JP2017505334A - イチョウ抽出物を製造するための改良法 - Google Patents

Abstract

本発明は薬品として用いるための、イチョウ葉抽出物を製造するための、改良された多段抽出法に関する。【選択図】なし

Description

本発明は、薬として使用するための、イチョウの葉の抽出物を製造するための改良された多段法に関する。

イチョウの葉からの抽出物は薬として何世紀にもわたって使用されてきた。現在、それらはいろいろな種類の痴呆およびその症状、ならびに脳および抹消循環不全の治療のために用いられている。活性が関係する成分はテルペンラクトン（ギンコリドＡ、Ｂ、Ｃおよびビロバライド）およびフラボン類のグリコシド類（ケルセチン、ケムフェロールおよびイソラムネチン）である。全イチョウの葉抽出物について記載している現行欧州薬局方（改訂版８．０；モノグラフ ０４／２００８：１８２７“イチョウ乾燥抽出物、精製且つ定量化品”）によれば、薬局方の範囲内で薬として認可され得るイチョウ葉抽出物は、フラボングリコシド類として計算して、２２．０〜２７．０％のフラボノイド類、２．６〜３．２％のビロバライド類、２．８〜３．４％のギンコライド類Ａ、ＢおよびＣならびに５ｐｐｍ以下のギンコール酸類を含有する。調合物は（“薬の認可と登録のための告示（ヒト医薬領域のための調合モノグラフ）−ギンコーフォリウム（イチョウの葉）”）（連邦新聞出版社４６（１３３），７３６０−７３６１（１９９４））に次のとおり記載されている：“アセトン−水でそして濃縮物あるいは単離成分の添加なしに引き続く精製工程で、イチョウ葉ＬＩＮＮＥの乾燥葉から調製された乾燥抽出物”。

最近、各成分の含量を伴うイチョウ葉が多く得られているが、それは公知の方法の抽出では、欧州薬局方の求めによる抽出物を与えることはない。特に、現在、異常に高いテルペンラクトン含量のイチョウ葉は、増加して収穫されているため抽出物中の含量も増加する結果となっている。しかしながら、時々、イチョウ葉も異常に高いフラボノイド含量を有している。
適切なイチョウ葉が用いられるとき、欧州薬局方の求めに沿う抽出物を与える最も重要な抽出法は、ＥＰ ４３１５３５Ｂ１（ドクター．ヴィルマー シュワーベ社）およびＥＰ ３６０５５６Ｂ１（インデナ社）に記載されている。最近になって、ＥＰ ４３１５３６Ｂ１（ドクター．ヴィルマー シュワーベ社）による方法が一層重要になって来た。その理由は、この方法では鉛塩（ＥＰ ４３１５３５Ｂ１）あるいは芳香族炭化水素（ＥＰ ３６０５５６Ｂ１）のような毒性学的に危険な化合物が求められないからである。

ＥＰ ４３１５３６Ｂ１のクレーム１によれば、イチョウ葉の抽出物を製造する請求された方法は、次の（ａ）〜（ｊ）によって特徴づけられる。
（ａ）新鮮なあるいは乾燥した生のイチョウの葉が、水含有アセトン、水含有炭素原子１〜３のアルカノールまたは無水メタノールで約４０〜１００℃の温度で抽出される。
（ｂ）有機溶媒の大部分の量が抽出物が分離され、１０重量％を超えない量にされる。その際最後の蒸留工程では、必要により、水が添加される。
（ｃ）残余の濃縮された水溶液は固形分含量５〜２５重量％まで水により希釈され、攪拌下に２５℃よりも低い温度まで冷却され、沈殿が生成するまで放置されそして水への溶解性が弱い脂溶性成分からなる形成された沈殿が分離される。
（ｄ）硫酸アンモニウムが残余の水溶液に添加されそして形成された溶液をメチルエチルケトンでまたはメチルエチルケトンとアセトンの混合物で抽出される。
（ｅ）得られた抽出物が固形分含有量５０〜７０％まで濃縮されそして得られた濃縮物が水で固体含有量５〜２０％まで希釈される。
（ｆ）かく得られた溶液が水と混和しないブタノールまたはペンタノールで多段工程で抽出される。
（ｇ）ブタノール相とペンタノール相は、それぞれ、固形分含有量５０〜７０％まで濃縮される。
（ｈ）濃縮物が、２０〜６０重量％の水性エタノール中に、５〜２０重量％乾燥抽出物を有する溶液が得られるような量の水とエタノールを添加され、希釈される。
（ｉ）水性アルコール溶液が、アルキルフェノール化合物をさらに分離するために、沸点６０〜１００℃の脂肪族もしくは環状脂肪族溶媒で抽出される。
（ｊ）水相が減圧下で濃縮されそして６０〜８０℃を超えない温度で乾燥されて水分含量５％未満の乾燥抽出物を与える。

