, Asn-βCH), 2.06, 2.05, 1.89 (each s, each
3H, Ac); HRMS Calcd for C67H97N5NaO40[M＋Na+] 163
4.5608, found 1634.5644
7.5 Hz, Fmoc), 7.51 (dd, 2H, J = 7.5 Hz, Fmoc),
7.43 (dd, 2H, J = 7.5Hz, Fmoc), 5.12 (s, 1H,Man4-H
-1), 4.99 (d, 1H, J = 9.4 Hz, GlcNAc1-H-1), 4.91
(s, 1H, Man4'-H-1), 4.77 (s, 1H, Man3-H-1), 4.57
(bd, 2H, GlcNAc2,5'-H-1), 4.46 (d, 1H, J= 7.5 Hz,
Gal6'-H-1), 4.34 (t, 3H, Fmoc), 4.24 (bs, 1H, Man
4'-H-2), 4.19 (bs, 1H, Man4-H-2), 2.72 (bd, 1H, J
= 15.5 Hz, Asn-βCH), 2.52 (bdd, 1H, J = 9.2 Hz, 1
5.5 Hz, Asn-βCH), 2.06, 2.05, 1.89 (each s, each
3H, Ac); HRMS Calcd for C67H97N5NaO40[M＋Na+] 163
4.5608, found 1634.5644
【０１１４】実施例１３ 化合物71の合成
化合物20(12mg, 7.4μmol)とウシ血清アルブミン1.0mg
をHEPES緩衝溶液（50mM, pH5.0, 330μL）に溶解させ、
β-ガラクトシダーゼ（生化学工業社製、from Jack Bea
ns, 12μL, 297mU）を加えた。この溶液を37℃で46時間
静置した後、HPLC分析により反応終了を確認した。反応
溶液をHPLC(YMC Packed Column D-ODS-5S-5 120A ODS
No.2020178、20×250mm、展開溶媒は50mM酢酸アンモニ
ウム水溶液：アセトニトリル＝80：20、流速4mL/min)で
精製した。更にODSカラム(コスモシール75C18-OPN、15
×100mm。最初にH2Oを50mL流し、次に25％アセトニトリ
ルを流して溶出させた)で脱塩したところ、目的とする
化合物71(6.6mg, 収率61％)が得られた。得られた化合
物の物理的データは以下の通りである。
をHEPES緩衝溶液（50mM, pH5.0, 330μL）に溶解させ、
β-ガラクトシダーゼ（生化学工業社製、from Jack Bea
ns, 12μL, 297mU）を加えた。この溶液を37℃で46時間
静置した後、HPLC分析により反応終了を確認した。反応
溶液をHPLC(YMC Packed Column D-ODS-5S-5 120A ODS
No.2020178、20×250mm、展開溶媒は50mM酢酸アンモニ
ウム水溶液：アセトニトリル＝80：20、流速4mL/min)で
精製した。更にODSカラム(コスモシール75C18-OPN、15
×100mm。最初にH2Oを50mL流し、次に25％アセトニトリ
ルを流して溶出させた)で脱塩したところ、目的とする
化合物71(6.6mg, 収率61％)が得られた。得られた化合
物の物理的データは以下の通りである。
【０１１５】1H-NMR (30℃)
δ7.90 (d, 2H, J = 7.5 Hz, Fmoc), 7.70 (d, 2H, J =
7.5 Hz, Fmoc), 7.49 (dd, 2H, J = 7.5 Hz, Fmoc),
7.42 (dd, 2H, J = 7.5 Hz, Fmoc), 5.11 (s, 1H,Man4-
H-1), 4.99 (d, 1H, J = 9.4 Hz, GlcNAc1-H-1), 4.91
(s, 1H, Man4'-H-1), 4.76 (s, 1H, Man3-H-1), 4.55
(d, 2H, GlcNAc2,5-H-1), 4.31 (b, 1H, Fmoc), 4.24
(bs, 1H, Man3-H-2), 4.18 (bs, 1H, Man4-H-2), 3.97
(dd, 1H, J =1.8 Hz, 3.3 Hz, Man4'-H-2), 2.72 (bd,
1H, J = 15.5 Hz, Asn-βCH), 2.52(bdd, 1H, J = 8.0
Hz, 15.5 Hz, Asn-βCH), 2.06, 2.05, 1.88 (each s,
each3H, Ac); MS(Fab) Calcd for C61H88N5O35[M＋H+]
1450.5, found 1450.3
7.5 Hz, Fmoc), 7.49 (dd, 2H, J = 7.5 Hz, Fmoc),
7.42 (dd, 2H, J = 7.5 Hz, Fmoc), 5.11 (s, 1H,Man4-
H-1), 4.99 (d, 1H, J = 9.4 Hz, GlcNAc1-H-1), 4.91
(s, 1H, Man4'-H-1), 4.76 (s, 1H, Man3-H-1), 4.55
(d, 2H, GlcNAc2,5-H-1), 4.31 (b, 1H, Fmoc), 4.24
(bs, 1H, Man3-H-2), 4.18 (bs, 1H, Man4-H-2), 3.97
(dd, 1H, J =1.8 Hz, 3.3 Hz, Man4'-H-2), 2.72 (bd,
1H, J = 15.5 Hz, Asn-βCH), 2.52(bdd, 1H, J = 8.0
Hz, 15.5 Hz, Asn-βCH), 2.06, 2.05, 1.88 (each s,
each3H, Ac); MS(Fab) Calcd for C61H88N5O35[M＋H+]
1450.5, found 1450.3
【０１１６】実施例１４ 化合物16の合成
化合物5(32mg, 18.4μmol)とウシ血清アルブミン2.5mg
をHEPES緩衝溶液（50mM, pH5.0, 713μL）に溶解させ、
ノイラミニダーゼ（シグマアルドリッチ社製、from Vib
lio Cholerae, 134mU）を加えた。この溶液を37℃で17
時間静置した後、HPLC分析により反応終了を確認した。
続いて、反応溶液をHPLC(YMC Packed Column D-ODS-5
S-5 120A ODS No.2020178、20×250mm、展開溶媒は50mM
酢酸アンモニウム水溶液：アセトニトリル＝80：20、流
速4mL/min)で精製した。更にODSカラム(コスモシール75
C18-OPN、15×100mm、最初にH2Oを50mL流し、次に25％
アセトニトリルを流して溶出させた)で脱塩したとこ
ろ、目的とする化合物16(13mg,収率52%)が得られた。得
られた化合物の物理的データは以下の通りである。
をHEPES緩衝溶液（50mM, pH5.0, 713μL）に溶解させ、
ノイラミニダーゼ（シグマアルドリッチ社製、from Vib
lio Cholerae, 134mU）を加えた。この溶液を37℃で17
時間静置した後、HPLC分析により反応終了を確認した。
続いて、反応溶液をHPLC(YMC Packed Column D-ODS-5
S-5 120A ODS No.2020178、20×250mm、展開溶媒は50mM
酢酸アンモニウム水溶液：アセトニトリル＝80：20、流
速4mL/min)で精製した。更にODSカラム(コスモシール75
C18-OPN、15×100mm、最初にH2Oを50mL流し、次に25％
アセトニトリルを流して溶出させた)で脱塩したとこ
ろ、目的とする化合物16(13mg,収率52%)が得られた。得
られた化合物の物理的データは以下の通りである。
【０１１７】1H-NMR (30℃)
δ7.92 (d, 2H, J = 7.5 Hz, Fmoc), 7.71 (d, 2H, J =
7.5 Hz, Fmoc), 7.51 (dd, 2H, J = 7.5 Hz, Fmoc),
7.44 (dd, 2H, J = 7.5 Hz, Fmoc), 5.00 (d, 1H,J =
9.9 Hz, GlcNAc1-H-1), 4.92 (s, 1H, Man4'-H-1), 4.7
5 (s, 1H, Man3-H-1), 4.58 (d, 2H, J = 7.5 Hz, GlcN
Ac2,5'-H-1), 4.47 (d, 1H, J = 7.8 Hz, Gal6'-H-1),
4.34 (t, 1H, Fmoc), 4.10 (bd, 1H, Man3-H-2), 4.07
(bs, 1H, Man4'-H-2), 2.72 (bdd, 1H, J = 15.5 Hz, A
sn-βCH), 2.52 (bdd, 1H, J = 9.2Hz, 15.5 Hz, Asn-
βCH), 2.07, 2.05, 1.89 (each s, each 3H, Ac); MS
(Fab)Calcd for C61H88N5O35[M＋H+] 1450.5, found 1
450.3.
7.5 Hz, Fmoc), 7.51 (dd, 2H, J = 7.5 Hz, Fmoc),
7.44 (dd, 2H, J = 7.5 Hz, Fmoc), 5.00 (d, 1H,J =
9.9 Hz, GlcNAc1-H-1), 4.92 (s, 1H, Man4'-H-1), 4.7
5 (s, 1H, Man3-H-1), 4.58 (d, 2H, J = 7.5 Hz, GlcN
Ac2,5'-H-1), 4.47 (d, 1H, J = 7.8 Hz, Gal6'-H-1),
4.34 (t, 1H, Fmoc), 4.10 (bd, 1H, Man3-H-2), 4.07
(bs, 1H, Man4'-H-2), 2.72 (bdd, 1H, J = 15.5 Hz, A
sn-βCH), 2.52 (bdd, 1H, J = 9.2Hz, 15.5 Hz, Asn-
βCH), 2.07, 2.05, 1.89 (each s, each 3H, Ac); MS
(Fab)Calcd for C61H88N5O35[M＋H+] 1450.5, found 1
450.3.
【０１１８】実施例１５ 化合物17の合成
化合物16(9mg, 6.2μmol)とウシ血清アルブミン1.6mgを
HEPES緩衝溶液（50mM,pH5.0, 613μL）に溶解させ、β-
ガラクトシダーゼ（生化学工業社製、from Jack Beans,
186mU）を加えた。この溶液を37℃で32時間静置した
後、HPLC分析により反応終了を確認した。反応溶液をHP
LC(YMC Packed Column D-ODS-5 S-5 120A ODS No.2020
178、20×250mm、展開溶媒は50mM酢酸アンモニウム水溶
液：アセトニトリル＝80：20、流速4mL/min)で精製し
た。更にODSカラム(コスモシール75C18-OPN、15×100m
m、最初にH2Oを50mL流し、次に25％アセトニトリルを流
して溶出させた)で脱塩したところ、目的とする化合物1
7(5.4mg, 収率68％)が得られた。得られた化合物の物理
的データは以下の通りである。
HEPES緩衝溶液（50mM,pH5.0, 613μL）に溶解させ、β-
ガラクトシダーゼ（生化学工業社製、from Jack Beans,
186mU）を加えた。この溶液を37℃で32時間静置した
後、HPLC分析により反応終了を確認した。反応溶液をHP
LC(YMC Packed Column D-ODS-5 S-5 120A ODS No.2020
178、20×250mm、展開溶媒は50mM酢酸アンモニウム水溶
液：アセトニトリル＝80：20、流速4mL/min)で精製し
た。更にODSカラム(コスモシール75C18-OPN、15×100m
m、最初にH2Oを50mL流し、次に25％アセトニトリルを流
して溶出させた)で脱塩したところ、目的とする化合物1
7(5.4mg, 収率68％)が得られた。得られた化合物の物理
的データは以下の通りである。
【０１１９】1H-NMR (30℃)
δ7.89 (d, 2H, J = 7.5 Hz, Fmoc), 7.68 (d, 2H, J =
7.5 Hz, Fmoc), 7.49 (dd, 2H, J = 7.5 Hz, Fmoc),
7.42 (dd, 2H, J = 7.5 Hz, Fmoc), 4.99 (d, 1H, J =
9.7 Hz, GlcNAc1-H-1), 4.91 (s, 1H, Man4'-H-1), 4.
55 (d, 1H, J = 8.1 Hz, GlcNAc2,5'-H-1), 4.09, 4.07
(s, 1H, Man4'-H-2, Man3-H-2), 2.72 (bd, 1H, J = 1
5.5 Hz Asn-βCH), 2.56 (bdd, 1H, J = 8.1 Hz, 15.5
Hz, Asn-βCH), 2.07, 2.05, 1.89 (each s, each 3H,
Ac); MS(Fab) Calcd for C55H77N5NaO30[M＋Na+] 131
0.5, found 1310.2
7.5 Hz, Fmoc), 7.49 (dd, 2H, J = 7.5 Hz, Fmoc),
7.42 (dd, 2H, J = 7.5 Hz, Fmoc), 4.99 (d, 1H, J =
9.7 Hz, GlcNAc1-H-1), 4.91 (s, 1H, Man4'-H-1), 4.
55 (d, 1H, J = 8.1 Hz, GlcNAc2,5'-H-1), 4.09, 4.07
(s, 1H, Man4'-H-2, Man3-H-2), 2.72 (bd, 1H, J = 1
5.5 Hz Asn-βCH), 2.56 (bdd, 1H, J = 8.1 Hz, 15.5
Hz, Asn-βCH), 2.07, 2.05, 1.89 (each s, each 3H,
Ac); MS(Fab) Calcd for C55H77N5NaO30[M＋Na+] 131
0.5, found 1310.2
【０１２０】実施例１６ 化合物18の合成
化合物17(3.4mg, 2.6μmol)とウシ血清アルブミン1.1mg
をHEPES緩衝溶液（50mM, pH5.0, 257μL）に溶解させ、
N-アセチル-β-D-グルコサミニダーゼ(シグマアルドリ
ッチ from Jack Beans, 144mU)加えた。この溶液を37℃
で24時間静置した後、HPLC分析により反応終了を確認し
た。反応溶液をHPLC(YMC Packed ColumnD-ODS-5 S-5 12
0A ODS No.2020178、20×250mm、展開溶媒は50mM酢酸ア
ンモニウム水溶液：アセトニトリル＝80：20、流速4mL/
min)で精製した。更にODSカラム(コスモシール75C18-OP
N、15×100mm。最初にH2Oを50mL流し、次に25％アセト
ニトリルを流して溶出させた)で脱塩したところ、目的
とする化合物18(2.1mg,収率75％)が得られた。得られた
化合物の物理的データは以下の通りである。
をHEPES緩衝溶液（50mM, pH5.0, 257μL）に溶解させ、
N-アセチル-β-D-グルコサミニダーゼ(シグマアルドリ
ッチ from Jack Beans, 144mU)加えた。この溶液を37℃
で24時間静置した後、HPLC分析により反応終了を確認し
た。反応溶液をHPLC(YMC Packed ColumnD-ODS-5 S-5 12
0A ODS No.2020178、20×250mm、展開溶媒は50mM酢酸ア
ンモニウム水溶液：アセトニトリル＝80：20、流速4mL/
min)で精製した。更にODSカラム(コスモシール75C18-OP
N、15×100mm。最初にH2Oを50mL流し、次に25％アセト
ニトリルを流して溶出させた)で脱塩したところ、目的
とする化合物18(2.1mg,収率75％)が得られた。得られた
化合物の物理的データは以下の通りである。
【０１２１】1H-NMR (30℃)
δ7.91 (d, 2H, J = 7.5 Hz, Fmoc), 7.71 (d, 2H, J =
7.5 Hz, Fmoc), 7.51 (dd, 2H, J = 7.5 Hz, 7.5 Hz,
Fmoc), 7.43 (dd, 2H, J = 7.5 Hz, 7.5 Hz, Fmoc), 5.
