JP2017515909A - 抗体処方物 - Google Patents

Abstract

本発明は、薬学的に有効な抗原結合タンパク質、例えば、モノクローナル抗体の医薬処方物に関する。このような処方物は、抗原結合タンパク質に加えて、緩衝剤および等張化剤を含んでなる。

Description

本発明は、薬学的に有効な抗原結合タンパク質、例えば、モノクローナル抗体の医薬処方物に関する。このような処方物は、抗原結合タンパク質に加えて、緩衝剤および等張化剤とを含んでなる。

抗体の薬学的使用はここ数年で増えてきた。多くの場合、このような抗体は静脈内（ＩＶ）経路で注射される。残念ながら、静脈内経路によって注射可能な抗体の量は、抗体の物理化学的特性、特に、好適な液体処方物中でのその溶解度および安定性により、また注射液の容量により制限される。もう１つの投与経路は皮下または筋肉内注射であり、これは患者のコンプライアンスおよび投与の容易さという点で潜在的利点を与える。これらの注射経路は、注射する最終溶液に高いタンパク質濃度を必要とする。

よって、皮下注射のための、治療上有効な抗原結合タンパク質、例えば抗体の、高濃縮型の安定な医薬処方物を提供することが望まれている。皮下注射の利点は、医師が患者へのかなり短い介入でそれを実施できるということである。さらに、患者は自身で皮下注射を実施する訓練を行うこともできる。このような自己投与は、病院での医療を必要としないので、維持投与中特に有用である（医療資源利用の低減）。通常、皮下経路による注射はおよそ２ｍＬに制限される。複数回の用量を要する患者には、複数単位用量の処方物を体表の複数の部位に注射することができる。

１つの態様において、本発明は、緩衝剤および等張化剤を含んでなる、抗原結合タンパク質のための医薬処方物を提供する。より詳しくは、本発明は、約１５０〜２５０ｍｇ／ｍＬの抗原結合タンパク質；約１〜１００ｍＭの、約５．０〜約７．０のｐＨを与える緩衝剤；および約７０〜１７０ｍＭの等張化剤を提供する。一実施形態では、抗原結合タンパク質は抗ＢＬｙＳ抗体である。

別の態様において、本発明は、緩衝剤、安定剤、等張化剤、および非イオン性界面活性剤を含んでなる、抗原結合タンパク質のための医薬処方物を提供する。より詳しくは、本発明は、抗原結合タンパク質、ヒスチジン、アルギニン、ＮａＣｌ、およびポリソルベート８０を含んでなる医薬処方物を提供する。１つの実施形態では、抗原結合タンパク質は、抗ＢＬｙＳ抗体である。

別の態様において、本発明は、対象において抗ＢＬｙＳ抗体で処置可能な疾患または病態を処置する方法であって、本発明による処方物を対象に前記疾患または病態を処置するのに有効な量で投与することを含んでなる方法を提供する。１つの態様において、疾患または病態は、自己免疫疾患または障害である。

別の態様において、本発明は、本発明による処方物を含有する１以上のバイアルと患者への処方物の皮下投与に関する使用説明書とを含んでなるキットを提供する。

別の態様において、本発明は、本明細書に記載の安定な抗ＢＬｙＳ抗体処方物を含んでなる注射デバイスを提供する。

別の態様において、本発明は、全身性紅斑性狼瘡、抗好中球細胞質抗体（「ＡＮＣＡ」）血管炎、狼瘡腎炎、原発シェーグレン症候群、慢性免疫血小板減少症、重症筋無力症、症候性ワルデンストレームマクログロブリン血症、腎移植待機患者の免疫脱感作、膜性腎症、全身性硬化症、関節リウマチ、多発性骨髄腫、多発性硬化症、および腎不全からなる群から選択される疾患の処置において使用するための本発明による処方物を提供する。

図１は、処方物１の凝集速度に及ぼすタンパク質濃度の影響を示す。 図２は、２〜８℃で５ １／４か月後の処方物１および５の濁度を示す。 図３は、ベリムマブ粘度と濃度の関係を示す。 図４は、種々の処方物の２〜８℃で３か月保存後の凝集率％の変化を示す。 図５は、種々の温度および処方物での３か月保存後の凝集率％の変化を示す。 図６は、最大２５℃で５ １／４か月後の凝集速度に及ぼす温度の影響を示し、アルギニン処方物（グラフの白い四角）は、処方物１（黒い四角）に比べて凝集を有意に低下させることを示す。 図７は、５ １／４か月保存後の１２５〜２００ｍｇ／ｍＬおよび−８０℃〜４０℃の間の処方物１（黒い四角；０６−Ｃ）および処方物５（白い四角；０６−Ｄ）の凝集速度を示し、いかに粘稠であっても、処方物５（破線）は処方物１（実線）よりも低い凝集速度を示す。 図８は、５ １／４か月保存後の１２５〜２００ｍｇ／ｍＬおよび−８０℃〜４０℃の間の処方物１（０６−Ｃ）および５（０６−Ｄ）のＣＧＥ分解速度の低下を示す。 図９は、５ １／４か月保存後の１２５〜２００ｍｇ／ｍＬおよび−８０℃〜４０℃の間の処方物１（黒い四角；０６−Ｃ）および５（白い四角；０６−Ｄ）の酸性化速度を示す。 図１０は、５ １／４か月保存後の１２５〜２００ｍｇ／ｍＬおよび−８０℃〜４０℃の間の処方物１および５におけるベリムマブ重鎖酸化レベルを示す。 図１１は、５ １／４か月保存後の２００ｍｇ／ｍＬでの処方物１におけるベリムマブのペプチドマップを示す。 図１２は、５ １／４か月保存後の２００ｍｇ／ｍＬでの処方物５におけるベリムマブのペプチドマップを示す。 図１３は、アルギニンレベルの異なるベリムマブサンプルのペプチドマップを示す。 図１４は、ＨＴＦ ｐＨ−緩衝剤スクリーニングを示す。 図１５は、２因子相互作用−ｐＨ×緩衝剤−ＳＥＣモノマーを示す。 図１６は、２因子相互作用−ｐＨ×緩衝剤−ｃＩＥＦメインを示す。 図１７は、種々の濃度での抗ＩＬ１３抗体の粘度を示す。 図１８は、振盪試験からの抗ＩＬ１３ Ｔ＝０サンプルに関する濃度（ｍｇ／ｍＬ）に対する粘度（ｃＰ）の結果を示す。 図１９は、７日目の酢酸サンプルはゲル化していたことを示す（左）。コハク酸サンプルまたはヒスチジンサンプル（中央および右）ではゲルは見られなかった。１０日目のコハク酸バイアルは、半ゲル状態であることが認められた。 図２０は、３か月化学安定性サンプルに関する近ＵＶ円偏光二色性スペクトルの比較を示す。

発明の詳細な説明

本発明は特定の方法、試薬、化合物、組成物、または生物学的システムに限定されず、当然のことながら多様であり得るものと理解されるべきである。また、本明細書で使用される用語は単に特定の実施形態を記載するためのものであり、限定することを意図するものではないことも理解されるべきである。本明細書および添付の特許請求の範囲で使用する場合、単数形「１つの(a)」、「１つの(an)」、および「その(the)」は、内容が明らかにそうではないことを明示しない限り、複数の指示語を含む。よって、例えば、「１つのポリペプチド」という場合には、２以上のポリペプチドの組合せを含むなどである。

「約」は、量および持続時間などの測定可能な値を表して本明細書で使用する場合、明示された値から±２０％または±１０％（±５％、±１％、および±０．１％を含む）の変動を包含することを意味するが、このような変動は開示される方法を実施するのに適当であるためである。

そうではないことが定義されない限り、本明細書で使用される総ての技術用語および科学用語は、本発明が属する技術分野の熟練者により一般に理解されているものと同じ意味を有する。本明細書に記載のものと類似または等価ないずれの方法も、本発明の試験のための実施に使用可能であるが、好ましい材料および方法が本明細書に記載される。本発明を記載および特許請求する上で、以下の用語を使用する。

１つの態様において、本発明は、緩衝剤および等張化剤を含んでなる抗原結合タンパク質のための医薬処方物を提供する。別の態様において、本発明は、緩衝剤、安定剤、等張化剤、および非イオン性界面活性剤を含んでなる抗原結合タンパク質のための医薬処方物を提供する。一実施形態では、処方物は、凍結乾燥または噴霧乾燥される。特定の実施形態では、処方物は、凍結乾燥または噴霧乾燥され、その後、分散剤で再構成される。１つの実施形態では、分散剤は、無菌水または「注射水」（ＷＦＩ）である。本抗原結合タンパク質は、投与前に望ましい濃度とするために、等張性生理食塩水または他の賦形剤でさらに希釈することができる。１つの実施形態では、処方物は、再構成処方物である。別の実施形態では、処方物は、液体医薬処方物である。

用語「医薬処方物」または「処方物」は、有効成分の生物活性を有効とさせ、かつ、その処方物が投与される対象に許容できないほど有毒な付加的成分を含有しないような形態である調製物を意味する。このような処方物は無菌である。

「無菌」処方物は、無菌、すなわち、あらゆる生きた微生物およびそれらの胞子を含まない。

本発明の例示的実施形態では、液体処方物は、望ましい粘度および表面張力特性などの望ましい特性を示す。

用語「表面張力」は、表面／空気界面での表面下の分子により及ぼされる引力を意味し、これは、分子濃度の低い気体と比較して、分子濃度の高い液体によってもたらされる。非極性液体などの低い表面張力値の液体は、水よりも流動しやすい。一般に、表面張力の値は、ニュートン／メートルまたはダイン／センチメートルで表される。

本明細書で言及される「動的表面張力」は、表面／空気界面であり、およびその表面／表面界面への動的界面張力である。動的表面張力を測定するためのいくつかの選択的方法が存在し、例えば、捕捉気泡表面張力測定法(captive bubble surface tensionometry)または拍動気泡表面張力測定法(pulsating bubble surface tensionometry)がある。

用語「粘度」は、特定の温度の流体によって示される流動に対する内部抵抗、すなわち、ずり速度に対するずり応力の比を意味する。１ダイン／平方センチメートルの力が、１平方センチメートルの面積で１平方センチメートル離れた２つの平行な液体表面を、１ｃｍ／秒の速度で互いに通過させた場合、液体は１ポアズの粘度を有する。１ポアズは１００センチポアズに等しい。

１つの実施形態では、緩衝剤および安定剤を含んでなる処方物の粘度は、緩衝剤および安定剤の不在下の処方物の粘度に比べて少なくとも約５％、少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、または少なくとも約３０％低減される。１つの実施形態では、緩衝剤および安定剤を含んでなる処方物の粘度は、約５０ｃＰ未満、約４５ｃＰ未満、約４０ｃＰ未満、約３５ｃＰ未満、約３０ｃＰ未満、約２５ｃＰ未満、約２０ｃＰ未満、約１５ｃＰ未満、または約１０ｃＰ未満である。

見かけ粘度に言及される際、粘度の値は、用いられた温度、ずり速度およびずり応力などの、測定が行われた条件に依存することが理解されるであろう。見かけ粘度は、用いられたずり速度に対するずり応力の比と定義される。見かけ粘度の測定には、いくつかの選択的方法が存在する。例えば、粘度は、適切な円錐と板、平行板または他のタイプの粘度計もしくはレオメータによって試験され得る。

「ゲル化」は、おそらくは、重合性ＭＡｂまたは微細線維の間のトポロジカルオーバーラップの誘導ならびにこれらの微細線維の架橋および束化によって引き起こされる強固なネットワークの形成の過程と定義される。この強固なネットワークは溶液弾性率（Ｇ’）ならびにこの固有の粘性係数（Ｇ’’）の増加として現れる。

１つの態様において、本発明は、本発明の処方物を利用することを含んでなる溶液のゲル化を低減または阻害する方法を対象とする。別の態様において、本発明は、治療用タンパク質を含んでなる溶液のゲル化を低減または阻害する方法を対象とし、その方法は、溶液にヒスチジンおよび塩化ナトリウムを投与することを含んでなる。

