JP2004196683A - キノリンオキシド誘導体およびその製造方法 - Google Patents
キノリンオキシド誘導体およびその製造方法 Download PDFInfo
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Abstract
【課題】 哺乳類における内因性メラトニン含量は極微量であり、しかも従来の分析法は感度が低いので、メラトニンを分析するために被験者の負担になる程度の量の血液が必要であった。この発明はできるだけ微量の採血でメラトニンの量を分析・測定できるようにした高感度なメラトニンの分析手段を提供すること、ならびに強い蛍光を有するキノリンオキシド誘導体を提供すること。
【解決手段】一般式［IV］で示されるメラトニンなどのインドール誘導体を酸化して得られた一般式［I］で示されるキノリンオキサイド誘導体は、その蛍光強度を測定することによって、メラトニンならびにインドール誘導体の量を測定することができる。
【選択図】 なし
【解決手段】一般式［IV］で示されるメラトニンなどのインドール誘導体を酸化して得られた一般式［I］で示されるキノリンオキサイド誘導体は、その蛍光強度を測定することによって、メラトニンならびにインドール誘導体の量を測定することができる。
【選択図】 なし
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】
この発明は、キノリンオキシド誘導体およびその製造方法に関するものであり、更に詳細には、蛍光特性を有するキノリンオキシド誘導体およびその製造方法に関するものである。また、この発明はキノリンオキシド誘導体が発する強い蛍光を利用したキノリンオキシド誘導体の分析方法およびその分析装置に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
急速に都市化、情報化の進んだ現代社会は２４時間化しており、人々のライフスタイルの多様化と共に睡眠覚醒症候群を含む生体リズム障害が急増している。これらの疾患は成人の社会生活を困難とし、幼児期、高齢者においては生活支援者の生活にも重大な問題を生じる。
【０００３】
また、このリズム障害は投与薬物の副作用の減弱と薬効の増強を目的とする時間治療、すなわち薬物投与のタイミングを最適化する治療の導入を困難とし、様々な疾患において治療法に制限を与える。
【０００４】
更にまた、例えば、未熟児や新生児の医療現場におけるような微量の試料しか採取できない場合において、生体成分や薬物などの微量分析が要請されるときには、蛍光分析法が広く利用されている。特に誘導体化試薬を用いる蛍光誘導体化法はそれ自体吸収や蛍光を持たない様々な分析対象に対して高感度かつ選択的な分析を可能にする極めて有効な手段であるといえる。
【０００５】
また、これまで蛍光標識を目的としてＤＮＳ−Ｃｌ、ＮＢＤ−Ｆなどの数多くの優れた試薬が開発されているけれども、これらの蛍光標識試薬にしても、安定性、感度、溶解性などにおいて問題を有するものも少なくない。例えば、ＤＮＳ誘導体は感度が不足するという欠点が、またＮＢＤ誘導体は光で分解されるという問題を有している。更に、当然のことながら、それらの蛍光標識試薬を用いた分析法や分析装置も問題を有する結果になっている。
【０００６】
上記したようなリズム障害に対する著効な薬として、また生体リズムのマーカーとして、松果体から血液中に分泌されるホルモンであるメラトニンが最近注目されている。このメラトニンは、松果体においてＬ−トリプトファンからセロトニン、Ｎ−アセチルセロトニンを経て生合成されるインドールホルモンであり、夜間に生合成、分泌が亢進するという顕著な概日リズムを示すことが知られている。
【０００７】
したがって、このような作用を有するメラトニンの血中濃度を正確に測定することは重要である。
現在、メラトニンの分析方法として知られている方法としては、例えば、メラトニン自身の持つ蛍光を測定してメラトニンの量を求める自然蛍光法や、放射線ラベル体を使用してメラトニンの量を求めるラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）がある。
【０００８】
ところで、哺乳類における内因性メラトニンの含量は、極めて微量であり、上述した従来の分析法では、メラトニンなどのインド−ル誘導体の血中濃度を測定するためには数ミリリットルの血液が必要であった。このためには注射による静脈採血が必要であり、被験者に多大な負担を与えることから、特に頻繁に採血が必要な概日リズム測定などには適当でなく、患者に対してはより負担が少なくかつメラトニンなどのインド−ル誘導体の血中濃度をより正確に測定する方法が要望されていた。
【０００９】
また、ＲＩＡは、ラジオアイソトープを使用しなければならないので、取り扱いが危険であり、特別の施設が必要である。したがって、このようなＲＩＡを使用しないで、インド−ル誘導体の血中濃度をより正確に測定する方法が要望されていた。
【００１０】
【発明が解決しようとする課題】
そこで、本発明者らは、従来方法を改良すべく鋭意検討研究した結果、メラトニンの酸化体であるメラトニンオキシドの蛍光を測定することによってメラトニンなどのインド−ル誘導体の血中濃度をより正確に測定することができることを見出して、この発明を完成するに至った。
【００１１】
【課題を解決するための手段】
したがって、この発明は、メラトニンなどのインド−ル誘導体の血中濃度をより正確に測定することができる蛍光性を有するキノリンオキシド誘導体を提供することを主な目的とする。
また、この発明は、強い蛍光性を有し、蛍光標識試薬の母核となり得るキノリンオキシド誘導体の製造方法を提供することを別の目的としている。
【００１２】
更に、この発明は、できるだけ微量の採血でメラトニンなどのインドール誘導体の量を分析・測定できるようにした高感度なキノリンオキシド誘導体の分析方法と、キノリンオキシド誘導体の分析装置を提供することを別の目的とする。
【００１３】
上記目的を達成するために、この発明は、一般式［I］：
【００１４】
【化１０】
【００１５】
（式中、Ｒはアミノ基、アルキルアミド基、カルボキシル基、カルボキシレート基、チオール基またはジスルフィド結合を意味する。）
で表されるキノリンオキシド誘導体を提供する。
【００１６】