00 (d, 1H, J = 9.7 Hz, GlcNAc1-H-1), 4.91 (d, 1H,
J = 1.6 Hz, Man4'-H-1), 4.76 (s, 1H, Man3-H-1), 4.
58 (d, 1H, J = 7.8 Hz, GlcNAc2-H-1), 4.34 (t, 1H,
Fmoc), 4.07 (d, 1H, J = 2.7 Hz, Man4'-H-2), 3.97
(dd, 1H, J= 1.6 Hz, 3.7 Hz, Man3-H-2), 2.72 (bdd,
1H, J = 3.2 Hz, 15.1 Hz, Asn-βCH), 2.52 (bdd, 1H,
J = 8.9 Hz, 15.1 Hz, Asn-βCH), 2.07, 1.89 (each
s,each 3H, Ac); MS(Fab) Calcd for C47H65N4O25[M＋N
a+] 1085.4, found 1085.3
7.5 Hz, Fmoc), 7.51 (dd, 2H, J = 7.5 Hz, 7.5 Hz,
Fmoc), 7.43 (dd, 2H, J = 7.5 Hz, 7.5 Hz, Fmoc), 5.
00 (d, 1H, J = 9.7 Hz, GlcNAc1-H-1), 4.91 (d, 1H,
J = 1.6 Hz, Man4'-H-1), 4.76 (s, 1H, Man3-H-1), 4.
58 (d, 1H, J = 7.8 Hz, GlcNAc2-H-1), 4.34 (t, 1H,
Fmoc), 4.07 (d, 1H, J = 2.7 Hz, Man4'-H-2), 3.97
(dd, 1H, J= 1.6 Hz, 3.7 Hz, Man3-H-2), 2.72 (bdd,
1H, J = 3.2 Hz, 15.1 Hz, Asn-βCH), 2.52 (bdd, 1H,
J = 8.9 Hz, 15.1 Hz, Asn-βCH), 2.07, 1.89 (each
s,each 3H, Ac); MS(Fab) Calcd for C47H65N4O25[M＋N
a+] 1085.4, found 1085.3
【０１２２】実施例１７ 化合物21の合成
化合物9(28mg, 16μmol)とウシ血清アルブミン1.7mgをH
EPES緩衝溶液（50mM,pH5.0, 624μL）に溶解させ、ノイ
ラミニダーゼ（シグマアルドリッチ社製、from Viblio
Cholerae, 117mU）を加えた。この溶液を37℃で17時間
静置した後、HPLC分析により反応終了を確認した。続い
て、反応溶液をHPLC(YMC Packed ColumnD-ODS-5 S-5 12
0A ODS No.2020178、20×250mm、展開溶媒は50mM酢酸ア
ンモニウム水溶液：アセトニトリル＝80：20、流速4mL/
min)で精製した。更にODSカラム(コスモシール75C18-OP
N、15×100mm。最初にH2Oを50mL流し、次に25％アセト
ニトリルを流して溶出させた)で脱塩したところ、目的
とする化合物21(14.6mg,収率68%)が得られた。得られた
化合物の物理的データは以下の通りである。
EPES緩衝溶液（50mM,pH5.0, 624μL）に溶解させ、ノイ
ラミニダーゼ（シグマアルドリッチ社製、from Viblio
Cholerae, 117mU）を加えた。この溶液を37℃で17時間
静置した後、HPLC分析により反応終了を確認した。続い
て、反応溶液をHPLC(YMC Packed ColumnD-ODS-5 S-5 12
0A ODS No.2020178、20×250mm、展開溶媒は50mM酢酸ア
ンモニウム水溶液：アセトニトリル＝80：20、流速4mL/
min)で精製した。更にODSカラム(コスモシール75C18-OP
N、15×100mm。最初にH2Oを50mL流し、次に25％アセト
ニトリルを流して溶出させた)で脱塩したところ、目的
とする化合物21(14.6mg,収率68%)が得られた。得られた
化合物の物理的データは以下の通りである。
【０１２３】1H-NMR (30℃)
δ7.92 (d, 2H, J = 7.5 Hz, Fmoc), 7.71 (d, 2H, J =
7.5 Hz, Fmoc), 7.50 (dd, 2H, J = 7.5 Hz, Fmoc),
7.43 (dd, 2H, J = 7.5 Hz, Fmoc), 5.12 (s, 1H,Man4-
H-1), 4.99 (d, 1H, J = 9.5 Hz, GlcNAc1-H-1), 4.77
(s, 1H, Man3-H-1), 4.57 (d, 2H, J = 7.2 Hz, GlcNAc
2-H-1), 4.46 (d, 1H, J = 7.8 Hz, Gal6-H-1), 4.34
(t, 1H Fmoc), 4.22 (bd, 1H, J = 2.7 Hz, Man3-H-2),
4.19 (b, 1H, Man4-H-2), 2.72 (bdd, 1H, J = 15.5 H
z, Asn-βCH), 2.52 (bdd, 1H, J = 9.8 Hz, 15.5 Hz,
Asn-βCH), 2.05 (s, 6H, Ac×2), 1.89 (s, 3H, Ac);
MS(Fab) Calcd for C61H88N5O35[M＋H+] 1450.5, foun
d 1450.3
7.5 Hz, Fmoc), 7.50 (dd, 2H, J = 7.5 Hz, Fmoc),
7.43 (dd, 2H, J = 7.5 Hz, Fmoc), 5.12 (s, 1H,Man4-
H-1), 4.99 (d, 1H, J = 9.5 Hz, GlcNAc1-H-1), 4.77
(s, 1H, Man3-H-1), 4.57 (d, 2H, J = 7.2 Hz, GlcNAc
2-H-1), 4.46 (d, 1H, J = 7.8 Hz, Gal6-H-1), 4.34
(t, 1H Fmoc), 4.22 (bd, 1H, J = 2.7 Hz, Man3-H-2),
4.19 (b, 1H, Man4-H-2), 2.72 (bdd, 1H, J = 15.5 H
z, Asn-βCH), 2.52 (bdd, 1H, J = 9.8 Hz, 15.5 Hz,
Asn-βCH), 2.05 (s, 6H, Ac×2), 1.89 (s, 3H, Ac);
MS(Fab) Calcd for C61H88N5O35[M＋H+] 1450.5, foun
d 1450.3
【０１２４】実施例１８ 化合物22の合成
化合物21(10mg, 6.9μmol)とウシ血清アルブミン1.6mg
をHEPES緩衝溶液（50mM, pH5.0, 672μL）に溶解させ、
β-ガラクトシダーゼ（生化学工業社製、from Jack Bea
ns, 205mU）を加えた。この溶液を37℃で20時間静置し
た後、HPLC分析により反応終了を確認した。反応溶液を
HPLC(YMC Packed Column D-ODS-5 S-5 120A ODS No.20
20178、20×250mm、展開溶媒は50mM酢酸アンモニウム水
溶液：アセトニトリル＝80：20、流速4mL/min)で精製し
た。更にODSカラム(コスモシール75C18-OPN、15×100m
m、最初にH2Oを50mL流し、次に25％アセトニトリルを流
して溶出させた)で脱塩したところ、目的とする化合物2
2(5.6mg, 収率64％)が得られた。得られた化合物の物理
的データは以下の通りである。
をHEPES緩衝溶液（50mM, pH5.0, 672μL）に溶解させ、
β-ガラクトシダーゼ（生化学工業社製、from Jack Bea
ns, 205mU）を加えた。この溶液を37℃で20時間静置し
た後、HPLC分析により反応終了を確認した。反応溶液を
HPLC(YMC Packed Column D-ODS-5 S-5 120A ODS No.20
20178、20×250mm、展開溶媒は50mM酢酸アンモニウム水
溶液：アセトニトリル＝80：20、流速4mL/min)で精製し
た。更にODSカラム(コスモシール75C18-OPN、15×100m
m、最初にH2Oを50mL流し、次に25％アセトニトリルを流
して溶出させた)で脱塩したところ、目的とする化合物2
2(5.6mg, 収率64％)が得られた。得られた化合物の物理
的データは以下の通りである。
【０１２５】1H-NMR (30℃)
δ7.87 (d, 2H, J = 7.5 Hz, Fmoc), 7.67 (d, 2H, J =
7.5 Hz, Fmoc), 7.48 (dd, 2H, J = 7.5 Hz, Fmoc),
7.41 (dd, 2H, J = 7.5 Hz, Fmoc), 5.12 (s, 1H,Man4-
H-1), 4.99 (d, 1H, J = 9.7 Hz, GlcNAc1-H-1), 4.76
(s, 1H, Man3-H-1), 4.55 (d, 2H, J = 8.6 Hz, GlcNAc
2,5-H-1), 4.26 (t, 1H, Fmoc), 4.22 (d,1H, J = 2.2
Hz, Man3-H-2), 4.18 (bdd, 1H, J = 1.3 Hz, 3.3 Hz,
Man4-H-2), 2.72 (bd, 1H, J = 15.5 Hz, Asn-βCH),
2.54 (bdd, 1H, J = 9.5 Hz, 15.5Hz, Asn-βCH), 2.05
(s, 6H, Ac×2), 1.88 (s, 3H, Ac)； MS(Fab) Calcd
for C55H78N5O30[M＋H+] 1288.5, found 1288.3
7.5 Hz, Fmoc), 7.48 (dd, 2H, J = 7.5 Hz, Fmoc),
7.41 (dd, 2H, J = 7.5 Hz, Fmoc), 5.12 (s, 1H,Man4-
H-1), 4.99 (d, 1H, J = 9.7 Hz, GlcNAc1-H-1), 4.76
(s, 1H, Man3-H-1), 4.55 (d, 2H, J = 8.6 Hz, GlcNAc
2,5-H-1), 4.26 (t, 1H, Fmoc), 4.22 (d,1H, J = 2.2
Hz, Man3-H-2), 4.18 (bdd, 1H, J = 1.3 Hz, 3.3 Hz,
Man4-H-2), 2.72 (bd, 1H, J = 15.5 Hz, Asn-βCH),
2.54 (bdd, 1H, J = 9.5 Hz, 15.5Hz, Asn-βCH), 2.05
(s, 6H, Ac×2), 1.88 (s, 3H, Ac)； MS(Fab) Calcd
for C55H78N5O30[M＋H+] 1288.5, found 1288.3
【０１２６】実施例１９ 化合物23の合成
化合物22(3.6mg, 2.8μmol)とウシ血清アルブミン1.2mg
をHEPES緩衝溶液（50mM, pH5.0, 277μL）に溶解させ、
N-アセチル-β-D-グルコサミニダーゼ(シグマアルドリ
ッチ from Jack Beans, 195mU)を加えた。この溶液を37
℃で24時間静置した後、HPLC分析により反応終了を確認
した。反応溶液をHPLC(YMC Packed Column D-ODS-5 S-
5 120A ODS No.2020178、20×250mm、展開溶媒は50mM酢
酸アンモニウム水溶液：アセトニトリル＝80：20、流速
4mL/min)で精製した。更にODSカラム(コスモシール75C
18-OPN、15×100mm、最初にH2Oを50mL流し、次に25％ア
セトニトリルを流して溶出させた)で脱塩したところ、
目的とする化合物23(2.3mg,収率77％)が得られた。得ら
れた化合物の物理的データは以下の通りである。
をHEPES緩衝溶液（50mM, pH5.0, 277μL）に溶解させ、
N-アセチル-β-D-グルコサミニダーゼ(シグマアルドリ
ッチ from Jack Beans, 195mU)を加えた。この溶液を37
℃で24時間静置した後、HPLC分析により反応終了を確認
した。反応溶液をHPLC(YMC Packed Column D-ODS-5 S-
5 120A ODS No.2020178、20×250mm、展開溶媒は50mM酢
酸アンモニウム水溶液：アセトニトリル＝80：20、流速
4mL/min)で精製した。更にODSカラム(コスモシール75C
18-OPN、15×100mm、最初にH2Oを50mL流し、次に25％ア
セトニトリルを流して溶出させた)で脱塩したところ、
目的とする化合物23(2.3mg,収率77％)が得られた。得ら
れた化合物の物理的データは以下の通りである。
【０１２７】1H-NMR (30℃)
δ7.91 (d, 2H, J = 7.5 Hz, Fmoc), 7.70 (d, 2H, J =
7.5 Hz, Fmoc), 7.50 (dd, 2H, J = 7.5 Hz, Fmoc),
7.43 (dd, 2H, J = 7.5 Hz, Fmoc), 5.11 (s, 1H,Man4-
H-1), 4.99 (d, 1H, J = 9.7 Hz, GlcNAc1-H-1), 4.77
(s, 1H, Man3-H-1), 4.57 (d, 1H, J = 6.5 Hz, GlcNAc
-H-1), 4.33 (t, 1H, Fmoc), 4.22 (d, 1H, J = 3.0 H
z, Man3-H-2), 4.07 (bdd, 1H, J = 2.1 Hz, Man4-H-
2), 2.72 (bdd, 1H, J = 15.5 Hz, Asn-βCH), 2.52 (b
dd, 1H, J = 8.9 Hz, 15.5 Hz, Asn-βCH), 2.05, 1.89
(each s, each 3H, Ac); MS(Fab) Calcd for C47H65N4
O25[M＋H+] 1085.4, found 1085.3
7.5 Hz, Fmoc), 7.50 (dd, 2H, J = 7.5 Hz, Fmoc),
7.43 (dd, 2H, J = 7.5 Hz, Fmoc), 5.11 (s, 1H,Man4-
H-1), 4.99 (d, 1H, J = 9.7 Hz, GlcNAc1-H-1), 4.77
(s, 1H, Man3-H-1), 4.57 (d, 1H, J = 6.5 Hz, GlcNAc
-H-1), 4.33 (t, 1H, Fmoc), 4.22 (d, 1H, J = 3.0 H
z, Man3-H-2), 4.07 (bdd, 1H, J = 2.1 Hz, Man4-H-
2), 2.72 (bdd, 1H, J = 15.5 Hz, Asn-βCH), 2.52 (b
dd, 1H, J = 8.9 Hz, 15.5 Hz, Asn-βCH), 2.05, 1.89
(each s, each 3H, Ac); MS(Fab) Calcd for C47H65N4
O25[M＋H+] 1085.4, found 1085.3
【０１２８】実施例２０ 化合物11の合成
化合物10(123mg, 62μmol)とウシ血清アルブミン(1.1m
g)をHEPES緩衝溶液（50mM, pH5.0, 2.5mL）に溶解さ
せ、β-ガラクトシダーゼ（生化学工業社製、fromJack
Beans, 24μL, 612mU）を加えた。この溶液を37℃で61
時間静置した後、HPLC分析により反応終了を確認した。
反応溶液を凍結乾燥し、続いてHPLC(YMC Packed Column
D-ODS-5 S-5 120A ODS No.2020178、20×250mm、展
開溶媒は50mM酢酸アンモニウム水溶液：アセトニトリル
＝80：20、流速3.5mL/min)で精製した。更にODSカラム
(コスモシール75C18-OPN、15×100mm。最初にH2Oを50mL
流し、次に25％アセトニトリルを流して溶出させた)で
脱塩したところ、目的とする化合物11(71mg, 収率70%)
が得られた。得られた化合物の物理的データは以下の通
りである。
g)をHEPES緩衝溶液（50mM, pH5.0, 2.5mL）に溶解さ
せ、β-ガラクトシダーゼ（生化学工業社製、fromJack
Beans, 24μL, 612mU）を加えた。この溶液を37℃で61
時間静置した後、HPLC分析により反応終了を確認した。
反応溶液を凍結乾燥し、続いてHPLC(YMC Packed Column
D-ODS-5 S-5 120A ODS No.2020178、20×250mm、展
開溶媒は50mM酢酸アンモニウム水溶液：アセトニトリル
＝80：20、流速3.5mL/min)で精製した。更にODSカラム
(コスモシール75C18-OPN、15×100mm。最初にH2Oを50mL
流し、次に25％アセトニトリルを流して溶出させた)で
脱塩したところ、目的とする化合物11(71mg, 収率70%)
が得られた。得られた化合物の物理的データは以下の通
りである。
【０１２９】1H-NMR (30℃)
δ7.91 (d, 2H, J = 7.5 Hz, Fmoc), 7.71 (d, 2H, J =
7.5 Hz, Fmoc), 7.50 (dd, 2H, J = 7.5 Hz, Fmoc),
7.43 (dd, 2H, J = 7.5 Hz, Fmoc), 5.11 (s, 1H,Man4-
H-1), 4.99 (1H, d, J = 9.9 Hz, GlcNAc1-H-1), 4.91
(s, 1H, Man4'-H-1), 4.76 (s, 1H, Man3-H-1), 4.55
(d, 2H, J = 8.6 Hz, GlcNAc2,5-H-1), 4.34 (t, 1H, F
moc), 4.24 (s, 1H, Man3-H-2), 4.18 (s, 1H, Man4-H-
2), 4.10 (s, 1H, Man4'-H-2), 2.72 (bd, 1H, J = 15.
