JP2018535962A - 滅菌水性点眼液の治療的使用 - Google Patents

Abstract

本発明は、角膜創傷の治療における使用のための、担体溶液中に、Ｎ−（Ｎ−アセチルシステイニル−）キトサンまたはその薬学的に許容可能な塩を含む滅菌水性点眼液であって、Ｎ−（Ｎ−アセチルシステイニル−）キトサンの遊離チオール基の含量が、８０μｍｏｌ／ポリマー１ｇ〜２８０μｍｏｌ／ポリマー１ｇである、点眼液に関する。
【選択図】図１Ａ

Description

本発明は、担体溶液中に、Ｎ−（Ｎ−アセチルシステイニル−）キトサンまたはその薬学的に許容可能な塩を含む滅菌点眼液の治療的使用に関する。

機械的角膜損傷は、最も一般的な眼科的損傷である。それは多くの場合、物理的外力の影響（例えば、木の枝、指の爪、メイクアップ用アプリケーター）によって生じ、その結果、角膜表面の小さな部分または大きな部分に傷害を引き起こす。異物が関連する剥離は、典型的には、角膜に入り込んだ浮遊粉塵片（金属片、木材片、ガラス片など）によって生じる。異物を除去した後に、角膜上皮に欠損が残される。コンタクトレンズが関連する剥離は、角膜上皮の欠損であり、これはコンタクトレンズの過度の使用もしくは不適切なフィッティングでの装着、またはコンタクトレンズの不適切な洗浄によって生じる。

化学的角膜損傷は、角膜外傷のもう１つの原因である。アルカリ性または酸性物質に曝露すると、角膜表面に広範囲に及ぶ傷害が生じることがある。

角膜上皮傷害もまた、眼の保護を適切に行わなかったことに起因して、紫外線光への強い曝露（光線角膜炎）の結果として生じる（例えば、雪盲）。角膜創傷はまた、白内障手術、角膜移植、緑内障ろ過手術、ならびに光学的屈折矯正角膜切除術（ＰＲＫ）およびレーザー角膜内切削形成術（ＬＡＳＩＫ）などの屈折矯正手術などの外科手術の結果としても、または硝子体切除術などの眼内手術の角膜合併症としても生じる（Ｈａｍｍｉｌ、Ｍ．Ｂｏｗｅｓ、２０１１、Ｍｅｃｈａｎｉｃａｌ Ｉｎｊｕｒｙ．Ｉｎ Ｋｒａｃｈｍｅｒ、Ｍａｎｎｉｓら（編）：Ｃｏｒｎｅａ［第３版］Ｅｌｓｅｖｉｅｒ Ｉｎｃ．：１１６９〜１１８５ページ）。

再発性角膜びらんは、角膜上皮の破壊が繰り返し発現することに特徴づけられる。これは、上皮基底膜ジストロフィーなどの角膜ジストロフィーによって生じることがあり、またはこれは、わずかな角膜外傷もしくは剥離の結果とされることがある（Ｓｔｅｅｌｅ、Ｃｈｒｉｓ、１９９９、Ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｃｏｎｔａｃｔ ｌｅｎｓｅｓ ｉｎ ｃｏｒｎｅａｌ ｗｏｕｎｄ ｈｅａｌｉｎｇ、Ｏｐｔｏｍｅｔｒｙ ｔｏｄａｙ（Ｏｃｔｏｂｅｒ ８）：３６〜４０ページ）。上皮層の破壊または喪失は、角膜表面の完全性を損なうことにつながる。したがって、角膜びらんと関連する角膜創傷は、主に上皮傷害である。１〜２週間経っても治癒しない、または治癒と破壊とを繰り返す上皮欠損は、例えば、非治癒性角膜上皮欠損、遷延性角膜上皮欠損、治癒遅延性角膜上皮欠損、および神経障害性（神経栄養性）上皮欠損である。

典型的な散在性の、微細な、点状の角膜上皮喪失または傷害を伴う他の上皮欠損は、いわゆる点状表層角膜炎（ＳＰＫ）である。この角膜の炎症は、ウイルス性結膜炎（最も一般にはアデノウイルス）、眼瞼炎、乾性角結膜炎、トラコーマ、化学熱傷、紫外線（ＵＶ）光曝露（例えば、溶接アーク、太陽灯、雪の照り返しによる光）、コンタクトレンズの過度の装着、全身用薬物（例えば、アデニンアラビノシド）、局所用薬物、または防腐剤による毒性、および末梢性顔面神経麻痺（ベル麻痺を含む）などのさまざまな原因の結果であり得る。したがって、ＳＰＫは感染症ならびに非感染性の原因によって生じることがある。

非感染性角膜創傷の治療は、痛み止めを全身的におよび／または局所的に投与することを介した患者の症状の軽減、（必要と判断された場合）抗生物質を局所的に滴下することを介した感染症の予防、ならびに角膜上皮の保護の３つの目的を有する。角膜移植などの外科的処置は典型的には、術後期のさらなる投薬を必要とするが、角膜表面の保護用および潤滑用の点眼薬は治療法の一部である。

角膜上皮の保護は、角膜上皮損傷後の主な治療目標であって、上皮の再生および無傷眼表面の再構築を可能にする。現在の治療選択肢としては、眼用潤滑剤の使用、治療用ソフトコンタクトレンズ（包帯レンズ）、または眼のパッチ貼付がある。コンタクトレンズも眼用パッチも患者に目の不快感をもたらす場合があり、治癒に時間がかかり、かつ細菌性角膜炎の危険性を高めることがある。したがって、その使用は眼科医によって厳重に監視されなければならい。眼用パッチの関連においてはまた、組織工学も研究される。ヒドロキシエチルキトサン、ゼラチン、および硫酸コンドロイチンを含み、角膜上皮細胞が播種され、機械的傷害角膜上皮に移植される人工ブレンド膜は、ウサギにおいて、術後２〜４日目に傷害面積のサイズを減少することが報告された（Ｌｉａｎｇら、２０１４、Ｔｉｓｓｕｅ−ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ ｍｅｍｂｒａｎｅ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｃｈｉｔｏｓａｎ ｆｏｒ ｒｅｐａｉｒ ｏｆ ｍｅｃｈａｎｉｃａｌｌｙ ｄａｍａｇｅｄ ｃｏｒｎｅａｌ ｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｍａｔｅｒｉａｌｓ Ｓｃｉｅｎｃｅ：Ｍａｔｅｒｉａｌｓ ｉｎ Ｍｅｄｃｉｎｅ（２５）：２１６３〜２１７１ページ）。ヒアルロン酸を含む製剤は、一般的に眼用潤滑剤として使用される。これを急性期の治癒中、１日４回適用するときに、角膜上皮の治癒を促進することが報告された（Ｓｔｉｅｂｅｌ−Ｋａｌｉｓｈら、１９９８、Ａ ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ ｏｆ ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃ ａｃｉｄ ｖｅｒｓｕｓ ｇｅｎｔａｍｉｃｉｎ ｏｎ ｃｏｒｎｅａｌ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｈｅａｌｉｎｇ、Ｅｙｅ（１２）：８２９〜８３３ページ）。再発性角膜びらんの場合、剥離が治癒した後に、予防対策として潤滑治療法を最短でも６カ月間継続しなくてはならない（Ｓｔｅｅｌｅ、Ｃｈｒｉｓ、１９９９、Ｔｈｅ ｒｏｌｅ ｏｆ ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｃｏｎｔａｃｔ ｌｅｎｓｅｓ ｉｎ ｃｏｒｎｅａｌ ｗｏｕｎｄ ｈｅａｌｉｎｇ、Ｏｐｔｏｍｅｔｒｙ ｔｏｄａｙ（Ｏｃｔｏｂｅｒ ８）：３６〜４０ページ）。