また、この発明に係るキノリンオキシド誘導体は、その好ましい１態様として、一般式［II］：
【００１７】
【化１１】
（式中、Ｒ１はアルキル基を意味する。）
で表されるキノリンオキシド誘導体を提供する。この発明の更に好ましい態様としては、一般式［I］または一般式［II］におけるアルキル基が、炭素原子数が１ないし６の、直鎖状もしくは分岐鎖状の１価飽和脂肪族炭化水素残基を意味するキノリンオキシド誘導体が提供される。より好ましい１態様として、一般式［I］または一般式［II］におけるアルキル基が、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基または第三級ブチル基を意味することを特徴とするキノリンオキシド誘導体が提供される。
【００１８】
この発明は、その特に好ましい態様として、該キノリンオキシド誘導体が式［III］：
【００１９】
【化１２】
で表されるキノリンオキシド誘導体を提供する。
【００２０】
更に、この発明は、別の形態として、一般式［IV］：
【００２１】
【化１３】
（式中、Ｒはアミノ基、アルキルアミド基、カルボキシル基、カルボキシレート基、チオール基またはジスルフィド結合を意味する。）
で表されるインド−ル誘導体を酸化して、上記一般式［I］で表されるキノリンオキシド誘導体を得ることからなるキノリンオキシド誘導体の製造方法を提供する。
【００２２】
この発明の形態における好ましい態様としては、一般式［V］：
【００２３】
【化１４】
（式中、Ｒ１はアルキル基を意味する。）
で表されるインドール誘導体を酸化して上記一般式［II］で表されるキノリンオキシド誘導体を得ることからなるキノリンオキシド誘導体の製造方法を提供する。
【００２４】
この発明に係るキノリンオキシド誘導体の製造方法において、その好ましい態様としては、該インド−ル誘導体をアルカリ性条件下において酸化することからなるキノリンオキシド誘導体の製造方法を提供する。また、この発明は、別の好ましい態様として、上記酸化反応によって得られた該キノリンオキシド誘導体を有機溶媒で抽出することからなるキノリンオキシド誘導体の製造方法を提供する。
【００２５】
この発明は、その特に好ましい態様として、式［VI］で表されるメラトニンを酸化して、一般式［III］で表されるメラトニンオキシドを得ることからなるキノリンオキシド誘導体の製造方法を提供する。
【００２６】
この発明は、その更に別の形態として、上記キノリンオキシド誘導体の蛍光強度を測定してメラトニンなどのインドール誘導体の量を測定することからなるキノリンオキシド誘導体の分析方法を提供する。この発明は、その形態の好ましい態様として、内標準物質を加えることからなるキノリンオキシド誘導体の分析方法を提供する。
【００２７】
また、この発明は、その更に別の形態として、上記インド−ル誘導体を酸化して、上記キノリンオキシド誘導体を得る酸化部と、該キノリンオキシド誘導体の蛍光強度を測定してキノリンオキシド誘導体の量を求める測定部とを備えているキノリンオキシド誘導体の分析装置を提供する。この発明は、その好ましい態様として、上記酸化部で得られた反応生成物から該キノリンオキシド誘導体を有機溶媒で抽出し、抽出した該キノリンオキシド誘導体を上記測定部に供給する抽出部を備えているキノリンオキシド誘導体の分析装置を提供する。また、別の好ましい態様として、この発明は、内標準物質を加える添加部を更に備えているキノリンオキシド誘導体の分析装置を提供する。更に、この発明は、その別の好ましい態様として、上記測定部がヒーター及び高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）とを備えているキノリンオキシド誘導体の分析装置を提供する。
【００２８】
【発明の実施の形態】
この発明に係るキノリンオキシド誘導体は、一般式［I］：
【００２９】
【化１５】
（式中、Ｒはアミノ基、アルキルアミド基、カルボキシル基、カルボキシレート基、チオール基またはカルボキシレート基を意味する。）
で表される。
【００３０】
上記キノリンオキシド誘導体のうち好ましいキノリンオキシド誘導体としては、一般式［II］：
【００３１】
【化１６】
（式中、Ｒ１はアルキル基を意味する。）
で表されるキノリンオキシド誘導体が挙げられる。
【００３２】
また、上記キノリンオキシド誘導体のうち、より好ましいキノリンオキシド誘導体としては、一般式［I］または一般式［II］におけるアルキル基が、炭素原子数が１ないし６の、直鎖状もしくは分岐鎖状の１価飽和脂肪族炭化水素残基を意味するキノリンオキシド誘導体が挙げられる。更に、より好ましい態様として、上記アルキル基が、例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、ｉ−プロピル基、ブチル基、ｉ−ブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ヘキシル基などを意味するキノリンオキシド誘導体が挙げられる。
更に、一般式［I］で表されるカルボキシレート基としては、例えば、脂肪酸の残基、例えば、酢酸、プロピオン酸などの残基が挙げられる。また、Ｒがカルボキシレート基を意味する場合には、一般式［I］で表されるキノリンオキシド誘導体がＳ−Ｓ結合で互いに結合していることを意味している。
【００３３】
この発明に係るキノリンオキシド誘導体のうち、その特に好ましいものとしては、式［III］：
【００３４】
【化１７】
で表されるキノリンオキシドが挙げられる。
【００３５】
この発明に係るキノリンオキシド誘導体は、強い蛍光を有すると共に、光や熱に対しても安定であることから、優れた蛍光母核となることができる。
【００３６】
この発明において、上記一般式［I］で示されるキノリンオキシド誘導体は、一般式［IV］：
【００３７】
【化１８】
（式中、Ｒはアミノ基、アルキルアミド基、カルボキシル基、カルボキシレート基、チオール基またはジスルフィド結合を意味する。）
で表されるインド−ル誘導体を酸化して得ることができる。
【００３８】
この発明において、この形態の特に好ましい態様は、式［VI］：
【００３９】
【化１９】
で表されるメラトニンを酸化して、式［III］：
【００４０】
【化２０】
で表されるキノリンオキシドを製造するキノリンオキシド誘導体の製造方法である。