5 Hz, Asn-βCH), 2.51 (bdd, 1H, J= 9.0 Hz, 15.5 H
z, Asn-βCH), 2.06 (s, 3H, Ac), 2.05 (s, 6H, Ac×
2), 1.88 (s, 3H, Ac); HRMS Calcd for C69H100N6NaO
40[M＋Na+] 1675.5873, found1675.5841
7.5 Hz, Fmoc), 7.50 (dd, 2H, J = 7.5 Hz, Fmoc),
7.43 (dd, 2H, J = 7.5 Hz, Fmoc), 5.11 (s, 1H,Man4-
H-1), 4.99 (1H, d, J = 9.9 Hz, GlcNAc1-H-1), 4.91
(s, 1H, Man4'-H-1), 4.76 (s, 1H, Man3-H-1), 4.55
(d, 2H, J = 8.6 Hz, GlcNAc2,5-H-1), 4.34 (t, 1H, F
moc), 4.24 (s, 1H, Man3-H-2), 4.18 (s, 1H, Man4-H-
2), 4.10 (s, 1H, Man4'-H-2), 2.72 (bd, 1H, J = 15.
5 Hz, Asn-βCH), 2.51 (bdd, 1H, J= 9.0 Hz, 15.5 H
z, Asn-βCH), 2.06 (s, 3H, Ac), 2.05 (s, 6H, Ac×
2), 1.88 (s, 3H, Ac); HRMS Calcd for C69H100N6NaO
40[M＋Na+] 1675.5873, found1675.5841
【０１３０】実施例２１ 化合物12の合成
化合物11(50mg, 30μmol)とウシ血清アルブミン2.0mgを
HEPES緩衝溶液（50mM,pH5.0, 920μL）に溶解させ、N-
アセチル-β-D-グルコサミニダーゼ（シグマアルドリッ
チ社製、from Jack Beans, 2.1U）を加えた。この溶液
を37℃で48時間静置した後、HPLC分析により反応終了を
確認した。反応溶液をHPLC(YMC PackedColumn D-ODS-5
S-5 120A ODS No.2020178、20×250mm、展開溶媒は50
mM酢酸アンモニウム水溶液：アセトニトリル＝80：20、
流速4mL/min)で精製し、凍結乾燥を行った。この残留物
をODSカラム(コスモシール75C18-OPN、15×100mm、最初
にH2Oを50mL流し、次に25％アセトニトリルを流して溶
出させた)で脱塩したところ、目的とする化合物12(25m
g, 収率66%)が得られた。得られた化合物の物理的デー
タは以下の通りである。
HEPES緩衝溶液（50mM,pH5.0, 920μL）に溶解させ、N-
アセチル-β-D-グルコサミニダーゼ（シグマアルドリッ
チ社製、from Jack Beans, 2.1U）を加えた。この溶液
を37℃で48時間静置した後、HPLC分析により反応終了を
確認した。反応溶液をHPLC(YMC PackedColumn D-ODS-5
S-5 120A ODS No.2020178、20×250mm、展開溶媒は50
mM酢酸アンモニウム水溶液：アセトニトリル＝80：20、
流速4mL/min)で精製し、凍結乾燥を行った。この残留物
をODSカラム(コスモシール75C18-OPN、15×100mm、最初
にH2Oを50mL流し、次に25％アセトニトリルを流して溶
出させた)で脱塩したところ、目的とする化合物12(25m
g, 収率66%)が得られた。得られた化合物の物理的デー
タは以下の通りである。
【０１３１】1H-NMR (30℃)
δ7.91 (d, 2H, J = 7.5 Hz, Fmoc), 7.70 (d, 2H, J =
7.5 Hz, Fmoc), 7.50 (dd, 2H, J = 7.5 Hz, Fmoc),
7.43 (dd, 2H, J = 7.5 Hz, Fmoc), 5.10 (s, 1H, Man4
-H-1), 4.99 (d, 1H, J = 9.7 Hz, GlcNAc1-H-1), 4.91
(bd, 1H, J = 1.6 Hz, Man4'-H-1), 4.77 (s, 1H, Man
3-H-1), 4.58〜4.52 (b, 1H, GlcNAc2-H-1), 4.33 (t,
1H, Fmoc), 4.24 (bs, 1H, Man3-H-2), 4.06 (dd, 1H,
J = 1.6 Hz, 3.2 Hz, Man4-H-2), 3.97 (dd, 1H, J =
1.6 Hz, 3.5 Hz, Man4'-H-2), 2.72(bd, 1H, J = 15.5
Hz, Asn-βCH), 2.53 (bdd, 1H, J = 9.0 Hz, 15.5 Hz,
Asn-βCH), 2.05, 1.88 (each s, each 3H, Ac)
7.5 Hz, Fmoc), 7.50 (dd, 2H, J = 7.5 Hz, Fmoc),
7.43 (dd, 2H, J = 7.5 Hz, Fmoc), 5.10 (s, 1H, Man4
-H-1), 4.99 (d, 1H, J = 9.7 Hz, GlcNAc1-H-1), 4.91
(bd, 1H, J = 1.6 Hz, Man4'-H-1), 4.77 (s, 1H, Man
3-H-1), 4.58〜4.52 (b, 1H, GlcNAc2-H-1), 4.33 (t,
1H, Fmoc), 4.24 (bs, 1H, Man3-H-2), 4.06 (dd, 1H,
J = 1.6 Hz, 3.2 Hz, Man4-H-2), 3.97 (dd, 1H, J =
1.6 Hz, 3.5 Hz, Man4'-H-2), 2.72(bd, 1H, J = 15.5
Hz, Asn-βCH), 2.53 (bdd, 1H, J = 9.0 Hz, 15.5 Hz,
Asn-βCH), 2.05, 1.88 (each s, each 3H, Ac)
【０１３２】実施例２２ 化合物13の合成
化合物12(10mg, 11μmol)とウシ血清アルブミン0.9mgを
HEPES緩衝溶液（50mM,pH5.0, 440μL）に溶解させ、α-
マンノシダーゼ（シグマアルドリッチ社製、from Jack
Beans, 30μL, 3.2U）を加えた。この溶液を37℃で21時
間静置した後、HPLC分析により反応終了を確認した。続
いてHPLC(YMC Packed Column D-ODS-5 S-5 120A ODS
No. 2020178、20×250mm、展開溶媒は50mM酢酸アンモニ
ウム水溶液：アセトニトリル＝80：20、流速4mL/min)で
精製を行った。更にODSカラム(コスモシール75C18-OP
N、15×100mm、最初にH2Oを50mL流し、次に25％アセト
ニトリルを流して溶出させた)で脱塩したところ、目的
とする化合物13(3mg,収率43％)を得た。得られた化合物
の物理的データは以下の通りである。
HEPES緩衝溶液（50mM,pH5.0, 440μL）に溶解させ、α-
マンノシダーゼ（シグマアルドリッチ社製、from Jack
Beans, 30μL, 3.2U）を加えた。この溶液を37℃で21時
間静置した後、HPLC分析により反応終了を確認した。続
いてHPLC(YMC Packed Column D-ODS-5 S-5 120A ODS
No. 2020178、20×250mm、展開溶媒は50mM酢酸アンモニ
ウム水溶液：アセトニトリル＝80：20、流速4mL/min)で
精製を行った。更にODSカラム(コスモシール75C18-OP
N、15×100mm、最初にH2Oを50mL流し、次に25％アセト
ニトリルを流して溶出させた)で脱塩したところ、目的
とする化合物13(3mg,収率43％)を得た。得られた化合物
の物理的データは以下の通りである。
【０１３３】1H-NMR (30℃)
δ7.92 (d, 2H, J = 7.5 Hz, Fmoc), 7.71 (d, 2H, J =
7.5 Hz, Fmoc), 7.51 (dd, 2H, J = 7.5 Hz, Fmoc),
7.43 (dd, 2H, J = 7.5 Hz, Fmoc), 4.99 (d, 1H,J =
9.5 Hz, GlcNAc1-H-1), 4.76 (s, 1H, Man3-H-1), 4.57
(1H, GlcNAc2-H-1), 4.06 (d, 1H, J = 3.2 Hz, Man3-
H-2), 2.72 (bd, 1H, J = 15.5 Hz, Asn-βCH), 2.52
(bdd, 1H, J = 8.3 Hz, 15.5 Hz, Asn-βCH), 2.05, 1.
89 (each s,each 3H, Ac)
7.5 Hz, Fmoc), 7.51 (dd, 2H, J = 7.5 Hz, Fmoc),
7.43 (dd, 2H, J = 7.5 Hz, Fmoc), 4.99 (d, 1H,J =
9.5 Hz, GlcNAc1-H-1), 4.76 (s, 1H, Man3-H-1), 4.57
(1H, GlcNAc2-H-1), 4.06 (d, 1H, J = 3.2 Hz, Man3-
H-2), 2.72 (bd, 1H, J = 15.5 Hz, Asn-βCH), 2.52
(bdd, 1H, J = 8.3 Hz, 15.5 Hz, Asn-βCH), 2.05, 1.
