JP2012509273A

JP2012509273A - 核酸送達系のための放出可能融合性脂質

Info

Publication number: JP2012509273A
Application number: JP2011536585A
Authority: JP
Inventors: ザオ，ホン; ヤン，ウェイリ; シー，リャンジュン; ウー，デシュン; ロイゼン，マクシム
Original assignee: エンゾンファーマシューティカルズ，インコーポレーテッド
Priority date: 2008-11-17
Filing date: 2009-11-17
Publication date: 2012-04-19
Also published as: WO2010057160A1; CA2742846A1; TW201021852A; US20110223257A1; WO2010057160A9; EP2355799A1; CN102215820A; EP2355799A4

Abstract

本発明は、オリゴヌクレオチドの送達のための放出可能融合性脂質、及び前記を含有するナノ粒子組成物、並びに前記を用いて遺伝子発現を調節する方法に関する。特に、本発明は、イミンリンカー及び両性イオン部分を含有する放出可能融合性脂質に関する。
【選択図】なし

Description

本発明は、核酸送達系のための放出可能融合性脂質に関する。

核酸を使用する療法は、過去数年にわたり様々な疾患を治療する試みとして提案されてきた。アンチセンス療法等の療法は、治療遺伝子が、疾患と関連する遺伝子発現を選択的に調節し、他の治療方式を使用する場合に起こる副作用を最小限に抑えることができるため、疾患の治療において強力な手段である。

しかし、核酸を使用する療法は、遺伝子の安定性が低いことや、送達の効果がないことにより限界があった。いくつかの遺伝子送達系が、該障害を克服し、インビトロ及びインビボで癌細胞又は癌組織等の標的領域に治療遺伝子を効果的に導入するために提案された。送達を改善し、治療遺伝子の細胞取込みを増進するためのこのような試みは、リポソームの利用を対象とする。

プラスミドの送達においてはある程度の進展があったが、現在利用できるリポソームはオリゴヌクレオチドを体内に効果的に送達するものではない。オリゴヌクレオチドの送達において、望ましい送達系は、オリゴヌクレオチドの負電荷を中和するのに十分に足りる正電荷を含んでいなければならない。最近、（非特許文献１）及び（非特許文献２）に各々記載されている被覆カチオン性リポソーム（ＣＣＬ）及び安定核酸脂質粒子（ＳＮＡＬＰ）により、小型で、核酸封入率が高く、血清安定性が良好で、循環時間の長いナノ粒子が得られることが報告された。

Stuart, D.D., et al Biochim. Biophys. Acta, 2000, 1463:219〜229 Semple, S.C., et al, Biochim. Biophys. Acta, 2001, 1510:152〜166

そのような試み及び前進にもかかわらず、核酸送達系を改善することが引き続き必要とされている。本発明はこの必要性に対処するものである。

本発明は、核酸送達のためのイミンリンカー及び両性イオン部分を含有する放出可能融合性脂質、並びに前記を含有するナノ粒子組成物を提供する。オリゴヌクレオチド等のポリ核酸は、カチオン性脂質、本明細書に記載の放出可能融合性脂質及びＰＥＧ脂質の混合物を含有するナノ粒子複合体中に封入される。

本発明のこの態様によれば、核酸（即ち、オリゴヌクレオチド）の送達のための放出可能融合性脂質は、式（Ｉ）：

（式中、
Ｒは水溶性の中性電荷部分又は両性イオン含有部分であり、
Ｌ_１〜２は独立に選択される二官能性リンカーであり、
Ｍはイミン含有部分であり、
Ｑは置換又は非置換、飽和又は不飽和のＣ４〜３０含有部分であり、
（ａ）は０又は正の整数であり、
（ｂ）は０又は正の整数である）
を有する。

本発明は、核酸送達のためのナノ粒子組成物も提供する。本発明によれば、核酸（即ち、オリゴヌクレオチド）送達のためのナノ粒子組成物は、
（ｉ）カチオン性脂質、
（ｉｉ）式（Ｉ）の化合物、及び
（ｉｉｉ）ＰＥＧ脂質
を含むことができる。

本発明の別の態様において、インビボ及びインビトロで細胞又は組織に核酸（好ましくはオリゴヌクレオチド）を送達する方法が提供される。本明細書に記載の方法で導入されるオリゴヌクレオチドは、標的遺伝子の発現を調節できる。

本発明の別の態様は、標的遺伝子、即ち、癌遺伝子、及び哺乳動物、好ましくはヒトの疾患と関連する遺伝子の発現を抑制する方法を提供する。該方法は、細胞、例えば癌細胞又は癌組織を、本明細書に記載のナノ粒子組成物から調製したナノ粒子／ナノ粒子複合体と接触させることを含む。ナノ粒子中に封入されたオリゴヌクレオチドは放出され、次いで処理される細胞又は組織におけるｍＲＮＡ又はタンパク質のダウンレギュレーションに介在する。ナノ粒子での治療により、癌細胞の増殖の抑制等、悪性疾患の治療における標的遺伝子発現の調節（及びそれと関連する付帯利益）が可能となる。このような療法は、単一の治療として、又は一つ又は複数の有用な及び／又は認可された治療との併用療法の一部として行われてもよい。

さらなる態様は、式（Ｉ）の化合物並びに前記を含有するナノ粒子を製造する方法を含む。

本明細書に記載の放出可能融合性脂質を含有するナノ粒子組成物は、核酸をインビボ並びにインビトロで投与する手段を提供する。

本明細書に記載の放出可能融合性脂質を含有するナノ粒子は、細胞及び細胞内コンパートメントに侵入した際、ナノ粒子中に封入された核酸の放出を補助できる。任意の理論に拘束されずに、このような特徴は、酸不安定リンカーにある程度起因する。イミン系リンカーは、酸に不安定であり、癌細胞及びエンドソーム等の酸性環境で加水分解される。したがって、イミン系リンカーは、ナノ粒子の破壊を促進でき、それにより核酸の細胞内放出を可能にする。

両性イオンに帯電した群を含有する放出可能融合性脂質は、核酸の細胞取込みを促進する。極性であるが、中性に帯電した群は、ナノ粒子の細胞膜の通過を促進する。

本明細書に記載の放出可能融合性脂質は、体液中のナノ粒子複合体及び核酸を安定させる。ナノ粒子複合体は、ヌクレアーゼから核酸分子を保護し、それによりポリ核酸を分解から保護することができる。

本明細書に記載のナノ粒子送達系により、十分な量の治療用オリゴヌクレオチドを、ＥＰＲ（Enhanced Permeation and Retention）効果により癌細胞等の所望の標的領域で選択的に利用することが可能となる。標的領域での治療用核酸は、特に癌細胞又は癌組織において標的遺伝子の発現を調節できる。

本明細書に記載のナノ粒子は、生物活性分子、例えば小分子化学療法薬、並びに１種又は複数の異なる種類の治療用核酸の送達においても使用され、それにより疾患の治療において相乗効果を得ることができる。

他の及びさらなる利点は、以下の説明から明らかとなろう。

本発明の目的のために、「残基」という用語は、例えば、別の化合物との置換反応を経た後に残るＣ６〜３０炭化水素等を指す、化合物の部分を意味すると理解されるものとする。

本発明の目的のために、「アルキル」という用語は、直鎖、分岐鎖及び環状のアルキル基を含む飽和脂肪族炭化水素を指す。「アルキル」という用語は、アルキルチオアルキル基、アルコキシアルキル基、シクロアルキルアルキル基、ヘテロシクロアルキル基及びＣ_１〜６アルキルカルボニルアルキル基も含む。アルキル基は、１〜１２個の炭素を有することが好ましい。アルキル基は、より好ましくは約１〜７個の炭素、さらにより好ましくは約１〜４個の炭素の低級アルキルである。アルキル基は、置換又は非置換であってよい。置換される場合、置換基（複数可）としては、好ましくはハロ基、オキシ基、アジド基、ニトロ基、シアノ基、アルキル基、アルコキシ基、アルキルチオ基、アルキルチオアルキル基、アルコキシアルキル基、アルキルアミノ基、トリハロメチル基、ヒドロキシル基、メルカプト基、ヒドロキシ基、シアノ基、アルキルシリル基、シクロアルキル基、シクロアルキルアルキル基、ヘテロシクロアルキル基、ヘテロアリール基、アルケニル基、アルキニル基、Ｃ_１〜６ヒドロカルボニル基、アリール基及びアミノ基が挙げられる。

本発明の目的のために、「置換」という用語は、官能基又は化合物に含有される一つ又は複数の原子を、ハロ基、オキシ基、アジド基、ニトロ基、シアノ基、アルキル基、アルコキシ基、アルキルチオ基、アルキルチオアルキル基、アルコキシアルキル基、アルキルアミノ基、トリハロメチル基、ヒドロキシル基、メルカプト基、ヒドロキシ基、シアノ基、アルキルシリル基、シクロアルキル基、シクロアルキルアルキル基、ヘテロシクロアルキル基、ヘテロアリール基、アルケニル基、アルキニル基、Ｃ_１〜６アルキルカルボニルアルキル基、アリール基及びアミノ基の群に由来する部分の一つに付加するか、又はそれと置き換えることを指す。

本発明の目的のために、「アルケニル」という用語は、直鎖、分岐鎖及び環状の基を含む、少なくとも一つの炭素−炭素二重結合を含有する基を指す。アルケニル基は、好ましくは約２〜１２個の炭素を有する。アルケニル基は、より好ましくは約２〜７個の炭素、さらにより好ましくは約２〜４個の炭素の低級アルケニルである。アルケニル基は、置換又は非置換であってよい。置換される場合、置換基（複数可）としては、好ましくはハロ基、オキシ基、アジド基、ニトロ基、シアノ基、アルキル基、アルコキシ基、アルキルチオ基、アルキルチオアルキル基、アルコキシアルキル基、アルキルアミノ基、トリハロメチル基、ヒドロキシル基、メルカプト基、ヒドロキシ基、シアノ基、アルキルシリル基、シクロアルキル基、シクロアルキルアルキル基、ヘテロシクロアルキル基、ヘテロアリール基、アルケニル基、アルキニル基、Ｃ_１〜６ヒドロカルボニル基、アリール基及びアミノ基が挙げられる。

本発明の目的のために、「アルキニル」という用語は、直鎖、分岐鎖及び環状の基を含む、少なくとも一つの炭素−炭素三重結合を含有する基を指す。アルキニル基は、好ましくは約２〜１２個の炭素を有する。アルキニル基は、より好ましくは約２〜７個の炭素、さらにより好ましくは約２〜４個の炭素の低級アルキニルである。アルキニル基は、置換又は非置換であってよい。置換される場合、置換基（複数可）としては、好ましくはハロ基、オキシ基、アジド基、ニトロ基、シアノ基、アルキル基、アルコキシ基、アルキルチオ基、アルキルチオアルキル基、アルコキシアルキル基、アルキルアミノ基、トリハロメチル基、ヒドロキシル基、メルカプト基、ヒドロキシ基、シアノ基、アルキルシリル基、シクロアルキル基、シクロアルキルアルキル基、ヘテロシクロアルキル基、ヘテロアリール基、アルケニル基、アルキニル基、Ｃ_１〜６ヒドロカルボニル基、アリール基及びアミノ基が挙げられる。「アルキニル」の例としては、プロパルギル、プロピン及び３−ヘキシンが挙げられる。

本発明の目的のために、「アリール」という用語は、少なくとも一つの芳香族環を含有する芳香族炭化水素環系を指す。芳香族環は、他の芳香族炭化水素環又は非芳香族炭化水素環と場合により縮合していてもよく、又はさもなければ結合していてもよい。アリール基の例としては、例えば、フェニル、ナフチル、１，２，３，４−テトラヒドロナフタレン及びビフェニルが挙げられる。アリール基の好ましい例としては、フェニル及びナフチルが挙げられる。

本発明の目的のために、「シクロアルキル」という用語は、Ｃ_３〜８環状炭化水素を指す。シクロアルキルの例としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル及びシクロオクチルが挙げられる。

本発明の目的のために、「シクロアルケニル」という用語は、少なくとも一つの炭素−炭素二重結合を含有するＣ_３〜８環状炭化水素を指す。シクロアルケニルの例としては、シクロペンテニル、シクロペンタジエニル、シクロヘキセニル、１，３−シクロヘキサジエニル、シクロヘプテニル、シクロヘプタトリエニル及びシクロオクテニルが挙げられる。

本発明の目的のために、「シクロアルキルアルキル」という用語は、Ｃ_３〜８シクロアルキル基で置換されたアルキル基を指す。シクロアルキルアルキルの例としては、シクロプロピルメチル及びシクロペンチルエチルが挙げられる。

本発明の目的のために、「アルコキシ」という用語は、酸素橋を介して親分子部分に結合した、示された数の炭素原子のアルキル基を指す。アルコキシ基の例としては、例えば、メトキシ、エトキシ、プロポキシ及びイソプロポキシが挙げられる。

本発明の目的のために、「アルキルアリール」基は、アルキル基で置換されたアリール基を指す。

本発明の目的のために、「アラルキル」基は、アリール基で置換されアルキル基を指す。

本発明の目的のために、「アルコキシアルキル」基は、アルコキシ基で置換されアルキル基を指す。

本発明の目的のために、「アルキルチオアルキル」基という用語は、アルキル−Ｓ−アルキルチオエーテル、例えばメチルチオメチル又はメチルチオエチルを指す。

本発明の目的のために、「アミノ」という用語は、一つ又は複数の水素ラジカルを有機ラジカルで置き換えることによってアンモニアから誘導される当技術分野で公知の窒素含有基を指す。例えば、「アシルアミノ」及び「アルキルアミノ」という用語は、各々、アシル置換基及びアルキル置換基を有する特定のＮ−置換有機ラジカルを指す。

本発明の目的のために、「アルキルカルボニル」という用語は、アルキル基で置換されたカルボニル基を指す。

本発明の目的のために、「ハロゲン」又は「ハロ」という用語は、フッ素、塩素、臭素及びヨウ素を指す。

本発明の目的のために、「ヘテロシクロアルキル」という用語は、窒素、酸素及び硫黄から選択される少なくとも一つのヘテロ原子を含有する非芳香族環系を指す。ヘテロシクロアルキル環は、他のヘテロシクロアルキル環及び／又は非芳香族炭化水素環と場合により縮合していてもよく、又はさもなければ結合していてもよい。好ましいヘテロシクロアルキル基は、３〜７員を有する。ヘテロシクロアルキル基の例としては、例えばピペラジン、モルホリン、ピペリジン、テトラヒドロフラン、ピロリジン及びピラゾールが挙げられる。好ましいヘテロシクロアルキル基としては、ピペリジニル、ピペラジニル、モルホリニル及びピロリジニルが挙げられる。

本発明の目的のために、「ヘテロアリール」という用語は、窒素、酸素及び硫黄から選択される少なくとも一つのヘテロ原子を含有する芳香族環系を指す。ヘテロアリール環は、一つ又は複数のヘテロアリール環、芳香族もしくは非芳香族炭化水素環、又はヘテロシクロアルキル環と縮合していてもよく、又はさもなければ結合していてもよい。ヘテロアリール環の例としては、例えばピリジン、フラン、チオフェン、５，６，７，８−テトラヒドロイソキノリン及びピリミジンが挙げられる。ヘテロアリール基の好ましい例としては、例えばチエニル、ベンゾチエニル、ピリジル、キノリル、ピラジニル、ピリミジル、イミダゾリル、ベンズイミダゾリル、フラニル、ベンゾフラニル、チアゾリル、ベンゾチアゾリル、イソキサゾリル、オキサジアゾリル、イソチアゾリル、ベンズイソチアゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、ピロリル、インドリル、ピラゾリル及びベンゾピラゾリルが挙げられる。

本発明の目的のために、「ヘテロ原子」という用語は、窒素、酸素及び硫黄を指す。

いくつかの実施形態において、置換アルキルとしては、カルボキシアルキル、アミノアルキル、ジアルキルアミノ、ヒドロキシアルキル及びメルカプトアルキルが挙げられ、置換アルケニルとしては、カルボキシアルケニル、アミノアルケニル、ジアルケニルアミノ、ヒドロキシアルケニル及びメルカプトアルケニルが挙げられ、置換アルキニルとしては、カルボキシアルキニル、アミノアルキニル、ジアルキニルアミノ、ヒドロキシアルキニル及びメルカプトアルキニルが挙げられ、置換シクロアルキルとしては、４−クロロシクロヘキシル等の部分が挙げられ、アリールとしては、ナフチル等の部分が挙げられ、置換アリールとしては、３−ブロモフェニル等の部分が挙げられ、アラルキルとしては、トリル等の部分が挙げられ、ヘテロアルキルとしては、エチルチオフェン等の部分が挙げられ、置換ヘテロアリールとしては、３−メトキシチオフェン等の部分が挙げられ、アルコキシとしては、メトキシ等の部分が挙げられ、フェノキシとしては、３−ニトロフェノキシ等の部分が挙げられる。ハロは、フルオロ、クロロ、ヨード及びブロモを含むと理解されるものとする。

本発明の目的のために、「正の整数」とは、１以上の整数を含むと理解されるものとし、当業者であれば、当業者の合理性の範囲内であることが理解されよう。

本発明の目的のために、「結合した」という用語は、一つの基の別の基への共有（好ましくは）結合又は非共有結合、即ち、化学反応による前記結合を含むと理解されるものとする。

本発明の目的のために、「有効量」及び「十分量」という用語は、所望の効果又は治療効果を達成する量を意味するものとし、このような効果は当業者により理解されている。

本明細書に記載のナノ粒子組成物を使用して形成される「ナノ粒子」及び／又は「ナノ粒子複合体」という用語は、脂質系ナノ複合体を指す。ナノ粒子は、カチオン性脂質、融合性脂質及びＰＥＧ脂質の混合物に封入されたオリゴヌクレオチド等の核酸を含有する。あるいは、ナノ粒子は、核酸なしで形成されていてもよい。

本発明の目的のために、「治療用オリゴヌクレオチド」とは、医薬品又は診断薬として使用するオリゴヌクレオチドを指す。

本発明の目的のために、「遺伝子発現の調節」という用語は、投与経路に関わらず、本明細書に記載のナノ粒子での処理なしに観察された遺伝子発現と比較して、好ましくは癌及び炎症と関連する任意の種類の遺伝子のダウンレギュレーション又はアップレギュレーションを広範に含むと理解されるものとする。

本発明の目的のために、「標的遺伝子の発現の抑制」とは、本明細書に記載のナノ粒子での処理なしに観察されたものと比較したとき、ｍＲＮＡ発現又は翻訳されたタンパク質の量を減少させるか、又は減弱させることを意味すると理解されるものとする。このような抑制の適切なアッセイとしては、例えばドットブロット、ノーザンブロット、ｉｎｓｉｔｕハイブリダイゼーション、ＥＬＩＳＡ、免疫沈降、酵素機能、並びに当業者に公知の表現型アッセイ等の当業者に公知の技法を用いたタンパク質又はｍＲＮＡレベルの検査が挙げられる。処理した状態は、例えば細胞、好ましくは癌細胞又は癌組織のｍＲＮＡレベルの減少により確認できる。

大まかに言って、抑制又は処理の成功は、所望の反応が得られた場合に生じるとみなされるものとする。例えば、抑制又は処理の成功は、例えば、腫瘍増殖抑制と関連する遺伝子の１０％以上（即ち、２０％、３０％、４０％）のダウンレギュレーションを得ることと定義できる。あるいは、処理の成功は、本明細書に記載のナノ粒子での処理なしに観察されたものと比較したとき、当業者により企図される他の臨床的指標を含め、癌細胞又は癌組織における癌遺伝子ｍＲＮＡレベルの少なくとも２０％、好ましくは３０％、より好ましくは４０％以上（即ち、５０％又は８０％）の低下を得ることと定義できる。

さらに、説明の簡便性のための単数形の用語の使用は、それだけに限定されることは決して意図されない。したがって、例えば、オリゴヌクレオチド、コレステロール類似体、カチオン性脂質、放出可能融合性脂質、ＰＥＧ脂質等を含む組成物についての言及は、オリゴヌクレオチド、コレステロール類似体、カチオン性脂質、放出可能融合性脂質、ＰＥＧ脂質等の一つ又は複数の分子を指す。オリゴヌクレオチドは、同一又は異なる種類の遺伝子であってよいことも企図される。本明細書に開示された特定の構成、工程段階及び物質は若干変化し得るため、本発明はこのような構成、工程段階及び物質に限定されないことも理解されたい。

本発明の範囲は、添付の特許請求の範囲及びその等価物により限定されるため、本明細書で使用する専門用語は、特定の実施形態を記載する目的のためだけに使用され、限定することは意図されないことも理解されたい。

実施例６〜１１に記載の化合物６を調製するための反応スキームを概略的に例示する図である。実施例１２〜１５に記載の化合物１０を調製するための反応スキームを概略的に例示する図である。

Ａ．概要
１．式（Ｉ）の放出可能融合性脂質
本発明の一態様において、式（Ｉ）の化合物：

［式中、
Ｒは水溶性の中性電荷部分又は両性イオン含有部分であり、
Ｌ_１〜２は独立に選択される二官能性リンカーであり、
Ｍはイミン含有部分であり、
Ｑは置換また非置換、飽和又は不飽和のＣ４〜３０含有部分であり、
（ａ）は０又は正の整数、好ましくは０又は約１〜約１０（例えば１、２、３、４、５、６）の整数であり、
（ｂ）は０又は正の整数、好ましくは０又は約１〜約１０（例えば１、２、３、４、５、６）の整数である］
が提供される。

（ａ）及び（ｂ）が２以上であるとき、Ｌ_１及びＬ_２は独立に同一又は異なる。

一つの好ましい態様において、本明細書に記載の式の化合物は、Ｑ炭化水素基（脂肪族）を含む。Ｑ基は、式（Ｉａ）：

［式中、
Ｙ_１及びＹ’_１は独立にＯ、Ｓ又はＮＲ_４、好ましくは酸素であり、
（ｃ）は０又は１であり、
（ｄ）は０又は正の整数、好ましくは０又は約１〜約１０（例えば１、２、３、４、５、６）の整数であり、
（ｅ）は０又は１であり、
ＸはＣ、Ｎ又はＰであり、
Ｑ_１はＨ、Ｃ_１〜３アルキル、ＮＲ_５、ＯＨ又は

であり、
Ｑ_２はＨ、Ｃ_１〜３アルキル、ＮＲ_６、ＯＨ又は

であり、
Ｑ_３は孤立電子対、（＝Ｏ）、Ｈ、Ｃ_１〜３アルキル、ＮＲ_７、ＯＨ又は

であるが、
ただし、
（ｉ）ＸがＣであるとき、Ｑ_３は孤立電子対又は（＝Ｏ）ではなく、
（ｉｉ）ＸがＮであるとき、Ｑ_３は孤立電子対であり、
（ｉｉｉ）ＸがＰであるとき、Ｑ_３は（＝Ｏ）であり、（ｅ）は０であり、
Ｌ_１１、Ｌ_１２及びＬ_１３は独立に選択される二官能性スペーサーであり、
Ｙ_１１、Ｙ_１２及びＹ_１３は独立にＯ、Ｓ又はＮＲ_８、好ましくはＯ又はＮＲ_８であり、
Ｙ’_１１、Ｙ’_１２及びＹ’_１３は独立にＯ、Ｓ又はＮＲ_８、好ましくは酸素であり、
Ｒ_１１、Ｒ_１２及びＲ_１３は独立に置換又は非置換、飽和又は不飽和のＣ_４〜３０であり、
（ｆ１）、（ｆ２）及び（ｆ３）は独立に０又は１であり、
（ｇ１）、（ｇ２）及び（ｇ３）は独立に０又は１であり、
（ｈ１）、（ｈ２）及び（ｈ３）は独立に０又は１であり、
Ｒ_２〜３は水素、ヒドロキシル、アミン、置換アミン、Ｃ_１〜６アルキル、Ｃ_２〜６アルケニル、Ｃ_２〜６アルキニル、Ｃ_３〜１９分岐アルキル、Ｃ_３〜８シクロアルキル、Ｃ_１〜６置換アルキル、Ｃ_２〜６置換アルケニル、Ｃ_２〜６置換アルキニル、Ｃ_３〜８置換シクロアルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、Ｃ_１〜６ヘテロアルキル及び置換Ｃ_１〜６ヘテロアルキル、好ましくは水素、ヒドロキシル、アミン、メチル、エチル及びプロピルからなる群から独立に選択され、
Ｒ_４〜８は水素、Ｃ_１〜６アルキル、Ｃ_２〜６アルケニル、Ｃ_２〜６アルキニル、Ｃ_３〜１９分岐アルキル、Ｃ_３〜８シクロアルキル、Ｃ_１〜６置換アルキル、Ｃ_２〜６置換アルケニル、Ｃ_２〜６置換アルキニル、Ｃ_３〜８置換シクロアルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、Ｃ_１〜６ヘテロアルキル及び置換Ｃ_１〜６ヘテロアルキル、好ましくは水素、メチル、エチル及びプロピルからなる群から独立に選択されるが、
ただし、ＱはＲ_１１、Ｒ_１２及びＲ_１３の少なくとも一つ又は二つ（例えば１、２、３）を含む］
を有する。

本発明の範囲内で企図される二官能性リンカーと二官能性スペーサーとの組合せとしては、リンカー基及びスペーサー基の変数と置換基との組合せが許容されることにより、このような組合せにより式（Ｉ）の安定な化合物がもたらされるものが挙げられる。例えば、値と置換基との組合せは、酸素、窒素又はカルボニルをイミンに直接隣接して配置させることを許容しない。

好ましくは、ＱはＲ_１１、Ｒ_１２及びＲ_１３の少なくとも二つを含む。

（ｄ）が２以上であるとき、各発生時に−Ｃ（Ｒ_２Ｒ_３）−基は同一又は異なる。

本発明の一つの好ましい態様において、イミン含有部分は、次式：
−Ｎ＝ＣＲ_１−又はＣＲ_１＝Ｎ−
（式中、Ｒ_１は水素、Ｃ_１〜６アルキル、Ｃ_３〜８分岐アルキル、Ｃ_３〜８シクロアルキル、Ｃ_１〜６置換アルキル、Ｃ_３〜８置換シクロアルキル、アリール及び置換アリール、好ましくは水素、メチル、エチル又はプロピルである）
を有する。

一実施形態において、酸不安定Ｍリンカーは−Ｎ＝ＣＨ−又は−ＣＨ＝Ｎ−である。

本発明によれば、本明細書に記載の放出可能融合性脂質は、式（Ｉｂ）又は（Ｉ’ｂ）：

を有する。

２．水溶性の中性電荷部分又は両性イオン含有部分：Ｒ基
本明細書に記載の化合物は、末端両性イオンを含む。一実施形態において、両性イオンは、アミン及び酸を含む。酸性プロトンは、アミンから３〜８原子に位置する（例えば、酸性プロトンは、アミンから３、４、５、６、７又は８原子に位置する）。好ましくは、酸性プロトンは、アミンから３〜６原子に位置する。

酸としては、それだけに限らないが、カルボン酸、スルホン酸又はリン酸が挙げられる。

さらなる実施形態において、両性イオン含有部分は、アミノ酸の両性イオン形態である。Ｒ基のいくつかの例示的例としては、それだけに限らないが、
−ＣＨ（ＣＯＯ）（ＮＨ_３）、
Ｌｙｓ＝−ＨＮ−（ＣＨ_２）_４ＣＨ（ＣＯＯ）（ＮＨ_３）、
Ｇｌｕ＝−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ_２）_２ＣＨ（ＣＯＯ）（ＮＨ_３）及び
Ａｓｐ＝−Ｃ（＝Ｏ）−（ＣＨ_２）ＣＨ（ＣＯＯ）（ＮＨ_３）
が挙げられる。

別の実施形態において、両性イオン含有部分は、アミノ酸の両性イオン形態の誘導体である。アミノ酸は、天然のアミノ酸、又は天然のアミノ酸の誘導体であってよい。アミノ酸の類似体及び誘導体のいくつかの例としては、２−アミノアジピン酸、３−アミノアジピン酸、βアラニン、βアミノプロピオン酸、２−アミノ酪酸、４−アミノ酪酸、ピペリジン酸、６−アミノカプロン酸、２−アミノヘプタン酸、２−アミノイソ酪酸、３−アミノイソ酪酸、２−アミノピメリン酸、２，４−アミノ酪酸、デスモシン、２，２−ジアミノピメリン酸、２，３−ジアミノプロピオン酸、Ｎ−エチルグリシン、Ｎ−エチルアスパラギン、３−ヒドロキシプロリン、４−ヒドロキシプロリン、イソデスモシン、アロイソロイシン、Ｎ−メチルグリシン又はサルコシン、Ｎ−メチルイソロイシン、６−Ｎ−メチルリジン、Ｎ−メチルバリン、ノルバリン、ノルロイシン、オルニチン等が挙げられ、枚挙にいとまがなく、それらは、本明細書に参照により組み込まれている、63 Fed. Reg., 29620、29622に列挙されている。