【００４１】
この発明における酸化反応は、酸化剤を使用して常法に従って行うことができる。使用する酸化剤としては、一般式［VI］もしくは［V］または式［IV］で表されるインド−ル骨格の３位の置換基を酸化することができる酸化剤であればいずれでも使用することができるが、特に好ましい酸化剤としては過酸化水素が挙げられる。また、この発明における酸化反応は、水または炭酸ナトリウムなどの無機溶媒中において、好ましくはアルカリ性下において、例えばｐＨ１０〜１２の条件下で、加熱下で行うのが好ましい。しかしながら、この発明は、これらに何ら限定されるものではなく、この発明の目的に適うのであれば適宜条件は変更することができる。
【００４２】
上記のようにして、一般式［IV］および一般式［V］で表されるインドール誘導体、特に好ましくは式［VI］で表されるメラトニンを酸化して得られた式［I］および［II］で表されるキノリンオキシド誘導体、特に好ましくは式［III］で表されるキノリンオキシド誘導体は、必要に応じて、例えば、メタノール、エタノール、アセトニトリルなどの有機溶媒で抽出することができる。
【００４３】
この発明に係るキノリンオキシド誘導体の分析方法は、上記反応式において、一般式［I］、［II］および［III］で表されるキノリンオキシド誘導体の蛍光強度を測定してキノリンオキシド誘導体の量を求めることによって行うことができる。なお、分析方法自体は、当該技術分野において慣用されている方法を用いて行うことができる。
なお、上記したように、キノリンオキシド誘導体を有機溶媒で抽出した場合には、これによりキノリンオキシド誘導体の定量における再現性が低下するおそれがある。
しかし、この場合には、内標準物質を加えて分析するのが好ましい。なお、ここで内標準物質としては、例えば、インド−ル誘導体と同様にインドール骨格を持ち、酸化によって蛍光誘導体化されてクロマトグラム上で良好なピークを与える物質、例えば５−メトキシインドール−３−酢酸（ＭＩＡＡ）などを使用することができる。
【００４４】
更に、この発明に係るキノリンオキシド誘導体の分析装置は、基本的には、上記酸化反応を行って上記キノリンオキシド誘導体を得る酸化部と、得られたキノリンオキシド誘導体の蛍光強度を測定してキノリンオキシド誘導体の量を求めるキノリンオキシド誘導体測定部とを備えている。
なお、上記測定部には、例えば、ミクロＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィー）を使用し、高感度化して分析することが好ましい。
【００４５】
【実施例】
以下、この発明を実施例によって、更に詳細に説明する。
実施例１： メラトニンオキサイド（ＭＥＬ ｏｘｉｄｅ：Ｎ-[(６−メトキシ−4−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−イル)メチル]アセタミド）の合成法
メラトニン（ＭＥＬ）１５０ｍｇ（６１０μｍｏｌ）のメタノール溶液（６００μｌ）を１００ｍＭ炭酸ナトリウム水溶液１５ｍｌに溶解し、この混合液を８０℃で加熱下攪拌しながら、３Ｍ過酸化水素水４００μｌを１０分ごとに１５時間滴下した。反応終了後、固相カートリッジを用いて抽出をして、得られたメタノール溶液を減圧留去し、残査を水から再結晶して無色の針状結晶を得た（４０．１２ｍｇ、１６３μｍｏｌ、収率２５．２％）。
得られたメラトニンオキサイドの機器分析結果は下表１に示す。更に、その1Ｈ−ＮＭＲと13Ｃ−ＮＭＲとをそれぞれ図１及び図２に示す。
【００４６】
実施例２： エチルオキシド（Ｎ-[(６−メトキシ−4−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−イル)メチル]プロピオンアミド）の合成法
メラトニンエチルアナログ１５０ｍｇのメタノール溶液（６００μｌ）を１００ｍＭ炭酸ナトリウム水溶液１５ｍｌに溶解し、この混合液を８０℃で加熱下攪拌しながら、３Ｍ過酸化水素水４００μｌを１０分ごとに１５時間滴下した。反応終了後、固相カートリッジを用いて抽出をして、得られたメタノール溶液を減圧留去し、残査を水から再結晶して結晶を得た（４０．６６ｍｇ、１５６μｍｏｌ、収率２５．６％）。得られた化合物の機器分析結果は下表１に示す。
【００４７】
実施例３： プロピルオキシド（Ｎ-[(６−メトキシ−4−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−イル)メチル]ブタンアミド）の合成法
メラトニンプロピルアナログ１５０ｍｇを実施例２と同様に反応させ、メタノールから再結晶してプロピルオキシドを結晶として得た（３５．５９ｍｇ、１３０μｍｏｌ、収率２２．５％）。得られた化合物の機器分析結果は下表１に示す。
【００４８】
実施例４： イソプロピルオキシド（Ｎ-[(６−メトキシ−4−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−イル)メチル]イソブタンアミド）の合成法
メラトニンイソプロピルアナログ１５０ｍｇを実施例２と同様に１８時間反応させ、メタノールから再結晶してイソプロピルオキシドを結晶として得た（５１．９９ｍｇ、１８９μｍｏｌ、収率３２．９％）。得られた化合物の機器分析結果は下表１に示す。
【００４９】
実施例５： ｔｅｒｔ−ブチルオキシド（Ｎ-[(６−メトキシ−4−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−イル)メチル]ｔｅｒｔ−ブチルカルボンタンアミド）の合成法
メラトニンイソプロピルアナログ１５０ｍｇを実施例４と同様に反応させ、メタノールから再結晶してｔｅｒｔ−ブチルオキシドを結晶として得た（５８．５８ｍｇ、２０３μｍｏｌ、収率３７．２％）。得られた化合物の機器分析結果は下表１に示す。
【００５０】
【表１】
【００５１】
実施例６
５−メトキシトリプタミンに２Ｍ炭酸ナトリウムと１００ｍＭ過酸化水素水溶液を加え、１００℃で３０分間加熱してアミン体（[I] :Ｒ＝アミノ）を得た。この時の蛍光強度を測定した結果、励起極大波長２４５ｎｍ、蛍光極大波長３８０ｎｍの強い蛍光が認められた。
【００５２】
実験例１：メラトニンオキシドのＸ線回折解析
実施例１で得た化合物のＸ線回折分析のために、上記化合物を緩和な条件下でメタノール水溶液（水／メタノール＝１０：１（ｖ/ｖ））から再結晶した。