キトサンは、局所用包帯剤として皮膚創傷の管理に広く使用されてきた（Ｄａｉ、Ｔａｎａｋａら、２０１１、Ｃｈｉｔｏｓａｎ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｓ ｆｏｒ ｗｏｕｎｄｓ ａｎｄ ｂｕｒｎｓ：ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ ａｎｄ ｗｏｕｎｄ−ｈｅａｌｉｎｇ ｅｆｆｅｃｔｓ、Ｅｘｐｅｒｔ Ｒｅｖ Ａｎｔｉ Ｉｎｆｅｃｔ Ｔｈｅｒ（９）：８５７〜８７９ページ）。チオール化炭水化物（チオール化キトサンを含む）の使用もまた、創傷包帯剤の調製に提唱されてきた（ＥＰ１４８７５０８ Ｊｏｈｎｓｏｎ＆Ｊｏｈｎｓｏｎ「Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ ｍｏｄｉｆｉｅｄ ｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ」）。

１．５％キトサンＨＣｌを含む点眼薬は、ウサギモデルにおける角膜上皮の治癒プロセスを促進する点で、ウシ組換え型塩基性線維芽細胞増殖因子点眼薬と効果が類似することが認められた。０．５％キトサンＨＣｌを含む点眼薬を１日３回適用すると、こうした促進効果の程度が著しく劣ることが示され、陰性対照よりもわずかに優れて機能した（Ｙｏｎｇｈｏｎ Ｘｕら、２００９、Ｐｒｏｍｏｔｉｖｅ Ｅｆｆｅｃｔｓ ｏｆ ＣＨ−ＨＣＬ Ｃｈｉｔｏｓａｎ Ｓｏｌｕｔｉｏｎ ｏｎ Ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ Ｃｏｒｎｅａｌ Ａｂｒａｓｉｏｎ ｉｎ Ｒａｂｂｉｔｓ、Ｗｕｈａｎ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ Ｊｏｕｒｎａｌ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｅｃｔｉｏｎ ３０（２）：１７３〜１７６ページ）。しかし、キトサンの角膜創傷治癒に対する効果の報告は、相反する。１％のキトサン溶液では、ウサギモデルを使用した研究において１日３回、３週間適用したときに、角膜創傷治癒を改善することができなかった（Ｓａｌｌ、Ｋｒｅｔｅｒら、１９８７、Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｃｈｉｔｏｓａｎ ｏｎ ｃｏｒｎｅａｌ ｗｏｕｎｄ ｈｅａｌｉｎｇ、Ａｎｎ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ（１９）：３１〜３３ページ）。別の研究グループからは、０．５％キトサン溶液が、ウサギ角膜を器官培養でインキュベートしてから２４時間後に、角膜創傷治癒を刺激したことが報告された（Ｃｕｉら、２０１４、Ｃｈｉｔｏｓａｎ ｐｒｏｍｏｔｅｄ ｔｈｅ ｃｏｒｎｅａｌ ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌ ｗｏｕｎｄ ｈｅａｌｉｎｇ ｖｉａ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ ｏｆ ＥＲＫ ＭＡＰＫ Ｐａｔｈｗａｙ、Ｉｎｖｅｓｔ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．Ｖｉｓ．Ｓｃｉ．５５（１３）：４９９ページ）。

ＷＯ２０１１／１２７１４４では、角膜創傷を治療するためのキトサン−アルギニンポリマーの使用を含む、いくつかの異なる創傷治癒用途のための誘導体化キトサンの使用が開示されている。ウサギ角膜のアルカリ熱傷モデルにおいて、キトサン−アルギニン誘導体を含む製剤を１日４回、９日間適用すると、炎症が縮小し、かつ創傷治癒が加速された。別の粘膜付着性ポリマーであるカラマツアラビノガラクタンは、５％溶液として１日３回、３日間適用したときに、ビヒクル対照と比較して角膜創傷の治癒速度を著しく高めることが報告された（Ｂｕｒｇａｌａｓｓｉ、Ｎｉｃｏｓｉａら、２０１１、Ａｒａｂｉｎｏｇａｌａｃｔａｎ ａｓ ａｃｔｉｖｅ ｃｏｍｐｏｕｎｄ ｉｎ ｔｈｅ ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ｏｆ ｃｏｒｎｅａｌ ｗｏｕｎｄｓ：ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｔｏｘｉｃｉｔｙ ａｎｄ ｉｎ ｖｉｖｏ ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎｓ ｏｎ ｒａｂｂｉｔｓ、Ｃｕｒｒ Ｅｙｅ Ｒｅｓ（３６）：２１〜２８ページ）。

ポリマーのチオール化が、それらの粘膜付着特性をさらに増加させるために開示されている。ＥＰ１１２６８８１Ｂ１では、少なくとも１つの非末端チオール基を含む粘膜付着性ポリマーが開示されている。組織増強用の埋込体を調製するためのチオール化多糖類の使用は、ＷＯ２００８／０７７１７２で開示され、前記チオール化ポリマーが、ポリマー網目構造の安定化をもたらすジスルフィド結合の形成によって特徴づけられている。ＷＯ２００８／０７７１７２の優先権主張出願であるＡ２１３６／２００６は、チオール化ポリマーのさらなる適用分野を開示している。

チオール基を有する配位子の共有結合によるキトサンの修飾（すなわち、チオール化）が開示されている。チオール化が、キトサンの粘膜付着特性を増加することも開示されている（ＫａｓｔおよびＢｅｒｎｋｏｐ−Ｓｃｈｎｕｒｃｈ、２００１、Ｔｈｉｏｌａｔｅｄ ｐｏｌｙｍｅｒｓ−ｔｈｉｏｍｅｒｓ：ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｈｉｔｏｓａｎ−ｔｈｉｏｇｌｙｃｏｌｉｃ ａｃｉｄ ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ、Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ（２２）：２３４５〜２３５２ページ；Ｂｅｒｎｋｏｐ−Ｓｃｈｎｕｒｃｈ、Ｈｏｒｎｏｆら、２００４、Ｔｈｉｏｌａｔｅｄ ｃｈｉｔｏｓａｎｓ、Ｅｕｒ Ｊ Ｐｈａｒｍ Ｂｉｏｐｈａｒｍ（５７）：９〜１７ページ；Ｂｅｒｎｋｏｐ−Ｓｃｈｎｕｒｃｈ、２００５、Ｔｈｉｏｍｅｒｓ：ａ ｎｅｗ ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｍｕｃｏａｄｈｅｓｉｖｅ ｐｏｌｙｍｅｒｓ、Ａｄｖ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ Ｒｅｖ（５７）：１５６９〜１５８２ページ；Ｓｃｈｍｉｔｚ、Ｇｒａｂｏｖａｃら、２００８、Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ｏｆ ａ ｃｈｉｔｏｓａｎ−Ｎ−ａｃｅｔｙｌ ｃｙｓｔｅｉｎｅ ｃｏｎｊｕｇａｔｅ、Ｉｎｔ Ｊ Ｐｈａｒｍ（３４７）：７９〜８５ページ）。いくつかのチオール化キトサンの抗菌有効性が同様に評価された（ＷＯ２００９１３２２２６Ａ１；ＷＯ２００９１３２２２７Ａ１；ＷＯ２００９１３２２２８Ａ１；Ｇｅｉｓｂｅｒｇｅｒ、Ｇｙｅｎｇｅら、２０１３、Ｃｈｉｔｏｓａｎ−ｔｈｉｏｇｌｙｃｏｌｉｃ ａｃｉｄ ａｓ ａ ｖｅｒｓａｔｉｌｅ ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂｉａｌ ａｇｅｎｔ、Ｂｉｏｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ（１４）：１０１０〜１０１７ページ）。

