JP2004231665A

JP2004231665A - 歯石処理用ホスホペプチド

Info

Publication number: JP2004231665A
Application number: JP2004115555A
Authority: JP
Inventors: Eric Charles Reynolds; チャールズレイノルズエリック
Original assignee: Victorian Dairy Industry Authority; University of Melbourne
Current assignee: Victorian Dairy Industry Authority; University of Melbourne
Priority date: 1991-08-22
Filing date: 2004-04-09
Publication date: 2004-08-19
Also published as: US5227154A; NZ244043A; AU658794B2; AU2472192A; EP0651633A1; CA2115249A1; JPH07502020A; CA2115249C; KR100225820B1; WO1993003707A1; EP0651633A4

Abstract

【課題】歯石を制御する。
【解決手段】特に亜鉛／ホスホペプチド錯体または凝集体の形態を有する、配列番号：１から配列番号：９の少なくとも１つのホスホペプチドを歯石を防止する量を含む経口組成物を歯に塗布することによる歯石の防止方法。
【選択図】なし

Description

本発明は、特殊なカゼインのホスホペプチドを含む経口組成物と歯を接触させることによって歯石を制御し防止する方法に関する。

歯石は歯の表面上に形成する石化した沈着物である。この石化した沈着物は、ほとんどが様々な形態のリン酸カルシウム、特にヒドロキシアパタイトの結晶である。ヒドロシキアパタイトの結晶生長を阻害または遅延させることによってあるいはより酸性の形態のリン酸カルシウム（例えば、ブラッシャイト）若しくは非晶質のリン酸カルシウムをヒドキシアパタイトに変換することを阻害することによって歯石の形成を防止することが望ましい。

パランジュニア（ＰａｒｒａｎＪｒ．）らは、経口組成物中に歯石防止剤として可溶な無機のピロリン酸のアルカリ金属塩を使用することを記載した（例えば、特許文献１〜３参照。）。

特許文献４において、シケス（Ｓｉｋｅｓ）らは、合成ポリマーがリン酸化されたアミノ酸を含有するものである無機物のスケーリングを阻害または遅延させるための合成の誘導アミノ酸ポリマーを開示している。さらに、シケス（Ｓｉｋｅｓ）ら（例えば、特許文献５〜６参照。）は、陰イオンのアミノ酸がポリペプチドの一端にクラスターを形成し、無極性残基が他端にクラスターを形成する歯石制御への合成ポリアミノ酸の使用を開示した。この陰イオンのアミノ酸は、それぞれホスホセリン、ホスホホモセリン、ホスホチロシン、ホスホトレオニン、グルタミン酸塩およびアスパラギン酸塩から選ばれる。さらに詳しくは、シケス（Ｓｉｋｅｓ）（例えば、特許文献７参照。）は、式ポリ（Ｘ）_ｍ（Ｙ）_ｎ（ただし、Ｘはアスパラギン酸塩、グルタミン酸塩、グルタミン、アスパラギンまたはホスホセリンのいずれかであり、Ｙはホスホセリン、ホスホホモセリン、ホスホチロシンおよびホスホトレオニン等のリン酸化アミノ酸のいずれかであり；ｍは２から１５０であり、ｎは１から３であり、ｎ＋ｍは５以上である）を有する合成ポリペプチドを開示した。
米国特許４，５１５，７７２号明細書米国特許４，５９０，０７７号明細書米国特許４，６８４，５１８号明細書米国特許４、５３４，８８１号明細書米国特許４、８６６，１６１号明細書米国特許４、８６８，２８７号明細書ヨーロッパ特許出願０，３９１，６２９号公報

本発明の目的は、経口組成物を歯に塗布することからなる歯石の防止方法を提供することにある。

また本発明の目的は、特定の配列を有するホスホペプチド又はそれらの塩からなる経口組成物を提供することにある。

さらに本発明の目的は、特定の配列を有するホスホペプチド又はそれらの塩からなる別の経口組成物を提供することにある。

すべてのシケス（Ｓｉｋｅｓ）らの明細書に示唆されたポリペプチドは合成されなければならず、特殊な配列の少数の様々なアミノ酸から構成される。本発明において、シケス（Ｓｉｋｅｓ）らの合成ポリペプチドとはアミノ酸の組成および配列が異なる、特殊なカゼインのホスホペプチドは、歯石防止力を有することが示される。これらのホスホペプチドは、米国特許５６３，７９８号でむしば防止剤および歯肉炎防止剤として記載されており、これらを便宜上本明細書においてはカゼインのホスホペプチド（ＣＰＰ）と称する。