本発明の目的は、望ましくない成分スペクトル特にテルペンラクトン類の含有量の多い、しかしまたフラボノイド類の含有量も多いイチョウ葉を使用した場合でも、欧州薬局方の求めを充足するイチョウ葉抽出物を製造するための改良された方法を提供することにある。さらに、本発明の目的は、純水な化合物やほぼ純粋な濃縮物は薬品として使用されるイチョウ葉抽出物のためには許可されていないので、それらを添加しないで上記方法を達成することにある。

驚いたことに、ＥＰ ４３１５３６Ｂ１による方法における付加的方法工程によっても、望ましくない成分スペクトルを持つイチョウ葉から欧州薬局方による抽出物を得ることができる。この目的のために、工程（ｄ）による抽出（液液分配）後、水相がメチルエチルケトンおよびメチルエチルケトン−アセトン相からそれぞれ分離され、それは濃縮物を得るまで、４０〜８０重量％の乾燥抽出部に濃縮される。この濃縮物の１０〜６０重量％の部分が水とメチルエチルケトンを用いて６０重量％を超えない乾燥抽出部分と３０重量％を超えないメチルエチルケトン含量に調節され、そしてメチルエチルケトンと６０〜１００℃の沸点を持つ脂肪族溶媒との７／３〜９／１（ｍ／ｍ）の比の混合物で抽出されて水−メチルエチルケトン相とメチルエチルケトン−脂肪族溶媒相とを得る。

水−メチルエチルケトン相は残余の９０〜４０重量％の濃縮物と一緒にされて溶液を得そしてそれによって最終製品のテルペンラクトン類の含量があまり高くなりすぎないように和らげる。
あるいは、得られたメチルエチルケトン−脂肪族溶媒相は残余の、９０〜４０重量％の濃縮物と一緒にされて最終製品のフラボノイド類の含量があまり高くなりすぎないように和らげる。

それ故、フラボングリコシドとして計算して、２２．０重量％〜２７．０重量％のフラボノイド含量、２．６重量％〜３．２重量％のビロバライド、２．８重量％〜３．４重量％のギンコリドＡ、ＢおよびＣならびに５ｐｐｍを超えないギンコール酸の含量を有するイチョウ葉の乾燥抽出物を製造するための本発明方法は、下記工程（ａ）〜（ｍ）からなる。