Ｎ−アセチルシステイン（ＮＡＣ）は、チオール基を有するアミノ酸Ｌ−システインの誘導体である。ＮＡＣは、抗酸化活性を有する還元剤である。また、ムチンジスルフィド結合を還元することによって、粘液粘度を低下させるその能力もよく知られている。これらの粘液溶解特性のため、ＮＡＣは、過度の粘液産生を伴う気管支肺障害において粘液粘度を低下するために広く使用される。粘液溶解および抗酸化剤であるＮＡＣを含む局所用眼科用製剤は、マイボーム腺機能障害およびＤＥＳなどの角膜疾患の治療に使用される（Ｌｅｍｐ、２００８、Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ ｏｆ ｄｒｙ ｅｙｅ ｄｉｓｅａｓｅ、Ａｍ Ｊ Ｍａｎａｇ Ｃａｒｅ（１４）：Ｓ８８〜１０１ページ；Ａｋｙｏｌ−Ｓａｌｍａｎ、Ａｚｉｚｉら、２０１０、Ｅｆｆｉｃａｃｙ ｏｆ ｔｏｐｉｃａｌ Ｎ−ａｃｅｔｙｌｃｙｓｔｅｉｎｅ ｉｎ ｔｈｅ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ ｍｅｉｂｏｍｉａｎ ｇｌａｎｄ ｄｙｓｆｕｎｃｔｉｏｎ、Ｊ Ｏｃｕｌ Ｐｈａｒｍａｃｏｌ Ｔｈｅｒ（２６）：３２９〜３３３ページ）。ＥＰ０５５１８４８Ｂ１では、３％から５％（ｗ／ｖ）の間の濃度のＮＡＣおよびポリビニルアルコールを含む、ＤＥＳの治療のための眼科用医薬組成物が開示されている。ＮＡＣを使用してキトサンをチオール化すると、ウサギ眼上のその眼滞留時間が、非チオール化キトサンと比較すると増加することが開示されている（Ｄａｎｇｌ、Ｈｏｒｎｏｆら、２００９、Ｉｎ ｖｉｖｏ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ Ｏｃｕｌａｒ Ｒｅｓｉｄｅｎｃｅ Ｔｉｍｅ ｏｆ ^１２４Ｉ−ｌａｂｅｌｌｅｄ Ｔｈｉｏｌａｔｅｄ Ｃｈｉｔｏｓａｎ ｉｎ Ｒａｂｂｉｔｓ Ｕｓｉｎｇ ＭｉｃｒｏＰＥＴ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、ＡＲＶＯ Ｍｅｅｔｉｎｇ Ａｂｓｔｒａｃｔｓ（５０）：３６８９ページ）。

Ｎ−（Ｎ−アセチルシステイニル−）キトサンＨＣｌが、マウスドライアイモデルにおけるマウス眼の眼表面に対していくつかの有益な効果を有することが開示されている（Ｈｏｎｇｙｏｋ、Ｃｈａｅら、２００９、Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｃｈｉｔｏｓａｎ−Ｎ−ａｃｅｔｙｌｃｙｓｔｅｉｎｅ ｃｏｎｊｕｇａｔｅ ｉｎ ａ ｍｏｕｓｅ ｍｏｄｅｌ ｏｆ ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ ｔｏｘｉｎ Ｂ−ｉｎｄｕｃｅｄ ｄｒｙ ｅｙｅ、Ａｒｃｈ Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ（１２７）：５２５〜５３２ページ；Ｈｏｒｎｏｆ、Ｇｏｙａｌら、２００９、Ｔｈｉｏｌａｔｅｄ Ｃｈｉｔｏｓａｎ ｆｏｒ ｔｈｅ Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｄｒｙ Ｅｙｅ−Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｉｎ Ｍｉｃｅ Ｕｓｉｎｇ ｔｈｅ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ−Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ Ｃｈａｍｂｅｒ Ｍｏｄｅｌ、ＡＲＶＯ Ｍｅｅｔｉｎｇ Ａｂｓｔｒａｃｔｓ（５０）：３６６３ページ）。Ｈｏｅｌｌｅｒら、２０１１、Ｓａｆｅｔｙ Ａｎｄ Ｔｏｌｅｒａｂｉｌｉｔｙ Ｏｆ Ｃｈｉｔｏｓａｎ−Ｎ−ａｃｅｔｙｌｃｙｓｔｅｉｎｅ Ｅｙｅ Ｄｒｏｐｓ Ｉｎ Ｈｅａｌｔｈｙ Ｙｏｕｎｇ Ｖｏｌｕｎｔｅｅｒｓ、ａｒｖｏ ａｎｎｕａｌ ｍｅｅｔｉｎｇ ａｂｓｔｒａｃｔ ｓｅａｒｃｈ ａｎｄ ｐｒｏｇｒａｍ ｐｌａｎｎｅｒ；Ｇａｒｈｏｆｅｒら、２０１１ Ｃｈｉｔｏｓａｎ−Ｎ−Ａｃｅｔｙｌｃａｘｔｅｉｎｅ Ｅｙｅ Ｄｒｏｐｓ、Ｃａｔａｒａｃｔ＆Ｒｅｆｒａｃｔｉｖｅ Ｓｕｒｇｅｒｙ Ｔｏｄａｙ Ｅｕｒｏｐｅ、４９〜５０ページ）。

チオール化ポリマーの種々の使用を再検討し、論じているさらなる刊行物を下記に挙げる：

Ｈｏｒｎｏｆら、Ｍｕｃｏａｄｈｅｓｉｖｅ ｏｃｕｌａｒ ｉｎｓｅｒｔ ｂａｓｅｄ ｏｎ ｔｈｉｏｌａｔｅｄ ｐｏｌｙ（ａｃｒｙｌｉｃ ａｃｉｄ）：ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ ｉｎ ｖｉｖｏ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｉｎ ｈｕｍａｎｓ、Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ Ｒｅｌｅａｓｅ ８９（２００３）４１９〜４２８ページ；Ｈｏｒｎｏｆ，Ｍ．、Ｉｎ ｖｉｔｒｏ ａｎｄ ｉｎ ｖｉｖｏ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｎｏｖｅｌ ｐｏｌｙｍｅｒｉｃ ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ ｉｎ ｔｈｅ ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ ｆｉｅｌｄ、Ｔｈｅｓｉｓ、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ ｏｆ Ｖｉｅｎｎａ、２００３；Ｂｅｒｎｋｏｐ−Ｓｃｈｎｕｒｃｈら、Ｐｅｒｍｅａｔｉｏｎ ｅｎｈａｎｃｉｎｇ ｐｏｌｙｍｅｒｓ ｉｎ ｏｒａｌ ｄｅｌｉｖｅｒｙ ｏｆ ｈｙｄｒｏｐｈｉｌｉｃ ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ：Ｔｈｉｏｍｅｒ／ＧＳＨ ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｊ．Ｃｏｎｔｒ．Ｒｅｌｅａｓｅ ９３（２００３）９５〜１０３ページ；Ｍ．Ｈｏｒｎｏｆら、Ｉｎ Ｖｉｔｒｏ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｔｈｅ Ｐｅｒｍｅａｔｉｏｎ Ｅｎｈａｎｃｉｎｇ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ Ｐｏｌｙｃａｒｂｏｐｈｉｌ−Ｃｙｓｔｅｉｎ Ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ ｏｎ ｔｈｅ Ｃｏｒｎｅａ ｏｆ Ｒａｂｂｉｔｓ、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．９１（１２）２００２、２５８８〜２５９２ページ；およびＣｌａｕｓｅｎら、Ｔｈｅ Ｒｏｌｅ ｏｆ Ｇｌｕｔａｔｈｉｏｎｅ ｉｎ ｔｈｅ Ｐｅｒｍｅａｔｉｏｎ Ｅｎｈａｎｃｉｎｇ Ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ Ｔｈｉｏｌａｔｅｄ Ｐｏｌｙｍｅｒｓ、Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．１９（５）２００２、６０２〜６０８ページ；Ｙａｍａｓｈｉｔａら、Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ ａｎｄ Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ Ｔｈｉｏｌ Ｐｏｌｙｍｅｒｓ、Ｊ．Ｍａｃｒｏｍｏｌ．Ｓｃ．２６（１９８９）、９、１２９１〜１３０４ページ；Ｚｈｅｎｇら、Ｄｉｓｕｌｆｉｄｅ Ｃｒｏｓｓ−Ｌｉｎｋｅｄ Ｈｙａｌｕｒｏｎａｎ Ｈｙｄｒｏｇｅｌｓ、Ｂｉｏｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ ３（６）２００２、１３０４〜１３１１ページ；Ｗａｎｇら、Ｃｈｉｔｏｓａｎ−ＮＡＣ Ｎａｎｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ ａｓ ａ Ｖｅｈｉｃｌｅ ｆｏｒ Ｎａｓａｌ Ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ Ｅｎｈａｎｃｅｍｅｎｔ ｏｆ Ｉｎｓｕｌｉｎ、Ｊ． Ｂｉｏｍｅｄ Ｍａｔｅｒ Ｒｅｓ Ｐａｒｔ Ｂ：Ａｐｐｌ Ｂｉｏｍａｔｅｒ ８８Ｂ、１５０〜１６１ページ、２００９；ＷＯ２００８／０９４６７５Ａ２；ＵＳ５，４１２，０７６Ａ。