本発明は、特殊なカゼインのホスホペプチドおよび／またはそれらの塩からなる経口組成物で歯を処理することによる歯石の制御方法を含むものである。この特殊なカゼインのホスホペプチドは、５から４０個のアミノアシル基を有し、配列−Ｓｅｒ（Ｐ）−Ｓｅｒ（Ｐ）−Ｓｅｒ（Ｐ）−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−（ただし、Ｓｅｒ（Ｐ）はホスホセリンであり、Ｇｌｕはグルタミン酸塩である）を有する。好ましくは、これらは、配列−Ｇｌｕ−Ｓｅｒ（Ｐ）−ｌｌｅ／Ｌｅｕ−Ｓｅｒ（Ｐ）−Ｓｅｒ（Ｐ）−Ｓｅｒ（Ｐ）−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−（ただし、Ｉｌｅはイソロイシンであり、Ｌｅｕはロイシンである）を有する。このカゼインのホスホペプチド（ＣＰＰ）は、歯石の形成に影響を及ぼすような量で経口組成物中に存在する。

本発明はまた、液状歯みがき、口内洗剤、ねり歯みがき、ロゼンジ、錠剤、食品若しくは飲料または歯石を制御するのに使用するのに適した他の製薬上使用できる賦形剤の形態を有する経口組成物を包含するものである。これらの組成物は、また、有効な量のホスファターゼインヒビター（例えば、弗化物またはビニルエーテルマレイン酸ポリマー（ｖｉｎｙｌｅｔｈｅｒｍａｌｅｉｃａｃｉｄｐｏｌｙｍｅｒ）若しくは金属イオンの活性剤（例えば、Ｚｎ（ＩＩ）またはＡｌ（ＩＩＩ））をも含んでいてもよい。

本発明によれば、歯石を制御または防止することができる。

特殊なカゼインのホスホペプチドおよび／またはそれらの塩を使用することが、本発明による歯石の制御方法に必須である。この特殊なカゼインのホスホペプチドは、配列−Ｓｅｒ（Ｐ）−Ｓｅｒ（Ｐ）−Ｓｅｒ（Ｐ）−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−（ただし、Ｓｅｒ（Ｐ）はホスホセリンであり、Ｇｌｕはグルタミン酸塩である）を含む５から４０個のアルミ酸を有する。−Ｇｌｕ−Ｓｅｒ（Ｐ）−ｌｌｅ／Ｌｅｕ−Ｓｅｒ（Ｐ）−Ｓｅｒ（Ｐ）−Ｓｅｒ（Ｐ）−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−（ただし、Ｉｌｅはイソロイシンであり、Ｌｅｕはロイシンである）のアミノアシル基の配列を有するものが、好ましいカゼインのホスホペプチドである。

カゼインのホスホペプチド（ＣＰＰ）および／またはそれらの塩の混合物を本発明の方法に使用してもよい。この場合、上記の配列−Ｇｌｕ−Ｓｅｒ（Ｐ）−ｌｌｅ／Ｌｅｕ−Ｓｅｒ（Ｐ）−Ｓｅｒ（Ｐ）−Ｓｅｒ（Ｐ）−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−を有するものが大部分を占めることが好ましい。このカゼインのホスホペプチドまたはＣＰＰの混合物は、少なくとも口に不愉快な不純物を含まない程度に実質的に精製されていることが好ましい。以下の「配列リスト」に配列番号：１、配列番号：２、配列番号：３、配列番号：４、配列番号：５、配列番号：６、配列番号：７、配列番号：８、配列番号：９として記載されたカゼインのホスホペプチドは、本発明の組成物において特に有用であることが知られている。

この好ましいカゼインのホスホペプチドはカゼインの消化物から抽出すればよく、消化も化学的なものであってもまたはタンパク質分解酵素による酵素的なものであってもよい。例えば、トリプシン、キモトリプシン、ペプシン、パパイン、サーモリシン若しくはプロナーゼ等のタンパク質分解酵素によってカゼインを消化することが好ましい。トリプシンが好ましい酵素である。さらに、消化されたカゼインを、配列−Ｓｅｒ（Ｐ）−Ｓｅｒ（Ｐ）−Ｓｅｒ（Ｐ）−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−を含むホスホペプチドおよび他のリン酸化されたペプチドおよびリン酸化されなかったペプチドに分画する。カゼインのホスホペプイドは、好ましくはカルシウム塩として米国特許５７３，７９８号に記載される選択沈降（ｓｅｌｅｃｔｉｖｅｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｉｏｎ）方法を用いて精製される。または、好ましいホスホペプチドを凝集するのにＣａＣｌ_２を用いる代わりに、他の二価若しくは三価の金属イオン（例えば、ＺｎＳＯ_４）を用いてＣＰＰ／金属イオン錯体または凝集体（例えば、ＺｎＣＰＰ）を形成し、さらにこれをエタノールによって選択的に沈殿させてもよい。カルシウム塩若しくは亜鉛塩のイオン交換によってあるいは米国特許５６３、７９８号に記載されているような陰イオン交換クロマトグラフィーによって、ペプチドのナトリウム塩を形成する。限外濾過を用いて、以下に記載するように非活性カゼインペプチドの残りからＣａＣＰＰまたはＺｎＣＰＰ錯体を分離する。このＣＰＰ塩を以下に記載するようにして限外濾過によってナトリウム塩に再度変換する。

