JP2017509648A - 局所送達用アプタマー - Google Patents

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ジェニファー、ネルソン
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Abstract

局所送達用のアプタマーおよびアプタマーの局所使用のための方法が記載される。インターロイキン（ＩＬ）−２３と結合するアプタマー（ＩＬ−２３アプタマー）およびこのようなアプタマーの使用方法も記載される。

Description

関連出願の参照
本出願は、２０１４年３月１７日に出願された米国特許出願第６１／９５３，９５３号の優先権を主張する。先願の開示は本出願の開示の一部と見なされる（引用することにより本明細書の一部とされる）。
発明の背景
アプタマーは、古典的なワトソン−クリックの塩基対形成以外の相互作用による分子との特異的結合親和性を有する合成によりもたらされる核酸分子である。アプタマーは、高い特異性および親和性、生体有効性、ならびに優れた薬物動態特性を含め、治療薬および診断薬としての使用に望ましいいくつかの特徴を有する。
皮膚は、外部環境との境界として働き、生体異物の侵入から身体を保護するとともに、水などの過剰な内在物質を減少させるという双方のための半透性バリアとして機能するヒト身体の主要な器官である。皮膚は、ヒト身体の中で最も接近の容易な器官であり、医薬剤の局所送達および経皮送達に役立っている。局所的薬物送達系の利点をいくつか挙げると、初回通過代謝の回避、適用の利便性、視覚的評価の容易さ、医薬成分の直接的作用部位への送達、全身送達から見られる変動（例えば、胃内容排出、酵素の存在、ｐＨ変化など）の回避、安全シグナルが見られた場合に投薬を容易に終了できること、有効性の高い化合物の利用、および自己投薬に適することである(Brown et al. Drug Deliv. (2006) 13(3):175-187)。しかしながら、皮膚は、特に５００ダルトンを超える分子量の化合物の局所送達には手強いバリアとなる。１，０００ダルトンを超える分子量の化合物がこのバリアを物理的に破壊することなく局所送達から臨床的有効性を示したことは、あったとしても極めて少ない。このサイズ排除現象を克服することは、新たな研究領域を拓くので皮膚科学および局所的薬物送達における大きな突破口となり、従来の小分子の使用では接近し得ない潜在的標的となり得る。
いくつかの態様では、本開示は、被験体（例えば、哺乳動物被験体、例えば、ヒト）において皮膚疾患を処置する方法を提供し、その方法は、一定用量（例えば、有効用量、例えば、治療上有効な用量）のアプタマー（例えば、アプタマーを含んでなる薬学的に許容可能な組成物）を、皮膚疾患を含んでなる被験体の皮膚、（前記皮膚は表皮と真皮を含んでなる）に局所的に投与（例えば、適用）することを含んでなり、ここで、適用用量の少なくとも０．０１％（例えば、少なくとも０．０５％、少なくとも０．１％、少なくとも０．５％、少なくとも１％、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、または少なくとも５０％）が、（例えば、投与１５分、３０分以内、または１、２、３、４、６、１２、１５、２４、４８、もしくは７２時間以内に）皮膚の表皮に入る（例えば、浸透する）。
いくつかの実施態様では、アプタマーは、薬学的に許容可能な組成物（例えば、ビヒクル）（例えば、本明細書に記載のビヒクル、例えば、表４または９に示されるビヒクル）中に存在する。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物中のアプタマーの濃度は０．００１％〜２０％の間（例えば、０．００１％〜１５％の間、０．００１％〜１０％の間、０．００１％〜５％の間、０．００１％〜２％の間、０．０１％〜２０％の間、０．０１％〜１０％の間、０．０１％〜５％の間、０．０１％〜２％の間、０．１％〜２０％の間、０．１％〜１５％の間、０．１％〜１０％の間、０．１％〜５％の間、または０．１％〜２％の間）である。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物は、スプレー（例えば、エアゾール）、液体、軟膏、クリーム、ローション、溶液（例えば、水溶液）、懸濁液、エマルション、ペースト、ゲル、粉末、フォーム、緩徐放出ナノ粒子、緩徐放出微粒子、生体接着剤、パッチ、包帯、半固体投与形または創傷被覆材として投与される。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物は、水溶液として投与される。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物は、半固体投与形として投与される。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物は、クリームとして投与される。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物は、浸透促進剤（例えば、プロピレングリコール）を含有しない。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物の皮膚への適用用量は、０．０１〜２０ｍｇ／ｃｍ２の間（例えば、０．０１〜１５ｍｇ／ｃｍ２の間、０．０１〜１０ｍｇ／ｃｍ２の間、０．０１〜５ｍｇ／ｃｍ２の間、０．０１〜２ｍｇ／ｃｍ２の間、０．０５〜２０ｍｇ／ｃｍ２の間、０．０５〜１５ｍｇ／ｃｍ２の間、０．０５〜１０ｍｇ／ｃｍ２の間、または０．０５〜５ｍｇ／ｃｍ２の間、０．０５〜２ｍｇ／ｃｍ２の間、０．１〜２０ｍｇ／ｃｍ２の間、０．１〜１５ｍｇ／ｃｍ２の間、０．１〜１０ｍｇ／ｃｍ２の間、０．１〜５ｍｇ／ｃｍ２の間、または０．１〜２ｍｇ／ｃｍ２の間）である。
いくつかの実施態様では、表皮に入る局所的に投与されたアプタマーの適用用量のパーセンテージは、ｅｘ ｖｉｖｏヒト皮膚を用いたｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイ（例えば、フランツセルセットアップまたはフロースルー拡散セル）（例えば、３２℃で）（例えば、本明細書に記載の通り）で決定される。
いくつかの実施態様では、アプタマーは、皮膚の真皮に入り（例えば、浸透し）、適用用量の少なくとも０．０１％（例えば、少なくとも０．０５％、少なくとも０．１％、少なくとも０．５％、少なくとも１％、少なくとも５％、または少なくとも１０％）が、（例えば、投与１５分、３０分以内に、または１、２、３、４、６、１２、１５、２４、４８、もしくは７２時間以内に）真皮に入る（例えば、浸透する）。
いくつかの実施態様では、真皮に入る、局所的に投与されたアプタマーの適用用量のパーセンテージは、ｅｘ ｖｉｖｏヒト皮膚（例えば、フランツセルセットアップまたはフロースルー拡散セル）を用いたｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイ（例えば、３２℃で）（例えば、本明細書に記載の通り）で決定される。
いくつかの実施態様では、５％未満（例えば、１％未満、０．５％未満、０．１％未満、０．０５％未満、０．０１％未満、０．００１％未満、または検出限界未満）の局所的に適用されたアプタマーが（例えば、投与２、３、４、６、１２、１５、２４、４８または７２時間後に）体循環に到達する。
いくつかの実施態様では、アプタマーの長さは、１００未満ヌクレオチド（例えば、９５、９０、８５、８０、７５、または７０ヌクレオチド未満）である。
いくつかの実施態様では、アプタマーの長さは、３０ヌクレオチドより長い（例えば、３５、４０、４５、５０、５５、６０、または６５ヌクレオチドより長い）。
いくつかの実施態様では、アプタマーは、３０〜９０ヌクレオチド長の間（例えば、３５〜８５ヌクレオチド長の間）である。
いくつかの実施態様では、アプタマーの少なくとも１つのヌクレオチドが化学修飾を含んでなる。
いくつかの実施態様では、アプタマーの総てのヌクレオチドが化学修飾を含んでなる。
いくつかの実施態様では、化学修飾は、糖の２’位に修飾を含んでなる。
いくつかの実施態様では、化学修飾は、２’−Ｏ−メトキシエチル付加を含んでなる。
いくつかの実施態様では、化学修飾は、２’フルオロ付加を含んでなる。
いくつかの実施態様では、アプタマーは、その３’末端に単一の逆位デオキシチミジン残基（ｉｄＴ）を含んでなる。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物は、１日１回投与される。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物は、1日２回投与される。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物は、週１回投与される。
いくつかの実施態様では、皮膚疾患は、喘息の増悪、関節リウマチの増悪、乾癬性関節炎の増悪、シェーグレン症候群の増悪、ブドウ膜炎の増悪、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）の増悪、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）の増悪、関節痛の増悪、または膵島細胞移植炎症の増悪を含んでなる。
いくつかの実施態様では、皮膚疾患は、乾癬、皮膚炎（例えば、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、湿疹性皮膚炎、または脂漏性皮膚炎）、化膿性汗腺炎、口腔扁平苔癬、慢性水疱性障害、座瘡、免疫介在障害の脂漏性皮膚病徴、脱毛症、円形脱毛症(alopecia greata)、強皮症(scleredoma)、瘢痕形成（例えば、ケロイド瘢痕または肥厚性瘢痕）、蕁麻疹、酒さ、黒色腫、または腎臓移植からの炎症を含んでなる。
いくつかの実施態様では、皮膚疾患は、持続的炎症、細胞動態、および分化の皮膚障害（例えば、乾癬、乾癬性関節炎、剥離性皮膚炎、バラ色粃糠疹、扁平苔癬、光沢蘚苔、または汗孔角化症）；表皮密着の皮膚障害、水疱性(vesicular and bullous)障害（例えば、天疱瘡、水疱性類天疱瘡、後天性表皮水疱症、または掌または足底膿疹）；表皮付属物の皮膚障害および関連の障害（例えば、毛髪障害、爪、酒さ、口周囲皮膚炎、または濾胞性症候群）；表皮および付属物の腫瘍などの皮膚障害（例えば、扁平上皮癌、基底細胞癌、角化棘細胞腫、良性上皮腫瘍、またはメルケル細胞癌）；メラノサイトの障害（例えば、色素障害、白化、メラニン欠乏症および色素沈着症、色素性母斑、または黒色腫）；真皮の炎症性および新生物性障害の皮膚障害（例えば、持久性隆起性紅斑、好酸球、顔面肉芽腫、壊疽性膿皮症、悪性萎縮性丘疹、真皮および軟組織の線維損傷、またはカポジ肉腫）；皮下組織の障害（例えば、脂肪織炎または脂肪異栄養症）；反応性が変化した皮膚変化を含む皮膚障害（例えば、蕁麻疹、血管性浮腫、移植片対宿主病、アレルギー性接触性皮膚炎、自家感作性皮膚炎、アトピー性皮膚炎、または脂漏性皮膚炎）；機械的および物理的因子による皮膚変化（例えば、熱損傷、放射線皮膚炎、うおのめ、またはたこ）；光傷害（例えば、急性および慢性ＵＶ照射、または光増感）；または微生物因子による皮膚障害（例えば、らい病、ライム病、爪真菌症、水虫、風疹、麻疹、単純ヘルペス、ＥＢＶ（エプスタイン−バーウイルス）、ＨＰＶ（ヒト乳頭腫ウイルス）（例えば、ＨＰＶ６および７）、疣贅、またはプリオン）を含んでなる。
いくつかの実施態様では、皮膚疾患は乾癬を含んでなる。
いくつかの実施態様では、乾癬は軽度乾癬である。
いくつかの実施態様では、乾癬は中等度乾癬である。
いくつかの実施態様では、乾癬は重度乾癬である。
いくつかの実施態様では、皮膚疾患は、皮膚炎（例えば、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、湿疹性皮膚炎、または脂漏性皮膚炎）を含んでなる。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物は、皮膚疾患の治療薬を含んでなる第２の薬剤と組み合わせて投与される。
いくつかの実施態様では、アプタマーは、第１の標的および／または第１の標的の標的と結合し、可溶性リガンドおよび／またはそれらの受容体、細胞外酵素、膜貫通酵素、および細胞内酵素、足場／構造タンパク質、ＲＮＡ、ＤＮＡ、脂質、脂肪酸、補因子および個々の特異的および／または非特異的相互作用を含む調節（例えば、促進作用、拮抗作用、安定化、脱安定化、アプタマーによる細胞、期間、または全身系からの除去の促進を含む）の対象となり得る他の生物学的または化学的実体との相互作用を含み得る。
いくつかの実施態様では、アプタマーは、皮膚中の標的（例えば、タンパク質）、例えば、ＩＬ２、ＩＬ１２、ＩＬ１７、ＩＬ２２、ＩＬ２３、ＩＦＮγ、ＴＮＦα、ＴＳＬＰ、ＣＣＲ１、ＣＸＣＲ４、ＣＲＴＨ２、ａＴＬＲ、ｐ５３、ＲＡＳ、ＭＥＫ、パッチ１、ソニックヘッジホッグシグナル伝達のメディエーター、ｍｉＲＮＡ（例えば、ｍｉｒ２１）、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ、ＰＴＥＮ、ＦＡＳ、ＤＧＡＴ、ＳＣＤ１、ＥＧＦＲ、ＥＧＦ、ＨＢ−ＥＧＦ、ＴＧＦ−α、ＥＰＲ、ＢＴＣ、ＮＲＧ１−４、β−インテグリン、ＣＤ４４、Ｅ−カドヘリン、ＣＬＡ、ＨＰＶ１、ＨＰＶ５、ＨＰＶ８、ＨＰＶ１４、ＨＰＶ１６、ＨＰＶ１７、ＨＰＶ２０、ＨＰＶ３１、ＨＰＶ４７、ＶＥＧＦＣ、ＶＥＧＦＤ、ＶＥＧＦＥＧＦ、ＦＧＦ、ＧＭＣＳＦ、ＩＬ−１、ＰＤＧＦ、またはＴＧＦ−β１と結合する。
いくつかの実施態様では、アプタマーは、表皮中の標的と結合する。いくつかの実施態様では、アプタマーは、真皮中の標的と結合する。
いくつかの実施態様では、皮膚は正常な皮膚である。
いくつかの実施態様では、皮膚は損傷皮膚である。
いくつかの実施態様では、損傷皮膚は罹患皮膚である。
いくつかの実施態様では、損傷皮膚は変化したバリアを含んでなる。
いくつかの実施態様では、アプタマーは、積載物（例えば、それに結合された（例えば、コンジュゲートされた））、例えば、小分子、イメージング色素、蛍光団、または放射性標識を含んでなる。
いくつかの態様において、本開示は、アプタマーを被験体（例えば、哺乳動物被験体、例えば、ヒト）に局所的に投与するための方法を提供し、その方法は、
一定用量（例えば、有効用量、例えば、治療上有効な用量）のアプタマー（例えば、アプタマーを含んでなる薬学的に許容可能な組成物）を被験体の皮膚（前記皮膚は表皮と真皮を含んでなる）を投与し；
前記アプタマーは皮膚の表皮に入り（例えば、浸透し）；かつ
適用用量の少なくとも０．０１％（例えば、少なくとも０．０５％、少なくとも０．１％、少なくとも０．５％、少なくとも１％、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、または少なくとも５０％）が（例えば、投与１５分、３０分以内に、または１、２、３、４、６、１２、１５、２４、４８、もしくは７２時間以内に）表皮に入り（例えば、浸透し）；
それによりアプタマーを被験体に局所的に投与すること
を含んでなる。
いくつかの実施態様では、アプタマーは、薬学的に許容可能な組成物（例えば、ビヒクル）（例えば、本明細書に記載のビヒクル、例えば、表４または９に示されるビヒクル）中に存在する。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物中のアプタマーの濃度は、０．００１％〜２０％の間（例えば、０．００１％〜１５％の間、０．００１％〜１０％の間、０．００１％〜５％の間、０．００１％〜２％の間、０．０１％〜２０％の間、０．０１％〜１０％の間、０．０１％〜５％の間、０．０１％〜２％の間、０．１％〜２０％の間、０．１％〜１５％の間、０．１％〜１０％の間、０．１％〜５％の間、または０．１％〜２％の間）である。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物は、スプレー（例えば、エアゾール）、液体、軟膏、クリーム、ローション、溶液（例えば、水溶液）、懸濁液、エマルション、ペースト、ゲル、粉末、フォーム、緩徐放出ナノ粒子、緩徐放出微粒子、生体接着剤、パッチ、包帯、半固体投与形または創傷被覆材として投与される。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物は、水溶液として投与される。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物は、半固体投与形として投与される。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物は、クリームとして投与される。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物は、浸透促進剤（例えば、プロピレングリコール）を含有しない。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物の皮膚への適用用量は、０．０１〜２０ｍｇ／ｃｍ２の間（例えば、０．０１〜１５ｍｇ／ｃｍ２の間、０．０１〜１０ｍｇ／ｃｍ２の間、０．０１〜５ｍｇ／ｃｍ２の間、０．０１〜２ｍｇ／ｃｍ２の間、０．０５〜２０ｍｇ／ｃｍ２の間、０．０５〜１５ｍｇ／ｃｍ２の間、０．０５〜１０ｍｇ／ｃｍ２の間、または０．０５〜５ｍｇ／ｃｍ２の間、０．０５〜２ｍｇ／ｃｍ２の間、０．１〜２０ｍｇ／ｃｍ２の間、０．１〜１５ｍｇ／ｃｍ２の間、０．１〜１０ｍｇ／ｃｍ２の間、０．１〜５ｍｇ／ｃｍ２の間、または０．１〜２ｍｇ／ｃｍ２の間）である。
いくつかの実施態様では、表皮に入る、局所的に投与されたアプタマーの適用用量のパーセンテージは、ｅｘ ｖｉｖｏヒト皮膚を用いたｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイ（例えば、フランツセルセットアップまたはフロースルー拡散セル（例えば、３２℃で）（例えば、本明細書に記載の通り）で決定される。
いくつかの実施態様では、アプタマーは皮膚の真皮に入り（例えば、浸透し）、適用用量の少なくとも０．０１％（例えば、少なくとも０．０５％、少なくとも０．１％、少なくとも０．５％、少なくとも１％、少なくとも５％、または少なくとも１０％）が（例えば、投与１５分、３０分以内に、または１、２、３、４、６、１２、１５、２４、４８、もしくは７２時間以内に）真皮に入る（例えば、浸透する）。
いくつかの実施態様では、真皮に入る、局所的に投与されたアプタマーの適用用量のパーセンテージは、ｅｘ ｖｉｖｏヒト皮膚を用いたｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイ（例えば、フランツセルセットアップまたはフロースルー拡散セル）（例えば、３２℃で）（例えば、本明細書に記載の通り）で決定される。
いくつかの実施態様では、局所的に適用されたアプタマーの５％未満（例えば、１％未満、０．５％未満、０．１％未満、０．０５％未満、０．０１％未満、０．００１％未満、または検出限界未満）が（例えば、投与２、３、４、６、１２、１５、２４、４８または７２時間後に）体循環に到達する。
いくつかの実施態様では、アプタマーの長さは、１００ヌクレオチド未満（例えば、９５、９０、８５、８０、７５、または７０部クレオチド未満）である。
いくつかの実施態様では、アプタマーの長さは、３０ヌクレオチドより長い（例えば、３５、４０、４５、５０、５５、６０、または６５ヌクレオチドより長い）。
いくつかの実施態様では、アプタマーは、３０〜９０ヌクレオチド長の間（例えば、間３５〜８５ヌクレオチド長の間）である。
いくつかの実施態様では、アプタマーの少なくとも１つのヌクレオチドが化学修飾を含んでなる。
いくつかの実施態様では、アプタマーの総てのヌクレオチドが化学修飾を含んでなる。
いくつかの実施態様では、化学修飾は、糖の２’位に修飾を含んでなる。
いくつかの実施態様では、化学修飾は、２’−Ｏ−メトキシエチル付加を含んでなる。
いくつかの実施態様では、化学修飾は、２’フルオロ付加を含んでなる。
いくつかの実施態様では、アプタマーは、その３’末端に単一の逆位デオキシチミジン残基（ｉｄＴ）を含んでなる。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物は、１日１回投与される。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物は、１日２回投与される。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物は、週１回投与される。
いくつかの実施態様では、皮膚は皮膚疾患を含んでなる。
いくつかの実施態様では、皮膚疾患は、喘息の増悪、関節リウマチの増悪、乾癬性関節炎の増悪、シェーグレン症候群の増悪、ブドウ膜炎の増悪、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）の増悪、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）の増悪、関節痛の増悪、または膵島細胞移植炎症の増悪を含んでなる。
いくつかの実施態様では、皮膚疾患は、乾癬、皮膚炎（例えば、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、湿疹性皮膚炎、または脂漏性皮膚炎）、化膿性汗腺炎、口腔扁平苔癬、慢性水疱性障害、座瘡、免疫介在障害の脂漏性皮膚病徴、脱毛症、円形脱毛症(alopecia greata)、強皮症(scleredoma)、瘢痕形成（例えば、ケロイド瘢痕または肥厚性瘢痕）、蕁麻疹、酒さ、黒色腫、または腎臓移植からの炎症を含んでなる。
いくつかの実施態様では、皮膚疾患は、持続的炎症、細胞動態、および分化の皮膚障害（例えば、乾癬、乾癬性関節炎、剥離性皮膚炎、バラ色粃糠疹、扁平苔癬、光沢蘚苔、または汗孔角化症）；表皮密着の皮膚障害、水疱性(vesicular and bullous)障害（例えば、天疱瘡、水疱性類天疱瘡、後天性表皮水疱症、または掌または足底膿疹）；表皮付属物の皮膚障害および関連の障害（例えば、毛髪障害、爪、酒さ、口周囲皮膚炎、または濾胞性症候群）；表皮および付属物の腫瘍などの皮膚障害（例えば、扁平上皮癌、基底細胞癌、角化棘細胞腫、良性上皮腫瘍、またはメルケル細胞癌）；メラノサイトの障害（例えば、色素障害、白化、メラニン欠乏症および色素沈着症、色素性母斑、または黒色腫）；真皮の炎症性および新生物性障害の皮膚障害（例えば、持久性隆起性紅斑、好酸球、顔面肉芽腫、壊疽性膿皮症、悪性萎縮性丘疹、真皮および軟組織の線維損傷、またはカポジ肉腫）；皮下組織の障害（例えば、脂肪織炎または脂肪異栄養症）；反応性が変化した皮膚変化を含む皮膚障害（例えば、蕁麻疹、血管性浮腫、移植片対宿主病、アレルギー性接触性皮膚炎、自家感作性皮膚炎、アトピー性皮膚炎、または脂漏性皮膚炎）；機械的および物理的因子による皮膚変化（例えば、熱損傷、放射線皮膚炎、うおのめ、またはたこ）；光傷害（例えば、急性および慢性ＵＶ照射、または光増感）；または微生物因子による皮膚障害（例えば、らい病、ライム病、爪真菌症、水虫、風疹、麻疹、単純ヘルペス、ＥＢＶ（エプスタイン−バーウイルス）、ＨＰＶ（ヒト乳頭腫ウイルス）（例えば、ＨＰＶ６および７）、疣贅、またはプリオン）を含んでなる。
いくつかの実施態様では、皮膚疾患は乾癬を含んでなる。
いくつかの実施態様では、乾癬は軽度乾癬である。
いくつかの実施態様では、乾癬は中等度乾癬である。
いくつかの実施態様では、乾癬は重度乾癬である。
いくつかの実施態様では、皮膚疾患は、皮膚炎（例えば、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、湿疹性皮膚炎、または脂漏性皮膚炎）を含んでなる。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物は、皮膚疾患の治療薬を含んでなる第２の薬剤と組み合わせて投与される。
いくつかの実施態様では、アプタマーは、第１の標的および／または第１の標的の標的と結合し、可溶性リガンドおよび／またはそれらの受容体、細胞外酵素、膜貫通酵素、および細胞内酵素、足場／構造タンパク質、ＲＮＡ、ＤＮＡ、脂質、脂肪酸、補因子および個々の特異的および／または非特異的相互作用を含む調節（例えば、促進作用、拮抗作用、安定化、脱安定化、アプタマーによる細胞、期間、または全身系からの除去の促進を含む）の対象となり得る他の生物学的または化学的実体との相互作用を含み得る。
いくつかの実施態様では、アプタマーは、皮膚中の標的（例えば、タンパク質）、例えば、ＩＬ２、ＩＬ１２、ＩＬ１７、ＩＬ２２、ＩＬ２３、ＩＦＮγ、ＴＮＦα、ＴＳＬＰ、ＣＣＲ１、ＣＸＣＲ４、ＣＲＴＨ２、ａＴＬＲ、ｐ５３、ＲＡＳ、ＭＥＫ、パッチ１、ソニックヘッジホッグシグナル伝達のメディエーター、ｍｉＲＮＡ（例えば、ｍｉｒ２１）、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ、ＰＴＥＮ、ＦＡＳ、ＤＧＡＴ、ＳＣＤ１、ＥＧＦＲ、ＥＧＦ、ＨＢ−ＥＧＦ、ＴＧＦ−α、ＥＰＲ、ＢＴＣ、ＮＲＧ１−４、β−インテグリン、ＣＤ４４、Ｅ−カドヘリン、ＣＬＡ、ＨＰＶ１、ＨＰＶ５、ＨＰＶ８、ＨＰＶ１４、ＨＰＶ１６、ＨＰＶ１７、ＨＰＶ２０、ＨＰＶ３１、ＨＰＶ４７、ＶＥＧＦＣ、ＶＥＧＦＤ、ＶＥＧＦＥＧＦ、ＦＧＦ、ＧＭＣＳＦ、ＩＬ−１、ＰＤＧＦ、またはＴＧＦ−β１と結合する。
いくつかの実施態様では、アプタマーは、表皮中の標的と結合する。いくつかの実施態様では、アプタマーは、真皮中の標的と結合する。
いくつかの実施態様では、皮膚は正常な皮膚である。
いくつかの実施態様では、皮膚は損傷皮膚である。
いくつかの実施態様では、損傷皮膚は罹患皮膚である。
いくつかの実施態様では、損傷皮膚は変化したバリアを含んでなる。
いくつかの実施態様では、アプタマーは、積載物（例えば、それに結合された（例えば、コンジュゲートされた））、例えば、小分子、イメージング色素、蛍光団、または放射性標識を含んでなる。
いくつかの態様において、本開示は、被験体（例えば、哺乳動物被験体、例えば、ヒト）において皮膚疾患を処置する方法を提供し、その方法は、一定用量（例えば、有効用量、例えば、治療上有効な用量）のアプタマー（例えば、アプタマーを含んでなる薬学的に許容可能な組成物）を被験体の皮膚（前記皮膚は表皮と真皮を含んでなる）に局所的に投与する（例えば、適用する）ことを含んでなり、前記アプタマーは皮膚において固有の活性を有する（例えば、薬力学的応答を惹起する）。
いくつかの実施態様では、固有の活性は表皮におけるものである。
いくつかの実施態様では、固有の活性は真皮におけるものである。
いくつかの実施態様では、固有の活性はＥＣ５０値（例えば、被験体標的に対する）として測定される。
いくつかの実施態様では、固有の活性は、ＩＣ５０値（例えば、被験体標的に対する）として測定される。
いくつかの実施態様では、アプタマーは表皮中にアプタマーのＩＣ５０の少なくとも１０倍（例えば、少なくとも１０倍、１００倍、２００倍、５００倍、または１０００倍）のレベルで存在する。
いくつかの実施態様では、アプタマーは真皮中にアプタマーのＩＣ５０の少なくとも１０倍（例えば、少なくとも１０倍、１００倍、２００倍、５００倍、または１０００倍）のレベルで存在する。
いくつかの実施態様では、アプタマーは薬学的に許容可能な組成物（例えば、ビヒクル）（例えば、本明細書に記載のビヒクル、例えば、表４または９に示されるビヒクル）中に存在する。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物中のアプタマーの濃度は、０．００１％〜２０％の間（例えば、０．００１％〜１５％の間、０．００１％〜１０％の間、０．００１％〜５％の間、０．００１％〜２％の間、０．０１％〜２０％の間、０．０１％〜１０の間％、０．０１％〜５％の間、０．０１％〜２％の間、０．１％〜２０％の間、０．１％〜１５％の間、０．１％〜１０％の間、０．１％〜５％の間、または０．１％〜２％の間）である。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物は、スプレー（例えば、エアゾール）、液体、軟膏、クリーム、ローション、溶液（例えば、水溶液）、懸濁液、エマルション、ペースト、ゲル、粉末、フォーム、緩徐放出ナノ粒子、緩徐放出微粒子、生体接着剤、パッチ、包帯、半固体投与形または創傷被覆材として投与される。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物は、水溶液として投与される。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物は、半固体投与形として投与される。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物は、クリームとして投与される。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物は、浸透促進剤（例えば、プロピレングリコール）を含有しない。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物の皮膚への適用用量は、０．０１〜２０ｍｇ／ｃｍ２の間（例えば、０．０１〜１５ｍｇ／ｃｍ２の間、０．０１〜１０ｍｇ／ｃｍ２の間、０．０１〜５ｍｇ／ｃｍ２の間、０．０１〜２ｍｇ／ｃｍ２の間、の間０．０５〜２０ｍｇ／ｃｍ２、の間０．０５〜１５ｍｇ／ｃｍ２、の間０．０５〜１０ｍｇ／ｃｍ２、または０．０５〜５ｍｇ／ｃｍ２の間、０．０５〜２ｍｇ／ｃｍ２の間、０．１〜２０ｍｇ／ｃｍ２の間、０．１〜１５ｍｇ／ｃｍ２の間、０．１〜１０ｍｇ／ｃｍの間２、０．１〜５ｍｇ／ｃｍ２の間、または０．１〜２ｍｇ／ｃｍ２）の間である。
いくつかの実施態様では、表皮に入る、局所的に投与されたアプタマーの適用用量のパーセンテージは、ｅｘ ｖｉｖｏヒト皮膚を用いたｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイ（例えば、フランツセルセットアップまたはフロースルー拡散セル）（例えば、３２℃で）（例えば、本明細書に記載の通り）で決定される。
いくつかの実施態様では、アプタマーは、皮膚の真皮に入り（例えば、浸透し）、適用用量の少なくとも０．０１％（例えば、少なくとも０．０５％、少なくとも０．１％、少なくとも０．５％、少なくとも１％、少なくとも５％、または少なくとも１０％）が（例えば、投与１５分、３０分、または１、２、３、４、６、１２、１５、２４、４８、もしくは７２時間以内に）真皮に入る（例えば、浸透する）。
いくつかの実施態様では、真皮に入る、局所的に投与されたアプタマーの適用用量のパーセンテージは、ｅｘ ｖｉｖｏヒト皮膚を用いたｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイ（例えば、フランツセルセットアップまたはフロースルー拡散セル）（例えば、３２℃で）（例えば、本明細書に記載の通り）で決定される。
いくつかの実施態様では、局所的に適用されたアプタマーの５％未満（例えば、１％未満、０．５％未満、０．１％未満、０．０５％未満、０．０１％未満、０．００１％未満、または検出限界未満）が（例えば、投与２、３、４、６、１２、１５、２４、４８または７２時間後に）体循環に到達する。
いくつかの実施態様では、アプタマーの長さは、１００ヌクレオチド未満（例えば、９５、９０、８５、８０、７５、または７０ヌクレオチド未満）である。
いくつかの実施態様では、アプタマーの長さは、３０ヌクレオチドより長い（例えば、３５、４０、４５、５０、５５、６０、または６５ヌクレオチドより長い）。
いくつかの実施態様では、アプタマーは、３０〜９０ヌクレオチド長の間（例えば、３５〜８５ヌクレオチド長の間）である。
いくつかの実施態様では、アプタマーの少なくとも１つのヌクレオチドが化学修飾を含んでなる。
いくつかの実施態様では、アプタマーの総てのヌクレオチドが化学修飾を含んでなる。
いくつかの実施態様では、化学修飾は、糖の２’位に修飾を含んでなる。
いくつかの実施態様では、化学修飾は、２’−Ｏ−メトキシエチル付加を含んでなる。
いくつかの実施態様では、化学修飾は、２’フルオロ付加を含んでなる。
いくつかの実施態様では、アプタマーは、その３’末端に単一の逆位デオキシチミジン残基（ｉｄＴ）を含んでなる。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物は、１日１回投与される。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物は、１日２回投与される。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物は、週１回投与される。
いくつかの実施態様では、皮膚疾患は、喘息の増悪、関節リウマチの増悪、乾癬性関節炎の増悪、シェーグレン症候群の増悪、ブドウ膜炎の増悪、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）の増悪、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）の増悪、関節痛の増悪、または膵島細胞移植炎症の増悪を含んでなる。
いくつかの実施態様では、皮膚疾患は、乾癬、皮膚炎（例えば、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、湿疹性皮膚炎、または脂漏性皮膚炎）、化膿性汗腺炎、口腔扁平苔癬、慢性水疱性障害、座瘡、免疫介在障害の脂漏性皮膚病徴、脱毛症、円形脱毛症(alopecia greata)、強皮症(scleredoma)、瘢痕形成（例えば、ケロイド瘢痕または肥厚性瘢痕）、蕁麻疹、酒さ、黒色腫、または腎臓移植からの炎症を含んでなる。
いくつかの実施態様では、皮膚疾患は、持続的炎症、細胞動態、および分化の皮膚障害（例えば、乾癬、乾癬性関節炎、剥離性皮膚炎、バラ色粃糠疹、扁平苔癬、光沢蘚苔、または汗孔角化症）；表皮密着の皮膚障害、水疱性(vesicular and bullous)障害（例えば、天疱瘡、水疱性類天疱瘡、後天性表皮水疱症、または掌または足底膿疹）；表皮付属物の皮膚障害および関連の障害（例えば、毛髪障害、爪、酒さ、口周囲皮膚炎、または濾胞性症候群）；表皮および付属物の腫瘍などの皮膚障害（例えば、扁平上皮癌、基底細胞癌、角化棘細胞腫、良性上皮腫瘍、またはメルケル細胞癌）；メラノサイトの障害（例えば、色素障害、白化、メラニン欠乏症および色素沈着症、色素性母斑、または黒色腫）；真皮の炎症性および新生物性障害の皮膚障害（例えば、持久性隆起性紅斑、好酸球、顔面肉芽腫、壊疽性膿皮症、悪性萎縮性丘疹、真皮および軟組織の線維損傷、またはカポジ肉腫）；皮下組織の障害（例えば、脂肪織炎または脂肪異栄養症）；反応性が変化した皮膚変化を含む皮膚障害（例えば、蕁麻疹、血管性浮腫、移植片対宿主病、アレルギー性接触性皮膚炎、自家感作性皮膚炎、アトピー性皮膚炎、または脂漏性皮膚炎）；機械的および物理的因子による皮膚変化（例えば、熱損傷、放射線皮膚炎、うおのめ、またはたこ）；光傷害（例えば、急性および慢性ＵＶ照射、または光増感）；または微生物因子による皮膚障害（例えば、らい病、ライム病、爪真菌症、水虫、風疹、麻疹、単純ヘルペス、ＥＢＶ（エプスタイン−バーウイルス）、ＨＰＶ（ヒト乳頭腫ウイルス）（例えば、ＨＰＶ６および７）、疣贅、またはプリオン）を含んでなる。
いくつかの実施態様では、皮膚疾患は乾癬を含んでなる。
いくつかの実施態様では、乾癬は軽度乾癬である。
いくつかの実施態様では、乾癬は中等度乾癬である。
いくつかの実施態様では、乾癬は重度乾癬である。
いくつかの実施態様では、皮膚疾患は、皮膚炎（例えば、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、湿疹性皮膚炎、または脂漏性皮膚炎）を含んでなる。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物は、皮膚疾患の治療薬を含んでなる第２の薬剤と組み合わせて投与される。
いくつかの実施態様では、アプタマーは、第１の標的および／または第１の標的の標的と結合し、可溶性リガンドおよび／またはそれらの受容体、細胞外酵素、膜貫通酵素、および細胞内酵素、足場／構造タンパク質、ＲＮＡ、ＤＮＡ、脂質、脂肪酸、補因子および個々の特異的および／または非特異的相互作用を含む調節（例えば、促進作用、拮抗作用、安定化、脱安定化、アプタマーによる細胞、期間、または全身系からの除去の促進を含む）の対象となり得る他の生物学的または化学的実体との相互作用を含み得る。
いくつかの実施態様では、アプタマーは、皮膚中の標的（例えば、タンパク質）、例えば、ＩＬ２、ＩＬ１２、ＩＬ１７、ＩＬ２２、ＩＬ２３、ＩＦＮγ、ＴＮＦα、ＴＳＬＰ、ＣＣＲ１、ＣＸＣＲ４、ＣＲＴＨ２、ａＴＬＲ、ｐ５３、ＲＡＳ、ＭＥＫ、パッチ１、ソニックヘッジホッグシグナル伝達のメディエーター、ｍｉＲＮＡ（例えば、ｍｉｒ２１）、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ、ＰＴＥＮ、ＦＡＳ、ＤＧＡＴ、ＳＣＤ１、ＥＧＦＲ、ＥＧＦ、ＨＢ−ＥＧＦ、ＴＧＦ−α、ＥＰＲ、ＢＴＣ、ＮＲＧ１−４、β−インテグリン、ＣＤ４４、Ｅ−カドヘリン、ＣＬＡ、ＨＰＶ１、ＨＰＶ５、ＨＰＶ８、ＨＰＶ１４、ＨＰＶ１６、ＨＰＶ１７、ＨＰＶ２０、ＨＰＶ３１、ＨＰＶ４７、ＶＥＧＦＣ、ＶＥＧＦＤ、ＶＥＧＦＥＧＦ、ＦＧＦ、ＧＭＣＳＦ、ＩＬ−１、ＰＤＧＦ、またはＴＧＦ−β１と結合する。
いくつかの実施態様では、アプタマーは、表皮中の標的と結合する。いくつかの実施態様では、アプタマーは、真皮中の標的と結合する。
いくつかの実施態様では、皮膚は正常な皮膚である。
いくつかの実施態様では、皮膚は損傷皮膚である。
いくつかの実施態様では、損傷皮膚は罹患皮膚である。
いくつかの実施態様では、損傷皮膚は変化したバリアを含んでなる。
いくつかの実施態様では、アプタマーは、積載物（例えば、それに結合された（例えば、コンジュゲートされた））、例えば、小分子、イメージング色素、蛍光団、または放射性標識を含んでなる。
いくつかの態様において、本開示は、被験体に積載物を局所的に送達するための方法を提供し、その方法は、
表皮と真皮を含んでなる、被験体の皮膚にアプタマー（例えば、アプタマーを含んでなる薬学的に許容可能な組成物の一定用量）を含んでなる薬学的に許容可能な組成物を投与し、
積載物は前記アプタマーと結合され、
前記アプタマーと結合積載物は皮膚の表皮に入り、
それにより、被験体に積載物を局所的に送達すること
を含んでなる。
いくつかの実施態様では、アプタマーおよび結合積載物の適用用量の少なくとも０．０１％（例えば、少なくとも０．０５％、少なくとも０．１％、少なくとも０．５％、少なくとも１％、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、または少なくとも５０％）が表皮に入る。
いくつかの実施態様では、積載物（例えば、アプタマーに結合された（例えば、コンジュゲートされた））は、小分子、イメージング色素、蛍光団、または放射性標識を含んでなる。
いくつかの実施態様では、表皮に入る、局所的に投与されたアプタマーおよび結合積載物の適用用量のパーセンテージは、ｅｘ ｖｉｖｏヒト皮膚を用いたｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイ（例えば、フランツセルセットアップまたはフロースルー拡散セル）（例えば、３２℃で）（例えば、本明細書に記載の通り）で決定される。
いくつかの実施態様では、アプタマーおよび結合積載物は皮膚の真皮に入り（例えば、浸透し）、適用用量の少なくとも０．０１％（例えば、少なくとも０．０５％、少なくとも０．１％、少なくとも０．５％、少なくとも１％、少なくとも５％、または少なくとも１０％）が（例えば、投与１５分、３０分以内に、または１、２、３、４、６、１２、１５、２４、４８、もしくは７２時間以内に）真皮に入る（例えば、浸透する）。
いくつかの実施態様では、真皮に入る、局所的に投与されたアプタマーおよび結合積載物の適用用量のパーセンテージは、ｅｘ ｖｉｖｏヒト皮膚を用いたｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイ（例えば、フランツセルセットアップまたはフロースルー拡散セル）（例えば、３２℃で）（例えば、本明細書に記載の通り）で決定される。
いくつかの実施態様では、アプタマーは、薬学的に許容可能な組成物（例えば、ビヒクル）（例えば、本明細書に記載のビヒクル、例えば、表４または９に示されるビヒクル）中に存在する。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物中のアプタマーおよび結合積載物の濃度は、０．００１％〜２０％の間（例えば、０．００１％〜１５％の間、０．００１％〜１０％の間、０．００１％〜５％の間、０．００１％〜２％の間、０．０１％〜２０％の間、０．０１％〜１０％の間、０．０１％〜５％の間、０．０１％〜２％の間、０．１％〜２０％の間、０．１％〜１５％の間、０．１％〜１０％の間、０．１％〜５％の間、または０．１％〜２％の間）である。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物は、スプレー（例えば、エアゾール）、液体、軟膏、クリーム、ローション、溶液（例えば、水溶液）、懸濁液、エマルション、ペースト、ゲル、粉末、フォーム、緩徐放出ナノ粒子、緩徐放出微粒子、生体接着剤、パッチ、包帯、半固体投与形または創傷被覆材として投与される。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物は、水溶液として投与される。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物は、半固体投与形として投与される。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物は、クリームとして投与される。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物は、浸透促進剤（例えば、プロピレングリコール）を含有しない。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物の皮膚への適用用量は、０．０１〜２０ｍｇ／ｃｍ２の間（例えば、０．０１〜１５ｍｇ／ｃｍ２の間、０．０１〜１０ｍｇ／ｃｍ２の間、０．０１〜５ｍｇ／ｃｍ２の間、０．０１〜２ｍｇ／ｃｍ２の間、０．０５〜２０ｍｇ／ｃｍ２の間、０．０５〜１５ｍｇ／ｃｍ２の間、０．０５〜１０ｍｇ／ｃｍ２の間、または０．０５〜５ｍｇ／ｃｍ２の間、０．０５〜２ｍｇ／ｃｍ２の間、０．１〜２０ｍｇ／ｃｍの間２、０．１〜１５ｍｇ／ｃｍの間２、０．１〜１０ｍｇ／ｃｍ２の間、０．１〜５ｍｇ／ｃｍの間２、または０．１〜２ｍｇ／ｃｍ２）の間である。
いくつかの実施態様では、表皮に入る、局所的に投与されたアプタマーおよび結合積載物の適用用量のパーセンテージは、ｅｘ ｖｉｖｏヒト皮膚を用いたｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイ（例えば、フランツセルセットアップまたはフロースルー拡散セル）（例えば、３２℃で）（例えば、本明細書に記載の通り）で決定される。
いくつかの実施態様では、アプタマーおよび結合積載物は皮膚の真皮に入り（例えば、浸透し）、適用用量の少なくとも０．０１％（例えば、少なくとも０．０５％、少なくとも０．１％、少なくとも０．５％、少なくとも１％、少なくとも５％、または少なくとも１０％）が（例えば、投与１５分、３０分以内に、または１、２、３、４、６、１２、１５、２４、４８、もしくは７２時間以内に）真皮に入る（例えば、浸透する）。
いくつかの実施態様では、真皮に入る、局所的に投与されたアプタマーおよび結合積載物適用用量のパーセンテージは、ｅｘ ｖｉｖｏヒト皮膚を用いたｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイ（例えば、フランツセルセットアップまたはフロースルー拡散セル）（例えば、３２℃で）（例えば、本明細書に記載の通り）で決定される。
いくつかの実施態様では、局所的に適用されたアプタマーおよび結合積載物の５％未満（例えば、１％未満、０．５％未満、０．１％未満、０．０５％未満、０．０１％未満、０．００１％未満、または検出限界未満）が（例えば、投与２、３、４、６、１２、１５、２４、４８または７２時後に）体循環に到達する。
いくつかの実施態様では、アプタマーの長さは、１００ヌクレオチド未満（例えば、９５、９０、８５、８０、７５、または７０ヌクレオチド未満）である。
いくつかの実施態様では、アプタマーの長さは、３０ヌクレオチドより長い（例えば、３５、４０、４５、５０、５５、６０、または６５ヌクレオチドより長い）。
いくつかの実施態様では、アプタマーは、３０〜９０ヌクレオチド長の間（例えば、３５〜８５ヌクレオチド長の間）である。
いくつかの実施態様では、アプタマーの少なくとも１つのヌクレオチドが化学修飾を含んでなる。
いくつかの実施態様では、アプタマーの総てのヌクレオチドが化学修飾を含んでなる。
いくつかの実施態様では、化学修飾は、糖の２’位に修飾を含んでなる。
いくつかの実施態様では、化学修飾は、２’−Ｏ−メトキシエチル付加を含んでなる。
いくつかの実施態様では、化学修飾は、２’フルオロ付加を含んでなる。
いくつかの実施態様では、アプタマーは、その３’末端に単一の逆位デオキシチミジン残基（ｉｄＴ）を含んでなる。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物は、１日１回投与される。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物は、１日２回投与される。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物は、週１回投与される。
いくつかの実施態様では、皮膚は正常な皮膚である。
いくつかの実施態様では、皮膚は損傷皮膚である。
いくつかの実施態様では、損傷皮膚は罹患皮膚である。
いくつかの実施態様では、損傷皮膚は変化したバリアを含んでなる。
いくつかの態様において、本開示は、被験体（例えば、哺乳動物被験体、例えば、ヒト）において皮膚疾患の処置に使用するための一定用量（例えば、有効用量、例えば、治療上有効な用量）のアプタマー（例えば、アプタマーを含んでなる薬学的に許容可能な組成物）を提供し、その用量は皮膚疾患を含んでなる被験体の皮膚（前記皮膚は表皮と真皮を含んでなる）に局所的に投与され（例えば、適用され）、適用用量の少なくとも０．０１％（例えば、少なくとも０．０５％、少なくとも０．１％、少なくとも０．５％、少なくとも１％、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、または少なくとも５０％）が（例えば、投与１５分、３０分以内に、または１、２、３、４、６、１２、１５、２４、４８、もしくは７２時間以内に）皮膚の表皮に入る（例えば、浸透する）。