「ポリペプチド」、「ペプチド」および「タンパク質」は、本明細書では、アミノ酸残基のポリマーを意味して互換的に使用される。ポリペプチドは、天然（組織由来）起源であるか、原核生物もしくは真核生物細胞調製物からの組換え発現もしくは天然発現であるか、または合成法により化学的に産生され得る。これらの用語は、１以上のアミノ酸残基が、対応する天然アミノ酸の人工化学模倣物であるアミノ酸ポリマー、ならびに天然アミノ酸ポリマーおよび非天然アミノ酸ポリマーに当てはまる。アミノ酸模倣物（ミメティクス）は、アミノ酸の一般化学構造とは異なる構造を有するが天然アミノ酸と同様に機能する化学化合物を意味する。非天然残基は科学文献および特許文献に十分に記載されており、天然アミノ酸残基の模倣物として有用な少数の例示的非天然組成物および指針を以下に記載する。芳香族アミノ酸の模倣物は、例えば、Ｄ−またはＬ−ナフチルアラニン(naphylalanine)；Ｄ−またはＬ−フェニルグリシン；Ｄ−またはＬ−２チエニルアラニン(thieneylalanine)；Ｄ−またはＬ−１、−２，３−、または４−ピレニルアラニン(pyreneylalanine)；Ｄ−またはＬ−３チエニルアラニン(thieneylalanine)；Ｄ−またはＬ−（２−ピリジニル）−アラニン；Ｄ−またはＬ−（３−ピリジニル）−アラニン；Ｄ−またはＬ−（２−ピラジニル）−アラニン；Ｄ−またはＬ−（４−イソプロピル）−フェニルグリシン：Ｄ−（トリフルオロメチル）−フェニルグリシン；Ｄ−（トリフルオロメチル）−フェニルアラニン：Ｄ−ｐ−フルオロ−フェニルアラニン；Ｄ−またはＬ−ｐ−ビフェニルフェニルアラニン；Ｋ−またはＬ−ｐ−メトキシ−ビフェニルフェニルアラニン：Ｄ−またはＬ−２−インドール（アルキル）アラニン；およびＤ−またはＬ−アルキルアラニン(alkylainines)（ここで、アルキルは、置換または非置換メチル、エチル、プロピル、ヘキシル、ブチル、ペンチル、イソプロピル、イソ−ブチル、ｓｅｃ−イソチル(sec-isotyl)、イソ−ペンチル、または非酸性アミノ酸であり得る）により置換することによって生成することができる。非天然アミノ酸の芳香環としては、例えば、チアゾリル、チオフェニル、ピラゾリル、ベンズイミダゾリル、ナフチル、フラニル、ピロリル、およびピリジル芳香環が含まれる。

「ペプチド」は、本明細書で使用する場合、本明細書に具体的に例示されるペプチドの保存的変異体であるペプチドを含む。「保存的変異体」は、本明細書で使用する場合、アミノ酸残基の、別の生物学的に類似の残基による置換を表す。保存的変異体の例としては、限定されるものではないが、イソロイシン、バリン、ロイシン、アラニン、システイン、グリシン、フェニルアラニン、プロリン、トリプトファン、チロシン、ノルロイシンまたはメチオニンなどの１つの疎水性残基の別のものでの置換、または１つの極性残基の別のものでの置換、例えば、アルギニンのリシンでの置換、グルタミン酸のアスパラギン酸での置換、またはグルタミンのアスパラギンでの置換などが挙げられる。互いに置換可能な中性親水性アミノ酸としては、アスパラギン、グルタミン、セリンおよびトレオニンが含まれる。「保存的変異体」はまた、非置換親アミノ酸の代わりに置換アミノ酸の使用も、その置換ポリペプチドに対する抗体も非置換ポリペプチドと免疫反応性がある限り含む。このような保存的置換も、本発明のペプチドの定義内にある。ペプチドの生物活性は、当業者に公知のおよび本明細書に記載の標準的方法によって決定することができる。

「組換え」は、タンパク質に関して使用される場合、そのタンパク質が異種核酸もしくはタンパク質の導入、または天然の核酸もしくはタンパク質の変更によって改変されたことを示す。

本明細書で使用する場合、「治療用タンパク質」は、例えば研究者または臨床家により求められる、組織、系、動物またはヒトの生物学的または医学的応答を惹起するために哺乳動物に投与することができるいずれのタンパク質および／またはポリペプチドも意味する。治療用タンパク質は、２つ以上の生物学的または医学的応答を惹起することもある。さらに、用語「治療上有効な量」は、そのような量を受容していない対応する対象に比べて、限定されるものではないが、疾患、障害、もしくは副作用の治癒、予防、もしくは改善、または疾患もしくは障害の進行速度の低下をもたらすいずれの量も意味する。この用語はまた、その範囲内に、正常な生理学的機能を増強するために有効な量、ならびに第２の医薬剤の治療効果を増強または補助する、患者において生理学的機能を引き起こすために有効な量も含む。

本明細書で特定される総ての「アミノ酸」残基は天然Ｌ配置である。標準的なポリペプチド命名法と一致して、アミノ酸残基の省略形は下表に示す通りである。

総てのアミノ酸残基配列は本明細書では、左から右への方向が従来のアミノ末端からカルボキシ末端の方向である式により表されることを述べておかなければならない。

別の実施形態では、ポリペプチドは、抗原結合タンパク質である。１つの実施形態では、抗原結合タンパク質は、可溶性受容体、抗体、抗体フラグメント、免疫グロブリン単一可変ドメイン、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ジスルフィド結合Ｆｖ、ｓｃＦｖ、閉構造多重特異性抗体、ジスルフィド結合ｓｃＦｖ、またはダイアボディからなる群から選択される。

用語「抗原結合タンパク質」は、本明細書で使用する場合、抗原と結合し得る抗体、抗体フラグメントおよびその他のタンパク質構築物を意味する。

用語Ｆｖ、Ｆｃ、Ｆｄ、Ｆａｂ、またはＦ（ａｂ）２は、それらの標準的な意味の範囲内で使用される（例えば、Harlow et al., Antibodies A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, (1988)参照）。

「キメラ抗体」は、ドナー抗体に由来する天然可変領域（軽鎖および重鎖）をアクセプター抗体に由来する軽鎖および重鎖定常領域と会合して含む操作抗体の一種を意味する。

「ヒト化抗体」は、非ヒトドナー免疫グロブリンに由来するそのＣＤＲを有し、その分子の残りの免疫グロブリン由来部分は１つ（または複数）のヒト免疫グロブリンに由来する人工抗体の一種を意味する。加えて、フレームワークサポート残基は、結合親和性を保存するために変更されていてもよい（例えば、Queen et al., Proc. Natl. Acad Sci USA, 86:10029-10032 (1989), Hodgson et al., Bio/Technology, 9:421 (1991)参照）。好適なヒトアクセプター抗体は、ドナー抗体のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列との相同性により、従来のデータベース、例えば、ＫＡＢＡＴ（商標）データベース、Ｌｏｓ Ａｌａｍｏｓデータベース、およびＳｗｉｓｓ Ｐｒｐｔｅｉｎデータベースから選択されるものであり得る。ドナー抗体のフレームワーク領域との相同性（アミノ酸ベース）を特徴とするヒト抗体は、ドナーＣＤＲの挿入のための重鎖定常領域および／または重鎖可変フレームワーク領域を提供するのに好適であり得る。軽鎖定常または可変フレームワーク領域を提供し得る好適なアクセプター抗体も同様に選択可能である。アクセプター抗体重鎖および軽鎖は、同じアクセプター抗体から起源する必要はないことを述べておかなければならない。従来技術は、このようなヒト化抗体を作製するいくつかの方法を記載している。例えば、ＥＰ−Ａ−０２３９４００およびＥＰ−Ａ−０５４９５１参照。

用語「ドナー抗体」は、変更された免疫グロブリンコード領域を提供してそのドナー抗体に特徴的な抗原特異性および中和活性を有する変更された抗体の発現をもたらすように、第１の免疫グロブリンパートナーにその可変領域、ＣＤＲ、またはその他の機能的フラグメントまたはその類似体のアミノ酸配列を与える抗体（モノクローナル、および／または組換え）を意味する。

用語「アクセプター抗体」は、その重鎖および／もしくは軽鎖フレームワーク領域、ならびに／またはその重鎖および／もしくは軽鎖定常領域をコードするアミノ酸配列の総て（または任意の一部、しかしいくつかの実施形態では総て）を第１の免疫グロブリンパートナーに与える、ドナー抗体とは異種の抗体（モノクローナルおよび／または組換え）を意味する。特定の実施形態では、ヒト抗体はアクセプター抗体である。

「ＣＤＲ」は、免疫グロブリン重鎖および軽鎖の超可変領域である、抗体の相補性決定領域アミノ酸配列と定義される。例えば、Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 第4版, U.S. Department of Health and Human Services, National Institutes of Health (1987)参照。免疫グロブリンの可変部分には３つの重鎖ＣＤＲと３つの軽鎖ＣＤＲ（またはＣＤＲ領域）が存在する。よって、「ＣＤＲ」は、本明細書で使用する場合、３つ総ての重鎖ＣＤＲ、または３つ総ての軽鎖ＣＤＲ（または適当であれば、総ての重鎖ＣＤＲと総ての軽鎖ＣＤＲの両方）を意味する。抗体の構造およびタンパク質フォールディングは、その他の残基は抗原結合領域の考慮される部分であることを意味する場合があり、当業者にはそのように理解されるであろう。例えば、Chothia et al., (1989) Conformations of immunoglobulin hypervariable regions; Nature 342, p 877-883参照。

本明細書で使用する場合、用語「ドメイン」は、タンパク質の残部とは独立の三次元構造を有する折り畳まれたタンパク質構造を意味する。一般に、ドメインは、タンパク質の別個の機能的特性を担い、多くの場合、タンパク質および／またはドメインの残部の機能欠失なく、付加、除去、または他のタンパク質に移動することができる。「抗体単一可変ドメイン」は、抗体可変ドメインに特徴的な配列を含んでなる折り畳まれたポリペプチドドメインである。従って、それは完全な抗体可変ドメインおよび改変された可変ドメインを含み、改変された可変ドメインでは、例えば、１以上のループが、抗体可変ドメインには特徴的でない配列、または末端切断型されたもしくはＮ末端もしくはＣ末端伸長を含んでなる抗体可変ドメイン、ならびに全長ドメインの少なくとも結合活性および特異性を保持する可変ドメインの折り畳まれたフラグメントで置換されている。

「免疫グロブリン単一可変ドメイン」という句は、異なるＶ領域またはドメインとは独立に抗原またはエピトープと特異的に結合する抗体可変ドメイン（Ｖ_Ｈ、Ｖ_ＨＨ、Ｖ_Ｌ）を意味する。免疫グロブリン単一可変ドメインは、他の領域またはドメインは、抗原結合のために単一免疫グロブリン可変ドメインによって必要とされない（すなわち、免疫グロブリン単一可変ドメインは付加的可変ドメインとは独立に抗原と結合する）、他の異なる可変領域または可変ドメインを伴う形式（例えば、ホモまたはヘテロ多量体）で存在し得る。「ドメイン抗体」または「ｄＡｂ」は、この用語が本明細書で使用される場合、抗原に結合し得る「免疫グロブリン単一可変ドメイン」と同じである。免疫グロブリン単一可変ドメインはヒト抗体可変ドメインであり得るが、齧歯類などの他種に由来する単一抗体可変ドメイン（例えば、ＷＯ００／２９００４に開示されている通り）、テンジクザメおよびラクダ科動物Ｖ_ＨＨ ｄＡｂ（ナノボディー）も含む。ラクダ科動物Ｖ_ＨＨは、天然に軽鎖を欠く重鎖抗体を産生する、ラクダ、ラマ、アルパカ、ヒトコブラクダ、およびグアナコを含む種に由来する免疫グロブリン単一可変ドメインポリペプチドである。このようなＶ_ＨＨドメインは、当技術分野で利用可能な標準的な技術に従ってヒト化可能であり、このようなドメインも本発明による「ドメイン抗体」であるとなお見なされる。本明細書で使用される場合、「Ｖ_Ｈ」は、ラクダ科動物Ｖ_ＨＨドメインを含む。ＮＡＲＶは、テンジクザメを含む軟骨魚類で同定された別のタイプの免疫グロブリン単一可変ドメインである。これらのドメインは、新規な抗原受容体可変領域（一般にＶ（ＮＡＲ）またはＮＡＲＶと略される）としても知られる。さらに詳しくは、Mol. Immunol. 44, 656-665 (2006)およびＵＳ２００５００４３５１９Ａを参照。