０．１ＭのＨＣｌでｐＨ４．７にまでミルクを酸性にし、ＮａＯＨを用いてｐＨ７．０まで沈降物を中和することによって、カゼインのナトリウム塩（ｓｏｄｉｕｍｃａｓｅｉｎａｔｅ）を調製した。１０％ｗ／ｖのカゼインのナトリウム塩溶液を調製し、ｐＨを８．０に調節し、トリプシン（ノボ（Ｎｏｖｏ）製）を０．２％ｗ／ｖになるまで加え、ＮａＯＨを常時加えることによってｐＨを８．０に調節しながら３７℃で加水分解を完了した。さらに、５ＭのＨＣｌを用いて、溶液のｐＨをｐＨ４．７に調節し、遠心分離によって沈殿物を室温で除去した。ＮａＯＨおよびＣａＣｌ_２を１．０％ｗ／ｖの量になるまで加えて、上清のｐＨを７．０に調節した。次に、この溶液を、５容の１．０％ｗ／ｖのＣａＣｌ_２を用いてアミコンヤイエム１０（ＡｍｉｃｏｎＹＭ１０）（分子量の排除限界が１０，０００）を通してダイアフィルトレーションを行った。さらに、アミコンヤイエム１フィルター（ＡｍｉｃｏｎＹＭ１）（分子量の排除限界が１，０００）を通して１容の蒸留水／脱イオン水を用いて、保持物質を洗浄した。このようにして得られた調製物のそれぞれのペプチドを、本発明者らのオーストラリア特許５９３，３６５号において記載されているようにイオン交換ＦＰＬＣおよび逆相ＨＰＬＣによって分離し、Ｓｅｒ（Ｐ）残基をＳ−エチルシステインに変換した後これをアミノ酸組成及び配列分析によって同定した。

ＣＰＰ調製物のそれぞれのペプチドを、上記したように陰イオン交換ＦＰＬＣ及び逆相ＨＰＬＣによって分離した後分析した。ペプチドの同定として、ホスホセリン残基（ｐｈｏｓｐｈｏｓｅｒｙｌｒｅｓｉｄｕｅ）をＳ−エチルシステイン残基（Ｓ−ｅｔｈｙｌｃｙｓｅｉｎｙｌｒｅｓｉｄｕｅ）に変換した後にアミノ酸組成及び配列分析を行うことが挙げられる。市販のカゼイネート（ｃａｓｅｉｎａｔｅ）のトリプシン消化物からの代表的なＺｎＣＰＰ限外濾過調製物には、配列番号：１が２２．３％ｗ／ｗ；配列番号：２が２１．４％ｗ／ｗ；配列番号：３が１７．９％ｗ／ｗ；配列番号：４が６．８％ｗ／ｗ；配列番号：５が６．３％ｗ／ｗ；配列番号：６が６．４％ｗ／ｗ；配列番号：７が５．７％ｗ／ｗ；配列番号：８が０．８％ｗ／ｗ；配列番号：９が３．３％ｗ／ｗおよび非活性ペプチドが９．１％ｗ／ｗ含まれている。より厳しい加水分解の条件（例えば、高温、極端なｐＨおよび「非−トリプシン−様」プロテアーゼ）によって、脱アミド化された（ｄｅａｍｉｄａｔｅｄ）および／または脱リン酸化されたおよび／または「配列リスト」に記載されたものより短いペプチドが得られることは注目すべき点である。これらのより短いおよび／または脱アミド化された（ｄｅａｍｉｄａｔｅｄ）ペプチドは、配列−Ｇｌｕ−Ｓｅｒ（Ｐ）−ｌｌｅ／Ｌｅｕ−Ｓｅｒ（Ｐ）−Ｓｅｒ（Ｐ）−Ｓｅｒ（Ｐ）−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−またはより小さい範囲では−Ｓｅｒ（Ｐ）−Ｓｅｒ（Ｐ）−Ｓｅｒ（Ｐ）−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−を有する場合には、依然として歯石防止活性がある。しかしながら、ＣＰＰの分解を最小限にし、これにより歯石防止活性を最大限にするために加水分解を制御することが好ましい。