ＷＯ２０１５／１６９７２８では、担体溶液中に、約０．０５％〜約０．５％（ｗ／ｗ）のＮ−（Ｎ−アセチルシステイニル−）キトサンまたはその薬学的に許容可能な塩を含む滅菌水性点眼液であって、Ｎ−（Ｎ−アセチルシステイニル−）キトサンの遊離チオール基の含量が、８０μｍｏｌ／ポリマー１ｇ〜２８０μｍｏｌ／ポリマー１ｇである点眼液、ならびにドライアイ症候群の治療における前記溶液の使用が開示されている。

本発明の目的は、角膜創傷の治療に適した医薬調製物を提供することである。

本目的は、角膜創傷の治療における使用のための、担体溶液中に、Ｎ−（Ｎ−アセチルシステイニル−）キトサンまたはその薬学的に許容可能な塩を含む滅菌水性点眼液であって、Ｎ−（Ｎ−アセチルシステイニル−）キトサンの遊離チオール基の含量が、８０μｍｏｌ／ポリマー１ｇ〜２８０μｍｏｌ／ポリマー１ｇである、点眼液によって解決される。

本発明の好ましい実施形態は、従属請求項で挙げられる。

０．１％Ｎ−（Ｎ−アセチルシステイニル−）キトサンを含む溶液の、角膜創傷治癒モデルにおける評価の結果を示す。 ０．１％Ｎ−（Ｎ−アセチルシステイニル−）キトサンを含む溶液の、角膜創傷治癒モデルにおける評価の結果を示す。 ０．１％キトサン−ＨＣｌ（Ｂ）または０．１％Ｎ−（Ｎ−アセチルシステイニル−）キトサン（Ｃ）とインキュベートされたヒト角膜縁上皮細胞の走査電子顕微鏡法の結果を示す。未処理のコンフルエントな対照細胞を比較（Ａ）に示す。

驚くべきことに、担体溶液中に、Ｎ−（Ｎ−アセチルシステイニル−）キトサンまたはその薬学的に許容可能な塩を含む滅菌水性点眼液であって、Ｎ−（Ｎ−アセチルシステイニル−）キトサンの遊離チオール基の含量が、８０μｍｏｌ／ポリマー１ｇ〜２８０μｍｏｌ／ポリマー１ｇである、点眼液は、角膜創傷の治療に有効であることが見出された。

好ましい実施形態において、前記角膜創傷は非感染性創傷であってもよい。

別の好ましい実施形態において、前記角膜創傷はまた、角膜びらんと関連し得る。

本発明に従って使用する点眼液は、角膜びらんの治療に特に適する。他の因子のうち、再発性角膜びらんは、角膜上皮の完全性に影響を及ぼす上皮基底膜ジストロフィー（コーガンジストロフィー）などの角膜ジストロフィーによって生じる場合がある。

さらに、前記角膜創傷はまた、上皮欠損であってもよい。例えば、非治癒性角膜上皮欠損、遷延性角膜上皮欠損、治癒遅延性角膜上皮欠損、および神経障害性（神経栄養性）上皮欠損からなる群から選択してもよい。

別の実施形態において、角膜創傷は、点状表層角膜炎（ＳＰＫ）と関連し得る。

下記において、「キトサン−ＮＡＣ」という用語は、Ｎ−（Ｎ−アセチルシステイニル−）キトサンおよびその薬学的に許容可能な塩の両方を表す。

いずれの理論にも束縛されるものではないが、キトサン−ＮＡＣの有益な効果は、その粘膜付着性が改善され、その結果、眼滞留時間が延長されたことと、眼表面上の保護被膜を形成するその能力とによるものであり得る。

角膜創傷の治療においてキトサン−ＮＡＣを使用すると、必要な適用頻度が少なく、１日１回または２回のみであるというさらなる利点があることが見出された。

本発明の好ましい実施形態において、前記点眼液中のＮ−（Ｎ−アセチルシステイニル−）キトサンまたは前記その薬学的に許容可能な塩の濃度は、０．０５〜０．３％（ｗ／ｗ）、好ましくは０．０５〜０．２％（ｗ／ｗ）、より好ましくは０．０８〜０．１６％（ｗ／ｗ）である。

さらに、前記薬学的に許容可能な塩は、好ましくは、酢酸、クエン酸、ギ酸、および酒石酸などの有機酸の塩、ならびにＨＣｌおよびＨ_２ＳＯ_４などの鉱酸の塩からなる群から選択される。

Ｎ−（Ｎ−アセチルシステイニル−）キトサンの遊離チオール基の含量は、好ましくは、１０５μｍｏｌ／ポリマー１ｇ〜２５０μｍｏｌ／ポリマー１ｇ、好ましくは１１０μｍｏｌ／ポリマー１ｇ〜２５０μｍｏｌ／ポリマー１ｇ、最も好ましくは１４０〜２５０μｍｏｌ／ポリマー１ｇである。

Ｎ−（Ｎ−アセチルシステイニル−）キトサン中の架橋チオール基の量は、その中の全チオール基の３０％以下、好ましくは２５％以下、最も好ましくは１５％以下であってもよい。

水性点眼液中のキトサン−ＮＡＣ上に固定化された遊離チオール基の量は、当業者によって、エルマン試薬を用いるなどの公知の方法で、測定することができる。

水性点眼液中のキトサン−ＮＡＣポリマー上の遊離チオール基の量が多いことが重要であるという事実に加えて、本発明の溶液中のキトサン−ＮＡＣポリマー上の架橋チオール（ジスルフィド）の量が少ないことも好ましい。水性点眼液の調製および保存中に、キトサン−ＮＡＣ上に固定化されたチオール基の架橋が生じることがある。製剤中に存在する架橋チオールの量が低いことは、本発明のキトサン−ＮＡＣポリマー製剤の好ましいパラメータである。

したがって、好ましい実施形態によれば、Ｎ−（Ｎ−アセチルシステイニル−）キトサン中の架橋チオール基の量は、その中の全チオール基の３０％以下、好ましくは２５％以下、最も好ましくは１５％以下である。

とりわけ、この好ましい実施形態において、Ｎ−（Ｎ−アセチルシステイニル−）キトサン中の架橋チオール基の量は、溶液を室温で少なくとも１２カ月間保存した後で、その中の全チオール基の３０％以下、好ましくは２５％以下、最も好ましくは２０％以下である。

製剤中に存在する架橋チオール基の量が高すぎる場合は、水性点眼液の特性は所望のパラメータの範囲を超えて変化することになり、例えば、水性点眼液の粘度が、点眼薬に適切になるには高すぎることになるはずである。