３．二官能性リンカー：Ｌ_１基及びＬ_２基
本発明によれば、式（Ｉ）の化合物に含まれるＬ_１基は、
−（ＣＲ_２１Ｒ_２２）_ｔ１−［Ｃ（＝Ｙ_１６）］_ａ３−、
−（ＣＲ_２１Ｒ_２２）_ｔ１Ｙ_１７−（ＣＲ_２３Ｒ_２４）_ｔ２−（Ｙ_１８）_ａ２−［Ｃ（＝Ｙ_１６）］_ａ３−、
−（ＣＲ_２１Ｒ_２２ＣＲ_２３Ｒ_２４Ｙ_１７）_ｔ１−［Ｃ（＝Ｙ_１６）］_ａ３−、
−（ＣＲ_２１Ｒ_２２ＣＲ_２３Ｒ_２４Ｙ_１７）_ｔ１（ＣＲ_２５Ｒ_２６）_ｔ４−（Ｙ_１８）_ａ２−［Ｃ（＝Ｙ_１６）］_ａ３−、
−［（ＣＲ_２１Ｒ_２２ＣＲ_２３Ｒ_２４）_ｔ２Ｙ_１７］_ｔ３（ＣＲ_２５Ｒ_２６）_ｔ４−（Ｙ_１８）_ａ２−［Ｃ（＝Ｙ_１６）］_ａ３−、
−（ＣＲ_２１Ｒ_２２）_ｔ１−［（ＣＲ_２３Ｒ_２４）_ｔ２Ｙ_１７］_ｔ３（ＣＲ_２５Ｒ_２６）_ｔ４−（Ｙ_１８）_ａ２−［Ｃ（＝Ｙ_１６）］_ａ３−、
−（ＣＲ_２１Ｒ_２２）_ｔ１（Ｙ_１７）_ａ２［Ｃ（＝Ｙ_１６）］_ａ３（ＣＲ_２３Ｒ_２４）_ｔ２−、
−（ＣＲ_２１Ｒ_２２）_ｔ１（Ｙ_１７）_ａ２［Ｃ（＝Ｙ_１６）］_ａ３Ｙ_１４（ＣＲ_２３Ｒ_２４）_ｔ２−、
−（ＣＲ_２１Ｒ_２２）_ｔ１（Ｙ_１７）_ａ２［Ｃ（＝Ｙ_１６）］_ａ３（ＣＲ_２３Ｒ_２４）_ｔ２−Ｙ_１５−（ＣＲ_２３Ｒ_２４）_ｔ３−、
−（ＣＲ_２１Ｒ_２２）_ｔ１（Ｙ_１７）_ａ２［Ｃ（＝Ｙ_１６）］_ａ３Ｙ_１４（ＣＲ_２３Ｒ_２４）_ｔ２−Ｙ_１５−（ＣＲ_２３Ｒ_２４）_ｔ３−、
−（ＣＲ_２１Ｒ_２２）_ｔ１（Ｙ_１７）_ａ２［Ｃ（＝Ｙ_１６）］_ａ３（ＣＲ_２３Ｒ_２４ＣＲ_２５Ｒ_２６Ｙ_１９）_ｔ２（ＣＲ_２７ＣＲ_２８）_ｔ３−、
−（ＣＲ_２１Ｒ_２２）_ｔ１（Ｙ_１７）_ａ２［Ｃ（＝Ｙ_１６）］_ａ３Ｙ_１４（ＣＲ_２３Ｒ_２４ＣＲ_２５Ｒ_２６Ｙ_１９）_ｔ２（ＣＲ_２７ＣＲ_２８）_ｔ３−、及び

［式中、
Ｙ_１６はＯ、ＮＲ_２８又はＳ、好ましくは酸素であり、
Ｙ_{１４〜１５}及びＹ_{１７〜１９}は独立にＯ、ＮＲ_２９又はＳ、好ましくはＯ又はＮＲ_２９であり、
Ｒ_{２１〜２７}は水素、ヒドロキシル、アミン、Ｃ_１〜６アルキル、Ｃ_３〜１２分岐アルキル、Ｃ_３〜８シクロアルキル、Ｃ_１〜６置換アルキル、Ｃ_３〜８置換シクロアルキル、アリール、置換アリール、アラルキル、Ｃ_１〜６ヘテロアルキル、置換Ｃ_１〜６ヘテロアルキル、Ｃ_１〜６アルコキシ、フェノキシ及びＣ_１〜６ヘテロアルコキシ、好ましくは水素、メチル、エチル又はプロピルの中から独立に選択され、
Ｒ_{２８〜２９}は水素、Ｃ_１〜６アルキル、Ｃ_３〜１２分岐アルキル、Ｃ_３〜８シクロアルキル、Ｃ_１〜６置換アルキル、Ｃ_３〜８置換シクロアルキル、アリール、置換アリール、アラルキル、Ｃ_１〜６ヘテロアルキル、置換Ｃ_１〜６ヘテロアルキル、Ｃ_１〜６アルコキシ、フェノキシ及びＣ_１〜６ヘテロアルコキシ、好ましくは水素、メチル、エチル又はプロピルの中から独立に選択され、
（ｔ１）、（ｔ２）、（ｔ３）及び（ｔ４）は独立に０又は正の整数、好ましくは０又は約１〜約１０（例えば１、２、３、４、５、６）の正の整数であり、
（ａ２）及び（ａ３）は独立に０又は１である］
の中から選択される。

本発明の範囲内で企図される二官能性Ｌ_１リンカーとしては、変数と置換基との組合せが許容されることにより、このような組合せにより式（Ｉ）の安定な化合物がもたらされるものが挙げられる。例えば、（ａ３）が０であるとき、Ｙ_１７はＹ_１４に直接結合しない。

本発明の目的のために、二官能性リンカーの値が２以上の正の整数であるとき、同一又は異なる二官能性リンカーを使用できる。

（ｔ１）、（ｔ２）、（ｔ３）及び（ｔ４）が各々独立に２以上であるとき、各発生時にＲ_２１〜Ｒ_２８は独立に同一又は異なる。

一実施形態において、Ｙ_{１４〜１５}及びＹ_{１７〜１９}はＯ又はＮＨであり、Ｒ_{２１〜２９}は独立に水素又はメチルである。

別の実施形態において、Ｙ_１６はＯであり、Ｙ_{１４〜１５}及びＹ_{１７〜１９}はＯ又はＮＨであり、Ｒ_{２１〜２９}は水素である。

ある種の実施形態において、Ｌ_１は、
−（ＣＨ_２）_ｔ１−［Ｃ（＝Ｏ）］_ａ３−、
−（ＣＨ_２）_ｔ１Ｙ_１７−（ＣＨ_２）_ｔ２−（Ｙ_１８）_ａ２−［Ｃ（＝Ｏ）］_ａ３−、
−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｙ_１７）_ｔ１−［Ｃ（＝Ｏ）］_ａ３−、
−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｙ_１７）_ｔ１（ＣＨ_２）_ｔ４−（Ｙ_１８）_ａ２−［Ｃ（＝Ｏ）］_ａ３−、
−［（ＣＨ_２ＣＨ_２）_ｔ２Ｙ_１７］_ｔ３（ＣＨ_２）_ｔ４−（Ｙ_１８）_ａ２−［Ｃ（＝Ｏ）］_ａ３−、
−（ＣＨ_２）_ｔ１−［（ＣＨ_２）_ｔ２Ｙ_１７］_ｔ３（ＣＨ_２）_ｔ４−（Ｙ_１８）_ａ２−［Ｃ（＝Ｏ）］_ａ３−、
−（ＣＨ_２）_ｔ１（Ｙ_１７）_ａ２［Ｃ（＝Ｏ）］_ａ３（ＣＨ_２）_ｔ２−、
−（ＣＨ_２）_ｔ１（Ｙ_１７）_ａ２［Ｃ（＝Ｏ）］_ａ３Ｙ_１４（ＣＨ_２）_ｔ２−、
−（ＣＨ_２）_ｔ１（Ｙ_１７）_ａ２［Ｃ（＝Ｏ）］_ａ３（ＣＨ_２）_ｔ２−Ｙ_１５−（ＣＨ_２）_ｔ３−、
−（ＣＨ_２）_ｔ１（Ｙ_１７）_ａ２［Ｃ（＝Ｏ）］_ａ３Ｙ_１４（ＣＨ_２）_ｔ２−Ｙ_１５−（ＣＨ_２）_ｔ３−、
−（ＣＨ_２）_ｔ１（Ｙ_１７）_ａ２［Ｃ（＝Ｏ）］_ａ３（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｙ_１９）_ｔ２（ＣＨ_２）_ｔ３−、及び
−（ＣＨ_２）_ｔ１（Ｙ_１７）_ａ２［Ｃ（＝Ｏ）］_ａ３Ｙ_１４（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｙ_１９）_ｔ２（ＣＨ_２）_ｔ３−
［式中、
Ｙ_{１４〜１５}及びＹ_{１７〜１９}は独立にＯ又はＮＨであり、
（ｔ１）、（ｔ２）、（ｔ３）及び（ｔ４）は独立に０又は正の整数、好ましくは０又は約１〜約１０（例えば１、２、３、４、５、６）の正の整数であり、
（ａ２）及び（ａ３）は独立に０又は１である］
の中から独立に選択される。

（ｔ１）又は（ｔ３）が２以上であるとき、各発生時にＹ_１７は同一又は異なる。

（ｔ２）が２以上であるとき、各発生時にＹ_１９は同一又は異なる。

さらなる実施形態及び／又は代替実施形態において、Ｌ_１基の例示的例は、
−ＣＨ_２−、−（ＣＨ_２）_２−、−（ＣＨ_２）_３−、−（ＣＨ_２）_４−、−（ＣＨ_２）_５−、−（ＣＨ_２）_６−、−ＮＨ（ＣＨ_２）−、
−ＣＨ（ＮＨ_２）ＣＨ_２−、
−（ＣＨ_２）_４−Ｃ（＝Ｏ）−、−（ＣＨ_２）_５−Ｃ（＝Ｏ）−、−（ＣＨ_２）_６−Ｃ（＝Ｏ）−、
−ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ−ＣＨ_２Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−、
−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_２−ＣＨ_２Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−、
−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_３−ＣＨ_２Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−、
−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_２−Ｃ（＝Ｏ）−、
−ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ−ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−、
−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_２−ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−、
−ＣＨ_２−Ｏ−ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ−ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−、
−ＣＨ_２−Ｏ−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_２−ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−、
−ＣＨ_２−Ｏ−ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ−ＣＨ_２Ｃ（＝Ｏ）−、
−ＣＨ_２−Ｏ−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_２−ＣＨ_２Ｃ（＝Ｏ）−、
−（ＣＨ_２）_４−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−、−（ＣＨ_２）_５−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−、
−（ＣＨ_２）_６−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−、
−ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ−ＣＨ_２Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−、
−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_２−ＣＨ_２Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−、
−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_３−ＣＨ_２Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−、
−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_２−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−、
−ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ−ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−、
−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_２−ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−、
−ＣＨ_２−Ｏ−ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ−ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−、
−ＣＨ_２−Ｏ−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_２−ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−、
−ＣＨ_２−Ｏ−ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ−ＣＨ_２Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−、
−ＣＨ_２−Ｏ−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_２−ＣＨ_２Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−、
−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_２−、−ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ−ＣＨ_２Ｏ−、
−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_２−ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨ−、
−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_３−ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨ−、
−ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ−ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨ−、
−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_２−ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨ−、
−ＣＨ_２−Ｏ−ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ−ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨ−、
−ＣＨ_２−Ｏ−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_２−ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨ−、
−ＣＨ_２−Ｏ−ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ−、
−ＣＨ_２−Ｏ−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_２−、

−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_２−、−ＣＨ_２Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_２−、
−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_３−、−ＣＨ_２Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_３−、
−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_４−、−ＣＨ_２Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_４−、
−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_５−、−ＣＨ_２Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_５−、
−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_６−、−ＣＨ_２Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_６−、
−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_２−、−ＣＨ_２Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_２−、
−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_３−、−ＣＨ_２Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_３−、
−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_４−、−ＣＨ_２Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_４−、
−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_５−、−ＣＨ_２Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_５−、
−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_６−、−ＣＨ_２Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_６−、
−（ＣＨ_２ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_２−、
−（ＣＨ_２ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_３−、
−（ＣＨ_２ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_４−、
−（ＣＨ_２ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_５−、
−（ＣＨ_２ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_６−、
−（ＣＨ_２ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_２−、
−（ＣＨ_２ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_３−、
−（ＣＨ_２ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_４−、
−（ＣＨ_２ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_５−、
−（ＣＨ_２ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_６−、
−（ＣＨ_２ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_２−、
−（ＣＨ_２ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_３−、
−（ＣＨ_２ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_４−、
−（ＣＨ_２ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_５−、及び
−（ＣＨ_２ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_６−の中から選択される。

ある種の実施形態において、Ｌ_２は、
−（ＣＲ’_２１Ｒ’_２２）_ｔ’１−［Ｃ（＝Ｙ’_１６）］_ａ’３（ＣＲ’_２７ＣＲ’_２８）_ｔ’２−、
−（ＣＲ’_２１Ｒ’_２２）_ｔ’１Ｙ’_１４−（ＣＲ’_２３Ｒ’_２４）_ｔ’２−（Ｙ’_１５）_ａ’２−［Ｃ（＝Ｙ’_１６）］_ａ’３（ＣＲ’_２７ＣＲ’_２８）_ｔ’３−、
−（ＣＲ’_２１Ｒ’_２２ＣＲ’_２３Ｒ’_２４Ｙ’_１４）_ｔ’１−［Ｃ（＝Ｙ’_１６）］_ａ’３（ＣＲ’_２７ＣＲ’_２８）_ｔ’２−、
−（ＣＲ’_２１Ｒ’_２２ＣＲ’_２３Ｒ’_２４Ｙ’_１４）_ｔ’１（ＣＲ’_２５Ｒ’_２６）_ｔ’２−（Ｙ’_１５）_ａ’２−［Ｃ（＝Ｙ’_１６）］_ａ’３（ＣＲ’_２７ＣＲ’_２８）_ｔ’３−、
−［（ＣＲ’_２１Ｒ’_２２ＣＲ’_２３Ｒ’_２４）_ｔ’２Ｙ’_１４］_ｔ’１（ＣＲ’_２５Ｒ’_２６）_ｔ’２−（Ｙ’_１５）_ａ’２−［Ｃ（＝Ｙ’_１６）］_ａ’３（ＣＲ’_２７ＣＲ’_２８）_ｔ’３−、
−（ＣＲ’_２１Ｒ’_２２）_ｔ’１−［（ＣＲ’_２３Ｒ’_２４）_ｔ’２Ｙ’_１４］_ｔ’２（ＣＲ’_２５Ｒ’_２６）_ｔ’３−（Ｙ’_１５）_ａ’２−［Ｃ（＝Ｙ’_１６）］_ａ’３（ＣＲ’_２７ＣＲ’_２８）_ｔ’４−
−（ＣＲ’_２１Ｒ’_２２）_ｔ’１（Ｙ’_１４）_ａ’２［Ｃ（＝Ｙ’_１６）］_ａ’３（ＣＲ’_２３Ｒ’_２４）_ｔ’２−、
−（ＣＲ’_２１Ｒ’_２２）_ｔ’１（Ｙ’_１４）_ａ’２［Ｃ（＝Ｙ’_１６）］_ａ’３Ｙ’_１５（ＣＲ’_２３Ｒ’_２４）_ｔ’２−、
−（ＣＲ’_２１Ｒ’_２２）_ｔ’１（Ｙ’_１４）_ａ’２［Ｃ（＝Ｙ’_１６）］_ａ’３（ＣＲ’_２３Ｒ’_２４）_ｔ’２−Ｙ’_１５−（ＣＲ’_２３Ｒ’_２４）_ｔ’３−、
−（ＣＲ’_２１Ｒ’_２２）_ｔ’１（Ｙ’_１４）_ａ’２［Ｃ（＝Ｙ’_１６）］_ａ’３Ｙ’_１４（ＣＲ’_２３Ｒ’_２４）_ｔ’２−Ｙ’_１５−（ＣＲ’_２３Ｒ’_２４）_ｔ’３−、
−（ＣＲ’_２１Ｒ’_２２）_ｔ’１（Ｙ’_１４）_ａ’２［Ｃ（＝Ｙ’_１６）］_ａ’３（ＣＲ’_２３Ｒ’_２４ＣＲ’_２５Ｒ’_２６Ｙ’_１５）_ｔ’２（ＣＲ’_２７ＣＲ’_２８）_ｔ’３−、
−（ＣＲ’_２１Ｒ’_２２）_ｔ’１（Ｙ’_１４）_ａ’２［Ｃ（＝Ｙ’_１６）］_ａ’３Ｙ’_１７（ＣＲ’_２３Ｒ’_２４ＣＲ’_２５Ｒ’_２６Ｙ’_１５）_ｔ’２（ＣＲ’_２７ＣＲ’_２８）_ｔ’３−、及び

［式中、
Ｙ’_１６はＯ、ＮＲ’_２８又はＳ、好ましくは酸素であり、
Ｙ’_{１４〜１５}及びＹ’_１７は独立にＯ、ＮＲ’_２９又はＳ、好ましくはＯ又はＮＲ’_２９であり、
Ｒ’_{２１〜２７}は水素、ヒドロキシル、アミン、Ｃ_１〜６アルキル、Ｃ_３〜１２分岐アルキル、Ｃ_３〜８シクロアルキル、Ｃ_１〜６置換アルキル、Ｃ_３〜８置換シクロアルキル、アリール、置換アリール、アラルキル、Ｃ_１〜６ヘテロアルキル、置換Ｃ_１〜６ヘテロアルキル、Ｃ_１〜６アルコキシ、フェノキシ及びＣ_１〜６ヘテロアルコキシ、好ましくは水素、メチル、エチル又はプロピルの中から独立に選択され、
Ｒ’_{２８〜２９}は水素、Ｃ_１〜６アルキル、Ｃ_３〜１２分岐アルキル、Ｃ_３〜８シクロアルキル、Ｃ_１〜６置換アルキル、Ｃ_３〜８置換シクロアルキル、アリール、置換アリール、アラルキル、Ｃ_１〜６ヘテロアルキル、置換Ｃ_１〜６ヘテロアルキル、Ｃ_１〜６アルコキシ、フェノキシ及びＣ_１〜６ヘテロアルコキシ、好ましくは水素、メチル、エチル又はプロピルの中から独立に選択され、
（ｔ’１）、（ｔ’２）、（ｔ’３）及び（ｔ’４）は独立に０又は正の整数、好ましくは０又は約１〜約１０（例えば１、２、３、４、５、６）の正の整数であり、
（ａ’２）及び（ａ’３）は独立に０又は１である］
の中から独立に選択される。

本発明の範囲内で企図される二官能性Ｌ_２リンカーとしては、リンカー基の変数と置換基との組合せが許容されることにより、このような組合せにより式（Ｉ）の安定な化合物がもたらされるものが挙げられる。例えば、（ａ’３）が０であるとき、Ｙ’_１４はＹ’_１４又はＹ’_１７に直接結合しない。

本発明の目的のために、放出可能リンカーを含む二官能性Ｌ_２リンカーの値が、２以上の正の整数であるとき、同一又は異なる二官能性リンカーを使用できる。

一実施形態において、Ｙ’_{１４〜１５}及びＹ’_１７はＯ又はＮＨであり、Ｒ’_{２１〜２９}は独立に水素又はメチルである。

別の実施形態において、Ｙ’_１６はＯであり、Ｙ’_{１４〜１５}及びＹ’_１７はＯ又はＮＨであり、Ｒ’_{２１〜２９}は水素である。

ある種の実施形態において、Ｌ_２は、
−（ＣＨ_２）_ｔ’１−［Ｃ（＝Ｏ）］_ａ’３（ＣＨ_２）_ｔ’２−、
−（ＣＨ_２）_ｔ’１Ｙ’_１４−（ＣＨ_２）_ｔ’２−（Ｙ’_１５）_ａ’２−［Ｃ（＝Ｏ）］_ａ’３（ＣＨ_２）_ｔ’３−、
−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｙ’_１４）_ｔ’１−［Ｃ（＝Ｏ）］_ａ’３（ＣＨ_２）_ｔ’２−、
−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｙ’_１４）_ｔ’１（ＣＨ_２）_ｔ’２−（Ｙ’_１５）_ａ’２−［Ｃ（＝Ｏ）］_ａ’３（ＣＨ_２）_ｔ’３−、
−［（ＣＨ_２ＣＨ_２）_ｔ’２Ｙ’_１４］_ｔ’１（ＣＨ_２）_ｔ’２−（Ｙ’_１５）_ａ’２−［Ｃ（＝Ｏ）］_ａ’３（ＣＨ_２）_ｔ’３−、
−（ＣＨ_２）_ｔ’１−［（ＣＨ_２）_ｔ’２Ｙ’_１４］_ｔ’２（ＣＨ_２）_ｔ’３−（Ｙ’_１５）_ａ’２−［Ｃ（＝Ｏ）］_ａ’３（ＣＨ_２）_ｔ’４−、
−（ＣＨ_２）_ｔ’１（Ｙ’_１４）_ａ’２［Ｃ（＝Ｏ）］_ａ’３（ＣＨ_２）_ｔ’２−、
−（ＣＨ_２）_ｔ’１（Ｙ’_１４）_ａ’２［Ｃ（＝Ｏ）］_ａ’３Ｙ’_１５（ＣＨ_２）_ｔ’２−、
−（ＣＨ_２）_ｔ’１（Ｙ’_１４）_ａ’２［Ｃ（＝Ｏ）］_ａ’３（ＣＨ_２）_ｔ’２−Ｙ’_１５−（ＣＨ_２）_ｔ’３−、
−（ＣＨ_２）_ｔ’１（Ｙ’_１４）_ａ’２［Ｃ（＝Ｏ）］_ａ’３Ｙ’_１４（ＣＨ_２）_ｔ’２−Ｙ’_１５−（ＣＨ_２）_ｔ’３−、
−（ＣＨ_２）_ｔ’１（Ｙ’_１４）_ａ’２［Ｃ（＝Ｏ）］_ａ’３（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｙ’_１５）_ｔ’２（ＣＨ_２）_ｔ’３−、及び
−（ＣＨ_２）_ｔ’１（Ｙ’_１４）_ａ’２［Ｃ（＝Ｏ）］_ａ’３Ｙ’_１７（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｙ’_１５）_ｔ’２（ＣＨ_２）_ｔ’３−
［式中、
Ｙ’_{１４〜１５}及びＹ’_１７は独立にＯ又はＮＨであり、
（ｔ’１）、（ｔ’２）、（ｔ’３）及び（ｔ’４）は独立に０又は正の整数、好ましくは０又は約１〜約１０（例えば１、２、３、４、５、６）の正の整数であり、
（ａ’２）及び（ａ’３）は独立に０又は１である］
の中から選択される。

（ｔ’１）又は（ｔ’２）が２以上であるとき、各発生時にＹ’_１４は同一又は異なる。

（ｔ’２）が２以上であるとき、各発生時にＹ’_１５は同一又は異なる。

さらなる実施形態及び／又は代替実施形態において、Ｌ_２基の例示的例は、
−ＣＨ_２−、−（ＣＨ_２）_２−、−（ＣＨ_２）_３−、−（ＣＨ_２）_４−、−（ＣＨ_２）_５−、−（ＣＨ_２）_６−、−ＮＨ（ＣＨ_２）−、
−ＣＨ（ＮＨ_２）ＣＨ_２−、
−Ｏ（ＣＨ_２）_２−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_３−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_３−、
−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_２−、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_３−、
−ＣＨ_２−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ（ＣＨ_２）_３−、
−ＣＨ_２−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ（ＣＨ_２）_３−、
−ＣＨ_２−ＯＣ（＝Ｏ）−Ｏ（ＣＨ_２）_３−、
−ＣＨ_２−ＯＣ（＝Ｏ）−ＮＨ（ＣＨ_２）_３−、
−（ＣＨ_２）_２−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ（ＣＨ_２）_３−、
−（ＣＨ_２）_２−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ（ＣＨ_２）_３−、
−ＣＨ_２Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_２−Ｏ−（ＣＨ_２）_２−、
−ＣＨ_２Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_２−Ｏ−（ＣＨ_２）_２−、
−（ＣＨ_２）_２Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_２−Ｏ−（ＣＨ_２）_２−、
−（ＣＨ_２）_２Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_２−Ｏ−（ＣＨ_２）_２−、
−ＣＨ_２Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_２ＣＨ_２ＣＨ_２−、
−（ＣＨ_２）_２Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_２ＣＨ_２ＣＨ_２−、
−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_２−、−ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ−ＣＨ_２Ｏ−．
−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_２−ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨ−、−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_３−ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨ−、
−ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ−ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨ−、
−ＣＨ_２−Ｏ−ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ−ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨ−、
−ＣＨ_２−Ｏ−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_２−ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨ−、
−ＣＨ_２−Ｏ−ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ−、−ＣＨ_２−Ｏ−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_２−、

−（ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（＝Ｏ）−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_２−、
−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_２−、−ＣＨ_２Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_２−、
−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_３−、−ＣＨ_２Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_３−、
−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_４−、−ＣＨ_２Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_４−、
−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_５−、−ＣＨ_２Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_５−、
−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_６−、−ＣＨ_２Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_６−、
−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_２−、−ＣＨ_２Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_２−、
−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_３−、−ＣＨ_２Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_３−、
−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_４−、−ＣＨ_２Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_４−、
−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_５−、−ＣＨ_２Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_５−、
−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_６−、−ＣＨ_２Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_６−、
−（ＣＨ_２ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_２−、
−（ＣＨ_２ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_３−、
−（ＣＨ_２ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_４−、
−（ＣＨ_２ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_５−、
−（ＣＨ_２ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_６−、
−（ＣＨ_２ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_２−、
−（ＣＨ_２ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_３−、
−（ＣＨ_２ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_４−、
−（ＣＨ_２ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_５−、
−（ＣＨ_２ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_６−、
−（ＣＨ_２ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_２−、
−（ＣＨ_２ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_３−、
−（ＣＨ_２ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_４−、
−（ＣＨ_２ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_５−、及び
−（ＣＨ_２ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_６−の中から選択される。

さらなる実施形態において、二官能性リンカーＬ_１及びＬ_２は、置換、飽和又は不飽和、分岐又は直鎖のＣ_３〜５０アルキル（即ち、Ｃ_３〜４０アルキル、Ｃ_３〜２０アルキル、Ｃ_３〜１５アルキル、Ｃ_３〜１０アルキル等）を有するスペーサーであってよく、一つ又は複数の炭素は、ＮＲ_６、Ｏ、Ｓ又はＣ（＝Ｙ）、（好ましくはＯ又はＮＨ）で場合により置き換えられるが、置き換えられる炭素は７０％を超えない（即ち、６０％、５０％、４０％、３０％、２０％、１０％未満）。

４．二官能性スペーサー：Ｌ_１１基、Ｌ_１２基及びＬ_１３基
本発明によれば、二官能性スペーサーＬ_{１１〜１３}は、
−（ＣＲ_３１Ｒ_３２）_ｑ１−及び
−Ｙ_２６（ＣＲ_３１Ｒ_３２）_ｑ１−
［式中、
Ｙ_２６はＯ、ＮＲ_３３又はＳ、好ましくは酸素又はＮＲ_３３であり、
Ｒ_{３１〜３２}は水素、ヒドロキシル、Ｃ_１〜６アルキル、Ｃ_３〜１２分岐アルキル、Ｃ_３〜８シクロアルキル、Ｃ_１〜６置換アルキル、Ｃ_３〜８置換シクロアルキル、Ｃ_１〜６ヘテロアルキル、置換Ｃ_１〜６ヘテロアルキル、Ｃ_１〜６アルコキシ、フェノキシ及びＣ_１〜６ヘテロアルコキシ、好ましくは水素、メチル、エチル又はプロピルの中から独立に選択され、
Ｒ_３３は水素、ヒドロキシル、Ｃ_１〜６アルキル、Ｃ_３〜１２分岐アルキル、Ｃ_３〜８シクロアルキル、Ｃ_１〜６置換アルキル、Ｃ_３〜８置換シクロアルキル、Ｃ_１〜６ヘテロアルキル、置換Ｃ_１〜６ヘテロアルキル、Ｃ_１〜６アルコキシ、フェノキシ及びＣ_１〜６ヘテロアルコキシ、好ましくは水素、メチル、エチル又はプロピルの中から選択され、
（ｑ１）は０又は正の整数であり、好ましくは０又は約１〜約１０（例えば１、２、３、４、５、６）の整数である］
の中から独立に選択される。

本発明の範囲内で企図される二官能性スペーサーとしては、変数と置換基との組合せが許容されることにより、このような組合せにより式（Ｉ）の安定な化合物がもたらされるものが挙げられる。