用語「エピトープ結合ドメイン」は、異なるＶ領域またはドメインとは独立に抗原またはエピトープと特異的に結合するドメインを意味し、これはドメイン抗体（ｄＡｂ）、例えば、ヒト、ラクダ科動物またはサメ免疫グロブリン単一可変ドメインであり得る。

本明細書で使用される場合、用語「抗原結合部位」は、抗原と特異的に結合し得るタンパク質上の部位を意味し、これはシングルドメイン、例えば、エピトープ結合ドメインであり得るか、またはそれは標準的な抗体上に見られ得る対をなすＶ_Ｈ／Ｖ_Ｌであり得る。本発明のいくつかの態様では、単鎖Ｆｖ（ＳｃＦｖ）ドメインが抗原結合部位を提供し得る。

用語「ｍＡｂｄＡｂおよびｄＡｂｍＡｂ」は、本明細書では、本発明の抗原結合タンパク質を意味して使用される。これら２つの用語は互換的に使用可能であり、本明細書で使用される場合、同じ意味を有することが意図される。

本発明の医薬処方物は、約１５０〜２５０ｍｇ／ｍＬの抗原結合タンパク質；約５．０〜約７．０のｐＨを与える約１〜１００ｍＭの緩衝剤；および約７０〜１７０ｍＭの等張化剤を提供する。あるいは、本発明の医薬処方物は、約１５０〜２５０ｍｇ／ｍＬの抗原結合タンパク質；６．０±０．５のｐＨを与える約１〜１００ｍＭの緩衝剤；約１〜１００ｍＭの安定剤；約９０〜１５０ｍＭの等張化剤；および約０．００５〜０．０１５％（ｗ／ｖ）の非イオン性界面活性剤を提供する。１つの実施形態では、抗原結合タンパク質は、抗Ｂリンパ球刺激因子（抗ＢＬｙＳ）タンパク質抗体である。

また、約１５０〜２５０ｍｇ／ｍＬの抗原結合タンパク質；６．０±０．５のｐＨの約１〜１００ｍＭのヒスチジン；約７０〜１７０ｍＭのＮａＣｌを含んでなる医薬処方物も記載される。１つの実施形態では、処方物は、約０．００５〜０．０３％（ｗ／ｖ）の非イオン性界面活性剤をさらに含んでなる。１つの実施形態では、処方物は、約０．０１〜約０．１ｍＭの金属キレーターをさらに含んでなる。１つの実施形態では、抗原結合タンパク質は抗ＩＬ−１３抗体である。

本発明の医薬処方物は液体形態で提供されてもよいし、または凍結乾燥形態で提供されてもよい。

本発明による医薬処方物は、緩衝剤を含んでなる。緩衝剤としては、限定されるものではないが、クエン酸、ＨＥＰＥＳ、ヒスチジン、酢酸カリウム、クエン酸カリウム、リン酸カリウム（ＫＨ_２ＰＯ_４）、酢酸ナトリウム、重炭酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、リン酸ナトリウム（ＮＡＨ_２ＰＯ_４）、Ｔｒｉｓ塩基、およびＴｒｉｓ−ＨＣｌが含まれる。１つの実施形態では、緩衝剤はヒスチジンである。特定の実施形態では、ヒスチジン濃度は、約５、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、４５、５０、５５、６０、６５、７０、７５、８０、８５、９０、９５、または１００ｍＭである。１つの実施形態では、ヒスチジン濃度は１０±５ｍＭである。１つの実施形態では、ヒスチジン濃度は１０±２ｍＭである。１つの実施形態では、ヒスチジン濃度は約１０ｍＭである。１つの実施形態では、ヒスチジン濃度は約１５ｍＭである。

本明細書で使用される場合、用語「約５．０〜約７．０のｐＨを与える緩衝剤」は、それを含んでなる溶液が、その酸／塩基共役成分の作用によりｐＨの変化に抵抗することを提供する薬剤を意味する。本発明において処方物中に使用される緩衝剤は、約５．５〜約６．５、または約５．８〜約６．２の範囲のｐＨを持ち得る。１つの実施形態では、ｐＨは約６．０である。１つの実施形態では、ｐＨは、約６．２５０である。ｐＨをこの範囲に制御する緩衝剤の例としては、酢酸、コハク酸、グルコン酸、ヒスチジン、クエン酸、グリシルグリシンおよびその他の有機酸緩衝剤が挙げられる。本発明において最も好適な緩衝剤は、ヒスチジン緩衝剤、例えば、Ｌ−ヒスチジンである。

「ヒスチジン緩衝剤」は、アミノ酸ヒスチジンを含んでなる緩衝剤である。ヒスチジン緩衝剤の例としては、塩化ヒスチジン、酢酸ヒスチジン、リン酸ヒスチジン、硫酸ヒスチジンが挙げられる。これらの例で最も好適であると特定されるヒスチジン処方物は、０．６５ｍｇ／ｍＬのＬ−ヒスチジン、１．２ｍｇ／ｍＬのＬ−ヒスチジン一塩酸塩から作製されるヒスチジン緩衝剤である。

本発明による医薬処方物は、等張化剤を含んでなる。等張化剤としては、限定されるものではないが、デキストロース、グリセリン、マンニトール、塩化カリウム、および塩化ナトリウムが含まれる。１つの実施形態では、等張化剤は塩化ナトリウムである。１つの実施形態では、塩化ナトリウム濃度は、約７０〜１７０ｍＭ；約９０〜１５０ｍＭ；または約１１５±１０ｍＭである。特定の実施形態では、塩化ナトリウム濃度は、約７０、７５、８０、８５、９０、９５、１００、１０５、１１０、１１５、１２０、１２５、１３０、１３５、１４０、１４５、１５０、１５５、１６０、１６５、１７０、または１７５ｍＭである。１つの実施形態では、塩化ナトリウム濃度は、約１１５ｍＭである。別の実施形態では、塩化ナトリウム濃度は、１５０±１０ｍＭである。１つの実施形態では、塩化ナトリウム濃度は、約１５０ｍＭである。

「等張性」とは、処方物がヒト血液と本質的に同じ浸透圧を有することを意味する。等張性処方物は一般に、約２５０〜３５０ｍＯｓｍの浸透圧を持つであろう。蒸気圧または凝固点降下型の浸透圧計を用いて測定することができる。

特定の実施形態では、本発明による医薬処方物は、安定剤を含んでなる。安定剤としては、限定されるものではないが、ヒト血清アルブミン（ｈｓａ）、ウシ血清アルブミン（ｂｓａ）、α−カゼイン、グロブリン、α−ラクトアルブミン、ＬＤＨ、リゾチーム、ミオグロビン、オボアルブミン、およびＲＮアーゼＡが含まれる。安定剤としてはまた、アミノ酸およびそれらの代謝産物、例えば、グリシン、アラニン（α−アラニン、β−アラニン）、アルギニン、ベタイン、ロイシン、リシン、グルタミン酸、アスパラギン酸、プロリン、４−ヒドロキシプロリン、サルコシン、γ−アミノ酪酸（ＧＡＢＡ）、オピン（アラノピン、オクトピン、ストロンビン）、およびトリメチルアミンＮ−オキシド（ＴＭＡＯ）も含まれる。１つの実施形態では、安定剤はアミノ酸である。１つの実施形態では、前記アミノ酸はアルギニンである。１つの実施形態では、アルギニン濃度は、約２０〜３０ｍＭである。１つの実施形態では、アルギニン濃度は、約２５±２ｍＭである。

特定の実施形態では、本発明による医薬処方物は、非イオン性界面活性剤を含んでなる。非イオン性界面活性剤としては、限定されるものではないが、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル（例えば、ポリソルベート２０およびポリソルベート８０）、ポリエチレン−ポリプロピレンコポリマー、ポリエチレン−ポリプロピレングリコール、ポリオキシエチレン−ステアレート、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、例えば、ポリオキシエチレンモノラウリルエーテル、アルキルフェニルポリオキシエチレンエーテル（Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ）、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンコポリマー（ポロキサマー、プルロニック）、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）が含まれる。１つの実施形態では、非イオン性界面活性剤は、ポリソルベート８０である。１つの実施形態では、ポリソルベート８０濃度は、約０．００５〜０．０２％（ｗ／ｖ）である。１つの実施形態では、ポリソルベート８０濃度は、約０．０１％（ｗ／ｖ）である。１つの実施形態では、ポリソルベート８０濃度は、約０．０２％（ｗ／ｖ）である。

特定の実施形態では、本発明による医薬処方物は、金属キレーターを含んでなる。金属キレーターとしては、限定されるものではないが、ＥＤＴＡおよびＥＧＴＡが含まれる。１つの実施形態では、金属キレーターはＥＤＴＡである。１つの実施形態では、ＥＤＴＡ濃度は、約０．０１〜約０．０２ｍＭである。１つの実施形態では、ＥＤＴＡ濃度は、約０．０５ｍＭである。

１つの実施形態では、抗原結合タンパク質は、モノクローナル抗体またはそのフラグメントである。１つの実施形態では、モノクローナル抗体またはそのフラグメントは、マウス、キメラ、ヒト化、または完全にヒトである。１つの実施形態では、モノクローナル抗体またはそのフラグメントは、ＢＬｙｓまたはＩＬ−１３と結合する。

一態様において、本処方物は、抗原結合タンパク質、ヒスチジン、アルギニン、ＮａＣｌ、およびポリソルベート８０を含んでなる。別の態様において、本処方物は、約２００ｍｇ／ｍＬの抗原結合タンパク質、約１０ｍＭのヒスチジン、約２５ｍＭのアルギニン、約１１５ｍＭのＮａＣｌ、および約０．０１％のポリソルベート８０を約ｐＨ６．０で含んでなる。１つの実施形態では、抗原結合タンパク質は、ＢＬｙｓと結合する。

１つの実施形態では、本発明の医薬処方物は、約２００ｍｇ／ｍＬの抗原結合タンパク質；約６．２５の、ｐＨ約１５ｍＭのヒスチジン；約１５０ｍＭのＮａＣｌ；約０．０２％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０；および約０．０５ｍＭのＥＤＴＡを提供する。１つの実施形態では、抗原結合タンパク質は、ＩＬ−１３と結合する。

一態様において、本発明の医薬処方物は、凍結および解凍に安定である。「安定な」処方物は、その中の全てのタンパク質が、意図される保存温度、例えば、２〜８℃で保存した際にそれらの物理的安定性および／または化学安定性および／または生物活性を本質的に保持するものである。本処方物は保存時にその物理的および化学的安定性、ならびにその生物活性を本質的に保持することが望ましい。保存期間は一般に、処方物の意図される貯蔵寿命に基づいて選択される。さらに、本処方物は、処方物の凍結（例えば−７０℃）および解凍後、例えば、１、２または３サイクルの凍結および解凍後に安定であるべきである。当技術分野ではタンパク質の安定性を測定するための種々の分析技術が利用可能であり、例えば、Peptide and Protein Drug Delivery, 247-301, Vincent Lee Ed., Marcel Dekker, Inc., New York, N.Y., Pubs. (1991)およびJones, A. Adv. Drug Delivery Rev. 10: 29-90 (1993)に総説されている。安定性は、選択された温度で、選択された期間を測定することができる。安定性は、凝集形成の評価（例えば、サイズ排除クロマトグラフィーの使用、濁度の測定による、および／または目視検査による）；陽イオン交換クロマトグラフィーまたはキャピラリーゾーン電気泳動を用いた電荷の不均質性の評価による；アミノ末端またはカルボキシ末端配列分析；質量分析；ＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析による還元抗体と完全抗体の比較；ペプチドマップ（例えば、トリプシンまたはＬＹＳ−Ｃ）分析；抗体の生物活性または抗原結合機能の評価などを含む、様々な異なる方法で定性的および／または定量的に評価することができる。