下記でより詳細に説明されるように、そのチオール基は架橋していないか、または架橋チオール基の量が、全チオール基の５％未満、好ましくは４％以下の架橋チオール基の量でなど、最小限に架橋されているのみである、キトサン−ＮＡＣの製造が可能であることが見出された。とりわけ、もしこのようなキトサン−ＮＡＣが本発明に従って使用する点眼液の製造に使用される場合、遊離チオール基は、溶液の全ライフサイクル中で、安定な傾向にある。

そのため、製剤の製造中にこのようなキトサン−ＮＡＣを使用すると、架橋チオール基の増加は、キトサン−ＮＡＣ原材料に最初に存在する遊離チオール基の量の１０％未満であることが見出された。さらに、１２カ月、さらには１８カ月を超える溶液の保存中では、架橋チオール基の増加は、製剤中に最初に存在する遊離チオール基の量の１５％未満である。最終的に、酸素障壁をもたらす溶液の第２の容器（下記に定義されるような）が開封される場合でさえ、開封から３０日後の架橋チオール基の増加は、開封前の製剤中に最初に存在する遊離チオール基の量の１５％未満である。

本質的に、本発明に従って使用するチオール化キトサン眼科用製剤は、下記のステップに従って作られる：
１．キチンを、小エビまたはズワイガニの殻などの甲殻類の殻より単離するステップ、
２．キトサンを、当技術分野で周知の化学的方法、例えば、アルカリ脱アセチル化によってキチンより調製するステップ；
３．キトサンを、本明細書で記述されるようなＮ−アセチルシステインを使用するなど、チオールを有する配位子の共有結合によってチオール化するステップ；
４．次いで、キトサン−ＮＡＣを、本明細書で記述されるような水性点眼液の形態に配合するステップ；および
５．次いで、キトサン−ＮＡＣを含む水性点眼液を、本明細書で記述されているようなその安定性を保証するはずの適切な容器に入れるステップ。

本発明で使用されるキトサン−ＮＡＣは、水性点眼液の調製に有用な濃度範囲内で水溶性であることが必要であり、結果として生じる溶液は、透明でかつ無色であることが必要である。キトサン−ＮＡＣの有機酸または無機酸との塩の形成は、キトサンの水溶解度を増加させる。本発明のチオール化キトサンの適切な塩としては、酢酸、クエン酸、ギ酸、および酒石酸などの有機酸、ならびにＨＣｌおよびＨ_２ＳＯ_４などの鉱酸との任意の薬学的に許容可能な塩が含まれる。キトサン−ＮＡＣ塩酸塩の使用は、本発明の好ましい実施形態である。

重要なことは、合成および精製の後に、キトサン骨格上に固定化された本質的にすべてのチオール基が、遊離形態で、かつジスルフィドのような架橋された形態でなく、すなわち最小限の架橋のみで存在するような反応経路および反応条件が使用されることである。事実上、本発明のチオール化キトサン中のすべての結合チオールは、遊離チオール基の形態であり、すなわちそれらは架橋していない。合成中の最低量の架橋のみが、チオール化キトサンの粘度が規定のパラメータ内にとどまり、かつその水溶解度が水性点眼液の調製に十分である限り、許容可能である。

その合成後に、例えばチオアセチル部分のアルカリ加水分解後に、キトサン−ＮＡＣを還元剤へ曝露することによって、チオール基の架橋度が非常に低い、さらにはゼロのキトサン−ＮＡＣを製造することが可能であることが見出された。還元剤は、ＤＴＴ、ＴＣＥＰ、またはＮａＢＨ_４の群から選択してよく、ＮａＢＨ_４が好ましい。さらに、還元ステップは、３０℃以上または好ましくは４０℃以上などの高温で行われるべきであることが見出された。さらに、還元剤のキトサン骨格ポリマーに対する化学量論比が２：１以上でなど、大量の還元剤の使用が必要とされる。

架橋チオール基の程度が、全チオール基の５％未満、好ましくは４％以下のキトサン−ＮＡＣポリマーを、本実施形態に従って合成することができる。

本発明に従って使用する最終的なキトサン−ＮＡＣの水溶液の粘度は、特定の範囲内に収まるのが好ましく、キトサン−ＮＡＣの製造中に、キトサン−ＮＡＣが特定の条件下および特定のパラメータ内で、特に最小限に架橋されたのみであるポリマーをもたらす上述の還元条件に従って処理される場合、キトサン−ＮＡＣの粘度は、この好ましい範囲内のみに収まることが見出された。結果として生じる製品の粘度は、キトサン−ＮＡＣが結果として生じる点眼薬製剤に最も有用になるような、許容可能な範囲内に収まるのが好ましい。そのため、キトサン−ＮＡＣポリマーの動粘度（０．５％水溶液、２５℃）は、好ましくは約１〜１５ｍｍ^２／ｓの範囲内、より好ましくは約２〜１０ｍｍ^２／ｓの範囲内である。粘度があまりにも高い場合、ポリマーが容器内で不溶性粘性物質として残る恐れがあるため、製剤中に好ましい濃度範囲のキトサン−ＮＡＣを含む有用な点眼薬溶液を作ることができない。

キトサン−ＮＡＣは、本発明に従って使用する製剤において有用となるために精製される必要がある（上記のステップ３の後、とりわけ、キトサン−ＮＡＣを還元剤で処理した後など）。キトサン−ＮＡＣは、結果として生じる製品が純粋になるような方法で洗浄されるべきである。１つの公知の方法が、ＫａｓｔおよびＢｅｒｎｋｏｐ−Ｓｃｈｎｕｒｃｈ、２００１、Ｔｈｉｏｌａｔｅｄ ｐｏｌｙｍｅｒｓ−ｔｈｉｏｍｅｒｓ：ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ ａｎｄ ｉｎ ｖｉｔｒｏ ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ ｏｆ ｃｈｉｔｏｓａｎ−ｔｈｉｏｇｌｙｃｏｌｉｃ ａｃｉｄ ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ、Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ（２２）：２３４５〜２３５２ページで開示されている。

別の方法は、キトサン−ＮＡＣを極性溶媒で洗浄し、続いて、溶媒を除去するために乾燥することであろう。１つの好ましい溶媒は、それが非毒性であり、容易に入手でき、かつ経済的であるため、イソプロピルアルコールであるが、他の溶媒、およびイソプロピルアルコール以外の他のアルコールでも同じく有効であろう。この洗浄は、必要に応じて繰り返すことができ、その都度使用される溶媒の体積に依存する。洗浄および乾燥のステップは少なくとも１回は繰り返されることが好ましい。

乾燥ステップは、室温でおよび標準湿度で行うことができるが、この方法は非常に時間がかかる恐れがある。したがって、乾燥方法は、高温でおよび／または減圧下で行うことが好ましい。キトサン−ＮＡＣの乾燥は、好ましくは少なくとも約４０℃〜約７０℃の高温で、好ましくは少なくとも約５時間行われる。より好ましくは、乾燥方法は、少なくとも約５０℃〜約６０℃の温度で、約１０〜２４時間行われる。１つの好ましい多ステップ精製方法は、キトサン−ＮＡＣポリマーを、イソプロピルアルコールで３回洗浄し、遠心分離し、続いて約６０℃で約１５〜２０時間乾燥することによって固形物を回収することであろう。

本発明に従って使用する水性点眼液は、少なくとも１つの眼適合性賦形剤を含むことができる。例えば、溶液の張度、粘度を調整すること、またはｐＨを安定させること、活性成分の溶解度を高めること、適用後の眼快適度を高めること、もしくは概して製剤を安定させることに適した任意の賦形剤を使用することができる。