（ａ）水含有アセトン、水含有炭素原子１〜３のアルカノールまたは無水メタノールで、約４０〜１００℃の温度で、新鮮なあるいは乾燥した生のイチョウ葉を抽出して粗抽出溶液を得、
（ｂ）工程（ａ）の粗抽出溶液からアセトンまたは炭素原子１〜３アルカノールの大部分の量を蒸留により分離して１０重量％を超えない含量とし、ここで工程（ａ）で無水メタノールが用いられる場合には、最後の蒸留工程で水が添加されて濃縮された水溶液を得る、
（ｃ）工程（ｂ）の濃縮水溶液を固形分含量５〜２５重量％まで水で希釈し、２５℃より低い温度に冷却し、沈殿が形成されるまで冷却を維持しそして形成された沈殿を分離して再度水溶液を得る、
（ｄ）工程（ｃ）の得られた水溶液に硫酸アンモニウムを添加しそして硫酸アンモニウムを含む生成溶液をメチルエチルケトンまたはメチルエチルケトンとアセトンの混合物で抽出し、水相をメチルエチルケトンもしくはメチルエチルケトン−アセトン相から分離してメチルエチルケトンもしくはメチルエチルケトン−アセトン相を得る、
（ｅ）工程（ｄ）のメチルエチルケトンもしくはメチルエチルケトン−アセトン相を４０〜８０重量％の乾燥抽出部分まで濃縮して濃縮物を得る、
（ｆ）工程（ｅ）の濃縮物の１０〜６０重量％の部分を水とメチルエチルケトンを用いて６０重量％を超えない乾燥抽出部分と３０重量％を超えないメチルエチルケトン含量に調整して調整抽出溶液を得そして得られた調整抽出液を、メチルエチルケトンと６０〜１００℃の沸点の脂肪族溶媒との７／３〜９／１（ｍ／ｍ）の比の混合物で抽出して水−メチルエチルケトン相とメチルエチルケトン−脂肪族溶媒相を得る、
（ｇ）工程（ｅ）の濃縮物の９０〜４０重量％の残余部分を工程（ｆ）の水−メチルエチルケトン相または工程（ｆ）のメチルエチルケトン−脂肪族溶媒相と一緒にして溶液を得る、
（ｈ）工程（ｇ）の溶液を固形分含量５０〜７０重量％に濃縮しそして得られた濃縮物を、５０重量％を超えない固形分含量まで水で希釈して溶液を得る、
（ｉ）工程（ｈ）で得られた溶液を水と混和しないブタノールまたはペンタノールを用いて多段抽出してブタノール相またはペンタノール相を得る、
（ｊ）工程（ｉ）のブタノールもしくはペンタノール相を少なくとも５０重量％の固形分含量まで濃縮して濃縮物を得る、
（ｋ）工程（ｊ）で得られた濃縮物を、必要により、水もしくは６０重量％を超えない水性エタノール中の、５〜２０重量％乾燥抽出物を有する溶液が得られるような量の水とエタノールを添加することにより希釈し、
（ｌ）工程（ｋ）の水溶液または水性エタノール溶液を、沸点６０〜１００℃の脂肪族溶媒を用いて抽出し、脂肪族溶媒相から水相を分離して水相を得る、
（ｍ）工程（ｌ）で得られた水相を、減圧下６０〜８０℃を超えない温度で濃縮して５重量％未満の水含量を有する乾燥抽出物を得る。

本発明の好ましい態様では
・工程（ａ）の抽出溶媒として、アセトン含有率が約５０〜７０重量％、特に好ましくはアセトン含有率が約６０重量％の水含有アセトンが用いられる。
・工程（ａ）の抽出溶媒として、メタノール、エタノール、１−プロパノールおよび２−プロパノールから選ばれるアルカノールの含有率が約５０重量％〜７０重量％の水含有アルカノール、特に好ましくはエタノール含有率が約６０重量％の水含有エタノールが用いられる。
・工程（ｃ）において、希釈された活性溶液が１２℃未満の温度に冷却される。
・工程（ｄ）において、工程（ｃ）の水溶液について少なくとも３０重量％の硫酸アンモニウム、特に好ましくは３０〜５０重量％の硫酸アンモニウムが添加される。
・工程（ｄ）において、それは７／３〜３／４（ｍ／ｍ）の比のメチルエチルケトンとアセトンの混合物で抽出される。
・工程（ｉ）において、それは１−ブタノールで抽出され、および／または
・工程（ｌ）において、それはヘプタンで、特に好ましくはｎ−ヘプタンでまたはｎ−ヘプタンが３５重量％を超える割合のヘプタン異性体の混合物で、抽出される。