１つの実施形態では、本発明の医薬処方物は、皮下または筋肉内投与に適している。

クエリーアミノ酸配列と対象アミノ酸配列の間の「同一性パーセント」は、ペアワイズＢＬＡＳＴＰアラインメントが実行された後にクエリーアミノ酸配列との１００％のクエリー被覆率を有する場合にＢＬＡＳＴＰアルゴリズムにより計算されるパーセンテージとして表される「同一性」値である。クエリーアミノ酸配列と対象アミノ酸配列の間のこのようなペアワイズＢＬＡＳＴＰアラインメントは、Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｃｅｎｔｅｒ ｆｏｒ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅのウェブサイトで利用可能なＢＬＡＳＴＰアルゴリズムのデフォルト設定を用い、低複雑性領域のフィルターをオフにして実行される。重要なこととしては、クエリーアミノ酸配列は、本明細書の１以上の請求項で特定されるアミノ酸配列のより記載され得る。

クエリー配列は対象配列と１００％同一であってもよいし、またはそれは対象配列に比べて、同一性％が１００％未満となるように、特定の整数までのアミノ酸変異を含んでもよい。例えば、クエリー配列は、対象配列と少なくとも５０、６０、７０、７５、８０、８５、９０、９５、９６、９７、９８、または９９％同一である。このような変異としては、少なくとも１つのアミノ酸の欠失、置換（保存的置換および非保存的置換を含む）、または挿入を含み、前記変異は、クエリー配列のアミノ末端もしくはカルボキシ末端の位置に、あるいはそれらの末端の位置の間のいずれかの位置に、クエリー配列内のアミノ酸間に個々に、またはクエリー配列内の１以上の連続する群に挿入されて存在し得る。

同一性％は、１または複数のＣＤＲを含むクエリー配列の全長にわたって決定され得る。あるいは、同一性％は、１または複数のＣＤＲを除外してもよく、例えば、１または複数のＣＤＲは、対象配列と１００％同一であり、同一性％の変動はクエリー配列の残りの部分にあり、従って、ＣＤＲ配列は固定されている／完全である。

１つの実施形態では、抗原結合タンパク質は、モノクローナル抗体またはそのフラグメントである。１つの実施形態では、モノクローナル抗体またはそのフラグメントは、マウス、キメラ、ヒト化、または完全にヒトである。１つの実施形態では、モノクローナル抗体またはそのフラグメントは、ＢＬｙＳ（配列番号１）またはＢＬｙＳのヘテロまたはホモ三量体型と結合し、例えば、モノクローナル抗体またはそのフラグメントは、ＢＬｙｓの可溶型（配列番号１０）と結合する。１つの実施形態では、モノクローナル抗体は、それぞれ配列番号２と９０％同一の、もしくは９１％同一、もしくは９２％同一、もしくは９３％同一、もしくは９４％同一、もしくは９５％同一、もしくは９６％同一、もしくは９７％同一、もしくは９８％同一、もしくは９９％同一であり、および、配列番号３と９０％同一、もしくは９１％同一、もしくは９２％同一、もしくは９３％同一、もしくは９４％同一、もしくは９５％同一、もしくは９６％同一、もしくは９７％同一、もしくは９８％同一、もしくは９９％同一であるアミノ酸配列、またはそれぞれ配列番号４と９０％同一の、もしくは９１％同一、もしくは９２％同一、もしくは９３％同一、もしくは９４％同一、もしくは９５％同一、もしくは９６％同一、もしくは９７％同一、もしくは９８％同一、もしくは９９％同一であり、および配列番号５と９０％同一の、もしくは９１％同一、もしくは９２％同一、もしくは９３％同一、もしくは９４％同一、もしくは９５％同一、もしくは９６％同一、もしくは９７％同一、もしくは９８％同一、もしくは９９％同一であるアミノ酸配列を含んでなる重鎖および軽鎖可変領域を含んでなる。１つの実施形態では、モノクローナル抗体は、それぞれ配列番号２および３と９５％同一であるアミノ酸配列、またはそれぞれ配列番号４および５と９５％同一であるアミノ酸配列を含んでなる重鎖および軽鎖可変領域を含んでなる。１つの実施形態では、モノクローナル抗体は、それぞれ配列番号２および３と９０％同一であるアミノ酸配列、またはそれぞれ配列番号４および５と９０％同一のであるアミノ酸配列を含んでなる重鎖および軽鎖可変領域を含んでなる。１つの実施形態では、モノクローナル抗体は、それぞれ配列番号２および３、またはそれぞれ配列番号４および５で示されるアミノ酸を含んでなる重鎖および軽鎖可変領域を含んでなる。１つの実施形態では、モノクローナル抗体は、それぞれ配列番号６と９１％同一、もしくは９２％同一、もしくは９３％同一、もしくは９４％同一、もしくは９５％同一、もしくは９６％同一、もしくは９７％同一、もしくは９８％同一、もしくは９９％同一である、および配列番号７と９１％同一、もしくは９２％同一、もしくは９３％同一、もしくは９４％同一、もしくは９５％同一、もしくは９６％同一、もしくは９７％同一、もしくは９８％同一、もしくは９９％同一であるアミノ酸配列、またはそれぞれ配列番号８と９１％同一、もしくは９２％同一、もしくは９３％同一、もしくは９４％同一、もしくは９５％同一、もしくは９６％同一、もしくは９７％同一、もしくは９８％同一、もしくは９９％同一である、および配列番号９と９１％同一、もしくは９２％同一、もしくは９３％同一、もしくは９４％同一、もしくは９５％同一、もしくは９６％同一、もしくは９７％同一、もしくは９８％同一、もしくは９９％同一であるアミノ酸配列を含んでなる重鎖および軽鎖を含んでなる。１つの実施形態では、モノクローナル抗体は、それぞれ配列番号６および７と９５％同一であるアミノ酸配列、またはそれぞれ配列番号８および９と９５％同一であるアミノ酸配列を含んでなる重鎖および軽鎖を含んでなる。１つの実施形態では、モノクローナル抗体は、それぞれ配列番号６および７と９０％同一であるアミノ酸配列、またはそれぞれ配列番号８および９と９０％同一であるアミノ酸配列を含んでなる重鎖および軽鎖を含んでなる。１つの実施形態では、モノクローナル抗体は、それぞれ配列番号６および７、またはそれぞれ配列番号８および９で示されるアミノ酸配列を含んでなる重鎖および軽鎖を含んでなる。１つの実施形態では、モノクローナル抗体は、配列番号１１、１２、１３、１４、１５および１６で示されるアミノ酸配列を含んでなるＣＤＲを含んでなる。１つの実施形態では、抗ＢＬｙＳ抗体は、ベリムマブ、タバルマブ、およびそれらの混合物の群から選択される。１つの実施形態では、抗ＢＬｙｓ抗体は、配列番号６および７で示される重鎖および軽鎖配列を含んでなる。

１つの実施形態では、本発明による医薬処方物は、２００±２０ｍｇ／ｍＬ濃度のモノクローナル抗体を含んでなる。１つの実施形態では、抗体濃度は約２００ｍｇ／ｍＬである。１つの実施形態では、抗ＢＬｙＳ抗体は、コルチコステロイドと同時にまたは逐次に併用投与される。１つの実施形態では、コルチコステロイドは、プレドニゾン、プレドニゾロン、ヒドロコルチゾン、メチルプレドニゾロンおよびデキサメタゾンからなる群から選択される。１つの実施形態では、コルチコステロイドはプレドニゾンである。

１つの態様において、本発明は、抗ＢＬｙＳ抗体で処置可能な疾患または障害の処置のための前記請求項に記載の医薬処方物を提供する。１つの実施形態では、本発明は、対象における抗ＢＬｙＳ抗体で処置可能な疾患または病態を処置する方法であって、本発明による処方物を対象に、前記疾患または病態を処置するのに有効な量で投与することを含んでなる方法を対象とする。１つの実施形態では、疾患または病態は、全身性紅斑性狼瘡、抗好中球細胞質抗体（「ＡＮＣＡ」）血管炎、狼瘡腎炎、原発シェーグレン症候群、慢性免疫血小板減少症、重症筋無力症、症候性ワルデンストレームマクログロブリン血症、腎移植待機患者の免疫脱感作、膜性腎症、全身性硬化症、関節リウマチ、多発性骨髄腫、多発性硬化症、および腎不全からなる群から選択される。別の態様において、本発明は、全身性紅斑性狼瘡、抗好中球細胞質抗体（「ＡＮＣＡ」）血管炎、狼瘡腎炎、原発シェーグレン症候群、慢性免疫血小板減少症、重症筋無力症、症候性ワルデンストレームマクログロブリン血症、腎移植待機患者の免疫脱感作、膜性腎症、全身性硬化症、関節リウマチ、多発性骨髄腫、多発性硬化症、および腎不全からなる群から選択される疾患の処置において使用するための処方物を提供する。別の態様において、本発明は、全身性紅斑性狼瘡の処置において使用するための処方物を提供する。別の態様において、本発明は、全身性紅斑性狼瘡、抗好中球細胞質抗体（「ＡＮＣＡ」）血管炎、狼瘡腎炎、原発シェーグレン症候群、慢性免疫血小板減少症、重症筋無力症、症候性ワルデンストレームマクログロブリン血症、腎移植待機患者の免疫脱感作、膜性腎症、全身性硬化症、関節リウマチ、多発性骨髄腫、多発性硬化症、および腎不全からなる群から選択される疾患の処置のための薬剤の製造における処方物の使用を提供する。別の態様において、本発明は、全身性紅斑性狼瘡の処置のための薬剤の製造における処方物の使用を提供する。

１つの態様において、本発明は、本発明の処方物を含有する１以上のバイアルと患者への前記処方物の皮下投与に関する説明書とを含んでなるキットを提供する。１つの実施形態では、本キットは、患者への処方物の皮下投与のための注射デバイスをさらに含んでなる。

１つの実施形態では、本発明は、本明細書に記載の安定な抗ＢＬｙＳ抗体処方物を含んでなる注射デバイスを対象とする。皮下送達のためには、本処方物は、（限定されるものではないが）シリンジ；注射デバイス（例えば、ＩＮＪＥＣＴ−ＥＡＳＥ（商標）およびＧＥＮＪＥＣＴ（商標）デバイス）；注入ポンプ（例えば、Ａｃｃｕ−Ｃｈｅｋ（商標））；インジェクターペン（例えば、ＧＥＮＰＥＮ（商標）；または無針デバイス（例えば、ＭＥＤＤＥＣＴＯＲ（商標）およびＢＩＯＪＥＣＴＯＲ（商標））などの好適なデバイスを介して投与され得る。

本発明による医薬処方物は、目に見える（ヒト目視）粒子を本質的に含まない。肉眼では見えない粒子（光遮蔽によって測定される）は、以下の判定基準を満たすべきである：粒子の最大数≧１０μｍ／バイアル−＞６０００；粒子の最大数≧２５μｍ／バイアル−＞６００。

本発明による薬学的に有効な抗ＢＬｙＳ抗体の医薬処方物は、皮下注射として投与することができ、それにより、投与は１、２、３、または４週間の時間間隔で数回繰り返される。１つの実施形態では、薬学的に有効な抗ＢＬｙＳ抗体の医薬処方物は、毎週１回または２週間に１回投与される。注射液の全量は、ほとんどの場合、１〜１０分、好ましくは２〜６分、最も好ましくは３±１分の時間内に投与される。

疾患の予防または治療のため、抗体の適当な用量は、上記に定義されるような処置される疾患のタイプ、疾患の重篤度および経過、抗体が予防目的で投与されるか治療目的で投与されるか、過去の療法、患者の臨床歴および患者の抗体に対する応答、および担当の医師の裁量によって異なる。抗体は好適には、１回または一連の処置として患者に投与される。疾患のタイプおよび重篤度に応じて、例えば、１回以上の独立した投与であれ、または連続的注入によるものであれ、約１μｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇ体重、またはより具体的には約０．１ｍｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇ体重）の抗体が、患者への投与の候補的初回投与となる。より具体的には、抗体の用量は、約０．０５ｍｇ抗体／ｋｇ体重〜約１０ｍｇ抗体／ｋｇ体重の範囲内であろう。

本発明の別の実施形態では、本発明の医薬処方物を含有し、かつ、その使用に関する説明書を提供する製品が提供される。この製品は、容器を含んでなる。好適な容器としては、例えば、ボトル、バイアル（例えば、マルチプルまたはデュアルチャンバーバイアル）、シリンジ（例えば、マルチプルまたはデュアルチャンバーシリンジ）および試験管が含まれる。容器は、ガラスまたはプラスチックなどの様々な材料から形成されてよい。容器は、処方物と、その上に、またはそれと組み合わせられたラベルを保持し、その容器は使用に関する指示を示し得る。処方物を保持する容器は、再構成処方物の反復投与（例えば、２〜６回投与）を可能とする多回使用バイアルであってもよい。製品は、他の緩衝剤、希釈剤、フィルター、針、シリンジ、および使用説明を記載した添付文書を含め、商業的および使用者の立場から望ましい他の材料をさらに含む。