Ｘ線回折解析の結果、この化合物が、メラトニンオキサイド（Ｎ-[(６−メトキシ−4−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−イル)メチル]アセタミド）であることを確認した（図３）。また、Ｘ線回折解析によって得られたメラトニンオキサイドの結晶についての分析結果を表２に示す。
【００５３】
【表２】
【００５４】
実験例２：メラトニンオキサイドおよびそのアナログオキシドの蛍光性
メラトニンオキサイドおよびそのアナログオキシドについて、１０％メタノール水溶液を溶媒として１０μＭにおける励起・蛍光スペクトルを測定した。また、ＵＶスペクトルを測定し、吸収極大波長２４５ｎｍにおけるモル吸光係数を算出した。結果を下表３に示す。
【００５５】
【表３】
【００５６】
実験例３：メラトニンオキシドの蛍光特性
逆相ＨＰＬＣによるメラトニンの感受性を決定するために、各種有機溶媒中におけるメラトニンオキシドの極大蛍光励起・発光波長と相対蛍光強度（RelativeFluorescence Intensity: RFI）についてメラトニンオキシドの蛍光特性を調べた。有機溶媒としては、逆相ＨＰＬＣに幅広く使用されているメタノール、エタノール、アセトニトリルを使用した。その結果を表４に示す。この結果から、試験した有機溶媒においては、蛍光強度は溶媒濃度が高くなるにつれて弱くなるのに対し、極大蛍光励起・発光波長は変化しないことが判明した。
【００５７】
【表４】
【００５８】
実験例４：マウス松果体試料の調製
マウスをエチルエーテルで麻酔をした後、全松果体を摘出し、６０ｐＭのＭＩＡＡを含むメタノール溶液５００μｌに入れて、氷上で１０００ｒｐｍで２０分間ホモジナイズした。得られたホモジネートを４５００ｘｇで５分間遠心分離をして、上澄液４００μｌを乾燥した。残査に水４０μｌと、４Ｍ炭酸ナトリウム水溶液２．５μｌと、２５０ｍＭ過酸化水素水とを添加して、１００℃で３０分間加熱した。処理した反応液から得られたメラトニンオキシドを酢酸エチル１５０μｌで３回抽出して、細胞中の親水性の生物物質からメラトニンオキシドを分離した。得られた有機相を乾燥して、残査に５％アセトニトリル水溶液３０μｌを添加し、得られた溶液５μｌをＨＰＬＣシステムに注入した。得られた結果を図４および図５に示す。
検量線は次ぎのようにして作成した。１５匹のＩＣＲマウスから、全松果体を摘出し、６０ｐＭのＭＩＡＡを含むメタノール溶液７．５mlに入れて一緒にホモジナイズし、得られたホモジネートを遠心分離した。得られた上澄液４００μｌに、０．０４ｎＭ、０．２ｎＭ、１ｎＭ、１０ｎＭのメラトニンのメタノール溶液３０μｌをそれぞれ添加した後乾燥した。得られた残査を誘導化して、上記のようにして分析した。
【００５９】
上記したように、メラトニンの酸化混合物の蛍光性は、メラトニンとは異なっていて、この特性はメラトニンを高感度で特定することが可能である。この発明に係るメラトニンオキシドは、炭酸ナトリウムなどを使用したアルカリ性条件下で、メラトニンに過酸化水素を断続的に添加して、その構造を特定した。酸化反応が進行するにつれて、蛍光・励起波長（３８０ｎｍ、２４５ｎｍ）での蛍光強度は高くなるのに対して、メラトニン自体の蛍光・励起波長（３３０ｎｍ、２８０ｎｍ）での蛍光強度は低くなる。このメラトニンオキシドを精製した後、無色の結晶が得られた。この結晶は、２４５ｎｍの最大吸収波長を有していて、メラトニンの反応混合物の蛍光励起スペクトルと発光スペクトルと同じスペクトルを有している（図６）。更に、この化合物は、固相ＨＰＬＣにおいてメラトニンの分析物と保持時間が同じである。
【００６０】
上記したように、この発明に係るメラトニンオキシドならびにメラトニンのアナログオキシド、例えば、エチルアナログ、ｎ−プロピルアナログ、イソプロピルアナログ、ｔｅｒｔ−ブチルアナログなどは、メラトニンの微量分析に有用である。また、この発明に係るキノリンオキシド誘導体の分析方法も、その分析装置もメラトニンの微量分析に有効に利用することができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】メラトニン酸化物の１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す図。
【図２】メラトニン酸化物の１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す図。
【図３】Ｘ線回折解析に基づくメラトニン酸化物の分子構造を示す図。
【図４】５−メトキシインドール−３−酢酸（ＭＩＡＡ）を添加していない場合における内因性マウス松果体のメラトニン誘導体のクロマトグラムを示す図。図中、（Ａ、Ｂ）はＩＣＲマウス松果体の内生メラトニンを調製して分析をした場合を示し、（Ｃ）はメラトニン誘導体とＭＩＡＡとの標準混合物を分析した場合を示している。
【図５】内標準物質としてＭＩＡＡを使用した場合における異なるマウスの松果体のメラトニン誘導体のクロマトグラムを示す図。
【図６】メラトニンの反応液と、メラトニン酸化物の励起・蛍光スペクトルを示すグラフ。（Ａ）は、メラトニンを炭酸ナトリウムの存在下で過酸化水素で１００℃で３０分間酸化した場合の励起・蛍光スペクトルを示し、（Ｂ）メラトニン酸化物を１０％メタノール水溶液に溶解した場合の励起・蛍光スペクトルを示している。
【図７】メラトニン誘導体（Ａ）と、得られたメラトニン酸化物（Ｂ）のクロマトグラムを示すグラフ。
【発明の属する技術分野】
この発明は、キノリンオキシド誘導体およびその製造方法に関するものであり、更に詳細には、蛍光特性を有するキノリンオキシド誘導体およびその製造方法に関するものである。また、この発明はキノリンオキシド誘導体が発する強い蛍光を利用したキノリンオキシド誘導体の分析方法およびその分析装置に関するものである。
【０００２】
【従来の技術】
急速に都市化、情報化の進んだ現代社会は２４時間化しており、人々のライフスタイルの多様化と共に睡眠覚醒症候群を含む生体リズム障害が急増している。これらの疾患は成人の社会生活を困難とし、幼児期、高齢者においては生活支援者の生活にも重大な問題を生じる。
【０００３】