さらに、ＥＰ１８６８６２５Ｂ１およびＥＰ１８６８５６８Ｂ１と同様にして、４’−Ｏ−メチルピリドキシンを除去するための下記追加方法が実施できる：
（ｎ）工程（ｋ）の水相からあるいは工程（ｍ）の乾燥抽出物から、エタノール含有率４０重量％〜６０重量％の水性エタノール性イチョウ抽出溶液を調製し、
（ｏ）工程（ｎ）の水性エタノール性イチョウ抽出溶液を強酸性イオン交換体に適用して残存する４’−Ｏ−メチルピリドキシンを該イオン交換体で除去しそして水性エタノールを用いて溶出して４’−Ｏ−メチルピリドキシンを含まない抽出液を溶離液として得、
（ｐ）工程（ｏ）の溶離液を減圧下で濃縮しそして６０〜８０℃の温度で乾燥して水分含有率が５重量％未満の乾燥抽出物を得る。

強酸性イオン交換体の例はメルク（Ｍｅｒｃｋ）Ｉおよびアンバーライト（Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ）ＩＲ−１２０である。典型的には、強酸性イオン交換体はスルホン酸基が結合されているポリスチレン樹脂である。
下記において、本発明の方法に関連して用いられる用語の定義が幾つか記載される。

乾燥抽出物：乾燥抽出物は、一般に、欧州薬局方による５重量％以下の水分含有率を有している。
例えば工程（ａ）における無水メタノールに関して、無水の言及は、本発明に関して水分含有率≦１重量％のことを言う。
抽出は、一工程、多工程および連続の抽出を包含する。

沸点６０〜１００℃の脂肪族溶媒は、好ましくはｎ−ヘプタンであるかまたは沸点により定義され且つ石油エーテルもしくは石油ガソリンとして知られ、市販品として入手可能な、飽和脂環式および／または環状脂肪族炭化水素の混合物である。好ましくは、ｎ−ヘプタンおよび他のＣ７アルカンから実質的になる脂肪族炭化水素の混合物が用いられる。３５重量％ｎ−ヘプタン（沸点９８℃）を超える、ｎ−ヘプタンの可成りの部分が例えば９４〜１００℃画分中に見られる。
工程（ｉ）中で述べられた水混和性でないブタノールまたはペンタノールは、好ましくは、１−ブタノールまたは１−ペンタノールである。
下記において、本発明方法がＥＰ ４３１５３６Ｂ１の比較例１および本発明の実施例１によりさらに説明され、記述される。

実施例１と比較例１のための出発溶液
（ＥＰ ４３１５３６Ｂ１の工程（ａ）〜（ｄ）および本発明方法による）
下記実施例において、“ペプタン”という用語は沸点範囲９４〜１００℃の飽和脂肪族炭化水素と３５重量％を超えるｎ−ヘプタン部分の混合物を意味する。
乾燥され且つ粉砕されたイチョウ葉５００ｇが３．７５ｋｇの６０重量％アセトンで６０℃、３０分抽出された。植物性物質が濾過され、３．７５ｋｇの６０重量％アセトンで６０℃、３０分再度抽出され、そして再度濾過された。かくして得られた２つの抽出溶液が一緒にされそして濃縮された（４３８ｇ：乾燥抽出部分３６．９％）。
得られた濃縮物は４００ｇの水で希釈されそして１２℃で１時間撹拌された。形成された沈殿は濾過されそして２４０ｇの硫酸アンモニウムが濾液に添加されそして溶解された。この溶液は、メチルエチルケトン／アセトン６／５（ｍｍ）のそれぞれ４００ｍｌで２回抽出された。メチルエチルケトン／アセトン相は一緒にされた（８０８ｇ）。

ＥＰ ４３１５３６Ｂ１による比較例１
（工程（ｅ）〜（ｊ）による）
上記出発溶液の半分（４０４ｇ）が濃縮された（２７．２ｇ）；乾燥抽出部分（５０％）。この濃縮物が水１０７．８ｇで希釈され（乾燥抽出部分１０％）そして水飽和１−ブタノール各６５ｍｌで３回振とうすることによって抽出された。１−ブタノール相が一緒にされ、濃縮されそして真空中５０℃で１６時間乾燥された（６．７２ｇ）。
このようにして得られた乾燥抽出物は、２０．２ｇのエタノールと４０．３ｇの水の混合物中に溶解された（乾燥抽出物１０％）。この溶液は、各２０ｍｌのヘプタンで３回振とうすることによって抽出され、濃縮されそして５０℃で１６時間真空中で乾燥された：６．１１ｇ（この薬品に対し２．４％）。