ＣＰＰは、そのまま、またはアルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩若しくは遷移金属塩の形態で使用される。具体的には、ナトリウム塩、カルシウム塩、亜鉛塩、銅塩、アルミニウム塩、カリウム塩、ストロンチウム塩、マグネシウム塩およびニッケル塩が挙げられる。ナトリウム塩および亜鉛塩が最も好ましい。したがって、本発明が本明細書に列記された特殊な塩に限定されるものではなく、ＣＰＰの他の陽イオンの金属塩、特に陽イオンの遷移金属塩を本明細書に記載された目的のために形成し使用することができると考えられる。歯石を防止することが知られている従来の化合物（例えば、ピロリン酸塩）と少なくとも１つのＣＰＰとの物理的な組合せも可能であり、本発明の概念に含まれる。このような組成物は、歯石の防止という観点で相乗効果または付加効果を発揮する。

本発明に方法は、特殊なＣＰＰからなる組成物を歯に塗布することをも含む。このような組成物は、通常、約０．０１から約３０重量％のＣＰＰ、好ましくは約０．１から１０重量％、最も好ましくは１．０から５．０重量％を含む。上記組成物は、口内洗剤、歯みがき、ねり歯みがき、歯磨き粉、ゲル、ロゼンジ、錠剤、チューイングガム、食品若しくは飲料の形態、または経口組成物の他の適当な形態のＣＰＰの水溶液、水−アルコール溶液またはアルコール溶液若しくは懸濁液である。これらの調製物のｐＨは２から１０の間でなければならない。ｐＨが極端になると脱リン酸化が起こり、これによりＣＰＰが不活性化される。好ましくは、ｐＨが５から９の間である。

ＣＰＰの歯石防止活性は、口内の歯苔の細菌のホスファターゼ活性の作用を経たホスホセリンの脱リン酸化によって破壊される。したがって、ホスファターゼやペプチダーゼ活性に対してＣＰＰが安定であることが望ましい。脱リン酸化を防止または阻害するためにＣＰＰと共に使用されるホスファターゼインヒビターの例としては、弗化物イオン、ビニルエーテルマレイン酸ポリマー（ｖｉｎｙｌｅｔｈｅｒｍａｌｅｉｃａｃｉｄｐｏｌｙｍｅｒ）（ガンツレッツ（ｇａｎｔｒｅｚ））および凝集した二価及び三価の金属イオン（例えば、Ｚｎ（ＩＩ））が挙げられる。亜鉛イオンはＣＰＰを凝集し、１モルのＣＰＰ当たり約６モルの亜鉛イオンを有する亜鉛ＣＰＰ錯体を生成する。この亜鉛とＣＰＰの凝集体または錯体はＺｎＣＰＰと称される。ＺｎＣＰＰは、口腔内のホスファターゼやペプチダーゼ活性に対して安定性を示し、さらに、ＮａＣＰＰと比較した場合口での保持の向上が、また、歯苔中への取り込みの向上及び強力な歯石防止活性の増加が示された。

ＣＰＰはリン酸カルシウムを安定化し、詳しくは、これらは自発的に結合し非晶質のリン酸カルシウムのクラスターを形成し、結晶形態、特にヒドロキシアパタイトに相転移するのを遅延または防止する。さらに、ＣＰＰはリン酸カルシウムの結晶相に結合し、結晶生長を遅延または防止する。ＣＰＰはまた、リン酸カルシウムのより酸性の形態、例えば、ブラッシャイト（ＣａＨＰＯ_４・２Ｈ_２Ｏ）を安定化し、より塩基性の形態、特にヒドロキシアパタイトに転移するのを遅延または防止する。合成ペプチドを用いることによって、ＣＰＰの活性中心が、配列−Ｇｌｕ−Ｓｅｒ（Ｐ）−ｌｌｅ／Ｌｅｕ−Ｓｅｒ（Ｐ）−Ｓｅｒ（Ｐ）−Ｓｅｒ（Ｐ）−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−およびより小さい範囲ではペンタマー−Ｓｅｒ（Ｐ）−Ｓｅｒ（Ｐ）−Ｓｅｒ（Ｐ）−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−として同定された。しかしながら、上記の合成オクタマーの特殊な活性はモルを基本とした場合ＣＰＰの配列番号：１および配列番号：２の半分しかないことは特記すべきである。これからＣＰＰの他のアミノアシル基が十分な活性を得るために重要であることが明らかに示される。