（ｑ１）が２以上であるとき、各発生時にＲ_３１及びＲ_３２は独立に同一又は異なる。

一つの好ましい実施形態において、Ｒ’_{３１〜３３}は水素又はメチルである。

ある種の好ましい実施形態において、Ｒ_{３１〜３２}は水素又はメチルであり、Ｙ_２６はＯ又はＮＨである。

（ｑ１）が２以上であるとき、Ｃ（Ｒ_３１）（Ｒ_３２）部分は同一又は異なる。

さらなる実施形態及び／又は代替実施形態において、Ｌ_{１１〜１３}は、
−ＣＨ_２−、−（ＣＨ_２）_２−、−（ＣＨ_２）_３−、−（ＣＨ_２）_４−、−（ＣＨ_２）_５−、−（ＣＨ_２）_６−、
−Ｏ（ＣＨ_２）_２−、−Ｏ（ＣＨ_２）_３−、−Ｏ（ＣＨ_２）_４−、−Ｏ（ＣＨ_２）_５−、−Ｏ（ＣＨ_２）_６−、ＣＨ（ＯＨ）−、
−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）−ＣＨ_２ＣＨ_２−、
−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_２−ＣＨ_２ＣＨ_２−、
−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_３−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_３−、
−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_２−、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_３−、
−ＣＨ_２−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ（ＣＨ_２）_３−、
−ＣＨ_２−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ（ＣＨ_２）_３−、
−ＣＨ_２−ＯＣ（＝Ｏ）−Ｏ（ＣＨ_２）_３−、
−ＣＨ_２−ＯＣ（＝Ｏ）−ＮＨ（ＣＨ_２）_３−、
−（ＣＨ_２）_２−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ（ＣＨ_２）_３−、
−（ＣＨ_２）_２−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ（ＣＨ_２）_３−、
−ＣＨ_２Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_２−Ｏ−（ＣＨ_２）_２−、
−ＣＨ_２Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_２−Ｏ−（ＣＨ_２）_２−、
−（ＣＨ_２）_２Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_２−Ｏ−（ＣＨ_２）_２−、
−（ＣＨ_２）_２Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_２−Ｏ−（ＣＨ_２）_２−、
−ＣＨ_２Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_２ＣＨ_２ＣＨ_２−、及び
−（ＣＨ_２）_２Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_２ＣＨ_２ＣＨ_２−
の中から独立に選択される。

５．Ｑ基
本発明によれば、Ｑ基は一つ又は複数の置換又は非置換、飽和又は不飽和のＣ４〜３０含有部分を含有する。Ｑ基は一つ又は複数のＣ４〜３０の飽和又は不飽和脂肪族炭化水素を含む。

Ｑ基は、式（Ｉａ）、

［式中、
ＸはＣ、Ｎ又はＰであり、
Ｑ_１はＨ、Ｃ_１〜３アルキル、ＮＲ_５、ＯＨ又は

であり、
Ｌ_１１、Ｌ_１２及びＬ_１３は独立に選択される二官能性スペーサーであり、
Ｙ_１１、Ｙ’_１１、Ｙ_１２、Ｙ’_１２、Ｙ_１３及びＹ’_１３は独立にＯ、Ｓ又はＮＲ_８であり、
Ｒ_１１、Ｒ_１２及びＲ_１３は独立に（置換又は非置換）飽和又は不飽和のＣ_４〜３０であり、
全ての他の変数は上に定義されたとおりであるが、
ただし、ＱはＲ_１１、Ｒ_１２及びＲ_１３の少なくとも一つ又は二つを含む］
により表される。

一つの好ましい実施形態において、Ｒ_１１、Ｒ_１２及びＲ_１３は独立に飽和又は不飽和のＣ_４〜３０脂肪族炭化水素を含む。より好ましくは、各脂肪族炭化水素は、飽和又は不飽和のＣ_８〜２４炭化水素（さらにより好ましくは、Ｃ_{１２〜２２}炭化水素、Ｃ_{１２〜２２}アルキル、Ｃ_{１２〜２２}アルケニル、Ｃ_{１２〜２２}アルコキシ）である。脂肪族炭化水素の例としては、それだけに限らないが、ラウロイル（Ｃ１２）、ミリストイル（Ｃ１４）、パルミトイル（Ｃ１６）、ステアロイル（Ｃ１８）、オレオイル（Ｃ１８）及びエルコイル（Ｃ２２）、飽和又は不飽和のＣ１２アルキルオキシ、Ｃ１４アルキルオキシ、Ｃ１６アルキルオキシ、Ｃ１８アルキルオキシ、Ｃ２０アルキルオキシ及びＣ２２アルキルオキシ、並びに飽和又は不飽和のＣ１２アルキル、Ｃ１４アルキル、Ｃ１６アルキル、Ｃ１８アルキル、Ｃ２０アルキル及びＣ２２アルキルが挙げられる。

好ましくは、Ｒ_１１、Ｒ_１２及びＲ_１３の少なくとも二つは独立に飽和又は不飽和のＣ_８〜２４炭化水素（より好ましくはＣ_{１２〜２２}炭化水素）を含む。

Ｑ基のいくつかの例は、次式：

［式中、
Ｙ_１はＯ、Ｓ又はＮＲ_３１、好ましくは酸素又はＮＨであり、
Ｒ_１１、Ｒ_１２及びＲ_１３は独立に置換又は非置換、飽和又は不飽和のＣ_４〜３０（アルキル、アルケニル、アルコキシ）であり、
Ｒ_３１は水素、メチル又はエチルであり、
（ｄ）は０又は正の整数、好ましくは０又は約１〜約１０（例えば１、２、３、４、５、６）の整数であり、
（ｆ１１）、（ｆ１２）及び（ｆ１３）は独立に０、１、２、３又は４であり、
（ｆ２１）及び（ｆ２２）は独立に１、２、３又は４である］
により表される。

ある種の実施形態において、Ｑ基は、ジアシルグリセロール、ジアシルグリカミド、ジアルキルプロピル、ホスファチジルエタノールアミン又はセラミドを含む。適切なジアシルグリセロール又はジアシルグリカミドは、約Ｃ_４〜約Ｃ_３０、好ましくは約Ｃ_８〜約Ｃ_２４の飽和又は不飽和の炭素原子を独立に含有するアルキル鎖長を有する、ジアルキルグリセロール基又はジアルキルグリカミド基を含む。ジアルキルグリセロール基又はジアルキルグリカミド基は、一つ又は複数の置換アルキル基をさらに含むことができる。

本明細書で使用する「ジアシルグリセロール」（ＤＡＧ）という用語は、二つの脂肪アシル鎖Ｒ_１１１及びＲ_１１２を有する化合物を指す。Ｒ_１１１及びＲ_１１２は、同一又は異なる約４〜約３０個（好ましくは約８〜約２４個）の炭素を有し、エステル結合によりグリセロールに結合している。アシル基は、飽和であってもよく、又は様々な不飽和度を含む不飽和であってもよい。ＤＡＧは次の一般式：

を有する。

ＤＡＧの例は、ジラウリルグリセロール（Ｃ１２）、ジミリスチルグリセロール（Ｃ１４、ＤＭＧ）、ジパルミトイルグリセロール（Ｃ１６、ＤＰＧ）、ジステアリルグリセロール（Ｃ１８、ＤＳＧ）、ジオレオイルグリセロール（Ｃ１８）、ジエルコイル（Ｃ２２）、ジラウリルグリカミド（Ｃ１２）、ジミリスチルグリカミド（Ｃ１４）、ジパルミトイルグリカミド（Ｃ１６）、ジステリルグリカミド（Ｃ１８）、ジオレオイルグリカミド（Ｃ１８）、ジエルコイルグリカミド（Ｃ２２）の中から選択できる。当業者であれば、他のジアシルグリセロールも企図されることを容易に認識されよう。

「ジアルキルオキシプロピル」という用語は、二つのアルキル鎖Ｒ_１１１及びＲ_１１２を有する化合物を指す。Ｒ_１１１及びＲ_１１２アルキル基は、同一又は異なる約４〜約３０個（好ましくは約８〜約２４個）の炭素を含む。アルキル基は、飽和であってもよく、又は様々な不飽和度を有していてもよい。ジアルキルオキシプロピルは次の一般式：

［式中、Ｒ_１１１及びＲ_１１２アルキル基は約４〜約３０個（好ましくは約８〜約２４個）の炭素を有する同一又は異なるアルキル基である］を有する。アルキル基は、飽和であってもよく、又は不飽和であってもよい。適切なアルキル基としては、それだけに限らないがラウリル（Ｃ１２）、ミリスチル（Ｃ１４）、パルミチル（Ｃ１６）、ステアリル（Ｃ１８）及びオレオイル（Ｃ１８）及びイコシル（Ｃ２０）が挙げられる。

一実施形態において、Ｒ_１１１及びＲ_１１２はいずれも同一である。即ち、Ｒ_１１１及びＲ_１１２はいずれもミリスチル（Ｃ１４）又はいずれもオレオイル（Ｃ１８）等である。別の実施形態において、Ｒ_１１１及びＲ_１１２は異なる。即ち、Ｒ_１１１はミリスチル（Ｃ１４）であり、Ｒ_１１２はステアリル（Ｃ１８）である。

別の実施形態において、Ｑ基は、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）を含むことができる。放出可能融合性脂質の結合に有用なホスファチジルエタノールアミンは、約４〜約３０個（好ましくは約８〜約２４個）の炭素の範囲の炭素鎖長を有する飽和又は不飽和の脂肪酸を含有できる。適切なホスファチジルエタノールアミンとしては、それだけに限らないがジミリストイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＭＰＥ）、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＰＰＥ）、ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）及びジステアロイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＳＰＥ）が挙げられる。

さらに別の実施形態において、Ｑ基は、セラミド（Ｃｅｒ）を含むことができる。セラミドは、一つだけアシル基を有する。セラミドは、約４〜約３０個（好ましくは約８〜約２４個）の炭素の範囲の炭素鎖長を有する飽和又は不飽和の脂肪酸を有することができる。

一つの好ましい実施形態は、

［式中、Ｒ_{１１〜１３}は独立に同一又は異なるＣ１２〜２２の飽和又は不飽和の脂肪族炭素原子、例えばジラウリル（Ｃ１２）、ジミリスチル（Ｃ１４）、ジパルミトイル（Ｃ１６）、ジステアリル（Ｃ１８）、ジオレオイル（Ｃ１８）及びジエルコイル（Ｃ２２）であり、
（ｆ１１）、（ｆ１２）及び（ｆ１３）は独立に０、１、２、３又は４であり、
（ｆ２１）及び（ｆ２２）は独立に１、２、３又は４である］
を含む。

Ｂ．式（Ｉ）の放出可能融合性脂質の調製
代表的な特定の化合物の合成を実施例に示す。しかし、一般に、本発明の化合物は、いくつかの方式で調製できる。本発明によれば、本明細書に記載の式（Ｉ）の化合物を調製する方法は、アミン含有化合物とアルデヒド含有化合物とを反応させて、イミン部分を有する融合性脂質を得ることを含む。アミンは第１級アミンであってよく、アルデヒドは脂肪族置換基又は芳香族置換基をさらに含有できる。

融合性脂質の調製の一つの代表例は図１及び図２に示されている。最初に、カップリング剤、例えばＥＤＣ又はＤＩＰＣの存在下で、脂質を求核多官能性リンカー（化合物１）と結合させて化合物２を得る。反応は、不活性溶媒、例えば塩化メチレン、クロロホルム、トルエン、ＤＭＦ又はそれらの混合物中で行われることが好ましい。反応は、塩基、例えばＤＭＡＰ、ＤＩＥＡ、ピリジン、トリエチルアミン等の存在下で、−４℃〜約７０℃（例えば、−４℃〜約５０℃）の温度で行われることも好ましい。一つの好ましい実施形態において、反応は、０℃〜約２５℃又は０℃〜ほぼ室温の温度で行われる。

化合物２の末端官能基を、二官能性リンカー、例えば化合物４とさらに結合させ、次いでアミン保護基を除去し、末端アミンを有する脂質化合物（化合物６）を得る。

両性イオン部分を含有する化合物、例えば、Ｆｍｏｃ−Ｌｙｓ（ＯＭｅ）−ＮＨ_２を、二官能性リンカー、例えば化合物７と反応させて、保護アルデヒドを有する化合物８を得る。アルデヒド保護基を除去する。化合物９のアルデヒドをアミン含有脂質（化合物６）と脱水条件下で反応させて、次いでアミン保護基を除去し、鹸化させて、イミン結合を含有する融合性脂質を得る。

求核多官能性リンカーへの脂質の結合は、当業者に公知のカップリング剤、例えば１，３−ジイソプロピルカルボジイミド（ＤＩＰＣ）、ジアルキルカルボジイミド、２−ハロ−１−アルキルピリジニウムハロゲン化物、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド（ＥＤＣ）、プロパンホスホン酸環状無水物（ＰＰＡＣＡ）及びフェニルジクロロホスフェートを用いて、塩基の存在下で標準的な有機合成法を用いて行うことができる。さらに、イミン結合の形成は、分子篩、共沸、酸触媒脱水等の脱水の標準的な有機合成法を用いて行うことができる。

別の実施形態において、ＮＨＳエステル又はＰＮＰエステル等の活性化された脂質酸を使用して、求核多官能性リンカー、例えば化合物１と反応させてもよい。

あるいは、脂質がＮＨＳ又はＰＮＰ等の離脱基で活性化される場合、カップリング剤は必要なく、反応は塩基の存在下で進められる。

アミン含有化合物からの保護基の除去は、強酸、例えばトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）、ＨＣｌ、硫酸等、又は接触水素化、ラジカル反応等により行うことができる。あるいは、Ｆｍｏｃ等のアミン保護基の除去は、ピペリジン又はＤＭＡＰ等の塩基により行うことができる。一つの好ましい実施形態において、Ｂｏｃ基の脱保護は、ジオキサン中のＨＣｌ溶液で行われる。脱保護反応は、−４℃〜約５０℃の温度で行うことができる。好ましくは、反応は０℃〜約２５℃又は室温の温度で行われる。より好ましい実施形態において、Ｂｏｃ基の脱保護は室温で行われる。

例えば、本明細書に記載の方法により調製される化合物は、

を含む。

好ましくは、式（Ｉ）の放出可能融合性脂質は、

を含む。

Ｃ．ナノ粒子組成物
１．概要
本発明の一つにおいて、核酸の送達のための式（Ｉ）の放出可能融合性脂質を含有するナノ粒子組成物が提供される。

本発明によれば、ナノ粒子組成物はカチオン性脂質、式（Ｉ）の放出可能融合性脂質及びＰＥＧ脂質を含有する。

本発明の一つの好ましい態様において、ナノ粒子組成物はコレステロールを含む。

本発明のさらなる態様において、本明細書に記載のナノ粒子組成物は、当技術分野で公知の融合性脂質（非カチオン性脂質）を含有できる。カチオン性脂質の混合物、異なる融合性脂質の混合物及び／又は異なる任意選択のＰＥＧ脂質の混合物を含有するナノ粒子組成物も企図される。

別の好ましい態様において、ナノ粒子組成物は、ナノ粒子組成物中に存在する総脂質の約１０％〜約９９．９％の範囲のモル比でカチオン性脂質を含有する。

カチオン性脂質成分は、ナノ粒子組成物中に存在する総脂質の約２％〜約６０％、約５％〜約５０％、約１０％〜約４５％、約１５％〜約２５％又は約３０％〜約４０％の範囲であってよい。

一つの好ましい実施形態において、カチオン性脂質は、ナノ粒子組成物中に存在する総脂質の約１５％〜約２５％（即ち１５、１７、１８、２０又は２５％）の量で存在する。

本発明によれば、ナノ粒子組成物は、ナノ粒子組成物中に存在する総脂質の約２０％〜約８５％、約２５％〜約８５％、約６０％〜約８０％（例えば６５、７５、７８又は８０％）のモル比で、コレステロール系及び／又は非コレステロール系融合性脂質を含む、総融合性脂質（好ましくは本明細書に記載の放出可能融合性脂質）を含有する。一つの好ましい実施形態において、総融合性／非カチオン性脂質は、ナノ粒子組成物中に存在する総脂質の約８０％である。

ある種の実施形態において、非コレステロール系融合性／非カチオン性脂質は、ナノ粒子組成物中に存在する総脂質の約２５％〜約７８％（２５、３５、４７、６０又は７８％）又は約６０〜約７８％のモル比で存在する。一実施形態において、非コレステロール系融合性／非カチオン性脂質は、ナノ粒子組成物中に存在する総脂質の約６０％である。

ある種の実施形態において、ナノ粒子組成物は、非コレステロール融合性脂質に加えて、ナノ粒子組成物中に存在する総脂質の約０％〜約６０％、約１０％〜約６０％又は約２０％〜約５０％（例えば２０、３０、４０又は５０％）の範囲のモル比でコレステロールを含む。一実施形態において、コレステロールは、ナノ粒子組成物中に存在する総脂質の約２０％である。

ある種の実施形態において、ナノ粒子組成物中に含有されるＰＥＧ脂質は、ナノ粒子組成物中に存在する総脂質の約０．５％〜約２０％、約１．５％〜約１８％のモル比の範囲である。ナノ粒子組成物の一実施形態において、ＰＥＧ脂質は、総脂質の約２％〜約１０％（例えば２、３、４、５、６、７、８、９又は１０％）のモル比で含まれる。例えば、総ＰＥＧ脂質は、ナノ粒子組成物中に存在する総脂質の約２％である。

本発明の目的のために、ナノ粒子組成物中に含有される放出可能融合性脂質の量は、ナノ粒子組成物中に存在する場合、本明細書に記載の放出可能融合性脂質単独の量、又は式（Ｉ）の放出可能融合性脂質と任意の追加の当技術分野で公知の融合性脂質（放出可能又は放出不可能のいずれか）との総量を意味すると理解されるものとする。

２．式（Ｉ）の放出可能融合性脂質及び任意選択の当技術分野で公知の融合性／非カチオン性脂質
本発明によれば、本明細書に記載のナノ粒子組成物は、式（Ｉ）の放出可能融合性脂質を含有する。任意の理論に拘束されずに、式（Ｉ）の放出可能融合性脂質は、ナノ粒子中に封入された核酸のエンドソームからの放出、及びナノ粒子が細胞に侵入した後、ナノ粒子からの放出を促す。

本発明のさらなる態様において、本明細書に記載のナノ粒子組成物は、追加の当技術分野で公知の融合性脂質を含むことができる。ナノ粒子組成物で有用な追加の適切な当技術分野で公知の融合性脂質としては、中性の融合性／非カチオン性脂質又はアニオン性融合性脂質が挙げられる。

中性脂質としては、選択されたｐＨ、好ましくは生理学的ｐＨで非荷電又は中性いずれかの両性イオン形態で存在する脂質が挙げられる。このような当技術分野で公知の融合性脂質の例としては、ジアシルホスファチジルコリン、ジアシルホスファチジルエタノールアミン、セラミド、スフィンゴミエリン、セファリン、コレステロール、セレブロシド及びジアシルグリセロールが挙げられる。

アニオン性脂質としては、生理学的ｐＨで負に帯電した脂質が挙げられる。これらの脂質としては、それだけに限らないが、ホスファチジルグリセロール、カルジオリピン、ジアシルホスファチジルセリン、ジアシルホスファチジン酸、Ｎ−ドデカノイルホスファチジルエタノールアミン、Ｎ−スクシニルホスファチジルエタノールアミン、Ｎ−グルタリルホスファチジルエタノールアミン、リジルホスファチジルグリセロール、パルミトイルオレイオイルホスファチジルグリセロール（ＰＯＰＧ）及び他のアニオン性修飾基で修飾された中性脂質が挙げられる。

多くの当技術分野で公知の融合性脂質としては、疎水性部分及び極性頭部基を一般に有する両親媒性脂質が挙げられ、水溶液中でベシクルを形成できる。

企図される融合性脂質としては、天然及び合成のリン脂質及び関連の脂質が挙げられる。

非カチオン性脂質の非限定的リストは、リン脂質及び非リン脂質関連物質、例えばレシチン、リゾレシチン、ジアシルホスファチジルコリン、リゾホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、リゾホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、スフィンゴミエリン、セファリン、セラミド、カルジオリピン、ホスファチジン酸、ホスファチジルグリセロール、セレブロシド、ジセチルホスフェート、
１，２−ジラウロイル−ｓｎ−グリセロール（ＤＬＧ）；
１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロール（ＤＭＧ）；
１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロール（ＤＰＧ）；
１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロール（ＤＳＧ）；
１，２−ジラウロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスファチジン酸（ＤＬＰＡ）；
１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスファチジン酸（ＤＭＰＡ）；
１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスファチジン酸（ＤＰＰＡ）；
１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスファチジン酸（ＤＳＰＡ）；
１，２−ジアラキドイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＡＰＣ）；
１，２−ジラウロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＬＰＣ）；
１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＭＰＣ）；
１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−エチルホスホコリン（ＤＰｅＰＣ）；
１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン又はジパルミトイルホスファチジルコリン又はジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）；
１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン又はジステアロイルホスファチジルコリン又はジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）；
１，２−ジラウロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＬＰＥ）；
１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン又はジミリストイルホスホエタノールアミン（ＤＭＰＥ）；
１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン又はジパルミトイルホスファチジル−エタノールアミン（ＤＰＰＥ）；
１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン又はジステアロイルホスファチジル−エタノールアミン（ＤＳＰＥ）；
１，２−ジラウロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホグリセロール（ＤＬＰＧ）；
１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホグリセロール（ＤＭＰＧ）；
１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−ｓｎ−１−グリセロール（ＤＭＰ−ｓｎ−１−Ｇ）；
１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホグリセロール又はジパルミトイルホスファチジルグリセロール（ＤＰＰＧ）；
１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホグリセロール（ＤＳＰＧ）；
１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−ｓｎ−１−グリセロール（ＤＳＰ−ｓｎ−１−Ｇ）；
１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−Ｌ−セリン（ＤＰＰＳ）；
１−パルミトイル−２−リノレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＰＬｉｎｏＰＣ）；
１−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン又はパルミトイルオレオイルホスファチジルコリン（ＰＯＰＣ）；
１−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホグリセロール（ＰＯＰＧ）；
１−パルミトイル−２−ｌｙｓｏ−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（Ｐ−ｌｙｓｏ−ＰＣ）；
１−ステアロイル−２−ｌｙｓｏ−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（Ｓ−ｌｙｓｏ−ＰＣ）；
１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン又はジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）；
ジフィタノイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＰｈＰＥ）；
１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン又はジオレオイルホスファチジルコリン又はジオレオイルホスファチジルコリン（ＤＯＰＣ）；及び
１，２−ジフィタノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＰｈＰＣ）、
ジオレオイルホスファチジルグリセロール（ＤＯＰＧ）；
パルミトイルオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＰＯＰＥ）；
ジオレオイル−ホスファチジルエタノールアミン４−（Ｎ−マレイミドメチル）−シクロヘキサン−１−カルボキシレート（ＤＯＰＥ−ｍａｌ）；
１６−Ｏ−モノメチルＰＥ；
１６−Ｏ−ジメチルＰＥ；
１８−１−ｔｒａｎｓＰＥ；１−ステアロイル−２−オレオイル−ホスファチジエタノールアミン（ＳＯＰＥ）；
１，２−ジエライドイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホホエタノールアミン（ｔｒａｎｓＤＯＰＥ）；それらの薬学的に許容される塩及び混合物の中から選択される。融合性脂質の詳細は、米国特許出願公開第２００７／０２９３４４９号明細書及び第２００６／００５１４０５号明細書に記載されている。

非カチオン性脂質としては、ステロール又はステロイドアルコール、例えばコレステロールが挙げられる。

追加の非カチオン性脂質としては、例えば、ステアリルアミン、ドデシルアミン、ヘキサデシルアミン、アセチルパルミテート、グリセロールリシノレート、ヘキサデシルステアレート、イソプロピルミリステート、両性アクリルポリマー、トリエタノールアミンラウリルサルフェート、アルキルアリールサルフェートポリエチルオキシル化脂肪酸アミド及びジオクタデシルジメチルアンモニウムブロミドがある。

企図されるアニオン性脂質としては、ホスファチジルセリン、ホスファチジン酸、ホスファチジルコリン、血小板活性化因子（ＰＡＦ）、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジル−ＤＬ−グリセロール、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルイノシトール、カルジオリピン、リゾホスファチジド、水素化リン脂質、スフィンゴ脂質、ガングリオシド、フィトスフィンゴシン、スフィンガニン、それらの薬学的に許容される塩及び混合物が挙げられる。

本明細書に記載のナノ粒子組成物の調製に有用な適切な非カチオン性脂質としては、ジアシルホスファチジルコリン（例えば、ジステアロイルホスファチジルコリン、ジオレオイルホスファチジルコリン、ジパルミトイルホスファチジルコリン及びジリノレオイルホスファチジルコリン）、ジアシルホスファチジルエタノールアミン（例えば、ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン及びパルミトイルオレオイルホスファチジルエタノールアミン）、セラミド又はスフィンゴミエリンが挙げられる。これらの脂質中のアシル基は、飽和及び不飽和の炭素鎖を有する脂肪酸、例えばリノイル、イソステアリル、オレイル、エライジル、ペトロセリニル、リノレニル、エレオステアリル、アラキジル、ミリストイル、パルミトイル及びラウロイルであることが好ましい。アシル基は、ラウロイル、ミリストイル、パルミトイル、ステアロイル又はオレオイルであることがより好ましく、飽和及び不飽和のＣ_８〜Ｃ_３０（好ましくはＣ_１０〜Ｃ_２４）炭素鎖を有する脂肪酸であることがより好ましい。

本明細書に記載のナノ粒子組成物で有用な様々なホスファチジルコリンとしては、
１，２−ジデカノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＤＰＣ、Ｃ１０：０、Ｃ１０：０）；
１，２−ジラウロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＬＰＣ、Ｃ１２：０、Ｃ１２：０）；
１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＭＰＣ、Ｃ１４：０、Ｃ１４：０）；
１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＰＰＣ、Ｃ１６：０、Ｃ１６：０）；
１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＳＰＣ、Ｃ１８：０、Ｃ１８：０）；
１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＯＰＣ、Ｃ１８：１、Ｃ１８：１）；
１，２−ジエルコイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＥＰＣ、Ｃ２２：１、Ｃ２２：１）；
１，２−ジエイコサペンタエノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＥＰＡ−ＰＣ、Ｃ２０：５、Ｃ２０：５）；
１，２−ジドコサヘキサエノイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＤＨＡ−ＰＣ、Ｃ２２：６、Ｃ２２：６）；
１−ミリストイル−２−パルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＭＰＰＣ、Ｃ１４：０、Ｃ１６：０）；
１−ミリストイル−２−ステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＭＳＰＣ、Ｃ１４：０、Ｃ１８：０）；
１−パルミトイル−２−ステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＰＭＰＣ、Ｃ１６：０、Ｃ１４：０）；
１−パルミトイル−２−ステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＰＳＰＣ、Ｃ１６：０、Ｃ１８：０）；
１−ステアロイル−２−ミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＳＭＰＣ、Ｃ１８：０、Ｃ１４：０）；
１−ステアロイル−２−パルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＳＰＰＣ、Ｃ１８：０、Ｃ１６：０）；
１，２−ミリストイル−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＭＯＰＣ、Ｃ１４：０、Ｃ１８：０）；
１，２−パルミトイル−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＰＯＰＣ、Ｃ１６：０、Ｃ１８：１）；
１，２−ステアロイル−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＰＯＰＣ、Ｃ１８：０、Ｃ１８：１）、それらの薬学的に許容される塩及び混合物が挙げられる。

本明細書に記載のナノ粒子組成物で有用な様々なリゾホスファチジルコリンとしては、
１−ミリストイル−２−ｌｙｓｏ−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（Ｍ−ＬｙｓｏＰＣ、Ｃ１４：０）；
１−パルミトイル−２−ｌｙｓｏ−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（Ｐ−ＬｙｓｏＰＣ、Ｃ１６：０）；
１−ステアロイル−２−ｌｙｓｏ−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（Ｓ−ＬｙｓｏＰＣ、Ｃ１８：０）、それらの薬学的に許容される塩及び混合物が挙げられる。

本明細書に記載のナノ粒子組成物で有用な様々なホスファチジルグリセロールとしては、
水素化大豆ホスファチジルグリセロール（ＨＳＰＧ）；
非水素化卵ホスファチジルグリセロール（ＥＰＧ）；
１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホグリセロール（ＤＭＰＧ、Ｃ１４：０、Ｃ１４：０）；
１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホグリセロール（ＤＰＰＧ、Ｃ１６：０、Ｃ１６：０）；
１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホグリセロール（ＤＳＰＧ、Ｃ１８：０、Ｃ１８：０）；
１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホグリセロール（ＤＯＰＧ、Ｃ１８：１、Ｃ１８：１）；
１，２−ジエルコイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホグリセロール（ＤＥＰＧ、Ｃ２２：１、Ｃ２２：１）；
１−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホグリセロール（ＰＯＰＧ、Ｃ１６：０、Ｃ１８：１）、それらの薬学的に許容される塩及び混合物の中から選択される。