かくして得られた抽出物は、ビロバライドおよびギンコリドＡ、ＢおよびＣの含有量に関して欧州薬局方の要求に合致していない。

本発明による実施例１
（本発明の工程（ｅ）〜（ｍ）による）
上記出発溶液のもう一方の半分（４０４ｇ）が濃縮された（２０．５ｇ：乾燥抽出部分６８．２％）。この濃縮物の１０．７５ｇが８．１ｇの水と５．６ｇのメチルエチルケトンを用いて乾燥抽出物部分３０％とメチルエチルケトン含有割合２３重量％に調製され、そして各１８．３ｇのメチルエチルケトン／ヘプタン８／２（ｍ／ｍ）で２回振とうすることによって抽出された。
この水−メチルエチルケトン相は出発溶液の残余の濃縮物（９．７５ｇ）と一緒にされた。この溶液は２４．１７ｇに濃縮され、１１５．５ｇの水で１０％の乾燥抽出物部分に調節されそして各６５ｍｌの水で飽和された１−ブタノールで３回振とうすることによって抽出された。これらの１−ブタノール相は一緒にされ、濃縮されそして５０℃で１６時間真空中で乾燥された（５．９３ｇ）。
このようにして得られた乾燥抽出物は１７．８ｇのエタノールと３５．６ｇの水の混合物中に溶解された（乾燥抽出部分１０％）。この溶液は各２０ｍｌのヘプタンで３回振とうすることによって抽出され、濃縮されそして５０℃で１６時間真空中で乾燥された：５．２９ｇ（この薬品に対し２．１％）。

かくして得られた抽出物は、全ての含有量、特にビロバライドおよびギンコリドＡ、ＢおよびＣの含有量に関して欧州薬局方の要求を必要としている。

Claims (12)