89 (each s,each 3H, Ac)
【０１３４】（糖鎖アスパラギン誘導体のFmoc基の脱保
護）以下、全ての糖鎖アスパラギン誘導体において、以
下の手順でFmoc基の脱保護を行った。まず、糖鎖アスパ
ラギンFmoc体1μmolあたりに240μLのN,N-ジメチルホル
ムアミド、160μLのモルホリンを加え、室温・アルゴン
雰囲気下で反応させた。TLC（展開溶媒として1M 酢酸ア
ンモニウム：イソプロパノール＝８：５を用いた）にて
反応終了を確認した後、氷水で冷却した。ここにジエチ
ルエーテルを反応溶液の10倍量加えて15分間攪拌した
後、析出した沈殿物をろ別した。得られた残渣を水に溶
解させ、35℃でエバポレートした。更にトルエンを3mL
加えエバポレートするという操作を三回繰り返した。残
留物を逆相カラムクロマトグラフィー（コスモシール75
C18-OPN、15×100mm、展開溶媒は水）により精製した。
護）以下、全ての糖鎖アスパラギン誘導体において、以
下の手順でFmoc基の脱保護を行った。まず、糖鎖アスパ
ラギンFmoc体1μmolあたりに240μLのN,N-ジメチルホル
ムアミド、160μLのモルホリンを加え、室温・アルゴン
雰囲気下で反応させた。TLC（展開溶媒として1M 酢酸ア
ンモニウム：イソプロパノール＝８：５を用いた）にて
反応終了を確認した後、氷水で冷却した。ここにジエチ
ルエーテルを反応溶液の10倍量加えて15分間攪拌した
後、析出した沈殿物をろ別した。得られた残渣を水に溶
解させ、35℃でエバポレートした。更にトルエンを3mL
加えエバポレートするという操作を三回繰り返した。残
留物を逆相カラムクロマトグラフィー（コスモシール75
C18-OPN、15×100mm、展開溶媒は水）により精製した。
【０１３５】実施例２３ 化合物33の合成
化合物10(10.5mg, 5.3μmol)を上記の操作で7時間反応
させたところ、目的とする化合物33(7mg, 収率76%)が得
られた。得られた化合物は1H-NMRが標品と一致したこと
から確認した。
させたところ、目的とする化合物33(7mg, 収率76%)が得
られた。得られた化合物は1H-NMRが標品と一致したこと
から確認した。
【０１３６】実施例２４ 化合物26の合成
化合物3(8.0mg, 3.8μmol)を上記の操作で21時間反応さ
せたところ、目的とする化合物26(6.3mg, 収率88%)が得
られた。得られた化合物の物理的データは以下の通りで
ある。
せたところ、目的とする化合物26(6.3mg, 収率88%)が得
られた。得られた化合物の物理的データは以下の通りで
ある。
【０１３７】1H-NMR (30℃)
δ5.13 (s, 1H, Man4-H-1), 5.07 (d, 1H, J = 9.9 Hz,
GlcNAc1-H-1), 4.95 (s, 1H, Man4'-H-1), 4.78 (s, 1
H, Man3-H-1), 4.62 (2H, GlcNAc2,5'-H-1), 4.56 (d,
1H, J = 8.1 Hz, GlcNAc5-H-1), 4.52 (d, 1H, J = 7.8
Hz, Gal6'-H-1),4.25 (bs, 1H, Man3-H-2), 4.19 (bs,
1H, Man4'-H-2), 4.12 (bs, 1H, Man4-H-2), 2.94 (d
d, 1H, J = 4.5 Hz, 17.0Hz, Asn-βCH), 2.85 (dd, 1
H, J = 6.8Hz, 17.0 Hz, Asn-βCH), 2.68 (dd, 1H, J
= 4.6 Hz, 12.4 Hz, NeuAc7'-H-3eq), 2.08, 2.07, 2.0
6, 2.04, 2.02 (each s, each 3H, Ac), 1.72 (dd, 1H,
J =12.1 Hz, 12.1 Hz, NeuAc7'-H-3ax); MS(Fab) Calc
d for C71H118N7O51[M＋H+]1884.7, found 1884.5
GlcNAc1-H-1), 4.95 (s, 1H, Man4'-H-1), 4.78 (s, 1
H, Man3-H-1), 4.62 (2H, GlcNAc2,5'-H-1), 4.56 (d,
1H, J = 8.1 Hz, GlcNAc5-H-1), 4.52 (d, 1H, J = 7.8
Hz, Gal6'-H-1),4.25 (bs, 1H, Man3-H-2), 4.19 (bs,
1H, Man4'-H-2), 4.12 (bs, 1H, Man4-H-2), 2.94 (d
d, 1H, J = 4.5 Hz, 17.0Hz, Asn-βCH), 2.85 (dd, 1
H, J = 6.8Hz, 17.0 Hz, Asn-βCH), 2.68 (dd, 1H, J
= 4.6 Hz, 12.4 Hz, NeuAc7'-H-3eq), 2.08, 2.07, 2.0
6, 2.04, 2.02 (each s, each 3H, Ac), 1.72 (dd, 1H,
J =12.1 Hz, 12.1 Hz, NeuAc7'-H-3ax); MS(Fab) Calc
d for C71H118N7O51[M＋H+]1884.7, found 1884.5
【０１３８】実施例２５ 化合物27の合成
化合物4(11.0mg, 5.8μmol)を上記の操作で23時間反応
させたところ、目的とする化合物27(8.5mg, 収率88%)で
得られた。得られた化合物の物理的データは以下の通り
である。
させたところ、目的とする化合物27(8.5mg, 収率88%)で
得られた。得られた化合物の物理的データは以下の通り
である。
【０１３９】1H-NMR (30℃)
δ5.11 (s, 1H, Man4-H-1), 5.08 (d, 1H, J = 9.7 Hz,
GlcNAc1-H-1), 4.95 (s, 1H, Man4'-H-1), 4.78 (s, 1
H, Man3-H-1), 4.62 (d, 2H, GlcNAc2,5'-H-1),4.45
(d, 1H, J = 7.6 Hz, Gal6'-H-1), 4.26 (bd, 1H, Man3
-H-2), 4.12 (bd,1H, Man4'-H-2), 4.08 (bdd, 1H, J =
1.6 Hz, 3.3 Hz, Man4-H-2), 2.94 (dd,1H, J = 4.0
Hz, 17.2 Hz, Asn-βCH), 2.85 (dd, 1H, J = 7.2 Hz,
17.2 Hz,Asn-βCH), 2.68 (dd, 1H, J = 4.1 Hz, 12.1
Hz, NeuAc7'-H-3eq), 2.09, 2.07, 2.04, 2.02 (each
s, each 3H, Ac), 1.72 (dd, 1H, J = 12.1 Hz, 12.1 H
z,NeuAc7'- H-3ax); MS(Fab) Calcd for C63H104N6NaO
46[M＋Na+] 1703.6, found1703.１
GlcNAc1-H-1), 4.95 (s, 1H, Man4'-H-1), 4.78 (s, 1
H, Man3-H-1), 4.62 (d, 2H, GlcNAc2,5'-H-1),4.45
(d, 1H, J = 7.6 Hz, Gal6'-H-1), 4.26 (bd, 1H, Man3
-H-2), 4.12 (bd,1H, Man4'-H-2), 4.08 (bdd, 1H, J =
1.6 Hz, 3.3 Hz, Man4-H-2), 2.94 (dd,1H, J = 4.0
Hz, 17.2 Hz, Asn-βCH), 2.85 (dd, 1H, J = 7.2 Hz,
17.2 Hz,Asn-βCH), 2.68 (dd, 1H, J = 4.1 Hz, 12.1
Hz, NeuAc7'-H-3eq), 2.09, 2.07, 2.04, 2.02 (each
s, each 3H, Ac), 1.72 (dd, 1H, J = 12.1 Hz, 12.1 H
z,NeuAc7'- H-3ax); MS(Fab) Calcd for C63H104N6NaO
46[M＋Na+] 1703.6, found1703.１
【０１４０】実施例２６ 化合物28の合成
化合物5(7.0mg, 4.0μmol)を上記の操作で21時間反応さ
せたところ、目的とする化合物28(5.3mg、収率87%)が得
られた。得られた化合物の物理的データは以下の通りで
ある。
せたところ、目的とする化合物28(5.3mg、収率87%)が得
られた。得られた化合物の物理的データは以下の通りで
ある。
【０１４１】1H-NMR (30℃)
δ5.07 (d, 1H, J = 9.4 Hz, GlcNAc1-H-1), 4.94 (s,
1H, Man4'-H-1), 4.76 (s, 1H, Man3-H-1), 4.61, 4.59
(each d, each 1H, GlcNAc2,5'-H-1), 4.44 (d, 1H,
J = 7.8 Hz, Gal6'-H-1), 4.10, 4.07 (each 1H, Man
4',3-H-2), 2.93 (dd, 1H, J = 4.6 Hz, 17.5 Hz, Asn-
βCH), 2.85 (dd, 1H, J = 7.0 Hz, 17.5 Hz, Asn-βC
H), 2.67 (dd, 1H, J = 4.6 Hz, 12.2Hz, NeuAc7'-H-3
eq), 2.08, 2.06, 2.02, 2.01 (each s, each 3H, Ac),
1.71 (2H, dd, J = 12.2 Hz, 12.2 Hz,NeuAc7'- H-
3ax); MS(Fab) Calcd for C57H94N6NaO41[M＋Na+] 154
1.5, found1541.3
1H, Man4'-H-1), 4.76 (s, 1H, Man3-H-1), 4.61, 4.59
(each d, each 1H, GlcNAc2,5'-H-1), 4.44 (d, 1H,
J = 7.8 Hz, Gal6'-H-1), 4.10, 4.07 (each 1H, Man
4',3-H-2), 2.93 (dd, 1H, J = 4.6 Hz, 17.5 Hz, Asn-
βCH), 2.85 (dd, 1H, J = 7.0 Hz, 17.5 Hz, Asn-βC
H), 2.67 (dd, 1H, J = 4.6 Hz, 12.2Hz, NeuAc7'-H-3
eq), 2.08, 2.06, 2.02, 2.01 (each s, each 3H, Ac),
1.71 (2H, dd, J = 12.2 Hz, 12.2 Hz,NeuAc7'- H-
3ax); MS(Fab) Calcd for C57H94N6NaO41[M＋Na+] 154
1.5, found1541.3
【０１４２】実施例２７ 化合物30の合成
化合物7(13.9mg, 6.6μmol)を上記の操作で7時間反応さ
せたところ、目的とする化合物30( 8.0mg, 収率64% )を
得た。得られた化合物の物理的データは以下の通りであ
る。
せたところ、目的とする化合物30( 8.0mg, 収率64% )を
得た。得られた化合物の物理的データは以下の通りであ
る。
【０１４３】1H-NMR (30℃)
δ5.13 (s, 1H, Man4-H-1), 5.06 (d, 1H, J = 9.9 Hz,
GlcNAc1-H-1), 4.91 (s, 1H, Man4'-H-1), 4.77 (s, 1
H, Man3-H-1), 4.61, 4.60 (each d, each 1H, J= 8.0
Hz, GlcNAc2,5-H-1), 4.55 (d, 1H, J = 8.4 Hz, GlcNA
c5'-H-1), 4.44(d, 1H, J = 8.0 Hz, Gal6-H-1), 4.24
(bd, 1H, Man3-H-2), 4.19 (bdd, 1H, J= 1.3 Hz, 3.2
Hz, Man4'-H-2), 4.10 (bdd, 1H, J = 1.4 Hz, 3.2 Hz,
Man4-H-2), 2.90 (dd, 1H, J = 4.5 Hz, 16.7 Hz, Asn
-βCH), 2.80 (dd, 1H, J = 7.5Hz, 16.7 Hz, Asn-βC
H), 2.66 (dd, 1H, J = 4.6 Hz, 12.4 Hz, NeuAc7-H-3
eq), 2.07, 2.06, 2.05, 2.02, 2.01 (each s, each 3
H, Ac), 1.71 (dd, 1H, J =12.4 Hz, 12.4 Hz, NeuAc7-
H-3ax); MS(Fab) Calcd for C71H117N7NaO51[M＋Na+]
1906.7, found 1906.1
GlcNAc1-H-1), 4.91 (s, 1H, Man4'-H-1), 4.77 (s, 1
H, Man3-H-1), 4.61, 4.60 (each d, each 1H, J= 8.0
Hz, GlcNAc2,5-H-1), 4.55 (d, 1H, J = 8.4 Hz, GlcNA
c5'-H-1), 4.44(d, 1H, J = 8.0 Hz, Gal6-H-1), 4.24
(bd, 1H, Man3-H-2), 4.19 (bdd, 1H, J= 1.3 Hz, 3.2
Hz, Man4'-H-2), 4.10 (bdd, 1H, J = 1.4 Hz, 3.2 Hz,
Man4-H-2), 2.90 (dd, 1H, J = 4.5 Hz, 16.7 Hz, Asn
-βCH), 2.80 (dd, 1H, J = 7.5Hz, 16.7 Hz, Asn-βC
H), 2.66 (dd, 1H, J = 4.6 Hz, 12.4 Hz, NeuAc7-H-3
eq), 2.07, 2.06, 2.05, 2.02, 2.01 (each s, each 3
H, Ac), 1.71 (dd, 1H, J =12.4 Hz, 12.4 Hz, NeuAc7-
H-3ax); MS(Fab) Calcd for C71H117N7NaO51[M＋Na+]
1906.7, found 1906.1
【０１４４】実施例２８ 化合物31の合成
化合物8( 8.0mg, 4.2μmol )を上記の操作で12時間反応
させたところ、目的とする化合物31( 6.0mg, 収率86% )
を得た。得られた化合物の物理的データは以下の通りで
ある。
させたところ、目的とする化合物31( 6.0mg, 収率86% )
を得た。得られた化合物の物理的データは以下の通りで
ある。
【０１４５】1H-NMR (30℃)
δ5.12 (s, 1H, Man4-H-1), 5.06 (d, 1H, J = 9.5 Hz,
GlcNAc1-H-1), 4.91 (s, 1H, Man4'-H-1), 4.77 (s, 1
H, Man3-H-1), 4.61, 4.59 (each d, each 1H, GlcNAc
2,5-H-1), 4.43 (d, 1H, J = 8.0 Hz, Gal6-H-1), 4.24
(bd, 1H, Man3-H-2), 4.18 (bdd, 1H, Man4'-H-2), 2.
91 (bd, 1H, J = 17.0 Hz, Asn-βCH), 2.81 (dd, 1H,
J = 6.5 Hz, 17.0 Hz, Asn-βCH), 2.66 (dd, 1H, J =
4.6 Hz, 12.6 Hz, NeuAc7-H-3eq), 2.06, 2.06, 2.02,
2.00 (each s, each 3H, Ac), 1.70(dd, 1H, J = 12.6
Hz, 12.6 Hz, NeuAc7-H-3ax); MS(Fab) Calcd for C63H
104N 6NaO46[M＋Na+] 1703.6, found 1703.0
GlcNAc1-H-1), 4.91 (s, 1H, Man4'-H-1), 4.77 (s, 1
H, Man3-H-1), 4.61, 4.59 (each d, each 1H, GlcNAc
2,5-H-1), 4.43 (d, 1H, J = 8.0 Hz, Gal6-H-1), 4.24
(bd, 1H, Man3-H-2), 4.18 (bdd, 1H, Man4'-H-2), 2.