本明細書に記載のナノ粒子組成物で有用な様々なホスファチジン酸としては、
１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスファチジン酸（ＤＭＰＡ、Ｃ１４：０、Ｃ１４：０）；
１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスファチジン酸（ＤＰＰＡ、Ｃ１６：０、Ｃ１６：０）；
１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスファチジン酸（ＤＳＰＡ、Ｃ１８：０、Ｃ１８：０）、それらの薬学的に許容される塩及び混合物が挙げられる。

本明細書に記載のナノ粒子組成物で有用な様々なホスファチジルエタノールアミンとしては、
水素化大豆ホスファチジルエタノールアミン（ＨＳＰＥ）；
非水素化卵ホスファチジルエタノールアミン（ＥＰＥ）；
１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＭＰＥ、Ｃ１４：０、Ｃ１４：０）；
１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＰＰＥ、Ｃ１６：０、Ｃ１６：０）；
１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＳＰＥ、Ｃ１８：０、Ｃ１８：０）；
１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＯＰＥ、Ｃ１８：１、Ｃ１８：１）；
１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＤＥＰＥ、Ｃ２２：１、Ｃ２２：１）；
１，２−ジエルコイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（ＰＯＰＥ、Ｃ１６：０、Ｃ１８：１）、それらの薬学的に許容される塩及び混合物が挙げられる。

本明細書に記載のナノ粒子組成物で有用な様々なホスファチジルセリンとしては、
１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−Ｌ−セリン（ＤＭＰＳ、Ｃ１４：０、Ｃ１４：０）；
１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−Ｌ−セリン（ＤＰＰＳ、Ｃ１６：０、Ｃ１６：０）；
１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−Ｌ−セリン（ＤＳＰＳ、Ｃ１８：０、Ｃ１８：０）；
１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホ−Ｌ−セリン（ＤＯＰＳ、Ｃ１８：１、Ｃ１８：１）；
１−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−３−ホスホ−Ｌ−セリン（ＰＯＰＳ、Ｃ１６：０、Ｃ１８：１）、それらの薬学的に許容される塩及び混合物が挙げられる。

一つの好ましい実施形態において、本明細書に記載のナノ粒子組成物の調製に有用な適切な中性脂質としては、例えば、
ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）、
ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＳＰＥ）、
パルミトイルオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＰＯＰＥ）、
卵ホスファチジルコリン（ＥＰＣ）、
ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、
ジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、
ジオレオイルホスファチジルコリン（ＤＯＰＣ）、
パルミトイルオレオイルホスファチジルコリン（ＰＯＰＣ）、
ジパルミトイルホスファチジルグリセロール（ＤＰＰＧ）、
ジオレオイルホスファチジルグリセロール（ＤＯＰＧ）、
ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン４−（Ｎ−マレイミドメチル）−シクロヘキサン−１−カルボキシレート（ＤＯＰＥ−ｍａｌ）、コレステロール、それらの薬学的に許容される塩及び混合物が挙げられる。

ある種の好ましい実施形態において、本明細書に記載のナノ粒子組成物は、ＤＳＰＣ、ＥＰＣ、ＤＯＰＥ等及びそれらの混合物を含む。

本発明のさらなる態様において、ナノ粒子組成物は、ステロール等の非カチオン性脂質を含有する。ナノ粒子組成物は、好ましくはコレステロール又はその類似体、より好ましくはコレステロールを含有する。

３．カチオン性脂質
本発明によれば、本明細書に記載のナノ粒子組成物は、カチオン性脂質を含むことができる。企図される適切な脂質としては、例えば、
Ｎ−［１−（２，３−ジオレオイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＭＡ）；
１，２−ビス（オレオイルオキシ）−３−３−（トリメチルアンモニウム）プロパン又はＮ−（２，３−ジオレオイルオキシ）プロピル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＡＰ）；
１，２−ビス（ジミルストイルオキシ）−３−３−（トリメチルアンモニア）プロパン（ＤＭＴＡＰ）；
１，２−ジミリスチルオキシプロピル−３−ジメチルヒドロキシエチルアンモニウムブロミド又はＮ−（１，２−ジミリスチルオキシプロパ−３−イル）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−ヒドロキシエチルアンモニウムブロミド（ＤＭＲＩＥ）；
ジメチルジオクタデシルアンモニウムブロミド又はＮ，Ｎ−ジステアリル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウムブロミド（ＤＤＡＢ）；
３−（Ｎ−（Ｎ’，Ｎ’−ジメチルアミノエタン）カルバモイル）コレステロール（ＤＣ−コレステロール）；
３β−［Ｎ’，Ｎ’−ジグアニジノエチル−アミノエタン）カルバモイルコレステロール（ＢＧＴＣ）；
２−（２−（３−（ビス（３−アミノプロピル）アミノ）プロピルアミノ）アセトアミド）−Ｎ，Ｎ−ジテトラデシルアセトアミド（ＲＰＲ２０９１２０）；
１，２−ジアルケノイル−ｓｎ−グリセロ−３−エチルホスホコリン（即ち、１，２−ジオレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−エチルホスホコリン、１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−エチルホスホコリン及び１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−エチルホスホコリン）；
テトラメチルテトラパルミトイルスペルミン（ＴＭＴＰＳ）；
テトラメチルテトラオレイルスペルミン（ＴＭＴＯＳ）；
テトラメトリテトララウリルスペルミン（ＴＭＴＬＳ）；
テトラメチルテトラミリスチルスペルミン（ＴＭＴＭＳ）；
テトラメチルジオレイルスペルミン（ＴＭＤＯＳ）；
２，５−ビス（３−アミノプロピルアミノ）−Ｎ−（２−（ジオクタデシルアミノ）−２−オキソエチル）ペンタンアミド（ＤＯＧＳ）；
２，５−ビス（３−アミノプロピルアミノ）−Ｎ−（２−（ジ（Ｚ）−オクタデカ−９−ジエニルアミノ）−２−オキソエチル）ペンタンアミド（ＤＯＧＳ−９−エン）；
２，５−ビス（３−アミノプロピルアミノ）−Ｎ−（２−（ジ（９Ｚ，１２Ｚ）−オクタデカ−９，１２−ジエニルアミノ）−２−オキソエチル）ペンタンアミド（ＤＬｉｎＧＳ）；
Ｎ４−スペルミンコレステリルカルバメート（ＧＬ−６７）；
（９Ｚ，９’Ｚ）−２−（２，５−ビス（３−アミノプロピルアミノ）ペンタンアミド）プロパン−１，３−ジイル−ジオクタデカ−９−エノエート（ＤＯＳＰＥＲ）；
２，３−ジオレイルオキシ−Ｎ−［２（スペルミンカルボキサミド）エチル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−１−プロパンアミニウムトリフルオロアセテート（ＤＯＳＰＡ）；
１，２−ジミリストイル−３−トリメチルアンモニウム−プロパン；１，２−ジステアロイル−３−トリメチルアンモニウム−プロパン；
ジオクタデシルジメチルアンモニウム（ＤＯＤＭＡ）；
ジステアリルジメチルアンモニウム（ＤＳＤＭＡ）；
Ｎ，Ｎ−ジオレイル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＤＡＣ）；それらの薬学的に許容される塩及び混合物が挙げられる。

カチオン性脂質の詳細は米国特許出願公開第２００７／０２９３４４９号明細書及び米国特許第４，８９７，３５５号明細書、第５，２７９，８３３号明細書、第６，７３３，７７７号明細書、第６，３７６，２４８号明細書、第５，７３６，３９２号明細書、第５，６８６，９５８号明細書、第５，３３４，７６１号明細書、第５，４５９，１２７号明細書、第２００５／００６４５９５号明細書、第５，２０８，０３６号明細書、第５，２６４，６１８号明細書、第５，２７９，８３３号明細書、第５，２８３，１８５号明細書、第５，７５３，６１３号明細書及び第５，７８５，９９２号明細書にも記載されている。

一つの好ましい態様において、カチオン性脂質は、選択されたｐＨ、例えばｐＨ＜１３（例えばｐＨ６〜１２、ｐＨ６〜８）で正味の正電荷を担持するであろう。ナノ粒子組成物の一つの好ましい実施形態は、次の構造式を有する本明細書に記載のカチオン性脂質

（式中、Ｒ_１はコレステロール又はその類似体である）。
を含む。

より好ましくは、ナノ粒子組成物は、次の構造式を有するカチオン性脂質

を含む。

カチオン性脂質の詳細は、その内容が参照により本明細書に組み込まれている、ＰＣＴ／ＵＳ０９／５２３９６にも記載されている。

さらに、カチオン性脂質を含む市販の製剤、例えばＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮ（登録商標）（ＤＯＴＭＡ及びＤＯＰＥを含有するカチオン性リポソーム、ＧＩＢＣＯ／ＢＲＬ、ＧｒａｎｄＩｓｌａｎｄ、ＮｅｗＹｏｒｋ、ＵＳＡ製）、ＬＩＰＯＦＥＣＴＡＭＩＮＥ（登録商標）（ＤＯＳＰＡ及びＤＯＰＥを含有するカチオン性リポソーム、ＧＩＢＣＯ／ＢＲＬ、ＧｒａｎｄＩｓｌａｎｄ、ＮｅｗＹｏｒｋ、ＵＳＡ製）及びＴＲＡＮＳＦＥＣＴＡＭ（登録商標）（ＤＯＧＳを含有するカチオン性リポソーム、ＰｒｏｍｅｇａＣｏｒｐ．、Ｍａｄｉｓｏｎ、Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ、ＵＳＡ製）を使用できる。

４．ＰＥＧ脂質
本発明によれば、本明細書に記載のナノ粒子組成物はＰＥＧ脂質を含有する。ＰＥＧ脂質は、本明細書に記載のナノ粒子の循環を延長し、身体からのナノ粒子の早期排出を防ぐ。ＰＥＧ脂質は、免疫原性を減少させ、ナノ粒子の安定性を高める。

ナノ粒子組成物で有用なＰＥＧ脂質としては、ＰＥＧ化形態の融合性／非カチオン性脂質が挙げられる。ＰＥＧ脂質としては、例えばジアシルグリセロールに結合したＰＥＧ（ＰＥＧ−ＤＡＧ）、ジアシルグリカミドに結合したＰＥＧ、ジアルキルオキシプロピルに結合したＰＥＧ（ＰＥＧ−ＤＡＡ）、リン脂質に結合したＰＥＧ、例えばホスファチジルエタノールアミンに結合したＰＥＧ（ＰＥＧ−ＰＥ）、セラミドに結合したＰＥＧ（ＰＥＧ−Ｃｅｒ）、コレステロール誘導体に結合したＰＥＧ（ＰＥＧ−Ｃｈｏｌ）又はそれらの混合物が挙げられる。各々の内容が参照により本明細書に組み込まれている、米国特許第５，８８５，６１３号明細書及び第５，８２０，８７３号明細書、並びに米国特許出願第２００６／０５１４０５号明細書参照。

ＰＥＧは、次の構造式：
−Ｏ−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ−
（式中、（ｎ）は、ＰＥＧ脂質のポリマー部分が約２００〜約１０００００ダルトン、好ましくは約２００〜約２００００ダルトンの数平均分子量を有するように、約５〜約２３００、好ましくは約５〜約４６０の正の整数である）で一般に表される。（ｎ）は、ポリマーの重合度を表し、ポリマーの分子量に依存する。

一つの好ましい態様において、ＰＥＧは約２００〜約２００００ダルトン、より好ましくは約５００〜約１００００ダルトン、さらにより好ましくは約１０００〜約５０００ダルトン（即ち、約１５００〜約３０００ダルトン）の範囲の数平均分子量を有するポリエチレングリコールである。一実施形態において、ＰＥＧは約２０００ダルトンの分子量を有する。別の実施形態において、ＰＥＧは約７５０ダルトンの分子量を有する。

あるいは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）残基部分は、次の構造式：
−Ｙ_７１−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ−ＣＨ_２ＣＨ_２Ｙ_７１−、
−Ｙ_７１−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ−ＣＨ_２Ｃ（＝Ｙ_７２）−Ｙ_７１−、
−Ｙ_７１−Ｃ（＝Ｙ_７２）−（ＣＨ_２）_ａ１２−Ｙ_７３−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ−ＣＨ_２ＣＨ_２−Ｙ_７３−（ＣＨ_２）_ａ１２−Ｃ（＝Ｙ_７２）−Ｙ_７１−及び
−Ｙ_７１−（ＣＲ_７１Ｒ_７２）_ａ１２−Ｙ_７３−（ＣＨ_２）_ｂ１２−Ｏ−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_ｎ−（ＣＨ_２）_ｂ１２−Ｙ_７３−（ＣＲ_７１Ｒ_７２）_ａ１２−Ｙ_７１−
［式中、
Ｙ_７１及びＹ_７３は独立にＯ、Ｓ、ＳＯ、ＳＯ_２、ＮＲ_７３又は結合であり、
Ｙ_７２はＯ、Ｓ又はＮＲ_７４、好ましくは酸素であり、
Ｒ_{７１〜７４}は水素、Ｃ_１〜６アルキル、Ｃ_２〜６アルケニル、Ｃ_２〜６アルキニル、Ｃ_３〜１９分岐アルキル、Ｃ_３〜８シクロアルキル、Ｃ_１〜６置換アルキル、Ｃ_２〜６置換アルケニル、Ｃ_２〜６置換アルキニル、Ｃ_３〜８置換シクロアルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、Ｃ_１〜６ヘテロアルキル、置換Ｃ_１〜６ヘテロアルキル、Ｃ_１〜６アルコキシ、アリールオキシ、Ｃ_１〜６ヘテロアルコキシ、ヘテロアリールオキシ、Ｃ_２〜６アルカノイル、アリールカルボニル、Ｃ_２〜６アルコキシカルボニル、アリールオキシカルボニル、Ｃ_２〜６アルカノイルオキシ、アリールカルボニルオキシ、Ｃ_２〜６置換アルカノイル、置換アリールカルボニル、Ｃ_２〜６置換アルカノイルオキシ、置換アリールオキシカルボニル、Ｃ_２〜６置換アルカノイルオキシ及び置換アリールカルボニルオキシ、好ましくは水素、メチル、エチル又はプロピルから独立に選択され、
（ａ１２）及び（ｂ１２）は独立に０又は正の整数、好ましくは０又は約１〜約６（即ち、１、２、３、４、５、６）の整数、より好ましくは１又は２であり、
（ｎ）は約５〜約２３００、好ましくは約５〜約４６０の整数である］
で表すことができる。

ＰＥＧの末端部分は、Ｈ、ＮＨ_２、ＯＨ、ＣＯ_２Ｈ、Ｃ_１〜６アルキル（例えばメチル、エチル、プロピル）、Ｃ_１〜６アルコキシ、アシル又はアリールで終わることができる。一つの好ましい実施形態において、ＰＥＧの末端ヒドロキシル基は、メトキシ基又はメチル基で置換されている。一つの好ましい実施形態において、ＰＥＧ脂質で使用するＰＥＧはメトキシＰＥＧである。

ＰＥＧは脂質に直接結合していてもよく、又はリンカー部分を介して結合していてもよい。脂質構造への結合のためのポリマーは、米国特許第５，１２２，６１４号明細書及び第５，８０８，０９６号明細書に記載の活性化法、並びに当業者に公知の他の技法を用いて過度に実験するまでもなく適切に活性化されたポリマーに変換される。

ＰＥＧ脂質の調製に有用な活性化ＰＥＧの例としては、例えばメトキシポリエチレングリコールスクシネート、ｍＰＥＧ−ＮＨＳ、メトキシポリエチレングリコールスクシンイミジルスクシネート、メトキシポリエチレングリコール酢酸（ｍＰＥＧ−ＣＨ_２ＣＯＯＨ）、メトキシポリエチレングリコールアミン（ｍＰＥＧ−ＮＨ_２）及びメトキシポリエチレングリコールトレシレート（ｍＰＥＧ−ＴＲＥＳ）が挙げられる。

ある種の態様において、末端カルボン酸基を有するポリマーは、ＰＥＧ脂質の調製のために使用できる。高純度で末端カルボン酸を有するポリマーを調製する方法は、その内容が参照により本明細書に組み込まれている、米国特許出願第１１／３２８，６６２号に記載されている。

別の態様において、末端アミン基を有するポリマーは、ＰＥＧ脂質を製造するために使用できる。高純度で末端アミンを含有するポリマーを調製する方法は、それらの各々の内容が参照により組み込まれている、米国特許出願第１１／５０８，５０７号及び第１１／５３７，１７２号に記載されている。

ＰＥＧ及び脂質は、結合部分、即ち非エステル含有リンカー部分又はエステル含有リンカー部分を介して結合できる。適切な非エステル含有リンカーとしては、それだけに限らないが、アミドリンカー部分、アミノリンカー部分、カルボニルリンカー部分、カルバメートリンカー部分、カーボネート（ＯＣ（＝Ｏ）Ｏ）リンカー部分、尿素リンカー部分、エーテルリンカー部分、スクシニルリンカー部分及びそれらの組合せが挙げられる。適切なエステルリンカー部分としては、例えばスクシノイル、ホスフェートエステル（−Ｏ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−Ｏ−）、スルホン酸エステル及びそれらの組合せが挙げられる。

一実施形態において、本明細書に記載のナノ粒子組成物は、ポリエチレングリコール−ジアシルグリセロール（ＰＥＧ−ＤＡＧ）又はポリエチレン−ジアシルグリカミドを含むことができる。適切なポリエチレングリコール−ジアシルグリセロール複合体又はポリエチレングリコール−ジアシルグリカミド複合体としては、約Ｃ_４〜約Ｃ_３０（好ましくは約Ｃ_８〜約Ｃ_２４）の飽和又は不飽和の炭素原子を独立に含有するアルキル鎖長を有する、ジアルキルグリセロール基又はジアルキルグリカミド基が挙げられる。ジアルキルグリセロール基又はジアルキルグリカミド基は、一つ又は複数の置換アルキル基をさらに含むことができる。

本明細書で使用する「ジアシルグリセロール」（ＤＡＧ）という用語は、二つの脂肪アシル鎖Ｒ_１１１及びＲ_１１２を有する化合物を指す。Ｒ_１１１及びＲ_１１２は、約４〜約３０個（好ましくは約８〜約２４個）の炭素の長さの同一又は異なる炭素鎖を有し、エステル結合によりグリセロールに結合する。アシル基は、飽和であってもよく、又は様々な不飽和度を含む不飽和であってもよい。ＤＡＧは次の一般式：

を有する。

一つの好ましい実施形態において、ＰＥＧ−ジアシルグリセロール複合体は、ＰＥＧ−ジラウリルグリセロール（Ｃ１２）、ＰＥＧ−ジミリスチルグリセロール（Ｃ１４、ＤＭＧ）、ＰＥＧ−ジパルミトイルグリセロール（Ｃ１６、ＤＰＧ）又はＰＥＧ−ジステアリルグリセロール（Ｃ１８、ＤＳＧ）である。当業者であれば、他のジアシルグリセロールも、ＰＥＧ−ジアシルグリコール複合体で企図されることを容易に認識されよう。本明細書で使用する適切なＰＥＧ−ジアシルグリセロール複合体及びそれを製造し使用する方法は、各々の内容が参照により本明細書に組み込まれている、米国特許出願公開第２００３／００７７８２９号及びＰＣＴ特許出願第ＣＡ０２／００６６９号に記載されている。

ＰＥＧ−ジアシルグリセロール複合体の例としては、ＰＥＧ−ジラウリルグリセロール（Ｃ１２）、ＰＥＧ−ジミリスチルグリセロール（Ｃ１４）、ＰＥＧ−ジパルミトイルグリセロール（Ｃ１６）、ＰＥＧ−ジステリルグリセロール（Ｃ１８）の中から選択できる。ＰＥＧ−ジアシルグリカミド複合体の例としては、ＰＥＧ−ジラウリルグリカミド（Ｃ１２）、ＰＥＧ−ジミリスチルグリカミド（Ｃ１４）、ＰＥＧ−ジパルミトイルグリカミド（Ｃ１６）及びＰＥＧ−ジステリルグリカミド（Ｃ１８）が挙げられる。

別の実施形態において、本明細書に記載のナノ粒子組成物は、ポリエチレングリコール−ジアルキルオキシプロピル複合体（ＰＥＧ−ＤＡＡ）を含むことができる。

「ジアルキルオキシプロピル」という用語は、二つのアルキル鎖Ｒ_１１１及びＲ_１１２を有する化合物を指す。Ｒ_１１１及びＲ_１１２アルキル基は、約４〜約３０個（好ましくは約８〜約２４個）の間の炭素の同一又は異なる炭素鎖長を含む。アルキル基は飽和であってもよく、又は様々な不飽和度を有していてもよい。ジアルキルオキシプロピルは次の一般式：

（式中、Ｒ_１１１及びＲ_１１２アルキル基は、約４〜約３０個（好ましくは約８〜約２４個）の炭素を有する同一又は異なるアルキル基である）を有する。アルキル基は、飽和であってもよく、又は不飽和であってもよい。適切なアルキル基の例としては、それだけに限らないがラウリル（Ｃ１２）、ミリスチル（Ｃ１４）、パルミチル（Ｃ１６）、ステアリル（Ｃ１８）、オレオイル（Ｃ１８）及びイコシル（Ｃ２０）が挙げられる。

一実施形態において、Ｒ_１１１及びＲ_１１２はいずれも同一である。即ち、Ｒ_１１１及びＲ_１１２はいずれもミリスチル（Ｃ１４）、いずれもステアリル（Ｃ１８）又はいずれもオレオイル（Ｃ１８）等である。別の実施形態において、Ｒ_１１１及びＲ_１１２は異なる。即ち、Ｒ_１１１はミリスチル（Ｃ１４）であり、Ｒ_１１２はステアリル（Ｃ１８）である。好ましい実施形態において、ＰＥＧ−ジアルキルプロピル複合体は同一のＲ_１１１及びＲ_１１２を含む。

さらに別の実施形態において、本明細書に記載のナノ粒子組成物は、ホスファチジルエタノールアミンに結合したＰＥＧ（ＰＥＧ−ＰＥ）を含むことができる。ＰＥＧ脂質の結合に有用なホスファチジルエタノールアミンは、約４〜約３０個（好ましくは約８〜約２４個）の炭素の範囲の炭素鎖長を有する飽和又は不飽和の脂肪酸を含有できる。適切なホスファチジルエタノールアミンとしては、それだけに限らないが、ジミリストイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＭＰＥ）、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＰＰＥ）、ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＯＰＥ）及びジステアロイルホスファチジルエタノールアミン（ＤＳＰＥ）が挙げられる。

さらに別の実施形態において、本明細書に記載のナノ粒子組成物は、セラミドに結合したＰＥＧ（ＰＥＧ−Ｃｅｒ）を含むことができる。セラミドはアシル基を一つだけ有する。セラミドは、約４〜約３０個（好ましくは約８〜約２４個）の炭素の範囲の炭素鎖長を有する飽和又は不飽和の脂肪酸を有することができる。

代替実施形態において、本明細書に記載のナノ粒子組成物は、コレステロール誘導体に結合したＰＥＧを含むことができる。「コレステロール誘導体」という用語は、その修飾、即ち置換及び／又は欠失を含むコレステロール構造を含有する任意のコレステロール類似体を意味する。本明細書においてコレステロール誘導体という用語は、ステロイドホルモン及び胆汁酸も含む。

ＰＥＧ脂質の例示的例としては、Ｎ−（カルボニルメトキシポリエチレングリコール）−１，２−ジミリストイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（^２ｋＤａｍＰＥＧ−ＤＭＰＥ又は^５ｋＤａｍＰＥＧ−ＤＭＰＥ）、Ｎ−（カルボニルメトキシポリエチレングリコール）−１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（^２ｋＤａｍＰＥＧ−ＤＰＰＥ又は^５ｋＤａｍＰＥＧ−ＤＰＰＥ）、Ｎ−（カルボニルメトキシポリエチレングリコール）−１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（^{７５０ｋＤａ}ｍＰＥＧ−ＤＳＰＥ、^２ｋＤａｍＰＥＧ−ＤＳＰＥ、^５ｋＤａｍＰＥＧ−ＤＳＰＥ）並びにそれらの薬学的に許容される塩（即ち、ナトリウム塩）及びそれらの混合物が挙げられる。

ある種の好ましい実施形態において、本明細書に記載のナノ粒子組成物は、ＰＥＧが約２００〜約２００００、好ましくは約５００〜約１００００、より好ましくは約１０００〜約５０００の分子量を有する、ＰＥＧ−ＤＡＧ又はＰＥＧ−セラミドを有するＰＥＧ脂質を含む。

ＰＥＧ−ＤＡＧ及びＰＥＧ−セラミドのいくつかの例示的実施形態を表１に示す：

好ましくは、本明細書に記載のナノ粒子組成物は、ＰＥＧ−ＤＳＰＥ、ＰＥＧ−ジパルミトイルグリカミド（Ｃ１６）、ＰＥＧ−セラミド（Ｃ１６）等及びそれらの混合物の中から選択されるＰＥＧ脂質を含む。ｍＰＥＧ−ＤＳＰＥ、ｍＰＥＧ−ジパルミトイルグリカミド（Ｃ１６）及びｍＰＥＧ−セラミド（Ｃ１６）の構造は以下のとおりである：

（式中、（ｎ）は、約５〜約２３００、好ましくは約５〜約４６０の整数である）。

一つの好ましい実施形態において、（ｎ）は約４５である。

さらなる実施形態において、及びＰＥＧ等のＰＡＯ系ポリマーの代替物として、一つ又は複数の効果的な非抗原性物質、例えばデキストラン、ポリビニルアルコール、炭水化物系ポリマー、ヒドロキシプロピルメタクリルアミド（ＨＰＭＡ）、ポリアルキレンオキシド及び／又はそれらのコポリマーを使用できる。ＰＥＧの代わりに使用できる適切なポリマーの例としては、それだけに限らないが、ポリビニルピロリドン、ポリメチルオキサゾリン、ポリエチルオキサゾリン、ポリヒドロキシプロピルメタクリルアミド、ポリメタクリルアミド及びポリジメチルアクリルアミド、ポリ乳酸、ポリグリコール酸及び誘導体化セルロース、例えばヒドロキシメチルセルロース又はヒドロキシエチルセルロースが挙げられる。その内容が参照により本明細書に組み込まれている、同一出願人による米国特許第６，１５３，６５５号明細書も参照のこと。当業者であれば、同じ種類の活性化が、ＰＥＧ等のＰＡＯについても本明細書に記載されているように使用できることを理解されよう。当業者は、前記リストは単に例示であり、本明細書に記載の特性を有する全てのポリマー材料が企図されることをさらに理解されよう。本発明の目的のために、「実質的に又は効果的に非抗原性」という用語は、非毒性であり、哺乳動物において感知できるほどの免疫原性反応を誘発しないことが当技術分野で理解されている全ての物質を意味する。

さらにさらなる実施形態において、本明細書に記載のナノ粒子は、ケタール又はイミン等の放出可能リンカーを有するＰＥＧ脂質を含むことができる。このような放出可能ＰＥＧ脂質により、送達系が細胞に侵入した後、核酸（オリゴヌクレオチド）を送達系から解離できる。このような放出可能ＰＥＧ脂質のさらなる詳細は、それらの各々の内容が参照により本明細書に組み込まれている、各々「Releasable Polymeric Lipids Based on Imine Moiety For Nucleic Acids Delivery System」及び「Releasable Polymeric Lipids Based on Ketal or Acetal Moiety For Nucleic Acids Delivery System」という表題の米国仮特許出願第６１／１１５，３７９号及び第６１／１１５，３７１号、並びに同日に出願された「Releasable Polymeric Lipids For Nucleic Acids Delivery Systems」という表題のＰＣＴ特許出願第＿＿＿＿号にも記載されている。

５．核酸／オリゴヌクレオチド
本明細書に記載のナノ粒子組成物は、様々な核酸を細胞又は組織に送達するために使用できる。核酸としては、プラスミド及びオリゴヌクレオチドが挙げられる。好ましくは、本明細書に記載のナノ粒子組成物は、オリゴヌクレオチドの送達のために使用される。

本発明の範囲をより十分に理解するために、以下の用語を定義する。当業者は、「核酸」又は「ヌクレオチド」という用語が、別段の指示がない限り一本鎖であるか又は二本鎖であるデオキシリボ核酸（「ＤＮＡ」）、リボ核酸（「ＲＮＡ」）、並びにそれらの任意の化学修飾体又は類似体、例えばロックド（Locked）核酸（ＬＮＡ）に適用されることを認識されよう。当業者は、「核酸」という用語には、ポリ核酸、その誘導体、修飾体及び類似体が含まれることを容易に理解されよう。「オリゴヌクレオチド」とは、例えば約２〜約２００ヌクレオチド長、好ましくは約８〜約５０ヌクレオチド長、より好ましくは約８〜約３０ヌクレオチド長、さらにより好ましくは約８〜約２０ヌクレオチド長又は約１５〜約２８ヌクレオチド長の大きさがある、一般に比較的短いポリヌクレオチドである。本発明によるオリゴヌクレオチドは、別段の指示がない限り、一般に合成核酸であり、一本鎖である。「ポリヌクレオチド」及び「ポリ核酸」という用語は、本明細書において同義的にも使用できる。