いくつかの実施態様では、アプタマーは、薬学的に許容可能な組成物（例えば、ビヒクル）（例えば、本明細書に記載のビヒクル、例えば、表４または９に示されるビヒクル）中に存在する。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物中のアプタマーの濃度は、０．００１％〜２０％の間（例えば、０．００１％〜１５％の間、０．００１％〜１０％の間、０．００１％〜５％の間、０．００１％〜２％の間、０．０１％〜２０％の間、０．０１％〜１０％の間、０．０１％〜５％の間、０．０１％〜２％の間、０．１％〜２０％の間、０．１％〜１５％の間、０．１％〜１０％の間、０．１％〜５％の間、または０．１％〜２％の間）である。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物は、スプレー（例えば、エアゾール）、液体、軟膏、クリーム、ローション、溶液（例えば、水溶液）、懸濁液、エマルション、ペースト、ゲル、粉末、フォーム、緩徐放出ナノ粒子、緩徐放出微粒子、生体接着剤、パッチ、包帯、半固体投与形または創傷被覆材として投与される。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物は、水溶液として投与される。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物は、半固体投与形として投与される。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物は、クリームとして投与される。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物は、浸透促進剤（例えば、プロピレングリコール）を含有しない。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物の皮膚への適用用量は、０．０１〜２０ｍｇ／ｃｍ２の間（例えば、０．０１〜１５ｍｇ／ｃｍ２の間、０．０１〜１０ｍｇ／ｃｍ２の間、０．０１〜５ｍｇ／ｃｍ２の間、０．０１〜２ｍｇ／ｃｍ２の間、０．０５〜２０ｍｇ／ｃｍ２の間、０．０５〜１５ｍｇ／ｃｍ２の間、０．０５〜１０ｍｇ／ｃｍ２の間、または０．０５〜５ｍｇ／ｃｍ２の間、０．０５〜２ｍｇ／ｃｍ２の間、０．１〜２０ｍｇ／ｃｍ２の間、０．１〜１５ｍｇ／ｃｍ２の間、０．１〜１０ｍｇ／ｃｍ２の間、０．１〜５ｍｇ／ｃｍ２の間、または０．１〜２ｍｇ／ｃｍ２）の間である。
いくつかの実施態様では、表皮に入る、局所的に投与されたアプタマーの適用用量のパーセンテージは、ｅｘ ｖｉｖｏヒト皮膚を用いたｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイ（例えば、フランツセルセットアップまたはフロースルー拡散セル）（例えば、３２℃で）（例えば、本明細書に記載の通り）で決定される。
いくつかの実施態様では、アプタマーは皮膚の真皮に入り（例えば、浸透し）、適用用量の少なくとも０．０１％（例えば、少なくとも０．０５％、少なくとも０．１％、少なくとも０．５％、少なくとも１％、少なくとも５％、または少なくとも１０％）が（例えば、投与１５分、３０分以内に、または１、２、３、４、６、１２、１５、２４、４８、もしくは７２時間以内に）真皮に入る（例えば、浸透する）。
いくつかの実施態様では、真皮に入る、局所的に投与されたアプタマーの適用用量のパーセンテージは、ｅｘ ｖｉｖｏヒト皮膚を用いたｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイ（例えば、フランツセルセットアップまたはフロースルー拡散セル）（例えば、３２℃で）（例えば、本明細書に記載の通り）で決定される。
いくつかの実施態様では、局所的に適用されたアプタマーの５％未満（例えば、１％未満、０．５％未満、０．１％未満、０．０５％未満、０．０１％未満、０．００１％未満、または検出限界未満）が（例えば、投与２、３、４、６、１２、１５、２４、４８または７２時間後に）が体循環に到達する。
いくつかの実施態様では、アプタマーの長さは、１００ヌクレオチド未満（例えば、９５、９０、８５、８０、７５、または７０ヌクレオチド未満）である。
いくつかの実施態様では、アプタマーの長さは、３０ヌクレオチドより長い（例えば、３５、４０、４５、５０、５５、６０、または６５ヌクレオチドより長い）。
いくつかの実施態様では、アプタマーは、３０〜９０ヌクレオチド長の間（例えば、３５〜８５ヌクレオチド長の間）である。
いくつかの実施態様では、アプタマーの少なくとも１つのヌクレオチドが化学修飾を含んでなる。
いくつかの実施態様では、アプタマーの総てのヌクレオチドが化学修飾を含んでなる。
いくつかの実施態様では、化学修飾は、糖の２’位に修飾を含んでなる。
いくつかの実施態様では、化学修飾は、２’−Ｏ−メトキシエチル付加を含んでなる。
いくつかの実施態様では、化学修飾は、２’フルオロ付加を含んでなる。
いくつかの実施態様では、アプタマーは、その３’末端に単一の逆位デオキシチミジン残基（ｉｄＴ）を含んでなる。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物は、１日１回投与される。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物は、１日２回投与される。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物は、週１回投与される。
いくつかの実施態様では、皮膚疾患は、喘息の増悪、関節リウマチの増悪、乾癬性関節炎の増悪、シェーグレン症候群の増悪、ブドウ膜炎の増悪、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）の増悪、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）の増悪、関節痛の増悪、または膵島細胞移植炎症の増悪を含んでなる。
いくつかの実施態様では、皮膚疾患は、乾癬、皮膚炎（例えば、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、湿疹性皮膚炎、または脂漏性皮膚炎）、化膿性汗腺炎、口腔扁平苔癬、慢性水疱性障害、座瘡、免疫介在障害の脂漏性皮膚病徴、脱毛症、円形脱毛症(alopecia greata)、強皮症(scleredoma)、瘢痕形成（例えば、ケロイド瘢痕または肥厚性瘢痕）、蕁麻疹、酒さ、黒色腫、または腎臓移植からの炎症を含んでなる。
いくつかの実施態様では、皮膚疾患は、持続的炎症、細胞動態、および分化の皮膚障害（例えば、乾癬、乾癬性関節炎、剥離性皮膚炎、バラ色粃糠疹、扁平苔癬、光沢蘚苔、または汗孔角化症）；表皮密着の皮膚障害、水疱性(vesicular and bullous)障害（例えば、天疱瘡、水疱性類天疱瘡、後天性表皮水疱症、または掌または足底膿疹）；表皮付属物の皮膚障害および関連の障害（例えば、毛髪障害、爪、酒さ、口周囲皮膚炎、または濾胞性症候群）；表皮および付属物の腫瘍などの皮膚障害（例えば、扁平上皮癌、基底細胞癌、角化棘細胞腫、良性上皮腫瘍、またはメルケル細胞癌）；メラノサイトの障害（例えば、色素障害、白化、メラニン欠乏症および色素沈着症、色素性母斑、または黒色腫）；真皮の炎症性および新生物性障害の皮膚障害（例えば、持久性隆起性紅斑、好酸球、顔面肉芽腫、壊疽性膿皮症、悪性萎縮性丘疹、真皮および軟組織の線維損傷、またはカポジ肉腫）；皮下組織の障害（例えば、脂肪織炎または脂肪異栄養症）；反応性が変化した皮膚変化を含む皮膚障害（例えば、蕁麻疹、血管性浮腫、移植片対宿主病、アレルギー性接触性皮膚炎、自家感作性皮膚炎、アトピー性皮膚炎、または脂漏性皮膚炎）；機械的および物理的因子による皮膚変化（例えば、熱損傷、放射線皮膚炎、うおのめ、またはたこ）；光傷害（例えば、急性および慢性ＵＶ照射、または光増感）；または微生物因子による皮膚障害（例えば、らい病、ライム病、爪真菌症、水虫、風疹、麻疹、単純ヘルペス、ＥＢＶ（エプスタイン−バーウイルス）、ＨＰＶ（ヒト乳頭腫ウイルス）（例えば、ＨＰＶ６および７）、疣贅、またはプリオン）を含んでなる。
いくつかの実施態様では、皮膚疾患は乾癬を含んでなる。
いくつかの実施態様では、乾癬は軽度乾癬である。
いくつかの実施態様では、乾癬は中等度乾癬である。
いくつかの実施態様では、乾癬は重度乾癬である。
いくつかの実施態様では、皮膚疾患は、皮膚炎（例えば、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、湿疹性皮膚炎、または脂漏性皮膚炎）を含んでなる。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物は、皮膚疾患の治療薬を含んでなる第２の薬剤と組み合わせて投与される。
いくつかの実施態様では、アプタマーは、第１の標的および／または第１の標的の標的と結合し、可溶性リガンドおよび／またはそれらの受容体、細胞外酵素、膜貫通酵素、および細胞内酵素、足場／構造タンパク質、ＲＮＡ、ＤＮＡ、脂質、脂肪酸、補因子および個々の特異的および／または非特異的相互作用を含む調節（例えば、促進作用、拮抗作用、安定化、脱安定化、アプタマーによる細胞、期間、または全身系からの除去の促進を含む）の対象となり得る他の生物学的または化学的実体との相互作用を含み得る。
いくつかの実施態様では、アプタマーは、皮膚中の標的（例えば、タンパク質）、例えば、ＩＬ２、ＩＬ１２、ＩＬ１７、ＩＬ２２、ＩＬ２３、ＩＦＮγ、ＴＮＦα、ＴＳＬＰ、ＣＣＲ１、ＣＸＣＲ４、ＣＲＴＨ２、ａＴＬＲ、ｐ５３、ＲＡＳ、ＭＥＫ、パッチ１、ソニックヘッジホッグシグナル伝達のメディエーター、ｍｉＲＮＡ（例えば、ｍｉｒ２１）、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ、ＰＴＥＮ、ＦＡＳ、ＤＧＡＴ、ＳＣＤ１、ＥＧＦＲ、ＥＧＦ、ＨＢ−ＥＧＦ、ＴＧＦ−α、ＥＰＲ、ＢＴＣ、ＮＲＧ１−４、β−インテグリン、ＣＤ４４、Ｅ−カドヘリン、ＣＬＡ、ＨＰＶ１、ＨＰＶ５、ＨＰＶ８、ＨＰＶ１４、ＨＰＶ１６、ＨＰＶ１７、ＨＰＶ２０、ＨＰＶ３１、ＨＰＶ４７、ＶＥＧＦＣ、ＶＥＧＦＤ、ＶＥＧＦＥＧＦ、ＦＧＦ、ＧＭＣＳＦ、ＩＬ−１、ＰＤＧＦ、またはＴＧＦ−β１と結合する。
いくつかの実施態様では、アプタマーは、表皮中の標的と結合する。いくつかの実施態様では、アプタマーは、真皮中の標的と結合する。
いくつかの実施態様では、皮膚は正常な皮膚である。
いくつかの実施態様では、皮膚は損傷皮膚である。
いくつかの実施態様では、損傷皮膚は罹患皮膚である。
いくつかの実施態様では、損傷皮膚は変化したバリアを含んでなる。
いくつかの実施態様では、アプタマーは、積載物（例えば、それに結合された（例えば、コンジュゲートされた））、例えば、小分子、イメージング色素、蛍光団、または放射性標識を含んでなる。
いくつかの態様において、本開示は、被験体（例えば、哺乳動物被験体、例えば、ヒト）における皮膚疾患（前記皮膚は表皮と真皮を含んでなる）の局所処置用薬剤の製造のための、一定の用量（例えば、有効用量、例えば、治療上有効な用量）のアプタマー（例えば、アプタマーを含んでなる薬学的に許容可能な組成物）の使用を提供し、適用用量少なくとも０．０１％（例えば、少なくとも０．０５％、少なくとも０．１％、少なくとも０．５％、少なくとも１％、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、または少なくとも５０％）が（例えば、投与１５分、３０分以内に、または１、２、３、４、６、１２、１５、２４、４８、もしくは７２時間以内に）皮膚の表皮に入り（例えば、浸透し）、前記用量は皮膚疾患を含んでなる被験体の皮膚への局所投与（例えば、適用）のためのものである。
いくつかの実施態様では、アプタマーは、薬学的に許容可能な組成物（例えば、ビヒクル）（例えば、本明細書に記載のビヒクル、例えば、表４または９に示されるビヒクル）中に存在する。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物中のアプタマーの濃度は、０．００１％および２０％の間（例えば、０．００１％および１５％の間、０．００１％および１０％の間、０．００１％および５％の間、０．００１％および２％の間、０．０１％および２０％の間、０．０１％および１０％の間、０．０１％および５％の間、０．０１％および２％の間、０．１％および２０％の間、０．１％および１５％の間、０．１％および１０％の間、０．１％および５％の間、または０．１％および２％の間）である。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物は、スプレー（例えば、エアゾール）、液体、軟膏、クリーム、ローション、溶液（例えば、水溶液）、懸濁液、エマルション、ペースト、ゲル、粉末、フォーム、緩徐放出ナノ粒子、緩徐放出微粒子、生体接着剤、パッチ、包帯、半固体投与形または創傷被覆材として投与される。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物は、水溶液として投与される。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物は、半固体投与形として投与される。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物は、クリームとして投与される。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物は、浸透促進剤（例えば、プロピレングリコール）を含有しない。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物の皮膚への適用用量は、０．０１および２０ｍｇ／ｃｍ２の間（例えば、０．０１および１５ｍｇ／ｃｍ２の間、０．０１および１０ｍｇ／ｃｍの間２、０．０１および５ｍｇ／ｃｍ２の間、０．０１および２ｍｇ／ｃｍ２の間、０．０５および２０ｍｇ／ｃｍ２の間、０．０５および１５ｍｇ／ｃｍ２の間、０．０５および１０ｍｇ／ｃｍ２の間、または０．０５および５ｍｇ／ｃｍ２の間、０．０５および２ｍｇ／ｃｍ２の間、０．１および２０ｍｇ／ｃｍ２の間、０．１および１５ｍｇ／ｃｍの間２、０．１および１０ｍｇ／ｃｍ２の間、０．１および５ｍｇ／ｃｍ２の間、または０．１および２ｍｇ／ｃｍ２の間）である。
いくつかの実施態様では、表皮に入る、局所的に投与されたアプタマーの適用用量のパーセンテージは、ｅｘ ｖｉｖｏヒト皮膚を用いたｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイ（例えば、フランツセルセットアップまたはフロースルー拡散セル）（例えば、３２℃で）（例えば、本明細書に記載の通り）で決定される。
いくつかの実施態様では、アプタマーは皮膚の真皮に入り（例えば、浸透し）、適用用量の少なくとも０．０１％（例えば、少なくとも０．０５％、少なくとも０．１％、少なくとも０．５％、少なくとも１％、少なくとも５％、または少なくとも１０％）が（例えば、投与１５分、３０分以内に、または１、２、３、４、６、１２、１５、２４、４８、もしくは７２時間以内に）真皮に入る（例えば、浸透する）。
いくつかの実施態様では、真皮に入る、局所的に投与されたアプタマーの適用用量のパーセンテージは、ｅｘ ｖｉｖｏヒト皮膚を用いたｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイ（例えば、フランツセルセットアップまたはフロースルー拡散セル）（例えば、３２℃で）（例えば、本明細書に記載の通り）で決定される。
いくつかの実施態様では、局所的に適用されたアプタマーの５％未満（例えば、１％未満、０．５％未満、０．１％未満、０．０５％未満、０．０１％未満、０．００１％未満、または検出限界未満）が（例えば、投与２、３、４、６、１２、１５、２４、４８または７２時間後に）体循環に到達する。
いくつかの実施態様では、アプタマーの長さは、１００ヌクレオチド未満（例えば、９５、９０、８５、８０、７５、または７０ヌクレオチド未満）である。
いくつかの実施態様では、アプタマーの長さは、３０ヌクレオチドより長い（例えば、３５、４０、４５、５０、５５、６０、または６５ヌクレオチドより長い）。
いくつかの実施態様では、アプタマーは、３０〜９０ヌクレオチド長の間（例えば、３５〜８５ヌクレオチド長さの間）である。
いくつかの実施態様では、アプタマーの少なくとも１つのヌクレオチドが化学修飾を含んでなる。
いくつかの実施態様では、アプタマーの総てのヌクレオチドが化学修飾を含んでなる。
いくつかの実施態様では、化学修飾は、糖の２’位に修飾を含んでなる。
いくつかの実施態様では、化学修飾は、２’−Ｏ−メトキシエチル付加を含んでなる。
いくつかの実施態様では、化学修飾は、２’フルオロ付加を含んでなる。
いくつかの実施態様では、アプタマーは、その３’末端に単一の逆位デオキシチミジン残基（ｉｄＴ）を含んでなる。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物は、１日１回投与される。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物は、１日２回投与される。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物は、週１回投与される。
いくつかの実施態様では、皮膚疾患は、喘息の増悪、関節リウマの増悪、乾癬性関節炎の増悪、シェーグレン症候群の増悪、ブドウ膜炎の増悪、悪移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）の増、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）の増悪、関節痛の増悪、または膵島細胞移植炎症の増悪を含んでなる。
いくつかの実施態様では、皮膚疾患は、乾癬、皮膚炎（例えば、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、湿疹性皮膚炎、または脂漏性皮膚炎）、化膿性汗腺炎、口腔扁平苔癬、慢性水疱性障害、座瘡、免疫介在障害の脂漏性皮膚病徴、脱毛症、円形脱毛症(alopecia greata)、強皮症(scleredoma)、瘢痕形成（例えば、ケロイド瘢痕または肥厚性瘢痕）、蕁麻疹、酒さ、黒色腫、または腎臓移植からの炎症を含んでなる。
いくつかの実施態様では、皮膚疾患は、持続的炎症、細胞動態、および分化の皮膚障害（例えば、乾癬、乾癬性関節炎、剥離性皮膚炎、バラ色粃糠疹、扁平苔癬、光沢蘚苔、または汗孔角化症）；表皮密着の皮膚障害、水疱性(vesicular and bullous)障害（例えば、天疱瘡、水疱性類天疱瘡、後天性表皮水疱症、または掌または足底膿疹）；表皮付属物の皮膚障害および関連の障害（例えば、毛髪障害、爪、酒さ、口周囲皮膚炎、または濾胞性症候群）；表皮および付属物の腫瘍などの皮膚障害（例えば、扁平上皮癌、基底細胞癌、角化棘細胞腫、良性上皮腫瘍、またはメルケル細胞癌）；メラノサイトの障害（例えば、色素障害、白化、メラニン欠乏症および色素沈着症、色素性母斑、または黒色腫）；真皮の炎症性および新生物性障害の皮膚障害（例えば、持久性隆起性紅斑、好酸球、顔面肉芽腫、壊疽性膿皮症、悪性萎縮性丘疹、真皮および軟組織の線維損傷、またはカポジ肉腫）；皮下組織の障害（例えば、脂肪織炎または脂肪異栄養症）；反応性が変化した皮膚変化を含む皮膚障害（例えば、蕁麻疹、血管性浮腫、移植片対宿主病、アレルギー性接触性皮膚炎、自家感作性皮膚炎、アトピー性皮膚炎、または脂漏性皮膚炎）；機械的および物理的因子による皮膚変化（例えば、熱損傷、放射線皮膚炎、うおのめ、またはたこ）；光傷害（例えば、急性および慢性ＵＶ照射、または光増感）；または微生物因子による皮膚障害（例えば、らい病、ライム病、爪真菌症、水虫、風疹、麻疹、単純ヘルペス、ＥＢＶ（エプスタイン−バーウイルス）、ＨＰＶ（ヒト乳頭腫ウイルス）（例えば、ＨＰＶ６および７）、疣贅、またはプリオン）を含んでなる。
いくつかの実施態様では、皮膚疾患は乾癬を含んでなる。
いくつかの実施態様では、乾癬は軽度乾癬である。
いくつかの実施態様では、乾癬は中等度乾癬である。
いくつかの実施態様では、乾癬は重度乾癬である。
いくつかの実施態様では、皮膚疾患は、皮膚炎（例えば、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、湿疹性皮膚炎、または脂漏性皮膚炎）を含んでなる。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物は、皮膚疾患の治療薬を含んでなる第２の薬剤と組み合わせて投与される。
いくつかの実施態様では、アプタマーは、第１の標的および／または第１の標的の標的と結合し、可溶性リガンドおよび／またはそれらの受容体、細胞外酵素、膜貫通酵素、および細胞内酵素、足場／構造タンパク質、ＲＮＡ、ＤＮＡ、脂質、脂肪酸、補因子および個々の特異的および／または非特異的相互作用を含む調節（例えば、促進作用、拮抗作用、安定化、脱安定化、アプタマーによる細胞、期間、または全身系からの除去の促進を含む）の対象となり得る他の生物学的または化学的実体との相互作用を含み得る。
いくつかの実施態様では、アプタマーは、皮膚中の標的（例えば、タンパク質）、例えば、ＩＬ２、ＩＬ１２、ＩＬ１７、ＩＬ２２、ＩＬ２３、ＩＦＮγ、ＴＮＦα、ＴＳＬＰ、ＣＣＲ１、ＣＸＣＲ４、ＣＲＴＨ２、ａＴＬＲ、ｐ５３、ＲＡＳ、ＭＥＫ、パッチ１、ソニックヘッジホッグシグナル伝達のメディエーター、ｍｉＲＮＡ（例えば、ｍｉｒ２１）、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ、ＰＴＥＮ、ＦＡＳ、ＤＧＡＴ、ＳＣＤ１、ＥＧＦＲ、ＥＧＦ、ＨＢ−ＥＧＦ、ＴＧＦ−α、ＥＰＲ、ＢＴＣ、ＮＲＧ１−４、β−インテグリン、ＣＤ４４、Ｅ−カドヘリン、ＣＬＡ、ＨＰＶ１、ＨＰＶ５、ＨＰＶ８、ＨＰＶ１４、ＨＰＶ１６、ＨＰＶ１７、ＨＰＶ２０、ＨＰＶ３１、ＨＰＶ４７、ＶＥＧＦＣ、ＶＥＧＦＤ、ＶＥＧＦＥＧＦ、ＦＧＦ、ＧＭＣＳＦ、ＩＬ−１、ＰＤＧＦ、またはＴＧＦ−β１と結合する。
いくつかの実施態様では、アプタマーは、表皮中の標的と結合する。いくつかの実施態様では、アプタマーは、真皮中の標的と結合する
いくつかの実施態様では、皮膚は正常な皮膚である。
いくつかの実施態様では、皮膚は損傷皮膚である。
いくつかの実施態様では、損傷皮膚は罹患皮膚である。
いくつかの実施態様では、損傷皮膚は変化したバリアを含んでなる。
いくつかの実施態様では、アプタマーは、積載物（例えば、それに結合された（例えば、コンジュゲートされた））、例えば、小分子、イメージング色素、蛍光団、または放射性標識を含んでなる。
いくつかの態様において、本開示は、被験体（例えば、哺乳動物被験体、例えば、ヒト）への局所投与に使用するための一定用量（例えば、有効用量、例えば、治療上有効な用量）のアプタマー（例えば、アプタマーを含んでなる薬学的に許容可能な組成物）を提供し、前記用量のアプタマーが被験体の皮膚（前記皮膚は表皮と真皮を含んでなる）に投与され、前記アプタマーは皮膚の表皮に入り（例えば、浸透し）、適用用量の少なくとも０．０１％（例えば、少なくとも０．０５％、少なくとも０．１％、少なくとも０．５％、少なくとも１％、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、または少なくとも５０％）が（投与例えば、１５分、３０分以内、または１、２、３、４、６、１２、１５、２４、４８、もしくは７２時間以内に）表皮に入る（例えば、浸透する）。
いくつかの実施態様では、アプタマーは、薬学的に許容可能な組成物（例えば、ビヒクル）（例えば、本明細書に記載のビヒクル、例えば、表４または９に示されるビヒクル）中に存在する。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物中のアプタマーの濃度は、０．００１％〜２０％の間（例えば、０．００１％〜１５％の間、０．００１％〜１０％の間、０．００１％〜５％の間、０．００１％〜２％の間、０．０１％〜２０％の間、０．０１％〜１０％の間、０．０１％〜５％の間、０．０１％〜２％の間、０．１％〜２０％の間、０．１％〜１５％の間、０．１％〜１０％の間、０．１％〜５％の間、または０．１％〜２％の間）である。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物は、スプレー（例えば、エアゾール）、液体、軟膏、クリーム、ローション、溶液（例えば、水溶液）、懸濁液、エマルション、ペースト、ゲル、粉末、フォーム、緩徐放出ナノ粒子、緩徐放出微粒子、生体接着剤、パッチ、包帯、半固体投与形または創傷被覆材として投与される。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物は、水溶液として投与される。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物は、半固体投与形として投与される。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物は、クリームとして投与される。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物は、浸透促進剤（例えば、プロピレングリコール）を含有しない。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物の皮膚への適用用量は、０．０１〜２０ｍｇ／ｃｍ２の間（例えば、０．０１〜１５ｍｇ／ｃｍ２の間、０．０１〜１０ｍｇ／ｃｍ２の間、０．０１〜５ｍｇ／ｃｍ２の間、０．０１〜２ｍｇ／ｃｍ２の間、０．０５〜２０ｍｇ／ｃｍ２の間、０．０５〜１５ｍｇ／ｃｍ２の間、０．０５〜１０ｍｇ／ｃｍ２の間、または０．０５〜５ｍｇ／ｃｍ２の間、０．０５〜２ｍｇ／ｃｍ２の間、０．１〜２０ｍｇ／ｃｍ２の間、０．１〜１５ｍｇ／ｃｍ２の間、０．１〜１０ｍｇ／ｃｍ２の間、０．１〜５ｍｇ／ｃｍ２の間、または０．１〜２ｍｇ／ｃｍ２の間）である。
いくつかの実施態様では、表皮に入る、局所的に投与されたアプタマーの適用用量のパーセンテージは、ｅｘ ｖｉｖｏヒト皮膚を用いたｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイ（例えば、フランツセルセットアップまたはフロースルー拡散セル）（例えば、３２℃で）（例えば、本明細書に記載の通り）で決定される。
いくつかの実施態様では、アプタマーは皮膚の真皮に入り（例えば、浸透し）、適用用量の少なくとも０．０１％（例えば、少なくとも０．０５％、少なくとも０．１％、少なくとも０．５％、少なくとも１％、少なくとも５％、または少なくとも１０％）が（例えば、投与１５分、３０分以内に、または１、２、３、４、６、１２、１５、２４、４８、もしくは７２時間以内に）真皮に入る（例えば、浸透する）。
いくつかの実施態様では、真皮に入る、局所的に投与されたアプタマーの適用用量のパーセンテージは、ｅｘ ｖｉｖｏヒト皮膚を用いたｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイ（例えば、フランツセルセットアップまたはフロースルー拡散セル）（例えば、３２℃で）（例えば、本明細書に記載の通り）で決定される。
いくつかの実施態様では、局所的に適用されたアプタマーの５％未満（例えば、１％未満、０．５％未満、０．１％未満、０．０５％未満、０．０１未満％、０．００１％未満、または検出限界未満）が（例えば、投与２、３、４、６、１２、１５、２４、４８または７２時間後に）体循環に到達する。
いくつかの実施態様では、アプタマーの長さは、１００ヌクレオチド未満（例えば、９５、９０、８５、８０、７５、または７０ヌクレオチド未満）である。
いくつかの実施態様では、アプタマーの長さは、３０ヌクレオチドより長い（例えば、３５、４０、４５、５０、５５、６０、または６５ヌクレオチドより長い）。
いくつかの実施態様では、アプタマーは、３０〜９０ヌクレオチド長の間（例えば、３５〜８５ヌクレオチド長の間）である。
いくつかの実施態様では、アプタマーの少なくとも１つのヌクレオチドが化学修飾を含んでなる。
いくつかの実施態様では、アプタマーの総てのヌクレオチドが化学修飾を含んでなる。
いくつかの実施態様では、化学修飾は、糖の２’位に修飾を含んでなる。
いくつかの実施態様では、化学修飾は、２’−Ｏ−メトキシエチル付加を含んでなる。
いくつかの実施態様では、化学修飾は、２’フルオロ付加を含んでなる。
いくつかの実施態様では、アプタマーは、その３’末端に単一の逆位デオキシチミジン残基（ｉｄＴ）を含んでなる。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物は、１日１回投与される。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物は、１日２回投与される。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物は、週１回投与される。
いくつかの実施態様では、皮膚は皮膚疾患を含んでなる。
いくつかの実施態様では、皮膚疾患は、喘息の増悪、関節リウマチの増悪、乾癬性関節炎の増悪、シェーグレン症候群の増悪、ブドウ膜炎の増悪、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）の増悪、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤの増悪）、関節痛の増悪、または膵島細胞移植炎症の増悪を含んでなる。
いくつかの実施態様では、皮膚疾患は、乾癬、皮膚炎（例えば、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、湿疹性皮膚炎、または脂漏性皮膚炎）、化膿性汗腺炎、口腔扁平苔癬、慢性水疱性障害、座瘡、免疫介在障害の脂漏性皮膚病徴、脱毛症、円形脱毛症(alopecia greata)、強皮症(scleredoma)、瘢痕形成（例えば、ケロイド瘢痕または肥厚性瘢痕）、蕁麻疹、酒さ、黒色腫、または腎臓移植からの炎症を含んでなる。
いくつかの実施態様では、皮膚疾患は、持続的炎症、細胞動態、および分化の皮膚障害（例えば、乾癬、乾癬性関節炎、剥離性皮膚炎、バラ色粃糠疹、扁平苔癬、光沢蘚苔、または汗孔角化症）；表皮密着の皮膚障害、水疱性(vesicular and bullous)障害（例えば、天疱瘡、水疱性類天疱瘡、後天性表皮水疱症、または掌または足底膿疹）；表皮付属物の皮膚障害および関連の障害（例えば、毛髪障害、爪、酒さ、口周囲皮膚炎、または濾胞性症候群）；表皮および付属物の腫瘍などの皮膚障害（例えば、扁平上皮癌、基底細胞癌、角化棘細胞腫、良性上皮腫瘍、またはメルケル細胞癌）；メラノサイトの障害（例えば、色素障害、白化、メラニン欠乏症および色素沈着症、色素性母斑、または黒色腫）；真皮の炎症性および新生物性障害の皮膚障害（例えば、持久性隆起性紅斑、好酸球、顔面肉芽腫、壊疽性膿皮症、悪性萎縮性丘疹、真皮および軟組織の線維損傷、またはカポジ肉腫）；皮下組織の障害（例えば、脂肪織炎または脂肪異栄養症）；反応性が変化した皮膚変化を含む皮膚障害（例えば、蕁麻疹、血管性浮腫、移植片対宿主病、アレルギー性接触性皮膚炎、自家感作性皮膚炎、アトピー性皮膚炎、または脂漏性皮膚炎）；機械的および物理的因子による皮膚変化（例えば、熱損傷、放射線皮膚炎、うおのめ、またはたこ）；光傷害（例えば、急性および慢性ＵＶ照射、または光増感）；または微生物因子による皮膚障害（例えば、らい病、ライム病、爪真菌症、水虫、風疹、麻疹、単純ヘルペス、ＥＢＶ（エプスタイン−バーウイルス）、ＨＰＶ（ヒト乳頭腫ウイルス）（例えば、ＨＰＶ６および７）、疣贅、またはプリオン）を含んでなる。
いくつかの実施態様では、皮膚疾患は乾癬を含んでなる。
いくつかの実施態様では、乾癬は軽度乾癬である。
いくつかの実施態様では、乾癬は中等度乾癬である。
いくつかの実施態様では、乾癬は重度乾癬である。
いくつかの実施態様では、皮膚疾患は、皮膚炎（例えば、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、湿疹性皮膚炎、または脂漏性皮膚炎）を含んでなる。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物は、皮膚疾患の治療薬を含んでなる第２の薬剤と組み合わせて投与される。
いくつかの実施態様では、アプタマーは、第１の標的および／または第１の標的の標的と結合し、可溶性リガンドおよび／またはそれらの受容体、細胞外酵素、膜貫通酵素、および細胞内酵素、足場／構造タンパク質、ＲＮＡ、ＤＮＡ、脂質、脂肪酸、補因子および個々の特異的および／または非特異的相互作用を含む調節（例えば、促進作用、拮抗作用、安定化、脱安定化、アプタマーによる細胞、期間、または全身系からの除去の促進を含む）の対象となり得る他の生物学的または化学的実体との相互作用を含み得る。
いくつかの実施態様では、アプタマーは、皮膚中の標的（例えば、タンパク質）、例えば、ＩＬ２、ＩＬ１２、ＩＬ１７、ＩＬ２２、ＩＬ２３、ＩＦＮγ、ＴＮＦα、ＴＳＬＰ、ＣＣＲ１、ＣＸＣＲ４、ＣＲＴＨ２、ａＴＬＲ、ｐ５３、ＲＡＳ、ＭＥＫ、パッチ１、ソニックヘッジホッグシグナル伝達のメディエーター、ｍｉＲＮＡ（例えば、ｍｉｒ２１）、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ、ＰＴＥＮ、ＦＡＳ、ＤＧＡＴ、ＳＣＤ１、ＥＧＦＲ、ＥＧＦ、ＨＢ−ＥＧＦ、ＴＧＦ−α、ＥＰＲ、ＢＴＣ、ＮＲＧ１−４、β−インテグリン、ＣＤ４４、Ｅ−カドヘリン、ＣＬＡ、ＨＰＶ１、ＨＰＶ５、ＨＰＶ８、ＨＰＶ１４、ＨＰＶ１６、ＨＰＶ１７、ＨＰＶ２０、ＨＰＶ３１、ＨＰＶ４７、ＶＥＧＦＣ、ＶＥＧＦＤ、ＶＥＧＦＥＧＦ、ＦＧＦ、ＧＭＣＳＦ、ＩＬ−１、ＰＤＧＦ、またはＴＧＦ−β１と結合する。
いくつかの実施態様では、アプタマーは、表皮中の標的と結合する。いくつかの実施態様では、アプタマーは、真皮中の標的と結合する。
いくつかの実施態様では、皮膚は正常な皮膚である。
いくつかの実施態様では、皮膚は損傷皮膚である。
いくつかの実施態様では、損傷皮膚は罹患皮膚である。
いくつかの実施態様では、損傷皮膚は変化したバリアを含んでなる。
いくつかの実施態様では、アプタマーは、積載物（例えば、それに結合された（例えば、コンジュゲートされた））、例えば、小分子、イメージング色素、蛍光団、または放射性標識を含んでなる。
いくつかの態様において、本開示は、被験体（例えば、哺乳動物被験体、例えば、ヒト）（前記皮膚は表皮と真皮を含んでなる）への局所投与用の薬剤の製造のための、一定用量（例えば、有効用量、例えば、治療上有効な用量）のアプタマー（例えば、アプタマーを含んでなる薬学的に許容可能な組成物）を提供し、前記アプタマーは皮膚に表皮に入り（例えば、浸透し）、適用用量の少なくとも０．０１％（例えば、少なくとも０．０５％、少なくとも０．１％、少なくとも０．５％、少なくとも１％、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、または少なくとも５０％）が（例えば、投与１５分、３０分以内に、または１、２、３、４、６、１２、１５、２４、４８、もしくは７２時間以内に）表皮に入る（例えば、浸透する）。
いくつかの実施態様では、アプタマーは、薬学的に許容可能な組成物（例えば、ビヒクル）（例えば、本明細書に記載のビヒクル、例えば、表４または９に示されるビヒクル）中に存在する。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物中のアプタマーの濃度は、０．００１％〜２０％の間（例えば、０．００１％〜１５％の間、０．００１％〜１０％の間、０．００１％〜５％の間、０．００１％〜２％の間、０．０１％〜２０％の間、０．０１％〜１０％の間、０．０１％〜５％の間、０．０１％〜２％の間、０．１％〜２０％の間、０．１％〜１５％の間、０．１％〜１０％の間、０．１％〜５％の間、または０．１％〜２％の間）である。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物は、スプレー（例えば、エアゾール）、液体、軟膏、クリーム、ローション、溶液（例えば、水溶液）、懸濁液、エマルション、ペースト、ゲル、粉末、フォーム、緩徐放出ナノ粒子、緩徐放出微粒子、生体接着剤、パッチ、包帯、半固体投与形または創傷被覆材として投与される。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物は、水溶液として投与される。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物は、半固体投与形として投与される。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物は、クリームとして投与される。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物は、浸透促進剤（例えば、プロピレングリコール）を含有しない。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物の皮膚への適用用量は、０．０１〜２０ｍｇ／ｃｍ２の間（例えば、０．０１〜１５ｍｇ／ｃｍ２の間、０．０１〜１０ｍｇ／ｃｍ２の間、０．０１〜５ｍｇ／ｃｍ２の間、０．０１〜２ｍｇ／ｃｍ２の間、０．０５〜２０ｍｇ／ｃｍ２の間、０．０５〜１５ｍｇ／ｃｍ２の間、０．０５〜１０ｍｇ／ｃｍ２の間、または０．０５〜５ｍｇ／ｃｍ２の間、０．０５〜２ｍｇ／ｃｍ２の間、０．１〜２０ｍｇ／ｃｍ２の間、０．１〜１５ｍｇ／ｃｍ２の間、０．１〜１０ｍｇ／ｃｍ２の間、０．１〜５ｍｇ／ｃｍ２の間、または０．１〜２ｍｇ／ｃｍ２の間）である。
いくつかの実施態様では、表皮に入る、局所的に投与されたアプタマーの適用用量のパーセンテージは、ｅｘ ｖｉｖｏヒト皮膚を用いたｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイ（例えば、フランツセルセットアップまたはフロースルー拡散セル）（例えば、３２℃で）（例えば、本明細書に記載の通り）で決定される。
いくつかの実施態様では、アプタマーは皮膚の真皮に入り（例えば、浸透し）、適用用量の少なくとも０．０１％（例えば、少なくとも０．０５％、少なくとも０．１％、少なくとも０．５％、少なくとも１％、少なくとも５％、または少なくとも１０％）が（例えば、投与１５分、３０分以内に、または１、２、３、４、６、１２、１５、２４、４８、もしくは７２時間以内に）真皮に入る（例えば、浸透する）。
いくつかの実施態様では、真皮に入る、局所的に投与されたアプタマーの適用用量のパーセンテージは、ｅｘ ｖｉｖｏヒト皮膚を用いたｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイ（例えば、フランツセルセットアップまたはフロースルー拡散セル）（例えば、３２℃で）（例えば、本明細書に記載の通り）で決定される。
いくつかの実施態様では、局所的に適用されたアプタマーの５％未満（例えば、１％未満、０．５％未満、０．１％未満、０．０５％未満、０．０１％未満、０．００１％未満、または検出限界未満）が（例えば、投与２、３、４、６、１２、１５、２４、４８または７２時間後に）体循環に到達する。
いくつかの実施態様では、アプタマーの長さは、１００ヌクレオチド未満（例えば、９５、９０、８５、８０、７５、または７０ヌクレオチド未満）である。
いくつかの実施態様では、アプタマーの長さは、３０ヌクレオチドより長い（例えば、３５、４０、４５、５０、５５、６０、または６５ヌクレオチドより長い）。
いくつかの実施態様では、アプタマーは、３０〜９０ヌクレオチド長の間（例えば、３５〜８５ヌクレオチド長の間）である。
いくつかの実施態様では、アプタマーの少なくとも１つのヌクレオチドが化学修飾を含んでなる。
いくつかの実施態様では、アプタマーの総てのヌクレオチドが化学修飾を含んでなる。
いくつかの実施態様では、化学修飾は、糖の２’位に修飾を含んでなる。
いくつかの実施態様では、化学修飾は、２’−Ｏ−メトキシエチル付加を含んでなる。
いくつかの実施態様では、化学修飾は、２’フルオロ付加を含んでなる。
いくつかの実施態様では、アプタマーは、その３’末端に単一の逆位デオキシチミジン残基（ｉｄＴ）を含んでなる。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物は、１日１回投与される。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物は、１日２回投与される。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物は、週１回投与される。
いくつかの実施態様では、皮膚は皮膚疾患を含んでなる。
いくつかの実施態様では、皮膚疾患は、喘息の増悪、関節リウマチの増悪、乾癬性関節炎の増悪、シェーグレン症候群の増悪、ブドウ膜炎の増悪、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）の増悪、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤの増悪）、関節痛の増悪、または膵島細胞移植炎症の増悪を含んでなる。
いくつかの実施態様では、皮膚疾患は、乾癬、皮膚炎（例えば、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、湿疹性皮膚炎、または脂漏性皮膚炎）、化膿性汗腺炎、口腔扁平苔癬、慢性水疱性障害、座瘡、免疫介在障害の脂漏性皮膚病徴、脱毛症、円形脱毛症(alopecia greata)、強皮症(scleredoma)、瘢痕形成（例えば、ケロイド瘢痕または肥厚性瘢痕）、蕁麻疹、酒さ、黒色腫、または腎臓移植からの炎症を含んでなる。
いくつかの実施態様では、皮膚疾患は、持続的炎症、細胞動態、および分化の皮膚障害（例えば、乾癬、乾癬性関節炎、剥離性皮膚炎、バラ色粃糠疹、扁平苔癬、光沢蘚苔、または汗孔角化症）；表皮密着の皮膚障害、水疱性(vesicular and bullous)障害（例えば、天疱瘡、水疱性類天疱瘡、後天性表皮水疱症、または掌または足底膿疹）；表皮付属物の皮膚障害および関連の障害（例えば、毛髪障害、爪、酒さ、口周囲皮膚炎、または濾胞性症候群）；表皮および付属物の腫瘍などの皮膚障害（例えば、扁平上皮癌、基底細胞癌、角化棘細胞腫、良性上皮腫瘍、またはメルケル細胞癌）；メラノサイトの障害（例えば、色素障害、白化、メラニン欠乏症および色素沈着症、色素性母斑、または黒色腫）；真皮の炎症性および新生物性障害の皮膚障害（例えば、持久性隆起性紅斑、好酸球、顔面肉芽腫、壊疽性膿皮症、悪性萎縮性丘疹、真皮および軟組織の線維損傷、またはカポジ肉腫）；皮下組織の障害（例えば、脂肪織炎または脂肪異栄養症）；反応性が変化した皮膚変化を含む皮膚障害（例えば、蕁麻疹、血管性浮腫、移植片対宿主病、アレルギー性接触性皮膚炎、自家感作性皮膚炎、アトピー性皮膚炎、または脂漏性皮膚炎）；機械的および物理的因子による皮膚変化（例えば、熱損傷、放射線皮膚炎、うおのめ、またはたこ）；光傷害（例えば、急性および慢性ＵＶ照射、または光増感）；または微生物因子による皮膚障害（例えば、らい病、ライム病、爪真菌症、水虫、風疹、麻疹、単純ヘルペス、ＥＢＶ（エプスタイン−バーウイルス）、ＨＰＶ（ヒト乳頭腫ウイルス）（例えば、ＨＰＶ６および７）、疣贅、またはプリオン）を含んでなる。
いくつかの実施態様では、皮膚疾患は乾癬を含んでなる。
いくつかの実施態様では、乾癬は軽度乾癬である。
いくつかの実施態様では、乾癬は中等度乾癬である。
いくつかの実施態様では、乾癬は重度乾癬である。
いくつかの実施態様では、皮膚疾患は、皮膚炎（例えば、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、湿疹性皮膚炎、または脂漏性皮膚炎）を含んでなる。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物は、皮膚疾患の治療薬を含んでなる第２の薬剤と組み合わせて投与される。
いくつかの実施態様では、アプタマーは、第１の標的および／または第１の標的の標的と結合し、可溶性リガンドおよび／またはそれらの受容体、細胞外酵素、膜貫通酵素、および細胞内酵素、足場／構造タンパク質、ＲＮＡ、ＤＮＡ、脂質、脂肪酸、補因子および個々の特異的および／または非特異的相互作用を含む調節（例えば、促進作用、拮抗作用、安定化、脱安定化、アプタマーによる細胞、期間、または全身系からの除去の促進を含む）の対象となり得る他の生物学的または化学的実体との相互作用を含み得る。
いくつかの実施態様では、アプタマーは、皮膚中の標的（例えば、タンパク質）、例えば、ＩＬ２、ＩＬ１２、ＩＬ１７、ＩＬ２２、ＩＬ２３、ＩＦＮγ、ＴＮＦα、ＴＳＬＰ、ＣＣＲ１、ＣＸＣＲ４、ＣＲＴＨ２、ａＴＬＲ、ｐ５３、ＲＡＳ、ＭＥＫ、パッチ１、ソニックヘッジホッグシグナル伝達のメディエーター、ｍｉＲＮＡ（例えば、ｍｉｒ２１）、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ、ＰＴＥＮ、ＦＡＳ、ＤＧＡＴ、ＳＣＤ１、ＥＧＦＲ、ＥＧＦ、ＨＢ−ＥＧＦ、ＴＧＦ−α、ＥＰＲ、ＢＴＣ、ＮＲＧ１−４、β−インテグリン、ＣＤ４４、Ｅ−カドヘリン、ＣＬＡ、ＨＰＶ１、ＨＰＶ５、ＨＰＶ８、ＨＰＶ１４、ＨＰＶ１６、ＨＰＶ１７、ＨＰＶ２０、ＨＰＶ３１、ＨＰＶ４７、ＶＥＧＦＣ、ＶＥＧＦＤ、ＶＥＧＦＥＧＦ、ＦＧＦ、ＧＭＣＳＦ、ＩＬ−１、ＰＤＧＦ、またはＴＧＦ−β１と結合する。
いくつかの実施態様では、アプタマーは、表皮中の標的と結合する。いくつかの実施態様では、アプタマーは、真皮中の標的と結合する。
いくつかの実施態様では、皮膚は正常な皮膚である。
いくつかの実施態様では、皮膚は損傷皮膚である。
いくつかの実施態様では、損傷皮膚は罹患皮膚である。
いくつかの実施態様では、損傷皮膚は変化したバリアを含んでなる。
いくつかの実施態様では、アプタマーは、積載物（例えば、それに結合された（例えば、コンジュゲートされた））、例えば、小分子、イメージング色素、蛍光団、または放射性標識を含んでなる。