本発明の好ましい経口組成物は、ねり歯みがきのクリーム若しくはゲル、または口内洗剤の形態を有する。ねり歯みがきおよびゲルに一般的に含まれる構成成分が本発明によるねり歯みがきおよびゲル組成物中に使用される。好ましい構成成分としては、研磨磨き材（ａｂｒａｓｉｖｅｐｏｌｉｓｈｉｎｇｍａｔｅｒｉａｌ）、石鹸泡剤（ｓｕｄｓｉｎｇａｇｅｎｔ）、フレーバー剤、保湿剤、結合剤、甘味料、および水が挙げられる。本発明の組成物中に使用される研磨材としては、α−アルミナ三水和物等の、アルミナ及びその水和物、三珪酸マグネシウム、炭酸マグネシウム、焼成珪酸アルミニウムや珪酸アルミニウム等の、アルミノ珪酸塩、炭酸カルシウム、珪酸ジルコニウム、ポリメタクリル酸メチル、粉末化ポリエチレン、シリカキセロゲル、ヒドロゲルおよびエーロゲル等が挙げられる。また、ピロリン酸カルシウム、不溶なメタリン酸ナトリウム、炭酸カルシウム、オルトリン酸二石灰（ｄｉｃａｌｃｉｕｍｏｒｔｈｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ）、粒状ヒドキシアパタイトなどが研磨剤として好ましい。経口組成物を摂取する形態によっては、研磨剤は、特にねり歯みがきでは、０から７０重量％、好ましくは１から７０重量％、より好ましくは１０から７０重量％の量で存在する。

本発明において使用される保湿剤としては、グリセロール、ポリオール、ソルビトール、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、水素化部分加水分解多糖類等が挙げられる。保湿剤は、特にねり歯みがきでは、通常、０から８０重量％、好ましくは５から７０重量％の量で存在する。本発明において好ましく使用される増粘剤としては、シリカが挙げられる。増粘剤は、０．１から２０重量％でねり歯みがきのクリームやゲル中に存在する。

本発明の組成物中に好ましく使用される結合剤としては、ヒドロキシエチルセルロース（ナトロゾル（Ｎａｔｒｏｓｏｌ）社製）およびヒドロキシプロピルセルロース（クルセル（Ｋｌｕｃｅｌ）社製）、さらにはキサンタンゴム（ｘａｎｔｈａｎｇｕｍ）、アイルランドコケおよびトラガカントゴムが挙げられる。結合剤は、０．０１から１０％の範囲で本発明のねり歯みがき中に存在する。本発明の歯みがき中に好ましく使用される甘味料は、約０．１％から５％の量が好ましいが、これらとしてはサッカリンが挙げられる。

弗化ナトリウム、弗化第一錫（ｓｔａｎｎｏｕｓｆｌｕｏｒｉｄｅ）、フルオロトリオクソリン酸ナトリウム、弗化アンモニウム亜鉛（ｚｉｎｃａｍｍｏｎｉｕｍｆｌｕｏｒｉｄｅ）、弗化アンモニウム錫（ｔｉｎａｍｍｏｎｉｕｍｆｌｕｏｒｉｄｅ）、弗化カルシウムおよび弗化アンモニウムコバルト（ｃｏｂａｌｔａｍｍｏｎｉｕｍｆｌｕｏｒｉｄｅ）等のねり歯みがき中に使用される弗化物源は、虫歯防止の長所を発揮するために含まれてもよく、また、含まれることが好ましい。本発明の組成物は、好ましくは、弗化物源を含む。弗化物イオンは、約３０００ｐｐｍまでのより高い量も用いられるが、通常、０から１５００ｐｐｍ、好ましくは５０から１５００ｐｐｍの量で使用される。

陰イオン、非イオン、陽イオン、両性および／または双生イオンの石鹸等の、界面活性剤は、０から１５重量％、好ましくは０．１から１５重量％、より好ましくは０．２５から１０重量％の範囲内で存在する。陰イオン界面活性剤が最も好ましく、これらとしてはドデシル硫酸ナトリウム、ラルリルサルコシンナトリウム（ｓｏｄｉｕｍｌａｕｒｙｌｓａｒｃｏｓｉｎａｔｅ）およびドデシルベンゼンスルホン酸ナトリウムが挙げられる。フレーバーは、通常、練り歯みがき中に低い量で、例えば、０．０１から約５重量％、特に０．１重量％から５重量％で含まれる。