オリゴヌクレオチド（類似体）は、一種類のオリゴヌクレオチドに限定されないが、その代わり、広範なこのような部分と連携するように設計されており、リンカーは、３’−又は５’−末端、通常ヌクレオチドのＰＯ_４基又はＳＯ_４基の一つ又は複数に結合できることが理解される。企図される核酸分子は、ホスホロチオエート、インターヌクレオチド結合修飾、糖修飾、核酸塩基修飾及び／又はホスフェート骨格修飾を挙げることができる。オリゴヌクレオチドは、天然のホスホロジエステル骨格又はホスホロチオエート骨格、又は任意の他の修飾骨格類似体、例えばＬＮＡ（ロックド核酸）、ＰＮＡ（ペプチド骨格を有する核酸）、ＣｐＧオリゴマー等を含有でき、それらは、その内容が参照により本明細書に組み込まれている、Tides 2002, Oligonucleotide and Peptide Technology Conferences, May 6-8, 2002, Las Vegas, NV及びOligonucleotide & Peptide Technologies, 18th & 19th November 2003, Hamburg, Germanyにて開示されている。

本発明で企図されるオリゴヌクレオチドの修飾は、例えば、追加の電荷、分極率、水素結合、静電相互作用及び官能性をオリゴヌクレオチドに取り込む官能性部分の付加又は置換を含む。このような修飾としては、それだけに限らないが、２’位糖修飾、５位ピリミジン修飾、８位プリン修飾、環外アミンでの修飾、４−チオウリジンの置換、５−ブロモウラシル又は５−ヨードウラシルの置換、骨格修飾、メチル化、イソ塩基のイソシチジン及びイソグアニジン等の塩基対合組合せ、並びに類似の組合せが挙げられる。本発明の範囲内で企図されるオリゴヌクレオチドとしては、３’及び／又は５’キャップ構造も挙げることができる。

本発明の目的のために、「キャップ構造」は、オリゴヌクレオチドのいずれかの末端で取り込まれた化学修飾を意味すると理解されるものとする。キャップは、５’−末端（５’−キャップ）又は３’−末端（３’−キャップ）に存在してもよく、又は両末端に存在してもよい。５’−キャップの非限定的例としては、脱塩基残基（部分）、４’，５’−メチレンヌクレオチド、１−（β−Ｄ−エリスロフラノシル）ヌクレオチド、４’−チオヌクレオチド、炭素環式ヌクレオチド、１，５−アンヒドロヘキシトールヌクレオチド、Ｌ−ヌクレオチド、αヌクレオチド、修飾塩基ヌクレオチド、ホスホロジチオエート結合、スレオペントフラノシルヌクレオチド、非環式３’，４’−セコヌクレオチド、非環式３，４−ジヒドロキシブチルヌクレオチド、非環式３，５−ジヒドロキシペンチルヌクレオチド、３’−３’−逆位ヌクレオチド部分、３’−３’−逆位脱塩基部分、３’−２’−逆位ヌクレオチド部分、３’−２’−逆位脱塩基部分、１，４−ブタンジオールホスフェート、３’−ホスホルアミデート、ヘキシルホスフェート、アミノヘキシルホスフェート、３’−ホスフェート、３’−ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート又は架橋もしくは非架橋メチルホスホネート部分が挙げられる。詳細は、その内容が参照により本明細書に組み込まれている、ＷＯ９７／２６２７０に記載されている。３’−キャップとしては、例えば、４’、５’−メチレンヌクレオチド、１−（β−Ｄ−エリスロフラノシル）ヌクレオチド、４’−チオヌクレオチド、炭素環式ヌクレオチド、５’−アミノアルキルホスフェート、１，３−ジアミノ−２−プロピルホスフェート、３−アミノプロピルホスフェート、６−アミノヘキシルホスフェート、１，２−アミノドデシルホスフェート、ヒドロキシプロピルホスフェート、１，５−アンヒドロヘキトールヌクレオチド、Ｌ−ヌクレオチド、αヌクレオチド、修飾塩基ヌクレオチド、ホスホロジチオエート、スレオペントフラノシルヌクレオチド、非環式３’，４’−セコヌクレオチド、３，４−ジヒドロキシブチルヌクレオチド、３，５−ジヒドロキシペンチルヌクレオチド、５’−５’−逆位ヌクレオチド部分、５’−５’−逆位脱塩基部分、５’−ホスホルアミデート、５’−ホスホロチオエート、１，４−ブタンジオールホスフェート、５’−アミノ、架橋及び／もしくは非架橋５’−ホスホルアミデート、ホスホロチオエート及び／又はホスホロジチオエート、架橋もしくは非架橋メチルホスホネート及び５’−メルカプト部分を挙げることができる。その内容が参照により本明細書に組み込まれている、Beaucage and Iyer, 1993, Tetrahedron 49, 1925も参照のこと。

ヌクレオシド類似体の非限定的リストは、次の構造式：

を有する。それらの各々の内容が、参照により本明細書に組み込まれている、Freier & Altmann; Nucl. Acid Res., 1997, 25, 4429-4443及びUhlmann; Curr. Opinion in Drug Development, 2000, 3(2), 293-213に記載のヌクレオシド類似体のさらなる例を参照のこと。

本明細書で使用する場合、「アンチセンス」という用語は、遺伝子産物をコードするか、又は調節配列をコードする特定のＤＮＡ配列又はＲＮＡ配列に相補的であるヌクレオチド配列を指す。「アンチセンス鎖」という用語は、「センス」鎖に相補的である核酸鎖に関して使用される。細胞代謝の通常の動作において、ＤＮＡ分子のセンス鎖は、ポリペプチド及び／又は他の遺伝子産物をコードする鎖である。センス鎖は、メッセンジャーＲＮＡ（「ｍＲＮＡ」）転写物（アンチセンス鎖）の合成のためのテンプレートとしての役割を果たし、次いで任意のコードされた遺伝子産物の合成を導く。アンチセンス核酸分子は、合成を含む当技術分野で公知の任意の方法により調製できる。細胞へ一旦導入されると、この転写鎖は、細胞により産生される天然配列と組み合わさり、二本鎖を形成する。次いで、これらの二本鎖はｍＲＮＡのさらなる転写又はその翻訳のいずれかを阻害する。「負」又は（−）の呼称がアンチセンス鎖を指すことも当技術分野で公知であり、「正」又は（＋）がセンス鎖を指すことも当技術分野で公知である。

本発明の目的のために、「相補的」とは、核酸配列が、別の核酸配列との水素結合（複数可）を形成することを意味すると理解されるものとする。パーセント相補性は、第２の核酸配列と水素結合、即ちワトソンクリック塩基対合を形成できる核酸分子中の隣接残基の割合を指す。即ち、１０の内５、６、７、８、９、１０は、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％及び１００％相補性である。「完全な相補性」とは、核酸配列の全ての隣接残基が、第２の核酸配列中の同数の隣接残基と水素結合を形成することを意味する。

本明細書に記載のナノ粒子で有用な核酸（例えば一つ又は複数の同一又は異なるオリゴヌクレオチド又はオリゴヌクレオチド誘導体）は、約５〜約１０００個の核酸、例えば好ましくは約８〜約５０ヌクレオチド長（例えば、約８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９又は３０）の大きさがある好ましくは比較的短いポリヌクレオチドを挙げることができる。

一態様において、本明細書に記載のナノ粒子中に封入される有用な核酸としては、天然のホスホロジエステル骨格もしくはホスホロチオエート骨格又は任意の他の修飾骨格類似体を有するオリゴヌクレオチド及びオリゴデオキシヌクレオチド、例えば
ＬＮＡ（ロックド核酸）；
ＰＮＡ（ペプチド骨格を有する核酸）；
低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）；
マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）；
ペプチド骨格を有する核酸（ＰＮＡ）；
ホスホロジアミデートモルホリノオリゴヌクレオチド（ＰＭＯ）；
トリシクロ−ＤＮＡ；
デコイＯＤＮ（二本鎖オリゴヌクレオチド）；
触媒ＲＮＡ配列（ＲＮＡｉ）；
リボザイム；
アプタマー；
シュピーゲルマー（Ｌ−立体配座オリゴヌクレオチド）；
ＣｐＧオリゴマー等、例えば、
その内容が参照により本明細書に組み込まれている、Tides 2002, Oligonucleotide and Peptide Technology Conferences, May 6-8, 2002, Las Vegas, NV及びOligonucleotide & Peptide Technologies, 18th & 19th November, 2003, Hamburg, Germanyにて開示されているものが挙げられる。

ナノ粒子中に封入された核酸の別の態様において、オリゴヌクレオチドは、以下の表２に列挙されているものを含む、任意の適切な当技術分野で公知のヌクレオチド類似体及び誘導体を場合により含むことができる。

一つの好ましい態様において、ナノ粒子に封入された標的オリゴヌクレオチドとしては、例えばそれだけに限らないが、癌遺伝子、プロ血管新生経路遺伝子、プロ細胞増殖経路遺伝子、ウイルス感染因子遺伝子及びプロ炎症経路遺伝子が挙げられる。

一つの好ましい実施形態において、本明細書に記載のナノ粒子中に封入されたオリゴヌクレオチドは、腫瘍細胞を標的とするか、又は腫瘍細胞及び／もしくは抗癌療法に対する腫瘍細胞の耐性と関連する遺伝子もしくはタンパク質の発現のダウンレギュレートに関わる。例えば、癌と関連する任意の当技術分野で公知の細胞タンパク質をダウンレギュレートするためのアンチセンスオリゴヌクレオチド、例えばＢＣＬ−２は本発明で使用できる。その内容が参照により本明細書に組み込まれている、２００４年４月９日に出願された米国特許出願公開第１０／８２２，２０５号明細書を参照のこと。好ましい治療用オリゴヌクレオチドの非限定的例としては、アンチセンスｂｃｌ−２オリゴヌクレオチド、アンチセンスＨＩＦ−１αオリゴヌクレオチド、アンチセンススルビビンオリゴヌクレオチド、アンチセンスＥｒｂＢ３オリゴヌクレオチド、アンチセンスＰＩＫ３ＣＡオリゴヌクレオチド、アンチセンスＨＳＰ２７オリゴヌクレオチド、アンチセンスアンドロゲン受容体オリゴヌクレオチド、アンチセンスＧｌｉ２オリゴヌクレオチド及びアンチセンスβカテニンオリゴヌクレオチドが挙げられる。

より好ましくは、本明細書に記載の本発明によるオリゴヌクレオチドとしては、ホスホロチオエート骨格及びＬＮＡが挙げられる。

一つの好ましい実施形態において、オリゴヌクレオチドは、例えばアンチセンススルビビンＬＮＡ、アンチセンスＥｒｂＢ３ＬＮＡ又はアンチセンスＨＩＦ１−αＬＮＡであってよい。

別の好ましい実施形態において、オリゴヌクレオチドは、例えば、Ｇｅｎａｓｅｎｓｅ（登録商標）（別名オブリメルセンナトリウム、ＧｅｎｔａＩｎｃ．、ＢｅｒｋｅｌｅｙＨｅｉｇｈｔｓ、ＮＪ製）と同一又は実質的に同様のヌクレオチド配列を有するオリゴヌクレオチドあってよい。Ｇｅｎａｓｅｎｓｅ（登録商標）は、１８−メルホスホロチオエートアンチセンスオリゴヌクレオチド（配列番号４）であり、ヒトｂｃｌ−２ｍＲＮＡの開始配列の最初の六つのコドンに相補的である（ヒトｂｃｌ−２ｍＲＮＡは当技術分野で公知であり、例えば配列番号１９として参照により本明細書に組み込まれている米国特許第６，４１４，１３４号明細書に記載されている）。

企図される好ましい実施形態は、以下を含む：
（ｉ）アンチセンススルビビンＬＮＡオリゴマー（配列番号１）
^ｍＣ_ｓ−Ｔ_ｓ−^ｍＣ_ｓ−Ａ_ｓ−ａ_ｓ−ｔ_ｓ−ｃ_ｓ−ａ_ｓ−ｔ_ｓ−ｇ_ｓ−ｇ_ｓ−^ｍＣ_ｓ−Ａ_ｓ−Ｇ_ｓ−ｃ；
大文字はＬＮＡを表し、「ｓ」はホスホロチオエート骨格を表す。

（ｉｉ）アンチセンスＢｃｌ２ｓｉＲＮＡ：
ＳＥＮＳＥ５’−ｇｃａｕｇｃｇｇｃｃｕｃｕｇｕｕｕｇａｄＴｄＴ−３’（配列番号２）
ＡＮＴＩＳＥＮＳＥ３’−ｄＴｄＴｃｇｕａｃｇｃｃｇｇａｇａｃａａａｃｕ−５’（配列番号３）
ｄＴはＤＮＡを表す。

（ｉｉｉ）Ｇｅｎａｓｅｎｓｅ（ホスホロチオエートアンチセンスオリゴヌクレオチド）：（配列番号４）
ｔ_ｓ−ｃ_ｓ−ｔ_ｓ−ｃ_ｓ−ｃ_ｓ−ｃ_ｓ−ａ_ｓ−ｇ_ｓ−ｃ_ｓ−ｇ_ｓ−ｔ_ｓ−ｇ_ｓ−ｃ_ｓ−ｇ_ｓ−ｃ_ｓ−ｃ_ｓ−ｃ_ｓ−ａ_ｓ−ｔ
小文字はＤＮＡを表し、「ｓ」はホスホロチオエート骨格を表す。

（ｉｖ）アンチセンスＨＩＦ１αＬＮＡオリゴマー（配列番号５）
Ｔ_ｓＧ_ｓＧ_ｓｃ_ｓａ_ｓａ_ｓｇ_ｓｃ_ｓａ_ｓｔ_ｓｃ_ｓｃ_ｓＴ_ｓＧ_ｓＴ_ｓａ
大文字はＬＮＡを表し、「ｓ」はホスホロチオエート骨格を表す。

（ｖ）アンチセンスＥｒｂＢ３ＬＮＡオリゴマー（配列番号６）
Ｔ_ｓＡ_ｓＧ_ｓｃ_ｓｃ_ｓｔ_ｓｇ_ｓｔ_ｓｃ_ｓａ_ｓｃ_ｓｔ_ｓｔ_ｓ ^ＭｅＣ_ｓＴ_ｓ ^ＭｅＣ_ｓ
大文字はＬＮＡを表し、「ｓ」はホスホロチオエート骨格を表す。

（ｖｉ）アンチセンスＥｒｂＢ３ＬＮＡオリゴマー（配列番号７）
Ｇ_ｓ ^ＭｅＣ_ｓＴ_ｓｃ_ｓｃ_ｓａ_ｓｇ_ｓａ_ｓｃ_ｓａ_ｓｔ_ｓｃ_ｓａ_ｓ ^ＭｅＣ_ｓＴ_ｓ ^ＭｅＣ
大文字はＬＮＡを表し、「ｓ」はホスホロチオエート骨格を表す。

（ｖｉｉ）アンチセンスＰＩＫ３ＣＡＬＮＡオリゴマー（配列番号８）
Ａ_ｓＧ_ｓ ^ＭｅＣ_ｓｃ_ｓａ_ｓｔ_ｓｔ_ｓｃ_ｓａ_ｓｔ_ｓｔ_ｓｃ_ｓｃ_ｓＡ_ｓ ^ＭｅＣ_ｓ ^ＭｅＣ
大文字はＬＮＡを表し、「ｓ」はホスホロチオエート骨格を表す。

（ｖｉｉｉ）アンチセンスＰＩＫ３ＣＡＬＮＡオリゴマー（配列番号９）
Ｔ_ｓＴ_ｓＡ_ｓｔ_ｓｔ_ｓｇ_ｓｔ_ｓｇ_ｓｃ_ｓａ_ｓｔ_ｓｃ_ｓｔ_ｓ ^ＭｅＣ_ｓＡ_ｓＧ
大文字はＬＮＡを表し、「ｓ」はホスホロチオエート骨格を表す。

（ｉｘ）アンチセンスＨＳＰ２７ＬＮＡオリゴマー（配列番号１０）
Ｃ_ｓＧ_ｓＴ_ｓｇ_ｓｔ_ｓａ_ｓｔ_ｓｔ_ｓｔ_ｓｃ_ｓｃ_ｓｇ_ｓｃ_ｓＧ_ｓＴ_ｓＧ
大文字はＬＮＡを表し、「ｓ」はホスホロチオエート骨格を表す。

（ｘ）アンチセンスＨＳＰ２７ＬＮＡオリゴマー（配列番号１１）
Ｇ_ｓＧ_ｓ ^ＭｅＣ_ｓａ_ｓｃ_ｓａ_ｓｇ_ｓｃ_ｓｃ_ｓａ_ｓｇ_ｓｔ_ｓｇ_ｓＧ_ｓ ^ＭｅＣ_ｓＧ
大文字はＬＮＡを表し、「ｓ」はホスホロチオエート骨格を表す。

（ｘｉ）アンチセンスアンドロゲン受容体ＬＮＡオリゴマー（配列番号１２）
^ＭｅＣ_ｓ ^ＭｅＣ_ｓ ^ＭｅＣ_ｓａ_ｓａ_ｓｇ_ｓｇ_ｓｃ_ｓａ_ｓｃ_ｓｔ_ｓｇ_ｓｃ_ｓＡ_ｓＧ_ｓＡ
大文字はＬＮＡを表し、「ｓ」はホスホロチオエート骨格を表す。

（ｘｉｉ）アンチセンスアンドロゲン受容体ＬＮＡオリゴマー（配列番号１３）
Ａ_ｓ ^ＭｅＣ_ｓ ^ＭｅＣ_ｓａ_ｓａ_ｓｇ_ｓｔ_ｓｔ_ｓｔ_ｓｃ_ｓｔ_ｓｔ_ｓｃ_ｓＡ_ｓＧ_ｓ ^ＭｅＣ
大文字はＬＮＡを表し、「ｓ」はホスホロチオエート骨格を表す。

（ｘｉｉｉ）アンチセンスＧＬＩ２ＬＮＡオリゴマー（配列番号１４）
^ＭｅＣ_ｓＴ_ｓ ^ＭｅＣ_ｓｃ_ｓｔ_ｓｔ_ｓｇ_ｓｇ_ｓｔ_ｓｇ_ｓｃ_ｓａ_ｓｇ_ｓＴ_ｓ ^ＭｅＣ_ｓＴ
大文字はＬＮＡを表し、「ｓ」はホスホロチオエート骨格を表す。

（ｘｉｖ）アンチセンスＧＬＩ２ＬＮＡオリゴマー（配列番号１５）
Ｔ_ｓ ^ＭｅＣ_ｓＡ_ｓｇ_ｓａ_ｓｔ_ｓｔ_ｓｃ_ｓａ_ｓａ_ｓａ_ｓｃ_ｓ ^ＭｅＣ_ｓ ^ＭｅＣ_ｓＡ
大文字はＬＮＡを表し、「ｓ」はホスホロチオエート骨格を表す。

（ｘｖ）アンチセンスβカテニンＬＮＡオリゴマー（配列番号１６）
Ｇ_ｓＴ_ｓＧ_ｓｔ_ｓｔ_ｓｃ_ｓｔ_ｓａ_ｓｃ_ｓａ_ｓｃ_ｓｃ_ｓａ_ｓＴ_ｓＴ_ｓＡ
大文字はＬＮＡを表し、「ｓ」はホスホロチオエート骨格を表す。

小文字はＤＮＡ単位を表し、太字の大文字はＬＮＡ、例えばβ−Ｄ−オキシ−ＬＮＡ単位を表す。ＬＮＡモノマー中の全てのシトシン塩基は、５−メチルシトシンである。下付き「ｓ」はホスホロチオエート結合を表す。

ＬＮＡは、以下に示すような２’−Ｏ、４’−Ｃメチレンビシクロヌクレオチドを含む：

各々の内容が参照により本明細書に組み込まれている、「LNA Oligonucleotides and the Treatment of Cancer」という表題の米国特許出願第１１／２７２，１２４号及び「Oligomeric Compounds for the Modulation Survivin Expression」という表題の米国特許出願第１０／７７６，９３４号に開示されているスルビビンＬＮＡの詳細な説明を参照のこと。ＨＩＦ−１α調節については、米国特許第７，５８９，１９０号明細書及び米国特許出願公開第２００４／００９６８６４号明細書、ＥｒｂＢ３調節については米国特許出願公開第２００８／０３１８８９４号明細書及びＰＣＴ／ＵＳ０９／０６３３５７、ＰＩＫ３ＣＡ調節については米国特許出願公開第２００９／０１９２１１０号明細書、ＨＳＰ２８調節についてはＰＣＴ／ＩＢ０９／０５２８６０号、アンドロゲン受容体調節については米国特許出願公開第２００９／０１８１９１６号明細書、βカテニン調節については「RNA Antagonists Targeting GLI2」という表題の米国仮特許出願第６１／０８１，１３５号及びＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＩＢ０９／００６４０７号、並びに米国特許出願公開第２００９／０００５３３５号明細書及び第２００９／０２０３１３７号明細書も参照のこと。適切な標的遺伝子のさらなる例は、その内容が参照により本明細書に組み込まれている、ＷＯ０３／７４６５４、ＰＣＴ／ＵＳ０３／０５０２８及び米国特許出願第１０／９２３，５３６号に記載されている。

さらなる実施形態において、本明細書に記載のナノ粒子は、エンドソーム放出促進群に放出可能なように結合したオリゴヌクレオチドを含むことができる。エンドソーム放出促進群、例えば富ヒスチジンペプチドは、エンドソーム膜を破壊し、それにより治療薬の細胞質送達を促進することができる。富ヒスチジンペプチドは、細胞質へのオリゴヌクレオチドのエンドソーム放出を促進する。次いで、細胞内に放出されたオリゴヌクレオチドは、核へ移行できる。オリゴヌクレオチド−富ヒスチジンペプチド複合体のさらなる詳細は、各々の内容が参照により本明細書に組み込まれている、２００８年１１月１７日に出願された米国仮特許出願第６１／１１５，３５０号及び第６１／１１５，３２６号、並びに同日に出願された「Releasable Conjugates For Nucleic Acids Delivery Systems」という表題のＰＣＴ特許出願第＿＿＿＿号に記載されている。

６．標的基
場合により／好ましくは、本明細書に記載のナノ粒子組成物は、特定の細胞型又は組織型に対する標的リガンドをさらに含む。標的基は、リンカー分子、例えばアミド（amide）、アミド（amido）、カルボニル、エステル、ペプチド、ジスルフィド、シラン、ヌクレオシド、脱塩基ヌクレオシド、ポリエーテル、ポリアミン、ポリアミド、ペプチド、炭水化物、脂質、ポリ炭化水素、リン酸エステル、ホスホルアミデート、チオホスフェート、アルキルホスフェート、マレイミジルリンカー又は光解離性リンカーを用いてナノ粒子組成物（好ましくは融合性脂質及びＰＥＧ脂質）の任意の成分に結合できる。当技術分野で公知の任意の技法は、過度に実験するまでもなくナノ粒子組成物の任意の成分に標的基を結合させるのに使用できる。

例えば、標的化剤を、ＰＥＧ脂質のポリマー部分に結合させて、ナノ粒子をインビボで標的領域に導くことができる。本明細書に記載のナノ粒子の標的送達は、治療用核酸を封入するナノ粒子の細胞取込みを促進し、それにより治療効果を増強させる。ある種の態様において、いくつかの細胞透過性ペプチドを、腫瘍部位への標的送達のため様々な標的ペプチドと置き換えてもよい。

本発明の一つの好ましい態様において、標的部位、例えば一本鎖抗体（ＳＣＡ）又は一本鎖抗原結合抗体、モノクローナル抗体、細胞接着性ペプチド、例えばＲＧＤペプチド及びセレクチン、細胞透過性ペプチド（ＣＰＰ）、例えばＴＡＴ、ペネトラチン及び（Ａｒｇ）_９、受容体リガンド、標的炭水化物分子又はレクチンにより、ナノ粒子は標的領域を特異的に対象とすることができる。その内容が参照により本明細書に組み込まれている、J Pharm Sci. 2006 Sep; 95(9): 1856-72 Cell adhesion molecules for targeted drug deliveryを参照のこと。

好ましい標的部分としては、一本鎖抗体（ＳＣＡ）又は抗体の一本鎖可変フラグメント（ｓＦｖ）が挙げられる。ＳＣＡは、標的腫瘍細胞の特異的分子を結合するか、又は認識することができる抗体のドメインを含有する。抗原結合部位を維持することに加えて、ＰＥＧ脂質に結合したＳＣＡは、抗原性を低下させ、血流中のＳＣＡの半減期を増大することができる。

「一本鎖抗体」（ＳＣＡ）、「一本鎖抗原結合分子又は抗体」又は「一本鎖Ｆｖ」（ｓＦｖ）という用語は、互換的に用いられる。一本鎖抗体は、抗原に対する結合親和性を有する。一本鎖抗体（ＳＣＡ）又は一本鎖Ｆｖｓは、いくつかの方法で構築でき、既に構築されている。一本鎖抗原結合タンパク質の理論及び産生の詳細は、それらの各々の内容が参照により本明細書に組み込まれている、同一出願人による米国特許出願第１０／９１５，０６９号明細書及び米国特許第６，８２４，７８２号明細書において見出される。

通常、ＳＣＡ又はＦｖドメインは、２６−１０、ＭＯＰＣ３１５、７４１Ｆ８、５２０Ｃ９、ＭｃＰＣ６０３、Ｄ１．３、マウスｐｈＯｘ、ヒトｐｈＯｘ、ＲＦＬ３．８ｓＴＣＲ、１Ａ６、Ｓｅ１５５−４、１８−２−３、４−４−２０、７Ａ４−１、Ｂ６．２、ＣＣ４９、３Ｃ２、２ｃ、ＭＡ−１５Ｃ５／Ｋ_１２ＧＯ、Ｏｘ等として文献中でそれらの略語により知られているモノクローナル抗体の中から選択できる（Huston, J. S. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85: 5879-5883(1988)；Huston, J. S. et al., SIM News 38(4)(Supp): 11(1988)；McCartney, J. et al., ICSU Short Reports 10: 114(1990)；McCartney, J. E. et al., unpublished results(1990)；Nedelman, M. A. et al., J. Nuclear Med. 32(Supp.): 1005(1991)；Huston, J. S. et al., In: Molecular Design and Modeling: Concepts and Applications, PartB, edited by J. J. Langone, Methods in Enzymology 203: 46-88(1991)；Huston, J. S. et al., In: Advancesin the Applications of Monoclonal Antibodies in Clinical Oncology, Epenetos、A. A. (Ed.), London, Chapman & Hall(1993)；Bird, R. E. et al., Science 242: 423-426(1988)；Bedzyk, W. D. et al., J. Biol. Chem. 265: 18615-18620(1990)；Colcher, D. et al., J. Nat. Cancer Inst. 82: 1191-1197(1990)；Gibbs, R. A. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88: 4001-4004(1991)；Milenic, D. E. et al., Cancer Research 51: 6363-6371(1991)；Pantoliano, M. W. et al., Biochemistry 30: 10117-10125(1991)；Chaudhary, V. K. et al., Nature 339: 394-397(1989)；Chaudhary, V. K. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87: 1066-1070(1990)；Batra, J. K. et al., Biochem. Biophys. Res. Comm. 171: 1-6(1990)；Batra, J. K. et al., J.Biol. Chem. 265: 15198-15202(1990)；Chaudhary, V. K. et al., Proc. Natl. Acad Sci. USA 87: 9491-9494(1990)；Batra, J. K. et al., Mol. Cell. Biol. 11: 2200-2205(1991)；Brinkmann, U. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88: 8616-8620(1991)；Seetharam, S. et al., J. Biol. Chem. 266: 17376-17381(1991)；Brinkmann, U. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89: 3075-3079(1992)；Glockshuber, R. et al., Biochemistry 29: 1362-1367(1990)；Skerra, A. et al., Bio/Technol. 9: 273-278(1991)；Pack, P. et al., Biochemistry 31: 1579-1534(1992)；Clackson, T. et al., Nature 352: 624-628(1991)；Marks, J. D. et al., J. Mol. Biol. 222: 581-597(1991)；Iverson, B. L. et al., Science 249: 659-662(1990)；Roberts, V. A. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87: 6654-6658(1990)；Condra, J. H. et al., J. Biol. Chem. 265: 2292-2295(1990)；Laroche, Y. et al., J. Biol. Chem. 266: 16343-16349(1991)；Holvoet, P. et al., J. Biol. Chem. 266: 19717-19724(1991)；Anand, N. N. et al., J. Biol. Chem. 266: 21874-21879(1991)；Fuchs, P. et al., Biol Technol. 9: 1369-1372(1991)；Breitling, F. et al., Gene 104: 104-153(1991)；Seehaus, T. et al., Gene 114: 235-237(1992)；Takkinen, K. et al., Protein Engng. 4: 837-841(1991)；Dreher, M. L. et al., J.Immunol. Methods 139: 197-205(1991)；Mottez, E. et al., Eur. J. Immunol. 21: 467-471(1991)；Traunecker, A. et al., Acad. Sci. USA 88: 8646-8650(1991)；Traunecker, A.等、EMBOJ. 10:3655-3659(1991); Hoo, W. F. S. et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89: 4759-4763(1993)も参照のこと）。前記刊行物は各々参照により本明細書に組み込まれている。