いくつかの態様において、本開示は、被験体（例えば、哺乳動物被験体、例えば、ヒト）における皮膚疾患の処置に使用するための、一定用量（例えば、有効用量、例えば、治療上有効な用量）のアプタマー（例えば、アプタマーを含んでなる薬学的に許容可能な組成物）を提供する。前記用量は皮膚疾患を含んでなる被験体の皮膚（前記皮膚は表皮と真皮を含んでなる）に局所的投与され（例えば、適用され）、前記アプタマーは皮膚において固有の活性を有する（例えば、薬力学的応答を惹起する）。
いくつかの実施態様では、固有の活性は表皮におけるものである。
いくつかの実施態様では、固有の活性は真皮におけるものである。
いくつかの実施態様では、固有の活性は、ＥＣ５０値（例えば、被験体標的に対する）として測定される。
いくつかの実施態様では、固有の活性は、ＩＣ５０値（例えば、被験体標的に対する）として測定される。
いくつかの実施態様では、アプタマーは、表皮中にアプタマーのＩＣ５０の少なくとも１０倍（例えば、少なくとも１０倍、１００倍、２００倍、５００倍または１０００倍）のレベルで存在する。
いくつかの実施態様では、アプタマーは、真皮中にアプタマーのＩＣ５０の少なくとも１０倍（例えば、少なくとも１０倍、１００倍、２００倍、５００倍または１０００倍）のレベルで存在する。
いくつかの実施態様では、アプタマーは、薬学的に許容可能な組成物（例えば、ビヒクル）（例えば、本明細書に記載のビヒクル、例えば、表４または９に示されるビヒクル）中に存在する。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物中のアプタマーの濃度は、０．００１％〜２０％の間（例えば、０．００１％〜１５％の間、０．００１％〜１０％の間、０．００１％〜５％の間、０．００１％〜２％の間、０．０１％〜２０％の間、０．０１％〜１０％の間、０．０１％〜５％の間、０．０１％〜２％の間、０．１％〜２０％の間、０．１％〜１５％の間、０．１％〜１０％の間、０．１％〜５％の間、または０．１％〜２％の間）である。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物は、スプレー（例えば、エアゾール）、液体、軟膏、クリーム、ローション、溶液（例えば、水溶液）、懸濁液、エマルション、ペースト、ゲル、粉末、フォーム、緩徐放出ナノ粒子、緩徐放出微粒子、生体接着剤、パッチ、包帯、半固体投与形または創傷被覆材として投与される。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物は、水溶液として投与される。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物は、半固体投与形として投与される。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物は、クリームとして投与される。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物を含有しない。浸透促進剤（例えば、プロピレングリコール）。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物の皮膚への適用用量は、０．０１〜２０ｍｇ／ｃｍ２の間（例えば、０．０１〜１５ｍｇ／ｃｍ２の間、０．０１〜１０ｍｇ／ｃｍ２の間、０．０１〜５ｍｇ／ｃｍ２の間、０．０１〜２ｍｇ／ｃｍ２の間、０．０５〜２０ｍｇ／ｃｍ２の間、０．０５〜１５ｍｇ／ｃｍ２の間、０．０５〜１０ｍｇ／ｃｍ２の間、または０．０５〜５ｍｇ／ｃｍ２の間、０．０５〜２ｍｇ／ｃｍ２の間、０．１〜２０ｍｇ／ｃｍ２の間、０．１〜１５ｍｇ／ｃｍ２の間、０．１〜１０ｍｇ／ｃｍ２の間、０．１〜５ｍｇ／ｃｍ２の間、または０．１〜２ｍｇ／ｃｍ２の間）である。
いくつかの実施態様では、表皮に入る、局所的に投与されたアプタマーの適用用量のパーセンテージは、ｅｘ ｖｉｖｏヒト皮膚を用いたｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイ（例えば、フランツセルセットアップまたはフロースルー拡散セル）（例えば、３２℃で）（例えば、本明細書に記載の通り）で決定される。
いくつかの実施態様では、アプタマーは皮膚の真皮に入り（例えば、浸透し）、適用用量の少なくとも０．０１％（例えば、少なくとも０．０５％、少なくとも０．１％、少なくとも０．５％、少なくとも１％、少なくとも５％、または少なくとも１０％）が（例えば、投与１５分、３０分以内に、または１、２、３、４、６、１２、１５、２４、４８、もしくは７２時間以内に）真皮に入る（例えば、浸透する）。
いくつかの実施態様では、真皮に入る、局所的に投与されたアプタマーの適用用量のパーセンテージは、ｅｘ ｖｉｖｏヒト皮膚を用いたｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイ（例えば、フランツセルセットアップまたはフロースルー拡散セル）（例えば、３２℃で）（例えば、本明細書に記載の通り）で決定される。
いくつかの実施態様では、局所的に適用されたアプタマーの５％未満（例えば、１％未満、０．５％未満、０．１％未満、０．０５％未満、０．０１％未満、０．００１％未満、または検出限界未満）が（例えば、投与２、３、４、６、１２、１５、２４、４８または７２時間後に）体循環に到達する。
いくつかの実施態様では、アプタマーの長さは、１００ヌクレオチド未満（例えば、９５、９０、８５、８０、７５、または７０ヌクレオチド未満）である。
いくつかの実施態様では、アプタマーの長さは、３０ヌクレオチドより長い（例えば、３５、４０、４５、５０、５５、６０、または６５ヌクレオチドより長い）。
いくつかの実施態様では、アプタマーは、３０〜９０ヌクレオチド長の間（例えば、３５〜８５ヌクレオチド長の間）である。
いくつかの実施態様では、アプタマーの少なくとも１つのヌクレオチドが化学修飾を含んでなる。
いくつかの実施態様では、アプタマーの総てのヌクレオチドが化学修飾を含んでなる。
いくつかの実施態様では、化学修飾は、糖の２’位に修飾を含んでなる。
いくつかの実施態様では、化学修飾は、２’−Ｏ−メトキシエチル付加を含んでなる。
いくつかの実施態様では、化学修飾は、２’フルオロ付加を含んでなる。
いくつかの実施態様では、アプタマーは、その３’末端に単一の逆位デオキシチミジン残基（ｉｄＴ）を含んでなる。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物は、１日１回投与される。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物は、１日２回投与される。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物は、週１回投与される。
いくつかの実施態様では、皮膚疾患は、喘息の増悪、関節リウマチの増悪、乾癬性関節炎の増悪、シェーグレン症候群の増悪、ブドウ膜炎の増悪、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）の増悪、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）の増悪、悪関節痛の増、または膵島細胞移植炎症の増悪を含んでなる。
いくつかの実施態様では、皮膚疾患は、乾癬、皮膚炎（例えば、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、湿疹性皮膚炎、または脂漏性皮膚炎）、化膿性汗腺炎、口腔扁平苔癬、慢性水疱性障害、座瘡、免疫介在障害の脂漏性皮膚病徴、脱毛症、円形脱毛症(alopecia greata)、強皮症(scleredoma)、瘢痕形成（例えば、ケロイド瘢痕または肥厚性瘢痕）、蕁麻疹、酒さ、黒色腫、または腎臓移植からの炎症を含んでなる。
いくつかの実施態様では、皮膚疾患は、持続的炎症、細胞動態、および分化の皮膚障害（例えば、乾癬、乾癬性関節炎、剥離性皮膚炎、バラ色粃糠疹、扁平苔癬、光沢蘚苔、または汗孔角化症）；表皮密着の皮膚障害、水疱性(vesicular and bullous)障害（例えば、天疱瘡、水疱性類天疱瘡、後天性表皮水疱症、または掌または足底膿疹）；表皮付属物の皮膚障害および関連の障害（例えば、毛髪障害、爪、酒さ、口周囲皮膚炎、または濾胞性症候群）；表皮および付属物の腫瘍などの皮膚障害（例えば、扁平上皮癌、基底細胞癌、角化棘細胞腫、良性上皮腫瘍、またはメルケル細胞癌）；メラノサイトの障害（例えば、色素障害、白化、メラニン欠乏症および色素沈着症、色素性母斑、または黒色腫）；真皮の炎症性および新生物性障害の皮膚障害（例えば、持久性隆起性紅斑、好酸球、顔面肉芽腫、壊疽性膿皮症、悪性萎縮性丘疹、真皮および軟組織の線維損傷、またはカポジ肉腫）；皮下組織の障害（例えば、脂肪織炎または脂肪異栄養症）；反応性が変化した皮膚変化を含む皮膚障害（例えば、蕁麻疹、血管性浮腫、移植片対宿主病、アレルギー性接触性皮膚炎、自家感作性皮膚炎、アトピー性皮膚炎、または脂漏性皮膚炎）；機械的および物理的因子による皮膚変化（例えば、熱損傷、放射線皮膚炎、うおのめ、またはたこ）；光傷害（例えば、急性および慢性ＵＶ照射、または光増感）；または微生物因子による皮膚障害（例えば、らい病、ライム病、爪真菌症、水虫、風疹、麻疹、単純ヘルペス、ＥＢＶ（エプスタイン−バーウイルス）、ＨＰＶ（ヒト乳頭腫ウイルス）（例えば、ＨＰＶ６および７）、疣贅、またはプリオン）を含んでなる。
いくつかの実施態様では、皮膚疾患は乾癬を含んでなる。
いくつかの実施態様では、乾癬は軽度乾癬である。
いくつかの実施態様では、乾癬は中等度乾癬である。
いくつかの実施態様では、乾癬は重度乾癬である。
いくつかの実施態様では、皮膚疾患は、皮膚炎（例えば、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、湿疹性皮膚炎、または脂漏性皮膚炎）を含んでなる。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物は、皮膚疾患の治療薬を含んでなる第２の薬剤と組み合わせて投与される。
いくつかの実施態様では、アプタマーは、第１の標的および／または第１の標的の標的と結合し、可溶性リガンドおよび／またはそれらの受容体、細胞外酵素、膜貫通酵素、および細胞内酵素、足場／構造タンパク質、ＲＮＡ、ＤＮＡ、脂質、脂肪酸、補因子および個々の特異的および／または非特異的相互作用を含む調節（例えば、促進作用、拮抗作用、安定化、脱安定化、アプタマーによる細胞、期間、または全身系からの除去の促進を含む）の対象となり得る他の生物学的または化学的実体との相互作用を含み得る。
いくつかの実施態様では、アプタマーは、皮膚中の標的（例えば、タンパク質）、例えば、ＩＬ２、ＩＬ１２、ＩＬ１７、ＩＬ２２、ＩＬ２３、ＩＦＮγ、ＴＮＦα、ＴＳＬＰ、ＣＣＲ１、ＣＸＣＲ４、ＣＲＴＨ２、ａＴＬＲ、ｐ５３、ＲＡＳ、ＭＥＫ、パッチ１、ソニックヘッジホッグシグナル伝達のメディエーター、ｍｉＲＮＡ（例えば、ｍｉｒ２１）、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ、ＰＴＥＮ、ＦＡＳ、ＤＧＡＴ、ＳＣＤ１、ＥＧＦＲ、ＥＧＦ、ＨＢ−ＥＧＦ、ＴＧＦ−α、ＥＰＲ、ＢＴＣ、ＮＲＧ１−４、β−インテグリン、ＣＤ４４、Ｅ−カドヘリン、ＣＬＡ、ＨＰＶ１、ＨＰＶ５、ＨＰＶ８、ＨＰＶ１４、ＨＰＶ１６、ＨＰＶ１７、ＨＰＶ２０、ＨＰＶ３１、ＨＰＶ４７、ＶＥＧＦＣ、ＶＥＧＦＤ、ＶＥＧＦＥＧＦ、ＦＧＦ、ＧＭＣＳＦ、ＩＬ−１、ＰＤＧＦ、またはＴＧＦ−β１と結合する。
いくつかの実施態様では、アプタマーは、表皮中の標的と結合する。いくつかの実施態様では、アプタマーは、真皮中の標的と結合する。
いくつかの実施態様では、皮膚は正常な皮膚である。
いくつかの実施態様では、皮膚は損傷皮膚である。
いくつかの実施態様では、損傷皮膚は罹患皮膚である。
いくつかの実施態様では、損傷皮膚は変化したバリアを含んでなる。
いくつかの実施態様では、アプタマーは、積載物（例えば、それに結合された（例えば、コンジュゲートされた））、例えば、小分子、イメージング色素、蛍光団、または放射性標識を含んでなる。
いくつかの態様において、本開示は、被験体（例えば、哺乳動物被験体、例えば、ヒト）における皮膚疾患（前記皮膚は表皮と真皮を含んでなる）の局所処置用の薬剤の製造のための、一定用量（例えば、有効用量、例えば、治療上有効な用量）のアプタマー（例えば、アプタマーを含んでなる薬学的に許容可能な組成物）を提供し、前記アプタマーは皮膚において固有の活性を有し（例えば、薬力学的応答を惹起し）、前記用量は皮膚疾患を含んでなる被験体の皮膚への局所投与（例えば、適用）のためのものである。
いくつかの実施態様では、固有の活性は表皮におけるものである。
いくつかの実施態様では、固有の活性は真皮におけるものである。
いくつかの実施態様では、固有の活性はＥＣ５０値（例えば、被験体標的に対する）として測定される。
いくつかの実施態様では、固有の活性は、ＩＣ５０値（例えば、被験体標的に対する）として測定される。
いくつかの実施態様では、アプタマーは、表皮中にアプタマーのＩＣ５０の少なくとも１０倍（例えば、少なくとも１０倍、１００倍、２００倍、５００倍、または１０００倍）のレベルで存在する。
いくつかの実施態様では、アプタマーは、真皮中にアプタマーのＩＣ５０の少なくとも１０倍（例えば、少なくとも１０倍、１００倍、２００倍、５００倍、または１０００倍）のレベルで存在する。
いくつかの実施態様では、アプタマーは、薬学的に許容可能な組成物（例えば、ビヒクル）（例えば、本明細書に記載のビヒクル、例えば、表４または９に示されるビヒクル）中に存在する。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物中のアプタマーの濃度は、０．００１％〜２０％の間（例えば、０．００１％〜１５％の間、０．００１％〜１０％の間、０．００１％〜５％の間、０．００１％〜２％の間、０．０１％〜２０％の間、０．０１％〜１０％の間、０．０１％〜５％の間、０．０１％〜２％の間、０．１％〜２０％の間、０．１％〜１５％の間、０．１％〜１０％の間、０．１％〜５％の間、または０．１％〜２％の間）である。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物は、スプレー（例えば、エアゾール）、液体、軟膏、クリーム、ローション、溶液（例えば、水溶液）、懸濁液、エマルション、ペースト、ゲル、粉末、フォーム、緩徐放出ナノ粒子、緩徐放出微粒子、生体接着剤、パッチ、包帯、半固体投与形または創傷被覆材として投与される。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物は、水溶液として投与される。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物は、半固体投与形として投与される。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物は、クリームとして投与される。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物は、浸透促進剤（例えば、プロピレングリコール）を含有しない。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物の皮膚への適用用量は、０．０１〜２０ｍｇ／ｃｍ２の間（例えば、０．０１〜１５ｍｇ／ｃｍ２の間、０．０１〜１０ｍｇ／ｃｍ２の間、０．０１〜５ｍｇ／ｃｍ２の間、０．０１〜２ｍｇ／ｃｍ２の間、０．０５〜２０ｍｇ／ｃｍ２の間、０．０５〜１５ｍｇ／ｃｍ２の間、０．０５〜１０ｍｇ／ｃｍ２の間、または０．０５〜５ｍｇ／ｃｍ２の間、０．０５〜２ｍｇ／ｃｍ２の間、０．１〜２０ｍｇ／ｃｍ２の間、０．１〜１５ｍｇ／ｃｍ２の間、０．１〜１０ｍｇ／ｃｍ２の間、０．１〜５ｍｇ／ｃｍ２の間、または０．１〜２ｍｇ／ｃｍ２の間）である。
いくつかの実施態様では、表皮に入る、局所的に投与されたアプタマーの適用用量のパーセンテージは、ｅｘ ｖｉｖｏヒト皮膚を用いたｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイ（例えば、フランツセルセットアップまたはフロースルー拡散セル）（例えば、３２℃で）（例えば、本明細書に記載の通り）で決定される。
いくつかの実施態様では、アプタマーは皮膚の真皮に入り（例えば、浸透し）、適用用量の少なくとも０．０１％（例えば、少なくとも０．０５％、少なくとも０．１％、少なくとも０．５％、少なくとも１％、少なくとも５％、または少なくとも１０％）が（例えば、投与１５分、３０分以内に、または１、２、３、４、６、１２、１５、２４、４８、もしくは７２時間以内に）真皮に入る（例えば、浸透する）。
いくつかの実施態様では、真皮に入る、局所的に投与されたアプタマーの適用用量のパーセンテージは、ｅｘ ｖｉｖｏヒト皮膚を用いたｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイ（例えば、フランツセルセットアップまたはフロースルー拡散セル）（例えば、３２℃で）（例えば、本明細書に記載の通り）で決定される。
いくつかの実施態様では、局所的に適用されたアプタマーの５％未満（例えば、１％未満、０．５％未満、０．１％未満、０．０５％未満、０．０１％未満、０．００１％未満、または検出限界未満）が（例えば、投与２、３、４、６、１２、１５、２４、４８または７２時間後に）体循環に到達する。
いくつかの実施態様では、アプタマーの長さは、１００ヌクレオチド未満（例えば、９５、９０、８５、８０、７５、または７０ヌクレオチド未満）である。
いくつかの実施態様では、アプタマーの長さは、３０ヌクレオチドより長い（例えば、３５、４０、４５、５０、５５、６０、または６５ヌクレオチドより長い）。
いくつかの実施態様では、アプタマーは、３０〜９０ヌクレオチド長の間（例えば、３５〜８５ヌクレオチド長の間）である。
いくつかの実施態様では、アプタマーの少なくとも１つのヌクレオチドが化学修飾を含んでなる。
いくつかの実施態様では、アプタマーの総てのヌクレオチドが化学修飾を含んでなる。
いくつかの実施態様では、化学修飾は、糖の２’位に修飾を含んでなる。
いくつかの実施態様では、化学修飾は、２’−Ｏ−メトキシエチル付加を含んでなる。
いくつかの実施態様では、化学修飾は、２’フルオロ付加を含んでなる。
いくつかの実施態様では、アプタマーは、その３’末端に単一の逆位デオキシチミジン残基（ｉｄＴ）を含んでなる。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物は、１日１回投与される。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物は、１日２回投与される。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物は、週１回投与される。
いくつかの実施態様では、皮膚疾患は、喘息の増悪、関節リウマチの増悪、乾癬性関節炎の増悪、シェーグレン症候群の増悪、ブドウ膜炎の増悪、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）の増悪、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）の増悪、関節痛の増悪、または膵島細胞移植炎症の増悪を含んでなる。
いくつかの実施態様では、皮膚疾患は、乾癬、皮膚炎（例えば、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、湿疹性皮膚炎、または脂漏性皮膚炎）、化膿性汗腺炎、口腔扁平苔癬、慢性水疱性障害、座瘡、免疫介在障害の脂漏性皮膚病徴、脱毛症、円形脱毛症(alopecia greata)、強皮症(scleredoma)、瘢痕形成（例えば、ケロイド瘢痕または肥厚性瘢痕）、蕁麻疹、酒さ、黒色腫、または腎臓移植からの炎症を含んでなる。
いくつかの実施態様では、皮膚疾患は、持続的炎症、細胞動態、および分化の皮膚障害（例えば、乾癬、乾癬性関節炎、剥離性皮膚炎、バラ色粃糠疹、扁平苔癬、光沢蘚苔、または汗孔角化症）；表皮密着の皮膚障害、水疱性(vesicular and bullous)障害（例えば、天疱瘡、水疱性類天疱瘡、後天性表皮水疱症、または掌または足底膿疹）；表皮付属物の皮膚障害および関連の障害（例えば、毛髪障害、爪、酒さ、口周囲皮膚炎、または濾胞性症候群）；表皮および付属物の腫瘍などの皮膚障害（例えば、扁平上皮癌、基底細胞癌、角化棘細胞腫、良性上皮腫瘍、またはメルケル細胞癌）；メラノサイトの障害（例えば、色素障害、白化、メラニン欠乏症および色素沈着症、色素性母斑、または黒色腫）；真皮の炎症性および新生物性障害の皮膚障害（例えば、持久性隆起性紅斑、好酸球、顔面肉芽腫、壊疽性膿皮症、悪性萎縮性丘疹、真皮および軟組織の線維損傷、またはカポジ肉腫）；皮下組織の障害（例えば、脂肪織炎または脂肪異栄養症）；反応性が変化した皮膚変化を含む皮膚障害（例えば、蕁麻疹、血管性浮腫、移植片対宿主病、アレルギー性接触性皮膚炎、自家感作性皮膚炎、アトピー性皮膚炎、または脂漏性皮膚炎）；機械的および物理的因子による皮膚変化（例えば、熱損傷、放射線皮膚炎、うおのめ、またはたこ）；光傷害（例えば、急性および慢性ＵＶ照射、または光増感）；または微生物因子による皮膚障害（例えば、らい病、ライム病、爪真菌症、水虫、風疹、麻疹、単純ヘルペス、ＥＢＶ（エプスタイン−バーウイルス）、ＨＰＶ（ヒト乳頭腫ウイルス）（例えば、ＨＰＶ６および７）、疣贅、またはプリオン）を含んでなる。
いくつかの実施態様では、皮膚疾患は乾癬を含んでなる。
いくつかの実施態様では、乾癬は軽度乾癬である。
いくつかの実施態様では、乾癬は中等度乾癬である。
いくつかの実施態様では、乾癬は重度乾癬である。
いくつかの実施態様では、皮膚疾患は、皮膚炎（例えば、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、湿疹性皮膚炎、または脂漏性皮膚炎）を含んでなる。
いくつかの実施態様では、薬学的に許容可能な組成物は、皮膚疾患の治療薬を含んでなる第２の薬剤と組み合わせて投与される。
いくつかの実施態様では、アプタマーは、第１の標的および／または第１の標的の標的と結合し、可溶性リガンドおよび／またはそれらの受容体、細胞外酵素、膜貫通酵素、および細胞内酵素、足場／構造タンパク質、ＲＮＡ、ＤＮＡ、脂質、脂肪酸、補因子および個々の特異的および／または非特異的相互作用を含む調節（例えば、促進作用、拮抗作用、安定化、脱安定化、アプタマーによる細胞、期間、または全身系からの除去の促進を含む）の対象となり得る他の生物学的または化学的実体との相互作用を含み得る。
いくつかの実施態様では、アプタマーは、皮膚中の標的（例えば、タンパク質）、例えば、ＩＬ２、ＩＬ１２、ＩＬ１７、ＩＬ２２、ＩＬ２３、ＩＦＮγ、ＴＮＦα、ＴＳＬＰ、ＣＣＲ１、ＣＸＣＲ４、ＣＲＴＨ２、ａＴＬＲ、ｐ５３、ＲＡＳ、ＭＥＫ、パッチ１、ソニックヘッジホッグシグナル伝達のメディエーター、ｍｉＲＮＡ（例えば、ｍｉｒ２１）、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ、ＰＴＥＮ、ＦＡＳ、ＤＧＡＴ、ＳＣＤ１、ＥＧＦＲ、ＥＧＦ、ＨＢ−ＥＧＦ、ＴＧＦ−α、ＥＰＲ、ＢＴＣ、ＮＲＧ１−４、β−インテグリン、ＣＤ４４、Ｅ−カドヘリン、ＣＬＡ、ＨＰＶ１、ＨＰＶ５、ＨＰＶ８、ＨＰＶ１４、ＨＰＶ１６、ＨＰＶ１７、ＨＰＶ２０、ＨＰＶ３１、ＨＰＶ４７、ＶＥＧＦＣ、ＶＥＧＦＤ、ＶＥＧＦＥＧＦ、ＦＧＦ、ＧＭＣＳＦ、ＩＬ−１、ＰＤＧＦ、またはＴＧＦ−β１と結合する。
いくつかの実施態様では、アプタマーは、表皮中の標的と結合する。いくつかの実施態様では、アプタマーは、真皮中の標的と結合する。
いくつかの実施態様では、皮膚は正常な皮膚である。
いくつかの実施態様では、皮膚は損傷皮膚である。
いくつかの実施態様では、損傷皮膚は罹患皮膚である。
いくつかの実施態様では、損傷皮膚は変化したバリアを含んでなる。
いくつかの実施態様では、アプタマーは、積載物（例えば、それに結合された（例えば、コンジュゲートされた））、例えば、小分子、イメージング色素、蛍光団、または放射性標識を含んでなる。
本開示は、インターロイキン（ＩＬ）−２３と結合するアプタマー（ＩＬ−２３アプタマー）および例えば、炎症性皮膚疾患（例えば、慢性炎症性皮膚疾患（例えば、皮膚炎（例えば、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、湿疹性皮膚炎、または脂漏性皮膚炎）、座瘡、乾癬、酒さ、または老化皮膚、例えば、乾癬またはアトピー性皮膚炎））の処置（例えば、局所処置）のためのその使用方法を提供する。
いくつかの実施態様では、ＩＬ−２３アプタマーはＩＬ−２３と結合し、ＩＬ−２３活性を阻害する、例えば、ＩＬ−２３シグナル伝達を阻害する（例えば、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％またはそれを超えて、例えば、低下させる）。いくつかの実施態様では、ＩＬ−２３活性に対するアプタマーの効果は、ＩＬ−２３とＩＬ−２３受容体（ＩＬ−２３Ｒ）との結合の下流の応答を、例えば、ＰＢＭＣにおいてＩＬ−１７（ＩＬ−１７ａ）、ＩＬ−１７ｆ、またはＩＬ−２２レベルを定量するために例えば、本明細書に記載の方法、例えば、ホスホＳＴＡＴ３アッセイ、または他のＥＬＩＳＡ方法を用いて評価することにより評価することができる。いくつかの実施態様では、評価される応答は、ＳＴＡＴ３のリン酸化、ＩＬ−１７発現、またはＩＬ−２２発現であり、ＩＬ−２３アプタマーは、例えば、対照（例えば、ＩＬ−２３アプタマーが不在であること以外は同一の条件下の応答のレベル）と比較して応答を低下させる。
いくつかの態様において、本開示は、ヒトインターロイキン（ＩＬ）−２３と結合するアプタマーを提供し、前記アプタマーは、配列番号１および２からなる群から選択される配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％）同一の核酸配列を含んでなる。
いくつかの実施態様では、アプタマーは、配列番号１および２からなる群から選択される配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％）同一の核酸配列からなる。
いくつかの実施態様では、アプタマーの長さは、１００ヌクレオチド未満（例えば、９５、９０、８５、８０、７５、または７０ヌクレオチド未満）である。
いくつかの実施態様では、アプタマーの長さは、３０ヌクレオチドより長い（例えば、３５、４０、４５、５０、５５、６０、または６５ヌクレオチドより長い）。
いくつかの実施態様では、アプタマーは、３０〜９０ヌクレオチド長の間（例えば、３５および８５ヌクレオチド長の間）である。
いくつかの実施態様では、アプタマーは、配列番号１からなるアプタマーと同様の（例えば、同一の）二次構造を含んでなる。
いくつかの実施態様では、アプタマーは、例えば、ｉｎ ｖｉｔｒｏホスホＳＴＡＴ３アッセイにおいて、例えば、アプタマーが不在であること以外は同一の条件下の対照と比較して判定した場合に、ＳＴＡＴ３のリン酸化を低下させる。
いくつかの実施態様では、アプタマーは、例えば、アプタマーが不在であること以外は同一の条件下の対照と比較して、例えば、ＥＬＩＳＡで判定した場合に、ＩＬ−１７発現を低下させる。
いくつかの実施態様では、アプタマーは配列番号１を含んでなる。
いくつかの実施態様では、アプタマーは配列番号１からなる。
いくつかの実施態様では、アプタマーは配列番号２を含んでなる。
いくつかの実施態様では、アプタマーは配列番号２からなる。
いくつかの実施態様では、アプタマーは、同一条件下で、例えば、配列番号１からなるアプタマーと同様に、（例えば、少なくとも約７５％、約５０％、約４０％、約３０％、または約２０％同様に）ヒトＩＬ−２３と結合する。
いくつかの実施態様では、アプタマーは、同一条件下で、例えば、配列番号１からなるアプタマーと同様に、（例えば、少なくとも約７５％、約５０％、約４０％、約３０％、または約２０％同様にＳＴＡＴ３のリン酸化を阻害する。
いくつかの実施態様では、アプタマーの少なくとも１つのヌクレオチドが化学修飾を含んでなる。
いくつかの実施態様では、アプタマーの総てのヌクレオチドが化学修飾を含んでなる。
いくつかの実施態様では、化学修飾は、糖の２’位に修飾を含んでなる。
いくつかの実施態様では、化学修飾は、２’−Ｏ−メトキシエチル付加を含んでなる。
いくつかの実施態様では、化学修飾は、２’フルオロ付加を含んでなる。
いくつかの実施態様では、アプタマーは、その３’末端に単一の逆位デオキシチミジン残基（ｉｄＴ）を含んでなる。
いくつかの態様において、本開示は、ヒトインターロイキン（ＩＬ）−２３と結合するアプタマーまたはその塩および薬学的に許容可能な担体もしくは希釈剤を含んでなる医薬組成物（例えば、薬学的に許容可能な組成物）を提供し、前記アプタマーは、配列番号１および２からなる群から選択される配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％）同一の核酸配列を含んでなる。
いくつかの実施態様では、医薬組成物は、半固体投与形を含んでなる。
いくつかの実施態様では、医薬組成物は、クリームを含んでなる。
いくつかの実施態様では、アプタマーは、配列番号１および２からなる群から選択される配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％）同一の核酸配列からなる。
いくつかの実施態様では、アプタマーの長さは、１００ヌクレオチド未満（例えば、９５、９０、８５、８０、７５、または７０ヌクレオチド未満）である。
いくつかの実施態様では、アプタマーの長さは、３０ヌクレオチドより長い（例えば、３５、４０、４５、５０、５５、６０、または６５ヌクレオチドより長い）。
いくつかの実施態様では、アプタマーは、３０〜９０ヌクレオチド長の間（例えば、３５〜８５ヌクレオチド長の間）である。
いくつかの実施態様では、アプタマーは、配列番号１からなるアプタマーと同様の（例えば、同一の）二次構造を含んでなる。
いくつかの実施態様では、アプタマーは、例えば、ｉｎ ｖｉｔｒｏホスホＳＴＡＴ３アッセイにおいて、例えば、アプタマーが不在であること以外は同一の条件下の対照と比較して判定した場合に、ＳＴＡＴ３のリン酸化を低下させる。
いくつかの実施態様では、アプタマーは、例えば、アプタマーが不在であること以外は同一の条件下の対照と比較して、例えば、ＥＬＩＳＡで判定した場合に、ＩＬ−１７発現を低下させる。
いくつかの実施態様では、アプタマーは、配列番号１を含んでなる。
いくつかの実施態様では、アプタマーは、配列番号１からなる。
いくつかの実施態様では、アプタマーは、配列番号２を含んでなる。
いくつかの実施態様では、アプタマーは、配列番号２からなる。
いくつかの実施態様では、アプタマーは、同一条件下で、例えば、配列番号１からなるアプタマーと同様に、（例えば、少なくとも約７５％、約５０％、約４０％、約３０％、または約２０％同様に）ヒトＩＬ−２３と結合する。
いくつかの実施態様では、アプタマーは、同一条件下で、例えば、配列番号１からなるアプタマーと同様に、（例えば、少なくとも約７５％、約５０％、約４０％、約３０％、または約２０％同様にＳＴＡＴ３のリン酸化を阻害する。
いくつかの実施態様では、アプタマーの少なくとも１つのヌクレオチドが化学修飾を含んでなる。
いくつかの実施態様では、アプタマーの総てのヌクレオチドが化学修飾を含んでなる。
いくつかの実施態様では、化学修飾は、糖の２’位に修飾を含んでなる。
いくつかの実施態様では、化学修飾は、２’−Ｏ−メトキシエチル付加を含んでなる。
いくつかの実施態様では、化学修飾は、２’フルオロ付加を含んでなる。
いくつかの実施態様では、アプタマーは、その３’末端に単一の逆位デオキシチミジン残基（ｉｄＴ）を含んでなる。
いくつかの態様において、本開示は、被験体（例えば、ヒト被験体）において炎症性皮膚疾患（例えば、慢性炎症性皮膚疾患（例えば、皮膚炎（例えば、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、湿疹性皮膚炎、または脂漏性皮膚炎）、座瘡、乾癬、酒さ、または老化皮膚、例えば、乾癬またはアトピー性皮膚炎）））処置する方法を提供し、その方法は、被験体にアプタマー（例えば、その治療上有効な量）（例えば、アプタマーを含んでなる医薬組成物（例えば、薬学的に許容可能な組成物））を投与することを含んでなり、前記アプタマーはヒトインターロイキン（ＩＬ）−２３と結合し、前記アプタマーは、配列番号１および２からなる群から選択される配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％）同一の核酸配列を含んでなる。
いくつかの実施態様では、アプタマーは、配列番号１および２からなる群から選択される配列と少なくとも８０％（例えば、少なくとも８５％、少なくとも９０％、少なくとも９１％、少なくとも９２％、少なくとも９３％、少なくとも９４％、少なくとも９５％、少なくとも９６％、少なくとも９７％、少なくとも９８％、または少なくとも９９％）の核酸配列からなる。
いくつかの実施態様では、アプタマーの長さは、１００未満ヌクレオチド（例えば、９５、９０、８５、８０、７５、または７０ヌクレオチド未満）である。
いくつかの実施態様では、アプタマーの長さは、３０ヌクレオチドより長い（例えば、３５、４０、４５、５０、５５、６０、または６５ヌクレオチドより長い）。
いくつかの実施態様では、アプタマーは、３０〜９０ヌクレオチド長の間（例えば、３５〜８５ヌクレオチド長の間）である。
いくつかの実施態様では、アプタマーは、配列番号１からなるアプタマーと同様の（例えば、同一の）二次構造を含んでなる。
いくつかの実施態様では、アプタマーは、ｉｎ ｖｉｔｒｏホスホＳＴＡＴ３アッセイにおいて、例えば、アプタマーが不在であること以外は同一の条件下の対照と比較して判定した場合に、ＳＴＡＴ３のリン酸化を低下させる。
いくつかの実施態様では、アプタマーは、ＥＬＩＳＡにおいて、例えば、アプタマーが不在であること以外は同一の条件下の対照と比較して判定した場合に、ＩＬ−１７発現を低下させる。
いくつかの実施態様では、アプタマーは配列番号１を含んでなる。
いくつかの実施態様では、アプタマーは配列番号１からなる。
いくつかの実施態様では、アプタマーは配列番号２を含んでなる。
いくつかの実施態様では、アプタマーは配列番号２からなる。
いくつかの実施態様では、アプタマーは、同一条件下で、例えば、配列番号１からなるアプタマーと同様に、（例えば、少なくとも約７５％、約５０％、約４０％、約３０％、または約２０％同様に）ヒトＩＬ−２３と結合する。
いくつかの実施態様では、アプタマーは、同一条件下で、例えば、配列番号１からなるアプタマーと同様に、（例えば、少なくとも約７５％、約５０％、約４０％、約３０％、または約２０％同様にＳＴＡＴ３のリン酸化を阻害する。
いくつかの実施態様では、アプタマーの少なくとも１つのヌクレオチドが化学修飾を含んでなる。
いくつかの実施態様では、アプタマーの総てのヌクレオチドが化学修飾を含んでなる。
いくつかの実施態様では、化学修飾は、糖の２’位に修飾を含んでなる。
いくつかの実施態様では、化学修飾は、２’−Ｏ−メトキシエチル付加を含んでなる。
いくつかの実施態様では、化学修飾は、２’フルオロ付加を含んでなる。
いくつかの実施態様では、アプタマーは、その３’末端に単一の逆位デオキシチミジン残基（ｉｄＴ）を含んでなる。
いくつかの実施態様では、アプタマーは局所的に投与される。
いくつかの実施態様では、アプタマーは１日１回投与される。
いくつかの実施態様では、アプタマーは１日２回投与される。
いくつかの実施態様では、アプタマーは週１回投与される。
いくつかの実施態様では、アプタマーは半固体投与形である。
いくつかの実施態様では、アプタマーは水溶液である。
いくつかの実施態様では、アプタマーはクリームである。
いくつかの実施態様では、炎症性皮膚疾患（例えば、慢性炎症性皮膚疾患）は乾癬を含んでなる。
いくつかの実施態様では、乾癬は軽度乾癬である。
いくつかの実施態様では、乾癬は中等度乾癬である。
いくつかの実施態様では、乾癬は重度乾癬である。
いくつかの実施態様では、炎症性皮膚疾患（例えば、慢性炎症性皮膚疾患）はアトピー性皮膚炎を含んでなる。
いくつかの実施態様では、アプタマーは、炎症性皮膚疾患（例えば、慢性炎症性皮膚疾患）のための第２の処置と組み合わせて投与される。
いくつかの態様において、本開示は、オリゴヌクレオチド（例えば、アプタマー）を検出する方法を提供し、その方法は、
第１のプローブ（例えば、検出プローブ）をオリゴヌクレオチド（例えば、アプタマー）と接触させ、それにより、混合物を作出すること；
前記混合物をオリゴヌクレオチド（例えば、アプタマー）の脱ホールディングをもたらす温度（例えば、９５℃）に加熱すること；
前記混合物を冷却すること；
前記第１のプローブをオリゴヌクレオチド（例えば、アプタマー）と相互作用させ（例えば、相補的塩基対形成を介する）（例えば、第１のプローブをオリゴヌクレオチドと相互作用させる条件を提供し）、それにより、プローブ：オリゴヌクレオチド複合体（例えば、プローブ：アプタマー複合体）を形成させること；
前記混合物を第２のプローブ（例えば、捕捉プローブ）と接触させ、ここで、この接触は第２のプローブを前記プローブ：オリゴヌクレオチド複合体（例えば、プローブ：アプタマー複合体）のオリゴヌクレオチド（例えば、アプタマー）と相互作用させる条件下で行い（例えば、相補的(complimentary)塩基対形成を介する）、それにより、捕捉された複合体を形成させること；および
前記捕捉された複合体を検出すること
を含んでなる。
いくつかの実施態様では、前記方法は、表面上の、例えば、捕捉された複合体中の、オリゴヌクレオチド（例えば、アプタマー）を定量することをさらに含んでなる。
いくつかの実施態様では、第２のプローブは、その５’末端に遊離アミンを含んでなる。
いくつかの実施態様では、第２のプローブは、遊離アミンを介して表面に連結される（例えば、共有結合される）。
いくつかの実施態様では、第２のプローブは、表面（例えば、プレートまたはビーズ）に連結される（例えば、共有結合される）。
いくつかの実施態様では、第１のプローブは、その３’末端に検出可能な標識（例えば、ビオチン）を含んでなる。
いくつかの実施態様では、捕捉された複合体の検出は、表面上の検出可能な標識を検出すること（例えば、ビオチンと結合するストレプトアビジン(strepavidin)を使用、例えば、ストレプトアビジン(strepavidin)を、検出および／または定量可能な試薬とコンジュゲートさせるか、または試薬（例えば、セイヨウワサビペルオキシダーゼまたはアルカリ性ホスファターゼ）は、例えば、比色定量アッセイにおいて検出および／または定量可能な基質（例えば、テトラメチルベンジジンまたはｐ−ニトロフェニルリン酸）に作用する）を含んでなる。
いくつかの実施態様では、前記方法は、検出工程の前に洗浄工程をさらに含んでなる。
いくつかの実施態様では、第２のプローブは、遊離アミンとヌクレオチドの５’末端の間に、オリゴヌクレオチド（例えば、アプタマー）との相互作用（例えば、相補的塩基対形成）を提供するスペーサー（例えば、３、４、または５ヌクレオチドのスペーサー）（例えば、４ヌクレオチドのスペーサー）を含んでなる。
いくつかの実施態様では、第１のプローブは、検出可能な標識（例えば、ビオチン）とヌクレオチドの３’末端の間に、オリゴヌクレオチド（例えば、アプタマー）との相互作用（例えば、相補的塩基対形成）を提供するスペーサー（例えば、３、４、または５ヌクレオチドのスペーサー）（例えば、４ヌクレオチドのスペーサー）を含んでなる。
いくつかの態様において、本開示は、オリゴヌクレオチド（例えば、アプタマー）を検出する方法を提供し、その方法は、
第１のプローブ（例えば、検出プローブ）をオリゴヌクレオチド（例えば、アプタマー）と接触させ、それにより、混合物を作出し、ここで、この接触は、第１のプローブとオリゴヌクレオチド（例えば、アプタマー）と相互作用させる条件下で行い、それにより、プローブ：オリゴヌクレオチド複合体（例えば、プローブ：アプタマー複合体）を形成させること；
混合物を第２のプローブ（例えば、捕捉プローブ）と接触させ、ここで、この接触は、第２のプローブを前記プローブ：オリゴヌクレオチド複合体（例えば、プローブ：アプタマー複合体）のオリゴヌクレオチド（例えば、アプタマー）と接触させる条件下で行い、それにより、捕捉された複合体を形成させること；および
前記捕捉された複合体を検出すること
を含んでなる。
いくつかの実施態様では、相互作用は、相補的(complimentary)塩基対形成を含んでなる。
いくつかの実施態様では、前記方法は、表面上の、例えば、捕捉された複合体中のオリゴヌクレオチド（例えば、アプタマー）を定量することをさらに含んでなる。
いくつかの実施態様では、前記方法は、検出工程の前に洗浄工程をさらに含んでなる。
いくつかの実施態様では、第１のプローブは、その３’末端に検出可能な標識（例えば、ビオチン）を含んでなる。
いくつかの実施態様では、第２のプローブは、その５’末端に遊離アミンを含んでなる。
いくつかの実施態様では、第２のプローブは、遊離アミンを介して表面に連結される（例えば、共有結合される）。
いくつかの実施態様では、第２のプローブは、表面に連結される（例えば、共有結合される）。
いくつかの実施態様では、第１のプローブは、その３’末端に検出可能な標識（例えば、ビオチン）を含んでなる。
いくつかの実施態様では、捕捉された複合体の検出は、表面上の検出可能な標識を検出すること（例えば、ビオチンと結合するストレプトアビジン(strepavidin)を使用、例えば、ストレプトアビジン(strepavidin)を、検出および／または定量可能な試薬とコンジュゲートさせるか、または試薬（例えば、セイヨウワサビペルオキシダーゼまたはアルカリ性ホスファターゼ）は、例えば、比色定量アッセイにおいて検出および／または定量可能な基質（例えば、テトラメチルベンジジンまたはｐ−ニトロフェニルリン酸）に作用する）を含んでなる。
いくつかの実施態様では、第２のプローブは、遊離アミンとヌクレオチドの５’末端の間に、オリゴヌクレオチド（例えば、アプタマー）との相互作用（例えば、相補的塩基対形成）を提供するスペーサー（例えば、３、４、または５ヌクレオチドのスペーサー）（例えば、４ヌクレオチドのスペーサー）を含んでなる。
いくつかの実施態様では、第１のプローブは、検出可能な標識（例えば、ビオチン）とヌクレオチドの３’末端の間に、オリゴヌクレオチド（例えば、アプタマー）との相互作用（例えば、相補的塩基対形成）を提供するスペーサー（例えば、３、４、または５ヌクレオチドのスペーサー）（例えば、４ヌクレオチドのスペーサー）を含んでなる。
いくつかの態様において、本開示は、少なくとも１つの化学修飾を含んでなるアプタマー（例えば、局所送達用）を提供する。一つの実施態様では、前記修飾は、核酸の、糖位での化学置換；リン酸基位での化学置換；および塩基位での化学置換；修飾ヌクレオチドの組み込み；３’キャッピング（例えば、３’−ｉｄＴ）；高分子量の非免疫原性化合物へのコンジュゲーション；親油性化合物へのコンジュゲーション；およびリン酸骨格修飾からなる群から選択される。一つの実施態様では、本開示のアプタマーとコンジュゲートされる非免疫原性の高分子量化合物は、ポリアルキレングリコール、好ましくは、ポリエチレングリコールである。一つの実施態様では、骨格修飾は、リン酸骨格への１以上のホスホロチオエートの組み込みを含んでなる。
いくつかの態様において、本開示は、配列番号１または２からなる群から選択される核酸配列を含んでなる（例えば、治療上有効な量の）アプタマーまたはその塩および薬学的に許容可能な担体または希釈剤を含んでなる医薬組成物を提供する。
いくつかの態様において、本開示は、皮膚疾患の処置における局所使用のための本明細書に記載のアプタマーと特徴とし、皮膚における疾患は、持続的炎症、細胞動態、および分化の皮膚障害（例えば、乾癬、乾癬性関節炎、剥離性皮膚炎、バラ色粃糠疹、扁平苔癬、光沢蘚苔、または汗孔角化症）；表皮密着の皮膚障害、水疱性(vesicular and bullous)障害（例えば、天疱瘡、水疱性類天疱瘡、後天性表皮水疱症、または掌または足底膿疹）；表皮付属物の皮膚障害および関連の障害（例えば、毛髪障害、爪、酒さ、口周囲皮膚炎、または濾胞性症候群）；表皮および付属物の腫瘍などの皮膚障害（例えば、扁平上皮癌、基底細胞癌、角化棘細胞腫、良性上皮腫瘍、またはメルケル細胞癌）；メラノサイトの障害（例えば、色素障害、白化、メラニン欠乏症および色素沈着症、色素性母斑、または黒色腫）；真皮の炎症性および新生物性障害の皮膚障害（例えば、持久性隆起性紅斑、好酸球、顔面肉芽腫、壊疽性膿皮症、悪性萎縮性丘疹、真皮および軟組織の線維損傷、またはカポジ肉腫）；皮下組織の障害（例えば、脂肪織炎または脂肪異栄養症）；反応性が変化した皮膚変化を含む皮膚障害（例えば、蕁麻疹、血管性浮腫、移植片対宿主病、アレルギー性接触性皮膚炎、自家感作性皮膚炎、アトピー性皮膚炎、または脂漏性皮膚炎）；機械的および物理的因子による皮膚変化（例えば、熱損傷、放射線皮膚炎、うおのめ、またはたこ）；光傷害（例えば、急性および慢性ＵＶ照射、または光増感）；または微生物因子による皮膚障害（例えば、らい病、ライム病、爪真菌症、水虫、風疹、麻疹、単純ヘルペス、ＥＢＶ（エプスタイン−バーウイルス）、ＨＰＶ（ヒト乳頭腫ウイルス）（例えば、ＨＰＶ６および７）、疣贅、またはプリオン）を含んでなる。
いくつかの態様において、本開示は、皮膚疾患の局所処置用の薬剤の製造のための本明細書に記載のアプタマーの使用を提供し、皮膚における疾患は、持続的炎症、細胞動態、および分化の皮膚障害（例えば、乾癬、乾癬性関節炎、剥離性皮膚炎、バラ色粃糠疹、扁平苔癬、光沢蘚苔、または汗孔角化症）；表皮密着の皮膚障害、水疱性(vesicular and bullous)障害（例えば、天疱瘡、水疱性類天疱瘡、後天性表皮水疱症、または掌または足底膿疹）；表皮付属物の皮膚障害および関連の障害（例えば、毛髪障害、爪、酒さ、口周囲皮膚炎、または濾胞性症候群）；表皮および付属物の腫瘍などの皮膚障害（例えば、扁平上皮癌、基底細胞癌、角化棘細胞腫、良性上皮腫瘍、またはメルケル細胞癌）；メラノサイトの障害（例えば、色素障害、白化、メラニン欠乏症および色素沈着症、色素性母斑、または黒色腫）；真皮の炎症性および新生物性障害の皮膚障害（例えば、持久性隆起性紅斑、好酸球、顔面肉芽腫、壊疽性膿皮症、悪性萎縮性丘疹、真皮および軟組織の線維損傷、またはカポジ肉腫）；皮下組織の障害（例えば、脂肪織炎または脂肪異栄養症）；反応性が変化した皮膚変化を含む皮膚障害（例えば、蕁麻疹、血管性浮腫、移植片対宿主病、アレルギー性接触性皮膚炎、自家感作性皮膚炎、アトピー性皮膚炎、または脂漏性皮膚炎）；機械的および物理的因子による皮膚変化（例えば、熱損傷、放射線皮膚炎、うおのめ、またはたこ）；光傷害（例えば、急性および慢性ＵＶ照射、または光増感）；または微生物因子による皮膚障害（例えば、らい病、ライム病、爪真菌症、水虫、風疹、麻疹、単純ヘルペス、ＥＢＶ（エプスタイン−バーウイルス）、ＨＰＶ（ヒト乳頭腫ウイルス）（例えば、ＨＰＶ６および７）、疣贅、またはプリオン）を含んでなる。