本発明に従って処方される抗体は、好ましくは本質的に純粋、望ましくは本質的に均質である。「本質的に純粋な」抗体とは、組成物の総重量に基づき少なくとも約９０重量％、好ましくは、少なくとも約９５重量％の抗体を含んでなる組成物を意味する。「本質的に均質な」抗体とは、組成物の総重量に基づき少なくとも約９９重量％の抗体を含んでなる組成物を意味する。

本発明は、以下の実施例を参照することでより詳しく理解される。それらは単に例示であり、本発明の範囲を限定すると見なされるべきでない。手順における微細な変動、例えば、時間、温度、量、濃度、規模などの微細な変化は実験の結果に影響を及ぼすとは考えられない。総ての文献および特許の引用は、参照により本明細書の一部とされる。

実施例は添付の図１〜２０によりさらに示される。

実施例１：ベリムマブ処方物
容器の閉鎖
そうではないことが述べられない限り、総ての試験でＤａｉｋｙｏ Ｄ２１−７Ｓ Ｆｌｕｒｏｔｅｃ（商標）栓およびフリップオフアルミニウムシールを備えたＳｃｈｏｔｔ Ｉ型バイアルを使用した。このバイアルと栓の組合せは、第１相構成として推奨される。＞２〜８℃で保存された長期安定性サンプルは、Ｓｔｅｌｍｉ ４８００ニードルシールドおよびＤａｉｋｙｏ Ｗ４０２３ Ｆｌｕｒｏｔｅｃ（商標）プランジャーを備えたＧｅｒｒｅｓｈｅｉｍｅｒ １．０ｍＬ長、２９Ｇ、薄壁、スタックド（ｓｔａｋｅｄ）、プレフィルドシリンジを使用し、窒素オーバーレイ下の真空で準備した。サンプル＜２〜８℃を低温バイアルに充填した。

製品取り扱い法
総ての実験前に、ベリムマブを０．２２μｍフィルターで無菌濾過し、選択された密閉容器に無菌的に充填した。保存中、総ての安定性サンプルを遮光した。

賦形剤の選択
ＧＭＰ ＢＤＳおよびＦＤＰ製造に義務づけられた複数の公定賦形剤を、スクリーニング試験では可能であれば使用し、長期安定性試験では総ての処方物に使用した。

表２は、供試処方物の一覧を示す。

長期安定性
処方物１の濃度依存的凝集
予想されたように、凝集はタンパク質濃度とともに増加した（表３、図１）。凝集速度は１００ｍｇ／ｍＬから２６０ｍｇ／ｍＬの間でおよそ２倍になるが、２６０ｍｇ／ｍＬであっても、２００ｍｇ／ｍＬベリムマブで２〜８℃にて３年間、凝集におよそ１％の増加をもたらすに過ぎない。ＳＥＣ−ＨＰＬＣにより見られた凝集の開始量は、タンパク質濃度が増すにつれて増加するが、およそ０．１％だけであった（表３の０か月の行）ことに留意されたい。

長期処方物候補スクリーン
以下の結果に基づき、３か月データの評価の後に処方物候補を処方物１と５に絞り、その後、５ １／４か月の後に、最終的処方物として処方物５を選択した。

外観、ｐＨ、およびモル浸透圧濃度
総てのサンプルはオパール色の淡黄色であり、５ １／４か月までの総ての時点で目に見える粒子物質を含まなかった。最終的な製剤は、８種類の処方物の総てにおいて３種類の濃度の総てで、開始時点で比色法により試験した場合のＹ５カラースタンダードに最もよく一致していた。ヒスチジン／ＮａＣｌ処方物（本明細書では処方物１と呼称）およびヒスチジン／ＮａＣｌ／アルギニン処方物（本明細書では処方物５と呼称）中のＦＤＰサンプルも総て、２〜８℃での３か月および５ １／４か月の保存後にＹ５スタンダードと一致していた。糖安定剤（スクロースおよびソルビトール）を含むサンプルの濁度は、他の総てのサンプルよりも有意に低く、開始時および３か月の時点で２９〜３８ＮＴＵの範囲であった。また、ＮａＣｌ含有サンプルの濁度は、タンパク質濃度が低下するにつれ増加した。処方物１および５のみを２〜８℃で５ １／４か月後に試験したが、処方、濃度または時間に対する応答を示さなかった（図２）。

総てのサンプルのｐＨは、開始時点で６．１〜６．３の範囲であり、処方物１および５では５ １／４か月後も変化しなかった（処方物５のデータを表１３に示す）。モル浸透圧濃度は開始時点でのみ試験し、総てのサンプルで２９９＋／−１７ｍＯｓｍ／ｋｇであった。

粘度および注射針通過性
糖含有処方物（スクロース、ソルビトール）は最高粘度を示し、コハク酸／塩化ナトリウム処方物がそれに次いだ（表５）。残りの塩含有サンプルも匹敵するものであった。処方物１および５では、粘度は、タンパク質濃度が増加するにつれて指数関数的に増大した（図３）。

１０秒で薄壁２９Ｇ針を通して１ｍＬを送達するのに必要な力として測定される注射針通過性は、開始時点で同様の傾向を示した。５ １／４か月後、処方物１および５のみを試験し、２〜８℃で経時的に見られる注射針通過性に有意な増大はなかった。５ １／４か月時点で、各シリンジの１つで２０秒での注射針通過性も試験し、送達力は、送達時間が倍になった場合に最大４０％低下することが示された。試験しなかったが、送達力は針のゲージを増すことによっても低下させることができる。

手動力を必要とすることからプレフィルドシリンジにより類似する７つの市販のペンインジェクターを通して薬物を投与するのに必要な力は、２００ｍｇ／ｍＬのベリムマブに関する力と同等である（表７）。注射時間は容量および容器径の違いのために異なり、比較のために表７に示す。最後に、英国貿易産業省により委託されたノッティンガム大学での試験は、着座中、１６〜９０歳の間の５９名の女性は、腰の高さで、親指で、５３．７〜２３７．７Ｎの下向きの静的力をかけることができたるここと示した。ペンインジェクターデータも力の試験もプレフィルドシリンジの使用と完全に相関するものではないが、両データセットとも、２００ｍｇ／ｍＬベリムマブの粘度および注射針通過性が手による投与を禁じるものではないということを確信させる。しかしながら、１ｍＬ長のプレフィルドシリンジから２９Ｇの薄壁針を通して２００ｍｇ／ｍＬベリムマブを送達するのに必要な力は、手による注射の望ましい限界かその付近であり、より幅の広い針が好ましいと思われる。

サイズの変動
３か月ＳＥＣ−ＨＰＬＣデータ
ＳＥＣ−ＨＰＬＣにより見られた凝集は、総ての処方物でベリムマブの主要な濃度依存的経路であった。断片化パーセント（バックショルダーとして見られる）は０．１〜０．２％の間で変動したが、時間が経っても変化しなかった（５ １／４か月のデータにより裏づけられる）。

２〜８℃で３か月後、８種類の処方物中に処方されたベリムマブ間で凝集速度に明確な違い（図４）が見られた。処方物５（ヒスチジン／ＮａＣｌ／アルギニン）は、３か月にわたって、特に２００ｍｇ／ｍＬで最低の速度を示した（図４の青色）。これは２００ｍｇ／ｍＬでの加速傾向によって裏づけられる（図５）。コハク酸は、低温度では最も不良な安定剤であったが、高温下では最良であった。処方物１（ヒスチジン／ＮａＣｌ）を含め、他の多くの塩および糖処方物は、同等の確かな凝集パーセンテージおよび凝集速度を示した。

５ １／４か月のＳＥＣ−ＨＰＬＣデータ
処方物１および５中のベリムマブを５ １／４か月後に評価した。３か月で見られた傾向は継続し、アルギニン含有処方物は、特に２００ｍｇ／ｍＬの最高濃度でより低い凝集速度を示す。図６は、最大２５℃で５ １／４か月後の凝集速度を示し、アルギニン処方物（グラフの白い四角）は、処方物１（黒い四角）に比べて有意に凝集を低下させることを示す。図７で、種々の温度での凝集速度のさらなる分析は、以下に一貫して処方物５（破線）が処方物１（実線）よりも低い凝集速度を示すかを示す。５ １／４か月までに見られた２〜８℃での凝集速度を３年間保持すれば、ＦＤＰはおよそ１．２％増加するだけである。

ＣＧＥ
処方物１および５の還元キャピラリーゲル電気泳動は、種々の温度で５ １／４か月保存後に何の傾向も示さなかった（図８に示す率）。よって、架橋およびクリッピングは濃度または処方物に依存しない。

電荷の不均質性
イオン交換は、濃度もヒスチジン緩衝塩処方物へのアルギニンの添加も電荷変異体に影響を及ぼさないことを示す（図９）。酸性変異体は高温で経時的に増加するが、高温下で、５ １／４か月後に変異体の変化はほとんど、ないし全く見られなかった。

酸化
２〜８℃で３か月保存後の８種類の処方物のいずれにも酸化に有意な変化は見られなかった（データは示されていない）。５ １／２か月後、−８０℃と１５℃のデータを比較すると、処方物１と５の間で、またはいずれかの処方物で３種類の濃度間で酸化に違いは見られなかった（図１０）。総てのサンプルで、２５℃で５ １／４か月保存後におよそ１．０％のさらなる酸化が見られ、４０℃ではおよそ４．５％のさらなる酸化が見られた。

ペプチドマッピング
５ １／４か月後に、２００ｍｇ／ｍＬの処方物１の−８０℃サンプルと２〜８℃サンプルまたは参照標準との間で違いは見られなかった（図１１）。２５℃サンプルは、温度の加速化で予想されるように、Ｔ４の脱アミド化に小さな増加を示した。処方物５サンプルも同様に、２５℃でＴ４の脱アミド化を示しただけでなく、他のいくつかのペプチドピーク（図１２の重鎖のＴ３３、Ｔ３４およびＴ５、軽鎖のＴ３）に一貫性のないピークの高さも示した。これらのピークの高さは温度による傾向を示さず、従って、アルギニンによる消化干渉が疑われた。

アルギニン干渉が変動の原因であったどうか判定するために、０、２５および５０ｍＭのアルギニンを本方法の脱塩公定を経た処方物１サンプルに加えた。次に、３種類のサンプルの総てに、トリプシン消化を含む残りの工程を実施した。安定性サンプルにおいて変動性を示した同じペプチドピークは、アルギニン濃度と相関した応答を示した（図１３）。これは、アルギニンが脱塩工程により常に完全に除去されるわけではないことを示し、処方物５中に処方されたサンプルのペプチドマップにおいて見られた温度依存的な変動を説明する。ペプチドマップに他の改変は見られなかったので、これらのマップにおける違いにも関わらず、処方物１および５には２〜８℃で５ １／４か月後に観測可能な分解は無く、２５℃で５ １／４か月後の分解も最小に過ぎなかった。

効力
ベリムマブは、１２５〜２００ｍｇ／ｍＬの間の処方物１または処方物５のいずれか中で、２〜８℃で３か月の保存の後に、２００ｍｇ／ｍＬの処方物５中では５ １／４か月後に、生物学的に活性を維持する（表８）。

凍結／解凍の評価
−４０℃と２〜８℃の間で５回の急速凍結／解凍サイクルに曝したサンプルは、−４０℃対照サンプルと同等の凝集量を示し、これは処方物１または処方物５のいずれでも急速凍結／解凍は問題が無いことを示す（表９）。

３回の緩慢凍結／解凍サイクルに曝したサンプルは、液体対照に比べて凝集レベルに０．２％増を示した（表１０）。

ＤＳＣ
熱量測定を用い、各処方物の氷点下ガラス転移（Ｔｇ’）を評価し、氷点下共晶が形成されたどうかを決定した。塩化ナトリウム−水共晶はおよそ−２１℃未満で形成可能であり、賦形剤の共晶結晶化は、結晶性表面の相互作用を導入し、タンパク質を含有する凍結濃縮物中の局部的化学的環境を変化させることによって生成物の質に影響を及ぼし得る。Ｔｇ’未満での保存は、緩和時間を延長し、関連の分解を軽減することにより安定性を改善し得る。