91 (bd, 1H, J = 17.0 Hz, Asn-βCH), 2.81 (dd, 1H,
J = 6.5 Hz, 17.0 Hz, Asn-βCH), 2.66 (dd, 1H, J =
4.6 Hz, 12.6 Hz, NeuAc7-H-3eq), 2.06, 2.06, 2.02,
2.00 (each s, each 3H, Ac), 1.70(dd, 1H, J = 12.6
Hz, 12.6 Hz, NeuAc7-H-3ax); MS(Fab) Calcd for C63H
104N 6NaO46[M＋Na+] 1703.6, found 1703.0
【０１４６】実施例２９ 化合物32の合成
化合物9( 7.7mg, 4.4μmol )を上記の操作で23時間反応
させたところ、目的とする化合物32( 5.2mg, 収率78% )
で得られた。得られた化合物の物理的データは以下の通
りである。
させたところ、目的とする化合物32( 5.2mg, 収率78% )
で得られた。得られた化合物の物理的データは以下の通
りである。
【０１４７】1H-NMR (30℃)
δ5.14 (s, 1H, Man4-H-1), 5.07 (d, 1H, J = 9.4 Hz,
GlcNAc1-H-1), 4.78 (s, 1H, Man3-H-1), 4.61, 4,60
(each d, each 1H, GlcNAc2,5-H-1), 4.44 (d, 1H, J =
8.0 Hz, Gal6-H-1), 4.23 (d, 1H, J = 3.0 Hz, Man3-
H-2), 4.19 (bdd,1H, J = 1.3 Hz, 2.9 Hz, Man4-H-2),
2.92 (dd, 1H, J = 4.1 Hz, 17.2 Hz, Asn-βCH), 2.8
3 (dd, 1H, J = 7.5 Hz, 12.7 Hz, Asn-βCH), 2.67 (d
d, 1H, J= 4.6 Hz, 12.7 Hz, NeuAc7-H-3eq), 2.06 (s,
6H, Ac×2), 2.03, 2.01 (eachs, each 3H, Ac) 1.71
(dd, 1H, J = 12.7 Hz, 12.7 Hz, NeuAc7- H-3ax); MS
(Fab) Calcd for C57H94N6NaO41[M＋Na+] 1541.5, foun
d 1541.2
GlcNAc1-H-1), 4.78 (s, 1H, Man3-H-1), 4.61, 4,60
(each d, each 1H, GlcNAc2,5-H-1), 4.44 (d, 1H, J =
8.0 Hz, Gal6-H-1), 4.23 (d, 1H, J = 3.0 Hz, Man3-
H-2), 4.19 (bdd,1H, J = 1.3 Hz, 2.9 Hz, Man4-H-2),
2.92 (dd, 1H, J = 4.1 Hz, 17.2 Hz, Asn-βCH), 2.8
3 (dd, 1H, J = 7.5 Hz, 12.7 Hz, Asn-βCH), 2.67 (d
d, 1H, J= 4.6 Hz, 12.7 Hz, NeuAc7-H-3eq), 2.06 (s,
6H, Ac×2), 2.03, 2.01 (eachs, each 3H, Ac) 1.71
(dd, 1H, J = 12.7 Hz, 12.7 Hz, NeuAc7- H-3ax); MS
(Fab) Calcd for C57H94N6NaO41[M＋Na+] 1541.5, foun
d 1541.2
【０１４８】実施例３０ 化合物37の合成
化合物14(9.1mg, 5.0μmol)を上記の操作で13時間反応
させたところ、目的とする化合物37 (6.5mg, 収率77%)
で得られた。得られた化合物の物理的データは以下の通
りである。
させたところ、目的とする化合物37 (6.5mg, 収率77%)
で得られた。得られた化合物の物理的データは以下の通
りである。
【０１４９】1H-NMR (30℃)
δ5.11 (s, 1H, Man4-H-1), 5.06 (d, 1H, J = 9.5 Hz,
GlcNAc1-H-1), 4.92 (s, 1H, Man4'-H-1), 4.75 (s, 1
H, Man3-H-1), 4.61, 4.57, 4.55 (each d, each1H, J
= 7.5 Hz, GlcNAc2,5,5'-H-1), 4.46 (d, 1H, J = 7.3
Hz, Gal6'-H-1),4.23 (bs, 1H, Man3-H-2), 4.18 (bs,
1H, Man4'-H-2), 4.10 (bs, 1H, Man4-H-2), 2.87 (dd,
1H, J = 4.8 Hz, 17.0 Hz, Asn-βCH), 2.76 (dd, 1H,
J = 7.2Hz, 17.0 Hz, Asn-βCH), 2.07 (s, 3H, Ac),
2.04 (s, 6H, Ac×2), 2.00 (s,3H, Ac); MS(Fab) Calc
d for C60H100N6NaO43[M＋Na+] 1615.6, found 1615.0
GlcNAc1-H-1), 4.92 (s, 1H, Man4'-H-1), 4.75 (s, 1
H, Man3-H-1), 4.61, 4.57, 4.55 (each d, each1H, J
= 7.5 Hz, GlcNAc2,5,5'-H-1), 4.46 (d, 1H, J = 7.3
Hz, Gal6'-H-1),4.23 (bs, 1H, Man3-H-2), 4.18 (bs,
1H, Man4'-H-2), 4.10 (bs, 1H, Man4-H-2), 2.87 (dd,
1H, J = 4.8 Hz, 17.0 Hz, Asn-βCH), 2.76 (dd, 1H,
J = 7.2Hz, 17.0 Hz, Asn-βCH), 2.07 (s, 3H, Ac),
2.04 (s, 6H, Ac×2), 2.00 (s,3H, Ac); MS(Fab) Calc
d for C60H100N6NaO43[M＋Na+] 1615.6, found 1615.0
【０１５０】実施例３１ 化合物42の合成
化合物19( 9.8mg, 5.4μmol )を上記の操作で13時間反
応させたところ、目的とする化合物42( 8.0mg, 収率88%
)で得られた。得られた化合物の物理的データは以下の
通りである。
応させたところ、目的とする化合物42( 8.0mg, 収率88%
)で得られた。得られた化合物の物理的データは以下の
通りである。
【０１５１】1H-NMR (30℃)
δ5.11 (s, 1H, Man4-H-1), 5.06 (d, 1H, J = 9.5 Hz,
GlcNAc1- H-1), 4.91 (s, 1H, Man4'-H-1), 4.76 (s,
1H, Man3-H-1), 4.60, 4.57, 4.55 (each d, each 1H,
GlcNAc2,5,5'-H-1), 4.46 (d, 1H, J = 7.8 Hz, Gal6-H
-1), 4.28 (s, 1H, Man3-H-2), 4.18 (s, 1H, Man4'-H-
2), 4.10 (s, 1H, Man4-H-2), 2.88 (dd,1H, J = 4.0 H
z, 16.6 Hz, Asn-βCH), 2.77 (dd, 1H, J = 7.5 Hz, 1
6.6 Hz, Asn-βCH), 2.07 (s, 3H, Ac), 2.04 (s, 6H,
Ac×2), 2.00 (s, 3H, Ac); MS(Fab) Calcd for C60H
101N6O43[M＋H+] 1593.6, found 1593.8
GlcNAc1- H-1), 4.91 (s, 1H, Man4'-H-1), 4.76 (s,
1H, Man3-H-1), 4.60, 4.57, 4.55 (each d, each 1H,
GlcNAc2,5,5'-H-1), 4.46 (d, 1H, J = 7.8 Hz, Gal6-H
-1), 4.28 (s, 1H, Man3-H-2), 4.18 (s, 1H, Man4'-H-
2), 4.10 (s, 1H, Man4-H-2), 2.88 (dd,1H, J = 4.0 H
z, 16.6 Hz, Asn-βCH), 2.77 (dd, 1H, J = 7.5 Hz, 1
6.6 Hz, Asn-βCH), 2.07 (s, 3H, Ac), 2.04 (s, 6H,
Ac×2), 2.00 (s, 3H, Ac); MS(Fab) Calcd for C60H
101N6O43[M＋H+] 1593.6, found 1593.8
【０１５２】実施例３２ 化合物38の合成
化合物15(5.1mg, 3.2μmol)を上記の操作で11時間反応
させたところ、目的とする化合物38(4.0mg, 収率91%)が
得られた。得られた化合物の物理的データは以下の通り
である。
させたところ、目的とする化合物38(4.0mg, 収率91%)が
得られた。得られた化合物の物理的データは以下の通り
である。
【０１５３】1H-NMR (30℃)
δ5.10 (s, 1H, Man4-H-1), 5.07 (d, 1H, J = 9.4 Hz,
GlcNAc1- H-1), 4.92 (s, 1H, Man4'-H-1), 4.76 (s,
1H, Man3-H-1), 4.61, 4.57 (each d, each 1H,J = 7.8
Hz, GlcNAc2,5'-H-1), 4.47 (d, 1H, J = 7.8 Hz, Gal
6'H-1), 4.24 (d, 1H, J = 2.3 Hz, Man3-H-2), 4.10,
4.06 (each bd, each 1H, Man4',4-H-2),2.90 (dd, 1H,
J = 4.2 Hz, 16.8 Hz, Asn-βCH), 2.81 (dd, 1H, J =
7.3 Hz,16.8 Hz, Asn-βCH), 2.07, 2.04, 2.01 (each
s, each 3H, Ac); MS(Fab) Calcd for C52H88N5O38[M
＋H+] 1390.5, found 1390.1
GlcNAc1- H-1), 4.92 (s, 1H, Man4'-H-1), 4.76 (s,
1H, Man3-H-1), 4.61, 4.57 (each d, each 1H,J = 7.8
Hz, GlcNAc2,5'-H-1), 4.47 (d, 1H, J = 7.8 Hz, Gal
6'H-1), 4.24 (d, 1H, J = 2.3 Hz, Man3-H-2), 4.10,
4.06 (each bd, each 1H, Man4',4-H-2),2.90 (dd, 1H,
J = 4.2 Hz, 16.8 Hz, Asn-βCH), 2.81 (dd, 1H, J =
7.3 Hz,16.8 Hz, Asn-βCH), 2.07, 2.04, 2.01 (each
s, each 3H, Ac); MS(Fab) Calcd for C52H88N5O38[M
＋H+] 1390.5, found 1390.1
【０１５４】実施例３３ 化合物72の合成
化合物70(4.0mg, 2.8μmol)を上記の操作で13時間反応
させたところ、目的とする化合物72(2.9mg, 収率85%)で
得られた。得られた化合物の物理的データは以下の通り
である。
させたところ、目的とする化合物72(2.9mg, 収率85%)で
得られた。得られた化合物の物理的データは以下の通り
である。
【０１５５】1H-NMR (30℃)
δ5.09 (s, 1H, Man4-H-1), 5.06 (d, 1H, J = 9.8 Hz,
GlcNAc1- H-1), 4.91 (s, 1H, Man4'-H-1), 4.76 (s,
1H, Man3-H-1), 4.61, 4.54 (each d, each 1H,GlcNAc
2,5-H-1 ), 4.24 (s, 1H, Man3-H-2), 4.10, 4.06 (eac
h bs, each 1H, Man4,4'-H-2), 2.87 (dd, 1H, J = 1
7.2 Hz, Asn-βCH), 2.76 (dd, 1H, J = 6.5 Hz, 17.2
Hz, Asn-βCH), 2.07, 2.04, 2.00 (each s, each 3H,
Ac); MS(Fab) Calcd for C46H78N5O33[M＋H+] 1228.5,
found 1228.3
GlcNAc1- H-1), 4.91 (s, 1H, Man4'-H-1), 4.76 (s,
1H, Man3-H-1), 4.61, 4.54 (each d, each 1H,GlcNAc
2,5-H-1 ), 4.24 (s, 1H, Man3-H-2), 4.10, 4.06 (eac
h bs, each 1H, Man4,4'-H-2), 2.87 (dd, 1H, J = 1
7.2 Hz, Asn-βCH), 2.76 (dd, 1H, J = 6.5 Hz, 17.2
Hz, Asn-βCH), 2.07, 2.04, 2.00 (each s, each 3H,
Ac); MS(Fab) Calcd for C46H78N5O33[M＋H+] 1228.5,
found 1228.3
【０１５６】実施例３４ 化合物43の合成
化合物20 (5.4mg, 3.3μmol)を上記の操作で11時間反応
させたところ、目的とする化合物43(4.1mg, 収率87%)で
得られた。得られた化合物の物理的データは以下の通り
である。
させたところ、目的とする化合物43(4.1mg, 収率87%)で
得られた。得られた化合物の物理的データは以下の通り
である。
【０１５７】1H-NMR (30℃)
δ5.11 (s, 1H, Man4-H-1), 5.07 (d, 1H, J = 9.5 Hz,
GlcNAc1- H-1), 4.91 (s, 1H, Man4'-H-1), 4.77 (s,
1H, Man3-H-1), 4.61, 4.57 (each d, each 1H,GlcNAc
2,5-H-1), 4.46 (d, 1H, Gal6-H-1), 4.24 (s, 1H, Man
3-H-2), 4.18 (bs, 1H, Man4-H-2) 2.90 (dd, 1H, J =
4.0 Hz, 17.0 Hz, Asn-βCH), 2.80 (dd,1H, J = 7.3 H
z, 17.0 Hz, Asn-βCH), 2.07, 2.04, 2.01 (each s, e
ach 3H, Ac); MS(Fab) Calcd for C52H88N5O38[M＋H+]
1390.5, found 1390.2
GlcNAc1- H-1), 4.91 (s, 1H, Man4'-H-1), 4.77 (s,
1H, Man3-H-1), 4.61, 4.57 (each d, each 1H,GlcNAc
2,5-H-1), 4.46 (d, 1H, Gal6-H-1), 4.24 (s, 1H, Man
3-H-2), 4.18 (bs, 1H, Man4-H-2) 2.90 (dd, 1H, J =
4.0 Hz, 17.0 Hz, Asn-βCH), 2.80 (dd,1H, J = 7.3 H
z, 17.0 Hz, Asn-βCH), 2.07, 2.04, 2.01 (each s, e
ach 3H, Ac); MS(Fab) Calcd for C52H88N5O38[M＋H+]
1390.5, found 1390.2
【０１５８】実施例３５ 化合物73の合成
化合物71(4.0mg, 2.8μmol)を上記の操作で13時間反応
させたところ、目的とする化合物73(2.9mg, 収率85%)で
得られた。得られた化合物の物理的データは以下の通り
である。
させたところ、目的とする化合物73(2.9mg, 収率85%)で
得られた。得られた化合物の物理的データは以下の通り
である。
【０１５９】1H-NMR (30℃)
δ5.11 (s, 1H, Man4-H-1), 5.06 (d, 1H, J = 9.9 Hz,
GlcNAc1- H-1), 4.91 (s, 1H, Man4'-H-1), 4.77 (s,
1H, Man3-H-1), 4.60, 4.54 (each d, each 1H,J = 7.9
Hz, GlcNAc2,5- H-1), 4.24 (s, 1H, Man3-H-2), 4.18
(dd, 1H, J = 1.6 Hz, 1.6 Hz, Man4-H-2), 3.96 (1H,
dd, J = 1.6 Hz, 1.6 Hz, Man4-H-2), 2.88 (dd, 1H,
J = 4.3 Hz, 16.8 Hz, Asn-βCH), 2.77 (dd, 1H, J =
7.2 Hz, 16.8 Hz, Asn-βCH), 2.06, 2.04, 2.00 (each