いくつかの態様において、本開示は、皮膚疾患（例えば、乾癬、皮膚炎（例えば、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、湿疹性皮膚炎、または脂漏性皮膚炎）、慢性水疱性障害、座瘡、免疫介在障害の脂漏性皮膚病徴、脱毛症、円形脱毛症(alopecia greata)、強皮症(scleredoma)、瘢痕形成（例えば、ケロイド瘢痕または肥厚性瘢痕）、蕁麻疹、酒さ、黒色腫、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）の増悪、腎臓移植からの炎症、喘息の増悪、化膿性汗腺炎、関節リウマチの増悪、乾癬性関節炎の増悪、シェーグレン症候群の増悪、ブドウ膜炎の増悪、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）の増悪、口腔扁平苔癬、関節痛の増悪、または膵島細胞移植炎症の増悪）の処置における局所使用のための本明細書に記載のアプタマーを特徴とする。
いくつかの態様において、本開示は、本明細書に記載のように、皮膚疾患（例えば、乾癬、皮膚炎（例えば、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、湿疹性皮膚炎、または脂漏性皮膚炎）、慢性水疱性障害、座瘡、免疫介在障害の脂漏性皮膚病徴、脱毛症、円形脱毛症(alopecia greata)、強皮症(scleredoma)、瘢痕形成（例えば、ケロイド瘢痕または肥厚性瘢痕）、蕁麻疹、酒さ、黒色腫、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）の増悪、腎臓移植からの炎症、喘息の増悪、化膿性汗腺炎、関節リウマチの増悪、乾癬性関節炎の増悪、シェーグレン症候群の増悪、ブドウ膜炎の増悪、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）の増悪、口腔扁平苔癬、関節痛の増悪、または膵島細胞移植炎症の増悪）の局所処置用の薬剤の製造のための本明細書に記載のアプタマーの使用を提供する。
いくつかの態様において、本開示は、本明細書に記載のように、炎症性皮膚疾患（例えば、慢性炎症性皮膚疾患（例えば、皮膚炎（例えば、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、湿疹性皮膚炎、または脂漏性皮膚炎）、座瘡、乾癬、酒さ、または老化皮膚、例えば、乾癬またはアトピー性皮膚炎）））の処置において使用するための本明細書に記載のアプタマーを特徴とする。
いくつかの態様において、本開示は、本明細書に記載のように、炎症性皮膚疾患（例えば、慢性炎症性皮膚疾患（例えば、皮膚炎（例えば、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、湿疹性皮膚炎、または脂漏性皮膚炎）、座瘡、乾癬、酒さ、または老化皮膚、例えば、乾癬またはアトピー性皮膚炎）））の処置用薬剤の製造のための本明細書に記載のアプタマーの使用を提供する。
図１Ａは、ＡＲＣ３２２２５（配列番号１）の推定二次構造を示す模式図である。ＡＲＣ３２２２５は、２’−メトキシ（○）と２’−フルオロヌクレオチドから構成され、ヌクレアーゼ耐性を高めるためにその３’末端において逆位デオキシチミジン残基（ｉｄＴ）で修飾されている。図１Ｂは、ＡＲＣ３２２２５の三次元接触を示す模式図である。補償的突然変異研究からのＩＣ５０値も示され、ＩＬ２３分子における三次元相互作用がループ−テール接触を含むことが示唆される。突然変異は太字の斜体で示されている。 図２は、ＡＲＣ２０１２２〜ＡＲＣ３２２２５の最小化および最適化がその機能活性に影響を及ぼさないことを示す線グラフである。 図３は、精製された内因性のＩＬ−２３ホスホ−ＳＴＡＴ３の誘導が、ｐ−４０およびｐ−１９の両方の中和モノクローナル抗体により阻害されることを示す線グラフである。 図４は、ＰＨＡ芽細胞ホスホ−ＳＴＡＴ３アッセイにおける内因性ＩＬ−２３のＡＲＣ３２２２５阻害を示す線グラフである。 図５は、ＡＲＣ３２２２５対、ｅＩＬ−２３（内因性ＩＬ−２３）およびｒＩＬ−１２（組換えＩＬ−１２）の活性を示す線グラフである。 図６は、ＡＲＣ３２２２５に対するＤＨＡに適当な検出プローブの決定を示す線グラフである。 図７は、ＡＲＣ３２２２５に対するＤＨＡに適当な捕捉プローブの決定を示す線グラフである。 図８は、マウス血漿におけるＤＨＡの感受性を示す線グラフである。 図９は、ブタ血漿におけるＤＨＡの感受性を示す線グラフである。 図１０は、カニクイザル血漿におけるＤＨＡの感受性を示す線グラフである。 図１１は、ヒトｅｘ ｖｉｖｏ皮膚におけるＩＬ２３アプタマー（ＡＲＣ３２２２５）の皮膚浸透を示す１パネルの棒グラフである。 図１２は、ヒトｅｘ ｖｉｖｏ皮膚におけるＩＬ２３アプタマー（ＡＲＣ３２２２５）の皮膚浸透の処方物による増強を示す２パネルの棒グラフである。 図１３Ａおよび１３Ｂは、表皮皮膚切片への単回の局所適用後に受容液において測定された水性ビヒクル中のＩＬ２３アプタマー（ＡＲＣ３２２２５）を２４時間にわたって示す２パネルの線グラフである（累積量（Ａ）およびフラックス（Ｂ）として示される）。 図１４は、適用後６時間（上のパネル）および１５時間（下のパネル）の時点での、表皮および真皮へのＩＬ２３アプタマー（ＡＲＣ３２２２５）の受動的浸透を、密封、水和、および有限投与と無限投与の効果を比較して示す２パネルの棒グラフである。 図１５は、適用後６時間（上のパネル）および１５時間（下のパネル）の時点での、表皮および真皮へのＩＬ２３アプタマー（ＡＲＣ３２２２５）の受動的浸透を、有限用量（１０ｍｇ／ｃｍ２）からの塩化カルシウムおよびＥＤＴＡの効果を比較して示す２パネルの棒グラフである。 図１６は、ＩＬ２３アプタマー（ＡＲＣ３２２２５）の受動的浸透を、有限用量（１０ｍｇ／ｃｍ２）で温度の効果を比較して示す１パネルの棒グラフである。 図１７Ａ、１７Ｂ、および１７Ｃは、適用後６時間（Ａ）および２４時間（Ｂ）でのｅｘ ｖｉｖｏヒト皮膚における種々の２’修飾ＩＬ２３アプタマーの皮膚浸透を示す２パネルの棒グラフ、ならびに適用後２４時間（Ｃ）での水溶液における二次構造を破壊する４つの異なる変異体（変異体１；１．１ｍｇ／ｍＬ、変異体２；０．４ｍｇ／ｍＬ、変異体３；０．９ｍｇ／ｍＬ、および変異体４；０．９ｍｇ／ｍＬ）および三次構造を破壊する１つの変異体（変異体５；１．１ｍｇ／ｍＬ）およびＩＬ２３アプタマー（ＡＲＣ３２２２５）（１．０ｍｇ／ｍＬ）の皮膚浸透（適用用量に対するパーセンテージとして）を示すパネルである。 図１８Ａおよび１８Ｂは、ＩＬ１７ｆ（Ａ）およびＩＬ２２（Ｂ）サイトカインレベルの低下により評価される局所的ＩＬ２３アプタマー（ＡＲＣ３２２２５）のヒト皮膚における生物活性を示す２パネルの棒グラフである。
発明の具体的説明
一般に、１，０００ダルトンより大きい薬剤は局所送達時に無傷の（例えば、損傷のない）哺乳動物（例えば、ヒト）皮膚を通過できず、角質層（ＳＣ）を通過して表皮および／または真皮の生きている層に到達できないと理解される。哺乳動物の皮膚バリアのサイズ排除現象を克服することは、皮膚科学および局所的薬物送達における大きな突破口となる。このサイズ排除現象、すなわち１，０００ダルトン未満は、経皮製剤および局所製剤として市販されるようになった薬物によっても補強される［１］。皮膚は、内在する水の損失を防ぎつつ物理的、機械的、および化学的傷害からヒトの身体を保護するために進化してきた。これは、最終的に角質層を形成するための基底ケラチノサイトの最終分化により、表皮の最外層で薄い（１０〜３０ｕｍ）角化層によって達成される。この最外層は、剥離により絶えず除去され、およそ３０日毎に補充される脂質エンベロープにより取り囲まれた平坦でケラチン豊富なリポタンパク質含有エンベロープからなる［２，３］。この脂質エンベロープは、角質細胞と周囲の細胞間脂質の間の密着を作り出し、明確に定義された側方充填およびラメラ相を有し、この極めて有効な保護バリアを形成する［４］。ヒト身体を保護するだけでなく、局所投与から達成可能な治療標的を制限するのは、この高度に進化したバリアである。
アプタマーは、タンパク質、ヌクレオチド、抗生物質、低分子有機または無機化合物、ならびに高い親和性および特異性を有する細胞全体さえも含む広範な分子と結合し得る、比較的新しい種類のオリゴヌクレオチドに基づく技術である［５］。アンチセンスオリゴヌクレオチドとアプタマーの間の１つの主要な違いは、コンフォメーション構造およびフレキシビリティである［１０］。アンチセンス分子の構造は、有効性に影響を持ち得ることから積極的に回避される。アプタマーの利点の１つは、構造が修飾可能であり、なお、活性を維持することである。ＲＮＡに基づくアプタマーは、コンフォメーションの「可塑性」を持ち、多くの異なる三次構造を作り出すことが記載されており、ＲＮＡの可塑性に関する高い潜在能力は、異なる機能的に活性なタンパク質構造を用いるＲＮＡとタンパク質の間の分子擬態の進化から生じるものであり得る［６］。今般、可塑性、可逆的変性（フレキシビリティ）、および高い安定性という特性が皮膚バリアを渡る局所送達に適していることが画定された。例えば、２’修飾ヌクレオチドを有する一本鎖アプタマーは、皮膚疾患の処置のための、バリア（例えば、無傷のヒト皮膚）の物理的破壊無くヒト皮膚に浸透（すなわち、受動的送達）可能な大分子量化合物のサブセットに相当する。加えて、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、多くの場合、約２０ヌクレオチド長であり、対照的に、アプタマーは一般にそれより大きく、例えば、少なくとも３０ヌクレオチド長であり、例えば５０〜９０ヌクレオチドなど、それより大きい場合の多い。
本開示は、無傷の（例えば、損傷の無い）ヒト皮膚を経たアプタマーの局所送達の第１の描写を提供する。さらに、このような局所送達アプタマーは、皮膚、例えば、表皮および／または真皮において治療効果を発揮し得る。局所送達を研究するための動物モデル（例えば、齧歯類、ブタ）が存在するが、これらのモデル系の皮膚は一般に、ヒト皮膚よりも浸透性が高く、ヒト皮膚に対する効果、例えば、角質層（ＳＣ）ならびに表皮および／または真皮の通過の予測となり得ない。
ＩＬ２３アプタマーの局所投与は、治療上適切な濃度で無傷のヒト皮膚、活性のある表皮および真皮へ浸透することが示されている。これらの濃度は、ピコモル濃度でヒト皮膚からアプタマーを抽出および定量可能であることが示されているデュアルハイブリダイゼーションアッセイを用いて定量されたものである。表皮で定量されたレベルは、一貫して、表皮ではＩＣ５０の１，０００倍超（マイクロモル）、真皮ではＩＣ５０の１００倍超（ナノモル〜マイクロモル）であった。加えて、表皮および真皮の両方へ浸透したアプタマーの適用用量の量が算出された。ビヒクル（例えば、薬学的に許容可能な組成物）に応じて、適用用量の１１％超が表皮に浸透し、１％超が真皮に浸透した。皮膚において定量されたレベルを蛍光を用いて確認したところ、ケラチノサイト内およびその周囲（細胞内および細胞外）の両方にあることが示された。このことは、これらのアプタマーが細胞外標的ならびに細胞内標的またはさらには核標的の両方を標的とし得ることを示す。皮膚において定量された濃度をサイトカイン阻害による皮膚内の生物活性を確認したところ、細胞外画分はタンパク質と結合して生物学的応答を惹起することができる。皮膚において定量されたレベルは、新しく切り出したヒト皮膚を用いて薬力学的モデルで生物活性に関して確認した。
本明細書に記載のように、皮膚疾患における、例えば、ＩＬ−２３アプタマーの使用（例えば、局所投与）によるＩＬ−２３の阻害は、皮膚におけるＴｈ１７リンパ球の活性化および増殖を遮断し、例えば、被験体の（例えば、ヒト被験体の）全身性免疫応答を損なうことなく、炎症性皮膚疾患（例えば、慢性炎症性皮膚疾患（例えば、乾癬またはアトピー性皮膚炎））の症状を改善する。
本明細書に記載の１つのアプタマーＡＲＣ３２２２５は、最適化および安定化された６１ヌクレオチド（ＭＷ＝２０，３９５．２７）のｍＲｆＹアプタマーである。３’末端は、ヌクレアーゼ分解に対する保護として付加的な逆位ｄＴを有する。局所投与向けには、それはペグ化されない。ＡＲＣ３２２２５は、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおいて活性化ヒト単球（内因性ＩＬ−２３またはｅＩＬ−２３）により産生されたＩＬ−２３と結合する。ＡＲＣ３２２２５は、内因性ＩＬ−２３により誘導されるＳＴＡＴ３活性化の強力な阻害剤であるが、ＩＬ−１２により誘導されるＳＴＡＴ３活性化の強力な阻害剤とは言えない（初代ヒトＴ細胞におけるｅＩＬ−２３依存的ＳＴＡＴ３活性化で判定された通り（ＩＣ５０＝約３００ｐＭ））。ＡＲＣ３２２２５はほとんどの非ヒトＩＬ−２３タンパク質を阻害しないが、カニクイザルＩＬ−２３を阻害し、オン・ターゲット毒性試験を可能とする。ＡＲＣ３２２２５は一般にヌクレアーゼ分解に耐性がある。９０％ヒト血清中で２４時間のインキュベーション後に有意な量の全長ＡＲＣ３２２２５が残る。ＡＲＣ３２２２５はまた、クリーム中に処方された場合、室温で２週間ほぼ１００％無傷で残る。ｉｎ ｖｉｔｒｏ皮膚浸透試験において１％クリーム処方物で局所的に適用された場合、無傷のＡＲＣ３２２２５は、健康なヒト皮膚において、表皮に浸透に、少なくとも４時間そこに局在する。アプタマーは健康なｅｘ−ｖｉｖｏ皮膚の表皮の全層および真皮の上層に浸透する。予備的なｉｎ ｖｉｖｏ試験において、ＡＲＣ３２２２５は、テープで剥離した生きたブタ皮膚に浸透し、少なくとも４時間存在した。ＡＲＣ３２２２５のようなＩＬ−２３アプタマーの局所適用は、皮膚におけるＴｈ１７細胞の活性を低下させる可能性があり、例えば感染に対して有効な免疫応答に必要とされる全身のＴｈ１またはＴｈ１７細胞活性に影響を及ぼすことなく、かつ、癌のリスクを軽減しつつ、局部的炎症作用の軽減をもたらし得る。
皮膚構造
皮膚は無傷（例えば、健康または非罹患皮膚）であってもよいし、または損傷を受けていてもよい（例えば、罹患皮膚または変化したバリアを有する）。正常な（無傷の）皮膚とは、疾患に侵されておらず、環境から身体を保護する働きをする正常なバリアを有する無傷の角質層と、正常な皮膚温度（一般に、３０〜３６℃の範囲）を有する皮膚を意味する。
損傷皮膚は、角質層が損傷を受けているか、肥厚しているか（例えば、過角化）、不全であるか、透過性が高いもしくは低いか、または角質層の少なくとも一部を欠いている皮膚（例えば、薬剤暴露；免疫応答またはその増悪；炎症性応答またはその増悪；切断、創傷、または剥離などの物理的外傷により損傷を受けた皮膚；早期産児に見られるような発育不全の皮膚；表皮の全体もしくは一部が露出している状態；化学的剥離、削皮術、およびレーザーリサーフェイシングなどのリサーフェイシング手順において直面する部分的に肥厚した創傷のような、真皮の一部が除去された状態）である。
皮膚は、表皮と真皮の２つの主要な層を有する。これらの下には皮下脂肪の層がある。皮膚の外表が表皮であり、それ自体、数層、すなわち、活性のある（例えば、生きている）層（基底細胞層、有棘層、顆粒細胞層）と活性のない角質外層を含む。表皮の最深層は基底細胞層である。ここで、細胞は、絶えず分裂して新たな皮膚細胞を産み出している。これらの細胞は、皮膚表面に向かって移動し、それらの下で分裂している細胞により上方へ押し出される。基底細胞層の下にある真皮中の血管は、この活発な新しい皮膚細胞の成長を支えるために栄養を供給する。基底細胞はそれらの血液供給から離れて上方へ移動するにつれ、それらの細胞の内容物および形状は変化する。基底細胞層の上の細胞は形状が不規則となり、有棘層を形成する。この上では、細胞は顆粒層に移動する。真皮中の血液供給から離れると、細胞は死に始め、ケラチンを蓄積する。
角質層は表皮の最上層（非活性）である。ここの細胞は平坦で鱗状（「鱗屑状」の形状である。これらの細胞は死んでおり、多量のケラチンを含有し、皮膚表面に強靱性と耐水性を付与す重畳層で構成されている。死んだ皮膚細胞は絶えず皮膚の表面から遊離している。これは基底細胞層の分裂細胞によりバランスがとられ、それにより、およそ３０日毎に起こる不断の再生という状態を作り出している。また、基底細胞層には、メラニンを産生する細胞がある。メラニンは、分裂中の皮膚細胞に吸収されて日光（紫外線）の傷害からそれらを保護する助けをする色素である。皮膚のメラニン量は遺伝子構成および日光暴露により決定される。
表皮の下は真皮と呼ばれる層である。真皮の最上層、すなわち、表皮のすぐ下のものは、乳頭と呼ばれる多くの隆起を有する。指先では、皮膚の表面はこの隆起のパターンに従い、我々の個々の指紋を作り出している。真皮は様々な量の脂肪、また、皮膚に強度と柔軟性を与えるコラーゲンおよびエラスチンを含む。血管は基底層の分裂細胞に影響を供給し、老廃物を除去する。
皮膚疾患：
アプタマーの局所用処方物および／または局所投与は、皮膚科障害（皮膚疾患）（すなわち、表皮、真皮、および／または皮下組織の異常な状態）を処置するために使用され得る。皮膚疾患としては、（部分的にまたは完全に）免疫障害（例えば、自己免疫性障害（例えば、湿疹、乾癬、アトピー性皮膚炎））；増殖障害（例えば、黒色腫）；アレルゲンおよび／または刺激物との接触；皮脂の過剰（例えば、座瘡）；線維芽細胞障害（例えば、外傷（例えば、手術）後の瘢痕形成）；またはそれらの組合せにより引き起こされる皮膚科疾患を含む炎症性皮膚科疾患が含まれる。皮膚科（皮膚）疾患の冷としては、限定されるものではないが、乾癬、皮膚炎（例えば、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、湿疹性皮膚炎、または脂漏性皮膚炎）、慢性水疱性障害、座瘡、免疫介在障害の脂漏性皮膚病徴、脱毛症、円形脱毛症(alopecia greata)、強皮症(scleredoma)、瘢痕形成（例えば、ケロイド瘢痕または肥厚性瘢痕）、蕁麻疹、酒さ、黒色腫、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）の増悪、腎臓移植からの炎症、喘息の増悪、化膿性汗腺炎、関節リウマチの増悪、乾癬性関節炎の増悪、シェーグレン症候群の増悪、ブドウ膜炎の増悪、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）の増悪、口腔扁平苔癬、関節痛の増悪、または膵島細胞移植炎症の増悪が含まれる。
アプタマーの局所用処方物および／または局所投与により処置可能なさらなる皮膚疾患としては、
・持続的炎症、細胞動態、および分化の皮膚障害（例えば、乾癬、乾癬性関節炎、剥離性皮膚炎、バラ色粃糠疹、扁平苔癬、光沢蘚苔、汗孔角化症など）；
・表皮密着の皮膚障害、水疱性(vesicular and bullous)障害（例えば、天疱瘡、水疱性類天疱瘡、後天性表皮水疱症、掌または足底膿疹など）；
・表皮外観の皮膚障害および関連の障害（例えば、毛髪障害、爪、酒さ、口周囲皮膚炎、濾胞性症候群など）；
・表皮および付属物の 腫瘍（例えば、扁平上皮癌、基底細胞癌、角化棘細胞腫、良性上皮腫瘍、メルケル細胞癌など）；
・メラノサイトの障害（例えば、色素障害、白化、メラニン欠乏症および色素沈着症、色素性母斑、黒色腫など）；
・真皮の炎症性および新生物性障害に関する皮膚障害（例えば、持久性隆起性紅斑、好酸球、顔面肉芽腫、壊疽性膿皮症、悪性萎縮性丘疹、真皮および軟組織の線維損傷、カポジ肉腫など）；
・皮下組織の障害（例えば、脂肪織炎、脂肪異栄養症など）；
・反応性が変化した皮膚変化を含む皮膚障害（例えば、蕁麻疹、血管性浮腫、移植片対宿主病、アレルギー性接触性皮膚炎、自家感作性皮膚炎、アトピー性皮膚炎、脂漏性皮膚炎など）；
・機械的および物理的因子による皮膚変化（例えば、熱損傷、放射線皮膚炎、うおのめ、たこなど）；
・光傷害（例えば、急性および慢性ＵＶ照射、光増感など）；
・微生物因子による皮膚疾患（例えば、らい病、ライム病、爪真菌症、水虫、風疹、麻疹、単純ヘルペス、ＥＢＶ（エプスタイン−バーウイルス）、ＨＰＶ（ヒト乳頭腫ウイルス）（例えば、ＨＰＶ６および７）、疣贅、プリオンなど）
が含まれる。
皮膚疾患の標的
皮膚疾患の媒介に関与するタンパク質は同定されており、従って、皮膚疾患を処置するための方法において標的とすることができる（例えば、アプタマーでの局所標的による）。炎症性皮膚科障害（例えば、アトピー性皮膚炎、乾癬、座瘡など）には、限定されるものではないが、ＩＬ２、ＩＬ１２、ＩＬ１７、ＩＬ２２、ＩＬ２３、ＩＦＮγ、ＴＮＦα、ＴＳＬＰなどまたはケモカインＣＣＲ１、ＣＸＣＲ４、ＣＲＴＨ２のようなサイトカインおよび／または受容体の標的が含まれる。皮膚における増殖障害（例えば、黒色腫および非黒色腫皮膚癌）には、限定されるものではないが、ＴＬＲ、ｐ５３、ＲＡＳ、ＭＥＫ、パッチ１、ソニックヘッジホッグシグナル伝達のメディエーターなどの標的を含む。皮膚における線維芽細胞障害（例えば、外傷または手術後の瘢痕形成）または線維症、強皮症(scleredoma)、瘢痕形成（例えば、ケロイド瘢痕または肥厚性瘢痕（ｍｉＲＮＡ（例えば、ｍｉｒ２１）、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ、ＰＴＥＮ））が含まれる。皮膚における皮脂の過剰生産（例えば、座瘡など）には、限定されるものではないが、ＦＡＳ、ＤＧＡＴ、ＳＣＤ１などの標的が含まれる。慢性水疱性障害における標的は、細胞成長、増殖、および分化（ＥＧＦＲ、ＥＧＦ、ＨＢ−ＥＧＦ、ＴＧＦ−α、ＥＰＲ、ＢＴＣ、ＮＲＧ１−４など）または接着（β−インテグリン、ＣＤ４４、Ｅ−カドヘリン、ＣＬＡなど）を標的とする。感染性疾患における標的（ＨＰＶ１、ＨＰＶ５、ＨＰＶ８、ＨＰＶ１４、ＨＰＶ１６、ＨＰＶ１７、ＨＰＶ２０、ＨＰＶ３１、ＨＰＶ４７など）。光傷害および光老化における標的。血管系および血管新生に関する標的（ＶＥＧＦＣ、ＶＥＧＦＤ、ＶＥＧＦ、ＶＥＧＦ−Ｒなど）。創傷修復または再生に関与する標的（ＥＧＦ、ＦＧＦ、ＧＭＣＳＦ、ＩＬ−１、ＰＤＧＦ、ＴＧＦ−β１、ａｎｄそれらの受容体、例えば、ＥＧＦ−Ｒ、ＦＧＦ−Ｒなど）。
個々の標的および／またはそれらの標的は、調節（アプタマー(apatamers)による促進作用、拮抗作用、安定化、脱安定化、細胞からの排除の促進、器官、または全身系）を受け得る他の生物学的または化学的実体との相互作用を含み得、可溶性リガンドおよびまたはそれらの受容体、細胞外酵素、膜貫通酵素、および細胞内酵素、足場／構造タンパク質、ＲＮＡ、ＤＮＡ、脂質、脂肪酸、補因子および個々の特異的および／または非特異的相互作用が含まれる。
これらの標的（例えば、皮膚疾患の媒介に関与するタンパク質）に対するアプタマーは、皮膚疾患を処置するために使用され得、例えば、本明細書に記載の通りに、例えば、局所投与され得る。
炎症性皮膚疾患
ＩＬ−２３アプタマーの局所用処方物および／または局所投与は、炎症性皮膚疾患を処置するために使用可能である。炎症性皮膚疾患は、皮膚において一連の炎症反応を引き起こす種々の刺激物質による臨床徴候および症状、例えば、そう痒、浮腫、紅斑および剥離を含む疾患を意味する。既知の炎症性皮膚疾患としては、限定されるものではないが、皮膚炎（例えば、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、湿疹性皮膚炎、または脂漏性皮膚炎）、座瘡、乾癬、酒さ、または老化皮膚が含まれる。
炎症性皮膚疾患は皮膚科学における一般的な問題である。それらは皮膚のそう痒および発赤を伴う偶発的発疹から皮膚炎、酒さおよび乾癬などの慢性病態まで、多くの形態で現れる。皮膚炎症は、急性または慢性として特徴付けることができる。急性炎症は、ＵＶ放射線（ＵＶＲ）、電磁放射線、アレルゲン、または化学刺激物質（石鹸、ヘアダイなど）との接触から起こる。この種の炎症は一般に、組織破壊をほとんど伴うことなく１〜２週間以内に消散する。慢性炎症は、皮膚それ自体の内部の免疫細胞により媒介される持続的な炎症性応答から起こる。この炎症は長く続き、有意かつ重大な組織破壊を生じ得る。
慢性炎症性皮膚疾患
慢性炎症性皮膚疾患としては、皮膚炎（例えば、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、湿疹性皮膚炎、および脂漏性皮膚炎）、座瘡、乾癬、酒さ、および老化皮膚が含まれる。
乾癬。 乾癬は、皮膚に現れる慢性の自己免疫疾患である。
身体の３％未満に乾癬を有する人は軽度症例を有すると見なされる。身体の３〜１０％が乾癬に侵された人は中等度症例と見なされる。１０％を超える場合は重度と見なされる。
アトピー性皮膚炎。 アトピー性皮膚炎は、鱗状でかゆみを伴う発疹を含む長期（慢性）皮膚障害である。
慢性炎症性皮膚疾患処置：
局所処置：
慢性炎症性皮膚疾患（例えば、乾癬またはアトピー性皮膚炎）に対する局所治療薬としては、脂環式酸；コールタール；アロエベラ；ホホバ；ジンクピリチオン；カプサイシン；角質溶解剤（例えば、サリチル酸、乳酸、尿素、またはフェノールの有効成分を含有する）；カラミン；カンファー；ジフェンヒドラミン塩酸（ＨＣｌ）；ベンゾカインおよびメントール；カルシポトリエン（例えば、ＤＯＶＯＮＥＸ（登録商標））またはカルシトリオール（例えば、ＶＥＣＴＩＣＡＬ（登録商標）またはＲＯＣＡＬＴＲＯＬ（登録商標））などのビタミンＤ類似体；二プロピオン酸カルシポトリエンおよびベタメタゾン（例えば、ＴＡＣＬＯＮＥＸ（登録商標））；タザロテン（例えば、ＴＡＺＯＲＥＣ（登録商標）またはＡＶＡＧＥ（登録商標））などの局所用レチノイド；アントラリン（例えば、ＺＩＴＨＲＡＮＯＬ（商標）−ＲＲ）；プロピオン酸クロベタゾール、二プロピオン酸ベタメタゾン、プロピオン酸ハロベタソール、フルオシノニド、二酢酸ジフロラゾン、フロ酸モメタゾン、二酢酸ジフロラゾン、ハルシノニド、デスオキシメタゾン、プロピオン酸フルチカゾン、吉草酸ベタメタゾン、フルランドレノリド、トリアムシノロンアセトニド、フルオシノロンアセトニド、吉草酸ヒドロコルチゾン、プレドニカルベート、デソニド、ヒドロコルチゾン、ジプロピオン酸アルクロメタゾンなどのコルチコステロイド、タクロリムス（例えば、ＰＲＯＧＲＡＦ（登録商標））および／またはピメクロリムス（例えば、ＥＬＩＤＥＬ（登録商標）など）などのカルシニュリン阻害剤が含まれる。慢性炎症性皮膚疾患（例えば、乾癬またはアトピー性皮膚炎）の処置のために、本明細書に記載のＩＬ−２３アプタマーは、１以上の局所治療薬と併用処置と組み合わせて使用することができる。
光線療法：
光線療法には、ナローバンドＵＶＢ療法などの紫外線Ｂ（ＵＶＢ）光線療法；紫外線Ａ（ＵＶＡ）光線療法；日光；ＰＵＶＡ（ソラレン／プソラレンおよびＵＶＡ）などの光化学療法；および／またはゲッケルマン(Goeckerman)療法（ＵＶＢ処置とコールタール処置の組合せ）が含まれる。慢性炎症性皮膚疾患（例えば、乾癬またはアトピー性皮膚炎）の処置のために、本明細書に記載のＩＬ−２３アプタマーは、１以上の光線療法と組み合わせて使用することができる。
レーザー処置：
レーザー処置には、エキシマレーザーおよび／またはパルス色素レーザーが含まれる。慢性炎症性皮膚疾患（例えば、乾癬またはアトピー性皮膚炎）の処置のために、本明細書に記載のＩＬ−２３アプタマーは、１以上のレーザー処置と組み合わせて使用することができる。
非生物学的全身処置：
慢性炎症性皮膚疾患（例えば、乾癬またはアトピー性皮膚炎）の全身処置には、アシトレチン（例えば、ＳＯＲＩＡＴＡＮＥ（登録商標）またはＮＥＯＴＩＧＡＳＯＮ（登録商標））などのレチノイド；シクロスポリン；メトトレキサート；ヒドロキシ尿素（例えば、ＨＹＤＲＥＡ（登録商標））；イソトレチノイン；ミコフェノール酸モフェチル；スルファサラジン；および／または６−チオグアニンが含まれる。慢性炎症性皮膚疾患（例えば、乾癬またはアトピー性皮膚炎）の処置のために、本明細書に記載のＩＬ−２３アプタマーは、１以上の非生物学的全身処置と組み合わせて使用することができる。
生物学的全身処置：
生物製剤は全身処置の一種である。慢性炎症性皮膚疾患（例えば、乾癬またはアトピー性皮膚炎）の生物学的処置には、アレファセプト（例えば、ＡＭＥＶＩＶＥ（登録商標））；エファリズマブ（例えば、ＲＡＰＴＩＶＡ（登録商標））；エタネルセプト（例えば、ＥＮＢＲＥＬ（登録商標））、アダリムマブ（例えば、ＨＵＭＩＲＡ（登録商標））、インフリキシマブ（例えば、ＲＥＭＩＣＡＤＥ（登録商標））、またはゴリムマブ（例えば、ＳＹＭＰＯＮＩ（登録商標））などの腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−ａ）遮断薬；および／またはウステキヌマブ（例えば、ＳＴＥＬＡＲＡ（登録商標））が含まれる。慢性炎症性皮膚疾患（例えば、乾癬またはアトピー性皮膚炎）の処置のために、本明細書に記載のＩＬ−２３アプタマーは、１以上の生物学的全身処置と組み合わせて使用することができる。
併用療法
用語「組合せ」は、同じ被験体を処置するための２以上の薬剤または療法の使用を意味し、ここで、薬剤または療法の使用または作用は時間的に重複する。薬剤または療法は、同時に（例えば、被験体に投与される単一の処方物としてまたは同時に投与される２つの分離した処方物として）または任意の順序で逐次投与することができる。逐次投与は、異なる時点で与えられる投与である。１つの薬剤と他の薬剤との間の投与時間は、分、時間、日、または週の単位であり得る。ＩＬ−２３アプタマーはまた、他の療法の用量を低減するため、投与される他の薬剤に伴う副作用を軽減するために使用することができる（またその逆）。よって、組合せは、第２の薬剤をＩＬ−２３アプタマーの不在下で使用される場合よりも少なくとも１０、２０、３０、または５０％低い用量で投与することを含み得る（またその逆）。
ＩＬ−２３、ＩＬ−１２、および自己免疫疾患
ＩＬ−２３がそのメンバーであるサイトカインインターロイキンの（ＩＬ）−１２ファミリーは、マクロファージおよび樹状細胞を含む抗原提示細胞により産生され、Ｔ細胞およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を活性化する、構造的に関連のあるタンパク質の一群である［１８〜１９］。基本メンバーであるＩＬ−１２は、ｐ４０サブユニットとｐ３５サブユニットからなるヘテロ二量体タンパク質である。ＩＬ−１２は、ナイーブＴ細胞の、ＩＦＮ−γ（ＩＦＮ−ｇ）および他のＴｈ１サイトカインを産生するＴｈ１細胞への分化を刺激し、さらにＴｈ１細胞の増殖も刺激する［２０〜２１］。
ＩＬ−２３は、ＩＬ−１２のｐ４０サブユニットとユニークなｐ１９サブユニットからなるＩＬ−１２ファミリーの比較的新しいメンバーである。ＩＬ−２３は、ＩＬ−１２受容体とは異なる受容体を介してＴｈ１７およびＮＫ細胞に結合する。ＩＬ−２３／ＩＬ−２３Ｒ相互作用は、Ｔｈ１７細胞を増殖し、ＩＬ−１７およびＩＬ−２２を産生するように刺激することも含め、異なれる効果を有する［２２〜２５］。ＩＬ−２３のみを欠く（ｐ１９−／−）、ＩＬ−１２のみを欠く（ｐ３５−／−）、または両サイトカインを欠く（ｐ４０−／−）マウスを用いた試験は、それぞれＭＳ、ＲＡ、およびＩＢＤに対するマウスＥＡＥ、マウスＣＩＡ、およびマウスにおけるＨ．ヘパティカス(H. hepaticus)により誘発されるＴ細胞依存性大腸炎モデルに関して、ＩＬ−１２よりもむしろＩＬ−２３が、より関連のあるサイトカインであることを示している［２６〜２９］。さらに、Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．［３０］は、抗マウスｐ１９阻害抗体がマウスＥＡＥ誘発を予防し、確立された疾患を逆転できたことを報告している。
また、ＩＬ−２３は、その作用部位が全身的（すなわち、血液、リンパ節）ではなく主として局部的組織（すなわち、皮膚、ＣＮＳ、肺など）であると思われるという点でもＩＬ−１２と異なる。数系統の証拠がこの仮説を裏付けている（３１に総説）。第一に、ＩＬ−２３は循環Ｔｈ１７細胞の生成には関与しないが、その代わりに既存のＴｈ１７細胞の活性化および増殖を刺激する［３１］。よって、いくつかの場合では、ＩＬ−２３の欠失は循環Ｔｈ１７細胞の有意な現象をもたらさなかった。このことと一致して、ＩＬ−２３は一般に、炎症部位でアップレギュレートされ、傷害部に有意に多いＩＬ−２３Ｒ発現Ｔ細胞をもたらすが、循環中のＩＬ−２３Ｒ発現Ｔ細胞のレベルは常態に維持される［３２］。第二に、外因性ＩＬ−２３はＩＬ−２３ノックアウトマウスにおいて、発現ベクターが脳に注入された場合にはＥＡＥから救済できるが、血中に導入された場合には救済できない［２６］。第三に、Ｒａｇ１−／−大腸炎マウスモデルにおいて野生型（ｗｔ）ＣＤ４＋ Ｔ細胞の代わりにＬ−２３Ｒ−／−を用いると、全身炎症に影響を及ぼすことなく結腸炎症が強く阻害される［３３］。
ヒトＩＬ−２３およびＩＬ−１２は双方とも、共通の１つのサブユニットとユニークなサブユニットを持つヘテロ二量体である。共通のサブユニットはｐ４０サブユニットであり、以下のアミノ酸配列（受託＃ＡＦ１８０５６３）（配列番号３）を含む。
ｐ１９サブユニットはＩＬ−２３にユニークなものであり、以下のアミノ酸配列（受託＃ＢＣ０６７５１１）（配列番号４）を含む。
ＩＬ−２３および炎症性皮膚疾患
皮膚におけるＩＬ−２３発現は、慢性炎症性皮膚疾患（例えば、乾癬およびアトピー性皮膚炎）に関連付けられている(Lowes, et al., Trends Immunol. Epublished: pii: S1471-4906(12)00199-8. doi: 10.1016/j.it.2012.11.005 (2013), “The IL-23/T17 pathogenic axis in psoriasis is amplified by keratinocyte responses” and Toussirot, Inflamm Allergy Drug Targets 11(2):159-68(2012))。遺伝的関連研究では、ｐ１９サブユニット（遺伝子ＩＬ−２３ａ）およびＩＬ−２３受容体の特異的サブユニット（遺伝子ＩＬ−２３Ｒ）に位置する特定の遺伝子変異体が乾癬に関連付けられるが、これらのバリエーションの機能的結果はまだ解明されていない［３４］。
皮膚における多くの細胞種はＩＬ−２３を産生するか、ＩＬ−２３に応答するかのいずれかである。上層真皮中の樹状細胞および表皮中のランゲルハンス細胞とケラチノサイトは、乾癬病巣だけでなく乾癬患者の正常な皮膚でもＩＬ−２３を産生する（３５に総説）。乾癬病巣で、真皮中のＣＤ４＋ Ｔ細胞ならびに表皮中のＣＤ８＋ Ｔ細胞、ケラチノサイト、および好中球はＩＬ−２３、ＩＬ−１７、およびＩＬ−２２に応答する［３６］。乾癬患者の病巣に存在するＩＬ−２３だけでなく、マウスの皮膚における直接注射またはＩＬ−２３の過剰発現も、それが乾癬様病巣の発生に十分であることが実証されている［３７］。病巣形成はマウスＩＬ−１７ａ、ＩＬ−２３、およびＩＬ−２２の発現の増強と相関が見出されている。注射されたＩＬ−２３の、全身送達された抗ＩＬ−２３モノクローナル抗体（Ｍａｂ）による遮断は、これらの病巣の形成を阻害した。最後に、抗ＩＬ−２３ Ｍａｂの注射は、乾癬のマウス異種移植モデルにおいて炎症性病巣の発生を阻害することができる［３８］。
アプタマー
アプタマーは、古典的なワトソン−クリックの塩基対形成以外の相互作用による分子との特異的結合親和性を有する合成によりもたらされる核酸分子である。アプタマーは、選択された標的と特異的に結合してその標的の活性を調節することができる。ランダム配列オリゴヌクレオチドのプールからのｉｎ ｖｉｔｒｏ選択プロセスにより作出されるので、アプタマーは、増殖因子、転写因子、酵素、免疫グロブリン、および受容体を含む１００を超えるタンパク質に関して作製されている（例えば、米国特許第５，２７０，１６３号および同第５，８４３，６５３号、およびBouchard et al., Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. (2010) 50:237-257参照）。典型的なアプタマーはその標的とサブナノモル親和性で結合し、近縁標的から識別することができる。
アプタマーは、高い特異性および親和性、生物学的有効性、および優れた薬物動態特性を含め、治療薬および診断薬として使用するために望ましいいくつかの特徴を有する。
アプタマーは、アンチセンスオリゴヌクレオチドよりもサイズが大きい。アンチセンスオリゴヌクレオチドは多くの場合、約２０ヌクレオチド長であり、これに対して、アプタマーは一般に、例えば、少なくとも３０ヌクレオチド、多くの場合にはより大きく、例えば、５０〜９０ヌクレオチドである。
アンチセンスオリゴヌクレオチドとアプタマーの間の主な違いは、コンフォメーション構造とフレキシビリティである(Nomura, Y., et al., (2010) Nucleic Acids Res 38(21):7822-9)。アンチセンス分子の構造は、それが有効性に影響を持ち得るので積極的に回避される。アプタマーの利点の１つは、構造が修飾可能であってなお活性を維持するということである。
アプタマーは、本明細書にさらに記載されるように、例えば、親油性または高分子量化合物（例えば、ＰＥＧ）とのコンジュゲーション、リン酸骨格へのＣｐＧモチーフの組み込み、キャップ部分の組み込み、修飾ヌクレオチドの組み込み、およびホスホロチオエートの組み込みを含む修飾を含み得る。
一つの実施態様では、ＩＬ−２３（ＩＬ−２３）に結合する単離されたおよび／または非天然のアプタマーが提供される。いくつかの実施態様では、単離されたおよび／または非天然のアプタマーは、ＩＬ−２３に対して１００ｎＭ未満、１０ｎＭ未満、５ｎＭ未満、１ｎＭ未満、０．５ｎＭ未満、０．２５ｎＭ未満、または０．１ｎＭ未満のＩＣ５０を有する。いくつかの実施態様では、単離されたおよび／または非天然のアプタマーは、ＩＬ−２３に対して０．３ｎＭのＩＣ５０を有する。本発明のいくつかの実施態様では、ＩＣ５０は、（ＰＨＡ／ＩＬ−２処理ＰＢＭＣから）ＰＨＡ／ＩＬ−２により活性化されたＴ細胞の内因性ＩＬ−２３活性化を阻害するアプタマーの能力を測定するｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイにより、本明細書に記載のようにＥＬＩＳＡによってホスホ−ＳＴＡＴ３のレベルを測定すること（「ホスホ−ＳＴＡＴ３アッセイ」）により決定される。
一つの実施態様では、アプタマーは、配列番号１または２のアプタマーと本質的に同じ（例えば、少なくとも約７５％、約５０％、約４０％約３０％、または約２０％同じ）ＩＬ−２３結合能を有する。
本発明の別の実施態様では、アプタマーは、配列番号１または２のアプタマーと類似の構造（例えば、類似の二次構造、例えば、一部または総てのループの保存；および／または三次構造）を有し、ＩＬ−２３と結合することができる。
本発明の別の実施態様では、ＩＬ−２３と結合するアプタマーは、配列番号１または２のアプタマーと類似の構造（例えば、類似の二次構造、例えば、一部または総てのループの保存；および／または三次構造）を有し、例えば、本明細書に記載のホスホ−ＳＴＡＴ３アッセイにおいてＳｔａｔ３のリン酸化を阻害する（例えば、低下させる）ことができる。
別の実施態様では、アプタマー（例えば、ＩＬ−２３と結合するアプタマー）は、医薬組成物において有効成分として使用される。
別の実施態様では、アプタマー（例えば、ＩＬ−２３と結合するアプタマー）または本発明のアプタマーを含んでなる組成物は、乾癬を処置するために使用される。
別の実施態様では、ＩＬ−２３と結合するアプタマーまたは本発明のアプタマーを含んでなる組成物は、アトピー性皮膚炎処置するために使用される。
アプタマー（例えば、ＩＬ−２３と結合するアプタマー）は、標準的なホスホラミダイト化学を用いて合成することができる(Beaucage, S. L. and R. P. Iyer. "Advances in the Synthesis of Oligonucleotides by the Phosphoramidite Approach." Tetrahedron 48(12): 2223-2311 (1992))。
アプタマー（例えば、ＩＬ−２３と結合するアプタマー）は凍結乾燥製剤として提供することができ、例えば、それは、例えば、投与用、例えば、局所投与用の溶液またはクリームで再構成することができる。
同一性パーセント：
２以上の核酸配列に関して用語「配列同一性」は、比較し、最大一致が得られるようにアラインした場合に、以下の配列比較アルゴリズムの１つを用いてまたは視認により測定して同じである、または同じである特定のヌクレオチドパーセンテージを有する２以上の配列または部分配列を意味する。配列比較のため、一般に、１つの配列は、試験配列が比較される参照配列として機能する。配列比較アルゴリズムを使用する場合、試験配列および参照配列がコンピューターに入力され、必要に応じて部分配列座標が表示され、配列アルゴリズムプログラムパラメーターが表示される。次に、配列比較アルゴリズムは、表示されたプログラムパラメーターに基づき、参照配列に対して試験配列の配列同一性パーセントを計算する。比較のための配列の最適なアラインメントは、例えば、Smith & Waterman, Adv. Appl. Math. 2: 482 (1981)のローカルホモロジーアルゴリズム、Needleman & Wunsch, J. Mol. Biol. 48: 443 (1970)のホモロジーアラインメントアルゴリズム、Pearson & Lipman, Proc. Nat'l. Acad. Sci. USA 85: 2444 (1988)の類似性検索法、これらのアルゴリズムのコンピューター実装形態（Wisconsin Genetics Software Package, Genetics Computer Group, 575 Science Dr., Madison, Wis.のＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、およびＴＦＡＳＴＡ）、または視認（一般に、Ausubel et al.参照）により行うことができる。
配列同一性パーセントを決定するのに好適なアルゴリズムの一例は、ベーシックローカルアラインメントサーチツール（以下、「ＢＬＡＳＴ」）で使用されるアルゴリズムである、例えば、Altschul et al., J. Mol. Biol. 215: 403-410 (1990) and Altschul et al., Nucleic Acids Res., 15: 3389-3402 (1997)参照。ＢＬＡＳＴ解析を実行するためのソフトウエアは、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（以下、「ＮＣＢＩ」）に好適に入手可能である。ＮＣＢＩから、例えば、ＢＬＡＳＴＮ（ヌクレオチド配列用）から入手可能なソフトウエアを用いて配列同一性を決定する際に使用されるデフォルトパラメーターは、McGinnis et al., Nucleic Acids Res., 32: W20-W25 (2004)に記載されている。
炎症性皮膚疾患向けの局所用抗ＩＬ−２３アプタマー
局所的、局部適用ＩＬ−２３阻害剤は、炎症性皮膚疾患（例えば、慢性炎症性皮膚疾患（例えば、皮膚炎（例えば、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、湿疹性皮膚炎、または脂漏性皮膚炎）、座瘡、乾癬、酒さ、または老化皮膚、例えば、乾癬またはアトピー性皮膚炎））に対する療法として．有用なアプローチであり得る。このような阻害剤は、例えば、全身性の免疫抑制なくｐ４０全身阻害剤として有効であり得る。例えば、このような阻害剤は、処置可能な乾癬患者の範囲を軽度乾癬を有する被験体の遙かに大きな集団を含むように拡大することができる。
ＡＲＣ３２２２５などの６２マーのオリゴヌクレオチド配列（配列番号１）からなるまたはそれを含有するアプタマーはＩＬ−２３と結合してそれを阻害することができ、例えば、炎症性皮膚疾患（例えば、慢性炎症性皮膚疾患（例えば、乾癬またはアトピー性皮膚炎））を処置するために使用することができる（例えば、炎症性皮膚疾患（例えば、慢性炎症性皮膚疾患（例えば、皮膚炎（例えば、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、湿疹性皮膚炎、または脂漏性皮膚炎）、座瘡、乾癬、酒さ、または老化皮膚、例えば、乾癬またはアトピー性皮膚炎））を処置するために局所的に適用することができる）。
ＡＲＣ３２２２５は、以下の配列（配列番号１）を有する６２マーのオリゴヌクレオチドである。
各塩基の糖の２’位は２’フルオロ基または２’−Ｏ−メトキシエチル（２’ＯＭＥ）基のいずれかにより修飾される。３’−逆位チミジン残基は、ヌクレアーゼ耐性を高めるために付加される。配列番号＿を含有するアプタマーの１以上のヌクレオチド（例えば、塩基または糖上）は、本明細書に記載のように修飾することができる。６２マーのオリゴヌクレオチド配列（配列番号１）からなるまたはそれを含有するアプタマーは、ＩＬ−２３と結合してそれを阻害することができる。
配列番号２の６１マーのオリゴヌクレオチドからなるまたはそれを含有するアプタマーは、ＩＬ−２３と結合してそれを阻害することができ、炎症性皮膚疾患（例えば、慢性炎症性皮膚疾患（例えば、皮膚炎（例えば、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、湿疹性皮膚炎、または脂漏性皮膚炎）、座瘡、乾癬、酒さ、または老化皮膚、例えば、乾癬またはアトピー性皮膚炎））を処置するために使用することができる（例えば、炎症性皮膚疾患（例えば、慢性炎症性皮膚疾患（例えば、乾癬またはアトピー性皮膚炎））を処置するために局所的に適用することができる））。
配列番号２を含有するアプタマーの１以上のヌクレオチド（例えば、塩基または糖上）は、本明細書に記載のように修飾することができる。
配列番号１または２のアプタマーは、本明細書に記載の１以上の方法により安定化させることができる。
投与法
適用用量パーセント：
局所用処方物は少量または薄層で皮膚に適用され（有限投与と呼ばれる）、これはｉｎ ｖｉｖｏ臨床状況を模倣すると考えられる。これらの量は、ビヒクル（例えば、薬学的に許容可能な組成物）の量（重量）を表面積で割って表面積被覆率を表したものとされる。ＦＤＡの指針は２ｍｇ／ｃｍ２または２μＬ／ｃｍ２であり、これは定義された厚さ２０μｍの均質なフィルムに必要とされるものに基づく(FDA, Sunscreen drug products for over-the-counter human use, Fed Reg 43; pages 38206-38269, (1978))。他の引例は、その範囲が処方物またはビヒクルおよびその粘度（表１）ならびに病状によって異なることを示唆する。より大きい体表面積に関わる膚疾患について、ＳｕｒｂｅｒおよびＤａｖｉｓは、局所用処方物により適用される用量に関する分野を総説している。彼らは、適用用量が０．７から４ｍｇ／ｃｍ２まで変動することを示している(Surber and Davis, Bioavailability and bioequivalence, in Walters, K.A. (Ed.), Dermatological and Transdermal Formulations, Marcel Dekker, New York, Basel, pp. 401-498 (2002))。これらの量は臨床状況で変動し、最大２０ｍｇ／ｃｍ２のより高量で適用されると考えることができる。