高濃度ベリムマブの処方物１および５は、氷点下転移に関して同様の挙動を有していた（表１１）。処方物１では、Ｔｇ’は−２３℃（急速凍結）〜−３３℃（緩慢凍結）の範囲であった。処方物５では、Ｔｇ’は−２２℃（急速凍結）〜−３２℃（緩慢凍結）の範囲であった。両処方物とも、共晶吸熱は、−２３℃での複数回のアニーリング工程を伴う温度周期の後にのみ見られた。共晶は塩化ナトリウム−水である可能性が最も高い。

これらの結果は、これらの処方物の氷点下温度転移はこのサンプルの熱履歴に感受性があることを示す。これはおそらく溶解した固体が高含量であることおよび塩化ナトリウムの存在によるものであり、これらはタンパク質／非晶質相のＴｇ’に影響を及ぼし得る。この結果はまた、第５．２節からの−８０℃および−４０℃の安定性データと合わせると、処方物５中のベリムマブには、ＢＤＳの＜−４０℃での保存と光からの保護で十分であることを示す。

振盪の評価
２５０ｒｐｍでの４８時間の振盪後、検討したポリソルベート濃度の範囲で、バイアルまたはシリンジのいずれかでＳＥＣ−ＨＰＬＣまたは濁度により純度の有意な変化は無かった（表１２）。０．０１％ポリソルベート８０は、バイアルおよびシリンジの両方で、処方物５において振盪に対する保護として有効かつロバストであることが示された。

結論
２００ｍｇ／ｍＬでのベリムマブの皮下投与のための処方物は、主要分解経路速度を最小とするその能力に基づいて選択した（処方物５；０．６５ｍｇ／ｍＬのＬ−ヒスチジン、１．２ｍｇ／ｍＬのＬ−ヒスチジン一塩酸塩、６．７〜−７．３ｍｇ／ｍＬの塩化ナトリウム、５．３ｍｇ／ｍＬのＬ−アルギニン塩酸塩、０．１ｍｇ／ｍＬのポリソルベート８０、ｐＨ６．０；あるいはまた、１０ｍＭのヒスチジン、１１５ｍＭの塩化ナトリウム、２５ｍＭのＬ−アルギニン塩酸塩、０．０１％（ｗ／ｖ）のポリソルベート８０、ｐＨ６．０）。凝集速度（２〜８℃で約０．０３％／月）はベリムマブ濃度とともに増大することが示されたが、２５ｍＭのアルギニンの使用により阻害された。脱アミド化速度は２〜８℃でおよそ０．２％／月であった。２００ｍｇ／ｍＬ処方物は、１ｍＬのロングシリンジと２９Ｇ薄壁または幅広針を用いた手動またはオートインジェクター送達に許容可能な送達力を有する。凍結／解凍特性ならびに−８０℃および−４０℃での保存は許容可能であることが示され、この製品は振盪応力に感受しない。

長期ＧＭＰ安定性試験を、処方物５中２００ｍｇ／ｍＬのベリムマブ最終製剤（１．０ｍＬロングＢＤシリンジに１．０ｍＬを充填）で行った。これまでに、２〜８℃の意図される保存温度で４２か月のＧＭＰ安定性データが存在する（表１４）。これらの結果は、処方物５がベリムマブに十分な安定性を与えることを示し、２〜８℃の意図される保存温度で許容可能な分解特性が見られた（表１４）。

実施例２：抗ＩＬ１３は高濃度−高用量ｍＡｂである
抗ＩＬ１３は、ヒトインターロイキン−１３（ＩＬ１３）に対するグリコシル化されたヒト化ｍＡｂ（ＩｇＧ１）である。ＰＫ／ＰＤモデル化に基づく皮下送達のための超高臨床用量（１０ｍｇ／ｋｇ）を達成するために、原体および製剤は、バイアル剤形で２００ｍｇ／ｍＬの濃度で開発される必要があった。バイアル中でＡｂのはるかに高い濃度を達成する直接の結果として、（ｉ）皮下送達を介した高臨床用量での送達を意図する高濃度モノクローナル抗体の安定性、製造性、分析および送達上の問題を補助することができるユニークな処方物を特定すること、（ｉｉ）高濃度のモノクローナル抗体のゲル化によって起こる分析および安定性上の問題を回避すること、（ｉｉｉ）特に１．５ｍＬ以下の注射容量のモノクローナル抗体の送達の際に起こり得る種々の関連問題を回避することなどの、抗ＩＬ１３に関する種々の処方物の問題が提示される。処方物開発研究中に直接的発見が明らかになったので、このモノクローナル抗体は高温下での特定の緩衝剤系において、マトリックスのような不可逆的ゲルを形成する傾向があったと判定され、従って、タンパク質の不安定性の重大なリスクを有する。粘度は濃度とともに指数関数的に増大し、濾過工程を複雑にし得る。高濃度のモノクローナル抗体ほど高い凝集感受性を持ち、粒子形成および可逆的自己会合の高いリスクを持つ。よって、高臨床用量を提供するように設計された高濃度モノクローナル抗体を補助するための新たな処方物の最適な緩衝剤およびｐＨを特定するために、ハイスループット処方物（ＨＴＦ）の開発研究を行った。これらは、他のベンチトップ研究とともに、高温下でゲル化減少を回避した最適な処方物を特定した。さらなる処方物開発研究は、選択された緩衝剤系に含まれるべき種々の賦形剤を特定した。これらは、物理的安定性を評価するための振盪、凍結−解凍、および高温試験と、その後の抗ＩＬ１３ ｍＡｂの化学安定性を評価するための短期および長期安定性試験であった。臨床送達考慮事項が満たされることを保証するための、種々の他の試験も行った。

実施例３：ＨＴＦ ｐＨ緩衝剤スクリーニング：（目標ｐＨおよび緩衝剤の特定）
従前に試験した５０ｍｇ／ｍＬの抗ＩＬ１３モノクローナル抗体のための酢酸に基づく処方物は、ｐＨが最適でなかったことがすでに確認された。最適以下の調剤緩衝剤（処方物緩衝剤）ｐＨは、タンパク質の電荷を変化させ、静電気的相互作用に影響を及ぼすことにより、より高濃度の抗ＩＬ１３モノクローナル抗体溶液の不安定性を増し得る。高濃度処方物の開発は、最適ｐＨの特定ならびに最良の緩衝剤種の決定で開始した。

試験は１３ｍｇ／ｍＬのｍＡｂ濃度で行った。緩衝剤のスクリーニングは、９６ウェルプレートでのＨＴＦ法の手段により行った。この試験は、広範囲の緩衝剤のタイプおよびｐＨ水準からなった。各プレートは、無作為な順序で２反復の４８サンプルからなった。サンプルは５０℃／周囲ＲＨで３日間のストレスに曝した。試験は、一般外観（ＧＡ）、Ａ２８０およびＡ２６０ｎｍでの濃度、ｐＨ、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）、キャピラリー等電点電気泳動（ｃＩＥＦ）および動的光散乱（ＤＬＳ）を含んだ。試験因子を表１５に示す。

プレートの一般外観検査の結果は、特に酢酸、クエン酸およびリン酸緩衝剤中のサンプルの一部で高レベルの沈澱を明らかにした。コハク酸緩衝剤が、沈澱を示さない唯一の緩衝剤であった。

それぞれｃＩＥＦおよびＳＥＣによる総てのサンプルに関して、脱アミド化および凝集プロファイルを作成した。図１４は、ｃＩＥＦおよびＳＥＣデータの重畳したプロットを示す。このプロットは、ＳＥＣにより最高モノマー％を有する処方物はまたｃＩＥＦによりメイン％の低下も有したことを示し、これは、抗ＩＬ１３は低ｐＨでは凝集し、高ｐＨは脱アミド化することを示す。緩衝剤の種類にかかわらず、ｐＨが６〜７の場合にはｐＨ４〜５．５の場合よりもモノマー％は高いことを見て取ることができる。

全体的に見れば、ＨＴＦ ｐＨ緩衝剤スクリーニングは以下の結論を導いた：（ｉ）ＧＡで決定されるように、クエン酸および酢酸緩衝剤は、最高数の曇りのあるウェル（沈澱の徴候）をもたらしたこと、および（ｉｉ）ｃＩＥＦおよびＳＥＣ結果に基づけば、リン酸緩衝剤は、凝集および脱アミド化を増加させるとともに沈澱形成を促進したこと、および（ｉｉｉ）抗ＩＬ１３は低ｐＨでは凝集し、高ｐＨでは脱アミド化すること。

実施例４：ＨＴＦ ｐＨ緩衝剤スクリーニング：（最適ｐＨの決定）
第２のＨＴＦ試験を合計９０サンプルからなる３×３因子（３種の緩衝剤、３種のｐＨ）ＤＯＥ計画に基づいて実施した。評価のために選択された緩衝剤としては、酢酸、ヒスチジンおよびコハク酸を５．５〜６．５の間の最終ｐＨ範囲で含んだ。これらの緩衝剤は２５ｍＭの固定濃度となるように選択した。この計画は、ストレスプレート上で比較のための対照とするための６反復の酢酸処方物とともに、各処方物について６反復を可能とした。

各プレートを５０℃／周囲ＲＨで３日間のストレスに曝した。試験には、選択されたサンプルに関する一般外観（ＧＡ）、Ａ２８０およびＡ２６０ｎｍでの濃度、ｐＨ、ＳＥＣ、ｃＩＥＦ、ＤＬＳおよびＤＳＣ（示差走査熱量測定）を含んだ。

試験の結果は、Ｄｅｓｉｇｎ Ｅｘｐｅｒｔとして知られる統計ソフトウエアにより解析した。同ソフトウエアを用いて総てのアッセイ結果に分散分析（ＡＮＯＶＡ）を行った際に興味深い結果が明らかになった。緩衝剤種およびｐＨは、濃度、補正濃度、ＤＬＳ、ＳＥＣおよびｃＩＥＦによる結果に有意な因子であることが判明した。

図１５は、ＳＥＣモノマー％に対するｐＨと緩衝剤種の間の相互作用を示す。酢酸緩衝剤およびヒスチジン緩衝剤の両方について、モノマー％はｐＨが増すにつれ増加した。図１６は、ｃＩＥＦに関するメイン％に対するｐＨと緩衝剤の相互作用を示す。ｐＨおよび緩衝剤は両方とも、有意であることが判明した。このプロットから、５．５〜６．５の範囲ｐＨは、酢酸またはコハク酸のいずれに関してもメイン％に影響を及ぼすとは思われないが、ヒスチジンには影響を及ぼす。

全体的に見て、ＨＴＦ ｐＨ緩衝剤スクリーニングは、最終最適ｐＨ６．２５の選択に至った。

実施例５：ＤＳＣによる熱安定性プロファイルに基づく最適温度ストレス条件の決定
濃度、ｐＨ、塩含量などのタンパク質のゲル化に影響を及ぼす可能性のある種々の中で、この現象を支配する１つの重要な因子としての温度がある。ＨＴＦおよびその他の開発試験によって試験された抗ＩＬ１３に関して選択された熱安定性条件を、ＤＳＣにより評価した。一般に、中サイズの球状タンパク質は２５℃前後で脱フォールディングし始め、モノクローナル抗体では、それは６０℃前後である。総ての供試緩衝剤（酢酸、ヒスチジンおよびコハク酸）下でのこのｍＡｂの脱フォールディングの開始は６１℃前後であり、熱に安定な分子を示し、５０℃の加速化保存温度が折り畳まれた抗ＩＬ１３モノクローナル抗体を可能とすることが確認される。脱フォールディングの開始と５０℃の加速化保存条件の間には１０℃を越える差があるので、スクリーニングのための保存温度として５０℃を使用することに決定した。

表１６は、生スキャンから決定したＴｍ値の一覧である。Ｔｍ１値は７１．３〜７１．６Ｃの範囲にわたり、Ｔｍ２値はより広く、８３．５〜８４．１Ｃの範囲にわたる。異なるｐＨ値で同じ緩衝剤のＴｍに有意な変化は見られない。総ての条件に関して測定されたＴｍ１およびＴｍ２の変動は１℃未満であり、従って、供試タンパク質溶液は同等の熱力学的安定性を有する。