ねり歯みがきに適した上記した構成成分は、ねり歯みがきやゲルの配合の分野における当業者には明らかなように、通常、ゲルにも適している。したがって、特記しない限り、ねり歯みがきに関するものはゲルにも同様に適用できるものと解釈される。具体的には、口内洗剤は、水／アルコール溶液、フレーバー、保湿剤、甘味料、石鹸泡剤（ｓｕｄｓｉｎｇａｇｅｎｔ）および着色剤からなる。ねり歯みがき中に使用される上記に相当する化合物は、通常、口内洗剤でも上記と同様の割合で使用できる。口内洗剤は、０から６０重量％、好ましくは５から３０重量％の量でエタノールを含むことができる。

抗菌剤、例えば、イルガサン（Ｉｒｇａｓａｎ）ＤＰ３００（例えば、チバ−ガイギー（Ｃｉｂａ−Ｇｅｉｇｙ）等のフェノール類やサリチルアミド類（アリチルアニリドを含む）および亜鉛、銅、銀や第一錫等のある種の金属イオン源（例えば、塩化亜鉛、塩化銅や塩化第一錫、及び硝酸銀）が、含まれてもよく、また、含まれることが好ましい。エフディ＆シーブルー（ＦＤ＆ＣＢｌｕｅ）＃１、エフディ＆シーイエロー（ＦＤ＆ＣＹｅｌｌｏｗ）＃１０、エフディ＆シーレッド（ＦＤ＆ＣＲｅｄ）＃４０等の、歯みがきに適した染料／着色剤を、本発明の歯みがきに使用してもよい。様々な他の構成成分を本発明の組成物中に更に加えてもよく、これらとしては、防腐剤、ビタミンＣ及びＥ等のビタミン、第一錫塩、銅塩、ストロンチウム塩及びマグネシウム塩等の他の歯苔防止剤が挙げられる。また、ｐＨ調節剤、尿素等のむしば防止剤、グリセロリン酸カルシウム、三メタリン酸ナトリウム、シリコーンポリマー等の非汚染化合物、植物の抽出物、感受性の高い歯に対しては硝酸カリウムやクエン酸カリウム等の減感剤（ｄｅｓｅｎｓｉｔｉｚｉｎｇａｇｅｎｔ）、およびこれらの混合物を含有していてもよい。さらに、ポリマー、特にポリカルボン酸塩若しくはポリスルホネート等の陰イオンポリマー、またはカルボキシレートやスルホネート部分の両方を含むポリマーを含有していてもよい。

（実施例１）
歯石防止の確立されたモデルである、種として播かれた結晶生長阻害アッセイ（ＳｅｅｄｅｄＣｒｙｓｔａｌＧｒｏｗｔｈＩｎｈｉｂｉｔｉｏｎＡｓｓａｙ）を用いて、インビトロ（ｉｎｖｉｔｒｏ）の比較実験を行った。代表的な実験によって、ＣＰＰおよび合成ペプチドによるヒドロシキアパタイト（ＨＡ）を種とした結晶生長の阻害を以下の表に示す。実験に使用した溶液の組成は、ＣａＣｌ_２中で１．０６ミリモル／リットルおよび無機リン酸塩（Ｐｉ）中で０．６３ミリモル／リットルであった。ｐＨは、Ｈ_２ＰＯ_４ ⁻とＨＰＯ_４ ^２−を適当に組み合わせて７．４０に調節し、イオン力は、ＮａＣｌを加えて制御した。種として使用されたＨＡは、１６．３ｍ^２／ｇの比表面積および１．６６のＣａ／Ｐのモル比を有し、ペプチド溶液またはコントロール溶液と共にそれぞれ予めインキュベートされた。コントロール溶液は、ペプチドを含まない以外は同じｐＨおよびイオン力であった。０時間で、ＨＡの種（２５ｍｇ）をサーモスタトで調温された溶液（３７℃±０．５℃）に添加し、ｐＨによって、さらには懸濁液の少量のサンプルを取ることによって、時間に対する（結晶生長による）溶液組成の変化を観察した。サンプルを濾過し、ＨＡの結晶を除去し、濾液のＰｉを分析した。種として播かれた結晶生長の阻害は、[Δ_（Ｐｉ）コントロール−Δ_（Ｐｉ）ペプチド]／Δ_（Ｐｉ）コントロール×１００で表した。