ｉｎ ｖｉｔｒｏ試験では、有限投与には２〜２０ｍｇ／ｃｍ２の範囲の用量を使用し、標準的な投与平均は１０ｍｇ／ｃｍ２前後である。この投与容量を、どのくらいの量の化合物が適用用量のパーセントとして皮膚に浸透するかを評価するために使用することができる。例えば、１％アプタマー処方物（１０ｍｇ／ｍＬ）がｅｘ ｖｉｖｏ皮膚に１０ｍｇ／ｃｍ２用量で局所的に適用される場合、皮膚表面に適用される医薬品有効成分（「ＡＰＩ」）またはこの場合にはアプタマーまたはアプタマーを含んでなる組成物の総量は１００μｇに等しい（投与面積１．０ｃｍ２と仮定する）。皮膚における濃度は、この量に対するパーセンテージに変換することができ、１．０μｇは適用用量の１％に相当し、４．０μｇは適用用量の４％に相当し、１０．０μｇは適用用量の１０％に相当するなどである。表皮における濃度は一般に適用用量の１％超であることが示されており、真皮における濃度は０．１％超である。これらのレベルは、小分子でしばしば見られるレベルであるので、驚くべきもの、また有意なものである。アプタマーが一般に従来のＡＰＩ小分子より有効であることを考えれば、これらの組織レベルは治療レベルを達成している（到達している）ことが示される。
本明細書に記載の方法を使用すると、局所的に適用されるアプタマーの適用用量の０．０１％５０％の間または０．１％〜５０％の間（０．１％〜３０％の間、０．１％〜２０％の間、０．１％〜１５％の間、０．１％〜１０％の間、または０．１％〜５％の間）が表皮（例えば、活性のある表皮）に入る（浸透する）。
本明細書に記載の方法を使用すると、局所的に適用されるアプタマーの適用用量の少なくとも０．０１％、少なくとも０．０５％、少なくとも０．１％、少なくとも０．５％、少なくとも１％、少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも１５％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％または少なくとも５０％が表皮（例えば、活性のある表皮）に入る（浸透する）。
本明細書に記載の方法を使用すると、局所的に適用されるアプタマーの適用用量の０．０１％〜５０％の間（０．１％〜４０％の間、０．１％〜３０％の間、０．１％〜２０％の間、０．１％〜１５％の間、０．１％〜１０％の間、または０．１％〜１０％の間）が真皮に入る（浸透する）。
本明細書に記載の方法を使用すると、局所的に適用されるアプタマーの適用用量の少なくとも０．０１％、少なくとも０．０５％、少なくとも０．１％、少なくとも０．５％、少なくとも１％、少なくとも５％、または少なくとも１０％が真皮に入る（浸透する）。
薬力学的応答
本明細書に記載の方法によれば、薬力学的（ＰＤ）応答を達成するためのレベルでのアプタマーの送達、すなわち、生理反応を誘発するためのアプタマーと生物学的標的との会合が可能である。これはアプタマーの親和性または固有の有効性／活性に関連し得る。固有の有効性／活性は、治療状況で活性を予測するためのサロゲートシステムによって定量的に測定することができ、薬理学的標的（すなわち、アゴニスト対アンタゴニストなど）に応じてＩＣ５０、ＥＣ５０、ｐＥＣ５０などとして提供される場合が多い。固有の有効性／活性の計算は本分野では慣例であり、これは開発中の創薬および工業の標準的なアプローチである(Terry Kenakin. “Pharmacodynamics in Pharmacology”, Pharmacology vol. 1, 319-354頁, Harry Majewski編; Encyclopedia of Life Support Systems, UNESCO (2009))。本明細書で実証されるように、本明細書に記載の方法に従って局所的に適用されたアプタマーは、表皮（例えば、活性のある表皮）および真皮の両方で、アプタマーのＩＣ５０の大過剰のレベルを達成する。実際に、本明細書に示されるように、例示されているアプタマーに関して、ＩＣ５０の１００倍、５００倍、１，０００倍、１０，０００倍、さらには１００，０００倍のアプタマーレベルが表皮（例えば、活性のある表皮）で得、ＩＣ５０のより長い１０倍、５０倍、１００倍、５００倍、１，０００倍、さらには５，０００倍のアプタマーレベルが真皮で得ることができる。本発明の一つの実施態様では、被験体（例えば、ヒト被験体）の皮膚へのアプタマー組成物の局所適用は、一定用量のアプタマー組成物を被験体に投与することを含んでなり、アプタマー組成物は被験体の皮膚の表皮または真皮において固有の活性を惹起する。一つの実施態様では、応答は表皮におけるものである。別の実施態様では、応答は真皮におけるものである。一つの実施態様では、活性は、ＥＣ５０値（例えば、被験体標的に対する）として測定される。別の実施態様では、活性は、ＩＣ５０値（例えば、被験体標的に対する）として測定される。
本明細書で使用する場合、固有の活性は薬力学的応答と同義(synonymous)である。
医薬組成物
本開示は、アプタマーを含有する医薬組成物（例えば、薬学的に許容可能な組成物）を提供する。いくつかの実施態様では、これらの組成物は、局所使用に好適であり、例えば、有効量のアプタマーを単独でまたは１以上のビヒクル（例えば、薬学的に許容可能な組成物または例えば、薬学的に許容可能な担体）と組み合わせて含む。
本開示は、皮膚疾患の媒介に関与する標的と結合するアプタマーを含有する局所投与用の医薬組成物を提供する。いくつかの実施態様では、これらの局所使用用の組成物は、例えば、有効量のアプタマーを単独でまたは１以上のビヒクル（例えば、薬学的に許容可能な担体）と組み合わせて含み得る。
アプタマーを含有する組成物は、皮膚疾患を治療または予防するために使用することができる（例えば、局所投与による）。皮膚疾患の処置は、皮膚疾患の少なくとも１つの症状の改善を含む。
これらのアプタマー含有組成物は、皮膚疾患に罹患している、または疾病素因のある被験体への局所投与に有用である。皮膚疾患としては、持続的炎症、細胞動態、および分化の皮膚障害（例えば、乾癬、乾癬性関節炎、剥離性皮膚炎、バラ色粃糠疹、扁平苔癬、光沢蘚苔、または汗孔角化症）；表皮密着の皮膚障害、水疱性(vesicular and bullous)障害（例えば、天疱瘡、水疱性類天疱瘡、後天性表皮水疱症、または掌または足底膿疹）；表皮付属物の皮膚障害および関連の障害（例えば、毛髪障害、爪、酒さ、口周囲皮膚炎、または濾胞性症候群）；表皮および付属物の腫瘍などの皮膚障害（例えば、扁平上皮癌、基底細胞癌、角化棘細胞腫、良性上皮腫瘍、またはメルケル細胞癌）；メラノサイトの障害（例えば、色素障害、白化、メラニン欠乏症および色素沈着症、色素性母斑、または黒色腫）；真皮の炎症性および新生物性障害の皮膚障害（例えば、持久性隆起性紅斑、好酸球、顔面肉芽腫、壊疽性膿皮症、悪性萎縮性丘疹、真皮および軟組織の線維損傷、またはカポジ肉腫）；皮下組織の障害（例えば、脂肪織炎または脂肪異栄養症）；反応性が変化した皮膚変化を含む皮膚障害（例えば、蕁麻疹、血管性浮腫、移植片対宿主病、アレルギー性接触性皮膚炎、自家感作性皮膚炎、アトピー性皮膚炎、または脂漏性皮膚炎）；機械的および物理的因子による皮膚変化（例えば、熱損傷、放射線皮膚炎、うおのめ、またはたこ）；光傷害（例えば、急性および慢性ＵＶ照射、または光増感）；または微生物因子による皮膚障害（例えば、らい病、ライム病、爪真菌症、水虫、風疹、麻疹、単純ヘルペス、ＥＢＶ（エプスタイン−バーウイルス）、ＨＰＶ（ヒト乳頭腫ウイルス）（例えば、ＨＰＶ６および７）、疣贅、またはプリオン）が含まれる。
皮膚疾患（例えば、持続的炎症、細胞動態、および分化の皮膚障害（例えば、乾癬、乾癬性関節炎、剥離性皮膚炎、バラ色粃糠疹、扁平苔癬、光沢蘚苔、または汗孔角化症）；表皮密着の皮膚障害、水疱性(vesicular and bullous)障害（例えば、天疱瘡、水疱性類天疱瘡、後天性表皮水疱症、または掌または足底膿疹）；表皮付属物の皮膚障害および関連の障害（例えば、毛髪障害、爪、酒さ、口周囲皮膚炎、または濾胞性症候群）；表皮および付属物の腫瘍などの皮膚障害（例えば、扁平上皮癌、基底細胞癌、角化棘細胞腫、良性上皮腫瘍、またはメルケル細胞癌）；メラノサイトの障害（例えば、色素障害、白化、メラニン欠乏症および色素沈着症、色素性母斑、または黒色腫）；真皮の炎症性および新生物性障害の皮膚障害（例えば、持久性隆起性紅斑、好酸球、顔面肉芽腫、壊疽性膿皮症、悪性萎縮性丘疹、真皮および軟組織の線維損傷、またはカポジ肉腫）；皮下組織の障害（例えば、脂肪織炎または脂肪異栄養症）；反応性が変化した皮膚変化を含む皮膚障害（例えば、蕁麻疹、血管性浮腫、移植片対宿主病、アレルギー性接触性皮膚炎、自家感作性皮膚炎、アトピー性皮膚炎、または脂漏性皮膚炎）；機械的および物理的因子による皮膚変化（例えば、熱損傷、放射線皮膚炎、うおのめ、またはたこ）；光傷害（例えば、急性および慢性ＵＶ照射、または光増感）；または微生物因子による皮膚障害（例えば、らい病、ライム病、爪真菌症、水虫、風疹、麻疹、単純ヘルペス、ＥＢＶ（エプスタイン−バーウイルス）、ＨＰＶ（ヒト乳頭腫ウイルス）（例えば、ＨＰＶ６および７）、疣贅、またはプリオン）を有する被験体、すなわち、本開示の方法により予知される被験体は、脊椎動物、より詳しくは、哺乳動物、またはより詳しくは、ヒトであり得る。
アプタマー含有組成物は、皮膚疾患に罹患している、または疾病素因のある被験体への局所投与に有用である。皮膚疾患としては、乾癬、皮膚炎（例えば、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、湿疹性皮膚炎、または脂漏性皮膚炎）、慢性水疱性障害、座瘡、免疫介在障害の脂漏性皮膚病徴、脱毛症、円形脱毛症(alopecia greata)、強皮症(scleredoma)、瘢痕形成（例えば、ケロイド瘢痕または肥厚性瘢痕）、蕁麻疹、酒さ、黒色腫、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）の増悪、腎臓移植からの炎症、喘息の増悪、化膿性汗腺炎、関節リウマチの増悪、乾癬性関節炎の増悪、シェーグレン症候群の増悪、ブドウ膜炎の増悪、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）の増悪、口腔扁平苔癬、関節痛の増悪、または膵島細胞移植炎症の増悪が含まれる。これらの組成物は、炎症性皮膚疾患（例えば、慢性炎症性皮膚疾患（例えば、乾癬またはアトピー性皮膚炎））を有する被験体を処置するための方法で使用可能である。本方法は、アプタマーのその標的との結合がその生物学的機能を低下させ（例えば、阻害し）、それにより皮膚疾患を治療するように、被験体にアプタマーまたはアプタマーを含んでなる組成物を局所的に投与することを含む。
皮膚疾患（例えば、乾癬、皮膚炎（例えば、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、湿疹性皮膚炎、または脂漏性皮膚炎）、慢性水疱性障害、座瘡、免疫介在障害の脂漏性皮膚病徴、脱毛症、円形脱毛症(alopecia greata)、強皮症(scleredoma)、瘢痕形成（例えば、ケロイド瘢痕または肥厚性瘢痕）、蕁麻疹、酒さ、黒色腫、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）の増悪、腎臓移植からの炎症、喘息の増悪、化膿性汗腺炎、関節リウマチの増悪、乾癬性関節炎の増悪、シェーグレン症候群の増悪、ブドウ膜炎の増悪、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）の増悪、口腔扁平苔癬、関節痛の増悪、または膵島細胞移植炎症の増悪）を有する被験体、すなわち、本開示の方法により処置される被験体は、脊椎動物、より詳しくは、哺乳動物、またはより詳しくは、ヒトであり得る。
アプタマーは、皮膚においてその所望の生物活性を発揮するのに十分な量（有効量）で局所的に投与することができる。
本開示は、ＩＬ−２３と結合するアプタマー（例えば、配列番号１または２の配列を含有するアプタマー、例えば、ＡＲＣ３２２２５）を含有する医薬組成物を提供する。いくつかの実施態様では、これらの組成物は、局所使用に好適であり、例えば、有効量のアプタマーを単独で、または１以上のビヒクル（例えば、薬学的に許容可能な担体）と組み合わせて含む。いくつかの実施態様では、これらの組成物は、内部使用に好適であり、例えば、有効量のアプタマーを単独で、１以上のビヒクル（例えば、薬学的に許容可能な担体）と組み合わせて含む。
ＩＬ−２３と結合するアプタマーを含有する組成物は、ＩＬ−２３に関連する病理、例えば、炎症性皮膚疾患（例えば、皮膚炎（例えば、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、湿疹性皮膚炎、または脂漏性皮膚炎）、座瘡、乾癬、酒さ、または老化皮膚、例えば、慢性炎症性皮膚疾患（例えば、乾癬またはアトピー性皮膚炎））を治療または予防するために使用することができる。
ＩＬ−２３と結合するアプタマーを含有する組成物は、炎症性皮膚疾患（例えば、慢性炎症性皮膚疾患（例えば、皮膚炎（例えば、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、湿疹性皮膚炎、または脂漏性皮膚炎）、座瘡、乾癬、酒さ、または老化皮膚、例えば、乾癬またはアトピー性皮膚炎））に罹患している、または疾病素因のある被験体への投与（例えば、局所投与）に有用である。これらの組成物は、炎症性皮膚疾患（例えば、慢性炎症性皮膚疾患（例えば、乾癬またはアトピー性皮膚炎））を有する被験体を処置するための方法において使用可能である。本方法は、アプタマーとＩＬ−２３の結合がＩＬ−２３の生物学的機能を低下させ（例えば、阻害する）、それにより、炎症性皮膚疾患（例えば、慢性炎症性皮膚疾患（例えば、皮膚炎（例えば、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、湿疹性皮膚炎、または脂漏性皮膚炎）、座瘡、乾癬、酒さ、または老化皮膚、例えば、乾癬またはアトピー性皮膚炎））を治療するように、被験体にアプタマーまたはアプタマーを含んでなる組成物を投与することを含む。
炎症性皮膚疾患（例えば、慢性炎症性皮膚疾患（例えば、皮膚炎（例えば、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、湿疹性皮膚炎、または脂漏性皮膚炎）、座瘡、乾癬、酒さ、または老化皮膚、例えば、乾癬またはアトピー性皮膚炎））を有する被験体、すなわち、本開示の方法により処置される被験体は、脊椎動物、より詳しくは、哺乳動物、またはより詳しくは、ヒトであり得る。
ＩＬ−２３と結合するアプタマーは、例えば、ＩＬ−２３機能を阻害する、例えば、本明細書に記載のように、例えば、ＳＴＡＴ３のリン酸化、ＩＬ１７発現、またはＩＬ２２発現を評価することにより評価される；および／またはその効果（例えば、炎症性皮膚疾患（例えば、慢性炎症性皮膚疾患（例えば、皮膚炎（例えば、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、湿疹性皮膚炎、または脂漏性皮膚炎）、座瘡、乾癬、酒さ、または老化皮膚、例えば、乾癬またはアトピー性皮膚炎））（例えば、病巣の大きさもしくは数の低減、または、例えば、発赤の低減）またはその症状の改善により評価される、その所望の生物活性を発揮するのに十分な量（有効量）で投与することができる。
治療用または薬理学的組成物は一般に、ビヒクル（例えば、薬学的に許容可能な担体または媒体）中に溶解または分散した療法の有効量の有効成分（例えば、アプタマー）を含む。薬学的に許容可能な媒体または担体としては、溶媒、分散媒、増粘剤、保存剤、被覆剤、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤などが含まれる。これらの治療用組成物には、補助的な有効成分も組み込むことができる。
医薬組成物の調製は、本開示に照らして当業者に公知である。このような組成物は、液体の溶液または懸濁液いずれかの局所用製剤、注射製剤として；注射前に液体中の溶液または懸濁液とするのに好適な固体形態；時限放出カプセル剤として；または点眼剤、クリーム、ローション、軟膏、吸入剤などを含む、現行使用されている他の任意の形態で調製され得る。無菌処方物の使用は特に有用であり得る。組成物はまた、マイクロデバイス、微粒子またはスポンジを介して送達してもよい。
処方されると、組成物は投与処方物に適合した様式で（例えば、クリームとして局所投与）、薬理学的に有効な量（例えば、局所用製剤で一定濃度）で投与することができる。処方物は、局所用製剤（例えば、クリーム）、注射溶液など、種々の投与形で容易に投与される。
これに関して、投与される組成物の有効成分および容量の濃度または量は、処置される宿主被験体によって決まる。投与に必要とされるアプタマーの厳密な量は、医師の判断により得る。
アプタマーを分散させるために必要とされる組成物の最少量を使用することができる。好適な投与計画は多様であり得るが、まず、所定用量のアプタマーを投与すること、その結果を監視すること、およびその後、さらなる制御用量をさらなる間隔で与えることを含み得る。
医薬組成物は滅菌し、かつ／または保存剤、安定剤、湿潤剤または乳化剤、溶解促進剤、浸透圧を調整するための塩および／またはバッファーなどの佐剤を含有し得る。加えて、医薬組成物はまた、他の治療上有益な物質も含有し得る。組成物は従来の混合、造粒、または被覆法に従って調製され、一般に約０．１％〜約７５％、好ましくは約０．５％〜約５０％または約０．７５％〜約１０％（例えば、１％）の有効成分を含有する。
液体、特に、注射組成物は、例えば、溶解、分散などにより調製され得る。アプタマーは、例えば、水、生理食塩水、デキストロース水溶液、グリセロール、エタノールなどの薬学的に純粋な溶媒に溶解させ、またはそれと混合し、それにより、注射溶液または懸濁液を形成することができる。加えて、注射前に液体に溶解させるのに好適な固体形態（例えば、凍結乾燥形態）を処方することもできる。
本発明のアプタマーは、総て製薬分野の熟練者に公知の形態を用いて静脈内（ボーラスおよび注入の両方）、腹腔内、皮下、または筋肉内形態で投与することができる。注射製剤は、液体の溶液または懸濁液のいずれかとして従来の形態で調製することができる。
非経口注射投与は一般に、皮下、筋肉内、または静脈内注射および注入に使用される。加えて、非経口投与の１つのアプローチでは、緩徐放出または制御放出システムの移植を使用する。
さらに、本発明のアプタマーは、好適な鼻腔内ビヒクル、吸入剤の局所使用を介した鼻腔内形態で、または例えば、当業者に公知の経皮用皮膚パッチの形態を用いる経皮経路を介して投与することができる。経皮送達系の形態で投与するためには、用量の投与は間欠的よりもむしろ持続的とすることができる。他の好ましい局所用製剤としては、クリーム、軟膏、ローション、エアゾールスプレーおよびゲルが含まれ、この場合、有効成分の濃度は、例えば、０．０１％〜２５％（例えば、１％）ｗ／ｗまたはｗ／ｖまたはｖ／ｖの範囲であり得る。
固体組成物の場合、賦形剤としては、製薬等級のマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、タルク、セルロース、グルコース、スクロース、炭酸マグネシウムなどが含まれる。アプタマーは、担体として、例えば、ポリアルキレングリコール、例えば、プロピレングリコールを用いて坐剤として処方され得る。いくつかの実施態様では、坐剤は有利には脂肪エマルションまたは懸濁液から調製される。
本発明の化合物はまた、リポソーム送達系、小単ラメラ小胞、大単ラメラ小胞および多重ラメラ小胞の形態で投与することもできる。リポソームは、コレステロール、ステアリルアミンまたはホスファチジルコリンを含有する多様なリン脂質から形成することができる。いくつかの実施態様では、米国特許第５，２６２，５６４号Ｕに記載されているように、脂質成分のフィルムを薬物の水溶液で水和させ、薬物を封入した脂質層を形成する。例えば、アプタマーは、当技術分野で公知の方法を用いて構築される、親油性化合物または非免疫原性の高分子量化合物との複合体として提供することができる。核酸会合複合体の例は、米国特許第６，０１１，０２０号に示されている。
アプタマーはまた、可溶性ポリマーとカップリングさせてもよい。このようなポリマーとしては、ポリビニルピロリドン、ピランコポリマー、ポリヒドロキシプロピル−メタクリルアミド−フェノール、ポリヒドロキシエチルアスパンアミドフェノール、またはパルミトイル残基で置換されたポリエチレンオキシドポリリジンが挙げられる。さらに、本発明の化合物は、薬物の放出制御の達成に有用な生分解性ポリマークラス、例えば、ポリ乳酸、ポリεカプロラクトン、ポリヒドロキシ酪酸、ポリオルトエステル、ポリアセタール、ポリジヒドロピラン、ポリシアノアクリレート、およびヒドロゲルの架橋型または両親媒性ブロックコポリマーとカップリングさせてもよい。
所望であれば、投与する医薬組成物はまた、湿潤剤または乳化剤、ｐＨ緩衝剤、ならびに例えば、酢酸ナトリウム、およびオレイン酸トリエタノールアミンのような他の物質などの微量の非毒性補助物質も含有してよい。
アプタマーを使用する投与計画は、被験体のタイプ、種、齢、体重、性別、体表面積、および健康状態；処置する病態の重篤度；投与経路；被験体の腎機能および肝機能；ならびに使用する特定のアプタマーまたはその塩を含む種々の因子に従って選択することができる。
本発明の組成物は、単回の一日用量で投与してもよいし、または総一日用量を、例えば、１日２回、３回または４回（など）の分割用量で投与してもよい。
局所用処方物
アプタマーは、局所投与用に処方することができる。アプタマーの好適な局所用処方物としては、液体、または半固体投与形（例えば、スプレー（エアゾールを含む）、軟膏、クリーム、ゲル、ローション、溶液、フォーム、およびペースト）が含まれる。アプタマーの処方物はまた、リポソーム、ミセル、および／またはミクロスフェアも含み得る。アプタマーは、懸濁液、またはエマルション（多重エマルションを含む）中、緩徐放出ナノ粒子、緩徐放出微粒子、生体接着剤、パッチ、包帯または創傷被覆材としてのように、液体、懸濁液、または粉末形態であってもよい。
いくつかの実施態様では、ＩＬ−２３アプタマーは、局所投与用に処方することができる。ＩＬ−２３アプタマーの好適な局所用処方物としては、液体、または半固体投与形（例えば、スプレー（エアゾールを含む）、軟膏、クリーム、ゲル、ローション、溶液、フォーム、およびペースト）が含まれる。ＩＬ−２３アプタマーの処方物はまた、リポソーム、ミセル、および／またはミクロスフェアも含み得る。ＩＬ−２３アプタマーはまた、懸濁液、またはエマルション（多重エマルションを含む）中、緩徐放出ナノ粒子、緩徐放出微粒子、生体接着剤、パッチ、包帯または創傷被覆材としてのように、液体、懸濁液、または粉末形態であってもよい。
局所投与用アプタマーは、スプレー（例えば、エアゾール）、液体、軟膏、クリーム、ローション、溶液、懸濁液、エマルション、ペースト、ゲル、粉末、フォーム、緩徐放出ナノ粒子、緩徐放出微粒子、生体接着剤、パッチ、包帯または創傷被覆材など、ビヒクル中に処方することができる。
局所投与用ＩＬ−２３アプタマーは、スプレー（例えば、エアゾール）、液体、軟膏、クリーム、ローション、溶液、懸濁液、エマルション、ペースト、ゲル、粉末、フォーム、緩徐放出ナノ粒子、緩徐放出微粒子、生体接着剤、パッチ、包帯または創傷被覆材など、ビヒクル中に処方することができる。
軟膏は、一般にワセリンまたは他の石油誘導体に基づく半固体製剤である。使用される特定の軟膏基剤は、最適な薬物送達を提供するもの、好ましくは、同様に、例えば、エモリエント性などの他の望ましい特徴を提供するものである。他の担体またはビヒクルについては、軟膏基材は不活性、安定、非刺激性および非感作性であるべきである。Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 第20版 (Lippincott Williams & Wilkins, 2000)に説明されているように、軟膏基材は、油性、乳化可能、乳化性、および水溶性という４つのクラスに分類することができる。油性軟膏機材には、例えば、植物油、動物から得られた脂肪、および石油から得られた半固体炭化水素が含まれる。乳化可能軟膏基材は、吸収性軟膏基材としても知られ、水をほとんど含まないか全く含まず、例えば、硫酸ヒドロキシステアリン、無水ラノリンおよび親水性ワセリンが含まれる。乳化性軟膏基材は、油中水型（Ｗ／Ｏ）エマルションまたは水中油型（Ｏ／Ｗ）エマルションのいずれかであり、例えば、セチルアルコール、モノステアリン酸グリセリル、ラノリンおよびステアリン酸が含まれる。数種の水溶性軟膏基材は、種々の分子量のポリエチレングリコールから調製される。
クリームは、粘稠な液体または水中油型（Ｏ／Ｗ）もしくは油中水型（Ｗ／Ｏ）のいずれかの半固体エマルションである。クリーム基材は水で洗浄できる傾向があり、油相、乳化剤および水相を含有する。
油相は、「内部」相とも呼ばれ、限定されるものではないが、１以上の油および／または脂肪から構成され得る。例示的な油および脂肪としては、限定されるものではないが、脂肪酸、エステル、グリセリンのエステル、脂肪アルコール、ワックス、ステロール、シロキサンおよびシラン、ラノリン、炭化水素、エッセンシャルオイル、植物油、鉱油および食用油、ならびにそれらの混合物が挙げられる。
一つの実施態様では、油はワセリンおよび／またはセチルもしくはステアリルアルコールもしくはセチルステアロイルアルコールなどの脂肪アルコールのうちの少なくとも１つである。水または水相は、必ずしも必要ではないが通常には、容量で油相を上回り、少なくとも１つの乳化剤または界面活性剤を含有し得る。油／水中の乳化剤は、非イオン性、陰イオン性、陽イオン性または両性界面活性剤であり得る。
界面活性剤の親水性／親油性バランス（ＨＬＢ）は、水または油に対する界面活性剤の親和性を表す。ＨＬＢ尺度は１（完全に親油性）〜２０（完全に親水性）の範囲であり、１０が両方の特徴の等バランスを示す。親油性界面活性剤は油中水型（ｗ／ｏ）エマルションを形成する傾向があり、親水性界面活性剤は水中油型（ｏ／ｗ）エマルションを形成する傾向がある。２つの界面活性剤のブレンドのＨＬＢは、界面活性剤Ａの重量分率×そのＨＬＢ値＋界面活性剤Ｂの重量分率×そのＨＬＢ値（重量平均）に等しい。
これらの処方物は、補助溶媒、保存剤、酸化防止剤、ｐＨ調整剤、キレート剤、および浸透促進剤などの付加的な薬学的に許容可能な賦形剤を含み得る。
好適なクリーム処方物の１つの限定されない例としては、ヒドロキシプロピルメチルセルロース；ミリスチン酸イソプロピル；モノステアリン酸グリセリル；ステアリン酸ポリオキシル４０；モノステアリン酸グリセリル；メチルパラベン；およびプロピルパラベンのうち１以上を含み得る。
ゲルは、半固体、懸濁液型の系である。単相ゲルは、一般に水性であるが、好ましくは、アルコール、所望により油（上記のものなど）が含有する担体液体に実質的に均一に分配された有機高分子を含有する。好適なゲル化剤としては、限定されるものではないが、架橋アクリル酸ポリマー、例えば、「カルボマー」系のポリマー、例えば、カーボポール（登録商標）として商業的に入手可能なカルボキシポリアルキレンが挙げられる。他のゲル化剤（粘度剤(viscosity agent)とも呼ばれる）は、ポリエチレンオキシド、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンコポリマーおよびポリビニルアルコールなどの親水性ポリマー；ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート、およびメチルセルロースなどのセルロース系ポリマー；トラガカントガムおよびキサンタンガムなどのガム；アルギン酸ナトリウム；ならびにゼラチンである。均一なゲルを調製するためには、アルコールまたはグリセリンなどの分散剤を添加することができ、またはゲル化剤を摩砕、機械的混合もしくは撹拌、またはそれらの組合せにより分散させることもできる。
ローションは、摩擦なく皮膚表面に塗布される製剤であり、有効薬剤を含む固体粒子が水またはアルコール基剤中に存在する、一般に、液体または半液体製剤である。ローションは多くの場合固体の懸濁液であり、水中油型の液体油性エマルションを含んでなり得る。ローションは一般に、ローション中の不溶物が微粉砕されている必要がある。ローションは一般に、より良い分散を得るための沈殿防止剤ならびに有効薬剤を皮膚と接触して局在させ保持するために有用な化合物、例えば、メチルセルロース、またはナトリウムカルボキシメチル−セルロースなどを含有する。
溶液は、１以上の化学物質（溶質）を、溶解した物質の分子が溶媒間に分散されるように他の液体に溶解させることにより調製された均質な混合物である。溶液は、溶質を緩衝させ、安定化させまたは保存するために他の薬学的に許容可能な化学物質を含有し得る。溶液を調製するために使用される溶媒または補助溶媒の慣用される例としては、限定されるものではないが、エタノール、イソプロパノールベンジルアルコールなどのアルコール、水、プロピレンまたはエチレングリコールなどのジオール、およびグリセロールなどの他のポリオールが挙げられる。
フォームは、１以上の有効成分、界面活性剤、水性液または非水性液、および噴射剤を含有するエマルションと定義される（米国薬局方３２（総論編：１１５１）。フォームは、皮膚への適用を意図する動的投与形としてのいくつかの定義から要約することができ、通常、有効薬剤、噴射剤、界面活性剤、溶媒および他の賦形剤を含有し、投与適用の前に、それらは与圧缶にエマルションまたは懸濁液または溶液の形態で密封され；投与またはバルブ作動の後に噴射剤がこの与圧システムから蒸発して液体または半固体フォーム製品を形成し、それが空気で拡大される(Zhao et al. Dynamic Foams in Topical Drug Delivery. J. Pharm & Pharmacology, June 2010)。
ペーストは、薬剤が好適な基剤中に懸濁された半固体投与形である。基剤の性質によって、ペーストは脂肪ペーストまたは単相水性ゲルから形成されるものに分けられる。脂肪ペーストの基剤は一般にワセリンまたは親水性ワセリンなどである。単相水性ゲルから形成されるペーストは一般に、基剤としてカルボキシメチルセルロースなどが配合される。
処方物はまた、リポソーム、ミセル、および／またはミクロスフェアを用いて調製してもよい。リポソームは、脂質二重層を含んでなる脂質壁を有する顕微鏡的小胞であり、薬物送達システムとして使用することができる。一般に、リポソーム処方物は、可溶性に乏しいまたは不溶性の医薬剤に好ましい。本発明において使用するためのリポソーム製剤としては、陽イオン性（正荷電）、陰イオン性（不荷電）および中性製剤が含まれる。陽イオン性リポソームは容易に入手できる。例えば、Ｎ−［１−２，３−ジオレイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリエチルアンモニウムリポソームは、商標リポフェクチン（登録商標）（ＧＩＢＣＯ ＢＲＬ、グランドアイランド、ＮＹ）として入手可能である。陰イオン性および中性リポソームも同様に、例えば、Ａｖａｎｔｉ Ｐｏｌａｒ Ｌｉｐｉｄｓ（バーミンガム、ＡＬ）から容易に入手でき、または容易に入手できる材料を用いて容易に製造することができる。このような材料としては、ホスファチジルコリン、コレステロール、ホスファチジルエタノールアミン、ジオレオイルホスファチジルコリン、ジオレオイルホスファチジルグリセロール、およびジオレオイルホスファチジルエタノールアミンが含まれる。これらの材料はまた、Ｎ−［１−２，３−ジオレイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリエチルアンモニウム（ＤＯＴＭＡ）と適当な比率で混合することもできる。これらの材料を用いてリポソームを作製するための方法は当技術分野で公知である。
ミセルは、それらの極性糖基が外部球殻を形成し、疎水性の炭化水素鎖がその球の中央に向かって配向されるように配置されて核を形成した界面活性剤分子から構成される。ミセルは、ミセルが自然に生じるような十分に高い濃度で界面活性剤を含有する水溶液中で形成する。ミセルを形成するために有用な界面活性剤としては、限定されるものではないが、ラウリン酸カリウム、オクタンスルホン酸ナトリウム、デカンスルホン酸ナトリウム、ドデカンスルホン酸ナトリウム、ラウリル硫酸ナトリウム、ドキュセートナトリウム、臭化デシルトリメチルアンモニウム、臭化ドデシルトリメチルアンモニウム、臭化テトラデシルトリメチルアンモニウム、塩化テトラデシルトリメチルアンモニウム、塩化ドデシルアンモニウム、ポリオキシル８ドデシルエーテル、ポリオキシル１２ドデシルエーテル、ノノキシノール１０およびノノキシノール３０が挙げられる。例えば、ミセル処方物は、局所または経皮送達系のリザーバーに、または体表に適用される処方物に配合することによって使用することができる。
ミクロスフェアは、処方物および薬物送達システムに配合することができる。リポソームおよびミセルと同様に、ミクロスフェアは本質的に薬物または薬物含有する処方物を封入する。ミクロスフェアは、必ずしも必要ではないが一般に、脂質、好ましくは、リン脂質などの荷電脂質から形成される。脂質ミクロスフェアの作製は当技術分野で公知である。
局所用処方物には種々の添加剤を含めることができる。例えば、比較的少量のアルコールを含む溶媒が、ある種の原体を溶解させるために使用可能である。他の任意選択の添加剤としては、乳白剤、酸化防止剤、香味剤、着色剤、ゲル化剤、増粘剤、安定剤、界面活性剤などが含まれる。また、保存時の損傷を防ぐため、すなわち、酵母およびかびなどの微生物の成長を阻害するために抗微生物剤などの他の薬剤を添加してもよい。
処方物はまた、アプタマー、基本増強剤(base enhancer)、または処方物他の成分から生じる皮膚刺激または皮膚損傷の可能性を最小化または排除するための刺激低減添加剤を含有してもよい。好適な刺激低減添加剤としては、例えば、α−トコフェロール；モノアミンオキシダーゼ阻害剤、特に、２−フェニル−１−エタノールなどのフェニルアルコール；グリセリン；サリチル酸およびサリチル酸塩；アスコルビン酸およびアスコルビン酸塩；モネンシンなどのイオノフォア；両親媒性アミン；塩化アンモニウム；Ｎ−アセチルシステイン；シス−ウロカニン酸；カプサイシン；およびクロロキンが挙げられる。刺激低減添加剤は、存在する場合、刺激または皮膚損傷を低減するために有効な濃度（一般に、処方物の約２０重量％以下、より一般には約５重量％以下に相当）で処方物に配合することができる。
処方物中の有効薬剤（例えば、アプタマー）の濃度は一般に、処置する疾患または病態（例えば、炎症性皮膚疾患、例えば、慢性炎症性皮膚疾患（例えば、皮膚炎（例えば、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、湿疹性皮膚炎、または脂漏性皮膚炎）、座瘡、乾癬、酒さ、または老化皮膚、例えば、乾癬またはアトピー性皮膚炎））、有効薬剤（例えば、アプタマー）の性質および活性、所望の効果、あり得る有害反応、有効薬剤（例えば、アプタマー）のその意図する標的へ到達する能力および速度、体表面積、および他の因子を含む種々の因子によって決まる。処方物は、例えば、約０．００１〜５０重量％、０．５〜５０重量％、または約０．７５〜１０％重量％、または例えば、約１ｗ／ｗまたはｖ／ｖ％程度の有効薬剤（例えば、アプタマー）を含有し得る。
例示的ビヒクル
本明細書に示される試験の過程で、アプタマー（例えば、ＩＬ−２３アプタマー）または他のオリゴヌクレオチド（例えば、アンチセンスオリゴヌクレオチド）、または小分子などの有効成分の被験体（例えば、哺乳動物被験体、例えば、ヒト）への局所送達（例えば、皮膚、例えば、無傷の（例えば、損傷の無い）皮膚の表面への送達）のための多くのビヒクルが開発された。例えば、表４および９参照、例えば、ここで、挙げられたＩＬ２３アプタマーは対象とする別の有効成分と置き換えられる。
本発明の一つの実施態様では、アプタマー(apatemer)組成物は、従来の界面活性剤を含有しない。別の実施態様(embodoiment)では、アプタマー(apatemer)組成物は、２％未満の界面活性剤、別の実施態様では、１％未満の界面活性剤を含有する。
本発明の一つの実施態様では、アプタマー(apatemer)組成物は、浸透促進剤を含有しない。別の実施態様(embodoiment)では、アプタマー(apatemer)組成物は、５％未満の浸透促進剤を含有し、別の実施態様では、２％未満の浸透促進剤を含有する。
一つの実施態様では、本発明は、治療上有効な量のアプタマー(apatemer)、油相、水相、および界面活性剤を含んでなる局所用医薬組成物を提供し、前記組成物は水中油型クリームである。
本開示は、有効薬剤（例えば、アプタマー）の局所送達用のビヒクルを提供し、前記ビヒクルは、カプリル酸／カプリン酸トリグリセリド、モノカプリル酸グリセリル、ポリソルベート８０、オレイン酸ソルビタン、および脱イオン水を、例えば、ほぼ表４に挙げられている量で含んでなる。
本開示は、有効薬剤（例えば、アプタマー）の局所送達用のビヒクルを提供し、前記ビヒクルは、カプリル酸／カプリン酸トリグリセリド、モノカプリル酸グリセリル、ポリソルベート８０、オレイン酸ソルビタン、イソプロパノールおよび脱イオン水を、例えば、約表４に挙げられている量で含んでなる。
本開示は、有効薬剤（例えば、アプタマー）の局所送達用のビヒクルを提供し、前記ビヒクルは、ポリソルベート８０、脱イオン水、モノカプリル酸プロピレングリコール、ジカプリロカプリン酸プロピレングリコールおよびジエチレングリコールモノエチルエーテルを、例えば、約表４に挙げられている量で含んでなる。
本開示は、有効薬剤（例えば、アプタマー）の局所送達用ビヒクルを提供し、前記ビヒクルは、イソプロパノール、脱イオン水、ベンジルアルコール、ドラケオール−５、ブリッジＯ２、ブリッジＯ１０、および塩化セトリモニウム３０％溶液を、例えば、約表４に挙げられている量で含んでなる。
本開示は、有効薬剤（例えば、アプタマー）の局所送達用ビヒクルを提供し、前記ビヒクルは、脱イオン水、ベネセルＭＰ３３３Ｃ、ミリスチン酸イソプロピル、モノステアリン酸グリセリルＮＳＥ４００、ポリオキシル−４０−ステアレート、およびフェノニップを、例えば、約表４に挙げられている量で含んでなる。
本開示は、有効薬剤（例えば、アプタマー）の局所送達用ビヒクルを提供し、前記ビヒクルは、脱イオン水、ミリスチン酸イソプロピル、モノステアリン酸グリセリルＮＳＥ ４００、ポリオキシル−４０−ステアレート、フェノニップ、およびベネセルＭＰ３３３Ｃを、例えば、約表９に挙げられている量で含んでなる。
本開示は、有効薬剤（例えば、アプタマー）の局所送達用ビヒクルを提供し、前記ビヒクルは、脱イオン水、キサンタンガム、ミリスチン酸イソプロピル、モノステアリン酸グリセリルＮＳＥ ４００、ポリオキシル−４０−ステアレート、無水クエン酸、クエン酸カリウム一水和物、フェノキシエタノール、およびベンジルアルコールを、例えば、約表９に挙げられている量で含んでなる。
本開示は、有効薬剤（例えば、アプタマー）の局所送達用ビヒクルを提供し、前記ビヒクルは、脱イオン水、ミリスチン酸イソプロピル、シスロールＧＭＳ ４０ ＳＥ−ＰＷ−（ＳＧ）、ポリオキシル−４０−ステアレート、ベネセルＭＰ３３３Ｃ、フェノキシエタノール、およびベンジルアルコールを、例えば、約表９に挙げられている量で含んでなる。
本開示は、有効薬剤（例えば、アプタマー）の局所送達用ビヒクルを提供し、前記ビヒクルは、脱イオン水、セトステアリルアルコール、白色ワセリン、ドラケオール ９、セトマクロゴール１０００ ＢＰ、テトラナトリウムＥＤＴＡ、二ナトリウムＥＤＴＡ、グリセリン、フェノキシエタノール、およびベンジルアルコールを、例えば、約表９に挙げられている量で含んでなる。
本開示は、有効薬剤（例えば、アプタマー）の局所送達用ビヒクルを提供し、前記ビヒクルは、脱イオン水、ミリスチン酸イソプロピル、セトステアリルアルコール、ドラケオール９、セトマクロゴール１０００ ＢＰ、無水クエン酸、クエン酸カリウム一水和物、プロピレングリコール、フェノキシエタノール、およびベンジルアルコール、例えば、約表９に挙げられている量で含んでなる。
本開示は、有効薬剤（例えば、アプタマー）の局所送達用ビヒクルを提供し、前記ビヒクルは、脱イオン水、ミリスチン酸イソプロピル、ＳＴ−５シクロメチコン、白色ワセリン、ドラケオール９、セトマクロゴール１０００ ＢＰ、セチルアルコール、モノラウリン酸ソルビタン、無水クエン酸、クエン酸カリウム一水和物、プロピレングリコール、およびフェノキシエタノールを、例えば、約表９に挙げられている量で含んでなる。
本開示は、有効薬剤（例えば、アプタマー）の局所送達用ビヒクルを提供し、前記ビヒクルは、脱イオン水、ミリスチン酸イソプロピル、ＳＴ−５シクロメチコン、ドラケオール９、セトマクロゴール１０００ ＢＰ、セチルアルコール、モノラウリン酸ソルビタン、無水クエン酸、クエン酸カリウム一水和物、プロピレングリコール、およびフェノキシエタノールを、例えば、約表９に挙げられている量で含んでなる。
本開示は、有効薬剤（例えば、アプタマー）の局所送達用ビヒクルを提供し、前記ビヒクルは、脱イオン水、ＤＩＰＡ、ミリスチン酸イソプロピル、ドラケオール９、オイムルギン(Eumilgin)Ｂ１ ＰＨ−セテアレス１２、無水クエン酸、クエン酸カリウム一水和物、プロピレングリコール、およびベンジルアルコールを、例えば、約表９に挙げられている量で含んでなる。
本開示は、有効薬剤（例えば、アプタマー）の局所送達用ビヒクルを提供し、前記ビヒクルは、脱イオン水、ＤＩＰＡ、軽質流動パラフィン、オイムルギンＢ１ ＰＨ−セテアレス１２、ＢＨＴ、無水クエン酸、クエン酸カリウム一水和物、ソルビン酸、およびソルビン酸カリウムを、例えば、約表９に挙げられている量で含んでなる。
本開示は、有効薬剤（例えば、アプタマー）の局所送達用ビヒクルを提供し、前記ビヒクルは、脱イオン水、セトステアリルアルコール、白色ワセリン、ドラケオール９、セトマクロゴール１０００ ＢＰ、無水クエン酸、クエン酸カリウム一水和物、プロピレングリコール、フェノキシエタノール、およびベンジルアルコールを、例えば、約表９に挙げられている量で含んでなる。
本開示は、有効薬剤（例えば、アプタマー）の局所送達用ビヒクルを提供し、前記ビヒクルは、脱イオン水、ミリスチン酸イソプロピル、プロピレングリコール、ベンジルアルコール、トランスクトールＰ、およびジメチルイソソルビドを、例えば、約表９に挙げられている量で含んでなる。
本開示は、有効薬剤（例えば、アプタマー）の局所送達用ビヒクルを提供し、前記ビヒクルは、脱イオン水、ポリソルベート２０、およびベンジルアルコールを、例えば、約表９に挙げられている量で含んでなる。
本明細書で使用する場合、「約」は、表に挙げられている量の１０％以内の（例えば、１０％多いまたは１０％少ない）量を意味する。好ましくは、「約」は、挙げられている量の５％多いまたは５％少ない量を意味する。より好ましくは、「約」は、挙げられている量の２％多いまたは２％少ない量を意味する。
本開示はまた、有効成分を被験体（例えば、哺乳動物被験体、例えば、ヒト）に（例えば、皮膚、例えば、無傷の（例えば、損傷の無い）皮膚の表面に）局所的に投与する方法を提供し、その方法は、
被験体にビヒクル、例えば、そこに挙げられている成分（挙げられているＩＬ−２３アプタマーを除く）を含有する表４または９に挙げられているビヒクルを局所的に投与すること
を含んでなり、例えば、ビヒクルの成分は約そこに挙げられている量であり、前記ビヒクルは有効成分を含んでなる。
いくつかの実施態様では、有効成分は、アプタマー（例えば、ＩＬ−２３アプタマー）である。
本方法のいくつかの実施態様では、ビヒクルは、カプリル酸／カプリン酸トリグリセリド、モノカプリル酸グリセリル、ポリソルベート８０、オレイン酸ソルビタン、および脱イオン水を、例えば、約表４に挙げられている量で含んでなる。
本方法のいくつかの実施態様では、ビヒクルは、カプリル酸／カプリン酸トリグリセリド、モノカプリル酸グリセリル、ポリソルベート８０、オレイン酸ソルビタン、イソプロパノール、および脱イオン水を、例えば、約表４に挙げられている量で含んでなる。
本方法のいくつかの実施態様では、ビヒクルは、ポリソルベート８０、脱イオン水、モノカプリル酸プロピレングリコール、ジカプリロカプリン酸プロピレングリコール、およびジエチレングリコールモノエチルエーテルを、例えば、約表４に挙げられている量で含んでなる。
本方法のいくつかの実施態様では、ビヒクルは、イソプロパノール、脱イオン水、ベンジルアルコール、ドラケオール−５、ブリッジＯ２、ブリッジＯ１０、および塩化セトリモニウム３０％溶液を、例えば、約表４に挙げられている量で含んでなる。
本方法のいくつかの実施態様では、ビヒクルは、脱イオン水、ベネセルＭＰ３３３Ｃ、ミリスチン酸イソプロピル、モノステアリン酸グリセリルＮＳＥ ４００、ポリオキシル−４０−ステアレート、およびフェノニップを、例えば、約表４に挙げられている量で含んでなる。
本方法のいくつかの実施態様では、ビヒクルは、脱イオン水、ミリスチン酸イソプロピル、モノステアリン酸グリセリルＮＳＥ ４００、ポリオキシル−４０−ステアレート、フェノニップ、およびベネセルＭＰ３３３Ｃを、例えば、約表９に挙げられている量で含んでなる。
本方法のいくつかの実施態様では、ビヒクルは、脱イオン水、キサンタンガム、ミリスチン酸イソプロピル、モノステアリン酸グリセリルＮＳＥ ４００、ポリオキシル−４０−ステアレート、無水クエン酸、クエン酸カリウム一水和物、フェノキシエタノール、およびベンジルアルコールを、例えば、約表９に挙げられている量で含んでなる。
本方法のいくつかの実施態様では、ビヒクルは、脱イオン水、ミリスチン酸イソプロピル、シスロールＧＭＳ ４０ ＳＥ−ＰＷ−（ＳＧ）、ポリオキシル−４０−ステアリレート、ベネセルＭＰ３３３Ｃ、フェノキシエタノール、およびベンジルアルコールを、例えば、約表９に挙げられている量で含んでなる。