また、このリズム障害は投与薬物の副作用の減弱と薬効の増強を目的とする時間治療、すなわち薬物投与のタイミングを最適化する治療の導入を困難とし、様々な疾患において治療法に制限を与える。
【０００４】
更にまた、例えば、未熟児や新生児の医療現場におけるような微量の試料しか採取できない場合において、生体成分や薬物などの微量分析が要請されるときには、蛍光分析法が広く利用されている。特に誘導体化試薬を用いる蛍光誘導体化法はそれ自体吸収や蛍光を持たない様々な分析対象に対して高感度かつ選択的な分析を可能にする極めて有効な手段であるといえる。
【０００５】
また、これまで蛍光標識を目的としてＤＮＳ−Ｃｌ、ＮＢＤ−Ｆなどの数多くの優れた試薬が開発されているけれども、これらの蛍光標識試薬にしても、安定性、感度、溶解性などにおいて問題を有するものも少なくない。例えば、ＤＮＳ誘導体は感度が不足するという欠点が、またＮＢＤ誘導体は光で分解されるという問題を有している。更に、当然のことながら、それらの蛍光標識試薬を用いた分析法や分析装置も問題を有する結果になっている。
【０００６】
上記したようなリズム障害に対する著効な薬として、また生体リズムのマーカーとして、松果体から血液中に分泌されるホルモンであるメラトニンが最近注目されている。このメラトニンは、松果体においてＬ−トリプトファンからセロトニン、Ｎ−アセチルセロトニンを経て生合成されるインドールホルモンであり、夜間に生合成、分泌が亢進するという顕著な概日リズムを示すことが知られている。
【０００７】
したがって、このような作用を有するメラトニンの血中濃度を正確に測定することは重要である。
現在、メラトニンの分析方法として知られている方法としては、例えば、メラトニン自身の持つ蛍光を測定してメラトニンの量を求める自然蛍光法や、放射線ラベル体を使用してメラトニンの量を求めるラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）がある。
【０００８】
ところで、哺乳類における内因性メラトニンの含量は、極めて微量であり、上述した従来の分析法では、メラトニンなどのインド−ル誘導体の血中濃度を測定するためには数ミリリットルの血液が必要であった。このためには注射による静脈採血が必要であり、被験者に多大な負担を与えることから、特に頻繁に採血が必要な概日リズム測定などには適当でなく、患者に対してはより負担が少なくかつメラトニンなどのインド−ル誘導体の血中濃度をより正確に測定する方法が要望されていた。
【０００９】
また、ＲＩＡは、ラジオアイソトープを使用しなければならないので、取り扱いが危険であり、特別の施設が必要である。したがって、このようなＲＩＡを使用しないで、インド−ル誘導体の血中濃度をより正確に測定する方法が要望されていた。
【００１０】
【発明が解決しようとする課題】
そこで、本発明者らは、従来方法を改良すべく鋭意検討研究した結果、メラトニンの酸化体であるメラトニンオキシドの蛍光を測定することによってメラトニンなどのインド−ル誘導体の血中濃度をより正確に測定することができることを見出して、この発明を完成するに至った。
【００１１】
【課題を解決するための手段】
したがって、この発明は、メラトニンなどのインド−ル誘導体の血中濃度をより正確に測定することができる蛍光性を有するキノリンオキシド誘導体を提供することを主な目的とする。
また、この発明は、強い蛍光性を有し、蛍光標識試薬の母核となり得るキノリンオキシド誘導体の製造方法を提供することを別の目的としている。
【００１２】
更に、この発明は、できるだけ微量の採血でメラトニンなどのインドール誘導体の量を分析・測定できるようにした高感度なキノリンオキシド誘導体の分析方法と、キノリンオキシド誘導体の分析装置を提供することを別の目的とする。
【００１３】
上記目的を達成するために、この発明は、一般式［I］：
【００１４】
【化１０】
（式中、Ｒはアミノ基、アルキルアミド基、カルボキシル基、カルボキシレート基、チオール基またはジスルフィド結合を意味する。）
で表されるキノリンオキシド誘導体を提供する。
【００１６】
また、この発明に係るキノリンオキシド誘導体は、その好ましい１態様として、一般式［II］：
【００１７】
【化１１】
で表されるキノリンオキシド誘導体を提供する。この発明の更に好ましい態様としては、一般式［I］または一般式［II］におけるアルキル基が、炭素原子数が１ないし６の、直鎖状もしくは分岐鎖状の１価飽和脂肪族炭化水素残基を意味するキノリンオキシド誘導体が提供される。より好ましい１態様として、一般式［I］または一般式［II］におけるアルキル基が、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基または第三級ブチル基を意味することを特徴とするキノリンオキシド誘導体が提供される。
【００１８】
この発明は、その特に好ましい態様として、該キノリンオキシド誘導体が式［III］：
【００１９】
【化１２】
【００２０】
更に、この発明は、別の形態として、一般式［IV］：
【００２１】
【化１３】
で表されるインド−ル誘導体を酸化して、上記一般式［I］で表されるキノリンオキシド誘導体を得ることからなるキノリンオキシド誘導体の製造方法を提供する。
【００２２】
この発明の形態における好ましい態様としては、一般式［V］：
【００２３】
【化１４】
で表されるインドール誘導体を酸化して上記一般式［II］で表されるキノリンオキシド誘導体を得ることからなるキノリンオキシド誘導体の製造方法を提供する。
【００２４】
この発明に係るキノリンオキシド誘導体の製造方法において、その好ましい態様としては、該インド−ル誘導体をアルカリ性条件下において酸化することからなるキノリンオキシド誘導体の製造方法を提供する。また、この発明は、別の好ましい態様として、上記酸化反応によって得られた該キノリンオキシド誘導体を有機溶媒で抽出することからなるキノリンオキシド誘導体の製造方法を提供する。
【００２５】
この発明は、その特に好ましい態様として、式［VI］で表されるメラトニンを酸化して、一般式［III］で表されるメラトニンオキシドを得ることからなるキノリンオキシド誘導体の製造方法を提供する。
【００２６】
この発明は、その更に別の形態として、上記キノリンオキシド誘導体の蛍光強度を測定してメラトニンなどのインドール誘導体の量を測定することからなるキノリンオキシド誘導体の分析方法を提供する。この発明は、その形態の好ましい態様として、内標準物質を加えることからなるキノリンオキシド誘導体の分析方法を提供する。