s, each 3H, Ac); MS(Fab) Calcdfor C46H78N5O33[M＋
H+] 1228.5, found 1228.3
GlcNAc1- H-1), 4.91 (s, 1H, Man4'-H-1), 4.77 (s,
1H, Man3-H-1), 4.60, 4.54 (each d, each 1H,J = 7.9
Hz, GlcNAc2,5- H-1), 4.24 (s, 1H, Man3-H-2), 4.18
(dd, 1H, J = 1.6 Hz, 1.6 Hz, Man4-H-2), 3.96 (1H,
dd, J = 1.6 Hz, 1.6 Hz, Man4-H-2), 2.88 (dd, 1H,
J = 4.3 Hz, 16.8 Hz, Asn-βCH), 2.77 (dd, 1H, J =
7.2 Hz, 16.8 Hz, Asn-βCH), 2.06, 2.04, 2.00 (each
s, each 3H, Ac); MS(Fab) Calcdfor C46H78N5O33[M＋
H+] 1228.5, found 1228.3
【０１６０】実施例３６ 化合物39の合成
化合物16(2.2mg, 1.5μmol)を上記の操作で7時間反応さ
せたところ、目的とする化合物39(1.6mg, 収率84%)で得
られた。得られた化合物の物理的データは以下の通りで
ある。
せたところ、目的とする化合物39(1.6mg, 収率84%)で得
られた。得られた化合物の物理的データは以下の通りで
ある。
【０１６１】1H-NMR (30℃)
δ5.07 (d, 1H, J = 9.7Hz, GlcNAc1-H-1), 4.92 (s, 1
H, Man4'-H-1), 4.75 (s, 1H, Man3-H-1), 4.62, 4.58
(each d, each 1H, GlcNAc2,5-H-1), 4.09, 4.08(each
s, each 1H, Man3,4'-H-2), 2.91 (dd, 1H, J = 4.1 H
z, 16.9 Hz, Asn-βCH), 2.81 (dd, 1H, J = 6.8 Hz, 1
6.9 Hz, Asn-βCH), 2.08, 2.04, 2.01 (each s, each
3H, Ac); MS(Fab) Calcd for C46H77N5NaO33[M＋Na+] 1
250.4, found 1250.3
H, Man4'-H-1), 4.75 (s, 1H, Man3-H-1), 4.62, 4.58
(each d, each 1H, GlcNAc2,5-H-1), 4.09, 4.08(each
s, each 1H, Man3,4'-H-2), 2.91 (dd, 1H, J = 4.1 H
z, 16.9 Hz, Asn-βCH), 2.81 (dd, 1H, J = 6.8 Hz, 1
6.9 Hz, Asn-βCH), 2.08, 2.04, 2.01 (each s, each
3H, Ac); MS(Fab) Calcd for C46H77N5NaO33[M＋Na+] 1
250.4, found 1250.3
【０１６２】実施例３７ 化合物40の合成
化合物17(1.5mg, 1.2μmol)を上記の操作で14時間反応
させたところ、目的とする化合物40(1.1mg, 収率89%)で
得られた。得られた化合物の物理的データは以下の通り
である。
させたところ、目的とする化合物40(1.1mg, 収率89%)で
得られた。得られた化合物の物理的データは以下の通り
である。
【０１６３】1H-NMR (30℃)
δ5.07 (d, 1H, J = 9.5 Hz, GlcNAc1-H-1), 4.91 (s,
1H, Man4'-H-1), 4.76 (s, 1H, Man3-H-1), 4.62, 4.55
(each d, each 1H, GlcNAc2,5-H-1), 4.10, 4.07 (eac
h s, each 1H, Man4',3-H-2 ), 2.89 (dd, 1H, J = 3.7
Hz, 17.0 Hz, Asn-βCH), 2.79 (dd, 1H, J = 7.0 Hz,
17.0 Hz, Asn-βCH), 2.07, 2.05, 2.01(each s, each
3H, Ac); MS(Fab) Calcd for C40H67N5NaO28[M＋Na+]
1088.4, found 1088.2
1H, Man4'-H-1), 4.76 (s, 1H, Man3-H-1), 4.62, 4.55
(each d, each 1H, GlcNAc2,5-H-1), 4.10, 4.07 (eac
h s, each 1H, Man4',3-H-2 ), 2.89 (dd, 1H, J = 3.7
Hz, 17.0 Hz, Asn-βCH), 2.79 (dd, 1H, J = 7.0 Hz,
17.0 Hz, Asn-βCH), 2.07, 2.05, 2.01(each s, each
3H, Ac); MS(Fab) Calcd for C40H67N5NaO28[M＋Na+]
1088.4, found 1088.2
【０１６４】実施例３８ 化合物41の合成
化合物18(1.3mg, 1.2μmol)を上記の操作で14時間反応
させたところ、目的とする化合物41(0.8mg, 収率80%)で
得られた。得られた化合物の物理的データは以下の通り
である。
させたところ、目的とする化合物41(0.8mg, 収率80%)で
得られた。得られた化合物の物理的データは以下の通り
である。
【０１６５】1H-NMR (30℃)
δ5.07 (d, 1H, J = 9.5 Hz, GlcNAc1-H-1), 4.91 (s,
1H, Man4'-H-1), 4.76 (s, 1H, Man3-H-1), 4.62 (d, 1
H, J = 7.8 Hz, GlcNAc2-H-1), 4.08 (d, 1H, J= 2.9
Hz, Man3-H-2), 2.92 (dd, 1H, J = 3.9 Hz, 17.3 Hz,
Asn-βCH), 2.83(dd, 1H, J = 7.0 Hz, 17.3 Hz, Asn-
βCH), 2.07, 2.01 (each s, each 3H, Ac); MS(Fab) C
alcd for C32H55N4O27[M＋H+] 863.3, found 863.2
1H, Man4'-H-1), 4.76 (s, 1H, Man3-H-1), 4.62 (d, 1
H, J = 7.8 Hz, GlcNAc2-H-1), 4.08 (d, 1H, J= 2.9
Hz, Man3-H-2), 2.92 (dd, 1H, J = 3.9 Hz, 17.3 Hz,
Asn-βCH), 2.83(dd, 1H, J = 7.0 Hz, 17.3 Hz, Asn-
βCH), 2.07, 2.01 (each s, each 3H, Ac); MS(Fab) C
alcd for C32H55N4O27[M＋H+] 863.3, found 863.2
【０１６６】実施例３９ 化合物44の合成
化合物21(2.3mg, 1.6μmol)を上記の操作で7時間反応さ
せたところ、目的とする化合物44(1.6mg, 収率84%)で得
られた。得られた化合物の物理的データは以下の通りで
ある。
せたところ、目的とする化合物44(1.6mg, 収率84%)で得
られた。得られた化合物の物理的データは以下の通りで
ある。
【０１６７】1H-NMR (30℃)
δ5.11 (s, 1H, Man4-H-1), 5.06 (d, 1H, J = 9.8 Hz,
GlcNAc1- H-1), 4.77 (s, 1H, Man3-H-1), 4.61, 4.57
(each d, each 1H, GlcNAc2,5-H-1), 4.46 (d,1H, J =
7.8 Hz, Gal-H-1), 4.22, 4.18 (each bs, each 1H, M
an3,4-H-2), 2.91 (dd, 1H, J = 4.1 Hz, 17.3 Hz, Asn
-βCH), 2.82 (dd, 1H, J = 7.0 Hz, 17.3 Hz, Asn-βC
H), 2.05, 2.04, 2.01 (each s, each 3H, Ac); MS(Fa
b) Calcd for C46H78N5O33[M＋H+] 1228.5, found 122
8.3
GlcNAc1- H-1), 4.77 (s, 1H, Man3-H-1), 4.61, 4.57
(each d, each 1H, GlcNAc2,5-H-1), 4.46 (d,1H, J =
7.8 Hz, Gal-H-1), 4.22, 4.18 (each bs, each 1H, M
an3,4-H-2), 2.91 (dd, 1H, J = 4.1 Hz, 17.3 Hz, Asn
-βCH), 2.82 (dd, 1H, J = 7.0 Hz, 17.3 Hz, Asn-βC
H), 2.05, 2.04, 2.01 (each s, each 3H, Ac); MS(Fa
b) Calcd for C46H78N5O33[M＋H+] 1228.5, found 122
8.3
【０１６８】実施例４０ 化合物45の合成
化合物22(1.6mg, 1.3μmol)を上記の操作で14時間反応
させたところ、目的とする化合物45(1.1mg, 収率85%)で
得られた。得られた化合物の物理的データは以下の通り
である。
させたところ、目的とする化合物45(1.1mg, 収率85%)で
得られた。得られた化合物の物理的データは以下の通り
である。
【０１６９】1H-NMR (30℃)
δ5.12 (s, 1H, Man4-H-1), 5.07 (d, 1H, J = 9.7 Hz,
GlcNAc1-H-1), 4.77 (s, 1H, Man3-H-1), 4.61, 4.54
(each d, each 1H, GlcNAc2,5-H-1), 4.22 (d, 1H, J =
2.5 Hz, Man3-H-2), 4.18 (dd, 1H, J = 1.4 Hz, 3.0
Hz, Man4'-H-2),2.89 (dd, 1H, J = 4.3 Hz, 16.9 Hz,
Asn-βCH), 2.78 (dd, 1H, J = 7.5 Hz,16.9 Hz, Asn-
βCH), 2.06, 2.05, 2.01 (each s, each 3H, Ac); MS
(Fab) Calcd for C40H67N5NaO28[M＋Na+] 1088.4, fou
nd 1088.3.
GlcNAc1-H-1), 4.77 (s, 1H, Man3-H-1), 4.61, 4.54
(each d, each 1H, GlcNAc2,5-H-1), 4.22 (d, 1H, J =
2.5 Hz, Man3-H-2), 4.18 (dd, 1H, J = 1.4 Hz, 3.0
Hz, Man4'-H-2),2.89 (dd, 1H, J = 4.3 Hz, 16.9 Hz,
Asn-βCH), 2.78 (dd, 1H, J = 7.5 Hz,16.9 Hz, Asn-
βCH), 2.06, 2.05, 2.01 (each s, each 3H, Ac); MS
(Fab) Calcd for C40H67N5NaO28[M＋Na+] 1088.4, fou
nd 1088.3.
【０１７０】実施例４１ 化合物46の合成
化合物23(1.6mg, 1.5μmol)を上記の操作で14時間反応
させたところ、目的とする化合物46(1.1mg, 6.4μmol,
収率85%)で得られた。得られた化合物の物理的データは
以下の通りである。
させたところ、目的とする化合物46(1.1mg, 6.4μmol,
収率85%)で得られた。得られた化合物の物理的データは
以下の通りである。
【０１７１】1H-NMR (30℃)
δ5.10 (s, 1H, Man4-H-1), 5.06 (d, 1H, J = 9.5 Hz,
GlcNAc1- H-1), 4.77 (s, 1H, Man3-H-1), 4.61 (d, 1
H, J = 7.3 Hz, GlcNAc2-H-1), 4.22 (d, 1H, J= 2.4 H
z, Man3-H-2), 4.07 (dd, 1H, J = 1.6 Hz, 3.0 Hz, Ma
n4'-H-2), 2.90(dd, 1H, J = 4.3 Hz, 17.0 Hz, Asn-β
CH), 2.80 (dd, 1H, J = 7.0 Hz, 17.2Hz, Asn-βCH),
2.05, 2.01 (each s, each 3H, Ac); MS(Fab) Calcd fo
r C32H5 5N4O23[M＋H+] 863.3, found 863.3
GlcNAc1- H-1), 4.77 (s, 1H, Man3-H-1), 4.61 (d, 1
H, J = 7.3 Hz, GlcNAc2-H-1), 4.22 (d, 1H, J= 2.4 H
z, Man3-H-2), 4.07 (dd, 1H, J = 1.6 Hz, 3.0 Hz, Ma
n4'-H-2), 2.90(dd, 1H, J = 4.3 Hz, 17.0 Hz, Asn-β
CH), 2.80 (dd, 1H, J = 7.0 Hz, 17.2Hz, Asn-βCH),
2.05, 2.01 (each s, each 3H, Ac); MS(Fab) Calcd fo
r C32H5 5N4O23[M＋H+] 863.3, found 863.3
【０１７２】実施例４２ 化合物34の合成
化合物11(12.4mg, 7.5μmol)を上記の操作で11時間反応
させたところ、目的とする化合物34(９.2mg, 収率86%)
で得られた。得られた化合物の物理的データは以下の通
りである。
させたところ、目的とする化合物34(９.2mg, 収率86%)
で得られた。得られた化合物の物理的データは以下の通
りである。
【０１７３】1H-NMR (30℃)
δ5.11 (s, 1H, Man4-H-1), 5.07 (d, 1H, J = 10.0 H
z, GlcNAc1-H-1), 4.91 (s, 1H, Man4'-H-1), 4.77 (s,
1H, Man3-H-1), 4.61 (d, 1H, J = 6.8 Hz, GlcNAc2-H
-1), 4.55 (d, 2H, GlcNAc5,5'-H-1), 4.24 (bs, 1H, M
an3-H-2), 4.18 (bs, 1H, Man4'-H-2), 4.10 (bs, 1H,
Man4-H-2), 2.80 (dd, 1H, J = 3.8 Hz, 15.6 Hz, Asn-
βCH), 2.63 (dd, 1H, J = 8.2 Hz, 15.6 Hz, Asn-βC
H), 2.07 (s,3H, Ac), 2.05 (s, 6H, Ac×2), 2.01 (s,
3H, Ac); MS(Fab) Calcd for C54H9 0N6NaO38[M＋Na+]
1453.5, found 1453.2
z, GlcNAc1-H-1), 4.91 (s, 1H, Man4'-H-1), 4.77 (s,
1H, Man3-H-1), 4.61 (d, 1H, J = 6.8 Hz, GlcNAc2-H
-1), 4.55 (d, 2H, GlcNAc5,5'-H-1), 4.24 (bs, 1H, M
an3-H-2), 4.18 (bs, 1H, Man4'-H-2), 4.10 (bs, 1H,
Man4-H-2), 2.80 (dd, 1H, J = 3.8 Hz, 15.6 Hz, Asn-
βCH), 2.63 (dd, 1H, J = 8.2 Hz, 15.6 Hz, Asn-βC
H), 2.07 (s,3H, Ac), 2.05 (s, 6H, Ac×2), 2.01 (s,
3H, Ac); MS(Fab) Calcd for C54H9 0N6NaO38[M＋Na+]
1453.5, found 1453.2
【０１７４】実施例４３ 化合物35の合成
化合物12(12.0mg, 8.4μmol)を上記の操作で11時間反応
させたところ、目的とする化合物35(7.0mg, 収率81% )
で得られた。得られた化合物の物理的データは以下の通
りである。
させたところ、目的とする化合物35(7.0mg, 収率81% )
で得られた。得られた化合物の物理的データは以下の通
りである。
【０１７５】1H-NMR (30℃)
δ5.10 (s, 1H, Man4-H-1), 5.07 (d, 1H, J = 9.7 Hz,
GlcNAc1-H-1), 4.91 (s, 1H, Man4'-H-1), 4.78 (s, 1
H, Man3-H-1), 4.61 (d, 1H, J = 8.0 Hz, GlcNAc2-H-
1), 4.25 (bs, 1H, Man3-H-2), 4.06 (bs, 1H, Man4'-H
-2), 3.97 (bs, 1H, Man4-H-2), 2.79 (dd, 1H, J = 5.