本方法のいくつかの実施態様では、ビヒクルは、脱イオン水、セトステアリルアルコール、白色ワセリン、ドラケオール９、セトマクロゴール１０００ ＢＰ、テトラナトリウムＥＤＴＡ、二ナトリウムＥＤＴＡ、グリセリン、フェノキシエタノール、およびベンジルアルコールを、例えば、約表９に挙げられている量で含んでなる。
本方法のいくつかの実施態様では、ビヒクルは、脱イオン水、ミリスチン酸イソプロピル、セトステアリルアルコール、ドラケオール９、セトマクロゴール１０００ ＢＰ、無水クエン酸、クエン酸カリウム一水和物、プロピレングリコール、フェノキシエタノール、およびベンジルアルコール、例えば、約表９に挙げられている量で含んでなる。
本方法のいくつかの実施態様では、ビヒクルは、脱イオン水、ミリスチン酸イソプロピル、ＳＴ−５シクロメチコン、白色ワセリン、ドラケオール９、セトマクロゴール１０００ ＢＰ、セチルアルコール、モノラウリン酸ソルビタン、無水クエン酸、クエン酸カリウム一水和物、プロピレングリコール、およびフェノキシエタノールを、例えば、約表９に挙げられている量で含んでなる。
本方法のいくつかの実施態様では、ビヒクルは、脱イオン水、ミリスチン酸イソプロピル、ＳＴ−５シクロメチコン、ドラケオール９、セトマクロゴール１０００ ＢＰ、セチルアルコール、モノラウリン酸ソルビタン、無水クエン酸、クエン酸カリウム一水和物、プロピレングリコール、およびフェノキシエタノールを、例えば、約表９に挙げられている量で含んでなる。
本方法のいくつかの実施態様では、ビヒクルは、脱イオン水、ＤＩＰＡ、ミリスチン酸イソプロピル、ドラケオール９、オイムルギンＢ１ ＰＨ−セテアレス１２、無水クエン酸、クエン酸カリウム一水和物、プロピレングリコール、およびベンジルアルコールを、例えば、約表９に挙げられている量で含んでなる。
本方法のいくつかの実施態様では、ビヒクルは、脱イオン水、ＤＩＰＡ、軽質流動パラフィン、オイムルギンＢ１ ＰＨ−セテアレス１２、ＢＨＴ、無水クエン酸、クエン酸カリウム一水和物、ソルビン酸、およびソルビン酸カリウム、例えば、約表９に挙げられている量で含んでなる。
本方法のいくつかの実施態様では、ビヒクルは、脱イオン水、セトステアリルアルコール、白色ワセリン、ドラケオール９、セトマクロゴール１０００ ＢＰ、無水クエン酸、クエン酸カリウム一水和物、プロピレングリコール、フェノキシエタノール、およびベンジルアルコールを、例えば、約表９に挙げられている量で含んでなる。
本方法のいくつかの実施態様では、ビヒクルは、脱イオン水、ミリスチン酸イソプロピル、プロピレングリコール、ベンジルアルコール、トランスクトールＰ、およびジメチルイソソルビド、例えば、約表９に挙げられている量で含んでなる。
本方法のいくつかの実施態様では、ビヒクルは、脱イオン水、ポリソルベート２０、およびベンジルアルコールを、例えば、約表９に挙げられている量で含んでなる。
本方法のいくつかの実施態様では、有効成分は、皮膚疾患（例えば、乾癬、皮膚炎（例えば、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、湿疹性皮膚炎、または脂漏性皮膚炎）、慢性水疱性障害、座瘡、免疫介在障害の脂漏性皮膚病徴、脱毛症、円形脱毛症(alopecia greata)、成人性呼吸窮迫症候群、肺線維症、強皮症(scleredoma)、瘢痕形成（例えば、ケロイド瘢痕または肥厚性瘢痕）、蕁麻疹、酒さ、黒色腫、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）の増悪、腎臓移植からの炎症、喘息の増悪、化膿性汗腺炎、関節リウマチの増悪、乾癬性関節炎の増悪、シェーグレン症候群の増悪、ブドウ膜炎の増悪、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）の増悪、口腔扁平苔癬、関節痛の増悪、または膵島細胞移植炎症の増悪）を処置するために局所的に投与される。
本方法のいくつかの実施態様では、有効成分は、皮膚疾患、例えば、持続的炎症、細胞動態、および分化の皮膚障害（例えば、乾癬、乾癬性関節炎、剥離性皮膚炎、バラ色粃糠疹、扁平苔癬、光沢蘚苔、または汗孔角化症）；表皮密着の皮膚障害、水疱性(vesicular and bullous)障害（例えば、天疱瘡、水疱性類天疱瘡、後天性表皮水疱症、または掌または足底膿疹）；表皮付属物の皮膚障害および関連の障害（例えば、毛髪障害、爪、酒さ、口周囲皮膚炎、または濾胞性症候群）；表皮および付属物の腫瘍などの皮膚障害（例えば、扁平上皮癌、基底細胞癌、角化棘細胞腫、良性上皮腫瘍、またはメルケル細胞癌）；メラノサイトの障害（例えば、色素障害、白化、メラニン欠乏症および色素沈着症、色素性母斑、または黒色腫）；真皮の炎症性および新生物性障害の皮膚障害（例えば、持久性隆起性紅斑、好酸球、顔面肉芽腫、壊疽性膿皮症、悪性萎縮性丘疹、真皮および軟組織の線維損傷、またはカポジ肉腫）；皮下組織の障害（例えば、脂肪織炎または脂肪異栄養症）；反応性が変化した皮膚変化を含む皮膚障害（例えば、蕁麻疹、血管性浮腫、移植片対宿主病、アレルギー性接触性皮膚炎、自家感作性皮膚炎、アトピー性皮膚炎、または脂漏性皮膚炎）；機械的および物理的因子による皮膚変化（例えば、熱損傷、放射線皮膚炎、うおのめ、またはたこ）；光傷害（例えば、急性および慢性ＵＶ照射、または光増感）；または微生物因子による皮膚障害（例えば、らい病、ライム病、爪真菌症、水虫、風疹、麻疹、単純ヘルペス、ＥＢＶ（エプスタイン−バーウイルス）、ＨＰＶ（ヒト乳頭腫ウイルス）（例えば、ＨＰＶ６および７）、疣贅、またはプリオン）を処置するために局所的に投与される。
いくつかの実施態様では、薬剤は、炎症性皮膚疾患（例えば、慢性炎症性皮膚疾患（例えば、皮膚炎（例えば、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、湿疹性皮膚炎、または脂漏性皮膚炎）、座瘡、乾癬、酒さ、または老化皮膚、例えば、乾癬またはアトピー性皮膚炎））の処置用である。
本開示はまた、有効成分を被験体（例えば、哺乳動物被験体、例えば、ヒト）に（例えば、皮膚、例えば、無傷の（例えば、損傷の無い）皮膚の表面に）局所的に投与するためのビヒクルを提供し、前記ビヒクルは、そこに挙げられている成分（挙げられているアプタマーを除く）を含有する表４または９に挙げられているビヒクルであり、例えば、ビヒクルの成分は、約そこに挙げられている量であり、前記ビヒクルは有効成分を含んでなる。
いくつかの実施態様では、有効成分は、アプタマー（例えば、ＩＬ−２３アプタマー）である。
いくつかの実施態様では、ビヒクルは、皮膚疾患（例えば、持続的炎症、細胞動態、および分化の皮膚障害（例えば、乾癬、乾癬性関節炎、剥離性皮膚炎、バラ色粃糠疹、扁平苔癬、光沢蘚苔、または汗孔角化症）；表皮密着の皮膚障害、水疱性(vesicular and bullous)障害（例えば、天疱瘡、水疱性類天疱瘡、後天性表皮水疱症、または掌または足底膿疹）；表皮付属物の皮膚障害および関連の障害（例えば、毛髪障害、爪、酒さ、口周囲皮膚炎、または濾胞性症候群）；表皮および付属物の腫瘍などの皮膚障害（例えば、扁平上皮癌、基底細胞癌、角化棘細胞腫、良性上皮腫瘍、またはメルケル細胞癌）；メラノサイトの障害（例えば、色素障害、白化、メラニン欠乏症および色素沈着症、色素性母斑、または黒色腫）；真皮の炎症性および新生物性障害の皮膚障害（例えば、持久性隆起性紅斑、好酸球、顔面肉芽腫、壊疽性膿皮症、悪性萎縮性丘疹、真皮および軟組織の線維損傷、またはカポジ肉腫）；皮下組織の障害（例えば、脂肪織炎または脂肪異栄養症）；反応性が変化した皮膚変化を含む皮膚障害（例えば、蕁麻疹、血管性浮腫、移植片対宿主病、アレルギー性接触性皮膚炎、自家感作性皮膚炎、アトピー性皮膚炎、または脂漏性皮膚炎）；機械的および物理的因子による皮膚変化（例えば、熱損傷、放射線皮膚炎、うおのめ、またはたこ）；光傷害（例えば、急性および慢性ＵＶ照射、または光増感）；または微生物因子による皮膚障害（例えば、らい病、ライム病、爪真菌症、水虫、風疹、麻疹、単純ヘルペス、ＥＢＶ（エプスタイン−バーウイルス）、ＨＰＶ（ヒト乳頭腫ウイルス）（例えば、ＨＰＶ６および７）、疣贅、またはプリオン）を処置するために局所的に投与される。
いくつかの実施態様では、ビヒクルは、皮膚疾患（例えば、乾癬、皮膚炎（例えば、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、湿疹性皮膚炎、または脂漏性皮膚炎）、慢性水疱性障害、座瘡、免疫介在障害の脂漏性皮膚病徴、脱毛症、円形脱毛症(alopecia greata)、肺線維症、強皮症(scleredoma)、瘢痕形成（例えば、ケロイド瘢痕または肥厚性瘢痕）、蕁麻疹、酒さ、黒色腫、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）の増悪、腎臓移植からの炎症、喘息の増悪、化膿性汗腺炎、関節リウマチの増悪、乾癬性関節炎の増悪、シェーグレン症候群の増悪、ブドウ膜炎の増悪、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）の増悪、口腔扁平苔癬、関節痛の増悪、または膵島細胞移植炎症の増悪）を処置するために局所的に投与される。
いくつかの実施態様では、薬剤は、炎症性皮膚疾患（例えば、慢性炎症性皮膚疾患（例えば、皮膚炎（例えば、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、湿疹性皮膚炎、または脂漏性皮膚炎）、座瘡、乾癬、酒さ、または老化皮膚、例えば、乾癬またはアトピー性皮膚炎））の処置用である。
本開示はまた、有効成分を被験体（例えば、哺乳動物被験体、例えば、ヒト）に（例えば、皮膚、例えば、無傷の（例えば、損傷の無い）皮膚の表面に）、局所投与するための薬剤の調製のためのビヒクルの使用を提供し、前記ビヒクルは、そこに挙げられている成分（挙げられているアプタマーを除く）を含有する表４または９に挙げられているビヒクルであり、例えば、ビヒクルの成分は、約そこに挙げられている量であり、前記ビヒクルは有効成分を含んでなる。
いくつかの実施態様では、有効成分は、アプタマー（例えば、ＩＬ−２３アプタマー）である。いくつかの実施態様では、薬剤は、皮膚疾患（例えば、持続的炎症、細胞動態、および分化の皮膚障害（例えば、乾癬、乾癬性関節炎、剥離性皮膚炎、バラ色粃糠疹、扁平苔癬、光沢蘚苔、または汗孔角化症）；表皮密着の皮膚障害、水疱性(vesicular and bullous)障害（例えば、天疱瘡、水疱性類天疱瘡、後天性表皮水疱症、または掌または足底膿疹）、表皮付属物の皮膚障害および関連の障害（例えば、毛髪障害、爪、酒さ、口周囲皮膚炎、または濾胞性症候群）；表皮および付属物の腫瘍などの皮膚障害（例えば、扁平上皮癌、基底細胞癌、角化棘細胞腫、良性上皮腫瘍、またはメルケル細胞癌）；メラノサイトの障害（例えば、色素障害、白化、メラニン欠乏症および色素沈着症、色素性母斑、または黒色腫）；真皮の炎症性および新生物性障害の皮膚障害（例えば、持久性隆起性紅斑、好酸球、顔面肉芽腫、壊疽性膿皮症、悪性萎縮性丘疹、真皮および軟組織の線維損傷、またはカポジ肉腫）；皮下組織の障害（例えば、脂肪織炎または脂肪異栄養症）；反応性が変化した皮膚変化を含む皮膚障害（例えば、蕁麻疹、血管性浮腫、移植片対宿主病、アレルギー性接触性皮膚炎、自家感作性皮膚炎、アトピー性皮膚炎、または脂漏性皮膚炎）；機械的および物理的因子による皮膚変化（例えば、熱損傷、放射線皮膚炎、うおのめ、またはたこ）；光傷害（例えば、急性および慢性ＵＶ照射、または光増感）；または微生物因子による皮膚障害（例えば、らい病、ライム病、爪真菌症、水虫、風疹、麻疹、単純ヘルペス、ＥＢＶ（エプスタイン−バーウイルス）、ＨＰＶ（ヒト乳頭腫ウイルス）（例えば、ＨＰＶ６および７）、疣贅、またはプリオン）の処置用である。
いくつかの実施態様では、有効成分は、アプタマー（例えば、ＩＬ−２３アプタマー）である。いくつかの実施態様では、薬剤は、皮膚疾患（例えば、乾癬、皮膚炎（例えば、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、湿疹性皮膚炎、または脂漏性皮膚炎）、慢性水疱性障害、座瘡、免疫介在障害の脂漏性皮膚病徴、脱毛症、円形脱毛症(alopecia greata)、強皮症(scleredoma)、瘢痕形成（例えば、ケロイド瘢痕または肥厚性瘢痕）、蕁麻疹、酒さ、黒色腫、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）の増悪、腎臓移植からの炎症、喘息の増悪、化膿性汗腺炎、関節リウマチの増悪、乾癬性関節炎の増悪、シェーグレン症候群の増悪、ブドウ膜炎の増悪、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）の増悪、口腔扁平苔癬、関節痛の増悪、または膵島細胞移植炎症の増悪）の処置用である。
いくつかの実施態様では、薬剤は、炎症性皮膚疾患（例えば、慢性炎症性皮膚疾患（例えば、皮膚炎（例えば、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎、湿疹性皮膚炎、または脂漏性皮膚炎）、座瘡、乾癬、酒さ、または老化皮膚、例えば、乾癬またはアトピー性皮膚炎））の処置用である。
アプタマー治療薬の薬物動態および生体分布の調節
アプタマーを含め、総てのオリゴヌクレオチド基づく治療薬の薬物動態特性は所望の医薬的用に適合するように調製されることが重要である。細胞外標的に対して向けられるアプタマーは細胞内送達に伴う障害を受けないが、このようなアプタマーはやはり、標的器官および組織に分配され、処置部位に（例えば、罹患（例えば、乾癬）皮膚）または所望の投与計画と一致した時間体内に（変化せずに）留まることができなければならない。
本開示は、アプタマー組成物の薬物動態、特に、アプタマー薬物動態を調整する能力に影響を与える材料および方法を提供する。アプタマー薬物動態の調整能（すなわち、調節する能力）は、修飾部分（例えば、ＰＥＧポリマー）とアプタマーのコンジュゲーションおよび／または核酸の化学組成を変更するための修飾型ヌクレオチド（例えば、糖基に対する、例えば、２’−フルオロもしくは２’−Ｏ−メチル）の組み込みにより達成され得る。アプタマーの薬物動態を調整する能力は、既存の治療適用の改善、あるいはまた、新たな治療適用の開発において使用される。例えば、作用部位に局所的に接近する場合（例えば、例えば罹患した皮膚（例えば、乾癬の皮膚）の処置において）または抗新生物または救急処置の状況において、またはアプタマーの持続的全身分布が望まれない場合、迅速な薬物クリアランスまたは遮断が望まれ得る場合などのいくつかの治療適用では、循環中でのアプタマーの滞留時間を短縮することが望ましい。あるいは、例えば、治療薬の体循環が望まれる維持療法などの他の治療適用では、循環中でのアプタマーの滞留時間を延長することが望ましい。
加えて、アプタマーの薬物動態の調整能は、被験体におけるアプタマーの生体分布を改変するために使用することもできる。例えば、いくつかの治療適用では、特定のタイプの組織または特定の器官（または器官セット）を標的化する試みにおいてアプタマー治療薬の生体分布を変更することが望ましい場合がある。これらの適用では、アプタマーは、特定の組織または１または複数の器官に優先的に蓄積する。他の治療適用では、アプタマー治療薬が罹患組織に優先的に蓄積するように、細胞マーカーまたは所与の疾患、細胞傷害もしくは他の異常な病態を伴う症状を呈する組織を標的化することが望ましい場合がある。
アプタマー治療薬（例えば、アプタマーコンジュゲートまたは修飾型ヌクレオチドなどの化学特性が変更されたアプタマー）の薬物動態および生体分布特性を決定するために、種々のパラメーターをモニタリングすることができる。このようなパラメーターには、例えば、アプタマー組成物の半減期（ｔ１／２）、血漿クリアランス（Ｃ１）、分布容積（Ｖｓｓ）、濃度−時間曲線下面積（ＡＵＣ）、最大血清または血漿中濃度（Ｃｍａｘ）、および平均滞留時間（ＭＲＴ）が含まれる。本明細書で使用する場合、用語「ＡＵＣ」は、アプタマー投与後の時間に対するアプタマー治療薬の血漿濃度のプロット下の面積を意味する。ＡＵＣ値は、所与のアプタマーのバイオアベイラビリティ（すなわち、アプタマー投与後の循環中の投与されたアプタマー治療薬のパーセンテージ）および／または総クリアランス（Ｃ１）（すなわち、アプタマー治療薬が循環から除去される速度）を評価するために使用される。分布容積は、アプタマー治療薬の血漿濃度と体内に存在するアプタマーの量を関連付ける。Ｖｓｓが大きいほど、より多くのアプタマーが血漿外に見られる（すなわち、より多くの管外遊出）。
本開示は、例えば、アプタマーと小分子、ペプチド、もしくはポリマー末端基などの調整部分をコンジュゲートすることにより、または修飾型ヌクレオチドをアプタマーに組み込むことにより、ｉｎ ｖｉｖｏにおいて安定化されたアプタマー組成物の薬物動態および生体分布を制御された様式で調整するための材料および方法を提供する。本明細書に記載のように、修飾部分および／または変更ヌクレオチド化学組成物のコンジュゲーションは、循環および組織分布におけるアプタマーの滞留時間の基本的態様を変化させる。
ヌクレアーゼによるクリアランスに加え、オリゴヌクレオチド治療薬は腎臓濾過による排出を受ける。例えば、静脈内に投与されたヌクレアーゼ耐性オリゴヌクレオチドは、濾過が遮断できなければ、１０分に満たないｉｎ ｖｉｖｏ半減期を示すことになるであろう。これは、血流から組織への迅速な分布を助長することにより、またはオリゴヌクレオチドの見掛けの分子量を糸球体の有効サイズカットオフよりも大きくすることにより達成することができる。以下に記載されるアプタマーとＰＥＧ（ポリエチレングリコール）ポリマー（ペグ化）のコンジュゲーションは、循環中のアプタマーの滞留時間を劇的に延長し、それにより投与頻度を低減することができる。
アプタマーは、高分子量ポリマー、例えば、ＰＥＧ；ペプチド、例えば、Ｔａｔ（ＨＩＶ Ｔａｔタンパク質の１３アミノ酸断片(Vives, et al., (1997), J. Biol. Chem. 272(25): 16010-7))、Ａｎｔ（ショウジョウバエアンテナペディアホメオティックタンパク質の第３ヘリックスに由来する１６アミノ酸配列(Pietersz, et al., (2001), Vaccine 19(11-12): 1397-405))またはＡｒｇ７（ポリアルギニン（Ａｒｇ．ｓｕｂ．７）から構成される短い正電荷細胞透過ペプチド(Rothbard, et al., (2000), Nat. Med. 6(11): 1253-7; Rothbard, J et al., (2002), J. Med. Chem. 45(17): 3612-8))；および小分子、例えば、コレステロールなどの親油性化合物などの種々の修飾部分とコンジュゲートすることができる。本明細書に記載の種々のコンジュゲートの中で、アプタマーのｉｎ ｖｉｖｏ特性は、ＰＥＧ基との複合体形成により最も顕著に変更される。例えば、混合された２’−Ｆと２’−ＯＭｅで修飾されたアプタマー治療薬と２０ｋＤａ ＰＥＧポリマーの複合体形成は、腎臓濾過を妨げ、健康な組織と炎症組織の両方へのアプタマーの分布を促進し得る。さらに、２０ｋＤａ ＰＥＧポリマー−アプタマーコンジュゲートは、アプタマーの腎臓濾過の妨げにおいて４０ｋＤａ ＰＥＧポリマーとほぼ同様の効果を誘発し得る。ペグ化の１つの効果はアプタマークリアランスに対するものであるが、２０ｋＤａ部分の存在によりもたらされる長期の全身暴露も組織、特に、高度潅流器官の組織へのアプタマーの分布を助長する。
修飾ヌクレオチドもまた、アプタマーの血漿クリアランスを調節するために使用することができる。例えば、２’−Ｆおよび２’−ＯＭｅ安定化化学基の両方を組み込んだ非コンジュゲートアプタマー（それはｉｎ ｖｉｔｒｏおよびｉｎ ｖｉｖｏで高度のヌクレアーゼ安定性を示すので、現世代のアプタマーの典型である）は、非修飾アプタマーと比較した場合に、血漿からの急速な消失（すなわち、急速な血漿クリアランス）および組織への急速な分布を示し得る。
２’−Ｏ−メチル、２’−フルオロおよび他の修飾ヌクレオチド修飾は、ヌクレアーゼに対してアプタマーを安定化させ、そのｉｎ ｖｉｖｏ半減期を延長することができる。３’−ｉｄＴキャップはエキソヌクレアーゼ耐性を増強することができる。例えば、米国特許第５，６７４，６８５号；同第５，６６８，２６４号；同第６，２０７，８１６号；および同第６，２２９，００２号参照。
ＰＥＧ誘導体化核酸
上記のように、高分子量非免疫原性ポリマーによる核酸の誘導体化は、核酸の薬物動態特性および薬力学的特性を変更してそれらをより有効な治療薬とする可能性を持つ。活性の有利な変化は、ヌクレアーゼによる分解に対する耐性の増強、腎臓による濾過の低減、免疫系暴露の低減、および身体の治療薬の分布の変化を含み得る。
本発明のアプタマーは、ポリアルキレングリコール（ＰＡＧ」）部分で誘導体化され得る。本発明で使用される典型的なポリマーとしては、ポリエチレンオキシド（「ＰＥＯ」）およびポリプロピレングリコール（ポリイソプロピレングリコールを含む）としても知られるポリエチレングリコール（「ＰＥＧ」）が含まれる。加えて、種々のアルキレンオキシド（例えば、エチレンオキシドおよびプロピレンオキシド）のランダムまたはブロックコポリマーも多くの適用で使用され得る。その最も一般的な形態では、ＰＥＧなどのポリアルキレングリコールは、各末端がヒドロキシル基で終わる直鎖ポリマー：ＨＯ−−ＣＨ２ＣＨ２Ｏ−−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−−ＣＨ２ＣＨ２−−ＯＨである。このポリマー、α−，ω−ジヒドロキシルポリエチレングリコールはＨＯ−ＰＥＧ−ＯＨとして表すこともでき、ここで、−ＰＥＧ−の記号は以下の構造単位：−−ＣＨ２ＣＨ２Ｏ−−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−−ＣＨ２ＣＨ２−−（ここで、ｎは一般に約４〜約１０，０００を表す）を表すと理解される。
示されたように、ＰＥＧ分子は二官能性であり、「ＰＥＧジオール」と呼ばれる場合がある。ＰＥＧ分子の末端部分は相対的に非反応性のヒドロキシル部分であり、−−ＯＨ基は活性化し、化合物上の反応性部分においてＰＥＧと他の化合物の結合のための官能性部分に変換することができる。このような活性化されたＰＥＧジオールは本明細書では二活性化ＰＥＧと呼ばれる。例えば、ＰＥＧジオールの末端部分は、相対的に非反応性のヒドロキシル部分−−ＯＨをＮ−ヒドロキシスクシンイミド由来のスクシンイミジル活性エステル部分で置換することにより、アミノ部分との選択的反応のための活性な炭酸エステルとして官能基化されている。
多くの適用では、一方の末端のＰＥＧ分子を、そのＰＥＧ分子が一官能性（または一活性化）となるように本質的に非反応性の部分でキャップすることが望ましい。一活性化ＰＥＧを作出するためには、ＰＥＧジオール分子の末端の１つのヒドロキシル部分を一般に非反応性メトキシ末端部分−−ＯＣＨ３で置換する。ＰＥＧ分子の他方の非キャップ末端は一般に、表面またはタンパク質などの分子上の反応性部位で結合させるために活性化され得る反応性末端部分に変換される。
ＰＡＧは、一般に水および多くの有機溶媒において溶解特性を持ち、毒性はなく、免疫原性もないポリマーである。ＰＡＧの１つの使用は、ポリマーを不溶性分子に供給結合させて、得られたＰＡＧ−分子「コンジュゲート」を可溶性とすることである。例えば、水不溶性薬剤パクリタキセルはＰＥＧと結合させた場合に水溶性となることが示されている。Greenwald, et al., J. Org. Chem., 60:331-336 (1995)。ＰＡＧコンジュゲートは、溶解度および安定性を高めるためだけでなく、分子の血液循環半減期を延長するために使用される。
本発明のポリアルキル化化合物は一般に５〜８０ｋＤａの間のサイズであるが、いずれのサイズでも使用可能であり、その選択はアプタマーおよび適用によって決まる。例えば、他のＰＡＧ化合物は１０〜８０ｋＤａまたは１０〜６０ｋＤａの間の大きさである。例えば、ＰＡＧポリマーは少なくとも１０、２０、３０、４０、５０、６０、または８０ｋＤａの大きさであり得る。このようなポリマーは直鎖であっても分岐型であってもよい。いくつかの実施態様では、ポリマーはＰＥＧである。いくつかの実施態様では、ポリマーは分岐型ＰＥＧである。
生物学的に発現されたタンパク質治療薬とは対照的に、核酸治療薬は一般に活性化されたモノマーヌクレオチドから化学的に合成される。ＰＥＧ−核酸コンジュゲートは、同じ反復のモノマー合成を用いてＰＥＧを組み込むことにより作製され得る。例えば、ホスホラミダイトへ形態の変換により活性化されたＰＥＧは、固相オリゴヌクレオチド合成に組み込むことができる。あるいは、オリゴヌクレオチド合成は、反応性ＰＥＧ結合部位の部位特異的組み込みで完成され得る。最も一般的には、これは５’末端に遊離第一級アミンを付加する（固相合成の最終カップリング工程で改質剤ホスホラミダイトを用いて組み込まれる）ことにより達成された。このアプローチを用い、反応性ＰＥＧ（例えば、アミンと反応して結合を形成するように活性化されるもの）を精製オリゴヌクレオチドと合わせ、溶液中でカップリング反応を行う。
ＰＥＧコンジュゲーションの、治療薬の生体分布を変更する能力は、コンジュゲートの見掛けの大きさ（例えば、流体力学的半径に関して測定）を含むいくつかの近視に関連付けられる。大きなコンジュゲート（＞１０ｋＤａ）ほど腎臓による濾過をより有効に遮断することおよび結果として小型の高分子（例えば、ペプチド、アンチセンスオリゴヌクレオチド）の血清半減期を延長することが知られている。ＰＥＧコンジュゲートの濾過を遮断する能力は、およそ５０ｋＤａまでＰＥＧサイズとともに増強することが示されている。
より高分子量の活性化ＰＥＧを作製するための１つの方法は、２以上のＰＥＧが、活性化基を有する中心コアに結合されている、分岐型の活性化ＰＥＧの形成を含む。これらのより高分子量のＰＥＧ分子の末端部分、すなわち、相対的に非反応性のヒドロキシル（−−ＯＨ）部分を、化合物上の反応性部位においてＰＥＧの１以上と他の化合物を結合させるために活性化するか、または官能性部分に変換することができる。分岐型の活性化ＰＥＧは３以上の末端を有し、２以上の末端が活性化された場合このような活性化されたより高分子量のＰＥＧ分子は、本明細書では、多活性化ＰＥＧと呼ばれる。場合によっては、分岐ＰＥＧ分子の総ての末端が活性化されるとは限らない。分岐ＰＥＧ分子のいずれか２つの末端が活性化される場合、このようなＰＥＧ分子は二活性化ＰＥＧと呼ばれる。分岐ＰＥＧ分子の１つの末端だけが活性化される場合には、このようなＰＥＧ分子は一活性化と呼ばれる。このアプローチの一例として、２つのモノメトキシＰＥＧのリシンコアへの結合により作製された活性化ＰＥＧ（その後、反応のために活性化される）が記載されている(Harris et al., Nature, vol. 2: 214-221, 2003)。
反応性核酸のＰＥＧ誘導体化
高分子量ＰＥＧ−核酸−ＰＥＧコンジュゲートは、一官能性活性化ＰＥＧと、２以上の反応性部位を含有する核酸との反応により作製することができる。一つの実施態様では、核酸は、二反応性、または二活性化であり、従来のホスホラミダイト合成、例えば、３’−５’−ジ−ペグ化によりオリゴヌクレオチドに導入された２つの反応性部位：５’−アミノ基と３’−アミノ基を含む。別の実施態様では、反応性部位は、第一級アミンの結合のための部位として、例えば、ピリミジンの５位、プリンの８位、またはリボースの２’位を用いて、内部の位置に導入することができる。このような実施態様では、核酸は数個の活性化または反応性部位を持つことができ、多活性化されると言われる。合成および精製後に、修飾されたオリゴヌクレオチドは、自発的加水分解を最小限にしつつ、オリゴヌクレオチド反応性部位との選択的反応を促進する条件下で一活性化ＰＥＧと合わせる。一つの実施態様では、モノメトキシ−ＰＥＧはプロピオン酸スクシンイミジルで活性化され、共役反応はｐＨ８．３で行われる。二置換ＰＥＧの合成を駆動するために、オリゴヌクレオチドに対して化学量論的過剰のＰＥＧを提供する。反応後、完全コンジュゲート種、部分的コンジュゲート種、および非コンジュゲート種を分離するために、ＰＥＧ−核酸コンジュゲートをゲル電気泳動または液体クロマトグラフィーにより精製する。
架橋ドメインはまた、それに結合された１以上のポリアルキレングリコール部分も有し得る。このようなＰＥＧは様々な長さであってよく、所望の分子量の組成物を得るために適当な組合せで使用することができる。
特定のリンカーの効果は、その化学組成および長さの両方によって影響を受け得る。長すぎる、短すぎる、またはＩＬ−２３と不利な立体および／またはイオン相互作用を形成するリンカーは、アプタマーとＩＬ−２３の間の複合体の形成を妨げる。必要より長いリンカーは、リガンドの有効濃度を引き下げることにより結合安定性を低下させ得る。よって、標的に対するアプタマーの親和性を最大化するためには、リンカーの組成および長さを最適化する必要があり得る。
バイオセンサーとしての局所投与アプタマー
アプタマーは、金属イオン、小分子、ペプチド、タンパク質、および細胞などの広範囲の標的に対して選択されている(Keefe et al., Nat. Rev. Drug Discov. (2010) 9:537-550)。
被験体標的に対して得ることのできる高い特異性および親和性のために、アプタマーは被験体標的の検出（例えば、診断目的）によく適している。これらの望ましい特徴を用いて、アデノシン、アデノシン三リン酸（ＡＴＰ）、コカイン、Ｈｇ２＋、毒素、トロンビン、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、ＩｇＥ、および他の多くのものを含む多様な標的セットを検出するためにアプタマーに基づくセンサーが開発されている。例えば、Wang et al., Curr Med Chem (2011) 18(27):4175-4184参照。
本明細書に開示されるように、局所的に適用されたアプタマーは、無傷の皮膚であっても皮膚に浸透することができる。よって、局所的に適用されたアプタマーは、例えば、診断目的で（例えば、癌特異的標的と結合するアプタマーを使用し、例えば、癌細胞と結合するアプタマーを使用し、例えば、癌（例えば、黒色腫）細胞検出のために）皮膚（例えば、表皮（例えば、活性のある表皮）または真皮）に存在し得る被験体標的のバイオセンサーとして有用なツールとなり得る。一般的な事項として、この方法は、被験体（例えば、ヒト）の皮膚（例えば、無傷の皮膚）に、皮膚に存在し得る被験体標的に特異的なアプタマーを局所的に適用すること、および前記標的と結合したアプタマーを検出する（および例えば、その標的と結合したアプタマーの量を定量するか、または標的を定性的にタグ付けする）ことを含む。アプタマーは蛍光標識（蛍光団）をコンジュゲートさせることができ、フルオレセインに、ビス−ピレニルに、ＤＭＤＡＰに、ＡＴＭＮＤに、および量子ドットに基づく蛍光団など、その多くの例が当技術分野で知られている。検出方法は、アプタマーがその標的と結合した際の蛍光シグナルの増強に基づくものであり得、またはそれはアプタマーがその標的と結合した際の蛍光シグナルの低下に基づくものであり得る。より具体的には、皮膚（例えば、表皮（例えば、活性のある表皮）または真皮）に存在し得る被験体標的のバイオセンサーとして局所的に適用されるアプタマーを使用するためには、以下の例が示すように種々の方法が使用可能である。蛍光の変化は、蛍光顕微鏡、ＭＲＩ、ＰＥＴ、または蛍光寿命画像顕微鏡(fluorescent lifetime imaging microscopy)（ＦＬＩＭ）などの方法によって検出および測定することができる。いくつかの方法では、アプタマーのその標的への結合は、ＰＣＲまたはＤＨＡなどの増幅法を用いて検出および測定することができる。
アプタマーは、標的との結合の前後で明瞭に異なるコンフォメーション／構造を有することがよく知られている。蛍光団を用いた直接修飾により、アプタマーのコンフォメーション変化および／または構造変化が色素の蛍光に影響を及ぼし得る。増強（すなわち、「シグナル・オン」モード）または低減（すなわち、「シグナル・オフ」モード）いずれかのシグナル変化は結合プロセスの程度を反映し、それにより、標的の定性またはその濃度の定量的測定を可能とする。
蛍光標識アプタマーに基づく典型的な「シグナル・オン」バイオセンサーでは、アプタマーの末端は、クエンチャー（別の蛍光団蛍光団であってもよい）によりクエンチされるその蛍光シグナルを有するにコンジュゲートされる。蛍光団とクエンチャーの分離（アプタマー結合による）の際に蛍光シグナルは回復され、これが標的の検出および定性またはその濃度の定量的測定に使用できる。
多くの場合、標的結合時のアプタマーのコンフォメーション変化は、コンジュゲートされた色素の蛍光に有意な影響を及ぼし得る。
蛍光団は、複数のアプタマーの選択された位置の２’−リボースを修飾するために使用することができ、これがアプタマーの標的結合時に蛍光ｎ増強を示す(Merino et al., J. Am. Chem. Soc. (2005) 127:12766-12767)。これらのバイオセンサーは、バッファー溶液中および生体サンプル中であっても広い検出範囲を持ち得る。蛍光団のコンジュゲーションは立体障害またはその折り畳みへの干渉のいずれかを介してアプタマーの標的結合親和性を減じ得るので、ＡＴＰと結合するＲＮＡアプタマーのｉｎ ｖｉｔｒｏＳＥＬＥＸのためにフルオレセイン修飾ウリジンをヌクレオシド三リン酸（ＮＴＰ）ライブラリーに組み込むことができる(Jhaveri et al., Nat. Biotechnol. (2000) 18:1293-1297)。標的結合時に蛍光シグナルに検出不能な変化をもたらし得る１つのアプタマーに複数の蛍光残基が存在することを避けるために、小パーセンテージのＮＴＰライブラリーだけをフルオレセイン修飾ウリジンとする。選択されたアプタマーはμＭ範囲でＡＴＰを検出することができ、フルオレセイン修飾ウリジンを１つだけ含有するものが最良であった。加えて、同様のシグナル伝達特異性および感受性を達成するために他の蛍光色素も、使用可能である。
「シグナル・オフ」モードに基づくセンサーは「シグナル・オン」モードに基づくものよりも感受性が低い場合があるが、それらは低親和性アプタマーでより良い標的検出をもたらし得る。さらに重要なこととしては、便宜かつコスト効果のあり得る「シグナル・オフ」センサーには、より少ない工程でより単純な設計が必要とされる(Stojanovic et al., Am. Chem. Soc. (2001) 123:4928-4931; Liu et al., Anal. Chem. (2009) 81:2383-2387)。
一般に、蛍光ドナーおよびクエンチャーは、アプタマーの両末端にそれぞれコンジュゲートされる。標的結合時、アプタマーのコンフォメーション変化はドナーおよびクエンチャーを近接した位置に戻し、これが蛍光の消光をもたらす。
場合によっては、アナライト（標的）は、アプタマーとの結合の後、ある種の色素の蛍光を消光し得る。
「シグナル・オン」アプタマーに基づくバイオセンサーの別の戦略は、標的結合時に、予め消光されているかまたはほとんど蛍光のない蛍光団を脱離し得る標識不含アプタマーの使用を含む。
金ナノ粒子およびある種の蛍光団は核酸塩基により消光され得る。「ｄスペーサー」などの脱塩基部位を含有するｓｓＯＤＮを構築し、被験体標的と結合するアプタマーとハイブリダイズさせることができる(Xiang et al., J. Am. Chem. Soc. (2009) 131:15352-15357)。得られる二重鎖にはｄスペーサーに２−アミノ−５，６，７−トリメチル−１，８−ナフチリジン（ＡＴＭＮＤ）を埋め込むことができ、これによりその蛍光は消光される。標的結合時、アプタマーは構造変化を受け、ｄスペーサーを含有するｓｓＯＤＮを放出し、ＡＴＭＮＤの蛍光回復をもたらす。
また、ＰＣＲに基づくまたはＤＨＡに基づくアプローチも、その標的と結合したアプタマーを検出するために使用することができる。例えば、被験体標的と結合する２つのアプタマー（ヘアピンなどの構造を含むもの）を作製することができる。標的結合時、アプタマーには構造変化が生じ、アプタマーのある部分（例えば、３’末端）がＰＣＲによる結合のプライミングおよび増幅に利用可能となる。例えば、アプタマーが被験体の皮膚に局所的に適用された後、処置された皮膚のサンプルをプライマー結合およびＰＣＲ増幅のために採取することができる。He et al., Anal. Chem. (2010)82:1358-1364参照。アプタマーの遊離部分（例えば、３’末端）にはプローブが結合可能であり、ＤＨＡにより検出され得る。
アプタマー結合を小分子を用いて測定するために、フルオレセイン標識オリゴヌクレオチドがアプタマーとプレハイブリダイズされ、次にこれがアプタマーにより認識され得る小分子により置換される脱離アッセイを設計することができる(Cruz-Aguado and Penner, Anal. Chem. (2008) 80:8853-8855)。同様に、アプタマーは、その標的への小分子の結合を検出または評価するために使用することもできる。例えば、その蛍光が消光される標識アプタマーは、その標的との結合時に構造変化を受け、蛍光団とクエンチャーが分離されると（アプタマー結合による）、蛍光シグナルが回復し、これを小分子と結合していない標的の検出および定性または定量的測定に使用することができる。小分子が標的と結合していれば、アプタマーの蛍光団(flurophore)は消光したままとなる。
本明細書に引用されている総ての刊行物、特許出願、特許、および他の参照文献は、それらの全内容が引用することにより組み込まれる。矛盾がある場合、定義を含む本明細書が優先する。加えて、材料、方法、および例は単に例示であり、限定を意図するものではない。
高分子量化合物の局所送達を記載している文献の大部分は、皮膚の透過性がより高く、かつ、分析技術が皮膚においてこれらの分子の局所送達および標的結合を正確に評価するそれらの能力に制限を受ける、動物モデルに頼るものである。ヒトＩＬ２３サイトカインに高い親和性および特異性を有するＩＬ２３の６２ヌクレオチド（ＭＷ＝２０，３９５Ｄａ）のアプタマー阻害剤（ＡＲＣ３２２２５）が開発された。本明細書に示すように、ＲＮＡに基づくアプタマーは、受動的局所送達を評価するために十分バリデートされたモデルを用い、角質層を物理的に破壊することなく、ヒト皮膚に浸透することができる。アプタマーを抽出および検出するための新規な分析技術を用い、種々の送達用ビヒクルを用いて受動的送達を治療薬レベルで定量することができる。これらの治療薬レベルは、局所適用からのみ説明可能なｅｘ ｖｉｖｏヒト皮膚モデルで生物活性に関して確認された。これは局所的生物応答を惹起するための、標的と結合し得るヒト皮膚を通過する大分子の受動的送達を示す初めての研究であり、皮膚疾患の局所的標的化および診断の分野を拓き得る広範なクラスの生物学的化合物に相当する。
実施例１：ＡＲＣ３２２２５の選択および最初の特性決定
ＡＲＣ３２２２５は、６２残基のオリゴヌクレオチドである（図１Ａ）。このオリゴヌクレオチドは、１０個の２’−Ｏ−メチルアデノシン（ｍＡ）、１個の２’−フルオロアデノシン（ｆＡ）、１４個の２’−Ｏ−メチルグアノシン（ｍＧ）、６個の２’−フルオログアノシン（ｆＧ）、３個の２’−Ｏ−メチルシトシン（ｍＣ）、１３個の２’−フルオロシトシン（ｆＣ）、１個の２’−Ｏ−メチルウリジン（ｍＵ）、１３個の２’−フルオロウリジン（ｆＵ）およびヌクレアーゼ分解から保護するために単一の逆位デオキシチミジン残基（ｉｄＴ）でキャップされた３’末端から構成される。ＡＲＣ３２２２５を作出するためのｉｎ ｖｉｔｒｏ選択試験を、それぞれｍＡ、ｍＧ、ｆＣおよびｆＵ残基を用いて作出した修飾オリゴヌクレオチド分子のプールを用いて行った。選択に使用した組換えインターロイキン２３（ＩＬ−２３）は、Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ（カタログ＃１２９０−ＩＬ−０１０／ＣＦ）から得た。
ＩＬ−２３との結合に関する反復選択とその後の増幅を行い、ＡＲＣ３２２２５の８４ヌクレオチド長の前駆体ＡＲＣ２０１２２を作出した。
ＡＲＣ２０１２２の配列は配列番号５である。
ＡＲＣ２０１２２は、コンピューター折り畳み予測プログラムと体系的欠失を用いて、８４ヌクレオチドから６１ヌクレオチドに最小化した。各塩基の糖の２’位における修飾は、活性を改善するために評価するとともに、２’フルオロの２’−Ｏ−メトキシエチル（２’ＯＭＥ）による置換（２’Ｆ−＞２’ＯＭｅ）または２’−Ｏ−メトキシエチルの２’フルオロによる置換（２’ＯＭｅ−＞２’Ｆ）のいずれかによってｉｎ ｖｉｔｒｏ安定性を予測した。総ての許容されるまたは効力増強置換をオリゴヌクレオチド内の総ての共用される欠失と組み合わせた。ヌクレアーゼ耐性を増強するための３’−逆位チミジン残基の付加の結果、６２ヌクレオチド長の分子となった（ＡＲＣ３２２２５）。ＡＲＣ３２２２５はまた、実施例では、「ＩＬ２３アプタマー(aptamer)」、「ＩＬ２３アプタマー(Aptamer)」、「ＩＬ−２３アプタマー(aptamer)」または「ＩＬ−２３アプタマー(Aptamer)」とも呼ばれる。
ＡＲＣ３２２２５内の２位のＧ残基と３０位のＣ残基の間で三次構造相互作用が確認された（図１Ｂ）。この相互作用は、部位特異的突然変異誘発試験により実証される。２位におけるＡ残基の置換は予測されるワトソン−クリック塩基対形成を乱し、ＳＴＡＴ３阻害アッセイにおいてアプタマーの活性を１０８ｎＭまで有意に低下させる。３０位におけるＵの補償的置換は、ワトソン−クリック塩基対形成能ならびに阻害活性を回復させ、ＳＴＡＴ３アッセイにおいて０．５ｎＭのＩＣ５０をもたらす。
分子構造および化学名：
ＡＲＣ３２２２５は、以下の配列（配列番号１）を有する６２マーのオリゴヌクレオチドである。
その遊離酸形態のＡＲＣ３２２２５の計算分子量は２０３９５．２７Ｄａである。ＡＲＣ３２２２５のナトリウム塩は、２１７３６．１７Ｄａの分子量を有する。アプタマーの計算吸光係数は、５８６，４００Ｌ ｍｏｌ−１ｃｍ−１である。
組換えヒトＩＬ−２３へのアプタマー結合のＫＤを競合因子ｔＲＮＡの存在下で検討した。ＡＲＣ３２２２５の全長親であるＡＲＣ２０１２２は、組換えヒトＩＬ−２３に、ＫＤ ９．１ｎＭ±２．５ｎＭで結合する。約１８，０００倍過剰の核酸競合因子の存在下での高親和性結合は、ＡＲＣ２０１２２の結合がＩＬ−２３に特異的であることを示す（データは示されていない）。
加えて、ＰＨＡ−芽細胞において、ＡＲＣ２０１２２ならびにその最小ＡＲＣ３２２２５の、ＳＴＡＴ３活性のＩＬ−２３依存的刺激を阻害する能力を試験した。このアッセイでは、本明細書に記載のように精製単球から産生された内因性ＩＬ−２３を用いた。ＡＣＲ２０１２２は、このアッセイで０．２６ｎＭ±０．０３６ｎＭのＩＣ５０を有していた（図２）。ＡＲＣ３２２２５は、０．０７５ｎＭ±０．０３０ｎＭのＩＣ５０を有するその親クローンよりもやや良好な性能を示した。両場合とも、活性は対照抗ｐ１９抗体ＩＣ５０＝０．６９ｎＭ±０．１２ｎＭよりも著しく良好であった。
ＡＲＣ３２２２５は、血清ヌクレアーゼに耐性があることが判明した。ＡＲＣ３２２２５を９０％のプールヒト血清およびラット血清中、３７℃で２４時間インキュベートした。相対量の全長アプタマーを１５％変性ポリアクリルアミドゲルのＳＹＢＲ金染色により可視化した。ラット血清中で２４時間のインキュベーション後、全長アプタマーの約５０％が完全な状態を維持していた。９０％ヒト血清中でのインキュベーション後には有意な量の全長アプタマーが残存していた（データは示されていない）。
実施例２：内因性ＩＬ−２３活性に対するＡＲＣ３２２２５の効果
利用可能な組換えＩＬ−２３と内因性ＩＬ−２３の間には有意な構造的差異があった。内因性ＩＬ−２３は、活性化した精製初代ヒト単球の細胞馴化培地からアフィニティー精製により調製した。末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）は、新鮮なヒト血液から調製したバフィーコートから得た。単球はＣＤ１４コーティング磁性ビーズ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ、ケルン、ドイツ）への接着により単離した。ＩＬ−２３発現を誘導および増強するために、単球をＬＰＳおよび抗ＩＬ−１０遮断抗体で処理した。２４時間後、細胞馴化培地を回収し、冷凍した。セファロースＮＨＳアガロースビーズ（Ｓｉｇｍａ、セントルイス、ＭＩ）を非中和ｐ１９受容体モノクローナル抗体（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ、サンディエゴ、ＣＡ）をカップリングし、一晩、複数のドナーからのプールした細胞馴化培地とともにインキュベートした。ビーズを洗浄し、内因性ＩＬ−２３を酸で溶出させ、ＴＲＩＳ−塩基、ＢＳＡを含有バッファーで中和した。溶出液をＰＢＳで透析し、精製タンパク質をアリコートに分け、冷凍した。
単球からのＩＬ−２３の発現は、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ（サンディエゴ、ＣＡ）からのｐ１９／ｐ４０ ＥＬＩＳＡを用いて細胞馴化培地を試験することによって確認した。ＥＬＩＳＡプレートを抗ｐ１９抗体でコーティングし、捕捉された抗原を抗ｐ４０抗体で検出し、従って、ＩＬ−２３サイトカインを特異的に測定する。このＥＬＩＳＡを用い、ＩＬ−２３が細胞馴化培地におよそ８＋／−４ｎｇ／ｍＬの量で存在すること、および親和性ビーズとのインキュベーション後に細胞馴化培地はＩＬ−２３が枯渇していたことが決定された。
精製内因性ＩＬ−２３活性は、ＰＨＡ芽細胞溶解液中でのタンパク質のＳＴＡＴ３活性化能により評価した。ＩＬ−２／ＰＨＡにより活性化したＴ細胞に１５分間、精製タンパク質の滴定を適用し、ＳＴＡＴ３のリン酸化を誘導した。次に、細胞溶解液におけるｐＳＴＡＴ３（ホスホ−ＳＴＡＴ３）レベルをＥＬＩＳＡ（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、ダンバーズ、ＭＡ）により測定した。精製内因性ＩＬ−２３で処理したＰＨＡ芽細胞からのリン酸化ＳＴＡＴ３の量を、透析溶出液による１５分の刺激後に比色定量ＥＬＩＳＡにより測定した（データは示されていない）。次に、ＰＨＡ芽細胞ホスホ−ＳＴＡＴ３アッセイで、内因性タンパク質をこの曲線の直線範囲に入る容量で使用した。
ホスホ−ＳＴＡＴ３シグナル誘導の大部分は精製内因性ＩＬ−２３によるものであった。抗ｐ４０および抗ｐ１９の両中和抗体はそれぞれ、５０ｎＭで９０％を超えてシグナルを阻害する。これら２つの抗体の阻害曲線を図３に示す。