実施例６：高濃度処方物の実現可能性の評価
高用量タンパク質に基づく薬物＞１００ｍｇ／ｍＬの皮下（ＳＣ）投与の臨床的必要性は、多くの場合、製造、分析試験、安定性、および送達にさらなる技術開発の挑戦を導入する。高濃度タンパク質処方物の一般的属性は高粘度であり、これはタンパク質の可逆的自己会合から直接的に生じるものである。高粘度はまた高い注射力のためのさらなる臨床開発の挑戦を導入し、注射部位における疼痛を増し、また、薬物動態特性を変化させる可能性もある。よって、製品開発努力の重要な要素は、低粘度の処方物を特定することを求める。粘度への影響は、ｐＨの変化または賦形剤の添加により軽減され得る。

２００ｍｇ／ｍＬまでのｍＡｂ濃度の増大の結果として予測される粘度の指数関数的増大のため、高濃度抗ＩＬ１３溶液の粘度および注入性を検討するための最初の実現可能性試験を行った。従前に確立された酢酸に基づく処方物中で約１５０ｍｇ／ｍＬの溶液を約２１０ｍｇ／ｍＬまで濃縮した。粘度特定は以下のｍＡｂ濃度：５０、１５０および２００ｍｇ／ｍＬで、コーン・プレートレオメターを用いて行った。

図１７は、前述の濃度に対してプロットした種々の粘度レベルを示し、濃度の増加とともに粘度の指数関数的増大が見られる。２０７．７ｍｇ／ｍＬの濃縮溶液の粘度結果は２８．６ｃＰであった。

最大注射力は、２０７．７ｍｇ／ｍＬの抗ＩＬ１３を、２７ゲージ針を取り付けた１ｍＬガラスシリンジに入れ、シリンジ速度を３ｍｍ／分に設定し、Ｉｎｓｔｒｏｎ電気機械的試験システムを用いて測定することで決定した。表１７は、最大濃度２０７．７ｍｇ／ｍＬで粘度および注射針通過性に関して得られた数値結果を示す。

２０７．７ｍｇ／ｍＬの濃度での粘度（２８．６センチポワズ）および３０．３ニュートンの最大注射力の決定は、高濃度抗ＩＬ１３剤形を製造および投与する実現可能とし、達成するためにさらなる処方物開発努力を必要としたことの後押しとなった。

実施例７：振盪試験による物理的特性の評価
ｐＨ６．２５のヒスチジンおよびコハク酸緩衝剤を最適な緩衝剤系として特定したが、温度の関数として高濃度およびゲル化に依存する高粘度に感受性のある高濃度ｍＡｂ溶液に好適な処方物を特定するためには、さらなる処方物開発研究が必要であった。

振盪試験で用いた処方物は、ＨＴＦスクリーニング試験から得られたものであった。ＨＴＦ試験では、良好な安定性を提供した２つの緩衝剤系（ｐＨ６．２５のヒスチジンおよびコハク酸）が特定された。第３の緩衝剤系（ｐＨ５．５５０ｍＭ酢酸）も対照として含めた。ヒスチジンおよびコハク酸ｐＨ６．２５緩衝剤系サンプルは、小規模バッファー交換および濃縮技術を用いて調製した。次に、以下の賦形剤を加えた：ずり応力からタンパク質を保護するための０．０２％ポリソルベート８０（ＰＳ８０）、および潜在的粘度降下剤としての１５０ｍＭ塩化ナトリウム。

これらのサンプル１．２ｍＬ容量を、３ｍＬのガラスバイアルに１ｍＬの充填容量で充填し、遮光した水平シェーカーにて２〜８℃、２５０ｒｐｍで７２時間振盪した。次に、これらのサンプルを種々の分析技術によって試験した。下表１８は、ずり応力／振盪試験に用いた処方物の一覧である。５０ｍｇ／ｍＬの事前振盪試験は試みられなかったので、低濃度の処方物も含めた。ＰＳ８０などの賦形剤を含まない対照処方物も含めた。酢酸サンプルの場合には、ＮａＣｌ対照を含めた。

ＮａＣｌおよびポリソルベート８０を用いて処方された総てのサンプルでは、一般外観、ＳＥＣ、ＤＬＳおよびＭＦＩに有意な変化は見られなかった。高濃度タンパク質処方物は、ＳＥＣ−ＨＰＬＣ結果によれば、酢酸（対照）処方物中では安定でなかった。

総ての供試抗ＩＬ１３ ｍＡｂの目標濃度は２００ｍｇ／ｍＬであるが、歩留まりの限界および粘度測定の固有の変動のために、２００ｍｇ／ｍＬのヒスチジンおよびコハク酸の公称（ｎｏｍｉｎａｌ）濃度処方物は±１０％の範囲内にある。振盪試験に使用したサンプルの粘度を測定すると、緩衝剤系によらず、１５０ｍＭの塩化ナトリウムを公称濃度２００ｍｇ／ｍＬで含有する処方物で６分の１の粘度が達成可能であることが明らかである（図５）。これらの緩衝剤を単独で含有する処方物は、ヒスチジンでは、酢酸ナトリウムおよびコハク酸ナトリウムに比べて有意に高い粘度を示した。このことは、後者の緩衝剤のナトリウムイオンは粘度を低下させる方向に寄与し得ることを示唆し、従って、塩化ナトリウムのナトリウムイオンが粘度降下効果を担い得ることも説明する。しかしながら、ヒスチジンを１５０ｍＭの塩化ナトリウムと組み合わせると、その粘度は他の緩衝剤系と同程度まで低下する。このことはまた、ヒスチジン緩衝剤とＮａＣｌの間に粘度を効果的に低下させる相乗作用が存在することも示唆する。

本試験はまた、５０ｍｇ／ｍＬという低濃度の処方物１、２、および３も含んだが、これらの処方物に違いは見られず、目標濃度での高濃度処方物に関して作成された安定性データの重要性を示す（データは示されていない）。

サンプルのタンパク質濃度およびナトリウム含量に対する粘度の依存を図１８にまとめる。５０ｍｇ／ｍＬ（低濃度）サンプルに関する粘度は総て２ｃｐｓ未満であった。１５０ｍＭのＮａＣｌを含有する公称（統計）濃度２００ｍｇ／ｍＬの酢酸サンプルの粘度は、主として低い歩留まりにより公称（統計）濃度２００ｍｇ／ｍＬよりも低いために、対応するヒスチジンおよびコハク酸サンプルよりも約３ｃｐｓ低かった。図１８に示されるように、濃縮サンプル調製中の損失のために、総合的濃度は２００ｍｇ／ｍＬ未満であった。

これらの試験結果は、１５０ｍＭのＮａＣｌの包含が供試緩衝剤系間の粘度を実質的に低下させたことを明らかに示した。また、ヒスチジン緩衝剤とＮａＣｌの間を相乗的関係へのユニークな洞察が見られた。

注：総ての供試抗ＩＬ１３ ｍＡｂの目標濃度は２００ｍｇ／ｍＬであるが、歩留まりの限界および粘度測定の固有の変動のために、２００ｍｇ／ｍＬのヒスチジンおよびコハク酸の公称濃度処方物は±１０％の範囲内にある。

実施例８：高温下での物理的特性の評価
以下の試験は、適宜特定された高温で温度ストレスに曝した際の、公称濃度２００ｍｇ／ｍＬの高濃度抗ＩＬ１３の物理的安定性を評価するように計画した。

サンプルを５０℃／６０％ＲＨの高温で７日または１０日間インキュベートした。分析試験は、一般外観（ＧＡ）、粘度、Ａ２８０ｎｍによる濃度、ＳＥＣ−ＨＰＬＣ、ＭＦＩおよびＤＬＳを含んだ。表１９に、高温試験に使用したサンプル処方物をまとめる。

表２０および図１９にまとめるように、一般外観の結果は、７日後の処方物１（酢酸）のゲル化を明らかにした。処方物２（コハク酸）は１０日の保存後に半ゲル化を示し、処方物３（ヒスチジン）は１０日の保存後にサンプルのゲル化を示さなかった。ゲル化しなかったサンプルのいずれにも粒子は見られなかった。７日および１０日のコハク酸サンプルおよびヒスチジンサンプルは、「乳白真珠光沢」として分類された。乳白真珠光沢は透明度の低下に相当し、高濃度の肉眼では見えない粒子および凝集の指標となり得る。ＭＦＩ結果（示されていない）は、処方物１（酢酸）のｔ＝０が他の処方物よりも約５０％多い粒子を有したことを明らかにした。

これらの試験結果は、１５０ｍＭのＮａＣｌとヒスチジン緩衝剤のｐＨ６．２５での組合せがゲル化現象を防いだことを明らかに示した。これらの結果はまた、緩衝剤のタイプが物理的安定性に有意な影響を有した（ヒスチジン＞コハク酸＞酢酸）ことも示した。これらの結果は、高濃度ｍＡｂ処方物の物理的安定を高めるためにヒスチジン緩衝剤とＮａＣｌの間に存在する相乗的関係を示唆し得る。

実施例９：２００ｍｇ／ｍＬ凍結−解凍試験
本試験の目的は、２〜８℃と−７０℃の間の範囲の３回の凍結−解凍サイクルが公称（統計）濃度２００ｍｇ／ｍＬの抗ＩＬ１３ ｍＡｂの物理的および化学安定性プロファイルに及ぼす影響を評価することであった。凍結−解凍試験では、１００または１５０ｍＭいずれかのＮａＣｌ、０．０５ｍｍのＥＤＴＡ、０．０２％のポリソルベート８０を含有する１５ｍＭヒスチジン緩衝剤ｐＨ６．２５中での安定性を検討した。酢酸に基づく処方物をｐＨ５．５で対照として含んだ。サンプルを３ｍＬガラスバイアルに１．２ｍＬの充填容量で充填し、光から保護して、２〜８℃と−７０℃の間で３回の凍結サイクルに曝した。表２１は、本試験のサンプルを示す。

これらのサンプルを以下の分析技術：ＧＡ、ｐＨ、粘度、Ａ２８０ｎｍによる濃度、ＳＰＲによる効力、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、ＳＥＣ−ＨＰＬＣ、ｃＩＥＦおよびＭＦＩにより分析した。

凍結解凍（Ｆ／Ｔ）。いずれの処方物でもＦ／Ｔサンプルと対照サンプルの結果の間に、一般外観、ｐＨ、ＳＰＲによる効力、濃度、ＳＥＣ、ＳＤＳ−ＰＡＧＥまたは粘度による有意差は無かった。ヒスチジン処方物に関して開始時からのｃＩＥＦメイン％の低下は見られなかった。表２２は、総ての一般外観、ｐＨ、効力、濃度および粘度データの一覧である。表２３は、総てのＳＤＳ−ＰＡＧＥデータの一覧である。表２４は、総てのＳＥＣおよびｃＩＥＦデータの一覧である。

本試験の全体的な結果は、１５０ｍＭのＮａＣｌとヒスチジン緩衝剤のｐＨ６．２５での組合せが最良の処方物であり、かつ、凍結−解凍ストレスに曝された後にも安定であることを明らかに示した。

実施例１０：公称濃度２００ｍｇ／ｍＬのｍＡｂに基づく製剤の短期化学安定性試験および生物物理学特徴
ＮａＣｌ、ＰＳ８０およびＥＤＴＡを含有する２００ｍｇ／ｍＬのｍＡｂ処方物の短期化学安定性を評価するために、開発安定性試験を行った。短期化学安定性試験では、１００または１５０ｍＭいずれかのＮａＣｌ、０．０５ｍｍのＥＤＴＡ、０．０２％のポリソルベート８０を含有する１５ｍＭヒスチジン緩衝剤ｐＨ６．２５中での安定性を検討した。酢酸に基づく処方物を対照として含めた。これらのサンプルを３ｍＬのガラスバイアルに１．２ｍＬの充填容量で充填し、以下の保存条件：５℃、２５℃および４０℃に置いた。下表２５は本試験のサンプルを示す。

これらのサンプルを以下の分析技術：ＧＡ、ｐＨ粘度、Ａ２８０ｎｍによる濃度、ＳＰＲによる効力、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、ＳＥＣ−ＨＰＬＣおよびｃＩＥＦを用いて分析した。本試験は全３か月の期間であり、開示時と最終時点でＤＳＣ、ＤＬＳ、ＣＤおよびＭＦＩを用いた種々の生物物理学的特徴試験も行った。