0 Hz, 17.0 Hz, Asn-βCH), 2.61 (dd, 1H,J = 7.3 Hz,
17.0 Hz, Asn-βCH), 2.07, 2.01 (each s, each 3H,
Ac); MS(Fab) Calcd for C38H65N4O28[M＋H+] 1025.4,
found 1025.2
GlcNAc1-H-1), 4.91 (s, 1H, Man4'-H-1), 4.78 (s, 1
H, Man3-H-1), 4.61 (d, 1H, J = 8.0 Hz, GlcNAc2-H-
1), 4.25 (bs, 1H, Man3-H-2), 4.06 (bs, 1H, Man4'-H
-2), 3.97 (bs, 1H, Man4-H-2), 2.79 (dd, 1H, J = 5.
0 Hz, 17.0 Hz, Asn-βCH), 2.61 (dd, 1H,J = 7.3 Hz,
17.0 Hz, Asn-βCH), 2.07, 2.01 (each s, each 3H,
Ac); MS(Fab) Calcd for C38H65N4O28[M＋H+] 1025.4,
found 1025.2
【０１７６】実施例４４ 化合物76、77の合成および単
離 化合物2、6(5.0mg, 2.2μmol)を220μLの水に溶解さ
せ、22mMの炭酸セシウム水溶液を100μL加え、pH7.0と
した。この溶液を凍結乾燥した。乾燥後の固形物にN,N-
ジメチルホルムアミドを430μL加え、更に6.6μmolのベ
ンジルブロマイド／N,N-ジメチルホルムアミド溶液を20
μL加えた。この溶液をアルゴン雰囲気下で攪拌した。4
8時間後、TLC（展開溶媒は１M NH4OAc：イソプロパノー
ル＝２：１を用いた）にて原料の消失を確認した後、4.
4mLのジエチルエーテルを加えて化合物を沈殿させた。
沈殿した糖鎖を濾過し、残った糖鎖を水に溶解させ凍結
乾燥した。凍結乾燥後の残留物を分取HPLC(YMC Packed
Column D-ODS-5 S-5 120AODS No.2020178、20×250m
m、展開溶媒は50mM酢酸アンモニウム水溶液：アセトニ
トリル＝78：22、流速4.0mL/min)で精製したところ、88
分後に化合物77が、91分後に化合物76が溶出した。それ
ぞれを取り分け、更にODSカラム(コスモシール75C18-OP
N、15×100mm、最初にH2Oを50mL流し、次に25％アセト
ニトリルを流して溶出させた)で脱塩したところ、目的
とする化合物76が1.6mg、化合物77が1.8mg得られた。得
られた化合物の物理的データは以下の通りである。
離 化合物2、6(5.0mg, 2.2μmol)を220μLの水に溶解さ
せ、22mMの炭酸セシウム水溶液を100μL加え、pH7.0と
した。この溶液を凍結乾燥した。乾燥後の固形物にN,N-
ジメチルホルムアミドを430μL加え、更に6.6μmolのベ
ンジルブロマイド／N,N-ジメチルホルムアミド溶液を20
μL加えた。この溶液をアルゴン雰囲気下で攪拌した。4
8時間後、TLC（展開溶媒は１M NH4OAc：イソプロパノー
ル＝２：１を用いた）にて原料の消失を確認した後、4.
4mLのジエチルエーテルを加えて化合物を沈殿させた。
沈殿した糖鎖を濾過し、残った糖鎖を水に溶解させ凍結
乾燥した。凍結乾燥後の残留物を分取HPLC(YMC Packed
Column D-ODS-5 S-5 120AODS No.2020178、20×250m
m、展開溶媒は50mM酢酸アンモニウム水溶液：アセトニ
トリル＝78：22、流速4.0mL/min)で精製したところ、88
分後に化合物77が、91分後に化合物76が溶出した。それ
ぞれを取り分け、更にODSカラム(コスモシール75C18-OP
N、15×100mm、最初にH2Oを50mL流し、次に25％アセト
ニトリルを流して溶出させた)で脱塩したところ、目的
とする化合物76が1.6mg、化合物77が1.8mg得られた。得
られた化合物の物理的データは以下の通りである。
【０１７７】化合物76のデータ1
H-NMR (30℃)
δ7.92 (d, 2H, J = 7.5 Hz, Fmoc), 7.71 (d, 2H, J =
7.5 Hz, Fmoc), 7.53-7.40 (m, 9H, Fmoc, -CH2-Ph),
5.38 (d, 1H, J = 12.1 Hz, -CH 2-Ph), 5.31 (d,1H, J
= 12.1 Hz, -CH 2-Ph), 5.12 (s, 1H, Man4-H-1), 4.99
(d, 1H, J = 9.5 Hz, GlcNAc1-H-1), 4.92 (s, 1H, Ma
n4'-H-1), 4.76 (s, 1H, Man3-H-1), 4.58 (m, 3H, Glc
NAc2,5,5'-H-1), 4.47 (d, 1H, J = 7.9 Hz, Gal6'- H-
1), 4.33(d, 1H, J = 7.9 Hz, Gal6-H-1), 4.24 (bs, 1
H, Man3-H-2), 4.19 (bs, 1H, Man4'-H-2), 4.11 (bs,
1H, Man4-H-2), 2.72 (bd, 1H, Asn-βCH), 2.68 (dd,
1H, J = 4.6 Hz, 12.7 Hz, NeuAc7-H-3eq), 2.52 (dd,
1H, J = 8.7 Hz, 15.0 Hz,Asn-βCH), 2.07, 2.04, 2.0
3, 2.02, 1.89 (each s, each 3H, Ac) 1.84 (dd,1H, J
= 12.7 Hz, 12.7 Hz, NeuAc7-H3ax); MS(Fab) Calcd f
or C99H143N17NaO 58[M＋H+] 2380.8, found 2380.0.
7.5 Hz, Fmoc), 7.53-7.40 (m, 9H, Fmoc, -CH2-Ph),
5.38 (d, 1H, J = 12.1 Hz, -CH 2-Ph), 5.31 (d,1H, J
= 12.1 Hz, -CH 2-Ph), 5.12 (s, 1H, Man4-H-1), 4.99
(d, 1H, J = 9.5 Hz, GlcNAc1-H-1), 4.92 (s, 1H, Ma
n4'-H-1), 4.76 (s, 1H, Man3-H-1), 4.58 (m, 3H, Glc
NAc2,5,5'-H-1), 4.47 (d, 1H, J = 7.9 Hz, Gal6'- H-
1), 4.33(d, 1H, J = 7.9 Hz, Gal6-H-1), 4.24 (bs, 1
H, Man3-H-2), 4.19 (bs, 1H, Man4'-H-2), 4.11 (bs,
1H, Man4-H-2), 2.72 (bd, 1H, Asn-βCH), 2.68 (dd,
1H, J = 4.6 Hz, 12.7 Hz, NeuAc7-H-3eq), 2.52 (dd,
1H, J = 8.7 Hz, 15.0 Hz,Asn-βCH), 2.07, 2.04, 2.0
3, 2.02, 1.89 (each s, each 3H, Ac) 1.84 (dd,1H, J
= 12.7 Hz, 12.7 Hz, NeuAc7-H3ax); MS(Fab) Calcd f
or C99H143N17NaO 58[M＋H+] 2380.8, found 2380.0.
【０１７８】化合物77のデータ1
H-NMR (30℃)
δ7.91 (d, 2H, J =7.5 Hz, Fmoc), 7.71 (d, 2H, J =
7.5 Hz, Fmoc), 7.53-7.41 (m, 9H, Fmoc, -CH2-Ph),
5.37 (d, 1H, J = 12.1 Hz, -CH 2-Ph), 5.31 (d,1H, J
= 12.1 Hz, -CH 2-Ph), 5.12 (s, 1H, Man4-H-1), 4.99
(d, 1H, J = 9.8Hz, GlcNAc1-H-1), 4.93 (s, 1H, Man
4'-H-1), 4.76 (s, 1H, Man3-H-1), 4.58(m, 3H, GlcNA
c2,5,5'-H-1), 4.46 (1H, d, J = 7.8 Hz, Gal6-H-1),
4.33 (d,1H, J =7.8 Hz, Gal6'-H-1), 4.24 (bs, 1H, M
an3-H-2), 4.19 (bs, 1H, Man4'-H-2), 4.11 (bs, 1H,
Man4-H-2), 2.72 (bd, 1H, Asn-βCH), 2.68 (dd, 1H,
J= 4.8 Hz, 13.0 Hz, NeuAc7-H-3eq), 2.52 (bdd, 1H,
J = 9.7 Hz, 14.1 Hz, Asn-βCH), 2.06, 2.05, 2.04,
2.02, 1.89 (each s, each 3H, Ac), 1.84 (dd, 1H, J
= 13.0 Hz, 13.0 Hz, NeuAc7-H-3ax); MS(Fab) Calcd f
or C99H143N7NaO58[M＋H+] 2380.8, found 2380.5
7.5 Hz, Fmoc), 7.53-7.41 (m, 9H, Fmoc, -CH2-Ph),
5.37 (d, 1H, J = 12.1 Hz, -CH 2-Ph), 5.31 (d,1H, J
= 12.1 Hz, -CH 2-Ph), 5.12 (s, 1H, Man4-H-1), 4.99
(d, 1H, J = 9.8Hz, GlcNAc1-H-1), 4.93 (s, 1H, Man
4'-H-1), 4.76 (s, 1H, Man3-H-1), 4.58(m, 3H, GlcNA
c2,5,5'-H-1), 4.46 (1H, d, J = 7.8 Hz, Gal6-H-1),
4.33 (d,1H, J =7.8 Hz, Gal6'-H-1), 4.24 (bs, 1H, M
an3-H-2), 4.19 (bs, 1H, Man4'-H-2), 4.11 (bs, 1H,
Man4-H-2), 2.72 (bd, 1H, Asn-βCH), 2.68 (dd, 1H,
J= 4.8 Hz, 13.0 Hz, NeuAc7-H-3eq), 2.52 (bdd, 1H,
J = 9.7 Hz, 14.1 Hz, Asn-βCH), 2.06, 2.05, 2.04,
2.02, 1.89 (each s, each 3H, Ac), 1.84 (dd, 1H, J
= 13.0 Hz, 13.0 Hz, NeuAc7-H-3ax); MS(Fab) Calcd f
or C99H143N7NaO58[M＋H+] 2380.8, found 2380.5
【０１７９】実施例４５ 化合物78の合成
４℃に冷やしたDowex-50Wx8(H+)のカラム（φ0.5 cm x
5 cm）に化合物１（20mg）の冷水溶液を流し、溶出した
水溶液を凍結乾燥した。得られた凍結乾燥物を４℃の冷
水に溶かし、これにCs2CO3水溶液(2.5mg/1ml)を加え水
溶液のpHが5〜６になるよう調整し、その後、該水溶液
を凍結乾燥した。凍結乾燥後のFmoc-ジシアロ糖鎖試料
をDryDMF（1.3ml）に溶かし、ベンジルブロミド（5.1μ
l）を加えてアルゴン気流下室温で45時間攪拌した。TLC
で反応終了を確認後、反応溶液を0℃に冷やしジエチル
エーテル10mlを加え目的物を析出させた。これをろ紙で
ろ過した。残った目的物に蒸留水を加えろ液として溶出
させ、続いてこれを減圧濃縮した。得られた残渣をODS
カラム(φ 1.6cm x 14cm, 溶出液：H2O →４０％MeOH水
溶液)にかけ精製し化合物78(18.2mg, 収率85% )を得
た。得られた化合物78の物理的データは以下の通りであ
る。
5 cm）に化合物１（20mg）の冷水溶液を流し、溶出した
水溶液を凍結乾燥した。得られた凍結乾燥物を４℃の冷
水に溶かし、これにCs2CO3水溶液(2.5mg/1ml)を加え水
溶液のpHが5〜６になるよう調整し、その後、該水溶液
を凍結乾燥した。凍結乾燥後のFmoc-ジシアロ糖鎖試料
をDryDMF（1.3ml）に溶かし、ベンジルブロミド（5.1μ
l）を加えてアルゴン気流下室温で45時間攪拌した。TLC
で反応終了を確認後、反応溶液を0℃に冷やしジエチル
エーテル10mlを加え目的物を析出させた。これをろ紙で
ろ過した。残った目的物に蒸留水を加えろ液として溶出
させ、続いてこれを減圧濃縮した。得られた残渣をODS
カラム(φ 1.6cm x 14cm, 溶出液：H2O →４０％MeOH水
溶液)にかけ精製し化合物78(18.2mg, 収率85% )を得
た。得られた化合物78の物理的データは以下の通りであ
る。
【０１８０】1H-NMR ( 30℃ )
7.90 (d, 2H, Fmoc), 7.70 (d, 2H, Fmoc), 7.53-7.40
(m, 9H, Bn, Fmoc), 5.36 (d, 2H, J = 11.6 Hz, CH2),
5.30 (d, 2H, J = 11.6 Hz, CH2), 5.12 (s, 1H, Man4
- H1), 4.99 (d, 1H, J = 9.7 Hz, GlcNAc1- H1), 4.93
(s, 1H, Man4'-H1), 4.75 (s, 1H, Man3- H1), 4.57
(m, 3H, GlcNAc2- H1, GlcNAc5, 5'- H1),4.32 (d, 2H,
Gal6, 6'- H1), 4.24 (d, 1H, Man3- H2), 4.18 (d, 1
H, Man4'-H2), 4.10 (1H, d, Man4- H2), 2.72 (bd, 1
H, Asn-βCH), 2.67 (dd, 2H, NeuAc7, 7'- H3eq), 2.