標的基の非限定的リストは、血管内皮細胞増殖因子、ＦＧＦ２、ソマトスタチン及びソマトスタチン類似体、トランスフェリン、メラノトロピン、ＡｐｏＥ及びＡｐｏＥペプチド、フォンウィルブランド因子及びフォンウィルブランド因子ペプチド、アデノウイルスファイバータンパク質及びアデノウイルスファイバータンパク質ペプチド、ＰＤ１及びＰＤ１ペプチド、ＥＧＦ及びＥＧＦペプチド、ＲＧＤペプチド、葉酸塩、アニサミド等を含む。当業者により認識される他の任意選択の標的化剤も、本明細書に記載のナノ粒子で使用できる。

一つの好ましい実施形態において、本明細書に記載の化合物に有用な標的化剤としては、一本鎖抗体（ＳＣＡ）、ＲＧＤペプチド、セレクチン、ＴＡＴ、ペネトラチン、（Ａｒｇ）_９、葉酸、アニサミド等が挙げられ、これらの薬剤の好ましい構造の一部は以下のとおりである：
Ｃ−ＴＡＴ：（配列番号：１７）ＣＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ；
Ｃ−（Ａｒｇ）９：（配列番号：１８）ＣＲＲＲＲＲＲＲＲＲ；
ＲＧＤは、直鎖又は環状の

であってよく、
葉酸は

の残基であり、
アニサミドは、ｐ−ＭｅＯ−Ｐｈ−Ｃ（＝Ｏ）ＯＨである。

Ａｒｇ_９は、例えばＣＲＲＲＲＲＲＲＲＲを結合するためのシステインを含むことができ、ＴＡＴは、ＣＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲＣ等のペプチドの末端でさらなるシステインを付加できる。

本発明の目的のために、明細書及び図面で使用する略語は、以下の構造を表す：
（ｉ）Ｃ−ｄｉＴＡＴ（配列番号１９）＝ＣＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲ−ＮＨ_２；
（ｉｉ）直鎖ＲＧＤ（配列番号２０）＝ＲＧＤＣ；
（ｉｉｉ）環状ＲＧＤ（配列番号２１及び配列番号２２）＝ｃ−ＲＧＤＦＣ又はｃ−ＲＧＤＦＫ；
（ｉｖ）ＲＧＤ−ＴＡＴ（配列番号２３）＝ＣＹＧＲＫＫＲＲＱＲＲＲＧＧＧＲＧＤＳ−ＮＨ_２及び
（ｖ）Ａｒｇ_９（配列番号２４）＝ＲＲＲＲＲＲＲＲＲ

あるいは、標的基は、糖及び炭水化物、例えばガラクトース、ガラクトサミン及びＮ−アセチルガラクトサミン；ホルモン、例えばエストロゲン、テストステロン、プロゲステロン、グルココルチゾン、アドレナリン、インスリン、グルカゴン、コルチゾール、ビタミンＤ、甲状腺ホルモン、レチノイン酸及び成長ホルモン；成長因子、例えばＶＥＧＦ、ＥＧＦ、ＮＧＦ及びＰＤＧＦ；神経伝達物質、例えばＧＡＢＡ、グルタメート、アセチルコリン；ＮＯＧＯ；イノシトール三リン酸；エピネフリン；ノルエピネフリン；一酸化窒素、ペプチド、ビタミン、例えば葉酸及びピリドキシン、薬物、抗体及びインビボ又はインビトロで細胞表面受容体と相互作用し得る任意の他の分子が挙げられる。

Ｄ．ナノ粒子の調製
本明細書に記載のナノ粒子は、過度に実験するまでもなく当技術分野で公知の方法で調製できる。

例えば、ナノ粒子は、第１の容器に水溶液（又は比較試験用に核酸なしの水溶液）中のオリゴヌクレオチド等の核酸を用意し、第２の容器に本明細書に記載のナノ粒子組成物を含有する有機脂質溶液を用意して、有機脂質溶液が水溶液と混ざり、核酸を封入するナノ粒子が製造されるように水溶液と有機脂質溶液とを混合することにより調製できる。該方法の詳細は、その内容が参照により本明細書に組み込まれている米国特許出願公開第２００４／０１４２０２５号明細書に記載されている。

あるいは、本明細書に記載のナノ粒子は、有機溶媒を利用して成分の混合中に単相を得る、界面活性剤透析法又は変性逆相法等の当技術分野で公知の任意の方法により調製できる。界面活性剤透析法では、核酸（即ち、ｓｉＲＮＡ）をカチオン性脂質の洗浄溶液と接触させ、被覆核酸複合体を形成する。

本発明の一実施形態において、カチオン性脂質とオリゴヌクレオチド等の核酸とを合わせて、約１：２０〜約２０：１の電荷比、好ましくは約１：５〜約５：１の比、より好ましくは約１：２〜約２：１の比を得る。

本発明の一実施形態において、カチオン性脂質とオリゴヌクレオチド等の核酸とを合わせて、約１：１〜約２０：１の電荷比、約１：１〜約１２：１の比、より好ましくは約２：１〜約６：１の比を得る。あるいは、ナノ粒子組成物の窒素とホスフェート（Ｎ／Ｐ）との比は、約２：１〜約５：１（即ち、２．５：１）の範囲である。

別の実施形態において、本明細書に記載のナノ粒子は、デュアルポンプシステムを用いて調製できる。一般に、該方法は、第１の容器に核酸を含有する水溶液及び第２の容器に記載のナノ粒子組成物を含有する脂質溶液を用意することを含む。二つの溶液をデュアルポンプシステムを用いて混合し、ナノ粒子を得る。次いで、得られた混合溶液を水性緩衝液で希釈し、形成したナノ粒子を透析により精製するか、且つ／又は単離することができる。ナノ粒子は、０．２２μｍのフィルターを介して濾過することにより滅菌されるようにさらに処理してもよい。

核酸を含有するナノ粒子は、直径約５〜約３００ｎｍの範囲である。好ましくは、ナノ粒子は、動的光散乱法（ＤＬＳ）を用いる測定により、約１５０ｎｍ（例えば約５０〜１５０ｎｍ）未満の中位径、より好ましくは約１００ｎｍ未満の中位径を有する。ナノ粒子の大部分は、約３０〜１００ｎｍ（例えば５９．５、６６、６８、７６、８０、９３、９６ｎｍ）、好ましくは約６０〜約９５ｎｍの中位径を有する。当業者は、ＤＬＳ法と比較したとき、ＴＥＭ等の他の当技術分野で公知の技法を用いる測定により、中位径数が半分に減少し得ることを認識されよう。本発明のナノ粒子は、多分散性により示されるように、実質的にサイズが均一である。

場合により、ナノ粒子は、当技術分野で公知の任意の方法によりサイジングできる。サイズは当業者により所望されるように制御できる。サイジングは、所望のサイズ範囲を得、ナノ粒子サイズの分布を比較的狭めるために行うことができる。ナノ粒子を所望のサイズにサイジングするためにいくつかの技法を利用できる。その内容が参照により本明細書に組み込まれている、例えば、米国特許第４，７３７，３２３号明細書参照。

本発明は、核酸（例えば、ＬＮＡ又はｓｉＲＮＡ）が脂質多重膜構造（即ち、脂質二重層）に封入され、分解から保護されるように、血清安定ナノ粒子を調製する方法を提供する。本明細書に記載のナノ粒子は、水溶液中で安定である。ナノ粒子に含まれる核酸は、体液中に存在するヌクレアーゼから保護される。

さらに、本発明に従って調製されるナノ粒子は、生理学的ｐＨで中性であるか、又は正に帯電していることが好ましい。

本明細書に記載のナノ粒子組成物を用いて調製されるナノ粒子又はナノ粒子複合体は、（ｉ）カチオン性脂質、（ｉｉ）式（Ｉ）の化合物を含む融合性脂質、（ｉｉｉ）ＰＥＧ脂質及び（ｉｖ）オリゴヌクレオチド等の核酸を含む。

一実施形態において、ナノ粒子組成物は、
カチオン性脂質、ジアシルホスファチジルエタノールアミンを場合により含む式（Ｉ）の化合物、ホスファチジルエタノールアミンに結合したＰＥＧ（ＰＥＧ−ＰＥ）及びコレステロールと、
カチオン性脂質、ジアシルホスファチジルコリンを場合により含む式（Ｉ）の化合物、ホスファチジルエタノールアミンに結合したＰＥＧ（ＰＥＧ−ＰＥ）及びコレステロールと、
カチオン性脂質、ジアシルホスファチジルエタノールアミン、ジアシルホスファチジルコリンを場合により含む式（Ｉ）の化合物、ジアシルホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミンに結合したＰＥＧ（ＰＥＧ−ＰＥ）及びコレステロールと、
カチオン性脂質、ジアシルホスファチジルエタノールアミンを場合により含む式（Ｉ）の化合物、セラミドに結合したＰＥＧ（ＰＥＧ−Ｃｅｒ）及びコレステロールと、
カチオン性脂質、ジアシルホスファチジルエタノールアミンを場合により含む式（Ｉ）の化合物、ホスファチジルエタノールアミンに結合したＰＥＧ（ＰＥＧ−ＰＥ）、セラミドに結合したＰＥＧ（ＰＥＧ−Ｃｅｒ）及びコレステロールと
の混合物を含む。

さらなるナノ粒子組成物は、当技術分野で公知のカチオン性脂質（複数可）を含有する組成物を修飾することにより調製できる。式（Ｉ）の化合物を含有するナノ粒子組成物は、当技術分野で公知のカチオン性脂質を加えることにより修飾できる。その内容が参照により本明細書に組み込まれている米国特許出願公開第２００８／００２００５８号明細書の表ＩＶに記載の当技術分野で公知の組成物を参照のこと。

ナノ粒子の調製のためのナノ粒子組成物の非限定的リストを表３に示す。

一実施形態において、ナノ粒子中のカチオン性脂質１：化合物１０：コレステロール：ＰＥＧ−ＤＳＰＥ：Ｃ１６ｍＰＥＧ−セラミドのモル比は、各々約１８％：６０％：２０％：１％：１％のモル比である（試料番号８）。

別の実施形態において、ナノ粒子は、カチオン性脂質１、化合物１０、コレステロール及びＣ１６ｍＰＥＧ−セラミドをナノ粒子組成物中に存在する総脂質の約１７％：６０％：２０％：３％のモル比で含有する（試料番号７）。

一実施形態において、組成物中に含有されるカチオン性脂質は、次の構造式：

を有する。

さらなる実施形態において、これらのナノ粒子組成物は、次の構造式を有する放出可能ポリマー脂質

を含有する。

そこでＰＥＧ脂質のポリマー部分は、約２０００ダルトンの数平均分子量を有する。

本明細書で使用するモル比は、ナノ粒子組成物中に存在する総脂質に対する量を指す。

Ｆ．治療方法
本明細書に記載のナノ粒子は、単独で、又は他の療法と組み合わせて、細胞又は組織における標的遺伝子の発現レベルに関連しているか、又はそれに反応する任意の特質、疾患又は状態を予防するか、抑制するか、低減するか又は治療するための治療において使用できる。該方法は、本明細書に記載のナノ粒子を、それを必要とする哺乳動物に投与することを含む。

本発明の一態様は、治療薬、例えば核酸／オリゴヌクレオチドを哺乳動物細胞にインビボ及び／又はインビトロで導入するか、又は送達する方法を提供する。

本発明による方法は、細胞を本明細書に記載の化合物と接触させることを含む。送達は、インビボで適切な医薬組成物の一部として行われてもよく、又はエクスビボ環境もしくはインビトロ環境で細胞に対して直接行われてもよい。

本発明は、オリゴヌクレオチドを哺乳動物に導入するのに有用である。本明細書に記載の化合物は、哺乳動物、好ましくはヒトに投与できる。

本発明によれば、本発明は、哺乳動物の細胞又は組織において遺伝子発現を抑制するか、又はダウンレギュレート（もしくは調節）する方法を好ましくは提供する。遺伝子発現のダウンレギュレーション又は抑制は、インビボ、エクスビボ及び／又はインビトロで実現できる。該方法は、ヒトの細胞又は組織と核酸を封入するナノ粒子とを接触させるか、又はナノ粒子をそれを必要とする哺乳動物に投与することを含む。接触が起こると、本明細書に記載のナノ粒子なしで観察されたものと比較して、少なくとも約１０％、好ましくは少なくとも約２０％以上（例えば、少なくとも約２５％、３０％、４０％、５０％、６０％）がインビボ、エクスビボ又はインビトロで実現された場合に、例えばｍＲＮＡレベル又はタンパク質レベルでの遺伝子発現の抑制又はダウンレギュレーションが成功したとみなされるものとする。

本発明の目的のために、「抑制する」又は「ダウンレギュレートする」は、一つ又は複数のタンパク質サブユニットをコードする標的遺伝子の発現、又はＲＮＡもしくは等価ＲＮＡのレベル、あるいは一つ又は複数のタンパク質サブユニットの活性が、本明細書に記載のナノ粒子の不在化で観察されたものと比較して低減されることを意味すると理解されるものとする。

一つの好ましい実施形態において、標的遺伝子としては、例えばそれだけに限らないが、癌遺伝子、プロ血管新生経路遺伝子、プロ細胞増殖経路遺伝子、ウイルス感染因子遺伝子及びプロ炎症経路遺伝子が挙げられる。

好ましくは、標的遺伝子の遺伝子発現は、癌細胞又は癌組織、例えば脳腫瘍細胞、乳癌細胞、結腸直腸癌細胞、胃癌細胞、肺癌細胞、口腔癌細胞、膵臓癌細胞、前立腺癌細胞、皮膚癌細胞又は子宮頸癌細胞において抑制される。癌細胞又は癌組織は、以下のもの：固形腫瘍、リンパ腫、小細胞肺癌、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、膵臓癌、膠芽腫、卵巣癌、胃癌、乳癌、結腸直腸癌、前立腺癌、子宮頸癌、脳腫瘍、ＫＢ癌、肺癌、結腸癌、表皮癌等の一つ又は複数に由来するものであってよい。

一つの特定の実施形態において、本明細書に記載の方法によるナノ粒子は、例えばアンチセンスｂｃｌ−２オリゴヌクレオチド、アンチセンスＨＩＦ−１αオリゴヌクレオチド、アンチセンススルビビンオリゴヌクレオチド、アンチセンスＥｒｂＢ３オリゴヌクレオチド、アンチセンスＰＩＫ３ＣＡオリゴヌクレオチド、アンチセンスＨＳＰ２７オリゴヌクレオチド、アンチセンスアンドロゲン受容体オリゴヌクレオチド、アンチセンスＧｌｉ２オリゴヌクレオチド及びアンチセンスβカテニンオリゴヌクレオチドを含む。

本発明によれば、ナノ粒子はオリゴヌクレオチド（各核酸が天然核酸又は修飾核酸である、配列番号１、配列番号２及び３、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５並びに配列番号１６）を含むことができ、それを使用できる。本明細書で企図される療法は、前記ナノ粒子に封入された核酸を使用する。一実施形態において、８個以上の連続アンチセンスヌクレオチドを含有する治療用ヌクレオチドを治療で使用できる。

あるいは、哺乳動物を治療する方法も提供される。該方法は、有効量の本明細書に記載のナノ粒子を含有する医薬組成物を、それを必要とする患者に投与することを含む。該方法の有効性は、治療される状態に対する核酸の有効性に依存するであろう。本発明は、哺乳動物における様々な医学的状態を治療する方法を提供する。該方法は、有効量の封入された治療用核酸を含有するナノ粒子を、このような治療を必要とする哺乳動物に投与することを含む。本明細書に記載のナノ粒子は、とりわけ、疾患、例えば（それだけに限らないが）癌、炎症性疾患及び自己免疫疾患を治療するのに有用である。

一実施形態において、有効量の本明細書に記載のナノ粒子を含有する医薬組成物を、それを必要とする患者に投与することを含む、悪性腫瘍又は癌を有する患者を治療する方法も提供される。治療される癌は、以下のもの：固形腫瘍、リンパ腫、小細胞肺癌、急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、膵臓癌、膠芽腫、卵巣癌、胃癌、結腸直腸癌、前立腺癌、子宮頸癌、脳腫瘍、ＫＢ癌、肺癌、結腸癌、表皮癌等の一つ又は複数であってよい。ナノ粒子は、標的遺伝子の遺伝子発現をダウンレギュレートすることにより、新生物疾患を治療し、全身腫瘍組織量を減少させ、新生物の転移を予防し、哺乳動物における腫瘍／新生物の増殖の再発を予防するのに有用である。例えば、ナノ粒子は、転移性疾患（即ち、肺に転移する癌）の治療に有用である。

さらに別の態様において、本発明は、インビボ又はインビトロで癌細胞の増殖又は成長を抑制する方法を提供する。該方法は、癌細胞を本明細書に記載のナノ粒子と接触させることを含む。一実施形態において、本発明は、細胞がＥｒｂＢ３遺伝子を発現するインビボ又はインビトロで癌の増殖を抑制する方法を提供する。

別の態様において、本発明は、例えば核においてＥｒｂＢ３ｍＲＮＡに結合し得る、癌細胞内に核酸（例えば、アンチセンスＥｒｂＢ３ＬＮＡオリゴヌクレオチド）を送達させる手段を提供する。結果として、ＥｒｂＢ３タンパク質発現が抑制され、それにより癌細胞の増殖が抑制される。該方法は、オリゴヌクレオチド（例えば、ＬＮＡを含むアンチセンスオリゴヌクレオチド）を癌細胞に導入し、癌細胞又は癌組織における標的遺伝子（例えばスルビビン、ＨＩＦ−１α又はＥｒｂＢ３）発現を減少させる。

あるいは、本発明は、癌細胞のアポトーシスを調節する方法を提供する。さらに別の態様において、インビボ又はインビトロで化学療法剤に対する癌細胞又は癌組織の感受性を高める方法も提供される。

さらに別の態様において、インビボ又はインビトロで腫瘍細胞を殺滅する方法が提供される。該方法は、本明細書に記載の化合物を腫瘍細胞に導入して、ＥｒｂＢ３遺伝子等の遺伝子発現を減少させるステップと、腫瘍細胞と、腫瘍細胞の一部を殺滅するのに十分な量の少なくとも１種の抗癌剤（例えば、化学療法剤）とを接触させるステップとを含む。したがって、殺滅される腫瘍細胞部分は、本明細書に記載のナノ粒子の不在化で同量の化学療法剤により殺滅されるであろう部分よりも大きくてよい。

本発明のさらなる態様において、抗癌剤／化学療法剤は、本明細書に記載の化合物と組み合わせて、同時に又は順次に使用できる。本明細書に記載の化合物は、抗癌剤の前に、又はそれと同時に、あるいは抗癌剤の投与後に投与できる。したがって、本明細書に記載のナノ粒子は、化学療法剤の治療前、治療中又は治療後に投与できる。

さらにさらなる態様は、相乗的又は付加的な利益のために本明細書に記載の本発明の化合物と他の抗癌療法とを組み合わせることを含む。

あるいは、本明細書に記載のナノ粒子組成物は、哺乳動物に対して負電荷又は中性電荷を好ましくは有する、医薬活性剤を送達するために使用できる。医薬活性剤／化合物を封入するナノ粒子は、それを必要とする哺乳動物に投与できる。医薬活性剤／化合物は、低分子量の分子を含む。通常、医薬活性剤は、約１５００ダルトン未満（即ち１０００ダルトン未満）の分子量を有する。

さらなる実施形態において、本明細書に記載の化合物は、核酸、医薬活性剤又はそれらの組合せを送達するために使用できる。

さらにさらなる実施形態において、治療と関連するナノ粒子は、相乗効果の利用のために一つ又は複数の治療用核酸（同一又は異なるいずれか、例えば同一又は異なるオリゴヌクレオチド）及び／又は一つもしくは複数の医薬活性剤の混合物を含有できる。

Ｇ．ナノ粒子の医薬組成物／医薬製剤
本明細書に記載のナノ粒子を含む医薬組成物／医薬製剤は、薬学的に使用できる製剤への活性化合物の加工を促進する賦形剤及び補助剤を含む、一つ又は複数の生理学的に許容される担体と共に製剤化できる。適切な製剤は、選択される投与経路、即ち、局所治療であるか、又は全身治療であるかに依存する。

適切な形態は、ある程度、経口、経皮又は注射等の使用又は侵入経路に依存する。適切な製剤を調製する当技術分野で公知の考慮因子としては、それだけに限らないが、組成物又は製剤がその効果を発揮することを妨げるであろう毒性及び任意の欠点が挙げられる。

本明細書に記載のナノ粒子の医薬組成物の投与は、経口、経肺、局所又は非経口であってよい。局所投与としては、それだけに限らないが、例えば膣送達及び直腸送達を含む、粘膜を介することを含む、表皮、経皮、眼の経路を介した投与が挙げられる。静脈内、動脈内、皮下、腹腔内又は筋肉内の注射又は注入を含む非経口投与も企図される。

一つの好ましい実施形態において、治療用オリゴヌクレオチドを含有するナノ粒子は、静脈内（ｉ．ｖ．）又は腹腔内（ｉ．ｐ．）に投与される。本発明の多くの態様において、非経口経路が好ましい。

それだけに限らないが静脈注射、筋肉内注射及び皮下注射を含む注射について、本発明のナノ粒子は、水溶液中で、好ましくは生理学的に相容性の緩衝液、例えば生理食塩水緩衝液中で、又はそれだけに限らないがピロリドン又はジメチルスルホキシドを含む極性溶媒中で製剤化できる。

ナノ粒子は、ボーラス注入又は連続注入用に製剤化されてもよい。注射用製剤は、単位剤形、例えばアンプル又は多用量容器中に存在できる。有用な組成物として、それだけに限らないが、油性又は水性ビヒクル中の懸濁液、溶液又はエマルジョンが挙げられ、賦形剤、例えば懸濁化剤、安定化剤及び／又は分散化剤を含有できる。非経口投与用の医薬組成物としては、水溶性形態の水溶液が挙げられる。水性注射用懸濁液は、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトール又はデキストラン等の懸濁液の粘度を調節する物質を含有できる。懸濁液は、溶液中のナノ粒子の濃度を増加させる適切な安定剤及び／又は薬剤も場合により含有できる。あるいは、ナノ粒子は、適当なビヒクル、例えば滅菌パイロジェンフリー水により使用前に構成するために粉末形態であってもよい。

経口投与について、本明細書に記載のナノ粒子は、ナノ粒子と、当技術分野で周知の薬学的に許容される担体とを合わせることにより製剤化できる。このような担体により、本発明のナノ粒子を、患者の経口摂取用に錠剤、ピル、トローチ、糖衣錠、カプセル、液体、ゲル、シロップ、ペースト、スラリー、溶液、懸濁液、患者の飲料水での希釈用の濃縮液及び懸濁液、患者の食餌での希釈用の予混合剤等に製剤化できる。経口使用のための医薬製剤は、固体賦形剤を使用し、得られた混合物を場合により粉砕して、所望される場合、他の適切な補助剤を加えた後に顆粒の混合物を加工して、錠剤又は糖衣錠の核を得ることにより製造できる。有用な賦形剤としては、特に充填剤、例えば糖（例えばラクトース、スクロース、マンニトール又はソルビトール）、セルロース製剤、例えばトウモロコシデンプン、小麦デンプン、米デンプン及びジャガイモデンプン、並びに他の物質、例えばゼラチン、トラガカントゴム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム及び／又はポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）がある。所望される場合、崩壊剤、例えば架橋ポリビニルピロリドン、寒天又はアルギン酸を加えてもよい。塩、例えばアルギン酸ナトリウムも使用できる。

吸入投与については、本発明のナノ粒子は、圧縮パック又はネブライザーを用いるエアロゾルスプレー、及び適切な噴射剤の形態で好都合に送達できる。

ナノ粒子は、例えば従来の座薬基剤、例えばココアバター又は他のグリセリドを用いて、直腸組成物、例えば座薬又は停留浣腸に製剤化してもよい。

先に記載の製剤に加えて、ナノ粒子は、デポー製剤として製剤化されてもよい。このような長時間作用型製剤は、移植（例えば皮下又は筋肉内）により又は筋肉内注射により投与できる。本発明のナノ粒子は、適切なポリマー材料又は疎水性材料（例えば、薬理学的に許容される油のエマルジョン）と共に、イオン交換樹脂と共に、又はそれだけに限らないが難溶性の塩等の難溶性誘導体としてこの投与経路用に製剤化できる。

さらに、ナノ粒子は、持続放出系、例えばナノ粒子を含有する固体疎水性ポリマーの半透過性マトリックスを用いて送達できる。様々な持続放出材料が確立されており、当業者に周知である。

さらに、抗酸化剤及び懸濁化剤は、本明細書に記載のナノ粒子の医薬組成物中で使用できる。

Ｈ．用量
一つ又は複数の予め選択された遺伝子の発現を抑制するのに適した用量、例えば臨床状況における治療有効量の決定は、特に本明細書の開示内容に照らして、十分当業者の能力の範囲内である。

本発明の方法で使用する任意の治療用核酸について、治療有効量は、最初にインビトロアッセイから推定できる。次いで、投与量は、有効な投与量を含む循環濃度範囲を得るために動物モデルでの使用に対して定式化できる。次いで、このような情報を使用して、患者に有用な投与量をより正確に決定できる。

投与される医薬組成物の量は、そこに含まれる核酸の有効性に依存するであろう。一般に、治療で使用する核酸を含有するナノ粒子の量は、哺乳動物において所望の治療結果を効果的に実現する量である。必然的に、様々なナノ粒子の投与量は、そこに封入された核酸（例えばオリゴヌクレオチド）（又は医薬活性剤）に応じて若干変化するであろう。さらに、投与量は、当然ながら、剤形及び投与経路に応じて変化し得る。しかし、一般に、本明細書に記載のナノ粒子に封入された核酸は、約０．１〜約１ｇ／ｋｇ／週、好ましくは約１〜約５００ｍｇ／ｋｇ、より好ましくは１〜約１００ｍｇ／ｋｇ（即ち、約３〜約９０ｍｇ／ｋｇ／用量）の範囲の量で投与できる。

上に示された範囲は、例示的であり、当業者は、臨床経験及び治療指示に基づき最適な用量を決定するであろう。さらに、正確な製剤、投与経路及び投与量は、患者の状態を考慮して個々の医師が選択できる。さらに、本明細書に記載のナノ粒子の毒性及び治療有効性は、当業者に周知の方法を用いて細胞培養又は実験動物において標準医薬操作により決定できる。

あるいは、約１〜約１００ｍｇ／ｋｇ／用量（０．１〜１００ｍｇ／ｋｇ／用量）の量を、核酸の有効性に応じて治療で使用してもよい。単位剤形は、一般に、活性剤、オリゴヌクレオチドの約１ｍｇ〜約６０ｍｇの範囲である。

一実施形態において、本発明の治療は、本明細書に記載のナノ粒子を、約１〜約６０ｍｇ／ｋｇ／用量（約２５〜６０ｍｇ／ｋｇ／用量、約３〜約２０ｍｇ／ｋｇ／用量）、例えば６０、４５、３５、３０、２５、１５、５又は３ｍｇ／ｋｇ／用量（単回投与計画又は多回投与計画のいずれか）の量で哺乳動物に投与することを含む。例えば、本明細書に記載のナノ粒子は、ｑ３ｄ×９で５、２５、３０又は６０ｍｇ／ｋｇ／用量の量で静脈内に投与できる。別の例としては、治療プロトコルは、アンチセンスオリゴヌクレオチドを、毎週約４〜約１８ｍｇ／ｋｇ／用量、又は毎週約４〜約９．５ｍｇ／ｋｇ／用量（例えば、６週間のサイクルで３週間毎週約８ｍｇ／ｋｇ／用量）で投与することを含む。

あるいは、本明細書に記載のナノ粒子中に封入されたオリゴヌクレオチドの送達は、約０．１〜約１０００μＭ、好ましくは約１０〜約１５００μＭ（即ち、約１０〜約１０００μＭ、約３０〜約１０００μＭ）の濃度のオリゴヌクレオチドと腫瘍細胞又は腫瘍組織とをインビボ、エクスビボ又はインビトロで接触させることを含む。

組成物は、１日１回投与してもよく、複数週の治療プロトコルの一環として与えることができる複数回投与に分けてもよい。正確な用量は、当業者に認識されるように、状態の段階及び重症度、核酸に対する腫瘍等の疾患の感受性、及び治療される患者の個々の特性に依存するであろう。