【００２７】
また、この発明は、その更に別の形態として、上記インド−ル誘導体を酸化して、上記キノリンオキシド誘導体を得る酸化部と、該キノリンオキシド誘導体の蛍光強度を測定してキノリンオキシド誘導体の量を求める測定部とを備えているキノリンオキシド誘導体の分析装置を提供する。この発明は、その好ましい態様として、上記酸化部で得られた反応生成物から該キノリンオキシド誘導体を有機溶媒で抽出し、抽出した該キノリンオキシド誘導体を上記測定部に供給する抽出部を備えているキノリンオキシド誘導体の分析装置を提供する。また、別の好ましい態様として、この発明は、内標準物質を加える添加部を更に備えているキノリンオキシド誘導体の分析装置を提供する。更に、この発明は、その別の好ましい態様として、上記測定部がヒーター及び高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）とを備えているキノリンオキシド誘導体の分析装置を提供する。
【００２８】
【発明の実施の形態】
この発明に係るキノリンオキシド誘導体は、一般式［I］：
【００２９】
【化１５】
で表される。
【００３０】
上記キノリンオキシド誘導体のうち好ましいキノリンオキシド誘導体としては、一般式［II］：
【００３１】
【化１６】
で表されるキノリンオキシド誘導体が挙げられる。
【００３２】
また、上記キノリンオキシド誘導体のうち、より好ましいキノリンオキシド誘導体としては、一般式［I］または一般式［II］におけるアルキル基が、炭素原子数が１ないし６の、直鎖状もしくは分岐鎖状の１価飽和脂肪族炭化水素残基を意味するキノリンオキシド誘導体が挙げられる。更に、より好ましい態様として、上記アルキル基が、例えば、メチル基、エチル基、プロピル基、ｉ−プロピル基、ブチル基、ｉ−ブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ヘキシル基などを意味するキノリンオキシド誘導体が挙げられる。
更に、一般式［I］で表されるカルボキシレート基としては、例えば、脂肪酸の残基、例えば、酢酸、プロピオン酸などの残基が挙げられる。また、Ｒがカルボキシレート基を意味する場合には、一般式［I］で表されるキノリンオキシド誘導体がＳ−Ｓ結合で互いに結合していることを意味している。
【００３３】
この発明に係るキノリンオキシド誘導体のうち、その特に好ましいものとしては、式［III］：
【００３４】
【化１７】
【００３５】
この発明に係るキノリンオキシド誘導体は、強い蛍光を有すると共に、光や熱に対しても安定であることから、優れた蛍光母核となることができる。
【００３６】
この発明において、上記一般式［I］で示されるキノリンオキシド誘導体は、一般式［IV］：
【００３７】
【化１８】
で表されるインド−ル誘導体を酸化して得ることができる。
【００３８】
この発明において、この形態の特に好ましい態様は、式［VI］：
【００３９】
【化１９】
【００４０】
【化２０】
【００４１】
この発明における酸化反応は、酸化剤を使用して常法に従って行うことができる。使用する酸化剤としては、一般式［VI］もしくは［V］または式［IV］で表されるインド−ル骨格の３位の置換基を酸化することができる酸化剤であればいずれでも使用することができるが、特に好ましい酸化剤としては過酸化水素が挙げられる。また、この発明における酸化反応は、水または炭酸ナトリウムなどの無機溶媒中において、好ましくはアルカリ性下において、例えばｐＨ１０〜１２の条件下で、加熱下で行うのが好ましい。しかしながら、この発明は、これらに何ら限定されるものではなく、この発明の目的に適うのであれば適宜条件は変更することができる。
【００４２】
上記のようにして、一般式［IV］および一般式［V］で表されるインドール誘導体、特に好ましくは式［VI］で表されるメラトニンを酸化して得られた式［I］および［II］で表されるキノリンオキシド誘導体、特に好ましくは式［III］で表されるキノリンオキシド誘導体は、必要に応じて、例えば、メタノール、エタノール、アセトニトリルなどの有機溶媒で抽出することができる。
【００４３】
この発明に係るキノリンオキシド誘導体の分析方法は、上記反応式において、一般式［I］、［II］および［III］で表されるキノリンオキシド誘導体の蛍光強度を測定してキノリンオキシド誘導体の量を求めることによって行うことができる。なお、分析方法自体は、当該技術分野において慣用されている方法を用いて行うことができる。
なお、上記したように、キノリンオキシド誘導体を有機溶媒で抽出した場合には、これによりキノリンオキシド誘導体の定量における再現性が低下するおそれがある。
しかし、この場合には、内標準物質を加えて分析するのが好ましい。なお、ここで内標準物質としては、例えば、インド−ル誘導体と同様にインドール骨格を持ち、酸化によって蛍光誘導体化されてクロマトグラム上で良好なピークを与える物質、例えば５−メトキシインドール−３−酢酸（ＭＩＡＡ）などを使用することができる。
【００４４】
更に、この発明に係るキノリンオキシド誘導体の分析装置は、基本的には、上記酸化反応を行って上記キノリンオキシド誘導体を得る酸化部と、得られたキノリンオキシド誘導体の蛍光強度を測定してキノリンオキシド誘導体の量を求めるキノリンオキシド誘導体測定部とを備えている。
なお、上記測定部には、例えば、ミクロＨＰＬＣ（高速液体クロマトグラフィー）を使用し、高感度化して分析することが好ましい。
【００４５】
【実施例】
以下、この発明を実施例によって、更に詳細に説明する。
実施例１： メラトニンオキサイド（ＭＥＬ ｏｘｉｄｅ：Ｎ-[(６−メトキシ−4−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−イル)メチル]アセタミド）の合成法
メラトニン（ＭＥＬ）１５０ｍｇ（６１０μｍｏｌ）のメタノール溶液（６００μｌ）を１００ｍＭ炭酸ナトリウム水溶液１５ｍｌに溶解し、この混合液を８０℃で加熱下攪拌しながら、３Ｍ過酸化水素水４００μｌを１０分ごとに１５時間滴下した。反応終了後、固相カートリッジを用いて抽出をして、得られたメタノール溶液を減圧留去し、残査を水から再結晶して無色の針状結晶を得た（４０．１２ｍｇ、１６３μｍｏｌ、収率２５．２％）。