51 (bdd, 1H, Asn-βCH ), 2.06 (s, 3H, Ac), 2.03,
2.01(each s, each 6H, Ac x 2), 1.89 (s, 3H, Ac),
1.83 (2H, dd, J = 12.2, 12.2 Hz, NeuAc7, 7'-
H3ax)；HRMS Calcd for C117H165N8Na2O66[M＋Na+] 27
83.9597, found 2783.9501
(m, 9H, Bn, Fmoc), 5.36 (d, 2H, J = 11.6 Hz, CH2),
5.30 (d, 2H, J = 11.6 Hz, CH2), 5.12 (s, 1H, Man4
- H1), 4.99 (d, 1H, J = 9.7 Hz, GlcNAc1- H1), 4.93
(s, 1H, Man4'-H1), 4.75 (s, 1H, Man3- H1), 4.57
(m, 3H, GlcNAc2- H1, GlcNAc5, 5'- H1),4.32 (d, 2H,
Gal6, 6'- H1), 4.24 (d, 1H, Man3- H2), 4.18 (d, 1
H, Man4'-H2), 4.10 (1H, d, Man4- H2), 2.72 (bd, 1
H, Asn-βCH), 2.67 (dd, 2H, NeuAc7, 7'- H3eq), 2.
51 (bdd, 1H, Asn-βCH ), 2.06 (s, 3H, Ac), 2.03,
2.01(each s, each 6H, Ac x 2), 1.89 (s, 3H, Ac),
1.83 (2H, dd, J = 12.2, 12.2 Hz, NeuAc7, 7'-
H3ax)；HRMS Calcd for C117H165N8Na2O66[M＋Na+] 27
83.9597, found 2783.9501
【０１８１】
【発明の効果】本発明によれば、所望の糖鎖構造を有す
る、様々な糖鎖類を非常に容易かつ大量に得ることがで
きる。従って、癌、炎症、インフルエンザなどの治療薬
への利用が期待される。特に、本発明により得られ得る
糖鎖アスパラギン誘導体、糖鎖アスパラギンは製造工程
における毒性成分の混入等の危険性はなく安全性に優れ
たものである。
る、様々な糖鎖類を非常に容易かつ大量に得ることがで
きる。従って、癌、炎症、インフルエンザなどの治療薬
への利用が期待される。特に、本発明により得られ得る
糖鎖アスパラギン誘導体、糖鎖アスパラギンは製造工程
における毒性成分の混入等の危険性はなく安全性に優れ
たものである。
【図１】図１は、本発明により得られ得る糖鎖アスパラ
ギン誘導体の一群の構造を示す図である。
ギン誘導体の一群の構造を示す図である。
【図２】図２は、本発明により得られ得る糖鎖アスパラ
ギンの一群の構造を示す図である。
ギンの一群の構造を示す図である。
【図３】図３は、本発明により得られ得る糖鎖の一群の
構造を示す図である。
構造を示す図である。
【図４】図４は、本発明の糖鎖アスパラギン誘導体の製
造方法における工程の一例を示す図である。
造方法における工程の一例を示す図である。
【図５】図５は、種々の糖加水分解酵素を用いた糖鎖ア
スパラギン誘導体の変換工程の一例を示す図である。
スパラギン誘導体の変換工程の一例を示す図である。
【図６】図６は、種々の糖加水分解酵素を用いた糖鎖ア
スパラギン誘導体の変換工程の一例を示す図である。
スパラギン誘導体の変換工程の一例を示す図である。
【図７】図７は、種々の糖加水分解酵素を用いた糖鎖ア
スパラギン誘導体の変換工程の一例を示す図である。
スパラギン誘導体の変換工程の一例を示す図である。
【図８】図８は、種々の糖加水分解酵素を用いた糖鎖ア
スパラギン誘導体の変換工程の一例を示す図である。
スパラギン誘導体の変換工程の一例を示す図である。
【図９】図９は、糖鎖アスパラギン誘導体からの保護基
（Ｆｍｏｃ基）の除去工程および糖鎖アスパラギンから
のアスパラギン残基の除去工程の一例を示す図である。
（Ｆｍｏｃ基）の除去工程および糖鎖アスパラギンから
のアスパラギン残基の除去工程の一例を示す図である。
フロントページの続き
(72)発明者 佐々木 賢
三重県四日市市赤堀新町９番５号 太陽化
学株式会社内
Ｆターム(参考） 4B064 AF21 CA21 CB07 CE07 CE10
DA20
4C057 AA18 BB04 CC03
4C090 AA04 AA05 BA79 BA97 BB03
BB53 BB94 BC27 CA13 CA38
DA09 DA23
4H045 AA10 AA20 BA14 CA40 EA62
FA70 GA22 GA25
Claims (19)
- 【請求項１】 （ａ）１種もしくは２種以上の糖鎖アス
パラギンを含む混合物に含まれる該糖鎖アスパラギンに
脂溶性の保護基を導入して糖鎖アスパラギン誘導体混合
物を得る工程、ならびに（ｂ）該糖鎖アスパラギン誘導
体混合物または該糖鎖アスパラギン誘導体混合物に含ま
れる糖鎖アスパラギン誘導体を加水分解して得られる混
合物をクロマトグラフィーに供して各糖鎖アスパラギン
誘導体を分離する工程、を含む、糖鎖アスパラギン由来
の糖鎖アスパラギン誘導体の製造方法。 - 【請求項２】 （ｂ’）工程（ｂ）で分離された糖鎖ア
スパラギン誘導体を糖加水分解酵素を用いて加水分解す
る工程をさらに含む請求項１記載の糖鎖アスパラギン誘
導体の製造方法。 - 【請求項３】 １種もしくは２種以上の糖鎖アスパラギ
ンを含む混合物が、 【化１】 および／または該化合物において１以上の糖残基が欠失
した化合物を含むものである、請求項１または２記載の
糖鎖アスパラギン誘導体の製造方法。 - 【請求項４】 脂溶性の保護基がフルオレニルメトキシ
カルボニル（Ｆｍｏｃ）基である請求項１〜３いずれか
記載の糖鎖アスパラギン誘導体の製造方法。 - 【請求項５】 工程（ａ）が、非還元末端にシアル酸残
基を有する１種もしくは２種以上の糖鎖アスパラギンを
含む混合物に含まれる該糖鎖アスパラギンにＦｍｏｃ基
を導入し、かつシアル酸残基にベンジル基を導入して糖
鎖アスパラギン誘導体混合物を得る工程である、請求項
１〜３いずれか記載の糖鎖アスパラギン誘導体の製造方
法。 - 【請求項６】 （ａ）１種もしくは２種以上の糖鎖アス
パラギンを含む混合物に含まれる該糖鎖アスパラギンに
脂溶性の保護基を導入して糖鎖アスパラギン誘導体混合
物を得る工程、（ｂ）該糖鎖アスパラギン誘導体混合物
または該糖鎖アスパラギン誘導体混合物に含まれる糖鎖
アスパラギン誘導体を加水分解して得られる混合物をク
ロマトグラフィーに供して各糖鎖アスパラギン誘導体を
分離する工程、ならびに（ｃ）工程（ｂ）で分離された
糖鎖アスパラギン誘導体の保護基を除去して糖鎖アスパ
ラギンを得る工程、を含む、糖鎖アスパラギンの製造方
法。 - 【請求項７】 （ｂ’）工程（ｂ）で分離された糖鎖ア
スパラギン誘導体を糖加水分解酵素を用いて加水分解す
る工程、および／または（ｃ’）工程（ｃ）で得られた
糖鎖アスパラギンを糖加水分解酵素を用いて加水分解す
る工程、をさらに含む、請求項６記載の糖鎖アスパラギ
ンの製造方法。 - 【請求項８】 １種もしくは２種以上の糖鎖アスパラギ
ンを含む混合物が、 【化２】 および／または該化合物において１以上の糖残基が欠失
した化合物を含むものである、請求項６または７記載の
糖鎖アスパラギンの製造方法。 - 【請求項９】 脂溶性の保護基がＦｍｏｃ基である請求
項６〜８いずれか記載の糖鎖アスパラギンの製造方法。 - 【請求項１０】 工程（ａ）が、非還元末端にシアル酸
残基を有する１種もしくは２種以上の糖鎖アスパラギン
を含む混合物に含まれる該糖鎖アスパラギンにＦｍｏｃ
基を導入し、かつシアル酸残基にベンジル基を導入して
糖鎖アスパラギン誘導体混合物を得る工程である、請求
項６〜８いずれか記載の糖鎖アスパラギンの製造方法。 - 【請求項１１】 （ａ）１種もしくは２種以上の糖鎖ア
スパラギンを含む混合物に含まれる該糖鎖アスパラギン
に脂溶性の保護基を導入して糖鎖アスパラギン誘導体混
合物を得る工程、（ｂ）該糖鎖アスパラギン誘導体混合
物または該糖鎖アスパラギン誘導体混合物に含まれる糖
鎖アスパラギン誘導体を加水分解して得られる混合物を
クロマトグラフィーに供して各糖鎖アスパラギン誘導体
を分離する工程、（ｃ）工程（ｂ）で分離された糖鎖ア
スパラギン誘導体の保護基を除去して糖鎖アスパラギン
を得る工程、ならびに（ｄ）工程（ｃ）で得られた糖鎖
アスパラギンのアスパラギン残基を除去して糖鎖を得る
工程、を含む、糖鎖の製造方法。 - 【請求項１２】 （ｂ’）工程（ｂ）で分離された糖鎖
アスパラギン誘導体を糖加水分解酵素を用いて加水分解
する工程、および／または（ｃ’）工程（ｃ）で得られ
た糖鎖アスパラギンを糖加水分解酵素を用いて加水分解
する工程、および／または（ｄ’）工程（ｄ）で得られ
た糖鎖を糖加水分解酵素を用いて加水分解する工程、を
さらに含む、請求項１１記載の糖鎖の製造方法。 - 【請求項１３】 １種もしくは２種以上の糖鎖アスパラ
ギンを含む混合物が、 【化３】 および／または該化合物において１以上の糖残基が欠失
した化合物を含むものである、請求項１１または１２記
載の糖鎖の製造方法。 - 【請求項１４】 脂溶性の保護基がＦｍｏｃ基である請
求項１１〜１３いずれか記載の糖鎖の製造方法。 - 【請求項１５】 工程（ａ）が、非還元末端にシアル酸
残基を有する１種もしくは２種以上の糖鎖アスパラギン
を含む混合物に含まれる該糖鎖アスパラギンにＦｍｏｃ
基を導入し、かつシアル酸残基にベンジル基を導入して
糖鎖アスパラギン誘導体混合物を得る工程である、請求
項１１〜１３いずれか記載の糖鎖の製造方法。 - 【請求項１６】 一般式： 【化４】 を有する糖鎖アスパラギン誘導体。
- 【請求項１７】 一般式： 【化５】 を有する糖鎖アスパラギン誘導体。
- 【請求項１８】 一般式： 【化６】 を有する糖鎖アスパラギン。
- 【請求項１９】 一般式： 【化７】 を有する糖鎖。
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|---|---|---|---|
| JP2002178032A JP4323139B2 (ja) | 2001-06-19 | 2002-06-19 | 糖鎖アスパラギン誘導体の製造方法 |
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| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2001-185685 | 2001-06-19 | ||
| JP2001185685 | 2001-06-19 | ||
| JP2002178032A JP4323139B2 (ja) | 2001-06-19 | 2002-06-19 | 糖鎖アスパラギン誘導体の製造方法 |
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|---|---|
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|---|---|---|---|
| JP2002178032A Expired - Fee Related JP4323139B2 (ja) | 2001-06-19 | 2002-06-19 | 糖鎖アスパラギン誘導体の製造方法 |
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| WO2023219065A1 (ja) | 2022-05-13 | 2023-11-16 | 株式会社糖鎖工学研究所 | シアル酸含有糖鎖の製造方法 |
| WO2024122608A1 (ja) * | 2022-12-07 | 2024-06-13 | Ｋｈネオケム株式会社 | 糖ペプチドを分離する方法 |
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| CN100413889C (zh) * | 2002-12-24 | 2008-08-27 | 大塚化学株式会社 | 糖链天冬酰胺衍生物、糖链天冬酰胺和糖链以及它们的制造方法 |
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| FI20031536A0 (fi) * | 2003-10-20 | 2003-10-20 | Biotie Therapies Oyj | Korkean affiniteetin ligandit influenssavirukselle ja menetelmät niiden valmistamiseen |
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