水性点眼液のｐＨは、任意の生理的におよび眼科用の許容可能なｐＨ調整酸、ｐＨ調整塩基、またはｐＨ調整緩衝液を添加することによって約５．５〜約７の範囲内のｐＨを有するように調整される。ｐＨが約５．５を大きく下回ると、生理学的に許容可能なパラメータの範囲を超えるであろう（溶液によって、刺すようなまたは焼けるような激しい感覚が眼にもたらされるであろう）。ｐＨ７を大きく上回る場合、溶液から析出することがないキトサン−ＮＡＣの安定な溶液を形成することは困難である。したがって、安定な溶液の配合を容易にするため、ｐＨが７を下回るのが好ましい。本発明に従って使用する水性点眼液の好ましいｐＨは、約５．８から約６．８の間であり、ｐＨ６．０〜６．６が最も好ましい。

本発明の製剤に使用される適切な酸の例としては、酢酸、ホウ酸、クエン酸、乳酸、リン酸、塩酸、および類似のものが含まれ、塩基の例としては、水酸化ナトリウム、リン酸ナトリウム、ホウ酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、乳酸ナトリウム、トロメタミン、ＴＨＡＭ（トリスヒドロキシメチルアミノメタン）、および類似のものが含まれる。好ましい実施形態は、ホウ酸−ホウ酸ナトリウム緩衝系であり、この緩衝系はまた、最も好ましいｐＨ範囲である６．０〜６．６で緩衝能を高めるようなマンニトールなどのポリオールを含む。

製剤の安定性を高めるために製剤で使用される適切な賦形剤の例としては、エチレンジアミン四酢酸二ナトリウム（Ｎａ_２−ＥＤＴＡ）、メタ重亜硫酸ナトリウム、マンニトール、ポリエチレングリコール、および類似のものが含まれる。

本発明で使用する局所用眼科用製剤の容量オスモル濃度は、概して、約１５０〜約４００ミリオスモル（ｍＯｓＭ）であり、より好ましくは約２００〜約３５０ｍＯｓＭであり、約２５０〜約３３０ｍＯｓＭの容量オスモル濃度が最も好ましい。容量オスモル濃度は、適切な量の生理的におよび眼科用の許容可能なイオン性または非イオン性の薬剤を使用することによって調整することができる。塩化ナトリウムは、一般的な浸透圧性薬剤である。カリウム、アンモニウム、および類似のものなどのカチオン、ならびに塩化物、クエン酸塩、アスコルビン酸塩、ホウ酸塩、リン酸塩、重炭酸塩、硫酸塩、チオ硫酸塩、重硫酸塩、および類似のものなどのアニオンで作られた１つまたは複数の等量の塩を、塩化ナトリウムに加えてまたはその代わりに使用し、上述の範囲内の容量オスモル濃度にすることができる。さらに、マンニトール、デキストロース、ソルビトール、グリセロール、グルコース、および類似のものなどの非イオン性薬剤も、容量オスモル濃度の調整に使用することができる。塩化ナトリウムおよびマンニトールが、浸透圧を調整するための好ましい薬剤である。

眼科用製剤は、ＤＥＳの治療に必要とされる定期的な適用に適した、高度な眼快適度をもたらす潤滑剤を含むことができる。ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、液体ポリオール、ヒアルロン酸、およびそれらの薬学的に許容可能な塩、ラブリシン、ならびにセルロース誘導体などの多くの種類の潤滑化剤がある；しかしながら、好ましい薬剤は、ポリエチレングリコールおよびヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）である。

好ましい実施形態において、本発明に従って使用する点眼液は、Ｎ−（Ｎ−アセチルシステイニル−）キトサン塩酸塩に加えて下記賦形剤を含む：
１．０〜１６．０ｍｇ／ｍｌ、好ましくは８〜１６ｍｇ／ｍｌの量のホウ酸；
０．０１〜５．０ｍｇ／ｍｌ、好ましくは１〜５ｍｇ／ｍｌの量のポリエチレングリコール４００；
０．０１〜０．５ｍｇ／ｍｌの量のＮａ_２−ＥＤＴＡ；
０．０１〜５．５ｍｇ／ｍｌ、好ましくは０．１〜４ｍｇ／ｍｌの量のマンニトール；
０．０１〜９ｍｇ／ｍｌ、好ましくは１〜３ｍｇ／ｍｌの量の塩化ナトリウム；および
０．０１〜２０ｍｇ／ｍｌ、好ましくは１〜３ｍｇ／ｍｌの量のヒドロキシプロピルメチルセルロース。

本発明に従って使用する点眼液は滅菌するべきであり、任意の適切な手法で滅菌することができる。１つの特定の好ましい滅菌方法は、ろ過滅菌である。本発明による点眼液は、塩化ベンザルコニウムなどの保存料を含むことができるが、これはあまり好ましくはない。

キトサン−ＮＡＣを含む水性点眼液は、局所投与のための任意の適切な手段によって患者の眼に投与することができる。これは、水性点眼薬溶液の形態であることが好ましい。この溶液は、開封するまでは滅菌されている使い捨て容器内に入れることができ、そのため、保存料を有する必要がなく、または開封後も滅菌されたままである多回使用容器の形態もしくは保存料を含む製剤とともに多回使用容器内に入れることができる。

キトサン−ＮＡＣポリマーのチオール基は、水溶液中でジスルフィド結合を形成する傾向があり、そのためキトサン−ＮＡＣの粘膜付着特性が低下する。この傾向は、水性点眼液中の酸素の存在に依存することが見出された。

無酸素の条件下、または本質的に無酸素の条件下で溶液を保存するとき、水溶液中の本発明に従って使用されるキトサン−ＮＡＣの遊離チオール基をさらにいっそう安定させることが可能であることが見出された。無酸素雰囲気は、窒素雰囲気、真空雰囲気、または希ガスからなる雰囲気とすることができる。

そのため、溶液を容器に入れるときは、そのように酸素非存在下で行われるべきである。さらに、容器を本発明の水性点眼液で充填した後は、無酸素のままにするべきである。そのために、本発明はまた、保存中、酸素から遮断された水性点眼液を維持する容器の使用を検討するものでもある。

したがって、本発明において、好ましくは、水性点眼液を収容する本質的に無酸素の容器が使用される。「本質的に無酸素」として、１．５％以下の量の酸素を含む雰囲気が理解されるべきである。製剤の製造中および容器へ充填中の溶液中の溶存酸素濃度は、１．０ｍｇ／Ｌ未満、より好ましくは０．５ｍｇ／Ｌ未満、さらにより好ましくは０．１ｍｇ／Ｌの範囲である。

好ましい実施形態において、容器は、充填後に点眼液が長期間本質的に無酸素のままであるような、酸素不浸透性材料から作られている。このような容器は、ガラスまたは内側をガラスで覆ったポリマー、金属または内側を金属で覆ったポリマーであってもよい。別の好ましい実施形態において、容器は、容器の壁を通過して酸素が溶液に侵入することを阻止するであろう酸素吸収剤をそこに含むポリマーから作られている。このような酸素吸収材としては、鉄塩、亜硫酸塩、アスコルビン酸、不飽和脂肪酸塩、金属ポリアミド複合体またはパラジウム／Ｈ_２系システム（ｐａｌｌａｄｉｕｍ／Ｈ_２ ｂａｓｅｄ ｓｙｓｔｅｍ）が含まれる。例えば、ＷＯ０９／３２５２６では、実質的にその主鎖中に炭素−炭素二重結合を有する熱可塑性樹脂、遷移金属塩、および酸素障壁特性を有する酸素障壁ポリマーが混合された酸素捕捉組成物を含む、活性酸素障壁層を有する膜が開示されている。