得られたメラトニンオキサイドの機器分析結果は下表１に示す。更に、その1Ｈ−ＮＭＲと13Ｃ−ＮＭＲとをそれぞれ図１及び図２に示す。
【００４６】
実施例２： エチルオキシド（Ｎ-[(６−メトキシ−4−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−イル)メチル]プロピオンアミド）の合成法
メラトニンエチルアナログ１５０ｍｇのメタノール溶液（６００μｌ）を１００ｍＭ炭酸ナトリウム水溶液１５ｍｌに溶解し、この混合液を８０℃で加熱下攪拌しながら、３Ｍ過酸化水素水４００μｌを１０分ごとに１５時間滴下した。反応終了後、固相カートリッジを用いて抽出をして、得られたメタノール溶液を減圧留去し、残査を水から再結晶して結晶を得た（４０．６６ｍｇ、１５６μｍｏｌ、収率２５．６％）。得られた化合物の機器分析結果は下表１に示す。
【００４７】
実施例３： プロピルオキシド（Ｎ-[(６−メトキシ−4−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−イル)メチル]ブタンアミド）の合成法
メラトニンプロピルアナログ１５０ｍｇを実施例２と同様に反応させ、メタノールから再結晶してプロピルオキシドを結晶として得た（３５．５９ｍｇ、１３０μｍｏｌ、収率２２．５％）。得られた化合物の機器分析結果は下表１に示す。
【００４８】
実施例４： イソプロピルオキシド（Ｎ-[(６−メトキシ−4−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−イル)メチル]イソブタンアミド）の合成法
メラトニンイソプロピルアナログ１５０ｍｇを実施例２と同様に１８時間反応させ、メタノールから再結晶してイソプロピルオキシドを結晶として得た（５１．９９ｍｇ、１８９μｍｏｌ、収率３２．９％）。得られた化合物の機器分析結果は下表１に示す。
【００４９】
実施例５： ｔｅｒｔ−ブチルオキシド（Ｎ-[(６−メトキシ−4−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−イル)メチル]ｔｅｒｔ−ブチルカルボンタンアミド）の合成法
メラトニンイソプロピルアナログ１５０ｍｇを実施例４と同様に反応させ、メタノールから再結晶してｔｅｒｔ−ブチルオキシドを結晶として得た（５８．５８ｍｇ、２０３μｍｏｌ、収率３７．２％）。得られた化合物の機器分析結果は下表１に示す。
【００５０】
【表１】
実施例６
５−メトキシトリプタミンに２Ｍ炭酸ナトリウムと１００ｍＭ過酸化水素水溶液を加え、１００℃で３０分間加熱してアミン体（[I] :Ｒ＝アミノ）を得た。この時の蛍光強度を測定した結果、励起極大波長２４５ｎｍ、蛍光極大波長３８０ｎｍの強い蛍光が認められた。
【００５２】
実験例１：メラトニンオキシドのＸ線回折解析
実施例１で得た化合物のＸ線回折分析のために、上記化合物を緩和な条件下でメタノール水溶液（水／メタノール＝１０：１（ｖ/ｖ））から再結晶した。
Ｘ線回折解析の結果、この化合物が、メラトニンオキサイド（Ｎ-[(６−メトキシ−4−オキソ−１，４−ジヒドロキノリン−３−イル)メチル]アセタミド）であることを確認した（図３）。また、Ｘ線回折解析によって得られたメラトニンオキサイドの結晶についての分析結果を表２に示す。
【００５３】
【表２】
実験例２：メラトニンオキサイドおよびそのアナログオキシドの蛍光性
メラトニンオキサイドおよびそのアナログオキシドについて、１０％メタノール水溶液を溶媒として１０μＭにおける励起・蛍光スペクトルを測定した。また、ＵＶスペクトルを測定し、吸収極大波長２４５ｎｍにおけるモル吸光係数を算出した。結果を下表３に示す。
【００５５】
【表３】
実験例３：メラトニンオキシドの蛍光特性
逆相ＨＰＬＣによるメラトニンの感受性を決定するために、各種有機溶媒中におけるメラトニンオキシドの極大蛍光励起・発光波長と相対蛍光強度（RelativeFluorescence Intensity: RFI）についてメラトニンオキシドの蛍光特性を調べた。有機溶媒としては、逆相ＨＰＬＣに幅広く使用されているメタノール、エタノール、アセトニトリルを使用した。その結果を表４に示す。この結果から、試験した有機溶媒においては、蛍光強度は溶媒濃度が高くなるにつれて弱くなるのに対し、極大蛍光励起・発光波長は変化しないことが判明した。
【００５７】
【表４】
実験例４：マウス松果体試料の調製
マウスをエチルエーテルで麻酔をした後、全松果体を摘出し、６０ｐＭのＭＩＡＡを含むメタノール溶液５００μｌに入れて、氷上で１０００ｒｐｍで２０分間ホモジナイズした。得られたホモジネートを４５００ｘｇで５分間遠心分離をして、上澄液４００μｌを乾燥した。残査に水４０μｌと、４Ｍ炭酸ナトリウム水溶液２．５μｌと、２５０ｍＭ過酸化水素水とを添加して、１００℃で３０分間加熱した。処理した反応液から得られたメラトニンオキシドを酢酸エチル１５０μｌで３回抽出して、細胞中の親水性の生物物質からメラトニンオキシドを分離した。得られた有機相を乾燥して、残査に５％アセトニトリル水溶液３０μｌを添加し、得られた溶液５μｌをＨＰＬＣシステムに注入した。得られた結果を図４および図５に示す。
検量線は次ぎのようにして作成した。１５匹のＩＣＲマウスから、全松果体を摘出し、６０ｐＭのＭＩＡＡを含むメタノール溶液７．５mlに入れて一緒にホモジナイズし、得られたホモジネートを遠心分離した。得られた上澄液４００μｌに、０．０４ｎＭ、０．２ｎＭ、１ｎＭ、１０ｎＭのメラトニンのメタノール溶液３０μｌをそれぞれ添加した後乾燥した。得られた残査を誘導化して、上記のようにして分析した。
【００５９】
上記したように、メラトニンの酸化混合物の蛍光性は、メラトニンとは異なっていて、この特性はメラトニンを高感度で特定することが可能である。この発明に係るメラトニンオキシドは、炭酸ナトリウムなどを使用したアルカリ性条件下で、メラトニンに過酸化水素を断続的に添加して、その構造を特定した。酸化反応が進行するにつれて、蛍光・励起波長（３８０ｎｍ、２４５ｎｍ）での蛍光強度は高くなるのに対して、メラトニン自体の蛍光・励起波長（３３０ｎｍ、２８０ｎｍ）での蛍光強度は低くなる。このメラトニンオキシドを精製した後、無色の結晶が得られた。この結晶は、２４５ｎｍの最大吸収波長を有していて、メラトニンの反応混合物の蛍光励起スペクトルと発光スペクトルと同じスペクトルを有している（図６）。更に、この化合物は、固相ＨＰＬＣにおいてメラトニンの分析物と保持時間が同じである。