（実施例２）
ペプチドが結合したリン酸カルシウムを限外濾過法を用いて測定した。１００ｍＭトリス／ＣＨＥＳ（ｐＨ７．０、８．０，９．０）０若しくは１２ｍＭＣａＣｌ_２、および０〜８．０ｍＭのリン酸ナトリウム（ＮａＣｌをイオン力を０．１５に一定に保つために加えた）における０．１〜２．０ｍＭのペプチドを放置し、３７℃、１８時間で平衡させった。沈殿物を含む溶液は廃棄した。さらに、１０％ｖ／ｖ未満の溶液を、１０００分子量（Ｍ_ｒ）の排除限界を有するフィルターを備えたアミコン（Ａｍｉｃｏｎ）のミクロパーティッションセル（ｍｉｃｒｏｐａｒｉｔｉｏｎｃｅｌｌ）に通過させた。もとの溶液（沈殿のないことを確認した）および限外濾過液におけるカルシウムおよびリン酸塩の濃度を、ＡＡＳおよび比色法を用いてそれぞれ測定した。全体のカルシウム及びリン酸塩と遊離したカルシウム及びリン酸塩の差によって、ペプチドが結合したリン酸カルシウムを測定した。リン酸カルシウムの結合は、様々なリン酸カルシウムのイオン活性生成物の機能として表されるため、ｐＨに依存しない機能を測定した。拡張されたデバイ−ヒュッケルの式を用いてイオン活性係数を算定し、イオン対、ＣａＨＰＯ_４ ^０、ＣａＨ_２ＰＯ_４ ^＋、ＣａＰＯ_４ ⁻、ＣａＯＨ^＋、及びＨ_３ＰＯ_４とＨ_２Ｏと解離及びイオン力を考慮した改良されたコンピュータープログラムを用いて、遊離したカルシウム及びリン酸塩の濃度およびｐＨから様々な相のリン酸カルシウムに対するイオン活性生成物を測定した。ＣＰＰおよび合成ペプチドによるリン酸カルシウムの結合を以下の表に示す。

ペプチドによって結合し安定化されたリン酸カルシウムは、非晶質のリン酸カルシウム[Ｃａ_１．５（ＰＯ_４）]であることが分かった。

（実施例３）
結晶相としてブラッシャイト（リン酸二石灰二水和物（ｄｉｃａｌｃｉｕｍｐｈｏｓｐｈａｔｅｄｉｈｙｄｒａｔｅ）、ＤＣＰＤ）を用いた種として播かれた結晶生長阻害アッセイ（ＳｅｅｄｅｄＣｒｙｓｔａｌＧｒｏｗｔｈＩｎｈｉｂｉｔｉｏｎＡｓｓａｙ）にＣＰＰおよび合成ペプチドを用いて、比較実験を行った。ＤＣＰＤによる結晶生長実験に使用された過飽和溶液は、以下の組成、Ｃａ及びＰｉが５．３ミリモル／リットル、ｐＨが６．１０、５０ミリモル／リットルのＮａＣｌを有するものであった。それぞれのペプチドを１．０マイクロモル／リットルの濃度で過飽和溶液に添加した。種として使用されたＤＣＰＤは、０．９９のモル比および１．１２ｍ^２／ｇの比表面積を有していた。０時間で、ＤＣＰＤを溶液に加え、様々な時間で結晶相を除去した後Ｐｉを測定した。ＣＰＰおよび合成ペプチドの効果を以下の表に示す。

（実施例４）
ＣＰＰへの亜鉛イオンの結合を、リン酸カルシウムの結合に関して実施例２において記載したのと同様の実験技術を用いて測定した。ｐＨ６．７で２０ミリモル／リットルのＺｎＳＯ_４を含有する１０ｍｇ／ｍｌのＮａＣＰＰ溶液を１，０００分子量（ＭＷ）の排除限界を有するフィルターで限外濾過し、限外濾過液を原子吸光分光分析によって分析した。限外濾過液が１ミリモル／リットルの遊離した亜鉛イオンを含むことから、１９ミリモル／リットルが結合し、これは１ＣＰＰ分子当たり６個のＺｎ^２＋の凝集体を表していることが示された。ＺｎＣＰＰ凝集体の大きさによって１錯体当たり少なくとも６個のＣＰＰ分子が示唆された。

（実施例５）
３ミリモル／リットル濃度のペプチドを口内洗剤中で用いて、歯苔中へのＮａＣＰＰおよびＺｎＣＰＰの取り込みを測定した。３日間口腔衛生を慎んだ人に一日２回、口内洗剤を使用してもらった。４日目に、下の前歯から歯肉上部分の歯苔を収集し、定量競合ＥＬＩＳＡ（ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅｃｏｍｐｅｔｉｖｅＥＬＩＳＡ）に特殊な抗体を用いてＣＰＰに関して分析した。ＮａＣＰＰを含む口内洗剤を用いた後の歯苔中のＣＰＰ量は１０７±５１μｇ／ｇ歯苔であった。しかしながら、ＺｎＣＰＰを含む口内洗剤を用いた後の歯苔中のＣＰＰ量は、上記に比べてかなり高い（Ｐ＜０．０５）２６６±６５μｇ／ｇであった。