さらに、容器自体は、埋め込まれた酸素捕捉物質およびエアーレス閉塞システムを有する気密性材料から製造することができる。

好ましい実施形態において、点眼液を収容する第１の容器、および前記第１の容器を収容する第２の容器が提供される。

そのため、例えば、本発明の点眼液を保持する容器は、それ自体が気密性の小袋または袋の内側に収容される。詳細には、アルミニウム、アルミニウム積層物またはアルミニウム組成物から作られている小袋または袋は、本発明による点眼液を含む１つまたは複数の副容器（すなわち「第１の容器」）をそこに収容してよい。第２の容器、すなわち小袋または袋はまた、いくつかの標準包装で使用されるようなさらなる酸素吸収剤（例えば、ＰＫＴ ＫＨ−２０ Ｐｈａｒｍａｋｅｅｐ（登録商標）またはＳｔａｂｉｌｏｘ（登録商標）Ｏｘｙｇｅｎ Ｓｃａｖｅｎｇｅｒ）を含むこともできる。小袋が真空下または不活性雰囲気下で密封される場合でさえ、副容器から残留酸素を除去するために、酸素吸収剤の添加が必要とされ得る。小袋は、１つまたは複数のいずれかの単回投与容器あるいは多回投与容器、例えば、小袋１つ当たり５個の単回投与容器を収容することができる。多回投与容器の場合、本発明による点眼液を、滅菌条件下および本質的に無酸素の条件下で貯蔵しなければならない。

室温で少なくとも１２カ月保存した後で、好ましくは本発明に従って使用する容器内に収容されているキトサン−ＮＡＣの遊離チオール基の含量は、８０μｍｏｌ／ポリマー１ｇ〜２５０μｍｏｌ／ポリマー１ｇ、好ましくは１０５μｍｏｌ／ポリマー１ｇ〜２５０μｍｏｌ／ポリマー１ｇである。これは、遊離チオール基がキトサン−ＮＡＣ上に残り、しかも結果として生じる製剤は、長期間にわたり安定であることを意味する。この期間は、好ましくは少なくとも約１２カ月、より好ましくは少なくとも１８カ月、さらにより好ましくは少なくとも約２４カ月である。この長時間安定性の好ましさは、許容可能なパラメータから外れて、より不安定な製品になる恐れがある、長期保存時間ならびに商用配送およびサプライチェーンの遅延を、いくつかの製品が有するようになるという事実に起因する。

さらに好ましくは、少なくとも１２カ月、より好ましくは少なくとも１８カ月保存された後の、容器内に収容されているキトサン−ＮＡＣ中の架橋チオール基の量は、その中の全チオール基の３０％以下、好ましくは２５％以下、最も好ましくは２０％以下である。上述のとおり、最小限度の架橋チオール基のみを有するキトサン−ＮＡＣが溶液の製造に使用される場合に、溶液中の遊離チオール基の安定性はとりわけ優れている。

１つまたは複数の第１の容器、例を挙げるとＬＤＰＥから作られる使い捨て容器を収容する第２の容器、例を挙げると気密性小袋がある上述の実施形態において、第１の容器を開封してから少なくとも３０日後の、溶液中の遊離チオール基の含量は、本発明によって定義されるような範囲内で残存することが好ましい。例を挙げると５つの容器を必要とする治療時間は５日であり、そのため、この安定期間は十分すぎるほどである。

上述のとおり、とりわけ最小限度の架橋チオール基のみを有するキトサン−ＮＡＣが、本発明の点眼液の製造に使用される場合、酸素障壁をもたらす第２の容器を開封した後でさえ、遊離チオール基は安定なままであることが見出された。すなわち、第２の容器を開封してから３０日後での架橋チオール基の増加は、開封前の溶液中に最初に存在するチオール基の量の１５％未満であることが見出された。

さらに好ましい実施形態において、点眼液は、角膜創傷に１日２回または１回適用される。

本発明はまた、非感染性角膜創傷を治療する方法であって、上記に定義したＮ−（Ｎ−アセチルシステイニル−）キトサンを含む滅菌水性点眼液を前記創傷に適用する方法に関する。

実施例１：角膜創傷治癒モデル
本実験の目的は、０．１％キトサン−ＮＡＣ（修飾度：２０９μＭ遊離チオール基／ポリマー１ｇ）を含む水性点眼液が、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）からなる対照物質と比較して、創傷治癒プロセスを加速できるかどうかを評価することであった。キトサン−ＮＡＣを、マンニトール、ポリエチレングリコール４０、およびヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）をさらに含むホウ酸緩衝液に溶解することによって、０．１％（ｗ／ｗ）キトサン−ＮＡＣを含む水性点眼液を、不活性条件下にて調製した。溶液の最終ｐＨは６．４だった。体重１．７ｋｇ〜２．５ｋｇの雌のニュージーランドホワイトウサギ（Ｃｈａｒｌｅｓ Ｒｉｖｅｒ、Ｅｋｒａｔｈ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を実験に使用した。動物は、昼夜１２時間／１２時間の人工的なリズム、室温２０℃、湿度６０％の制御環境にて２匹１組で飼育した。水およびウサギ用標準餌を自由に与えた。動物が到着して、環境に適合させるための少なくとも２週間の期間の後に、研究を行った。

合計１６匹の動物において、規定の角膜病変を誘発させた。角膜上皮の中心を、眼科手術用メスを用いて、ボーマン層に傷害を与えないように注意深く取り出した。目標とする欠損のサイズは、直径６ｍｍであった。角膜病変のサイズは、超高分解能ＯＣＴ、およびフルオレセイン滴下後に細隙灯写真撮影法を適用することによって特徴づけられた。測定は、ベースライン時（切開前）、および角膜病変を誘発してから６、１２、２４、３６、４８、および７２時間後に行った。点眼薬の投与は、実験期間にわたって１２時間ごとに行った。すべての実験は麻酔下で実施し、麻酔はケタミン２５ｍｇ／ｋｇおよびキシラジン２ｍｇ／ｋｇを筋肉内注射することで行った。鎮痛薬としてメタミゾールナトリウムおよびフェンタニル０．０２５ｍｇを投与した。

本研究の結果を図１に要約する。図１は、キトサン−ＮＡＣ（白色マーカー）またはＰＢＳ（プラセボ、黒色マーカー）のいずれかを適用した後の創傷治癒の時間経過を示す。ｙ軸は、欠損面積を示す。データは、角膜病変のフルオレセイン染色後に細隙灯写真撮影法（Ａ）から、またはＯＣＴ画像（Ｂ）から評価した。データは、平均＋／−標準偏差として表される。キトサンＮ−アセチルシステインを含む点眼薬で、プラセボに対して有意に速い治癒速度が観察された（各ｐ＜０．０５、反復測定ＡＮＯＶＡ）。良好な一致が、２つの異なる技法から得られたデータ間で観察された。

実施例２：眼表面上におけるポリマー網目構造の形成
ヒト角膜縁上皮（ＨＣＬＥ）細胞を、血清不含ケラチン生成細胞増殖培地（Ｔｈｅｒｍｏ Ｆｉｓｈｅｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）中、３７℃および５％ＣＯ_２で維持し、１ｘ１０５細胞／ウェルを、１１ｍｍ ＡＣＬＡＲ（登録商標）カバースリップディスクが埋められた２４ウェルプレートに播種した。細胞がコンフルエンスに達したときに、１００ｍＭホウ酸緩衝液で希釈した０．１％（ｗ／ｗ）キトサン−ＨＣｌまたは０．１％（ｗ／ｗ）キトサン−ＮＡＣ（修飾度：２１９μＭ遊離チオール基／ポリマー１ｇ）で１５分間処理した。ホウ酸緩衝液を、対照細胞にも適用した。次に、ポリマー溶液を除去し、細胞を、０．０６×ＰＨＥＭ緩衝液（１×ＰＨＥＭ緩衝液は、６０ｍＭ ＰＩＰＥＳ、２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、１０ｍＭ ＥＧＴＡ、および２ｍＭ ＭｇＣｌ_２を含む）中の２．５％グルタルアルデヒドを添加することによって、走査電子顕微鏡（ＳＥＭ）用にただちに固定した。次いで、細胞単層を１％四酸化オスミウム水溶液（Ａｇａｒ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、Ｓｔａｎｓｔｅｄ、ＵＫ）で後固定し、特級アセトンで脱水し、液体ＣＯ_２で臨界点乾燥し（Ｌｅｉｃａ ＣＰＤ３００、Ｌｅｉｃａ Ｍｉｃｒｏｓｙｓｔｅｍｓ ＧｍｂＨ、Ｖｉｅｎｎａ、Ａｕｓｔｒｉａ）、Ｃ−ｔａｂとともに１２ｍｍのアルミニウムＳＥＭスタブに載せてから、金スパッタリング被覆（１００ｍｓｅｃ）を回転（Ｌｅｉｃａ ｓｐｕｔｔｅｒ ｃｏａｔｅｒ、Ｌｅｉｃａ Ｍｉｃｒｏｓｙｓｔｅｍｓ ＧｍｂＨ、Ｖｉｅｎｎａ、Ａｕｓｔｒｉａ）しながら行い、ＪＥＯＬ ＩＴ３００ ＳＥＭを用い１５ｋＶで撮影した。すべての画像は、二次電子検出器を用いて３００倍の倍率で撮影した。