ナノ粒子が投与される本発明の全ての態様において、言及された投与量は、投与されるナノ粒子の量ではなくオリゴヌクレオチドの分子量に基づいている。

治療は、所望の臨床結果が得られるまで１日又は数日行われることが企図される。治療用の核酸（又は医薬活性剤）を封入するナノ粒子の投与の正確な量、回数及び期間は、当然ながら、患者の性別、年齢及び医学的状態、並びに担当臨床医により決定された疾患の重症度に応じて変化するであろう。

さらにさらなる態様は、相乗的又は付加的な利益のために、本明細書に記載の本発明のナノ粒子と他の抗癌療法とを組み合わせることを含む。

以下の実施例は、本発明のさらなる理解を得るために利用されるが、本発明の有効な範囲を制限することを何ら意味するものではない。

実施例において、全ての合成反応は、乾燥窒素又は乾燥アルゴンの雰囲気下で行われる。Ｎ−（３−アミノプロピル）−１，３−プロパンジアミン）、ＢＯＣ−ＯＮ、ＬｉＯＣｌ_４、コレステロール及び１Ｈ−ピラゾール−１−カルボキサミジンＨＣｌをＡｌｄｒｉｃｈから購入した。全ての他の試薬及び溶媒を、さらなる精製なしで使用した。スルビビン遺伝子を標的とするＬＮＡオリゴ−１及びＥｒＢ３遺伝子を標的とするオリゴ−２を社内で調製した。その配列を表４に示す。インターヌクレオチド結合はホスホロチオエートであり、^ｍＣはメチル化シトシンを表し、大文字はＬＮＡを示す。

以下の略語、例えばＬＮＡ（ロックド核酸オリゴヌクレオチド）、ＢＡＣＣ（２−［Ｎ，Ｎ’−ジ（２−グアニジンプロピル）］アミノエチルコレステリルカーボネート）、Ｃｈｏｌ（コレステロール）、ＤＩＥＡ（ジイソプロピルエチルアミン）、ＤＭＡＰ（４−Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン）、ＤＯＰＥ（Ｌ−α−ジオレオイルホスファチジルエタノールアミン、ＡｖａｎｔｉＰｏｌａｒＬｉｐｉｄｓ、ＵＳＡ又はＮＯＦ、Ｊａｐａｎ）、ＤＬＳ（動的光散乱）、ＤＳＰＣ（１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン）（ＮＯＦ、Ｊａｐａｎ）、ＤＳＰＥ−ＰＥＧ（１，２−ジステアロイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン−Ｎ−（ポリエチレングリコール）２０００アンモニウム塩又はナトリウム塩、ＡｖａｎｔｉＰｏｌａｒＬｉｐｉｄｓ、ＵＳＡ及びＮＯＦ、Ｊａｐａｎ）、ＫＤ（ノーンダウン）、ＥＰＣ（卵ホスファチジルコリン、ＡｖａｎｔｉＰｏｌａｒＬｉｐｉｄｓ、ＵＳＡ）及びＣ１６ｍＰＥＧ−セラミド（Ｎ−パルミトイル−スフィンゴシン−１−スクシニル（メトキシプロピルエチレングリコール）２０００、ＡｖａｎｔｉＰｏｌａｒＬｉｐｉｄｓ、ＵＳＡ）は、実施例全体で使用され得る。他の略語、例えばＦＡＭ（６−カルボキシフルオレセイン）、ＦＢＳ（ウシ胎児血清）、ＧＡＰＤＨ（グリセルアルデヒド−３−リン酸デヒドロゲナーゼ）、ＤＭＥＭ（ダルベッコの修飾イーグル培地）、ＭＥＭ（修飾イーグル培地）、ＴＥＡＡ（テトラエチルアンモニウムアセテート）、ＴＦＡ（トリフルオロ酢酸）、ＲＴ−ｑＰＣＲ（逆転写定量的ポリメラーゼ連鎖反応）も使用できる。

（実施例１）
一般的ＮＭＲ法
別段の指示がない限り、ＶａｒｉａｎＭｅｒｃｕｒｙ３００ＮＭＲ分光計及び溶媒として重水素化クロロホルムを用いて３００ＭＨｚで^１ＨＮＭＲスペクトル及び７５．４６ＭＨｚで^１３ＣＮＭＲスペクトルを得た。化学シフト（δ）を、テトラメチルシラン（ＴＭＳ）からのダウンフィールドで１００万分の一（ｐｐｍ）で報告する。

（実施例２）
一般的なＨＰＬＣ法
反応混合物、並びに中間体及び最終生成物の純度を、ＢｅｃｋｍａｎＣｏｕｌｔｅｒＳｙｓｔｅｍＧｏｌｄ（登録商標）ＨＰＬＣ装置でモニターする。１ｍＬ／分の流量で０．０５％ＴＦＡ中のアセトニトリル１０〜９０％の勾配、又は１ｍＬ／分の流量で５０ｍＭＴＥＡＡ緩衝液中のアセトニトリル２５〜３５％の勾配を用いて、１６８ダイオードアレイＵＶ検出器を備えたＺＯＲＢＡＸ（登録商標）３００ＳＢＣ８逆相カラム（１５０×４．６ｍｍ）又はＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘＪｕｐｉｔｅｒ（登録商標）３００ＡＣ１８逆相カラム（１５０×４．６ｍｍ）を使用する。アニオン交換クロマトグラフィーを、Ｗａｔｅｒｓ製のＡＰ−Ｅｍｐｔｙグラスカラムに充填したＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ製のＰｏｒｏｓ５０ＨＱ強アニオン交換樹脂を用いてＧＥＨｅａｌｔｈｃａｒｅ（ＡｍｅｒｓｈａｍＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）製のＡＫＴＡエクスプローラー１００Ａで行った。脱塩は、ＡｍｅｒｓｈａｍＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ製のＨｉＰｒｅｐ２６／１０脱塩カラム（ＰＥＧ−オリゴ用）を用いて達成された。

（実施例３）
一般的なｍＲＮＡダウンレギュレーション法
細胞を完全培地（Ｆ−１２Ｋ又はＤＭＥＭ、１０％ＦＢＳで補足）中で維持する。各ウェル中に２．５×１０^５細胞を含有する１２ウェルプレートを３７℃で終夜インキュベートする。細胞をＯｐｔｉ−ＭＥＭ（登録商標）で１回洗浄し、Ｏｐｔｉ−ＭＥＭ（登録商標）４００μＬを各ウェルに加える。次いで、オリゴヌクレオチドを含有するナノ粒子又はＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００（登録商標）の溶液を各ウェルに加える。細胞を４時間インキュベートし、次いで各ウェルに培地６００μＬを加え、２４時間インキュベートする。処理の２４時間後、ヒトスルビビン遺伝子等の標的遺伝子及びＧＡＰＤＨ等のハウスキーピング遺伝子の細胞内ｍＲＮＡレベルを、ＲＴ−ｑＰＣＲで定量する。ｍＲＮＡの発現レベルを正規化する。

（実施例４）
一般的なＲＮＡ調製法
インビトロｍＲＮＡダウンレギュレーションスクリーニングのために、製造業者の使用説明書に従って全ＲＮＡをＲＮＡｑｕｅｏｕｓＫｉｔ（登録商標）（Ａｍｂｉｏｎ）を用いて調製する。ＲＮＡ濃度を、ナノドロップを用いてＯＤ_{２６０ｎｍ}で決定する。

（実施例５）
一般的なＲＴ−ｑＰＣＲ法
全ての試薬はＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ製である：ＨｉｇｈＣａｐａｃｉｔｙｃＤＮＡＲｅｖｅｒｓｅＴｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎＫｉｔ（登録商標）（４３６８８１３）、２０×ＰＣＲマスターミックス（４３０４４３７）、並びにヒトＧＡＰＤＨ（Ｃａｔ．＃０６１２１７７）及びスルビビン（ＢＩＲＫ５Ｈｓ００１５３３５３）用ＴａｑＭａｎ（登録商標）遺伝子発現アッセイキット。全ＲＮＡ２．０μｇを、最終量５０μＬでのｃＤＮＡ合成に使用する。反応を、ＰＣＲサーモサイクラーで２５℃にて１０分間、３７℃にて１２０分間、８５℃にて５秒間行い、次いで４℃で貯蔵する。リアルタイムＰＣＲを、５０℃−２分間、９５℃−１０分間及び９５℃−１５秒間／６０℃−１分間のプログラムで４０サイクル行う。各ｑＰＣＲ反応については、ｃＤＮＡ１μＬを最終量３０μＬで使用する。

（実施例６）
Ｈ−Ｄａｐ−ＯＭｅ：２ＨＣｌの調製（化合物１）
Ｈ−Ｄａｐ−（Ｂｏｃ）−ＯＭｅ：ＨＣｌ（５ｇ、１９．６３ｍｍｏｌ）を１．４−ジオキサン（１３０ｍＬ）中の２ＭＨＣｌで室温にて３０分間処理した。溶媒を３０〜３５℃にて真空下で除去した。残渣をジエチルエーテル中で再懸濁し、濾過した。単離した固体を真空下でＰ_２Ｏ_５で乾燥させ、生成物３．４ｇ（９０％）を得た。¹³C NMR (DMSO-d₆) δ 38.95, 49.99, 53.53, 66.37, 166.77.

（実施例７）
ジオレオイル−ＤＡＰ−ＯＭｅの調製（化合物２）
無水ＤＭＦ２６ｍＬ中の化合物１（３．４ｇ、１７．８ｍｍｏｌ）の溶液を無水ＤＣＭ１７０ｍＬ中のオレイン酸（２２．５ｍＬ、２０．０ｇ、７１．１ｍｍｏｌ）の溶液に加えた。混合物を０〜５℃まで冷却し、次いでＥＤＣ（２０．５ｇ、１０６．７ｍｍｏｌ）及びＤＭＡＰ（２８．２ｇ、２３１．１ｍｍｏｌ）を加えた。反応混合物を終夜撹拌し、窒素下で室温まで昇温させた。反応の完了をＴＬＣ（ＤＣＭ：ＭＥＯＨ＝９０：１、ｖ／ｖ）でモニターした。反応混合物を試薬等級のＤＣＭ２００ｍＬで希釈し、１ＮＨＣｌ（３×８０ｍＬ）及び０．５％水性ＮａＨＣＯ_３（３×８０ｍＬ）で洗浄した。得られた有機層を分離し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、３０℃にて真空下で濃縮した。残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＴＥＡ＝９５：５：０．１、ｖ／ｖ／ｖ）で精製し、生成物７．０ｇ（６１％）を生成した。¹³C NMR δ 14.15, 22.60, 25.55, 25.69, 27.20, 27.25, 29.18, 29.23, 29.29, 29.34, 29.55, 29.75, 29.78, 31.91, 36.43, 36.52, 41.53, 52.63, 53.58, 129.49, 129.54, 129.82, 129.85, 170.55, 173.59, 174.49.

（実施例８）
ジオレオイル−Ｄａｐ−ＯＨの調製（化合物３）
水７ｍＬ中のＮａＯＨ（０．８７ｇ、２１．６３ｍｍｏｌ）の溶液をエタノール７０ｍＬ中の化合物２（７．０ｇ、１０．８ｍｍｏｌ）の溶液に加えた。混合物を室温で終夜撹拌し、室温にて真空下で濃縮した。残渣を水６３ｍＬに懸濁し、溶液を０〜５℃にて１ＮＨＣｌで酸性化した。水溶液をＤＣＭで３回抽出した。得られた有機層を合わせて、無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。溶媒を３５℃にて真空下で除去し、生成物５．５ｇ（８０％）を生成した。¹³C NMR δ 14.19, 22.75, 25.51, 25.68, 27.25, 27.29, 29.21, 29.26, 29.32, 29.38, 29.59, 29.79, 29.82, 31.95, 36.30, 36.37, 41.58, 55.15, 129.53, 129.91, 171.49, 175.67, 176.19.

（実施例９）
ＢｏｃＮＨＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨ_２の調製（化合物４）
無水ＤＣＭ１５０ｍＬ中のＢｏｃ無水物（６０ｇ、２７４．９ｍｍｏｌ）の溶液を、無水ＴＨＦ２５０ｍＬ及び無水ＤＣＭ２００ｍＬ中のエタン−１，２−ジアミン（４１．３ｇ、６８７．３ｍｍｏｌ）の溶液に０〜５℃で１．５時間かけて徐々に加えた。反応混合物を終夜撹拌しながら、室温まで昇温させた。水３００ｍＬを混合物に加え、それを３０℃にて真空下で濃縮した。得られた水溶液をＤＣＭ（３×３００ｍＬ）で洗浄し、有機層を合わせ、０．５ＮＨＣｌ（３×３００ｍＬ）で抽出した。水層を合わせて、ｐＨを９〜１０に４ＮＮａＯＨ溶液で調整し、次いでＤＣＭ（３×５００ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせて、無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。溶媒を３５℃にて真空下で除去し、生成物１７．６ｇ（４０％）を生成した。¹³C NMR δ 28.23, 41.67, 43.19, 78.77, 155.93.

（実施例１０）
ジオレオイル−Ｄａｐ−ＮＨＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨＢｏｃの調製（化合物５）
ＤＭＡＰ（６．２ｇ、５．１２ｍｍｏｌ）を、無水ＤＭＦ５０ｍＬ及び無水ＤＣＭ４００ｍＬ中の化合物３（５．４ｇ、８．５３ｍｍｏｌ）の溶液に加え、溶液を氷浴で冷却した。化合物４（２．７３ｇ、１７．１ｍｍｏｌ）及びＥＤＣ（６．６ｇ、３４．１ｍｍｏｌ）を溶液に加え、溶液を室温まで昇温させながら終夜撹拌した。反応の完了をＴＬＣ（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝９：１、ｖ／ｖ）でモニターし、反応混合物をＤＣＭ５００ｍＬで希釈し、０．２ＮＨＣｌ（３×５００ｍＬ）及び水（３×５００ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥させた。溶媒を３５℃にて真空下で除去し、生成物５．６ｇ（８５％）を生成した。¹³C NMR δ 14.16, 22.72, 25.52, 25.77, 27.23, 27.26, 28.43, 29.24, 29.35, 29.56, 29.79, 31.92, 36.50, 40.25, 40.38, 41.99, 55.22, 76.57-77.42 (CDCl₃), 79.41, 129.54, 129.86, 156.35, 170.44, 174.25, 175.35.

（実施例１１）
ジオレオイル−Ｄａｐ−ＮＨＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨ_２の調製（化合物６）
化合物５（５．６ｇ、７．２ｍｍｏｌ）を、ＤＣＭ９５ｍＬに溶解させ、溶液をトリフルオロ酢酸２４ｍＬで室温にて３０分間処理した。溶媒を室温にて真空下で除去し、残渣をＤＣＭ２００ｍＬに再度溶解させた。溶液を、ｐＨが８〜９になるまで水及び１％ＮａＨＣＯ_３で数回洗浄した。有機層を無水硫酸マグネシウムで乾燥させ、溶媒を３０℃にて真空下で除去し、生成物４．１３ｇ（８５％）を生成した。¹³C NMR δ 14.15, 22.70, 25.62, 25.77, 27.25, 29.24, 29.35, 29.55, 29.78, 31.91, 36.43, 41.53, 54.95, 129.48, 129.85, 170.99, 174.43, 175.33.

（実施例１２）
４−（ジメチルアセタール）安息香酸の調製（化合物７）
４−ホルミル安息香酸（１．５ｇ、１０ｍｍｏｌ）を無水メタノール３０ｍＬに溶解させ、次いでアセトニトリル（３００μＬ、０．３ｍｍｏｌ）中の１．０Ｍテトラフルオロホウ酸リチウム、オルトギ酸トリメチル（１．３８ｇ、１０ｍｍｏｌ）に加えた。反応混合物を終夜還流した。溶媒を除去し、残渣を沸騰ヘキサンに３０分間懸濁した。混合物を室温まで冷却し、固体を濾過により単離し、生成物１．５ｇ（７７％）を生成した。¹³C NMR (CD₃OD) δ 53.26, 103.88, 127.75, 130.47, 131.14, 144.29, 169.30.

（実施例１３）
化合物８の調製
ＦｍｏｃＮＨ−Ｌｙｓ（ＯＭｅ）−ＮＨ_２（０．６０ｍｍｏｌ）及びＤＭＡＰ（２１９．６ｍｇ、１．８０ｍｍｏｌ）を無水ＤＣＭ及び無水ＤＭＦに溶解させる。混合物を０〜５℃まで冷却し、次いでＥＤＣ（３４５．６ｍｇ、１．８０ｍｍｏｌ）及び化合物７（３５２．８ｍｇ、１．８０ｍｍｏｌ）を加える。反応混合物をＮ_２下で室温まで０℃にて終夜撹拌する。溶媒を除去し、残渣をＤＭＦ／ＩＰＡ（１０ｍＬ／１００ｍＬ）の混合溶媒から再結晶化し、生成物を得る。

（実施例１４）
化合物９の調製
クロロホルム６．７５ｍＬ中の化合物８（０．４６ｍｍｏｌ）を８６％のギ酸１．６８ｍＬで室温にて終夜処理する。溶媒を除去し、残渣をＤＣＭ／エチルエーテルで２回再結晶化し、生成物を得る。

（実施例１５）
化合物１０の調製
化合物６（０．３０ｍｍｏｌ）を無水ＤＣＭ１０ｍＬ及び無水ＤＭＦ２ｍＬに溶解させ、次いで化合物９（１．０ｇ、０．２ｍｍｏｌ）、分子篩（２ｇ）及びＤＩＥＡ（２５．８ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）を加える。反応混合物をＮ_２下で室温にて終夜撹拌する。反応混合物を濾過し、濾過液を真空下で濃縮する。残渣をアセトニトリル−ＩＰＡから再結晶化する。非常に細かい固体懸濁液を遠心分離して生成物を得る。化合物をピペリジンで処理し、Ｆｍｏｃを除去し、アミンを得る。アミン中間体をＮａＯＨで処理し、メチルエステルを加水分解し、次いで酸性化して、化合物１０を得る。

（実施例１６）
ＬＮＡ脂質ナノ粒子組成物の調製
本実施例において、様々な核酸、例えばＬＮＡ含有オリゴヌクレオチドを封入するナノ粒子組成物を調製する。例えば、カチオン性脂質１、化合物１０、Ｃｈｏｌ、ＤＳＰＥ−ＰＥＧ及びＣ_１６ｍＰＥＧ−セラミドを、９０％エタノール（総脂質３０μｍｏｌ）１０μＬ中で１８：６０：２０：１：１のモル比で混合する。ＬＮＡオリゴヌクレオチド（０．４μｍｏｌ）を２０ｍＭトリス緩衝液（ｐＨ７．４〜７．６）１０ｍＬに溶解させる。３７℃まで加熱した後、二つの溶液をデュアルシリンジポンプにより混合し、次いで混合溶液を２０ｍＭトリス緩衝液（３００ｍＭＮａＣｌ、ｐＨ７．４〜７．６）２０ｍＬで希釈する。混合物を３７℃で３０分間インキュベートし、１０ｍＭＰＢＳ緩衝液（１３８ｍＭＮａＣｌ、２．７ｍＭＫＣｌ、ｐＨ７．４）で透析する。透析により混合物からエタノールを除去した後、安定な粒子が得られる。ナノ粒子溶液を遠心分離により濃縮する。ナノ粒子溶液を１５ｍＬの遠心分離濾過装置（ＡｍｉｃｏｎＵｌｔｒａ−１５、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、ＵＳＡ）に移す。遠心分離速度は３０００ｒｐｍであり、遠心分離中の温度は４℃である。濃縮懸濁液を所与の時間後に収集し、０．２２μｍのシリンジフィルター（Ｍｉｌｌｅｘ−ＧＶ、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、ＵＳＡ）による濾過により滅菌する。

ナノ粒子の直径及び多分散性を、Ｐｌｕｓ９０ＰａｒｔｉｃｌｅＳｉｚｅＡｎａｌｙｚｅｒＤｙｎａｍｉｃＬｉｇｈｔＳｃａｔｔｅｒｉｎｇＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔ（Ｂｒｏｏｋｈａｖｅｎ、ＮｅｗＹｏｒｋ）で培地として水（Ｓｉｇｍａ）中で２５°で測定する。

ＬＮＡオリゴヌクレオチドの封入効率をＵＶ−ＶＩＳ（Ａｇｉｌｅｎｔ８４５３）で決定する。背景紫外線−ｖｉｓスペクトルは、ＰＢＳ緩衝生理食塩水（２５０μＬ）、メタノール（６２５μＬ）及びクロロホルム（２５０μＬ）からなる混合溶液である溶液を走査することにより得られる。封入された核酸の濃度を決定するために、メタノール（６２５μＬ）及びクロロホルム（２５０μＬ）をＰＢＳ緩衝生理食塩水ナノ粒子懸濁液（２５０μＬ）に加える。混合後、透明な溶液が得られ、この溶液を２６０ｎｍでの吸光度を測定する前に２分間超音波処理する。封入された核酸の濃度及び負荷効率を、方程式（１）及び（２）に従って計算する：
Ｃ_ｅｎ（μｇ／ｍｌ）＝Ａ_２６０×ＯＤ_２６０単位（μｇ／ｍＬ）×希釈係数（μＬ／μＬ）（１）
希釈係数は、アッセイ体積（μＬ）を試料貯蔵体積（μＬ）で割ることにより得られる。

封入効率（％）＝［Ｃ_ｅｎ／Ｃ_{ｉｎｉｔｉａｌ}］×１００（２）
Ｃ_ｅｎは、精製後にナノ粒子懸濁液に封入された核酸（即ち、ＬＮＡオリゴヌクレオチド）の濃度であり、Ｃ_{ｉｎｉｔｉａｌ}は、ナノ粒子懸濁液の形成前の最初の核酸（ＬＮＡオリゴヌクレオチド）の濃度である。様々なナノ粒子組成物の例を、表５及び６に要約する。

（実施例１７）
ナノ粒子の安定性
ナノ粒子の安定性は、構造的完全性をＰＢＳ緩衝液中で４℃にて経時的に保持するその能力として定義される。ナノ粒子のコロイド安定性は、平均径の変化を経時的にモニターすることにより評価される。表６の試料番号ＮＰ１で調製したナノ粒子を、１０ｍＭＰＢＳ緩衝液（１３８ｍＭＮａＣｌ、２．７ｍＭＫＣｌ、ｐＨ７．４）中に分散させ、４℃にて貯蔵する。所与の時間で、ナノ粒子懸濁液約２０〜５０μＬを取り出し、最大２ｍＬの純水で希釈する。ナノ粒子のサイズを２５℃にてＤＬＳで測定する。

（実施例１８）
インビトロでのナノ粒子の細胞取込み
本明細書に記載のナノ粒子に封入された核酸（ＬＮＡオリゴヌクレオチドオリゴ−２）の細胞取込み効率は、前立腺癌細胞（１５ＰＣ３細胞株）等のヒト癌細胞で評価される。試料ＮＰ２のナノ粒子を、実施例１６に記載の方法を用いて調製する。ＬＮＡオリゴヌクレオチド（オリゴ−２）を、蛍光顕微鏡試験のためにＦＡＭで標識する。

ナノ粒子を１５ＰＣ３細胞株で評価する。細胞を完全培地（ＤＭＥＭ、１０％ＦＢＳで補足）中で維持する。各ウェル中に２．５×１０^５細胞を含有する１２ウェルプレートを３７℃で終夜インキュベートする。細胞をＯｐｔｉ−ＭＥＭで１回洗浄し、Ｏｐｔｉ−ＭＥＭ４００ｍＬを各ウェルに加える。次いで、細胞を、核酸を封入する試料番号ＮＰ２（２００ｎＭ）のナノ粒子溶液（ＦＡＭ−修飾オリゴ２）又は対照としてナノ粒子なしでの遊離核酸溶液（裸のＦＡＭ−修飾オリゴ２）で処理する。細胞を３７℃にて２４時間インキュベートする。細胞をＰＢＳで５回洗浄し、次いでウェル毎にＨｏｅｃｈｓｔ溶液（２ｍｇ／ｍＬ）３００ｍＬで３０分間染色し、次いでＰＢＳで５回洗浄する。細胞を予備冷却（−２０℃）した７０％ＥｔＯＨで−２０℃にて２０分間固定させる。細胞を蛍光顕微鏡下で検査し、本明細書に記載のナノ粒子に封入された核酸の細胞取込みの効率を評価する。

（実施例１９）
様々なヒト癌細胞におけるｍＲＮＡダウンレギュレーションに対するナノ粒子のインビトロでの有効性
本明細書に記載のナノ粒子の有効性は、様々な癌細胞、例えばヒト表皮癌細胞（Ａ４３１）、ヒト胃癌細胞（Ｎ８７）、ヒト肺癌細胞（Ａ５４９、ＨＣＣ８２７又はＨ１５８１）、ヒト前立腺癌細胞（１５ＰＣ３、ＬＮＣａＰ、ＰＣ３、ＣＷＲ２２、ＤＵ１４５）、ヒト乳癌細胞（ＭＣＦ７、ＳＫＢＲ３）、結腸癌細胞（ＳＷ４８０）、膵臓癌細胞（ＢｘＰＣ３）及び黒色腫（５１８Ａ２）で評価される。細胞は、以下のもの：アンチセンスＥｒｂＢ３オリゴヌクレオチドを封入するナノ粒子（試料番号ＮＰ１）又はプラセボ空ナノ粒子（試料番号ＮＰ３）の内の一つで処理される。ＥｒｂＢ３発現のダウンレギュレーションに対する各ナノ粒子のインビトロでの有効性は、実施例３に記載の方法で測定される。

（実施例２０）
ヒト前立腺癌異種移植マウスモデルの腫瘍及び肝臓におけるｍＲＮＡダウンレギュレーションに対するナノ粒子の有効性
本明細書に記載のナノ粒子のインビボでの有効性をヒト前立腺癌異種移植マウスにおいて評価する。１５ＰＣ３ヒト前立腺腫瘍を、５×１０^６細胞／マウスを右脇腹に皮下注射することによりヌードマウスにおいて確立する。腫瘍が平均体積１００ｍｍ^３に達しとき、マウスを１グループ５匹に無作為に分類する。各グループのマウスをアンチセンスＥｒｂＢ３オリゴヌクレオチド（試料番号ＮＰ１）又は対応する裸のオリゴヌクレオチド（オリゴ２）を封入するナノ粒子で処理する。ナノ粒子を、１５ｍｇ／ｋｇ／用量、５ｍｇ／ｋｇ／用量、１ｍｇ／ｋｇ／用量又は０．５ｍｇ／ｋｇ／用量でｑ３ｄ×４（又はｑ３ｄ×１０）にて静脈内（ｉ．ｖ．）に投与する。投与量は、ナノ粒子中のオリゴヌクレオチドの量に基づくものである。裸のオリゴヌクレオチドを、３０ｍｇ／ｋｇ／用量で腹腔内（ｉ．ｐ．）、又は２５ｍｇ／ｋｇ／用量もしくは４５ｍｇ／ｋｇ／用量で静脈内にｑ３ｄ×４にて１２日間投与する。マウスを最終投与の２４時間後に屠殺する。血漿試料をマウスから採取し、−２０℃で貯蔵する。腫瘍試料及び肝臓試料もマウスから採取する。腫瘍及び肝臓のｍＲＮＡＫＤについて試料を分析する。動物の生存を観察する。

Claims

式（Ｉ）の化合物：

［式中、
Ｒは水溶性の中性電荷部分又は両性イオン含有部分であり、
Ｌ_１〜２は独立に選択される二官能性リンカーであり、
Ｍはイミン含有部分であり、
Ｑは置換また非置換、飽和又は不飽和のＣ_４〜３０含有部分であり、
（ａ）は０又は正の整数であり、
（ｂ）は０又は正の整数である］。
Ｍが、−Ｎ＝ＣＲ_１−又は−ＣＲ_１＝Ｎ−（式中、Ｒ_１は水素、Ｃ_１〜６アルキル、Ｃ_３〜８分岐アルキル、Ｃ_３〜８シクロアルキル、Ｃ_１〜６置換アルキル、Ｃ_３〜８置換シクロアルキル、アリール及び置換アリールである）である、請求項１に記載の化合物。
両性イオン含有部分が、アミン及び酸を含み、酸性プロトンがアミンから３〜８原子に位置する、請求項１に記載の化合物。
酸が、カルボン酸、硫酸又はリン酸である、請求項３に記載の化合物。
両性イオン含有部分が、アミノ酸の両性イオン形態である、請求項３に記載の化合物。
Ｑが、次式（Ｉａ）：

［式中、
Ｙ_１及びＹ’_１は独立にＯ、Ｓ又はＮＲ_４であり、
（ｃ）は０又は１であり、
（ｄ）は０又は正の整数であり、
（ｅ）は０又は１であり、
ＸはＣ、Ｎ又はＰであり、
Ｑ_１はＨ、Ｃ_１〜３アルキル、ＮＲ_５、ＯＨ又は