【００６０】
上記したように、この発明に係るメラトニンオキシドならびにメラトニンのアナログオキシド、例えば、エチルアナログ、ｎ−プロピルアナログ、イソプロピルアナログ、ｔｅｒｔ−ブチルアナログなどは、メラトニンの微量分析に有用である。また、この発明に係るキノリンオキシド誘導体の分析方法も、その分析装置もメラトニンの微量分析に有効に利用することができる。
【図面の簡単な説明】
【図１】メラトニン酸化物の１Ｈ−ＮＭＲスペクトルを示す図。
【図２】メラトニン酸化物の１３Ｃ−ＮＭＲスペクトルを示す図。
【図３】Ｘ線回折解析に基づくメラトニン酸化物の分子構造を示す図。
【図４】５−メトキシインドール−３−酢酸（ＭＩＡＡ）を添加していない場合における内因性マウス松果体のメラトニン誘導体のクロマトグラムを示す図。図中、（Ａ、Ｂ）はＩＣＲマウス松果体の内生メラトニンを調製して分析をした場合を示し、（Ｃ）はメラトニン誘導体とＭＩＡＡとの標準混合物を分析した場合を示している。
【図５】内標準物質としてＭＩＡＡを使用した場合における異なるマウスの松果体のメラトニン誘導体のクロマトグラムを示す図。
【図６】メラトニンの反応液と、メラトニン酸化物の励起・蛍光スペクトルを示すグラフ。（Ａ）は、メラトニンを炭酸ナトリウムの存在下で過酸化水素で１００℃で３０分間酸化した場合の励起・蛍光スペクトルを示し、（Ｂ）メラトニン酸化物を１０％メタノール水溶液に溶解した場合の励起・蛍光スペクトルを示している。
【図７】メラトニン誘導体（Ａ）と、得られたメラトニン酸化物（Ｂ）のクロマトグラムを示すグラフ。
Claims (18)
- 一般式［I］：
で表されるキノリンオキシド誘導体であることを特徴とするキノリンオキシド誘導体。 - 請求項１に記載する キノリンオキシド誘導体において、前記キノリンオキシド誘導体が一般式［II］：
で表されるキノリンオキシド誘導体であることを特徴とするキノリンオキシド誘導体。 - 請求項１または２に記載するキノリンオキシド誘導体において、前記アルキル基が、炭素原子数が１ないし６の、直鎖状もしくは分岐鎖状の１価飽和脂肪族炭化水素残基を意味することを特徴とするキノリンオキシド誘導体。
- 請求項１ないし３のいずれか１項に記載するキノリンオキシド誘導体において、前記アルキル基が、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基または第三級ブチル基を意味することを特徴とするキノリンオキシド誘導体。
- 請求項１ないし４のいずれか１項に記載するキノリンオキシド誘導体において、該キノリンオキシド誘導体が式［III］：
- 一般式［IV］：
で表されるインド−ル誘導体を酸化して、一般式［I］：
で表されるキノリンオキシド誘導体を得ることを特徴とするキノリンオキシド誘導体の製造方法。 - 請求項６に記載するキノリンオキシド誘導体の製造方法において、前記インドール誘導体が一般式［V］：
で表されるインドール誘導体であり、該インドール誘導体を酸化して一般式［II］：
で表されるキノリンオキシド誘導体を得ることを特徴とするキノリンオキシド誘導体の製造方法。 - 請求項６または７に記載するキノリンオキシド誘導体の製造方法において、前記アルキル基が、炭素原子数が１ないし６の、直鎖状もしくは分岐鎖状の１価飽和脂肪族炭化水素残基を意味することを特徴とするキノリンオキシド誘導体の製造方法。
- 請求項６ないし８のいずれか１項に記載するキノリンオキシド誘導体の製造方法において、前記アルキル基が、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基または第三級ブチル基を意味することを特徴とするキノリンオキシド誘導体の製造方法。
- 請求項６ないし９のいずれか１項に記載するキノリンオキシド誘導体の製造方法において、前記インドール誘導体が式［VI］：
- 請求項６ないし１０のいずれか１項に記載するキノリンオキシド誘導体の製造方法において、該インド−ル誘導体をアルカリ性下において酸化することを特徴とするキノリンオキシド誘導体の製造方法。
- 請求項６ないし１１のいずれか１項に記載するキノリンオキシド誘導体の製造方法において、該キノリンオキシド誘導体を有機溶媒で抽出することを特徴とするキノリンオキシド誘導体の製造方法。
- 請求項１ないし５のいずれか１項に記載する一般式［I］もしくは［II］または式［II］で表されるキノリンオキシド誘導体の蛍光強度を測定することを特徴とするキノリンオキシド誘導体の分析方法。
- 請求項１３に記載するキノリンオキシド誘導体の分析方法において、内標準物質を加えることを特徴とするキノリンオキシド誘導体の分析方法。
- 請求項６ないし１２のいずれか１項に示す酸化反応によって、一般式［IV］もしくは［V］または式［VI］で表されるインド−ル誘導体を酸化して、一般式［I］もしくは［II］または式［II］で表されるキノリンオキシド誘導体を得る酸化部と、該キノリンオキシド誘導体の蛍光強度を測定してキノリンオキシド誘導体の量を求める測定部とを備えていることを特徴とするキノリンオキシド誘導体の分析装置。
- 請求項１５に記載するキノリンオキシド誘導体の分析装置において、前記酸化部で得られた反応生成物から該キノリンオキシド誘導体を有機溶媒で抽出し、抽出した該キノリンオキシド誘導体を前記測定部に供給する抽出部を備えていることを特徴とするキノリンオキシド誘導体の分析装置。
- 請求項１５または１６に記載するキノリンオキシド誘導体の分析装置において、内標準物質を加える添加部を更に備えていることを特徴とするキノリンオキシド誘導体の分析装置。
- 請求項１５ないし１７のいずれか１項に記載するキノリンオキシド誘導体の分析装置において、前記測定部がヒーター及び高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）を備えていることを特徴とするキノリンオキシド誘導体の分析装置。
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