結果を図２に示す。図２は、０．１％（ｗ／ｗ）キトサン−ＨＣｌ（Ｂ）または０．１％（ｗ／ｗ）キトサン−ＮＡＣ（Ｃ）とインキュベートされたヒト角膜縁上皮細胞の走査電子顕微鏡法を示す。未処理のコンフルエントな対照細胞を比較（Ａ）に示す。図２Ｃより、キトサン−ＮＡＣ溶液を適用した後、細胞表面上にポリマー網目構造が形成されたことが明らかに示される。この効果は、対照細胞（図２Ａ）およびキトサン−ＨＣｌで処理された細胞（図２Ｂ）では観察されない。

実施例３：症例研究
きわめて重度のアトピー性皮膚炎および長期間再発性ヘルペス性角膜炎に罹患している男性患者（５７歳）に、穿孔による緊急全層角膜移植術が行われた。患者は移植手術後感染症を発症し、それは抗生物質でコントロールすることができた。しかし、患者は、遷延性の上皮欠損に罹患し、それは複数の異なる投薬（局所的投薬：Ｖｉｇａｍｏｘ１日４回、Ｄｅｘａ ＥＤＯ１日２回、およびＶｉｓｍｅｄ１時間ごと、経口的投薬：Ｖａｌｔｒｅｘ １−０−１、Ｍｙｆｏｒｔｉｃ３６０ｍｇ ２−０−２、Ｄｅｃｏｒｔｉｎ Ｈ １２．５ｍｇ／１日）にもかかわらず数カ月治癒しなかった。

０．１％キトサン−ＮＡＣ（修飾度：２１２μＭ遊離チオール基／ポリマー１ｇ）を含む水性点眼液を、１日１回、７日間、さらに眼に適用した後、角膜上皮の欠損は治癒した。

実施例４：症例研究
眼に発赤および疼痛を伴う男性患者（３１歳、コンタクトレンズ装着者）は、両眼性の点状表層角膜炎（ＳＰＫ）および軽度の毛様体充血と診断された。レボフロキサシン点眼薬を用いた最初の治療により、３週間で症状が改善したが、ＳＰＫは残ったままであった。Ｐｒｅｄｓｏｌ０．５％点眼薬１日３回を投薬に追加した。１週間後の臨床所見は依然として同じままであり、Ｃｅｌｌｕｖｉｓｃ０．５％点眼薬２時間ごとおよびＤｏｘｙｃｙｌｉｎｅ１００ｍｇを投薬にさらに追加した。１カ月後、臨床所見は依然として改善しなかった。Ａｚｙｔｅｒ点眼薬を用いて反復治療を行っても、ＳＰＫの際立った改善は全く得られなかった。Ｃｅｌｌｕｖｉｓｃ点眼薬および眼瞼衛生用ティーツリー油で１カ月間治療した後、患者の症状は再び悪化した。先のすべての投薬を中止した。

０．１％キトサン−ＮＡＣ（修飾度：２１２μＭ遊離チオール基／ポリマー１ｇ）を含む水性点眼液を用い、１日１回、５日間治療した後、患者の症状は際立って改善し、残存するＳＰＫは最小限のみであった。

Claims (16)

1. 角膜創傷の治療における使用のための、担体溶液中に、Ｎ−（Ｎ−アセチルシステイニル−）キトサンまたはその薬学的に許容可能な塩を含む滅菌水性点眼液であって、Ｎ−（Ｎ−アセチルシステイニル−）キトサンの遊離チオール基の含量が、８０μｍｏｌ／ポリマー１ｇ〜２８０μｍｏｌ／ポリマー１ｇである、点眼液。
2. 治療される角膜創傷が、角膜びらんと関連する、請求項１に記載の使用のための点眼液。
3. 治療される角膜創傷が、非治癒性角膜上皮欠損、遷延性角膜上皮欠損、治癒遅延性角膜上皮欠損、および神経障害性（神経栄養性）上皮欠損からなる群から選択される上皮欠損である、請求項１に記載の使用のための点眼液。
4. 治療される角膜創傷が、点状表層角膜炎と関連する、請求項１に記載の使用のための点眼液。
5. 前記溶液中のＮ−（Ｎ−アセチルシステイニル−）キトサンまたは前記その薬学的に許容可能な塩の濃度が、０．０５〜０．３％（ｗ／ｗ）、好ましくは０．０５〜０．２％（ｗ／ｗ）、より好ましくは０．０８〜０．１６％（ｗ／ｗ）である、請求項１から４のいずれか一項に記載の使用のための点眼液。
6. 前記薬学的に許容可能な塩が、酢酸、クエン酸、ギ酸、および酒石酸などの有機酸の塩、ならびにＨＣｌおよびＨ_２ＳＯ_４などの鉱酸の塩からなる群から選択される、請求項１から５のいずれかに記載の使用のための点眼液。
7. Ｎ−（Ｎ−アセチルシステイニル−）キトサンの遊離チオール基の含量が、１０５μｍｏｌ／ポリマー１ｇ〜２５０μｍｏｌ／ポリマー１ｇ、好ましくは１１０μｍｏｌ／ポリマー１ｇ〜２５０μｍｏｌ／ポリマー１ｇ、最も好ましくは１４０〜２５０μｍｏｌ／ポリマー１ｇである、請求項１から６のいずれかに記載の使用のための点眼液。
8. Ｎ−（Ｎ−アセチルシステイニル−）キトサン中の架橋チオール基の量が、その中の全チオール基の３０％以下、好ましくは２５％以下、最も好ましくは１５％以下である、請求項１から７のいずれかに記載の使用のための点眼液。
9. 前記溶液が角膜創傷に１日２回または１回適用される、請求項１から８のいずれかに記載の使用のための点眼液。
10. 前記角膜創傷が非感染性創傷である、請求項１から９のいずれかに記載の使用のための点眼液。
11. 請求項１から５のいずれか一項に記載のＮ−（Ｎ−アセチルシステイニル−）キトサンを含む滅菌水性点眼液を前記創傷に適用する、角膜創傷を治療する方法。
12. 前記溶液が角膜創傷に１日２回または１回適用される、請求項１１に記載の方法。
13. 前記角膜創傷が非感染性創傷である、請求項１１または１２に記載の方法。
14. 前記角膜創傷が角膜びらんと関連する、請求項１１、１２、または１３に記載の方法。
15. 前記角膜創傷が、非治癒性角膜上皮欠損、遷延性角膜上皮欠損、治癒遅延性角膜上皮欠損、および神経障害性（神経栄養性）上皮欠損からなる群から選択される上皮欠損である、請求項１１または１２に記載の方法。
16. 前記角膜創傷が、点状表層角膜炎と関連する、請求項１１または１２に記載の方法。