であり、
Ｑ_２はＨ、Ｃ_１〜３アルキル、ＮＲ_６、ＯＨ又は

であり、
Ｑ_３は孤立電子対、（＝Ｏ）、Ｈ、Ｃ_１〜３アルキル、ＮＲ_７、ＯＨ又は

であるが、
ただし、
（ｉ）ＸがＣであるとき、Ｑ_３は孤立電子対又は（＝Ｏ）ではなく、
（ｉｉ）ＸがＮであるとき、Ｑ_３は孤立電子対であり、
（ｉｉｉ）ＸがＰであるとき、Ｑ_３は（＝Ｏ）であり、（ｅ）は０であり、
Ｌ_１１、Ｌ_１２及びＬ_１３は独立に選択される二官能性スペーサーであり、
Ｙ_１１、Ｙ’_１１、Ｙ_１２、Ｙ’_１２、Ｙ_１３及びＹ’_１３は独立にＯ、Ｓ又はＮＲ_８であり、
Ｒ_１１、Ｒ_１２及びＲ_１３は独立に置換又は非置換、飽和又は不飽和のＣ_４〜３０であり、
（ｆ１）、（ｆ２）及び（ｆ３）は独立に０又は１であり、
（ｇ１）、（ｇ２）及び（ｇ３）は独立に０又は１であり、
（ｈ１）、（ｈ２）及び（ｈ３）は独立に０又は１であり、
Ｒ_２〜３は水素、ヒドロキシル、アミン、置換アミン、Ｃ_１〜６アルキル、Ｃ_２〜６アルケニル、Ｃ_２〜６アルキニル、Ｃ_３〜１９分岐アルキル、Ｃ_３〜８シクロアルキル、Ｃ_１〜６置換アルキル、Ｃ_２〜６置換アルケニル、Ｃ_２〜６置換アルキニル、Ｃ_３〜８置換シクロアルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、Ｃ_１〜６ヘテロアルキル及び置換Ｃ_１〜６ヘテロアルキルからなる群から独立に選択され、
Ｒ_４〜８は水素、Ｃ_１〜６アルキル、Ｃ_２〜６アルケニル、Ｃ_２〜６アルキニル、Ｃ_３〜１９分岐アルキル、Ｃ_３〜８シクロアルキル、Ｃ_１〜６置換アルキル、Ｃ_２〜６置換アルケニル、Ｃ_２〜６置換アルキニル、Ｃ_３〜８置換シクロアルキル、アリール、置換アリール、ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、Ｃ_１〜６ヘテロアルキル及び置換Ｃ_１〜６ヘテロアルキルからなる群から独立に選択されるが、
ただし、ＱはＲ_１１、Ｒ_１２及びＲ_１３の少なくとも一つ又は二つを含む］
を有する、請求項１に記載の化合物。
式（Ｉｂ）又は（Ｉ’ｂ）：

を有する、請求項６に記載の化合物。
Ｑ_１〜３が、独立にＣ_{１２〜２２}アルキル、Ｃ_{１２〜２２}アルケニル、Ｃ_{１２〜２２}アルキルオキシ、ラウロイル（Ｃ１２）、ミリストイル（Ｃ１４）、パルミトイル（Ｃ１６）、ステアロイル（Ｃ１８）、オレオイル（Ｃ１８）及びエルコイル（Ｃ２２）、飽和又は不飽和のＣ１２アルキルオキシ、Ｃ１４アルキルオキシ、Ｃ１６アルキルオキシ、Ｃ１８アルキルオキシ、Ｃ２０アルキルオキシ及びＣ２２アルキルオキシ、並びに飽和又は不飽和のＣ１２アルキル、Ｃ１４アルキル、Ｃ１６アルキル、Ｃ１８アルキル、Ｃ２０アルキル及びＣ２２アルキルから選択される基を含む、請求項６に記載の化合物。
Ｌ_１１、Ｌ_１２及びＬ_１３が、
−（ＣＲ_３１Ｒ_３２）_ｑ１−及び
−Ｙ_２６（ＣＲ_３１Ｒ_３２）_ｑ１−
［式中、
Ｙ_２６はＯ、ＮＲ_３３又はＳであり、
Ｒ_{３１〜３２}は水素、ヒドロキシル、Ｃ_１〜６アルキル、Ｃ_３〜１２分岐アルキル、Ｃ_３〜８シクロアルキル、Ｃ_１〜６置換アルキル、Ｃ_３〜８置換シクロアルキル、Ｃ_１〜６ヘテロアルキル、置換Ｃ_１〜６ヘテロアルキル、Ｃ_１〜６アルコキシ、フェノキシ及びＣ_１〜６ヘテロアルコキシからなる群から独立に選択され、
Ｒ_３３は水素、Ｃ_１〜６アルキル、Ｃ_３〜１２分岐アルキル、Ｃ_３〜８シクロアルキル、Ｃ_１〜６置換アルキル、Ｃ_３〜８置換シクロアルキル、Ｃ_１〜６ヘテロアルキル、置換Ｃ_１〜６ヘテロアルキル、Ｃ_１〜６アルコキシ、フェノキシ及びＣ_１〜６ヘテロアルコキシからなる群から選択され、
（ｑ１）は０又は正の整数である］
からなる群から独立に選択される、請求項６に記載の化合物。
Ｌ_１１、Ｌ_１２及びＬ_１３が、−ＣＨ_２−、−（ＣＨ_２）_２−、−（ＣＨ_２）_３−、−（ＣＨ_２）_４−、−（ＣＨ_２）_５−、−（ＣＨ_２）_６−、−Ｏ（ＣＨ_２）_２−、−Ｏ（ＣＨ_２）_３−、−Ｏ（ＣＨ_２）_４−、−Ｏ（ＣＨ_２）_５−、−Ｏ（ＣＨ_２）_６−及びＣＨ（ＯＨ）−からなる群から独立に選択される、請求項８に記載の化合物。
Ｌ_１が、
−（ＣＲ_２１Ｒ_２２）_ｔ１−［Ｃ（＝Ｙ_１６）］_ａ３−、
−（ＣＲ_２１Ｒ_２２）_ｔ１Ｙ_１７−（ＣＲ_２３Ｒ_２４）_ｔ２−（Ｙ_１８）_ａ２−［Ｃ（＝Ｙ_１６）］_ａ３−、
−（ＣＲ_２１Ｒ_２２ＣＲ_２３Ｒ_２４Ｙ_１７）_ｔ１−［Ｃ（＝Ｙ_１６）］_ａ３−、
−（ＣＲ_２１Ｒ_２２ＣＲ_２３Ｒ_２４Ｙ_１７）_ｔ１（ＣＲ_２５Ｒ_２６）_ｔ４−（Ｙ_１８）_ａ２−［Ｃ（＝Ｙ_１６）］_ａ３−、
−［（ＣＲ_２１Ｒ_２２ＣＲ_２３Ｒ_２４）_ｔ２Ｙ_１７］_ｔ３（ＣＲ_２５Ｒ_２６）_ｔ４−（Ｙ_１８）_ａ２−［Ｃ（＝Ｙ_１６）］_ａ３−、
−（ＣＲ_２１Ｒ_２２）_ｔ１−［（ＣＲ_２３Ｒ_２４）_ｔ２Ｙ_１７］_ｔ３（ＣＲ_２５Ｒ_２６）_ｔ４−（Ｙ_１８）_ａ２−［Ｃ（＝Ｙ_１６）］_ａ３−、
−（ＣＲ_２１Ｒ_２２）_ｔ１（Ｙ_１７）_ａ２［Ｃ（＝Ｙ_１６）］_ａ３（ＣＲ_２３Ｒ_２４）_ｔ２−、
−（ＣＲ_２１Ｒ_２２）_ｔ１（Ｙ_１７）_ａ２［Ｃ（＝Ｙ_１６）］_ａ３Ｙ_１４（ＣＲ_２３Ｒ_２４）_ｔ２−、
−（ＣＲ_２１Ｒ_２２）_ｔ１（Ｙ_１７）_ａ２［Ｃ（＝Ｙ_１６）］_ａ３（ＣＲ_２３Ｒ_２４）_ｔ２−Ｙ_１５−（ＣＲ_２３Ｒ_２４）_ｔ３−、
−（ＣＲ_２１Ｒ_２２）_ｔ１（Ｙ_１７）_ａ２［Ｃ（＝Ｙ_１６）］_ａ３Ｙ_１４（ＣＲ_２３Ｒ_２４）_ｔ２−Ｙ_１５−（ＣＲ_２３Ｒ_２４）_ｔ３−、
−（ＣＲ_２１Ｒ_２２）_ｔ１（Ｙ_１７）_ａ２［Ｃ（＝Ｙ_１６）］_ａ３（ＣＲ_２３Ｒ_２４ＣＲ_２５Ｒ_２６Ｙ_１９）_ｔ２（ＣＲ_２７ＣＲ_２８）_ｔ３−、
−（ＣＲ_２１Ｒ_２２）_ｔ１（Ｙ_１７）_ａ２［Ｃ（＝Ｙ_１６）］_ａ３Ｙ_１４（ＣＲ_２３Ｒ_２４ＣＲ_２５Ｒ_２６Ｙ_１９）_ｔ２（ＣＲ_２７ＣＲ_２８）_ｔ３−、及び

［式中、
Ｙ_１６はＯ、ＮＲ_２８又はＳであり、
Ｙ_{１４〜１５}及びＹ_{１７〜１９}は独立にＯ、ＮＲ_２９又はＳであり、
Ｒ_{２１〜２７}は水素、ヒドロキシル、アミン、Ｃ_１〜６アルキル、Ｃ_３〜１２分岐アルキル、Ｃ_３〜８シクロアルキル、Ｃ_１〜６置換アルキル、Ｃ_３〜８置換シクロアルキル、アリール、置換アリール、アラルキル、Ｃ_１〜６ヘテロアルキル、置換Ｃ_１〜６ヘテロアルキル、Ｃ_１〜６アルコキシ、フェノキシ及びＣ_１〜６ヘテロアルコキシからなる群から独立に選択され、
Ｒ_{２８〜２９}は水素、Ｃ_１〜６アルキル、Ｃ_３〜１２分岐アルキル、Ｃ_３〜８シクロアルキル、Ｃ_１〜６置換アルキル、Ｃ_３〜８置換シクロアルキル、アリール、置換アリール、アラルキル、Ｃ_１〜６ヘテロアルキル、置換Ｃ_１〜６ヘテロアルキル、Ｃ_１〜６アルコキシ、フェノキシ及びＣ_１〜６ヘテロアルコキシからなる群から独立に選択され、
（ｔ１）、（ｔ２）、（ｔ３）及び（ｔ４）は独立に０又は正の整数であり、
（ａ２）及び（ａ３）は独立に０又は１である］
からなる群から選択される、請求項１に記載の化合物。
Ｌ_１が、
−ＣＨ_２−、−（ＣＨ_２）_２−、−（ＣＨ_２）_３−、−（ＣＨ_２）_４−、−（ＣＨ_２）_５−、−（ＣＨ_２）_６−、−ＮＨ（ＣＨ_２）−、
−ＣＨ（ＮＨ_２）ＣＨ_２−、
−（ＣＨ_２）_４−Ｃ（＝Ｏ）−、−（ＣＨ_２）_５−Ｃ（＝Ｏ）−、−（ＣＨ_２）_６−Ｃ（＝Ｏ）−、
−ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ−ＣＨ_２Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−、
−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_２−ＣＨ_２Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−、
−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_３−ＣＨ_２Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−、
−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_２−Ｃ（＝Ｏ）−、
−ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ−ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−、
−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_２−ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−、
−ＣＨ_２−Ｏ−ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ−ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−、
−ＣＨ_２−Ｏ−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_２−ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−、
−ＣＨ_２−Ｏ−ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ−ＣＨ_２Ｃ（＝Ｏ）−、
−ＣＨ_２−Ｏ−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_２−ＣＨ_２Ｃ（＝Ｏ）−、
−（ＣＨ_２）_４−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−、−（ＣＨ_２）_５−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−、
−（ＣＨ_２）_６−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ−、
−ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ−ＣＨ_２Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−、
−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_２−ＣＨ_２Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−、
−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_３−ＣＨ_２Ｏ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−、
−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_２−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−、
−ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ−ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−、
−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_２−ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−、
−ＣＨ_２−Ｏ−ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ−ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−、
−ＣＨ_２−Ｏ−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_２−ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−、
−ＣＨ_２−Ｏ−ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ−ＣＨ_２Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−、
−ＣＨ_２−Ｏ−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_２−ＣＨ_２Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−、
−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_２−、−ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ−ＣＨ_２Ｏ−、
−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_２−ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨ−、
−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_３−ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨ−、
−ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ−ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨ−、
−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_２−ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨ−、
−ＣＨ_２−Ｏ−ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ−ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨ−、
−ＣＨ_２−Ｏ−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_２−ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨ−、
−ＣＨ_２−Ｏ−ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ−、
−ＣＨ_２−Ｏ−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_２−、

−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_２−、−ＣＨ_２Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_２−、
−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_３−、−ＣＨ_２Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_３−、
−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_４−、−ＣＨ_２Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_４−、
−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_５−、−ＣＨ_２Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_５−、
−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_６−、−ＣＨ_２Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_６−、
−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_２−、−ＣＨ_２Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_２−、
−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_３−、−ＣＨ_２Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_３−、
−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_４−、−ＣＨ_２Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_４−、
−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_５−、−ＣＨ_２Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_５−、
−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_６−、−ＣＨ_２Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_６−、
−（ＣＨ_２ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_２−、
−（ＣＨ_２ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_３−、
−（ＣＨ_２ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_４−、
−（ＣＨ_２ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_５−、
−（ＣＨ_２ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_６−、
−（ＣＨ_２ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_２−、
−（ＣＨ_２ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_３−、
−（ＣＨ_２ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_４−、
−（ＣＨ_２ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_５−、
−（ＣＨ_２ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_６−、
−（ＣＨ_２ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_２−、
−（ＣＨ_２ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_３−、
−（ＣＨ_２ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_４−、
−（ＣＨ_２ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_５−、及び
−（ＣＨ_２ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_６−からなる群から選択される、請求項１に記載の化合物。
Ｌ_２が、
−（ＣＲ’_２１Ｒ’_２２）_ｔ’１−［Ｃ（＝Ｙ’_１６）］_ａ’３（ＣＲ’_２７ＣＲ’_２８）_ｔ’２−、
−（ＣＲ’_２１Ｒ’_２２）_ｔ’１Ｙ’_１４−（ＣＲ’_２３Ｒ’_２４）_ｔ’２−（Ｙ’_１５）_ａ’２−［Ｃ（＝Ｙ’_１６）］_ａ’３（ＣＲ’_２７ＣＲ’_２８）_ｔ’３−、
−（ＣＲ’_２１Ｒ’_２２ＣＲ’_２３Ｒ’_２４Ｙ’_１４）_ｔ’１−［Ｃ（＝Ｙ’_１６）］_ａ’３（ＣＲ’_２７ＣＲ’_２８）_ｔ’２−、
−（ＣＲ’_２１Ｒ’_２２ＣＲ’_２３Ｒ’_２４Ｙ’_１４）_ｔ’１（ＣＲ’_２５Ｒ’_２６）_ｔ’２−（Ｙ’_１５）_ａ’２−［Ｃ（＝Ｙ’_１６）］_ａ’３（ＣＲ’_２７ＣＲ’_２８）_ｔ’３−、
−［（ＣＲ’_２１Ｒ’_２２ＣＲ’_２３Ｒ’_２４）_ｔ’２Ｙ’_１４］_ｔ’１（ＣＲ’_２５Ｒ’_２６）_ｔ’２−（Ｙ’_１５）_ａ’２−［Ｃ（＝Ｙ’_１６）］_ａ’３（ＣＲ’_２７ＣＲ’_２８）_ｔ’３−、
−（ＣＲ’_２１Ｒ’_２２）_ｔ’１−［（ＣＲ’_２３Ｒ’_２４）_ｔ’２Ｙ’_１４］_ｔ’２（ＣＲ’_２５Ｒ’_２６）_ｔ’３−（Ｙ’_１５）_ａ’２−［Ｃ（＝Ｙ’_１６）］_ａ’３（ＣＲ’_２７ＣＲ’_２８）_ｔ’４−
−（ＣＲ’_２１Ｒ’_２２）_ｔ’１（Ｙ’_１４）_ａ’２［Ｃ（＝Ｙ’_１６）］_ａ’３（ＣＲ’_２３Ｒ’_２４）_ｔ’２−、
−（ＣＲ’_２１Ｒ’_２２）_ｔ’１（Ｙ’_１４）_ａ’２［Ｃ（＝Ｙ’_１６）］_ａ’３Ｙ’_１５（ＣＲ’_２３Ｒ’_２４）_ｔ’２−、
−（ＣＲ’_２１Ｒ’_２２）_ｔ’１（Ｙ’_１４）_ａ’２［Ｃ（＝Ｙ’_１６）］_ａ’３（ＣＲ’_２３Ｒ’_２４）_ｔ’２−Ｙ’_１５−（ＣＲ’_２３Ｒ’_２４）_ｔ’３−、
−（ＣＲ’_２１Ｒ’_２２）_ｔ’１（Ｙ’_１４）_ａ’２［Ｃ（＝Ｙ’_１６）］_ａ’３Ｙ’_１４（ＣＲ’_２３Ｒ’_２４）_ｔ’２−Ｙ’_１５−（ＣＲ’_２３Ｒ’_２４）_ｔ’３−、
−（ＣＲ’_２１Ｒ’_２２）_ｔ’１（Ｙ’_１４）_ａ’２［Ｃ（＝Ｙ’_１６）］_ａ’３（ＣＲ’_２３Ｒ’_２４ＣＲ’_２５Ｒ’_２６Ｙ’_１５）_ｔ’２（ＣＲ’_２７ＣＲ’_２８）_ｔ’３−、
−（ＣＲ’_２１Ｒ’_２２）_ｔ’１（Ｙ’_１４）_ａ’２［Ｃ（＝Ｙ’_１６）］_ａ’３Ｙ’_１７（ＣＲ’_２３Ｒ’_２４ＣＲ’_２５Ｒ’_２６Ｙ’_１５）_ｔ’２（ＣＲ’_２７ＣＲ’_２８）_ｔ’３−、及び

［式中、
Ｙ’_１６はＯ、ＮＲ’_２８又はＳであり、
Ｙ’_{１４〜１５}及びＹ’_１７は独立にＯ、ＮＲ’_２９又はＳであり、
Ｒ’_{２１〜２７}は水素、ヒドロキシル、アミン、Ｃ_１〜６アルキル、Ｃ_３〜１２分岐アルキル、Ｃ_３〜８シクロアルキル、Ｃ_１〜６置換アルキル、Ｃ_３〜８置換シクロアルキル、アリール、置換アリール、アラルキル、Ｃ_１〜６ヘテロアルキル、置換Ｃ_１〜６ヘテロアルキル、Ｃ_１〜６アルコキシ、フェノキシ及びＣ_１〜６ヘテロアルコキシからなる群から独立に選択され、
Ｒ’_{２８〜２９}は水素、Ｃ_１〜６アルキル、Ｃ_３〜１２分岐アルキル、Ｃ_３〜８シクロアルキル、Ｃ_１〜６置換アルキル、Ｃ_３〜８置換シクロアルキル、アリール、置換アリール、アラルキル、Ｃ_１〜６ヘテロアルキル、置換Ｃ_１〜６ヘテロアルキル、Ｃ_１〜６アルコキシ、フェノキシ及びＣ_１〜６ヘテロアルコキシからなる群から独立に選択され、
（ｔ’１）、（ｔ’２）、（ｔ’３）及び（ｔ’４）は独立に０又は正の整数であり、
（ａ’２）及び（ａ’３）は独立に０又は１である］
からなる群から選択される、請求項１に記載の化合物。
Ｌ_２が、
−ＣＨ_２−、−（ＣＨ_２）_２−、−（ＣＨ_２）_３−、−（ＣＨ_２）_４−、−（ＣＨ_２）_５−、−（ＣＨ_２）_６−、−ＮＨ（ＣＨ_２）−、
−ＣＨ（ＮＨ_２）ＣＨ_２−、
−Ｏ（ＣＨ_２）_２−、−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_３−、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_３−、
−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_２−、−Ｃ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_３−、
−ＣＨ_２−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ（ＣＨ_２）_３−、
−ＣＨ_２−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ（ＣＨ_２）_３−、
−ＣＨ_２−ＯＣ（＝Ｏ）−Ｏ（ＣＨ_２）_３−、
−ＣＨ_２−ＯＣ（＝Ｏ）−ＮＨ（ＣＨ_２）_３−、
−（ＣＨ_２）_２−Ｃ（＝Ｏ）−Ｏ（ＣＨ_２）_３−、
−（ＣＨ_２）_２−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ（ＣＨ_２）_３−、
−ＣＨ_２Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_２−Ｏ−（ＣＨ_２）_２−、
−ＣＨ_２Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_２−Ｏ−（ＣＨ_２）_２−、
−（ＣＨ_２）_２Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_２−Ｏ−（ＣＨ_２）_２−、
−（ＣＨ_２）_２Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_２−Ｏ−（ＣＨ_２）_２−、
−ＣＨ_２Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_２ＣＨ_２ＣＨ_２−、
−（ＣＨ_２）_２Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_２ＣＨ_２ＣＨ_２−、
−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_２−、−ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ−ＣＨ_２Ｏ−．
−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_２−ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨ−、−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_３−ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨ−、
−ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ−ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨ−、
−ＣＨ_２−Ｏ−ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ−ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨ−、
−ＣＨ_２−Ｏ−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_２−ＣＨ_２ＣＨ_２ＮＨ−、
−ＣＨ_２−Ｏ−ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ−、−ＣＨ_２−Ｏ−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_２−、

−（ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（＝Ｏ）−（ＣＨ_２ＣＨ_２Ｏ）_２−、
−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_２−、−ＣＨ_２Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_２−、
−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_３−、−ＣＨ_２Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_３−、
−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_４−、−ＣＨ_２Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_４−、
−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_５−、−ＣＨ_２Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_５−、
−Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_６−、−ＣＨ_２Ｃ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_６−、
−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_２−、−ＣＨ_２Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_２−、
−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_３−、−ＣＨ_２Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_３−、
−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_４−、−ＣＨ_２Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_４−、
−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_５−、−ＣＨ_２Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_５−、
−Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_６−、−ＣＨ_２Ｃ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_６−、
−（ＣＨ_２ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_２−、
−（ＣＨ_２ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_３−、
−（ＣＨ_２ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_４−、
−（ＣＨ_２ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_５−、
−（ＣＨ_２ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（＝Ｏ）ＮＨ（ＣＨ_２）_６−、
−（ＣＨ_２ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_２−、
−（ＣＨ_２ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_３−、
−（ＣＨ_２ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_４−、
−（ＣＨ_２ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_５−、
−（ＣＨ_２ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（＝Ｏ）Ｏ（ＣＨ_２）_６−、
−（ＣＨ_２ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_２−、
−（ＣＨ_２ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_３−、
−（ＣＨ_２ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_４−、
−（ＣＨ_２ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_５−、及び
−（ＣＨ_２ＣＨ_２）_２ＮＨＣ（＝Ｏ）（ＣＨ_２）_６−
からなる群から選択される、請求項１に記載の化合物。
Ｑが、

［式中、
Ｙ_１はＯ、Ｓ又はＮＲ_３１であり、
Ｒ_１１、Ｒ_１２及びＲ_１３は独立に置換又は非置換、飽和又は不飽和のＣ_４〜３０であり、
Ｒ_３１は水素、メチル又はエチルであり、
（ｄ）は０、又は正の整数であり、
（ｆ１１）、（ｆ１２）及び（ｆ１３）は独立に０、１、２、３又は４であり、
（ｆ２１）及び（ｆ２２）は独立に１、２、３又は４である］
からなる群から選択される、請求項１に記載の化合物。
Ｑが、

［式中、Ｒ_{１１〜１３}は独立に同じ又は異なるＣ１２〜２２の飽和又は不飽和の脂肪族炭化水素であり、
（ｆ１１）、（ｆ１２）及び（ｆ１３）は独立に０、１、２、３又は４であり、
（ｆ２１）及び（ｆ２２）は独立に１、２、３又は４である］
からなる群から選択される、請求項１に記載の化合物。
からなる群から選択される、請求項１に記載の化合物。
請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物を含むナノ粒子組成物。
式（Ｉ）の化合物が、

である、請求項１８に記載のナノ粒子組成物。
カチオン性脂質及びＰＥＧ脂質をさらに含む、請求項１８に記載のナノ粒子組成物。
カチオン性脂質が、

である、請求項２０に記載のナノ粒子組成物。
ＰＥＧ脂質が、ＰＥＧ−ＤＳＰＥ、ＰＥＧ−ジパルミトイルグリカミド、Ｃ１６ｍＰＥＧ−セラミド及びそれらの組合せからなる群から選択される、請求項２０に記載のナノ粒子組成物。
コレステロールをさらに含む、請求項２０に記載のナノ粒子組成物。
カチオン性脂質が、ナノ粒子組成物中に存在する総脂質の約１０％〜約９９．９％の範囲のモル比を有する、請求項２０に記載のナノ粒子組成物。
カチオン性脂質が、ナノ粒子組成物中に存在する総脂質の約１５％〜約２５％の範囲のモル比を有する、請求項２０に記載のナノ粒子組成物。
カチオン性脂質と、式（Ｉ）の化合物を含む融合性脂質と、ＰＥＧ脂質とコレステロールとのモル比が、ナノ粒子組成物中に存在する総脂質の約１５〜２５％、２０〜７８％、０〜５０％、２〜１０％である、請求項２４に記載のナノ粒子組成物。
請求項１８に記載のナノ粒子組成物とともに封入された核酸を含むナノ粒子。
核酸が、一本鎖又は二本鎖のオリゴヌクレオチドである、請求項２７に記載のナノ粒子。
核酸が、デオキシヌクレオチド、リボヌクレオチド、ロックド核酸（ＬＮＡ）、低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）、マイクロＲＮＡ（ｍｉＲＮＡ）、アプタマー、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、ホスホロジアミデートモルホリノオリゴヌクレオチド（ＰＭＯ）、トリシクロ−ＤＮＡ、二本鎖オリゴヌクレオチド（デコイＯＤＮ）、触媒ＲＮＡ（ＲＮＡｉ）、アプタマー、シュピーゲルマー、ＣｐＧオリゴマー及びそれらの組合せからなる群から選択される、請求項２７に記載のナノ粒子。
オリゴヌクレオチドが、アンチセンスオリゴヌクレオチドである、請求項２８に記載のナノ粒子。
オリゴヌクレオチドが、ホスホジエステル結合又はホスホロチオエート結合、及びそれらの組合せを有する、請求項２８に記載のナノ粒子。
オリゴヌクレオチドが、ＬＮＡを含む、請求項２８に記載のナノ粒子。
オリゴヌクレオチドが、約８個〜５０個のヌクレオチドを有する、請求項２８に記載のナノ粒子。
オリゴヌクレオチドが、癌遺伝子、プロ血管新生経路遺伝子、プロ細胞増殖経路遺伝子、ウイルス感染因子遺伝子及びプロ炎症経路遺伝子の発現を抑制する、請求項２８に記載のナノ粒子。
オリゴヌクレオチドが、アンチセンスｂｃｌ−２オリゴヌクレオチド、アンチセンスＨＩＦ−１αオリゴヌクレオチド、アンチセンススルビビンオリゴヌクレオチド、アンチセンスＥｒｂＢ３オリゴヌクレオチド、アンチセンスＰＩＫ３ＣＡオリゴヌクレオチド、アンチセンスＨＳＰ２７オリゴヌクレオチド、アンチセンスアンドロゲン受容体オリゴヌクレオチド、アンチセンスＧｌｉ２オリゴヌクレオチド及びアンチセンスβカテニンオリゴヌクレオチドからなる群から選択される、請求項２８に記載のナノ粒子。
オリゴヌクレオチドが、配列番号１、配列番号２及び３、配列番号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５並びに配列番号１６に示される８個以上の連続ヌクレオチドを含み、各核酸が、天然核酸又は修飾核酸である、請求項２８に記載のナノ粒子。
核酸と式（Ｉ）の化合物との電荷比が約１：２０〜約２０：１の範囲である、請求項２７に記載のナノ粒子。
ナノ粒子が、約５０ｎｍ〜約１５０ｎｍの範囲のサイズを有する、請求項２７に記載のナノ粒子。
請求項２７に記載のナノ粒子を、それを必要とする哺乳動物に投与することを含む、哺乳動物における疾患を治療する方法。
細胞と請求項２７に記載のナノ粒子とを接触させることを含む、細胞にオリゴヌクレオチドを導入する方法。
ヒト細胞又はヒト組織と請求項２７に記載のナノ粒子とを接触させることを含む、ヒト細胞又はヒト組織における遺伝子発現を抑制する方法。
細胞又は組織が、癌細胞又は癌組織である、請求項４１に記載の方法。
有効量の請求項２７に記載のナノ粒子を、それを必要とする哺乳動物に投与することを含む、哺乳動物における遺伝子発現をダウンレギュレートする方法。
癌細胞と請求項２７に記載のナノ粒子とを接触させることを含む、癌細胞の増殖又は成長を抑制する方法。
抗癌剤を投与することをさらに含む、請求項４４に記載の方法。