分析試験（濃度、効力、ＳＥＣ、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、ｃＩＥＦ）および生物物理学的特徴試験（ＤＳＣ、蛍光、ＣＤ）からの結果は、短期化学的安定性に関して３つの処方物のうち処方物Ｂ（１５ｍＭのヒスチジン、ｐＨ６．２５、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．０５ｍＭのＥＤＴＡ、０．０２％のポリソルベート８０中、２００ｍｇ／ｍＬの抗ＩＬ１３）が最良であったことを示す。

分析試験結果の概要および考察：
表２６に総ての分析技術による３か月までの５℃データをまとめ、表２７に３か月までの２５℃および４０℃でのストレスおよび加速化データをまとめる。

ヒスチジン処方物（ＡおよびＢ）中のサンプルは、ｃＩＥＦで決定した場合、５℃および２５℃で３か月の後に、酢酸対照サンプルよりも高いメイン％を示した。ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより決定した純度は、２５℃で３か月後に両ヒスチジン処方物（ＡおよびＢ）中のサンプルに関して、酢酸対照サンプルよりも高い％重鎖および軽鎖含量を明らかにした。保存条件４０℃／７５％ＲＨでは、３つの総ての処方物が１か月後に、開始時に比べて低い％Ｈ＋Ｌ含量を示したが、処方物ＡおよびＢは処方物Ｃに優っていた（９０．６および９１．８対８８．２％）。１か月４０℃の総てのサンプルに関してメイン％に有意な低下が見られたが、その低下は、酢酸処方物に関する変化（９．９％）に対してヒスチジン処方物では小さく（８．８または７．５％）、処方物Ｂが最低の低下率％を示した。最高の効力結果は、１５０ｍＭのＮａＣｌを含有するヒスチジンに基づく処方物Ｂの、２５℃／６０％ＲＨでの３か月時点および４０℃／７５％ＲＨでの１か月時点で見られた。最低の効力は、対照および前者の酢酸に基づく処方物Ｃで見られ、これは高濃度ｍＡｂには好適な安定性をもたらさない。処方物ＡおよびＢ開始時試験の粘度結果（１８．０および１６．３ｃｐｓ）は、処方物ＡおよびＢのＮａＣｌ濃度がより高いために（それぞれ１００および１５０ｍＭ ＮａＣｌ）予想されるように、処方物Ｃの場合（１８．７ｃｐｓ）より低かった。処方物Ｂの粘度結果は、総ての条件および時点で最低であった。

生物物理学特徴の概要および考察：
表２８は、開始時のＤＬＳおおび開始時と３か月の蛍光データを示す。ＭＦＩ結果は、３か月にわたってどのサンプルにも目に見える粒子が見られなかったことを示した。ｍＡｂの流体力学的半径を測定するＤＬＳによって、３つの処方物に有意差は無かった。蛍光および円偏光二色性データは、３か月保存後のヒスチジン処方物における二次構造および三次構造に摂動を示さなかった。図２０は、スペクトルのＣＤ比較プロットを示す。処方物Ｃサンプルのより低いシグナルは、三次構造の変化を示し得る。処方物Ｃに関して消光率％に見られる違いもまた、この処方物の三次構造の変化を示す。開始時および３か月サンプルのＤＳＣデータを表２９に示す。両ヒスチジン／ＮａＣｌ処方物のより高いＴｍおよび総ｋｃａｌ／モルの結果の傾向は、付加的な塩が酢酸処方物よりも大きな熱力学的安定性を可能とすることを示唆する。

実施例１１：公称（統計）濃度２００ｍｇ／ｍＬのｍＡｂに基づく製剤の長期化学安定性試験および生物物理学的特徴
表２６に一覧化されているように、安定性に関して総てのサンプルの１６か月時点を試験した。この時点の結果を用いて、Ｈｉｓ、ＮａＣｌ、ＰＳ８０およびＥＤＴＡ中に処方された公称（統計）濃度２００ｍｇ／ｍＬでのｍＡｂ製剤の長期化学安定性を評価した。長期安定性を確認するために限定された試験を行った。

これらのサンプルを以下の分析技術：ＧＡ、ｐＨ、粘度、Ａ２８０ｎｍによる濃度、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、ＳＥＣ−ＨＰＬＣおよびｃＩＥＦを用いて分析した。生物物理学的特徴試験も行い、これには蛍光、ＤＳＣおよびＣＤを含んだ。

表２６は、総ての分析技術による１６か月時点での５℃データを含んだ。

分析試験結果の概要および考察：ヒスチジン処方物（ＡおよびＢ）中のサンプルは、５℃で１６か月後により高いモノマー含有率％を示した。処方物Ｃは、ヒスチジン処方物のいずれよりも０．９％高かった。

生物物理学的特徴の結果の概要および考察：全体として、生物物理学的特徴の結果は、３か月時点から１６か月時点の間、匹敵するものであった。蛍光および円偏光二色性データは、１６か月保存後のヒスチジン処方物における二次構造および三次構造に摂動を示さなかった。５℃での１６か月の処方物ＡおよびＢサンプルの結果は、有意な変化を示さない。両処方物Ｃサンプルで有意な強度増加は無く、これはこの分子が折り畳まれておらず、より多くの蛍光基を露出していることを示す。処方物ＡおよびＢのＭＦＩ結果による分析に基づけば、１６か月時点で目に見える粒子の増加は無かった。１６か月時点でのサンプルのＤＳＣデータ。両ヒスチジン／ＮａＣｌ処方物のより高いＴｍおよび総ｋｃａｌ／モルの結果の傾向は、付加的な塩が酢酸処方物よりも大きな熱力学的安定性を可能とすることを示唆する。

表２８は、１６か月時点に関する蛍光データを示す。表２９は、１６か月時点に関するＤＳＣ結果を示す。

分析試験（濃度、効力、ＳＥＣ、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、ｃＩＥＦ）および生物物理学的特徴試験（ＤＳＣ、蛍光、ＣＤ）からの結果は、処方物Ａ（１５ｍＭのヒスチジン、ｐＨ６．２５、１５０ｍＭのＮａＣｌ、０．０５ｍＭのＥＤＴＡ、０．０２％のポリソルベート８０中、２００ｍｇ／ｍＬの抗ＩＬ１３）は、長期化学的安定性に関して３つの処方物のうち最良であった。

Claims (34)

1. ａ．約１５０〜２５０ｍｇ／ｍＬの抗原結合タンパク質；
   ｂ．約１〜１００ｍＭの、約５．０〜約７．０のｐＨを与える緩衝剤；および
   ｃ．約７０〜１７０ｍＭの等張化剤
   を含んでなる、抗原結合タンパク質のための医薬処方物。
2. 抗原結合タンパク質、ヒスチジン、アルギニン、ＮａＣｌ、およびポリソルベート８０を含んでなる、抗原結合タンパク質のための医薬処方物。
3. 約２００ｍｇ／ｍＬの抗原結合タンパク質、約１０ｍＭのヒスチジン、約２５ｍＭのアルギニン、約１１５ｍＭのＮａＣｌ、および約０．０１％のポリソルベート８０を約６．０のｐＨで含んでなる、請求項２に記載の医薬処方物。
4. 前記抗原結合タンパク質がモノクローナル抗体またはそのフラグメントである、請求項１〜３のいずれか一項に記載の医薬処方物。
5. 前記モノクローナル抗体またはそのフラグメントがＢＬｙＳ（配列番号１）またはＢＬｙＳのヘテロまたはホモ三量体型と結合する、請求項４に記載の医薬処方物。
6. 前記モノクローナル抗体が、それぞれ配列番号２および３と９０％同一のアミノ酸配列、またはそれぞれ配列番号４および５と９０％同一のアミノ酸配列を含んでなる重鎖および軽鎖可変領域を含んでなる、請求項４または５に記載の医薬処方物。
7. 前記モノクローナル抗体が、それぞれ配列番号６および７と９０％同一のアミノ酸配列、またはそれぞれ配列番号８および９と９０％同一のアミノ酸配列を含んでなる重鎖および軽鎖を含んでなる、請求項４〜６のいずれか一項に記載の医薬処方物。
8. モノクローナル抗体濃度が２００±２０ｍｇ／ｍＬである、請求項４〜７のいずれか一項に記載の医薬処方物。
9. 等張化剤が塩化ナトリウムである、請求項１〜８のいずれか一項に記載の医薬処方物。
10. 塩化ナトリウム濃度が１１５±１０ｍＭである、請求項９に記載の医薬処方物。
11. 緩衝剤がヒスチジンである、請求項１〜１０のいずれか一項に記載の医薬処方物。
12. ヒスチジン濃度が約５〜１５ｍＭである、請求項１１に記載の医薬処方物。
13. ヒスチジン濃度が１０±２ｍＭである、請求項１２に記載の医薬処方物。
14. 約１〜１００ｍＭの安定剤をさらに含んでなる、請求項１〜１３のいずれか一項に記載の医薬処方物。
15. 安定剤がアミノ酸である、請求項１４に記載の医薬処方物。
16. アミノ酸がアルギニンである、請求項１５に記載の医薬処方物。
17. アルギニン濃度が約２０〜３０ｍＭである、請求項１６に記載の医薬処方物。
18. アルギニン濃度が２５±２ｍＭである、請求項１７に記載の医薬処方物。
19. 約０．００５〜０．０１５％（ｗ／ｖ）の非イオン性界面活性剤をさらに含んでなる、請求項１〜１８のいずれか一項に記載の医薬処方物。
20. 非イオン性界面活性剤がポリソルベート８０である、請求項１９に記載の医薬処方物。
21. ポリソルベート８０濃度が約０．０１％（ｗ／ｖ）である、請求項２０に記載の医薬処方物。
22. 凍結および解凍に安定である、請求項１〜２１のいずれか一項に記載の医薬処方物。
23. 緩衝剤が６．０±０．２のｐＨを与える、請求項１〜２２のいずれか一項に記載の医薬処方物。
24. 皮下または筋肉内投与のための、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の医薬処方物。
25. 液体または再構成形態である、請求項１〜２４のいずれか一項に記載の医薬処方物。
26. 凍結乾燥または噴霧乾燥形態である、請求項１〜２３のいずれか一項に記載の医薬処方物。
27. 抗ＢＬｙＳ抗体で処置可能な疾患または障害の処置において使用するための、請求項１〜２６のいずれか一項に記載の医薬処方物。
28. 請求項４〜２６のいずれか一項に記載の抗ＢＬｙＳ抗体処方物を含んでなる、注射デバイス。
29. 医薬処方物がコルチコステロイドと同時または逐次に併用投与される、請求項２８に記載の注射デバイス。
30. 対象において抗ＢＬｙＳ抗体で処置可能な疾患または病態を処置する方法であって、請求項４〜２６のいずれか一項に記載の処方物を、前記疾患または病態を処置するために有効な量で投与することを含んでなる、方法。
31. 前記疾患または病態が、全身性紅斑性狼瘡、抗好中球細胞質抗体（「ＡＮＣＡ」）血管炎、狼瘡腎炎、原発シェーグレン症候群、慢性免疫血小板減少症、重症筋無力症、症候性ワルデンストレームマクログロブリン血症、腎移植待機患者の免疫脱感作、膜性腎症、全身性硬化症、関節リウマチ、多発性骨髄腫、多発性硬化症、および腎不全からなる群から選択される、請求項３０に記載の方法。
32. 請求項１〜２６のいずれか一項に記載処方物を含有する１以上のバイアルと患者への前記処方物の皮下投与に関する説明書とを含んでなる、キット。
33. 患者への前記処方物の皮下投与に関する注射デバイスをさらに含んでなる、請求項３２に記載のキット。
34. 全身性紅斑性狼瘡、抗好中球細胞質抗体（「ＡＮＣＡ」）血管炎、狼瘡腎炎、原発シェーグレン症候群、慢性免疫血小板減少症、重症筋無力症、症候性ワルデンストレームマクログロブリン血症、腎移植待機患者の免疫脱感作、膜性腎症、全身性硬化症、関節リウマチ、多発性骨髄腫、多発性硬化症、および腎不全からなる群から選択される疾患の処置において使用するための、請求項１〜２６のいずれか一項に記載の処方物。