1. フラボングリコシドとして計算して、２２．０重量％〜２７．０重量％のフラボノイド含量、２．６重量％〜３．２重量％のビロバライド、２．８重量％〜３．４重量％のギンコリド Ａ、ＢおよびＣならびに５ｐｐｍを超えないギンコール酸の含量を有するイチョウ葉の乾燥抽出物を製造するための方法であって、下記工程：
   （ａ）水含有アセトン、水含有炭素原子１〜３のアルカノールまたは無水メタノールで、約４０〜１００℃の温度で、新鮮なあるいは乾燥した生のイチョウ葉を抽出して粗抽出溶液を得、
   （ｂ）工程（ａ）の粗抽出溶液からアセトンまたは炭素原子１〜３アルカノールの大部分の量を蒸留により分離して１０重量％を超えない含量とし、ここで工程（ａ）で無水メタノールが用いられる場合には、最後の蒸留工程で水が添加されて濃縮された水溶液を得る、
   （ｃ）工程（ｂ）の濃縮水溶液を固形含有量５〜２５重量％まで水で希釈し、２５℃より低い温度に冷却し、沈殿が形成されるまで冷却を維持しそして形成された沈殿を分離して再度水溶液を得る、
   （ｄ）工程（ｃ）の得られた水溶液に硫酸アンモニウムを添加しそして硫酸アンモニウムを含む生成溶液をメチルエチルケトンまたはメチルエチルケトンとアセトンの混合物で抽出し、水相をメチルエチルケトンもしくはメチルエチルケトン−アセトン相から分離してメチルエチルケトンもしくはメチルエチルケトン−アセトン相を得る、
   （ｅ）工程（ｄ）のメチルエチルケトンもしくはメチルエチルケトン−アセトン相を４０〜８０重量％の乾燥抽出部分まで濃縮して濃縮物を得る、
   （ｆ）工程（ｅ）の濃縮物の１０〜６０重量％の部分を水とメチルエチルケトンを用いて６０重量％を超えない乾燥抽出部分と３０重量％を超えないメチルエチルケトン含量に調整して調整抽出溶液を得そして得られた調整抽出液を、メチルエチルケトンと６０〜１００℃の沸点の脂肪族溶媒との７／３〜９／１（ｍ／ｍ）の比の混合物で抽出して水−メチルエチルケトン相とメチルエチルケトン−脂肪族溶媒相を得る、
   （ｇ）工程（ｅ）の濃縮物の９０〜４０重量％の残余部分を工程（ｆ）の水−メチルエチルケトン相または工程（ｆ）のメチルエチルケトン−脂肪族溶媒相と一緒にして溶液を得る、
   （ｈ）工程（ｇ）の溶液を固形分含量５０〜７０重量％に濃縮しそして得られた濃縮物を、５０重量％を超えない固形分含量まで水で希釈して溶液を得る、
   （ｉ）工程（ｈ）で得られた溶液を水と混和しないブタノールまたはペンタノールを用いて多段抽出してブタノール相またはペンタノール相を得る、
   （ｊ）工程（ｉ）のブタノールもしくはペンタノール相を少なくとも５０重量％の固形分含量まで濃縮して濃縮物を得る、
   （ｋ）工程（ｊ）で得られた濃縮物を、必要により、水もしくは６０重量％を超えない水性エタノール中の、５〜２０重量％乾燥抽出物を有する溶液が得られるような量の水とエタノールを添加することにより希釈し、
   （ｌ）工程（ｋ）の水溶液または水性エタノール溶液を、沸点６０〜１００℃の脂肪族溶媒を用いて抽出し、脂肪族溶媒相から水相を分離して水相を得る、
   （ｍ）工程（ｌ）で得られた水相を、減圧下６０〜８０℃を超えない温度で濃縮して５重量％未満の水含量を有する乾燥抽出物を得る、
   からなる上記方法。
2. 工程（ａ）における抽出溶媒として、アセトン含有割合が約５０〜７０重量％の水含有アセトンが用いられる請求項１に記載の方法。
3. 工程（ａ）における抽出溶媒として、アセトン含有割合が約６０重量％である水含有アセトンが用いられる請求項２に記載の方法。
4. 工程（ａ）における抽出溶媒として、メタノール、エタノール、１−プロパノールおよび２−プロパノールから選ばれるアルカノールの含有割合が約５０重量％〜７０重量％である水含有アルカノールが用いられる請求項１に記載の方法。
5. 工程（ａ）における抽出溶媒として、エタノール含有割合が約６０重量％である水含有エタノールが用いられる請求項４に記載の方法。
6. 工程（ｃ）において、希釈された水溶液が１２℃よりも低い温度に冷却される請求項１〜５のいずれかに記載の方法。
7. 工程（ｄ）において、工程（ｃ）の水溶液について少なくとも３０重量％の硫酸アンモニウムが添加される、請求項１〜６のいずれかに記載の方法。
8. 工程（ｄ）において、それは７／３〜３／４（ｍ／ｍ）の比率のメチルエチルケトンとアセトンの混合物で抽出される請求項１〜７のいずれかに記載の方法。
9. 工程（ｉ）において、それは１−ブタノールで抽出される請求項１〜８のいずれかに記載の方法。
10. 工程（ｌ）において、それはヘプタンで抽出される、請求項１〜９のいずれかに記載の方法。
11. ヘプタンがｎ−ヘプタンまたはｎ−ヘプタンが３５重量％を超える部分を占めるヘプタン異性体の混合物である、請求項１０に記載の方法。
12. 下記付加工程：
    （ｎ）工程（ｋ）の水相からあるいは工程（ｍ）の乾燥抽出物から、エタノール含有率４０重量％〜６０重量％の水性エタノール性イチョウ抽出溶液を調製し、
    （ｏ）工程（ｎ）の水性エタノール性イチョウ抽出溶液を強酸性イオン交換体に適用して残存する４’−Ｏ−メチルピリドキシンを該イオン交換体で除去しそして水性エタノールを用いて溶出して４’−Ｏ−メチルピリドキシンを含まない抽出液を溶離液として得、
    （ｐ）工程（ｏ）の溶離液を減圧下で濃縮しそして６０〜８０℃の温度で乾燥して水分含有率が５重量％未満の乾燥抽出物を得る、
    をさらに有する請求項１〜１１のいずれかに記載の方法。