ＰＨＡ／ＩＬ−２により活性化されたＴ細胞の内因性ＩＬ−２３活性化を阻害するＡＲＣ３２２２５の能力は、ホスホ−ＳＴＡＴ３のレベルを測定することにより調べた（「ホスホ−ＳＴＡＴ３アッセイ」）。ＩＬ−２３と、活性化されたＴ細胞上のその受容体との結合は、ＳＴＡＴ３を含むいくつかのＳＴＡＴ経路を刺激する。新鮮なヒト血液からの末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）をＨｉｓｔｏｐａｑｕｅ勾配における遠心分離により単離し、Ｔ細胞を富化し、ＩＬ−２３受容体をアップレギュレートするためにＰＨＡ／ＩＬ−２で処理した。細胞を血清飢餓状態とし、内因性ＩＬ−２３で１５分間処理した後、溶解させた。ＡＲＣ３２２２５または中和ｐ１９抗体の存在下および不在下で、ＩＬ−２３処理溶解液中のホスホ−ＳＴＡＴ３の相対レベルを、ＥＬＩＳＡ（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、ダンバーズ、ＭＡ）により測定した。アプタマー／抗体の滴定を用いて阻害曲線を作成し、それからＩＣ５０の決定を行った。ｐ１９およびＡＲＣ３２２２５阻害曲線の代表的グラフを図４に示す。
それぞれ二反復の７本の１２点滴定曲線を用い、ｐ１９については２．０＋／−１．２ｎＭ、およびＡＲＣ３２２２５については０．２９６＋／−０．０９０ｎＭの平均（＋／−ＳＥＭ）ＩＣ５０を計算した。総てのドナーに関して試験した各濃度について阻害パーセントを記録した（データは示されていない）。各ドナーの個々のＩＣ５０も記録した（データは示されていない）。
本発明者らはまた、ＰＨＡ／ＩＬ−２により活性化されたＴ細胞のＩＬ−１２活性化を阻害するＡＲＣ３２２２５の能力を試験した。ＩＬ−２３と同様に、ＩＬ−１２と、活性化されたＴ細胞上のその受容体との結合は、ＳＴＡＴ３を含むいくつかのＳＴＡＴ経路を刺激する。ＩＬ−１２を滴定するためにホスホ−ＳＴＡＴ３アッセイを用い、ＳＴＡＴ３活性化の直線範囲の濃度をその後のアッセイで使用するために選択した。細胞を血清飢餓状態とし、ＩＬ−１２（２０ｎｇ／ｍｌ）で１５分間処理した後、溶解させた。ＡＲＣ３２２２５または中和ｐ１９抗体の存在下または不在下で、ＩＬ−１２処理溶解液中のホスホ−ＳＴＡＴ３の相対レベルを、ＥＬＩＳＡ（Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、ダンバーズ、ＭＡ）により測定した。アプタマー／抗体の滴定を用いて阻害曲線を作成し、それからＩＣ５０の決定を行った。ｐ１９およびＡＲＣ３２２２５阻害曲線の代表的グラフを図５に示す。
実施例３：ｉｎ ｖｉｔｒｏにおけるＡＲＣ３２２２５によるＴＬＲ３、７、８、または９の活性化の欠如
ヒトＰＢＭＣにおいてＴｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）３、７、８または９を刺激するＡＲＣ３２２２５の能力を調べた。自然免疫系は侵入する細菌、ＲＮＡおよびＤＮＡウイルス、および他の病原体に対して迅速な防御を惹起する。数種のオリゴヌクレオチドが炎症性応答を刺激する潜在的病原体として自然免疫系により認識される。ＴＬＲ３は二本鎖ＲＮＡを認識し、形質細胞様樹状細胞においてＩＬ−６の放出を誘導する。ＴＬＲ７／８および９の活性化は配列に依存する。グアノシン／ウリジン豊富な一本鎖ＲＮＡはＴＬＲ７／８を活性化し、非メチル化シトシン／グアノシンヘキサマーモチーフ（ＣｐＧ）を含むＤＮＡはＴＬＲ９を活性化する。さらに、種々のクラスの合成ＣｐＧはＰＢＭＣにおいて様々な効果を誘導し、クラスＡ ＣｐＧは、インターフェロンαおよびインターフェロンγの発現を誘導し、Ｂ細胞の増殖を生じない。クラスＢ ＣｐＧは、強力なインターロイキン−６応答を誘導し、Ｂ細胞において増殖応答を誘発する。ＣｐＧを欠く配列も免疫刺激を誘導することが報告されているので、ＣｐＧの存在は免疫刺激に絶対的に必要ではない。従って、ＡＲＣ３２２５を、自然免疫系の活性化を誘導するその能力に関してスクリーニングした。
ＡＲＣ３２２２５を、ＰＢＭＣにおいてＩＬ−６およびインターフェロン（ＩＦＮ）α分泌ならびに細胞増殖を誘導するその能力に関して調べた。ＩＬ−６の放出は、ＴＬＲ ３／７／８およびＴＬＲ９クラスＢ活性化の指標である。Ｂ細胞増殖は、ＴＬＲ９クラスＢ ＣｐＧ刺激の指標である。インターフェロンαの放出は、ＴＬＲ９クラスＡ ＣｐＧ促進作用を示す。ＰＢＭＣはＨｉｓｔｏｐａｑｕｅ勾配において遠心分離により単離し、１００ｎＭまたは２５ｎＭのＡＲＣ３２２２５またはＣｐＧ対照で処理した。２４時間および４８時間後に、上清を回収し、ＩＬ−６およびＩＦＮαの放出をＥＬＩＳＡによりアッセイした。放出されるＩＦＮαの量は、比色定量ＥＬＩＳＡによる４５０〜６００ｎＭにおける吸光度と相関する。細胞増殖は、チミジン類似体５−ブロモ−２’デオキシウリジン（ＢｒｄＵ）の組み込みにより測定されるゲノムＤＮＡの複製から評価した。ＰＢＭＣを１００ｎＭまたは２５ｎＭのアプタマーまたはＣｐＧ Ｂ対照で１日処理した。その後の２４時間パルスの後、細胞を固定し、化学発光ＥＬＩＳＡ（Ｒｏｃｈｅ、マンハイム、ドイツ）を用いてＢｒｄＵに対してプロービングした。
ＡＲＣ３２２２５は、ＩＬ−６またはＩＦＮα産生またはＰＢＭＣ増殖の欠如により示されるように、ｉｎ ｖｉｔｒｏにおけるヒトＰＢＭＣの免疫刺激に関与しなかった（データは示されていない）。ＰＢＭＣは、ＩＬ−６およびＩＦＮα分泌およびＰＢＭＣ増殖で陽性対照オリゴヌクレオチド（ＣｐＧ）に応答した（データは示されていない）。
実施例４：ＩＬ２３アプタマーの局所適用は損傷および損傷の無い（無傷の）ヒト皮膚に浸透する
局所適用からヒト皮膚に浸透するＩＬ２３アプタマーの能力をまず、新しく切り出された、バリアが完全に除去されたか、部分的に損傷を受けているか、または無傷を維持する皮膚を用いて、蛍光により評価した。前処理した皮膚切片を、漏れ止めシールを提供するドナーブロックを用い、１．０ｃｍ２の表面積を露出してフロースルー拡散セルに取り付けた。拡散セルを、ＰＢＳを用い流速およそ３．６ｍＬ／時で多チャネルポンプに接続した。次に、各セルを３２℃の皮膚表面温度を確保するため加熱マニホールドで平衡化した（投与前少なくとも３０間）。ＡＲＣ３２２２５をＤｙＬｉｇｈｔ ４８８（ＡＲＣ３２７７８）で標識し、１１ｍｇ／ｍｌ（約１％ｖ／ｖ）でクリーム中に処方し、処理および非処理の皮膚の角質層に、容積移送式ピペットを用いて均一に拡げた。このクリーム処方物は、Mehta et al., J. Invest. Derma. 115:805-812 (2000)に記載されているクリームと同様であった。適用後０時点および４時間の時点で、０．０５％ｖ／ｖ Ｔｗｅｅｎ ２０／ＰＢＳ溶液に浸した５本の綿棒を用いて皮膚の表面を洗浄し、残留処方物を皮膚の表面から除去した。次に、洗浄した皮膚をＯＣＴ（Ｏｐｔｉｍｕｍ Ｃｕｔｔｉｎｇ Ｔｅｍｐｒｅｔｕｒｅ）媒体中で凍結させた。切片を取り付け、蛍光を顕微鏡で検出した。
この洗浄手順は、０時点のサンプルで皮膚の表面からアプタマーを除去するのに有効であることが示され、無傷および部分的損傷のある皮膚でＡＲＣ３２２２５（ＡＲＣ３２７７８として）の不在が認められた（データは示されていない）。興味深いことに、角質層が完全に除去され、局所的に投与され、すぐに洗浄された皮膚は、皮膚表面から基底膜に向かって低くなる勾配でＡＲＣ３２２２５（ＡＲＣ３２７７８として）アプタマー表皮への浸透を示した（データは示されていない）。このことは、このアプタマーがほとんどすぐに活性のある表皮に分配され、表皮の密着結合（これらも受動拡散を調節すると考えられる）によりさらなる制限を受けないことを示唆する。４時間の局所的暴露の後、ＡＲＣ３２２２５（ＡＲＣ３２７７８として）アプタマーは総ての皮膚サンプル（無傷、テープ剥離、および部分的損傷）に、総てのサンプルで皮膚表面から基底膜に向かって見られる勾配で浸透することが示された（データは示されていない）。
組織ブロックおよびその内部に適用されたアプタマーが無傷の標識ＡＲＣ３２２２５（ＡＲＣ３２７７８）であったことを確認するために、２つの処理済み組織ブロックからアプタマーを抽出した後、標準アプタマーに対し、ＰＡＧＥにて電気泳動を行った。具体的には、０時点の無傷の皮膚および４時間での擦過皮膚に相当する２つの組織ブロックを室温で１０分間放置してＯＣＴを融解した。各ブロックは、それぞれ約５〜８ｍｍ×２〜３ｍｍの寸法の２つのサンプルを含んだ。一方のサンプルは再凍結し、他方はレーザーメスで細断し、２００μＬのｄＰＢＳ中に入れた。
アプタマーは細胞外にあるはずであり、組織の破壊だけが送達されたアプタマーの一部を放出すると推論された。組織をｄＰＢＳ単独中で３回の凍結／解凍サイクルに曝し、激しくボルテックスで撹拌した。各１０マイクロリットルを変性ポリアクリルアミドゲルに載せた。単離された材料を、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｄｙｎａｍｉｃｓ ＰｈｏｓｐｈｏｒＩｍａｇｅｒを用いて蛍光により可視化し、既知のＡＲＣ ３２７７８標準と一致して移動した（データは示されていない）。これらの結果から、単離されたアプタマーは両方とも全長型で、蛍光標識されていることが確認され、皮膚に無傷のアプタマーが存在することが確認された。
実施例５：ＩＬ２３アプタマーの局所適用はｉｎ ｖｉｖｏにおいてブタ皮膚に浸透する
ヒト乾癬病巣モデルにおいてＡＲＣ３２２２５誘導体が生きているブタ皮膚に浸透するかどうかを決定するために、ＡＲＣ３２７７８（Ｄｙｌｉｔｅ ４８８標識ＡＲＣ３２２２５）を、ｉｎ ｖｉｔｒｏ試験で用いたものと同じクリーム中に１１ｍｇ／ｍｌで処方した。１００μｌの試験品を、テープ剥離（スコッチテープを２０回適用）または非テープ剥離の雌の白色ユカタンミニブタの背の１”×１”角の面積に塗布した。０または４時間後、示された投与部位から全厚生検を採取した。各０時間生検は＃１０外科用メスを用いて採取した。次に、各組織を２ｍｌのクリオバイアルに入れ、液体窒素で急速凍結させた。４時間生検は、各動物を過用量のペントバルビタールナトリウで安楽死させた後に同様に採取した。
これらの生検を蛍光顕微鏡により分析した。２サンプルについて使用できる画像のみを取得した（データは示されていない）。テープ剥離した４時間サンプルでは、有意な量のＡＲＣ３２７７８が細胞核から排除されて表皮から真皮層にかけて見られた（データは示されていない）。これに対し、非テープ剥離０時間対照では、蛍光は角質層を越えて見られなかった（データは示されていない）。これらの予備的結果はｉｎ ｖｉｔｒｏ試験と一致し、アプタマーが生きているテープ剥離ブタ皮膚に浸透し、そこに４時間滞留することを示唆する。
実施例６：アプタマーの調製
ＡＲＣ３２２２５アプタマーは、２’−フルオロ修飾と２’−Ｏ−メチル修飾の組合せを有するヌクレオチドを組み込んで合成製造されたホスホジエステルオリゴヌクレオチドである。ＡＲＣ３２２２５は、コア６１マーオリゴヌクレオチドからなる。３’末端は、ヌクレアーゼ分解からの保護として付加的逆位ｄＴキャップを有する。アプタマーは、凍結乾燥粉末として提供することができる。製造に使用される出発材料および試薬、溶媒および補助材料を表２および３に示す。
合成：
ＡＲＣ３２２２５は、標準プロトコールと類似のホスホラミダイト法を用いるＡＫＴＡ Ｏｌｉｇｏｐｉｌｏｔ １００自動固相合成装置にて(Beaucage, S.L.; In Current Protocols in Nucleic Acid Chemistry; Beaucage, S. L., Bergstrom, D. E., Glick, G.D., Jones, R.A., Eds.; John Wiley & Sons: New York, NY, 2001; Chapter 3.) ２．５ｍｍｏｌスケールで合成した。
定容量合成カラム（４．５×１０ｃｍ）に第１のヌクレオシド残基（ｉｄＴ）で誘導体化した固相支持体を充填し、合成装置に接続した。合成は、脱トリチル溶液がカラムに送られ、酸に不安定なジメトキシトリチル基が除去されて第１のヌクレオシドの５’−ＯＨが生成した際に開始される。ＡＲＣ３２２２５の合成に関して、固相支持体上の逆位デオキシチミジンのため、およびピリミジン塩基のために付加的な酸処理を加えることが有益である。加えて、ＵＶカットオフは、監視サイクル中に５００ｍＡＵから１００ｍＡＵに低下する。全体的に見れば、付加的酸処理により、ｎ−ｘ回の失敗が減る。次に、アセトニトリル中のホスホラミダイトおよびアクチベーター（ＳＥＴ）を合成カラムに同時に送達し、アミダイトと５’−ヒドロキシルのカップリングが起こる。ＡＲＣ３２２２５では、３．０当量２’−フルオロおよび２’−Ｏ−メチルアミダイトが、一貫した収量およびＦＬＰをもたらすことが判明した。カップリング後、カラムをアセトニトリルで洗浄する。酸化前に、酸化中、支持体が塩基性を確実に維持するように１ＣＶ（カラム容量）のＣａｐ Ｂ溶液でカラムを処理する。このＣａｐ Ｂ処理の後、酸化溶液をカラムに送り、亜リン酸トリエステル結合Ｐ（ＩＩＩ）をそのホスホトリエステル類似体Ｐ（Ｖ）に変換する。アセトニトリル洗浄の後、残留する未反応の５’−ヒドロキシル基を、Ｃａｐ Ａ溶液とＣａｐ Ｂ溶液の混合物を用いてキャップする。この工程は、未反応の５’−ＯＨを合成サイクル中のさらなる反応、および従って望ましくない欠失配列の鎖の伸長を防ぐ。無水イソ酪酸が、収量およびＦＬＰ（全長産物）の両方の点でＡＲＣ３２２２５の合成用の標準無水酢酸溶液として有利である。
アセトニトリル洗浄の後、別の脱トリチル工程で新たな伸長サイクルが始まり、成長中のヌクレオチド鎖の５’−ＯＨを生成し、その後、次のホスホラミダイトの組み込みが起こる。このプロセスが、所望の配列が合成されるまで繰り返される。合成は、末端ヘキシルアミン修飾因子ホスホラミダイトの付加で終わる。
塩基洗浄、および切断／脱保護：
合成が完了したところで、固相支持体をアセトニトリル(acetronitrile)中２０％ジエチルアミン溶液で洗浄し、リン酸骨格上のシアノエチル保護基を除去する。次に、固相支持体を真空装置に接続し、余分な溶媒を除去する。次に、固相支持体を脱保護容器に移し、飽和水酸化アンモニウムを加え、固相支持体からの切断、および環外塩基保護基の脱保護に作用するように、この混合物を１４〜１６時間およそ４５℃に加熱する。脱保護物を周囲温度まで放冷し、焼結ガラス漏斗を用いて固相支持体を濾過し、水およびエタノールですすぎ、以下の工程に進めた。塩基洗浄および切断／脱保護は、収量を最大にし、不純物を最少にするように最適化した。加えて、時間および容量の両方に制限を設けた。
ＡＲＣ３２２２５のトリチル上精製：
ＡＲＣ３２２２５を、ＲＰクロマトグラフィーを用いて精製した。ｎ−ｘ不純物からのＦＬＰの分離を助けるために合成中、最後の５’トリチルを残した。逆相クロマトグラフィープロセスのため、シリカゲルマトリックスを、ゲル上のシラノールヒドロキシル基に埋め込まれたＣ４アルキル基配位子（Ｓｅｐａｘ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｉｎｃ．）とともに用いた。このカラムに＜１８ｍｇ／ｍＬ、＞４０℃でロードを行い、分離は疎水性が増す勾配で達成される。
トリチル(Tritryl)除去およびＡＲＣ３２２２５の対イオン交換：
ＲＰクロマトグラフィーから精製された材料をプールし、トリチル除去および骨格の対イオン交換のために約２０ｍｇ／ｍＬ、＞４０℃でアガロースマトリックスＩＥＸ カラム（Ｑ−Ｓｅｐｈａｒｏｕｓ、ＧＥ Ａｍｅｒｓｈａｍ）にロードする。ロードした材料を２５℃で８０％酢酸に曝し、ＵＶモニタリングを用いてトリチル除去工程の完了を判定する。このカラムをｐＨ６〜７に中和した後、ＦＬＰを＞４０℃でイオン強度が増す緩衝水溶液で溶出させる。
限外濾過：
ＡＲＣ３２２２５のカラム精製の後、溶液を、５ＫＤａ ＭＷＣＯ（分子量カットオフ）膜を装備した限外濾過装置（ＡＫＴＡ Ｃｒｏｓｓｆｌｏｗ、ＧＥ Ｌｉｆｅｓｃｉｅｎｃｅｓ）にロードし、この溶液を、一定の伝導率となるまで水を用いてダイアフィルターにかけ、過剰な塩を除去する。
凍結乾燥：
ＡＲＣ３２２２５の精製し脱塩した溶液をＬｙｏＧｕａｒｄトレイ（Ｇｏｒｅ Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ）に移す。次に、生成物を乾燥した灰白色〜やや黄色がかった粉末となるまで凍結乾燥させる。
実施例７：デュアルハイブリダイゼーションアッセイ（ＤＨＡ）の開発
静脈内（ＩＶ）または皮下（ＳＣ）注射により投与された非ペグ化アプタマーの薬物動態はＨＰＬＣで歴史的に測定されてきた。研究で注射されるアプタマーの濃度は比較的高いために、これらの状況でのアプタマーの定量化にはＨＰＬＣで十分である。しかしながら、アプタマーは局所的に投与することもできる。皮膚へ局所的に投与されるＡＲＣ３２２２５の、予想される低い用量濃度および浸透を考えれば、所与の組織または血漿サンプルにおけるアプタマーの濃度は、ＨＰＬＣの定量下限(lower limit of quantitation)（ＬＬＯＱ）（およそ１０×１０−９〜５０×１０−９Ｍ）を下回る可能性がある。このため、デュアルハイブリダイゼーションアッセイ（ＤＨＡ）が開発された。
ＤＨＡでは、相補的塩基対形成が特異性と感受性を駆動し、１０×１０−１２〜４０×１０−１２Ｍの範囲でＡＲＣ３２２２５濃度の定量化が得られる。簡単に述べれば、アプタマーのそれぞれ５’末端および３’末端に相補的な検出プローブおよび捕捉プローブが合成された。これらのプローブは、捕捉プローブがその５’末端に遊離アミンを有するように設計される。この遊離アミンは、プローブを９６ウェルプレート（Ｎｕｎｃ Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｒ、＃４３６００６）に共有結合させる。テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）基質を用いたストレプトアビジンコンジュゲートセイヨウワサビペルオキシダーゼによる検出を可能とするように、プローブの３’末端に共有結合されたビオチン分子を有する検出プローブが設計される。過剰量の検出プローブをアプタマー標準またはＰＫサンプルとともにインキュベートし、この溶液を加熱してＡＲＣ３２２２５の脱ホールディングを可能とする。この融解工程の後に、溶液をゆっくり冷却し、このようにして検出プローブとアプタマーの間の相補的塩基対形成が可能となる。次に、この溶液を９６ウェルプレートにすでに共有結合されている捕捉プローブに加える。このアプローチでは、サンプル中のアプタマーの濃度は、同じアッセイ中に含まれるアプタマーの標準曲線と比較することにより決定することができる。
アッセイの開発は、最適なＡＲＣ３２２２５捕捉および検出プローブ、それぞれＡＲＣ３５１４１およびＡＲＣ３５１５６を決定することにより始まった（図６および７）。ＡＲＣ３５１４１は、相補的塩基対形成を提供する１１ヌクレオチドの５’末端の遊離アミンの間に４ヌクレオチドのスペーサーを含む１５ヌクレオチドのプローブである。ＡＲＣ３５１５６は、プローブの３’末端のビオチンと、相補的塩基対形成を提供する９ヌクレオチドの間に４ヌクレオチドのスペーサーを含む１３ヌクレオチドのプローブである。
評価した検出プローブを以下に示す。各プローブに関する結果を図６に示す。ビオチン化検出プローブの評価は、ＡＲＣ３２２２５とハイブリダイズできなかったＡＲＣ３５１５７以外は、総てのプローブが同様に挙動したことを示した。感受性と特異性のバランスをとるために、より長いプローブと同様に機能したＡＲＣ３５１５６を検出プローブとして選択した（ｎ＝１）。
評価した捕捉プローブを以下に示す。各プローブに関する結果を図７に示す。ＡＲＣ３２２２５の検出のためにＡＲＣ３５１５６を用い、いくつかのＡＲＣ３２２２５特異的捕捉プローブを評価した。捕捉プローブの長さが短くなるにつれ（ＡＲＣ３５１４０は最も多い相補的塩基を含むが、ＡＲＣ３５１４５は最も少ない）、ＡＲＣ３２２２５の捕捉が低下する。ＡＲＣ３５１４０およびＡＲＣ３５１４１の感受性には若干の違いがあるが、この違いは最小であり、これら２つのプローブの感受性は同等である。このこととより短い捕捉プローブが特異性を提供するという利点を考え、ＡＲＣ３５１４１が捕捉プローブとして選択された（ｎ＝１）。ＤＨＡはＩＬ２３に対して選択性があることが示されたが、アプタマーまたはプローブからのヌクレオチドの１回の除去が検出の低下をもたらした。完全な消失は、２以上のヌクレオチドが除去された場合に＜１，０００ｐＭの濃度範囲で見られた。
ネズミ、ブタおよびカニクイザル血漿における本アッセイの感度を判定した。各血漿におけるアッセイのＬＬＯＱを判定するために、種々の濃度の種特異的血漿でアッセイ感度を決定した。血漿が存在する場合、各サンプル内の血漿のパーセンテージが認識される必要がある。血漿濃度＞２５％で、サンプルはアプタマーを融解するために６５℃を越えて加熱することはできず、そうでなければ血漿由来のタンパク質が凝固してしまう。≦２５％の血漿を含有するサンプルは、アプタマーを融解するために９５℃まで加熱することができる。これらの検討の結果として、ＡＲＣ３２２２５のＬＬＯＱを、ＡＲＣ３５１４１およびＡＲＣ３５１５６をプローブとして用い、各種特異的血漿について決定した。およそ５×１０−１２〜１０×１０−１２ＭのＡＲＣ３２２２５が２５％マウス血漿で検出できた（図８）。５０％または１００％マウス血漿では、デュアルハイブリダイゼーションシグナルは弱く、ＡＲＣ３２２２５の信頼性のある定量には十分でないと判定された。よって、マウス血漿におけるＡＲＣ３２２２５のＬＬＯＱはおよそ２０×１０−１２〜４０×１０−１２Ｍである。図８の結果に示されるように、マウス血漿において検出可能なＡＲＣ３２２２５のＬＬＯＱを推定するために、従前に記載された捕捉および検出プローブを用い、種々の濃度の希釈血漿でＡＲＣ３２２２５を滴定した。２５％マウス血漿では、アッセイの感度は約５〜１０ｐＭであり、よって、ＬＬＯＱは約２０〜４０ｐＭ（ｎ＝１）である。
ブタ血漿でも、使用される血漿の最高濃度に当たる２５％血漿では同様の結果が得られたが、５０％および１００％ブタ血漿は弱いシグナルを生じただけであった（図９）。加えて、ブタ血漿中のＡＲＣ３２２２５のＬＬＯＱは、マウス血漿と同様におよそ２０×１０−１２〜４０×１０−１２Ｍであった。図９の結果に示されるように、ブタ血漿において検出可能なＡＲＣ３２２２５のＬＬＯＱを推定するために、従前に記載された捕捉および検出プローブを用い、種々の濃度の希釈血漿でＡＲＣ３２２２５を滴定した。２５％ブタ血漿では、アッセイの感度は約５〜１０ｐＭであり、よって、ＬＬＯＱは約２０〜４０ｐＭ（ｎ＝１）である。
カニクイザル血漿では、ＡＲＣ３２２２５は５０％および１００％血漿でより強いシグナルを示し、広範囲のサル血漿サンプルが使用できることが示唆される（図１０）。このデータに基づけば、サル血漿中のＡＲＣ３２２２５のＬＬＯＱは、およそ１０×１０−１２〜２０×１０−１２Ｍであると計算される。図１０の結果に示されるように、カニクイザル血漿において検出可能なＡＲＣ３２２２５のＬＬＯＱを推定するために、従前に記載された捕捉および検出プローブを用い、種々の濃度の希釈血漿でＡＲＣ３２２２５を滴定した。５０％カニクイザル血漿では、アッセイの感度は約５〜１０ｐＭであり、よって、ＬＬＯＱは約１０〜２０ｐＭ（ｎ＝１）である。
従って、試験した総ての血漿において、デュアルハイブリダイゼーションアッセイは、ＨＰＬＣ法のおよそ１０００分の１のＡＲＣ３２２２５濃度の定量を可能とする。
実施例８：ヒト皮膚を介したケラチノサイトへのＩＬ２３アプタマーおよび積載物アプタマーの局所送達
皮膚に浸透するＩＬ２３（ＩＬ−２３）アプタマー（ＡＲＣ３２２２５）の能力を、ヒトｅｘ ｖｉｖｏ皮膚への局所適用後、蛍光を用いて視覚的に評価した。また、大きさ（分子量）およびこの浸透の広さも、３つの異なる積載物アプタマーおよび一定範囲の分子量で、蛍光を用いて評価した。積載物アプタマー１は、アプタマーの受動的浸透に及ぼす大きさの効果を検討するために、２種類の大きさ（３９マーおよび８５マー）で作製した。第２の積載物アプタマーは、アプタマーの受動的浸透の広さおよび大きさの影響を調べるために、３種類の大きさ（３６マー、４５マー、および８６マー）で作製した。最後に、第３の積載物アプタマー（８５マー）を、比較のための第３のアプタマーとして含めた。３種類のアプタマーは総て、治療活性の無い積載物アプタマーとして設計したので、生物活性は調べることができなかった。
方法
新しく切り取ったヒト腹部皮膚を５００±１００μｍの厚さにダーマトームで採皮し、漏れ止めシールを提供するためにドナーブロックを用い、１．０ｃｍ２の表面積を露出してフロースルー拡散セルに取り付けた。拡散セルを、ＰＢＳを用い流速およそ３．６ｍＬ／時で多チャネルポンプに接続した。次に、各セルを３２℃の皮膚表面温度を確保するため加熱マニホールドで平衡化した（投与前少なくとも３０分間）。ＩＬ２３および積載物アプタマーをＣｙ３で標識し、水性ビヒクル（９７．９％ＤＩ水、０．１％ポリソルベート２０、１％ベンゾイルアルコール）に溶かした。これらの処方物水溶液を１０μＬ／セル（１０ｍｇ／ｃｍ２）の用量で局所適用し、容積移送式ピペットを用いて角質層表面に均一に拡げた。適用後０時間、６時間、および２２時間で、０．０５％ｖ／ｖ Ｔｗｅｅｎ ２０／ＰＢＳ溶液に浸した５本の綿棒を用いて皮膚の表面を洗浄した。洗浄した皮膚は、その直後に、皮膚表面に貼り付けた３枚のテープストリップで残留処方物と角質層の第１層を除去した。これらのサンプルは皮膚に浸透しないＩＬ２３アプタマー（ＡＲＣ３２２２５）と見なし、分析しなかった。テープ剥離した皮膚を乾燥させたものを、清浄なカッティングボード上に、表皮側を下にして置き、清浄なレーザーメスを用いてより小さな切片に切断した。これらの切片を１５×１５ｍｍのモールドの端に載せ、その後すぐに、イソペンタン／ドライアイス浴を用い、ＯＣＴ中で凍結させた。次に、これらのモールドをイソペンタン浴から取り出し、アルミホイルで包み、免疫蛍光（ＩＦＣ）を分析するまで−８０℃で保存した。凍結組織ブロックを−８０℃の冷凍庫から取り出し、切片化の３分前に−２０℃のクリオスタットに入れた。５μｍ切片を切断し、各Ｒｉｃｈａｒｄ Ａｌｌｅｎ Ｂｏｎｄ−Ｒｉｔｅスライドに載せた。これらのスライドを−２０℃の冷アセトン中で１０分間固定した後、３０分間風乾した。これらのスライドをＴｒｉｓ緩衝生理食塩水（ＴＢＳ）（Ｄａｋｏ Ｒｅｆ Ｓ３００６）中で、ＴＢＳを３回交換してすすいだ。総てのスライドに、ジアミジノ−２−フェニルインドール（ＤＡＰＩ）（Ｉｎｖｉｔｏｇｅｎ、Ｐ３６９３５）とともにＰｒｏＬｏｎｇ（登録商標）金退色防止剤を用いてカバーガラスをかけた。浸透量は蛍光顕微鏡を用いて評価した。Ｎｉｋｏｎ ＤＳ−ＱｉＭｃモノクロカメラおよびＮＩＳ Ｅｌｅｍｅｎｔｓ ＢＲ ３．２を取り付けたＬｅｉｃａ ＤＭＲＸＡ２顕微鏡で写真画像を採取した。
結果
ＩＬ２３ Ｃｙ３標識アプタマー：
この場合にも、洗浄手順は０時点のサンプルの皮膚表面からアプタマーを除去するのに有効であることが示された（データは示されていない）。ＩＬ２３アプタマーは、バリアを破壊することなく６時間という早さで表皮に浸透し、２４時間までに劇的に増えることが示された（データは示されていない）。皮膚切片の数カ所で蛍光シグナルが示され、これらは蛍光顕微鏡下でケラチノサイト内に見られた（データは示されていない）。共焦点イメージングは、ＩＬ２３アプタマーがケラチノサイトの細胞内とおそらくは核内にあることを示した（データは示されていない）。ヒト皮膚におけるＩＬ２３アプタマーの浸透を種々の蛍光標識を用いて繰り返したところ、送達は細胞内および細胞外に見られる。
Ｃｙ３標識積載物アプタマー：
積載物アプタマー１は、積載物アプタマー１は、アプタマーの受動的浸透に及ぼす大きさの効果を検討するために、２種類の大きさ（３９マーおよび８５マー）で作製した。第２の積載物アプタマーは、アプタマーの受動的浸透の広さおよび大きさの影響を調べるために、３種類の大きさ（３６マー、４５マー、および８６マー）で作製した。最後に、第３の積載物アプタマー（８５マー）を、比較のための第３のアプタマーとして含めた。３種類のアプタマーは総て、治療活性の無い積載物アプタマーとして設計したので、生物活性は調べることができなかった。
３種類の積載物に基づくアプタマーは総て、６時間から２４時間で蛍光の増強を伴い、表皮への顕著な浸透をもたらした。その定量は困難であったが、３６マーの積載物アプタマーは８６マーの積載物アプタマーに比べてほとんど区別されなかったので、大きさの効果であるとは思われなかった。切片の多くは、細胞内に見られる蛍光を示し、これらのアプタマーは細胞内標的または細胞外標的の両方を結びつけ得ることが示唆される。さらに、これらの結果は、アプタマーの受動的送達がＩＬ２３アプタマーの外側のより広い基盤の現象であり得ることを示唆する。
実施例９：クリームおよびマイクロエマルション
単純な溶媒系は高分子量アプタマーの受動的浸透が可能であることを示し、高い水濃度のビヒクルほど真皮への高い送達を示すと思われた。油中水型マイクロエマルションはペプチドおよびタンパク質の局所送達の有効な手段として示唆されており、広範な水溶性分子の送達にはるかに一般的な役割を持ち得る［７］。マイクロエマルションがＩＬ２３アプタマー（ＡＲＣ３２２２５）の送達を改善するために使用可能であるかどうかを知ることに着目された。Ｍｅｈｔａ， ｅｔ． ａｌ．は、クリームビヒクルが高分子量のアンチセンスオリゴヌクレオチドを、重大な損傷を受けた免疫不全［８］に移植されたヒト皮膚に送達できることを示した。このＩＬ２３もオリゴヌクレオチドであることを考慮して、マイクロエマルションとの比較にためにクリームビヒクルを使用した。本試験の目的は、マイクロエマルションの用量応答を文献からの水性系クリームと比較することであった。
方法
新しく切り取ったヒト腹部皮膚を５００±１００μｍの厚さで採皮し、漏れ止めシールを提供するためにドナーブロックを用い、１．０ｃｍ２の表面積を露出してフロースルー拡散セルに取り付けた。拡散セルを、ＰＢＳを用い流速およそ３．６ｍＬ／時で多チャネルポンプに接続した。次に、各セルを３２℃の皮膚表面温度を確保するため加熱マニホールドで平衡化した（投与前少なくとも３０分間）。ＩＬ２３アプタマー（ＡＲＣ３２２２５）処方物を１０μＬ／セル（１０ｍｇ／ｃｍ２）の用量で局所適用し、容積移送式ピペットを用いて角質層表面に均一に拡げた。局所用ビヒクルの組成は表４に見出すことができる。試験品を１〜３名の別のドナーに適用し、皮膚ドナー当たり少なくとも５反復とした。適用後６時間および２４時間で、皮膚表面を洗浄し、０．０５％ｖ／ｖ Ｔｗｅｅｎ ２０／ＰＢＳ溶液に浸した５本の綿棒を用いて皮膚の表面を洗浄した。洗浄した皮膚は、その直後に、皮膚表面に貼り付けた３枚のテープストリップで残留処方物と角質層の第１層を除去した。これらのサンプルは皮膚に浸透しないＩＬ２３アプタマー（ＡＲＣ３２２２５）と見なし、分析しなかった。残留する局所用処方物を皮膚表面から除去した後、残った表皮および真皮を６０℃のオーブンに２分間入れた。この表皮および真皮をオーブンから取り出し、鉗子と手袋をはめた指を用いて手作業で分離した。表皮層と真皮層を別のバイアルに入れ、すぐに凍結させた。皮膚浸透試験からの表皮および真皮サンプルを別のバイアルに入れ、１ｍＬの０．２５％トリプシンを表皮および真皮にそれぞれ加えた。バイアルを３７℃に設定したオーブンに１６〜２０時間入れ、その後、抽出希釈剤を除去し、１３，０００ＲＰＭで１０分間遠心分離して不溶性の材料および粒子を総て除去した。
デュアルハイブリダイゼーションアッセイ：
デュアルハイブリダイゼーションアッセイ（ＤＨＡ）は、血漿および硝子体液サンプルの定量に関して従前に記載されている［９］。本明細書の実施例７も参照。簡単に述べれば、このアッセイは、アプタマーが捕捉および検出デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）オリゴヌクレオチドプローブにハイブリダイズされ得る酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）と同様である。アプタマーの５’末端の１３のヌクレオチドに対する捕捉プローブ（ＡＲＣ３５１４１；Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ ＤＮＡ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を、３’末端アミノリンカーを介してプレートと共有結合させた。検出プローブ（ＡＲＣ３５１５６；Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ ＤＮＡ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）は、アプタマーの３’末端の１５のヌクレオチドと相補的であり、５’末端をビオチン化した。このアッセイは、皮膚組織からアプタマーを抽出し、ピコモル濃度で定量することができるような選択性および感受性を有することが示された。
ＤＨＡアッセイプレートを、９６ウェルプレートを１００μＬの捕捉プローブ（１ｍＭ ＥＤＴＡ／ＤＰＢＳ中２５０ｎＭ）でコーティングすることにより調製し、４℃で一晩インキュベートした。捕捉プローブ溶液を除去し、プレートを、３×３００μＬの洗浄バッファー（Ｔｗｅｅｎを含むトリス緩衝生理食塩水（ＴＢＳＴ））を用い、３回の洗浄サイクルのそれぞれに最低１分の浸漬時間を設けて洗浄し、各洗浄の後にプレートを吸収性の紙の上に軽く打ち付けた。洗浄バッファーを除去した後、２００μＬのブロッキング溶液（ＴＢＳＴ中５％ｗ／ｖ ＢＳＡ）を各ウェルに加え、アッセイプレートを密封し、室温で６０分、オービタルシェーカー上でインキュベートした。ブロッキング溶液を除去し、プレートを従前に記載したように洗浄した。アプタマーのアプタマー標準曲線は、２倍希釈を行って１０ｎＭ〜１０ｐＭの標準を作製することにより作成し、ブランクサンプル（０ｐＭ）としてＤＰＢＳを新しい９６ウェルプレート（ハイブリダイゼーションプレート）に２反復（ウェル当たり６０μＬ）で加えた。抽出された表皮および真皮サンプルをハイブリダイゼーションプレートに加えた（６０μＬ）。サンプルおよび標準を含有するハイブリダイゼーションプレートの各ウェルに、６０μＬの検出プローブ（ＤＰＢＳ中１５０ｎＭ）を加えた。検出プローブの終濃度は７５ｎＭであり、アプタマー標準の濃度は０ｐＭ、５ｎＭ〜５ｐＭであった。ハイブリダイゼーションプレートを密封し、６５℃で設定した加熱オーブンに４０分間入れてアプタマーをプローブとハイブリダイズさせ、その後、室温まで放冷した。１００μＬのアプタマー標準／サンプル：検出プローブ混合物をハイブリダイゼーションプレートからＤＨＡアッセイプレートに移し、密封し、４℃で一晩インキュベートし、アプタマーと捕捉プローブをハイブリダイズさせた。このアッセイ溶液を除去し、ＤＨＡアッセイプレートを従前に記載したようにＴＢＳＴで洗浄した。ＤＰＢＳで１：２０，０００希釈した１００μＬのストレプトアビジン−ポリ−ＨＲＰをＤＨＡアッセイプレートに加え、次に、このプレートを密封し、振盪しながら室温で１時間インキュベートした。ストレプトアビジン−ポリ−ＨＲＰ溶液を除去し、プレートを再びＴＢＳＴで洗浄し、１００μＬのＴＭＢ基質溶液（室温）を各ウェルに加え、これらのプレートを十分発色するまで室温で５分間インキュベートした。１００μＬの停止溶液を各ウェルに加えた後、反応を停止させた後、３０分以内にプレートを４５０ｎＭで読み取った。データ分析は各プレートについてＰｒｉｓｍ ５を用いて行い、バックグラウンドＡ４５０値（０ｐＭアプタマー）をサンプルセット内の総ての値から差し引いた。ＤＨＡの捕捉プローブはＡＲＣ３５１４１（配列番号１５）であった。
ＤＨＡの検出プローブはＡＲＣ３５１５６（配列番号１２）であった。
オリゴ−タンパク質沈降アッセイ：
ＤＨＡからのアプタマーの定量を確認するために、オリゴ沈降(oligo-precipitation)「ＯＰ」と呼ばれる新たなアッセイを開発した。このアッセイでは、１００μＬの消化した皮膚サンプル（表皮または真皮）と混合するためにＤＨＡからの同じビオチン化捕捉プライマーを使用する。これらのサンプルを加熱し、冷却してプライマーをハイブリダイズさせる。ストレプトアビジンビーズを加えて、アプタマー−プライマー複合体のプルダウンを行う。次に、アプタマーをビーズから溶出させ、１５％尿素ゲルに載せ、Ｓｙｂｒ Ｇｏｌｄで染色して可視化し、アプタマーバンドを比較した。
結果
数ヶ月の保存の後、この試験で用いたＭｅｈｔａ， ｅｔ ａｌ．に基づくクリームビヒクルは物理的に安定ではなく、従って、開発可能な処方物ではないことが見出された。よって、以降の試験には既知の安定性を有するクリームビヒクルを使用する。
種々の処方物から表皮および真皮においてＤＨＡを用いて定量されたＩＬ２３アプタマーの量は図１１に見出せ、ＩＣ５０値との比較は表５に見出せる。マイクロエマルション（０．４５％、０．５％、０．７５％、および１％）は、２４時間の時点で、表皮への非線形用量応答送達を示した。総ての処方物で、６時間から２４時間までＩＬ２３アプタマーの量の増加が示された。マイクロエマルションは６時間から２４時間まで最大の増加を示し、表皮では＞１０倍の増加、真皮では＞１．９倍の増加であった。これは、マイクロエマルションでは誘導期がより長く、一方、クリームは適用の早い時間により多くのＡＰＩを送達し得ることを示唆し得る。１％クリームは、マイクロエマルションに比べて最大の送達（１．５〜５．５倍）を示した。６時間の時点で、１％クリームは、２４時間の時点の皮膚（表皮および真皮）に比べて＞３．４倍のＩＬ２３アプタマー（ｐ＜０．０６）を皮膚（表皮および真皮）に、および＞１．５倍のＩＬ２３アプタマー（ｐ＜０．０７）を送達することが見て取れた。１％クリームは、局所適用６時間および２４時間後の双方で、＞０．６μｇのＩＬ２３アプタマーを真皮に、＞４．３μｇを表皮に送達した。初代ヒトＴ細胞のＳＴＡＴ３活性化におけるＩＬ２３アプタマーのＩＣ５０はおよそ３００ｐＭである。クリーム処方物は表皮においては２４時間の時点でＩＣ５０の１２０，０００を、真皮においては６時間と２４時間の両時点でＩＣ５０の＞３，０００倍を送達している。このことは、１％クリームはバリアを破壊することなく局所用ビヒクルから治療量を有意に越える量を送達していることを示唆する。マイクロエマルションでは＜２０％であるのに対して、クリーム処方物はおよそ６０％の水を含有する。ＩＬ２３アプタマーは高い水溶解度を有することが示されており、従って、送達機構の１つは、角質層の水和による浸透の増強によるものである可能性がある。
表６は、ヒトｅｘ ｖｉｖｏ皮膚におけるＩＬ２３アプタマーの皮膚浸透を適用用量パーセント（％）として示す。そこに示されるように、６時間までに有意な量のアプタマーが表皮および真皮に浸透し、これは投与２４時間後にわたって増加する。
ＤＨＡから得られた値を確認するために、オリゴ沈降アッセイを用い、組織からアプタマーを抽出し、アプタマーバンドを可視化して比較するためのＳｙｂｒ Ｇｏｌｄにより確認した。これらのバンドをＩＬ２３標準と並べ、全体的な強度を相関させたところ、クリーム由来のサンプルはマイクロエマルションに比べて濃いことが示され、ＤＨＡからの値が確認された。
図１１は、ヒトｅｘ ｖｉｖｏ皮膚におけるＩＬ２３アプタマーの皮膚浸透を示す。ｅｘ ｖｉｖｏ腹部皮膚をマイクロエマルションまたはクリーム処方物中２０μＬ（２００μｕｇ／ｃｍ２）のＩＬ２３アプタマーで局所的に処置した。適用後６時間および２４時間の時点でＩＬ２３アプタマーを表皮および真皮から抽出した。バーは、６時間の時点の１名の皮膚ドナーで５反復、またはマイクロエマルションでは２名の２皮膚ドナーで５反復、または２４時間の時点でのクリームでは３名の皮膚ドナーで５反復からのＩＬ２３アプタマーの平均量から０時の値を差し引いたものを表す。サンプルはＤＨＡにより分析し、平均±ＳＥＭとして示される。
また、ヒト皮膚フランツセルセットアップへのＩＬ２３アプタマーの浸透に及ぼす非水性ビヒクルの効果を評価するための試験も行った。アプタマー送達用のビヒクルとして水ビヒクル（９７．９％ＤＩ水、０．１％ポリソルベート２０、１％ベンゾイルアルコール、総て％ｗ：ｗ）、１００％グリセロール、および１００％エタノールを評価した。用量１０ｍｇ／ｃｍ２のアプタマーを使用した。受容液はＰＢＳとした。６時間および１５時間の時点のＩＬ２３アプタマーの表皮および真皮組織レベルをＤＨＡにより定量した。両時点および３種類総ての条件下で、アプタマーは表皮および真皮で検出され、両時点とも表皮における量が多かった（データは示されていない）。よって、ＩＬ２３アプタマーは、非水性ビヒクルでも水性ビヒクルでも表皮および真皮に浸透することができる。
ヒト皮膚フランツセルセットアップへのＩＬ２３アプタマーの浸透に及ぼすさらなるビヒクルの効果を評価するためにさらなる試験を行った。アプタマー送達用のビヒクルとして水ビヒクル（９７．９％ ＤＩ水、０．１％ポリソルベート２０、１％ベンゾイルアルコール、総て％ｗ：ｗ）、１：１グリセロール：ＤＩ水、および１：１エタノール：ＤＩ水を評価した。用量１０ｍｇ／ｃｍ２のアプタマーを使用した。受容液はＰＢＳとした。６時間および１５時間の時点のＩＬ２３アプタマーの表皮および真皮組織レベルをＤＨＡにより定量した。両時点および３種類総ての条件下で、アプタマーは表皮および真皮で検出された（データは示されていない）。よって、ＩＬ２３アプタマーは、これらのさらなるビヒクルでも表皮および真皮に浸透することができる。
実施例１０：概念実証（ＰＯＣ） ビヒクル（フォーム、溶液、およびクリーム）
浸透促進剤および処方物最適化の使用は、小分子の送達を改善するために一般的に使用され、これらの賦形剤のいくつかは、高分子の送達の改善にも有利であり得る(Williams and Barry (2004) Adv Drug Deliv Rev 56(5):603-18; Karande et al. (2004) Nat Biotechnol 22(2):192-7)。クリームは、マイクロエマルションと比べて、より高い量のＩＬ２３アプタマー（ＡＲＣ３２２２５）をヒト皮膚に送達することが示され、ＩＬ２３アプタマーの浸透をさらに改善する機会があり得ることを示唆している。水濃度の仮説に基づくために、ＩＬ２３アプタマー（ＡＲＣ３２２２５）を、水性ビヒクル（水９７．９％）、フォーム溶液（水８２％）、およびクリーム（水６２．５％）中に処方した。浸透促進剤（ＰＥ）の効果を調査するために、ＩＬ２３アプタマー（ＡＲＣ３２２２５）を、グリコール溶液（水１５％およびＰＥ７８％）中に処方した。
本研究の目的は、臨床的状況に進展させる可能性がある様々な水ベースのクリームおよび溶液から、損傷の無い皮膚でのＩＬ２３アプタマー（ＡＲＣ３２２２５）の受動的浸透を評価することであった。
方法
新しく切り取ったヒト腹部皮膚を５００±１００μｍの厚さにダーマトームで採皮し、漏れ止めシールを提供するためにドナーブロックを用い、１．０ｃｍ２の表面積を露出してフロースルー拡散セルに取り付けた。拡散セルを、ＰＢＳを用い流速およそ１．８ｍＬ／時で多チャネルポンプに接続した。次に、各セルを３２℃の皮膚表面温度を確保するため加熱マニホールドで平衡化した（投与前少なくとも３０分間）。ＩＬ２３アプタマー（ＡＲＣ３２２２５）処方物を１０μＬ／セル（１０ｍｇ／ｃｍ２）の用量で局所適用し、容積移送式ピペットを用いて角質層表面に均一に拡げた。試験品を２名の別のドナーに皮膚ドナー当たり少なくとも６反復で適用した。６時間で、０．０５％ｖ／ｖ Ｔｗｅｅｎ ２０／ＰＢＳ溶液に浸した５本の綿棒を用いて皮膚の表面を洗浄した。洗浄した皮膚は、その直後に、皮膚表面に貼り付けた３枚のテープストリップで残留処方物と角質層の第１層を除去した。これらのサンプルは皮膚に浸透しないＩＬ２３アプタマー（ＡＲＣ３２２２５）と見なし、分析しなかった。皮膚の表面から残留する局所用処方物を除去した後、残っている表皮および真皮を６０℃で２分間オーブンに入れた。表皮および真皮をオーブンから取り出し、鉗子と手袋をはめた指を用いて手で分離した。表皮層および真皮層を別個のバイアルに入れ、すぐに凍結した。バイアルを後に解凍し、ＤＨＡを用いて分析した（前述）。
クリームおよび溶液：
本研究に使用した処方物は、初回ヒト投与（ＦＴＩＨ）試験に進展させることができる物理的に安定した「臨床／市販対応」処方物を提供する目的で開発した。処方物を２群に分ける；水中油型クリーム、および水ベースの溶液。水ベースの溶液は、市販のフォームビヒクル（Ｌｕｘｉｑ ＳＭＥ、タザロテン ＳＭＥ）から得た。フォームベースの溶液は、密閉容器系として最終フォーム製品を作り出すために噴射剤を加える前のビヒクルを表す。クリームは、想定された安定性を有するいくつかの市販処方物（ソルボレンクリーム、エイクアスクリームＢＰ、およびヒドロゾールクリーム）に基づいた。「ＩＳＩＳベースのクリーム」は、以前の研究への橋渡しとして、水性水対照（皮膚のより良い湿潤を可能にするために少量のＴｗｅｅｎを含む）とともに含めた。加えて、高濃度の浸透促進剤（プロピレングリコール、ジメチルイソソルビド、およびトランスクトール（ＴＲＡＮＳＣＵＴＯＬ）（登録商標））を含むグリコールベースの溶液を、浸透促進剤の効果を調査するために含めた。クリームおよび溶液の処方物組成を表９に記載する。
結果
１２のプロトタイプ活性処方物からの表皮および真皮中へのＩＬ−２３アプタマーの浸透を、適用後６時間および１５時間の時点の表皮および真皮から判定した（表７および図１２）。
ＩＬ２３アプタマーの送達の増加は、ＩＳＩＳクリームｗ／キサンタンを除く総ての処方物から６時間から１５時間までの表皮において観察された。適用後６時間の時点で、ＩＬ−２３アプタマー処方物（ソルボレンクリームｗ／ＰＧ）の１つを除いた総てがＩＣ５０の１３，０００倍以上の増加を達成し、１５時間では総てのＩＬ−２３アプタマー処方物がこの増加を達成した。表皮から回収されたＩＬ−２３アプタマーの量は、ｔ＝６時間および１５時間の両方の時点で真皮からのものよりも高かった。表皮からの上位３位までの処方物の順位は、６時点でオリジナルのＩＳＩＳクリーム＞ＰＧを含まないタザロテンＳＭＥ＞ヒドロゾールクリームであり、一方、１５時点で順位づけられた上位３位までは、ヒドロゾールクリーム＞ＩＳＩＳクリームｗ／ＧＭＳ＞ＰＧ不含タザロテンＳＭＥであった。表皮で観察されたＩＬ２３の最高濃度は、適用後１５時間の時点でのヒドロゾールクリームからのものであり（６．９２±１．３５μｇ、ＩＣ５０を上回るおよそ７５，０００倍増加）、これは、陰性対照（未処置の皮膚）よりも有意に高かった（Ｐ＜０．０５）。適用後６時間の時点ではより低い（３．２３±０．２６ｕｇ）が、ヒドロゾール(Hydrazole)クリームから表皮に送達されたＩＬ−２３アプタマーの量は同様に、オリジナルのＩＳＩＳクリームプラセボおよび未処置の皮膚（陰性対照）の両方よりも有意に高かった（Ｐ＜０．０５）。ＩＳＩＳクリームｗ／ＧＭＳおよびソルボレンクリームｗ／グリセリンから表皮において見られたＩＬ−２３アプタマーの量は、陰性対照よりも有意に高かった（Ｐ＜０．０５）が、オリジナルのＩＳＩＳクリームプラセボに対しては有意な改善を示さなかった（Ｐ＞０．０５）。