（実施例６）
本発明によるＣＰＰを含む、口内洗剤の具体的な配合を以下に示す：

（実施例７）
本発明によるＣＰＰを含む、ねり歯みがきの具体的な配合を以下に示す：

Claims

５から４０個のアミノアシル基を有し、配列−Ｓｅｒ（Ｐ）−Ｓｅｒ（Ｐ）−Ｓｅｒ（Ｐ）−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−（ただし、Ｓｅｒ（Ｐ）はホスホセリンであり、Ｇｌｕはグルタミン酸塩である）を有する、歯石を防止する量の少なくとも１つのホスホペプチドまたはそれらの塩を含む経口組成物を歯に塗布することからなる歯石の防止方法。
該ホスホペプチドが配列−Ｇｌｕ−Ｓｅｒ（Ｐ）−ｌｌｅ／Ｌｅｕ−Ｓｅｒ（Ｐ）−Ｓｅｒ（Ｐ）−Ｓｅｒ（Ｐ）−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−（ただし、Ｉｌｅはイソロイシンであり、Ｌｅｕはロイシンである）を有する、請求項１記載の方法。
該ホスホペプチドが明細書に記載の配列番号：１から配列番号：９から選ばれたものである、請求項１または請求項２記載の方法。
該ホスホペプチドがナトリウム塩、カルシウム塩、亜鉛塩、銅塩、アルミニウム塩、カリウム塩、ストロンチウム塩、マグネシウム塩およびニッケル塩等のアルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩若しくは遷移金属塩から選らばれた塩の形態を有する、請求項１、２または３に記載の方法。
該ホスホペプチドが二価若しくは三価の金属イオン錯体または凝集体の形態を有する、請求項１，２または３に記載の方法。
該経口組成物が弗化物イオン、ビニルエーテルマレイン酸ポリマー（ｖｉｎｙｌｅｔｈｅｒｍａｌｅｉｃａｃｉｄｐｏｌｙｍｅｒ）（ガンツレッツ（ｇａｎｔｒｅｚ））および凝集した二価及び三価の金属イオンから選ばれたホファターゼインヒビターを含むものである、請求項１，２または３に記載の方法。
製薬上使用できる担体において５から４０個のアミノアシル基を有し、配列−Ｓｅｒ（Ｐ）−Ｓｅｒ（Ｐ）−Ｓｅｒ（Ｐ）−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−（ただし、Ｓｅｒ（Ｐ）はホスホセリンであり、Ｇｌｕはグルタミン酸塩である）を有する、歯石を防止する量の少なくとも１つのホスホペプチドまたはそれらの塩からなる経口組成物。
該組成物が弗化物イオン、ビニルエーテルマレイン酸ポリマー（ｖｉｎｙｌｅｔｈｅｒｍａｌｅｉｃａｃｉｄｐｏｌｙｍｅｒ）（ガンツレッツ（ｇａｎｔｒｅｚ））および凝集した二価及び三価の金属イオンから選ばれた有効な量のホファターゼインヒビターを含むものである、請求項７記載の組成物。
二価若しくは三価の金属イオン錯体または凝集体として存在する、５から４０個のアミノアシル基を有し、配列−Ｓｅｒ（Ｐ）−Ｓｅｒ（Ｐ）−Ｓｅｒ（Ｐ）−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−（ただし、Ｓｅｒ（Ｐ）はホスホセリンであり、Ｇｌｕはグルタミン酸塩である）を有する、歯石を防止する量の少なくとも１つのホスホペプチドまたはそれらの塩からなる経口組成物。
該ホスホペプチドがさらに配列−Ｇｌｕ−Ｓｅｒ（Ｐ）−ｌｌｅ／Ｌｅｕ−Ｓｅｒ（Ｐ）−Ｓｅｒ（Ｐ）−Ｓｅｒ（Ｐ）−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−（ただし、Ｉｌｅはイソロイシンであり、Ｌｅｕはロイシンである）を有する、請求項９記載の組成物。
該ホスホペプチドが明細書に記載の配列番号：１から配列番号：９から選ばれたものである、請求項９または請求項１０記載の組成物。
該ホスホペプチドが亜鉛／ホスホペプチド錯体または凝集体として存在する、請求項９、１０または１１項に記載の経口組成物。