真皮では、これらの処方物により送達されたＩＬ−２３アプタマーの量は、６時間の時点で、ＰＧを含まないタザロテンＳＭＥ＞グリコール溶液＞Ｌｕｘｉｑ ＳＭＥの順位であり、１５時間の時点でも同様のままであった。しかしながら、１５時間の時点ではタザロテンＳＭＥ ｗ／ＰＧがＬｕｘｉｑ ＳＭＥにとって代わった。量が経時的（６〜１５時間）に増加した、表皮において観察されたＩＬ−２３アプタマーの量のパターンとは逆に、上位３位までに順位づけられた処方物（ＰＧを含まないタザロテンＳＭＥ、グリコール溶液およびＬｕｘｉｑ ＳＭＥ）の適用後の真皮におけるＩＬ−２３アプタマーの量は、逆を示し、１５時間と比べて６時間後により高い浸透があった。加えて、真皮におけるＩＬ−２３アプタマーの量は、ＰＧを含まないタザロテンＳＭＥの適用後、６時間の時点では表皮における量よりも低かった（ＩＣ５０を上回る最大およそ６，６００倍増加に達している）（１．４３±０．３９ｕｇ）。ＩＬ−２３アプタマーを含有する総ての処方物は、ＩＣ５０を上回る最低およそ６００倍増加を達成した。
表皮および真皮サンプルの両方において、既知の浸透促進剤であるプロピレングリコールをタザロテンＳＭＥ処方物に添加することにより、両方の時点でのＩＬ２３アプタマーの浸透が逆説的に減少したことに注目することは興味深く、同じことが処方物Ｌｕｘｉｑ ＳＭＥでも見られ、その場合、より多くのミリスチン酸イソプロピルの処方物への添加は、６時間時点で表皮に送達されたＩＬ２３アプタマーの量に対してほとんど効果はなかったが、１５時間の時点での表皮と、両方の時点での真皮におけるＩＬ−２３アプタマーの量を減少させた。
ＩＬ２３アプタマーは、早ければ６時間で無傷のｅｘ ｖｉｖｏヒト皮膚の表皮および真皮の両方に浸透していることが観察され、１５時間にわたって継続した。回収されたＩＬ−２３アプタマーの量は、表皮および真皮それぞれにおいて、ＩＣ５０を上回る１３，０００〜７５，０００倍およびＩＣ５０を上回る６００〜１６，０００倍であった（表７参照）。真皮における作用部位に送達されているＩＬ−２３アプタマーのかなりの量は、大分子量アプタマーの皮膚に浸透する能力の証拠を提供し、治療上関連するレベルであると思われる。また、特定のビヒクルがこの送達を改善し得ることも示されている。グリコール溶液およびプロピレングリコールを含まないタザロテンＳＭＥの両方が≧４倍（Ｐ＞０．００１）の改善された送達を示した。
表８は、ヒトｅｘ ｖｉｖｏ皮膚におけるＩＬ２３アプタマーの皮膚浸透を適用用量パーセント（％）として示す。そこに示されているように、アプタマーの意味のある量が６時間で表皮および真皮に浸透し、これが投与後１５時間を通じて持続しまたは増加する。
図１２は、ヒトｅｘ ｖｉｖｏ皮膚におけるＩＬ２３アプタマーの皮膚浸透の処方物による増強を示している。Ｅｘ ｖｉｖｏ腹部皮膚を、１０μＬ（１００μｇ／ｃｍ２）のＩＬ２３アプタマーを用いてフォーム、クリーム、またはグリコール溶液として局所的に処置した。適用後６時間（濃灰色）および１５時間（薄灰色）の時点で表皮および真皮からＩＬ２３アプタマーを抽出した。バーは、２名の皮膚ドナー（ｎ＝１２）で６反復からのＩＬ２３アプタマーの平均量を表す。サンプルを、ＤＨＡにより分析し、平均±ＳＥＭとして示した。
実施例１１：浸透経路およびアプタマー動態
ＩＬ２３アプタマー（ＡＲＣ３２２２５）が皮膚中に入りその至る所へ受動的に浸透する経路および動態を決定するために、単離された表皮を用いてフラックス実験を行った。
方法
表皮膜は、全層皮膚を熱脱イオン水（６０±３℃）中に４５秒間浸漬することにより準備した。手袋をはめた指を用いて下にある真皮から表皮膜を外し、真皮を廃棄した。その後、表皮膜は、実験の時間まで、ＳＣ側を上にして脱イオン水中で濾紙上に浮かべた。表皮膜を、漏れ止めシールを提供するためにドナーブロックを用い、１．０ｃｍ２の表面積を露出してフロースルー拡散セルに取り付けた。拡散セルを、ＰＢＳを用い、流速およそ０．３ｍＬ／時の多チャンネルポンプに接続した。各セルは、その後、加熱マニホールド中で平衡化し、皮膚表面温度３２℃を確保した（投与前に少なくとも３０分間）。ＩＬ２３アプタマー（ＡＲＣ３２２２５）処方物は、用量１０μＬ／セル（１０ｍｇ／ｃｍ２）で局所的に適用し、容積移送式ピペットを用いて角質層表面に均一に広げた。試験品を２名の別のドナーに皮膚ドナー当たり少なくとも１６反復で適用した。受容液は、２時間ごとに２４時間、９６ウェルプレートに集め、すぐに凍結した。プレートを後に解凍し、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）受容液中のＩＬ２３アプタマーの濃度を、ＤＨＡを用いて定量した（前述）。
結果
２４時間にわたるＩＬ２３アプタマー（ＡＲＣ３２２２５）の累積量は、最初の４時間の間の受容液中へのＩＬ２３アプタマーの急速な初期浸透を示し、明らかな誘導期はない（図１３）。この迅速な送達の後、その後の１２時間にわたってＩＬ２３アプタマー（ＡＲＣ３２２２５）のより遅い浸透が起こり、これは、擬似定常状態プロフィールとより一致しているだけでなく、観察可能な誘導期を欠いている。データを各個別のフラックスプロフィールについてフラックス（ｎｇ／ｃｍ２／時）として示す場合、ピークは、４時間の時点で観察され、その後の６時間の収集で急速に減少し、次に、その後の１０〜１２時間にわたって受容液中へのＩＬ２３アプタマー（ＡＲＣ３２２２５）の定常状態の送達を再開した（図１３）。表皮膜を全層皮膚から準備する場合、毛幹は、単離中に取り除かれた状態になり得、本質的に毛包への送達のためのオープンチャネルが生じる。「毛包」と表示した線から示されるように、サンプルのいくつかで観察された迅速な送達をこれにより説明することができる（図１３）。これらのサンプルは、その後の６時間の時点で著しい減少を示し、これは、持続浸透のためのオープンチャネルではないことを示唆している。「細胞間」と表示した別の線は、角質層を通じたＩＬ２３アプタマー（ＡＲＣ３２２２５）の受動的浸透を示し、これは、角質層内の細胞間または細胞内の経路を通じて起こり得た。ＩＬ２３アプタマー（ＡＲＣ３２２２５）の受動的送達は毛胞経路と細胞間経路の組合せであるように思われ、本研究の期間にわたっての主要な経路は角質層の細胞間または細胞内の経路を通じた受動的送達である。受容液中への２４時間にわたっての浸透総量は１．９μｇまたは適用用量のおよそ２％であった。
図１３は、表皮皮膚切片への単回の局所適用後に受容液において測定された水性ビヒクル中のＩＬ２３アプタマー（ＡＲＣ３２２２５）を２４時間にわたって示す（累積量（Ａ）およびフラックス（Ｂ）として示される）。線は、２つの皮膚ドナー（ｎ＝３２）に関する１６反復からのＩＬ２３アプタマーの平均累積量を表す。サンプルを、ＤＨＡにより分析し、平均±ＳＥＭとして示した。
実施例１２：ＩＬ２３アプタマーの水勾配および受動的送達
ＩＬ２３アプタマー（ＡＲＣ３２２２５）は、治療上関連するレベルで無傷のヒト皮膚に受動的に浸透することが示されている。水ベースのビヒクルは単回の局所適用後に早ければ６時間で真皮内でＩＬ２３アプタマーのかなりの濃度を示すことから、多少のビヒクル効果があるように思われる。大分子量および大分子の受動的送達についての文献におけるデータの裏づけの圧倒的な不足を考慮すればこれは特に驚くべきことである。ＲＮＡアプタマーは、これらの分子が最低エネルギー状態を維持しようとして常に流動状態にあるというコンフォメーションの可塑性を有することが示されている［６、１０］。このフレキシビリティは、この大分子量分子が皮膚に浸透する方法に寄与し得るが、この送達についての機構または経路を十分に説明するものではない。送達に影響を及ぼし得るかまたはその説明に役立ち得る２つの潜在的な経路または推進力は、皮膚において発生する独特のイオンおよび水勾配に基づく。
初期実験からの受動的浸透が水ビヒクルならびにより臨床的に実行可能なビヒクルで観察された。より高い水濃度を有するビヒクルは、ＩＬ２３アプタマーの皮膚への送達の増強をもたらした。皮膚は、角質層で約１５％であると推定される独特の水勾配を有し、基底膜ではおよそ８０％に増加する［１１］。皮膚の表面から内部へとこのように水分含有量が違うことから、大分子の推進力として働くことができる浸透圧勾配が起こる［１２］。ＩＬ２３アプタマーは、高い水溶解度を有することが示されている。これらの観察を組み合わせることで、浸透圧勾配と、アプタマーのコンフォメーションの可塑性および水溶解度とが組み合わさることにより、ＩＬ２３アプタマーの受動的送達において役割を果たすことができると仮定した。
方法
新たに切り取ったヒト腹部皮膚を、２５０±１００μｍの厚さにダーマトームで採皮し、平均表面積およそ０．６ｃｍ２および容量およそ２．０ｍＬのフランツ拡散セルに取り付けた。ダーマトームで採皮した皮膚をドナーコンパートメントとレシーバーコンパートメントの間に固定し、セルを、パラフィルム（登録商標）およびクリップを使用して一緒にシールした。レシーバーコンパートメントをレシーバー液（水、ＭＳ用）で満たした。前の溶解度の結果は、水がシンク条件に影響しないことを示している。各セルは、その後、平衡化し、表面温度３２℃を確保した（投与前に少なくとも３０分間）。追加のフランツセルも同様に取り付けたが、（ブランク対照としての役割を果たすように）投与を行わず、サンプル定量への干渉を評価した。ＩＬ２３アプタマー（ＡＲＣ３２２２５）を１％ｗ／ｗとして水溶液（９７．９％ｗ／ｗ脱イオン水、０．１％ｗ／ｗポリソルベート２０および１．０％ｗ／ｗベンジルアルコール）に溶解した。ＩＬ２３アプタマー（ＡＲＣ３２２２５）処方物は、６ｍｇ（すなわち、１０ｍｇ／ｃｍ２）の有限用量または１８０ｍｇ（すなわち、３００ｍｇ／ｃｍ２）の無限用量のいずれかの用量で局所的に適用し、容積移送式ピペットを用いて角質層表面に均一に広げた。処置後に密封されたセルは、パラフィルム（登録商標）で被覆されたドナーコンパートメントを有していた。非密封のセルは、ドナーコンパートメントが開いたままとなる。皮膚を水和させるために、水（ＬＣＭＳ用）１ｍＬをフランツセルのドナーチャンバーに分注し、試験項目の適用前にフランツセルを水浴に３７℃で１２時間入れた。試験品を１名の皮膚ドナーに皮膚ドナー当たり少なくとも４反復で適用した。適用後６時間および１５時間の時点で、皮膚の表面を、０．０５％ｖ／ｖ Ｔｗｅｅｎ ２０／ＰＢＳ溶液に浸した５本の綿棒を使用して洗浄した。洗浄した皮膚は、その直後に、皮膚表面に貼り付けた３枚のテープストリップで残留処方物と角質層の第１層を除去した。これらのサンプルは、皮膚に浸透しないＩＬ２３アプタマー（ＡＲＣ３２２２５）と見なし、分析しなかった。皮膚の表面から残留する局所用処方物を除去した後、残っている表皮および真皮を６０℃で２分間オーブンに入れた。表皮および真皮をオーブンから取り出し、鉗子と手袋をはめた指を用いて手作業で分離した。表皮層および真皮層を別個のバイアルに入れ、すぐに凍結した。バイアルを後に解凍し、ＤＨＡを用いて分析した（前述）。
結果
適用後の６時間および１５時間それぞれでのｅｘ ｖｉｖｏ皮膚におけるＩＬ２３アプタマーの受動的送達に対する有限用量（６ｍｇまたは１０ｍｇ／ｃｍ２）からの皮膚の水和および密封の効果についての結果は、図１４に記載している。適用後の６時間および１５時間での水和、密封、および有限（６ｍｇまたは１０ｍｇ／ｃｍ２）と無限（１８０ｍｇまたは３００ｍｇ／ｃｍ２）の効果を比較したＩＬ２３アプタマーの受動的送達についての結果もまた、図１４に記載している。
皮膚の水和により、適用後６時間の時点で真皮に送達されたＩＬ２３アプタマー（ＡＲＣ３２２２５）の量はおよそ２倍に減少した。興味深いことに、表皮に送達されたＩＬ２３アプタマー（ＡＲＣ３２２２５）の量では違いがあるように見えなかった。１５時間までに、水和は、真皮に送達されたＩＬ２３アプタマー（ＡＲＣ３２２２５）の量に約２倍に同様の悪影響を及ぼした。水和により影響を受けた送達の減少は表皮において１５時間の時点でより顕著であり、未密封の皮膚切片では６倍の減少があり、一方、密封した皮膚切片は表皮において２３倍の減少を示した。水の前処置により水和させた、密封した皮膚では表皮においてアプタマーがほとんど存在しない結果となった。これが、皮膚により深く真皮層に送達されたＩＬ２３アプタマー（ＡＲＣ３２２２５）がより少ないという結果にはならなかった理由またはこの傾向が、前の６時間の時点に対して、後の１５時間の時点でのみ観察されたことの理由は不明である。レベルがＤＨＡの検出限界を下回っている場合を除いて、受容液に浸透するＩＬ２３アプタマー（ＡＲＣ３２２２５）によってそれを説明することはできなかった。
ＩＬ２３アプタマー（ＡＲＣ３２２２５）の最高レベルは、未水和の皮膚で無限用量（１８０ｍｇまたは３００ｍｇ／ｃｍ２）から１５時間の時点に真皮において達成された。有限投与と無限投与を比較すると、より高い用量により１５時間の時点で皮膚（表皮または真皮）へのＩＬ２３アプタマー（ＡＲＣ３２２２５）の２〜４倍増加した送達がもたらされた。これらの効果は、水和させていない１５時間の皮膚においてより顕著であるように思われた。有限投与と同様に、皮膚の水和は、表皮および真皮におけるＩＬ２３アプタマー（ＡＲＣ３２２２５）の量を約２倍に減少させ、１５時間時点でより明らかであった。
図１４は、ＩＬ２３アプタマー（ＡＲＣ３２２２５）の受動的浸透を、密封、水和、および有限投与と無限投与の効果を比較して示す。適用後６時間および１５時間の表皮および真皮に送達されたＩＬ２３アプタマー（ＡＲＣ３２２２５）の量を示している。バーは、４反復および１ドナー（ｎ＝４）からのＩＬ２３アプタマー（ＡＲＣ３２２２５）平均量±ＳＥＭを表す。サンプルを、１０×１０−１２〜４０×１０−１２Ｍの範囲を用いてＤＨＡにより分析した。
実施例１３：皮膚におけるイオン勾配
ヒトＩｇＧ ＲＮＡアプタマーを用いた研究では、活性構造は、ＥＤＴＡ溶液で不安定にし、その場合、二価陽イオンがキレート剤により除去された。すぐに、それは、再び二価陽イオンを添加することによって再ホールディングされた［１０］。これらの二価陽イオンは、活性アプタマーコンフォメーション構造のホールディングにおいて重要であり得、迅速なホールディングおよび脱ホールディングのこれらの観察は、コンフォメーションの可塑性が、皮膚バリアを通じた受動的送達の要因の１つであり得ることを示唆している。このことは、表皮を渡ってカルシウムイオン（Ｃａ２＋）の異なる勾配があり、それが、表皮のホメオスタシスの維持において重要な役割を果たす［１３］ことから、特に重要である。勾配は、上部の顆粒層内でピークになり、その後、ＳＣを渡って急激に低下する［１４］。従って、ＳＣ内でのこれらの独特の勾配はアプタマーの局所送達における要因の役割を果たすことが可能である。Ｃａ２＋が、コンフォメーション構造を変更することによってＩｇＧ ＲＮＡアプタマー結合を解離することができたＮｏｍｕｒａ， ｅｔ ａｌ．の観察に基づいて、本研究は、二価陽イオン（すなわち、Ｃａ２＋、Ｍｇなど）と結合するＥＤＴＡを含有する溶媒系を調査する。ＩＬ２３アプタマー（ＡＲＣ３２２２５）は、水ビヒクル、ＥＤＴＡビヒクル、または塩化カルシウムビヒクルのいずれかの溶液として適用した。受容液は投与ビヒクルを反映し、例えば、ＥＤＴＡビヒクルはまた、皮膚の直下の受容液におけるＥＤＴＡの同じ濃度を有していた。
方法
新たに切り取ったヒト腹部皮膚を、２５０±１００μｍの厚さにダーマトームで採皮し、平均表面積およそ０．６ｃｍ２および容量およそ２．０ｍＬのフランツ拡散セルに取り付けた。ダーマトームで採皮した皮膚をドナーコンパートメントとレシーバーコンパートメントの間に固定し、セルを、パラフィルム（登録商標）およびクリップを使用して一緒にシールした。レシーバーコンパートメントをレシーバー液（水、ＭＳ用）で満たした。前の溶解度の結果は、水がシンク条件に影響しないことを示している。各セルは、その後、平衡化し、表面温度３２℃を確保した（投与前に少なくとも３０分間）。追加のフランツセルも同様に取り付けたが、（ブランク対照としての役割を果たすように）投与を行わず、サンプル定量への干渉を評価した。カルシウムイオン勾配および他のイオン勾配の両方の効果を調査するために、１０ｍＭ ＥＤＴＡ溶液を調製し、局所用ビヒクルとしてＩＬ２３アプタマーを用いて１０ｍＭ ＣａＣｌ２溶液を調製し、カルシウムまたはＥＤＴＡを含まない水ビヒクル溶液のＩＬ２３と比較した。受容液は投与ビヒクルにマッチさせた（すなわち、１０ｍＭ ＥＤＴＡビヒクルおよび１０ｍＭ ＥＤＴＡ受容液）。ＩＬ２３アプタマー（ＡＲＣ３２２２５）処方物は、用量６ｍｇ（すなわち、１０ｍｇ／ｃｍ２）で局所的に適用し、容積移送式ピペットを用いて角質層表面に均一に広げた。試験品を１名の皮膚ドナーに皮膚ドナー当たり少なくとも４反復で適用した。適用後６時間および１５時間の時点で、皮膚の表面を、０．０５％ｖ／ｖ Ｔｗｅｅｎ ２０／ＰＢＳ溶液に浸した５本の綿棒を使用して洗浄した。洗浄した皮膚は、その直後に、皮膚表面に貼り付けた３枚のテープストリップで残留処方物と角質層の第１層を除去した。これらのサンプルは、皮膚に浸透しないＩＬ２３アプタマー（ＡＲＣ３２２２５）と見なし、分析しなかった。皮膚の表面から残留する局所用処方物を除去した後、残っている表皮および真皮を６０℃で２分間オーブンに入れた。表皮および真皮をオーブンから取り出し、鉗子と手袋をはめた指を用いて手作業で分離した。表皮層および真皮層を別個のバイアルに入れ、すぐに凍結した。バイアルを後に解凍し、ＤＨＡを用いて分析した（前述）。
結果
適用後の６時間および１５時間でのｅｘ ｖｉｖｏ皮膚におけるＩＬ２３アプタマーの受動的送達に対する有限用量（６ｍｇまたは１０ｍｇ／ｃｍ２）からのＥＤＴＡの効果についての結果は、図１５に記載している。ビヒクルおよび受容液中にＥＤＴＡを含めることは、皮膚へのＩＬ２３アプタマーの浸透に大きな影響を与えるように見えなかった。ビヒクルおよび受容液中にカルシウムを含めることもまた、皮膚へのＩＬ２３アプタマーの浸透に大きな影響を与えるように見えなかった。
図１５は、ＩＬ２３アプタマーの受動的浸透を、アプタマーの有限用量（１０ｍｇ／ｃｍ２）からのＥＤＴＡまたはＣａＣｌ２の効果を比較して示す。適用後６時間および１５時間の表皮（濃い方の灰色）および真皮（薄い方の灰色）に送達されたＩＬ２３アプタマーの量を示している。バーは、４反復および１ドナー（ｎ＝４）からのＩＬ２３アプタマーの量±ＳＥＭを表す。サンプルを、１０×１０−１２〜４０×１０−１２Ｍの範囲を用いてＤＨＡにより分析した。
実験をまた、同様の条件下で実施し、ビヒクル中１０ｍＭまたは１００ｍＭ ＥＤＴＡの効果を見た。ＩＬ２３アプタマーは両方のＥＤＴＡ濃度で表皮および真皮に浸透した（データは示されていない）。
皮膚のＥＤＴＡ前処置（５分未満）（１０ｍＭ ＥＤＴＡ）の効果もまた、評価した。ＩＬ２３アプタマーはＥＤＴＡ前処置後に表皮および真皮に浸透した（データは示されていない）。
実施例１４：受動的浸透および能動輸送
ＭＡＲＣＯ、スカベンジャー受容体（ＳＲ−ＡサブクラスＩＩ）は、最近、ヒトケラチノサイトにおける単純ヘルペスウイルス１型（ＨＳＶ−１）の取り込みおよび感染の原因であることが示されました［１５］。２０１４年研究皮膚科学会(Society for Investigative Dermatology)でのポスター発表では、この受容体は、角質層で陽性染色を示した［１６］。角質層中にスカベンジャー受容体が存在することは、受動輸送および能動輸送の完全な欠如の手段としてのこのバリアに関して広く受け入れられていることとは正反対であった。ＩＬ２３アプタマー（ＡＲＣ３２２２５）が能動輸送または受動輸送のどちらによって皮膚に浸透しているかを評価するために実験を実施した。
方法
新たに切り取ったヒト腹部皮膚を、２５０±１００μｍの厚さにダーマトームで処理し、平均表面積およそ０．６ｃｍ２および容量およそ２．０ｍＬのフランツ拡散セルに取り付けた。ダーマトームで処理した皮膚をドナーコンパートメントとレシーバーコンパートメントの間に固定し、セルを、パラフィルム（登録商標）およびクリップを使用して一緒にシールした。レシーバーコンパートメントをレシーバー液（水、ＭＳ用）で満たした。前の溶解度の結果は、水がシンク条件に影響しないことを示している。各セルは、その後、平衡化し、表面温度３２℃を確保した（投与前に少なくとも３０分間）。追加のフランツセルも同様に取り付けたが、（ブランク対照としての役割を果たすように）投与を行わず、サンプル定量への干渉を評価した。ＩＬ２３アプタマー（ＡＲＣ３２２２５）を１％ｗ／ｗとして水溶液（９７．９％ｗ／ｗ脱イオン水、０．１％ｗ／ｗポリソルベート２０および１．０％ｗ／ｗベンジルアルコール）に溶解した。ＩＬ２３アプタマー（ＡＲＣ３２２２５）処方物は、用量６ｍｇ（すなわち、１０ｍｇ／ｃｍ２）で局所的に適用し、容積移送式ピペットを用いて角質層表面に均一に広げた。試験品を１名の皮膚ドナーに皮膚ドナー当たり少なくとも４反復で適用した。適用後６時間および１５時間の時点で、皮膚の表面を、０．０５％ｖ／ｖ Ｔｗｅｅｎ ２０／ＰＢＳ溶液に浸した５本の綿棒を使用して洗浄した。洗浄した皮膚は、その直後に、皮膚表面に貼り付けた３枚のテープストリップで残留処方物と角質層の第１層を除去した。これらのサンプルは、皮膚に浸透しないＩＬ２３アプタマー（ＡＲＣ３２２２５）と見なし、分析しなかった。皮膚の表面から残留する局所用処方物を除去した後、残っている表皮および真皮を６０℃で２分間オーブンに入れた。表皮および真皮をオーブンから取り出し、鉗子および手袋をはめた指を用いて手で分離した。表皮層および真皮層を別個のバイアルに入れ、すぐに凍結した。バイアルを後に解凍し、ＤＨＡを用いて分析した（前述）。
結果
適用後の６時間および１５時間でのｅｘ ｖｉｖｏ皮膚におけるＩＬ２３アプタマーの受動的送達に対する有限用量（６ｍｇまたは１０ｍｇ／ｃｍ２）からの温度および表皮の効果についての結果は、図１６に記載している。ＩＬ２３アプタマーは、３２℃または４℃のいずれかで維持した皮膚では６時間および１５時間の両方の時点で皮膚に浸透した。３２℃で維持した皮膚では、皮膚において見られたＩＬ２３アプタマーの量は６時間から１５時間まで増加した。温度は、皮膚へのＩＬ２３アプタマーの浸透に影響を与えず、それに従って、能動輸送の概念は除外され、浸透が受動的であることがさらに裏づけられた。
図１６は、ＩＬ２３アプタマーの受動的浸透を、有限用量（１０ｍｇ／ｃｍ２）で温度の効果を比較して示す。適用後６時間および１５時間の表皮および真皮に送達されたＩＬ２３アプタマーの量を示している。バーは、４反復および１ドナー（ｎ＝４）からのＩＬ２３アプタマーの平均量±ＳＥＭを表す。サンプルを、１０×１０−１２〜４０×１０−１２Ｍの範囲を用いてＤＨＡにより分析した。
実施例１５：ＩＬ２３アプタマー局所送達に対する化学的および構造的修飾の効果
化学的修飾は、多くの場合、ヌクレアーゼ耐性増強のためにフルオロ−（Ｆ）、アミノ−（ＮＨ２）またはＯ−メチル（ＯＣＨ３）基のいずれかと２’位を置き換えることにより、ヌクレオチド糖またはヌクレオチド間ホスホジエステル結合に行われる (Keefeet al.(2010) Nat Rev Drug Discov 9(7):537-50) 種々の２’修飾がＩＬ２３アプタマーの局所送達に影響を与えるかどうかを判定するために、２’メチルまたは２’フルオロ修飾をＩＬ２３アプタマーに行った。アンチセンスオリゴヌクレオチドとアプタマーの間の1つの大きな違いはコンフォメーション構造とフレキシビリティである(Nomura, Y., et al., (2010) Nucleic Acids Res 38(21):7822-9)。アンチセンス分子内の構造は、有効性に影響を与える可能性があるため、それは積極的に回避される。アプタマーの利点の１つは、構造が変更され得、それでもなお活性を維持することができることである。ＩＬ２３アプタマーは分子の外側に圧倒的に多いリン酸骨格でホールディングされ、塩基の大部分は二次構造に関連する。コンフォメーション構造がＩＬ２３アプタマーの局所送達のための送達に影響を与えるかどうかをよりよく理解するために、二次および三次構造を変化させることが予測される点突然変異をＩＬ２３アプタマーに作成した。最後に、一般のアプタマーの種々の物理化学的特性を理解しやすくするために、多数のプールランダムライブラリーからアプタマー浸透の広さを調査した。
方法
新たに切り取ったヒト腹部皮膚を、５００±１００μｍの厚さにダーマトームで採皮し、漏れ止めシールを提供するためにドナーブロックを用い、１．０ｃｍ２の表面積を露出してフロースルー拡散セルに取り付けた。拡散セルを、ＰＢＳを用い、流速およそ１．８ｍＬ／時の多チャンネルポンプに接続した。各セルは、その後、加熱マニホールド中で平衡化し、皮膚表面温度３２℃を確保した（投与前に少なくとも３０分間）。ＩＬ２３アプタマー（ＡＲＣ３２２２５）およびＩＬ２３類似体を１％ｗ／ｗとして水溶液（９７．９％ｗ／ｗ脱イオン水、０．１％ｗ／ｗポリソルベート２０および１．０％ｗ／ｗベンジルアルコール）に溶解した。ＩＬ２３アプタマー（ＡＲＣ３２２２５）および変異体を１００％ＤＩ水に溶解した。アプタマーは、用量１０μＬ／セル（１０ｍｇ／ｃｍ２）で局所的に適用し、容積移送式ピペットを用いて角質層表面に均一に広げた。試験品を１名の皮膚ドナーに皮膚ドナー当たり２〜７反復で適用した。適用後６時間および２４時間の時点で、皮膚の表面を、０．０５％ｖ／ｖ Ｔｗｅｅｎ ２０／ＰＢＳ溶液に浸した５本の綿棒を使用して洗浄した。洗浄した皮膚は、その直後に、皮膚表面に貼り付けた３枚のテープストリップで残留処方物と角質層の第１層を除去した。これらのサンプルは、皮膚に浸透しないアプタマーと見なし、分析しなかった。皮膚の表面から残留する局所用処方物を除去した後、残っている表皮および真皮を６０℃で２分間オーブンに入れた。表皮および真皮をオーブンから取り出し、鉗子と手袋をはめた指を用いて手作業で分離した。表皮層および真皮層を別個のバイアルに入れ、すぐに凍結した。バイアルを後に解凍し、ＤＨＡを用いて分析した（前述）。
ＩＬ２３変異体：
変異体１〜４は、２°構造を破壊する点突然変異を含み、一方、変異体５は、三次接触点を破壊する突然変異を含む。突然変異は、ＤＨＡに必要なプローブの結合を妨げないアプタマーの部分に限定した。３’末端および５’末端は、ＤＨＡを用いたアプタマーの定量を可能にするために保存される必要があった。アプタマー変異体は１００％ＤＩ水に溶解し、それは、角質層中の脂質からの表面張力により皮膚の投与面積を)完全には覆わないことが後に見出された。
変異体１（２°構造の破壊）：
変異体２（２°構造の破壊）：
変異体３（２°構造の破壊）：
変異体４（２°構造の破壊）：
変異体５（３°構造の破壊）：
アプタマープールライブラリー：
２．５ｕＭの２’−フルオロ−Ｃ；２’−メトキシ−Ａ，Ｇ，Ｕ組成物を含むｆＣｍＤ構造のプール。２．５ｕＭの２’−フルオロ−Ｇ；２’−メトキシ−Ａ，Ｃ，Ｕ組成物を含むｆＧｍＨ構造のプール。５４１ｕＭの２’−フルオロ−Ａ、Ｇ；２’−メトキシ−Ｃ，Ｕを含むｆＲｍＹ。５４９ｕＭの２’−ヒドロキシ−Ｇ；２’−メトキシ−Ａ，Ｃ，Ｕを含むｒＧｍＨプール。
ＩＬ２３類似体（修飾物）：
９７．９％ＤＩ水、０．１％ポリソルベート２０、１％ベンゾイルアルコールを含有するビヒクルに１２．１５ｍｇ／ｍＬで溶解された、２’ヒドロキシル基にメチル基が追加されているＭＮＡ ＩＬ２３類似体（統一的には、２’−ＯＭｅリボース）。９７．９％ＤＩ水、０．１％ポリソルベート２０、１％ベンゾイルアルコールを含有するビヒクルに３．２９ｍｇ／ｍＬで溶解された、ｆＣｍＤ ＩＬ２３類似体（２’−フルオロシチジン；２’−ＯＭｅアデノシン、グアノシン、ウリジン）。９７．９％ＤＩ水、０．１％ポリソルベート２０、１％ベンゾイルアルコールを含有するビヒクルに１０．８７ｍｇ／ｍＬで溶解された、ｆＧｍＨ ＩＬ２３類似体（２’−フルオログアノシン；２’−ＯＭｅアデノシン、シチジン、ウリジン）。
結果
ＩＬ２３ ２’修飾物：
種々の２’修飾を有するＩＬ２３アプタマーは総て、早ければ６時間および２４時間時点で治療レベルで表皮および真皮に浸透した（ＩＣ５０を上回る５６０〜３４，１００倍）（図１７）。ＭＮＡ ＩＬ２３アプタマー類似体は、６時間および２４時間の両方の時点で表皮におけるアプタマーの最高量を示し、メトキシル化がより良い皮膚浸透について正の相関を有する可能性があることを示唆した（図１７）。これらのメトキシル化化合物は異なる溶解度を有する可能性があり、これが、化合物の熱力学的に影響を与え、最終的に皮膚に浸透するその能力に影響を与えることができた。
また、ＤＮＡベースのＩＬ２３アプタマーも調製した。しかしながら、このアプタマーの表皮および真皮に浸透する能力は、ＤＨＡにこのアプタマーの検出能力がないことから評価することができず、これは、標準曲線からのシグナルの欠如により確認された。
表１０は、ヒトｅｘ ｖｉｖｏ皮膚におけるＩＬ２３アプタマーの皮膚浸透を適用用量パーセント（％）として示している。そこに示されているように、アプタマーの意味のある量が６時間で表皮および真皮に浸透し、投与後１５時間を通じて増加するまたは持続する。
構造的変更物（変異体）：
二次構造の変化を有する変異体の４つ総てが２４時間にわたって表皮においてかなりの濃度を示し、適用用量の４〜１６％が皮膚に浸透した（図１７）。点突然変異によって三次構造が破壊されているかまたは変化している変異体５もまた、２４時間にわたって表皮に浸透するように見えた（図１７）。変異体１および変異体４は、真皮において検出可能なレベルに至らなかった。前の研究と比べて、皮膚における全体的な低レベルは、おそらく、ビヒクルと角質層中の脂質の間の表面張力のために皮膚を十分に湿らさなかった水ビヒクルにより説明される。この表面張力を壊すために、水性ビヒクル中に界面活性剤（すなわち、ポリソルベート２０）を含むことが奨励される。ＩＬ２３アプタマーの二次または三次構造の修飾は浸透に大きな影響を与えず、このアプタマーの能力は構造に完全には依存していないことを示唆した。
アプタマープールライブラリー：
ｆＣｍＤ、ｆＧｍＨ、ｆＲｍＹおよびｒＧｍＨアプタマーライブラリーは、プロテイナーゼＫで消化した皮膚サンプルからビオチン化ハイブリダイゼーションプローブを用いて抽出し、ｑＰＣＲに付した。各皮膚サンプルから回収されたアプタマーの平均数は２０００億を超え、平均回収率は０．０５１％であった。これらの大きな回収量は、分子のクラスとしてのアプタマーが皮膚に浸透することを示唆している。
回収された量が非常に大きかったため、全体の配列スペースをサンプリングすることができなかった。しかしながら、ｆＣｍＤおよびｆＧｍＨおよびｆＲｍＹおよびｒＧｍＨライブラリーは、濃縮（＞２コピー）のために配列決定し、そこで、データを処理し、解析し、統計的な観点から濃縮されたと考えられる配列だけを保存した。これらの結果は、５１０万の配列の選択が行われ、これらの２５２のものだけが濃縮されたことを示している。しかしながら、これらの濃縮された配列は大部分はプライマーである：ダイマーおよびアーチファクト。見られた回収率で他のものよりも好ましい配列は、２つより多い配列を提供するであろう。例えば、ｆＲｍＹライブラリーからの真皮サンプルは、３．９ｅ＋１１分子の回収を示し、回収率は０．０２４％であった。この真皮サンプルからの配列数は３５１，２４１であった。その回収率で特定配列に対する選好があった場合、８４配列が見られることが予想されるであろう。
およそ５１０万の配列が、総データセットの１回または２回だけで見出され、特定配列に対する選好がなかったことを示していた。アプタマーがより良い浸透をもたらす特定の化学的性質（配列または組成）を有する場合、配列決定データにより多くのコピーを有することが予想されるであろう。配列決定においてこのように違いがないことはまた、アプタマーの浸透がこれらの分子の一般的な特性であることを示唆する。各ライブラリーにおける回収率を表１１に示す。
図１７は、ｅｘ ｖｉｖｏヒト皮膚における種々の２’修飾ＩＬ２３アプタマーの皮膚浸透を示す。ｅｘ ｖｉｖｏ腹部皮膚を、水溶液における４つの異なる２’修飾ＩＬ２３アプタマーの１０μＬ（ＩＬ２３ １０８ｕｇ／ｃｍ２、ＭＮＡ １２１．５ｕｇ／ｃｍ２、ｆＣｍＤ ３２．９ｕｇ／ｃｍ２、およびｆＧｍＨ １０８．７ｕｇ／ｃｍ２）で局所的に処置した。バーは、６時間（Ａ）および２４時間（Ｂ）の時点での単一皮膚ドナーに関する２〜７反復からのＩＬ２３アプタマーの平均量を表す。ｅｘ ｖｉｖｏ腹部皮膚を、水溶液における二次構造を破壊する４つの異なる変異体（変異体１；１．１ｍｇ／ｍＬ、変異体２；０．４ｍｇ／ｍＬ、変異体３；０．９ｍｇ／ｍＬ、および変異体４；０．９ｍｇ／ｍＬ）および三次構造を破壊する１つの変異体（変異体５；１．１ｍｇ／ｍＬ）およびＩＬ２３アプタマー（１．０ｍｇ／ｍＬ）の１０μＬで局所的に処置した。バーは、２４時間（Ｃ）の時点での単一皮膚ドナー（ｎ≧４）に関する４反復からのＩＬ２３アプタマーの量±ＳＥＭを表す。表皮（黒色のバー）および真皮（灰色のバー）に送達されたＩＬ２３アプタマーの量。サンプルを、ＤＨＡにより分析し、平均±ＳＥＭとして示した。
実施例１６：治療用アプタマーからのヒト皮膚における生物活性
生物学的に活性であった総ての皮膚浸透研究から真皮におけるＩＬ２３アプタマーの治療濃度を確認するために、新たに切り取ったヒト皮膚を取り付け、成長培地を含む静止セルを用いて所定の位置に固定し、Ｔｈ１７応答を誘導するために刺激した。ＩＬ２３アプタマーは、水ビヒクル（９７．９％ｗ／ｗ脱イオン水、０．１％ｗ／ｗポリソルベート２０および１．０％ｗ／ｗベンジルアルコール）中に処方し、局所的に適用し、培地中のＩＬ２３アプタマーおよびＲＯＲγ逆アゴニストと比較した。
方法
Ｔｈ１７刺激性ヒトＥｘ−Ｖｉｖｏ皮膚モデル
静止セルを用いた組織培養：
新たに切り取った健康ヒト皮膚を７５０ｕｍにダーマトームで採皮し、１×ダルベッコのリン酸緩衝生理食塩水中１％ＧＩＢＣＯ（商標）抗生物質−抗真菌薬（１００倍濃縮）、０．１％ゲンタマイシンとして構成された抗生物質／抗真菌薬溶液で洗浄した。直径１２ｍｍの生検材料を、使い捨て単回使用生検パンチ（Ａｃｕｐｕｎｃｈ，Ａｃｕｄｅｒｍ，Ｉｎｃ．）を使用して切り取り、抗生物質(antibiobitc)／抗真菌薬溶液中で５〜１０分間洗浄した。皮膚生検材料を、２ｍＬのレセプター容量を有するオートクレーブ処理した７ｍｍ（０．３８ｃｍ２）の未被覆静止セル（ＰｅｒｍｅＧｅａｒ，Ｉｎｃ；製品番号６Ｇ−０１−００−０７−０２）上に置き、漏れ止めシールを、金属クランプおよびドナーチャンバーを用いて維持した。レセプターチャンバーを、パスツールピペット(pastuer pipette)を使用して角化剤(cornification)で満たし、サンプリングポートに分注した。次いで、静止セルを３７℃の加湿インキュベーターに入れた。1日目（日−１）に試験品を培地中で局所的にまたは全身に投与した。２４時間後（日 ０）、培地を交換し、Ｔｈ１７刺激「カクテル」をフランツセルのレセプターチャンバーに添加した。２４時間後（日 １）、組織を取り出し、１×１×１ｍｍ未満の片に刻み、ＲＮＡ単離のために１％２−β−メルカプト−エタノールを添加したＲＮｅａｓｙ Ｌｙｓｉｓ Ｂｕｆｆｅｒ（Ｑｉａｇｅｎ、カタログ番号７９２１６）３００μＬを加えた１０倍容量のＲＮＡ ｌａｔｅｒ（Ｑｉａｇｅｎ、カタログ番号７６１０４）中に保存した。
角化培地：
培地は、ダルベッコの改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）（Ｇｉｂｃｏ（登録商標）、カタログ番号１１９９５−０６５）２３７ｍＬ、Ｈａｍ’ｓ Ｆ−１２Ｋ（Ｋａｉｇｈｎ’ｓ）培地（Ｇｉｂｃｏ（登録商標）、２１１２７−０２２）２３７ｍＬ、９０ｍＭアデニン１ｍＬ、０．９４Ｍ ＣａＣｌ １ｍＬ、１０ｎＭトリヨードサイロニン１ｍＬ、インスリン−トランスフェリン−セレン−エタノールアミン（ＩＴＳ−Ｘ）（１００倍濃縮）（Ｇｉｂｃｏ（登録商標）５１００−０５６）１ｍＬ、抗生物質−抗真菌薬（１００倍濃縮）（Ｇｉｂｃｏ（登録商標）１５２４０−０６２）５ｍＬ、ウシ胎児血清（ＦＢＳ）（ＨｙＣｌｏｎｅ（商標）、ＳＨ３００７１．０１ＨＩ）１０ｍＬ、ＧｌｕｔａＭＡＸ（商標）Ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ（Ｇｉｂｃｏ（登録商標）、３５０５０−０６１）５ｍＬ、５０ｍｇ／ｍｌゲンタマイシン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、製品番号１５７５００６０）０．１ｍＬで構成された。
Ｔｈ１７刺激カクテル：
サイトカインカクテルは、ナイーブＣＤ４ Ｔ細胞を刺激し、ＴＨ１およびＴＨ２細胞の刺激を妨害し、ＴＨ１７細胞の刺激に集中するように最適化した。ナイーブＣＤ４刺激は、１ｕｇ／ｍｌ精製ＮＡ／ＬＥマウス抗ヒトＣＤ３（ＢＤ Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ、カタログ番号５５５３２９）および２ｕｇ／ｍｌヒトＣＤ２８抗体（Ｒ＆ＤＳｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号ＭＡＢ３４２）の組合せを介して達成された。ＴＨ１およびＴＨ２細胞の妨害は、１ｕｇ／ｍｌ ヒトＩＦＮ−γ抗体（Ｒ＆ＤＳｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号ＭＡＢ２８５１）、１ｕｇ／ｍｌヒトＩＬ−４抗体（Ｒ＆ＤＳｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号ＭＡＢ３０４）を組み合わせることにより達成された。ＴＨ１７細胞の刺激は、１０ｎｇ／ｍｌ組換えヒトＩＬ−１ｂ／ＩＬ−１Ｆ２（Ｒ＆ＤＳｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号２０１−ＬＢ−０２５／ＣＦ）、１０ｎｇ／ｍｌ組換えヒトＩＬ−６（Ｒ＆ＤＳｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号２０６−ＩＬ−０１０／ＣＦ）、１ｎｇ／ｍｌ組換えヒトＴＧＦ−ｂ１（Ｒ＆ＤＳｙｓｔｅｍｓ、カタログ番号２４０−Ｂ−０１０／ＣＦ）、および組換えヒトＩＬ−２１（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ Ｂｉｏｔｅｃｈ、カタログ番号１９０００−００）の混合物を介した。総ての成分は角化培地とともに単一混合物中で混合された。
ＲＮＡ単離＆定量化：
刻んだ組織およそ４０ｍｇを、２．８および１．４ｍｍのセラミックビーズを含むホモジナイゼーションチューブに加えた。組織は、高スループットビーズミルホモジナイザー（ＰＲＥＣＥＬＬＹＳ（登録商標）２４ Ａｔｋｉｎｓｏｎ、ＮＨ）を使用して６３００ｒｐｍで３０秒間、２分のアイスブレークを取って１０サイクルで破壊した。ホモジネートは、５５℃で１５分間、プロテイナーゼＫ（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、カタログ番号Ｅ００４９１）１０μＬを含有する水４９０μＬを添加することにより消化した。消化した組織は、１０，０００ｘｇで３分間スピンダウンして細胞残渣をペレット化し、上清は、製造業者のプロトコルに従ってＱｉａｇｅｎ社製Ｍｉｎｉ ＲＮＡ Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ ｋｉｔ（カタログ番号７４１０６）を使用するＲＮＡ単離のために使用した。全ＲＮＡをＮａｎｏｄｒｏｐ ２０００（Ｔｈｅｒｍｏ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、ウィルミントン、ＤＥ）を使用して定量した。皮膚組織から単離されたＲＮＡ（１．４ｕｇ）は、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ ＶＩＬＯ ｃＤＮＡ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ｋｉｔ（製品番号１１７５４−０５０）を使用するＰＣＲ容量２０μＬでの鋳型として使用し、ｃＤＮＡ鋳型を作成した。ｃＤＮＡは、各遺伝子を定量するための特異的ＴａｑＭａｎプローブを用いた後続のｑＰＣＲのために１：２５希釈した。Ｌｉｆｅ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社製ＡＶｉｉ７ ＰＣＲ機は、ｑＰＣＲ ４０増幅サイクルのために使用した。ＧＡＰＤＨ、ＩＬ１７Ａ、ＩＬ１７Ｆ、＆ＩＬ２２相対的発現のＲＮＡレベルは、ΔΔＣＴ式を用いて計算した。
結果
Ｔｈ１７刺激条件によりＩＬ１７ｆおよびＩＬ２２の両方の著しいアップレギュレーションがもたらされた（図１８）。ＩＬ２３アプタマーの局所適用によりＩＬ１７ｆおよびＩＬ２２の両方の減少がもたらされ（それぞれｐ＜０．００１および０．０５）、これらの減少は培地中に含まれるＩＬ２３アプタマーと同様であった。興味深いことに、ＩＬ２３アプタマーの局所適用からのＩＬ２２の減少は小分子ＲＯＲγ逆アゴニストと比べて同様であった。このことにより以前に定量された治療レベルは、皮膚の微小環境内で生物学的に意味のあるレベルで細胞外ＩＬ２３に結合することができるコンフォメーション構造のものであることが確認される。
図１８は、ＩＬ２３アプタマーの局所適用はヒト皮膚においてＴｈ１７由来サイトカインを阻害することを示す。新たに切り取ったヒト腹部皮膚を取り付け、成長培地を含む静止セルを用いて所定の位置に固定し、Ｔｈ１７応答を誘導するために２４時間後に刺激した。Ｔｈ１７刺激の前後に皮膚を８μＬ（２１０μｇ／ｃｍ２）で局所的に２回処置した。１０μＭのＩＬ２３アプタマーおよびＲＯＲγ逆アゴニストを全身対照として培地に含めた。刺激後２４時間の皮膚を回収し、Ｔｈ１７型サイトカイン、ＩＬ１７ｆおよびＩＬ２２の相対的な転写レベルをｑＰＣＲにより決定した。バーは、３つの異なる皮膚ドナー（ｎ＝９）に関する３反復からの最大刺激（１００％に設定）の平均パーセントを表す。
参照文献

Claims (35)

  1. 被験体において皮膚疾患を処置する方法であって、
    アプタマーを含んでなる薬学的に許容可能な組成物の用量の有効量を、皮膚疾患を含んでなる被験体の皮膚に局所的に投与することを含んでなり、前記皮膚は表皮と真皮を含んでなり、適用用量の少なくとも０．０１％が皮膚の表皮に入る、方法。
  2. 前記薬学的に許容可能な組成物中のアプタマーの濃度が０．００１％〜２０％の間である、請求項１に記載の方法。
  3. 前記薬学的に許容可能な組成物がスプレー、液体、軟膏、クリーム、ローション、溶液、懸濁液、エマルション、ペースト、ゲル、粉末、フォーム、緩徐放出ナノ粒子、緩徐放出微粒子、生体接着剤、パッチ、包帯、半固体投与形、または創傷被覆材として投与される、請求項１に記載の方法。
  4. 前記薬学的に許容可能な組成物が水溶液として投与される、請求項１に記載の方法。
  5. 前記薬学的に許容可能な組成物が半固体投与形として投与される、請求項１に記載の方法。
  6. 前記薬学的に許容可能な組成物がクリームとして投与される、請求項１に記載の方法。
  7. 前記薬学的に許容可能な組成物が浸透促進剤を含有しない、請求項１に記載の方法。
  8. 前記薬学的に許容可能な組成物の皮膚に対する前記適用用量が０．０１〜２０ｍｇ／ｃｍ２の間である、請求項１に記載の方法。
  9. 表皮に入る局所的に投与されたアプタマーの前記適用用量のパーセンテージが、ｅｘ ｖｉｖｏヒト皮膚を用いたｉｎ ｖｉｔｒｏ アッセイで決定される、請求項１に記載の方法。
  10. 前記アプタマーが皮膚の真皮に入り、前記適用用量の少なくとも０．０１％が真皮に入る、請求項１に記載の方法。
  11. 真皮に入る局所的に投与されたアプタマーの前記適用用量のパーセンテージが、ｅｘ ｖｉｖｏヒト皮膚を用いたｉｎ ｖｉｔｒｏアッセイで決定される、請求項１０に記載の方法。
  12. 前記局所的に適用されたアプタマーの５％未満が体循環に到達する、請求項１に記載の方法。
  13. 前記アプタマーの長さが１００ヌクレオチド未満である、請求項１に記載の方法。
  14. 前記アプタマーの長さが３０ヌクレオチドより長い、請求項１に記載の方法。
  15. 前記アプタマーが３０〜９０ヌクレオチド長の間である、請求項１に記載の方法。
  16. アプタマーの少なくとも１つのヌクレオチドが化学修飾を含んでなる、請求項１に記載の方法。
  17. アプタマーの総てのヌクレオチドが化学修飾を含んでなる、請求項１６に記載の方法。
  18. 前記化学修飾がその糖の２’位に修飾を含んでなる、請求項１６に記載の方法。
  19. 前記化学修飾が２’−Ｏ−メトキシエチル付加を含んでなる、請求項１６に記載の方法。
  20. 前記化学修飾が２’フルオロ付加を含んでなる、請求項１６に記載の方法。
  21. 前記アプタマーがその３’末端に単一の逆位デオキシチミジン残基（ｉｄＴ）を含んでなる、請求項１に記載の方法。
  22. 前記薬学的に許容可能な組成物が１日１回投与される、請求項１に記載の方法。
  23. 前記薬学的に許容可能な組成物が１日２回投与される、請求項１に記載の方法。
  24. 前記薬学的に許容可能な組成物が週１回投与される、請求項１に記載の方法。
  25. 前記薬学的に許容可能な組成物が皮膚疾患の治療薬を含んでなる第２の薬剤と組み合わせて投与される、請求項１に記載の方法。
  26. 被験体にアプタマーを局所的に投与するための方法であって、
    アプタマーを含んでなる薬学的に許容可能な組成物の一定用量を、表皮と真皮を含んでなる被験体の皮膚に投与し、
    前記アプタマーは皮膚の表皮に入り、かつ、
    適用用量の少なくとも０．０１％が表皮に入り、
    それにより、前記アプタマーを被験体に局所的に投与することを含んでなる、
    方法。
  27. 前記皮膚が正常な皮膚である、請求項２６に記載の方法。
  28. 前記皮膚が損傷皮膚である、請求項２６に記載の方法。
  29. 前記損傷皮膚が罹患皮膚である、請求項２８に記載の方法。
  30. 損傷皮膚が変化したバリアを含んでなる、請求項２８に記載の方法。
  31. 被験体において皮膚疾患を処置する方法であって、アプタマーを含んでなる薬学的に許容可能な組成物の一定用量を、表皮と真皮を含んでなる被験体の皮膚に局所的に投与することを含んでなり、前記アプタマーは皮膚において固有の活性を有する、方法。
  32. 前記固有の活性がＩＣ５０値として測定される、請求項３１に記載の方法。
  33. 前記アプタマーが表皮中にアプタマーのＩＣ５０の少なくとも１０倍のレベルで存在する、請求項３２に記載の方法。
  34. 前記アプタマーが真皮中にアプタマーのＩＣ５０の少なくとも１０倍のレベルで存在する、請求項３２に記載の方法。
  35. 被験体に積載物を局所的に送達するための方法であって、
    表皮と真皮を含んでなる、被験体の皮膚にアプタマーを含んでなる薬学的に許容可能な組成物を投与し、
    積載物は前記アプタマーと結合され、
    前記アプタマーと結合積載物は皮膚の表皮に入り、
    それにより、被験体に積載物を局所的に送達すること
    を含んでなる、方法。
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